JPS5841849A - ヒト白血球インタフエロン - Google Patents
ヒト白血球インタフエロンInfo
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- JPS5841849A JPS5841849A JP57140898A JP14089882A JPS5841849A JP S5841849 A JPS5841849 A JP S5841849A JP 57140898 A JP57140898 A JP 57140898A JP 14089882 A JP14089882 A JP 14089882A JP S5841849 A JPS5841849 A JP S5841849A
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- Japan
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- polypeptide
- dna sequence
- human leukocyte
- microbial
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- Pending
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/56—IFN-alpha
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
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- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は遺伝子組換え技術分野に関するものであり、遺
伝子組換え技術を用いた方法およびそれらの方法により
得られる生産物に関するものである。
伝子組換え技術を用いた方法およびそれらの方法により
得られる生産物に関するものである。
さらに詳しく述べると、本発明はポリペプチド、即ち、
ヒト白血球インタフエロンにおよびし、それらを含有す
る医薬組成物およびそれらの製造法に係るものであり、
該製造法は、該ポリペプチドを発現できる複製可能な微
生物発現ベクターで形質転換した微生物の培養物を生育
させ、該ポリペプチドを発現することにより成っている
。さらに、本発明は本製造法に用いられる発現ベクター
、これらの発現ベクターを含有する新規微生物およびそ
れらの調製法をも含む。またさらに、本発明は成熟ヒト
白血球インタフエロンにおよびＬのアミノ酸配列をコー
ドする配列より成るＤＮＡ配列に関するものである。
ヒト白血球インタフエロンにおよびし、それらを含有す
る医薬組成物およびそれらの製造法に係るものであり、
該製造法は、該ポリペプチドを発現できる複製可能な微
生物発現ベクターで形質転換した微生物の培養物を生育
させ、該ポリペプチドを発現することにより成っている
。さらに、本発明は本製造法に用いられる発現ベクター
、これらの発現ベクターを含有する新規微生物およびそ
れらの調製法をも含む。またさらに、本発明は成熟ヒト
白血球インタフエロンにおよびＬのアミノ酸配列をコー
ドする配列より成るＤＮＡ配列に関するものである。
ヒト白血球インタフエロン（ＬｅｌＦ）Ａ種〜Ｊ種、そ
れらの微生物による製造法（即ち、組換えＤＮＡ技術を
用いたもの）、その製造法における中間物質（ＤＮＡ配
列、複製可能な微生物発現ベクター、たとえばプラスミ
ド、および形質転換微生物）およびそれらインタフエロ
ンを含む医薬組成物は、例えば本出願人のヨーロッパ特
許出願Ｎ０．４３９８０および日本公開特許公報Ｎｏ。
れらの微生物による製造法（即ち、組換えＤＮＡ技術を
用いたもの）、その製造法における中間物質（ＤＮＡ配
列、複製可能な微生物発現ベクター、たとえばプラスミ
ド、および形質転換微生物）およびそれらインタフエロ
ンを含む医薬組成物は、例えば本出願人のヨーロッパ特
許出願Ｎ０．４３９８０および日本公開特許公報Ｎｏ。
７９８９７／８２に発表され、主張されている。
成熟白血球インタフエロンの直接発現およびヒト白血球
インタフエロンの８種のクローンされたＯ ＤＮＡの構
造およびＬｅｌＦ−ＡからＨまでのインタフエロン種の
対応するアミノ酸配列は、Ｑ ｏｅｄｄｅｌらによりＮ
ａｔｕｒｅ ２８７巻４１１頁（１９８０年１０月２
日）およびＮ ａｔｕｒｅ ２９０巻２０頁（１９８１
年３月５日）に記載されている。
インタフエロンの８種のクローンされたＯ ＤＮＡの構
造およびＬｅｌＦ−ＡからＨまでのインタフエロン種の
対応するアミノ酸配列は、Ｑ ｏｅｄｄｅｌらによりＮ
ａｔｕｒｅ ２８７巻４１１頁（１９８０年１０月２
日）およびＮ ａｔｕｒｅ ２９０巻２０頁（１９８１
年３月５日）に記載されている。
上記特許明細書およびＮ ａｔｕｒｅの論文（これらは
全て引用文献として本明細書に含まれる）に詳細に記載
