HU205385B - Process for producing proteins with tumour-necrosis factor effect - Google Patents
Process for producing proteins with tumour-necrosis factor effect Download PDFInfo
- Publication number
- HU205385B HU205385B HU882428A HU242888A HU205385B HU 205385 B HU205385 B HU 205385B HU 882428 A HU882428 A HU 882428A HU 242888 A HU242888 A HU 242888A HU 205385 B HU205385 B HU 205385B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- vector
- proteins
- tnf
- hybrid
- genetic information
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 37
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 title description 5
- 102000018594 Tumour necrosis factor Human genes 0.000 title 1
- 108050007852 Tumour necrosis factor Proteins 0.000 title 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 17
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 7
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 5
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims description 5
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 claims description 4
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 claims description 4
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 3
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 claims description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 claims 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 abstract description 16
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 abstract description 15
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 abstract description 3
- 230000004075 alteration Effects 0.000 abstract 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 22
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 22
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 14
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 8
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 6
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 5
- 102000057041 human TNF Human genes 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 4
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 4
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- 229960003589 arginine hydrochloride Drugs 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 2
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 2
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 2
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 2
- 239000002644 phorbol ester Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101100268670 Caenorhabditis elegans acc-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 241001517013 Calidris pugnax Species 0.000 description 1
- 101001004851 Cicer arietinum Legumin Proteins 0.000 description 1
- 101710123904 Cobalamin binding intrinsic factor Proteins 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000999325 Homo sapiens Cobalamin binding intrinsic factor Proteins 0.000 description 1
- 101001027128 Homo sapiens Fibronectin Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical group CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 1
- 229910021380 Manganese Chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L Manganese chloride Chemical compound Cl[Mn]Cl GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 101150033527 TNF gene Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 229960000190 bacillus calmette–guérin vaccine Drugs 0.000 description 1
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000013599 cloning vector Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 235000002867 manganese chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011565 manganese chloride Substances 0.000 description 1
- 229940099607 manganese chloride Drugs 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Chemical group 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000006433 tumor necrosis factor production Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/525—Tumour necrosis factor [TNF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
- C07K2319/74—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor
- C07K2319/75—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor containing a fusion for activation of a cell surface receptor, e.g. thrombopoeitin, NPY and other peptide hormones
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/14—Lymphokine; related peptides
- Y10S930/144—Tumor necrosis factor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
A találmány tárgyát új TNF-hatást kifejtő proteinek előállítása képezi..
Carswell és munkatársai [Proc. Natl. Acad. Sci., 72, 3666-3670 (1975)] közölték, hogy endotoxinnal kezelt állatok széruma - az állatokat előzőleg Calmette-Guérin (BCG=Bacillus Calmette-Guérin) mycobaktérium törzzsel fertőzték - egérben különböző tumoroknál hemorrhagiás nekrőzist okozott. Ezt a hatást egy tumornekrózis-faktomak (TNF) tulajdonították. A TNF-nek citosztatikus és citotoxikus hatása van számos transzformált sejtvonalra in vitro, míg normál emberi és állati sejtvonalra nincs hatása [Ruff és Gifford, Lymphokine Reports, 2. kötet, 235-275. oldal. Academic Press,
New York, (1981)]. Nemrég írták le az emberi TNF biokémiai tulajdonságait és génjét [AggarwaI és munkatársai, J. Bioi. Chem., 260, 2345-2354 (1985); Nedwin és munkatársai, Nucl. Acids Rés., 13, 6361-6373 (1985)]. Ezekből az adatokból az érett humán TNF protein szerkezete az alábbiak szerint írható le.
