FI92905B

FI92905B - Menetelmä eläinperäisen keuhkojen pinta-aktiivisen aineen valmistamiseksi

Info

Publication number: FI92905B
Application number: FI881508A
Authority: FI
Inventors: Bengt Robertson; Tore Curstedt
Original assignee: Chiesi Farma Spa
Priority date: 1987-04-08
Filing date: 1988-03-30
Publication date: 1994-10-14
Also published as: FI881508A; NO174733C; ES2004856T3; NO174733B; JP2700323B2; IT1203873B; ZA882416B; NZ224146A; FI881508A0; ATE99949T1; IE881008L; PH25300A; HK1007103A1; DK190088D0; DK190088A; IE61384B1; ES2004856A4; AU619462B2; EP0286011B1; NO881515D0

Description

92905

Menetelmä eläinperäisen keuhkojen pinta-aktiivisen aineen valmistamiseksi Förfarande för framställning av ett ytaktivt ämne för lungor 5

Keksinnön kohtena on menetelmä eläinperäisen keuhkojen pinta-aktiivisen aineen valmistamiseksi, joka muodostuu polaarisesta lipidifraktiosta, 10 joka muodostuu pääasiassa fosfolipideistä, joka fosfolipidifraktio muodostuu vähintään 70-75 painoprosenttisesti fosfatidyylikoliinista, joka puolestaan muodostuu vähintään 40-45 painoprosenttisesti dipalmi-toyylidifosfatidyylikoliinista, sekä proteiinifraktiosta, joka muodostuu yksinomaan proteiineista, joiden molekyylipaino on pieni, 3-14 15 kilodaltonia, jota polaarista lipidifraktiota on läsnä vähintään 98,5 paino-%, sen muodostuessa puolestaan pääasiassa, vähintään 95-prosent-tisesti, fosfolipidien seoksesta.

Keksintö kohdistuu eläimestä peräisin olevaan keuhkojen pinta-aktii-20 viseen valmisteeseen (KPA), jonka toksisuus on vähäinen, ja jonka pin-ta-aktiiviset ominaisuudet ovat optimaaliset, ja jota voidaan käyttää imeväisten hengityselinten toimintahäiriön (Infant Respiratory Distress Syndrome; IRDS) ja aikuisten hengityselinten toimintahäiriön (Adult Respiratory Distress Syndrome) estämiseen ja hoitamiseen, joka hengi-25 tyselinten toimintahäiriö liittyy hyaliinikalvon sairauteen (Hyaline Membrane Disease; HMD).

Keuhkojen normaali toiminta riippuu erityisen materiaalin, eli keuhkojen pinta-aktiivisen aineen, läsnäolosta, jonka pinta-aktiivisen 30 aineen tehtävänä on alveolien stabiloiminen pintajännitystä pienentämällä, erityisesti uloshengitysvaiheen aikana.

Keuhkojen pinta-aktiivisen aineen läsnäolo on erityisen tärkeätä syntymähetkellä. KPA:n puuttuminen on IRDS-taudin, josta 10-15 % kesko-35 sista kärsii syntymähetkellä, syntymisen avaintekijä. Näiden keskosten hengityksestä on huolehdittava keinotekoisesti käyttäen suuria happipitoisuuksia ja suuria sisäänpuhalluspaineita. IRDS-tilan kuolleisuus on noin 25 % ja monet eloonjääneet kärsivät keuhkojen kroonisista komp- 2 92905 likaatioista, jotka johtuvat pääasiassa pitkäaikaisesta keinotekoisesta hengityksestä, sekä sekundäärisistä neurologisista vajaatoiminnoista, jotka johtuvat aivojen vaurioitumisesta hapen niukkuuden seurauksena.

5 Keuhkojen pinta-aktiivisen aineen puute on myös ARDS-tilan tärkeä tekijä. Tämä sairaalloinen tila voi kehittyä lukuisten vammojen, sisäänhen-gityksen, haimatulehduksen, jne. tapauksessa, kuolleisuuden ollessa 40-70 %.

10 Puuttuvan pinta-aktiivisen aineen korvaavien annosten antaminen on osoittautunut käyttökelpoiseksi näitä patologisia tiloja hoidettaessa.