され、既に知られた方法となっている手法を用いた本発
明は、組換えヒト白面法インタフエ０ン種群をさらに２
種、ＫおよびＬｌを増やすものである。さらに詳しくは
、ヒト白血球インタフエロンにおよびＬ遺伝子を同定し
たことにより、組換えＤＮＡ技術を通して、同族の白血
球インクフエロン（糖鎖のない）群のこれら新しく加わ
った種を、プレ配列やその一部を伴なわない成熟ポリペ
プチドとして、微生物により生産することが出来た。そ
れらのポリペプチドは直接発現され、回収され、動物お
よびヒトのウィルス性および悪性疾患の治療への使用に
適する程度に精製される。
全て引用文献として本明細書に含まれる）に詳細に記載
され、既に知られた方法となっている手法を用いた本発
明は、組換えヒト白面法インタフエ０ン種群をさらに２
種、ＫおよびＬｌを増やすものである。さらに詳しくは
、ヒト白血球インタフエロンにおよびＬ遺伝子を同定し
たことにより、組換えＤＮＡ技術を通して、同族の白血
球インクフエロン（糖鎖のない）群のこれら新しく加わ
った種を、プレ配列やその一部を伴なわない成熟ポリペ
プチドとして、微生物により生産することが出来た。そ
れらのポリペプチドは直接発現され、回収され、動物お
よびヒトのウィルス性および悪性疾患の治療への使用に
適する程度に精製される。
本明細書で“成熟白血球インタフエロン”の発現という
のは、ヒト白面法インタフェロン遺伝子の−ＲＮＡ翻訳
を伴なう、細菌または他の微生物による糖鎖およびプレ
配列を伴なわないインタフエロン分子の生産を意味する
。本発明によると、成熟白面法インタフエロンは、天然
生産物の第一番目のアミノ酸コドンの直前にある翻訳開
始シグナル（ＡＴＧ）から直ちに発現する。そのため、
成熟ポリペプチドはＡＴＧコードのメチオニンを含むが
それによりポリペプチドの特性は変わらない。また、微
生物宿主が翻訳産物の第一番目のメチオニンを削除する
こともある。
のは、ヒト白面法インタフェロン遺伝子の−ＲＮＡ翻訳
を伴なう、細菌または他の微生物による糖鎖およびプレ
配列を伴なわないインタフエロン分子の生産を意味する
。本発明によると、成熟白面法インタフエロンは、天然
生産物の第一番目のアミノ酸コドンの直前にある翻訳開
始シグナル（ＡＴＧ）から直ちに発現する。そのため、
成熟ポリペプチドはＡＴＧコードのメチオニンを含むが
それによりポリペプチドの特性は変わらない。また、微
生物宿主が翻訳産物の第一番目のメチオニンを削除する
こともある。
ＬｅＩＦＫおよびＬｅｌＦＬと同定された新規の白血球
インタフエロンたん白質は決定された遺伝子のＤＮＡ配
列および推定アミノ酸配列（第１表および第２表参照）
により定義されている。特にこれらのインタフエロンに
於いては天然の対立遺伝子変異が存在し、個々により起
ることがわかる。これらの変異は全配列中のアミノ酸の
差異、削除、置換、挿入、逆位または追加などで示され
る。本発明の白血球インクフエロンたん白では、上記対
立遺伝子変異は各定義で標識、命名・された範囲内、従
って本発明内に含まれるものである。
インタフエロンたん白質は決定された遺伝子のＤＮＡ配
列および推定アミノ酸配列（第１表および第２表参照）
により定義されている。特にこれらのインタフエロンに
於いては天然の対立遺伝子変異が存在し、個々により起
ることがわかる。これらの変異は全配列中のアミノ酸の
差異、削除、置換、挿入、逆位または追加などで示され
る。本発明の白血球インクフエロンたん白では、上記対
立遺伝子変異は各定義で標識、命名・された範囲内、従
って本発明内に含まれるものである。
次に、本発明を実施するための有利な具体例を示す。
Ａ、 Ｊ’ｔｌ１ｍ１ｍ
記載した実施においてはＥ、 ｃｏｌｉ Ｋ−１２２
９４株（ｅｎｄ Ａ、を旧−、ｈｓｒ−、ｈｓｌ：ｃ）
が使用され、これは契国特許公報Ｎｏ。
９４株（ｅｎｄ Ａ、を旧−、ｈｓｒ−、ｈｓｌ：ｃ）
が使用され、これは契国特許公報Ｎｏ。
２０５５３８２Ａに記載され、Ａ １ｅｒｉｃａｎＴｙ
ｐｅ ＣＵｌｔＬＩｒｅ Ｃ０１ｌｅＣｔｉＯｎニ
ＡＴＣＣ番号３１４４６として寄託されている。全ての
組換えＤＮＡ実験はＮ ａｔｉｏｎａｌ Ｉ ｎ５
ｔｉｔｕｔｅ ｏｆＨｅａｌｔｈΦガイドラインに従
って行なった。
ｐｅ ＣＵｌｔＬＩｒｅ Ｃ０１ｌｅＣｔｉＯｎニ
ＡＴＣＣ番号３１４４６として寄託されている。全ての
組換えＤＮＡ実験はＮ ａｔｉｏｎａｌ Ｉ ｎ５
ｔｉｔｕｔｅ ｏｆＨｅａｌｔｈΦガイドラインに従
って行なった。
本発明め最も有利な具体例は、上述のＥ、Ｃｏｌ＋２９
４株のみでなく、他のＥ、Ｃｏｊｉ株たとえばＥ、 ｃ
ｏｌｉ ｘｌ ７７６、Ｅ、ｃｏｌｉＢを含むＥ、ｃｏ
ｌｉ或いは、たとえばＡ ｇ＋ｅｒｉｃａｎ Ｔ ｙ
ＤｅＣｕｌｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ （Ａ
ＴＣＣ）のような公認の微生物寄託機関に寄託され、入
手可能な他の微生物菌株に関して記載される。他の微生
