JPS61129200A - 新規な白血球インタ−フエロン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規で明確な、ヒト白血球インターフェロン
タンパク質系列（ファミＩＪ−’Ｊ　Ｃ本明細書中では
ＨｕｌＦＮ−ａＴＬまたはＨｕ　Ｉ　Ｆ　Ｎ　−ａ　ｍ
と称し、その個々のものを、例えば、ＨｕＩＦＮ−αＩ
１．１またはＨｕＩＦＮ−αｍｌの如く表わす〕であっ
て、ウィルス性疾患および新生物疾患の治療に有用なタ
ンパク質系列、並びにその様なインターフェロンタンパ
ク質の製造方法に関するものである。更に詳しくは、本
発明は、組換えＤＮＡ技術により、新規な独特のヒトイ
ンターフェロン系列、並びにその製造方法を見出したこ
とに基くものである。

本発明の技術的背景を明らかにすると共に、特殊な場合
には、その実際面での詳細部分を補充するのに役立つと
思われる刊行物等を明細書中で引用し、便宜上、番号を
付すと共に、添付の文献目録にまとめて示した。

発明の技術的背景 ヒト白血球インターフェロンは、最初、天然起源から極
めて不純な沈殿物の形で得られた（１）。

この仕事に続いて、ヒト白血球インターフェロンは、実
質上、全てが密接なホモロジイ関係を示し、同じ抗ウィ
ルス活性の程度を異にする１クラスの、即ち１系列の物
質であることが見出された。この仕事は後に、いくつか
の文献で証明された（２゜３．４．５）。この白血球イ
ンターフェロンの系列（一般に省略してＩ−［ｕＩＦＮ
−αと称する）は、抗ウィルス活性の程度を異にす−る
１５またはそれ以上の個々の物質で構成されている°と
いうことが報告された。このヒト白血球インターフェロ
ン種は、その成熟型のものが約１６５〜１６６アミノ酸
からなっていること、およびそれぞれの配列の基礎とな
るＤＮＡ配列並びにグリコジル化部位および報告されて
いる動物種での抗ウィルス活性、などにより特性化され
て来た。実際、これらのヒト白血球インターフェロンタ
ンパク質の内、少くとも１個は、公認のヒトにおける臨
床試験において成功を収めている。これらのインターフ
ェロン種は組換えＤＮＡ技術、とりわけ当該技術分野で
用いられている、トランスフェクトされた大腸菌（Ｅ、
　ｃｏｌｉ　）を利用して生産されて来たし、現在も生
産されている。即ち、これらの先行技術により、今日、
臨床研究面での使用に必要であることが分っている極め
て高純度のタンパク質をトランスフェクトされた宿主系
を用いた組換えＤＮＡ技術を介して大量に回収し、充分
量のヒト白血球インターフェロン種を生産することがで
きるようになった。その様な従来技術は既述の文献並び
に今日の技術に関するその他の文献に記載されている。

広範な研究がなされ、様々な人々がヒト白血球インター
フェロン系列の研究に労力を費した。これまでに発見さ
れ、研究されたヒト白血球インターフェロンは疑いもな
く、特性上のホモロジイ、アミノ酸長さおよび抗ウィル
ス活性において共通したものを宵する単１のタンパク質
系列にまとめられる。同様の研究は、動物、特にウシの
インターフェロンに関しても成功を収めている（６）。

第２のヒトインターフェロン類は、いわゆるヒト線維芽
細胞インターフェロン（β−インターフェロンまたはＨ
ｕｌＦＮ−βと称する）である。この化合物に関しても
広範な研究がなされており、驚ろくべきことに、上記の
如く、ヒト白血球インターフェロンが一般に１５または
それ以上の種からなると定義されるのと対照的に、単一
のポリペプチドまたはタンパク質であると思われている
（７　）。

第３番目のヒトインターフェロン類はヒトガンマインタ
ーフェロン（ＨｕＩＦＮ−γ）と称される（８．９）。

ヒトガンマインターフェロンは白血球および線維芽細胞
に由来するヒトインターフェロンの特性である抗ウィル
ス活性および抗増殖作用を示すことが報告されているか
、これらと対照的に、白血球およびβインターフェロン
よりも、より短いアミノ酸配列を有し、ＰＨ２において
不安定であるという特徴を有することが明らかにされた
（１０）。このことから、ヒトガンマインターフェロン
が実質上、がん患者の治療に有用であることを示す様な
、上記抗増殖作用に関する特徴についてもつと主張され
るべきであると考えられている。そこで、ヒトガンマイ
ンターフェロンに関して集中的に、あるいは個々別々に
研究がなされて来た。

ヒト線維芽細胞インターフェロン（ＨｕＩＦＮ−β）と
ヒト白血球インターフェロン（ＨｕＩＦＮ−α）に関し
ては、その構造（アミノ酸長さおよびホモローガスな配
列部分）および生物学的な特性（抗ウィルス活性）は類
似しているので、ヒト線維芽細胞の場合は、これまで唯
１個の遺伝子が存在するだけであるのに、ヒト白血球イ
ンターフェロンは、複数個の物質からなる一系列のもの
からなるということは、奇妙なことに思われる。これは
、ヒト白血球インターフェロンの場合には、白血球系列
の進化論的な分枝および拡張があって複数の遺伝子が存
在することになり、一方、ヒト線維芽細胞インターフェ
ロンの場合には、唯一個のはつきりした遺伝子か保持さ
れたことを示している。

本発明者らは上記の点に興味を抱き、ＨｕＩＦＮ−β遺
伝子について詳しく研究を行った。この研究は、既知の
ＨｕｉＦＮ−β遺伝子の成熟した暗号領域にまたがった
フラグメントから調製したＤＮＡプローブを用いて、低
いハイブリダイゼーション・ストリジエンシイにおいて
ヒトゲノムＤＮＡライブラリィ（１１）をスクリーニン
グすることにより行った。その結果、思いがけず、これ
までその存在か知られていなかった。新規で明確なヒト
白血球インターフェロン系列の発見という驚異的な成果
をあげることができた。本発明は、この新規で明確なヒ
ト白血球インターフェロンの発見に基いて完成された。

発明の要約 本発明は、ヒト白血球インターフェロン化合物群の間に
見出された新規かつ明確に他と区別し得る系列または群
（グループ）に関するものである。

この新らしいヒト白血球インターフェロン系列または群
は、これまでに報告されたヒト白血球インターフェロン
系列の遺伝子と実質上ホモロジイ（例えば、約７０％）
な暗号領域ををするが、そのホモロジイは上記の値以上
ではなく、またそのアミノ酸残基の長さもこれまでに報
告されたヒト白血球インターフェロンの系列に属するも
のよりも長いことが分った。即ち、従来知られているヒ
ト白血球インターフェロン系列は、その成熟型において
約１６５〜１６６個のアミノ酸から成っている。本発明
に係るヒト白血球インターフェロン、即ち、この第■の
ヒト白血球インターフェロン系列の代表的なものは、約
１７２個のアミノ酸から成ることが分った。同様に生物
学的な抗ウィルス活性に関しても、本発明のヒト白血球
インターフェロンの抗ウィルス活性は、従来からのヒト
白血球インターフェロンの内の幾つかのものの活性と比
較したとき、それらと重複する活性を有し、さらに広い
活性スペクトルを有することかわかった。

