SU1703690A1 - Рекомбинантна плазмидна ДНК @ 22, кодирующа синтез интерферона @ -11 человека, и штамм бактерии РSеUDомоNаS Sp. -продуцент- интерферона @ -11 человека - Google Patents
Рекомбинантна плазмидна ДНК @ 22, кодирующа синтез интерферона @ -11 человека, и штамм бактерии РSеUDомоNаS Sp. -продуцент- интерферона @ -11 человека Download PDFInfo
- Publication number
- SU1703690A1 SU1703690A1 SU864065414A SU4065414A SU1703690A1 SU 1703690 A1 SU1703690 A1 SU 1703690A1 SU 864065414 A SU864065414 A SU 864065414A SU 4065414 A SU4065414 A SU 4065414A SU 1703690 A1 SU1703690 A1 SU 1703690A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- size
- gene
- interferon
- pvn22
- plasmid
- Prior art date
Links
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 title claims abstract description 27
- 241000589774 Pseudomonas sp. Species 0.000 title claims abstract description 14
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title claims abstract description 7
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 title claims description 17
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 title claims description 14
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 title claims description 5
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 claims abstract description 11
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 9
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 claims abstract description 7
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract 6
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims abstract 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims abstract 2
- 101150097493 D gene Proteins 0.000 claims 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 abstract description 5
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 abstract description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 abstract description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 abstract 1
- 241000702315 Escherichia virus phiX174 Species 0.000 abstract 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 5
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 241000701533 Escherichia virus T4 Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 101000702488 Rattus norvegicus High affinity cationic amino acid transporter 1 Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 description 1
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101150033202 thr gene Proteins 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/56—IFN-alpha
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
- C12N15/78—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora for Pseudomonas
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к биотехнологии , генной инженерии, микробиологической и медицинской промышленности и представл ет собой сконструированную in vitro плазмиду. обеспечивающую биосинтез лейкоцитарного интерферона человека, и штамм Pseudomonas sp. - продуцент лейкоцитарного интерферона, содержащий эту плазмиду. Целью изобретени вл етс повышение выхода интерферона сг-П человека . Рекомбинантна плазмидна ДНК pVN 22. кодирующа синтез интерферона с:-И человека, состоит из и НтсПП-фр&г- ментов плазмиды pAYC37. Штамм Pseudomonas sp. 31 (pVN 22) ВКМВ-3480 - продуцент интерферона а-|1 человека. 2 с.п. ф-лы. 1 ил.
Description
Изобретение относитс к биотехнологии , генной инженерии, микробиологической и медицинской промышленности и представл ет собой сконструированную in vitro плазмиду, обеспечивающую биосинтез лейкоцитарного интерферона человека, и штамм Pseudomonas sp. - продуцент лейкоцитарного интерферона. содержащий эту плазмиду.
Цель изобретени - повышение выхода интерферона а -И.
На чертеже показана схема конструировани плазмиды pVN 22.
П р и м е р 1. Конструирование плазмиды pVN22.
0.2 мкг ДНКплазмиды pAYC37(Plasmid. 14, 118-125, 1985) и 1 мкг ДНК известной плазмиды pVN 609 расщепл ют рестрикта- зами EcoRI и Hindlll в следующих услови х:
6 мМ трис-CI, рН 7.6. 6 мМ MgCl2, 6 мМ 2-меркаптоэтанола и 50 мМ NaCI; EcoRI - 2 ед. активности, Hindl.ll - 2 ед. активности; обьем реакционной смеси 30 мкл. Реакцию провод т 40 мин при 37°С и останавливают прогреванием в течение 15 мин при 65°С. Затем провод т смешивание полученных фрагментов с помощью ДНК-лигазы фага Т4. Лигирование провод т при 12-14°С в течение 120 мин, после чего такую смесь трансформацией ввод т в E.coli C600.
