FI90545B - Menetelmä terapeuttisesti aktiivisten 2,2-dimetyylikromeenijohdannaisten valmistamiseksi - Google Patents

Description

1 90545

Menetelmä terapeuttisesti aktiivisten 2,2-dimetyylikromee-nijohdannaisten valmistamiseksi Tämän keksinnön kohteena on menetelmä kromeenijoh-5 dannaisten valmistamiseksi. Näillä johdannaisilla on anti-hypertensiivisiä ja antiarytmisiä ominaisuuksia.

BE-patenttihakemuksessa no. 829 611 mainitaan joukko 3-kromanolijohdannaisia, joilla on antihypertensiivistä aktiivisuutta; näille johdannaisille on tunnusomaista että 10 niissä on asemassa 4 NR,R2-ryhmä, jossa R, on vety tai mahdollisesti substituoitu hiilivetyryhmä, R2 on vety tai al-kyyli, ja NRiR2 voi olla heterosyklinen ryhmä, joka sisältää 3-8 atomia ja joka on substituoimaton tai substituoitu yhdellä tai kahdella metyyliryhmällä; lisäksi niissä voi 15 olla asemassa 6 tai 7 substituentti suureseta joukosta mahdollisia substituentteja.

EP-patenttihakemuksessa, joka on julkaistu numerolla 76 075 on esitetty 3-kromanolijohdannaisia, joilla on antihypertensiivistä aktiivisuutta ja joille on tun-20 nusomaista, että niissä on asemassa 4 2-okso-l-pyrrolidi-nyyliryhmä tai 2-oksopiperidinoryhmä ja mahdollisesti asemassa 6 tai 7 substituentti suuresta joukosta mahdollisia substituentteja, joihin kuuluu syaaniryhmä.

EP-patenttihakemuksessa no. 93535 on esitetty 2,2-25 dimetyylikromeenijohdannasia, joille on tunnusomaista, että niissä on asemassa 4 2-oksopiperidinoryhmä tai 2-ok-so-l-pyrrolidinyyliryhmä ja että ne sisältävät jonkin useista mahdollisista substituenteista asemassa 6 tai 7.

Lisäksi julkaisussa J. Med. Chem., 1986, 29, 2194-30 2201 vertaillaan kromanolijohdannaisten ja vastaavien kah dessa yllä mainitussa Ep-patenttihakemuksessa esitettyjen kromeenijohdannaisten antihypertensiivistä ominaisuuksia.

Saadut tulokset tutkittaessa spontaanisti hyperten-soidun rotan verenpaine laskua, osoittavat, että kromanol-35 ijohdannaisilla on samankaltaista aktiivisuutta kuin vastaavilla kromeenijohdannaisilla.

2 90545 Tämän keksinnön mukaisesti on nyt valmistettu 2,2-dimetyylikromeenijohdannaisia, joille on tunnusomaista että niissä on asemassa 4 2-okso-l,2-dihydro-l-pyridyy-liryhmä, ja joilla on erinomainen antihypertensiivinen ja 5 antiarytminen aktiivisuus ja erittäin heikko toksisuus.

Yllättäen havaittiin, että näillä johdannaisilla on suurempi antihypertensiivinen aktiivisuus kuin vastaavilla 3-kromanolijohdannaisilla.

Tämän keksinnön kohteena on siten menetelmä 2,2-10 dimetyylikromeenijohdannaisten valmistamiseksi, joilla on kaava

Cx 15 νΥίΓ']ι^ι (I)

Ar~Cti2 \h3 20 jossa Z tarkoittaa syaani- tai dietyylifosfonoryhmää.

Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista että 3-kromanoli, jolla on kaava 25

Cl !γγνο" nch3 josssa Z tarkoittaa samaa kuin edellä, dehydratoidaan al-35 kalimetallihydridillä.

i: 3 90545 3-kromanoli dehydratoidaan alkalimetallihydridillä, kuten natriumhydridillä, inertissä liuottimessa, kuten tetrahydrofuraanissa, läinpötilavälillä 50 °C - 100 °C.

3-kromanolin (II) valmistamiseksi kromaaniepoksi-5 dia, jolla on kaava „ 'νΛοΛ-· ch3 jossa Z tarkoittaa samaa kun edellä, käsitellään 2-hydrok-sipyridiinillä.

