HU191263B - Process for producing factor for promoting letting out growth hormone of human pancreatic origine - Google Patents
Process for producing factor for promoting letting out growth hormone of human pancreatic origine Download PDFInfo
- Publication number
- HU191263B HU191263B HU8497A HU9783A HU191263B HU 191263 B HU191263 B HU 191263B HU 8497 A HU8497 A HU 8497A HU 9783 A HU9783 A HU 9783A HU 191263 B HU191263 B HU 191263B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- ser
- gln
- leu
- arg
- glu
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 26
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 title description 21
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 title description 21
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 title description 21
- 230000008569 process Effects 0.000 title description 5
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 title 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 65
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 33
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims abstract description 9
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 9
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 45
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 35
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 35
- -1 2,6-dichlorobenzyl Chemical group 0.000 claims description 22
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 16
- 108010091798 leucylleucine Proteins 0.000 claims description 6
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 4
- 108010053037 kyotorphin Proteins 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 3
- 108010036320 valylleucine Proteins 0.000 claims description 3
- UQHGAYSULGRWRG-WHFBIAKZSA-N Glu-Ser Chemical group OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UQHGAYSULGRWRG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 2
- ALMBZBOCGSVSAI-ACZMJKKPSA-N Glu-Ser-Asn Chemical group C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N ALMBZBOCGSVSAI-ACZMJKKPSA-N 0.000 claims description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 claims description 2
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 claims description 2
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 125000005147 toluenesulfonyl group Chemical group C=1(C(=CC=CC1)S(=O)(=O)*)C 0.000 claims description 2
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 claims 1
- 108010078144 glutaminyl-glycine Proteins 0.000 claims 1
- 125000004356 hydroxy functional group Chemical group O* 0.000 claims 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 10
- 241000282412 Homo Species 0.000 abstract description 7
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 abstract description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 abstract description 7
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N D-alanine Chemical group C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 abstract description 5
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 abstract description 5
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 abstract description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 4
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 abstract description 4
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 abstract description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 abstract description 2
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 abstract 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 abstract 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 abstract 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 17
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 16
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 13
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 12
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 11
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 11
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 9
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 7
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 7
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- SHDMMLFAFLZUEV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1,1-diphenylmethanamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(NC)C1=CC=CC=C1 SHDMMLFAFLZUEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical group C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 5
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 4
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 4
- MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N diphenylmethanamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(N)C1=CC=CC=C1 MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 4
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical group 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 108010036509 somatotropin releasing factor 40 Proteins 0.000 description 3
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 125000005076 adamantyloxycarbonyl group Chemical group C12(CC3CC(CC(C1)C3)C2)OC(=O)* 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 2
- 125000004218 chloromethyl group Chemical group [H]C([H])(Cl)* 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- XYWDPYKBIRQXQS-UHFFFAOYSA-N di-isopropyl sulphide Natural products CC(C)SC(C)C XYWDPYKBIRQXQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N dopamine Chemical compound NCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 2
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- WXEHBUMAEPOYKP-UHFFFAOYSA-N methylsulfanylethane Chemical compound CCSC WXEHBUMAEPOYKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 125000001412 tetrahydropyranyl group Chemical group 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N (2s)-5-[amino-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]methylidene]azaniumyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoate Chemical compound CC1=CC=C(S(=O)(=O)NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C=C1 WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- NXJOFTRBTBDSHB-UHFFFAOYSA-N (4-methyl-1,4-diazepane-1-carbothioyl)sulfanyl 4-methyl-1,4-diazepane-1-carbodithioate Chemical compound C1CN(C)CCCN1C(=S)SSC(=S)N1CCN(C)CCC1 NXJOFTRBTBDSHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHTZSJKMWBONMD-UHFFFAOYSA-N (4-methylphenyl)-phenylmethanamine;hydrochloride Chemical compound Cl.C1=CC(C)=CC=C1C(N)C1=CC=CC=C1 NHTZSJKMWBONMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JLLYLQLDYORLBB-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-n-methylthiophene-2-sulfonamide Chemical compound CNS(=O)(=O)C1=CC=C(Br)S1 JLLYLQLDYORLBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 125000006847 BOC protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940122439 Hydroxylase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N L-alanine-L-arginine Natural products CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N Leu-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XGDCYUQSFDQISZ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FYYSQDHBALBGHX-YFKPBYRVSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-asparagine Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O FYYSQDHBALBGHX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- BCKYYTVFBXHPOG-ACZMJKKPSA-N Ser-Asn-Gln Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CO)N BCKYYTVFBXHPOG-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 1
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000005915 ammonolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 description 1
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012412 chemical coupling Methods 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 125000002668 chloroacetyl group Chemical group ClCC(=O)* 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003749 cleanliness Effects 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- UNXNGGMLCSMSLH-UHFFFAOYSA-N dihydrogen phosphate;triethylazanium Chemical compound OP(O)(O)=O.CCN(CC)CC UNXNGGMLCSMSLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 229960003638 dopamine Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 125000003754 ethoxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC)* 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 1
- 125000002795 guanidino group Chemical group C(N)(=N)N* 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000960 hypophysis hormone Substances 0.000 description 1
- 230000002267 hypothalamic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 1
- 230000037189 immune system physiology Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000005928 isopropyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(OC(*)=O)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- MGJXBDMLVWIYOQ-UHFFFAOYSA-N methylazanide Chemical compound [NH-]C MGJXBDMLVWIYOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003170 phenylsulfonyl group Chemical group C1(=CC=CC=C1)S(=O)(=O)* 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 125000001557 phthalyl group Chemical group C(=O)(O)C1=C(C(=O)*)C=CC=C1 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229920006122 polyamide resin Polymers 0.000 description 1
- 239000002952 polymeric resin Substances 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- QLNJFJADRCOGBJ-UHFFFAOYSA-N propionamide Chemical compound CCC(N)=O QLNJFJADRCOGBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000003578 releasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003488 releasing hormone Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000011894 semi-preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 1
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 125000004044 trifluoroacetyl group Chemical group FC(C(=O)*)(F)F 0.000 description 1
- PQDJYEQOELDLCP-UHFFFAOYSA-N trimethylsilane Chemical compound C[SiH](C)C PQDJYEQOELDLCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/60—Growth hormone-releasing factor [GH-RF], i.e. somatoliberin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/843—Digestive system
- Y10S530/845—Pancreas
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/12—Growth hormone, growth factor other than t-cell or b-cell growth factor, and growth hormone releasing factor; related peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- External Artificial Organs (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Prostheses (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Chemical And Physical Treatments For Wood And The Like (AREA)
- Machine Tool Sensing Apparatuses (AREA)
- Adhesives Or Adhesive Processes (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
A találmány tárgya eljárás olyan új peptidek előállítására, amelyek befolyást gyakorolnak az agyalapi mirigy funkciójára az emberben és állatokban, főleg emlősökben. A peptid elősegíti az agyalapi mirigyből a növekedési hormon kibocsátását.
A fiziológusok már régen felismerték, hogy a hipotalamusz szabályozza az adenohipofizis összes kiválasztási funkcióját oly módon, hogy a hipotalamusz speciális polipeptideket hoz létre, amelyek előidézik az egyes agyalapi mirigy hormonok kiválasztását. Egy inhibitor faktort is azonosítottak, az ún. szomatosztatint, amely gátolja a növekedési hormon (GH) kiválasztását.