Трансформацию провод т следующим образом. Ночную культуру E.coli C600 в 500 раз развод т жидкой средой LB (7) и раст т на качалке с аэрацией при 37°С до достижени культурой клеток оптической плотности 0,4-0,6 ед. при 550 нм. Затем суспензию клеток охлаждают в лед ной бане , собирают центрифугированием,суспенXI
О
GJ о ю о
дируют в лед ном растворе 0,1 М CaCl2, после чего суспензию на 30 мин помещают в лед ную баню. Затем клетки собирают центрифугированием и ресуспендируют в 1/20 первоначально объема клеточной сус- пензии. К 100 мкл приготовленных таким образом клеток добавл ют 30 мкл раствора ДНК после лигировани и после тщательного перемешивани полученную смесь составл ют на 30 мин в лед ной бане, затем провод т прогревание смеси, помеща п ро- бу в вод ной термостат с температурой 42°С на 4-5 мин, после чего пробу снова помещают на 20 мин в лед ную баню.
Затем суспензию в дес ть раз развод т средой LB и на 2,0-2.5 ч помещают в термостат 37°С. Така длительна инкубаци необходима дл про влени устойчивости к стрептомицину. После подращивани 10- 50 мкл клеточной культуры высевают на ага- ризованную LB-среду, содержащую в качестве селективных маркеров стрептомицин (100 мкг/мл) и эмпициллин (100 мкг/мл).
кторна плазмида pAYC37 не способ- н 1 восстановлении дать трансформан- TL 1 такой среде, так как не обладает устойчивостью к стрептомицину. Промотор, с которого происходит экспресси стрепто- мицинустойчивости, у pAYC37 отсутствует. При клонировании промотор-содержащего фрагмента с интерфероном а -Ц из pVN 609 в pAYC37 происходит восстановление устойчивости к стрептомицину, что позвол ет легко отбирать клоны, содержащие искомые плазмиды. Из таких клонов щелоч- ным методом выдел ют плазмидную ДНК и анализируют структуру плазмид с помощью рестриктаз HindlJJ и EcoR в указанных услови х . Анализ получаемых фрагментов провод т с помощью электрофореза в 1 %-ном агарозном геле в стандартном трис-борат- ном буфере с последующим прокрашивани- ем гел бромистым этидием, что позвол ет увидеть фрагменты ДНК в длинноволновом ультрафиолете. Идентифицирована плазмида pVN 22.
П р и м е р 2. Получение штамма Pseudomonas sp. 31 (pVN 22), продуцирующего интерферон а-П.
Дл введени плазмиды pVN 22 в Pseudomonas sp. 31 примен ют две последовательные конъюгации. Сначала в штамм E.coll C600 (pVN 22) конъюгацией ввод т плазмиду R751, котора обеспечивает устойчивость к триметаприму.
Высев конъюгатов производ т на минимальную агаризованную солевую среду Адамса, содержащую следующие компоненты: глюкоза 4 мг/мл: тиэмингидрохлорид 5 мкг/мл; треонин 50 мкг/мл; лейцин 50 мкг/мл; ампициллин 75 мкг/мл; стрептомицин 75 мкг/мл; триметаприм 75 мкг/мл. В этих услови х вырастают только конью- гаты E.coli C600 (R 751, pVN 22). Затем провод т конъюгацию между E.coli C600(R 751. pVN 22) и Pseudomonas sp. 31 с дефектным геном thr А. Конъюгэты вырастают на минимальной агаризованной солевой среде следующего состава: глюкоза 4 мг/мл; тиамингидрохлорид 5 мкг/мл; треонин 50 мкг/мл; ампициллин 75 мкг/мл, стрептомицин 200 мкг/мл, триметаприм 75 мкг/мл. Температура роста конъюгантов 30°С. Штамм-донор СбОО (R 751, pVN 22), помимо треонина, нуждаетс еще и в лейцине, поэтому на такой среде не вырастает. В результате получен штамм Pseudomonas sp. 31 (pVN 22), содержащий плазмиду, котора обеспечивает синтез интерферона а-11.