本発明はこれまでに報告されたヒト白血球インターフェ
ロンから明確に区別される、新規なヒト白血球インター
フェロンの新系列に関し、さらに、その製造方法を開示
するものである。本発明は、その様な新規で独特なヒト
白血球インターフェロンを組換えＤＮＡ技術を利用して
、それらを、あるいはそれらの各々を直接成熟型で、あ
るいは融合タンパク質中間体の形を介し、市場化の前段
階として必要な臨床試験を行うのに必要な量を生産する
ことを可能ならしめるものである。本発明の生産物は、
そのあらゆる型が、ヒトに対する予防または治療、とり
わけウィルス感染症および悪性腫瘍、並びに免疫抑制ま
たは免疫欠損症状の治療に用いるのに適する。その様な
型には、様々なオリゴマーが含まれ、さらに、グリコジ
ル化されたものやアレル変異体、または個々のメンバー
または種のその他の誘導体をも含む。本発明においては
、これらの生産物を、一般的に取扱われている物 微生（たは細胞培養システムにより、生産する。

本発明はこの様にして生産された新規で独特なヒト白血
球インターフェロン、並ひにそれを生産する方法および
手段に関するものである。本発明はまた、新規で独特な
ヒト白血球インターフェロンの遺伝子配列を発現し得る
形で含有している複製可能なりＮＡ発現ビヒクルを提供
するものである。更にまた、本発明は、上記の発現ビヒ
クルによってトランスフェクトされた微生物株または細
胞培８、並びにその様なトランスフェクトされた株また
は培養であって、本発明の新規で独特なヒト白血球イン
ターフェロンを生産し得る株または培養を含む発酵培地
を提供するものである。

さらにまた本発明は、該インターフェロン遺伝子配列、
ＤＮＡ発現ビヒクル、微生物株および細胞培養の様々な
調製方法、並びにそれらの特殊な態様に関するものであ
る。さらにまた本発明は、該微生物および細胞培養のた
めの発酵培地に関するものである。また、ある宿主系で
は、所望のインターフェロンを生産し、それを成熟型で
宿主から分泌させる様にベクターを工夫することもでき
る。

本発明の態様の一般的な記述 本発明は１本発明に係る特に新規で独特なヒト白血球イ
ンターフェロンの遺伝子配列を担った発現ベクターによ
ってトランスフェクトされ得る、様々な細菌、酵母、あ
るいは咄乳類またはを推動物の細胞培養系を用いて実施
することができる。

その様な系は当該技術分野で良く知られており、数多く
の文献がある。例えば、本発明においては、微生物大腸
菌に一１２株２９４（ＡＴＣＣＦｋＬ３１４４６）を、
他の当該技術分野で既知の大腸菌の菌株や様々な寄託機
関に寄託されている他の公共的な微生物と同様に、広範
囲に用いることができる。これらの他の微生物には、例
えば、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、す／ｌ／ｌ／テ
ネラＳａｌｍｏｎｅｌｌａ　）およびセラチア（５６ｒ
ａｔｉａ　）の菌株が含まれる。さらに、種々の酵母株
についても記述されており、それらを本発明に用いるこ
とかできる。最も注目されるのは、アメリカン・タイプ
・カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙ
ｐｅ　Ｃａ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ　）にＡ
ＴＣＣＮａ４４０７６の下で寄託されているサツ力ロミ
ケスセレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒ
ｅｖｉｓｉａｅ　）の特定の株、ＲＨ２１８である。同
様に、様々な細胞培養系が開発されて使用されており、
それらを本発明の工程に用いることができる。例えば、
Ｗｔ３８、ＢＨＫ、Ｔ３、ＣＨＯおよびＶｅｒｏ　−Ｌ
ルライン等の様々な培養物を用いることができる。

これらの系それぞれについて、機能的に結合しているヘ
テロローガスな遺伝子セグメント（本発明では、新規で
独特なヒト白血球インターフェロンをコードしているヘ
テロローガスな遺伝子セグメント）を発現させる様に指
令する種々のプロモーター系が開発されており、それら
を用いることができる。遺伝子と、特定の発現宿主系内
で適切なプロモーターとの機能的な結合は、本発明の新
規で独特なヒト白血球インターフェロンを、該アミノ酸
と結合しているプレ配列または他の人工的な発現物質を
全く含まない、成熟型として発現させ得る様、結合させ
ることによって行われる。別法として、本発明の新規で
独特なヒト白血球インターフェロンをそれ自身の信号配
列と機能的に結合させ、細胞膜を通過して移送される際
に該信号配列か開裂されることにより、成熟型のものが
分泌される様にすることもできる。加えて、本発明の新
規で独特なヒト白血球インターフェロン遺伝子を、該新
規で独特なヒト白血球インター、フエロンのアミノ酸配
列と、そのＮ末端に結合したホモローガスなタンパク質
との融合タンパク質を生産させる様、機能的に結合させ
ることができる。これらの全ての態様は、これまでに報
告されているヒト白血球インターフェロン（４）と異る
性質オよび構造を有する、新規で独特なヒト白血球イン
ターフェロン類または系列の発見、同定、並びにその生
産の可能性に関する基本的な前提条件を満すので、本発
明の範囲内に含まれるものである。

好ましい態様についての記述 本発明方法は、遺伝子配列、遺伝子の単離、発現させる
ための連結、精製および生物学的な確認等の手段を介し
て本発明の新規で独特なヒト白血球インターフェロンを
同定するための、代表的な態様によって例示される。こ
の方法では、元々、他のβ遺伝子が存在するか否かを決
定する目的で、ヒトゲノムライブラリィのプローブにヒ
トβインターフェロンの遺伝子を用いた。これらの実験
の結果、最初にβインターフェロン遺伝子ではなく、む
しろ、白血球系列のインターフェロンにより近いと思わ
れる遺伝子が同定された。本発明はこの結論を具体化し
たものである。

図面の説明 第１図は制限エンドヌクレアーゼ・マツピング法に基（
ＩＦＮ−α■遺伝子の配列を示す模式図である。この遺
伝子（第２図）の配列決定された領域（ＩＦＮ−αＩ１
．２遺伝子のＱ、Ｑｋｂ〜Ｑ、３ｋｂ領域を除く）に含
まれる制限エンドヌクレアーゼ部位も示されている。Ｉ
ＦＮ−αＩ１．１の地図において、太く描いた部分はＩ
ＦＮプレタンパク質の暗号配列に対応する部分である。