Kutatás folyt egy megfelelő hipotalamusz-eredetű, agyalapú mirigy GH kibocsátását elősegítő faktor felderítése érdekében, és 1982-ben humán hasnyálmirigy tumor kivonatából egy olyan polipeptidet izoláltak, tisztítottak, jellemeztek, majd szintetizáltak és vizsgáltak meg, amely elősegítette az agyalapi mirigy GH kibocsátását. Ennek a 40 tagú peptidnek a képlete a következő:
H - Tyr - Ala - Asp - Ala - Ile - Phe - Thr - Asn
- Ser - Tyr - Arg - Lys - Val - Leu - Gly - Gin - Leu
- Ser - Ala - Arg - Lys - Leu - Leu - Gin - Asp - Ile
- Met - Ser - Arg - Gin - Gin - Gly - Glu - Ser - Asn
- Gin - Glu - Arg - Gly - Ala - OH. A peptridre ez után mint hPGRF-re hivatkozunk (emberi hasnyálmirigy tumor GH kibocsátó faktor). Ennek a peptidnek egy 44 tagú, amidált változatát izolálták egy másik tumorból, amely Arg-Ala-Arg-Leu-t foglalt magában a C-termináiison.
Úgy találtuk, hogy a hPGRF szintetikus peptid analógja, amelyben a 15. helyzetben a glicin-maradékot D-Ala helyettesíti, teljes, valódi biológiai aktivitást mutat, ugyanakkor a testben az enzimes bomlásnak fokozottan ellenáll, így meghosszabbított időtartamú biológiai hatása van. Ezen túi meglepő módon azt találtuk, hogy az amidált C-termináüst tartalmazó 1 — 29 és í — 32 hPGRF-fragmensek olyan biológiai potenciált mutatnak, amely azonos a natív, 40 aminosavból álló peptid potenciáljával.
A találmány tárgya továbbá eljárás olyan gyógyászati készítmények előállítására, amelyek hPGRF-et, vagy biológiailag aktív amidált fragmensét tartalmazzák, vagy a fentiek bármilyen nem toxikus sóját, gyógyszerészeti lég elfogadható folyadékban vagy szilárd hordozóban diszpergálva. Az ilyen gyógyászati kompozíciókat mind β humán, mind az állatgyógyászatban lehet alkalmazni klinikai gyógyításban terápiás adagoláshoz és diagnosztikai célra egyaránt.
A következőkben a találmány előnyös megvalósítását ismertetjük. A peptidek meghatározásánál Schrödet és Lubke nomenklatúráját alkalmazzuk, [„The Peptides”, Academic Press (1965)], ahol a hagyományos ábrázolásnak megfelelően az aminocsoport az N-terminálisnál a bal oldalon van feltüntetve és a karboxilcsoport a C-terminálisnál a jobb oldalon. Ahol az aminosav-maradékoknak izomer formái vannak, a képletben mindig az amiiosav L-formája értendő, hacsak határozottan másképpen nem jelöljük.
A találmány szerinti eljárássá) az (I) általános képletű hPGRF peptideket lehet előállítani:
H - Tyr - Ala - Asp - Ala - Ile - Phe - Thr - Asn
- Ser - Tyr - Arg - Lys - Val - Leu - D - Ala - Gin
Leu - Ser - Ala - Arg - Lys - Leu - Leu - Gin - Asp
- Ile - Met - Ser - Arg - Gin - Gin - Gly - Q„ - Y (I) ahol
Q jelentése Glu, Glu-Ser, Glu-Ser-Asn, Glu-SerAsn-Gln, Glu-Ser-Asn-Gln-Glu, Glu-SerAsn-Gln-Glu-Arg, Glu-Ser-Asn-Gln-GluArg-Gly, Glu-Ser-Asn-G!n-Glu-Arg-Gly-Ala, n értéke 0 vagy 1,
Y jelentése -OH vagy -NH2.
A peptideket bármilyen alkalmas módszerekkel lehet szintetizálni, így pl. kizárólagosan szilárd fázit ú technikákkal, részlegesen szilárd fázisú technikákkal, fragmenskondenzáciéval, klasszikus, oldatban történő kapcsolásokkal. A kizárólagosan szilárd fázisú technikát például a „Solid-Phase Pepiidé Synthesis” (Szilárd fázisú peptid szintézis) című szakkönyv (Stewart és Young szerkesztése, Frecman és Co. kiadás, San Francisco, 1969), és a 4 105 603 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás leíró részében ismerteti (Vale és munkatársai, 1978. aug. 8.). A fragmens-kondenzációs módszert a 3 972 859 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás részletesen ismerteti (1976. aug. 3.). Egyéb alkalmas szintézis módszereket ismertet a 3 842 067 (1974. okt. 15.) és 3 862 925 í 1975. jan. 28.) számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás.
A találmány szerinti peptidek előállítására alkalmas rekombináns DNS technikák alkalmazásával örténő szintézis (amely módszer nem képezi találmányunk tárgyát) értelemszerűen magában foglalja a hpGRF fragmens kívánt formáját kódoló struktúrgén megfelelő alkalmazását. A szintetikus íPGRF fragmenst úgy nyerhetjük, hogy egy ilyen struktúrgénnel együttműködő promotort és operátort magában foglaló kifejeződést előidéző (expessziós) vektort alkalmazva egy mikroorganizmust transzformálunk, és így előidézzük, hogy egy lyen transzformált mikroorganizmus kifejezze a bPGRF fragmenst. Egy állatot (embert nem) szintén lehet használni hPGRF előállításához gén tenyésztéssel, egy ilyen struktúrgént és általános eljáást ismertet a 4 276 282 (1981. június 30.) számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás, vagy az embriók mikroinjekciózását ismerteti a WO 83/01783 nemzetközi közzétételi számú PCT bejelentés (publikálva 1983. május 26.) és a WO 32/04443 nemzetközi közzétételi számú PCT-bejelentés (publikálva 1982. december 23.). A szintetikus hPGRF fragmenst közvetlenül abban az állatban is elő lehet állítani, amelynek növekedését fokozni kívánjuk. Ezt a módszert is ismerteti a két említett PCT-bejelentés.
A kémiai kapcsolásos szintézisekben szokásos módszer az, hogy az aminosav-maradékok oldalláncaiban levő, könnyen reakcióba lépő csoporto-2Í91 263 kát alkalmas csoportokkal védik. Szokásos módszer az is, hogy az α-aminocsoportot védik, amíg a karboxilcsoporton végbemenő reakció folyik, majd az α-aminocsoportot védő csoportot eltávolítják az ezen a helyen végzendő reakciók lehetővétételére, 5 Ennek megfelelően a reakció során képződik egy olyan intermedier molekula, amely az aminosavakat a pepiidnek megfelelő sorrendben tartalmazza, az aminosavak oldalláncaiban levő csoportok azonban védőcsoportokkal védett formában van- 10 nak.