ValArgSerSerSerArgThrProSerAspLysProValAlaHisValValAlaAsnPro
GlnAlaGluGlyGlnLeuGlnTrpLeuAsnArgArgAlaAsnAIaLeuLeuAIaAsnGly
ValGluLeuArgÁspÁsnGlnLeuValValProSerGluGlyLeuTyrLeuIIeTyrSer
GbiValLeuPheLysGlyGlnGlyCysProSerThrHisValLeuLeuThrHisThrlle
SerArglleAIaValSerTyrGInThrLysVaLAsnLeuLeuSerAlalleLysSerPro
CysGlnArgGluThrProGluGlyAlaGluAlaLysProTrpTyrGluProIleiyrLeu
GlyGIyValPheGlnLeuGluLysGlyAspArgLeuSerAlaGluIleAsnArgProAsp
TyrLeuAspPheAlaGluSerGlyGlnValTyrPheGlyllelleAlaLeu
A fibronektin egyike az emberi plazmában jelen levő proteineknek, molekulatömege körülbelül 450 000. Két diszulfídhíddal összekapcsolt polipeptidláncből áll, amelyek egy sejtkötő domént tartalmaznak [Hynes és munkatársai, J. Cell. Bioi., 95,369-377 (1982)]. E sejtkötő dómén primer szerkezetét Pierschbacher és munkatársai írták le [J. Bioi. Chem., 257,9593-9597 (1982)]. A fibronektinmolekula ennek a doménnek a segítségével tud a sejtek - például a vérlemezkék vagy fibroblasztok - felületén lévő receptorhoz kötődni [PIow és Ginsberg, J. Bioi. Chem., 256,9477-9482 (1981)].
Ha az emberi fibronektin sejtkötő doménjéből részszekvenciákat kapcsolunk az érett humán TNF amino25 terminálisához, úgy olyan hibrid proteineket kapunk, amelyek előnyösebb tulajdonságokkal rendelkeznek, mint maga a humán TNF.
A találmány a következő aminosav-szekvenciájú proteinekre vonatkozik:
Y-Val-X-(Ser)n-ArgThrProSerAspLysProVaIAlaHisValValAlaAsnPro
GlnAlaGluGIyGInLeuGlnTrpLeuAsnArgArgAlaAsnAlaLeuLeuAlaAsnGly
ValGluLeuArgAspAsnGlnLeuValValProSeiGluGlyLeuTyrLeuIleTyrSer
GlnValLeuPheLysGlyGlnGlyCysProSerThrHisValLeuLeuThrHisThrlle
SerArglleAIaValSeriyrGlnThrLysValAsnLeuLeuSerAlalleLysSerPro
CysGInArgGIuThrProGIuGlyAlaGluAlaLysProTrpTyrGluProIIeTyrLeu
GlyGlyValPheGlnLeuGluLysGlyAspArgLeuSerAlaGluIleAsnArgProAsp amelyben n=0,1,2,3 vagy 4;
X=a fibronektinmolekula sejtkötő doménjének egy 10-20 aminosáv-maradékot tartalmazó részszekvenciája;
Y=hidrogénatom vagy metionincsoport.
Ezek közül a proteinek közül azok előnyösek, amelyekben n-l, 2,3 vagy 4, és Y-hidogénatom.
Az új proteineket a következőképpen állíthatjuk elő:
a) olyan vektort állítunk elő, amely a fenti képletú proteinek genetikus információját tartalmazza;
b) a vektort szaporítjuk;
c) az expresszióhoz szükséges szignálokat beépítjük a vektorba;
d) a vektort bevisszük egy gazdaszervezetbe és
e) a gazdaszervezetet szaporítjuk és a proteint izoláljuk.
Az alkalmas vektor előállítása érdekében a megfelelő cDNS-ből Indulunk ki.
A megfelelő cDNS izolálásához a HL60 monocita sejtvonalat (ATCC CCL240) Pannica és munkatársai [Natúré, 312,724-729 (1984)] leírása szerint tenyésztjük, stimulálás után az mRNS-t izoláljuk és ismert eljárásokkal cDNS-re fordítjuk át.
A kapott cDNS-t a kereskedelemben kapható (stratagene GmbH lambda gtlO klónozó vektorba visszük be, s ilyen módon egy cDNS-gyujteményt hozunk létre.
Radioaktív jelzett oligonukleotid szondák segítségével olyan kiónt azonosítunk, amely a TNF-gén kódoló részét tartalmazza (1. ábra).
A példákban közelebbről leírt új TNF hibrid gének klónozásához e szekvencia azon részeit használjuk, amelyek a restrikciós felismerőhelyek révén könnyen hozzáférhetők (1. ábra). A génfragmentumok beépítését a kiónozó vektorokba - például a kereskedelemben kapható pBR322 és pBR327 plazmádba — ismert módon végezzük. A géneket és génfragmentumokat olyan megfelelő, kémiai úton szintetizált szabályozó szakaszokkal is el lehet látni, amelyek a protein kifejeződését lehetővé teszik. Az alkalmas gazdaszervezeteknek, előnyösen az E.colinak, az így kapott hibrid plazmidokkal való transzformálása szintén ismert és részlete2
HU 205 385 Β sen leírt módszer. A hibrid plazmidok olyan megfelelő szignálszekvenciákat is tartalmaznak, amelyek elősegítik a polipeptidek szekrécióját az E.coli sejtfolyadékába.