物−としては、たとえば、Ｂ ａｃｉｌｌｕｓ ５ｕ
ｂｔｉｌｉ８のようなり ａｃｉ Ｉ ｌｕｓ属、５ａ
ｌｓｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕ−および
５ｅｒｒａｔ＋ａ ５ａｒｃｅｓｃｅｎｓを例として
挙げられる謁内細ｌがあり、これらは、複製可能で巽種
遺伝子配列を発現することのできるプラスミドを利用す
る。Ｓ ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓ
ｉａｅのような酵母も、酵母のプロモータ制御下にイン
タフエロンたん白をコードする遺伝子を発現することに
より、インタフエロンたん白を生産するための宿主菌と
して有利に用いられる。
４株のみでなく、他のＥ、Ｃｏｊｉ株たとえばＥ、 ｃ
ｏｌｉ ｘｌ ７７６、Ｅ、ｃｏｌｉＢを含むＥ、ｃｏ
ｌｉ或いは、たとえばＡ ｇ＋ｅｒｉｃａｎ Ｔ ｙ
ＤｅＣｕｌｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ （Ａ
ＴＣＣ）のような公認の微生物寄託機関に寄託され、入
手可能な他の微生物菌株に関して記載される。他の微生
物−としては、たとえば、Ｂ ａｃｉｌｌｕｓ ５ｕ
ｂｔｉｌｉ８のようなり ａｃｉ Ｉ ｌｕｓ属、５ａ
ｌｓｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕ−および
５ｅｒｒａｔ＋ａ ５ａｒｃｅｓｃｅｎｓを例として
挙げられる謁内細ｌがあり、これらは、複製可能で巽種
遺伝子配列を発現することのできるプラスミドを利用す
る。Ｓ ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓ
ｉａｅのような酵母も、酵母のプロモータ制御下にイン
タフエロンたん白をコードする遺伝子を発現することに
より、インタフエロンたん白を生産するための宿主菌と
して有利に用いられる。
ｅ −ｅ −
Ｌ ａｗｎら、Ｃｅ１１１５巻、１１５７頁（１９７８
年）、により構成されたヒトゲノムのλファージＣｈａ
ｒｏｎ Ｊ Ａ組換え体ライブラリーをプラークハイブ
リダイゼーション（Ｂ ｅｎｔｏｎａｎｄ Ｄ ａｖ
ｉｓ％Ｓ ｃｉｅｎｃｅｌ ９６巻、１８０頁：１９７
７年）により新規白血球インタフエロン遺伝子を検索し
た。ｃＤ Ｎ ＡクローンＬｅ ＩＦ−Ａ（Ｑ ｏｅｄ
ｄｅｌら、Ｎ ａｔｔｉｒ８２８７巻、４１１頁［１９
８０年］）より誘導した放射性ＬｅｌＦプローブを用い
、その結集、さらに新たなりローンを得た。本クローン
（Ｃ８）はＥｃｏＲＩにより３．３．３．１．２．９．
２．２．１．４および１．３ｋｂ対の断片を示し、この
内２．２．１．４および１．３ｋｂ断片は、０．８％ア
ガロースゲル電気泳動分離とニトロセルロース濾紙への
トランスファー後放射性（ｉＤ Ｎ Ａプローブとハイ
ブリダイズした。
年）、により構成されたヒトゲノムのλファージＣｈａ
ｒｏｎ Ｊ Ａ組換え体ライブラリーをプラークハイブ
リダイゼーション（Ｂ ｅｎｔｏｎａｎｄ Ｄ ａｖ
ｉｓ％Ｓ ｃｉｅｎｃｅｌ ９６巻、１８０頁：１９７
７年）により新規白血球インタフエロン遺伝子を検索し
た。ｃＤ Ｎ ＡクローンＬｅ ＩＦ−Ａ（Ｑ ｏｅｄ
ｄｅｌら、Ｎ ａｔｔｉｒ８２８７巻、４１１頁［１９
８０年］）より誘導した放射性ＬｅｌＦプローブを用い
、その結集、さらに新たなりローンを得た。本クローン
（Ｃ８）はＥｃｏＲＩにより３．３．３．１．２．９．
２．２．１．４および１．３ｋｂ対の断片を示し、この
内２．２．１．４および１．３ｋｂ断片は、０．８％ア
ガロースゲル電気泳動分離とニトロセルロース濾紙への
トランスファー後放射性（ｉＤ Ｎ Ａプローブとハイ
ブリダイズした。
第１図はゲノムＤＮＡりＯ−ンＧ８の１４．２ｋｂ挿入
部の制限酵素切断部位を示す。白血球インタフエロンｃ
ＤＮＡとハイブリダイズする３つの断片は、インタフエ
ロンＣＤ Ｎ Ａ配列を含むプラスミド１０４ （Ｍａ
ｅｄａら、ｐｒｏｃ 、 Ｎａｔｌ 。
部の制限酵素切断部位を示す。白血球インタフエロンｃ
ＤＮＡとハイブリダイズする３つの断片は、インタフエ
ロンＣＤ Ｎ Ａ配列を含むプラスミド１０４ （Ｍａ
ｅｄａら、ｐｒｏｃ 、 Ｎａｔｌ 。
Ａｃａｄ 、 Ｓｃｉ、 Ｕ、 Ｓ、 Ａ、 ７７巻、
７０１０頁［１９８０年］）から得られた内部プライマ
ー、或いはＭ１３ ＤＮＡ部位と相補的な合成オリゴ
ヌクレオチドプライマーと、ＥＣｏＲｌ部位の前で、第
１図に示すように連結した。
７０１０頁［１９８０年］）から得られた内部プライマ
ー、或いはＭ１３ ＤＮＡ部位と相補的な合成オリゴ
ヌクレオチドプライマーと、ＥＣｏＲｌ部位の前で、第
１図に示すように連結した。
第１図において、縦の矢印は制限酵素の切断部位を示す
。斜線部分はＣＤ Ｎ Ａプ０−プとハイブリダイズす
るＥｃｏＲＩ断片を表わす。又黒く′ぬりつぶした部分
はたん白をコードする部分を表わし、水平の矢印は、白