A fentiek alapján a találmány szerinti eljárás első lépésében előállítunk egy (II) általános képletű vegyületet, amelyben az aminosavak oldalláncaiban levő, könnyen reagáló csoportok védőcsoportok- 1θ kai védett formában vannak:
X1 - Tyr(X2) - Alá - Asp(X3) - Alá - Ile - Phe Thr(X4) - Asn(X5) - SeríX4) - Tyr(X2) - Arg(X6) Lys(X7) - Val - Leu - D - Alá - Gin - (X5) - Leu Ser(X4) - Alá - Arg(Xö) - Lys(X7) - Leu - Leu - 20 Gln(Xs) - Asp(X3) - Ile - Met - Ser(X4) - Arg(Xe)
- Gln(XJ) - GIn(X5) - Gly - [Q(X)]n - X8 (II) ahol n értéke 0 vagy 1, 25
Q(X) jelentése az (I) általános képletnél Q jelentéseként megadott aminosavak kívánt esetben védett formában.
X1 jelentése hidrogénatom vagy egy a-aminocsoportot védő csoport. Az X’-el jelzett a- 30 aminocsoportot védő csoportok jól ismertek a polipeptidek lépésenként! szintézisének gyakorlatából. Az X’-ei jelzett, a-aminocsoportot védő csoportok a következők lehetnek; (l) acil-tipusú védőcsoportok, mint pl. formil-, 35 trifluor-acetil-, ftalil-, toluolszulfonil- (Tos), benzolszulfonil-, nitro-fenil-szulfenil-, tritiíszulfenil-, o-nitro-fenoxi-acetil-, klór-acetil-, acetil- és γ-klór-butiril-csoport; (2) aromás uretán típusú védőcsoportok, mint pl. benzil- 40 oxi-karbonil-csoport (Z) és helyettesített Z, úgy mint p-nitro-benzil-oxi-karbonil, p-brómbenzil-oxi-karboníl-, p-metoxi-benzil-oxikarbonil-csoport; (3) alifás uretán-típusú védöcsoportok, mint pl. t-butil-oxi-karbonil- 45 (BOC), diízopropil-metil-oxi-karbonil-, izopropil-oxi-karbonil-, etoxi-karbonil, allil-oxikarbonil-csoport; (4) cikloalkü-uretán típusú védőcsoportok, mint pl. ciklopentil-oxikarbonil-, adamantil-oxí-karbonil- és cíklohe- 5θ xil-oxi-karbonil-csoport (5) tiouretán-típusú védőcsoportok, mint pl. fenil-tiokarbonilcsoport; (6) alkil-típusú védőcsoportok, mint pl. trifenil-metil-(tritil), benzilcsoport; (7) trialkil-szílán csoportok, mint pl. trimetil-sziláncsoport. A legelőnyösebb a-amínocsoportot védő csoport a BOC.
X2 jelentése a Tyr fenolos hidroxilcsoportját védő csoport, amely tetrahidropiranil, tercier „„ butil, tritil, Bzl, CBZ, 4-Br-CBZ és 2,6-dikíórbenzil (DCB) csoportok valamelyike lehet. X2 lehet hidrogénatom is, amely azt jelenti, hogy a hidroxilcsoporton nincs védőcsoport.
X3 jelentése hidrogén vagy egy észtert képző 6védőcsoport az Asp vagy a Glu karboxilcsoportján, amelyet benzil, 2,6-diklór-benzil, metil és etilcsoportok közül lehet kiválasztani.
X4 jelentése védőcsoport a Thr- vagy Ser hidroxilcsoportjain, amelyet acetil-, benzoil, tere.-butil-, tritil-, tetrahidropiranil-, Bzl, 2,6diklór-benzil és CBZ csoportok közül lehet kiválasztaai. Az előnyös védőcsoport a Bzl. Az X4 lehet hidrogénatom is, amely azt jelenti, hogy nincs védőcsoport a hidroxilcsoporton.
Xs jelentése hidrogénatom vagy védőcsoport az Asn vagy Gin oldalláncúnak aminocsoportjaihoz, és ez előnyösen xantil (Xan) csoport.
Xe jelentése vagy védőcsoport az Arg guanidinocsoportjához, amelyet a nitro, Tos, CBZ, adamantil-oxi-karbonil- és BOC csoportok közül lehet kiválasztani, vagy hidrogénatom.
X7 jelentése hidrogénatom vagy védőcsoport a Lys oldalláncának amino-szubsztituenséhez. Ilyen védőcsoportok lehetnek többek között — csak szemléltetés céljából felsorolva - a 2-klór-benzil-oxi-karbonil(2-Cl-Z), Tos, t-pentil-oxi-karbonil és BOC csoportok.
Az oldallánc aminocsoportját védő csoport kiválasztása nem kritikus, kivéve azt a követelményt, hogy olyannak kell lennie, amely az α-arninocsoportokról történő védőcsoport eltávolításánál nem hasad le a szintézis során. Vagyis az α-aminocsoportot védő csoport és az oldallánc aminocsoportját védő csoport nem lehet azonos.
X8 lehet védőcsoport a C-terminális karboxíl-csoporthoz, ilyenek lehetnek az X3-nál említett észter-képző csoportok, vagy jelölheti a gyantához rögzítő kötést. Lehet olyan eset is, amikor X8 nincs a molekulában, ez esetben a C-terminálisnál a maradéknak egy Y karboχίΐ-része van. Amikor gyantát alkalmazunk rögzítő anyagként, az Y képlete a következő lehet: - O - CH2-gyanta, O - CH2-benzilpoliamid gyanta, — NH-benzhidrilamin (BHA) gyanta, és - NH - para-metil-benzhidrilamin (MBHA) gyanta.
A poliamid polimer gyanták kereskedelmi forgalomban kaphatók, ilyen gyanta alkalmazását ismertetik pl. a Bioorganic Chemistry, 8, 351 -370 (1979) irodalmi helyen, ahol ennek előnyös változatait is bemutatják egy szintézissel kapcsolatban. Hordozó gyantán végzett szintézis esetén az oldallánc-védő csoportokat először hidrogén-fluoridos (HF) kezeléssel lehasítjuk, majd ezt követően a pepiidet le lehet hasítani a gyantáról, mint egy amidot, ammonolízissel. Ha a helyettesítetlen amidra van szükség, a BHA vagy MBHA gyanta alkalmazása előnyös, mivel a hasítás közvetlenül megadja az amidot. Amennyiben N-metil-amidot kívánunk nyerni, ezt N-metil BHA-gyantából lehet létrehozni.
A köztes termékek képletében az X csoportok legalább egyikének védöcsoportnak kell lennie, vagy X8-nak gyantának kell lennie.
191 263
A peptidek szintézisénél felhasználandó, megfelelő oldalláncot védő csoport kiválasztásánál a következő szabályokat kell követni: (1) a védőcsoporlnak meg kell tartania védő tulajdonságait és nem szabad lehasadnia az összekapcsolások körülményei között (2) a védőcsoport legyen stabil az egyes reagensekre, és Xan kivételével, legyen stabil az α-amino védőcsoport eltávolításához kiválasztott reakciókörülmények között a szintézis minden lépésénél és (3) az oldalláncot védő csoport legyen eltávolítható a szintézis teljessé tétele után (vagyis amikor a kívánt aminosav-szekvencia kialakult) olyan körülmények között, amelyek nem változtatják meg a peptid-láncot.