A genetikai kód degenerálása alapján az is lehetséges, hogy más DNS-szekvenciákat, például eltérő DNS-szekvenciájú, kémiailag szintetizált TNF-géneket használjunk fel a INF hibrid gének expressziójához.
Az új, TNF aktivitású hibrid proteineket, mint új hatóanyagokat, az emberek rosszindulatú megbetegedéseinek kezelésében alkalmazhatjuk.
Plazmidok előállítása
1. példa
Hibrid plazmid előállítása, amelyben egy
TNF-származék génfragmentum megváltoztatott aminoterminálist hordoz
A kiindulási anyag egy olyan rekombináns fág, amely a Pennica és munkatársai [Natúré, 312,724-729 (1984)] által leírt eljárással kapott TNF cDNS-t tartalmazza.
A restrikciós enzimekkel végzett hasításokat a gyártók által csatolt utasítások szerint, a különböző kapcsolási műveleteket a Maniatis kézikönyv általános leírásai szerint végezzük. A HL60 emberi monocita sejtvonalat (ATCC CCL240) forbol-észterrel (PMA) kezeljük, hogy TNF-termelésre serkentsük. A forbol-észterrel való kezelés után 4 órával a sejtvonalból izoláljuk az RNS-t és ebből Maniatis szerint (Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory, 1982, a 224 és következő oldalak) állítjuk elő a cDNS-t. A cDNS-ből génbankot létesítünk, amikor is vektorként a lambda gtlö fágot (Stratagene, Heidelberg) használjuk. Egy TNF-specifikus, kémiailag szintetizált, radioaktív jelzett oligonukleotid próbaanyag segítségével átvizsgáljuk a génbankot. Egy pozitív kiónt Aval és HindHÍ restrikciós enzimmel hasítunk, s ekkor egy 578 bp hosszú DNS-fragmentumot kapunk, amely a humán TNF-molekula 8-157 aminosavát kódolja. E fragmentumot elektroforézissel - 1%-os agarózgélben - választjuk el a többi keletkezett fragmentumtól és a gél15 bői ismert módszerekkel eluáljuk (Maniatis és munkatársai, Cold Spring Harbor Laboratory, 1982, 164. oldal). A kapott hasítási terméket ezután egy olyan vektorba építjük be, amelyhez úgy jutunk, hogy a pBR322 plazmidot Clal és HindHI restrikciós endonukleázzal hasítjuk. A hasításnál keletkezett nagyffagmentumot kétszeres etanolos kicsapással tisztán állítjuk elő.
Cla-Ava-adapterként az Al és Bl szintetikus úton előállított oligonukleotidok (kereskedelmi forgalomban megrendelhetők pl. Stratagene-től) ekvimoláris ke25 veréke szolgál.
Az Al és Β1 primer szerkezete a következő:
Al: 5’-CGATACTACTATGGTCAGATCTTCATCTrCTCGAACC . -3’
Bl: 3’- TATGATGATACCAGTCTAGAAGTAGAAGAGCTTGGGGCT-5’
Az új pTNF-1 hibrid plazmidhoz úgy jutunk, ha a vektorfragmentumból 0,1 pmólt, az 578 bp hosszú TNF-fragmentűmből 0,2 pmólt és az Al és Bl oligonukleotidokból 0,5-0,5 pmólt T4 DNS-ligáz enzim segítségével összekapcsolunk (1. ábra, ahol An és Bn az Al, A2... és Bl, B2... oligonukleotidokat jelenti).
