FI93963B - Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten 3H-6H-1,4,5a,8a,-tetra-atsa-asenaftyleeni-3,5(4H)-dionijohdannaisten valmistamiseksi - Google Patents

Description

93963

Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten 3H, 6H-1,4,5a,8a-tetra-atsa-asenaftyleeni-3,5(4H)-dioni- johdannaisten valmistamiseksi 5 Keksintö koskee uusien kaavan I mukaisten 3H, 6H,1,4,5a, 8a-tetra-atsa-asenaftyleeni-3,5- (4H)-dioni-johdannaisten ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistusta, 10 Ρ=Ι—r5 -Υ’τΥ .5 r2 o jossa kaavassa Rx on vety, C1_2-alkyyli, karboksiamidometyyli, 4-kloorifenyyli, bentsyyli tai (4-nitrofenyyli)metyy-20 li, R2 ja R3 tarkoittavat vetyä tai C1.3-alkyyliä, ja R4 on 3-pyridyyli tai oc; jossa R6 ja R7 tarkoittavat toisistaan riippumatta vetyä, klooria, fluoria tai trifluorimetyyliä; R5 on vety tai C1.2-alkyyli, ja katkoviiva tarkoittaa mahdollista sidosta. 30 Nämä yhdisteet ovat käyttökelpoisia verenpainetta alenta-: vina aineina ja/tai aineina kognitiivisten ja niihin liit tyvien hermostollisten käyttäytymisongelmien hoidossa nisäkkäillä.

Alalla on tunnettua käyttää orgaanisia yhdisteitä 35 verenpainetta alentavina aineina ja/tai aineina kognitii- • ♦ 2 93963 visten ja niihin liittyvien hermostollisten käyttäytymisongelmien hoidossa nisäkkäillä.

US-patenttijulkaisussa 4 236 005, Dusza et ai., esitetään substituoituja pyratsolo(1,5-a)pyrimidiinejä ja 5 imidatso(1,5-a)pyrimidiiniyhdisteitä, joilla on kaavat I2 R,-1 N Ί- R-i 10 "4

N

X2 I3 15 R1 15 1 | s.

joissa R;l on vety tai 1-3 hiiliatomia sisältävä alkyyli; R2 valitaan ryhmästä fenyyli, orto-trifluorimetyylifenyy-20 li, meta-trifluorimetyylifenyyli ja meta-metoksifenyyli; R3 on vety, fluori, kloori, bromi, syaani, syaanimetyyli, karbamoyyli tai 1-3 hiiliatomia sisältävä alkyyli; R4 valitaan ryhmästä vety, fluori, kloori, bromi, formyyli, karboksyyli, syaani, hydroksimetyyli, N-hydroksiformimido-25 yyli, 1-3 hiiliatomia sisältävä alkyyli,

0 0 O

il II II

-C-R, -C-0-R, -CH2-0-R, -CH=N-0-R, -C-OfCH^O-R,

30 0 0 ✓ R

Il II X

-C-0-(CH2)2-NH-R tai -C-0-(CH2)2-N ^

^ R

jossa R on 1 - 3 hiiliatomia sisältävä alkyyli; jotka vai-35 kuttavat keskushermostoon ja jotka ovat käyttökelpoisia rauhoittavina aineina.

Il 3 93963 US-patenttijulkaisussa 4 281 000, Dusza et ai., esitetään pyratsolo( 1,5-a)pyrimidiiniyhdisteitä, joilla on kaava 5 .-// V- *3 10 jossa Ri on vety tai 1-3 hiiliatomia sisältävä alkyyli; R2 valitaan ryhmästä O*' θ'” Ό » is Ν· j o y*’ .

Hl 20 jossa R’ on vety tai 1-3 hiiliatomia sisältävä alkyyli; R3 on vety, fluori, kloori, bromi, syaani, syaanimetyyli, karbamoyyli tai 1-3 hiiliatomia sisältävä alkyyli; R4 valitaan ryhmästä vety, fluori, kloori, bromi, formyyli, karboksyyli, syaani, hydroksimetyyli, N-hydroksiformimido-25 yyli, 1-3 hiiliatomia sisältävä alkyyli, 0 0 0

Il II II

-C-R, -C-O-R, -CH2-0-R, -CH=N-0-R, -C-OfCH^O-R,

30 O O /R

Il II /

-C-0-(CH2)2-NH-R ja -C-0-fCH24^-N

^R

jossa R on 1 - 3 hiiliatomia sisältävä alkyyli; jotka vai-35 kuttavat rauhoittavasti.

\ · 4 93963 t US-patenttijulkaisussa 4 178 449, Dusza et ai., kuvataan substituoituja pyratsolo(1,5-a)pyrimidiinejä ja imidatso(1,5-a)pyrimidiinejä, joilla on kaavat r2 *n^^NV-R3 k>=L-R4 10 ?2 ?3 15 joissa R2, R2, R3 ja R4 merkitsevät samaa kuten kaavojen (I) ja (II) yhteydessä; jotka vaikuttavat rauhoittavasti.

US-patenttihakemuksessa Serial No. 07/278 296,

Epstein et ai., jätetty 30.11.1988, nyt hyväksytty, esitetään yhdisteitä, joilla on kaava 20

R3—Γ——N

rr r2 R.

jossa Rx ja R2 kumpikin itsenäisesti valitaan ryhmästä ve-ty, (C1-C4)-alkyyli, bentsoyyli, mono- tai disubstituoitu 30 bentsoyyli, jossa substituentit ovat (Cj-C^-alkyyli, ♦ (Ci-CgJ-alkoksi, (C2-C7)-asyylioksi, halogeeni, nitro tai trifluorimetyyli, ja ryhmät, joilla on kaavat 0 0 0 0

Il II II H

35 -c-cf3, -c-ch2-ci, -c-o-ch2ch3, -C-0CH2CC13, li 5 93963 -'•cV"iy)' -<Q> , 5

tai —fCH^R

jossa n on kokonaisluku 1 - 3 ja R on hydroksi, 4-morfoli-nyyli, lH-imidatsol-l-yyli, -CH( (C1-C3)-alkoksi)2, a-hyd-10 roksibentsyyli, fenyyli tai mono- tai disubstituoitu fe-nyyli, jossa substituentit ovat halogeeni tai (C^-Cgkalkyyli; Rx ja R2 yhdessä niihin liittyneen typen kanssa ovat 4-morfolinyyli tai ryhmä, jolla on kaava -N(CH2)m, jossa m on kokonaisluku 2 - 6; R3 on vety tai (Cx-C6kalkyyli, R4 on 15 vety, halogeeni, (C^-Cjkaikoksi, (Ci-C3)-alkyyli tai tri-fluorimetyyli; ja R5 on vety tai (C3-C6)-alkyyli; jotka ovat käyttökelpoisia kognitiivisten ja niihin liittyvien hermostollisten käyttäytymishäiriöiden hoidossa tasalämpöisillä eläimillä.

20 US-patenttijulkaisussa 4 713 387, Francis et ai., esitetään triatsolokinatsoliiniyhdisteitä, joilla on kaava /-jn-"1 : 25

: CAI

N^X

«2 30 jossa Ri on mahdollisesti substituoitu fenyyli, pyridyyli, • furyylitienyyli, dihydro- tai tetrahydrofuranyyli tai « * -tienyyli, pyranyyli tai O-ribofuranosyyli; R2 on vety tai alempi alkyyli; X on happi, rikki tai NR3, jossa R3 on vety, alempi alkyyli, aryyli(alempi alkyyli), sykloalkyyli, 35 alempi alkenyyli, jossa tyydyttymätön sidos on erotettu 6 93963 typpiatomista vähintään yhdellä tyydyttyneellä hiiliatomilla, alempi alkynyyli, jossa tyydyttymätön sidos on erotettu typestä vähintään yhdellä tyydyttyneellä hiiliatomilla, aryyli, amino(alempi alkyyli), (alempi alkyyli)-5 amino(alempi alkyyli), di(alempi alkyyli)amino(alempi alkyyli) tai hydroksi(alempi alkyyli); ja rengas A on subs-tituoimaton tai substituoitu alemmalla alkyylillä, alemmalla alkoksilla, hydroksilla, halogeenillä, trifluorime-tyylillä, nitrolla, aminolla, alemmalla alkyylitiolla, 10 alemmalla alkyylisulfonyylillä, alemmalla alkyylisulfinyy- lillä tai aryyli(alemmalla alkoksilla); jotka ovat käyttökelpoisia adenosiinin antagonisteina ja bentsodiatsepiinin antagonisteina.

Mainittakoon myös US-patenttijulkaisu 4 614 732, 15 Hamilton et ai., jossa esitetään N6-asenaftyyliadenosiine-ja ja niiden analogeja, jotka ovat käyttökelpoisia verenpainetta alentavina aineina nisäkkäillä. Tässä yhteydessä voidaan lisäksi mainita US-patenttijulkaisut 4 916 137 ja 4 521 422. Kyseiset tunnetut yhdisteet eroavat kuitenkin 20 sekä rakenteeltaan että biologisilta ominaisuuksiltaan selvästi nyt kuvatuista uusista yhdisteistä.