キロ塩基対（ｋｂ）に基くサイズスケールを地図下方に
示した。ＩＦＮ−α■遺伝子内の制限エンドヌクレアー
ゼ部位を次に示す＋ＡｃｃＩ（Ａ）、ＢａｍＨＩ（Ｂ）
、ＢｇｌＩＩ（Ｂｇ）、ＥｃｏＲＩ　（Ｅ）、Ｈｉｎｄ
　：［（Ｈ）、Ｎｃｏ　丁（Ｎ）、Ｐｓｔ工（Ｐ）およ
びＰｖｕ　■（Ｐｖ　）。

第２図はＩＦＮ−α■遺伝子間のＤＮＡ配列の関係を示
す模式図である。ＩＦＮ−αＩ１．ｌ遺伝子の配列を、
２５０塩基からなる５′非翻訳配列（ウィルス性の誘導
に必要であると思われる領域をコードするのに充分な配
列）、および推定のポリアデニル化部分を通過した３′
非翻訳領域を含めて詳しく示した。ＩＦＮ−αＩ１．２
、αＩ１．３およびαＩ１．４遺伝子のヌクレオチドは
、ＩＦＮ−αＬｌのそれと異なるもののみを示した。Ｉ
ＦＮ−αＩ１．１配列中の（・・・・　）で示したギャ
ップは他の遺伝子への挿入適応部位であり；（Δ−Δ−
Δ）、ＩＦＮ−αＩ１．２、αＩ１．３およびαＩ１．
４配列における欠除は、ＩＦＮ−αＩ１．１との最大の
ホモロジイ部分である；（芹）はＩＦＮ−αＩ１．ｌの
メツセンジャーＲＮＡの推定のキャップサイトである；
（＝）は５′非翻訳領域であり；（−）は３′非翻訳領
域である。ＩＦＮ−αＩ１．４の１９９位よりも上流の
配列は未だ得られていない。ＩＦＮ−αＩ１．４の最初
の２つのヌクレオチドは対応する■ＦＮ−α■。１の塩
基と同一であるために記載されていない。

第３図はＩＦＮ−α■遺伝子系列によってコードされて
いるポリペプチドのアミノ酸配列を示す模式図である。

ＩＦＮ−αＩ［，１プレタンパク質の完全なアミノ酸配
列が示されている。アミノ酸残基中、挿入／欠失部位に
ついてはアンダーラインを付して示した。ＩＦＮ−αＩ
Ｉ．１のシグナル（信号）ペプチドの残基はＳｌからＳ
２３までであり、成熟タンパク質の残基は１から１７２
までである。

第４図はＨｕＩＦＮ−α■１遺伝子を含有しているファ
ージ組換え体の構造を示す模式図である。暗号領域を交
叉した斜線で示し、プレ配列（左側の斜線で陰影を付け
た部分）と分け、さらに、ＨｕＩＦＮ−α■１遺伝子お
よび組換えファージλ２４．ｌの非翻訳領域の制限地図
をも示したみ 第５図はヒ）ＩＦＮ−α遺伝子系列のサザーン・プロッ
ト分析の結果を示す写真の模写図である。

高分子量のヒトゲノムＤＮＡ（５μｙ）を、表示されて
いる様に種々の制限エンドヌクレアーゼで消化し、０．
８％アガロースゲル電気泳動に付し、ニトロセルロース
渥紙上に移した。次のＩＦＮ−α暗号領域、即ちＨｕＩ
ＦＮ−ａｌ１（レーンａ）およびＨｕＩＦＮ−α■１（
レーンｂ）から導かれたプローブを用い、ストリ、ンジ
エント条件下でハイブリダイゼーションを行った。分子
量標準には１．ＥｃｏＲＩ消化バク消化バクテリオファ
ージンシャロン３０ＡＡおよびＰＢＲ３２２ＤＮＡ、並
びにＲｓａＩ消化、ｐＢＲ３２２ＤＮＡを用いた。

第６図はＨｕ　Ｉ　Ｆ　Ｎ　−ａ　ｎ　１とＨｕ　Ｉ　
Ｆ　Ｎ　−ａ　Ｉ　１のヌクレオチド配列、並ひにＨｕ
ＩＦＮ−α■１でコードされたタンパク質およびクラス
エのＨｕＩＦＮ−α工１遺伝子系列のタンパク質を対比
させて示した図である。ＨｕＩＦＮ−ａｌ１のアミノ酸
残基中、下線を施したものは今日までに報告されている
、クラスエのＨｕＩＦＮ−α１１種の全てに見出されて
いる残基である。ＨｕＩＦＮ−αＩＩ　Ｉ　Ｄ　Ｎ　Ａ
配列の下方のアミノ酸残基は、ＨｕＩＦＮ−ａｌとＨｕ
　Ｉ　Ｆ　Ｎ−ａ　Ｉ■ １との相違部分を示している。星印は、コードされてい
るアミノ酸配列には変化をもたらすことのない、咲ヌク
レオチド配列上の変化を示している。

ＨｕｌＦＮ−ａｌ１のポリアデニル化信号（ＡＡＴＡＡ
Ａ）にはオーバーラインを付した。提案し得るＨｕＩＦ
Ｎ−α■−のポリアデニル化信号（ＡＴＴＡＡＡ）　に
ｉ；！アンダーラインを付した。垂直な矢印は、ＨｕＩ
ＦＮ−α１１のメツセンジャーＲＮＡのキャップサイト
を示している。中空の三角形で示した部位は、５′末端
と、最長のＨｕＩＦＮ−ａ■１ｃＤＮＡ　　クローンに
見出された、ポリ（Ａ）付加に係る３′部位を示してい
る。

第７図はウィルス的に誘導されたクラス■およびクラス
■のＩＦＮ−α転写物の分析結果を示す図である。各レ
ーンは、それぞれ５μノのポリＡ（＋）Ｒ，Ｎ　Ａ分析
に係る。図中、（Ａ）はクラスＩ（ＩＦＮ−α工２）プ
ローブ、（Ｂ）はクラス■（ＩＦＮ−α■１）プローブ
を用いたハイブリダイゼーションの結果を示す。レーン
１，２および３は供与者１から、レーン４．５および６
は供与者２からの試料を用いた結果である。レーン１お
よび４は非誘導対照であり、レーン２および５はニュー
キャッスル症ウィルス（Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ　Ｄｉｓｅ
ａｓｅ　ｖｉｒｕｓ　）、レーン３および６はセンダイ
・ウィルス（５ｅｎｄａｉｖｉｒｕｓ　）により、それ
ぞれ誘導されたものである。

分子量マーカーはｐＬｅＩＦＡ２５のＥｃｏＲＩ　＋　
Ｐｓ　ｔ、、１消化（３，５ｋｂおよび０．９ｋｂ）お
よびｐＨｕＩＦＮ−α■【ｒＰのＥｃｏＲＩ＋Ｈｉｎｄ
［消化（４，３ｋｂおよび１．２ｋｂ、第１１図）によ
って誘導された。Ｑ、９ｋｂｐＬｅＩＦＡ２５７ラグ７
７トは、Ｉ　Ｆ　Ｎ　−ＣＩ　Ｉ　２の暗号領域を含有
しており、また、１．２　ｋｂ　ｐＨｕ　Ｉ　ＦＮ−α
■ｔｒｐ１フラグメントはＩＦＮ−α■１の暗号領域を
含有してＣ）る。