Alalla tunnetut pinta-aktiiviset aineet kuuluvat kolmeen perusryhmään: 15 1. Keinotekoiset keuhkojen ninta-aktiiviset aineet

Keinotekoisia pinta-aktiivisia valmisteita, jotka perustuvat dipalmi-toyylidyfosfokoliinin tai fosfolipidin pitoisuuksiltaan ja suhteiltaan erilaisiin seoksiin, joihin on valinnaisesti yhdistetty muita kompo-20 nentteja kuten sokereita, aminohappoja, alkoholeja tai rasvahappoja, on kuvattu monissa patenttijulkaisuissa: DE 2900300 (Klitzing LV); JP 58222022 (Teijin KK); EP 110498; US 4312860 (University of California); DE 3229179 (Natterman A & Cie GmbH); JP 61065821 (Tokyo Tanabe KK).

• · 25

Keinotekoiset pinta-aktiiviset aineet eivät kuitenkaan osoittautuneet kovinkaan tehokkaiksi kliinis-farmakologisessa käytössä.

2. Ihmisen keuhkojen pinta-aktiivinen aine 30 ·. Tämä on saatu uuttamalla vesikalvonesteestä. Vaikka se onkin tehokas, niin se on kuitenkin käytännössä lähes käyttökelvotonta johtuen sekä sen suuresta proteiinipitoisuudesta (joka voi johtaa käsiteltävän kohteen herkistymiseen) että vaikeudesta valmistaa sitä suuria määriä, 35 sillä yhden annoksen saaminen edellyttää vesikalvonesteen ottamista kolmesta loppuvaiheessa olevasta raskaudesta. Siihen liittyy myös suuri 3 92905 viruskontaminaation vaara, jolloin niinkin vakavien sairauksien kuin immuunikadon (AIDS) siirtyminen on mahdollista.

3. Luonnollinen keuhkojen pinta-aktiivinen aine 5 Tämä pinta-aktiivinen aine on uutettu nisäkkäiden keuhkoista ja sen tehokkuus on verrannollinen ihmisen pinta-aktiiviseen aineeseen, ja näin ollen sen etuna on valmistamisen yksinkertaisuus sekä pienempi proteiinipitoisuus.

10

Alalla on valmistettu aikaisemmin alkuperältään luonnollisia keuhkojen pinta-aktiivisia aineita eläimistä uuttamalla. Esimerkiksi patenttijulkaisuissa DE 3021006, JP 58045299 ja EP 119056 (Tokyo Tanabe KK) kuvataan suhteellisen monimutkainen menetelmä, joka johtaa monien toimenpi-15 teiden, kuten toistuvien sentrifugointien (850 x g - 20 000 x g), ly-ofilisoinnin ja lukuisten uuttojen jälkeen luonnolliseen keuhkojen pin-ta-aktiiviseen aineeseen, joka sisältää fosfolipidien (75-95,5 %) ja proteiinien (0,5-5 %) lisäksi myös hiilihydraatteja (0,1-2 %), neutraaleja lipidejä (0,3-14 %) ja kokonaiskolesterolia (0-8 %), joilla kom-20 ponenteilla ei ole mitään yhteyttä farmakologiseen vaikutukseen.

Samoin patenttijulkaisun EP 145005 mukaisesti valmistettu pinta-aktii-vinen aine (VEB Arzneimittel Dresden) sisältää vieläkin suuremman prosenttisen osuuden (5-40 %) apolaarista lipidifraktiota, jolla ei ole -- 25 mitään vaikutusta biologiseen aktiivisuuteen. Sen sijaan fosfolipidien, jotka sitä vastoin muodostavat tärkeimmän fysiologisen komponentin, pitoisuus siinä on pieni (40-70 %).

Lopuksi patenttijulkaisuissa EP 55041, JP 58183620, JP 58183621 ja JP 30 58164513 (Tejin KK) kuvataan luonnollisia, keinotekoisia tai puolittain luonnollisia (eli joihin on lisätty synteettisiä fosfolipidejä) pinta-aktiivisia aineita, joista proteiinit on poistettu täydellisesti. Kaikkein viimeaikaisimmat tutkimukset ovat selvittäneet, että proteiinien läsnäoloon liittyy huoomattavaa toiminnallista merkitystä.

35 4 92905

Pitkäaikaisten ja syvällisten tutkimusten, jotka käynnistettiin monia vuosia sitten, jälkeen hakija on saanut valmistetuksi uuden keuhkojen pinta-aktiivisen aineen, johon oheinen keksintö liittyy, ja jonka koostumus on optimaalinen tasapainoiselle farmakologiselle aktiivisuudelle. 5

Keksinnön mukaisella pinta-aktiivisen aineen valmistusmenetelmällä toivottu fraktio saadaan erotetuksi vain muutamalla toimenpiteellä eläinkeuhkoista lähtien.

10 Keksinnön mukainen menetelmä on pääasiassa tunnettu siitä, että a) pinta-aktiivinen aine erotetaan kokonaisuudessaan hienoksi jauhetuista ja suolaliuoksella pestyistä eläinkeuhkoista peräkkäisten suodatus-, sentrifugointi- ja uuttotoimenpiteiden avulla orgaanista liuo- 15 tinta käyttäen; b) raaka lipidifraktio otetaan talteen haihduttamalla liuotin; c) polaarinen lipidikomponentti erotetaan lopulta apolaarisesta kom- 20 ponentista geelikromatografisesti käänteisfaasilla LIPIDEX -500011 (epi-kloorihydriinillä ristisilloitettu dekstraanijohdannainen) täytetyllä kolonnilla ja orgaanisella liuotinseoksella.

Keksinnön mukaisella menetelmällä saadulla keuhkojen pinta-aktiivisella 25 aineella on seuraavat ominaisuudet: a) suurin polaaristen lipidien, jotka ovat pääasiassa fosfolipideja, pitoisuus (99 %) muihin valmisteisiin verrattuna; 30 b) vapaat hiilihydraatit, kolesteroli, triglyseridit sekä kolestero-liesterit, eli komponentit, jotka eivät vaikuta millään tavalla pinta-aktiivisuuteen, puuttuvat niistä täysin (Suzuki Y., J. Lipid Res. 23, 62-69, 1982), kuten myöskin muut farmakologisesti katsoen tehottomat neutraalit lipidit (Nohara K., Eur. J. Resp. Dis. 69, 321-335, 1986); 35 5 92905 c) siinä on läsnä proteiinikomponenttia, jonka tunnusomaisena piirteenä on hydrofobisten aminohappojen erityisen suuri määrä, näiden aminohappojen suurimman pitoisuuden ollessa alle 1-1,5 %. Proteiiniosa muodostuu yksinomaan hydrofiilisista proteiineista, joiden molekyylipaino on 5 3-4 kilodaltonia, ja jotka ovat tärkeitä ajatellen fosfolipidien ab sorptiota ilman ja nesteen rajapinnalla.

Keksinnön mukaisella valmistusmenetelmällä saadaan toistettavasti ja teollisessa mitassa kannattavasti pinta-aktiivista ainetta, jolla on 10 edellä esitetyt tunnusomaiset piirteet.

Hienoksi jauhetut eläinkeuhkot pestään fysiologisessa liuoksessa. Ne suodatetaan ja niitä sentrifugoidaan alueella 1000 - 5000 x g olevilla nopeuksilla yhdestä kolmeen tuntiin, nopeudesta riippuen. Pinta-aktii-15 vinen aine uutetaan sitten orgaanisella liuottimella, joka on mielellään metyylialkoholin ja kloroformin l:2-seosta. Orgaaninen faasi pestään vedellä ja haihdutetaan, jolloin saadaan raaka lipidifraktio, joka otetaan talteen orgaanisella liuottimella, tämän liuottimen ollessa edullisesti 1,2-dikloorietaanin ja dikloorimetaanin 1:4-seos. Tämän 20 jälkeen fosfolipideistä muodostuva polaarinen lipidikomponentti erotetaan geelikromatografisesti apolaarisesta komponentista, joka muodostuu triglyserideistä, kolesterolista ja kolesteroliestereistä.

Kliiniseen käyttöön tarkoitettu fosfolipidifraktio steriloidaan ult-25 rasuodattamalla ja sitä säilytetään korkeintaan -20 °C:n lämpötilassa.

Se voidaan vaihtoehtoisesti lyofilisoda ja säilyttää -20 °C:n lämpötilassa.

Oheisen keksinnön kohteena olevan pinta-aktiivisen aineen valmistusta 30 havainnollistetaan seuraavassa yksityiskohtaisilla esimerkeillä, kek-’ sintöä kuitenkaan millään tavalla rajoittamatta.

Esimerkki 1 35 Sian keuhkot jauhetaan hienoksi sekoittajassa ja kudoskappaleet pes-täään fysiologisella liuoksella. Seos suodatetaan ja sitä sentrifugoi- 6 92905 daan alustavasti nopeudella 1000 x g 20 °C:n lämpötilassa 15 minuuttia solukappaleiden poistamiseksi. Tämän jälkeen supernatantiksi jäävää nestettä sentrifugoidaan uudestaan nopeudella 3000 x g 4 eC:n lämpötilassa 2 tuntia.

5

Raaka (kiinteä) pinta-aktiivinen aine poistetaan ja uutetaan kloroformin ja metyylialkoholin 2:1-seoksella (vol./vol.), suodatetaan, pestään vedellä ja orgaaninen faasi haihdutetaan, jolloin saadaan raaka lipidi-uute. Lipidifraktion uute (1-1,5 g) otetaan talteen 20 millilitralla 10 1,2-dikloorietaanin ja metyylialkoholin l:4-seosta (vol/vol) ja erote taan kromatografisesti käänteisfaasilla Lipidex -5000 (4 x 21,5 cm; Packard Instruments Co.) täytetyllä kolonnilla, käyttäen eluenttina 1,2-dikloorietaanin ja metyylialkoholin l:4-seosta (vol/vol), virtausnopeudella 60-90 ml/h. Fraktio 1 (0-270 ml) sisältää vain fosfolipide-15 jä, fraktio 2 (270-405 ml) sisältää hieman fosfolipidejä ja muita polaarisia lipidejä, kun taas apolaariset lipidit (triglyseridit, kolesteroli ja sen esterit) jäävät kolonniin.

Fraktio 1 voidaan käyttää sellaisenaan.

20

Fraktion 2 sisältämät fosfolipidit voidaan ottaa talteen menettelemällä seuraavasti. Fraktio 2 kromatografoidaan uudestaan samalla kolonnilla ja ensimmäiseksi saatava fraktio (0-270 ml) yhdistetään edellisestä kromatografisesta käsittelystä saatuun fraktioon 1. Nämä kaksi yhdis-... 25 tettyä fraktiota kuivataan (alle 40 °C:n lämpötiloissa), liuotetaan kloroformin ja metyylialkoholin 98:2-seokseen (vol/vol), steriloidaan suodattamalla (esisuodatin 0,45 μπι ja suodatin 0,2 μτα) , ja säilytetään pakastimessa -20 °C:n lämpötilassa.

30 Esimerkki 2 *

Esimerkissä 1 kuvatulla menetelmällä saatu fosfolipidifraktio sulatetaan steriileissä olosuhteissa, kuivataan ja suspendoidaan uudestaan fysiologiseen liuokseen käyttäen ultraääntä, jonka taajuus on sopiva, 35 eli 45-50 kilohertsiä, energiatason ollessa 50 Wattia. Tämä on sangen kriittinen vaihe menetelmässä aktiivisen tuotteen saamiseksi, sillä 7 92905 tietyissä tapauksissa ollaan varmistettu kokeellisesti, että jopa pienetkin vaihtelut ultraäänen taajuudessa saattavat vaikuttaa huomattavasti biologiseen aktiivisuuteen, vaikka tuotteen kemialliset ja fysi-kokemialliset ominaisuudet pysyvätkin muuttumattomina.

5 Tällä tavalla saatu suspensio laitetaan ampulleihin myöhempää lääkinnällistä käyttöä varten, pitoisuuden ollessa tällöin 80 mg fosfolipide-jä/ml suolaliuosta. Esimerkeissä 1 ja 2 kuvatulla menetelmällä täysikasvuisen sian keuhkoista saadaan eristetyksi noin 200 mg keuhkojen 10 pinta-aktiivista ainetta, eli suurin piirtein tuoteannos IRDS-tilan hoitamista varten. Suurempia annoksia tarvitaan ARDS-tilan hoitamiseen.

Kustakin tuote-erästä arvioitiin joka kerta fosfolipidien pitoisuus ja koostumus sekä muiden komponenttien määrä. Proteiinipitoisuus arvioi-15 tiin analysoimalla aminohapot.

Taulukossa I esitetään fosfolipidifraktion koostumus valmisteessa, joka saatiin esimerkissä 1 kuvatun menetelmän mukaisesti.

20 Taulukko I: Fosfolipidikoostumus pinta-aktiivisissa valmisteissa. Arvot esitetään keskiarvoina ± standardipoikkeama kuuden erän tapauksessa.

Fosfolipidit Mooli-% 25 ................................................................

Fosfatidyylikoliini 75,1 ± 3,3

Fosfatidyylietanoliamiini 7,5 ± 2,7

Fosfatidyyliseriini 1,2 ± 1,1

Fosfatidyyliinositoli 7,2 ± 1,7 30 Fosfatidyyliglyseroli 3,5 ± 1,3

Lysofosfatidyylikoliini 0,7 ± 0,5

Sfingomyeliini 4,7 ± 1,7 8 92905

Seuraavassa kuvauksessa lääkitsevän tuotteen olennaisena ja pääasiallisena komponenttina mainitaan yksinkertaisuuden vuoksi vain fosfoli-pidifraktio.

5 Kunkin erän pintaominaisuudet arvioitiin samoin 37 eC:n lämpötilassa sykkivällä kuplatekniikalla (Surfactometer International, Toronto,

Kanada) (Enhorning G., J. Appi. Physiol. 43, 198-203, 1977).

Pitoisuuden ollessa 10 mg/ml valmisteen pintajännitys on pienimmillään, 10 <5 mN/m, pinnan puristuksen ollessa 50 % 5 minuutin pulssituksessa.

Valmisteen steriliys varmistettiin bakteriologisella analyysillä.

Tämän valmisteen tehokkuus testattiin eläimillä sekä spontaanin IRDS-tilan tapauksessa liian varhain syntyneissä kaniineissa ja että ARDS-15 tilan tapauksessa, joka oli indusoitu marsuihin huuhtelemalla keuhkot moneen kertaan.

Eläinkokeet 20 Näissä kokeissa (jotka toteutettiin menetelmällä, joka kuvataan julkaisussa Lachmann B., et ai., Pediatr. Res., 15, 833-838, 1981) käytettiin kaniineja, jotka olivat syntyneet liian aikaisin keisarinleikkauksen seurauksena 27. raskausvuorokautena, ja joiden henkitorvet avattiin ja varustettiin kanyylillä.

25 11 kaniinia käsiteltiin antamalla niille kanyylin kautta keuhkojen pinta-aktiivista ainetta, joka oli valmistettu oheisen keksinnön mukaisesti, kun taas 15 muuta ei saaanut mitään, vaan ne muodostivat vertailuryhmän.

30

Kaikki eläimet, sekä käsitellyt että vertailut, kytkettiin rinnan hen-gityslaitteeseen, ja niitä hengitettiin keinotekoisesti vakiopaineella 100 % happea käyttäen 40 hengityksellä minuutissa, sisäänhengityspai-neen muuttuessa tavanomaisesti. Keuhkoja laajennettiin ensin kohdista-35 maila niihin 1 minuutin ajan 35 cm H20 paine. Sitten painetta alennettiin vähitellen eri hetkillä arvoon 15 cm H20. Lopuksi se nostettiin 9 92905 uudestaan 5 minuutiksi arvoon 25 cm H20. Hengitystilavuus mitattiin joka 5. minuutti.

Tulokset esitetään taulukossa II.

5

Taulukko II: Mediaaniarvot, jotka saatiin 11 pinta-aktiivisella aineella käsitellyllä eläimellä ja 15 vertailueläimellä. Hengitystilavuudet (HT) liian varhain syntyneissä kaniineissa, joita oli hengitetty 30 minuuttia tavanomaisesti muuttuvia sisäänhengityspaineita (Pj) käyttäen.

10

Aika Pj HT (käsitelty) HT (vertailu) (min) (cm HzO) (ml/kg) (ml/kg) 15 5 25 34,5 2,2 10 25 34,0 2,0 15 25 34,5 2,2 20 20 25,0 1,3 25 15 8,1 1,0 20 30 25 40,0 3,0

Hengitystilavuuden todettiin suurenevan huomattavasti käsitellyissä eläimissä vertailueläimiin nähden.

25 Paraffinoitujen keuhkoleikkeiden, jotka oli värjätty hematoksyliinillä ja eosiinilla, ja joita tarkasteltiin mikroskooppisesti, histologinen analyysi osoitti alveolilohkon tilavuuden suurentuneen huomattavasti käsitellyssä ryhmässä.

30 Samankaltaisia tuloksia saatiin antamlla oheisen keksinnön mukaista —. pinta-aktiivista ainetta marsuille, joihin oli indusoitu hengityselin ten vajaatoiminta menetelmällä, joka kuvataan julkaisussa Berggren P., et ai., Acta Anesthesiol. Scand. 30, 321-328, 1986.

35 Käsitellyissä tapauksissa, kuten taulukosta III nähdään, kaasuvaihdon arvot palautuivat nopeammin normaaleiksi vertailutapauksiin nähden.

10 92905

Taulukko III: Veren kaasut täysikasvuisissa marsuissa, joihin on indusoitu hengityselinten vajaatoimintaa huuhtomalla keuhkot moneen kertaan (mediaaniarvot). Koe toteutettiin yhteensä 41 täysikasvuisella marsulla, joiden keuhkot oli huuhdottu moneen kertaan haalealla 5 (37 eC) normaalilla suolaliuoksella. Eläintä, jossa todettiin alhai simmat Pa02-pitoisuudet (keskiarvo 5,6 KPa), käytettiin pinta-aktiivisen aineen korvaamisella aikaansaadun vaikutuksen arvioimiseen; loput eläimistä (keskiarvo Pa02: 8,1 KPa) oli käsittelemättömiä ja ne toimivat vertailuna.

10

Aika Käsitelty Vertailu (min) pa02 PaC02 (Kpa) (Kpa) 15 ...........-......................................................- 0 * 7,5 8,2 8,0 6,8 15 47 5,9 9,0 7,0 30 48 5,5 10,0 7,2 45 * 50 5,3 10,1 7,0 20 60 55 5,0 10,3 6,9 * Aika, joka kuluu PS-annoksen tiputtamiseen käsitellyissä eläimissä. Kliiniset kokeet 25

Kliiniset tutkimukset toteutettiin hyaliinikalvotaudista kärsivien vastasyntyneiden keskosvauvojen erityisissä keskuksissa, joilla kes-·· kosilla todettiin hengityselinten huomattavaa vajaatoimintaa ja jotka kärsivät hapen puutteesta, veren liiallisesta hiilidioksidipitoisuu-30 desta ja kudosten happamuudesta huolimatta ajoittaisesta mekaanisesta hengityksestä positiivisessa paineessa, hapen prosenttisen osuuden ollessa yli 60 %.

Jäljempänä esitetään tulokset hallitusta tutkimuksesta, joka toteutet-35 tiin 10 vastasyntyneestä vauvasta muodostuvalla ryhmällä. Viisi vauvaa käsiteltiin keksinnön mukaisella pinta-aktiivisella aineella ja viisi vertailuvauvaa käsiteltiin perinteisin hoitomenetelmin.

^2905 11 Käsittelylle tkellä potilaat irroitettiin hengityslaitteesta ja pinta-aktiivista ainetta injektoitiin henkitorven sisään annoksena, jonka suuruus oli 2,5 ml/kg, joka vastaa 200 mg fosfolipidejä/kg.

5 Antamisen jälkeen vauvoja hengitettiin käsin 1 minuutin ajan kuplan avulla nopeudella 40-60 hengitystä minuutissa, käyttäen samaa kaasu-seosta kuin aikaisemmin.

Sitten potilaat liitettiin uudestaan hengityslaitteeseen, joka toimi 10 samalla tavalla kuin aikaisemmin; toimintaa muutettiin tämän jälkeen kliinisen reaktion ja veren kaasuarvojen muuttumisen mukaan.

Vertailuryhmän vauvat irroitettiin myös hengityslaitteesta ja niitä hengitettiin käsin 2 minuuttia samoissa olosuhteissa, kuin pinta-aktii-15 visella aineella käsiteltyjä potilaita.

Hengityselinten toimintaan liittyvien eri indeksien muuttuminen osoitti käsittelyn tehokkuuden.

20 Erityisesti noin 5 minuutin aikana pa02-arvot (hapen osapaine valtimossa) suurenivat nopeasti ja dramaattisesti siten, että pa/A02-suhde (valtimoissa ja alveoleissa vallitsevan hapen osapaineen välinen suhde) saavutti 15 minuutin kuluessa mediaaniarvon, joka oli kolme kertaa suurempi kuin alkuperäinen arvo (30,6 verrattuna arvoon 10,4; ·· 25 p < 0,001), minkä jälkeen arvo pieneni hiukan ensimmäisen ja toisen tunnin välillä vakiintuakseen sitten arvoihin, jotka olivat noin kaksinkertaiset lähtöarvoihin verrattuna.

Sen sijaan vertailuryhmässä pa/A02-suhteen alkuperäinen mediaaniarvo, 30 7,62, ei muuttunut merkittävästi.

4

Keuhkojen radiologiset löydökset osoittivat samoin patologisen tilan paranevan käsitellyissä kohteissa peruskudokseen pidättyneen nesteen vähentyessä ja ilmatiehyeiden venyessä.

35 12 92905

Sen sijaan vertailuryhmään kuuluvien vauvojen radiologiset löydökset eivät paljastaneet mitään merkittävää muutosta ensimmäisen 48-72 ha-vaintotunnin aikana.

5 Lopuksi, on tärkeätä korostaa sitä, että keksinnön mukaisella keuhkojen pinta-aktiivisella aineella käsitellyissä tapauksissa keinotekoisesti hengittämällä positiivisessa paineessa toteutetun hoidon ja happihoidon pituuden todettiin lyhenevän merkittävästi.

10 Tämän ansiosta erittäin kalliin tehohoidon pituutta sekä tunkeutuviin käsittelyihin liittyviä vaaroja voidaan vähentää. Monet kirjoittajat ovat itse asiassa sitä mieltä, että IRDS-tilasta johtuva keuhkojen vaurioituminen on seurausta myös elvytyshoidosta sekä erityisesti pitkästä altistumisesta suurille happipitoisuuksille.

15

Lisäksi eloonjääneissä potilaissa ei ollut todettavissa immunologisia komplikaatioita, mikä osoittaa keksinnön mukaisen pinta-aktiivisen aineen pienen antigeenisyyden.

20 Näin ollen ulkoisen pinta-aktiivisen aineen käyttö on huomattavan tärkeätä sekä hengityselimien sairaalloisia oireyhtymiä estettäessä että hoidettaessa.

Aiotussa lääkinnällisessä käytössä erityisen sopiviksi ovat osoittautu- 25 neet fosfolipidisuspensiot fysiologisessa liuoksessa, joiden suspensioiden pitoisuus on 80 mg/ml, ja joita annetaan 2,5 mg/kg suuruisina annoksina, vastaten noin 200 mg fosfolipidejä ruumiin painokiloa kohden.

30 Käsittely toteutetaan normaalisti tiputtamalla suspensiota suoraan henkitorveen. Toinen mahdollisuus on antaminen sumuna.

Il

Claims

92905

1. Menetelmä eläinperäisen keuhkojen pinta-aktiivisen aineen valmistamiseksi, joka muodostuu polaarisesta lipidifraktiosta, joka muodostuu 5 pääasiassa fosfolipideistä, joka fosfolipidifraktio muodostuu vähintään 70-75 painoprosenttisesti fosfatidyylikoliinista, joka puolestaan muodostuu vähintään 40-45 painoprosenttisesti dipalmitoyylidifosfatidyyli-koliinista, sekä proteiinifraktiosta, joka muodostuu yksinomaan proteiineista, joiden molekyylipaino on pieni, 3-14 kilodaltonia, jota po-10 laarista lipidifraktiota on läsnä vähintään 98,5 paino-%, sen muodostuessa puolestaan pääasiassa, vähintään 95-prosenttisesti, fosfolipidi-en seoksesta, tunnettu siitä, että a) pinta-aktiivinen aine erotetaan kokonaisuudessaan hienoksi jauhe-15 tuista ja suolaliuoksella pestyistä eläinkeuhkoista peräkkäisten suodatus-, sentrifugointi- ja uuttotoimenpiteiden avulla orgaanista liuotinta käyttäen; b) raaka lipidifraktio otetaan talteen haihduttamalla liuotin; 20 c) polaarinen lipidikomponentti erotetaan lopulta apolaarisesta komponentista geelikromatografisesti käänteisfaasilla LIPIDEX -5000R (epi-kloorihydriinillä ristisilloitettu dekstraanijohdannainen) täytetyllä kolonnilla ja orgaanisella liuotinseoksella. - 25

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunne ttu siitä, että orgaaninen liuotinseos on kloroformin ja metanolin l:4-seos (v/v). 30 92905