HRP980143A2

HRP980143A2 - 4,4-disubstituted-3,4-dihydro-2 (1h)-quinazolinones useful as hiv reverse transcriptase inhibitors

Info

Publication number: HRP980143A2
Application number: HR60/071,322A
Authority: HR
Inventors: Soo Sung Ko
Original assignee: Soo Sung Ko
Priority date: 1997-04-09
Filing date: 1998-03-19
Publication date: 1999-02-28
Also published as: JP2002504095A; EA001991B1; AR012340A1; CA2284996A1; HUP0001446A2; BR9808513A; CN1252063A; NO994904L; HUP0001446A3; KR20010006146A; WO1998045276A2; WO1998045276A3; AU734928B2; EA199900907A1; PL336305A1; IL132188A0; EP0973753A2; SK137899A3; EE9900452A; TW587078B

Description

Područje tehnike

Ovaj se izum odnosi na 4,4-disupstituirane 3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinone koji su korisni kao inhibitori obrnute transkriptaze HIV-a, na farmaceutske pripravke i dijagnostičke kitove koji ih sadrže, na postupke njihove uporabe pri liječenju virusne infekcije ili kao standarda ili reagensa za testove, te na međuspojeve i postupke za njihovo dobivanje.

Stanje tehnike

Dva različita retrovirusa, virus ljudske imunodeficijencije (HIV) tip 1 (HIV-1) i tip 2 (HIV-2) etiološki su vezani za imunosupresijsku bolest koja se naziva stečeni sindrom imunodeficijencije (AIDS). Osobe seropozitivne na HIV na početku su asimptomatske, no vremenom redovito razvijaju kompleks pridružen AIDS-u (ARC, AIDS-related complex), a nakon njega AIDS. Oboljele osobe pate od jake imunosupresije koja ih čini podložnima iscrpljujućim i redovito smrtonosnim oportunističkim infekcijama.

Bolest AIDS je krajnji ishod HIV-1 ili HIV-2 virusa koji je prošao kroz svoj složeni životni ciklus. Životni ciklus viriona počinje njegovim pričvršćivanjem za imunosnu stanicu domaćina, ljudski T-4 limfocit, pomoću vezanja glikoproteina na površini zaštitnog omotača viriona na CD4 glikoprotein limfocita. Nakon pričvršćivanja, virion odbacuje svoj glikoproteinski omotač, prodire kroz stanice domaćina i oslobađa svoju RNK. Enzim viriona, obrnuta transkriptaza, upravlja procesom prepisivanja RNK u jednolančanu DNK. Virusna RNK se razgrađuje i nastaje drugi lanac DNK. DNK, koja je sada dvolančana, ugrađuje se u genom ljudske stanice i ti se geni koriste za umnožavanje virusa.

U ovom stadiju RNK polimeraza prepisuje integriranu DNK u virusnu RNK. Virusna RNK se prevodi u prekursorski fuzijski protein gag-pol. Poliprotein se potom kida, pomoću enzima HIV proteaze, čime se oslobađaju zreli virusni proteini. Prema tome, HIV proteaza je odgovorna za reguliranje kaskade kidanja koja dovodi do sazrijevanja virusnih čestica u virus sa punom infektivnošću.

Tipični odgovor ljudskog imunosnog sustava, uništavanje napadačkog viriona, otežano je stoga što virus inficira i ubija T stanice koje su dio tog istog imunosnog sustava. Pored toga, virusna obrnuta transkriptaza, enzim koji sudjeluje u stvaranju nove čestice viriona, nije jako specifičan, pa dovodi do grešaka u prepisivanju koje imaju za posljedicu trajne promjene glikoproteina na površini zaštitnog omotača virusa. Ova odsutnost specifičnosti smanjuje učinkovitost imunosnog sustava, zato što protutijela specifično proizvedena protiv jednog glikoproteina mogu biti beskorisna protiv drugog, što smanjuje broj protutijela koja se bore protiv virusa. Virus se nastavlja umnožavati, uz istodobno slabljenje odgovora imunosnog sustava. Konačno, virus premoćno nadvladava imunosni sustav tijela, omogućujući razvoj opotunističkih infekcija koje, ako se ne liječe primjenom protuvirusnih sredstava, imunomodulatora ili s obje ove vrste lijekova, mogu završiti smrću.

Postoje barem tri kritične točke u životnom ciklusu virusa koje su određene kao mogući ciljevi protuvirusnih lijekova: (1) početno pričvršćivanje viriona na mjesto na T-4 limfocitu ili makrofagu, (2) prepisivanje virusne RNK u virusnu DNK (obrnuta transkriptaza, RT), i (3) procesiranje gag-pol proteina pomoću HIV proteaze.

Inhibicija virusa na drugoj kritičnoj točki, tijekom postupka prepisivanja virusne RNK u virusnu DNK, temelj je brojnih postupaka kojima se danas liječi AIDS. Ovo je prepisivanje uvjet umnažanja viriona zato što su geni viriona kodirani u RNK, a stanice domaćina mogu čitati samo DNK. Uvođenjem lijekova koji sprečavaju djelovanje obrnute transkriptaze u sastavljanju virusne DNK, može se zaustaviti replikacija virusa HIV-1.

Brojni spojevi koji ometaju replikaciju virusa razvijeni su u svrhu liječenja AIDS-a. Na primjer, analozi nukleozida, kao što su 3'-azido-3'-deoksitimidin (AZT), 2I,3'-dideoksicitidin (ddC), 2',3'-dideoksitimidinen (d4T), 2',3'-dideoksiinozin (ddl) i 2',3'-dideoksi-3'-tiacitidin (3TC) navode se kao relativno učinkoviti u zaustavljanju replikacije HlV-a u stadiju obrnute transkriptaze (RT).

Područje istraživanja s velikom aktivnošću je otkrivanje nenukleozidnih inhibitora obrnute transkriptaze HIV-a. Primjera radi, nađeno je da su neki benzoksazinoni i kvinazolinoni djelatni u inhibiranju obrnute transkriptaze HIV-a, sprečavanju ili liječenju infekcije HIV-om, te u liječenju AIDS-a.

SAD 5519021 opisuje inhibitore obrnute transkriptaze koji su benzoksazinoni formule:

[image]

pri čemu je X halogen, a Z može biti O.

EP 0530994 i WO 93/04047 opisuju inhibitore obrnute transkriptaze koji su kvinazolinoni formule A:

[image]

pri čemu G predstavlja različite skupine, R3 i R4 mogu biti H, Z može biti O, R2 može biti nesupstituirani alkil, nesupstituirani alkenil, nesupstituirani alkinil, nesupstituirani cikloalkil, nesupstituirani heterocikl i po želji supstituirani aril, a R1 mogu biti različite skupine uključujući supstituirani alkil.

WO 95/12583 također opisuje inhibitore obrnute transkriptaze HIV-a formule A. U ovom dokumentu, G su različite skupine, R3 i R4 mogu biti H, Z može biti O, R2 je supstituirani alkenil ili supstituirani alkinil, a R1 je cikloalkil, alkinil, alkenil ili cijano. WO 95/13273 prikazuje nesimetričnu sintezu jednog od spojeva iz WO 95/12583, i to (S)-(-)-6-kloro-4-ciklopropil-3,4-dihidro-4((2-piridi)etinil)-2(1H)-kvinazolinona.

Sintetički postupci dobivanja kvinazolinona, kao što su gore opisani, potanko su opisani u slijedećim referencama: Houpis i sur., Tetr. Leti. 1994, 35(37), 6811-6814; Tucker i sur., J. Med. Chem. 1994, 37, 2437-2444; i Huffman i sur, J. Org. Chem. 1995, 60, 1590-1594.

DE 4320347 prikazuje kvinazolinone čija je formula:

[image]

pri čemu je R fenil, karbociklički prsten ili heterociklički prsten. Spojevi ove vrste ne pripadaju ovom izumu.

Unatoč posljednjim uspjesima inhibitora obrnute transkriptaze, nađeno je da bolesnici koji nose HIV mogu postati otporni na pojedini inhibitor. Stoga je poželjno razvijati nove inhibitore za borbu protiv infekcije HIV-om.

Izlaganje biti izuma

Shodno izloženom, jedan predmet ovog izuma su novi inhibitori obrnute transkriptaze.

Slijedeći predmet ovog izuma je novi postupak za liječenje HIV infekcije, koji obuhvaća primjenu na domaćina, kojem je takvo liječenje potrebno, terapijski učinkovite količine najmanje jednog od spojeva ovog izuma ili njegove farmaceutski prikladne soli.

Slijedeći predmet ovog izuma je novi postupak liječenja HIV infekcije, koji obuhvaća primjenu na domaćina, kojem je takvo liječenje potrebno, terapijski učinkovite kombinacije (a) jednog od spojeva ovog izuma i (b) jednog ili više spojeva odabranih iz skupine koja se sastoji od inhibitora obrnute transkriptaze HIV-a i inhibitora proteaze HIV-a.

Slijedeći predmet ovog izuma su farmaceutski pripravci koji imaju inhibirajuće djelovanje na obrnutu transkriptazu, a sadrže farmaceutski prikladan nosač i terapijski učinkovitu količinu najmanje jednog od spojeva ovog izuma ili njegove farmaceutski prikladne soli.

Slijedeći predmet ovog izuma je postupak inhibiranja HIV-a nazočnog u uzorku tjelesne tekućine, koji obuhvaća izlaganje uzorka tjelesne tekućine učinkovitoj količini spoja ovog izuma.

Slijedeći predmet ovog izuma je kit ili spremnik, koji sadrži najmanje jedan od spojeva ovog izuma u količini koja je učinkovita za uporabu u ulozi standarda ili reagensa za test kojim se ispituje sposobnost potencijalnog lijeka da inhibira obrnutu transkriptazu HIV-a, rast HIV-a ili oboje.

Ovi i drugi predmeti, koji će postati vidljivi tijekom slijedećeg potankog opisa, postignuti su otkrićem autora ovog izuma da su spojevi formule (I):

[image]

gdje su R1, R2, R3 i R8 određeni u daljnjem izlaganju, njihovi steroizomerički oblici, smjese stereoizomeričkih oblika, kao i njihove farmaceutski prikladne soli, učinkoviti inhibitori obrnute transkriptaze HIV-a.

Detaljan opis preporučenih oblika

[1] Prema ovome, u svojem prvom obliku ovaj izum opisuje novi spoj formule I:

[image]

ili njegov stereoizomer, ili njegovu farmaceutski prikladnu sol, pri čemu:

R1 je C1-3 alkil supstituiran s 1-7 halogena;

R2 je odabran između C1-5 alkil supstituiran s 1-2 R4, C2-5 alkenil supstituiran s 1-2 R4 i C2-5 alkinil supstituiran s 1 R4;

R3 je, pri svakoj pojavi, neovisno odabran između C1-4 alkil, OH, C1-4 alkoksi, F, Cl, Br, I, NR5R5a, NO2, CN, C(O)R6, NHC(O)R7 i NHC(O)NR5R5a;

alternativno, ako su nazočna dva R3 vezana na susjedne atome ugljika, mogu se kombinirati i tvoriti -OCH2O-;

R4 je odabran između: C3-5 cikloalkil supstituiran s 0-2 R3, fenil supstituiran s 0-5 R3 i 5-6-eročlani heterociklički sustav koji sadrži 1-3 heteroatoma odabranih između O, N i S, supstituiran s 0-2 R3;

R5 i R5a su neovisno odabrani između H i C1-3 alkil;

R6 je odabran između H, OH, C1-4 alkil, C1-4 alkoksi i NR5R5a;

R7 je odabran između C1-3 alkil i C1-3 alkoksi;

R8 je odabran između H, C3-5 cikloalkil i C1-3 alkil, a

n je odabran između 0, 1, 2, 3 i 4.

[2] U preporučenom obliku, ovaj izum opisuje novi spoj formule I, u kojem:

R1 je C1-3 alkil supstituiran s 1-7 halogena;

R2 je odabran između C1-5 alkil supstituiran s 1 R4, C2-5 alkenil supstituiran s 1 R4 i C2-5 alkinil supstituiran s 1 R4;

R4 je odabran između: C3-5 cikloalkil supstituiran s 0-2 R3, fenil supstituiran s 0-2 R3 i 5-6-eročlani heterociklički sustav koji sadrži 1-3 heteroatoma odabranih između O, N i S, supstituiran s 0-1 R3;

R5 i R5a su neovisno odabrani između H, CH3 i C2H5;

R6 je odabran između H, OH, CH3, C2H5, OCH3, OC2H5 i NR5R5a;

R7 je odabran između CH3, C2H5, OCH3 i OC2H5;

R8 je odabran između H, ciklopropil, CH3 i C2H5; a

n je odabran između 0, 1, 2 i 3.

[3] U više preporučenom obliku, ovaj izum opisuje novi spoj formule I, u kojem:

R1 je odabran između CF3 i C2F5;

R2 je odabran između C1-3 alkil supstituiran s 1 R4, C2-3 alkenil supstituiran s 1 R4 i C2-3 alkinil supstituiran s 1 R4;

R3 je, pri svakoj pojavi, neovisno odabran između C1-3 alkil, OH, C1-3 alkoksi, F, Cl, Br, I, NR5R5a, NO2, CN, C(O)R6, NHC(O)R7 i NHC(O)NR5R5a;

R4 je odabran između: C3-5 cikloalkil supstituiran s 0-2 R3, fenil supstituiran s 0-2

R3 i 5-6-eročlani heterociklički sustav koji sadrži 1-3 heteroatoma odabranih između O, N i S, supstituiran s 0-1 R3;

R5 i R5a su neovisno odabrani između H, CH3 i C2H5;

R6 je odabran između H, OH, CH3, C2H5, OCH3, OC2H5 i NR5R5a;

R7 je odabran između CH3, C2H5, OCH3 i OC2H5;

R8 je odabran između H, CH3 i C2H5; a

n je odabran između 0, 1 i 2.

[4] U još više preporučenom obliku, ovaj izum opisuje novi spoj formule I, u kojem:

R1 je CF3;

R3 je, pri svakoj pojavi, neovisno odabran između C1-3 alkil, OH, C1-3 alkoksi, F, Cl, NR5R5a, NO2, CN, C(O)R6, NHC(O)R7 i NHC(O)NR5R5a;

R4 je odabran između: ciklopropil supstituiran s 0-1 R3, fenil supstituiran s 0-2

R3 i 5-6-eročlani heterociklički sustav koji sadrži 1-3 heteroatoma odabranih između O, N i S, supstituiran s 0-1 R3, pri čemu je heterociklički sustav odabran između: 2-piridil, 3-piridil, 4-piridil, 2-furanil, 3-furanil, 2-tienil, 3-tienil,2-oksazolil, 2-tiazolil, 4-izoksazolil i 2-imidazolil;

R5 i R5a su neovisno odabrani između H, CH3 i C2H5;

R6 je odabran između H, OH, CH3, C2H5, OCH3, OC2H5 i NR5R5a;

R7 je odabran između CH3, C2H5, OCH3 i OC2H5;

R8 je odabran između H, CH3 i C2H5; a

n je odabran između 1 i 2.

[5] U slijedećem preporučenom obliku, spoj ima formulu Ia

[image]

[6] U slijedećem preporučenom obliku, spoj ima formulu Ib:

[image]

[7] U slijedećem preporučenom obliku, spoj formule I je odabran između:

(+/-)-6-kloro-4-ciklopropiletinil-4-trifluorometM-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(+/-)-6-kloro-4-(2-piridil) etinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(+/-)-6-kloro-4-feniletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(+/-)-4-ciklopropiletinil-6-metoksi-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(+/-)-6-metoksi-4-(2-piridil)etinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(+/-)-6-metoksi-4-feniletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(+/-)-4-ciklopropiletinil-5,6-difluoro-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(+/-)-5,6-difluoro-4-(2-piridil)etinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(+/-)-5,6-difluoro-4-feniletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(+/-)-4-ciklopropiletinil-6-fluoro-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(+/-)-6-fluoro-4-(2-piridil)etinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(+/-)-6-fluoro-4-feniletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(+/-)-6-fluoro-4-(2'-2-piridil)etil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(+/-)-6-fluoro-4-feniletil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(-)-6-kloro-4-ciklopropiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(+)-6-kloro-4-ciklopropiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(+)-4-ciklopropiletinil-5,6-difluoro-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(-)-4-ciklopropiletinil-5,6-difluoro-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(+)-4-E-ciklopropiletenil-5,6-difluoro-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon i

(-)-6-kloro-4-E-ciklopropiletenil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

ili njihove farmaceutski prikladne soli.