第８図は、大腸菌内で成熟ＩＦＮ−αタンパク質を合成
するためのプラスミドの構造を示す模式図である。巾の
厚くなっている部分がＩＦＮ−α挿入部分であり、成熟
暗号領域は、陰影を付けて示されている：　Ｈｕ　Ｉ　
ＦＮ−ａ■１　ｔｒＰ　。

ヒトＩＦＮ−ａ遺伝子（Ｈｕ　Ｉ　ＦＮ−ａ　’Ｊｌ　
）の同定ヒトゲノムＤＮＡライブラリィ（１１）を、Ｈ
ｕＩＦＮ−β遺伝子の成熟暗号領域にまたがるフラグメ
ントから調製したプローブを用い、低いハイブリダイゼ
ーションストリンジエンシイ下においてスクリーニング
した。このスクリーニング法で回収された７個の陽性ク
ローンの内、４個が、制限マツピング、サザーン分析、
およびＨｕＩＦＮ−βプローブを用いた、高ストリンジ
エンシイ下で、の　　゛ハイブリダイゼーションの結果
、ＨｕＩＦＮ−β遺伝子を含有していることが分った。

残る３個の組換え体はヒトゲノムの重複セグメントであ
って、低いストリンジエンシイ下においてのみ、ＨｕＩ
ＦＮ−βプローブとハイブリダイズする、関連性の薄い
遺伝子を含有するものと思われる。これらのクローンの
内の１個（λ２４．１）から得たハイブリダイズし得る
領域を含む４．１キロ塩基のＨｉｎｄＩ［フラグメント
をｐＢＲ３２２にサブクローンし、制限エンドヌクレア
ーゼマツピング（第４図）および、ヌクレオチド配列決
定による特性化を行った。

このフラグメントのＤＮＡ配列分析の結果（第６図）、
インターフェロン遺伝子は、その暗号領域のヌクレオチ
ド配列において、ＨｕＩＦＮ−β　とのホモロジイ（４
８％）よりも、ＨｕＩＦＮ−α遺伝子とのホモロジイ（
例、ＨｕＩＦＮ−α工１と７０％、表１）を多く有して
いることが明らかになった。同様に、ＨｕｌＦＮ−α１
１タンパク質およびλ２４．１の遺伝子産物は、いずれ
もＨｕＩＦＮ−βと３０％のアミノ酸ホモロジイを示す
にすきないのに対し、それらは相互に、約５２％のホモ
ローガスな関係を示した。従って、λα２４．１に含ま
れている遺伝子は、ＩＦＮ−βでな（ＩＦＮ−αをコー
ドしていると結論される。しかしなから、このタンパク
質の配列は他のＨｕｌＦＮ−α遺伝子産物とは驚く程、
異っている。

この新規なＨｕｌＦＮ−αは、そのカルボキシ末端に５
または６個のアミノ酸を付加しており、その内の３個は
各タンパク質において同一のものである（第６図）。こ
の様な類似性はヌクレオチドのホモロジイ程度にも同様
に反映されているＣ表１）。これらの観察結果は総合的
に、この新規なＨｕＩＦＮ−αが、既に配列決定された
機能的な）（ｕＩＦＮ−α遺伝子を含む、クラスエのＩ
ＦＮ−α遺伝子系列と区別される、ホモローガスな遺伝
子産物であることを強く示唆しているといえる。そこで
、本発明者らはこの遺伝子をクラスエのＩＦＮ−α遺伝
子と判別するために、ＨｕｌＦＮ−α■１と命名した。

このＨｕＩＦＮ−α■ｌ配列は７８−８０位に潜在的な
グリコジル化配列、口ｎ　−ｍｅ　ｔ　−ｔｈｒ　　を
含有している。興味深いことには、ＨｕＩＦＮ−βの同
じ位置に同様の配列が認められ、これは、インビボで炭
水化物の付加により修飾されることが知られている・（
２０）。

ＨｕＩＦＮ−α■１がヒトゲノム内でＩＦＮ−α遺伝子
の新らしい系列であると定義し得るか否かを試験するた
めに、ＨｕＩＦＮ−ａ■ｌおよびＨｕＩＦＮ−α１１　
暗号領域から導かれたプローブを用い、両遺伝子のクロ
スハイブリダイゼーションを起こさせない様なストリン
ジェント条件下、ヒトゲノムＤＮＡのプロットハイブリ
ダイゼーション分析を行った。これらの実験の結果、第
５図に示す如く、ＨｕＩＦＮ−ａ■１プローブおよびＨ
ｕＩＦＮ−α■１プローブは、別個の遺伝子系列をはっ
きりと示すことが証明された。このＨｕＩＦＮ−α１１
１プローブで、ヒトゲノム中には６〜７個のクラス■遺
伝子が存在していることが証明された。

ウィルスによって誘導可能な、クラス■のＩＦＮ−α遺
伝子の発現： ＨｕＩＦＮ−α■１タンパク質またはその近縁のクラス
■のＩＦＮ−α遺伝子産物のいずれも、ウィルス的に誘
導されたセルラインからのインターフェロン標品中に同
定されたことがない（２１、２２）ばかりか、リンパ芽
球様セルラインから調製されたｃＤＮＡライブラリィ（
３）またはウィルスによって誘導された末梢血中リンパ
細胞中に見出されるＤＮＡ配列に対応する配列を含有し
ていない。

クラス■のＨｕＩＦＮ−α遺伝子がウィルス感染に応答
して転写されるか否かを調べるために、センダイウィル
スまたはニューキャッスル症ウィルスで誘導された２供
与者から得た末梢血中リンパ細胞からのＲＮＡをプロッ
トハイブリダイゼーション法で分析した。ウィルスと一
緒に６時間インキュベートした後、培養中からポリオＡ
　　ＲＮＡを単離し、ホルムアルデヒドゲル電気泳動に
かけ、ニトロセルロース戸紙上に移してクラスエ（Ｈｕ
ＩＦＮ−αＩ２　）またはクラＸ　Ｉｔ　（Ｈｕ　Ｉ　
ＦＮ−ａ■Ｌ）プローブを用いてハイブリダイズした。

第７図に見られる様に、クラスエ（第７図Ａ）および−
クラス■（第７図Ｂ）のＩＦＮ−α遺伝子の転写は、い
ずれもニューキャッスル症ウィルス（レーン２および５
）およびセンダイウィルス（レーン３および６）の両者
によって誘導され、両供与者からの非誘導培養中には検
出することができなかったＣレーン１および４）。クラ
スエおよびクラス■遺伝子の発現レベルを比較するため
に、これらの各プローブでハイブリダイズした沖紙をＨ
ｕＩＦＮ−αＩ２（第７図Ａ）またはＨｕ　Ｉ　ＦＮ−
ａ■１　（第７図Ｂ）の暗号領域を含有しているＤＮＡ
マーカーが等しい強度（データは表示されていない）の
シグナルを示すまでフィルムにさらした。この分析の結
果、クラス■遺伝子はクラスエ遺伝子と類似のレベルで
転写されることが分った（第７図）。