15 Epoksidin III avausreaktio suoritetaan lämpötilavä- lillä 10 - 100 °C inertissä orgaanisessa liuottimessa, kuten dioksaanissa, tetrahydrofuraanissa, metyylitert-bu-tyylieetterissä, dimetyylisulfoksidissa tai dimetyylifor-mamidissa, emäksisen kondensointiaineen, kuten natriumhyd-20 ridin tai kvaternäärisen ammoniumhydroksidin, kuten bent-syylitrimetyyliammoniumhydroksidin läsnäollessa. Näissä olosuhteissa epoksidin III avaus johtaa 3-kromanolijohdannaiseen, jolla on trans-konfiguraatio.

Lähtöaineena käytetyt kaavan III mukaiset epoksidit 25 ovat tunnettuja, tai ne voidaan valmistaa tunnettujen menetelmien mukaisesti. Esimerkiksi epoksidi III, jossa Z on syaaniryhmä, on esitetty BE-patenttihakemukessa no.

852 955.

Lähtöaineena käytettyjä kaavan III mukaisia epok-30 sideja, joissa Z tarkoittaa dietyylifosfonoryhmää, ei ole esitetty kirjallisuudessa. Ne voidaan valmistaa lähtemällä 6-bromi-2,2-dimetyylikromeenista (J. Chem. Soc. 1960, 3094-3098), jolla on kaava: 4 90545 . I e_CH - 5 O J (IV) xCH3 saattamalla tämä yhdiste reagoimaan trietyylifosfiitin kanssa nikkelikloridin läsnäollessa 180 °C:een lämpötilas-10 sa, ja näin saatu reaktiotuote, jolla on kaava:

C2H5 II

c2< y^v^i 15 VJ^0J\CH3 (V) ch3 saatetaan reagoimaan N-bromisukkinimidin kanssa vesipitoi-20 sessa dimetyylisulfoksidissa.

Näin saatua bromihydriiniä, jolla on kaava:

C2H5 f °,H

>, Λ 1 Br c2<Y^ri CH (VI) 3 CH3 30 käsitellään tämän jälkeen: alkalisella yhdisteellä veden ja orgaanisen liuottimen seoksessa, esimerkiksi veden ja dioksaanin seoksessa, edullisesti vallitsevassa lämpötilassa 8-20 tunnin ajan, ja näin saatu epoksidi, jolla on kaava II, jossa Z on dietyylifosfonoryhmä, eristetään tun-35 netuilla menetelmillä, esimerkiksi konsentroimalla reak- li 5 90545 tioseos ja ottamalla jäännös liuottimeen, jonka avulla eliminoidaan epäpuhtaudet, kuten metyleenikloridiin, minkä jälkeen se pestään vedellä ja konsentroidaan.

Kaavan I mukaiset yhdisteet lisäätään sileiden li-5 hassyiden polarisaatiota, ja niillä on vasodilatoorinen vaikutus porttilaskimoon; niiden antihypertensiivistä vaikutusta on tutkittu eläimillä.

Lisäksi on havaittu, että kaavan I mukaiset yhdisteet kiihdyttävät myokardiaalisten solujen repolarisaa-10 tiota; ja samoin niiden antiarytmista vaikutusta on tutkittu eläinmallilla.

Yhdisteillä ei ole havaittu olevan toksisia vaikutuksia farmakologisesti aktiivisina annoksina.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan siten käyttää 15 hoidettaessa kohonnutta verenpainetta sekä sileiden lihas-syiden supistumiseen liittyviä patologisia vaivoja ruoansulatus- ja hengityselimissä, kohdussa ja virtsateissä, esimerkiksi haavaumia, astmaa, ennenaikaisia kohdunsupis-tuksia, virtsanpidätysvaikeuksia sekä hoidettaessa muita 20 kardiovaskulaarisia patologisia vaivoja, kuten angoria, sydämen vajaatoimintaa sekä cerebraalisia että perifeerisiä vaskulaarisia sairauksia. Lisäksi kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää hoidettaessa kardiaalisia aryt-mioita. Lopuksi kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan käyt-25 tää kaljuuntumisen paikallisessa hoidossa.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää formuloituina farmaseuttisiksi koostumuksiksi, jotka sisältävät vaikuttavan annoksen kaavan I mukaista yhdistettä yhdessä sopivan täyteaineen kanssa. Nämä täyteaineet vali-30 taan käytetyn farmaseuttisen muodon ja antotavan mukaisesti.

