FI87794B - Foerfarande foer framstaellning av tripeptidderivat - Google Patents

Description

1 S7794

Menetelmä tripeptidijohdannaisten valmistamiseksi Tämä keksintö koskee menetelmää tripeptidijohdannaisten valmistamiseksi, joilla on seuraava kaava (I) 5 T” (CHj )«. -NH* ί00*1 , (I)

Rl —W—CO—NH—CH—CO-NH—CH( CHi ) i -CO-Rj 10 jossa

Rx on Ci.^-alkyyliryhmä, C4_7-sykloalkyyli- tai C5_7-sykloalkyyli-alempi alkyyliryhmä, fenyyli- tai fenyyli-alempi alkyyliryhmä, joissa bentseenirengas voi mahdollisesti olla substituoitu 1-4 substituentilla joukosta 15 halogeeni, alempi alkyyli, alempi alkoksi, fenyyli, mety-leenidioksi, etyleenidioksi, amino, di(alempi alkyyli)-amino ja hydroksi, naftyyli- tai naftyyli-alempi alkyyliryhmä, joissa naftaleenirengas voi mahdollisesti olla substituoitu 1-3 substituentilla joukosta halogeeni, 20 alempi alkyyli, alempi alkoksi ja hydroksi, heterosykli- nen ryhmä tai heterosykli-alempi alkyyliryhmä, joissa he-terosyklinen ryhmä on tyydyttynyt tai tyydyttymätön 5-tai 6-jäseninen rengas, joka sisältää 1-3 heteroatomia joukosta typpi, happi ja rikki ja voi mahdollisesti olla 25 substituoitu 1-3 substituentilla joukosta halogeeni, alempi alkyyli, alempi alkoksi, amino, di(alempi alkyyli )amino, hydroksi, okso ja tyydyttynyt 5- tai 6- jäseninen typpeä sisältävä heterosyklinen ryhmä, ja voi edelleen mahdollisesti olla fuusioitunut bentseenirenkaaseen, 30 tai imidatsolyylivinyyliryhmä; R2 on vetyatomi, ^.^-alkyyliryhmä tai bentsyyli- ryhmä; R3 on 2(S)-karboksi-indolin-l-yyli- tai 2-karbok- si(2S,3aS,7aS)oktahydroindol-1-yyliryhmä; .35 W on yksinkertainen sidos tai -0-; 2 87794.

T on yksinkertainen sidos, -S- tai -S-; ja 0 m on 2 tai 3; 5 edellyttäen, että emäksisen aminohappo-osan a-hii- lellä on L-konfiguraatio ja glutamiinihappo-osan a-hii-lellä on D-konfiguraatio, ja niiden suolojen valmistamiseksi .

Näitä yhdisteitä voidaan käyttää lääkeaineina, 10 erityisesti verenpainetta alentavina aineina.

yhdisteinä, jotka ovat rakenteeltaan samankaltaisia kuin edellä olevan kaavan (I) mukaiset yhdisteet, esittävät G.M. Ksander et ai. 1-(L-lysyyli-gamma-D-gluta-myyli)indoliini-2(S)-karboksyylihapon ja l-( N2, N6-dibent-15 syylioksikarbonyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli)indolii- ni-2(S)-karboksyylihapon angiotensiiniä muuttavan entsyymin (ACE) inhibiittoreina (Journal of Medicinal Chemistry, 1985, voi. 28, nro 11, sivut 1606-1611). Tässä julkaisussa todetaan, että näillä tunnetuilla yhdisteillä on 20 ACE:n inhibointikyky in vitro. Tutkimukset ovat kuitenkin osoittaneet, että in vivo -kokeessa rotilla näillä tunnetuilla yhdisteillä ei ole mitään merkittävää verenpainetta alentavaa vaikutusta oraalisesti annettuna.

Kaavan (I) mukaiset tripeptidijohdannaiset, jotka 25 tämä keksintö tarjoaa käyttöön, ovat uusia yhdisteitä, jotka rakenteellisesti eroavat edellä olevista tunnetuista yhdisteistä siinä, että aminoryhmä emäksisen aminohappo-osan N2-asemassa on monosubstituoitu spesifisellä : substituentilla ja sivuketjussa oleva aminoryhmä on subs- 30 tituoimaton. Edelleen yllä mainittujen tunnettujen yhdis- ’. . teiden perusteella on aivan odottamatonta se, että kaavan (I) mukaisilla tripeptidijohdannaisilla tai niiden suoloilla, jotka tämä keksintö tarjoaa, ei ole vain ACE:n inhibitiovaikutusta, vaan myös erinomainen verenpainetta 35 alentava vaikutus annettaessa oraalisesti, toisin kuin tunnetuilla yhdisteillä. Sen mukaisesti tämän keksinnön 3 3 7 7 5 4 mukaisesti valmistettuja kaavan (I) mukaisia tripeptidi-johdannaisia ja niiden suoloja voidaan käyttää lääkkeinä, erityisesti verenpainetta alentavina aineina.

Termi "alempi", käytettynä tässä selityksessä ja 5 mukana olevissa patenttivaatimuksissa määrittelemään ryhmää tai yhdistettä, merkitsee sitä, että näin määritellyssä ryhmässä tai yhdisteessä ei ole enempää kuin 5, edullisesti ei enempää kuin 3 hiiliatomia.

Alkyyliryhmä voi olla suora tai haarautunut.

10 "C^o-alkyyliryhmä” käsittää ryhmät metyyli, etyyli, n-propyyli, isopropyyli, n-butyyli, sek-butyyli, tert-bu-tyyli, isobutyyli, n-heksyyli, n-oktyyli ja n-dekyyli. Metyyli ja etyyli ovat edullisia "alempi alkyyliryhminä”. Esimerkkejä "alempi alkoksiryhmistä" ovat metoksi, etok-15 si, tert-butoksi ja n-pentyylioksi.

"C4_7-sykloalkyyliryhmä" käsittää ryhmät syklobu-tyyli, syklopentyyli, sykloheksyyli ja sykloheptyyli. Esimerkkejä "C5_7-sykloalkyyli-alempi alkyyliryhmistä" ovat syklopentyylimetyyli, sykloheksyylimetyyli, syklo-20 heksyylietyyli ja sykloheptyylimetyyli.

"Halogeeni" käsittää fluorin, kloorin, bromin ja jodin, ja kloori ja fluori ovat edullisia. Spesifisiä esimerkkejä "di(alempi alkyyli)aminosta" ovat dimetyyli-amino, dietyyliamino ja metyylietyyliamino.

25 Esimerkkejä "fenyyli-alempi alkyyliryhmästä" ovat bentsyyli ja fenetyyli. Bentseenirengas "fenyyli"- ja "fenyyli-alempi alkyyli"-ryhmissä voi mahdollisesti olla substituoitu 1-4, edullisesti 1-3 substituentilla, jotka on valittu joukosta halogeeni, alempi alkyyli, alempi al-30 koksi, fenyyli, metyleenidioksi, etyleenidioksi, amino, di(alempi alkyyli)amino ja hydroksi. Esimerkkejä substi-tuoiduista fenyyli- ja fenyyli-alempi alkyyliryhmistä ovat 4-kloorifenyyli-, 4-fluorifenyyli, 4-metyylifenyyli, 2-metyylifenyyli, 4-isopropyylifenyyli, 2-metyyli-6-hyd-35 roksifenyyli, 2-metoksifenyyli, 4-metoksifenyyli, 3-me- 4 37754 toksi4-hydroksifenyyli, 3,5-dimetoksi-4-hydroksifenyyli, 4-fenyylifenyyli, 3,4-etyleenidioksifenyyli, 3-amino-4-hydroksifenyyli, 4-dimetyyliaminofenyyli, 4-hydroksife-nyyli, 2-hydroksifenyyli, 4-klooribentsyyli, 2-fluori-5 bentsyyli, 2-klooribentsyyli, 4-metyylibentsyyli, 2-me- tyylibentsyyli, 4-metoksifenetyyli, 4-fenyylibentsyyli, 3,4-metyleenidioksibentsyyli ja 4-hydroksifenetyyli.

Esimerkkejä "naftyyli-alempi alkyyliryhmästä" ovat alfa-naftyylimetyyli ja alfa-naftyylietyyli, ja naftalee-10 nirengas "naftyyliryhmässä" ja "naftyyli-alempi alkyyli-ryhmässä" voi mahdollisesti olla substituoitu 1-3, edullisesti 1-2 substituentilla, jotka on valittu joukosta halogeeni, alempi alkyyli, alempi alkoksi ja hydroksi. Esimerkkejä substituoiduista "naftyyli"- ja "naftyyli-15 alempi alkyyli"-ryhmistä ovat 3-hydroksinaftalen-2-yyli, 6-hydroksinaftalen-2-yyli, 3-metyylinaftalen-l-yyli ja 6-metoksinaftalen-l-yylietyyli.

"Tyydyttynyt tai tyydyttymätön 5- tai 6-jäseninen heterosyklinen ryhmä, joka sisältää typpi-, happi- tai 20 rikkiatomin heteroatomina" voi sisältää 1-3 tällaista he-teroatomia, ja spesifisiä esimerkkejä ovat 2-furyyli, 2-pyrrolidinyyli, 3-pyridyyli, 2-pyridyyli, 4-pyridyyli, 2-tienyyli ja 2-pyratsinyyli. Esimerkkejä "heterosykli-alempi alkyyliryhmästä" ovat 2-pyridyylietyyli, 3-pyri-25 dyylimetyyli ja morfolinoetyyli.

Heterosyklinen osa näissä "heterosyklisissä" ja "heterosykli-alempi alkyyli"-ryhmissä voi mahdollisesti olla substituoitu 1-3, edullisesti 1 tai 2 substituentilla, jotka on valittu joukosta halogeeni, alempi alkyyli, 30 alempi alkoksi, amino, di(alempi alkyyli)amino, hydroksi, okso ja tyydyttynyt 5- tai 6-jäseninen typpeä sisältävä heterosyklinen ryhmä (esimerkkejä tästä typpeä sisältävästä heterosyklisestä ryhmästä ovat 1-pyrrolidinyyli ja morfolino). Esimerkkejä näistä substituoiduista hetero-35 syklisistä tai heterosykli-alempi alkyyliryhmistä ovat 5 3779*1 2-klooripyridin-5-yyli, 2-klooripyridin-3-yyli, 2-metyyli pyridin-5-yyli, 2-metoksipyridin-5-yyli, 2-etoksipyri-din 5-yyli, 2-n-propyylioksipyridin-5-yyli, 2-isopropok-sipy ridin-5-yyli, 2-aminopyridin-5-yyli, 2-dimetyyliami-5 no pyridin-5-yyli, 2-hydroksipyridin-5-yyli, 2-pyrroli-don-5 yyli, 2-pyrrolidinyylipyridin-5-yyli, 2-morfolino-pyridin 5-yyli, 3-hydroksipyridin-2-yylimetyyli, 3-metok-sipyridin 2-yylimetyyli, 2-klooripyridin-6-yylimetyyli ja 2-metyyli pyridin-6-yylimetyyli. Bentseenirengas voi mah-10 dollisesti olla fuusioitunut edellä mainittuun heterosyk-liseen ryhmään. Esimerkkejä tällaisista fuusiorengassys-teemeistä ovat kinolin-3-yyli, indolin-2-yyli, tianaften-2-yyli, kinoksalin-2-yyli ja isokinolin-l-yyli.

Yleiskaavassa (I) T on edullisesti yksinkertainen 15 sidos ja R2 on vetyatomi.

Edullista tripeptidijohdannaisten ryhmää, jonka tämä keksintö tarjoaa, esittää seuraava kaava <CH04-—NH, , 2 m 2

CH0 C00H

20 , 2 , R11-W'-CO-NH-CH-CO-NH-CH4CH2^-CO-R3 (1-1) jossa Ru-W'- on C4_7-sykloalkyyli-, C4_7-sykloalkyylioksi, sykloheksyylimetyylioksi- tai sykloheksyylietyylioksiryh-25 mä, fenyyliryhmä, joka voi mahdollisesti olla substituoi-tu substituentilla, joka on valittu joukosta C^-alkoksi, fluori, kloori ja hydroksi, bentsyylioksi- tai fenetyyli-oksiryhmä, joissa bentseenirengas voi mahdollisesti olla substituoitu substituentilla, joka on valittu joukosta 30 C1.3-alkoksi, metyleenidioksi ja hydroksi, pyridyyliryh-mä, joka voi olla valinnaisesti substituoitu 2- tai 6-asemassa substituentilla, joka on valittu joukosta fluori, kloori, C^j-alkoksi, metyyli ja dimetyyliamino, pyri-dyylimetyylioksi- tai pyridyylietyylioksiryhmä, jossa py-35 ridiinirengas voi mahdollisesti olla substituoitu, 3- tai 6 37794 6-asemassa substituent! 11a, joka on valittu joukosta (netoksi ja hydroksi, 2-indolinyyli-, 2-pyrrolidinyyli-, 2-pyratsinyyli-, 2-furyyli-, 2-tienyyli- tai 3-kinolyyli-ryhmä tai 4-imidatsolyylivinyyliryhmä; R3 on 2(S)-kar-5 boksi-indolin-l-yyli- tai 2-karboksi(2S,3aS,7aS)oktahyd-roindol-l-yyliryhmä; ja m on 2 tai 3; edellyttäen, että emäksisen aminohappo-osan α-hiilellä on L-konfiguraatio ja glutamiinihappo-osan α-hiilellä on D-konfiguratio.

Edullisempi kaavan (I) mukaisten tripeptidijohdanto naisten ryhmä, jonka tämä keksintö tarjoaa, ovat tripep-tidijohdannaiset, joita esittää seuraava kaava (CH2fT-NH2 CH2 cooh 15 R12-W"-CO-NH-CH-CO-NH-CH4CH2^2-CO-R3 (1-2) jossa R12-W- on syklobutyyli-, syklopentyyli-, syklobu-tyylioksi- tai syklopentyylioksiryhmä, fenyyliryhmä, joka voi mahdollisesti olla substituoitu 2- tai 4-asemassa 20 substituentilla, joka on valittu joukosta C^-alkoksi (erityisesti metoksi) ja hydroksi, fenetyylioksiryhmä, joka voi mahdollisesti olla substituoitu hydroksilla bentseenirenkaan 4-asemassa, tai pyridyyliryhmä, joka voi valinnaisesti olla substituoitu 2- tai 6-asemassa kloo-25 rilla tai C1.3-alkoksilla; ja R3 on 2(S)-karboksi-indolin-1-yyli- tai 2-karboksi-(2S,3aS,7aS)oktahydroindol-l-yyli-ryhmä, edellyttäen, että emäksisen aminohappo-osan a-hii-lellä on L-konfiguraatio ja glutamiinihappo-osan a-hii-lellä on D-konfiguraatio.

30 Keksinnön mukaisesti valmistetuissa tripeptidijoh dannaisissa (I) on aminoryhmä, ja kun R2 on vety, myöskin yksi tai kaksi karboksyyliryhmää. Niinpä ne muodostavat suoloja erilaisten happojen kanssa, esimerkiksi epäorgaanisten happojen, kuten vetykloridihapon ja rikkihapon 35 kanssa, ja orgaanisten happojen, kuten trifluorietlkkaha- 7 87794 pon ja etikkahapon kanssa, tai voivat esiintyä suolojen, kuten natrium-, kalium-, kalsium- ja ammoniumsuolojen tai emäksisten aminohapposuolojen muodossa. Farmaseuttisesti sopivat suolat ovat edullisia.

5 Keksinnön mukaisesti valmistetut tripeptidijohdan- naiset (I) voivat myös esiintyä hydraattien tai solvaat-tien, kuten dioksaanin kanssa muodostuneen solvaatin, muodossa, ja tulisi ymmärtää, että tämä keksintö käsittää myös näiden tripeptidijohdannaisten tällaisten hydraat-10 tien ja solvaattien valmistamisen.

Tripeptidijohdannaisissa (I) on ainakin kolme asymmetristä hiiliatomia, so. hiiliatomi emäksisen aminohappo-osan alfa-asemassa, hiiliatomi glutamiinihappo-osan alfa-asemassa ja hiiliatomi 2(S)-karboksi-indolin-l-yyli-15 ryhmän tai 2-karboksi(2S,3aS,7aS)oktahydroindol-l-yyli- ryhmän 2-asemassa. Emäksisen aminohappo-osan alfa-hiilen konfiguraatio on L, ja glutamiinihappo-osan alfa-hiilen konfiguraatio on D.

Seuraavat yhdisteet ovat erityisen edullisia kaa-20 van (I) mukaisten tripeptidijohdannaisten joukossa.

1- [N2-syklobutyylikarbonyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli]indoliini-2(S)-karboksyylihappo, ( 2S, 3aS, 7aS) -1- [N2-syklobutyylikarbonyyli-L-lysyy-li-gamma-D-glutamyyli]oktahydro-lH-indoli-2-karboksyyli-*’·"·* 25 happo, "* ( 2S, 3aS, 7aS )-l - [N2-syklopentyylikarbonyyli-L-ly- syyli-gamma-D-glutamyyli]oktahydro-lH-indoli-2-karboksyy- lihappo, 1- [N2-syklobutyylioksikarbonyyli-L-lysyyli-gamma-. 30 D-glutamyyli]indoliini-2(S)-karboksyylihappo, ( 2S, 3aS, 7aS)-1-[N2-syklobutyylioksikarbonyyli-L-. . lysyyli-gamma-D-glutamyyli]oktahydro-1 H-indoli-2-karbok- ; syylihappo, 1-[N2-syklopentyylioksikarbonyyli-L-lysyyli-gamma-35 D-glutamyyli] indoliini-2( S) -karboksyylihappo, 8 87794 ( 2S, 3aS, 7aS )-1- [N2-syklopentyylioksikarbonyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli]oktahydro-lH-indoli-2-karbok-syylihappo, 1- [N2-bentsoyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli]in-5 doliini-2(S)-karboksyylihappo, ( 2S, 3aS, 7aS )-1- [N2-bentsoyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli]oktahydro-lH-indoli-2-karboksyylihappo, ( 2S, 3aS, 7aS )-1- [N2- ( 2-metoksibentsoyyli ) -L-lysyy-li-gamma-D-glutamyyli]oktahydro-ΙΗ-indoli-2-karboksyyli-10 happo, ( 2S, 3aS, 7aS )-1- [N2-( 4-hydroksibentsoyyli )-L-lysyy-ligamma-D-glutamyyli]oktahydro-ΙΗ-indoli-2-karboksyylihappo , 1- [N2-fenetyylioksikarbonyyli)-L-lysyyli-gamma-D-15 glutamyyli]indoliini-2(S)-karboksyylihappo, ( 2S, 3aS, 7aS )-1- [N2-( fenetyylioksikarbonyyli )-L-ly-syyli-gamma-D-glutamyyli]oktahydro-lH-indoli-2-karboksyy-lihappo, ( 2S, 3aS, 7aS)-l-[N2-(4-hydroksifenetyylioksikarbo-20 nyyli)-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli]oktahydro-lH-indoli- 2-karboksyylihappo, 1 - [ N2-nikotinoyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli]-indoliini-2 (S)-karboksyylihappo, ( 2S, 3aS, 7aS )-1- [N2-nikotinoyyli-L-lysyyli-gamma-25 D-glutamyyli]oktahydro-lH-indoli-2-karboksyylihappo, (2S,3aS,7aS)-l - [N2-nikotinoyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli]oktahydro-lH-indoli-2-karboksyylihapon mono- natriumsuola, ( 2S, 3aS, 7aS )-1-[N2-isonikotinoyyli-L-lysyyli-gam-30 ma-D-glutamyyli]oktahydro-ΙΗ-indoli-2-karboksyylihappo, (2S,3aS,7aS)-l-[N2-(pyridiini-2-karbonyyli)-L-ly-syyli-gamma-D-glutamyyli]oktahydro-ΙΗ-indoli-2-karboksyy-lihappo, (2S,3aS,7aS)-l-[N2-( 6-kloorinikotinoyyli)-L-ly-·’ 35 syyli-gamma-D-glutamyyli]oktahydro-ΙΗ-indoli-2-karboksyy- lihappo, 9 87794 ( 2S, 3aS, 7aS )-1- [N2- ( 6-metoksinikotinoyyli )-L-ly-syyli-gamma-D-glutamyyli]oktahydro-lH-indoli-2-karboksyy-lihappo, ( 2S, 3aS, 7aS )-1- [N2- ( 6-etoksinikotinoyyli )-L-ly-5 syyli-gamma-D-glutamyyli]oktahydro-lH-indoli-2-karboksyy- lihappo, ( 2S, 3aS, 7aS ) -1- [N2- ( 6-n-propyylioksinikotinoyyli ) -L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli]oktahydro-lH-indoli-2-kar-boksyylihappo ja 10 ( 2S, 3aS, 7aS ) -1- [N2- ( 6-isopropyylioksinikotinoyy- li)-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli]oktahydro-lH-indoli-2-karboksyylihappo.