A peptideket előnyösen szilárd fázisú szintézissel készítjük, ahogyan ezt Merrifield leírta [/. Am. Chem. Soc., 85, 2145. (1963)]. A szilárd fázisú szintézis a peptid C-terminális végéről kezdődik egy védett α-aminosav kapcsolásával a megfelelő gyantához. Ilyen kiindulási anyagot a 40 tagú pepiidhez lehet készíteni az α-amino-csoporton védett Alá kapcsolásával egy észter-kötés útján egy klór-meti-; lezett gyantához vagy egy hidroxi-metil gyantához, vagy egy amid-kötés útján BHA vagy MBHA gyantához. A BHA és MBHA gyanták a kereskedelmi forgalomban kaphatók, és általában akkor használatosak, amikor a szintetizálni kívánt polipeptid helyettesítetlen amidcsoportot tartalmaz a C-terminálison. Ha metil-, etil- vagy propil-amid építendő be a készítendő polipeptidbe, klór-metiíe-! zett vagy hidroximetil gyantát használunk, és a hasítást alkalmas módon a megfelelő amin, pl. etil-amin alkalmazásával hajtjuk végre.
A BOC-vel védett Alá a klór-metilezett gyantához Monahan és Gilon módszere szerint kapcsolható (Biopolimer, 12, 2513- 19, 1973). A BOC-Alá kapcsolását követően a gyantához, az a-aminocsoportot védő csoportot eltávolítjuk metilén-kloridos közegben trifluor-ecetsavval (TFA), vagy csak TFA-val, vagy dioxános közegben sósavval. A védőcsoport eltávolítását 0 °C és szobahőmérséklet között kell végrehajtani. Egyéb szokásos hasító reagensek és körülmények is használhatók az egyes α-aminocsoportokat védő csoportok eltávolítására, amint ezeket Schröder és Lubke leírták [The Peptides, 1, 72-75 (Academic Press 1965)].
A Phe α-amino csoportját védő csoport eltávolítása után a többi α-aminocsoportban és oldalláncban védett csoporttal rendelkező aminosavat lépésenként kapcsoljuk össze a kívánt sorrendben; az egyes aminosavak egyenkénti adagolásának alternatívájaként alkalmazhatunk olyan módszert is, amelyben néhány aminosavat egymáshoz kapcsolunk még a szilárd fázisú reaktorba történő adagoláselőtt. A megfelelő kapcsoló reagens kiválasztása a szakterületen jártassághoz tartozik. Különösen alkalmas kapcsoló reagens az N, N’-diciklohexilkarbodiimid (DCCI).
A peptidek szilárd fázisú szintézisében alkalmazott aktiváló reagensek jól ismertek a peptidkészítés gyakorlatában. A megfelelő aktiváló reagensekre a példák a karbodiimidek, mint pl. az N, N’diizopropil-karbodiimid, NTetil-N’-(3-dimetil4 amino-propil)karbodiimid. Más aktiváló reagenseket és alkalmazásukat a kapcsolási reakciókban is leírták Schröder és Lubke a korábban idézett mű III. fejezetében, valamint Kapoor a [Pharm. Sci. 59, 1 — 27 (1970)] irodalmi helyen.
Minden védett aminosavat vagy aminosav-szekvenciát négyszeres vagy nagyobb fölöslegben adagolunk a szilárd fázisú reaktorba, és a kapcsolást dimetil-formamid (DMF): CH2C12 (1:1) közegben hajtjuk végre, vagy csak DMF-ben, ill. csak CH2Cl2-ben. Abban az esetben, ha a kapcsolás nem megy végbe tökéletesen, a kapcsolási eljárást még egyszer el kell végezni az α-aminocsoportot védő csoport eltávolítása előtt, amely megelőzi a következő aminosav kapcsolását. A kapcsolási reakció sikerét a szintézis minden stádiumában ninhidrinreakcióval kell ellenőrizni, ahogyan ezt E. Kaiser és munkatársai leírták [Anal. Biochem. 34, 595 (1970)].
Miután a kívánt aminosav-szekvencia teljessé vált, köztes peptid-terméket el kell távolítani a gyantáról, pl. folyékony hidrogén-fluoriddal, amely nem csupán lehasítja a pepiidet a gyantáról, hanem lehasitja az összes megmaradt, oldalláncot védő X2, X3, X4, Xs, X6 és X7 csoportot, az X8 rögzítő kötést, és az X1 α-aminocsoportot védő csoportot, így nyerjük a peptidet szabad sav formájában. Amennyiben pl. etil-amid előállítása lenne szükséges, a peptidet száraz etil-aminos kezeléssel lehet hasítani. Mivel Met is van jelen a szekvenciában, előnyös először a BOC védőcsoportot lehasítani trifluorecetsav (TFA) és etán-ditiol elegyével, mielőtt még a peptidet lehasítanánk a gyantáról HF-el, ilyen módon elkerüljük a lehetséges S-alkilezést, Amikor HF-et alkalmazunk a hasításhoz, anizolt és metil-etil szulfidot is teszünk a reakcióedénybe átöblítés céljából.
A következő példákban bemutatjuk a hPGRF szintézisét szilárd fázisú technikával. A rövidebb peptid fragmensek szintézisét azonos módszerrel hajtjuk végre, csupán elhagyjuk a kívánt mennyiségű aminosavat a lánc valamelyik végénél, azt azonban tudni kell, hogy a biológiailag aktív fragmenseknek tartalmazniok kell az aktivitáshoz szükséges szekvenciát az N-terminálisnál.
1. példa
A[D-Ala15]-hPGRF(l-40)-NH2 - amelynek képlete H - Tyr - Alá - Asp - Alá - He - Phe - Thr
- Ásn - Ser - Tyr - Arg - Lys - Val - Leu - D - Alá
- Gin - Leu - Ser - Alá - Arg - Lys - Leu - Leu - Gin
- Asp - íle - Met - Ser - Arg - Gin'- Gin - Gly - Glu
- Ser - Asn - Gin - Glu - Arg - Gly - Alá - NH2-szintézisét lépésenként hajtjuk végre, Beckman 990 peptid-szintetizátort használva MBHA (p-metilbenzhidrilamin hidroklorid-gyantán, amely a Bgchem, Inc.-től kapható, és emylenk helyettesíthetősége 0,1 —0,5 mmól/g gyanta között van. A BOCAla kapcsolását a gyantához az alábbiakban, az „A” és „B” táblázatban leírt általános eljárás szerint végezzük, amelyet végig a szintézis során hasz-41
191 263 nálunk, és így mintegy 0,35 mmól Ala-t kötünk meg 1 g gyantán. Minden felhasznált oldószert gondosan gázmentesítünk valamely inért gáz, pl. hélium vagy nitrogén átbuborékoltatásával, az oxigén eltávolítása érdekében, amely a kén nem kívánatos oxidációját okozhatja a Met maradékon.