2. példa
TNF-származékok megváltoztatott aminotermlnállssal
A szerkesztés az 1. példával analóg módon történik, 35 az A2/B2, A3/B3, A4/B4 és új oligonukleotidokkal:
A2:5’-CGATACTACTATGGTCAGATCTAGATCATCTTCTTCGCGAACC -3’
B2:3’- TATGATGATACCAGTCTAGATCTAGTAGAAGAAGCGCTTGGGGCT-5’
A3:5’-CGATACTACCATGGTCTACGCTGTCACCGGCCGTGGTGACTCTCCTGCTTCAB3:3’- TATGATGCTACCAGATGCGACAGTGGCCGGCACCACTGAGAGGACGAAGT
TCTTCTCGAACC -3’
AGAAGAGCTTGGGGCT-5 ’
A4:5’-CGATACTACCATGGTCTACGCTGTCACCGGCCGTGGTGACTCTCCTATCGACGGTCGA B4:3’- TATGATGGTACCAGATGCGACAGTGGCCGGCACCACTGAGAGGATAGCTGCCAGCT
ACC -3’
TGGGGCT-5’ 50 így kapjuk a pTNF-2, pTNF-3 és pTNF-4 új hibrid plazmidokat.
3.példa
Fibronektin-TNF hibrid proteineket meghatározó génfragmentumokat tartalmazó hibrid plazmidok előállítása
Az 1. példa szerint szerkesztett pTNF-1 plazmid a kiindulópont, amely egyetlen BglII felismerőhelyet 60 (AGATCT) tartalmaz. A pTNF-1 plazmidot BglH restrikciós enzimmel felnyitjuk. E DNS-fragmentum 0,1 pmóljához hozzáadunk a szintetikus úton előállított 55 A5 és B5 oligonukleotid ekvimoláris keverékéből 0,3 pmólt. Az alkotórészeket T4 DNS-ligázzal katalizált reakcióval kapcsoljuk össze (2. ábra).
HU 205 385 Β
A5:5’-GATCTGTCACCGGCCGTGGTGACTCTCCTGCTA -3’ B5:3’- ACATGTGCCGGCACCACTGAGAGGACGATCTAG-5’
Ekkor kapjuk a pTNF-1/5 új hibrid plazmidot. Ennél a szerkesztésnél az A5/B5 fragmentum tetszés szerinti irá- 5 nyitottsággal épülhet be a vektorba. Ennélfogva két különböző hibrid plazmid keletkezik, amelyek az A5/B5 fragmentum orientációjában különböznek egymástól, s így az ezután következő génkifejeződés különböző hibrid proteineket eredményez. Az irányítottság ismert DNS- 10 szekvenálási eljárásokkal határozható meg.
4. példa
További fibronektin-TNF hibrid proteineket meghatározó génfragmentumokat hordozó hibrid plazmidok előállítása
A szerkesztés a 3. példával analóg módon történik, az A6/B6 és A7/B7 új oligonukleotid-keverékekkel.
A6:5’-GATCTTACGCTGTCACCGGCCGTGGTGACTCTCCTGCTAGCTCAAAGCCTA -3’ B6:3’- AATGCGACAGTGGCCGGCACCACTGAGAGGACGATCGAGTTTCGGATCTAG-5’
A7: 5’-GATCTTACGCTGTCACCGGCCGTGGTGACTCTCCTGCTAGCTCAAAGCCT B7:3’-AATGCGACAGTGGCCGGCACCACTGAGAGGACGATCGAGTITCGGA
ATCAGCATCAACTACCGTACCGAAATCGACGGTA -3’ TAGTCGTAGTTGATGGCATGGCTTTAGCTGCCATCTAG-5’ így jutunk az új pTNF-1/6 és pTNF-1/7 hibrid plazmidokhoz.
Plazmidok szaporítása
5. példa
A hibrid plazmidok transzformálása
Transzformáció-kompetens E.coli sejteket (Stratagene, Heidelberg) transzformálunk az 1-4 példa szerinti hibrid plazmidok 0,1-1 pg-jával, majd ampicíllintartalmú LB-agarlemezekre szélesztjük a sejteket. Ezután plazmid gyorsanalízisek segítségével meghatározzuk azokat a kiónokat, amelyek korrekt módon integrálódott TNF részszekvencíákat tartalmaznak (Maniatis és munkatársai, Cold Spring Harbor Laboratory, 1982, 366. oldal).
ő. példa
A proteinek termelése
A fenti példák szerint előállított hibrid plazmidokat a Clal helyen felnyitjuk és bevisszük a génexpresszióhoz szükséges szintetikusan előállított szignálszekvenciákat (WO 86/03751 számon publikált PCT-bejelentés II. példája).