Edullisia kaavan (1-2) mukaisia tripeptidijohdannaisia ovat ne, joissa R12-W"- on fenyyliryhmä substitu-15 oituna hydroksilla tai C^j-alkoksilla 2- tai 4-asemassa.

Ne, joissa R12-W"- on 4-hydroksifenyyli, ovat edullisempia ja (2S,3aS,7aS)-l-[N2-(4-hydroksibentsoyyli)-L-lysyy-li-gamma-D-glutamyyli]oktahydro-lH-indoli-2-karboksyyli-happo ja ( 2S, 3aS, 7aS )-l-[N2-nikotinoyyli-L-lysyyli-gamma-20 D-glutamyyli]oktahydro-lH-indoli-2-karboksyylihappo ovat edullisimpia.

Kaavan (I) mukaisia tripeptidijohdannaisia voidaan valmistaa siten, että (a) yhdiste, jolla on seuraava kaava ’ · 1 25 T-(CH1 )»-NH-Rs ?H1 (II)

Rt -W-C0-NH-CH-C00H

30 jossa R1( W, T, m ja emäksisen aminohappo-osan a-hiilen konfiguraatio ovat edellä määritellyt ja ’· R,, on vetyatomi tai aminon suojaryhmä, tai sen karboksyyliryhmän osalta reaktiivinen johdannainen saate-Γ 35 taan reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on seuraava kaava 10 87794

?00Rl . ' (HD

Ha N-CH- (CHj ) * -CO-Ri 5 jossa R2 Ja glutamiinihappo-osan α-hiilen konfiguraatio ovat edellä määritellyt ja R3' on R3 tai esteröity R3, joka on ryhmä, jossa on R3:n 2-asemassa karboksyyliryhmän sijasta Cj.j-alkoksikarbonyyli- tai bentsyylioksikarbonyy-10 liryhmä, tai sen happoadditiosuolan kanssa, tai (b) yhdiste, jolla on seuraava kaava

Rj-W-COOH (IV) 15 jossa

Rj ja W ovat edellä määritellyt, tai sen karbok syyliryhmän osalta reaktiivinen johdannainen saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on seuraava kaava T- ( CHj ) m -NH-Ri 20 | CHi COORi ^ (V)

Hi N-CH-C0-NH-CH-(CHi )i -CO-Ri jossa R2, R3' , R5, T, m ja emäksisen aminohappo-osan ja 25 glutamiinihappo-osan α-hiilien konfiguraatiot ovat edellä .määritellyt, tai sen happoadditiosuolan kanssa, tai • (c) yhdiste, jolla on seuraava kaava T-(CHi )»-NH-Ri CHz C00R, . .

30 | I (VIJ

Ri-W-C0-NH-CH-C0-NH-CH-{CHi ),-COOH

. . jossa

Rx, R2, R5, T, w, m ja emäksisen aminohappo-osan ja glutamiinihappo-osan α-hiilien konfiguraatiot ovat edellä : " 35 määritellyt, tai sen karboksyyliryhmän osalta reaktiivi- n 87794 nen johdannainen tai sen molekyylinsisäinen anhydridi saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on seuraava kaava 5 R3'-H (VII) jossa R3' on edellä määritelty, tai sen happoadditiosuo-lan kanssa, ja tarvittaessa poistetaan saadussa yhdis-10 teessä mahdollisesti oleva suojaryhmä ja/tai muutetaan saatu yhdiste suolaksi.

Reaktiot, joita käytetään menetelmävaihtoehdoissa (a), (b) ja (c), ovat peptidisointireaktioita ja ne voidaan suorittaa tavanomaisilla menetelmillä, joita käyte-15 tään peptidien synteeseissä [katso esimerkiksi Methoden der Organischen Chemie (toim. Houben-Weyl), voi. 15, osa I, osa II, (1974)]. Kun kaavojen (II), (IV) ja (VI) mukaisten karboksyylihappojen annetaan reagoida vapaassa karboksyylihappomuodossa kaavojen (III), (V) ja vastaa-20 vasti (VII) mukaisten amiiniyhdisteiden kanssa, reaktiot suoritetaan mukavasti kondensoivan aineen, kuten Ν,Ν'-di-sykloheksyylikarbodi-imidin, l-etyyli-3-(3-dimetyyliami-nopropyyli)karbodi-imidihydrokloridin, karbonyylidi-imi-datsolin, difenyylifosforyyliatsidin tai dietyylisyano-25 fosfaatin läsnäollessa. Kun käytetään kondensoivana aineena karbodi-imidiä, voidaan reaktiosysteemiin mahdolli-.··. sesti lisätä esimerkiksi 1-hydroksibentsotriatsolia, N- hydroksisukkiini-imidiä tai N-hydroksi-5-norborneeni-2,3-dikarboksi-imidiä inhiboimaan rasemoitumista.

30 Tällaisen kondensoivan aineen käyttämisen sijasta voidaan kaavojen (II), (IV) ja (VI) mukaisten yhdisteiden antaa reagoida karboksyyliryhmän osalta reaktiivisten ·. johdannaistensa muodossa kaavojen (III), (V) ja (VII) mu kaisten amiiniyhdisteiden kanssa. Esimerkkejä kaavojen 35 (II), (IV) ja (VI) mukaisten yhdisteiden reaktiivisista 12 87794 johdannaisista ovat happohalogenidit, happoatsidit, se-kahappoanhydridit, aktiiviset esterit ja aktiiviset amiinit .

Reaktiot menetelmävaihtoehdoissa (a), (b) ja (c) 5 suoritetaan tavallisesti liuottimessa lämpötila välillä 40 °C:sta 40 °C:seen. Esimerkkejä liuottimista, joita voidaan käyttää, ovat tetrahydrofuraani, dioksaani, kloroformi, metyleenikloridi, etyyliasetaatti, asetoni, me-tyylietyyliketoni, dimetyyliformamidi, asetonitriili, 10 etanoli, metanoli ja vesi. Näitä liuottimia voidaan käyttää yksinään tai yhdistelmänä. Kun happo esiintyy sivutuotteena tai kaavojen (III), (V) ja (VII) mukaiset yhdisteet ovat happoadditiosuoloja tai kaavojen (III), (V) ja (VII) mukaisissa yhdisteissä on vapaa karboksyyliryh-15 mä, reaktio suoritetaan edullisesti siten että läsnä on emäs happoakseptorina. Esimerkkejä emäksistä, joita voidaan käyttää, ovat aikaiihydroksidi, kuten natriumhydrok-sidi tai kaliumhydroksidi, alkalikarbonaatti tai -bikar-bonaatti, kuten natriumbikarbonaatti, natriumkarbonaatti 20 tai kaliumkarbonaatti, tai orgaaninen emäs, kuten tri-etyyliamiini, N-metyylimorfoliini, disykloheksyyliamii-ni, pyridiini tai 4-dimetyyliaminopyridiini.

Edellä olevissa reaktioissa lähtöaineita, joissa aminoryhmä tai karboksyyliryhmä on suojattu, voidaan 25 käyttää kuten yleensä on tapana peptidisynteesissä. Kaikki peptidisynteesialalla tunnetut suojaryhmät ovat käyttökelpoisia suojaamaan amino- tai karboksyyliryhmää, mut- ta ne pitäisi valita käyttötarkoituksen mukaan (katso edellä viitattu Methoden der Organischen Chemie). Bent-30 syylioksikarbonyyli, tert-butoksikarbonyyli ja 3-nitro- 2-pyridiinisulfenyyli voidaan mainita viitteinä esimerk-. . keinä aminonsuojaryhmästä R5. Reaktion jälkeen suojaryh mät voidaan poistaa tavallisella tavalla. Esimerkiksi alempi alkyyli-esterit ja aralkyyliesterit suojaryhminä 35 karboksyyliryhmälle voidaan eliminoida hydrolyysillä i3 87794 käyttäen laimeita emäksiä, esimerkiksi 1 - 2 N NaOH tai KOH. Bentsyylioksikarbonyyliryhmä tai bentsyyliesterin bentsyyliryhmä voidaan mukavasti eliminoida katalyyttisellä pelkistyksellä palladium-hiilen läsnä ollessa tai 5 katalyyttisellä siirtohydrauksella käyttäen palladium- hiili/ammoniumformaattia tai palladium-hiili/sykloheksee-niä tai HBr/etikkahapon vaikutuksella. Tert-butoksikarbo-nyyliryhmä tai tert-butoksiesterin tert-butoksiryhmä voidaan eliminoida vahvan hapon, kuten trifluorietikkahapon 10 vaikutuksella huoneenlämmössä tai jäällä jäähdyttäen.

Keksinnön mukaisesti valmistetut tripeptidijohdannaiset (I), voidaan haluttaessa muuttaa edellä esimerkein esitetyiksi suoloiksi tavallisella tavalla.

Tripeptidijohdannaiset (I) tai niiden suolat, jot-15 ka on valmistettu edellä kuvatulla tavalla, voidaan eristää ja puhdistaa tunnetuilla menetelmillä, kuten uutto, konsentrointi, neutralointi, suodatus, uudelleenkiteytys, pylväskromatografia, korkeapainenestekromatografia tai ioninvaihtohartsi, sopivana yhdistelmänä.

20 Keksinnön mukaisesti valmistetuilla tripeptidijoh dannaisilla (I) ja niiden suoloilla on erinomaiset farmakologiset vaikutukset, erityisesti verenpainetta alentava vaikutus ja ne ovat käyttökelpoisia aineita estettäessä ja hoidettaessa kardiovaskulaarisia sairauksia, 25 kuten korkeaa verenpainetta ja verentungosta aiheuttavaa sydänvikaa.

Keksinnön mukaisesti valmistettujen tripeptidijohdannaisten (I) ja niiden suolojen erinomainen verenpainetta alentava vaikutus voidaan osoittaa seuraavalla ve-30 renpainetta alentavaa vaikutusta selvittävällä in-vivo -kokeella käyttäen munuaiskorkeaverenpaineisia rottia. Tulokset in vitro-ACE-inhibointivaikutuskokeesta on myös esitetty jäljempänä.

Verenpainetta alentava vaikutus 35 Urospuolisille Sprague Dawley-rotille (5 viikkoa 14 87 794 vanhoja) aiheutettiin vasemman munuaisvaltimon kuristuminen hopeisella nipistimellä (sisähalkaisija 0,22 mm) kevyessä eetterinukutuksessa. Oikea munuainen ja munuais-laskimo jätettiin koskemattomiksi. Noin 6-10 viikkoa ni-5 pistimen asetuksen jälkeen käytettiin rottia, joiden ve renpaine oli yli 180 mmHg. Näitä käsiteltyjä rottia nimitetään kaksimunuaisiksi Goldblatt-tyyppisiksi munuaiskor-keaverenpaineisiksi rotiksi ja niitä pidetään munuaisve-risuonten supistamisesta aiheutuvan korkean verenpaineen 10 tyypillisenä mallina.

Verenpaine mitattiin häntäkalvosinmenetelmällä käyttäen ohjelmoitua sähköistä verenpainemittaria (PE-300, Narco Biosystem, USA) lämmittämällä ensin 38 °C:ssa lämpölaatikossa 10 minuutin ajan.

15 Koeyhdisteiden verenpainetta alentava vaikutus ar vioitiin yhden oraalisen antokerran jälkeen munuaiskor-keaverenpaineisissa rotissa (3-5 rottaa/ryhmä). Tulokset on esitetty taulukossa 1.

In vitro-ACE-inhibitiokoe 20 Koeväliaine sisälsi ACE-preparaatin (kanin keuh ko), synteettistä substraattia (hippuryyli-L-histidyyli-L-leusiini 5 mM), NaCl (300 mM) ja fosfaattipuskuria (100 mM, pH 8,3). Se sekoitettiin lopulliseen 0,300 ml:n tilavuuteen ja inkuboitiin 37 °C:ssa 30 minuuttia koeyhdis-25 teiden läsnä tai poissaollessa. Kun reaktio oli lopetettu :·· lisäämällä 300 μΐ IN HC1, muodostunut hippuurihappo uu- tettiin 2 tilavuudella etyyliasetaattia. Kun etyyliase-·. taatti oli haihdutettu ja tislattua vettä oli lisätty, ; hippuurihappo määritettiin absorbanssistaan 228 nm:ssä 30 spektrofotometrillä (Hitachi 100-41).

. ACE-inhibition määrä laskettiin aktiivisuuksista koeyhdisteiden kanssa ja ilman niitä. IC50-arvo (molaari-nen konsentraatio, joka vaaditaan ACE-aktiivisuuden 50 • ; %:iseen inhibitioon) saatiin annos-inhibitio-käyrästä.

35 Tulokset on esitetty seuraavassa taulukossa 1.

15 87794 I Μ Λ ή ι 3g σι οο οο οο

Ä4S3 I I ι ι I

G <0 ιη ·* ο ο ο ο ο -H O -H o r-i <—I ι—I ι-Η ι-Η

I -Η > in X X X X X

W-P-Ho <ο ro rr n to Ο -Η ·Η Μ ·» ·Ν · rfj Λ-Ρ^ tn r-i οο cm co -1------

•H I

(0 ·Η ft Ε<-G — Π3 *

Q) &i-P G K G G

II g It OI

> s <u (0 M tn -h >h 0 fÖ -P :0j to 03 f-) r-i

Jj in G -r-ι ro ro CM CM CM

d « P I III I

3 0) -P G 0) (1) G en n a:

ro O

OS O

ι P

0 __/ y co ( \ T 05 Z-ect s

Γ M

w (O) CM X \_f

05 U

O *+·______ cm o x x u -o

25 I

I 33

E Z

4- I CM

CMO X X E E E E

X u U CM I Ί- X X

tr*-0-0______ 33 g ro CO e e e Z______ ι o o ι ι G · w ä E-· -H-POeee e ι tn P Ό

r-i Λ5 <u -H

«__>1* M_____

O

CM

* . . . " I Λ - - I O CM / : S CM a:

ι x o ι ri-X f N

r-ι o ~ o O z x « ; ‘ Φ ®0

Ai 3 ------ • · * ιΗ *: G <u ι

to -P P

: ' . £H inaittO r-i ro co o •H E -P Ό -h n .': . rC w ·Η >j (D4t! _____ 87794 I cn~ •Hi 32 co σι en σι oo co

I I II I I

C Λ to ' O O oo o o

Ή O Ή O i—I i—I i—| r—i >—I *—I

! -H > m X X XX X X

W+j-hO m m σι ·μ· n h n ·η -h h ·~ *» ·· ·*· ·- ·» < Xi +j—' a\ m 'ro ι-h cm i "

•H I 0 -H

Cu Hifi — (0 * Φ 0>+J S-! g c fi Q) E rö Φ > E o -- rt X m "'"I 1—11 ® nj -P :ni co i— 'T in <—i h·

O u) q -n CM ro cm m· (N (N

+} co q i i il i i 3 Φ -p fi 3 OJ a> U Ci l/l aa a: a;

O O O

o o o

.Ό U U

r>- j> * [V

<°> O <©>

(N

03 33 = s c c c E m c (Nm = c l G · co

, -H 4-> O

H CO H Ό e e r = ε

,¾ Φ -H >iM CO

»Ö

. . O K

>3 U | I Q

. . -M I » O \ O */

(0 12 33 <n N__ cm J

-n I V 33 /yOi 33 f\ ·· — Ή O = (Uz U 2 33

0 : b- Φ 0 L

-¾_______

► . rH

: fi 0) i

- 0 -M M

Fh co (U :rfl H g +J o rH m «tr m ip Ό ·Η tn ή r-i i i .1 <i r t ,c; to -h

in Φ X

i7 87 794 I »s cn σ> <m cn οο σι

Ή I 3 I I II I I

,β A! β ·> ο ο ο ο ο σ

CinJWOl-H I—I <—I <—I —I Ή -HO-HinX x xx X x

I -rl >CJ in 00 «Ϊ «Τ Ή CN

W+J-Hn — *> ·> ·» ·» ·* Ο Ή ·Η~-^ vo τι* in '—i C Λ -P_______ -1--- •H I (0 -H Λ S*-β —> (ϋ * <D Ö .-P U ffi β β > S Φ

(Λ cH

n «J -P :nj cn r» cn cn σι oo

Jj W β -n Tl· ro CN TT cn ro

3 « 3 I I II I I

g <u +j β 4 <y a» A fim te s: k as o o o o o o

/u rf -K

r ' · · kr 6'

CN

05 03 = c c = e g co = «= e e b

β · ω H -M O

Ph W V-l Ό s se s e a: ω -h >ίΑ! tn I it d * |* { *

=:o " (o) V

O φ V *r* .. 3------=-- : d 0) i

P 4J M

, <d tn CU :tU

' ·' H il -S ω r' 01 rH IN co M*

SS” M ^ ι-N CN CN CN

: *; ‘; tH Φ Ai • » e 18 87794 h . 2 s σι σι σι οο σι co οο 2 , 2 ι ιι ι ιι ι

3 S S S S S S

7 T: in x xx x xx x

M n !1U 00 O VO ^ O Ή CM

rl Tj J M ^ ^ *- ·* ·* r. ^ < qmjw 10 m *r r-i co «-h cm •H \ fÖ ·Η g* G (Ö *

0) tn-P

m g g g d) E G <1) > E <U ,nw O Λ (Λ ,_j __j O m 4J 30 00 nvo o -s-oo ro

+) S h~ «*> (N CN -T «Nm (N

g w § ' ' 1 1 ' ι '

3 ®4J G S dl <D

G σ\ M__

03 OS

O o o o rt r? 0 <2>

{VJ

04 03eee=ce

E ΓΟ EE S EE E

G * W H -P O

f* 1/1 h Tl e ε e sr e ω -h >iä ra ' Λ ι

(0 O

o ™ y iii ~ _U I O O Q <N > * s 6 0J 1 !fe=d Λί . . 3--------

* »H

G Φ ι

fO P H

H ra <u :io •H £5 -G in {oi^· οο σν o ι—ι Ί3·ΗΜ <n (N (N (N (Nro ro ' - js ra -h in a> m i9 87794 .^1™£<τι οο οο σ σ σ»

ς-4 1/ r-< I I I I I I

c «® « 2 2 2 2 2 2 7 2 s! m χ x x x x χ

W-U-hO -η <N Ή ON in VO

r).pj._iH ·> ·"· ·* ·* <Λ.μ~ 1/1 ^ ^ 1/1 _J*__^

•H I

ιΰ ·η a, 0r-c ·~ <Ö *

Q) tr»4J

a) g tc <u > g φ - (C x ω (β !μ !irt « Γ" t" ™ O' 7 oSfi-π « 7 7 7 7 7 +J cn 3 1 1 1 1 1 1 2 a) +> c 2 <U (1) a cm k

S3 SC

° s o o P p

m ΓΛ [H

05 JZ- = c JZ - * ε ® o

IN

05 33 e e c = ε e m = s ε s ε β · to ^ ω H § c s ε c e

Λ 4) -H

....: >ιΛ ω ___ Ό ^ • ° I _7 i; -s I- ύ f <S> k ύ & : : : o <§N § ^ * . · 0-------

: »H

β <υ i <ϋ -P k E-t ω ω ’.to •Hg+J 04 00 ^ ιο r-~ oo »o -h o °° 00 0° n* ^ i! M -rl i» 0) X _____ 2o 87 794 I I r—t ^ ΟΛ 00 0>

L § I I I I I I

3|«o S 2 S 3 s 2 7.^'ςιηχ x x x x x

ώ o .j U σ» om cn (jo oo 'T

ritjUM ·* ·* *· ^ ·* ·ν < 3 +j 1/1 00 10

•H I <0 -H

a E<-fi ^ m *

QJ tO-P

u x d β o) ^ ni 0) >1 Q)

^ (0 X

“ - Tj Γη ^ 1/1 ™ t" π- co 9 S r* -Ä ^ 04 04 om "* on 4J OT β -Γ-Ί , . . . . , 3 « 3 1 1 1 1 1 1 3 Φ -P fi S (U φ ^ fi on w a: xx o o o o o o ο ου on |—\ Γ~{ 05 55- = c 2 - 2 - = __o___® o (0 s <N — 06 x = c : a o id as β Ή O o E a) ______— ω__

E m C E C E C

l fi · ω c_i -H -P O - n - _ _ ^ CAHT3 c c c

M Φ H

__>1* M______ nd ' Z ί ^ ft= ^ ^ <c| ": S 3 <ö> s “ i—I 1 - - i .... - — — . , - 3 3 0) i : '^jnniw« ^ ° Ή on ri> in •H p 4J ^ ^ 10 ^ ^ Ό ri a

' ' Λ W -H

X 0) M___ 2i 87794 s «

! I

------ C a I ω — co ω •η ι G S oo <r> σι I o> *- w ίΛ 3 I I I o I *- li G (Ö CO ·' O O O H O VO Tj .