Штамм Pseudomonas sp. 31 (pVN 22) характеризуетс следующими признаками.
Морфологические признаки. Клетки пр мые палочковидные длиной 3-5 мк, гра- мотрицательные, неспороносные.
Культуральные признаки. Клетки хорошо растут на простых питательных средах. На м сопептонном агаре через 24 ч роста при 25-30° образуют крупные колонии с неровным краем (диаметр 3-4 мм), поверхность шероховата , цвет светло-зеленый. При росте на бульоне Хоттингера или М 9 с добавками казаминокислот образуетс равномерна муть. Через 24 ч роста на бульоне Хоттингера с аэрацией культура приобретает светло-зеленый цвет и слегка опалесци- рует.
Физиолого-биохимические признаки. Клетки Pseudomonas sp. 31 (pVN 22) растут при 10-35° с оптимумом 30°С при рН 6,7- 7,5. Источники углерода: глюкоза, арабино- за. Источники азота: соли аммони , мочевина, могут быть также аминокислоты, пептон, триптон и т.п.
Устойчивость к антибиотикам. Клетки Pseudomonas sp. 31(pVN 22) обладают устойчивостью к 400-500 мкг/мл стрептомицина и 150-200 мкг/мл ампициллина.
Стабильность плазмиды в штамме. При поддержании клеток Pseudomonas sp. 31 (pVN 22) в течение 6 мес на агаризованной среде, содержащей ампициллин и стрептомицин в соответствующих концентраци х, не наблюдаютс потери или перестройки плазмиды.
П р и м е р 3. Культивирование Pseudomonas sp. 31 (pVN 22).
Штамм Pseudomonas sp. 31 (pVN 22) вы- ращивгют при 28°С с течение 14 ч на скошенной агаризованной стандартной среде
Хоттингера, содержащей антибиотики: ампициллин 75 мкг/мл, стрептомицин 150 мкг/мл. Триметаприм в среду не добавл етс , так как наличие плазмиды R751 на продукцию интерферона не вли ет. Вы- росшую на кос ках биомассу используют дл приготовлени посевного материала. Дл этого клетки перенос т в колбы Эрлен- мейера объемом 750 мл со 100 мл указанной среды, но без агара и выращивают на качал- ке при перемешивании (240 об/мин) в тече- ние нескольких часов при 280C 0-Ds50 посевной культуры должна быть равна приблизительно 1,0-2,5. Ферментацию провод т в ферментере, оснащенном системами дл регулировани температуры, рН, скорости перемешивани и аэрации, датчиком дл измерени парциального давлени растворенного кислорода.
Посевную культуру внос т в количестве 5% в ферментер с указанной средой. Раст т клетки до оптической плотности в стандартных услови х 2-4 при рН 6,7-6,9 и температуре 28±0,5°С. Провод т интенсивную аэрацию и перемешивание. Режим, аэра- ции и перемешивани подбирают так, что рост культуры не лимитируетс концентрацией растворенного кислорода, дл чего значение парциального давлени кислорода поддерживают на уровне 5-10% от насы- щени . Дл стабилизации рН используют аммиачную воду. Рост биомассы контролируют по изменению оптической плотности культуральной среды. После окончани ферментации активность интерферона состав- л ет2,5 х 109 МЕ/л.
Таким образом, создана плазмида, обеспечивающа синтез нового вида человеческого лейкоцитарного интерферона GT-I1 и способна реплицироеатьс во мно-
гих грамотрицательных бактери х. С помощью полученной плазмиды создан штамм - продуцент интерферона и -11 с активностью до 2,5 х 109 МЕ/л культуральчой жидкости.
Использование интерферона а-11 в качестве добавки к смеси других, уже известных лейкоцитарных интерферонов, также получаемых микробиологическим синтезом , позвол ет приблизить лечебный эффект такого комбинированного препарата интерферонов к действию природных лейкоцитарных интерферонов плазмы крови. В дальнейшем возможно и самосто тельное применение интерферона а-11.