[8] U drugom obliku, ovaj izum opisuje novi spoj formule II:

[image]

ili njegov stereoizomer, ili njegovu farmaceutski prikladnu sol, pri čemu:

R2 je C≡C-R4a;

R3 je odabran između C1-4 alkil, OH, C1-4 alkoksi, F, Cl, Br, I, NR5R5a, NO2, CN, C(O)R6, NHC(O)R7 i NHC(O)NR5R5a;

R4a je odabran između metil, etil, n-propil, i-propil, i-butil, t-butil i i-pentil;

R5 i R5a su neovisno odabrani između H i C1-3 alkil;

R6 je odabran između H, OH, C1-4 alkil, C1-4 alkoksi i NR5R5a;

R7 je odabran između C1-3 alkil i C1-3 alkoksi;

R8 je odabran između H, C3-5 cikloalkil i C1-3 alkil, a

n je odabran između 0, 1, 2, 3 i 4.

[9] U slijedećem preporučenom obliku, ovaj izum opisuje novi spoj formule II, u kojem:

R2 je C≡C-R4a;

R3 je odabran između C1-4 alkil, OH, C1-4 alkoksi, F, Cl, Br, I, NR5R5a, NO2, CN, C(O)R6 i NHC(O)R7;

R5 i R5a su neovisno odabrani između H, CH3 i C2H5;

R6 je odabran između H, OH, CH3, C2H5, OCH3, OC2H5 i NR5R5a;

R7 je odabran između CH3, C2H5, OCH3 i OC2H5;

R8 je odabran između H, ciklopropil, CH3 i C2H5; a

n je odabran između 0, 1 i 2.

[10] U slijedećem preporučenom obliku, formula spoja je IIa:

[image]

[11] U slijedećem preporučenom obliku, formula spoja je IIb:

[image]

[12] U slijedećem, još više preporučenom obliku, spoj formule II je odabran između:

(+/-)-6-kloro-4-izopropiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(+/-)-6-kloro-4-etiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(+/-)-4-izopropiletinil-6-metoksi-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(+/-)-5,6-difluoro-4-izopropiletinM-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(+/-)-5,6-difluoro-4-etiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(+/-)-5,6-difluoro-4-izopentil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(+/-)-6-fluoro-4-izopropiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(+/-)-6-fluoro-4-etiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(-)-5,6-difluoro-4-izopropiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(+)-5,6-difluoro-4-izopropiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon;

(-)-5,6-difluoro-4-etiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon i

(+)-5,6-difluoro-4-etiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon; ili njihove farmaceutski prikladne soli.

U trećem obliku, ovaj izum opisuje nove farmaceutske pripravke koji sadrže farmaceutski prikladan nosač i terapijski učinkovitu količinu spoja formule I ili II, ili njihove farmaceutski prikladne soli.

U četvrtom obliku, ovaj izum opisuje novi postupak za liječenje HIV infekcije, koji obuhvaća primjenu na domaćina, kojem je takvo liječenje potrebno, terapijski učinkovite količine spoja formule I ili II, ili njihove farmaceutski prikladne soli.

U petom obliku, ovaj izum opisuje novi postupak za liječenje HIV infekcije, koji obuhvaća kombiniranu primjenu na domaćina, kojem je takvo liječenje potrebno, terapijski učinkovite količine:

(a) spoja formule l ili II; i

(b) najmanje jednog spoja odabranog iz skupine koja se sastoji od inhibitora obrnute transkriptaze HIV-a i inhibitora proteaze HIV-a.

U slijedećem preporučenom obliku, inhibitor obrnute transkriptaze odabran je između AZT, 3TC, ddl, ddC, d4T, delavirdina, derivata TIBO, BI-RG-587, nevirapina, L-697661, LY 73497, Ro 18893, lovirida, trovirdina, MKC-442 i HBY 097, a inhibitor proteaze je odabran između sangvinavira, ritonavira, indinavira, VX-478, nelfinavira, KNI-272, CGP-61755, U-140690 i ABT-378.

U još više preporučenom obliku, inhibitor obrnute transkriptaze je odabran između AZT i 3TC, a inhibitor proteaze je odabran između sangvinavira, ritonavira, nelfinavira i indinavira.

U daljnjem preporučenom obliku, inhibitor obrnute transkriptaze je AZT.

U daljnjem preporučenom obliku, inhibitor proteaze je indinavir.

U šestom obliku, ovaj izum opisuje farmaceutski kit koristan za liječenje HIV infekcije, koji sadrži terapijski učinkovitu količinu:

(a) spoja formule I ili II; i

(b) najmanje jednog spoja odabrabog iz skupine koja se sastoji od inhibitora obrnute transkriptaze HIV-a i inhibitora proteaze HIV-a, u jednom ili više sterilnih spremnika.

U sedmom obliku, ovaj izum opisuje novi postupak inhibiranja HIV-a nazočnog u uzorku tjelesne tekućine, koji obuhvaća izlaganje uzorka tjelesne tekućine učinkovitoj količini spoja fomule I ili II.

U osmom obliku, ovaj izum opisuje novi kit ili spremnik, koji sadrži spoj formule I ili II u količini koja je učinkovita za uporabu u ulozi standarda ili reagensa za test kojim se ispituje sposobnost potencijalnog lijeka da inhibira obrnutu transkriptazu HIV-a, rast HIV-a ili oboje.

DEFINICIJE

U značenju u kojem se ovdje koriste, slijedeći termini i izrazi imaju navedena značenja. Uvidjet će se kako spojevi ovog izuma sadrže nesimetrično supstituiran atom ugljika i mogu se izolirati u optički aktivnim ili racemičkim oblicima. U struci je dobro poznat način priprave optički aktivnih oblika, kao što je razdvajanje racemičkih oblika ili sintezom, od optički aktivnih početnih tvari. Uključeni su svi kiralni, dijastereomerički, racemički oblici, kao i svi geometrijski izomerički oblici strukture, osim ako je posebno naglašena određena stereokemija ili izomerički oblik.

Predviđeno je da se postupci ovog izuma provode u najmanje višegramskom redu veličine, kilogramskom, višekilogramskom ili industrijskom redu veličine. Višegramski red veličine, u značenju u kojem se ovdje koristi, preporučljivo je onaj red veličine u kojem je najmanje jedna početna tvar nazočna u količini od 10 grama ili više, bolje 50 grama ili više, još bolje 100 grama ili više. Višekilogramski red veličine, u značenju u kojem se ovdje koristi, označuje onaj red veličine u u kojem se koristi više od jednog kilograma najmanje jedne početne tvari. Industrijski red veličine, u značenju u kojem se ovdje koristi, označuje red veličine različit od laboratorijskog reda veličine, kojim se proizvod dobiva u količinama dostatnim bilo za klinička ispitivanja, bilo za snabdijevanje potrošača.

U značenju u kojem se ovdje koristi, izraz "alkil" uključuje i razgranate i nerazgranate zasićene alifatske ugljikovodične skupine koje imaju određen broj ugljikovih atoma. Primjeri za alkil uključuju, ali nisu ograničeni na: metil, etil, n-propil, i-propil, n-butil, s-butil, t-butil, n-pentil i s-pentil. "Haloalkil" uključuje i razgranate i nerazgranate zasićene alifatske ugljikovodične skupine koje imaju određen broj ugljikovih atoma, a supstituirane su s jednim ili više halogena (na primjer, -CVFW, gdje je v=1 do 3 i w=1 do (2v + 1)). Primjeri za haloalkil uključuju, ali nisu ograničeni na: trifluorometil, triklorometil, pentafluoroetil i pentakloroetil. "Alkoksi" predstavlja alkilnu skupinu, kao što je gore definirana, s određenim brojem ugljikovih atoma povezanih preko kisikovog mosta. Primjeri za alkoksi uključuju, ali nisu ograničeni na: metoksi, etoksi, n-propoksi, i-propoksi, n-butoksi, s-butoksi, t-butoksi, n-pentoksi i s-pentoksi. "Cikloalkil" uključuje zasićene prstenaste skupine, kao što su ciklopropil, ciklobutil ili ciklopentil. "Alkenil" uključuje ugljikovodične lance bilo nerazgranate bilo razgranate konfiguracije s jednom ili više nezasićenih ugljik-ugljik veza koje mogu biti smještene na bilo kojem stabilnom dijelu lanca, a primjeri su etenil, propenil i slični. "Alkinil" uključuje ugljikovodične lance bilo nerazgranate bilo razgranate konfiguracije s jednom ili više trostrukih ugljik-ugljik veza koje mogu biti smještene na bilo kojem stabilnom dijelu lanca, a primjeri su etinil, propinil i slično.

"Halo" ili "halogen" odnosi se na fluoro, kloro, bromo i jodo. "Protuion" je izraz koji se koristi da bi se opisala mala, negativno nabijena čestica kao što je klorid, bromid, hidroksid, acetat, sulfat i slično.

Izraz "aril" ili "aromatski ostatak" korišten je za označavanje aromatskog dijela koji sadrži određen broj ugljikovih atoma, kao što su fenil ili naftil. U značenju u kojem se ovdje koristi, "karbocikl" ili "karbociklički ostatak" znači bilo koji stabilni 3- do 5-eročlani monociklički prsten, koji može biti zasićen ili djelomično nezasićen. Primjeri ovakvih karbocikla uključuju, bez ograničenja, ciklopropil, ciklopentil, cikloheksil, fenil, bifenil, naftil, indanil, adamantil ili tetrahidronaftil (tetralin).

U značenju u kojem se ovdje koristi, izraz "heterocikl" ili "heterociklički sustav" označuje stabilni 5- do 6-eročlani monociklički heterociklički prsten koji je zasićen, djelomično nezasićen ili nezasićen (aromatski), a sastoji se od ugljikovih atoma i od 1 do 3 heteroatoma neovisno odabranih iz skupine koja se sastoji od N, O i S. Heteroatomi dušika i sumpora mogu po želji biti oksidirani. Heterociklički prsten može biti povezan sa svojom visećom skupinom bilo kojim heteroatomom ili atomom ugljika, uz uvjet da se postigne stabilna struktura. Ovdje opisani heterociklički prsteni mogu na dušikovom ili ugljikovom atomu biti supstituirani, uz uvjet stabilnosti tako nastalog spoja. Ako je posebno naznačeno, dušik u heterociklu može po želji biti kvaterniziran. Preporučuje se da, u slučaju kada ukupan broj S i O atoma u heterociklu prelazi 1, ovi heteroatomi ne budu smješteni na susjednim položajima. Preporučuje se da ukupan broj S i O atoma u heterociklu ne bude veći od 1. U značenju u kojem se ovdje koristi, izraz "aromatski heterociklički sustav" označuje stabilni 5-do 6-eročlani monociklički heterociklički aromatski prsten koji se sastoji od ugljikovih atoma i 1 do 3 heteroatoma, neovisno odabranih iz skupine koja se sastoji od N, O i S. Preporučuje se da ukupni broj S i O atoma u aromatskom heterociklu ne bude veći od 1.

Primjeri takvih heterocikla uključuju, bez ograničenja, 2-pirolidonil, 2H-pirolil, 4-piperidonil, 6H-1,2,5-tiadiazinil, 2H,6H-1,5,2-ditiazinil, furanil, furazanil, imidazolidinil, imidazolinil, imidazolil, izoksazolil, morfolinil, oksadiazolil, 1,2,3-oksadiazolil, 1,2,4-oksadiazolil, 1,2,5-oksadiazolil, 1,3,4-oksadiazolil, oksazolidinil, oksazolil, piperazinil, piperidinil, pteridinil, piperidonil, 4-piperidonil, pteridinil, purinil, piranil, pirazinil, pirazolidinil, pirazolinil, pirazoiil, piridazinil, piridinil, piridil, pirimidinil, pirolidinil, pirolinil, pirolil, tetrahidrofuranil, 6H-1,2,5-tiadiazinil, 1,2,3-tiadiazolil, 1,2,4-tiadiazolil, 1,2,5-tiadiazolil, 1,3,4-tiadiazolil, tiazolil, tienil, tienotiazolil, tienooksazolil, tienoimidazolil, tiofenil, triazinil, 1,2,3-triazolil, 1,2,4-triazolil, 1,2,5-triazolil i 1,3,4-triazolil. Heterocikli koji se preporučuju uključuju, ali nisu ograničeni na, piridinil, furanil, tienil, pirolil, pirazoiil, imidazolil i oksazolidinil. Također su uključeni stopljeni prsteni i spiro spojevi koji sadrže, na primjer, gornje heterocikle.

U značenju u kojem se ovdje primjenjuje, "inhibitor obrnute transkriptaze HIV-a" odnosi se na nukleozidne i nenukleozidne inhibitore obrnute transkriptaze (RT) HIV-a. Primjeri nukleozidnih inhibitora RT uključuju, ali nisu ograničeni na, AZT, ddC, ddl, d4T i 3TC. Primjeri nenukleozidnih inhibitora RT uključuju, ali nisu ograničeni na, delavirdin (Pharmacia i Upjohn U90152S), derivate TIBO, BI-RG-587, nevirapin (Boehringer Ingelheim), L-697661, LY 734497, Ro 18893 (Roche), lovirid (Janssen), trovirdin (Lilly), MKC-442 (Triangle) i HBY 097 (Hoechst).

U značenju u kojem se ovdje koristi, "inhibitor proteaze HIV-a" odnosi se na spojeve koji inhibiraju proteazu HIV-a. Primjeri uključuju, ali nisu ograničeni na, sakvinavir (Roche, Ro31-8959), ritonavir (Abbott, ABT-538), indinavir (Merck, MK-639), VX-478 (Vertex/Glaxo VVellcome), nelfinavir (Agouron, AG-1343), KNI-272 (Japan Energy), CGP-61755 (Ciba-Geigy), U-140690 (Pharmacia i Upjohn) i ABT-378. Dodatni primjeri uključuju cikličke inhibitore proteaze opisane u WO 93/07128, WO 94/19329, WO 94/22840 i PCT prijava br. SAD 96/03426.

Izraz "farmaceutski prikladne soli" odnosi se na derivate opisanih spojeva, pri čemu je matični spoj izmijenjen stvaranjem njegove kisele ili lužnate soli. Primjeri farmaceutski prikladnih soli uključuju, bez ograničenja, mineralne ili organske kisele soli lužnatih ostataka, kao što su amini; alkali ili organske soli kiselih ostataka, kao što su karboksilne kiseline; i slično. Farmaceutski prihvatljive soli uključuju uobičajene neotrovne soli kvaternarnih amonijevih soli matičnog spoja, oblikovane, na primjer, od neotrovnih neorganskih ili organskih kiselina. Na primjer, takve uobičajene neotrovne soli uključuju one koje su dobivene od neorganskih kiselina, kao što su klorovodična, bromovodična, sulfatna, sulfamilna, fosfatna, nitratna i druge kiseline; kao i soli pripravljene od organskih kiselina, kao što su octena, propionska, sukcinilna, glikolna, stearinska, mliječna, malična, vinska, limunska, askorbinska, pamoična, maleinska, hidroksimaleinska, feniloctena, glutaminska, benzojeva, salicilna, sulfanilna, 2-acetoksibenzojeva, fumarna, toluensulfonska, metansulfonska, etandisulfonska, oksalna, izetionična i druge kiseline.

Farmaceutski prikladne soli ovog izuma mogu se sintetizirati od matičnih spojeva koji sadrže lužnati ili kiseli dio uobičajenim kemijskim postupcima. Općenito, ove se soli mogu pripraviti reakcijom slobodnih kiselih ili lužnatih oblika ovih spojeva sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće lužine ili baze u vodi ili u organskom otapalu, ili u njihovoj smjesi; općenito, preporučuju se bezvodni mediji kao što je eter, etilacetat, etanol, izopropanol ili acetonitril. Popisi prikladnih soli mogu se naći u Remington's Pharmaceutical Sciences, 17. izd., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1985, p. 1418, koji je ovdje uključen kao referenca.