•ΗΟΉΟι—I ι-l «—i X i—i * ν' 1 -H > ID X X X CO X I.TJln W P -H CJ r- vo o\ co h co n, U Ή *H H ^ *n ·» r- Ok, .

< J3 P ^ CN VO CO rH vo VO ^

____________V~ fd I

•HI - rt f- rt -H - -P g ft e<- <- c o g — rt * <- φ u a) cn-P — in m p 33 G G co (fl ΰ

φ £ rt φ ™ B

> Γ; <u rt 4j — m * -p 3

-H H CO CO >1 -p 'Z

ϊ rt P :rt O CM (H * * P CL) rj M CO G -π co co co co CM P G >.

p to G I I I I I ω -h ^ 2 ΦΡ G ·η «β β .3 Φ Φ S ft _η s β σι to Φ G - λ φ 5 -------υ ρ 5 as 33 cm cm φ r; O O *1 * H > ^ O OM rö u U o G · _/ _/ Λ I · -H Cn

co \ V P K Ö1 O

DJ 2 - e 2 - rt Λί H \ .2.

_/ _V Ä I > rti &1

/~A / \ I -HO 5' Φ S

(O) < ) ~ rH ft g S ^ vi/ \_/ w >1 ft O k — >1«! O ‘P 00 m CN C3 X! r- O 10 I >i -h ra „ H H H CO rH O -r.

G I >i O (β G

-H PJ >1 β G G _ -H I ra G P cd ,

CN i—I Ή ,χ φ G

« a: e c oho o ·η m Ό >ιΛ ·Η rt» +j “

β >1 p -p W X

•H G rö to (Ö Φ £ _ o M φ ra ra e -h Λ i m m -h c

E CO E E H P >—> H G H

ΪΗ G cn H ra rö 2 in .X rt -H rö 2 I E -H cn rö rt P ^ G · ra O rt toi p .x O „ •H PO rtN -p ^ -H °drt g· m prt e I G o G G h ,χ φ -H CO H -H -H rt ·π rt Γ) >ι ,Χ ffl Λ &1H-H H H jj I i>tH H ίπ H rl . . Q >s O rö -P rt Σι l ra T3 & P E rt .:. P G rt Φ rt i g -h p p p ^

...rt O I I Φ —- G -H G

• : O cm O -h ja -H rt ra rö " * · · ,Χ 33 cmh-hh ^g

• - P I o 33 >ι O Ό >i G G S

: ro S _/ cp >i ft ι >i -h g -h d .

*rv i j /—\ I ra ft ID g ^ 0 -H g — H A, (O) A >i rt 2 rt P p-^ij - · « f] v-y in I ή ^ * -ρ όρφ<τιο r- L J )—( ΙΛΛΙ ι h cm G rtrtrt0'^ . . . / \ PJ h ZH m φ ra - Ϊ . .* o OO -- ^ Cn P .B .j M \y l >ι II P to P B g G______> Ό > n • · H 'v V P Ä P . c \\<χ<φπ .·;*. En ra φ :rt \ \ h cn co

'.* -HgP .n j. , \ \ -K-K-K

S-5! 5 - 5 - \ \ : : : >< «m \ \ 22 87794 i

Myrkyllisyys Käytettiin urospuolisia STD-ddy-lajin hiiriä, jotka painoivat noin 22-25 g. Koeyhdisteiden (esimerkit 14 ja 46) oraaliset LD50-arvot hiirissä havaittiin suuremmiksi 5 kuin 3000 mg painokiloa kohden. Nämä tulokset osoittavat, että yhdisteiden myrkyllisyydet ovat pienet.

Edellä olevat koetulokset vahvistavat sen, että kaavan (I) mukaisilla tripeptidijohdannaisilla ja niiden farmaseuttisesti sopivilla suoloilla on erinomainen veren-10 painetta alentava vaikutus, joka kestää kauan ja on vähän myrkyllinen, ja siksi niitä voidaan käyttää lääkkeenä hoidettaessa korkeaa verenpainetta ja kardiovaskulaarisia sairauksia, kuten verentungosta aiheuttava sydänvika.

Keksinnön mukaisesti valmistettujen tripeptidijoh-15 dannaisten (I) antotapa voi olla oraalinen, parenteraali-nen tai intrarektaalinen, mutta edullisesti niitä annetaan oraalisesti. Kaavan (I) mukaisten tripeptidijohdannaisten tai niiden farmaseuttisesti sopivan suolan annostus vaihte-lee riippuen tämän verenpainetta alentavasti vaikuttavan 20 yhdisteen tyypistä, antomenetelmästä, potilaan kunnosta, painosta, iästä, jne. Annos on yleensä 0,001-5,0 mg painokiloa kohti päivässä, edullisesti 0,01-3,0 mg painokiloa kohti päivässä. Koska keksinnön mukaisesti valmistettu tripeptidi johdannainen (I) on vaikutukseltaan pitkäkestoinen, 25 on riittävää ottaa lääkettä kerran tai kahdesti päivässä esitettyinä kokonaisannoksina.

Tavallisesti kaavan (I) tripeptidijohdannaista tai sen farmaseuttisesti sopivaa suolaa annetaan potilaalle farmaseuttisen koostumuksen muodossa, joka koostuu tera-30 peuttisesti vaikuttavasta ja myrkyttömästä määrästä tällaista yhdistettä ja farmaseuttisesta kantajasta tai lai-. .· mennusaineesta. Farmaseuttinen koostumus muodostetaan se koittamalla kaavan (I) tripeptidijohdannainen tai sen farmaseuttisesti sopiva suola farmaseuttisesti sopivan kanta-”. · 35 jän tai laimennusaineen kanssa. Sopivia kantajia tai lai- .λ mennusaineita ovat ne, joita tavallisesti käytetään lääkkeiden 23 87 794 valmistuksessa ja jotka eivät reagoi kaavan (I) mukaisten tripeptidijohdannaisten tai niiden suolojen kanssa. Spesifisiä esimerkkejä näistä kantajista ovat laktoosi, tärkkelys, sakkaroosi, mikrokiteinen selluloosa, natriumkarboksi-5 metyyliselluloosa, kalsiumkarboksimetyyliselluloosa, metyy-liselluloosa, liivate, akaasia, hydroksipropyyliselluloosa, hydroksipropyylimetyyliselluloosa, polyvinyylipyrrolidoni, kevyt vedetön piihappo, magnesiumstearaatti, talkki, titaanidioksidi, sorbitaanirasvahappoesterit, tyydyttyneiden 10 rasvahappojen glyseridit, makrogol, propyleeniglykoli ja vesi. Farmaseuttinen koostumus voi olla erilaisissa annos-tusmuodoissa, kuten tabletit, kapselit, rakeet, hienorakeet, jauheet, siirapit, peräpuikot, ja injektiot, jotka valmistetaan tavallisella tavalla. Nestemäiset valmisteet voivat 15 olla sellaisessa muodossa, että ne liuotetaan tai suspen-doidaan veteen tai muihin sopiviin apuaineisiin juuri ennen käyttöä. Tabletit voivat olla päällystetyt tunnetulla tavalla. Haluttaessa farmaseuttinen koostumus voi sisältää makuaineita, aromaattisia aineita, säilöntäaineita, pusku-20 reita, suoloja koostumuksen muuttamiseksi isotoniseksi, jne.

Tavallisesti farmaseuttinen koostumus voi sisältää ainakin 0,5 %, edullisesti 1-60 % kaavan (I) mukaista tripeptidi johdannaista tai sen farmaseuttisesti sopivaa suolaa 25 vaikuttavana aineena. Koostumus voi myös sisältää muita *:*·: terapeuttisesti vaikuttavia yhdisteitä, kuten diureetin, -j- esimerkiksi hydroklooritiatsidin, triamtereenin, spirono- laktonin, furosemidin, jne.

Viimeksi mainitussa farmaseuttisessa koostumuksessa 30 käytetty diureetin määrä voi esimerkiksi olla 25-50 mg . hydroklooritiatsidia, 50-100 mg triamtreenia, 50-100 mg spironolaktonia ja 10-160 mg furosemidia, kukin 5-10 mg:aa kohti kaavan (I) mukaista tripeptidijohdannaista. Samoja *. kantajia tai laimennusaineita kuin edellä kuvattiin, voi- ’ 35 daan käyttää tässä koostumuksessa, ja koostumus voi olla . missä tahansa edellä kuvatussa annostusmuodossa.

24 87 794

Kaavan (I) mukainen tripeptidijohdannainen ja ureet-tinen aine voidaan antaa potilaalle jokaisessa edellä kuvatussa annostusmuodossa.

Seuraavat esimerkit esittävät tätä keksintöä tarkem- 5 min.

Esimerkki 1 2 1-(N -bentsyylioksikarbonyyli-L-lysyyli-gamma-D- glutamyyli)indoliini-2(S)-karboksyylihappo 1 10 Etyyli-1-(0 -etyyli-gamma-D-glutamyyli)indoliini- 2(S)-karboksylaatin (johon viitataan “diesteri A":na; 1,5 g) 2 6 1,97 g:n N -bentsyylioksikarbonyyli-N -t-butoksikarbonyyli-L-lysiiniä ja 0,99 g:n 1-etyyli-3-(3-dimetyyliaminopropyy-li) -karbodi-imidihydrokloridia (johon viitataan "vesiliukoi-15 sena karbodi-imidihydrokloridina") , annettiin reagoida yön yli huoneenlämmössä metyleenikloridissa sekoittaen. Reaktioseos pestiin 5 % natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja 10 % sitruunahapolla, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, ja konsentroitiin kuiviin alipaineessa. Jäännös puhdistet-20 tiin silikageelipylväskromatografiällä (eluentti: kloroformi) . Uudelleenkiteytys n-heksaanista ja sen jälkeen suo- 2 dattaminen, antoivat 2,7 g etyyli-1-(N -bentsyylioksikarbo- 6 1 nyyli-N -t-butoksikarbonyyli-L-lysyyli-0 -etyyli-gamma-D- glutamyyli) indoliini-2 (S) -karboksylaattia . Erä (2,3 g) täs-25 tä tuotteesta liuotettiin dioksaanin ja veden seokseen, ja 10 ml 1N NaOH lisättiin. Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 1,5 tuntia. Reaktioseos tehtiin happamaksi laimealla vetykloridihapolla, laimennettiin vedellä, ja uutettiin sitten kloroformilla. Uute kuivattiin vedettömällä 30 natriumsulfaatilla, ja konsentroitiin kuiviin alipaineessa. Jäännös kromatografoitiin CHP20P-pyiväällä (2,5 cm halkaisijaltaan ja 40 cm pituudeltaan (Mitsubishi Chemical Co.,

Ltd.:n tuote; 75-150 mikronia) käyttäen asetonitriiliä/vet-tä (30 % —>50 % gradientti) eluenttina. Fraktiot, jotka 35 sisälsivät halutun tuotteen, kerättiin ja konsentroitiin ‘ · kuiviin alipaineessa. Jäännös kiteytettiin eetteri/n-heksaa- 25 87794 nista ja kerättiin suodattamalla, jolloin saatiin 1,6 g 2 6 1-(N -bentsyylioksikarbonyyli-N -t-butoksikarbonyyli-L- lysyyli-gamma-D-glutamyyli)indoliini-2(S)-karboksyylihap-poa, jonka sulamispiste on 121-129°C (haj.).

5 Trifluorietikkahappoa (20 ml) lisättiin 1,1 g:aan tätä tuotetta jäällä jäähdyttäen ja seosta sekoitettiin 15 minuuttia ja konsentroitiin sitten kuiviin alipaineessa huoneenlämmössä. Jäännös puhdistettiin pylväskromatografiällä (CHP20P-pylväs; 0 % —>60 % asetonitriili/vesi-gradient-10 ti). Halutut fraktiot konsentroitiin alipaineessa, ja konsentroiminen lopetettiin, kun kiteet alkoivat saostua. Jäännös jäähdytettiin ja saostuneet kiteet kerättiin suodattamalla, jolloin saatiin 0,68 g otsikon yhdistettä. Sulamispiste: 190-204°C (haj.) 15 Z~°<_7d7 : -78'5° {1N Na0H)

Alkuaineanalyysi C28H34N4°8 * /25^0:116 :

Laskettu (%): C, 58,27; H, 6,38; N, 9,71

Saatu (%): C, 58,51; H, 6,48; N, 9,92.

Esimerkit 2-7 20 Samalla tavalla kuin esimerkissä 1 syntetisoitiin seuraavat yhdisteet.

2 1-(N -bentsyylioksikarbonyyli-L-ornitinyyli -gamma D-glutamyyli)indoliini-2(S)-karboksyylihappo (esimerkki 2):

Sulamispiste: 204-211°C (haj.) 25 Ml1: “79,0° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi C27H32N4°8 · 1»25^0: lie:

Laskettu (%) : C, 57,59; H, 6,18; N, 9,95

Saatu (%): C, 57,58; H, 6,10; N, 9,81.

2 1-(N -fenetyylioksikarbonyyli-L-lysyyli-gamma-D-30 glutamyyli)indoliini-2(S)-karboksyylihappo (esimerkki 3): Sulamispiste: 199-204°C /><7p6: -82,1° (1N NaOH) . . Alkuaineanalyysi C2gH2gN^Og.1,5H20:lie:

Laskettu (%) : C, 58,48; H, 6,60; N, 9,41 ' 35 Saatu (%) : C, 58,25; H, 6,82; N, 9,31.

2« 87794 2 1-(N -sykloheksyylioksikarbonyyli-L-lysyyli-gamma- D-glutamyyli)indoliini-2(S)-karboksyylihappo (esimerkki 4):

Sulamispiste: 197-205°C

Zo<7^7: -85,3° (1N NaOH) 5 Alkuaineanalyysi C27H38N4°8 . 1 ,75H20: lie:

Laskettu (%): C, 56,09; H, 7,24; N, 9,69

Saatu (%): C, 56,15; H, 7,59; N, 9,84.

2 1-(N -metoksikarbonyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyy-li)indoliini-2(S)-karboksyylihappo (esimerkki 5): 10 "86,8° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi C29H36N4°9 *2H20:lie:

Laskettu (%): C, 51,36; H, 6,43; N, 10,90

Saatu (%): C, 51,36; H, 6,66; N, 10,89.

2 1-(N -n-oktyylioksikarbonyyli-L-lysyyli-gamma-D- 15 glutamyyli)indoliini-2(S)-karboksyylihappo (esimerkki 6):

Sulamispiste: 199-202°C

ZTc*Jq8: -82,3° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi C29H44N4°8 * 2,5H20:lle *·

Laskettu (%): C, 56,02; H, 7,94; N, 9,01 20 Saatu (%): C, 56,29; H, 7,98; N, 9,13.

2 1-(N -sykloheptyylioksikarbonyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli)indoliini-2(S)-karboksyylihappo (esimerkki 7): Sulamispiste: 190-195°C -84,6° (1N NaOH) 25 Alkuaineanalyysi C2gH^gN^0g.1,75H20:lle: ' Laskettu (%) : C, 56,79; H, 7,40; N, 9,46

Saatu (%) : C, 56,68; H, 7,46; N, 9,39.

Esimerkki 8 1-/n -(2-furoyyli)-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli7- 30 indoliini-2(S)-karboksyylihappo_ ·.·. 2-furaanikarboksyylihappoa (2,0 g) , 2,26 g N-hydro- sukkiini-imidiä ja 3,76 g vesiliukoista karbodi-imidi-. . hydrokloridia sekoitettiin yön yli huoneenlämmössä tetra- hydrofuraanissa (THF lyhyesti) /metyleenikloridissa. Reak-35 tioseos konsentroitiin kuiviin alipaineessa, ja saatu jäännös uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros pestiin 27. 87794 peräkkäin 10 % vetykloridihapolla, kyllästetyllä natriumbi-karbonaattiliuoksella, kyllästetyllä natriumkloridin vesi-liuoksella, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, ja konsentroitiin kuiviin alipaineessa. Jäännös uudelleen-5 kiteytettiin isopropanolista, jolloin saatiin 2,8 g N-(2-furoyylioksi)sukkiini-imidiä (sulamispiste 126-127°C). Liuokseen, jossa oli 1,79 g saatua sukkiini-imidiä ja 2,0 g N^-bentsyylioksikarbonyyli-L-lysiiniä THF/vedessä, lisättiin 2,9 g trietyyliamiinia ja seosta sekoitettiin yön yli 10 huoneenlämmössä. THF haihdutettiin alipaineessa ja saadun liuoksen pH säädettiin arvoon 2-3 10 % vetykloridihapolla, ja uutettiin sitten etyyliasetaatilla. Uute kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin kuiviin alipaineessa. Jäännös puhdistettiin pylväskromatografiällä 15 (CHP20P-pylväs; 30 % —> 60 % asetonitriili/vesi-gradient- 2 6 ti), jolloin saatiin 2,3 g N -(2-furoyyli)-N -bentsyyli-oksikarbonyyli-L-lysiiniä ' -4,6° (metanoli) . Erä (1,35 g) tästä tuotteesta ja 1,0 g diesteriä A liuotettiin metyleenikloridiin, ja 0,66 g vesiliukoista karbodi-imidi-20 hydrokloridia lisättiin. Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä yön yli. Reaktioseos pestiin peräkkäin 10 %:isella vetykloridihapolla, kyllästetyllä natriumbikarbonaatin vesi-liuoksella ja vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, ja konsentroitiin kuiviin alipaineessa. Jäännös 25 saostettiin uudelleen eetteri/etanolista, jolloin saatiin *' · - 2 6 1,8 g etyyli-1-/N -(2-furoyyli)-N -bentsyylioksikarbonyy- li-L-lysyyli-0 -etyyli-gamma-D-glutamyyli7indoliini-2(S)- karboksylaattia (sp. 120-123°C). Liuokseen, jossa oli - · ’ 1,65 g saatua etyyliesteriä dioksaanissa, lisättiin 6,85 ml ·"·. 30 1N NaOH ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 1 tunti.

. Seos tehtiin sitten happamaksi 10 % vetykloridihapolla, ja uutettiin sitten etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros . . pestiin kyllästetyllä natriumkloridin vesiliuoksella, kui- vattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, ja konsentroitiin 35 alipaineessa. Jäännös uudelleenkiteytettiin petrolieetteri/ t etyyliasetaatista ja kerättiin suodattamalla, jolloin 28 87794 saatiin 1,50 g 1-^N -(2-furoyyli)-N -bentsyylioksikarbonyy-li-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli7indoliini-2(S)-karboksyy-lihappoa. Metanolilluokseen, jossa oli 1,35 g tätä tuotetta, lisättiin 0,35 g ammoniumformaattia ja 0,4 g 10 % palla-5 diumhiiltä, ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 7 tuntia. Katalyytti poistettiin ja metanoli haihdutettiin alipaineessa. Etyyliasetaattia lisättiin sitten ja seos uutettiin 10 %:lla vetykloridihapolla. Uute kromatografoitiin CHP20P-pylväällä käyttäen asetonitriili/vesi-seosta (0 % —> 10 60 % -gradientti) eluenttina, jolloin saatiin fraktio, joka sisälsi noin 70 % halutusta tuotteesta. Fraktio puhdistettiin pylväskromatografiällä /ODS-Q3 -pylväs (Wako Pure Chemical Co., Ltd.:n tuote) joka oli halkaisijaltaan 4 cm ja pituudeltaan 30 cm; asetonitriili/1 % trifluorietikka-15 happo = 1/9)7, jolloin saatiin 0,65 g jauhetta. Jauhe kro-matografoitiin edelleen CHP20P-pylväällä (0 % —>60 % ase-tonitriili/vesi-gradientti), ja konsentroitiin kuiviin alipaineessa. Jäännös liuotettiin veteen ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,3 g otsikon yhdistettä.

20 /Γ°7ο5: "67,1° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi C25H30N4°8.2,25 H^Orlle:

Laskettu (%): C, 54,10; H, 6,27; N, 10,09

Saatu (%): C, 54,16; H, 6,17; N, 9,98.

Esimerkki 9 25 Samalla tavalla kuin esimerkissä 8 valmistettiin 1 -(L-prolyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli)indoliini-2(S)-karboksyylihappo.

-99,1° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi ^^Η^Ν,-Ο^.3,5H20:lle : 30 Laskettu (%) : C, 51,71; H, 7,29; N, 12,06

Saatu (%): C, 51,48; H, 7,31; N, 12,02.