Claims (2)
1. Рекомбинантна плазмиднэ ДНК pVN 22, кодирующа синтез интерферона человека, имеет размер 10,85 т.п.о. и состоит из следующих элементов:
EcoRJ-HindfII-фрагмента плазмиды р AYC 37 размером 9,45 т.п.о.; Hindlll-EcoRt- фрагмента размером 1,4 т.п.о., внутри которого расположены; участок ДНК и рВР322 диаметром 0,03 т.п.о.: регул торна область гена D фага уэх 174 размером 0,22 т.п.о.; ген интерферона а -11 размером 0.50 т. п.о.,-участок геномн ой ДНК человека размером 0,65 т.п.о.; генетические маркеры: ген Ар14, обеспечивающий устойчивость к ампициллину; ген StrR, обеспечивающий устойчивость к стрептомицину; уникальные участки узнавани следующих ре- стриктаз; HindlTl - 0; EcoRl - 1,4 т.п.о.. BamHf - 10,82 т п.о.
2. Штамм Pseudomonas sp. ВКПМ В- 3480 - продуцент интерферона а- человека .
EcoRI
EcoRI
Hindi EcoRI
Bom HI
Priority Applications (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU864065414A SU1703690A1 (ru) | 1986-04-30 | 1986-04-30 | Рекомбинантна плазмидна ДНК @ 22, кодирующа синтез интерферона @ -11 человека, и штамм бактерии РSеUDомоNаS Sp. -продуцент- интерферона @ -11 человека |
GB8729559A GB2199830B (en) | 1986-04-30 | 1987-04-29 | Recombinant plasmid dna pvn22, coding for biosynthesis of human leukocyte interferon -i1 and strain pseudomonas sp. 31 (pvn22) |
DE19873790221 DE3790221T1 (ru) | 1986-04-30 | 1987-04-29 | |
PCT/SU1987/000052 WO1987006613A1 (en) | 1986-04-30 | 1987-04-29 | RECOMBINANT PLASMID DNA pVN22, CODING FOR BIOSYNTHESIS OF HUMAN LEUCOCYTE INTERFERON alpha-I1 AND STRAIN PSEUDOMONAS sp. 31 (pVN22) - PRODUCER OF HUMAN LEUCOCYTE INTERFERON alpha-I1 CONTAINING IT |
JP62503287A JPH01500960A (ja) | 1986-04-30 | 1987-04-29 | ヒト白血球インターフェロンα‐I1の生合成をコードする組換えプラスミドDNA pVN22及びそれを含むヒト白血球インターフェロンα‐I1の生産体であるシュードモナスSP.31(pVN22)菌株 |
CH11/88A CH673469A5 (ru) | 1986-04-30 | 1987-04-29 | |
US07/163,967 US4988622A (en) | 1986-04-30 | 1987-04-29 | Recombinant plasmid DNA pVN 22 coding biosynthesis of human leukocyte interferon alpha-I1 and strain Pseudomonas sp. 31 (pVN 22) - producer of human leukocyte interferon alpha-I1 containing same |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU864065414A SU1703690A1 (ru) | 1986-04-30 | 1986-04-30 | Рекомбинантна плазмидна ДНК @ 22, кодирующа синтез интерферона @ -11 человека, и штамм бактерии РSеUDомоNаS Sp. -продуцент- интерферона @ -11 человека |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1703690A1 true SU1703690A1 (ru) | 1992-01-07 |
Family
ID=21236928
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU864065414A SU1703690A1 (ru) | 1986-04-30 | 1986-04-30 | Рекомбинантна плазмидна ДНК @ 22, кодирующа синтез интерферона @ -11 человека, и штамм бактерии РSеUDомоNаS Sp. -продуцент- интерферона @ -11 человека |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4988622A (ru) |
JP (1) | JPH01500960A (ru) |
CH (1) | CH673469A5 (ru) |
DE (1) | DE3790221T1 (ru) |
GB (1) | GB2199830B (ru) |