A kapott hibrid plazmidokkal kompetens E.coli sejteket transzformálunk (Maniatis és munkatársai, Cold Spring Harbor Laboratory, 1982, 249. és a további oldalak). A transzformált gazdasejteket egy éjszakán át 37 °C-onLB-táptalajban fermentáljuk.
7. példa
A proteinek tisztítása
Az egyik új anyagot termelő egy E.coli törzs 1 liternyi feimentlevét 30 percig 3 000 g mellett lecentrifugáljuk.
Az üledéket 200 ml 0,4 mólos arginin hidrokloridot és 20 mmól nátrium-foszfátot tartalmazó oldatban (pH-8,5) vesszük fel, s az oldatot 30 percig ultrahanggal kezeljük. A szuszpenzióhoz 6 ml 2 mólos mangán-kloridot adunk és 45 percig 3 000 g mellett centrifugáljuk. A felülúszó pH-ját 8,9-re állítjuk be híg ammóniaoldattal és szilárd ammónium-szulfáttal 60%-ra telítjük.
A proteincsapadékot 0,2 mólos arginin-hidrokloridoldatban (pH=7,5) szuszpendáljuk, majd 0,4 mólos arginin-hidroklorid-oldattal (pH«7,5) szemben dializáljuk. A dializált anyag pH-ját 16 óra. múlva híg ammóniaoldattal pH=8,5-re állítjuk be és vízzel ötszörös térfogatára hígítjuk.
Ezt az oldatot egy 0,01 mólos argininpuffenel (pH=8,5) kiegyensúlyozott R-Sepharose oszlopon (Pharmacia) kromatografáljuk. Az elúciót 0,02 mól/1 nátrium-foszfát és 0,06 mól/1 nátrium-klorid-taríalmú oldattal végezzük. Az eluátumot két és félszeresére hígítjuk és ezután 0,02 mólos nátrium-foszfáttal (pH=8,0) kiegyensúlyozott S-Sepharose oszlopon (Pharmacia) kromatografáljuk. Az oszlopot kiegyensúlyozó pufferrel mossuk, majd a kioldást 0,05 mól/1 nátrium-foszfát, 0,1 mól/1 nátrium-klorid és 0,1 mól/1 arginin- (pH=8,6) tartalmú oldattal végezzük, s így SDS-poliakrilamid gélelektroforézissel való meghatározás szerint, tiszta proteint kapunk.
A találmány szerinti protein képletének megfelelő következő vegyületeket kapjuk (n=4, Y=Met) az A5/B5, A6/B6, illetve Α1ΓΒΊ oligonukleotidpárokat tartalmazó plazmidokkal transzformált E.coli sejtek tenyészlevéből:
A. X=ArgSerSerArgArgValTbrThrAlaGlyAspArg
B. X-ArgSerTyrAlaValThrGlyArgGlyAspSerProAlaSerSerLysProArg
C. X-ArgSerTyrAlaValThrGlyArgGIyAspSerProAlaSerSerLysProIleSerlleAsnTyrArgThrGluIleAspGlyArg.
HU 205 385 Β
8. példa
Az új polipeptidek citotoxikus aktivitása
Az 1. táblázatban felsorolt törzsekből exponenciális növekedési szakaszban levő, 5403 tripszinnel frissen kezelt sejtet viszünk rá 96 tartályos lemezekre 150 |ig 5 komplett táptalajban [MÉM táptalaj Earle sókkal 10% fetális borjúszérummal (FCS) kiegészítve; FIow Laboratories, Meckenheim] és a lemezt egy éjszakán át 37 °C-on 5% COí-tartalmú, vízgőzzel telített atmoszférában inkubáljuk. A hatóanyagot a következő nap visszük a leme- 10 zekre, tartályonként 25 μΐ teljes táptalajban. Akezdőkoncentráciő 10 ng/ml volt; a titrálást kétszeres sorozathígítással végeztük, két párhuzamos meghatározással. Minden tenyésztőlemezhez a következő kontrollokat észítettük el: a) kizárólag táptalaj, b) a táptalaj sejtekkel, de ha- 15 tóanyag nélkül, c) ismert biológiai aktivitású megtitrált TNF-standard. A fent megadott feltételek melletti további 48 órát tartó inkubálás után a túlélő sejteket kristály-ibolya-oldattal (15 g kristály-ibolya, 7 g NaCl, 646 ml etanol, 172,8 ml 37%-os formaldehid ad 2 liter víz) festjük 20 meg.