Esimerkki 10 n -[2- (4-imidatsolyyli) -propenoyyli^-l^lysyyli-gamma-D-glutamyyli}indoliini-2(S)-karboksyylihappo 35 Ammoniumformaattia (0,56 g) ja 0,4 g 10 % palladium- hiiltä lisättiin etanoliliuokseen, jossa oli 2,1 g 29 8 7 7 9 4 2 6 etyyli-1-(N -bentsyylioksikarbonyyli-N -t-butoksikarbonyy-li-L-lysyyli-O^-etyyli-gamma-D-glutamyyli)indoliini-2(S)-karboksylaattia (katso esimerkki 1), ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 1 tunti. Katalyytti poistettiin suodatta-5 maila ja emäliuos konsentroitiin alipaineessa. Jäännökseen lisättiin etyyliasetaattia, ja seos pestiin kyllästetyllä natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja kyllästetyllä nat-riumkloridin vesiliuoksella, ja kuivattiin sitten vedettömällä natriumsulfaatilla, jolloin saatiin 1,7 g etyyli-1- 6 1 10 (N -t-butoksikarbonyyli-L-lysyyli-0 -etyyli-gamma-D-gluta- myyli)indoliini-2(S)-karboksylaattia (sp. 114-117°C). Liuokseen, jossa oli 1,4 g tuotetta ja 0,4 g urokaanihappoa di-metyyliformamidissa (lyhyesti DMF)/metyleenikloridissa, lisättiin 1,17 g vesiliukoista karbodi-imidihydrokloridia, 15 ja seosta sekoitettiin yön yli huoneenlämmössä. Liuotin haihdutettiin alipaineessa. Jäännös kiteytettiin kyllästetystä natriumbikarbonaatin vesiliuoksesta, ja kerättiin suodattamalla. Kiteet pestiin vedellä ja saostettiin uudelleen eetteri/etanolista, jolloin saatiin 1,4 g jauhetta.

20 Se puhdistettiin silikageelipylväskromatografiällä (metano-li/kloroformi - 1/9), jolloin saatiin 1,0 g jauhetta. Erä saatua jauhetta liuotettiin 20 ml:aan dioksaania ja lisättiin 3,8 ml 1N NaOH. Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 3 tuntia, neutraloitiin kaliumvetysulfaatin vesiliuoksella, 25 ja konsentroitiin alipaineessa. Jäännös liuotettiin veteen. Liuoksen pH säädettiin arvoon 5 kaliumvetysulfaatin vesi-liuoksella ja kromatografoitiin CHP20P-pylväällä (0 % —> • 60 % asetonitriili/vesi-gradientti), jolloin saatiin 0,65 g jauhetta. Erä (0,55 g) tästä jauheesta jätettiin seisomaan 30 yhdessä 20 ml:n kanssa trifluorietikkahappoa jäällä jääh-dyttäen 30 minuutiksi, ja sitten trifluorietikkahappo haihdutettiin alipaineessa huoneenlämmössä. Jäännös kromatogra-. . foitiin CHP20P-pylväällä (0 % —> 30 % asetonitriili/vesi- gradientti) , ja saadut puhdistetut fraktiot konsentroitiin. 35 Jäännös lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,33 g otsikon yh-:T. distettä.

* · # a * 87794 30 /cXjp5: -43,1° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi C26H32N6°7 * ^H2°: :

Laskettu (%): C, 52,52; H, 6,44; N, 14,13

Saatu (%): C, 52,38; H, 6,50; N, 14,14.

5 Esimerkki 11 2 (2S,3aS,7aS)-1-(N - bentsyylioksikarbonyyli-L-lysyy- li-gamma-D-glutamyyli)oktahydro-1H-indoli-2-karbok- syylihappo_

Vesiliukoista karbodi-imidihydrokloridia (15,8 g) 10 lisättiin metyleenikloridiliuokseen, joka sisälsi 24,5 g N-bentsyylioksikarbonyyli-0 -etyyli-D-glutamiinihappoa, 17,5 g etyyli-(2S,3aS,7aS)-oktahydro-1H-indoli-2-karboksy-laattihydrokloridia ja 7,58 g trietyyliamiinia, ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä yön yli. Reaktioseos pestiin 15 peräkkäin kyllästetyllä natriumbikarbonaatin vesiliuoksella, vedellä, 10 % vetykloridihapolla ja vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, ja konsentroitiin kuiviin alipaineessa, jolloin saatiin 34,1 g öljyistä ainetta, öljyinen aine liuotettiin 400 ml:aan etanolia, ja lisättiin 20 3 g 10 % palladiumhiiltä. Samalla kuin seosta sekoitettiin huoneenlämmössä, lisättiin 12 g ammoniumformaattia kolmessa erässä. Tunnin kuluttua katalyytti poistettiin suodattamalla ja suodos tehtiin happamaksi vetykloridihapolla ja konsentroitiin kuiviin alipaineessa. Jäännös liuotettiin 25 veteen ja pestiin etyyliasetaatilla. Vesikerros tehtiin emäksiseksi natriumbikarbonaatilla ja uutettiin metyleeni-·”’· kloridilla. Orgaaninen kerros kuivattiin vedettömällä nat- • riumsulfaatilla ja konsentroitiin kuiviin alipaineessa, jol- loin saatiin 23,5 g etyyli-(2S,3aS,7aS)-1-(0 -etyyli-gamma-30 D-glutamyyli)oktahydro-1H-indoli-2-karboksylaattia (johon viitataan "diesteri B":nä) öljyisenä aineena. Erä (23 g) diesteri B:tä liuotettiin 150 ml:aan etanolia ja lisättiin ; ^ 210 ml 1N NaOH. Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 5,5 - ' tuntia, tehtiin happamaksi vetykloridihapolla ja konsentroi- 35 tiin alipaineessa. Jäljelle jäänyt liuos puhdistettiin pyl-väskromatografiällä (CHP20P-pylväs; 0 % —> 30 % aseto- 3i 87794 nitriili/vesi-gradientti). Puhdistetut fraktiot konsentroitiin kuiviin alipaineessa, jolloin saatiin 6,31 g tuotetta. Riittämättömästi puhdistetut fraktiot konsentroitiin kuiviin alipaineessa. Jäännös liuotettiin ve-5 teen, neutraloitiin natriumbikarbonaatilla ja puhdistettiin jälleen pylväskromatografiällä (CHP20P-pylväs; 0 % --> 30 % asetonitriili/vesi-gradientti), jolloin saatiin 8,70 g tuotetta. Nämä tuotteet yhdistettiin, jolloin saatiin 15,01 g (2S,3aS,7aS)-1-(gamma-D-glutamyyli)oktahyd-10 ro-lH-indoli-2-karboksyylihappoa (sp. 191-192 °C). Vesi-liuokseen, jossa oli 2 g saatua tuotetta ja 2,68 ml tri-etyyliamiinia, lisättiin 40 ml THF. Sekoittaen lisättiin 3,06 g N2-bentsyylioksikarbonyyli-N6-t-butoksikarbonyyli-L-lysiini-N-hydroksisukkiini-imidiesteriä. Seosta sekoi-15 tettiin yön yli huoneenlämmössä ja sitten konsentroitiin alipaineessa. Jäljelle jäänyt liuos sekoitettiin 10 % sitruunahapon kanssa ja uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros pestiin kyllästetyllä natriumkloridiliu-oksella, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, ja 20 konsentroitiin alipaineessa, jolloin saatiin 3,96 g jauhetta. Erä (3,46 g) tätä jauhetta jätettiin seisomaan 35 ml:aan trifluorietikkahappoa 20 minuutiksi jäällä jäähdyttäen, ja konsentroitiin sitten kuiviin alipaineessa. Jäännös liuotettiin veteen, pH säädettiin arvoon 4 nat-·:·: 25 riumbikarbonaatilla, ja puhdistettiin pylväskromatogra- •:· fialla (CHP20P-pylväs; 0 % --> 60 % asetonitriili/vesi- gradientti). Halutut fraktiot konsentroitiin kuiviin ali-; paineessa, jolloin saatiin 1,6 g otsikon yhdistettä val koisena jauheena.

30 [a]26 : -40,0° (IN NaOH)

Alkuaineanalyysi C28H40N408.1,75H20 : lie :

Laskettu (%): C, 56,79; H, 7,40; N, 9,46 V1: Saatu (%): C, 56,88; H, 7,47; N, 9,33.

32 87794

Esimerkki 12

Etyyli- ( 2S, 3aS, 7aS ) -1- (N2-bentsyylioksikarbonyyli-L-ornitinyyli-gamma-D-glutamyyli)oktahydro-lH-in-doli-2-karboksylaatti 5 20 ml:aan metyleenikloridia liuotettiin 1,81 g N2-bentsyylioksikarbonyyli-N5-t-butoksikarbonyyli-L-orni-tiinia ja 1,75 g diesteri B:tä, ja liuokseen lisättiin 0,04 g vesiliukoista karbodi-imidihydrokloridia. Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä yön yli. Reaktioseos pestiin 10 peräkkäin 10 % sitruunahapolla, vedellä, kyllästetyllä natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, ja konsentroitiin kuiviin alipaineessa, jolloin saatiin 3,2 g viskoosia öljymäistä ainetta. Erä (3,0 g) tätä öljyistä ainetta liu-15 otettiin 20 ml:aan trifluorietikkahappoa ja jätettiin jäällä jäähdyttäen seisomaan 15 minuutiksi. Trifluori-etikkahappo haihdutettiin alipaineessa. Jäännös sekoitettiin natriumbikarbonaatin vesiliuoksen kanssa, ja uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros uutettiin 10 % 20 vetykloridihapolla. Vesikerros tehtiin emäksiseksi natriumbikarbonaatilla ja uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatil-la ja konsentroitiin kuiviin alipaineessa, jolloin saatiin 1,2 g viskoosia öljyistä ainetta. Öljyinen aine liu-25 otettiin etanoliin ja lisättiin 3 ml IN NaOH. Seosta se-koitettiin 30 minuuttia jäällä jäähdyttäen. Liuos sekoi-: tettiin 3 ml:n kanssa IN vetykloridihappoa ja konsentroi tiin alipaineessa. Jäännös puhdistettiin pylväskromato-grafialla (CHP20P-pylväs; 0 % --> 60 % asetonitriili/ve-30 si-gradientti). Puhdistetut fraktiot konsentroitiin kuiviin alipaineessa. Jäännös lyofilisoitiin, jolloin saa-. . tiin 0,60 g otsikon yhdistettä valkoisena jauheena. 1 • · 33 8 7 7 9 4 -46/0° (etanoli)

Alkuaineanalyysi C29H42N4°8 * ** ' SHjOslle :

Laskettu (%): C, 57,89; H, 7,54; N, 9,31

Saatu (%): C, 57,74; H, 7,33; N, 9,29.

5 Esimerkki 13 2 (2S,3aS,7aS)-1-(N -bentsyylioksikarbonyyli-L-orni-tinyyli-gamma-D-glutamyyli)oktahydro-1H-indoli-2- karboksyylihappo_

Esimerkissä 12 valmistettu lopullinen tuote (0,5 g) 10 liuotettiin etanoliin ja lisättiin 5 ml 1N NaOH. Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 3 tuntia, ja lisättiin 5 ml 1N vetykloridihappoa. Seos konsentroitiin sitten alipaineessa ja jäännös kromatografoitiin CHP20P-pylväällä (0 % —> 60 % asetonitriili/vesi-gradientti). Puhdistetut 15 fraktiot konsentroitiin kuiviin alipaineessa. Jäännös lyo-filisoitiin, jolloin saatiin 0,30 g otsikon yhdistettä valkoisena jauheena.

Ζ"°!7β6: "39,4° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi ^-yH-jgN^Og · 2^0: lie: 20 Laskettu (‘λ): C, 55,66; H, 7,27; N, 9,62

Saatu (A): C, 55, 39; II, 7,08; N, 9,49.

Esimerkki 14 2 (2S,3aS,7aS)-1-(N -nikotinoyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli)oktahydro-1H-indoli-2-karboksyylihappo 25 Menetelmä a) ---· Seokseen, jossa oli 20 ml THF ja 3 ml vettä, lisät- tiin 4,42 g N -bentsyylioksikarbonyyli-N -t-butoksikarbo-:/-f nyyli-L-lysiini-N-hydroksisukkiini-imidiesteriä, 2,89 g : ·.. (2S, 3aS, 7aS)-1 - (gamma-D-glutamyyli) oktahydro-1H-indoli-2- :Y: 30 karboksyylihappoa (katso esimerkki 11) ja 2,6 ml trietyyli- amiinia, ja seosta sekoitettiin 5 tuntia huoneenlämmössä.

; Reaktioseos konsentroitiin alipaineessa. Jäännös sekoitet- ·-· tiin kyllästetyn natri.umkl.oridin vesiliuoksen kanssa ja pestiin eLyyliasctaai.il Ja. Vesikerros tehtiin happamaksi ’ 35 10 Ά sitruunahapolle* ja uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaa- : - ninen kerros pestiin kyllästetyllä natriumkloridiliuoksella, 34 8 7 7 9 4 kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, ja konsentroitiin kuiviin alipaineessa, jolloin saatiin 5,19 g jäännöstä. Jäännös puhdistettiin pylväskromatografiällä (CHP20P-pylväs; 0 % —> 60 % asetonitriili/vesi-gradientti). Saa-5 dut fraktiot konsentroitiin kuiviin alipaineessa. Jäännös liuotettiin dioksaani/veteen, ja lyofilisoitiin, jolloin g saatiin 4,7 g (2S,3aS,7aS)-1-(N -bentsyylioksikarbonyyli- 2 N -t-butoksikarbonyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli)okta-hydro-lH-indoli-2-karboksyylihappoa. Erä (2,27 g) tuotetta 10 liuotettiin 50 ml:aan trifluorietikkahappoa, ja jätettiin seisomaan 15 minuutiksi jäällä jäähdyttäen, ja konsentroitiin sen jälkeen kuiviin alipaineessa. Jäännös liuotettiin veteen, pH säädettiin arvoon 4, ja kromatografoitiin CHP20P-pylväässä (0 % —> 50 % asetonitriili/vesi-gradi-15 entti). Halutut fraktiot konsentroitiin alipaineessa, jolloin saatiin 1,15 g (2S,3aS,7aS)-1-(N^-bentsyylioksikarbo-nyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli)oktahydro-1H-indoli-2-karboksyylihappoa lasimaisena aineena. Erä (1,0 g) tätä lasimaista ainetta liuotettiin Ν,Ν-dimetyyliformamidin ja 20 tetrahydrofuraanin seokseen, ja lisättiin 0,5 ml trietyy-liamiinia ja 0,39 g N-(nikotinoyylioksi)sukkiini-imidiä, ja seosta sekoitettiin yön yli huoneenlämmössä. Laimeaa vetykloridihappoa lisättiin reaktioseokseen ja seos uutettiin etyyliasetaatilla. Uute kuivattiin vedettömällä nat-*"***· 25 riumsulfaatilla, ja konsentroitiin kuiviin alipaineessa.

Saatu lasimainen aine liuotettiin 25 mlraan etanolia ja : : lisättiin 0,6 g ammoniumformaattia ja 0,3 g 10 % palladium- hiiltä. Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 3 tuntia. Kata-lyytti poistettiin suodattamalla, ja emäliuos konsentroi-30 tiin kuiviin alipaineessa. Jäännös kromatografoitiin « » CHP20P-pylväässä (0 % —> 60 % asetonitriili/vesi-gradient-. . ti). Halutut fraktiot konsentroitiin kuiviin alipaineessa.

« » I

Jäännös lyof ilisoitiin, jolloin saatiin 0,5 g otsikon yh-\ ’ distettä.

:T: 35 M™' -27,2° (H20) 35 87794

Alkuaineanalyysi C26H37N5°7 . 2,25^0: lie :

Laskettu (%): C, 54,58; H, 7,31; N, 12,24

Saatu (%): C, 54,62; H, 7,25; N, 12,20.

Menetelmä b) 5 D-glutamiinihappoa (18 g) ja 31,75 g natriumkarbo naattia liuotettiin 200 ml:aan vettä ja sitten lisättiin 37,5 g N-karboetoksiftaali -imidiä jäällä jäähdyttäen. Seosta sekoitettiin sitten huoneenlämmössä 4 tuntia. Liukenematon aine poistettiin suodattamalla. Liuos tehtiin happa-10 maksi 6N vetykloridihapolla ja jätettiin seisomaan yön yli 4°C:een. Saostuneet kiteet kerättiin suodattamalla, pestiin kylmällä vedellä ja kuivattiin, jolloin saatiin 33,2 g N-ftaloyyli-D-glutamiinihappoa (sp. 162-164°C). Erä (30 g) tätä yhdistettä lisättiin 90 ml:aan etikkahappoanhydridiä, 15 ja seosta sekoitettiin 55°C:ssa kunnes se liukeni. Välittömästi liukenemisen jälkeen liuos jäähdytettiin ja lisättiin 150 ml seosta vedetön eetteri/n-heksaani (2:1). Saostuneet kiteet kerättiin suodattamalla, jolloin saatiin 18,2 g N-ftaloyyli-D-glutamiinihappoanhydridiä (sp. 203-206°C).

20 (2S,3aS,7aS)oktahydro-1H-indoli-2-karboksyylihappo (6,13 g) liuotettiin 40 mlraan pyridiiniä, ja lisättiin 9,39 g N-ftaloyyli-D-glutamiinianhydridiä. Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 2 tuntia. Etyyliasetaattia lisättiin reak-tioseokseen ja seos pestiin peräkkäin laimealla vetyklori-25 dihapolla ja natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivattiin. Liuotin haihdutettiin ja jäännös kiteytettiin pienestä määrästä etyyliasetaattia. Kiteet kerättiin suodattamalla, : \: pestiin eetterillä ja kuivattiin, jolloin saatiin 1,31 g Γ ·.. (2S, 3aS, 7aS) -1 - (N-ftaloyyli-gamma-D-glutamyyli) -oktahydro- 30 1 H-indoli-2-karboksyylihappoa (sp. 194-198°C). S atu yhdis te liuotettiin 200 ml:aan etanolia, ja lisättiin 6,13 g • - hydratsiinimonohydraattia. Seosta sekoitettiin yön yli huoneenlämmössä ja lisättiin 60 ml vettä. Liuoksen pH säädettiin arvoon 4-5 12 N vetykloridihapolla ja saostuma pois-" 35 tattiin suodattamalla. Emäliuos konsentroitiin. Jäännös : kromatografoitiin HP-20-pylväällä (Mitsubishi Chemical Co., 36 37794

Ltd.:n tuote). Pylväs pestiin vedellä ja eluoitiin 70 % metanolilla. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot konsentroitiin alipaineessa jolloin saatiin 6,13 g (2S,3aS,7aS)-1-(gamma-D-glutamyyli)oktahydro-lH-indoli-2-karboksyyli-5 happoa (sp. 191-192°C). Erä (1,8 g) tätä yhdistettä ja 1,28 g natriumkarbonaattia liuotettiin seokseen, jossa oli 40 ml asetonitriiliä ja 30 ml vettä. Liuos jäähdytettiin -10°C:seen ja sekoittaen lisättiin 2,1 g N^-bentsyylioksi-karbonyyli-L-lysiini-N-karboksyylianhydridiä. Seosta sekoi-10 tettiin -10°C:ssa 2 tuntia. Reaktioseos erottui kahteen kerrokseen. Vesikerros pestiin kylmällä asetonitriilillä, ja lisättiin 200 ml etanolia. Saostuma poistettiin suodattamalla. Emäliuos konsentroitiin, ja kromatografoitiin CHP20P-pylväällä (0 % —> 60 % asetonitriili/vesi-gradient-15 ti). Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot konsentroitiin kuiviin alipaineessa, jolloin saatiin 1,9 g (2S,3aS,7aS)-l-(N^-bentsyylioksikarbonyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli)-oktahydro-1H-indoli-2-karboksyylihappoa. Tämä tuote liuotettiin 30 mlraan etanolia ja lisättiin 0,9 g ammonium-20 formaattia ja 0,5 g 10 % palladiumhiiltä. Seosta sekoitettiin yön yli huoneenlämmössä. Katalyytti poistettiin suodattamalla ja emäliuos konsentroitiin kuiviin alipaineessa. Jäännös kromatografoitiin CHP20P-pylväällä (0 % —> 30 % asetonitriili/vesi-gradientti). Haluttua tuotetta sisältä-25 vät fraktiot konsentroitiin kuiviin alipaineessa. Jäännös lyofilisoitiin, jolloin saatiin 1,05 g (2S,3aS,7aS)-1-(L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli)oktahydro-1H-indoli-2-karbok-syylihappoa : “5,4° (H20)J. Erä (1,0 g) saatua karboksyylihappoa ja 0,46 g natriumkarbonaattia liuotettiin 30 seokseen, jossa oli 10, ml THF ja 30 ml vettä, ja kiivaasti sekoittaen ja jäällä jäähdyttäen lisättiin 0,39 g nikoti-noyylikloridihydrokloridia. Seosta sekoitettiin vielä 2 • ; tuntia. Reaktioseos konsentroitiin alipaineessa ja pH sää dettiin arvoon 2-3 laimealla vetykloridihapolla. Liuos 35 kromatografoitiin CHP20P-py 1 vääl 1 ä (0 V. —> 60 7. a se to-nitriili/vosi-gradionttL). Haluttua tuotetta sisältävät 37 37794 fraktiot konsentroitiin kuiviin alipaineessa ja lyofili-soitiin, jolloin saatiin 0,15 g otsikon yhdistettä. Menetelmä c)