Izraz "farmaceutski prikladan" koristi se ovdje u opisu onih sastojaka, tvari, spojeva i/ili oblika za doziranje koji su, prema medicinskoj prosudbi, prikladni za uporabu koja uključuje dodir s tkivima ljudi i životinja, bez pretjerane toksičnosti, nadraživanja ili alergijskog odgovora, ili drugih problema ili komplikacija primjene, u skladu s razumnim omjerom koristi i rizika.

"Prolijekovi" uključuju sve kovalentno vezane nosače koji oslobađaju aktivni matični lijek formule (I) ili drugih formula ili spojeva ovog izuma in vivo, kada se taj prolijek primijeni na sisavca. Prolijekovi spoja ovog izuma, na primjer formule (I), pripravljaju se izmjenama funkcijskih skupina koje su nazočne u spoju, tako da se izmijenjeni spojevi kidaju, bilo prilikom rutinskog rukovanja, bilo in vivo, na matični spoj. Prolijekovi uključuju spojeve ovog izuma u kojima je hidroksi ili amino skupina vezana za bilo koju skupinu na taj način da se, kada se prolijek primjenjuje na sisavca, ponovno otcijepi, čime nastaje slobodni hidroksil, odnosno slobodni amino. Primjeri za prolijekove uključuju, ali nisu ograničeni na, acetat, format i benzoatne derivate alkohola i aminskih funkcijskih skupina u spojevima ovog izuma, i slično.

"Stabilni spoj" ili "stabilna struktura" označuje spoj koji je dovoljno postojan da podnese postupak izoliranja iz reakcijske smjese do korisnog stupnja čistoće, te pripravu u učinkovito terapijsko sredstvo. Ovim su izumom obuhvaćeni samo stabilni spojevi.

Izraz "supstituiran" znači da je jedan ili više vodika na određenom atomu, o okjemu se govori kao "supstituiranom", zamijenjeno nekom od određenih spomenutih skupina s time da uobičajena valencija određenog atoma nije prekoračena, te da je spoj dobiven supstitucijom stabilan. Kada je supstituent keto (tj. =O) skupina, zamjenjuju se dva atoma vodika.

"Terapijski učikovita količina" znači količinu spoja ovog izuma ili količinu kombinacije spojeva iz patentnog zahtjeva, koja je učinkovita za inhibiranje infekcije HIV-om, ili za liječenje simptoma infekcije HIV-om u domaćina. Preporučljivo je da kombinacija spojeva bude sinergistička. O sinergiji, koja je opisana na pr. u Chou i Talalay, Adv. Enzyme Regul. 22:27-55 (1984), se govori kada je učinak (u ovom slučaju inhibicija replikacije HIV-a) spojeva primijenjenih u kombinaciji veći od zbroja učinaka spojeva kada bi se primijenili pojedinačno, kao samostalna sredstva. Općenito, sinergistički učinak se najočitije pokazuje pri suboptimalnim koncentracijama spojeva. Sinergija se može zamijetiti kao manja citotoksičnost, veći protuvirusni učinak, ili koji drugi povoljni učinak kombinacije u poredbi s njenim pojedinačnim sastojcima.

SINTEZA

Spojevi ovog izuma mogu se pripraviti na brojne načine koji su poznati stručnjacima na području organske sinteze. Spojevi ovog izuma mogu se sintetizirati na dolje opisane načine, postupcima sinteze poznatima na području sinteze u organskoj kemiji, kao i njihovim varijacijama koje preferiraju pojedini stručnjaci. Preporučeni postupci uključuju, ali nisu ograničeni na, postupke koji su opisani u daljnjem tekstu. Svaka od dolje citiranih referenci ovdje je uključena kao referenca.

[image]

Shema 1 ilustrira postupak priprave keto-anilina iz prikladno supstituirane 2-aminobenzojeve kiseline. Kiselina se prevodi u svoj N-metoksi-N-metil amidni derivat koji se potom može ukloniti, čime se dobije R1-supstituirani keton. Keto-anilini su korisni međuspojevi za spojeve iz ovog patentnog zahtjeva.

[image]

Shema 2 opisuje drugi postupak priprave keto-anilina, ovaj puta od prikladno supstituiranog anilina. Nakon jodiranja i zaštite amina, može se uvesti skupina kao što je trifluorometil, uz pomoć jake baze i etil trifluoroacetata. Deprotekcijom se dobije keto-anilin. Stručnjacima su poznata i druga sredstva priprave keto-anilina, na pr. Houpis i sur., Tetr. Lett. 1994, 35(37), 6811-6814, sadržaj kojeg je ovdje uključen kao referenca.

[image]

Slijedeći postupak priprave 2-trifluoroacetilanilina prikazan je na Shemi 3. Nakon stvaranja zaštićenog anilina, amid se reducira i dodaje se trifluorometilna skupina. Oksidacijom s oksidansom, kao što je MnO2, dobije se koristan međuspoj.

[image]

Uporabom općenitog postupka prikazanog na Shemi 4, moguće je pripraviti spojeve ovog izuma. Keto-anilin 1, koji se može pripraviti postupcima opisanima na Shemama 1 i 2, izlaže se trimetilsilil izocijanatu u suhom tetrahidrofuranu, u nazočnosti dimetilaminopiridina, potom tetrabutilamonij fluorida, čime nastaje hidroksi-ureja 2. Hidroksi-ureja 2 se potom dehidrira pomoću sredstva za dehidriranje, kao što su molekularna sita od 4 A u toluenu ili ksilenima koji su u stanju refluksa, čime se dobije ketimin 3. Supstituirana acetilenska R2 skupina doda se izlaganjem ketimina 3 litij acetilidu, koji se pripravi u drugoj tikvici, reagiranjem odgovarajuće supstituiranog acetilena s n-butillitijem u suhom tetrahidrofuranu, čime se dobije 4,4-disupstituirani 3,4-dihidro-2(1 H)-kvinazolinon 4, spoj formule I. Acetilenska veza spoja 4 može se reducirati, na pr. katalitičkim hidrogeniranjem, čime se dobije odgovarajuća alkenilna skupina (nije prikazano) ili zasićeni spoj 5.

Druge R2 skupine također se mogu uvesti izravnim reagiranjem imina 3 s litijatom R2Li ili Grignardovim reagensom R2MgX, s ili bez Lewisove kiseline kao katalizatora, na pr. BF3 eterata. Vidi također i Huffman i sur., J.Org.Chem. 1995, 60, 1590-1594, čiji je sadržaj ovdje uključen kao referenca.

U nekim slučajevima, jedan enantiomer spoja Formule I ili II može pokazati nadmoćnu aktivnost u poredbi s drugim. Kada je potrebno, razdvajanje racemične tvari može se postići pomoću HPLC, uporabom kiralnog stupca, kao što je opisano u Primjerima 27-34 (Shema 4) ili otapanjem pomoću sredstva za otapanje, poput kamfon-klorida, kao u Thomas J. Tucker i sur., J.Med.Chem. 1994, 37,2437-2444. Kiralni spoj formule I također se može izravno sintetizirati uporabom kiralnog katalizatora ili kiralnog Uganda, na pr. Mark A. Huffman i sur., J.Org.Chem. 1995, 60, 1590-1594.

Druga svojstva izuma postat će jasna tijekom slijedećih opisa oblika koji su izloženi radi primjera i ilustriranja izuma, te ih ne treba shvatiti kao ograničavajuće.

Primjeri

Kratice koje su korištene u Primjerima imaju slijedeća značenja: "°C" je stupanj Celsiusa, "d" je dublet, "dd" je dublet ili dubleti, "eq" je ekvivalent ili ekvivalenti, "g" je gram ili grami, "mg" je miligram ili miligrami, "mL" je milimetar ili milimetri, "H" je vodik ili vodici, "h" je sat ili sati, "m" je multiplet, "M" je molarni, "min." je minuta ili minute, "MHz" je megaherc, "MS" je masena spektroskopija, "nmr" ili "NMR" je nuklearna magnetska rezonantna spektroskopija, "t" je triplet, "TLC" je tankoslojna kromatografija, "EDAC" je 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidroklorid, "DIPEA" je diizopropiletilamin, "TBAF" je tetrabutilamonij fluorid, "LAH" je litij aluminij hidrid i "TEA" je trietilamin.

Primjer 1

Priprava (+/-)-6-kloro-4-ciklopropiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (R4 = ciklopropil)

[image]

Otopini spoja I-a (4.55 g, 20.2 mmol) u bezvodnom THF (40 mL) se doda dimetilaminopiridin (0.25 g, 2.02 mmol) i trimetilsilil izocijanat (6.05 g, 7.11 mL, 52.5 mmol). Smjesa se miješa na sobnoj temperaturi tijekom približno 16 h, a potom se doda tetrabutilamonij fluorid (21 mL 1 M otopine u THF). Gusta smjesa se razrijedi s dodatnim THF (20 mL) i miješa na sobnoj temperaturi 0.5 sati. THF se ukloni pod smanjenim tlakom, a ostatak se prenosi u EtOAc (100 mL) i uzastopno ispire s 1N HCl (70 mL), zasićenim vodenim NaHCO3 (70 mL) i zasićenim vodenim NaCl (50 mL). Organska faza se suši preko MgSO4, filtrira i koncentrira pod smanjenim tlakom, čime se dobije svijetložuta kruta tvar. Žuta boja nestaje nakon usitnjavanja heksanima, čime se dobije IIa (5.09 g, 94%) u obliku bijele krute tvari: 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 9.06 (br s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.40 (br s, 1H), 7.34 (dd, J = 8.8, 2.6 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 8.8 Hz, 1H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -86.33, -86.35; IR (KBr Peleta)1724,1678, 1398, 1198, 1174 cm-1; MS (Cl) m/e 266 (MH + , 100).

Korak 2. Sinteza III-a iz II-a

Suspenzija II-a (5.09 g, 19.1 mmol) u toluenu (150 mL) koja sadrži 4 A molekularna sita (približno 100 mg) grije se uz refluks tijekom 16 sati. Nastala bistra žuta otopina hladi se do sobne temperature, precipitirana kruta tvar se otopi u acetonu i molekularna sita se uklone vakuumskom filtracijom. Filtrat se koncentrira pod smanjenim tlakom i usitni heksanima, čime se dobije lll-a (4.25 g, 89%) u obliku žute krute tvari: 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 7.86-7.82 (m, 2H), 7.61 (d, J = 8.8 Hz, 1H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -67.88.

Korak 3. Sinteza IV-a iz IIIa

Otopina ciklopropilacetilena (13.0 mL 30 mas.% otopine u toluen/THF/heksanima, 59.0 mmol) u bezvodnom THF (118 mL) se hladi na -78 °C, izlaže djelovanju n-BuLi (32.8 mL 1.6 M otopina u heksanima, 52.4 mmol), grije do 0°C u ledenoj kupelji i ostavi stajati 0.5 h. Otopini III-a (3.12 g, 12.6 mmol) u bezvodnom THF (66 mL) na -78 °C se doda litij acetilid tijekom približno 10 minuta. Ovome se doda bor trifluorid eterat (0.89 g, 0.80 ml, 6.28 mmol), nakon čega se kupelj za hlađenje ukloni. Reakcija se ostavi kako di dostigla sobnu temperaturu, i na toj temperaturi se miješa tijekom 4 sata prije gašenja s 1 M limunskom kiselinom (100 mL). Smjesa se koncentrira pod smanjenim tlakom do 1/2 početnog volumena, razrijedi s EtOAc (200 ml), potom se vodena faza uklanja, a organska faza uzastopno ispire zasić. vod. NaHCO3 (100 ml), i zasić. vod. NaCl (100 mL). Organska faza se potom suši preko MgSO4, filtrira i koncentrira pod smanjenim tlakom. Sirova tvar se pročisti plamenom kromatografijom (3% MeOH/CH2Cl2), čime se dobije gusto žuto ulje, a iz njega se dobije kristalni IV-a (R4 = ciklopropil) (3.85 g, 97%) kako bijela kruta tvar: 1.1. 86.6-88°C; 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 8.95 (br s, 1H), 7.51 (br s, 1H), 7.43 (br s, 1H), 7.40 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 1.49-1.41 (m, 1H), 0.93-0.82 (m, 1H), 0.77-0.74 (m, 1H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -82.96; IR (KBr Peletaa) 1696, 1172 cm-1; MS (Cl) m/e izrač. za C14H10ClF3N2O: 315.051201, nađeno 315.051626; 315 (MH + , 51), 332 (M + NH4+, 100); Analiza izrač. za C14H10N2ClF3O•0.25 H2O: C, 52.68; H, 3.32; N, 8.78; nađeno: C, 52.61; H, 3.35; N, 8.28.

Primjer 2

Priprava (+/-)-6-kloro-4-izopropiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (R4 = izopropil)

Otopina III-a (50 mg, 0.201 mmol) se izlaže litij acetilidu koji se dobije od 3-metil-1-butina (62 mg, 93 mL, 0.905 mmol) postupkom iz Primjera 1, Koraka 3. Dobivena sirova tvar se pročisti plamenom kromatografijom (35% EtOAc/heksani) čime se dobije 26 mg (41%) željenog proizvoda: 1H NMR (300 MHz,) δ 9.08 (br s, 1H), 7.59 (br s, 1H), 7.53 (br s, 1H), 7.40 (dd, J = 8.4, 2.2Hz, 1H), 7.02 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 2.81-2.68 (m, 1H), 1.20 (dd, J = 6.6 Hz, 6H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -83.05; MS (Cl) m/e izrač. za C14H12ClF3N2O: 317.066851, nađeno 317.069433; 317 (MH + , 43), 334 (M + NH4+, 100).

Primjer 3

Priprava (+/-)-6-kloro-4-(2-piridil)etinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (R4 = 2-piridil)

Otopina III-a (100 mg, 0.402 mmol) se izlaže litij acetilidu koji se dobije od 2-etinilpiridina (0.19 g, 1.81 mmol), postupkom iz Primjera 1, Koraka 3. Dobivena sirova tvar se pročisti pomoću HPLC (2.5% MeOH/CH2Cl2), čime se dobije 85 mg (60%) željenog proizvoda: 1.1. 105°C dec.; 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 9.14 (br s, 1H), 8.64-8.61 (m, 1H), 7.89-7.84 (m, 2H), 7.70-7.66 (m, 2H), 7.48-7.43 (m, 2H), 7.09 (d, J = 8.8 Hz, 1H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -82.48; IR (KBr Peleta) 1704, 1430, 1186 cm-1; MS (Cl) m/e izrač. za C16H10ClF3N3O: 352.046450, nađeno 352.046956; 352 (MH + , 100); Analiza izrač. za C16H9ClF3N3O•0.125 H2O: C, 54.3; H, 2.56; N, 11.9; nađeno: C, 54.71; H, 3.03; N, 11.3.

Primjer 4

Priprava (+/-)-6-kloro-4-etiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (R4 =etil)

Otopina III-a (100 mg, 0.402 mmol) se izloži litij acetilidu dobivenom od 1-butina (109 mg, 2.01 mmol), postupkom iz Primjera 1, Koraka 3. Dobivena sirova tvar se pročisti pomoću HPLC (2.5% MeOH/CH2Cl2), čime se dobije 79 mg (65%) željenog proizvoda: 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 9.05 (br s, 1H), 7.54 (br s, 2H), 7.41-7.39 (m, 1H), 7.02 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 2.36-2.32 (m, 2H), 2.18-1.13 (m, 3H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -82.99; MS (Cl) m/e izrač. za C13H10ClF3N2O 303.051201, nađeno 303.051882; 303 (MH + , 55), 320 (M + NH4+, 100).