A védőcsoport eltávolítása és semlegesítés után a peptid-láncot lépésről lépésre felépítjük a gyantán. A védőcsoportok eltávolítását, a semlegesítést és az egyes aminosavak beadagolását általában a Vale és munkatársai által részletesen leírt eljárással összhangban végezzük (4 292 313 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás). A védőcsoport eltávolítását előnyösen az „Á” táblázatban ismertetett eljárás szerint végezzük, amely a következő :
A táblázat
| Lépés száma | Reagensek , és műveletek | Keverési idő (perc) |
| 1. | 60 % TFA/2 % etán-ditiol | 10 |
| 2. | 60 % TFA/2 % etán-ditiol | 15 |
| 3. | IPA/1 % etán-ditiol | 0,5 |
| 4. | Et3N(10 %) CH2Cl2-ben | 0,5 |
| 5. | MeOH | 0,5 |
| 6. | Et3N(10 %) CH2Cl2-ben | 0,5 |
| 7. | MeOH (kétszer) | 0,5 |
| 8. | CH2C12 (kétszer) | 0,5 |
A kapcsolásokat előnyösen a „B” táblázatban ismertetett eljárás szerint hajtjuk végre, amely a következő:
B táblázat
| Lépés száma | Reagensek és műveletek | Keverési idő (perc) |
| 9. | DCCI | _ |
| 10. | BOC-aminosav | 50-90 |
| 11. | MeOH (kétszer) | 0,5 |
| 12. | CH2C12 (kétszer) | 0,5 |
| 13. | Ac2 (3 mólos) CH2Cl2-ben | 15,0 |
| 14. | CH2C12 | 0,5 |
| 15. | MeOH | 0,5 |
| 16. | CIT2C12 (kétszer) | 0,5 |
Röviden: 1 és 2 mmól közötti mennyiségű BOCal védett és metilén-kloridban oldott aminosavat használunk egy gram gyantához, és 1 mól ekvivalenst DCCI-t 1,0 mólos metilén-kloridos oldat formájában. Amikor BOC-Arg (TOS)-t kapcsolunk, % DMF és metilén-klorid elegyét használjuk. Bzl étert használunk, mint a Ser és Thr hidroxiloldalláncát védő csoportot. p-Nitro-fenil észtert (ONp) alkalmazunk az Asn vagy Gin karboxilvégének aktiválásához, és pl. BOC-Asn(ONp) kapcsolását egy éjszakán át végezzük, 1 mól ekvivalens HOBt-t használva DMF és metilénklorid 50 %-os Hegyében; ebben az esetben DCCI-t nem adunk hozzá. Az Asn vagy Gin amino-csoportját Xan-nal védjük, amikor DCCI kötést használunk az aktív észter módszer helyett. 2 Cl-Z-t alkalmazunk védőcsoportként a Lys oldalláncához. Tos-t alkalmazunk az Arg guanidino-csoportjának védőcsoportjaként, a Glu vagy Asp karboxil-csoportját pedig OBzl-el védjük. A Tyr fenolos hidroxil-csoportját DCB-vel védjük. A szintézis végén a következő összetételt kapjuk: X1 - Tyr(X2) - Alá - Asp(X3) Alá - Ile - Phe - Thr(X4) - Asn(X5) - Ser(X4) Tyr(X2) - Arg(Xö) - Lys(X7) - Val - Leu - D - Alá
- Gln(X5) - Leu - Ser(X4) - Alá - Arg(X6) - Lys(X7)
- Leu - Leu - Gln(Xs) - Asp(X3) - Ile - Met - Ser(X4)
- Arg(X6) - Gln(X5) - Gln(X5) - Gly - Giu(X3) Ser(X5) - Asn(X5) - Gln(X5) - Glu(X3) - Arg(X6) Gly - Alá - X8, ahol X1 jelentése BOC, X2 jelentése DCB, X3 jelentése benzil észter, X4 jelentése Bzl, X5 jelentése Xan, Xö jelentése Tos, X7 jelentése 2 Cl-Z és X8 jelentése - NH-gyanta. A Xan-t részlegesen vagy teljesen el lehet távolitva az a-amino-csoportot védő csoport eltávolítására használt TFA-kezeléssel.
Miután a befejező Tyr maradékot hozzákapcsoltak a gyantához, a BOC csoportot eltávolítjuk 60 % TFA-val CH2CI2-ben. A védőcsoportok lehas tása érdekében 1 g peptid-gyanta komplexumra számítva 1,5 mi anizolból, 0,5 ml metil-etil-szulfidból és 15 ml hidrogén fluoridból (HF) álló keveréket használunk, a kezelést — 20 °C hőmérsékleten fel órán át, majd 0 °C hőmérsékleten fél órán át végezzük. A HF eltávolítása után nagy-vákuumban, a megmaradó gyanta-pepiid komplexumot váltakozva mossuk száraz dietil-éterrel és kloroformmal, és azután a pepiidet gázmentesített 2 n vizes ecetsavval locsoljuk, majd a gyantától szűréssel elkülönítjük.
A lehasított és védőcsoportoktól megszabadított pepiidet azután 0-5 %-os ecetsavban oldjuk és tisztítjuk, a tisztítás magában foglalhatja a Sephadex G - 50 finom gélszűrést is.
A peptideket ez után tovább tisztítjuk preparatív vagy félpreparativ HPLC-vel, amint ezt Rivier és munkatársai [Peptides: Structure and Biological Function (1979), 125— 128 oldal] és Marki és munkatársai [7. Am. Chem. Soc. 103, 3178 (1981)] leírták. Röviden összefoglalva a Waters Associates prep LC-500-hoz illő patronokat töltünk meg 15 — 20 C18 Silica-val (Vydac, 300A). CH3CN gradienst TEAP-ban alakítunk ki kis nyomású Eldex gradiens-készítőben, ahogyan ezt Rivier, J. leírta (7. Liq. Chromatography 1, 343—367 (1978)]. A kromatográfiás frakciókat gondosan követjük HPLC-vel, és csupán azokat a frakciókat gyűjtjük össze, amelyek jelentős tisztaságot mutatnak. A tisztított frakciók kisózásához, amelyeket egy5
-5191 263 mástól függetlenül ellenőriztünk a tisztaságra, CH ,CN gradienst alkalmazunk 0,1 %-osTFA-ban. A központi kivágatot azután liofilizáljuk a kívánt pepiid kinyerése érdekében, amelynek tisztasága nagyobb lehet, mint 98 %. Kitermelés: 123 mg. [«]“: -55,7°(C = l %, ecetsav).
A szintézist meg lehet ismételni klór-metilezett gyantát alkalmazva [D-Aía,5J-hPGRF( 1-40)-OH előállítása érdekében, ahogyan ezt Rivier, J. leírta [J. Amer. Chem. Soc. 96,, 2986-2992 (1974)]. Kitermelés: 132 mg, [a]®:’
55,5° (C = 1 %, ecetsav).
Olyan tenyészeteket használunk az összehasonlító vizsgálathoz, amelyeket optimálisnak tekintünk a növekedési hormon kibocsátása szempontjából. Az összehasonlító vizsgálatokat Vale és munkatársai módszerével végezzük (Endocrinology, 91,
562-572 (1972)]. Az inkubálást a vizsgálandó vegyülettel 3 — 4 órán át végezzük, és a tenyészetből alikvotokat veszünk, amelyeknek megmérjük immunoreaktív GH (ir GH) tartalmát. A mérés módszere a jó! ismert radioimmunassay.
Ennek az összehasonlító vizsgálatnak az eredményeit (ekvimoláris koncentrációkat összehasonlítva) az I. táblázatban mutatjuk be.
2. példa
A [D-Ala15]-hPGRF(l-32)-NH2 - amelynek képlete H - Tyr - Alá - Asp - Alá - Ile - Phe - Thr
- Asn - Ser - Tyr - Arg - Lys - Val - Leu - D - Alá
- Gin - Leu - Ser - Alá - Arg - Lys - Leu - Leu - Gin
- Asp - fle - Met - Ser - Arg - Gin - Gin - Gly - NH2
- szintézisét lépésenkénti módszerrel hajtjuk végre, Beckman 990 Peptide Synthesizert használva, MBH A gyantán, az 1. példában leírt módszei szerint. Kiteimelés: 149 mg. A pepiidet alapvetően tisztának találjuk TLC-vel és HPLC-vel vizsgálva, [ujp: 57,9° (C = 1 %, ecetsav).