Seos, jossa oli 5,0 g D-glutamiinihappoa ja 7,1 g 5 natriumkarbonaattia, liuotettiin seokseen, jossa oli 170 ml vettä ja 200 ml asetonitriiliä, ja lisättiin liuos, 6 2 jossa oli 11 g N -bentsyylioksikarbonyyli-L-lysiini-N - karboksyylianhydridiä asetonitriilissä, -10°C:ssa sekoittaen. Seosta sekoitettiin vielä 2 tuntia -10°C:ssa. Vesi-10 kerros pestiin kylmällä asetonitriilillä, neutraloitiin ja konsentroitiin alipaineessa. Jäännös puhdistettiin CHP20P-pylväskromatografiällä (0 % —> 50 % asetonitrii-li/vesi-gradientti), ja uudelleenkiteytettiin laimeasta alkoholista, jolloin saatiin 6,3 g N^-bentsyylioksikarbo-15 nyyli-L-lysyyli-D-glutamiinihappoa (sp. 149-150°C). Erä (6,0 g) tätä tuotetta ja 3,0 g natriumkarbonaattia liuotettiin seokseen, jossa oli 100 ml vettä ja 40 ml THF, ja sekoittaen ja jäillä jäähdyttäen lisättiin THF-liuos, jossa oli 3,2 g N-(nikotinoyylioksi)sukkiini-imidiä. Seos-20 ta sekoitettiin huoneenlämmössä 2 tuntia. Reaktioseos neutraloitiin ja konsentroitiin alipaineessa. Jäännösliuoksen pH säädettiin arvoon 2 ja sille suoritettiin CHP20P-pyl-väskromatografia (0 % —> 60 % asetonitriili/vesi-gradient- ti). Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot konsentroitiin '; - -: 2 25 kuiviin alipaineessa, jolloin saatiin 4,8 g N -nikotinoyy- li-N^-bentsyylioksikarbonyyli-L-lysyyli-D-glutamiinihappoa. Erää (4,0 g) tätä tuotetta sekoitettiin etikkahappoanhydri-. ' dissä (100 ml) 2 tuntia ja konsentroitiin kuiviin alipai neessa matalassa lämpötilassa, ja jäännös liuotettiin 50 30 ml:aan metyleenikloridia. Liuos pestiin vedellä ja kuivattiin ja liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 3,5 g 2 6 karkeasti puhdistettua N -nikotinoyyli-N -bentsyylioksi-.··.·. karbonyyli-L-lysyyli-D-glutamiinianhydridiä. Saatu anhydri- di (3,5 g) lisättiin liuokseen, jossa oli 1,2 g (2S,3aS, 35 7aS)-oktahydro-1H-indoli-2-karboksyylihappoa 15 mlrssa py-ridiiniä, ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 2 tuntia.

m ;<'/y<y.1

Reaktioseos konsentroitiin kuiviin alipaineessa huoneenlämmössä. Jäännös liuotettiin veteen ja liuoksen pH säädettiin arvoon 2. Liuokselle suoritettiin CHP20P-pylväs-kromatografia (0 % —> 60 % asetonitriili/vesi-gradientti). 5 Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot konsentroitiin kuiviin alipaineessa, jolloin saatiin 1,3 g (2S,3aS,7aS)-1-2 6 (N -nikotinoyyli-N -bentsyylioksikarbonyyli-L-lysyyli-gam-ma-D-glutamyyli) oktahydro-1H-indoli-2-karboksyylihappoa. Tämä yhdiste liuotettiin 25 ml:aan etanolia, ja lisättiin 10 1,2 g ammoniumformaattia ja 0,5 g 10 % palladiumhiiltä.

Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 3 tuntia. Katalyytti poistettiin suodattamalla ja emäliuos konsentroitiin kuiviin alipaineessa. Jäännös puhdistettiin CHP20P-pylväs-kromatografiällä (0 % —> 60 % asetonitriili/vesi-gradient-15 ti), ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,8 g samaa lopputuotetta kuin saatiin edellä menetelmässä a).

Esimerkit 15-20

Seuraavat yhdisteet syntetisoitiin samalla tavalla kuin esimerkissä 14 (menetelmä a).

2 20 1 — (N -sykloheksyylimetoksikarbonyyli-L-lysyyli- gamma-D-glutamyyli)indoliini-2(S)-karboksyylihappo (esimerkki 15) :

Sulamispiste: 186-191°C -84,4° (1N NaOH) 25 Alkuaineanalyysi ^qH^qN^Oq.1,5Η2<3: lie:

Laskettu (%): C, 57,23; H, 7,38; N, 9,53

Saatu (%): C, 57,33; H, 7,67; N, 9,64.

1 -(D-prolyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli)indolii- ni-2(S)-karboksyylihappo (esimerkki 16): 30 Sulamispiste: 209-216°C (haj.) /o<7^0: -66,3° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi C25H35N5°7.3,5H20:lle: '· Laskettu (%) : C, 51,71; H, 7,29; N, 12,06

Saatu (%): C, 51,58; H, 7,40; N, 12,08.

2 35 (2S,3aS,7aS)-1-(N -syklobutaanikarbonyyli-L-lysyy- li-gamma-D-glutamyyli) oktahydro-1 II-indoli-2-karboksyylihappo (esimerkki 17): 39 8 7 794 [o]” : -46,8° (IN NaOH)

Alkuaineanalyysi C25H40N5O7.2H20.0,25C4H802: lie:

Laskettu (%): C, 55,11; H, 8,18; N, 9,89

Saatu (%); C, 55,16; H, 7,98; N, 9,78.

5 1-(L-pyroglutamyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyy- li)indoliini-2(S)-karboksyylihappo (esimerkki 18): [α]25 : -81,0° (IN NaOH)

Alkuaineanalyysi C25H33N508.3,25H20: lie:

Laskettu (%): C, 50,88; H, 6,75; N, 11,87 10 Saatu (%): C, 50,85; H, 6,56; N, 11,96.

( 2S, 3aS, 7aS )-1- [N2-(pyridiini-2-karbonyyli )-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli]oktahydro-ΙΗ-indoli-2-kar-boksyylihappo (esimerkki 19): [a]25 : -19,2° (H20) 15 Alkuaineanalyysi C26H37N507.1,75H20: lie:

Laskettu (%): C, 55,45; H, 7,25; N, 12,44

Saatu (%): C, 55,74; H, 7,05; N, 12,42.

( 2S, 3aS, 7aS )-1- [N2-( 4-metoksibentsoyyli )-L-ly-syyli-gamma-D-glutamyyli]oktahydro-lH-indoli-2-karbok-20 syylihappo (esimerkki 20): [a]26: -15,2° (H20)

Alkuaineanalyysi ^28^40^4^8.3, 5H20: lie:

Laskettu (%): C, 53,92; H, 7,60; N, 8,98

Saatu (%): C, 53,77; H, 7,33; N, 9,13.

’' ' 25 Esimerkki 21 ( 2S, 3aS 7aS )-1- [N2-fenetyylioksikarbonyyli-L-ly-’· - syyli-gamma-D-glutamyyli] oktahydro-ΙΗ-indoll-2- : karboksyylihappo N,N'-disukkinimidyylikarbonaattia (5,12 g), 30 2,44g fenetyylialkoholia ja 0,49 g 4-dimetyyliaminopy- ridiiniä sekoitettiin metyleenikloridissa 3 päivää. Reaktioseos pestiin vedellä, kuivattiin vedettömällä • *’ natriumsulfaatilla ja konsentroitiin kuiviin alipai- ‘ neessa. Jäännös kiteytettiin eetteristä. Kiteet kerät- ;**: 35 tiin suodattamalla, jolloin saatiin 3,5 g N-( fenetyyli- 40 8 7 794 oksikarbonyylioksi)sukkiiniimidiä (sp. 69-72 °C). N6-t-butoksikarbonyyli-L-lysiini (2,53 g) liuotettiin seokseen, jossa oli 30 ml asetonitriiliä ja 50 ml 5 % kaliumkarbonaattia, ja lisättiin 2,9 g N-(fenetyylioksi-5 karbonyylioksi)sukkiini-imidiä. Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 1 tunti. Reaktioseos pestiin kloroformilla. Vesikerros tehtiin happamaksi 10 % sitruunahapolla ja uutettiin kloroformilla. Uute kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin kuiviin 10 alipaineessa, jolloin saatiin 4,5 g N6-t-butoksikarbo-nyyli-Nz-fenetyylioksikarbonyyli-L-lysiiniä öljyisenä aineena. Erää (1,26 g) öljyistä ainetta ja Ν,Ν'-disuk-kiiniimidyylikarbonaattia sekoitettiin etyyliasetaatissa 3 tuntia ja sitten lisättiin etyyliasetaattiliuos, 15 joka sisälsi 1,0 g (2S,3aS,7aS)-l-(gamma-D-glutamyyli)-oktahydro-lH-indoli-2-karboksyylihappoa ja 0,256 g py-ridiiniä ja seosta sekoitettiin edelleen 5 tuntia. Reaktioseos uutettiin 5 % natriumbikarbonaattiliuoksel-la. Uute tehtiin happamaksi 10 % sitruunahapolla, ja 20 uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros kuivat tiin vedettömällä natriumsulfaatilla, ja konsentroitiin kuiviin alipaineessa. Jäännös liuotettiin 20 mitään trifluorietikkahappoa, jätettiin seisomaan huoneenlämpöön 20 minuutiksi ja konsentroitiin sen jälkeen kui-25 viin alipaineessa. Jäännökselle suoritettiin CHP20P- .... pylväskromatografia (0 % --> 60 % asetonitriili/vesi- gradientti). Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot konsentroitiin kuiviin alipaineessa. Jäännös liuotettiin dioksaani/veteen ja lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,3 30 g otsikon yhdistettä.

[a]p2 :-36,9° (IN NaOH)

Alkuaineanalyysi C^H^N^Oy. 2H,0.0, 25C4Hn02: lie:

Laskettu (%): C, 56,95; H, 7,65; N, 8,85

Saatu (%): C, 56,92; H, 7,87; N, 8,64.

4i 87794

Esimerkki 22 (2S,3aS, 7aS )-1-( N2-bentsoyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyll)oktahydro-lH-indoli-2-karboksyylihap-20 5 (1) Natriumkarbonaattia (2,0 g) liuotettiin 10 ml:aan vettä, ja lisättiin 4,83 g (2S,3aS,7aS)-l-(gamma-D-glutamyyli)-oktahydro-lH-indoli-2-karboksyyli-happoa. Liuoksen muodostuttua lisättiin 40 ml tetra-hydrofuraania. Kiivaasti sekoittaen lisättiin vaiheit-10 tain 7,46 g N2-bentsyylioksikarbonyyli-N6-t-butoksikar-bonyyli-L-lysiini-N-hydroksisukkiini-imidiesteriä. Seosta sekoitettiin yön yli huoneenlämmössä. Reak-tioseos konsentroitiin puoliksi, tehtiin happamaksi 10 % sitruunahapolla ja uutettiin etyyliasetaatilla. Or-15 gaaninen kerros pestiin kyllästetyllä natriumkloridi-liuoksella, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin kuiviin alipaineessa, jolloin saatiin 9,17 g (2S,3aS,7aS )-1-( N2-bentsyylioksikarbonyyli-N6-t-butoksikarbonyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli)oktahyd-20 ro-lH-indoli-2-karboksyylihappoa.

(2) Erä (6,2 g) saatua karboksyylihappoa liuotettiin 60 ml:aan etanolia ja lisättiin 1,0 g 10 % pal-ladiumhiiltä. Sekoittaen lisättiin 2,5 g ammoniumfor-maattia pienissä erissä. Seosta sekoitettiin 4 tuntia.

"· " · 25 Katalyytti poistettiin suodattamalla. Emäliuos konsen- troitiin kuiviin ja etyyliasetaatti lisättiin jäännökseen. Saatu jauhe kerättiin suodattamalla, jolloin saatiin 3,9 g (2S,3aS,7aS)-l-(N6-t-butoksikarbonyyli-L-ly-syyli-gamma-D-glutamyyli)oktahydro-lH-indoli-2-karbok-30 syylihappoa.

42 87794 (3) Erä (1,0 g) saatua karboksyylihappoa liuotettiin 7 ml:aan vettä ja lisättiin 0,55 g natriumbikarbonaattia ja 12 ml THF. Kiivaasti sekoittaen lisättiin 0,46 g N-bentsoyylioksisukkiini-imidiä ja seosta sekoitettiin yön 5 yli huoneenlämmössä. Reaktioseos konsentroitiin puolittain, tehtiin happamaksi 10 % sitruunahapolla, ja uutettiin metyleenikloridilla. Orgaaninen kerros pestiin vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin kuiviin alipaineessa.

10 (4) Jäännökseen lisättiin 20 ml trifluorietikka- happoa jäällä jäähdyttäen ja seosta sekoitettiin 15 minuuttia. Trifluorietikkahappo haihdutettiin alipaineessa. Jäännös kromatografoitiin CHP20P-pylväällä käyttäen aseto-nitriili/vettä (0 % —> 50 % -gradientti). Haluttua tuo-15 tetta sisältävät fraktiot konsentroitiin kuiviin alipaineessa. Jäännös lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,50 g otsikon yhdistettä.

£θ(7ρ5: -23,1° (H20)

Alkuaineanalyysi ¢27^8^4^ . 2,25H20: lie: 20 Laskettu (%): C, 56,78; H, 7,50; N, 9,81

Saatu (%): C, 56,91; H, 7,29; N, 10,03.

Esimerkit 23-45

Seuraavat yhdisteet syntetisoitiin samalla tavalla kuin esimerkissä 22.

2 25 1-/N -(4-metoksifenyylietoksikarbonyyli)-L-lysyyli- gamma-D-glutamyyli7indoliini-2 (S) -karboksyylihappo (esi-merkki 23):

Sulamispiste 197-202°C

ZcAjp1 : -74,2° (1N NaOH) 30 Alkuaineanalyysi C^qII^^N^Oq.H20:lie:

Laskettu (%) : C, 58,53; H, 6,39; N, 9,10

Saatu (%): C, 58,53; H, 6,43; N, 9,14.

2 (2S,3aS,7aS)-1-(N -isonikotinoyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli)oktahydro-1H-indoli-2-karboksyylihappo (esi-35 merkki 24) : /MJ*5: -29,8° (H20)

Alkuaineanalyysi C26H37N5°7 *2'lie:

Laskettu (%): C, 54,16; H, 7,34; N, 12,15 43 8 7 7 94

Saatu (%): C, 54,25; H, 7,06; N, 12,23.

2 (2S,3aS,7aS)-1-(N -syklopentyylioksikarbonyyli-L- 5 lysyyli-gamma-D-glutamyyli)oktahydro-1H-indoli-2-karbok- syylihappo (esimerkki 25 ) : 0*J2v'' "37,1° (H20)

Alkuaineanalyys 1 C26H42N408.1,5H20:lle:

Laskettu (%): C, 55,21; H, 8,02; N, 9,90 10 Saatu (%): C, 55,05; H, 7,77; N, 10,05.

2 (2S,3aS,7aS)-1-(N -sykloheksyylioksikarbonyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli)oktahydro-1H-indoli-2-karbok-syylihappo (esimerkki 26 ) : -31,9 (H20) 15 Alkuaineanalyysi C2^H44N40g.1,75H20:lle:

Laskettu (%): C, 55,51; H, 8,20; N, 9,59

Saatu (%): C, 55,53; H, 8,42; N, 9,55.

(2S,3aS,7aS)-Ί-/β2-(syklobutyylioksikarbonyyli)-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyl^oktahydro-1H-indoli-2-karboksyy-20 lihappo (esimerkki 27 ): /c*7d5; “40'7° (H20)

Alkuaineanalyysi C25H40N4°8’2H20::

Laskettu (%): C, 53,56; H, 7,91; N, 9,99

Saatu (%): C, 53,57; H, 7,60; N, 9,93.

: 2 25 1 — (N -syklobutyylioksikarbonyyli-L-lysyyli-gamma-D- glutamyyli) indoliini-2 (S)-karboksyylihappo (esimerkki 28): Sulamispiste 197-204°C ro(J2O7: -84,0° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi C25H34N4°8*1/75H20:lle: '.·· 30 Laskettu (%) : C, 54,49; H, 7,12; N, 9,78

Saatu (%): C, 54,67; H, 7,40; N, 9,53.

2 • 1 - (N -sykloheksyylietoksikarbonyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli)indoliini-2(S)-karboksyylihappo (esimerk- ki 29.) :

• ' 35 Sulamispiste: 192-195°C

/ToG7^1 : “78,8° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi C29H42N4°8 . 1 ,δΙ^ΟτΙΙθ :

Laskettu (%) : C, 57,89; H, 7,54; N, 9,31 44 87794

Saatu (%): C, 57,82; H, 7,74; N, 9,36.

2 1 —(N -nikotinoyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli)- 5 indoliini-2(S)-karboksyylihappo (esimerkki 30 ):

Sulamispiste 218-222°C

Cck]^ \ -66,5° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi C26H31N5°7.2,251^0:116:

Laskettu (%): C, 55,16; H, 6,32; N, 12,37 10 Saatu (%): C, 55,24; H, 6,57; N, 12,24.

2

1 -(N -syklobutaanikarbonyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli)indoliini-2(S)-karboksyylihappo (esimerkki 31 ): Sulamispiste 209-215°C

·. -96,6° (1N NaOH) 15 Alkuaineanalyysi ^25Η34^4°7 .1 , 5H2O: lie:

Laskettu (%): C, 56,70; H, 7,04; N, 10,58

Saatu (%): C, 56,64; H, 7,06; N, 10,46.

2 1-(N -syklopentyylioksikarbonyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli)indoliini-2(S)-karboksyylihappo (esimerk-20 ki 32 ) :

Sulamispiste: 198-203°C

/c<7d4 ·' -79,3° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi C26H36N4°8 * ^ ' ^-*H2°: :

Laskettu (%) : C, 54,49; H, 7,12; N, 9,78 25 Saatu (%): C, 54,67; H, 7,40; N, 9,53.

_ 2 1-/N -(2- pyridiinietoksikarbonyyli)-L-lysyyli-ganuna-D-glutamyyli7indoliini-2 (S) -karboksyylihappo (esimerkki 33 ) : C&.]2*: -69,3° (1N NaOH) 30 Alkuaineanalyysi ^gH^Nj-Og . 2,25^0: lie :

Laskettu (%): C, 55,12; H, 6,53; N, 11,48 V-* Saatu (%) : C, 54,91; H, 6,37; N, 11,33.

2 1 — (N -bentsoyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli)- indoliini-2 (S)-karboksyylihappo (esimerkki 3.4 ):

35 Sulamispiste: 202-208°C

/D<7^4: -77,2° (1N NaOH) 45 8 7 7 9 4

Alkuaineanalyysi C27H32N4°7 *2H20:lle;

Laskettu (%) : C, 57,85; H, 6,47; N, 9,99

Saatu (%): C, 57,97; H, 6,32; N, 10,20.

2 1-/N -(4-morfoliinietoksikarbonyyli)-L-lysyyli-5 gamma-D-glutamyyli7indoliini-2(S)-karboksyylihappo (esimerkki 35 J : ZXJp5: -57,4° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi C27H35N5°8·2,25H20:lle:

Laskettu (%): C, 48,57; H, 7,40; N, 10,49 10 Saatu (%): C, 48,70; H, 7,23; N, 10,45.

2 1-/β -(3-pyridiinimetoksikarbonyyli)-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli7indoliini-2(g)-karboksyylihappo (esimerkki 36.) : /o<725: -64,2° (1N NaOH) 15 Alkuaineanalyysi C27H33N5°8'2,^5H2<3:‘*’le:

Laskettu (%): C, 53,59; H, 6,41; N, 11,57

Saatu (%): C, 53,41; H, 6,14; N, 11,56.

Λ (2S, 3aS, 7aS) -1 -/n - (4-klooribentsyyl ioksikarbonyy-li)-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli7oktahydro-1H-indoli-2-20 karboksyylihappo (esimerkki 37 ): Z«<7p2: -30,8° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi C^gH^ClN^Og . 1,5H20: lie:

Laskettu (%): C, 54,06; H, 6,81; N, 9,01; Cl: 5,70

Saatu (%): C, 53,95; H, 6,65; N, 8,80; Cl: 5,56.

o 25 (2S,3aS,7aS)-1-/N -(4-metyylibentsyylioksikarbonyy- li)-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli7oktahydro-1H-indoli-2-karboksyylihappo (esimerkki 38 ) : "31'9° (1N Na0H)

Alkuaineanalyysi C^H^N^Og . 1,75H20:lle : 30 Laskettu (%): C, 57,46; H, 7,57; N, 9,24

Saatu (%): C, 57,37; H, 7,51; N, 9,07.

o · (2S, 3aS,7aS) -1-^N - (2-klooribentsyylioksikarbonyy- li)-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli7oktahydro-1H-indoli-2-karboksyylihappo (esimerkki 39 ): 35 -32,8° (IN NaOH) 46 37794

Alkuaineanalyysi ^gHggd^Og.1,25H20:lle:

Laskettu (¾): C, 54,45; H, 6,77; N, 9,07; Cl, 5,74

Saatu (%): C, 54,55; H, 6,81; N, 8,90; Cl: 5,60.

Λ (2S,3aS,7aS)-1-/n -(2-metyylibentsyylioksikarbonyy- 5 li)-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli7oktahydro-1H-indoli-2- karboksyylihappo (esimerkki 40): £c<_7q2: -35,8° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi ^29H42N4°8 * ^ '^5Η20: He:

Laskettu (%): C, 57,46; H, 7,57; N, 9,24 10 Saatu (%): C, 57,68; H, 7,63; N, 9,01.

_ 2 (2S,3aS,7aS)-1-/N -(2-fluoribentsyylioksikarbonyy-li)-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli7oktahydro-lH-indoli-2-karboksyylihappo (esimerkki 41 ):

CoCj^i -32,5° (1N NaOH) 15 Alkuaineanalyysi C28H39FN4°8.1,5H20.0,5C^Hg02:lle:

Laskettu (%): C, 55,46; H, 7,14; N, 8,62; F, 2,92

Saatu (%): C, 55,63; H, 7,08; N, 8,54; F, 3,01.

_ 2 (2S,3aS,7aS)-1-/N -(alfa-naftyylimetoksikarbonyyli)-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli7oktahydro-lH-indoli-2-karbok-20 syylihappo (esimerkki 42 ) :

ZocJq2: -36,3° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi ^^H^N^Og · 1 > 5H20.0,25C^Hg02 : lie :

Laskettu (%): C, 60,08; H, 7,18; N, 8,49

Saatu (%) : C, 59,78; H, 7,41; N, 8,37.

25 (2S,3aS,7aS)-1-/N2-(alfa-naftyylietoksikarbonyyli)~ L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli7oktahydro-1H-indoli-2-kar-boksyylihappo (esimerkki 43 ): ZCX7q2: -38,8° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi C33H44N4°g·2H20.0,5C^Hg02:lle: 30 Laskettu (%): C, 59,64; H, 7,44; N, 7,95

Saatu (%): C, 59,87; H, 7,17; N, 7,91.

Λ (2S,3aS,7aS)-1-/N -(4-fenyylibentsyylioksikarbonyy-li)-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli7oktahydro-1H-indoli-2-karboksyylihappo (esimerkki 44 ): 35 ZTiXj27: -39,1° (1N NaOH) 47 07794

Alkuaineanalyysi C34H44N4°g·1 , 2^0. O , 5C4HgC>2 : lie:

Laskettu (%): C, 61,09; H, 7,26; N, 7,92

Saatu (%): C, 61,23; H, 7,26; N, 7,85.

(2S,3aS,7aS)-1-/N^-(fenoksikarbonyyli)-L-lysyyli-5 ganuna-D-glutamyyli/oktahydro-1H-indoli-2-karboksyylihappo (esimerkki 45): [X7β9: -17,7° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi C27H38N4°8·1H2°·0'5C4H8°2:lle:

Laskettu (7>) : C, 57,22; II, 7,29; N, 9,20 10 Saatu (%): C, 56,95; H, 7,13; N, 9,49.

Esimerkki 46 (2S,3aS,7aS)-1-/n -(4-hydroksibentsoyyli)-L-lysyy-1i-gamma-D-glutamyy1i^oktahydro-1 H-indoli-2-karbok- syylihappo___ 15 5 ml:aan vettä liuotettiin 1,30 g (2S,3aS,7aS)-1- e (N -bentsyylioksikarbonyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli)-oktahydro-1H-indoli-2-karboksyylihappoa ja 0,25 g natrium-karbonaattia ja 10 ml tetrahydrofuraania lisättiin. Kiivaasti sekoittaen lisättiin 0,7 g N-(4-hydroksibentsoyyli-20 oksi)sukkiini-imidiä ja seosta sekoitettiin yön yli huoneenlämmössä. Reaktioseos konsentroitiin puoliksi, tehtiin happamaksi 10 % sitruunahapolla ja uutettiin metyleeni-kloridilla. Orgaaninen kerros pestiin vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, ja konsentroitiin kuiviin 25 alipaineessa. Jäännös kromatografoitiin CHP20P-pylväällä (2,5 cm halkaisijaltaan ja 4 0 cm pituudeltaan) käyttäen --· asetonitriili/vesi-seosta (30 % —> 70 % -gradientti) eluenttina. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot konsentroitiin kuiviin alipaineessa, jolloin saatiin 0,6 g - 30 jäännöstä. Jäännös liuotettiin 25 % HBr/AcOH-seokseen (10 ml) ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 1 tunti. Sitten lisättiin 100 ml eetteriä ja saatu valkoinen sakka : kerättiin suodattamalla, ja kromatografoitiin CI!P20P-pyl- vääliä (2,5 cm halkaisijaltaan ja 40 cm pituudeltaan) . 35 käyttäen asetonitriili/vesi-seosta (0 % —> 40 % gradient- ti) . Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot konsentroitiin 48 3 7 794 kuiviin alipaineessa. Jäännös lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,3 g otsikon yhdistettä.

' -17,4° (H20)

Alkuaineanalyysi C27H38N4°8 * ** '^H2°: : 5 Laskettu (%): C, 56,53; H, 7,20; N, 9,77

Saatu (%): C, 56,71; H, 7,09; N, 9,95.

Esimerkit 47-62

Seuraavat yhdisteet syntetisoitiin samalla tavalla kuin esimerkissä 46.

10 (2S,3aS,7aS)-1-^N^-(2-tiofeenikarbonyyli)-L-lysyy- li-gamma-D-glutamyyli7oktahydro-1H-indoli-2-karboksyyli-happo (esimerkki 47.) :

Lei]2*'. -23,1° (H20)

Alkuaineanalyysi l^Orlle: 15 Laskettu (%): C, 54,14; H, 6,91; N, 10,10; S, 5,78

Saatu (%): C, 54,09; H, 6,74; N, 10,14; S, 5,99.

Λ (2S,3aS,7aS)-1-/N -(3-kinoliinikarbonyyli)-L-lysyy-li-gamma-D-glutamyyli7oktahydro-1H-indoli-2-karboksyyli-happo (esimerkki 48-) : 20 /o<7^4: -25,8° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi C3oH39N5°7·2H20:lie:

Laskettu (%): C, 58,33; H, 7,02; N, 11,34

Saatu (%): C, 58,46; H, 7,30; N, 11,24.

O

(2S,3aS,7aS)-1-/N -(2-kloorinikotinoyyli)-L-lysyy- ____: 25 li-gamma-D-glutamyyli/oktahydro-lH-indoli-2-karboksyyli- happo (esimerkki 49): £o<7d6: "42,6° (H20)

Alkuaineanalyysi C^H^gClN^O^ . 1,5H20: lie :

Laskettu (%): C, 52,66; H, 6,63; N, 11,81; Cl, 5,98 ’·' 30 Saatu (%) : C, 52,75; H, 6,68; N, 11,76; Cl, 5,89.

*.*.* (2S,3aS,7aS)-1-/N^-(4-klooribentsoyyli)-L-lysyyli- gamma-D-glutamyyli/oktahydro-1H-indoli-2-karboksyylihappo (esimerkki 50): -25,9 (1N NaOH) 35 Alkuaineanalyysi C^H^CIN^O^ . 1,5H20:lle:

Laskettu (%): C, 54,77; H, 6,81; N, 9,46; Cl: 5,99

Saatu (%): C, 55,07; H, 7,09; N, 9,26; Cl: 5,79.

49 87794 (2 S,3aS,7aS)-1-/n^-(indoliini-2(S)-karbonyyli)-L-lysyyli-gamnia-D-glutamyyli7oktahydro-1H-indoli-2-karbok-syylihappo (esimerkki 51 ): Ζ~°ί7ο5: -64,3° (1N NaOH) 5 Alkuaineanalyysi C29H41N5°9*l,25H20:lle:

Laskettu (%): C, 56,90; H, 7,47; N, 11,44

Saatu (%): C, 56,99; H, 7,61; N, 11,15.

Λ (2S,3aS,7aS)-1-/N-(2-tianafteenikarbonyyli)-L-lysyyli-gainma-D-,?lutamyyli7oktahydro-1 H-indoli-2-karbok-10 syylihappo (esimerkki 52 ):

Zc<7p6: -16,5° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi ^29^38Ν4°7^*2H20:lle:

Laskettu (%): C, 55,93; H, 6,80; N, 9,00; S, 5,15

Saatu (%): C, 56,08; H, 6,63; N, 8,87; S, 4,94.

15 (2S,3aS,7aS)-1-/n^-(2-kinoksaliinikarbonyyli)-L- lysyyli-gamma-D-glutamyyli7°ktahydro-1H-indoli-2-karbok-syylihappo (esimerkki 53 ): : -15,3° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi C2 gH^gN^-O^· 1,25H2O:lie: 20 Laskettu (%): C, 57,56; H, 6,75; N, 13,89

Saatu (%): C, 57,48; H, 7,00; N, 13,96.

2 (2S,3aS,7aS)-1-/N -(1-isokinoliinikarbonyyli)-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli7oktahydro-1H-indoli-2-karbok-syylihappo (esimerkki 54); : 25 “51,8° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi C^QH^gN^O^.1H2O:lie:

Laskettu (%): C, 60,09; H, 6,89; N, 11,68 : ·’ Saatu (%) : C, 59,89; H, 6,66; N, 11,61.

(2S,3aS,7aS)-1-/N - (6-metoksinikotinoyyli) -L-lysyy-30 li-gamma-D-glutamyyli7oktahydro-1H-indoli-2-karboksyyli-happo (esimerkki 55 ) :

Co(jl7·. -18,0° (H20) : Alkuaineanalyysi C27H39N5°8'1'5H20:lle:

Laskettu (%): C, 55,09; H, 7,19; N, 11,90 35 Saatu (%): C, 55,09; H, 7,44; N, 11,77.

so 87794 (2S,3aS,7aS)-1~ZN2-(6-etoksinikotinoyyli)-L-lysyy-li-gamma-D-glutamyyli7oktahydro-1H-indoli-2-karboksyyli-happo (esimerkki 56 ): 7q7: -16,4° (H20) 5 Alkuaineanalyysi C28H41N5°8 * 2H2°: :

Laskettu (%): C, 54,98; H, 7,42; N, 11,45

Saatu (%): C, 55,00; H, 7,70; N, 11,27.

(2S,3aS,7aS)-1-/N -(6-kloorinikotinoyyli)-L-lysyy-1i-gamma-D-glutamyyli7oktahydro-1H-indoli-2-karboksyyli-10 happo (esimerkki 57.) :

Zc<7d7 : “21,4° (H20)

Alkuaineanalyysi C^H^CIN^O^ . 2H20: lie :

Laskettu (%): C, 51,87; H, 6,70; N, 11,63; Cl, 5,89

Saatu (%): C, 51,78; H, 6,44; N, 11,86; Cl, 6,05.

15 (2S,3aS,7aS)-1-/N2-(2-hydroksibentsoyyli)-L-lysyy- 1i-gamma-D-glutamyyli7oktahydro-1H-indoli-2-karboksyyli-happo (esimerkki 58 ) : ZX/q8 : -21,0° (H20)

Alkuaineanalyysi C27H38N4°8*1»25H20:lle: 20 Laskettu (%): C, 56,98; H, 7,17; N, 9,84

Saatu (%): C, 56,83; H, 7,26; N, 9,89.

(2S,3aS,7aS)-1-/N -(6-n-propoksinikotinoyyli)-L-lysyy1i-gamma-D-glutamyy1i7oktahydro-1H-indoli-2-karbok-syylihappo (esimerkki 59 ): 25 : -25,2° (INNaOH)

Alkuaineanalyysi C2gH^^N^Og.1,5H20:lie :

Laskettu (%): C, 56,48; H, 7,52; N, 11,36

Saatu (%): C, 56,56; H, 7,22; N, 11,36.

(2S,3aS,7aS)-1-^N -(2-i-propoksinikotinoyyli)-L-30 lysyy1i-gamma-D-glutamyy1x7oktahydro-1H-indoli-2-karbok-syylihappo (esimerkki 60 ) : : -26,4° (INNaOH)

Alkuaineanalyysi C29H43N5°8.2H20:lle:

Laskettu (%): C, 55,67; H, 7,57; N, 11,19 35 Saatu (%): C, 55,41; H, 7,80; N, 11,05.

ft 7 70 J, 51 0/,^4 Λ (2S,3aS,7aS)-1-^N -(3-hydroksibentsoyyli)-L-lysyy-li-gamma-D-glutamyyli7oktahydro-1H-indoli-2-karboksyyli-happo (esimerkki 61 ): βλ7p1: -29,8° (1N NaOH) 5 Alkuaineanalyysi C27H38N4^8 . 1 ,251^0: lie:

Laskettu (%) : C, 56,98; H, 7,17; N, 9,84

Saatu (%): C, 57,07; H, 7,16; N, 9,79.

(2S,3aS,7aS)-1-/N -(4-hydroksi-3-metoksibentsoyy-li)-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli7oktahydro-1H-indoli-2-10 karboksyylihappo (esimerkki 62 -1) : Z*7d8: "17,9° (H20)

Alkuaineanalyysi ^28^40^4^9 *2H20:lle:

Laskettu (%): C, 54,89; H, 7,24; N, 9,14

Saatu (%): C, 54,95; H, 7,26; N, 9,04.

15 (2S,3aS,7aS)-1-/N2-(3-hydroksi-4-metoksibentsoyyli)- L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli7oktahydro-lH-indoli-2-karboksyylihappo (esimerkki 62 -2) : ' "40,0° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi C28*l40N4°9 * ^' 251^0: lie: 20 Laskettu (*): C, 52,95; H, 7,38; N, 8,82

Saatu (%): C, 52,86; H, 7,07; N, 8,97.

(2S, 3aS, 7aS)-1-^N2- (2-hydroksi-4-metyylibentsoyyli) -L - ly sy y 1 i-ga mma - D-g 1 u tamy y 1 i7 okt a hy dr o-1H - i ndo 1 i - 2-ka r-boksyylihappo (esimerkki 62 -3): ·;--- 25 Z^7q5·· +37,4° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi ^qH^qN^Oq . 1H20: lie:

Laskettu (%): C, 58,12; H, 7,32; N, 9,68 ' . Saatu (%): C, 57,92; H, 7,12; N, 9,46.

(2S,3aS,7aS)-1-/n2-(6-hydroksi-beeta-naftoyyli)-L-30 lysyyli-gamma-D-glutamyyli7oktahydro-1H-indoli-2-karboksyy-lihappo (esimerkki 62 -4)s : -2,8° (1N NaOH) \ Alkuaineanalyysi H^qN^Oq . 2,5H20: lie :

Laskettu (%): C, 58,02; H, 7,07; N, 8,73 35 Saatu (%): C, 57,90; H, 7,09; N, 8,58.

52 87794 (2S, 3aS, 7aS) -1-/N - (3,5- dimetoksi-4-hydroksi-bentsoyyli)-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyl^oktahydro-IH-indoli-2-karboksyylihappo (esimerkki 6 2 -5): /X7p6: -4,1° (1N NaOH) 5 Alkuaineanalyysi C29H42N4°1 0'2 ' ^H2°: :

Laskettu (%): C, 53,45; H, 7,27; N, 8,60

Saatu (%): C, 53,57; H, 7,24; N, 8,77.

(2S,3aS,7aS)-1-/n2-(3-hydroksi-2-naftoyyli)-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyll)oktahydro-lH-indoli-2-karbok 10 syylihappo (esimerkki 62 -6) : : +15,6° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi H40N4°8·2,5H20;lie :

Laskettu (%): C, 58,02; H, 7,07; N, 8,73

Saatu (%): C, 57,82; H, 6,74; N, 8,47.

15 (2 S,3aS,7aS)-1-/N^-(2-hydroksi-5-metoksibentsoyyli)- L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli/oktahydro-lH-indoli-2-karbok-syylihappo (esimerkki 62-7): [0(jle : +22,1 (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi C28H40N4°9‘1'5H20:lle: 20 Laskettu (%): C, 55,71; H, 7,18; N, 9,28

Saatu (%): C, 55,56; H, 7,09; N, 9,31.

2 (2S,3aS,7aS)-1 -/N -(4-hydroksi-3-aminobentsoyyli)-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli7oktahydro-1H-indoli-2-karbok-syylihappo (esimerkki 62-8) : 25 £θ<726: -15,3° (HjO)

Alkuaineanalyysi C2^H2gN^Og.1,75H20:lie :

Laskettu (%): C, 54,67; H, 7,22; N, 11,81 ; Saatu (%): C, 54,81; H, 7,31; N, 11,79.

(2S,3aS,7aS)-1-/N2-(2-hydroksi-5-bromibentsoyyli)-30 L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli7oktahydro-1H-indoli-2-karbok-syylihappo (esimerkki 62-9): J26: +10,8° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi C27H37N4°8Br. 1,75H20:lie:

Laskettu (%): C, 49,36; H, 6,21; N, 8,53; Br, 12,16 35 Saatu (%) : C, 49,42; II, 6,25; N, 8,50; Br, 12,01.

53 87794 (2S,3aS,7aS)-1-/N2-(2-hydroksi-5-metyylibentsoyyli)-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli7oktahydro-lH-indoli-2-karbok-syylihappo (esimerkki 62 -10):

Zo<7q8 : +23,2° (1N NaOH) 5 Alkuaineanalyysi C^gH^2N4°9 · 1 · 25^0: lie:

Laskettu (%): C, 57,63; H, 7,17; N, 8,96

Saatu (%): C, 57,51; H, 7,20; N, 8,88.

Λ (2S,3aS,7aS)-1-/N -(2-hydroksi-6-metyylibentsoyyli)-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli7oktahydro-lH-indoli-2-kar-10 boksyylihappo (esimerkki 62-11) : /JXJq*·· +4 5,2° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi CggH^^Og * ^ · 5H20:lle:

Laskettu (%): C, 57,22; H, 7,20; N, 8,90

Saatu (%): C, 57,18; H, 7,25; N, 8,81.

15 {2 S,3aS,7aS)-1-/N2-(2-hydroksi-4-klooribentsoyyli)- L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli/oktahydro-lH-indoli-2-karbok-syylihappo (esimerkki 62 -12) : £cX7d°: +29,3° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi ^^H^ydN^O^.1,5H20:lle: 20 Laskettu (%): C, 53,33; H, 6,63; N, 9,21; Cl, 5,83

Saatu (%): C, 53,41; H, 6,72; N, 9,18; Cl, 5,79.

(2S,3aS,7aS)-1-/N2-(2-hydroksi-5-klooribentsoyyli)-L-lysyyli-gamraa-D-glutamyyli7oktahydro-1H-indoli-2-karbok-syylihappo (esimerkki 62 -13): 25 : +17,2° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi ^' ^H20:^e:

Laskettu (%): C, 53,33; H, 6,63; N, 9,21; Cl, 5,83

Saatu (%): C, 53,21; H, 6,75; N, 9,23; Cl, 5,65.