Primjer 5

Priprava (+/-)-6-kloro-4-feniletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (R4= fenil)

Otopina III-a (100 mg, 0.402 mmol) se izloži litij acetilidu dobivenom od fenilacetilena (185 mg, 1.81 mmol), postupkom iz Primjera 1, Koraka 3. Dobivena sirova tvar se pročisti pomoću HPLC (2.5% MeOH/CH2Cl2), čime se dobije 54 mg (38%) željenog proizvoda: 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 9.07 (br s, 1H), 7.74 (br s, 1H), 7.67 (br s, 1H), 7.62-7.58 (m, 2H), 7.48-7.40 (m, 4H), 7.08 (d, J = 8.4 Hz, 1H); 19F NMR (282 MHz,aceton-d6) δ -82.67; IR (KBr peleta) 1696, 1186 cm-1; MS(Cl) m/e izrač. za C17H11ClF3N2O: 351.051201, nađeno 351.051704; 351 (MH + , 51), 368 (M + NH/,100); Analiza izrač. za C17H10ClF3N2O•0.25 H2O: C, 57.48; H, 2.98; N, 7.89; nađeno: C, 57.00; H, 3.03; N, 7.48.

Primjer 6

Priprava (+/-)-4-ciklopropiletinil-6-metoksi-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (R4 = ciklopropil)

[image]

Otopina V-a (0.50 g, 2.28 mmol) se izlaže dimetilaminopiridinu i trimetilsilil izocijanatu, kao što je opisano u Primjeru 1, Koraku 1, čime se dobije 0.58 g (97%) željenog proizvoda: 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 8.81 (br s, 1H), 7.17 (br s, 1H), 7.11 (br s, 1H), 7.00-6.92 (m, 2H), 6.83 (s, 1H), 3.76 (s, 3 H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -85.99.

Korak 2. Sinteza VII-a iz VI-a

Otopina VI-a (0.58 g, 2.21 mmol) se grije u toluenu uz refluks, kao što je opisano u Primjeru 1, Koraku 2, čime se dobije 0.50 g (93%) željenog proizvoda: 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 7.52 (br s, 2H), 7.27 (s, 1H), 3.90 (s, 3 H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -68.08.

Korak 3. Sinteza VIII-a iz VII-a.

Otopina VII-a (100 mg, 0.410 mmol) se izlaže litij acetilidu dobivenom od ciklopropilacetilena (0.41 mL 30 mas.% otopine u toluen/THF/heksanima, 1.85 mmol), prema postupku iz Primjera 1, Koraka 3. Dobivena sirova tvar se pročisti pomoću HPLC (2.5% MeOH/CH2CI2), čime se dobije 103 mg (81%) željenog proizvoda: 1H NMR (300 MHz,aceton-d6) δ 8.77 (br s, 1H), 7.29 (br s, 1H), 7.06 (br s, 1H), 6.99-6.90 (m, 2H), 3.77 (s, 3H), 1.46-1.38 (m, 1H),0.91-0.85 (m, 2H), 0.79-0.72 (m, 2H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -82.61; MS (Cl) m/e izrač. za C15H14F3N2O2= 311.100738, nađeno 311.099970; 311 (MH + , 100).

Primjer 7

Priprava (+/-)-4-izopropiletinil-6-metoksi-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (R4 = izopropil)

Otopina VII-a (100 mg, 0.410 mmol) se izlaže litij acetilidu dobivenom iz 3-metil-1-butina (126 mg, 0.19 mL, 1.85 mmol) prema postupku iz Primjera 1, Koraka 3. Dobivena sirova tvar se pročisti plamenom kromatografijom (2.5% MeOH/CH2Cl2) čime se dobije 30 mg (24%) željenog proizvoda: 1.1. 228-229 °C; 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 8.72 (br s, 1H), 7.27 (br s, 1H), 7.10 (br s, 1H), 7.00-6.91 (m, 2H), 3.77 (s, 3 H), 2.73-2.67 (m, 1H), 1.20 (dd, J = 7.0, 1.5 Hz, 6H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -82.71; IR (KBr peleta) 1696, 1428, 1190, 1176 cm'1; MS (Cl) m/e izrač. za C15H16F3N2O2: 313.116388, nađeno 313.115871; 313 (MH+, 100), 330 (M + NH4+, 15); Analiza izrač. za C15H15F3N2O2: C, 57.69; H, 4.84; N, 8.97; nađeno: C, 57.74; H, 5.01; N, 8.57.

Primjer 8

Priprava (+/-)-6-metoksi-4-(2-piridil)etinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinone (R4 = 2-piridil)

Otopina VII-a (100 mg, 0.410 mmol) se izlaže litij acetilidu dobivenom iz 2-etinilpiridina (0.19 g, 1.85 mmol) prema postupku iz Primjera 1, Koraka 3. Dobivena sirova tvar se pročisti plamenom kromatografijom (2.5% MeOH/CH2Cl2) čime se dobije 56 mg (39%) željenog proizvoda: 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 8.81 (br s, 1H), 8.61 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 7.88-7.82 (m, 1H), 7.66 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.61 (br s, 1H), 7.46-7.42 (m, 1H), 7.23 (br s, 1H), 7.06-6.97 (m, 2H), 3 .79 (s, 3 H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -82.13; IR (KBr peleta) 1698, 1518, 1464, 1430, 1244, 1208,1184 cm-1; MS (Cl) m/e izrač. za C17H13F3N3O2: 348.095987, nađeno 348.095629; 348 (MH+, 100); Analiza izrač. za C17H12F3N3O2•0.25 C3H6O: C, 58.92; H, 3.76; N, 11.61; nađeno: C, 59.38; H, 4.04; N, 11.35.

Primjer 9

Priprava (+/-)-6-metoksi-4-feniletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (R4 = fenil)

Otopina VII-a (100 mg, 0.410 mmol) se izlaže litij acetilidu dobivenom iz fenilacetilena (0.19 g, 1.85 mmol) prema postupku iz Primjera 1, Koraka 3. Dobivena sirova tvar se pročisti plamenom kromatografijom (2.5% MeOH/CH2Cl2), čime se dobije 34 mg (24%) željenog proizvoda: 1.1. 206.2-207.7°C; 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 8.85 (br s, 1H), 7.60-7.57 (m, 3H), 7.49-7.39 (m, 3H), 7.21 (br s, 1H), 7.05-6.96 (m, 2H), 3.79 (s, 3 H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -82.32; IR (KBr peleta) 1696, 1516, 1430, 1236, 1204, 1184, 1128 cm-1; MS (Cl) m/e izrač. za C18H14F3N2O2: 347.100738, nađeno 347.101482; 347 (MH + , 100), 364 (M + NH4+, 48); Analiza izrač. za C18H13F3N2O2: C, 62.43; H, 3.78; N, 8.10; nađeno: C, 62.35; H, 3.58; N, 7.83.

Primjer 10

Priprava (+/-)-4-ciklopropiletinil-5,6-difluoro-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (R4 = ciklopropil)

[image]

Otopina IX-a (6.46 g, 28.7 mmol) se izlaže dimetilaminopiridinu i trimetilsilil izocijanatu, kao što je opisano u Primjeru 1, Koraku 1, čime se dobije 6.74 g (88%) željenog proizvoda: 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 9.13 (br s, 1H),7.45-7.32 (m, 2H), 7.18 (br s, 1H), 6.85-6.80 (m, 1H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -86.6 (d, 17.2, 3),-137.52-137.68 (m, 1), -148.47-148.59 (m, 1).

Korak 2. Sinteza XI-a iz X-a

Otopina X-a (6.74 g, 25.1 mmol) se zagrijava u ksilenima, uz refluks, kao što je opisano u Primjeru 1, Koraku 2, pri čemu ksileni zamjenjuju toluen, čime se dobije 6.3 g (100%) željenog proizvoda: 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 7.92-7.83 (m, 1H), 7.46-7.44 (m, 1H) ; 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -70.7 (d, 38.7, 3), -136.72 (s, 1), -146.47-146.57 (m, 1).

Korak 3. Sinteza XII-a iz XI-a

Otopina XI-a (6.28 g, 25.1 mmol) se izlaže litij acetilidu dobivenom iz ciklopropilacetilena (24.9 mL 30 mas.% otopine u toluen/THF/heksanima, 0.113 mol), prema postupku iz Primjera 1, Koraka 3. Dobiveno sirovo žuto ulje otopi se u acetonu i koncentrira pod smanjenim tlakom, čime nastaje žuta kruta tvar. Kristalizacijom iz acetona dobije se 5.98 g (75%) željene tvari: 1.1. 86.5-88.5°C; 1H NMR (300 MHz,aceton-d6) δ 9.01 (br s, 1H), 7.46 (br s, 1H), 7.44-7.35 (m, 1H), 6.86-6.81 (m, 1H), 1.41-1.37 (m, 1H), 0.90-0.83 (m, 1H), 0.74-0.69 (m, 1H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -83.3 (d, J = 12.9, 1), -136.04-136.23 (m, 1), -148.14-148.26 (m, 1); IR (KBr peleta) 1706, 1516, 1442, 1246, 1214, 1196 cm-1; MS (Cl) m/e izrač. za C14H10F5N2O: 317.071329, nađeno 317.070836; 317 (MH + , 100), 334 (M + NH4+, 62); Analiza izrač. za C14H9F5N2O: C, 53.17; H, 2.88; N, 8.87; nađeno: C, 53.30; H, 3.16; N, 8.53.

Primjer 11

Priprava (+/-)-5,6-difluoro-4-izopropiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (R4 = izopropil)

Otopina XI-a (7.24 g, 28.9 mmol) se izlaže litij acetilidu dobivenom iz 3-metil-1-butina (8.87 g, 13.3 mL, 0.130 mol), prema postupku iz Primjera 1, Koraka 3. Dobivena sirova tvar se pročisti plamenom kromatografijom (2.5% MeOH/CH2Cl2), čime se dobije žuto ulje. Kristaliziranjem iz acetona dobije se 6.77 g (74%) željenog proizvoda: 1.1. 79-80 °C; 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 9.02 (br s, 1H), 7.50 (br s, 1H), 7.44-7.35 (m, 1H), 6.87-6.82 (m, 1H),2.69-2.65 (m, 1H), 1.17 (d, J = 7.0 Hz, 6H); 19F NMR (282 MElz, aceton-d6) δ -83.4 (d, J = 12.9, 1), -135.79-135.94 (m, 1), -148.14-148.26 (m, 1); MS(Cl) m/e izrač. za C14H12F5N2O: 319.086979, nađeno 319.087376; 319 (MH + , 100), 336 (M + NH4+, 76).

Primjer 12

Priprava (+/-)-5,6-difluoro-4-(2piridil)etinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvlnazolinona (R4 = 2-piridil)

Otopina XI-a (100 mg, 0.400 mmol) se izlaže litij acetilidu dobivenom iz 2-etinilpiridina (0.19 g, 1.80 mmol) prema postupku iz Primjera 1, Koraka 3. Dobivena sirova tvar se pročisti plamenom kromatografijom (4% MeOH/CH2Cl2) čime se dobije 83 mg (59%) željenog proizvoda: 1.1. 219-220 °C; 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 9.15 (br s, 1H), 8.61 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 7.88-7.82 (m, 2H), 7.63 (dd, J = 7.0, 1.1Hz, 1H), 7.47-7.42 (m, 2H), 6.94-6.88 (m, 1H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -82.8 (d, J = 12.9, 3), -135.78-135.93 (m, 1), -147.86-147.98 (m, 1); IR (KBr peleta) 1712, 1470, 1450, 1430, 1416, 1264, 1238, 1226, 1198, 1186 cm-1; MS (Cl) m/e izrač. za C16H9F5N3O: 354.066578, nađeno 354.067821; 354 (MH + , 100).

Primjer 13

Priprava (+/-)-5,6-difluoro-4-etiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (R4 = 2-etil)

Otopina XI-a (100 mg, 0.400 mmol) se izlaže litij acetilidu dobivenom iz 1-butina (97 mg, 1.80 mmol) prema postupku iz Primjera 1, Koraka 3. Dobivena sirova tvar se pročisti pomoću HPLC (2.5% MeOH/CH2Cl2) čime se dobije 69 mg (57%) željenog proizvoda: 1.1. 191-194 °C; 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 9.03 (br s, 1H),7.50 (br s, 1H), 7.45-7.35 (m, 1H), 6.87-6.82 (m, 1H), 2.34-2.27 (m, 2H), 1.20-1.15 (m, 3H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -83.3 (d, J = 12.9, 3), -135.79-135.98 (m, 1), -148.16-148.29 (m, 1); IR (KBr peleta) 1704, 1686, 1518, 1444, 1244, 1210, 1192,1172 cm-1; MS (Cl) m/e izrač. za C13H10F5N2O: 305.071329, nađeno 305.071146; 305 (MH + , 100); Analiza izrač. za C13H9F5N2O: C, 51.33; H, 2.98; N, 9.22; nađeno: C, 51.00; H, 2.79; N, 8.99.

Primjer 14

Priprava (+/-)-5,6-difluoro-4-feniletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (R4 = fenil)

Otopina XI-a (100 mg, 0.400 mmol) se izlaže litij acetilidu dobivenom iz fenilacetilena (0.18 g, 0.20 mL, 1.80 mmol) prema postupku iz Primjera 1, Koraka 3. Dobivena sirova tvar se pročisti pomoću HPLC (2.5% MeOH/CH2Cl2) čime se dobije 92 mg (65%) željenog proizvoda: 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 9.14 (br s, 1H), 7.80 (br s, 1H), 7.57-7.54 (m, 2H), 7.49-7.40 (m, 4H), 6.92-6.87 (m, 1H) ; 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -83 .0 (d, J = 12.9, 3), -136.08-136.27 (m, 1), -147.87-148.00 (m, 1); MS (Cl) m/e izrač. za C17H10F5N2O: 353.071329, nađeno 353.071716; 353 (MH + , 42), 370 (M + NH4+, 100).

Primjer 15

Priprava (+/-)-5,6-difluoro-4-izopentil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (R4 = izopropil)

Sinteza XIII-a iz XII-a

Otopina XIII-a (R4 = izopropil) (26 mg, 82 mmol) u etanolu (1 mL) i EtOAc (0.5 mL) se izlaže 10%-tnom Pd na ugljiku (35 mg) u H2 (1 atm) tijekom 16 sati. Katalizator se uklanja vakuumskom filtracijom kroz celit, a filterski kolač se ispire s EtOAc. Pomiješani filtrati se koncentriraju pod smanjenim tlakom, čime se dobije 26 mg (100%) željene tvari. Daljnje pročišćavanje nije potrebno. 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 8.88 (br s, 1H), 7.41-7.31 (m, 1H), 6.89-6.81 (m, 2H), 2.55-2.50 (m, 1H), 1.64-1.45 (m, 2H), 1.06-1.02 (m, 1H), 0.89 (dd, J = 6.6, 2.2Hz, 6H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -83.22 (d, J = 12.1, 3), -138.97-139.13 (m, 1), -148.46-148.58 (m, 1); IR (KBr peleta) 1700, 1678, 1518, 1438, 1252, 1188, 1172 cm-1; MS(Cl) m/e izrač. za C14H16F5N2O: 323.118280, nađeno 323.116703; 323 (Mh+, 100), 340 (M + NH4+, 57).

Primjer 16

Priprava (+/-)-4-butil-5,6-difluoro-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (R4 = etil)

Otopina XIII-a (R4 = etil) (20 mg, 66 mmol) u etanolu (1 mL) i EtOAc (0.5 mL) se izlaže 10%-tnom Pd na ugljiku, pod H2, prema postupku iz Primjera 15. Pročišćavanjem pomoću HPLC (2.5% MeOH/CH2Cl2) dobije se 12 mg (56%) željenog proizvoda: 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 8.89 (br s, 1H), 7.41-7.32 (m, 1H), 6.86-6.81 (m, 2H), 2.57-2.47 (m, 1H), 1.56-1.15 (m, 5H), 0.88 (t, J = 7.3 Hz, 3H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -83.19-83.24 (m, 1), -139.14 (s, 1), -148.49-148.62 (m, 1); MS (Cl) m/e izrač. za C13H14F5N2O: 309.102629, nađeno 309.103555; 309 (MH + , 100), 326 (M + NH4+, 62).