I. táblázat ·.
összePeptid hasonlítás, %
hPGRF(l-40)-OH (standard ehhez a 100 vizsgálathoz) hPGRF(l-40)-NH2 110 hPGRF(l-32)-NH2 140 hPGRF(l-29)-NH2 230 hPGRF(l-29)-OH 29 hPGRF(l-27)-NH2 20
3. példa
A [D-Ala15]-hPGRF(l-39)-NH2 - amelynek képlete H - Tyr - Alá - Asp - Alá - Ile - Phe - Thr
- Asn - Ser - Tyr - Arg - Lys - Val - Leu - D - Alá
- Gin - Leu - Ser - Alá - Arg - Lys - Leu - Leu - Gin
- Asp - Ile - Met - Ser - Arg - Gin - Gin - Gly - Glu
- Ser - Asn - Gin - Glu - Arg - Gly - NH2 — szintézisét lépésenkénti módszerrel hajtjuk végre, Beckman 990 Peptide Synthesizert használva, MBHA gyantán, az L példában leírt módszer szerint. Kitermelés: 107 mg. A pepiidet alapvetően tisztának találjuk TLC-vel és HPLC-vel. [α]θ: 56,3° (C = 1 %>, ecetsav).
A szintézist kivitelezhetjük azonos módon, de klórmetilezett gyantát használva, ilyen módon azo-, nos pepiidet állítunk elő szabad sav formájában, ahogyan ezt már általános formában korábban jeleztük.
Az 1. példa szerint előállított két szintetikus pepiidet in vitro mérésben összehasonlítjuk tisztított natív hPGRF-et, és a GH kiválasztásában ahhoz hasonló aktivitásúnak találtuk.
A különböző szintetikus peptidek növekedési hormon kibocsátását elősegítő hatásának meghatározására in vitro méréseket hajtunk végre, szintetikus hPGRF(l - 40)-OH-t alkalmazva standardként (mivel ez ekvivalens a natív pepiiddel), egymás melletti összehasonlításban a különböző más szintetizált analógok és fragmensek ekvimoláris koncentrációival. Olyan tenyészeteket használunk, amelyek magukban foglalnak 4-5 nappal korábban eltávolított patkány-agyalapi mirigy sejteket.
Ezeknek a szintetikus peptideknek in vitro vizsgálata azt mutatja, hogy az EC5(, 20- 100 pikomól között van és a legkisebb hatásos koncentráció 3 — 8 pikomólos. A maximális hatásos koncentráció hPGRF(l-40)-NH2-re kb. 1 nanomólos.
Az in vitro vizsgálatokon kívül a növekedési hormon kiválasztásokra in vivő kísérleteket is folytatunk a szintetikus pepiid injekciózásával egy beépített katéteren át szabadon futkározó normális hím patkányokba. Az állatokat előkezeljük FLA-63-al, vagyis egy dopamin hidroxiláz inhibitorral, amely visszaszorítja a spontán GH kiválasztást anélkül, hogy az exogén GRF-re adott válaszra hatna. Vérmintákat veszünk ugyanazon a katéteren keresztül közvetlenül az injekciózás előtt, ‘valamint 5 és 20 perccel az injekciók után; a GH szintet a vérben radioimmunassayval mérjük. Az eredmények azt mutatják, hogy a szintetikus hPGRF(l-40)-NH2 és más analógok is hatásos stimulátorai az agyalapi mirigy-eredetű GH kiválasztásának. A testsúly kgonkénti 40 nanogram és 25 mikrogram közti menynyiségeket találtuk hatásos dózisnak.
A további vizsgálatok azt mutatják, hogy a szintetikus hPGRF analógok, amelyeket az I., 2., 3. példák szerint szintetizáltunk, a hPGRF(l-40)-OH teljes belső biológiai aktivitását mutatják.
A szintetikus hPGRF peptidek hasznosak lehetnek olyan esetekben, amelyekben egy orvos növelni szeretné a GH termelést. ÁGH kiválasztás stimulálása ilyen hPGRF peptidekkel fontos lehet olyan pacienseknél, akik az endogén GRF csökkentett termelése által okozott teljes vagy viszonylagos GH hiányban szenvednek. Ezen túl megnövekedett GH
191 263 kiválasztás és az ezt követő növekedés-emelkedés érhető el olyan embereknél és állatoknál, amelyeknek egyébként GH szintje normális. Ezen felül hPGRF peptidek beadása megváltoztathatja a test zsírtartalmát és módosíthat más GH-függő méta- 5 bolikus, immunológiai és fejlődési folyamatot. így pl. a hPGRF peptidek alkalmazhatók az anabolikus folyamatok stimulálására emberekben olyan körülmények között, mint pl. az égési sérüléseket követő állapot. Egy másik példa: a hPGRF pepii- 10 dek hasznosak lehetnek a kereskedelmileg fontos állatok termelésében (pl. csirkék, sertések, marhák és birkák), a növekedés meggyorsításával és a nyert fehérje/zsír hányados növelésével. Az emberekbe történő beadáshoz a szintetikus peptidek tisztása- 15 gának legalább 93 %-osnak kell lennie, előnyösen legalább 98 %-osnak. Ez a tisztaság azt jelenti, hogy az illető peptid alkotja az összes jelen levő peptidszerű anyag és peptíd-fragmens említett tömeg %-át. · 20
Kereskedelmileg fontos vagy más állatok esetén növekedéselősegítés és zsírtartalomcsökkentés céljából 5 %-os tisztaságú, vagy akár még 0,1 % tisztaságú szintetikus hPGRF peptidek is adagolhatok.
A szintetikus hPGRF peptidek vagy nem toxikus 25 sóik gyógyászatilag elfogadható hordozóval kombinálva gyógyászati készítményt alkothatnak, amelyek emlősök, beleértve az embert is, intravénásán, szubkután, intramuszkulárisan vagy szájon át (amennyiben hatásos kapcsolóanyagok vagy hordozók állnak rendelkezésre) adagolhatok. A „gyógyászatilag elfogadható” kifejezés értelemszerűen magában foglalja az „állatgyógyászatilag elfogadható” kifejezést is. A szükséges adag a kezelendő ember vagy állat pillanatnyi állapotával, az állapot súlyosságától, és a kívánt kezelés időtartamától függEzek a peptidek gyógyászatilag elfogadható, nem toxikus sók formájában, mint pl. savaddíciós 40 sók vagy fémkomplexek, pl. cinkkel, vassal stb.-vel alkotott komplexek formájában a bejelentésben ezeket is sóknak tekintjük) is adagolhatok. Savaddíciós sókra példák a hidroklorid, hidrobromid, szulfát, foszfát, maleát, acetát, citrát, benzoát, 45 szukcinát, maleát, aszkorbát, tartarát stb. Ha az aktív alkotórészt tabletta formájában adagoljuk, a tabletta tartalmazhat valamilyen kötőanyagot, pl. tragakantot, kukoricakeményítőt vagy zselatint; valamilyen szétesést elősegítő anyagot, pl. algin- 50 savat; és egy csúsztató anyagot, mint pl. magnéziumsztearátot. Ha folyadék-formájú adagolás kívánatos, édesítő- és/vagy illatosító anyagokat is lehet használni, az intravénás adagolást pedig izotóniás sóoldatban, foszfát-pufferban vagy hasonlókkal le- 55 hét végrehajtani.