Esimerkki 63 2 30 1-(N -pyratsinoyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli)- indoliini-2(S)-karboksyylihappo_ (1) Pyratsiinihappoa (0,26 g) liuotettiin seokseen, ' ' jossa oli 3 ml dimetyyliformamidia ja 20 ml metyleeniklori- dia ja lisättiin 1,1 g etyyli-1-(N6-t-butoksikarbonyyli-. ' 35 L-lysyyli-0 -etyyli-gamma-D-glutamyyli)indoliini-2(S)- . - . karboksylaattin ja 0,84 g 1-ctyyl1-3-(3-dimotyyliamino- 54 87794 propyyli)karbodi-imidihydrokloridia. Seosta sekoitettiin yön yli huoneenlämmössä. Reaktioseos pestiin peräkkäin kyllästetyllä natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsent-5 roitiin kuiviin alipaineessa. Jäännökselle suoritettiin silikageelipylväskromatografia (2 % metanoli/kloroformi), 6 2 jolloin saatiin 0,8 g etyyli-1-.(N -t-butoksikarbonyyli-N -pyratsinoyyli-L-lysyyli-O^-etyyli-gamma-D-glutamyyli)indo-liini-2(S)-karboksylaattia viskoosina öljyisenä aineena.

10 (2) Kohdassa (1) saatu yhdiste (0,8 g) liuotettiin dioksaaniin, ja lisättiin 3,5 ml 1N NaOH. Seosta sekoitettiin jäällä jäähdyttäen 1,5 tuntia. Reaktioseos konsentroitiin, tehtiin happamaksi 10 % sitruunahapolla, ja kroma-tografoitiin CHP20P-pylväällä käyttäen asetonitriili/vesi-15 seosta (0 % —> 60 % -gradientti) eluenttina. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot konsentroitiin kuiviin alipaineessa. Jäännös saostettiin uudelleen petrolieetteri/etyy- liasetaatista. Suodattamalla saatiin 0,55 g 1-(N^-t-butok-2 sikarbonyyli-N -pyratsinoyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli)-20 indoliini-2(S)-karboksyylihappoa.

(3) Trifluorietikkahappoa (10 ml) lisättiin erään (0,45 g) kohdassa (2) saatua lopullista tuotetta, ja seosta sekoitettiin jäällä jäähdyttäen 20 minuuttia. Trifluori-etikkahappo haihdutettiin ja jäännös kromatografoitiin 25 CHP20P-pylväällä käyttäen asetonitriili/vesi-seosta (0 % —> 30 % -gradientti) eluenttina. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot konsentroitiin kuiviin alipaineessa, ja jäännös lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,27 g otsikon yhdistettä.

30 -74,4° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi C25H30N6^7 ' ^ ' ^H2°: :

Laskettu (%): C, 52,53; H, 6,17; N, 14,70

Saatu (%): C, 52,52; H, 6,27; N, 14,54.

55 8 7 794

Esimerkki 64 2

Mononatrium-(2S,3aS,7aS)-1-(N -nikotinoyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli)oktahydro-lH-indoli-2-karboksylaatti_ 5 5 ml:aan vettä liuotettiin 0,57 g (2S,3aS,7aS)-1- 2 (N -nikotinoyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli)-oktahydro-1H-indoli-2-karboksyylihappo (katso esimerkki 14), ja lisättiin 1 ml 1N NaOH. Saadulle vesiliuokselle suoritettiin CHP20P-pylväskromatografia (0 % —> 20 % asetonitriili/ 10 vesi-gradientti). Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot konsentroitiin kuiviin alipaineessa. Jäännös lyofilisoi-tiin, jolloin saatiin 0,25 g otsikon yhdistettä.

[C<J*S: -24,6° (H20).

Esimerkki 65 15 (2S,3aS,7aS)-1-^N^-(2-metoksibentsoyyli)-L-lysyyli- gamma-D-glutamyy1i7ok tahyd ro-1 H-i ndo1i-2-karbok- syylihappo__ (1) o-anisiinihappoa (1,0 g), N-hydroksisukkiini-imidiä (0,76 g) ja vesiliukoista karbodi-imidihydroklori-20 dia (1,39 g) liuotettiin metyleenikloridiin (15 ml) ja liuosta sekoitettiin yön yli huoneenlämmössä. Emäliuos konsentroitiin alipaineessa ja jäännös uudelleenkiteytet-tiin isopropanolista, jolloin saatiin 1,47 g N-(2-metoksi-bentsoyylioksi)sukkiini-imidiä (sp. 180-182°C).

-- ·· 25 (2S, 3aS,7aS)-1 - (N^-bentsyylioksikarbonyyli-L-lysyy- li-gamma-D-glutamyyli) oktahydro-1 H-indoli-2-karboksyylihap-poa liuotettiin 6 ml:aan vettä ja lisättiin natriumkarbonaattia ja 10 ml THF. Kiivaasti sekoittaen lisättiin N-(2-metoksibentsoyylioksi)sukkiini-imidiä. Seosta sekoitettiin 30 yön yli huoneenlämmössä. Reaktioseos tehtiin happamaksi 10 % sitruunahapolla, ja uutettiin metyleenikloridilla. Orgaaninen kerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatil-la, ja konsentroitiin kuiviin alipaineessa. Jäännös kroma-tografoitiin CHP20P-pylväällä käyttäen asetonitriili/vesi-35 seosta (30 % —>70 % gradientti) eluenttina. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot konsentroitiin kuiviin ali- 56 87794 £ paineessa, jolloin saatiin 1,0 g (2S,3aS,7aS)-1-/N -bent- 2 syylioksikarbonyyli-N -(2-metoksibentsoyyli)-L-lysyyli-gamraa-D-glutamyyli7oktahydro-1H-indoli-2-karboksyylihap-poa.

5 (2) 10 ml:aan etanolia liuotettiin 1,0 g (2S,3aS,7aS)- 6 2 1-/N -bentsyylioksikarbonyyli-N -(2-metoksibentsoyyli)-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli7oktahydro-1H-indoli-2-karboksyy-lihappoa ja lisättiin 1,18 g syklohekseeniä ja 0,2 g 10 % palladium-hiiltä. Seosta sekoitettiin 60°C:ssa 2 tuntia.

10 Katalyytti poistettiin suodattamalla ja emäliuos konsentroitiin kuiviin alipaineessa. Jäännökselle suoritettiin CHP20P-pylväskromatografia (0 % —>50 % asetonitriili/ve-si-gradientti). Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot konsentroitiin alipaineessa. Jäännös lyofilisoitiin, jolloin 15 saatiin 0,34 g otsikon yhdistettä.

CdL]2^' -14,9° (H20)

Alkuni neannlyysi C~QH . _N. 0Q . 2I1„0:1 le : 1 ? 28 4 0 4 8 2

Laskettu U): C, 56,36; H, 7,43; N, 9,39

Saatu (%): C, 56,63; H, 7,18; N, 9,33.

20 Esimerkit 66-68

Seuraavat yhdisteet syntetisoitiin samalla tavalla kuin esimerkissä 65.

2 1-(N -sykloheksyylikarbonyvli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli)indoliini-2(S)-karboksyylihappo (esimerkki 66):

25 Sulamispiste: 207-212°C

ZT°<7d6: -90,3° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi C^H^gN^O^ .2H20:lle:

Laskettu (%): C, 57,23; H, 7,47; N, 9,89

Saatu (%): C, 57,42; H, 7,52; N, 9,94.

30 (2S,3aS,7aS)-1-/N2-(4-fenyylibentsoyyli)-L-lysyyli- gamma-D-glutamyyli7oktahydro-1H-indoli-2-karboksyylihappo (esimerkki 67): q6; -11,6° (1N NaOH)

Alkuaineanalyysi C-j^H^2N^0^ . 1,5H20.0,5C4Hg02 : He 35 Laskettu (%): C, 62,02; H, 7,29; N, 8,27

Saatu (%): C, 61,98; H, 7,15; N, 8,35.

57 37794 (2S,3aS,7aS)-1-/N2-(4 —fluoribentsoyyli)-L-lysyyli-gamma-D-glutamyy1l/oktahydro-1 H-indoli-2-karboksyy1ihappo (esimerkki 68):

ZtXj*9: 31,8° (1N NaOH) 5 Alkuaineanalyysi . 21^0: lie :

Laskettu (%): C, 55,47; H, 7,07; N, 9,58; F, 3,25

Saatu (%).: C, 55,59; H, 7,36; N, 9,46; F, 3,03.

Esimerkki 69 - 2 1-/N -(3,4-metyleenidioksibentsyylioksikarbonyyli)-10 L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli7irtdoliini-2(S)-kar- bok syy1ihappo 2 6 2,5 g N -t-butoksikarbonyyli-N -O-nitro^-pyridii-nisulf enyyli)-L-lysiiniä ja 2,2 g etyyli-1-(0^-etyyli-gamma-D-glutamyyli)indoliini-2(S)-karboksylaattia liuotet-15 tiin metyleenikloridiin, ja lisättiin 2,0 g 1-etyyli-3- (3-dimetyyliaminopropyyli)karbodi-imidihydrokloridia. Seosta sekoitettiin yön yli huoneenlämmössä. Reaktioseos pestiin peräkkäin kyllästetyllä natriumbikarbonaatin vesi-liuoksella, 5 % kaliumvetysulfaatin vesiliuoksella ja nat-20 riumkloridin vesiliuoksella, kuivattiin vedettömällä nat-riumsulfaatilla ja konsentroitiin kuiviin alipaineessa. Jäännös uudelleenkiteytettiin etanolista, jolloin saatiin 3,6 g etyyli-1~7N2-t-butoksikarbonyyli-1-N^-(3-nitro-2-pyridiinisulfenyyli)-L-lysyyli-O^-etyyli-gamma-D-gluta-"25 myyli7 indoliini-2 (S) -karboksylaattia: : -28,2° (dimetyyliformamidi) .

: 3,5 g tätä esteriä sekoitettiin 30 ml:n kanssa tri- fluorietikkahappoa jäällä jäähdyttäen 30 minuuttia. Tri-- - fluorietikkahappo haihdutettiin, ja etyyliasetaattia ja .·. 30 5 % kaliumkarbonaattia lisättiin jäännökseen. Seosta ravis tettiin voimakkaasti. Orgaaninen kerros pestiin natrium-kloridin vesiliuoksella, kuivattiin vedettömällä natrium-sulfaatilla ja konsentroitiin alipaineessa. Jäännös uudelleenkiteytettiin eetteri/etanolista, jolloin saatiin 2,6 g : 35 etyyli-1-/n^-(3-nitro-2-pyridiinisulfenyyli)-L-lysyyli-O^- : etyyli-gamma-D-glutamyyli7indoliini-2(S)-karboksylaattia.

58 87794

Sp. 95-102°C. * -39,6° (dimetyyliformamidi) .

Erä (1,0 g) saatua esteriä liuotettiin 30 ml:aan metyleenikloridia ja lisättiin 0,21 g N-metyylimorfoliinia ja 1,07 g N-(3,4-metylcenidioksibcntsyylioksikarbonyyli-5 oksi)sukkiini-imidiä, ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 3 tuntia. Reaktioseos pestiin peräkkäin kyllästetyllä natriumbikarbonaatin vesiliuoksella, 5 % kaliumvetysul-faatin vesiliuoksella ja vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin kuiviin alipaineessa. 10 Jäännös uudelleenkiteytettiin etanoli/metanolista, jolloin saatiin 1,1 g etyyli-1-^N -(3,4-metyleenidioksibentsyyli- g oksikarbonyyli)-N -(3-nitro-2-pyridiinisulfenyyli)-L-lysyv-li-0 -etyyli-gamma-D-glutamyyli7indoliini-2(S)-karboksy-laattia. Sp. 130-135°C. : 23,2° (dimetyyliformamidi).

15 Tämän tuotteen pienen erän (1,0 g) käsittelyä jat kettiin kuten esimerkin 63 toisessa vaiheessa, jolloin saa-2 tiin 0,8 g 1-/N -(3,4-metyleenidioksibentsyylioksikarbo-nyyli) -N -(3-nitro-2-pyridiinisulfenyyli)-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli7_indoliini-2(S)-karboksyylihappoa. Sp. 100-20 110°c. 0*3^ · -70,5° (1N NaOH) .

Erä (0,74 g) tuotetta liuotettiin 10 mlraan diok-saania ja lisättiin 10 ml 0,5N vetykloridihappoa. Seosta sekoitettiin 45°C:ssa 4 tuntia. Reaktioseos neutraloitiin ja konsentroitiin, ja jäännös tehtiin happamaksi 1N vety-25 kloridihapolla ja sille suoritettiin CHP20P-pylväskroma-V'; tografia (0 %—>60 % asetonitriili/vesi-gradientti). Ha luttua tuotetta sisältävät fraktiot konsentroitiin ja saostuneet kiteet kerättiin suodattamalla, jolloin saatiin 45 mg otsikon yhdistettä.

30 Sulamispiste: 198-202°C

foJn1'· "67'3° UN Na0H)

Alkuaineanalyysi £29^341^0^ . 2H2O: lie :

Laskettu (¾) : C, 54,88; II, 6,04; N, 8,83

Saatu (%): C, 55,16; H, 6,14; N, 8,83.

59 87794

Esimerkki 70 (25,335,738) -1-,/N-bentsyylioksikarbonyyli-S- (3-aminopropyyli)-L-kysteinyyli-gamma-D-glutamyyli/- oktahydro-1H-indoli-2-karboksyylihappo_ 5 L-kysteiinihydrokloridihydraattia (13 g) liuotet tiin seokseen, jossa oli 100 ml etanolia ja 50 ml vettä ja lisättiin 1N NaOH, Samalla kun liuoksen pH säilytettiin arvossa 10, lisättiin 16 g 3-(t-butoksikarbonyyli-amino)propyylibromidia. Seosta sekoitettiin huoneenlämmös-10 sä 4 tuntia. Neutraloinnin jälkeen reaktioseos konsentroitiin kuiviin alipaineessa. Jäännös liuotettiin 15 % ammoniakin vesiliuokseen, ja sille suoritettiin CHP20P-pylväs-kromatografia (0 S—> 30 % asetonitriili/vesi-gradientti). Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot konsentroitiin ali-15 paineessa. Saostuneet kiteet kerättiin suodattamalla, jolloin saatiin 10,3 g S-(3-t-butoksikarbonyyliaminopropyyli)-L-kysteiiniä. Sp. 193°C (haj.). Erä (3,0 g) tätä tuotetta liuotettiin vesi/THF-liuokseen, joka sisälsi 3,0 g kalium-karbonaattia, ja kiivaasti sekoittaen lisättiin 2,76 g 20 bentsyylioksikarbonyylikloridia. Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 3 tuntia. Reaktioseos pestiin eetterillä, tehtiin happamaksi 10 % sitruunahapolla, ja uutettiin kloroformilla. Orgaaninen kerros kuivattiin vedettömällä nat-riumsulfaatilla ja konsentroitiin alipaineessa, jolloin 25 saatiin 2,8 g N-bentsyylioksikarbonyyli-S-(3-t-butoksi- karbonyyliaminopropyyli)-L-kysteiiniä öljynä. Tämän yhdisteen disykloheksyyliamiinisuolan sulamispiste on 125-127°C. Erä (1,76 g) öljyistä tuotetta liuotettiin 20 ml:aan ase-tonitriiliä ja liuokseen lisättiin 0,43 g N-hydroksisukkii-30 ni-imidiä ja 0,77 g N,lsf-disykloheksyylikarbodi-imidiä.

Seosta sekoitettiin 2 tuntia. Sakka poistettiin suodattamalla ja kloroformia lisättiin emäliuokseen. Seos pestiin peräkkäin kyllästetyllä natriumbikarbonaatin vesiliuok-; sella ja natriumkloridin vesiliuoksella, kuivattiin vedet- ' 35 tömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin kuiviin ali- paineessa, jolloin saatiin 2,2 g jauhetta. Natriumkarbo- 60 87794 naattia (0,6 g) ja 1,07 g (2S,3aS,7aS)-1-(gamma-D-gluta-myyli)oktahydro-1H-indoli-2-karboksyylihappoa liuotettiin seokseen, jossa oli 24 ml THF ja 12 ml vettä, ja liuokseen lisättiin 2,2 g edellä olevaa jauhetta. Seosta sekoi-5 tettiin huoneenlämmössä 3 tuntia. Reaktioseos neutraloitiin ja konsentroitiin alipaineessa. Jäännös tehtiin happamaksi 5 % kaliumvetysulfaatin vesiliuoksella ja sille suoritettiin CHP20P-pylväskromatografia (30 %—>70 % aseto-nitriili/vesi-gradientti). Haluttua tuotetta sisältävät 10 fraktiot konsentroitiin alipaineessa, jolloin saatiin 0,6 g (2S,3aS,7aS)-1-/N-bentsyylioksikarbonyyli-S-(3-t-butoksikarbonyyliaminopropyyli)-L-kysteinyyli-gamma-D-glutamyyli7oktahydro-1H-indoli-2-karboksyylihappoa. Erä (0,58 g) tätä tuotetta käsiteltiin edelleen kuten esimerkin 15 22 neljännessä vaiheessa, jolloin saatiin 0,33 g otsikon yhdistettä.

ZK7p7: -26,7° (H20)

Alkuaineanalyysi C28H40N4°8* 1H20:lle:

Laskettu (%): C, 55,07; H, 6,93; N, 9,17; S, 5,25 20 Saatu (%): C, 55,00; H, 6,78; N, 9,16; S, 5,47.

Esimerkki 71 (2S,3aS,7aS)-1-/N-bentsyylioksikarbonyyli-S-(3-aminopropyyli)-L-kysteinyyli-gamma-D-glutamyyli7-oktahydro-1H-indoli-2-karboksyylihapposulfoksidi ‘ ' 25 (2S,3aS,7aS)-1-^N-bentsyylioksikarbonyyli-S-(3-t- butoksikarbonyyliaminopropyyli)-L-kysteinyyli-gamma-D-glutamyyli7oktahydro-1H-indoli-2-karboksyylihappoa (0,5 g) (katso esimerkki 70) liuotettiin metyleenikloridiin, ja lisättiin 0,16 g m-klooriperbentsoehappoa. Seosta sekoi-30 tettiin huoneenlämmössä 1 tunti. Reaktioseos konsentroitiin kuiviin alipaineessa. Jäännökselle suoritettiin CHP20P-pylväskroinatografia (30 % —> 70 '1 asetonitriili/ vesi-gradientti). Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot konsentroitiin kuiviin alipaineessa, jolloin saatiin 0,33 35 g jäännöstä. Jäännöstä käsiteltiin edelleen kuten esimerkin 22 neljännessä vaiheessa, jolloin saatiin 0,23 g otsi-kon yhdistettä.

61 87794 [a]j;4: -28,0° (IN NaOH)

Alkuaineanalyysi C28H40N4OsS. 2H20:1 le:

Laskettu (%): C, 52,16; H, 6,88; N, 8,69; S, 4,97 5 Saatu (%): C, 52,29; H, 6,97; N, 8,82; S, 4,65.

Esimerkki 72 (2S,3aS,7aS)-1-[N-bentsyylioksikarbonyyli-S-(2aminoetyyli ) -L-kysteinyyli-gamma-D-gluta-10 niyy li ] oktahydro-1H-indo] i ~2-kari» iknyy 1 ihappo oni f oky id i

Otsikon yhdiste syntetisoitiin samalla tavalla kuin esimerkissä 71.

[a]f: -34,0° (IN NaOH) 15 Alkuaineanalyysi C27H38N409S. 1H20: lie:

Laskettu (%): C, 52,93; H, 6,58; N, 9,14; S, 5,23 Saatu (%): C, 52,60; H, 6,61; N, 9,29; S, 5,52.

Esimerkki 73 20 Etyyli-1- (N^-bentsyylioksikarbonyyli-L-lysyy- li-gamma-D-glutamyyli)indoliini-2( S)-karboksy-laatti

Etyyli-indoliini-2(S)-karboksylaattihydroklo-ridia (11,6 g), 5,2 g trietyyliamiinia ja 19 g alfa-25 bentsyyli-N-bentsyylioksikarbonyyli-D-glutamaattia liuotettiin 150 ml: aan metyleenikloridia, ja lisät-: tiin 15,6 g vesiliukoista karbodi-imidihydrokloridia.

: Seosta sekoitettiin yön yli huoneenlämmössä. Reaktio- liuos pestiin peräkkäin 10 % vetykloridihapolla, nat-30 riumbikarbonaatin vesiliuoksella ja natriumkloridin vesiliuoksella, ja kuivattiin. Liuotin haihdutettiin, ja jäännös uudelleenkiteytettiin etanoli/ eetteristä, \ jolloin saatiin 16,0 g otyyl i-1 -( N-bontsyyl i - 62 87794 oksikarbonyyli-0 -bentsyyli-gamma-D-glutamyyli) indoliini-2(S)-karboksylaattia (sp. 114-116°C).