SU (1) | SU1703690A1 (ru) |
WO (1) | WO1987006613A1 (ru) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6089741A (en) * | 1996-08-19 | 2000-07-18 | Cogent Light Technologies, Inc. | Apparatus and method for coupling high intensity light into low temperature optical fiber |
FR2825716B1 (fr) | 2001-06-11 | 2004-09-24 | Genodyssee | Nouveaux polynucleotides et polypeptides de l'ifn alpha 7 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0072541A3 (en) * | 1981-08-14 | 1984-04-18 | F. HOFFMANN-LA ROCHE & CO. Aktiengesellschaft | Human leukocyte interferons, process for their microbial production, intermediates therefor and compositions containing them |
US4748233A (en) * | 1982-03-23 | 1988-05-31 | Bristol-Myers Company | Alpha-interferon Gx-1 |
SU1364343A1 (ru) * | 1984-07-13 | 1988-01-07 | Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов | Способ получени человеческого лейкоцитарного интерферона альфа-2 |
-
1986
- 1986-04-30 SU SU864065414A patent/SU1703690A1/ru active
-
1987
- 1987-04-29 GB GB8729559A patent/GB2199830B/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-04-29 JP JP62503287A patent/JPH01500960A/ja active Pending
- 1987-04-29 DE DE19873790221 patent/DE3790221T1/de not_active Withdrawn
- 1987-04-29 CH CH11/88A patent/CH673469A5/de not_active IP Right Cessation
- 1987-04-29 WO PCT/SU1987/000052 patent/WO1987006613A1/ru active Application Filing
- 1987-04-29 US US07/163,967 patent/US4988622A/en not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Авторское свидетельство СССР N: 1464471,30.09.86. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO1987006613A1 (en) | 1987-11-05 |
GB2199830A (en) | 1988-07-20 |
JPH01500960A (ja) | 1989-04-06 |
GB2199830B (en) | 1990-07-04 |
US4988622A (en) | 1991-01-29 |
GB8729559D0 (en) | 1988-02-03 |
CH673469A5 (ru) | 1990-03-15 |
DE3790221T1 (ru) | 1988-06-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP0946711B1 (en) | Improved expression vectors | |
JP2564506B2 (ja) | 異種タンパク質の製造方法 | |
JPH10508203A (ja) | ジスルフィド結合を有する異種ポリペプチドの細菌による産生方法 | |
US6773899B2 (en) | Phage-dependent superproduction of biologically active protein and peptides | |
JPH05503002A (ja) | クローン化されたヘモグロビン遺伝子の発現による細胞増殖の促進 | |
HU194316B (en) | Process for preparing alpha-l human leukocyte interferone | |
US7229792B2 (en) | Method of producing recombinant proteins | |
SU1703690A1 (ru) | Рекомбинантна плазмидна ДНК @ 22, кодирующа синтез интерферона @ -11 человека, и штамм бактерии РSеUDомоNаS Sp. -продуцент- интерферона @ -11 человека | |
JP2658716B2 (ja) | 新規微生物及びそれを用いるd−ビオチンの製法 | |
RU2610173C1 (ru) | Рекомбинантная плазмида pFM-IFN-17, обеспечивающая экспрессию интерферона альфа-2b человека, рекомбинантная плазмида pFM-АР, обеспечивающая экспрессию фермента метионинаминопептидазы E. coli, биплазмидный штамм Escherichia coli FM-IFN-АР (pFM-IFN-17, pFM-АР) - продуцент (Met-) рекомбинантного интерферона альфа-2b человека | |