丸印で示されるプライマーから始まるＤＮＡ終結配列の
方向と長さとを表わす。
。斜線部分はＣＤ Ｎ Ａプ０−プとハイブリダイズす
るＥｃｏＲＩ断片を表わす。又黒く′ぬりつぶした部分
はたん白をコードする部分を表わし、水平の矢印は、白
丸印で示されるプライマーから始まるＤＮＡ終結配列の
方向と長さとを表わす。
線状断片（Ｓａｕ３Ａ−ＥｃｏＲＩ ）を得る。これと
断片（ｂ）を結合して環状分子を得る。上記の結合反応
は３断片結合として同時に行う。形質転換株はアンピシ
リンとテトラサイクリン耐性で選択し、制限酵素図でス
クリーニングして得られるクーロンを後の実験に用いる
。正しい分子は３個のＥＣｏＲｌ部位を有する。
断片（ｂ）を結合して環状分子を得る。上記の結合反応
は３断片結合として同時に行う。形質転換株はアンピシ
リンとテトラサイクリン耐性で選択し、制限酵素図でス
クリーニングして得られるクーロンを後の実験に用いる
。正しい分子は３個のＥＣｏＲｌ部位を有する。
ステップ２ニ
ステップ１で得られるプラスミドをＥｃｏＲＩで部分消
化し、線状型をゲル電気泳動で単離する。
化し、線状型をゲル電気泳動で単離する。
この線状ＥｃｏＲＩ断片を断片（Ｃ）と結合する。
挿入部位３ケ所で各２つの方向性が可能であるので、得
られる形質転換株の６分の１が白血球インタフエロンＫ
（Ｌｅ ＩＦ−ｒ Ｋ）を生産するのに適した配列で
ある。
られる形質転換株の６分の１が白血球インタフエロンＫ
（Ｌｅ ＩＦ−ｒ Ｋ）を生産するのに適した配列で
ある。
えプラスミ° ＬｅＩＦ−ｒＫの 約
組換えプラスミド、ｐＬ、ｅｔｉ−ｒＫは上記のように
構成された。Ｅ、 ｃｏｌｉ Ｋ −１２へ導入され
ると、このプラスミドはアミノ末端のメチオニン（開始
コドン）と共にヒト白血球インタフエロンの１種に対応
する、アミノ酸１６６個のたん白を生産した。本プラス
ミドは第２図に示す断片を含有している。
構成された。Ｅ、 ｃｏｌｉ Ｋ −１２へ導入され
ると、このプラスミドはアミノ末端のメチオニン（開始
コドン）と共にヒト白血球インタフエロンの１種に対応
する、アミノ酸１６６個のたん白を生産した。本プラス
ミドは第２図に示す断片を含有している。
本インタフエロンＤＮＡは精製ヒト白血球インタフエロ
ンから得られるたん白配列のデータ（Ｒｕｂｉｎｓｔｅ
ｉｎら、Ａ ｒｃｈ 、 Ｂ ｉｏｃｈｅｍ、 Ｂ １
ｏｐｈｙｓ。
ンから得られるたん白配列のデータ（Ｒｕｂｉｎｓｔｅ
ｉｎら、Ａ ｒｃｈ 、 Ｂ ｉｏｃｈｅｍ、 Ｂ １
ｏｐｈｙｓ。
２１０巻、３０７〜３１８頁［１９８１年］；Ｌ ｅｖ
ｙら、Ｐｒｏｃ 、 Ｎａｔｌ 、 Ａｃａｄ 、 Ｓ
ｃｉ。
ｙら、Ｐｒｏｃ 、 Ｎａｔｌ 、 Ａｃａｄ 、 Ｓ
ｃｉ。
Ｕ、Ｓ、Ａ、７８巻、６１８６〜６１９０頁［１９８１
年］：ＬｅＶＶら、Ｐｒｏｃ 、 Ｎａｔｌ 。
年］：ＬｅＶＶら、Ｐｒｏｃ 、 Ｎａｔｌ 。
Ａｃａｄ 、 Ｓｃｉ、 Ｌｌ、 Ｓ、 Ａ、 ７７巻
、５１０２〜５１０４頁［１９８０年］；７ｏｏｎら、
Ｓ ｃｉｅｎｃｅ１２０７巻、５２７〜５２８頁［１９
８０年］）と一致するたん白をコードする。ＤＮＡの残
部には、遺伝子の３′側の非翻訳部分が含まれるが他の
遺伝子は含まれていない。
、５１０２〜５１０４頁［１９８０年］；７ｏｏｎら、
Ｓ ｃｉｅｎｃｅ１２０７巻、５２７〜５２８頁［１９
８０年］）と一致するたん白をコードする。ＤＮＡの残
部には、遺伝子の３′側の非翻訳部分が含まれるが他の
遺伝子は含まれていない。
Ｌｅ ＩＦ−ｒ Ｌの の手
ＬｅｌＦ−ｒＬの発現プラスミドを構成するために次の
断片を単一する。
断片を単一する。
（ａ ） Ｇ８−ＩＩＩからの３５ ｂ、ｐ、の３ａ
ｕ３ａ −８ａｕ９６１断片（２，２ｋｂ） （ｂ） Ｇ３−ｌ１１部分からの５ａｕ９６１−ＥＣ
ＯＲＩ断片から３′末端までの断片（約１３００ｂ、ｐ
、） （ｃ ） ｐＬｅ ＩＦ−Ａ２５からの上に記載の
およそ３００ ｂ、ｐ、の断片（Ｈｉｎｄ ｌ１ｌ−８
ａｕ３ａ ）（ｄ） Ｉ）ＢＲ３２２からの前述の
ＥｃｏＲＩ−Ｈｉｎｄｌ断片（４，３ｋｂ） ステップ１： 断片（ａ）を３断片結合反応液中で、断片（ｂ ）およ
び（Ｃ）と結合する。ポリメリゼーションを最少限とす
るため、生成するａ −ｂ−ｃ区分をＨｉｎｄｌ［［お
よびＥｃｏＲＩで切断する。ｃ −ａ −ｂ断片を＊＊
１．、、（ｄ ）と結合して発現プラスミドを得る。形
質転換株をアンピシリンおよびテトラサイクリン耐性で
選択する。制限酵素地図により形質転換をスクリーニン
グする。目的の分子はおよそ６０００ ｂ、ｐ、の大き
さであり、３個のＥｃｏＲ１部位を有し、Ｅ、ｃｏｌｉ
Ｋ１２を形質転換するとＮ末端にメチオニンを付加
したヒト白白球インタフエロンの１種に相当する１６６
個のアミノ酸より成るたん白（Ｌｅ ＩＦ−ｒ Ｌ）を
生産する。このプラスミドは第３図に示すような断片を
含んでいる。
ｕ３ａ −８ａｕ９６１断片（２，２ｋｂ） （ｂ） Ｇ３−ｌ１１部分からの５ａｕ９６１−ＥＣ
ＯＲＩ断片から３′末端までの断片（約１３００ｂ、ｐ