Primjer 17

Priprava (+/-)-4-ciklopropiletinil-6-fluoro-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (R4 = ciklopropil)

[image]

Otopina XIII-a (3.07 g, 14.8 mmol) se izlaže dimetilaminopiridinu i trimetilsilil izocijanatu, kao što je opisano u Koraku 1 Primjera 1, čime se dobije 2.81 g (76%) željenog proizvoda.

Korak 2. Sinteza XVI-a iz XV-a

Otopina XV-a (6.74 g, 25.1 mmol) se grije u toluenu uz refluks, kao što je opisano u Koraku 2 Primjera 1, čime se dobije 0.73 g (94%) željenog proizvoda.

Korak 3. Sinteza XVII-a iz XVI-a

Otopina XVI-a (100 mg, 0.431 mmol) se izlaže litij acetilidu dobivenom iz ciklopropilacetilena (1.43 mL 30 mas.% otopine u toluen/THF/heksanima, 1.94 mmol) prema postupku iz Primjera 1, Koraka 3. Dobivena sirova tvar se pročisti pomoću HPLC (2.5% MeOH/CH2Cl2) čime se dobije 44 mg (34%) željenog proizvoda: 1.1. 155°C; 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 8.86 (br s, 1H), 7.36 (br s, 1H), 7.30-7.27 (m, 1H), 7.22-7.15 (m, 1H), 7.04-6.99 (m, 1H), 1.47-1.42 (m, 1H), 0.90-0.87 (m, 2H), 0.76-0.75 (m, 2H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -82.86, -123.36-123.44; MS (Cl) m/e izrač. za C14H11F4N2O: 299.080751, nađeno 299.079976; 299 (MH + , 100).

Primjer 18

Priprava (+/-)-6-fluoro-4-izopropiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (R4 = izopropil)

Otopina XVI-a (100 mg, 0.431 mmol) se izlaže litij acetilidu dobivenom iz 3-metil-1-butina (0.13 g, 0.20 mL, 1.94 mmol) prema postupku iz Primjera 1, Koraka 3. Dobivena sirova tvar se pročisti pomoću HPLC (2.5% MeOH/CH2Cl2), čime se dobije 24 mg (18%) željenog proizvoda: 1.1. 158°C; 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 9.07 (br s, 1H), 7.60 (br s, 1H), 7.32-7.30 (m, 1 H),7.24-7.16 (m, 1H), 7.05-6.99 (m, 1H), 2.77-2.67 (m, 1H), 1.20 (dd, J = 7.0, 2.6 Hz, 6H) ; 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -82.95, -123.41-123.49; MS (301) m/e izrač. za C14H13F4N2O: 301.096401, nađeno 301.096235; 301 (MH + , 100).

Primjer 19

Priprava (+/-)-6-fluoro-4-(2-piridil)etinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (R4 = 2-piridil)

Otopina XVI-a (100 mg, 0.431 mmol) se izlaže litij acetilidu dobivenom iz 2-etinilpiridina (0.20 g, 1.94 mmol) prema postupku iz Primjera 1, Koraka 3. Dobivena sirova tvar se pročisti pomoću HPLC (2.5% MeOH/CH2Cl2), čime se dobije 65 mg (45%) željenog proizvoda: 1.1. 155°C; 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 9.02 (br s, 1H), 8.60 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.87-7.78 (m, 2H), 7.66 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.45-7.41 (m, 2H), 7.26-7.20 (m, 1H), 7.09-7.05 (m, 1H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -82.36, -122.94-123.02; MS (Cl) m/e izrač. za C16H10F4N3O: 336.076000, nađeno 336.074156; 336 (MH + , 25).

Primjer 20

Priprava (+/-)-6-fluoro-4-etiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (R4 = etil)

Otopina XVI-a (100 mg, 0.431 mmol) se izlaže litij acetilidu dobivenom iz 1-butina (0.10 g, 1.94 mmol) prema postupku iz Primjera 1, Koraka 3. Dobivena sirova tvar se pročisti pomoću HPLC (2.5% MeOH/CH2Cl2) čime se dobije 40 mg (33%) željenog proizvoda: 1.1. 190 °C; 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 8.86 (br s, 1H), 7.38 (br s, 1H),7.34-7.31 (m, 1H), 7.22-7.16 (m, 1H), 7.05-7.00 (m, 1H), 2.04-2.01 (m, 2H), 1.19-1.14 (m, 3 H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -75.392, -123.42-123.50; MS (Cl) m/e izrač. za C13H11F4N2O: 287.080751, nađeno 287.080740; 287 (MH + , 100) .

Primjer 21

Priprava (+/-)-6-fluoro-4-feniletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (R4 = fenil)

Otopina XVI-a (100 mg, 0.431 mmol) se izlaže litij acetilidu dobivenom iz fenilacetilena (0.20 g, 0.21 mL, 1.94 mmol) prema postupku iz Primjera 1, Koraka 3. Dobivena sirova tvar se pročisti pomoću HPLC (2.5% MeOH/CH2Cl2), čime se dobije 41 mg (28%) željenog proizvoda: 1.1. 107°C; 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 9.00 (br s, 1H), 7.69 (br s, 1H), 7.63-7.59 (m, 2H), 7.50-7.40 (m, 4H), 7.27-7.20 (m, 1H), 7.10-7.05 (m, 1H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -82.56, -122.99-123.07; MS (Cl) m/e izrač. za C17H11F4N2O: 335.080751, nađeno 335.082057; 335 (MH + , 74), 352 (M + NH4+, 100).

Primjer 22

Priprava (+/-)-6-fluoro-4-izopentil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (R4 = izopropil)

Sinteza XVIII-a iz XVII-a

Otopina XVII-a (R4 = izopropil) (26 mg, 87 mmol) u etanolu (1 mL) i EtOAc (0.5 mL) se izlaže 10%-tnom Pd na ugljiku, u H2, prema postupku iz Primjera 15, čime se dobije 15 mg (58%) željenog proizvoda. Daljnje pročišćavanje nije potrebno: 1.1. 179°C; 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 7.02-6.97 (m, 2H), 6.80-6.76 (m, 1H), 2.18-2.09 (m, 2H), 1.92-1.82 (m, 2H), 1.52-1.45 (m, 1H), 0.88-0.79 (m, 6H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -82.60, -123.72-123.84; MS (Cl) m/e izrač. za C14H17F4N2O: 305.127707, nađeno 305.126790; 305 (MH + , 100).

Primjer 23

Priprava (+/-)-6-fluoro-4-(2’-2-piridil)etil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (R4 = 2-piridil)

Otopina XVII-a (R4 = 2-piridil) (33 mg, 99 mmol) u etanolu (1 mL) i EtOAc (0.5 mL) se izlaže 10%-tnom Pd na ugljiku, u H2, prema postupku iz Primjera 15, čime se dobije 10 mg (30%) željenog proizvoda. Daljnje pročišćavanje nije potrebno: 1.1. 88°C; 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 8.35 (d, J= 4.4 Hz, 1H), 7.63 (dt, J = 7.7, 1.5 Hz, 1H),7.20-7.13 (m, 3 H), 7.04-6.98 (m, 1H), 6.83-6.79 (m, 1H), 2.84-2.78 (m, 1H), 2.68-2.48 (m, 2H), 2.27-2.06 (m, 1H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -82.58, -123.26-123.34; MS (Cl) m/e izrač. za C16H14F4N3O: 340.107300, nađeno 340.107719; 340 (MH + , 100).

Primjer 24

Priprava (+/-)-4-butil-6-fluoro-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (R4 = etil)

Otopina XVII-a (R4 = etil) (24 mg, 84 mmol) u etanolu (1 mL) i EtOAc (0.5 mL) se izlaže 10%-tnom Pd na ugljiku, u H2, prema postupku iz Primjera 15, čime se dobije 24 mg (100%) željenog proizvoda. Daljnje pročišćavanje nije potrebno: 1.1. 198°C; 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 7.03-6.97 (m, 2H), 6.80-6.76 (m, 1H), 2.18-2.11 (m, 1H),1.90-1.81 (m, 1H), 1.30-1.19 (m, 3H), 0.97-0.80 (m, 4H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -82.692, -123..78-123.86; MS (Cl) m/e izrač. za C13H15F4N2O: 291.112051, nađeno 291.112227; 291 (MH + , 100).

Primjer 25

Priprava (+/-)-6-fluoro-4-feniletil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (R4 = fenil)

Otopina XVII-a (R4 = fenil) (30 mg, 90 mmol) u etanolu (1 mL) i EtOAc (0.5 mL) ) se izlaže 10%-tnom Pd na ugljiku, u H2, prema postupku iz Primjera 15, čime se dobije 20 mg (67%) željenog proizvoda. Daljnje pročišćavanje nije potrebno: 1.1. 98°C; 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 7.18-6.99 (m, 7H), 6.84-6.79 (m, 1H), 2.68-2.60 (m, 1H),2.48-2.12 (m, 3H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -82.67, -123.24-123.32; MS (Cl) m/e izrač. za C17H15F4N2O: 339.112051, nađeno 339.110781; 339 (MH + , 100).

Primjer 26

Priprava (+/-)-6-fluoro-4-metilpropargil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (R4 = metil)

Sinteza XIX-a iz XVI-a

Otopina 2-butina (94 mg, 1.75 mmol) u bezvodnom THF (3.5 mL) se hladi do 0°C, izlaže n-BuLi (0.97 mL 1.6 M otopine u heksanima, 1.55 mmol), i ostavi stajati 0.5 h. Otopini XVI-a (90 mg, 0.388 mmol) u bezvodnom THF (1.9 mL) na -78°C se doda litijev anion tijekom 5 minuta, a nakon njega bor trifluorid eterat (25 mL, 0.194 mmol). Kupelj za hlađenje se ukloni, a smjesa se ostavi da se zagrije do sobne temperature. Nakon 16 h na sobnoj temperaturi slijedi gašenje dodavanjem 1 M limunske kiseline (10 mL), razrjeđivanje s EtOAc (50 mL), razdvajanje faza i ispiranje organske faze zasić. vod. NaHCO3 (20 mL), a zatim zasić. vod. NaCl (20 mL). Dobivena tvar se pročisti pomoću HPLC (2.5% MeOH/CH2Cl2), čime se dobije 10 mg (9%) željenog proizvoda: 1.1. 181°C; 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 8.91 (br s, 1H), 7.27 (d, 8.4H), 7.18-7.08 (m, 1H), 7.02-6.97 (m, 2H), 3.29 (dd, J = 16.8, 2.6 Hz, 1H), 3.00 (dd, J = 16.8, 2.2Hz, 1H), 1.61-1.59 (m, 3 H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -81.86, -123.69-123.70; MS (Cl) m/e izrač. za C13H11F4N2O: 287.080751, nađeno 287.080340; 287 (MH + , 75), 304 (M + NH4+, 100).

[image]

Primjeri 27 i 28

Priprava (-)-6-kloro-4-ciklopropiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (Primjer 27) i (+)-6-kloro-4-ciklopropiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (Primjer 28)

Odvajanje IV-b,c od IV-a (R4 = ciklopropil)

Kiralnom HPLC, pomoću Chiralcel OD stupca, 3% izopropanola, 5% CH2Cl2 i 92% heksana, na temperaturi okoline, uz brzinu protoka od 1.0 mL/min i mjerenje na 250 nm postiže se odvajanje IV-b od IV-c, uz enantiomerički višak od 99%, odnosno 99.4%. IV-b: 1.1. 106-109°C; [α])D25 -60.34° (c=0.274, MeOH) . IV-c: 1.1. 105-107°C; [α]D25 +58.33° (c=0.288, MeOH).

Primjeri 29 i 30

Priprava (+)-4-ciklopropiletinil-5,6-difluoro-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (Primjer 29) i (-)-4-ciklopropiletinil-5,6-difluoro-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H) kvinazolinona (Primjer 30)

Odvajanje XII-b,c od XII-a (R4 = ciklopropil)

Kiralnom HPLC, pomoću Chiralpak AD stupca, 5% vode i 95% metanola, na temperaturi okoline, uz brzinu protoka od 0.8 mL/min i mjerenje na 250 nm postiže se odvajanje XII-b od XII-c, uz enantiomerički višak od 100%, odnosno 99%. XII-b: 1.1. 187 °C; [α]D25 +1.46° (c=0.274, MeOH). XII-c: 1.1. 187.5-188.8°C; [α]D25 -1.45° (c=0.278, MeOH).

Primjeri 31 i 32

Priprava (-)-5,6-difluoro-4-izopropiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (Primjer 31) i (+)-5,6-difluoro-4-izopropiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (Primjer 32)

Odvajanje XII-b,c od XII-a (R4 = izopropil)

Kiralnom HPLC, pomoću Chiralpak AD stupca, 5% vode i 95% metanola, na temperaturi okoline, uz brzinu protoka od 0.5 mL/min i mjerenje na 250 nm postiže se odvajanje XII-b od XII-c, uz enantiomerički višak od 100%, odnosno 99%. XII-b: 1.1. 155°C; [α]D25 -2.14° (c=0.280, MeOH) . XII-c: 98 °C; [α]D25 +4.45° (c=0.292, MeOH) .

Primjeri 33 i 34

Priprava (-)-5,6-difluoro-4-etiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (Primjer 33) i (+)-5,6- difluoro-4-etiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (Primjer 34)

Odvajanje XII-b,c od XII-a (R4 = etil)

Kiralnom HPLC, pomoću AS stupca, 20% etanola i 80% heksana, na temperaturi okoline, uz brzinu protoka od 1.0 mL/min i mjerenje na 250 nm postiže se odvajanje XII-b od XII-c, uz enantiomerički višak od 100%, odnosno 99%. XII-b: 1.1. 165-167°C. Xll-c: 1.1. 157-159°C.

Primjeri 35 i 36

Priprava 5,6-difluoro-4-(2-hidroksietil)etinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (Primjer 35) i 5,6-difluoro-4-(1-hidroksietM)etinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona (Primjer 36)

[image]

U smjesu ketimina (300 mg, 1.20 mmol) u bezvod. THF (11 mL) na -78°C se uzastopno dodaju prethodno ohlađena(0°C) otopina sililom zaštićenog litij acetilida (5.40 mmol) i BF3.OEt2 (0.60 mmol). Dobivena smjesa se miješa na sobnoj temperaturi preko noći. Reakcija se gasi dodavanjem 1 M limunske kiseline i razrijedi s EtOAc. Faze se razdijele, organska faza se ispire vodom, zasić. vod. NaHCO3 i zasić. vod. NaCl. Organski ekstrakti se suše preko MgSO4, filtriraju i koncentriraju. Tvar se pročisti pomoću HPLC regularne faze (41.4 mm Rainin Dynamax® stupac, uz 60 A silika @ 25 mL/min): 2.5% MeOH/CH2Cl2 za 24 min., povećanje do 30% MeOH/CH2Cl2 tijekom 4 min., 30% MeOH/CH2Cl2 za 10 min., te povratak na 2.5% MeOH/CH2Cl2 tijekom 2 min. Prinos zaštićenih spojeva bio je 47%, odnosno 32%.

Primjer 35-međuspoj. T.t. 62.9-64°C; 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 8.98 (br s, 1H), 7.41-7.32 (m, 2H), 6.83-6.78 (m, 1H), 3.74 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.47 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 0.81 (s, 9H), 0.00 (s, 6H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -83.17, -135.16-135.31, -148.09-148.22; MS (Cl) izrač. za C19H24F5N2O2Si: m/z 435.152723, nađeno 435.151149; 435 (MH + , 94), 452 (M + NH4+, 100); Analiza izrač. za C19H23F5N2O2Si: C, 52.52; H, 5.35; N, 6.46; nađeno: C, 52.65; H, 5.29; N, 6.31.