加えて、センダイウィルスはＮＤＶの数倍のクラスＩお
よびクラス■インターフェロン・メツセージを誘導する
と思われる。このことは、クラスエおよびクラス■遺伝
子がウィルス感染に対する応答において、同様な制御を
受けていることを示唆するものである。

ＩＦＮ−α■１遺伝子か発現されているという結論を確
認するために、センダイウィルス−誘導末梢血中リンパ
細胞から単離したポ＋）　Ａ（ｎ　ＲＮ　Ａから相補的
ＤＮＡライブラリィを組立てた。ストリンジェント・ハ
イブリダイゼーション条件下、Ｈｕ　Ｉ　Ｆ　Ｎ　−ａ
　ｎ　ｌ暗号領域プローブを用いて１ｏ、ｏｏ。

個のプラークをスクリーニングした。こうして２個のＨ
ｕＩＦＮ−α■１クローンを回収した。ＤＮＡ配列決定
の結果から、２個のｃＤＮＡりａ−ンの内、長い方はｍ
　ＲＮ　Ａのポリ（Ａ）から、ＨｕｌＦＮ−α■１　の
信号ペプチドの暗号配列内に伸びていることが示された
。ＨｕｌＦＮ−α■１遺伝子中の対応する配列を第６図
に示す。

抗ウィルス活性を有するタンパク質をコードしているク
ラス■のＩＦＮ−α遺伝子： クラス■のＩＦＮ−α遺伝子が活性なタンパク質をコー
ドしているか否かを決定し、また、それらの宿主域をク
ラス■のＩＦＮ−αポリペプチドのそれと比較する目的
で、ＨｕｌＦＮ−α■１遺伝子の発現のための細菌性ベ
クターを組立てた。得られたプラスミドは、ｔｒＰオペ
ロンプロモーター、リボゾーム結合部位およびメチオニ
ン開始コドンと、それぞれの成熟ＩＦＮ−α暗号領域の
最初のアミノ酸残基とか結合したものである。表２から
分る様に、３つのプラスミドの各々で形質転換された大
腸菌株を、培地中のトリプトファンを消耗する様な条件
下で増殖させ、この大腸菌のエキスを調製したところ、
このエキスは細胞変性効果阻止分析（ｃｙｔｏｐａｔｈ
ｉｃ　ｅｆｆｅｃｔｓ　１ｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ａｓｓ
ａｙ）による測定の結果、有意量の抗ウィルス活性を有
することが分った。各ＩＦＮ−αの相対的な抗ウィルス
活性を、２個のクラスエＨｕｌＦＮ−αタンパク質、即
ち、ＨｕＩＦＮ−（２Ｉ２およびＨｕＩＦＮ−ａ■１と
、小水飽性口内炎ウィルスにチャレンジさせたウシセル
ライン（ＭＤＢＫ）セルライン、並びに脳心筋炎ウィル
スにチャレンジさせたヒト肺腫瘍（Ａ５４９）セルライ
ンを用いて比較した。両細胞型に対し、ＨｕＩＦＮ−ａ
■ｌとＨｕ　Ｉ　Ｆ　Ｎ　−ａ　工２とは略等しい活性
を示した。従って、クラス■のＩＦＮ−αタンパク質の
活性は他のセルライン同様、これらのセルラインでもク
ラスエのＩＦＮ−α遺伝子産物の比活性をオーバーラツ
プしていると思われる。

さらに、ＨｕｌＦＮ−α■１に付随する抗ウィルス活性
を特性化するために、ＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−βに対
する抗血清を調製し、そのＨｕＩＦＮ−α■１活性に対
する中和能力を調べた。抗ＨｕＩＦＮ−βはＨｕＩＦＮ
−α■１の活性に対して有意な影響を及ぼさないが、ヒ
ト白血球培養からの、センダイウィルス誘導インターフ
ェロンに対して調製された抗血清はＨｕＩＦＮ−α■１
抗ウィルス活性の中和作用を示した（表３）。後者の誘
導法はＩ（ｕｌＦＮ−βでな（ＨｕｌＦＮ−αを一義的
に生産せしめる、ということが既に分っており、従って
、この結果は、タンパク質のホモロジイに基いてなされ
たＨｕＩＦＮ−α■１のＩＦＮ−α系列への帰属を確認
するものである。

２個の区別し得るＩＦＮ−α遺伝子系列：これまでの研
究では、その暗号領域中に少くとも８５％のヌクレオチ
ドホモロジイ関係を有する約１５の非アレル型ＨｕｌＦ
Ｎ−α遺伝子からζる系列が示されている（３）：明確
に言えば、これらの遺伝子はＨｕＩＦＮ−α工　系列に
属する。各遺伝子は、大腸菌内で抗ウィルス活性を発現
させる能力に基き、機能的なインターフェロンポリペプ
チドをコードしていると断定された。

その様な遺伝子はＨｕｌＦＮ−βｃＤＮＡプローブを用
いてヒトゲノムライブラリィをスクリーニングすること
によって初めて単離されたクローン集団から、ＨｕｌＦ
Ｎ−α■　であると同定された。しかしなから、ＤＮＡ
ホモロジイに関する比較、並びに大腸菌内で発現された
ＨｕＩＦＮ−α■１タンパク質の抗原性の研究に基き、
この遺伝子がＨｕＩＦＮ−βでなく、ＨｕＩＦＮ−α　
タンパク質をコードしていることが確定的となった。Ｈ
ｕＩＦＮ−α■１は１７２アミノ酸残基からなる成熟ポ
リペプチドをコードしている。これらの結果は、ヒトゲ
ノム中に２種のホモローガスであるが別個のＩＦＮ−α
遺伝子が存在していることを証明するものである。

ヒトＤＮＡのサザーン・プロット分析の結果は、クラス
■Ｈｕ　Ｉ　Ｆ’Ｎ−α遺伝子系列中に６−３７個の異
るメンバーが含まれていることを示唆している。

■ クラスＨｕＩＦＮ−α系列のメンバー、並びに△ ＨｕＩＦＮ−βのメンバーは染色体９の上に存在しテオ
リ（２３）、ＨｕｌＦＮ−１の遺伝子は染色体１２上に
存在している（２４）。最近の研究では、クラス［Ｈｕ
ｌＦＮ−α系列のメンバーの大多数（全でではない）も
また染色体９上に存在していることが指摘されている。

クラス■のＩＦＮ−α遺伝子の転写コントロール：ＩＦ
Ｎ−０ｍ　ＲＮ　Ａレベルに対する制御の変異は、ウィ
ルス的に誘導された細胞培養内において個々のＨｕＩＦ
Ｎ−０ｍ　ＲＮ　Ａ　配列が見出される頻度の１０倍以
上の頻度範囲に及ぶことが示唆された。