A festést úgy végezzük, hogy a táptalaj leöntése után a sejteket szobahőmérsékleten 20 percig hagyjuk állni 50 pl festékoldattal, majd utána a lemezeket addig mossuk vízzel, amíg az összes nem kötött festéket 25 eltávolítjuk. A megfestődött sejteket 100 pl festőoldat (50% etanol, 0,1% ecetsav) hozzáadásával lizáljuk, és
540 nm-nél fotometriásan mérjük. Az anyagokra a vizsgált sejtvonalakban az 1. táblázatban megadott, egység/mg proteinben kifejezett aktivitásokat kaptuk. Egy egység az az anyagmennyiség, amely a kezelt sejtek 50%-os lízisét váltja ki.
1.táblázat
| Anyag | Biológiai aktivitás egység/mg proteinben kifejezve | ||
| L-929 | WEHI-164 | MDF-7 | |
| rHn-TNF | 8,2406 | 7,9405 | 2,6405 |
| A | 2,040’ | 1,3406 | 7,5405 |
| B | 1,840’ | 1,6406 | 9,5405 |
A táblázatban előforduló rövidítések:
L-929 egy egér-fíbroszarkóma-sejtvonal,
WEH1-164 szintén egy egér-fibroszarkóma-sejtvonal, MCF-7 egy humán emlőkarcinóma-sejtvonal, rHn-TNF rekombináns humán INF.
Claims (3)
1. Eljárás az
Y-Val-X-(Ser)„-ArgThrProSerAspLysProValAlaHisValValAlaAsnPro
GlnAlaGluGlyGlnLeuGlnTrpLeuAsnArgArgAlaAsnAlaLeuLeuAlaAsnGly
ValGluLeuArgAspAsnGlnLeuValValProSerGluGlyLeuiyrLeuIleTyrSer
GlnValLeuPheLysGlyGhGlyCysProSerThrHisValLeuLeuThrHisThrlle
SerArglleAlaValSerTyrGlnThrLysValAsnLeuLeuSerAlalleLysSerPro
CysGlnArgGluThrProGluGlyAlaGluAlaLysProTrpiyrGluProIleTyrLeu
GlyGlyValPheGlnLeuGluLysGlyAspArgLeuSerAlaóluIleAsnArgProAsp
TyrLeuAspPheAlaGluSerGlyGlnValTyrPheGlylleHeAlaLeu aminosav-szekvenciájú proteinek ahol n értéke 0,1,2,3 vagy 4;
X a fibronektinmolekula sejtkötő doménjének egy 40 10-20 aminosav-maradékot tartalmazó részszekvenciája;
Y jelentése hidrogénatom vagy metioninmaradékelőállítására, azzal jellemezve, hogy
i) előállítunk egy olyan vektort, amely a tárgyi kör- 45 ben meghatározott proteinek genetikai információját tartalmazza;
ii) a vektort szaporítjuk;
ArgSerSerArgArgValThiThrAlaGlyAspArg,
ArgSerValThrGlyArgGlyAspSerProAlaArg,
TyrAlaValThrGlyArgGlyAspSerProAla,
TyrAlaValThrGlyArgGlyAspSerProIleAspGly vagy ArgSerTyrAlaValThrGlyArgGlyAspSerProAlaSerSerLysProArg, azzal jellemezve, hogy a tárgyi körben meghatározott proteinek genetikai információját tartalmazó vektorokat állítunk elő.
4. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan proteinek előállítására, amelyek képletében Y jelentése hidrogén- 60 iii) beépítjük a vektorba az expresszióhoz szükséges szignálokat;
iv) a vektort bevisszük egy bakteriális gazdaszervezetbe; és
v) a gazdaszervezetet tenyésztjük, és a kifejezett proteint izoláljuk.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy egy E.coli fajba, mint gazdaszervezetbe visszük be a vektort.
3. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan proteinek előállítására, amelyek aminosav-szekvenciájában X jelentése atom, azzal jellemezve, hogy a tárgyi körben meghatározott proteinek genetikai információját tartalmazó vektorokat állítunk elő.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19873716513 DE3716513A1 (de) | 1987-05-16 | 1987-05-16 | Proteine mit tnf-wirkung |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUT46946A HUT46946A (en) | 1988-12-28 |
| HU205385B true HU205385B (en) | 1992-04-28 |
Family
ID=6327747
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU882428A HU205385B (en) | 1987-05-16 | 1988-05-16 | Process for producing proteins with tumour-necrosis factor effect |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5180811A (hu) |
| EP (1) | EP0291804A3 (hu) |
| JP (1) | JPS63297399A (hu) |
| AU (1) | AU600131B2 (hu) |
| DE (1) | DE3716513A1 (hu) |
| DK (1) | DK263588A (hu) |
| FI (1) | FI882283A (hu) |
| HU (1) | HU205385B (hu) |
| ZA (1) | ZA883428B (hu) |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2878341B2 (ja) * | 1989-03-03 | 1999-04-05 | 学校法人藤田学園 | 人工機能性ポリペプチド |
| US5686570A (en) * | 1989-06-16 | 1997-11-11 | Cor Therapeutics, Inc. | Platelet aggregation inhibitors |
| US5780595A (en) * | 1989-06-16 | 1998-07-14 | Cor Therapeutics, Inc. | Platelet aggregation inhibitors |
| US5318899A (en) * | 1989-06-16 | 1994-06-07 | Cor Therapeutics, Inc. | Platelet aggregation inhibitors |
| DE3925183A1 (de) * | 1989-07-29 | 1991-02-07 | Basf Ag | Proteine mit tnf-wirkung |
| JPH05255393A (ja) * | 1990-09-21 | 1993-10-05 | Ishihara Sangyo Kaisha Ltd | ポリペプチド |
| US5519119A (en) * | 1990-09-21 | 1996-05-21 | Ishihara Sangyo Kaisha Ltd. | Muteins of TNF pharmaceutical compositions and a method of making |
| US6368815B1 (en) * | 1999-03-29 | 2002-04-09 | Warner-Lambert Company | Screening of molecules that inhibit human phosphodiesterase 4A produced by non-recombinant cell lines |
| US7446174B2 (en) | 2001-03-02 | 2008-11-04 | Xencor, Inc. | Protein based TNF-α variants for the treatment of TNF-α related disorders |
| US7687461B2 (en) * | 2000-03-02 | 2010-03-30 | Xencor, Inc. | Treatment of TNF-α related disorders with TNF-α variant proteins |
| US7056695B2 (en) | 2000-03-02 | 2006-06-06 | Xencor | TNF-α variants |
| US20070172449A1 (en) * | 2000-03-02 | 2007-07-26 | Xencor, Inc. | TNF-alpha VARIANT FORMULATIONS FOR THE TREATMENT OF TNF-alpha RELATED DISORDERS |
| US7662367B2 (en) * | 2000-03-02 | 2010-02-16 | Xencor, Inc. | Pharmaceutical compositions for the treatment of TNF-α related disorders |
| US7244823B2 (en) * | 2000-03-02 | 2007-07-17 | Xencor | TNF-alpha variants proteins for the treatment of TNF-alpha related disorders |
| US7101974B2 (en) | 2000-03-02 | 2006-09-05 | Xencor | TNF-αvariants |
| GB0209893D0 (en) * | 2002-04-30 | 2002-06-05 | Molmed Spa | Conjugate |
| GB0209896D0 (en) | 2002-04-30 | 2002-06-05 | Molmed Spa | Conjugate |
| ES2347239T3 (es) * | 2002-12-02 | 2010-10-27 | Amgen Fremont Inc. | Anticuerpos dirigidos al factor de necrosis tumoral y usos de los mismos. |
| KR100755676B1 (ko) * | 2005-08-26 | 2007-09-05 | 삼성전자주식회사 | 밝기 향상 및 전력 제어를 지원하는 영상 표시 장치 및방법 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3582183D1 (de) * | 1984-03-06 | 1991-04-25 | Dainippon Pharmaceutical Co | Dns den menschlichen tumornekrosisfaktor kodierend und das menschliche tumornekronisfaktor-polypeptid. |