Mikään edellä mainituista patenttijulkaisuista ei esitä nyt kuvattuja kaavan I mukaisia 2,4,8-trisubstituoi-tuja 3H,6H-1,4,5a,8a-tetra-atsa-asenaftyleeni-3,5(4H)-25 dioneja. Yllättävästi kaavan I mukaisilla dioniyhdisteil-lä on verenpainetta alentavaa aktiivisuutta ja ne ovat käyttökelpoisia aineina kognitiivisten ja niihin liittyvien hermostollisten käyttäytymisongelmien hoidossa nisäkkäillä.

30 Erityisen edullisia yhdisteitä ovat 7-(3-(trifluo- • rimetyyli )fenyyli)-3H, 6H-1,4, 5a, 8a-tetra-atsa-asenaf tylee- ni-3,5(4H)-dioni;7,8-dihydro-8-(3-trifluorimetyyli)fenyy-li-3H, 6H-1,4,5a, 8a-tetra-atsa-asenaftyleeni-3,5(4H)-dioni; 8-( 2,5-dikloorifenyyli )-2-metyyli-3H, 6H-1,4,5a, 8a-tetra-35 atsa-asenaftyleeni-3,5(4H)-dioni; 4-metyyli-8-(3-trifluo- 7 93963 rimetyyli )fenyyli )-3H, 6H-1,4, 5a, 8a-tetra-atsa-asenaftylee-ni-3,5(4H)-dioni;8-(3-pyridinyyli)-3H,6H-1,4,5a,8a-tetra-atsa-asenaf tyleeni-3 ,5(4H)-dioni; 4-(4-kloorifenyyli)-8-(3-trifluorimetyyli )fenyyli )-3H, 6H-1,4, 5a, 8a-tetra-atsa-5 asenaftyleeni-3,5(4H)-dioni; 3,5-diokso-8-(3-trifluorime- tyyli)fenyyli-3H,6H-1,4,5a,8a,tetra-atsa-asenaftyleeni-4(5H)-asetamidi;4-etyyli-8-(3-(trifluorimetyyli)fenyyli)-3H,6H-1,4,5a,8a-tetra-atsa-asenaftyleeni-3,5(4H)-dioni; 4-((4-nitrofenyyli)metyyli)-8-(3-(trifluorimetyyli)fenyy-10 li)-3H,6H-1,4,5a,8a-tetra-atsa-asenaftyleeni-3,5(4H)-dio ni; ja 4-(fenyylimetyyli)-8-(3-trifluorimetyyli)fenyyli)-3H,6H-1,4,5a,8a-tetra-atsa-asenaftyleeni-3,5(4H)-dioni.

Kaavan I mukaisia uusia yhdisteitä saadaan yleensä väriltään valkeasta vaalean keltaiseen vaihtelevina kiin-15 teinä aineina, joilla on ominaiset sulamispisteet ja ab-sorptiospektrit. Ne ovat yleensä liukoisia orgaanisiin liuottimiin kuten alempiin alkanoleihin, asetonitriiliin, kloroformiin, dikloorimetaaniin, N,N-dimetyyliformamidiin, dioksaaniin, tolueeniin ja vastaaviin, mutta yleensä ne 20 ovat liukenemattomia veteen.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja voidaan valmistaa siten, että a) yhdiste, jonka kaava on 25 R4 K2 N ^C-OCoHc I II 2 5 0=C 0

30 I

HN-Rj^ • « • · jossa Rx, R2, R3, R4, R5 ja katkoviiva tarkoittaa samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan emäksen kanssa, tai b) yhdiste, jonka kaava on 8 93963 i4 H/' ^^ ^C-NH,

5 H I

jossa R2, R3, R4, R5 ja katkoviiva tarkoittavat samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on 10 0

Z-C-Z

/= N

jossa Z on ij I, Cl tai metoksi, inertissä liuottimes-15 \=J

sa, jolloin saadaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa Rx on vety, ja haluttaessa saatu yhdiste saatetaan reagoimaan alkylointiaineen kanssa jolloin saadaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa Rx on C^-alkyyli, karboksiamidometyyli, 4-20 kloorifenyyli, bentsyyli tai (4-nitrofenyyli)metyyli.

Loppu- ja välituotteiden valmistusta voidaan kuvata seuraavilla reaktiokaavioilla: 9 93963 i4

/Νχ n X

N '^1 R5 G = NH? "

J I -^ + 2—C—Z

J=J-C-G vb Ivb 5 ^ ST n V 0 X = 0_ dioksaani tai ^r° — OEt. j tetrahydrofuraani - r=p ,, i ·υυύ

>Γ1Λ^ν ,rV"VH

B3 I_I _· .. R2 0 15 R2“IIIb I 0 0=C -r HN Ilia D v

I R|Y

R, Ha 20

NaOH NaH DMF

v ?=—*5 ·: 25 η4Ί^νυ\° "ΊΓ^Υι ,3 yV·^ T h R~ 0 r2 o * la lb 30 • · joissa Rlf R2, R3, R4, r5 ja katkoviiva tarkoittavat samaa kuin edellä, X on happi, G on NH2 tai etyyliesteri (OEt), 35 Y on bromi tai jodi ja Z on 10 93963

^=N

N

9 5 kloori tai metoksi.

Kuten edellä on esitetty, (1) 2,7-disubstituoitu 4,5-dihydro- tai 4,5,6,7-tetrahydropyratsolo(1,5-aJpyrimi-diini-3-karboksyylihappo, etyyliesteri (Va) (valmistettu kuten on kuvattu yleisesti viitatussa US-patenttijulkai-10 sussa 4178449) saatetaan reagoimaan substituoidun isosyanaatin kanssa, jolla on kaava R^NCO (IVa), jossa Rx on kuten edellä on määritelty, inertissä liuottimessa kuten tolueenissa kuumentamalla palautusjäähdytyslämpötilassa 4-96 tunnin ajan, jolloin saadaan vastaava 4-substituoi-15 tu aminokarbonyyli-4,5-dihydro- tai 4,5,6,7-tetrahydropy-ratsolo(1,5-a)pyrimidiini-3-karboksyylihappo,etyyliesteri (lila). 4-substituoitu aminokarbonyyli, etyyliesteri (lila) saatetaan sitten reagoimaan emäksen kuten natrium-hydroksidin kanssa sekoittaen noin 120 °C:ssa 2-5 tun-20 tia. Reaktioseoksen annetaan sitten jäähtyä huoneen lämpötilaan. Muodostuva kiinteä aine kerätään ja pestään vedellä ja tämän jälkeen jääetikalla ja sitten kuivataan vakuumissa, jolloin saadaan 2,4,8-trisubstituoituja 3H, 6H1,4,5a,8a-tetra-atsa-asenaftyleeni-3,5(4H)-dioneja 25 tai 7,8-dihydro-2,4,8-trisubstituoituja 3H,6H-1,4,5a,8a-tetra-atsa-asenaftyleeni-3,5(4H)-dioneja (Ia).

Vaihtoehtoisesti (2) 2,7-disubstituoitu 4,5-dihydro- tai 4,5,6,7-tetrahydropyratsolo(1,5-a)pyrimidiini-3-karboksiamidi (Vb) (valmistettu pelkistämällä pyratsolo-30 (1,5-a)pyrimidiini tavalla kuten on kuvattu US-patentti- julkaisussa 4 847 256, Tseng et ai.) saatetaan reagoimaan 1,1'-karbonyylidi-imidatsolin, fosgeenin tai dimetyyli-karbonaatin ja vastaavan (IVb) kanssa typessä inertissä liuottimessa kuten p-dioksaanissa tai tetrahydrofuraanissa 35 kuumentamalla palautusjäähdytyslämpötilassa 4-96 tunnin ajan, jolloin saadaan vastaava 2,8-disubstituoitu 3H,6H-

II

9S963 11 1,4,5a,8a-tetra-atsa-asenaftyleeni-3,5(4H)-dioni tai 7,8-dihydro-2,8-disubstituoitu 3H,6H-1,4,5a,8a-tetra-atsa-asenaftyleeni-3,5(4H)-dioni (Illb). Dioni (Illb) voidaan sitten alkyloida typessä huoneen lämpötilassa liuottimessa 5 kuten Ν,Ν-dimetyyliformamidissa ja vastaavassa käyttäen natriumhydridiä emäksenä alkylointiaineen (Ha) kanssa, kuten metyylijodidin, 2-jodiasetamidin, jodietaanin, 4-nitrobentsyylibromidin tai bentsyylibromidin ja vastaavien kanssa 6-60 tuntia. Liuottimen haihduttaminen antaa 10 kiinteän aineen, joka pestään vedellä, suodatetaan ja puhdistetaan tavanomaisella tavalla käyttäen liuottimia kuten kloroformia, dikloorimetaania, eetteriä, heksaania, asetonitriiliä, Ν,Ν-dimetyyliformamidia ja vastaavia, jolloin saadaan 2,4,8-trisubstituoituja 3H,6H-1,4,5a,8a-tet-15 ra-atsa-asenaftyleeni-3,5(4H)-dioneja tai 7,8-dihydro- 2,4,8-trisubstituoituja3H,6H-1,4,5a,8a-tetra-atsa-asenaf-tyleeni-3,5(4H)-dioneja (Ib).

4,5-dihydropyratsolo(1,5-a)pyrimidiinivälituoteyh-disteet valmistettiin yleisesti seuraavasti: pyratsolo-20 (1,5-a)pyrimidiini, jossa on vety, fenyyli, substituoitu fenyyli tai 3-pyridinyyli C-7-asemassa ja elektroneja puoleensa vetävä ryhmä C-3-asemassa, saatettiin reagoimaan natriumsyaaniboorihydridin kanssa sekoittamalla jääetikas-sa inertissä atmosfäärissä jäähauteessa noin tunnin ajan, 25 sitten huoneen lämpötilassa 1-12 tuntia ja muodostunut saostuma kerättiin ja pestiin vedellä. Kiinteä aine liuotettiin inerttiin liuottimeen kuten dikloorimetaaniin tai asetonitriiliin ja vastaavaan ja pestiin kyllästetyllä natriumbikarbonaatilla. Orgaanisen faasin erottaminen ja 30 haihduttaminen antoi dihydroraakatuotteen, joka uudelleen- .. kiteytettiin liuottimesta kuten isopropyylialkoholista tai • « « asetonitriilistä ja vastaavasta tai liuottimien seoksesta kuten eetteri-heksaanista, kloroformi-metanolista tai N,N-dimetyyliformamidi-asetonitriilistä ja vastaavasta.

35 Kun dihydrotuote pelkistettiin trietyylisilaanilla trifluorietikkahapossa 60 °C:ssa 1-24 tunnin ajan mene- • · 12 93963 telmän mukaan, jonka Lanzilotti et ai. ovat kuvanneet julkaisussa J. Org. Chem., 44, 4809 (1979), ja reaktioseos ympäristön lämpötilassa tehtiin heikosti emäksiseksi (pH 9) vesipitoisella kaliumhydroksidilla, 4,5,6,7-tetra-5 hydropyratsolo(1,5-a)pyrimidiinituote saostui, sitten se eristettiin ja puhdistettiin uudelleenkiteyttämällä tai kromatografiällä.

Pyratsolo(1,5-a)pyrimidiinejä esitetään US-patent-tijulkaisuissa 4 178 449, 4 236 005, 4 281 000 ja 10 4 521 422. Niitä valmistetaan kondensoimalla 3-amino- pyratsoleja ja substituoituja 3-aminopyratsoleja 1,3-kar-bonyyliyhdisteiden kanssa, kuten on kuvattu julkaisussa J. Med. Chem. 18, 645 (1974); J. Med. Chem. 18, 460 (1975); J. Med. Chem. 20, 386 (1977); Synthesis, 673 15 (1982); ja niihin sisältyvissä viitteissä.

On havaittu, että natriumsyaaniboorihydridin käyttö etikkahapossa tarjoaa yksinkertaisen, sopivan, regioselek-tiivisen tavan pelkistää pyratsolo(1,5-a)pyrimidiinejä ja niiden johdannaisia, joissa on funktionaalisia ryhmiä, 20 kuten halogeeneja, nitriilejä, amideja, amidiineja, este-reitä, karboksyylihappoja ja aryyliketoneja, ilman että nämä ryhmät pelkistetään, ja antaen lopputuotteita suuremmin saannoin kuin saatiin muilla pelkistysaineilla. Itse asiassa tiettyihin edellä kuvatuista funktionaalisista 25 ryhmistä muiden pelkistysaineiden tiedetään vaikuttavan, jolloin muodostuu tuotteiden seoksia, jotka vaativat aikaa vieviä erotusmenetelmiä halutun tuotteen saamiseksi.

Tietyissä tapauksissa pyratsolo(1,5-a)pyrimidiini-johdannaisten pelkistäminen natriumsyaaniboorihydridillä 30 jääetikassa johtaa pelkistykseen tetrahydrojohdannaiseksi dihydrotuotteeksi pelkistämisen ohella.

Toinen tehokas tapa pelkistää pyratsolo(1,5-a)pyri-midiinejä on käyttää hyväksi natriumboorihydridiä jääetikassa. Vaikka tämä menetelmä on tehokas, se ei anna yhtä 35 suuria saantoja kuin mitä saadaan käytettäessä natrium-syaaniboorihydridiä. Tämä ero voisi johtua siitä, että

II

13 93963 natriumsyaaniboorihydridi on stabiilimpi jääetikassa kuin natriumboorihydridi. Havaittu on myös, että kun natrium-boorihydridi saatetaan reagoimaan pyratsolo(1,5-a)pyrimi-diinijohdannaisen kuten 7-(4-kloorifenyyli)-5-metyylipy-5 ratsolo(1,5-a)pyrimidiini-3-karbonitriilin tai 7-(3-kloo- rifenyyli ) -5-metyylipyratsolo( 1,5-a)pyrimidiini-3-karbo-nitriilin kanssa tetrahydrofuraanirmetanolissa (1:1) sekoittamalla huoneen lämpötilassa 24 tuntia tai 55 eC:ssa 6 tuntia, saadaan vastaava tetrahydroyhdiste.

10 Vielä toinen tapa pelkistää pyratsolo(1,5-a)pyrimi- diinejä tai pelkistää 4,5-dihydropyratsolo(1,5-a)pyrimi-diinejä edelleen 4,5,6,7-tetrahydromuodoksi on hydrata yhdiste katalyyttisesti ravistamalla sopivassa laitteessa, kuten Parr-ravistimessa liuottimen kuten etyyliasetaatin, 15 N,N-dimetyyliformamidin tai vastaavan kanssa katalyytin läsnä ollessa kuten 10 % Pd/C:tä läsnä ollessa alussa vallitsevassa vetypaineessa, joka on 5 - 30 lbs, kunnes vedyn vastaanottaminen on täydellinen, minkä jälkeen pelkistys-tuote erotetaan ja puhdistetaan tavanomaisin menetelmin. 20 Kaavan I mukaiset uudet yhdisteet ovat aktiivisia verenpainetta alentavina aineina ei-myrkyllisinä annoksina annosteltaessa niitä nisäkkäille. Nämä yhdisteet testattiin verenpainetta alentavan aktiivisuuden suhteen menetelmällä, jonka on esittänyt P.S. Chan ja D.W. Poorvin, 25 Clinical and Experimental Hypertension, 1 (6), 817-830 (1979). Testissä käytetään Okamoto-kannan urospuolisia, 16 viikon vanhoja, luonnostaan kohonneen verenpaineen omaavia rottia, joiden keskimääräinen valtimoverenpaine on 160 ± 1,5 mmHg. Yhdestä kolmeen rottaa käytetään testiyhdistettä 30 kohden. Rotalle annostellaan testiyhdistettä letkulla, ; joka yhdiste on suspendoitu 2 prosenttiseen esikiehautet- « ·« tuun tärkkelykseen pitoisuutena 50 mg/ml, annoksen ollessa 100 mg/kg kehon painoa tai vähemmän, yhdessä 0,9 prosenttisen natriumkloridiannoksen kanssa annoksena 25 ml/kg 35 kehon painoa. Toinen samanlainen annos testiyhdistettä ilman natriumkloridiannosta annetaan 24 tuntia myöhemmin.

•« 14 93963 28 tunnin kuluttua alkuannoksesta valtimoverenpaineen keskiarvo mitataan edellä mainitulla menetelmällä, jonka on esittänyt Chan ja Poorvin. Menetelmä toistetaan toisella ja kolmannella rotalla mikäli tarpeellista.

5 Tämän testin tulokset kaavan I mukaisilla yhdis teillä on esitetty alla taulukossa I.

Taulukko I

10 Valtimoverenpaineen keskiarvon alentaminen luonnostaan kohonneen verenpaineen omaavissa rotissa

_Yhdiste_ MABP/mm HG

(rottien lkm) 15 8-(3-pyridinyyli)-3H-6H-l,4,5a,8a- 113(1) tetra-atsa-asenaftyleeni-3,5(4H)-dioni 4-etyyli-8-(3-trifluorimetyyli)fenyyli)- 130(2) 3H,6H-1,4,5a,8a-tetra-atsa-asenaftyleeni-3,5(4H)-dioni 20 4-((4-nitrofenyyli)metyyli-8-(3-(trifluo- 110(1) rimetyyli)fenyyli)-3H,6H-1,4,5a,8a-tetra-atsa-asenaftyleeni-3,5-(4H)-dioni MABP = valtimoverenpaineen keskiarvo 25

Kaavan I mukaisilla uusilla yhdisteillä on kyky lisätä hermoston toimintaa tasalämpöisillä eläimillä, joilla esiintyy neurologisia käyttäytymisongelmia, kuten esim. havainnon huonontumista liittyen heikentyneeseen 30 hermoston toimintaan, jota esiintyy aivojen vaajaatoimin-nan, ikääntymisen, dementian ja samanlaisten olosuhteiden yhteydessä.

Hypoksinen eloonjäämis- (Hypoxic Survival) testi on käyttökelpoinen in vivo -testi mitattaessa keskushermos-35 toon vaikuttavien lääkeaineiden tehokkuutta lisäämään t 15 93963 eloonjäämistä happiniukassa ympäristössä tunnetun para-sympaattikusta kiihottavan aineen fysostigmiinin suhteen. Tämä koe osoittaa, että eläimiä jää enemmän eloon happiniukassa ympäristössä sen jälkeen kun ne on käsitelty lää-5 keaineella verrattuna suolaliuoksella käsiteltyihin kont-rollieläimiin.

Laajamittainen testaus on osoittanut, että olosuhteissa, joissa on 10 % happea, ainoastaan 5 - 10 % kont-rollihiiristä (käsitelty suolaliuoksella) jää eloon 5 mi-10 nuutin kuluttua, kun taas 60 - 80 % fysostigmiinillä käsitellyistä hiiristä jää eloon. Lääkeaineet injektoidaan vatsaontelonsisäisesti hiiriryhmille 30 minuuttia ennen niiden asettamista happiniukkaan seokseen, ja eloonjääminen mitataan. Tämän testin selitys on se, että lääkeai-15 neet, jotka lisäävät eloonjäämistä happiniukissa olosuhteissa ilman myötäseuraavaa masennusta tai rauhoittavia sivuvaikutuksia, voivat toimia niin lisäämällä aivojen aineenvaihduntaa, ts. parantamalla energian saantia tarpeeseen nähden ja niin turvaamalla normaali aivojen toiminta 20 olosuhteissa, joissa vallitsee vähentynyt energian vaihdunta. Kun otetaan huomioon, että aivot ovat riippuvaisia jatkuvasta energian saannista, niin lääkeaineilla, joilla on tämä ominaisuus, voi olla kauaskantoisia terapeuttisia indikaatioita, kuten mm. halvauksesta ja pään sisäisistä .. 25 vahingoista toipuminen ja ikään liittyvien keskushermoston vajaatoiminnan vahingollisten vaikutusten väheneminen. Esimerkiksi ikääntyneillä ja dementiaa sairastavilla vanhoilla ihmisillä energian vaihdunnassa esiintyvien puutosten ajatellaan vaikuttavan merkittävästi ikääntymisen neu-30 rokemiallisiin ja neurofysiologisiin toimintahäiriöihin.

Ryhmä, jossa on 20 Royal Hart -hiirtä (6 viikon ikäisiä), injektoidaan vatsaontelonsisäisesti testiyhdis-teellä (1 - 200 mg/kg) 30 minuuttia ennen niiden asettamista happiniukkaan seokseen (10 % happea 90 %:ssa hiili-35 dioksidia), ja eloonjääminen mitataan 5 minuutin kuluttua.

16 93963

Erillinen ryhmä, jossa on 20 hiirtä, injektoidaan vat-saontelonsisäisesti suolaliuoksella (0,01 cm3/g kehon painoa) ja menetellään kuten edellä on kuvattu.

Vielä toinen ryhmä, jossa on 20 hiirtä, injektoi-5 daan vatsaontelonsisäisesti määrällä 0,125 mg/kg fysostig-miiniä ja menetellään kuten edellä on kuvattu.

Tämän testin tulokset kaavan I mukaisella yhdisteellä on esitetty taulukossa II.

10 Taulukko II

Hypoksinen eloonjäämistesti

Yhdiste annos % eloonjääneitä 15 mg/kg 7,8-dihydro-8-(3-(trifluo- 100 60 rimetyyli)fenyyli-3H,6H-1,4,5a,8a-tetra-atsa-ase-naftyleeni-3,5(4H)-dioni 20

Toinen in vivo -testi liittyen heikentyneeseen hermoston toimintaan nisäkkäillä on passiivisen välttämisen hapenpuutteen aiheuttama muistinmenetyksen testi (Passive Avoidance Anoxic Induced Amnesia Test). Tätä testiä käyte-25 tään määrittämään hapenpuutteen aiheuttaman muistittomuuden vähentyminen hiirillä, jotka on käsitelty lääkeaineella, verrattuna suolaliuoksella käsiteltyihin kontrolli-eläimiin, joille ei ole annettu lääkeainetta.

Shokin aiheuttamaa, yksittäiskokeellista, vaiheit-30 täistä passiivista välttämismenettelyä käytetään. 25 kes-ki-ikäisen Swiss-Webster -hiiren muodostama ryhmä (9 kuukauden ikäisiä) laitetaan yksittäin 2-kammioisen laatikon etukammioon ja niiden annetaan vapaaehtoisesti kulkea ta-kakammioon. Heti kun hiiri astuu takakammioon, ovi auto-35 maattisesti ottaa hiiren kiinni ja heikko sähköinen shokki

II

17 93963 (0,4 mA 4 sekunnin ajan) kohdistetaan sen jalkoihin. Jalkaan kohdistuneen iskun jälkeen hiiret laitetaan aluksi hapettomaan ympäristöön (0 % happea) 12 sekunniksi, mikä nopeasti aiheuttaa tiedottomuuden. Sitten ne laitetaan 5 happiniukkaan ympäristöön (15 % happea) 4 minuutiksi, mikä pidentää hapenpuutostilaa ylläpitäen tiedottomuuden. Koko testaus suoritetaan 24 tuntia myöhemmin ja kaikissa tapauksissa hiiret näyttävät toipuvan täydellisesti edeltävästä hapettomuus/happiniukasta käsittelystä. Kaikki testiyh-10 disteet annostellaan vatsaontelonsisäisesti annoksena 10 -200 mg/kg 30 minuuttia ennen harjoittamista ja testausta. Kontrollieläimet injektoidaan vatsaontelonsisäisesti ainoastaan suolaliuoksella määrän ollessa 0,01 cm3/g kehon painoa.

15 Viiveaika astua takakammioon tallennetaan sekä har joituksen että testauksen tapauksessa. Todennäköisesti mitä enemmän eläin muistaa saaneensa shokin, sitä enemmän se välttää menemistä takakammioon ja sitä suurempi on viiveaika astua sinne uudelleen. 30 prosentin parannusta suo-20 laliuoksella käsiteltyihin kontrollieläimiin nähden pide tään aktiivisena. Tämän testin tulokset kaavan 1 mukaisella yhdisteellä on esitetty taulukossa III.

Taulukko III

25

Yhdiste Annos Parannus mg/kg % 4-metyyli-8-(3-(trifluori- 100 79 metyyli)fenyyli)-3H,6H-30 1,4,5a,8a-tetra-atsa-asenaf- tyleeni-3,5(4H)-dioni

Kaavan I mukaisten uusien yhdisteiden on havaittu olevan hyvin käyttökelpoisia alentamaan kohonnutta veren-35 painetta nisäkkäillä, kun niitä annostellaan määrinä noin i 18 93963 2,0 - 100 mg/kg kehon painoa vuorokaudessa. Edullinen annostusohje optimitulosten saamiseksi olisi noin 50 mg -750 mg annosta kohden. Tällaisia annostusyksiköitä käytetään niin, että koko määrä 200 mgrsta - 3,0 g:sta ak-5 tiivistä yhdistettä, noin 70 kg painoista kohdetta ajatellen, annostellaan 24 tunnin aikana.

Kaavan I mukaisten yhdisteiden on havaittu olevan käyttökelpoisia kognitiivisten ja niihin liittyvien hermostollisten käyttäytymisongelmien hoidossa nisäkkäillä, 10 kun niitä annostellaan määrinä noin 5 mg - 20 mg/kg kehon painoa vuorokaudessa. Edullinen annostusohje optimitulosten saamiseksi olisi noin 10 mg - 50 mg/kg kehon painoa vuorokaudessa ja tällaisia annostusyksiköitä käytetään niin, että koko määrä noin 700 mg:sta - 3,5 g:sta aktii-15 vista yhdistettä, noin 70 kg painoista kohdetta ajatellen, annostellaan 24 tunnin aikana.

Edellä kuvattua annostusohjetta kohonneen verenpaineen alentamiseksi ja hermostollisten käyttäytymisongelmien hoitamiseksi nisäkkäillä voidaan säätää aikaansaamaan 20 optimaalinen terapeuttinen vaste. Esimerkiksi useita jaettuja annoksia voidaan annostella päivittäin tai annosta voidaan annoksittain vähentää terapeuttisen tilan tarpeen mukaan. Varma käytännön etu on se, että näitä aktiivisia yhdisteitä voidaan annostella millä tahansa sopivalla ta-25 valla kuten suun kautta, laskimonsisäisesti, lihaksensisäisesti tai ihonalaista tietä.

Aktiivisia yhdisteitä voidaan annostella suun kautta esimerkiksi inertin laimentimen kanssa tai assimiloituvan syötävän kantajan kanssa tai ne voidaan sulkea koviin 30 tai pehmeisiin gelatiinikuorikapseleihin tai ne voidaan puristaa tableteiksi tai ne voidaan sisällyttää suoraan perusravintoruokaan. Suun kautta annettavaa terapeuttista annostelua varten näitä aktiivisia yhdisteitä voidaan sisällyttää täyteaineisiin ja käyttää suolistoon liukenevina 35 tabletteina, poskitabletteina, lääkenappeina, kapseleina, • 19 93963 eliksiireinä, suspensioina, siirappeina, vohveleina ja vastaavina. Tällaisten koostumusten ja preparaattien tulisi sisältää vähintään 0,1 % aktiivista yhdistettä. Koostumusten ja preparaattien prosentuaaliset määrät voivat 5 tietysti vaihdella ja ne voivat olla sopivasti noin 2-60 paino-% yksiköstä. Aktiivisen yhdisteen määrä tällaisissa terapeuttisesti käyttökelpoisissa koostumuksissa on sellainen, että sopiva annostus saavutetaan. Edulliset koostumukset tai preparaatit valmistetaan niin, että oraalinen 10 annostusyksikkömuoto sisältää noin 5 - 200 mg aktiivista yhdistettä.

Tabletit, lääkenapit, pillerit, kapselit ja vastaavat voivat sisältää myös seuraavia: sideainetta kuten tra-ganttikumia, akaasiakumia, maissitärkkelystä tai gelatii-15 nia; täyteaineita kuten dikalsiumfosfaattia; hajottavaa ainetta kuten maissitärkkelystä, perunatärkkelystä, algii-nihappoa ja vastaavia; voiteluainetta kuten magnesiumstea-raattia; ja makeutusainetta kuten sakkaroosia, laktoosia tai sakkariinia voidaan lisätä tai makuainetta kuten pi-20 parminttua, talvikkiöljyä tai kirsikkamakua. Kun annostus-yksikkömuoto on kapseli, se voi sisältää edellä kuvatun tyyppisten aineiden lisäksi nestemäistä kantajaa. Erilaisia muita aineita voi olla läsnä päällysteinä tai ne voivat muutoin modifioida annostusyksikön fysikaalista muo-·; 25 toa. Esimerkiksi tabletit, pillerit ja kapselit voidaan päällystää sellakalla, sokerilla tai molemmilla. Siirappi tai eliksiiri voi sisältää aktiivista yhdistettä, sakkaroosia makeutusaineena, metyyli- ja propyyliparabeeniä säilöntäaineena, väriainetta ja makuainetta kuten kirsikan 30 tai appelsiinin makua. Tietysti minkä tahansa aineen, jota käytetään minkä tahansa annostusyksikön valmistamisessa, tulisi olla farmaseuttisesti puhdas ja oleellisesti ei-myrkyllinen käytettyinä määrinä. Lisäksi näitä aktiivisia yhdisteitä voidaan sisällyttää hitaasti vapauttaviin 35 preparaatteihin ja formulaatioihin.

20 93963 Näitä aktiivisia yhdisteitä voidaan annostella myös parenteraalisesti tai vatsaontelonsisäisesti. Näiden vapaana emäksenä tai farmakologisesti hyväksyttävinä suolana olevien aktiivisten yhdisteiden liuoksia tai suspensioita 5 voidaan valmistaa vedessä, johon on sopivasti sekoitettu pinta-aktiivista ainetta kuten hydroksipropyyliselluloo-saa. Dispersioita voidaan valmistaa myös glyserolissa, nestemäisissä polyetyleeniglykoleissa ja niiden seoksia öljyissä. Tavanomaisissa varastointi- ja käyttöolosuhteis-10 sa nämä preparaatit sisältävät säilöntäainetta mikro-organismien kasvun estämiseksi.

Injektoitavaksi sopivia farmaseuttisia muotoja ovat mm. steriilit vesipitoiset liuokset tai dispersiot ja steriilit jauheet steriilien injektoitavien liuosten tai dis-15 persioiden valmistelemattomaan valmistamiseen. Kaikissa tapauksissa muodon täytyy olla steriili ja sen täytyy olla juoksevaa siinä määrin että se voidaan helposti ruiskuttaa. Sen täytyy olla stabiili valmistus- ja varastointi-olosuhteissa ja sen täytyy olla säilötty migro-organismien 20 kuten bakteerien ja sienien kontaminoivaa toimintaa vastaan. Kantaja voi olla liuotin tai dispersioväliaine, joka sisältää esimerkiksi vettä, etanolia, polyolia (esim. glyserolia, propyleeniglykolia ja nestemäistä polyetyleeni-glykolia), niiden sopivia seoksia ja vihannesöljyjä.

25 Seuraavat esimerkit valaisevat keksintöä.

Esimerkki 1 7-(3-(trifluorimetyy1i)fenyyli)pyratsolo(1,5-a)py-rimidiini-3-karboksiamidi

Seosta, jossa on 3,0 g 7-(3-trifluorimetyyli)fenyy-30 li)pyratsolo(1,5-a)pyrimidiini-3-karbonitriiliä (valmis-. tettu kuten on kuvattu US-patenttijulkaisussa 4 236 005) ja 150 ml väkevää rikkihappoa, sekoitetaan huoneen lämpötilassa 4 tuntia. Liuos kaadetaan sitten varovaisesti jääveteen samalla sekoittaen. Muodostuva valkoinen sakka 35 kerätään, pestään vedellä ja sitten kyllästetyllä natrium- • l I! 21 93963 bikarbonaatilla, kunnes pesut ovat neutraaleja. Kiinteää ainetta kuumennetaan yhden litran kanssa isopropyylialko-holia ja suodatetaan. Valkoinen kiinteä aine kuivataan vakuumissa ja saadaan esimerkin mukaista tuotetta värittö-5 mänä kiinteänä aineena, sp. 256 - 258 °C.

Esimerkki 2 7-(2,5-dikloorifenyyli)-2-metyylipyratsolo(l,5-a)-pyrimidiini-3-karboksiamidi

Seosta, jossa on 31,0 g 2',5'-diklooriasetofenonia 10 ja 25 ml N,N-dimetyyliformamididimetyyliasetaalia, kuumennetaan höyryhauteessa 6 tuntia, sitten haihdutetaan kuiviin vakuumissa. Jäännös lietetään heksaanilla, suodatetaan ja saadaan 35,3 g 2',5'-dikloori-3-dimetyyliaminoak-rylofenonia oranssin värisinä kiteinä, sp. 83 - 85 °C.

15 Seosta, jossa on 12,2 g 3-amino-4-syaani-5-metyyli- pyratsolia ja 24,4 g 2',5'-dikloori-3-dimetyyliaminoakry-lofenonia 250 ml:ssa jääetikkaa, kuumennetaan höyryhauteessa 4 tuntia. Seos jäähdytetään ja suodatetaan ja saadaan 21,28 g 7-(2,5-dikloorifenyyli)2-metyylipyratsolo-20 (1,5-a)pyrimidiini-3-karbonitriiliä harmaan valkeina ki teinä.

21,28 g edellistä tuotetta liuotetaan väkevään rikkihappoon ja sekoitetaan 5 tuntia. Liuos kaadetaan varovaisesti jäihin. Muodostuva sakka kerätään suodattamalla, 25 pestään vedellä ja kuivataan, jolloin saadaan esimerkin « mukaista tuotetta värittöminä kiteinä, sp. 234 - 236 eC.

Esimerkit 3-7

Muita pyratsolo(1,5-a)pyrimidiini-3-karboksiamide-ja, joita valmistetaan vastaavista pyratsolo( 1,5-a)pyrimi-30 diini-3-karbonitriileistä esimerkissä 1 kuvatulla tavalla, on lueteltu taulukossa IV.

# 22 93963 in

ID

oo m oo m n cn

α cm cs I

O1' ^ f\| , io m oo X n. **> »n in

i -¾ - £> O- O

1 ro / \ 00 o:—<v 2 •s Y_^

•H

•H

> Ό a m t—I ·Η (N s E as i cj =

ο Ή Λί D

Il % ^ <y I ·Ή ·Η 3 «j n o w η ¢1 X I -Η -Η λ; ι μ ο^Λ en — ό ο ο οο ^ X. ΓΜ (0 ·η ω -Q Η Λ — ι ε -μ d ο μ X m id ιί id wit η -H D X 4-> Μ

4- <—ι W >ι I ro I

π Μ Οι m Cl ro

^ O O -H I >, I

4J "T H „Q I—I ·Η Λ -H

2 rv! 1 W ro >1 -H -H -H

sLerO -P Ai C -H rH-rH

* ιί I ro I 0) T3 >1 Ό

w J- pro 4-1 -H >ί -H

/7 >1 I I E C E

Dj ·Η I *H *H *H

1C ID Ό D

-H -H -H >i -H

\ i—I Ή i—I Dj D Dj -t _ <U >1 Ό >1 — >1 — ·*- \ +> >1 Ή >1 (0 Dj tö ro/ \ W C E 4-ll-H I I Ή c*LJ -» -H <D-H 0> in Ό m in Ό

^ 2 rQ 4-1 D E- -H ~ - -rH

\\ // i>i I «-t E I *~r E

X '/ >r γ-Dj cn —ro r-~-i0 * e

•H

W m «rr m 4

II

23 93963 ΐΰ σ\ .. σ> η Μ ™

° I I

η ^ Γ" S' ^ ^ n rs

Cu <Ν « X s >

Η I I

I X I 42

0 — 0 0 0 U

.*3 I—I 43 w <tJ

M 3 0 P -P M

3 ,y tn (3 <ci .—I 4-> 4-1 M M n

3 (3 (3 t >ι I

(3 -n t-ι m ft -H

E-i — >ι I — C

d Ή Ή *r4

— C rH -H

H *H !>r 3 I—I *H ,r4 >1 Ό Cg

>1 -Η <U -H

c ε ή m

Η ·Η -H

T3 U M d Η ^ Ο Ή P d 3 iö Ό

(D >i — ·Η I—I I -H

4-> d (3 Ό 44 ΙΠ g W I I ·Η I - (3 •r4 41 ΙΠ £ fO f-4 Ή

T3 ^ - t3 — W

43 I Η -H 10.* >4 f'- —’ CO I I—I o i - 24 93963

Esimerkki 8 4,5-dihydro-7- (3- (trifluorimetyyli)fenyyli)pyratso-lo(1,5-a)pyrimidiini-3-karboksiamidi 10,0 g:n määrää 7-(3-(trifluorimetyyli)fenyyli)pyr-5 atsolo(1,5-a)pyrimidiini-3-karboksiamidia (valmistettu esimerkissä 1 kuvatulla tavalla) sekoitetaan typessä suspensiona 120 ml:ssa jääetikkaa (jäähdytetty jäähauteessa) ja sitten 5,5 g natriumsyaaniboorihydridiä lisätään reak-tioseokseen annoksittain vielä 80 ml:n kanssa jääetikkaa.

10 Kun seosta on sekoitettu tunti jäähauteessa, sekoitetaan sitä sitten huoneen lämpötilassa 19 tuntia. Liuos haihdutetaan kuiviin, sitten lisätään vettä ja muodostuva valkoinen sakka kerätään suodattamalla ja pestään natriumbikarbonaatin kyllästetyllä vesiliuoksella, sitten vedellä.

15 Kiinteä aine käsitellään 100 ml:11a asetonitriiliä, eristetään ja kuivataan, jolloin saadaan 5,25 g haluttua tuotetta, joka uudelleenkiteytetään asetonitriilistä, sp. 157 - 160 °C.

Esimerkki 9 20 7- (2,5-dikloorifenyyli) -4,5-dihydro-2-metyylipyrat- solo(1,5-a)pyrimidiini-3-karboksiamidi 3,21 g:n annos 7-(2,5-dikloorifenyyli)-2-metyylipy- ratsolo(1,5-a)pyrimidiini-3-karboksiamidia (esimerkki 2) suspendoidaan 150 ml:aan jääetikkaa ja sekoitetaan typessä .. 25 huoneen lämpötilassa. Sitten 1,5 g natriumsyaaniboorihyd- « ridiä lisätään annoksittain ja sekoitusta jatketaan 3 tuntia. Reaktioseos haihdutetaan kuiviin vakuumissa ja kun vettä lisätään jäännökseen, muodostuu valkoinen sakka.

Tämä kiinteä aine kerätään ja liuotetaan dikloorimetaaniin 30 ja tämä liuos pestään natriumbikarbonaatin kyllästetyllä vesiliuoksella. Sitten orgaaninen faasi kuivataan vedettö-mällä natriumsulfaatilla ja suodatetaan. Suodos haihdutetaan vakuumissa ja saadaan 2,95 g tämän esimerkin mukaista tuotetta valkeana kiinteänä aineena, sp. 93 - 96 °C.

25 93963

Esimerkki 10 4,5-dihydro-7-(3-pyridinyyli)pyratsolo(l,5-a)py-rimidiini-3-karboksiamidi 20,0 g:n määrä 7-(3-pyridinyyli)pyratsolo(1,5-a)-5 pyrimidiini-3-karboksiamidia (valmistettu esimerkissä 5 kuvatulla tavalla) suspendoidaan 200 ml:aan jääetikkaa samalla sekoittaen typessä huoneen lämpötilassa. Sitten 14 g natriumsyaaniboorihydridiä lisätään annoksittain ja seosta sekoitetaan 3 tuntia. Seoksen annetaan seistä huo-10 neen lämpötilassa 16 tuntia ja sitten reaktioseos haihdutetaan kuiviin. Lisätään vettä, sitten kyllästettyä natriumbikarbonaattia kunnes pH on 8,0 ja kumimainen kiinteä aine saostuu. Kiinteä aine kerätään suodattamalla ja liuotetaan asetonitriiliin. Asetonitriili haihdutetaan ja saa-15 daan 10,0 g keltaista kiinteää ainetta (A). Edellä oleva vesipitoinen suodos haihdutetaan kuiviin ja uutetaan ase-tonitriilillä. Haihduttaminen antaa keltaista kumimaista kiinteää ainetta (B). Kiinteät aineet (A) ja (B) yhdistetään ja trituroidaan isopropyylialkoholilla. Keltainen 20 kiinteä aine eristetään ja kuivataan vakuumissa, jolloin saadaan 6,19 g haluttua tuotetta, joka uudelleenkiteyte-tään isopropanoli-asetonitriilistä, sp. 182 - 184 eC.

Esimerkki 11 7-(3-fluorifenyyli)-4,5-dihydropyratsolo(l,5-a)py-25 rimidiini-3-karboksiamidi 136,3 g:n määrää 7-(3-fluorifenyyli)pyratsolo(1,5-a)pyrimidiini-3-karboksiamidia (valmistettu esimerkissä 7 kuvatulla tavalla) yhdessä litrassa jääetikkaa, sekoitetaan huoneen lämpötilassa, siten 83,6 g natriumsyaaniboo-30 rihydridiä lisätään annoksittain typessä. Seosta sekoitetaan 16 tuntia, sitten saostuneet kiteet kerätään suodattamalla ja trituroidaan kyllästetyllä natriumbikarbonaatilla kunnes pH on 7 - 8. Kiteet pestään vedellä ja kuivataan vakuumissa, jolloin saadaan 63,0 g tuotetta kermanvä-35 risinä kiteinä, sp. 122 - 125 eC.

« 26 93963

Esimerkki 12 4,5-dihydro-7- (3- (trif luorimetyyli) f enyyli) pyrat-solo(l,5-a)pyrimidiini-3-karboksyylihappo/ etyyliesteri 20,0 g:n määrään 7-(3-(trifluorimetyyli)fenyyli)-5 pyratsolo(1,5-a)pyrimidiini-3-karboksyylihappoa,etyylies- teriä (US-patenttijulkaisu 4 178 449, esimerkki 16), joka on sekoitettu 100 ml:aan jääetikkaa ja jäähdytetty vesi-hauteessa, lisätään annoksittain 10,0 g natriumsyaaniboo-rihydridiä typessä. Seosta sekoitetaan huoneen lämpötilas-10 sa 3 tuntia.

Seoksen haihduttaminen vakuumissa antaa öljyn, joka muuttuu kiinteäksi käsiteltäessä sitä vedellä. Kiinteä aine kerätään suodattamalla ja sekoitetaan sitten natriumbikarbonaatin kyllästetyn liuoksen kanssa, sitten suodate-15 taan, pestään vedellä ja kuivataan vakuumissa, jolloin saadaan valkoinen kiinteä aine. Uudelleenkiteyttäminen isopropyylialkoholista antaa 18,2 g haluttua tuotetta, sp. 108 - 110 °C.

Esimerkki 13 20 4,5,6,7-tetrahydro-7- (3- (trif luorimetyyli) f enyyli)- pyratsolo(l,5-a)pyrimidiini-3-karboksiamidi

Liuosta, jossa on 3,44 g 4,5-dihydro-7-(3-trifluo-rimetyyli)fenyyli)pyratsolo(1,5-a)pyrimidiini-3-karboksi-amidia (esimerkki 8) 40 ml:ssa trifluorietikkahappoa, se-25 koitetaan typessä ja kuumennetaan 60 °C:seen öljyhautees-sa. Sitten lisätään 5,0 ml trietyylisilaania ja seosta sekoitetaan 60 eC:ssa 24 tuntia. Reaktioseos jäähdytetään ja kaadetaan varovaisesti astiaan, jossa on 25 %:sta kalium-hydroksidin vesiliuosta ja murskattua jäätä. Tuote, joka 30 saostuu, uutetaan kloroformiin ja uute pestään vedellä, kuivataan vedettömällä natriumsulfaatilla ja suodatetaan.

Suodos haihdutetaan vakuumissa, jolloin saadaan kiteitä, jotka sitten uudelleenkiteytetään tolueeni-heksaanista, jolloin saadaan haluttu tuote, sp. 152 - 154 eC.

I! 27 93963

Esimerkki 14 8- (3-(trifluorimetyyli)fenyyli)-3H,6H-1,4,5a,8a-tetra-atsa-asenaftyleeni-3,5(4H)-dioni

Seokseen, jota sekoitetaan ja jossa on 10,0 g 5 4,5-dihydro-7-(3-(trifluorimetyyli)fenyyli)pyrat- solo( 1,5-a)-pyrimidiini-3-karboksiamidia (valmistettu esimerkissä 8 kuvatulla tavalla) 200 ml:ssa dioksaania, lisätään huoneen lämpötilassa typessä 20,0 g 1,1'-karbonyyli-di-imidatsolia. Seosta kuumennetaan sitten palautusjääh-10 dyttäen 5 tuntia, sitten jäähdytetään ja suodatetaan. Suo-dos haihdutetaan kuiviin vakuumissa ja ylimäärä vettä lisätään jäännökseen. Muodostuva valkoinen kiinteä aine kerätään ja uudelleenkiteytetään asetonitriili-etanolista, jolloin saadaan 6,5 g haluttua tuotetta valkeana kiinteänä 15 aineena, sp. 260 - 262 °C.

Esimerkki 15 7,8-dihydro-8-(3-(trifluorimetyyli)fenyyli)-3H,6H-1,4,5a,8a-tetra-atsa-asenaftyleeni-3,5(4H)-dioni 3.0 g:n annokseen 4, 5,6,7-tetrahydro-7-(3-( trifluo-20 rimetyyli)fenyyli)pyratsolo(1,5-a)pyramidiini-3-karboksi- amidia (esimerkki 13), joka on suspendoitu 40 mitään kuivaa tetrahydrofuraania, lisätään annoksittain typessä 8,0 g 1,1'-karbonyylidi-imidatsolia ja 60 ml kuivaa tetrahydrof uraania . Reaktioseosta kuumennetaan palautusjäähdyt-25 täen 96 tuntia ja jäähdytetään sitten, jolloin saadaan valkoinen sakka, joka kerätään suodattamalla. Sakka käsitellään 10 ml:11a vettä, suodatetaan ja kuivataan, jolloin saadaan 1,05 g haluttua tuotetta valkoisena kiinteänä aineena, sp. 297 - 300 °C.

30 Esimerkki 16 8-(2,5-dikloorifenyyli)-2-metyyli-3H,6H-1,4,5a,8a-tetra-atsa-asenaftyleeni-3,5(4H)-dioni 3.0 g:n määrään 7-(2,5-dikloorifenyyli)-4,5-dihyd-ro-2-metyylipyratsolo( 1,5-a )pyrimidiini-3-karboksiamidia 35 (esimerkki 9),joka on suspendoitu ja sekoitettu 100 mitään 28 93963 kuivaa p-dioksaania, lisätään typessä 8,0 g 1,1'-karbonyy-lidi-imidatsolia. Seos haihdutetaan kuiviin vakuumissa ja jäännös käsitellään vedellä 1,1'-karbonyylidiimidatsoli-ylimäärän hajottamiseksi. Jäljelle jäävä kiinteä aine ke-5 rätään suodattamalla, sitten sekoitetaan 50 ml:n kanssa tetrahydrofuraania. Kiinteä aine kerätään ja kuivataan, jolloin saadaan 1,6 g haluttua tuotetta valkoisena kiinteänä aineena. Tuote uudelleenkiteytetään etanoli-asetoni triilistä ja saadaan sp. 205 - 209 °C.

10 Esimerkki 17 4-metyyli-8-(3-(trifluorimetyyli)fenyyli)-3H,6H-1,4,5a,8a-tetra-atsa-asenaftyleeni-3,5(4H)-dioni

Seokseen, jota sekoitetaan ja jossa on 2,0 g 8-(3-(trifluorimetyyli)fenyyli)-3H,6H-1,4,5a,8a-tetra-15 atsa-asenaftyleeni-3,5(4H)-dionia (esimerkki 14) 20 mlrssa N,N-dimetyyliformamidia, lisätään typessä 270 mg 60 %:sta natriumhydridiä. Seosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa 3 tuntia anionin muodostamiseksi ja sitten sekoitettuun seokseen lisätään 0,5 ml metyylijodidia hypodermisen ruis-20 kun lävitse. Kun on sekoitettu 3 tuntia huoneen lämpötilassa, lisätään vielä 0,5 ml metyylijodidia ja sekoitusta jatketaan 16 tunnin ajan. Seos kaadetaan veteen ja muodostuva valkoinen sakka kerätään, pestään vedellä ja kuivataan vakuumissa. Uudelleenkiteyttäminen isopropyylialkoho-25 lista antaa 1,5 g haluttua tuotetta valkoisena kiinteänä aineena, sp. 190 - 192 °C.

Samalla tavalla 1-jodidekaania lisätään edellä mainittuun anioniin, jolloin saadaan 4-dekyyli-8-(3-(trifluo-rimetyyli) f enyyli )-3H, 6H-1,4, 5a, 8a-tetra-atsa-asenaftylee-30 ni-3,5(4H)-dionia.

Esimerkki 18 8- (3-pyridinyyli) -3H, 6H-1,4,5a, 8a-tetra-atsa-ase-naftyleeni-3,5(4H)-dioni

Seosta, jossa on 4,0 g 4,5-dihydro-7-(3-pyridinyy-35 li)pyratsolo(1,5-a)pyrimidiini-3-karboksiamidia (esimerk- 29 93963 ki 10), 80 ml kuivaa p-dioksaania ja 10,0 g 1,1’-karbonyy-li-di-imidatsolia, kuumennetaan palautusjäähdytyslämpöti-lassa 5 tuntia. Sitten lisätään vielä 5,0 g 1,1'-karbonyy-lidi-imidatsolia ja kuumennusta jatketaan 16 tuntia. Kun 5 on jäähdytetty huoneen lämpötilaan, saostunut kiinteä aine kerätään suodattamalla, pestään vedellä ja kuivataan va-kuumissa, jolloin saadaan 2,0 g haluttua tuotetta valkoisena kiinteänä aineena, sp. 292 - 295 °C.

Esimerkki 19 10 4- (4-kloorif enyyli ) -8- (3-trif luor ime tyyli ) fenyyli ) - 3H,6H-1 4,5a,8a-tetra-atsa-asenaftyleeni-3,5(4H)-dioni

Seosta, jossa on 5,0 g 4,5-dihydro-7-(3-(trifluori-metyyli)fenyyli )pyratsolo( 1, 5-a )pyrimidiini-3-karboksyyli-happoa, etyyliesteriä (esimerkki 12) ja 2,5 g p-kloorife-15 nyyli-isosyanaattia 40 ml:ssa tolueenia, kuumennetaan palautus jäähdy tyslämpötilassa 16 tuntia. Reaktioseos haihdutetaan kuiviin vakuumissa ja vettä lisätään jäännökseen. Tämä seos uutetaan kloroformilla ja orgaaninen faasi erotetaan, kuivataan vedettömällä natriumsulfaatilla ja suo-20 datetaan. Suodoksen haihduttaminen antaa 8,51 g keltaista öljyä, joka trituroidaan dietyylieetterillä, jolloin saostuu valkoinen kiinteä aine. Kiinteä aine kerätään ja kuivataan vakuumissa, jolloin saadaan 2,0 g 4-(((4-kloorife-nyyli)amino)karbonyyli)-4,5-dihydro-7-(3-(trifluorimetyy-25 li )fenyyli )pyratsolo( 1,5-a )pyrimidiini-3-karboksyylihap-poa, etyyliesteriä, sp. 163 - 165 eC.

1,0 g: n annosta edeltävää yhdistettä 20 mlrssa 5 %:sta vesipitoista natriumhydroksidia sekoitetaan ja kuumennetaan öljyhauteessa 120 °C:ssa 3 tuntia. Reaktio-30 seos jäähdytetään huoneen lämpötilaan ja valkoinen kiinteä aine muodostuu. Kiinteä aine kerätään, pestään vedellä ja sitten jääetikalla. Tuote kuivataan vakuumissa ja saadaan 700 mg haluttua tuotetta vaalean keltaisena kiinteänä aineena, joka uudelleenkiteytetään tolueenista, sp. 177 -35 180 °C.

30 93963

Esimerkki 20 3,5-diokso-8- (3-(tri£luorimetyyli) fenyyli) -3H, 6H-1,4,5a,8a-tetra-atsa-asenaftyleeni-3,5(4H)-asetamidi

Seokseen, jota sekoitetaan ja jossa on 5,0 g 5 8-(3-(trifluorimetyyli)fenyyli)-3H,6H-1,4,5a,8a-tetra-at- sa-asenaftyleeni-3,5(4H)-dionia (valmistettu esimerkissä 14 kuvatulla tavalla) 50 ml:ssa kuivaa N,N-dimetyyliform-amidia, lisätään typessä 800 mg 60 %:sta natriumhydridiä (dispersio mineraaliöljyssä). Seosta sekoitetaan huoneen 10 lämpötilassa 2 tuntia. Sitten lisätään 3,4 g 2-jodiaset-amidia ja sekoitusta jatketaan 48 tuntia. Reaktioseos haihdutetaan kuiviin, sitten käsitellään vedellä. Kiinteä sakka kerätään suodattamalla ja kuivataan, jolloin saadaan 5,0 g haluttua tuotetta valkoisena kiinteänä aineena. Tuo-15 te uudelleenkiteytetään asetonitriili-N,N-dimetyyliform- amidi-vedestä, sp. 282 - 284 eC.

Esimerkki 21 4-etyyli-8-(3-(trifluorimetyyli)fenyyli)-3H,6H-1,4,5a,8a-tetra-atsa-asenaftyleeni-3,5(4H)-dioni 20 Seokseen, jota sekoitetaan ja jossa on 5,0 g 8-(3-(trifluorimetyyli)fenyyli)-3H,6H-1,4,5a,8a-tetra-at-sa-asenaftyleeni-3,5(4H)-dionia (valmistettu esimerkissä 14 kuvatulla tavalla) 50 ml:ssa kuivaa N,N-dimetyyliform-amidia, lisätään typessä 800 mg 60 %:sta natriumhydridiä 25 (dispersio mineraaliöljyssä). Seosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa 2 tuntia, sitten lisätään 10 ml jodietaania ja sekoitusta jatketaan 48 tunnin ajan. Reaktioseos haihdutetaan kuiviin, sitten käsitellään vedellä ja kumimainen kiinteä aine eristetään, liuotetaan kloroformiin ja uute 30 kuivataan vedettömällä natriumsulfaatilla. Haihduttaminen antaa öljyn, joka trituroidaan dietyylieetteri-heksaanil-la, jolloin saadaan keltainen kiinteä aine, joka kerätään suodattamalla, jolloin saadaan 2,0 g haluttua tuotetta valkoisena kiinteänä aineena. Tuote uudelleenkiteytetään 35 isopropyylialkoholista, sp. 161 - 163 eC.

Il 31 93963

Esimerkki 22 4-((4-nitrofenyyli)metyyli)-8- (3- (trif luorimetyy-li)fenyyli)-3H,6H-1,4,5a,8a-tetra-atsaasenaftyleeni-3,5(4H)-dioni 5 Seokseen, jota sekoitetaan ja jossa on 5,0 g 8-(3-( trif luorimetyyli) f enyyli )3H, 6H-1,4,5a, 8a-tetra-atsa-asenaftyleeni-3,5(4H)-dionia (valmistettu esimerkissä 14 kuvatulla tavalla) 50 ml:ssa kuivaa N,N-dimetyyliformami-dia, lisätään typessä 800 mg 60 %:sta natriumhydridiä 10 (dispersio mineraaliöljyssä). Seosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa 2 tuntia, sitten lisätään 3,3 g 4-nitrobent-syylibromidia 10 ml:ssa N,N-dimetyyliformamidia ja seosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa 40 tuntia. Seos haihdutetaan kuiviin vakuumissa, sitten käsitellään vedellä, 15 jolloin saadaan kullanruskea kiinteä aine. Kiinteä aine kerätään suodattamalla, pestään vedellä ja kuivataan. Kiinteä aine liuotetaan dikloorimetaaniin ja johdetaan lyhyen kolonnin lävitse, jossa on magnesiumsilikaattia. Eluaatti haihdutetaan vakuumissa, jolloin saadaan 5,9 g 20 haluttua tuotetta vaalean keltaisena kiinteänä aineena. Tuote uudelleenkiteytetään isopropyylialkoholi-etyyliasetaatista, sp. 184 - 186 °C.

Esimerkki 23 4- (f enyy lime tyyli )-8-(3-( trif luorimetyyli) f enyyli) -25 3H,6H-1,4,5a,8a-tetra-atsa-asenaftyleeni-3,5(4H)-dioni

Seokseen, jota sekoitetaan ja jossa on 4,0 g 8-(3-( trifluorimetyyli)fenyyli)-3H,6H-1,4,5a,8a-tetra-at-sa-asenaftyleeni-3,5(4H)-dionia (valmistettu esimerkissä 14 kuvatulla tavalla) 40 ml:ssa kuivaa N,N-dimetyyliform-30 amidia, lisätään typessä 650 mg 60 %:sta natriumhydridiä (dispersio mineraaliöljyssä). Seosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa 2 tuntia, sitten lisätään 2,5 g bentsyylibro-midia ja seosta sekoitetaan 40 tuntia.

Seos haihdutetaan kuiviin vakuumissa, käsitellään 35 sitten vedellä, jolloin saadaan valkoinen sakka, joka ke- 93963 32 rätään, pestään vedellä ja ilmakuivataan. Kiinteä aine liuotetaan kloroformiin ja liuos kuivataan vedettömällä natriumsulfaatilla ja suodatetaan. Suodos haihdutetaan vakuumissa ja saadaan 7,0 g öljyä, joka trituroidaan di-5 etyylieetteri-heksaanilla, jolloin saadaan valkoinen kiinteä aine. Kiinteä aine kerätään, liuotetaan pieneen määrään kuumaa tolueenia ja suodatetaan magnesiumsilikaatin läpi. Suodokseen lisätään heksaania, kunnes muodostuu valkoinen sakka. Seos jäähdytetään jäissä, sitten suodatetaan 10 halutun tuotteen keräämiseksi. Aines kuivataan ja saadaan 1,5 g valkoista kiinteää ainetta, sp. 144 - 146 eC.

. * »·

Claims (2)

33 93963

1. Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten kaavan I mukaisten 3H,6H,1,4,5a,8a-tetra-atsa-asenaf-5 tyleeni-3,5-(4H)-dionijohdannaisten ja niiden farmaseutti sesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, N —- R5 r<tntv J « N-R-, r2 o 15 jossa kaavassa R: on vety, C1.2-alkyyli, karboksiamidometyy-li, 4-kloorifenyyli, bentsyyli tai (4-nitrofenyyli)metyyli, R2 ja R3 tarkoittavat vetyä tai C^-alkyyliä, ja R4 on 3-pyridyyli tai 20 oc 25 jossa R6 ja R7 tarkoittavat toisistaan riippumatta vetyä, klooria, fluoria tai trifluorimetyyliä; R5 on vety tai C^-alkyyli, ja katkoviiva tarkoittaa mahdollista sidosta, tunnettu siitä, että a) yhdiste, jonka kaava on 30 :· ΐ4 E3\A^VRs rA j=1

35 R2 ^|-OC2H5 o=c o Hllj-R-L 93963 jossa Rt, R2, R3, R4, R5 ja katkoviiva tarkoittaa samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan emäksen kanssa, tai b) yhdiste, jonka kaava on

5 R4

2. XC-NH, H II 2 o 10 jossa R2, R3, R4, R5 ja katkoviiva tarkoittavat samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on 15 0 II Z-C-Z jossa Z on N | , Cl tai metoksi, inertissä liuottimes- \ —I 20 sa, jolloin saadaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa Rx on vety, ja haluttaessa saatu yhdiste saatetaan reagoimaan alkylointiaineen kanssa jolloin saadaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa Rx on C1.2-alkyyli, karboksiamidometyyli, 4-kloorifenyyli, bentsyyli tai (4-nitrofenyyli)metyyli.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että (a) yhdiste, jonka kaava on ; 2 N x C-NH-j H H 2 0 jossa R2, R3, R4, R5 ja katkoviiva tarkoittavat samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan 1,1'-karbonyylidi-imidatso-35 Iin, fosgeenin tai dimetyylikarbonaatin kanssa liuottimes- II 93963 sa, joka on dioksaani tai tetrahydrofuraani, typpiatmos-fäärissä palautusjäähdytyslämpötilassa noin 4-96 tuntia; (b) liuotin haihdutetaan ja jäännöstä käsitellään vedellä 1,1'-karbonyyldi-imidatsoli-, fosgeeni- ta dimetyylikarbo-5 naattiylimäärän hajottamiseksi; (c) jäljelle jäänyt kiinteä aine otetaan talteen, kuivataan ja uudelleenkiteyte-tään liuottimesta, jolloin saadaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa Ri on vety; (d) saatu dioni alkyloidaan noin 6-60 tuntia liuottimessa typpiatmosfäärissä huoneenläm-10 pötilassa käyttämällä emäksenä natriumhydridiä ja alky-lointiaineena metyylijodidia, 2-jodiasetamidia tai bent-syylibromidia; (e) reaktiotuoteseos haihdutetaan kuiviin; ja (f) jäännös puhdistetaan tavanomaisella tavalla. • · • · se 93963