、） （ｃ ） ｐＬｅ ＩＦ−Ａ２５からの上に記載の
およそ３００ ｂ、ｐ、の断片（Ｈｉｎｄ ｌ１ｌ−８
ａｕ３ａ ）（ｄ） Ｉ）ＢＲ３２２からの前述の
ＥｃｏＲＩ−Ｈｉｎｄｌ断片（４，３ｋｂ） ステップ１： 断片（ａ）を３断片結合反応液中で、断片（ｂ ）およ
び（Ｃ）と結合する。ポリメリゼーションを最少限とす
るため、生成するａ −ｂ−ｃ区分をＨｉｎｄｌ［［お
よびＥｃｏＲＩで切断する。ｃ −ａ −ｂ断片を＊＊
１．、、（ｄ ）と結合して発現プラスミドを得る。形
質転換株をアンピシリンおよびテトラサイクリン耐性で
選択する。制限酵素地図により形質転換をスクリーニン
グする。目的の分子はおよそ６０００ ｂ、ｐ、の大き
さであり、３個のＥｃｏＲ１部位を有し、Ｅ、ｃｏｌｉ
Ｋ１２を形質転換するとＮ末端にメチオニンを付加
したヒト白白球インタフエロンの１種に相当する１６６
個のアミノ酸より成るたん白（Ｌｅ ＩＦ−ｒ Ｌ）を
生産する。このプラスミドは第３図に示すような断片を
含んでいる。
本インタフエロンＤＮＡ配列は精製ヒト白面球インタフ
エロンから得られるたん白配列データ（Ｒｕｂｉｎｓｔ
ｅｉｎら、Ａ ｒｃｈ 、 Ｂ ｉｏｃｈｅｍ、 Ｂ
１ｏｐｈｙｓ。
エロンから得られるたん白配列データ（Ｒｕｂｉｎｓｔ
ｅｉｎら、Ａ ｒｃｈ 、 Ｂ ｉｏｃｈｅｍ、 Ｂ
１ｏｐｈｙｓ。
２１０巻、３０７〜３１８頁［１９８１年］：Ｌ ｅｖ
ｙら、Ｐｒｏｃ 、 Ｎａｔｌ 、 Ａｃａｄ 、 Ｓ
ｃｉ。
ｙら、Ｐｒｏｃ 、 Ｎａｔｌ 、 Ａｃａｄ 、 Ｓ
ｃｉ。
Ｕ、Ｓ、Ａ、７８巻、６１８６〜６１９０頁［９８１年
］：ＬｅＶＶら、Ｐｒｏｃ 、 Ｎａｔｌ 。
］：ＬｅＶＶら、Ｐｒｏｃ 、 Ｎａｔｌ 。
Ａｃａｄ 、 Ｓｃｉ、 Ｕ、 Ｓ、 Ａ、 ７７巻、
５１０２〜５１０４頁［１９８０年］；７ｏｏｎら、３
Ｃ１ｅｎＣｅ２０７巻、５２７〜５２８頁［１９８０
年］）と一致する一つのたん白をコードしている。ＤＮ
Ａの残部には遺伝子３′−側の非翻訳部分が含まれるが
、他の遺伝子は含まれていない。
５１０２〜５１０４頁［１９８０年］；７ｏｏｎら、３
Ｃ１ｅｎＣｅ２０７巻、５２７〜５２８頁［１９８０
年］）と一致する一つのたん白をコードしている。ＤＮ
Ａの残部には遺伝子３′−側の非翻訳部分が含まれるが
、他の遺伝子は含まれていない。
ヨーロッパ特許出願Ｎｏ、４３９８０あるいは日本公開
特許公報Ｎｏ、７９８９７／８２に詳細に記載しである
手法を用いることにより、組換えＬｅｌＦ−におよび−
１の細菌抽出物中の含有参は高められ、生産物は精製物
として得ることができる。
特許公報Ｎｏ、７９８９７／８２に詳細に記載しである
手法を用いることにより、組換えＬｅｌＦ−におよび−
１の細菌抽出物中の含有参は高められ、生産物は精製物
として得ることができる。
ＬｅｌＦ−におよび−Ｌは抗腫瘍あるいは抗ウイルス治
療を必要とする患者および免疫抑制状態を示す患者に対
して非経口で投与される。投与幡および投与回数はヒト
由来の物質で現在臨床試験に用いられるのと同等、即ち
、−口約（１〜１０）ＸＩＯＢ単位、そして純度１％以
上の物質の場合多分−日５Ｘ１０７単位までであろう。
療を必要とする患者および免疫抑制状態を示す患者に対
して非経口で投与される。投与幡および投与回数はヒト
由来の物質で現在臨床試験に用いられるのと同等、即ち
、−口約（１〜１０）ＸＩＯＢ単位、そして純度１％以
上の物質の場合多分−日５Ｘ１０７単位までであろう。
本質的に均質の細菌ＬｅＩＦの非経口用の適当な投与剤
の例として、たとえば比活性２Ｘ１０Ｂ単位／１０のＬ
ｅｌＦ３１０を５Ｎのヒト血清アルブミン２５−１に溶
解し、溶液を除菌フィルターを通した後、無菌的に１０
０バイアルに分注してそれぞれ６Ｘ１０Ｂ単位の純粋な
インタフエロンを含有する非経口投与に適したバイアル
を得る。使用前、バイアルは低温（−２０℃）で貯蔵す
るのが望ましい。
の例として、たとえば比活性２Ｘ１０Ｂ単位／１０のＬ
ｅｌＦ３１０を５Ｎのヒト血清アルブミン２５−１に溶
解し、溶液を除菌フィルターを通した後、無菌的に１０
０バイアルに分注してそれぞれ６Ｘ１０Ｂ単位の純粋な
インタフエロンを含有する非経口投与に適したバイアル
を得る。使用前、バイアルは低温（−２０℃）で貯蔵す
るのが望ましい。
本発明のインタフエロン種は医薬に有効な組成物を調製
するのに既に知られている方法、即ち、医薬的に許容さ
れうる担体基礎剤と混ぜ合わせて処方される。適当な基
礎剤およびその処方は、Ｅ。
するのに既に知られている方法、即ち、医薬的に許容さ
れうる担体基礎剤と混ぜ合わせて処方される。適当な基
礎剤およびその処方は、Ｅ。
Ｗ、 ＭａｒｔｉｎによるＲ ｅｌｉｎｇｔｏｒｌ’
ＳＰ ｈａｒｓａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓ ｃｉｅｎａ
ｅｓに記載されており、これを参考文献として引用する
。これらの組成物は、インタフエロンたん白の有効鏝と