Primjer 36-međuspoj. 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 8.96 (br s, 1H), 7.50 (br s, 1H), 7.37-7.28 (m, 1H), 6.79-6.74 (m, 1H), 4.61 (q, J = 13.2, 6.6 Hz, 1H), 1.30 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.78 (s, 9H), 0.01 (s, 6H); 19F NMR (282 MHz,aceton-d6) δ -82.88-82.95, -135.20-135.42, -148.06-148.23; MS (Cl) izrač. za C19H24F5N2O2Si: m/z 435.152723, nađeno 435.152927; 435 (MH + , 51), 452 (M + NH4+, 100); Analiza izrač. za C19H23F5N2O2Si: C, 52.52; H, 5.35; N, 6.46; nađeno: C, 52.54; H, 5.34; N, 6.69.

U otopinu zaštićenog međuspoja Primjera 35 (0.56 mmol) u THF (1.1 ml_) se doda TBAF (0.62 mL 1.0 M otopine u THF). Dobivena smjesa se miješa na sobnoj temp. 1H, razrijedi s EtOAc, ispire s 1 N HCl, zasić. vod. NaHCO3 i zasić. vod. NaCl. Organski ekstrakt se suši preko MgSO4, filtrira i koncentrira. Tvar se pročisti pomoću HPLC regularne faze (41.4 mm Rainin Dynamax® stupca, uz 60 A silika @ 25 mL/min): 2.5% MeOH/CH2Cl2 tijekom 24 min., povećanje do 30% MeOH/CH2Cl2 tijekom 4 min., 30% MeOH/CH2Cl2 za 10 min. i povratak na 2.5% MeOH/CH2Cl2 tijekom 2 min. Primjer 35 izoliran je u 82%-tnom prinosu.

Primjer 35. T.t. 190-192°C; 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 9.05 (br s, 1H), 7.53 (br s, 1H), 7.45-7.36 (m, 1H),6.88-6.83 (m; 1H), 4.01-3.98 (m, 1H), 3.68-3.64 (m, 2H), 2.50 (t, J = 6.6 Hz, 2H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ-83.3, -135.68-135.88, -148.10-148.22; MS (Cl) izrač. za C13H10F5NO2: m/z 321.066244, nađeno 321.066479; 321 (MH+, 100); Analiza izrač. za C13H9F5N2O2: C, 48.76; H, 2.83; N, 8.76; nađeno: C, 49.05; H, 3.23; N, 8.38.

Primjer 36 je sintetiziran na analogni način, čime je nastao naslovni spoj u 88%-tnom prinosu. T.t. 190-191°C; 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 9.06 (br s, 1H), 7.56 (br s, 1H), 7.46-7.37 (m, 1H), 6.88-6.83 (m, 1H), 4.58-4.57 (m, 2H), 1.39 (d, J = 5.5 Hz, 3H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -83.15, -135.40, -1 35.60, -148.OS-148.20; MS (Cl) izrač. za C13H10F5N2O2: m/z 321.066244, nađeno 321.065983; 321 (MH + , 58), 338 (M + NH4+, 100); Analiza izrač. za C13H9F5N2O2: C, 48.76; H, 2.83; N, 8.76; nađeno: C, 48.84; H, 2.76; N, 8.63.

Primjer 37

Priprava (+)-4-E-ciklopropiletenil-5,6-difluoro-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona

U otopinu XII-b (200 mg, 0.632 mmol) u bezvod. THF (1.3 mL), na sobnoj temp., se doda otopina litij aluminij hidrida (1.3 mL 1.0 M otopine u THF). Dobivena smjesa se miješa na sobnoj temp. preko noći. Reakcija se gasi dodavanjem 10% NaOH (3 mL) i vode (3 mL). Smjesa se razrijedi s EtOAc (30 mL) i faze se razdvoje. Organska faza se ispire zasić. vod. NaCl, suši preko MgSO4, filtrira i koncentrira. Naslovni spoj se pročisti pomoću HPLC regularne faze (41.4 mm Rainin Dynamax® stupca, uz 60 A silika): 2.5% MeOH/CH2Cl2 za 24 min., povećanje na 30% MeOH/CH2Cl2 tijekom 4 min, 30% MeOH/CH2Cl2 za 10 min,., i povratak na 2.5% MeOH/CH2Cl2 tijekom 2 min. T.t. 80-83°C; 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 9.07 br s, 1H), 7.33 (q, J=8.8 Hz, 1H), 6.94 (br s, 1H), 6.84-6.79 (m, 1H), 6.27 (dd, J = 15.6, 7.5 Hz, 1H), 5.67 (dd, J = 15.2, 9.4 Hz, 1H), 1.65-1.56 (m, 1H), 0.80-0.71 (m, 2H), 0.50-0.42 (m, 2H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -82.68, -135.05, -148.49; MS (Cl) Jzrač. za C14H12F5N2O: m/2 319.086979, nađeno 319.087755; 319 (MH+, 100); [α]D20 +72.77° (c=0.382, MeOH); Analiza izrač. za C14H11F5N2O: C, 52.84; H, 3.48; N, 8.80; nađeno: C, 53.02; H, 3.48; N, 8.61.

Primjer 38

Priprava (-)-6-kloro-4-E-ciklopropiletenil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2(1H)-kvinazolinona

Naslovni spoj se pripravi na način opisan u Primjeru 37 (počevši od IV-b), osim što se pročišćavanje izvodi pomoću Chiralcel OD stupca uz 1.5 mL/min. u 0.5% EtOH/20% CH2Cl2/79.5% heksanima. T.t. 87-89 °C; 1H NMR (300 MHz, aceton-d6) δ 9.08 (br s, 1H), 7.40-7.25 (m, 2H), 7.04-6.90 (m, 2H), 6.28-6.18 (m, 1H), 5.64-5.52 (m, 1H), 1.68-1.55 (m, 1H), 0.83-0.71 (m, 2H), 0.53-0.41 (m, 2H); 19F NMR (282 MHz, aceton-d6) δ -81.67; MS (Cl) izrač. za C14H13ClF3N2O: m/z 317.066851, nađeno 317.065857; 317 (MH + , 100); [α]D20 -6.81° (c=0.382, MeOH); Analiza izrač. za C14H12ClF3N2O . 0.27 C3H6O: C, 53.52; H, 4.13; N, 8.43; nađeno: C, 53.90; H, 4.07; N, 8.80.

[image]

KORISNOST

Spojevi ovog izuma posjeduju inhibicijsko djelovanje na obrnutu transkriptazu, točnije inhibicijsko djelovanje na HIV. Spojevi formule (I) posjeduju inhibicijsko djelovanje na obrnutu transkriptazu HIV-a, te su stoga učinkoviti kao protuvirusna sredstva za liječenje infekcije HIV-om i pridruženih bolesti. Spojevi formule (I) posjeduju inhibicijsko djelovanje na obrnutu transkriptazu HIV-a, te su stoga učinkoviti kao inhibitori rasta HIV-a. Sposobnost spojeva ovog izuma da inhibiraju rast virusa ili njegovu infektivnost može se pokazati standardnim testovima rasta ili infektivnosti virusa, na primjer dolje opisanim testom.

Spojevi formule (I) ovog izuma također su korisni za inhibiranje HIV-a u ex vivo uzorku koji sadrži HIV ili se predmnijeva da je bio izložen HIV-u. Prema tome, spojevi ovog izuma mogu se koristiti za inhibiranje HIV-a nazočnog u uzorku tjelesne tekućine (na primjer, serumu ili uzorku sjemena) koji sadrži ili se sumnja da sadrži ili da je bio izložen HIV-u.

Spojevi ovog izuma također su korisni kao standardi, odnosno referentni spojevi za korištenje u testovima za ustanovljavanje sposobnosti nekog sredstva da inhibira replikaciju virusnog klona i/ili obrnutu transkriptazu HIV-a, na primjer u istraživačkim programima farmaceutske industrije. Prema tome, spojevi ovog izuma mogu se koristiti kao kontrolni ili referalni spojevi u takvim testovima, te kao standardi prilikom provjere kakvoće. Spojevi ovog izuma dostupni su u obliku kita ili spremnika namijenjenog tržištu, za uporabu u ulozi standarda ili referalnih spojeva.

Kako spojevi ovog izuma pokazuju specifičnost za obrnutu transkriptazu HIV-a, oni se također mogu koristiti kao dijagnostički reagensi u dijagnostičkim testovima za ustanovljavanje obrnute transkriptaze HIV-a. Prema tome, inhibiranje djelovanja obrnute transkriptaze u testu (kao što su ovdje opisani testovi) spojem ovog izuma ukazuje na nazočnost obrnute transkriptaze HIV-a i samog HIV-a.

U ovdje uporabljenom značenju, "µg" označuje mikrogram, "µg" označuje miligram, "g" označuje gram, "µL" označuje mikrolitar, "ml" označuje mililitar, "L" označuje litru, "nM" označuje nanomolarni, "µM" mikromolarni, "mM" milimolarni, "M" molarni, a "nm" označuje nanometar. "Sigma" znači Sigma-Aldrich Corp. of St. Louis, MO.

HIV RNK test

DNK plazmidi i in vitro RNK prijepisi:

Plazmid pDAB 72 koji sadrži i gag i pol slijedove BH10 (bp 113-1816) kloniran u PTZ 19R pripravi se premaErickson-Viitanenu i sur., AIDS Research and Human Retroviruses 1989, 5, 577. Plazmid se linearizira pomoću Bam HI prije stvaranja in vitro RNK prijepisa pomoću Riboprobe Gemini sistem II kita (Promega) s T7 RNK polimerazom. Sintetizirana RNK se pročisti izlaganjem RNazi slobodnoj DNazi (Promega), ekstrakcijom s fenol-kloroformom i precipitacijom etanolom. RNK prijepisi se otope u vodi i pohrane na -70°C. Koncentracija RNK se odredi uz A260.

Sonde:

Biotinilirane sonde za hvatanje se pročiste pomoću HPLC nakon sinteze na Applied Biosystems (Foster City, CA) sintetizatoru DNK, dodavanjem biotina 5' kraju oligonukleotida, uz pomoć biotin-fosforamiditnog reagensa prema Cocuzzi, Tet. Lett. 1989, 30, 6287. Gag biotinilirana sonda za hvatanje (5-biotin-CTAGCTCCCTGCTTGCCCATACTA 3') je komplementarna nukleotidima 889-912 od HXB2, a pol biotinilirana sonda za hvatanje (51-biotin-CCCTATCATTTTTGGTTTCCAT-3') je komplementarna nukleotidima 2374-2395 od HXB2. Oligonukleotide konjugirane alkalnom fosfatazom, korišteni kao izvještajne sonde, pripravlja Syngen (San Diego, CA). Pol izvještajna sonda (5' CTGTCTTACTTTGATAAAACCTC 3') je komplementarna nukleotidima2403-2425 od HXb2. Gag izvještajna sonda (5'CCCAGTATTTGTCTACAGCCTTCT 3') je komplementarna nukleotidima 950-973 od HXB2. Svi položaji nukleotida su od GenBank Genetic Sequence Data Bank, dobiveni od Genetics Computer Group Sequence Analysis softverskog paketa (Devereau Nucleic Acids Research 1984, 12, 387). Izvještajne sonde su pripravljene kao 0.5 µM punjenja u 2 x SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M natrij citrata), 0.05 M Tris pH 8.8, 1 mg/mL BSA. Biotinilirane sonde za hvatanje pripravljene su kao 100 µM punjenja u vodi.

Ploče obložene streptavidinom:

Ploče obložene streptavidinom dobivene su od Du Pont Biotechnology Systems (Boston, MA).

Stanična i virusna punjenja:

MT-2 i MT-4 stanice održavaju se u RPMI 1640 kojem je dodano 5% fetalnog telećeg seruma (FCS) za MT-2 stanice, odnosno 10% FCS za MT-4 stanice, 2 mM L-glutamina i 50 µg/mL gentamicina, sve od tvrtke Gibco. HIV-1 RF se umnoži u MT-4 stanicama u istom mediju. Virusna punjenja se priprave otprilike 10 dana nakon akutne infekcije MT-4 stanica, i pohrane kao alikvoti na -70°C. Infektivni titrovi HIV-1 (RF) punjenja bili su 1-3 x 107 PFU (jedinica stvaranja naslage)/mL, mjereno testom za naslage na MT-2 stanicama (vidi ispod). Svaki alikvot virusnog punjenja korišten za inficiranje otapan je samo jednom.

Za procjenu protuvirusnog djelovanja, stanice koje se inficiraju su supkultivirane jedan dan uoči infekcije. Na dan infekcije, stanice se ponovno suspendiraju na 5 x 105 stanica/mL u RPMI 1640, 5%-tnom FCS za obilne infekcije, ili na 2 x 106/mL u Dulbeccovom preinačenom Eagles mediju s 5% FCS za infekcije u mikrotitracijskim pločama. Doda se virus i kultiviranje se nastavi tijekom 3 dana na 37°C.

HIV RNK test:

Stanični lizati ili pročišćena RNK u 3 M ili 5 M GED se pomiješaju s 5 M GED i sondom za hvatanje, do konačne koncentracije gvanidin izotiocijanata od 3 M i konačne koncentracije biotinskog oligonukleotida od 30 nM.

Hibridizacija se provodi u zapečaćenim pločama za tkivna kulture koje imaju 96 jamica i U-dno (Nunc ili Costar), tijekom 16-20 h, na 37°C. Reakcije hibridizacije RNK se razrijede trostruko s deioniziranom vodom do konačne koncentracije izotiocijanata od 1 M, a alikvoti (150 µL) se prenesu u jamice mikrotitracijske ploče obložene streptavidinom. Postupak vezanja sonde za hvatanje i hibrida sonda za hvatanje-RNK na imobilizirani streptavidin ostavi se da se odvija 2 h na sobnoj temperaturi, nakon čega se ploče ispiru 6 puta DuPont ELISA puferom za ispiranje ploča (otopina soli puferirana fosfatom (PBS), 0.05% Tween 20). Druga hibridizacija izvještajne sonde s imobiliziranim kompleksom sonde za hvatanje i hibridizirane ciljne RNK provodi se u ispranoj jamici obloženoj streptavidinom, dodavanjem 120 µL hibridizacijskog koktela koji sadrži 4 x SSC, 0.66% Triton x 100, 6.66% deioniziranog formamida, 1 mg/mL BSA i 5 nM izvještajne sonde. Nakon hibridiziranja tijekom 1 h na 37°C, ploča se ponovno ispire 6 puta. Aktivnost (mobilizirane alkalne fosfataze ustanovi se dodavanjem 100 µL 0.2 mM 4-metilumbeliferil fosfat (MUBP, JBL Scientific) u puferu 6 (2.5 M dietanolamina pH 8.9 (JBL Scientific), 10 mM MgCl2, 5 mM cinkovog acetat dihidrata i 5 mM N-hidroksietil-etilen-diamin-trioctene kiseline). Ploče se inkubiraju na 37°C. Mjeri se fluorescencija na 450 nM pomoću fluorometra za mikroploče (Dynateck) uz pobuđivanje na 365 nM.

Procjena spoja temeljena na mikroploči u HIV-1 inficiranih MT-2 stanica:

Spojevi koje treba procijeniti otope se u DMSO i razrijede u mediju za kultiviranje do dvostruke vrijednosti najveće ispitivane koncentracije i maksimalne koncentracije DMSO od 2%. Učine se daljnja trostruka razrjeđenja spoja u mediju za kultiviranje, izravno u mikrotitracijskim pločama s U-dnom (Nunc). Nakon razrjeđivanja spoja, MT-2 stanice (50 µL) se dodaju do konačne koncentracije od 5 x 105 po mL (1 x 105 po jamici). Stanice se inkubiraju sa spojem tijekom 30 minuta na 37°C u CO2 inkubatoru. Za vrednovanje protuvirusnog potencijala, odgovarajuće razrjeđenje HIV-1 (RF) virusnog punjenja (50 µL) se doda jamicama za kultiviranje koje sadrže stanice i razrjeđenja ispitivanog spoja. Konačni volumen u svakoj jamici iznosio je 200 µL. Osam jamica na svakoj ploči ostavi se neinficirano, s 50 µL medija koji se doda umjesto virusa, a drugih osam jamica se inficira, bez nazočnosti bilo kojeg protuvirusnog spoja. Za vrednovanje otrovnosti spoja, usporedne jamice se kultiviraju bez inficiranja virusom.