Erä (5,0 g) tätä esteriä suspendoitiin seokseen, jossa oli 100 ml metanolia ja 30 ml vettä, ja suspensioon 5 lisättiin 5 ml etikkahappoa, 4,6 g ammoniumformaattia ja 0,5 g 10 % palladiumhiiltä. Seosta sekoitettiin 50°C:ssa 1 tunti. Katalyytti poistettiin suodattamalla. Emäliuos säädettiin pH-arvoltaan 7:ään ja konsentroitiin. Jäännös-liuos jäähdytettiin. Saostuneet kiteet kerättiin suodatta-10 maila ja uudelleenkiteytettiin etanoli/vesi-seoksesta (1/1)/ jolloin saatiin 2,2 g etyyli-1-(gamma-D-glutamyyli)-indoliini-2(S)-karboksylaattia (sp. 197-200°C, haj.). Erä (2,0 g) tätä esteriä ja 0,66 g natriumkarbonaattia liuotettiin 25 ml:aan vettä ja lisättiin liuos, jossa oli 3,3 g 2 6 15 N -bentsyylioksikarbonyyli-N -t-butoksikarbonyyli-L-ly- siini-N-hydroksisukkiini-imidiesteriä 25 mlzssa THF. Seosta sekoitettiin yön yli huoneenlämmössä. Tetrahydrofuraani haihdutettiin ja lisättiin 5 % kaliumvetysulfaatin vesiliuosta. Saostuneet kiteet kerättiin suodattamalla 20 ja uudelleenkiteytettiin etanoli/eetteristä, jolloin saa- 2 6 tiin 3,3 g etyyli-1-(n -bentsyylioksikarbonyyli-N -t- butoksikarbonyyli-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli)indoliini-2(S)-karboksylaattia. Erä (0,7 g) tätä esteriä sekoitettiin 10 ml:n kanssa trifluorietikkahappoa jäällä jäähdyt-25 täen 20 minuuttia. Reaktioseos konsentroitiin kuiviin alipaineessa, ja jäännökselle suoritettiin CHP20P-pylväskroma-tografia (0 % —>50 % asetonitriili/vesi-gradientti). Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot konsentroitiin ja saostuneet kiteet kerättiin suodattamalla, jolloin saatiin 0,34 30 g otsikon yhdistettä.

Sulamispiste: 188-191°C .·. ; -63,9° (DMF)

Alkuaineanalyysi C^qH^qN^Oq.1,75H2O:lie:

Laskettu (%): C, 58,67; H, 6,81; N, 9,12 35 Saatu (%): C, 58,71; H, 6,84; N, 9,40.

β3 87794

Esimerkki 74

Seuraava yhdiste syntetisoitiin samalla tavalla kuin esimerkissä 73 .

2

Etyyli-(2S,3aS,7aS)-1-(N -bentsyylioksikarbonyyli-5 L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli)oktahydro-1H-indoli-2-kar-boksylaatti.

Alkuaineanalyysi C30H44N4V1'75H2O:lle:

Laskettu (%) : C, 58,10; H, 7,72; N, 9,03

Saatu (%): C, 58,07; H, 7,49; N, 8,98.

10 Esimerkki 75 2 1 1-(N -bentsyylioksikarbonyyli-L-lysyyli-0 -etyyli- gamma-D-glutamyyli)indoliini-2(S)-karboksyylihappo

Vesiliukoista karbodi-imidihydrokloridia (4,3 g), 4,0 g 1-bentsyylioksikarbonyyli-indoliini-2(S)-karboksyy-15 lihappoa, 1,2 g t-butanolia ja 1,05 g 4-dimetyyliamino-pyridiiniä sekoitettiin metyleenikloridissa jäällä jäähdyttäen 2 tuntia ja sitten huoneenlämmössä yön yli. Reak-tioseos pestiin peräkkäin 10 % sitruunahapolla, natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja natriumkloridin vesiliuok-20 sella, ja kuivattiin. Liuotin haihdutettiin ja jäännös puhdistettiin silikageelipylväskromatografiällä, jolloin saatiin 4,4 g t-butyyli-1-bentsyylioksikarbonyyli-indoliini-2 (S)-karboksylaattia öljynä. Saatu esteri (4,0 g) liuotettiin t-butanolin, dioksaanin ja metanolin seokseen, 25 ja lisättiin 5,7 g ammoniumformaattia ja 0,5 g 10 % palla-diumhiiltä. Seosta sekoitettiin 6 tuntia huoneenlämmössä. Katalyytti poistettiin suodattamalla, ja liuotin haihdu-V·; tettiin. Natriumbikarbonaatin vesiliuosta lisättiin jään nökseen ja seos uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen : : 30 kerros pestiin natriumkloridin vesiliuoksella ja kuivat tiin. Liuotin haihdutettiin. Jäännös sekoitettiin 1,3 g:n : kanssa oksaalihappoa ja uudelleenkiteytettiin eetteri/iso- propanolista, jolloin saatiin 3,9 g t-butyyli-indoliini-2(S)-karboksylaattioksalaattia (sp. 123-125°C). Metyleeni-35 kloridiliuosta, jossa oli 2,6 g t-butyyli-indoliini-2(S)-karboksylaattia, 3,7 g alfa-etyyli-N-bentsyylioksikar- 64 87794 bonyyli-D-glutamaattia ja 3,8 g vesiliukoista karbodi- imidihydrokloridia, sekoitettiin huoneenlämmössä 4 tuntia.

Reaktioseos pestiin peräkkäin natriumbikarbonaatin vesi- liuoksella, 5 % kaliumvetysulfaatin vesiliuoksella ja kui- 5 vattiin. Liuotin haihdutettiin ja jäännös uudelleenkitey- tettiin n-heksaani/etanolista, jolloin saatiin 4,0 g t-butyyli-1-(N-bentsyylioksikarbonyyli-0 -etyyli-gamma-D-glutamyyli)indoliini-2(S)-karboksylaattia. Tämä tuote liuotettiin etanoliin ja lisättiin 2,6 g ammoniumformaat-10 tia ja 1,0 g 10 % palladiumhiiltä. Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 6 tuntia. Katalyytti poistettiin suodattamalla ja liuotin haihdutettiin. Jäännös sekoitettiin natriumbikarbonaatin vesiliuoksen kanssa ja uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen kerros pestiin vedellä ja kuivat- 15 tiin. Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 2,6 g öljyis- 2 tä ainetta. Erää (2,4 g) öljyistä ainetta, 2,67 g N -bent-syy1ioksiknrbonyyli-N^-t-butoksikarbonyy1i-L-1ysi iniä ja 2,08 g vesiliukoista karbodi-imidihydrokloridia sekoitettiin metyleenikloridissa 2 tuntia. Reaktioseos pestiin pe-20 räkkäin natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja 5 % kaliumvetysulfaatin vesiliuoksella ja kuivattiin. Liuotin haihdutettiin, jolloin saatiin 4,7 g lasimaista ainetta. Erää (0,7 g) lasimaista ainetta sekoitettiin 10 ml:n kanssa trl-fluorietikkahappoa jäällä jäähdyttäen 10 minuuttia. Seos ' ‘ 25 konsentroitiin kuiviin alipaineessa, ja jäännökselle suori tettiin CHP20P-pylväskromatografia. Haluttua tuotetta sisältävät fraktiot konsentroitiin, jolloin saatiin 0,24 g ·· : otsikon yhdistettä.

Sulamispiste: 207-212°C . : 30 DXJ^· -3,2° (DMF)

Alkuaineanalyysi C3oH38N4°8 *0'75H2°:lle: : Laskettu (%) : C, 60,44; H, 6,68; N, 9,40 ... Saatu (%) : C, 60,63; H, 6,54; N, 9,43.

65 87794

Seuraavat yhdisteet voidaan syntetisoida kuten edellä olevissa esimerkeissä.

( 2S, 3aS, 7aS ) -1- [N2- ( 4-hydroksifenyylietoksikar-bonyyli)-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli]oktahydro-lH-in-5 doli-2-karboksyylihappo (kuten esimerkissä 21).

1-{N2-[(5-hydroksipyridin-2-yyli)metoksikarbon-yyli]-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyl}indoliini-2(S)-kar-boksyylihappo (kuten esimerkissä 33).

1- (N2-[(5-metoksipyridin-2-yyli)metoksikarbonyy-10 li]-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli}indoliini-2( S)-karbok-syylihappo (kuten esimerkissä 33) .

( 2S, 3aS, 7aS ) -1- (N2- [ ( 3-klooripyridin-2-yyli )me-toksikarbonyyli]-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli}oktahyd-ro-lH-indoli-2-karboksyylihappo (kuten esimerkissä 22). 15 (2S,3aS,7aS )-l-{N2-[ ( 3-metyylipyridin-2-yyli )- metoksikarbonyyli]-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli}okta-hydro-lH-indoli-2-karboksyylihappo (kuten esimerkissä 22).

( 2S, 3aS, 7aS )-l - [N2- ( syklopentyylikarbonyyli )-L-20 lysyyli-gamma-D-glutamyyli]oktahydro-1H-indoli-2-kar-boksyylihappo (kuten esimerkissä 17).

( 2S, 3aS, 7aS )-l - [N2-( 4-isopropyylibentsyylioksi-karbonyyli)-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli]oktahydro-lH-indoli-2-karboksyylihappo (kuten esimerkissä 46).

25 1- [N2-(4-dimetyyliaminobentsoyyli)-L-lysyyli- gamma-D-glutamyyli] indoli-2( S )-karboksyylihappo (kuten esimerkissä 46).

. ( 2S, 3aS, 7aS)-l-(N2-[( 2-metyylipyridin-5-yyli )- : karbonyyli]-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli}oktahydro-lH- 30 indoli-2-karboksyylihappo (kuten esimerkissä 14).

( 2S, 3aS, 7aS )-l-{N2-[ ( 2-hydroksipyridin-5-yyli )-karbonyyli]-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli}oktahydro-lH-indoli-2-karboksyylihappo (kuten esimerkissä 14).

- ‘ (2S,3aS,7aS)-l-{N2-[ (2-pyrrolidinyylipyridin-5- 35 yyli)karbonyyli]-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli}oktahyd- 66 87794 ro-lH-indoli-2-karboksyylihappo (kuten esimerkissä 14).

( 2S, 3aS, 7aS )-l-{N2- [ ( 2-morfolinyylipyridin-5-yy-li)karbonyyli]-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli}oktahydro-lH-indoli-2-karboksyylihappo (kuten esimerkissä 14).

5 ( 2S, 3aS, 7aS )-l-{N2- [ ( 2-dimetyyliaminopyridin-5- yyli)karbonyyl i-L-lysyyli-gamma-D-glutamyyli}oktahyd-ro-lH-indoli-2-karboksyylihappo (kuten esimerkissä 14).

Claims (10)

67 87754

1. Menetelmä tripeptidijohdannaisen valmistamiseksi, jolla on kaava (I) 5 T- { CHi )--NH: CH: COORj ^ ^ Ri —W—CO—NH-CH-CO-NH—CH ( CH* )2 -CO-Rj jossa

10 R3 on Ci.^-alkyyliryhmä, C4_7-sykloalkyyli- tai C5_ 7-sykloalkyyli-alempi alkyyliryhmä, fenyyli- tai fenyy-li-alempi alkyyliryhmä, joissa bentseenirengas voi mahdollisesti olla substituoitu 1-4 substituentilla joukosta halogeeni, alempi alkyyli, alempi alkoksi, fe-15 nyyli, metyleenidioksi, etyleenidioksi, amino, di(alempi alkyyli)amino ja hydroksi, naftyyli- tai naftyyli-alempi alkyyliryhmä, joissa naftaleenirengas voi mahdollisesti olla substituoitu 1-3 substituentilla joukosta halogeeni, alempi alkyyli, alempi alkoksi ja hyd-20 roksi, heterosyklinen ryhmä tai heterosykli-alempi alkyyliryhmä, joissa heterosyklinen ryhmä on tyydyttynyt tai tyydyttymätön 5- tai 6-jäseninen rengas, joka sisältää 1-3 heteroatomia joukosta typpi, happi ja rikki ja voi mahdollisesti olla substituoitu 1-3 substi-25 tuentilla joukosta halogeeni, alempi alkyyli, alempi alkoksi, amino, di(alempi alkyyli)amino, hydroksi, okso ja tyydyttynyt 5- tai 6- jäseninen typpeä sisältävä heterosyklinen ryhmä, ja voi edelleen olla fuusioitunut bentseenirenkaaseen, tai imidatsolyylivinyyliryhmä;

30 R2 on vetyatomi, C^Q-alkyyliryhmä tai bentsyyli- ryhmä; R3 on 2(S)-karboksi-indolin-l-yyli- tai 2-kar-boksi(2S,3aS,7aS)oktahydroindol-l-yyliryhmä; W on yksinkertainen sidos tai -0-; 68 3 7 794 T on yksinkertainen sidos, -S- tai -S-; ja 0 m on 2 tai 3; 5 edellyttäen, että emäksisen aminohappo-osan a-hii- lellä on L-konfiguraatio ja glutamiinihappo-osan a-hii-lellä on D-konfiguraatio, ja sen suolojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että (a) yhdiste, jolla on seuraava kaava 10 T— (CHi )m -NH-Rj YH* (II) Rt-W-CO-NH-CH-COOH jossa

15 Rx, W, T, m ja emäksisen aminohappo-osan a-hiilen konfiguraatio ovat edellä määritellyt ja R5 on vetyatomi tai aminon suojaryhmä, tai sen karboksyyliryhmän osalta reaktiivinen johdannainen saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on seuraava kaava 20 C\00Ri . (m) Hj N-CH- (CH* ) 2 -C0-Ri jossa R2 ja glutamiinihappo-osan a-hiilen konfiguraatio 25 ovat edellä määritellyt ja R3' on R3 tai esteröity R3, joka on ryhmä, jossa on R3:n 2-asemassa karboksyyliryhmän sijasta C1.5-alkoksikarbonyyli- tai bentsyylioksikarbonyy-liryhmä, tai sen happoadditiosuolan kanssa, tai (b) yhdiste, jolla on seuraava kaava 30 Rj-W-COOH (IV) jossa Rj ja W ovat edellä määritellyt, tai sen karbok- - 35 syyliryhmän osalta reaktiivinen johdannainen saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on seuraava kaava „„ 8 7 794 T-(CHj )·κ -NH-Ri CH: COORs (V) Hj N-CH-CO-NH-CH-(CHi h -CO-Rj ' 5 jossa Κ3'< R5r T, m ja emäksisen aminohappo-osan ja glutamiinihappo-osan α-hiilien konfiguraatiot ovat edellä määritellyt, tai sen happoadditiosuolan kanssa, tai (c) yhdiste, jolla on seuraava kaava 10 T-(CH, ). -NH-Ri CH, C00R, (VI) R, -W-C0-NH-CH-C0-NH-CH-(CH, ), -COOH jossa

15 Rj, R2, R5, T, W, m ja emäksisen aminohappo-osan ja glutamiinihappo-osan α-hiilien konfiguraatiot ovat edellä määritellyt, tai sen karboksyyliryhmän osalta reaktiivinen johdannainen tai sen molekyylinsisäinen anhydridi saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on seuraava 20 kaava R3'-H (VII) jossa

25 Rj' on edellä määritelty, tai sen happoadditiosuo lan kanssa, ja tarvittaessa poistetaan saadussa yhdisteessä mahdollisesti oleva suojaryhmä ja/tai muutetaan saatu yhdiste suolaksi.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 30 tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jossa R2 on vetyatomi ja T on yksinkertainen sidos.

3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jossa W on yksinkertainen sidos, Rj on C4_7-sykloalkyyliryhmä, : 35 fenyyliryhmä, joka voi olla substituoitu 1-3 substi- 70 8 7 7 9 4 tuentilla joukosta fluori, kloori, C^-alkyyli, C^-al-koksi, fenyyli, amino ja hydroksi, naftyyliryhmä, joka voi olla substituoitu hydroksilla, pyridyyliryhmä, joka voi olla substituoitu substituentilla joukosta fluori, 5 kloori, C^-alkoksi ja hydroksi, 2-indolinyyli-, 2-pyrro-lidinyyli-, 2-pyratsinyyli-, 2-furyyli-, 2-tienyyli-, 3-kinolyyli-, 1-isokinolyyli-, 2-kinoksalinyyli-, 2-pyrro-lidon-5-yyli- tai tianaften-2-yyliryhmä tai 4-imidatso-lyylivinyyliryhmä.

4. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jossa W on -O- ja R3 on Cj.^-alkyyliryhmä, C4_7-sykloalkyyliryh-mä, C5.7-sykloalkyyli-C1.2-alkyyliryhmä, fenyyliryhmä, fe-nyyli-C1.2-alkyyliryhmä, jossa bentseenirengas voi olla 15 substituoitu substituentilla joukosta fluori, kloori, C1.3-alkyyli , Cj.j-alkoksi , fenyyli ja metyleenidioksi, naftyyli-Cj^-alkyyliryhmä, pyridyyli-Cw-alkyyliryhmä tai morfolino-Cj^-alkyyliryhmä.

5. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, 20 tunnettu siitä, että valmistetaan tripeptidijohdannainen, jolla on seuraava kaava (CH* )™ -NH* ΓΗ u-n R, , -W1-CO-NH-CH-CO-NH-CH ( CHi )*-CO-R» 25 jossa R11-W' on C4.7-sykloalkyyli-, C4.7-sykloalkyylioksi-, sykloheksyylimetyylioksi- tai sykloheksyylietyylioksiryh-mä, fenyyliryhmä, joka voi olla substituoitu Cj.j-alkok-30 silla, fluorilla, kloorilla tai hydroksilla, bentsyyliok-si- tai fenetyylioksiryhmä, jonka bentseenirengas voi olla substituoitu Cj.j-alkoksilla, metyleenidioksilla tai hydroksilla, pyridyyliryhmä, joka voi olla substituoitu 2- tai 6-asemassa fluorilla, kloorilla, Cj.j-alkoksilla, 35 metyylillä tai dimetyyliaminolla, pyridyylimetyylioksi- V1 87794 tai pyridyylietyylioksiryhmä, jonka pyridiinirengas voi olla substituoitu 3- tai 6-asemassa metoksilla tai hyd-roksilla, 2-indolinyyli-, 2-pyrrolidinyyli-, 2-pyratsi-nyyli-, 2-furyyli-, 2-tienyyli- tai 3-kinolyyliryhmä tai 5 4-imidatsolyylivinyyliryhmä; R3 on 2(S)-karboksi-indolin-l-yyli- tai 2-karbok-si-(2S,3aS,7aS)-oktahydroindol-l-yyliryhmä; ja m on 2 tai 3; edellyttäen, että emäksisen aminohappo-osan α-hiilellä on L-konfiguraatio ja glutamiini-10 happo-osan α-hiilellä on D-konfiguraatio, tai sen suola.

6. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan tripeptidijoh- dannainen, jolla on seuraava kaava 15 (CH*)j-NHi CH* COOH (I_2) Rl , -W"-C0-NH-CH-C0-NH-CH(CH* )*-CO-R* jossa R12-W" on syklobutyyli-, syklopentyyli-, syklobu-20 tyylioksi- tai syklopentyylioksiryhmä, fenyyliryhmä, joka voi olla substituoitu 2- tai 4-asemassa C^j-alkoksilla tai hydroksilla, fenetyylioksiryhmä, jonka bentseeniren-gas voi olla substituoitu 4-asemassa hydroksilla, tai py-ridyyliryhmä, joka voi olla substituoitu 2- tai 6-asemas-25 sa kloorilla tai C^-alkoksilla; ja ·.·' R3 on 2( S )-karboksi-indolin-l-yyli- tai 2-karbok- ·-- si-( 2S, 3aS, 7aS )-oktahydroindol-l~yyliryhmä; edellyttäen, että lysiiniosan α-hiilellä on L-konfiguraatio ja gluta-miinihappo-osan α-hiilellä on D-konfiguraatio, tai sen 30 suola.

7. Minkä tahansa patenttivaatimuksista 3-5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jossa m on 3.

8. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelmä, 35 tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jossa 72 8 7 7 9 4 R12-W" on 2- tai 4-hydroksi- tai 2- tai 4-C1_,-alkoksisub-tituoitu fenyyliryhmä tai pyridyyliryhmä .

9. Patenttivaatimuksen 8 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan (2S,3aS,7aS)- 5 1 -( N2-nikotinoyyli-L-lysyyli- ^-D-glutamyyli)oktahydro-lH- indoli-2-karboksyylihappo tai sen suola.

10. Patenttivaatimuksen 8 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan (2S,3aS,7aS)-1- [N2- ( 4-hydroksibentsoyyli ) -L-lysyyli-}h-D-glutamyyli]ok- 10 tahydro-lH-indoli-2-karboksyylihappo tai sen suola. 73 8 7 7 9 4