、適量の基礎剤を含み、宿主に対して有効で投与に適し
た医薬的に許容し得る組成物とする。投与法の一つの有
利なものは非経口投与である。
ＳＰ ｈａｒｓａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓ ｃｉｅｎａ
ｅｓに記載されており、これを参考文献として引用する
。これらの組成物は、インタフエロンたん白の有効鏝と
、適量の基礎剤を含み、宿主に対して有効で投与に適し
た医薬的に許容し得る組成物とする。投与法の一つの有
利なものは非経口投与である。
第１図は、ゲノムＤＮＡ、クローンＧ８の１４ｋｂ挿入
部の制限酵素切断図を示す。 第２図および第３図は、それぞれ組換えプラスミドＩ）
ＬｅｌＦｒＫおよびｐＬｅＩＦｒＬの構成を示す。 代理人 浅 村 皓 外４名 第１図 １、。 Ｃトー−−−１−― 第３図 ａｕ３ａ ρ８Ｒ３２２由東＾所ｈ 第１頁の続き − １／１９ １／４２ １／４２５ １／８６５ ０発 明 者 シトニー・ペストカ アメリカ合衆国ニューシャーシ ー州ノース・カルドウエル・プ ルックサイド・テラス８２ ０出 願 人 ジエネンテック・インコーホレーテッド アメリカ合衆国カリフォルニア 州廿ウス・サン・フランシスコ ・ポイント・サン・ブルノ・ブ ールバード４６０
部の制限酵素切断図を示す。 第２図および第３図は、それぞれ組換えプラスミドＩ）
ＬｅｌＦｒＫおよびｐＬｅＩＦｒＬの構成を示す。 代理人 浅 村 皓 外４名 第１図 １、。 Ｃトー−−−１−― 第３図 ａｕ３ａ ρ８Ｒ３２２由東＾所ｈ 第１頁の続き − １／１９ １／４２ １／４２５ １／８６５ ０発 明 者 シトニー・ペストカ アメリカ合衆国ニューシャーシ ー州ノース・カルドウエル・プ ルックサイド・テラス８２ ０出 願 人 ジエネンテック・インコーホレーテッド アメリカ合衆国カリフォルニア 州廿ウス・サン・フランシスコ ・ポイント・サン・ブルノ・ブ ールバード４６０
Claims (40)
- （１） 成熟ヒト白血球インクフエロンＫ又はＬのプレ
配列を伴なわないアミノ酸配列より成るポリペプチド。 - （２） 糖を含有しない、上記（１）項記載のポリペプ
チド。 - （３） 成熟ヒト白血球インタフエロンＫ又はＬの通常
の第一番目のアミノ酸のＮ末端にメチオニンを結合した
アミノ酸配列より成るポリペプチド。 - （４） 成熟ヒト白血球インタフエロンＫ（Ｌｅ ＩＦ
−Ｋ） - （５） 成熟ヒト白血球インタフエロンＬ（Ｌｅ ＩＦ
−Ｌ）。 - （６） 微生物的に生産された、上記（１）項〜（５）
項のいずれか一つに記載のポリペプチド。 - （７） 細菌により生産された、上記（１）項〜（５）
項のいずれか一つに記載のポリペプチド。 - （８） Ｅ、Ｃ０１ｉにより生産された、上記（１）
項から（５）項のいずれか一つに記載のポリペプチド。 - （９） 成熟ヒト白面法インタフエロンＫまたはＬの、
プレ配列を伴なわないアミノ酸配列をコードする塩基配
列より成るＤＮＡ配列。 - （１０） 成熟ヒト白血球インタフエロンＫまたはＬの
通常の第一番目のアミノ酸のＮ末端にメチオニンを結合
して含有するアミノ酸配列をコードする塩基配列より成
るＤＮＡ配列。 - （１１） 成熟ヒト白血球インタフエロンＫ（ｍｅ Ｉ
Ｆ−Ｋ）をコードするＤＮＡ配列。 - （１２） 成熟ヒト白血球インタフエロンＬ（Ｌｅ Ｉ
Ｆ−１）をコードするＤＮＡ配列。 - （１３） 上記（１）項〜（８）項のいずれか一つに記
載のポリペプチドの微生物発現を行なわせるためのＤＮ
Ａ配列を結合した、上記（９）項〜（１２）項のいずれ
か一つに記載のＤＮＡ配列。 - （１４） 上記（１）項〜（８）項のいずれか一つに記
載のポリペプチドを細菌内発現させるためのＤＮＡ配列
を結合した、上記（９）項〜（１２）項のいずれか一つ
に記載のＤＮＡ配列。 - （１５） 上記（１）項〜（８）項のいずれか一つに記
載のポリペプチドを大腸菌内発現させるためのＤＮＡ配
列を結合した、上記（９）項〜（１２）項のいずれか１
つに記載のＤＮＡ配列。 - （１６） 上記（１）項〜（８）項のいずれか一つに記
載のポリペプチドの、形質転換大腸菌内発現を可能なら
しめる、複製可能な微生物の発現ベクター。 - （１７） 上記（１）項〜（８）項のいずれか一つに記
載のポリペプチドの、形質転換組菌内発現を可能ならし
める、複製可能な細菌の発現ベクター 〇 - （１８） 上記（１）項〜（８）項のいずれか一つに記
載のポリペプチドの、形質転換大腸菌内発現を可能なら
しめる、複製可能な大ｌ！菌の発現ベクター。 - （１９） 上記（１６）項〜（１８）項のいずれか一つ
に記載の、プラスミドである微生物発現ベクター。 - （２０） 上記（１６）〜（１９）項のいずれか一つに
記載のベクターで形質転換した微生物。 - （２１） 上記（１６）項〜（１９）項のいずれか一つ
に記載のベクターで形質転換した細菌。 - （２２） 上記（１６）項〜（１９）項のいずれか一つ
に記載のベクターで形質転換したＥ、ＣＯＩ＋の転換株