| US4879226A (en) * | 1984-04-06 | 1989-11-07 | Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha | Novel human physiologically active polypeptide |
| GB8516421D0 (en) * | 1985-06-28 | 1985-07-31 | Biotechnology Interface Ltd | Fibronectins |
| ATE107362T1 (de) * | 1986-06-20 | 1994-07-15 | Dainippon Pharmaceutical Co | Polypeptid-mutanten des menschlichen tnf und für diese mutanten codierende dns. |
-
1987
- 1987-05-16 DE DE19873716513 patent/DE3716513A1/de not_active Withdrawn
-
1988
- 1988-05-07 EP EP88107401A patent/EP0291804A3/de not_active Withdrawn
- 1988-05-12 JP JP63113719A patent/JPS63297399A/ja active Pending
- 1988-05-13 AU AU16151/88A patent/AU600131B2/en not_active Ceased
- 1988-05-13 DK DK263588A patent/DK263588A/da not_active Application Discontinuation
- 1988-05-13 US US07/193,661 patent/US5180811A/en not_active Expired - Fee Related
- 1988-05-16 HU HU882428A patent/HU205385B/hu not_active IP Right Cessation
- 1988-05-16 FI FI882283A patent/FI882283A/fi not_active Application Discontinuation
- 1988-05-16 ZA ZA883428A patent/ZA883428B/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3716513A1 (de) | 1988-11-24 |
| AU600131B2 (en) | 1990-08-02 |
| ZA883428B (en) | 1990-01-31 |
| EP0291804A2 (de) | 1988-11-23 |
| EP0291804A3 (de) | 1990-05-30 |
| AU1615188A (en) | 1988-11-17 |
| HUT46946A (en) | 1988-12-28 |
| US5180811A (en) | 1993-01-19 |
| DK263588D0 (da) | 1988-05-13 |
| DK263588A (da) | 1988-11-17 |
| FI882283A (fi) | 1988-11-17 |
| JPS63297399A (ja) | 1988-12-05 |
| FI882283A0 (fi) | 1988-05-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU205385B (en) | Process for producing proteins with tumour-necrosis factor effect | |
| US5460811A (en) | Mature human fibroblast interferon | |
| KR940010865B1 (ko) | 종양 괴사 인자의 생산 방법 및 종양 괴사 인자의 수율을 증가시키는 방법 | |
| US6610830B1 (en) | Microbial production of mature human leukocyte interferons | |
| US4897348A (en) | Recombinant materials and methods for producing human connective tissue-activating peptide-III and analogs thereof | |
| JP2667193B2 (ja) | 二機能性タンパク質 | |
| GB2079291A (en) | Interferons and process for their preparation | |
| US5059530A (en) | Expression vector for human TNF | |
| AU607930B2 (en) | Homogeneous recombinant immune interferon fragments | |
| US4871663A (en) | Exporession vector for human TnF | |
| JPS635099A (ja) | 新規なポリペプチド、その製法及び用途 | |
| JPS5841849A (ja) | ヒト白血球インタフエロン | |
| GB2188933A (en) | Expression vectors for production of polypeptides, method for enhanced expression of polypeptides, hosts containing the expression vectors, products manufactured thereby | |
| EP0153961B1 (en) | Recombinant materials and methods for producing human connective tissue-activating peptide-iii and analogs thereof | |
| HU208996B (en) | Process for producing recombinant human interleukin-1 alpha polipeptides and pharmaceuticals containing its | |
| JP2675294B2 (ja) | ヒト腫瘍壊死因子 | |
| WO1992019737A1 (en) | Process for producing a monocyte chemotactic factor polypeptide and a strain for the production thereof | |
| JP2721854B2 (ja) | 抗腫瘍活性物質 | |
| Liu et al. | Construction of novel tumor necrosis factor-alpha mutants with reduced toxicity and higher cytotoxicity on human tumor cells | |
| CA2051124A1 (en) | Proteins with tnf activity | |
| JPH02177896A (ja) | 新規生理活性ポリペプチド | |
| JPS62248498A (ja) | 新規生理活性ポリペプチド | |
| JPS63160598A (ja) | 新規生理活性ポリペプチド | |
| JPS63188395A (ja) | 新規生理活性ポリペプチド | |
| JPS62263199A (ja) | 新規生理活性ポリペプチド |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |