DK171402B1 - Tripeptidderivater, fremgangsmåde til deres fremstilling og farmaceutiske præparater deraf, især et antihypertensivt middel - Google Patents

Description

DK 171402 B1

Den foreliggende opfindelse angår tripeptidderivater, fremgangsmåder til deres fremstilling og farmaceutiske præparater deraf, især et antihypertensivt middel.

Den foreliggende opfindelse angår nærmere bestemt 5 tripeptidderivater med den almene formel TMCH0f—NH0 i 2 m 2 ch2 COOR2 10 R^-W-CO-NH-CH-CO-NH-CH-fCHj·)-^—CO-F? hvori 15 R1 betyder en C^ig-alkylgruppe, en C4_7-cycloalkyl- eller C5_7-cycloalkyl-lavere alkylgruppe, en phenyl- eller phenyl -lavere alkylgruppe, hvori benzenringen eventuelt kan være substitueret med 1-4 substituenter valgt blandt halogen, lavere alkyl, lavere alkoxy, phenyl, methylendioxy, ethylen-20 dioxy, amino, di-(lavere alkyl)-amino og hydroxy, en naphthyl- eller naphthyl-lavere alkylgruppe, hvori naphthalenrin-gen eventuelt kan være substitueret med 1-3 substituenter valgt blandt halogen, lavere alkyl, lavere alkoxy og hydroxy, en heterocyclisk eller heterocyclisk-lavere alkylgruppe, 25 hvori den heterocycliske gruppe er en mættet eller umættet 5- eller 6-leddet ring indeholdende 1-3 heteroatomer valgt blandt nitrogen-, oxygen- eller svovlatomer, og eventuelt kan være substitueret med 1-3 substituenter valgt blandt halogen, lavere alkyl, lavere alkoxy, amino, di-(lavere 30 alkyl)-amino, hydroxy, oxo og en mættet 5- eller 6-leddet nitrogenholdig heterocyclisk gruppe, og yderligere eventuelt kan være kondenseret til en benzenring, eller en imidazolyl-vinylgruppe; R2 betyder et hydrogenatom, en C^^g-alkylgruppe eller en benzylgruppe, R3 betyder en 2(S)-carboxy-indolin-1-35 yl- eller 2-carboxy-(2S,3aS,7aS)-octahydroindol-1-yl-gruppe, W betyder en enkeltbinding eller -O-, 2 DK 171402 B1 T betyder en enkeltbinding, -S- eller -S-, og 0 m er 2 eller 3, forudsat, at Q!-carbonatoinet i den basiske 5 aminosyredel har L-konfiguration, medens α-carbonatornet i glutaminsyredelen har D-konfiguration, eller salte deraf med syrer eller baser.

Som forbindelser, der strukturelt ligner tripeptid- derivaterne med formlen I ovenfor, beskriver G.M. Ksander 10 et al. 1-(L-lysyl-gamma-D-glutamyl)-indolin-2(S)-carboxyl- 0 fi syre og 1-(N ,N -dibenzyloxycarbonyl-L-lysyl-gamma-D-gluta-myl) -indolin-2 (S) -carboxylsyre som inhibitorer af angio-tensin-omdannende enzym (ACE) (Journal of Medicinal Chemistry, 1985, vol. 28, No. 11, pp. 1606-1611). Denne publi-15 kation anfører, at disse kendte forbindelser viser in vitro-inhibering af ACE. Egne undersøgelser har imidlertid vist, at disse forbindelser i et in vivo-forsøg med rotter ikke viser nogen væsentlig antihypertensiv virkning efter oral indgivelse.

20 Tripeptidderivaterne med formlen I tilvejebragt ifølge opfindelsen er hidtil ukendte forbindelser, som er strukturelt forskellige fra de ovennævnte kendte forbindelser 2 ved, at aminogruppen ved N -stillingen af den basiske amino-syfedel er mono-substitueret med en specifik substituent, 25 og aminogruppen ved sidekæden er usubstitueret. Desuden er det ganske uventet ud fra de ovennævnte kendte forbindelser, at tripeptidderivaterne med formlen I eller salte deraf tilvejebragt ifølge den foreliggende opfindelse ikke kun har ACE-inhiberende virkning men også fremragende anti-30 hypertensiv virkning ved oral anvendelse i modsætning til de kendte forbindelser. Følgelig kan tripeptidderivaterne med formlen I og salte deraf i overensstemmelse med den foreliggende opfindelse anvendes som lægemidler, især antihypertensive midler.

35 0 3 DK 171402 B1

Udtrykket "lavere", som er anvendt i den foreliggende beskrivelse og i kravene til betegnelse af en gruppe eller en forbindelse, betyder, at den nævnte gruppe eller forbindelse ikke har mere end 5, fortrinsvis ikke mere end 3 5 carbonatomer.

Alkylgruppen kan være ligekædet eller forgrenet. "C^-^g-Alkylgruppen" omfatter methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, sek.butyl, tert.butyl, isobutyl, n-hexyl, n-octyl og n-decyl. Methyl og ethyl foretrækkes som den 10 "lavere alkylgruppe". Eksempler på den "lavere alkoxygrup-pe" omfatter methoxy, ethoxy, tert.butoxy og n-pentyloxy.

"C4_y-Cycloalkylgruppen" omfatter cyclobutyl, cyclo-pentyl, cyclohexyl og cycloheptyl. Eksempler på en -cycloalkyl-lavere alkylgruppe" er cyclopentylmethyl, cyclo-15 hexylmethyl, cyclohexylethyl og cycloheptylmethyl.

"Halogen" omfatter fluor, chlor, brom og iod, og chlor og fluor foretrækkes. Specifikke eksempler på "di-(lavere alkyl)amino" er dimethylamino, diethylamino og me-thylethylamino.

20 Eksempler på en "phenyl-lavere alkylgruppe" er benzyl og phenethyl. Benzenringen i "phenyl"- og "phenyl-lavere alkyl"-grupperne kan eventuelt være substitueret med 1-4, fortrinsvis 1-3 substituenter valgt blandt halogen, lavere alkyl, lavere alkoxy, phenyl, methylendioxy, ethylendioxy, 25 amino, di(lavere alkyl)amino og hydroxy. Eksempler på substituerede phenyl- og phenyl-lavere alkylgrupper omfatter 4-chlorphenyl, 4-fluorphenyl, 4-methylphenyl, 2-methyl-phenyl, 4-isopropylphenyl, 2-methyl-6-hydroxyphenyl, 2--methoxyphenyl, 4-methoxyphenyl, 3-methoxy-4-hydroxyphenyl, 30 3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl, 4-phenylphenyl, 3,4-ethylen- dioxyphenyl, 3-amino-4-hydroxyphenyl, 4-dimethylaminophe-nyl, 4-hydroxyphenyl, 2-hydroxyphenyl, 4-chlorbenzyl, 2--fluorbenzyl, 2-chlorbenzyl, 4-methylbenzyl, 2-methylben-zyl, 4-methoxyphenethyl, 4-phenylbenzyl, 3,4-methylendioxy-35 benzyl og 4-hydroxyphenethyl.

4 DK 171402 B1

Eksempler på en "naphthyl-lavere alkylgruppe" er α-naphthylmethyl og a-naphthylethyl, og naphthalenringen i "naphthylgruppen" og en "naphthyl-lavere alkylgruppe" kan eventuelt være substitueret med 1-3, fortrinsvis 1 5 eller 2 substituenter valgt blandt halogen, lavere alkyl, lavere alkoxy og hydroxy. Eksempler på de substituerede "naphthyl"- og "naphthyl-lavere alkyl"-grupper er 3-hy-droxynaphthalen-2-yl, 6-hydroxynaphthalen-2-yl, 3-methyl-naphthalen-1-yl-methyl og 6-methoxynaphthalen-l-yl-ethyl.

10 Eksempler på den "mættede eller umættede 5- eller 6- leddede heterocycliske gruppe indeholdende 1-3 heteroatomer valgt blandt nitrogen-, oxygen- eller svovlatomer" omfatter 2-furyl, 2-pyrrolidinyl, 3-pyridyl, 2-pyridyl, 4-pyridyl, 2-thienyl og 2-pyrazinyl. Eksempler på den "heterocycliske-15 lavere alkylgruppe" omfatter 2-pyridylethyl, 3-pyridylmethyl og morpholinoethyl.

Den heterocycliske ring i disse "heterocycliske" og "heterocycliske-lavere alkyl"-grupper kan eventuelt være substitueret med 1-3, fortrinsvis 1 eller 2 substituenter 20 valgt blandt halogen, lavere alkyl, lavere alkoxy, amino, di(lavere alkyl)amino, hydroxy, oxo og en mættet 5- eller 6-leddet nitrogenholdig heterocyclisk gruppe (eksempler på denne nitrogenholdige heterocycliske gruppe er 1-pyrroli-dinyl og morpholino). Eksempler på sådanne substituerede 25 heterocycliske eller heterocycliske-lavere alkylgrupper omfatter 2-chlorpyridin-5-yl, 2-chlorpyridin-3-yl, 2-me-thylpyridin-5-yl, 2-methoxypyridin-5-yl, 2-ethoxypyridin--5-yl, 2-n-propyloxypyridin-5-yl, 2-isopropoxypyridin-5--yl, 2-aminopyridin-5-yl, 2-dimethylaminopyridin-5-yl, 2-30 -hydroxypyridin-5-yl, 2-pyrrolidon-5-yl, 2-pyrrolidinyl-pyridin-5-yl, 2-morpholinopyridin-5-yl, 3-hydroxypyridin--2-ylmethyl, 3-methoxypyridin-2-ylmethyl, 2-chlorpyridin--6-ylmethyl og 2-methylpyridin-6-ylmethyl. En benzenring kan eventuelt være kondenseret til den ovennævnte hetero-35 cycliske gruppe. Eksempler på sådan en kondenseret ring er quinolin-3-yl, indolin-2-yl, thianaphthen-2-yl, quinoxa-lin-2-yl og isoquinolin-l-yl.

5 DK 171402 B1 I den almene formel I betyder T fortrinsvis en enkelt-binding, og R2 betyder fortrinsvis hydrogen.

En foretrukken gruppe af tripeptidderivaterne med formlen I tilvejebragt ifølge opfindelsen har den følgende 5 formel

, 2 m 2 ch2 C00H

R11-« ' -CO-NH-CH-CO-NH-CH4CH2^-CO-R3 (1-1) hvori 10 R^-W'- betyder en C4_7-cycloalkyl-, C4_7-cycloalkyloxy-, cyclohexylmethyloxy- eller cyclohexylethyloxygruppe, en phenylgruppe, som eventuelt kan være substitueret med 1-4 substituenter (fortrinsvis 1 substituent) valgt blandt lavere alkoxy, halogen og hydroxy, en benzyloxy- eller phen-15 ethyloxygruppe, hvori benzenringen eventuelt kan være substitueret med 1-4 substituenter (fortrinsvis 1 substituent) valgt blandt lavere alkoxy, methylendioxy og hydroxy, en pyridylgruppe, som eventuelt kan være substitueret, fortrinsvis ved 2- eller 6-stillingen, med en substituent 20 valgt blandt halogen, lavere alkoxy, methyl og dimethylamino, en pyridylmethyloxy- eller pyridylethyloxygruppe, hvori pyridinringen eventuelt kan være substitueret, fortrinsvis ved 3- eller 6-stillingen, med en substituent valgt blandt methoxy og hydroxy, en 2-indolinyl-, 2-pyrrolidinyl-, 2-25 -pyrazinyl-, 2-furyl-, 2-thienyl- eller 3-quinolylgruppe, eller en 4-imidazolylvinylgruppe, og R2, m og konfigurationerne ved a-carbonatomerne i den basiske aminosyredel og glutaminsyredelen har den samme betydning som ovenfor.

30 En mere foretrukken gruppe af tripeptidderivaterne med formlen I tilvejebragt ifølge opfindelsen har den følgende formel <CH2*3-NH2 35 CH2 cooh R12-W"-CO-NH-CH-CO-NH-CH4CH24-^-CO-R3 (1-2) 6 DK 171402 B1 hvori 12 R -W"- betyder en cyclobutyl-, cyclopentyl-, cyclobutyl-oxy- eller cyclopentyloxygruppe, en phenylgruppe, som eventuelt kan være substitueret ved 2- eller 4-stillingen med 5 en substituent valgt blandt lavere alkoxy (især methoxy) og hydroxy, en phenethyloxygruppe, som eventuelt kan være substitueret med hydroxy ved 4-stillingen af benzenringen, eller en pyridylgruppe, som eventuelt kan være substitueret, fortrinsvis ved 2- eller 6-stillingen, med halogen (fortrin-10 vis chlor) eller lavere alkoxy, og og konfigurationerne ved α-carbonatomerne i lysindelen og glutaminsyredelen har den samme betydning som ovenfor.

Tripeptidderivaterne med formlen I ifølge opfindelsen har en aminogruppe og mindst én carboxylgruppe. Følgelig 15 danner de salte med forskellige syrer, f.eks. uorganiske syrer, såsom saltsyre og svovlsyre, og organiske syrer, såsom trifluoreddikesyre og eddikesyre, eller kan eksistere i form af salte, såsom natrium-, kalium-, calcium- og ammoniumsalte eller basiske aminosyresalte. Farmaceutisk accep-20 table salte foretrækkes.

Tripeptidderivaterne med formlen I ifølge opfindelsen kan også eksistere i form af hydrater eller solvater, såsom et solvat med dioxan, og det bør forstås, at tripeptidderivaterne ifølge opfindelsen også omfatter sådanne hydrater 25 og solvater.

De følgende forbindelser er særligt foretrukne blandt tripeptidderivaterne med formlen I.

2 1-[N -cyclobutylcarbonyl-L-lysyl-gamma-D-glutamyl]- -indolin-2(S)-carboxylsyre, o 30 (2S,3aS,7aS)-l-[N -cyclobutylcarbonyl-L-lysyl-gamma- -D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre, 2 (2S,3aS,7aS)-1-[N -cyclopentylcarbonyl-L-lysyl-gamma- -D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre, 2 1-[N -cyclobutyloxycarbonyl-L-lysyl-gamma-D-gluta-35 myl]-indolin-2(S)-carboxylsyre, (2S,3aS,7aS)-1-[N^-cyclobutyloxycarbonyl-L-lysyl- 0 7 DK 171402 B1 -gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre, 2 1-[N -cyclopentyloxycarbonyl-L-lysyl-gamma-D-gluta- myl]-indolin-2(S)-carboxylsyre, 2 (2S,3aS,7aS)-l-[N -cyclopentyloxycarbonyl-L-lysyl- 5 -gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre, 2 1-[N -benzoyl-L-lysyl-gamma-D-glutamyl]-indolin--2 (S)-carboxylsyre, 2 (2S,3aS,7aS)-1-[N -benzoy1-L-lysyl-gamma-D-gluta- myl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre, 2 ΊΟ (2S,3aS,7aS)-l-[N -(2-methoxybenzoyl)-L-lysyl-gamma- -D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre, 2 (2S,3aS,7aS)-1-[N -(4-hydroxybenzoyl)-L-lysyl-gamma- -D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre, 2 1-[N -phenethyloxycarbonyl)-L-lysyl-gamma-D-gluta-15 myl]-indolin-2(S)-carboxylsyre, (2S,3aS,7aS)-1-[N2-(phenethyloxycarbonyl)-L-lysyl--gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre, (2S,3aS,7aS)-1-[N2-(4-hydroxyphenethyloxycarbonyl)--L-lysyΙ-gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxyl-20 syre, 2 1-[N -nicotinoyl-L-lysyl-gamma-D-glutamyl]-indolin--2 (S)-carboxylsyre, 2 (2S,3aS,7aS)-1-[N -nicotinoyl-L-lysyl-gamma-D-gluta- myl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre, 2 25 (2S,3aS,7aS)-1- [N -nicotinoyl-L-lysyl-gamma-D-gluta- myl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre-mononatriumsalt, 2 (2S,3aS,7aS)-l-[N -isonicotinoyl-L-lysyl-gamma-D- -glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre, 2 (2S,3aS,7aS)-1-[N -(pyridin-2-carbonyl)-L-lysyl- 30 -gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre, (2S,3aS,7aS)-1-[N2-(6-chlornicotinoyl)-L-lysyl- -gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre, 2 (2S,3aS,7aS)-1-[N -(6-methoxynicotinoyl)-L-lysyl- -gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre, 35 (2S,3aS,7aS)-1-[N2-(6-ethoxynicotinoyl)-L-lysyl- -gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre, 2 (2S,3aS,7aS)-1-[N -(6-n-propyloxynicotinoyl)-L- 8 DK 171402 B1 -lysyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-IH-indol-2-carboxylsyre, (2S,3aS,7aS)-1-[N2-(6-isopropyloxynicotinoyl)-L-lysyl -gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre.

Foretrukne blandt tripeptidderivaterne med formlen 5 (1-2) er dem, hvori R^-2-W"- betyder en phenylgruppe sub stitueret med hydroxy eller Ci_3-alkoxy ved 2- eller 4-stil-lingen. De derivater, hvori R12-W"- betyder 4-hydroxyphenyl er mere foretrukne, og (2S,3aS,7aS)-1-[N2-(4-hydroxybenzo-yl)-L-lysyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxyl-10 syre og (2S,3aS,7aS)-1-[N2-nicotinoyl-L-lysyl-gamma-D-glut-amyl] -octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre er mest foretrukne.

Opfindelsen angår også en fremgangsmåde til fremstilling af et tripeptidderivat ifølge opfindelsen, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved 15 (a) omsætning af en forbindelse med den almene formel NH-R5 • 2 m CH2 F1-W-C0-NH-CH-C00H (II) 20 hvori R1, W, T, m og konfigurationen ved α-carbonatomet i den basiske aminosyredel har den ovennævnte betydning, og R^ 25 betyder et hydrogenatom eller en aminobeskyttelsesgruppe, eller et reaktivt derivat deraf ved carboxylgruppen med en forbindelse med den almene formel COOR2 30 H2N-CH4CH2>yCO-R3 (III) hvori R2, R2 og konfigurationen ved α-carbonatomet i gluta-minsyredelen har den ovennævnte betydning, 35 eller et syreadditionssalt deraf, eller (b) omsætning af en forbindelse med den almene formel R1-W-COOH (IV) 9 DK 171402 B1 hvori R1 og W har den ovennævnte betydning, eller et reaktivt derivat deraf ved carboxylgruppen med en forbindelse med den almene formel c T4CH-·)——-NH-R5 b , 2 m „ ch2 COOR^ h2n-ch-co-nh-ch4ch2^2-co-r3 (V) hvori R2, R3, R5, T, m og konfigurationerne ved a-carbonato-10 merne i den basiske aminosyredel og glutaminsyredelen har den ovennævnte betydning, eller et syreadditionssalt deraf eller (c) omsætning af en forbindelse med den almene formel 15 ΉΟΗ,,^-ΝΗ-Η5 . 2 m 2

ch2 COOR

R1-W-CO-NH-CH-CO-NH-CH4CH2^2-COOH (VI) hvori R1, R2, R5, T, W, m og konfigurationerne ved a-car-20 bonatomerne i den basiske aminosyredel og glutaminsyredelen har den ovennævnte betydning, eller et reaktivt derivat deraf ved carboxylgruppen eller et intramolekylært anhydrid deraf, med en forbindelse med den almene formel 25 R3-H (VII) hvori R3 har den ovennævnte betydning, eller et syreadditionssalt deraf, og, om nødvendigt, fjernelse af beskyttelsesgruppen, som 30 kan forekomme i den dannede forbindelse, og/eller omdannelse af forbindelsen til et salt.

Reaktionerne anvendt ved fremgangsmådevarianterne (a), (b) og (c) er peptideringsreaktioner og kan udføres ved gængse metoder anvendt ved syntese af peptider (se 35 f.eks. Methoden der Organischen Chemie (udgivet af Houben-Weyl), vol. 15, Part I, Part II (1974)). Når carboxylsyre-forbindelserne med formlen II, IV og VI omsættes i fri carboxylsyreform med aminforbindelserne med formlen III, 10 DK 171402 B1 o V hhv. VII, udføres reaktionerne passende i nærværelse af et kondensationsmiddel, såsom N,N-dicyclohexylcarbodiimid, l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)-carbodiimid-hydrochlorid, carbonyldiimidazol, diphenylphosphorylazid eller diethyl-5 cyanophosphat. Når der anvendes et carbodiimid som kondensationsmiddel, kan f.eks. 1-hydroxybenzotriazol, N--hydroxysuccinimid eller N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dicar-boximid sættes til reaktionssystemet til inhibering af racemisering.

10 I stedet for anvendelse af sådan et kondensations- middel kan forbindelserne med formlen II, IV og VI omsættes i form af deres reaktive derivater ved carboxyl-gruppen med aminforbindelserne med formlen III, V og VII. Eksempler på de reaktive derivater af forbindelserne 15 med formlen II, IV og VI er syrehalogenider, syreazider, blandede syreanhydrider, aktive estere og aktive amider.

Reaktionerne ved fremgangsmådevarianterne (a), (b) og (c) udføres sædvanligvis i et opløsningsmiddel ved en temperatur på -40 til +40°C. Et eksempel på et anvendeligt 20 opløsningsmiddel er tetrahydrofuran, dioxan, chloroform, methylenchlorid, ethylacetat, acetone, methylethylketon, dimethylformamid, acetonitril, ethanol, methanol eller vand. Sådant et opløsningsmiddel kan anvendes alene eller i kombination. Når en syre forekommer som et biprodukt, 25 eller forbindelserne med formlen III, V og VII er syreadditionssalte, eller forbindelserne med formlen III, V og VII har en fri carboxylgruppe, gennemføres reaktionen fortrinsvis i nærværelse af en base som en syreacceptor. Et eksempel på en anvendelig base er et alkalimetalhydroxid, 30 såsom natriumhydroxid eller kaliumhydroxid, et alkali- metalcarbonat eller -hydrogencarbonat, såsom natriumhydro-gencarbonat, natriumcarbonat eller kaliumcarbonat, eller en organisk base, såsom triethylamin, N-methylmorpholin, dicyclohexylamin, pyridin eller 4-dimethylaminopyridin.

35 I de ovennævnte reaktioner kan der anvendes udgangs forbindelser, i hvilke aminogruppen eller carboxylgruppen er beskyttet, som det sædvanligvis er tilfældet ved peptid- 11 DK 171402 B1 syntese. Der kan anvendes alle beskyttelsesgrupper, som er kendte inden for peptidsynteseområdet til beskyttelse af atnino- eller carboxylgruppen, men de bør fortrinsvis vælges i overensstemmelse med formålet (se Methoden der Organischen 5 Chemie nævnt ovenfor). Benzyloxycarbonyl, tert.butoxycarbonyl og 3-nitro-2-pyridinsulfenyl kan nævnes som eksempler på aminobeskyttelsesgruppen R5. Efter reaktionen kan beskyttelsesgrupperne fjernes på en gængs måde. F.eks. kan lavere alkylestere og aralkylestere som beskyttelsesgrupper for 10 carboxylgruppen fjernes ved hydrolyse under anvendelse af fortyndede baser, f.eks. 1~2N NaOH eller KOH. En benzyloxy-carbonylgruppe eller benzylgruppen af en benzylester kan hensigtsmæssigt fjernes ved katalytisk reduktion i nærværelse af palladium-carbon eller ved katalytisk transfer-hydrogene-15 ring under anvendelse palladium-carbon/ammoniumformiat eller palladium-carbon/cyclohexen eller ved indvirkning af HBr/ed-dikesyre. En tert.butoxycarbonylgruppe eller tert.butoxygrup-pen af en tert.butoxyester kan fjernes ved indvirkning af en stærk syre, såsom trifluoreddikesyre, ved stuetemperatur 20 eller under isafkøling.

Tripeptidderivaterne med formlen I ifølge opfindelsen fremstillet som ovenfor beskrevet kan, hvis det er nødvendigt, omdannes til de ovenfor eksemplificerede salte på en gængs måde.

25 Tripeptidderivaterne med formlen I eller salte der af, som fremstillet ovenfor, kan isoleres og renses ved en kendt metode, såsom ekstraktion, koncentrering, neutralisering, filtrering, omkrystallisation, søjlechromatograf i, højtryksvæskechromatografi eller en ionbytter-30 harpiks i egnet kombination.

Tripeptidderivaterne med formlen I eller salte deraf ifølge opfindelsen har fremragende farmakologiske virkninger, især antihypertensiv virkning, og er anvendelige som midler til forebyggelse og behandling af cardiovasku-35 lære sygdomme, såsom hypertension og kongestiv hjertelammelse .

12 DK 171402 B1

Opfindelsen angår derfor endvidere et antihypertensivt middel, som er ejendommeligt ved, at det omfatter et tripep-tidderivat med formlen I eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf ifølge opfindelsen, samt endelig også et far-5 maceutisk præparat, som er ejendommeligt ved, at det omfatter et tripeptidderivat med formlen I eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf ifølge opfindelsen og et farmaceutisk acceptabelt bæremateriale eller fortyndingsmiddel.

Den fremragende antihypertensive virkning af tripep-10 tidderivaterne med formlen I eller salte deraf ifølge den foreliggende opfindelse kan påvises ved det følgende in vivo-forsøg for antihypertentiv virkning under anvendelse af renalt hypertensive rotter. Resultaterne af et in vitro-forsøg for ACE-inhiberende virkning er også vist nedenfor.

15

Antlhypertensiv virkning

Sprague Dawley hanrotter {5 uger gamle) underkastes konstriktion af den venstre nyrearterie med en sølvklemme (indvendig diameter: 0,22 mm) under let etherbedøvelse.

20 Den højre nyre og nyrearterien lades intakte. Ca. 6-10 uger efter sammensnøring anvendes rotter, som viser et blodtryk over 180 mm Hg. Disse behandlede rotter betegnes renalt hypertensive "two-kidney"-Goldblatt-rotter og anses for en typisk model for renin-angiotensin-afhængig hyper-25 tension.

Blodtrykket måles ved en hale-manchet-metode under anvendelse af et programmeret elektro-sphygmomanometer ("PE-300", Narco Biosystem, U.S.A.) efter opvarmning ved 38°C i 10 minutter i en varmekasse.

30 Forsøgsforbindelsernes antihypertensive virkning bedømmes efter en enkelt oral indgivelse til renalt hypertensive rotter (3-5 rotter pr. gruppe). Resultaterne er vist i tabel I.

35 0 13 DK 171402 B1

In vitro-ACE-inhiberende virkning

Forsøgsmediet indeholder et ACE-præparat (kaninlunge), syntetisk substrat (5 mM hippuryl-L-histidyl-L-leucin), 300 mM NaCl og 100 mM phosphatpuffer med en pH-værdi på 5 8,3. Det blandes til et endeligt volumen på 0,300 ml og inkuberes ved 37°C i 30 minutter i nærværelse eller fraværelse af forsøgsforbindelser. Efter at reaktionen er afsluttet ved tilsætning af 300 μΐ IN HC1, ekstraheres dannet hippursyre med 2 portioner ethylacetat. Efter afdamp-10 ning af ethylacetatet og tilsætning af destilleret vand bestemmes hippursyren ud fra dens absorbans ved 228 nm med et spektrofotometer ("Hitachi 100-41").

ACE-Inhiberingsgraden beregnes ud fra virkninger med og uden forsøgsforbindelser. IC^Q-Værdien (den molære kon-15 centration, som er nødvendig til 50%'s inhibering af ACE-virkning) fås ud fra en dosis-inhiberings-kurve. Resultaterne er vist i tabel I nedenfor.