Oraalisesti, sublinguaalisesti, ihon alle, int-ramuskulaarisesti, intravenoosisti, paikallisesti, trans-dermaalisesti tai raktaalisesti annettavissa farmaseutti-35 sissa koostumuksissa edellä esitetyn kaavan I mukaisia 6 90545 vaikuttavia aineita voidaan annostella annostusmuotoina seoksena klassisten farmaseuttisten kantaja-aineiden kanssa eläimille ja ihmisille profylaktisesti tai edellä mainittujen vaivojen tai sairauksien hoitoon. Sopivia annos-5 tusmuotoja ovat oraalisesti annettavat puristeet, kapselit, jauheet, rakeet sekä oraaliset liuokset tai suspensiot, sublingaaliset ja suun kautta annettavat annostusmuo-dot, ihonalaisesti, intramuskulaarisesti tai suonensisäisesti annettavat sekä rektaalisesti annettavat annokset. 10 Paikalliseen käyttöön kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää voiteina, salvoina tai emulsioina.

Halutun profylaktisen tai terapeuttisen vaikutuksen saamiseksi pääasiallisen vaikuttavan aineen pitoisuus voi vaihdella 0,01 ja 5 mg/kg ruuminpainoa kohden päivittäin. 15 Jokainen yksittäinen annos voi sisältää 0,5 - 200 mg, edullisesti 1 - 50 mg vaikuttavia aineita yhdistettyinä farmaseuttiseen kantajaan. Tämä yksittäinen annos voidaan antaa 1-5 kertaa päivässä pitämällä päivittäinen annos välillä 0,5 - 1000 mg, edullisesti 5 - 250 mg.

20 Valmistettaessa kiinteä koostumus puristeiden muo dossa sekoitetaan vaikuttava aine farmaseuttiseen väliaineeseen, kuten gelatiiniin, tärkkelykseen, laktoosiin, magnesiumstearaattiin, talkkiin, arabikumiin tai niiden johdannaisiin. Puristeet voidaan päällystää sakkaroosilla 25 tai muilla sopivilla aineilla tai ne voidaan käsitellä niin, että niiden vaikutusaika pitenee, ja että ne vapauttavat jatkuvasti ennalta määrätyn määrän vaikuttavaa ainetta .

Kapselit valmistetaan laimentamalla vaikuttava aine 30 ja kaatamalla saatu seos pehmeisiin tai koviin kapselei-hin.

Siirapin tai eliksiirin muodossa oleva tai tippoina annettava valmiste voi sisältää vaikuttavan aineen yhdistettynä makeuttimeen, edullisesti kalorittomaan, metyyli-35 parabeeniin tai propyyliparabeeniin antiseptisinä aineina, samoin kuin aineeseen, joka antaa sopivan maun ja värin.

h 7 90545

Vesiliukoiset jauheet ja rakeet voivat sisältää vaikuttavan aineen seoksena dispergoivan tai kosteuttavan aineen kanssa, kuten polyvinyylipyrrolidonin kanssa, samoin kuin makeuttimen tai maunkorjaajän kanssa.

5 Rektaaliseen annostukseen käytetään peräpuikkoja, joissa on käytetty sideaineita, jotka sulavat rektaaliläm-pötilassa, esimerkiksi kaakaovoita tai polyetyleeniglyko-leja.

Parenteraaliseen annostukseen käytetään vesipitoi-10 siä suspensioita, isotonisia suolaliuoksia tai injektoitavia ja steriileita liuoksia, jotka sisältävät farmakologisesti sopivia dispergoivia ja/tai pehmentäviä aineita, esimerkiksi propyleeniglykolia tai butyleeniglykolia.

Vaikuttava aine voi olla muotoiltu myös mikrokapse-15 leiksi, mahdollisesti yhdentai useamman kantajan tai lisäaineen kanssa.

Tällaiset farmaseuttiset koostumukset voivat sisältää edellä mainitun kaavan I mukaisen yhdisteen lisäksi muita vaikuttavia aineita, kuten esimerkiksi rauhoittavia 20 aineita tai muita lääkkeitä, jotka voivat olla käyttökelpoisia edellä mainittujen sairauksien tai vaivojen hoidossa .

Seuraavat esimerkit kuvaavat keksintöä yksityiskohtaisemmin. Esimerkeissä, kuten myös selitys- ja vaatimus-25 osissa yhdisteet nimetään kromaanin johdannaisina. Selvää on, että kaavan I mukaiset yhdisteet ovat 2,2-dimetyyli-2H-kromeenin johdannaisia, ja että termeillä "kromeeni" ja "kromaani" tarkoitetaan vastaavasti "2H-kromeeniaM sekä "3,4-dihydro 2H-kromeenia".

30 6-dietvvlifosfono-2.2-dimetvvli-3.4-etoksikromaanin valmistus A) 6-dietyylifosfono-2,2-dimetyyli-2H-kromeeni 16 g 6-bromi-2,2-dimetyyli-2H-kromeenia liuotetaan 100 ml:aan trietyylifosfiittia. Liuokseen lisätään 2 g 35 nikkelikloridia ja sitä kuumennetaan refluksoiden 180 8 90545 °C:ssa 24 tuntia autoklaavissa. Jäljellä oleva trietyyli-fosfiitti konsentroidaan, ja saatu tuote tislataan 130-140 °C:ssa 0,1 mmHg paineessa. Saadaan 11,5 g tuotetta.

B)trans-3-bromi-6-dietyylifosfono-2,2-dimetyyli-4-5 kromanoli.

11 g edellä saatua tuotetta liuotetaan 62 ml:aan dimetyylisulfoksidia, jossa on 1,35 ml vettä. Pitämällä seoksen lämpötila matalampana kun 20 °C, siihen lisätään 12,2 g N-bromisukkinimidiä pieninä erinä. Liuosta sekoite-10 taan vallitsevassa lämpötilassa 30 min, minkä jälkeen siihen lisätään 100 ml vettä, ja se uutetaan etyyliasetaatilla. Liuos kuivataan natriumsulfaatilla, orgaaninen faasi konsentroidaan, jäännös otetaan 100 ml:aan asetonia ja 50 ml:aan vettä, minkä jälkeen sitä kuumennetaan refluksoiden 15 5 tunnin ajan. Asetoni konsentroidaan, uutetaan eetteril lä, kuivataan natriumsulfaatilla ja konsentroidaan. Haluttu tuote kiteytyy isopropyylieetterissä. Kiteiden suodatuksen ja kuivauksen jälkeen saadaan 3,2 g tuotetta. Sulamispiste: 124 °C.

20 C) 6-dietyylifosfono-2,2-dimetyyli-3,4-epoksikro- maani 23 g edellisessä vaiheessa saatua tuotetta ja 12 g natriumhydroksidia sekoitetaan 900 ml:aan dioksaania ja 100 ml:aan vettä. Liuoksen annetaan seistä 24 tuntia val-25 litsevassa lämpötilassa, minkä jälkeen dioksaani konsentroidaan, jäännös otetaan veteen ja sitä uutetaan etyyli-eetterillä, minkä jälkeen se kuivataan natriumsulfaatilla. Konsentroinnin jälkeen saadaan 16,2 g haluttua tuotetta.

Esimerkki 1 30 6-svaani-4-(1.2-dihvdro-2-okso-l-pvridvvli)-2.2- dimetvvli-kromeeni; SR 44866 A) trans-6-syaani-4-(1,2-dihydro-2-okso-l-pyridyy-1i)-2,2-dimetyy1i-3-kromanoli

Liuosta jossa on 1 g 6-syaani-2,2-dimetyyli-3,4-35 epoksikromaania ja 1 g 2-hydroksipyridiiniä 10 ml:ssa di- 9 90545 oksaania kuumennetaan refluksoiden 40 tunnin ajan 35-pro-senttisen bentsyylitrimetyyliammoniumhydroksidin metanoli-sen liuoksen läsnäollessa. Liuos otetaan 30 ml:aan vettä, saatu sakka erotetaan, pestään isopropyylieetterillä, min-5 kä jälkeen se kiteytetään 20 mlrssa absoluuttista etyylialkoholia. Saadaan 0,9 g haluttua tuotetta. Sulamispiste: 243 °C, hajoaminen (kapillaariputki).

B) SR 44866

Seosta, jossa on 1,7 g vaiheessa A saatua tuotetta 10 ja 150 mg natriumhydridiä 50 ml:ssa tetrahydrofuraania refluksoidaan 2 tunnin ajan. Tetrahydrofuraani haihdutetaan tyhjiössä, jäännös otetaan jäiseen veteen, minkä jälkeen sitä uutetaan etyyliasetaatilla. Orgaaninen faasi kuivataan natriumsulfaatilla, minkä jälkeen se haihdute-15 taan tyhjiössä. Jäännös otetaan isopropyylieetterin ja etyylieetterin (50/50, v/v) seokseen. Suodatuksen, isopro-pyylieetteripesun ja 100 °C:ssa kuivauksen jälkeen tyhjiössä saadaan 800 mg haluttua tuotetta.

Sulamispiste : 151 °C.

20 Esimerkki 2 6-dietvvlifosfono-4-f 1.2-dihvdro-2-okso-l-pvridvv-lil -2.2-dimetvvli-kromeeni: SR 45014 A)trans-6-dietyylifosfono-4-(1,2-dihydro-2-okso-l-pyridyyli)-2,2 dimetyyli-3-kromanoli 25 Liuosta jossa on 5,6 g 6-dietyylifosfono-2,2-dime- tyyli-3,4-epoksikromaania ja 2,5 g 2-hydroksipyridiiniä ja 4 tippaa bentsyylihydroksiditrimetyyliammoniumia kuumennetaan refluksoiden 48 tunnin ajan. Dioksaanin konsentroi-misen jälkeen jäännös otetaan dikloorimetaaniin, se pes-30 tään kaksi kertaa vedellä, minkä jälkeen, se kuivataan natriumsulfaatilla ja konsentroidaan kuiviin. Lisätään etyylieetteriä, jolloin tuote kiteytyy. Etyyliasetaatista uudelleenkiteytyksen jälkeen saadaan 1,5 g haluttua tuotetta. Sulamispiste: 130 °C (kapillaariputki).

10 90545 B) SR 45014 2 g edellisessä vaiheessa saatua 3-kromanolia liuotetaan 100 ml:aan tetrahydrofuraania. Liuokseen lisätään pieninä osina 120 mg natriumhydridiä, minkä jälkeen sitä 5 refluksoidaan 8 tunnin ajan. Reaktioseoksen kuiviin haihdutuksen jälkeen uutetaan sitä 3 kertaa metyleenikloridil-la. Orgaaninen faasi kuivataan ja konsentroidaan, saatu öljy puhdistetaan silikageelikromatografiällä eluoimalla metyleenikloridin ja metanolin seoksella (98/2, v/v). Saa- 10 daan 200 mg vahamaista tuotetta, joka on tunnettu sen NMR-ja IR-spektreistä.

IR-spektri rekisteröitiin tuotteelle sen pitoisuuden ollessa 2 prosenttia metyleenikloridissä: 980 cm -1. (C-O-C), 1030 cm -1. ja 1055 cm -1. (P-O-C), 1240 cm -1.

15 (P=0), 1490 cm -1., 1540 cm -1. ja 1600 cm -1. (C=C), 1670 cm -1. (C=0), 2960 cm -1., 2970 cm -1., 2990 cm -1. (C-H).

NMR-spektri rekisteröitiin 250 MHz:n taajuudella, DMSO-liuoksessa 20 4’ 5iiS 3'

61 (I I

25 0 | 5

(Et 0)2_P I

'y jj 3 CH3 30 N\ V X0 ^ CH3 1 11 90545

HMR-SPEKTRI

5 Delta Aspekti Protoneita Attribuutio : l.lppm : T de D : 6H : 2 CH3 (Et) : : J CH3,CH2 = 8Hz: : : : : J CH P = 2Hz : : : 10 : 1,45 et : 2 S : 6H : (CH3)2C : : 1,5 ppm :: :: : 3,83ppm : M : 4H : 2 CH (Et) : 15 2 : 6,05ppra : S : 1H : H3 : : 6,3 ppm : T de D : 1H : H5' : : : Jo5',6'=7Hz : : : 20 : : Jm5',3'=l,25Hz : : : : 6,45ppm : D de D : 1H : H3' : : : Jo3'4'=10Hz : : : 25 : : Jm3151=1,25Hz : :: : 6,77ppm : D de D : 1H : H5 : : : J5,P=13Hz : : : : J5,7=1,5Hz : : : 30 : : : : : : 6,95ppm : D de D : 1H : H8 : : : Jo8,7=8Hz : : : : : J 8,P=3Hz : : : 35 : 7,45ppra : D de D de D : 1H : H7 : 12 90545 : : J 7,P=13Hz : : : : : Jo7,8=8Hz : : : : : Jm7,5=1,5Hz : : : 5 ‘ ‘ : 7,53ppm : T de D : 1H : H4’ : : : Jo4',3'=7Hz : : : : : Jo4',5'=7Hz : : : : : Jm41,6'=l,8Hz : : 10 : : : : : 7,56pprn : D 1H : H61 : : Jo6',5'=7Hz : : : 15 S tarkoittaa singlettiä D tarkoittaa duplettia T tarkoittaa triplettiä M tarkoittaa multiplettia J tarkoittaa kytkentävakiota 20

Kaavan I mukaisille yhdisteille on tehty farmakologiset in vitro- ja in vivo testit A), B) ja C), jotka esitetään seuraavassa.

Vertailuyhdisteinä käytettiin seuraavia yhdisteitä: 25 - trans-6-syaani-4-(2-okso-l-pyrrolidinyyli)-2,2- dimetyyli-3-kromanoli, joka on esitetty EP-patenttihakemu-ksessa no. 76075:

NC » 1 OH

XXXr ti I3 90 545 jota seuraavassa kusutaan "yhdisteeksi A", -6-syaani-4-(2-okso-l-pyrrolidinyyli)-2,2-dimetyy-likromeeni, joka on esitetty EP-patenttihakemuksessa no. 95535, ja jota seuraavassa kusutaan "yhdisteksi B".

5 Kaavan I mukaisten yhdisteiden aktiivisuutta on myös verrattu vastaavien 3-kromanolien aktiivisuuksiin : trans-6-syaani-4-(1,2-dihydro-2-okso-l-pyridyy-li)-2,2-dimetyyli-3-kromanoli, valmistettu esmerkissä 1 (Yhdiste C) 10 A) Rotalta eristetty porttilaskimo

Koirasrotat Sprague Dawley (250-300 g) tapettiin, minkä jälkeen niistä päästettiin veri pois kurkun leikkauksella. Porttilaskimo, joka sidottiin in situ kahdesta kohtaa 15 mm:n päästää toisistaan, eristettiin ja leikat-15 tiin pituussuunnassa, minkä jälkeen se pantiin pystysuoraan tutkimusastiaan, joka sisälsi 37 °C lämpötilassa fysiologista liuosta, jonka koostumus oli (mM) : NaCl 137; KC1 5,4; MgCl2 1,05; CaCl 1,8; NaHP04 1,2; NaHCO, 15,5; glukoosi 11,5, ja jota kuplitettiin kaasuseoksella, joka si-20 saisi 95 prosenttia hqppea ja 5 prosenttia hiilidioksidia.

Laskimo laitettiin 500 mg:n jännitykseen. Stabiloi-tumisvaiheen jälkeen (noin 1 h 30 min) spontaanit supistukset mitattiin isometrisellä anturilla. Jokainen mittaus suoritettiin peräkkäin neljälle valmisteelle.

25 Yhdisteitä tutkittiin kasvavina ja peräkkäisinä konsentraatioina (15 mm per konsentraatio), kunnes spontaanit supistukset inhiboituivat täysin. Tulokset ilmaistaan molaarisina konsentraatioina, jotka aiheuttivat 50-prosenttisen inhibiition (CI50) spontaaneille supistuksil-30 le.

Saadut tulokset on kerätty allaolevaan taulukkoon 1.

Tulosrivillä ilmoitetaan rotasta eristetyn portti-laskimon spontaanien supistusten C150.

14 90 5 45 TAULUKKO 1

Spontaanien supistusten inhiboituminen.

Vertailu

Yhdiste Esimerkki CI50 M Yhdiste CI50 M

5 SR 44866 1 7,1109 C 9,0'10* A 6,8-10* B 7,0-10*

Tutkitulla kaavan I mukaisella yhdisteellä oli merkittävä inhiboiva vaikutus laskimon spontaaneihin supis-10 tuksiin, ja se oli suurempi kuin vertailuyhdisteiden inhi-bo iva va ikutus.

Havaittiin, että kaavan I mukaisella kromeenijoh-dannaisella on vähintään 10-kertaa suurempi aktiivisuus kuin vastaavalla 3-kromanolin johdannaisella, kun taas 15 vertailuyhdisteillä A ja B on samanlainen aktiivisuus.

B) Marsun papillaarilihas

Albiino-koirasmarsut Charles River (300 - 400 g) tapettiin, ja niistä päästettiin veri pois kurkun leikkauksella. Sydän eristettiin ja avattiin, oikea papillaarili-20 has irrotettiin, ja sitä tarkkailtiin koeastiassa, joka sisälsi fysiologista liuosta 36 °C lämpötilassa (koostumus esitetty edellä).

Preparaattia stimuloitiin bipolaarisen elektrodin avulla, 1 joka oli liitetty stimulaattoriin (frekvenssi = 25 60 sykäystä minuutissa). Ventrikulaarinen aktiopotentiaali mitattiin klassisella mikroelektrodimenetelmällä. Tyypilliset parametrit mitattiin aktiopotentiaaleista (PA) ennen ja jälkeen tutkittavan yhdisteen antamista kolmena peräkkäisenä ja kasvavana pitoisuutena (30 min perfuusiota pi-30 toisuutta kohden). Määritettiin pitoisuus, joka saa aikaan 50-prosenttisen vähennyksen PA:n kestossa (CI50).

Tulokset on esitetty alla olevassa taulukossa 2: ii 15 90545 TAULUKKO 2

Aktiopotentiaalin keston vähentyminen Yhdiste Esimerkki CI50 SR 44866 1 1,5 10Λ 5 Yhdiste A - 1,6· 10'5

Yhdiste B - 2,0 105

Taulukosta näkyy, että aktiopotentiaalin kesto vähenee selvästi. Erityisesti yhdisteen SR 44866 pitoisuus, 10 joka saa aikaan tälle parametrille 50-prosenttisen vähennyksen on 10 kertaa pienempi kuin yhdisteen A pitoisuus, mikä osoittaa suurempaa elektrofysiologista aktiivisuutta membraanipermeabiliteetissa, joka liittyy tähän repolari-saatiofaasiin.

15 Tutkittavan yhdisteen elektrofysiologinen profiili osoittaa, että sillä ei ole merkittävää vaikutusta lepopo-tentiaaliin eikä depolarisaation maksimaaliseen nopeuteen, mikä tarkoittaa sitä, että tutkittavalla yhdisteellä ei ole paikallista anesteettista aktiivisuutta.

20 C) Antihypertensiivinen aktiivisuus spontaanisti hvpertensoiduilla valveilla oleville rotille (SHR).

Koe toteutettiin 11-12 viikkoa vanhoille SHR-koi-rasrotille (rotua Wistar), joille koetta edeltävänä päivänä laitettiin pentobarbitaali-nukutuksessa katedri a. ca-25 rotikseen. Kokeen aikana valveilla olevilta eläimiltä mitattiin diastolinen (PAD) ja systolinen (PAS) valtimopaine jatkuvasti, mittaus aloitettiin 1 tunti ennen ja sitä jatkettiin 2 tuntia yhdisteen annostuksen jälkeen. Kardiaali-nen frekvenssi (FC) määritettiin sykkivän valtimopaineen 30 avulla, ja se rekisteröitiin jatkuvana samanaikaisesti.

Yhdisteet annosteltiin oraalisesti 2 ml:n tilavute-na 100 g eläimen ruumiinpainoa kohden suspensiona 5-pro-senttisessa arabikumin vesiliuoksessa.

16 90545

Tulokset on ilmoitettu alla olevassa taulukossa 3.

TAULUKKO 3

Valtimopaineen väheneminen 5 Yhdiste Esimerkki Annos Keskimääräisen Vaiku- mg/kg valtimopaineen tusaika maksimaalinen vä- p.o.

heneminen mmHg (± e.s.) SR 44866 1 0,02 34 ± 6 90 0,03 41 ± 6 >120

Yhdiste A - 0,10 30 ± 10 60 0,20 56 ± 11 90 10 ..........................

Kaavan I mukaiset yhdisteet ovat tehokkaita antihy-pertensiivisiä yhdisteitä joiden aktiivisuus on samaa luokkaa tai suurempi kuin yhdisteellä A.

Lisäksi on havaittu, että kaavan I mukaisilla yh-15 disteillä on pidempi vaikutusaika kuin yhdisteellä A.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä on lisäksi tutkittu antiarytmisinä yhdisteinä seuraavan testin D) mukaisesti.

D) Antiarvtminen aktiivisuus valveilla olevassa koirassa.

20 Käytetty menetelmä on esitetty julkaisussa Dupuis et ai., (Br. J. Pharmacol. 1976, 58., p. 409) ja siinä akuutti infarkti saadaan aikaan asettamalla suljettuun tooraksiin kuparijousi koronaariverenkiertoon. EKG mitattiin telemetrisesti, ja ekstrasystolit analysoitiin ja 25 laskettiin automaattisesti, sillä eläintä tarkkailtiin sisäisellä TV-piirillä. Yhdisteet annettiin oraalisesti eläimille, joilla oli vähintään 50 prosenttia ekstrasysto-leita.

Kaavan I mukaisella yhdisteellä SR 44866, jota an-30 nettiin oraalisesti 0,03 mg/kg ja 0,1 mg/kg, on merkit- h 17 90545 tävää antiarytmistä aktiivisuutta, ja se vähentää ekstra-systoleiden määrää tai palauttaa sinusrytmin ajassa, joka vaihtelee välillä 45 min - 2 tuntia eläimestä riippuen.

Edellä olevat biologiset määritykset osoittavat, 5 että kaavan I mukaiset yhdisteet ovat tehokkaita antihy-pertensiivisiä aineita ja potentiaalisia antiarytmisia yhdisteitä.

Kaavan I mukaisen yhdisteen SR 44866v akuutti toksisuus määritettiin hiirillä oraalisesti eri annoksilla 10 10 eläimen ryhmällä; vertailuaineena oli yhdiste A.

Letaalit annokset (DL) laskettiin näille kahdelle yhdisteelle ja ne on esitetty alla olevassa taulukossa 4.

TAULUKKO 4 15 DLo mg/kg DL50 mg/kg SR 44866 500 1000

Yhdiste A 500 välillä 500 -1000 Näillä kahdella yhdisteellä on siis toisiinsa ver-20 rattavissa oleva toksisuus, mutta yhdisteen SR 44866 aktiivisuus on noin 10 kertaa suurempi suurimmassa osassa kokeita. Päätelmänä voidaan sanoa, että kaavan I mukaisilla yhdisteillä on suurempi terapeuttinen kerroin kuin verta iluyhdisteillä.

Claims (3)

18 90545

1. Menetelmä terapeuttisesti aktiivisten 2,2-dime-tyylikromeenijohdannaisten valmistamiseksi, joilla on kaa- 5 va p. ^ N I (I) 10 kAoA-cH3 ch3 15 jossa Z tarkoittaa syaani- tai dietyylifosfonoryhmää, tunnettu siitä, että 3-kromanoli, jolla on kaava Cl (II) ^^\0^VCH3 xch3 25 jossa Z tarkoittaa samaa kuin edellä, dehydratoidaan alka-1imetällihydridillä.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä 6-syaa-ni-4- (1,2-dihydro-2-okso-l-pyridyyli) -2,2-dimetyylikromee- 3. nin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että 3-kroma noli, jolla on kaava I: 19 90 545 ch3 10 dehydratoidaan alkalimetallihydridillä.

3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan (II) mukainen 3-kroma-noli dehydratoidaan natriumhydridillä tetrahydrofuraanissa lämpötilavälillä 50 °C ja 100 °C. 20 90545