クラスエおよび■のＩＦＮ−α遺伝子に対する転写制御
を比較する目的で、ヒト末梢血中リンパ細胞におけるイ
ンターフェロン生成を誘導するために、ニューキャッス
ル症ウィルス（ＮＤＶ）　、あるいはセンダイウィルス
を用いた。ウィルス誘導の６時間後には、各培養から調
製したボＩＪ　Ａ”−ＲＮ　Ａ中に比較し得るレベルの
クラスＩ　ｍ　ＲＮ　Ａおよびクラス■ｍＲＮＡを容易
に認めることができた（第７図）。また、センダイウィ
ルスは数倍量のクラス■およびクラスエの両型のＩＦＮ
−α転写物を誘導するらしい。このことから、どちらの
ＩＦＮ−αも、ウィルス誘導によって同様の転写活性化
作用を受けることが示唆された。これまで、ヒト白血球
またはヒト骨髄芽球様セルラインのセンダイウィルス誘
導培養から調製したライブラリィ中にはクラス［ｃＤＮ
Ａクローンが観察されていないことから、以上の結果は
、クラス■のＩＦＮ−α合成がウィルス的に誘導される
、ということの最初に得られた証拠といえる。このこと
は、ＩＦＮ−α■１ｍＲＮＡの３′末端、並びにその暗
号領域の大部分を含んだ相補的ＤＮＡクローンの単離に
よって追認された（第６図）。

ハイブリダイゼーションの条件およびプローブ類： ハイブリダイゼーションは５Ｘｓｓｃ（１ｘＳＳＣは、
０．１５　Ｍ　ＮａＣ（，０，０１５Ｍクエン酸ナトリ
ウムからなる）、５　Ｘ　Ｄｅｎｈａｒｄｔ’ｓ溶液（
１２）、０．１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、
０．１％ピロリン酸ナトリウム、５０μｙ／−の音波処
理による変性鮭精子ＤＮＡおよび１０％デキストラン硫
酸ナトリウム中、非ストリンジェントおよびストリンジ
ェント条件を与えるためにそれぞれ２０％または５０％
のホルムアミドを含有させて行った。４２℃でインキュ
ベーションした後、フィルターを、室温において２ｘＳ
ＳＣ１０，２％５ＤＳ（非ストリンジェント）中で洗浄
するか、あるいは４２℃において、０．２ＸＳＳＣ１０
，１％５０５．（ストリンジェント）中で洗浄する、の
いずれかで処理した。文献記載の如く３２Ｐ標識プロー
ブを調製した（１３）。ヒトＤＮＡ中のクラス■および
■遺伝子を高いスｌ−ＩＪノンジエンシイ下分析するた
めに（第５図）、以下のフラグメントを用いた（いずれ
も対応するＩＦＮ−α遺伝子の成熟暗号領域を含む）二
りラスエのヒト由来、ｐＨｕＩＦＮ−α工２／１ハイブ
リッド（１４）の５６５　ｂｐ　ＥｃｏＲ■フラグメン
ト；クラス■のヒト由来、ｐＨｕＩＦＮ−α■１の３９
０ｂｐＸｂａＩ−ＡｃｃＩ７ラグメント４（プラスミド
については第８図を参照されたい）。

ファージライブラリィの組立てとスクリーニング： ＨｕＩＦＮ−α■ｌ遺伝子は、ローフ　（Ｌａｗｎ　）
　　らによって組立てられたヒト胎児の肝臓／バクテリ
オファージスシャロン４Ａライブラリイ（１１）から、
成熟ＨｕＩＦＮ−β　タンパク質をコードしている５　
０１　ｂｐのＸｂａ　Ｉ　−Ｂａｌ　■フラグメントか
ら調製したプローブを用いて単離した。

ＤＮＡ配列分析 ＤＮＡ配列は（１６）に記載の方法により、あるいはＤ
ＮＡをＭ　Ｉ　３　ｍＰ　８およびｍｐ９ベクター（１
７）にサブクローンし、ジデオキシ鎖ターミネーション
法（１８）を使って決定した。

ウィルス誘導ＲＮＡの調製および分析；末梢血リンパ球
（２Ｘ１０９）を、５％の小で不活性化した牛胎児血清
を含むＲＰＭ１１６４０に、４Ｘ１０’細胞／−となる
様に再懸濁した。培養をＴ−１７５７ラス：Ｉ　（Ｆａ
ｌｃｏｎ　）中でインキュベートし、誘導した培養を、
２５　ＵＡＵ／　１０６細、胞のニューキャッスル・デ
ィシーズ・ウィルスまたはセンダイウィルスで処理した
。ウィルスと共に６時間インキュベートした後、培養を
０．０５％Ｅ　ＤＴＡで処理し、細胞を遠心して集め、
水冷媒質で１回洗浄し、ポリＡ（＋）ＲＮＡを調製した
（１９）。ＲＮＡをホルムアルデヒド・ゲル電気１１に
カケ、／−ザン・プロット分析を行なった。２末鎖ｃＤ
ＮＡをλｙ【１０ベクター（２５）に結合させたことを
除き、末梢血リンパ球ｃＤＮＡライブラリーを組み立て
た（２）。

ＩＦＮ−α遺伝子のための細菌性発現プラスミドの組み
立て： 大腸菌のｔｒｐプロモーターのコントロール下で成熟Ｈ
ｕｌＦＮ−α工１および−α工２　を発現させるプラス
ミドの組み立ては、既に報告されている（２および１４
）。成熟ＨｕＩＦＮ−ａ■ｌのＮ−末端アミノ酸残基を
イニシエーター（メチオニン）コドン、リポソーム結合
部位およびｔｒｐプロモータに直接隣接させる類似の組
み立てを以下の様に行なった。Ｘｂａ　工粘着末端、Ａ
ＴＧコドン、成熟タンパクの１−７アミノ酸のためのコ
ドンを含有し、Ｎｃｏ工粘着で終っている合成りＮＡ２
本鎖を、ＨｕＩＦＮ−α■１暗号配列の残りを含んでい
る１２９０ｂｐ　Ｎｃｏ　ニー１−１ｉｎｃｌ　ｌ［７
ラグメントに結合させ、ｔｒｐ発現ベクター、ｐＨＧＨ
２０７−１（２０）の、Ｘｂａ工および）（ｉｎｄｌ［
部位の間に挿入した。

大腸菌内でのＩＦＮ−α抗ウィルス活性の検出：適当な
発現プラスミドを導入した大腸菌に１２−２９４株の一
夜放置培養を増殖させ、収穫し、抽出して抗ウイルス分
析を行なった（１５）。インターフェロン活性は、牛の
腎臓細胞（ＭＤＢＮ）またはヒトの肺癌細胞（Ａ５４９
）（アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション、
ＲｏｃＫｖｉｌｌｅ　ＭＤ。

から入手）を使用し、細胞変性効果（ＣＰＥ）阻止分析
により決定した。水痘性口内炎ウィルスおよび脳心筋炎
（ＥＭＣ）ウィルスを増殖させ、Ｃ：ＰＥ阻止分析に使
用した（１４）。この方法で得た値を、ＮＩＨ白血球標
準Ｇ−０２３−９０１−５２７に対する単位として表わ
した。