EA015498B1 (ru) | Способ получения г-ксф человека | |
JP3325597B2 (ja) | ポリペプチドの製法 | |
RU2153535C1 (ru) | Рекомбинантная плазмидная днк psav27, кодирующая синтез растворимого стрептавидина из streptomyces avidinii, и бактериальный штамм escherichia coli - продуцент растворимого стрептавидина из streptomyces avidinii | |
ES2281822T3 (es) | Vectores de expresion, celulas huesped transformadas y procedimiento de fermentacion para la produccion de polipeptidos recombinantes. | |
RU2303063C2 (ru) | ШТАММ Escherichia coli BL21 (DE3)[pAYC-ET-(hIFN-α2b)-IacI]-ПРОДУЦЕНТ РЕКОМБИНАНТНОГО ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО АЛЬФА-2b ИНТЕРФЕРОНА И СПОСОБ ЕГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ | |
US5147789A (en) | Stabilized expression vectors containing lambda pl promoter and the gene for the CI434 repressor, plasmids containing the vectors, hosts containing the plasmids and related methods | |
RU2313576C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА, ЭКСПРЕССИРУЮЩАЯ КЛОНИРОВАННЫЙ ГЕН Ace VIBRIO CHOLERAE И ШТАММ ESCHERICHIA COLI-ПРОДУЦЕНТ ACCESSORY CHOLERAE ENTEROTOXIN VIBRIO CHOLERAE | |
RU2787531C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДА PET32a-TNF-Thy, ОБЕСПЕЧИВАЮЩАЯ СИНТЕЗ ГИБРИДНОГО БЕЛКА α-ФАКТОР НЕКРОЗА ОПУХОЛЕЙ - ТИМОЗИН АЛЬФА 1, ШТАММ БАКТЕРИЙ ESCHERICHIA COLI BL21(DE3)/PET32A-THF-Thy - ПРОДУЦЕНТ ГИБРИДНОГО БЕЛКА TNF-Thy И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИБРИДНОГО БЕЛКА TNF-Thy | |
SU1703693A1 (ru) | Рекомбинантна плазмидна ДНК @ - @ 2-19, кодирующа синтез интерлейкина-2 человека, способ ее конструировани @ штамм бактерий ЕSснеRIснIа coLI - продуцент интерлейкина-2 человека | |
RU2326168C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pIF TREN, КОДИРУЮЩАЯ ПОЛИПЕПТИД ИНТЕРФЕРОНА АЛЬФА-2b ЧЕЛОВЕКА, И ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli-ПРОДУЦЕНТ ПОЛИПЕПТИДА ИНТЕРФЕРОНА АЛЬФА-2b ЧЕЛОВЕКА | |
US20090104656A1 (en) | System for the Inducible Expression of Recombinant Proteins in Cyanobacteria | |
RU2165455C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pSS5, КОДИРУЮЩАЯ СИНТЕЗ РЕКОМБИНАНТНОГО ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО АЛЬФА-2b ИНТЕРФЕРОНА, ШТАММ ESCHERICHIA COLI SS5 - ПРОДУЦЕНТ РЕКОМБИНАНТНОГО ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО АЛЬФА-2b ИНТЕРФЕРОНА И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНТЕРФЕРОНА АЛЬФА-2b | |
RU2326169C1 (ru) | РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК pA3GF, КОДИРУЮЩАЯ ПОЛИПЕПТИД ГРАНУЛОЦИТАРНОГО КОЛОНИЕСТИМУЛИРУЮЩЕГО ФАКТОРА ЧЕЛОВЕКА, И ШТАММ БАКТЕРИЙ Escherichia coli - ПРОДУЦЕНТ ПОЛИПЕПТИДА ГРАНУЛОЦИТАРНОГО КОЛОНИЕСТИМУЛИРУЮЩЕГО ФАКТОРА ЧЕЛОВЕКА | |
EP0281104A1 (en) | Novel plasmids | |
RU2045575C1 (ru) | Рекомбинатная плазмидная днк ppr - tgatg - hil - 1 beta - tsr, обеспечивающая синтез рекомбинантного интерлейкина-1 и штамм escherichia coli - продуцент рекомбинантного интерлейкина-1 бета человека |