。 - （２３） 上記（１６）項〜（１９）項のいずれか一つ
に記載のベクターで形質転換したＥ、ｃｏｌｉＫ−１２
２９４株。 - （２４） 本質的に上記（１）項〜（５）項のいずれか
一つに記載のヒト白血球インタフエロンＫまたはＬのア
ミノ酸配列より成るポリペプチドの治療活性区分を含み
、その残りは、該ポリペプチドを治療応用に十分有効な
程度に精報した微生物由来の可溶性たん白質である組成
物。 - （２５） 本質的に上記（１）項〜（５）項のいずれか
一つに記載のヒト白血球インタフエロンＫまたはＬのア
ミノ酸配列より成るポリペプチドを、約９５パーセント
以上の純度で含有する細菌抽出物。 - （２６） 治療有効量の、上に！（１）墳〜（５）項の
いずれか一つに記載のヒト白血球インタフエロンＫまた
はしおよび薬剤投薬に適した担体物質とを含有する薬剤
組成物。 - （２７） 非経口投与のための、上記（２６）項記載の
薬剤組成物。 - （２８） ヒト白血球インクフエ０ンＫまたはＬを生産
可能な微生物細胞の培養株。 - （２９） 上記（２０）項〜（２３）項のいずれか一つ
に記載の微生物である、上記（２８）項記載の培養株。 - （３０） がんおよびウィルス感染の治療のため、また
は、その治療に有効な薬剤組成物を調製するために、上
記（１）項〜（８）項のいずれか一つに記載の化合物を
使用すること。 - （３１） 上記（１）項〜（８）項のいずれか一つに記
載の化合物を微生物生産するために、上記（９）項〜（
１５）項のいずれか一つに記載のＤＮＡ配列を使用する
こと。 - （３２） 上記（１）項〜（８）項のいずれか一つに記
載の化合物を微生物生産するために、上記（１６）項〜
（１９）項のいずれか一つに記載の発現ベクターを使用
すること。 - （３３） 上記（１）項〜（８）項のいずれか一つに記
載の化合物を生産するために、上記（２０）項〜（２３
）項のいずれか一つに記載の微生物または、上記（２８
）項〜（２９）項のいずれか一つに記載の微生物細胞培
養株を使用すること。 - （３４） がんおよびウィルス感染の治療のため、また
はその治療に有効な薬剤組・酸物を調製するために用い
られる上記（１）項〜（８）項のいずれか一つに記載の
化合物。 - （３５） 上記（１）項〜（８）項のいずれか一つに記
載の化合物を微生物生産するのに用いられる、上記（９
）項〜（１５）項のいずれか一つに記載のＤＮＡ配列。 - （３６） 上記（１）項〜（８）項のいずれか一つに記
載の化合物を微生物生産するのに用いられる、上記（１
６）項〜（１９）項のいずれか一つに記載の発現ベクタ
ー。 - （３７） 上記（１）項〜（８）項のいずれか一つに記
載の化合物を生産するのに用いられる、上記〈２０）項
〜（２３）項のいずれか一つに記載の微生物または上＆
ｌ！（２８）項〜（２９）項のいずれか一つに記載の微
生物細胞培養株。 - （３８） 微生物培養株を、上記（１）項〜（８）項の
いずれか一つに記載のポリペプチドを発現できる複製可
能な微生物発現ベクターで形質転換し、生育させて該ポ
リペプチドを発現させ、該ポリペプチドを回収すること
より成るポリペプチドの調製方法。 - （３９） 上記（１）項〜（８）項のいずれか一つに記
載のポリペプチドを発現できる、複製可能な微生物発現
ベクターで微生物を形質転換し、形質転換微生物を培養
することより成る該ポリペプチド発現可能な微生物の調
製方法。 - （４０） 上記（１）項〜（８）項のいずれか一つに記
載のポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を先ず構成し
、これに該ポリペプチドの微生物発現を実施できる第二
のＤＮＡ配列を有効に結合することより成る、形質転換
微生物中で該ポリペプチド発現可能な複製可能微生物発
現ベクターの調製方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US29304481A | 1981-08-14 | 1981-08-14 | |
| US293044 | 1981-08-14 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5841849A true JPS5841849A (ja) | 1983-03-11 |
Family
ID=23127395
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57140898A Pending JPS5841849A (ja) | 1981-08-14 | 1982-08-13 | ヒト白血球インタフエロン |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0072541A3 (ja) |
| JP (1) | JPS5841849A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61129200A (ja) * | 1984-08-27 | 1986-06-17 | ジエネンテク，インコ−ポレイテツド | 新規な白血球インタ−フエロン |
| JP2007016453A (ja) * | 2005-07-06 | 2007-01-25 | Sk Kaken Co Ltd | 押圧具及びそれを用いた模様形成方法 |
| US7399464B2 (en) | 2001-06-11 | 2008-07-15 | Genodyssee Sa | Polypeptides of the IFNα-7 gene |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1217440A (en) * | 1982-08-18 | 1987-02-03 | Michael A. Innis | INTERFERON .alpha. 6L |
| GB2150573B (en) * | 1983-02-24 | 1987-11-11 | Inst Organicheskogo Sinteza Ak | Leukocytic human interferon n and method to obtain it in bacterial cells |
| DE3685044D1 (de) * | 1985-02-01 | 1992-06-04 | Ici Plc | Analoge interferon-polypeptide, verfahren zu deren herstellung und diese enthaltende pharmazeutische zusammensetzungen. |
| EP0240224A3 (en) * | 1986-03-31 | 1989-02-01 | Interferon Sciences, Inc. | An alpha interferon analogue |
| DE3751409T2 (de) | 1986-04-15 | 1996-01-25 | Ciba Geigy Ag | Monoklonale Antikörper gegen Interferon-induziertes humanes Protein in gereignigter Form, und diese Antikörper enthaltende Testsätze. |
| SU1703690A1 (ru) * | 1986-04-30 | 1992-01-07 | Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов | Рекомбинантна плазмидна ДНК @ 22, кодирующа синтез интерферона @ -11 человека, и штамм бактерии РSеUDомоNаS Sp. -продуцент- интерферона @ -11 человека |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES8302778A1 (es) * | 1980-11-10 | 1983-02-01 | Genentech Inc | Un procedimiento para producir un polipeptido antiviral. |
-
1982
- 1982-08-12 EP EP82107337A patent/EP0072541A3/en not_active Ceased
- 1982-08-13 JP JP57140898A patent/JPS5841849A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61129200A (ja) * | 1984-08-27 | 1986-06-17 | ジエネンテク，インコ−ポレイテツド | 新規な白血球インタ−フエロン |
| JPH06234796A (ja) * | 1984-08-27 | 1994-08-23 | Genentech Inc | 新規な白血球インターフェロン |
| US7399464B2 (en) | 2001-06-11 | 2008-07-15 | Genodyssee Sa | Polypeptides of the IFNα-7 gene |
| JP2007016453A (ja) * | 2005-07-06 | 2007-01-25 | Sk Kaken Co Ltd | 押圧具及びそれを用いた模様形成方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0072541A3 (en) | 1984-04-18 |
| EP0072541A2 (en) | 1983-02-23 |
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