A peptideket orvosi felügyelettel kell adagolni; a gyógyászati kompozícióknak a peptideket általá30 bán hagyományos, gyógyászatilag elfogadható hordozókkal együtt kell tartalmaznia. Az adagolás parenterális beadás esetén 40 nanogram - 25 mikrogram peptid a kezelendő szervezet testsúly kgjára számítva.
A találmány szerinti eljárással előállított vegyületekben különböző változtatások lehetségesek, úgy találtuk azonban, hogy a biológiai hatékonyság szempontjából fontos, hogy az 1 - 27. aminosa/-maradék jelen legyen a peptidben.
Claims (2)
- Szabadalmi igénypontok1. EljárásH - Tyr - Alá - Asp - Alá - Ile - Phe - Thr - Asn- Ser - Tyr - Arg - Lys - Val - Leu - D - Alá - Gin- Leu - Ser - Alá - Arg - Lys - Leu - Leu - Gin - Asp- ile - Met - Ser - Arg - Gin - Gin - Gly - Qn - Y (I) általános képletű peptidek előállitására - a képletbenQ jelentése Glu, Glu-Ser, Glu-Ser-Asn, Glu-SerAsn-Gln, Glu-Ser-Asn-Gln-Glu, Glu-SerAsn-Gln-Glu-Arg, Glu-Ser-Asn-GIn-GluArg-Gly, Glu-Ser-Asn-GIn-GIu-Arg-Gly-Ala, n értéke 0 vagy 1,Y jelentése -OH vagy -NH2 csoport azzal jellemezve, hogy valamely, a pepti^kémiában szokásos eljárással előállított, legalább egy védőcsoportot tartalmazóX1 - Tyr(X2) - Alá - Asp(X3) - Alá - Ile - Phe Thr(X4) - Asn(XJ) - Ser(X4) - Tyr(X2) - Arg(Xe) Lys(X7) - Val - Leu - D - Alá - Gln(X5) - Leu Ser(X4) - Alá - Arg(Xe) - Lys(X7) - Leu - Leu Gln(X5) - Asp(X3) - Ile - Met - Ser(X4) - Arg(X6)- Gln(X5) - Gln(X’) - Gly - [Q(X)]n - X8 (II) á'talános képletű vegyületről, a képletbenX *, X2, X3, X4, Xs, X6 és X7 jelentése hidrogénatom vagy védőcsoport,Q(X) jelentése a tárgyi körben Q jelentésénél megadott aminosavak kívánt esetben védett formában, n értéke 0 vagy 1,X8 jelentése hidroxil- vagy aminocsoport vagy ezek védett származéka, vagy - NH-hordozógyanta, a hordozógyantát és/vagy a védőcsoportokat lehasítjuk.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan (II) általános képletű vegyületet használunk, ahol X1 jelentése terc-butoxi-karbonilcsoport, X2 jelentése 2,6-diklór-benziI-csoport, X3 jelentése benzil-észter-csoport, X4 jelentése benzilcsoport, x5 jelentése xantilcsoport, Xö jelentése toluolszulfonilcsoport, X7 jelentése 2-klór-benzil-oxiik arbonil-csoport, X8 jelentése -NH-hordozógyanta.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/432,663 US4563352A (en) | 1982-10-04 | 1982-10-04 | Human pancreatic GRF |
| PCT/US1983/001564 WO1984001379A1 (en) | 1982-10-04 | 1983-10-03 | Human pancreatic grf |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU191263B true HU191263B (en) | 1987-01-28 |
Family
ID=23717095
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU8497A HU191263B (en) | 1982-10-04 | 1983-10-03 | Process for producing factor for promoting letting out growth hormone of human pancreatic origine |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4563352A (hu) |
| EP (1) | EP0105759B1 (hu) |
| JP (1) | JPS59501951A (hu) |
| KR (1) | KR900006712B1 (hu) |
| AT (1) | ATE24919T1 (hu) |
| AU (1) | AU566180B2 (hu) |
| CA (1) | CA1243016A (hu) |
| DE (1) | DE3369144D1 (hu) |
| DK (1) | DK269284D0 (hu) |
| ES (1) | ES8606399A1 (hu) |
| FI (1) | FI83660C (hu) |
| GR (1) | GR79698B (hu) |
| HU (1) | HU191263B (hu) |
| IE (1) | IE56175B1 (hu) |
| IL (1) | IL69897A (hu) |
| MX (1) | MX7701E (hu) |
| NO (1) | NO167866C (hu) |
| NZ (1) | NZ205745A (hu) |
| PH (1) | PH20333A (hu) |
| PT (1) | PT77453B (hu) |
| RO (1) | RO91186B (hu) |
| SU (1) | SU1426455A3 (hu) |
| WO (1) | WO1984001379A1 (hu) |
| YU (1) | YU45575B (hu) |
| ZA (1) | ZA837208B (hu) |
Families Citing this family (34)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4728726A (en) * | 1982-10-04 | 1988-03-01 | The Salk Institute For Biological Studies | GRF analogs IIIb |
| US4703035A (en) * | 1982-10-04 | 1987-10-27 | The Salk Institute For Biological Studies | Human pancreatic GRF amidated fragments |
| US4581168A (en) * | 1983-02-21 | 1986-04-08 | Sanofi | Synthesis of hpGRF (Somatocrinin) in liquid phase and intermediate peptides |
| ZA844380B (en) * | 1983-07-05 | 1985-01-30 | Salk Inst For Biological Studi | Dna encoding a grf precursor |
| AU575843B2 (en) * | 1983-08-10 | 1988-08-11 | The Administrators Of The Tulane Eductional Fund | Growth hormone releasing peptides |
| US4617149A (en) * | 1983-09-21 | 1986-10-14 | Eli Lilly And Company | Growth hormone release factor analogs |
| US4528190A (en) * | 1983-10-25 | 1985-07-09 | The Salk Institute For Biological Studies | GRF Analogs IV |
| FR2567524B1 (fr) * | 1984-07-10 | 1987-11-27 | Sanofi Sa | Procede de synthese de la somatocrinine en phase liquide et peptides intermediaires |
| US4649131A (en) * | 1984-09-24 | 1987-03-10 | Hoffmann-La Roche Inc. | Growth hormone releasing factor analogs |
| EP0189673B1 (en) * | 1984-12-24 | 1990-09-26 | Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited | Stable growth hormone releasing factor preparation |
| US4734399A (en) * | 1985-08-06 | 1988-03-29 | Hoffmann-La Roche Inc. | Growth hormone releasing factor analogs |
| US4880778A (en) * | 1986-05-12 | 1989-11-14 | Eastman Kodak Company | Combinations having synergistic growth hormone releasing activity and methods for use thereof |
| FR2599038B1 (fr) * | 1986-05-26 | 1990-06-29 | Sanofi Sa | Procede de preparation de nonacosapeptides et peptides intermediaires |
| IL84758A (en) * | 1987-01-13 | 1992-03-29 | Salk Inst For Biological Studi | Peptides stimulating the release of pituitary growth hormone in fish and amphibians,and pharmaceutical compositions containing them |
| US4839344A (en) * | 1987-06-12 | 1989-06-13 | Eastman Kodak Company | Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity |
| US4801456A (en) * | 1987-07-09 | 1989-01-31 | International Minerals & Chemical Corp. | Growth hormone-releasing factor analogs |
| USRE33699E (en) * | 1987-07-09 | 1991-09-24 | International Minerals & Chemical Corp. | Growth hormone-releasing factor analogs |
| US4880777A (en) * | 1987-09-01 | 1989-11-14 | Eastman Kodak Company | Synthetic peptides having growth hormone releasing activity |
| AU637316B2 (en) * | 1988-01-28 | 1993-05-27 | Eastman Kodak Company | Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity |
| US5043322A (en) * | 1988-07-22 | 1991-08-27 | The Salk Institute For Biological Studies | Cyclic GRF analogs |
| US5153175A (en) * | 1989-05-25 | 1992-10-06 | University Of Tennesee Research Corporation | Method of inducing sleep with GHRH complementary peptide compositions |
| US5756458A (en) * | 1989-06-16 | 1998-05-26 | Pharmacia & Upjohn Company | Stabilized potent GRF analogs |
| CA2085362A1 (en) * | 1990-06-29 | 1991-12-30 | Arthur M. Felix | Histidine substituted growth hormone releasing factor analogs |
| DK0490249T3 (da) * | 1990-12-10 | 1995-05-29 | Hoffmann La Roche | Fremgangsmåde til enzymatisk fremstilling af GRF(1-44)-NH2 |
| CA2084061A1 (en) * | 1991-04-09 | 1992-10-10 | Arthur M. Felix | Growth hormone releasing factor analogs |
| US5246920A (en) * | 1992-06-15 | 1993-09-21 | University Of South Florida | Treatment of hyperprolactinemia |
| US5811074A (en) * | 1992-06-29 | 1998-09-22 | University Of South Florida | Method of diagnosing pituitary dependent growth hormone deficiency |
| US5631225A (en) * | 1994-10-13 | 1997-05-20 | Novo Nordisk A/S | Pharmaceutical formulation |
| EP0880969A1 (en) * | 1997-05-28 | 1998-12-02 | Applied Research Systems ARS Holdings N.V. | Pharmaceutical compositions of peptides having low solubility in physiological medium |
| EP0922446A1 (en) * | 1997-12-03 | 1999-06-16 | Applied Research Systems Ars Holding N.V. | Solution-phase site-specific preparation of GRF-PEG conjugates |
| EP1355941A2 (en) * | 2001-02-02 | 2003-10-29 | ConjuChem, Inc. | Long lasting growth hormone releasing factor derivatives |
| JP2006504694A (ja) * | 2002-09-18 | 2006-02-09 | サントル・オスピタリエ・ドゥ・リュニヴェルシテ・ドゥ・モントリオール・（シー・エイチ・ユー・エム） | Ｇｈｒｈ類似体 |
| US20090088380A1 (en) * | 2007-07-12 | 2009-04-02 | Pierrette Gaudreau | Ghrh analogs and therapeutic uses thereof |
| CN107936090B (zh) * | 2017-12-08 | 2021-09-24 | 陕西慧康生物科技有限责任公司 | 一种低成本合成ARK-Cu的方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3904753A (en) * | 1970-02-20 | 1975-09-09 | Research Corp | Clinically active bovine growth hormone fraction |
| US3664925A (en) * | 1970-02-20 | 1972-05-23 | Martin Sonenberg | Clinically active bovine growth hormone fraction |
| US3853833A (en) * | 1971-04-27 | 1974-12-10 | Hormone Res Foundation | Synthetic human growth-promoting and lactogenic hormones and method of producing same |
| US4056520A (en) * | 1972-03-31 | 1977-11-01 | Research Corporation | Clinically active bovine growth hormone fraction |
| PH14681A (en) * | 1977-11-30 | 1981-11-10 | Pfizer | Phenylglycinamides useful in the treatment of ischaemic heart disease |
-
1982
- 1982-10-04 US US06/432,663 patent/US4563352A/en not_active Expired - Lifetime
-
1983
- 1983-09-26 NZ NZ205745A patent/NZ205745A/en unknown
- 1983-09-27 ZA ZA837208A patent/ZA837208B/xx unknown
- 1983-10-03 AU AU21269/83A patent/AU566180B2/en not_active Expired
- 1983-10-03 HU HU8497A patent/HU191263B/hu unknown
- 1983-10-03 PH PH29648A patent/PH20333A/en unknown
- 1983-10-03 ES ES526201A patent/ES8606399A1/es not_active Expired
- 1983-10-03 WO PCT/US1983/001564 patent/WO1984001379A1/en active IP Right Grant
- 1983-10-03 GR GR72605A patent/GR79698B/el unknown
- 1983-10-03 JP JP83503459A patent/JPS59501951A/ja active Pending
- 1983-10-03 IE IE2333/83A patent/IE56175B1/en not_active IP Right Cessation
- 1983-10-04 AT AT83306008T patent/ATE24919T1/de not_active IP Right Cessation
- 1983-10-04 DE DE8383306008T patent/DE3369144D1/de not_active Expired
- 1983-10-04 CA CA000438354A patent/CA1243016A/en not_active Expired
- 1983-10-04 IL IL69897A patent/IL69897A/xx not_active IP Right Cessation
- 1983-10-04 YU YU200083A patent/YU45575B/sh unknown
- 1983-10-04 EP EP83306008A patent/EP0105759B1/en not_active Expired
- 1983-10-04 PT PT77453A patent/PT77453B/pt not_active IP Right Cessation
- 1983-10-04 MX MX831019U patent/MX7701E/es unknown
- 1983-10-26 KR KR1019830005067A patent/KR900006712B1/ko not_active IP Right Cessation
-
1984
- 1984-05-30 NO NO84842148A patent/NO167866C/no not_active IP Right Cessation
- 1984-05-30 DK DK269284A patent/DK269284D0/da not_active Application Discontinuation
- 1984-05-30 FI FI842166A patent/FI83660C/fi not_active IP Right Cessation
- 1984-06-01 SU SU843750475A patent/SU1426455A3/ru active
- 1984-06-01 RO RO114739A patent/RO91186B/ro unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI88402C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara grf-analoger | |
| CA1243016A (en) | Human grf peptide analogs | |
| FI92210B (fi) | Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisten GRF-analogien valmistamiseksi | |
| US4529595A (en) | GRF Analogs | |
| FI87080C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av grf-analoger | |
| HU206126B (en) | Process for producing growth hormone releasing factor derivatives | |
| US4610976A (en) | Porcine GRF | |
| US4585756A (en) | Bovine GRF | |
| KR0138907B1 (ko) | 합성 펩티드 | |
| HU199508B (en) | Process for producing grf analogues and pharmaceutical compositions comprising same as active ingredient | |
| US4605643A (en) | Ovine GRF | |
| FI89499C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbar peptid | |
| US4703035A (en) | Human pancreatic GRF amidated fragments | |
| IE53488B1 (en) | Crf and analogues | |
| EP0107890B1 (en) | Mammalian pgrf | |
| CS276972B6 (en) | Peptides, process of their preparation and pharmaceutical containing thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HU90 | Patent valid on 900628 |