ＨｕＩＦＮ−α１１１の抗原的同一性は（１４）により
決定した。

表１　ヒ）ＩＦＮ−α遺伝子の暗号領域に於けるＨｕＩ
ＦＮ−ａｌ、Ｉ　ＨｕＩＦＮ−αＩＩ、１アミノ酸ホモ
口キ一６つ インターフェロン・プレタンパク対間のアミノ酸配列ホ
モロギー％（左下）および相当する暗号領域間のヌクレ
オチドホモロギー％（右上）が示しである。■−型イン
ターフェロンの追加の６個のＣ−末端アミノ酸残基、あ
るいは１８個の追加のヌクレオチド（第５図および第７
図）は、Ｉ型インターフェロンとの比較に含まれていな
い。

表２．大腸菌抽出物中のＩＦＮ−α活性ヒトおよ、び生
細胞に対するインターフェロン抗ウィルス活性。適当な
発現プラスミドを含んでいる大腸菌Ｋ１２（２９４株）
培養を増殖させ、インターフェロン分析用の溶菌液を調
製した。

溶菌液中のインターフェロン抗ウィルス活性は、脳心筋
炎ウィルスでチャレンジしたＭＤＢＫ（牛の腎臓）細胞
および水痘性口内炎ウィルスまたはＡ３４９（ヒト肺癌
腫）細胞を使って、細胞変性効果阻止分析によって決定
した。５５０ｎＭに於ける光学密度が１．０になるまで
増殖させた細菌培養液１１当たりの抗ウィルス活性の量
で結果を表わした。

表３．ＨｕＩＦＮ−αｍｌ活性を抗体で中和してＨｕＩ
ＦＮ−αとする 表２の脚注に示した様にしてインターフェロンを調製し
、分析した。純化した天然のＨｕＩＦＮ−αでウサギを
免疫することにより抗ＩＦＮ−αを調製した。抗ＩＦＮ
−βは、天然のＨｕＩＦＮ−βで牛を免疫することによ
り調製した。（）内の数値は、抗血清処理後の抗ウィル
ス活性に於けるホールドリダクシを示す。

表４．　　Ｉ型および■型ＩＦＮ−α暗号領域の修正さ
れたヌクレオチドのずれ％ ＨｕＩＦＮ−ａ１１／ＨｕＩＦＮ−ａｌｌｌ　　３０．
２７　　６９．１９ヌクレオチド配列の各ペアの修正し
たずれ％を計算した。ヌクレオチド配列を第２図および
第４図に示す様に並べた。■型ＩＦＮ−α遺伝子の最後
の１８ヌクレオチド（１６７−１７２のアミノ酸をコー
ドしている）を互いに比較したが、工型対■型の比較で
は除外した。

本発明のヒト白血球インターフェロンは、既に報告され
ているヒト白血球インターフェロン（例えば（４）参照
）と比較すると、多分より広い生物活性スペクトラムを
持っているという特性を有する。更に、本発明の新規な
独特の白血球インターフエロンは、既に報告されている
ヒト白血球インターフェロン（４）と比較すると、アミ
ノ酸レベルで、約７０％以下のホモロギー（通常は約５
０〜６０％の範囲）しか持っていないという特徴を有す
る。更に、本発明のこの新規な独特のヒト白血球インタ
ーフェロンは、その成熟型では１６６以上のアミノ酸残
基、最も普通には約１７２のアミノ酸を持っていること
で特徴つけられる。

本明細書には、特定の態様のみを開示したが、本発明は
これらの特定の態様にのみ限定されるものではない。

文献 １、　イサツク（ｌ５ａａｃｓ　）ら、ジャーナル・オ
フ・プロシーディンゲス・リサーチ・ソサエティ（Ｊ。

Ｐｒｏｃ、Ｒ−Ｓｏｃ、）、Ｂ１４７．２５８　（１９
５７）２、　ゲッタ／Ｌ／　（Ｇｏｅｄｄｅｌ　）ら、
ネーチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２８７．４１１　（１９
８０） ３、　ゲッタ／Ｌ／　（Ｇｏｅｄｄｅｌ　）ら、ネーチ
ャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２９０．２０　（１９８１） ４、　ヨーロッパ特許出願公開Ｎ１００４３９８０５、
　ヨーロッパ特許出願公開１１ｈｏ０３２１３４６、　
ヨーロッパ特許出願公開Ｎ１００８８６２２７、　ヨー
ロッパ特許出願公開ＦｋＬ００４８９７０８、グレイ（
Ｇｒａｙ）ら、ネーチャー（Ｎａｔｕｒｅ　）、２９５
．５０３　（１９８２） ９、　ヨーロッパ特許出願公開Ｎｌ００７７６７０　　
。

１０゜リンテルクネ−４１７ト（ＲｉｎｄｅｒＫｎｅｃ
ｅｔ　）ら、ジャーナル・オフ・バイオロジカル・ケミ
ストリー（Ｊ、　Ｂｉｏｌ　、　Ｃｈｅｍ、　）、２５
９．６７　（１９８４）１１、　ローン（Ｌａｗｎ　）
、セル（Ｃｅ１ｌ　）、１５．１１５７１２、デナート
（Ｄｅｎｎａｒｄｔ　）、バイオケミカル・バイオフィ
ジカル・リサーチ・コミュニケーショ、ン（Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙ、　Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍ、　）、２
３．６４１１３゜ティラー（Ｔａｙｌｏｒ　）ら、バイ
オキミカ・工・バイオフイジカ／Ｌ／−アクタ（Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ。

ＡＣＥａ　）　４４２．３２４　（１９７６）１４、ウ
ニツク（Ｗｅｃｋ　）ら、ヌクレイツタ・アシッド、・
リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、　）
、９．１５、ゲラデル（Ｇｏｅｄｄｃｌ　）ら、ヌクレ
イツク・ア’ｙ　ット−Ｕ　４ｔ−ｆ　（Ｎｕｃｌｅｉ
ｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、）、８．１６、マクサム（Ｍ
ａｘａｍ、　Ａ、Ｍ、　）ら、メソッド・オフ・エンザ
イモロジ−（Ｍｅｔｈ、　Ｅｎｚｙｍｏｌ　、　）、６
５．１７、メツシング（Ｍｅｓｓｉｎｇ　）ら、ヌクレ
イツク・アシッド・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１
ｄｓ　Ｒｅｓ、　）、９．３０９　（１９８１） １８、サンガー（Ｓａｎｇｅｒ　）ら、プロシーディン
ゲス・オフ・ナショナル・アカデミ−・オフ・サイエン
ス（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　）
、（Ｕｊ、Ａ）、７４．５４６３　（１９７７） １９、ウールリツヒ（Ｕｌｌｒｉｃｈ　）ら、サイエン
ス（Ｓｃｉｅｎｃｅ　）、１９６．１３１３　（１９７
７）２０、ハーバ／ｌ／　（Ｈａｖｅｌｌ　）　ラ、ジ
ャーナル・オフ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ、
　Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ。

）、２５２．４４２５　（１９７７） ２１、ズー７　（Ｚｏｏｎ　）ら、サイｘ　７　ス（５
ｃｉｅｎｃｅ　）、２０７．５２７　（１９８０） ２２、アレン（Δ１ｌｅｎ　）ら、ネーチャー（Ｎａｔ
ｕｒｅ　）、２８７．４０８　（１９８０） ２３、オペルハツハ（ＯｗｅｒｂａＣｈ）ら、プロシー
ディンゲス・オフ・ナショナル・アカデミ−・オフ・サ
イエンス（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、
）、（ＵＳＡ）、７８．３１２３（１９８１） ２４、ネイラー（Ｎａｙｌｏｒ　）ら、ジャーナル・オ
フ・エクスペリメンタル・メデイシ７　（Ｊ、Ｅｘｐ、
　Ｍｅｄ。

）、５７．１０２０　（１９８３） ２５、７　イア　（Ｈｕｙｎｈ　）ら、ＤＮＡクローニ
ング・テクニックス（ＤＮＡ　　Ｃｌｏｎｉｎｇ　Ｔｅ
ｃｈｎｉｇｕｅｓ　）　ニア・プラクティカル・アプロ
ーチ（Ａ　ＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ　）、
編著ニゲローバー（Ｄ、　Ｃ１ｏｖｅｒ　）、ＩＲＬプ
レス（１９８４）。

【図面の簡単な説明】

第１図はＩＦＮ−α■遺伝子の配列を示す模式図、第２
図はＩＦＮ−α■遺伝子間のＤＮＡ配列の関係を示す模
式図、第３図はＩＦＮ−α■遺伝子系列によってコード
されているポリペプチドのアミノ酸配列を示す模式図、
第４図はＨｕｌＦＮ−α■１遺伝子を含有しているファ
ージ組換え体の構造を示す模式図、第５図はヒトＩＦＮ
−α遺伝子系列のサザーン・プロット分析の結果を撮影
した写真の模写図、第６図はＨｕ　Ｉ　Ｆ　Ｎ　−ａ　
ｎ　ｌとＨｕＩＦＮ−αＩｌのヌクレオチド配列、およ
びＨｕＩＦＮ−α■１でコードされたタンパク質とクラ
スＩのＨｕＩＦＮ−α工１遺伝子系列のタンパク質の模
式図、第７図はウィルス的に誘導されたクラスエおよび
クラス■のＩＦＮ−α転写体の分析結果を撮影した写真
の模写図、第８図は大腸菌内で成熟ＩＦＮ−αタンパク
質を合成するためのプラスミドの構造を示す模式図であ
る。 特許出願人　ジエネンテク、インコーポレイテッド代　
理　人　弁理士　青白　葆　外１名Ｆｉｇ。３ ａＨ，Ｉ　　　　ＭＡＬＬＦＰＬＬＡＡＬＶＭＴＳＹＳ
ＰＶＧＳＬＧＣＤＬｄｌ［、ｌ　　　ＲＲ［）ＦＲＦＰ
ＱＥＭＶＫＧＳＯＬＱＫＡＨＶＭＳＶＬＨσｒ１．２　
　　＋−＋＋＋　−−−＋、＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋
＋＋＋　　−＋ａＩ１．３　　　ＲＲＤＦＦＩＦＰＬＥ
ＭＷＭＡＶＳＣＲＲＰＲＰＣＬＳＳＭｄＨ，４Ｒ３ＤＦ
ＲＦＰＱＱＫＥＶＳＱＬＱＫＡＱＡＭＳＦＬＷｄ１１．
３　　　− ｄＨ，４ＴＳＳＡＡＧＴＰＧＤＬＬＧＡＧＤＧＦ？ＲＲ
３ＷＧＯＷＶｄＩＩ　　３　　−−−−−−一一一＋＋
−−−−−＋＋−−−＋−＋−σｒ１．４　　　　　　
　　＋＋＋　　−＋　　　＋＋＋　　　　　＋＋　　　
＋　　　＋＋＋−１ｏ　　　　　　　　　　　　　　２
０　　　　　　　　　　　　　　３０ＰＯＮＨＧＬＬＳ
ＲＮＴＬＶＬＬＨＱＭＲＲＩ　　ＳＰＦＬＣＬＫＯＰＱ
ＮＨＧＬＬＳＲＣ）ＴＬＡＬＬＧＱＭＣＲＩＳＴＦＬＣ
ＬＫＤＰＱＮＨＧＬＬＧＲＮＴＬＶＬＬＧＱＭＲＲＩ　
５ＰＦＬＣＬＫＤＥＭＬＯＱＴ　　ＦＳＬＦＨＴＥＲ５
ＳＡＡＷＮＭＴＬＬＤＯＬＩ−ＩＴＲＣＦＳＲ３ＳＡＳ
ＳＳＰＯ５ＡＰＬＬＰＧＴＯＰ　　−−−−−−ＤＶＬ
ＱＱＶＦＮＦＳＨＫＡＬＬＣＣＭＥＨＤＬＰＧＰＴＰＨ
ＦＳＳＰＡＬＴＬＲＲＹＦＱＧ　Ｉ　　ＲＶＹＬＫＥＫ
ＫＹＳＣＩ−ＣＡＷＥＧＳＳ Ｆｉｇ。７ Ｆ智、８

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、通常随伴している他のタンパク質を含まず、全アミ
   ノ酸残基が１６６以上であるヒト白血球インターフエロ
   ン。 ２、アミノ酸残基が１７２である第１項に記載のヒト白
   血球インターフエロン。 ３、添付の図面の第３図のαII．１について記載した第
   １位から第１７２位に至るまでのアミノ酸配列を持つた
   ヒト白血球インターフエロン。 ４、第１項、第２項または第３項に記載のヒト白血球イ
   ンターフエロンを含んでいる組成物。 ５、薬学的に許容し得る担体を更に含んでいる第４項に
   記載の組成物。 ６、添付の図面の第６図のＨｕＩＦＮ−αII．１の第１
   位から第１７２位までの配列を持つた第１項〜第３項の
   いずれかに記載のヒト白血球インターフエロンをコード
   しているＤＮＡ配列。 ７、第１項〜第３項のいずれかに記載のヒト白血球イン
   ターフエロンをコードしているＤＮＡを機能的に保持し
   ている、微生物または細胞培養をトランスフエクトする
   のに好適な発現ベクター。 ８、第６項に記載のＤＮＡ配列を機能的に保持している
   第７項に記載の発現ベクター。 ９、第１項に記載のヒト白血球インターフエロンを生産
   し得る微生物または細胞培養。 １０、第７項に記載のＤＮＡを保持している機能的発現
   ベクターでトランスフエクトされた微生物または細胞培
   養。 １１、組み換えＤＮＡ発現によつて、第１０項に記載の
   微生物または細胞培養中、第１項に記載のヒト白血球イ
   ンターフエロンを生産する方法。