Nakon 3 dana kultiviranje na 37°C, u vlažnoj komori unutar CO2 inkubatora, ukloni se sve osim 25 µl medija iz ploča inficiranih HIV-om. Trideset i sedam µL 5 M GED koji sadrži biotiniliranu sondu za hvatanje se doda slegnutim stanicama i ostatku medija u svakoj jamici do konačne koncentracije od 3 M GED i 30 nM sonde za hvatanje. Hibridizacija sonde za hvatanje i HIV RNK u staničnom lizatu provede se u istoj jamici mikroploče korištenoj za kultiviranje virusa, pomoću pečaćenja ploča napravom za pečaćenje (Costar) i inkubiranjem tijekom 16-20 h u inkubatoru na 37°C. Potom se u svaku jamicu doda destilirana voda, čime se hibridizacijska reakcija razrijedi trostruko, a 150 µL ove razrijeđene smjese se prenese u mikrotitracijsku ploču obloženu streptavidinom. Količina HIV RNK odredi se gore opisanim postupkom. Standardna krivulja, pripravljena dodavanjem poznatih količina pDAB 72 in vitro RNK transkripta u jamice koje sadrže lizirane neinficirane stanice, izradi se za svaku mikrotitracijsku ploču, sa svrhom ustanovljavanja količine virusne RNK koja je nastala tijekom infekcije.

Da bi se standardizirao virusni inokulum korišten pri vrednovanju protuvirusnog djelovanja spojeva, odabrana su razrjeđenja virusa koja su imala IC90 vrijednost (koncentracija spoja koja je potrebna za 90%-tno smanjivanje razine HIV RNK) za dideoksicitidin (ddC) od 0.2 µg/mL. IC90 vrijednosti ostalih protuvirusnih spojeva, i više i manje moćnih od ddC, moguće je reproducirati uporabom nekoliko punjenja HIV-1 (RF) prilikom ponavljanja ovog postupka. Ova koncentracija virusa odgovara približno 3 x 105 PFU (mjereno testom za naslage na MT-2 stanicama) po ispitivanoj jamici i tipično proizvodi približno 75% maksimalne razine virusne RNK koju je moguće postići pri bilo kojem inokulumu virusa. Za HIV RNK test, IC90 vrijednosti se utvrđuju prema postotku smanjivanja mrežnog signala (signal iz inficiranih staničnih uzoraka minus signal iz neinficiranih staničnih uzoraka) u RNK testu u odnosu na mrežni signal iz inficiranih, neliječenih stanica iste kultivacijske ploče (prosjek 8 jamica). Prave odlike pojedine infekcije i RNK testova presuđene su prema tri kriterija. Zahtijevalo se da virusna infekcija ima signal na RNK testu jednak ili veći od signala koji nastaje od 2 ng pDAB 72 in vitro RNK prijepisa. IC90 za ddC, određen pri svakom izvođenju testa, treba biti između 0.1 i 0.3 µg/mL. Konačno, plato vrijednost virusne DNK proizvedene učinkovitim inhibitorom obrnute transkriptaze treba biti manja od 10% vrijednosti postignute pri neinhibiranoj infekciji. Spoj se smatrao djelatnim ako je njegov IC90 bio manji od 20 µM.

Za testove protuvirusne sposobnosti, sva rukovanja mikrotitracijskim pločama, nakon početnog dodavanja 2 x koncentrirane otopine spoja jednom redu jamica, provedena su uporabom Perkin Elmer/Cetus ProPette.

Vezanje proteina i otpornost mutanata

Kako bi se procijenilo posjedovanje kliničke učinkovitosti analoga NNRTI, ispitivan je učinak proteina plazme na protuvirusnu sposobnost i mjerena je protuvirusna sposobnost protiv divljeg tipa i mutantskih sojeva HIV-a koji mogu nositi aminokiselinske promjene na poznatom mjestu za vezanje NNRTI. Obrazloženje ovakve strategije ispitivanja je dvojako:

1. Mnogi lijekovi se izdašno vežu na proteine plazme, lako je afinitet vezanja najvećeg broja lijekova za glavne sastojke ljudske plazme, i to ljudski serumski albumin (HAS) ili alfa-1-kiseli glikoprotein (AAG), nizak, ovi glavni sastojci su u krvi nazočni u visokim koncentracijama. Jedino je slobodan ili nevezan lijek sposoban proći kroz inficiranu staničnu membranu, kako bi stupio u međudjelovanje s ciljnim mjestom (tj. obrnutom transkriptazom virusa HIV-1, HIV-1 RT). Stoga, učinak dodanog HSA+AAG na protuvirusnu sposobnost u kulturi tkiva blisko odražava sposobnost određenog spoja u kliničkoj primjeni. Koncentracija spoja koja je potrebna za 90%-tnu inhibiciju umnožavanja virusa, mjerena osjetljivim detekcijskim postupkom temeljenim na RNK, izražena je kao IC90. Potom je izračunato koliko puta raste IC90 ispitivanih spojeva u nazočnosti dodanih količina HSA i AAG, koje odražavaju koncentracije in vivo (45 mg/mL HSA, 1 mg/mL AAG). Što je indeks povećanja manji, spoj je sposobniji za međudjelovanje s ciljnim mjestom.

2. Kombinacija velike brzine umnažanja virusa u inficiranog pojedinca i slabe vjernosti virusne RT dovodi do proizvodnje lažnih sojeva ili smjesa sojeva HIV-a u inficiranog pojedinca. Ovi sojevi uključuju većinu sojeva divljeg tipa, ali i mutantne inačice HIV-a, a udio pojedinog mutanta odražava njegovu izdržljivost i brzinu umnažanja. Iz razloga što mutantne inačice, uključujući mutante s promjenama u aminokiselinskom slijedu virusne RT, vjerojatno postoje među lažnim sojevima zaraženog pojedinca, ukupna sposobnost opažena u kliničkoj primjeni odražava sposobnost lijeka da inhibira ne samo divlji tip HIV-1, već i njegove mutantne inačice. Stoga smo stvorili, uz poznatu genetsku podlogu, mutantne inačice HIV-1 koje nose aminokiselinske promjene na položajima za koje se misli kako su povezani s vezanjem NNRTI, te mjerili sposobnost ispitivanih spojeva da inhibiraju umnažanje ovih mutantskih virusa. Koncentracija spoja koja je potrebna za 90%-tnu inhibiciju umnožavanja virusa, mjerena osjetljivim detekcijskim postupkom temeljenim na RNK, izražena je kao IC90. Poželjno je imati spoj koji je visoko djelatan protiv različitih mutanata.

DOZIRANJE I PRIPRAVA

Protuvirusni spojevi ovog izuma mogu se primjenjivati u liječenju virusnih infekcija na bilo koji način kojim se omogućuje dodir aktivne tvari i mjesta njezina djelovanja, tj virusne obrnute transkriptaze, u tijelu sisavca. Mogu se primijeniti bilo kojim prikladnim uobičajenim načinom, vezani s radiofarmacima, bilo kao pojedinačna terapijska sredstva, bilo u kombinaciji terapijskih sredstava. Mogu se primijeniti sama, ali preporučljivo se primjenjuju s farmaceutskim nosačem odabranim prema putu primjene i standardnoj farmaceutskoj praksi.

Razumljivo je da primijenjena doza varira ovisno o poznatim činiteljima, kao što su farmakodinamičke osobine pojedinog sredstva te način i put njegove primjene; dobi, zdravstvenom stanju i težini primatelja; prirodi i opsegu simptoma; vrsti usporednog liječenja; učestalosti liječenja; i željenom učinku. Dnevne doze aktivne tvari očekivano su oko 0.001 do oko 1000 miligrama po kilogramu tjelesne težine, uz preporučenu dozu od oko 0.1 do oko 30 mg/kg.

Oblici za doziranje pripravaka prikladnih za primjenu sadrže od oko 1 mg do oko 100 mg aktivne tvari po jedinici. U ovim farmaceutskim pripravcima, aktivna tvar je obično nazočna u količinama od oko 0.5-95% prema težini, temeljeno na ukupnoj težini pripravka. Aktivni sastojak može se primijeniti peroralno u krutim oblicima doziranja, kao što su kapsule, tablete i prašci, ili u tekućim oblicima doziranja, kao što su eliksiri, sirupi i suspenzije. Također može se primijeniti parenteralno, u sterilnim tekućim oblicima doziranja.

Želatinske kapsule sadrže aktivni sastojak i nosače u obliku praška, kao što su laktoza, škrob, derivati celuloze, magnezij stearat, stearinska kiselina i slično. Slična se sredstva za razrjeđivanje mogu koristiti pri izradi stlačenih tableta, l tablete i kapsule se mogu pripraviti tako da produljeno oslobađaju proizvod, čime se omogućuje kontinuirano oslobađanje lijeka tijekom višesatnog razdoblja. Stlačene tablete mogu biti obložene šećerom ili filmom, da bi se prikrio svaki neugodni okus tablete i da'bi se tabletu zaštitilo od atmosfere, ili enterički obložene, što omogućuje selektivnu razgradnju u probavnom traktu. Tekući oblici za doziranje za peroralnu primjenu mogu sadržavati boje i arome, da bi se uvećala prihvatljivost od strane bolesnika.

Općenito, voda, prikladno ulje, otopina soli, vodena dekstroza (glukoza) i srodne otopine šećera, kao i glikoli poput propilen glikola ili polietilen glikola, pogodni su nosači za parenteralne otopine. Otopine za parenteralnu primjenu preporučljivo sadrže vodotopljive soli aktivnog sastojka, prikladno sredstvo za stabiliziranje i, ako je potrebno, puferske tvari. Sredstva protiv oksidacije, poput natrij bisulfita, natrij sulfita ili askorbinske kiseline, pojedinačno ili u kombinaciji, pogodna su sredstva za stabiliziranje. Također se koriste limunska kiselina i njezine soli, kao i natrij EDTA. Pored toga, parenteralne otopine mogu sadržavati konzervanse, kao što su benzalkonij klorid, metil- ilipropil-paraben i klorobutanol. Prikladni farmaceutski nosači su opisani u Remington's Pharmaceutical Sciences, vidi gore, koja je standardna referenca na ovom području.

Korisni farmaceutski oblici doziranja za primjenu spojeva ovog izuma mogu se opisati na slijedeći način:

Kapsule

Velik broj različitih kapsula može se pripraviti punjenjem standardnih dvodjelnih kapsula od tvrde želatine sa 100 mg aktivnog sastojka u obliku praška, 150 mg laktoze, 50 mg celuloze i 6 mg magnezij stearata.

Meke želatinske kapsule

Smjesa aktivnog sastojka u probavljivom ulju, poput sojinog, pamučnog ili maslinovog ulja, može se pripraviti i injicirati putem pozitivne istisne crpke u želatinu, čime nastaju meke želatinske kapsule koje sadrže 100 mg aktivnog sastojka. Kapsule se potom trebaju isprati i osušiti.

Tablete

Velik broj tableta može se pripraviti uobičajenim postupcima, tako da je jedinica doziranja 100 mg aktivnog sastojka, 0.2 mg koloidnog silicij dioksida, 5 miligrama magnezij stearata, 275 mg mikrokristalne celuloze, 11 mg škroba i 98.8 mg laktoze. Može se primijeniti odgovarajuće oblaganje da bi se popravio okus ili odgodila apsorpcija.

Suspenzija

Vodena suspenzija može se pripraviti za peroralnu primjenu tako da svakih 5 mL sadrži 25 mg fino raspršenog aktivnog sastojka, 200 mg natrij karboksimetil celuloze, 5 mg natrij benzoata, 1.0 g otopine sorbitola, U.S.P., i 0.025 mg vanilina.

Pripravci za injiciranje

Parenteralni pripravci pogodni za primjenu u obliku injekcija mogu se pripraviti miješanjem 1.5 mas.% aktivnog sastojka u 10 vol.% propilen glikolu i vodi. Otopina se sterilizira uobičajenim tehnikama.

Kombinacija sastojaka (a) i (b)

Svako terapijsko sredstvo ovog izuma može biti samostalni sastojak oblika za doziranje, kao što su gore opisani, a može biti primijenjeno na različite načine, što je također gore opisano. Treba uvidjeti kako u slijedećem opisu sastojak (b) predstavlja jedno ili više sredstava, kao što je ranije opisano. Prema tome, ako se sastojci (a) i (b) trebaju obraditi na isti način ili neovisno, svako sredstvo sastojka (b) također treba obraditi na isti način ili neovisno.

Sastojci (a) i (b) ovog izuma mogu zajedno biti dijelovi jednog pripravka, u jednoj jedinici za doziranje (drugim riječima, pomiješani zajedno u jednoj kapsuli, tableti, prašku, tekućini i si.) kao kombinirani proizvod. Kada sastojci (a) i (b) nisu zajedno, kao dijelovi jednog oblika za doziranje, sastojak (a) se može primijeniti istodobno sa sastojkom (b), ili bilo kojim redoslijedom; na pr., sastojak (a) ovog izuma može se primijeniti prvi, a nakon njega slijedi primjena sastojka (b), ili redoslijed primjene može biti obrnut. Ako sastojak (b) sadrži više od jednog sredstva, na pr. jedan inhibitor RT i jedan inhibitor proteaze, ova se sredstva mogu primijeniti istodobno ili bilo kojim redoslijedom. Kada se ne primjenjuju istodobno, preporučuje se da razdoblje između primjene sastojaka (a) i (b) ne bude dulje od približno jedan sat. Preporučuje se da put primjene sastojaka (a) i (b) bude peroralni. Izrazi peroralno sredstvo, peroralni inhibitor, peroralni spoj i slični, u značenju u kojem se ovdje koriste, označuju spojeve koji se primjenjuju peroralno. lako se preporučuje se da se sastojci (a) i (b) primjenjuju istim putem (na primjer, oba peroralno) ili oblikom za doziranje, po želji se mogu primjenjivati različitim putevima (na pr. jedan sastojak kombiniranog proizvoda se primijeni peroralno, a drugi intravenozno) ili u različitim oblicima za doziranje.

Iskusnom medicinskom praktičaru bit će jasno kako doze pri kombiniranom liječenju na način iz ovog izuma mogu razlikovati ovisno o različitim činiteljima, kao što su farmakodinamicke osobine pojedinog sredstva, način i put njegove primjene, dob, zdravstveno stanje i težina primatelja, priroda i opseg simptoma, vrsta liječenja koje se istodobno primjenjuje, učestalost primjene i željeni učinak, kao što je gore opisano.

Iskusan medicinski praktičar lako će odrediti pravilno doziranje sastojaka (a) i (b) ovog izuma, na temelju ovog otkrića. Općenito, tipična dnevna doza je oko 100 mg do oko 1.5 g svakog sastojka. Ako sastojak (b) sadrži više od jednog spoja, tada je tipična dnevna doza oko 100 mg do oko 1.5 g svakog pojedinog sredstva iz sastojka (b). Općenito, kada se spojevi sastojaka (a) i (b) propisuju u kombinaciji, doza svakog sastojka umanji se 70-80% u odnosu na uobičajeno doziranje sastojka kada se on primjenjuje pojedinačno, kao samostalno sredstvo za liječenje infekcije HIV-om, a zbog sinergističkog učinka kombinacije.

Kombinirani proizvodi ovog izuma mogu se pripraviti na takav način da, iako su aktivni sastojci kombinirani u jednom obliku za doziranje, fizički dodir između aktivnih sastojaka bude sveden na najmanju mjeru.

U svrhu smanjivanja dodira, na primjer kada se proizvod primjenjuje peroralno, jedan aktivni sastojak može biti enterički obložen. Enteričkim oblaganjem jednog od aktivnih sastojaka moguće je ne samo smanjiti dodir između kombiniranih aktivnih sastojaka, već i kontrolirati oslobađanje jednog od ovih sastojaka u probavnom sustavu, tako da se jedan od ovih sastojaka ne oslobađa u želucu, nego u crijevima. Drugi oblik ovog izuma, kada je poželjna peroralna primjena, uključuje kombinirani proizvod u kojem je jedan od aktivnih sastojaka obložen s tvari koja omogućuje produljeno oslobađanje u probavnom sustavu i ujedno služi smanjivanju fizičkog dodira između kombiniranih aktivnih sastojaka. Nadalje, sastojak koji se produljeno oslobađa može biti dodatno enterički obložen, tako da se oslobađanje ovog sastojka odvija samo u crijevima. Drugi pristup uključuje pripravu kombiniranog proizvoda pri čemu je jedan sastojak obložen polimerom za produljeno i/ili enteričko oslobađanje, a drugi sastojak je obložen polimerom niskog stupnja viskoznosti, poput hidroksipropil metilceluloze, ili kojom drugom prikladnom tvari poznatoj u struci, sa svrhom dodatnog odjeljivanja aktivnih sastojaka. Polimerski ovoj služi oblikovanju dodatne prepreke međudjelovanju s drugim sastojkom. U svakom pripravku u kojem je dodir između sastojaka (a) i (b) spriječen putem omotača ili kojom drugom tvari, također se može spriječiti međusobni dodir pojedinih sredstava unutar sastojka (b).

Oblici za doziranje kombiniranog spoja ovog izuma, u kojima je jedan od aktivnih sastojaka enterički obložen mogu biti u obliku tableta, tako da se enterički obloženi sastojak i drugi aktivni sastojak pomiješaju zajedno, te potom stlače u tabletu, ili tako da se enterički obloženi sastojak stlači u jedan sloj tablete, a drugi aktivni sastojak se stlači u drugi sloj. Po želji, želi li se dodatno odijeliti dva sloja, može se umetnuti jedan ili više placebo sojeva, i to tako da placebo sloj bude između slojeva aktivnih sastojaka. Pored toga, Oblici za doziranje ovog izuma mogu biti u obliku kapsula, pri čemu je jedan aktivni sastojak stlačen u tabletu ili je u obliku brojnih mikrotableta, ulomaka, zrnaca ili non-perils, koje se naknadno enterički oblažu. Ove enterički obložene mikrotablete, ulomci, zrnca ili non-perils potom se stave u kapsulu ili se komprimiraju u kapsulu zajedno s granulatom drugog aktivnog sastojka.

Ovi, kao i drugi načini smanjivanja dodira između sastojaka kombiniranih proizvoda ovih izuma, bilo da su primjenjeni u jednom obliku za doziranje ili u odvojenim oblicima, ali istodobno i na isti način, bit će jasni poznavateljima struke, uz upoznavanje ovog otkrića.

Farmaceutski kitovi korisni za liječenje infekcije HIV-om, koji uključuju terapijski aktivnu količinu farmaceutskog pripravka koji sadrži spoj iz sastojka (a) i jedan ili više spojeva iz sastojka (b), u jednom ili više sterilnih spremnika, također pripadaju području ovog izuma. Steriliziranje spremnika može se provesti uobičajenim sterilizacijskim postupcima, koji su stručnjacima dobro poznati. Sastojak (a) i sastojak (b) mogu biti u istom sterilnom spremniku, ili u posebnim sterilnim spremnicima. Sterilni spremnici za tvari mogu unutar sebe sadržavati više zasebnih spremnika, ili jedan ili više spremnika od više dijelova, ako je to poželjno. Sastojak (a) i sastojak (b) mogu biti odijeljeni, ili fizički pomiješani u jednom obliku ili jedinici za doziranje, kao što je ranije opisano. Ovakvi kitovi mogu po želji sadržavati i jedan ili više različitih uobičajenih sastojaka kita, kao što su na pr. jedan ili više farmaceutski prikladnih nosača, dodatne ampule za miješanje sastojaka itd., što će stručnjacima biti razumljivo. Upute, bilo u obliku papirića, bilo u obliku naljepnica, na kojima su navedene količine sastojaka za primjenu, smjernice za primjenu i/ili smjernice za miješanje sastojaka, također mogu biti sastavni dio kita.

Očigledno je da su, u svjetlu gore izloženoga, moguće brojne modifikacije i varijacije. Stoga treba uvidjeti da se, unutar područja priloženih zahtjeva, ovaj izum može provoditi i na načine različite od onih koji su ovdje specifično opisani.

Claims

1. Spoj formule (I): [image] ili njegov stereoizomer, ili njegova farmaceutski prikladna sol, naznačen time, što: R1 je C1-3 alkil supstituiran s 1-7 halogena; R2 je odabran između C1-5 alkil supstituiran s 1-2 R4, C2-5 alkenil supstituiran s 1-2 R4 i C2-5 alkinil supstituiran s 1 R4; R3 je, pri svakoj pojavi, neovisno odabran između C1-4 alkil, OH, C1-4 alkoksi, F, Cl, Br, I, NR5R5a, NO2, CN, C(O)R6, NHC(O)R7 i NHC(O)NR5R5a; alternativno, ako su nazočna dva R3 vezana na susjedne atome ugljika, mogu se kombinirati i tvoriti -OCH2O-; R4 je odabran između: C3-5 cikloalkil supstituiran s 0-2 R3, fenil supstituiran s 0-5 R3 i 5-6-eročlani heterociklički sustav koji sadrži 1-3 heteroatoma odabrana između O, N i S, supstituiran s 0-2 R3; R5 i R5a su neovisno odabrani između H i C1-3 alkil; R6 je odabran između H, OH, C1-4 alkil, C1-4 alkoksi i NR5R5a; R7 je odabran između C1-3 alkil i C1-3 alkoksi; R8 je odabran između H, C3-5 cikloalkil i C1-3 alkil, a n je odabran između 0, 1, 2, 3 i 4.

2. Spoj prema Zahtjevu 1, naznačen time, što: R1 je ct.s alkil supstituiran s 1-7 halogena; R2 je odabran između C1-5 alkil supstituiran s 1 R4, C2-5 alkenil supstituiran s 1 R4 i C2-5 alkinil supstituiran s 1 R4; R3 je, pri svakoj pojavi, neovisno odabran između C1-4 alkil, OH, C1-4 alkoksi, F, Cl, Br, I, NR5R5a, NO2, CN, C(O)R6, NHC(O)R7 i NHC(O)NR5R5a; alternativno, ako su nazočna dva R3 vezana na susjedne atome ugljika, mogu se kombinirati i tvoriti -OCH2O-; R4 je odabran između: C3-5 cikloalkil supstituiran s 0-2 R3, fenil supstituiran s 0-2 R3 i 5-6-eročlani heterociklički sustav koji sadrži 1-3 heteroatoma odabranih između O, N i S, supstituiran s 0-1 R3; R5 i R5a su neovisno odabrani između H, CH3 i C2H5; R6 je odabran između H, OH, CH3, C2H5, OCH3, OC2H5 i NR5R5a; R7 je odabran između CH3, C2H5, OCH3 i OC2H5; R8 je odabran između H, ciklopropil, CH3 i C2H5; a n je odabran između 0, 1, 2 i 3.

3. Spoj prema Zahtjevu 2, naznačen time, što: R1 je odabran između CF3 i C2F5; R2 je odabran između C1-3 alkil supstituiran s 1 R4, C2-3 alkenil supstituiran s 1 R4 i C2-3 alkinil supstituiran s 1 R4; R3 je, pri svakoj pojavi, neovisno odabran između C1-3 alkil, OH, C1-3 alkoksi, F, Cl, Br, I, NR5R5a, NO2, CN, C(O)R6, NHC(O)R7 i NHC(O)NR5R5a; alternativno, ako su nazočna dva R3 vezana na susjedne atome ugljika, mogu se kombinirati i tvoriti -OCH2O-; R4 je odabran između: C3-5 cikloalkil supstituiran s 0-2 R3, fenil supstituiran s 0-2 R3 i 5-6-eročlani heterociklički sustav koji sadrži 1-3 heteroatoma odabranih između O, N i S, supstituiran s 0-1 R3; R5 i R5a su neovisno odabrani između H, CH3 i C2H5; R6 je odabran između H, OH, CH3, C2H5, OCH3, OC2H5 i NR5R5a; R7 je odabran između CH3, C2H5, OCH3 i OC2H5; R8 je odabran između H, CH3 i C2H5; a n je odabran između 0, 1 i 2.

4. Spoj prema Zahtjevu 3, naznačen time, što: R1 je CF3; R2 je odabran između C1-3 alkil supstituiran s 1 R4, C2-3 alkenil supstituiran s 1 R4 i C2-3 alkinil supstituiran s 1 R4; R3 je, pri svakoj pojavi, neovisno odabran između C1-3 alkil, OH, C1-3 alkoksi, F, Cl, NR5R5a, NO2, CN, C(O)R6, NHC(O)R7 i NHC(O)NR5R5a; alternativno, ako su nazočna dva R3 vezana na susjedne atome ugljika, mogu se kombinirati i tvoriti -OCH2O-; R4 je odabran između: ciklopropil supstituiran s 0-1 R3, fenil supstituiran s 0-2 R3 i 5-6-eročlani heterociklički sustav koji sadrži 1-3 heteroatoma odabranih između O, N i S, supstituiran s 0-1 R3, pri čemu je heterociklički sustav odabran između: 2-piridil, 3-piridil, 4-piridil, 2-furanil, 3-furanil, 2-tienil, 3-tienil, 2-oksazolil, 2-tiazolil, 4-izoksazolil i 2-imidazolil; R5 i R5a su neovisno odabrani između H, CH3 i C2H5; R6 je odabran između H, OH, CH3, C2H5, OCH3, OC2H5 i NR5R5a; R7 je odabran između CH3, C2H5, OCH3 i OC2H5; R8 je odabran između H, CH3 i C2H5; a n je odabran između 1 i 2.

5. Spoj prema Zahtjevu 4, naznačen time, što ima formulu Ia: [image]

6. Spoj prema Zahtjevu 4, naznačen time, što ima formulu Ia: [image]

7. Spoj prema Zahtjevu 1, naznačen time, što je odabran između: (+/-)-6-kloro-4-ciklopropiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon; (+/-)-6-kloro-4-(2-piridil) etinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon; (+/-)-6-kloro-4-feniletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon; (+/-)-.4-ciklopropiletinil-6-metoksi-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon; (+/-)-6-metoksi-4-(2-piridil)etinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon; (+/-)-6-metoksi-4-feniletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon; (+/-)-4-ciklopropiletinil-5,6-difluoro-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon; (+/_)-5,6-difluoro-4-(2-piridil)etinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon; (+/-)-5,6-difluoro-4-feniletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon; (+/-)-4-ciklopropiletinil-6-fluoro-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon; (+/-)-6-fluoro-4-(2-piridil)etinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1 H)-kvinazolinon; (+/-)-6-fluoro-4-feniletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvlnazolinon; (+/-)-6-fluoro-4-(2'-2-piridil)etil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvlnazolinon; (+/-)-6-fluoro-4-feniletil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon; (-)-6-kloro-4-ciklopropiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon; (+)-6-kloro-4-ciklopropiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon; (+)-4-ciklopropiletinil-5,6-difluoro-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon; (-)-4-ciklopropiletinil-5,6-difluoro-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvlnazolinon; (+)-4-E-ciklopropiletenil-5,6-difluoro-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon i (-)-6-kloro-4-E-ciklopropiletenil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon; ili njihovih farmaceutski prikladnih soli.

8. Spoj formule II: [image] ili njegov stereoizomer, ili njegova farmaceutski prikladna sol, naznačen time, što: R2 je C≡C-R4a; R3 je odabran između C1-4 alkil, OH, C1-4 alkoksi, F, Cl, Br, I, NR5R5a, NO2, CN, C(O)R6, NHC(O)R7 i NHC(O)NR5R5a; R4a je odabran između metil, etil, n-propil, i-propil, i-butil, t-butil i i-pentil; R5 i R5a su neovisno odabrani između H i C1-3 alkil; R6 je odabran između H, OH, C1-4 alkil, C1-4 alkoksi i NR5R5a; R7 je odabran između C1-3 alkil i C1-3 alkoksi; R8 je odabran između H, C3-5 cikloalkil i C1-3 alkil, a n je odabran između 0, 1, 2, 3 i 4.

9. Spoj prema Zahtjevu 8, naznačen time, što: R2 je C≡C-R4a; R3 je odabran između C1-4 alkil, OH, C1-4 alkoksi, F, Cl, Br, I, NR5R5a, NO2, CN, C(O)R6 i NHC(O)R7; R4a je odabran između metil, etil, n-propil, i-propil, i-butil, t-butil i i-pentil; R5 i R5a su neovisno odabrani između H, CH3 i C2H5; R6 je odabran između H, OH, CH3, C2H5, OCH3, OC2H5 i NR5R5a; R7 je odabran između CH3, C2H5, OCH3 i OC2H5; R8 je odabran između H, ciklopropil, CH3 i C2H5; a n je odabran između 0, 1 i 2.

10. Spoj prema Zahtjevu 9, naznačen time, što ima formulu IIa: [image]

11. Spoj prema Zahtjevu 9, naznačen time, što ima formulu IIb: [image]

12. Spoj prema Zahtjevu 8, naznačen time, što je odabran između: (+/-)-6-kloro-4-izopropiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon; (+/-)-6-kloro-4-etiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon; (+/-)-4-izopropiletinil-6-metoksi-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon; (+/-)-5,6-difluoro-4-izopropiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon; (+/-)-5,6-difluoro-4-etiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon; (+/-)-5,6-difluoro-4-izopentil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon; (+/-)-6-fluoro-4-izopropiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon; (+/-)-6-fluoro-4-etiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon; (-)-5,6-difluoro-4-izopropiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon; (+)-5,6-difluoro-4-izopropiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon; (-)-5,6-difluoro-4-etiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon i (+)-5,6-difluoro-4-etiletinil-4-trifluorometil-3,4-dihidro-2 (1H)-kvinazolinon; ili njihovih farmaceutski prikladnih soli.

13. Farmaceutski pripravak, naznačen time, što sadrži farmaceutski prikladan nosač i terapijski učinkovitu količinu jednog od spojeva iz Zahtjeva 1-12, ili njihove farmaceutski prikladne soli.

14. Postupak za liječenje infekcije HIV-om, naznačen time, što obuhvaća: primjenu na domaćina, kojem je takvo liječenje potrebno, terapijski učinkovitu količinu jednog od spojeva iz Zahtjeva 1-12, ili njihove farmaceutski prikladne soli.

15. Postupak za liječenje infekcije HIV-om, naznačen time, što obuhvaća kombiniranu primjenu na domaćina, kojem je takvo liječenje potrebno, terapijski učinkovite količine: (a) jednog od spojeva iz Zahtjeva 1-12, ili njegovog stereoizomeričkog oblika, ili smjese stereoizomeričkih oblika, ili njegove farmaceutski prikladne soli; i (b) najmanje jednog spoja odabranog iz skupine koja se sastoji od inhibitora obrnute transkriptaze HIV-a i inhibitora proteaze HlV-a.

16. Postupak prema Zahtjevu 15, naznačen time, što je inhibitor obrnute transkriptaze odabran između AZT, 3TC, ddl, ddC, d4T, delavirdina, derivata TIBO, BI-RG-587, nevirapina, L-697661, LY 73497, Ro 18893, lovirida, trovirdina, MKC-442 i HBY 097, a inhibitor proteaze je odabran između sakvinavira, ritonavira, indinavira, VX-478, nelfinavira, KNI-272, CGP-61755, U-140690 i ABT-378.

17. Postupak prema Zahtjevu 16, naznačen time, U još više preporučenom obliku, inhibitor obrnute transkriptaze je odabran između AZT i 3TC, a inhibitor proteaze je odabran između sakvinavira, ritonavira, nelfinavira i indinavira.

18. Farmaceutski kit koristan za liječenje infekcije HIV-om, naznačen time, što sadrži terapijski učinkovitu količinu: (a) jednog od spojeva iz Zahtjeva 1-12, ili njegovog stereoizomeričkog oblika, ili smjese stereoizomeričkih oblika, ili njegove farmaceutski prikladne soli; i (b) najmanje jednog spoja odabranog iz skupine koja se sastoji od inhibitora obrnute transkriptaze HIV-a i inhibitora proteaze HIV-a, u jednom ili više sterilnih spremnika.