20 25 1 35 0 -—----- 14 DK 171402 B1 <t3 tj1

I C C Α CTi CO <T\ CO CO

fi <U -H ... I » · · I

•Η μ C o O o o o o I ΦΛ tn 1-1 Ή -+ ·~1 Ή

W .Q P r i X X X X X

0 3 -hP VO ΓΟ 'T ro vo lo r-ι co cm ro 5 Ό

0 U

Ή — <U i—I

Λ tn-P*

K <4-1 QJ

•H <u to

IH 1—I

t n g n <u

fi Φ > ·—I LO 00 rH r-J

-H g *H ro rO CM CM CM

10 Μ Λί -H tn * III I

1U Ό >1+J Ό fin c &3 -P cn -h s

ro O

OS O

1 P

0 / V Γ0. ' T OS 2-cer c 15 ]<M I_/ " „ x" ©

m K U

<P O ·+" _____________

& CM O S

Π3 33 CJ-U

^ 2 I

1 * ε 2 -4· i (n 20 CMOOS 2 esc r 2 O CJ CM I -+-2 2 E-ι -U -U______ 2 ε ro ro ε c c 2______ i i tn

O -PC

U >—I -H

I <D T3 oc SE-· Λ! C = * = c

25 I C -H

Ή 0) -Q

OS______ o

CM

1 O CM , / 2 <M 2 30 I 2 cj i f>\ i—\ rH C_) w O 0 2 2 ‘ Φ> é6

fi (D

-H <u tn Λ Μ H r—( ΓΟ Tf 00 a\ P Η φ M O φ <4-1 fe t3 ri 1) 15 DK 171402 B1 o __ -H ® ? ? T ? ® r· m r* i I I I 1

d^.5^o O O O O O

*r-l C C O ^ ιΗ·Η Ή »H

^ SS s X X XX X X

au uo ·« “I °1 " Ί <* « <ί « 5 ---—i------ Ό

0 H

ι-H ^ (UH

Λ tn+JX a 4-i ω •H <U W £ 1—i ? >5 m ^ ro i- ^rm ή ^ io -5 £-h 7 7 7 ? 7 7 M Jii-H Oi * * 11 1 1

Ό >ι-Ρ Ό C ^ C fej -P <Ti -H

x sa nc § 8 §

S K° (—<L

15 " ΐ >->-· >- i © o ® -------- " ' "'

i—I

<v Λ 20 * oj ^OS a-ec c e g ro c cm ro = t __ -P C ιΗ ·Η 25 φ T3 E-< AICece E c C -H Ο Λ i 1 t 5 . b » Α- p- é ό 1 C Q) •H 0) t7> ΓΟ T LD l£>

·“ i—t i—I i—I .-I

i-l ι-H Ό. 0) •o ·-* O 4ΙΉΛ pH Ό ri 0) DK 171402 B1 0 16 -H tn? ^ °> θ' θ' co σ> χ! Φ c 1 * 11 1 1 G Ό -H .* © o o o o o -H d d O Ή ή <—(

I Si i) X X XX X X

W 1-1 dl U *rt 00 VO Ί" <—t (N

5 u (ϋ·Γ(Η k * ·“·“ <Λ>'-' l'" Ό ^in ' t Ι Ό 0 u <H —- (DH Λ 014J* ae g-ι φ •η φ ω ιυ οι g ^ φ d — φ > cm ρ~ σι cn σι co •η e-π 7 7 7 Τ 7 7 di ή tn · i li i i

Ό >i-d> T3 CM d ---- ti -P σι -H

+J_______ <ϋ cn æ as ae

-Ρ O O O

dl O O O

15 O O Up 3 1 5' ' & 6' Φ_______

EH

20

(N

(¾ tC ε r r = = £ Π s π r r r 25 i d

rH -H

Φ T) 9h ^ d * e = = =

d -H

Φ X!

O

I <N

o ^ 30 ^ aT1 l d ύ ! toj & Φ

(O) V

Φ rr 35------- G Φ •η Φ tn ρ- <σ, i—i cn rn «3*

Λ Wrl · ri CN<N CN CN

P H w O Φ m Ai

Pli Ό -Η φ DK 171402 B1 0 17 1 σ> σ> σ> oo σ> co oo <D c S ' 1 1 * 1 ' 1 c $ -5 .. ° o o o ° o o V SS S x xx x * * x W HUO * ® ® Ί 5 *° »n <-t CO <n

TI

0 P

I—I ^ <l)rH

x> &>+»*: ffi U-l Q)

-H O) W

10 ΪΓ.Ε mSoo ro vo o ^ 00 ro -5 i-S 7 77 7 77 7 P Λ5 -H &> 1 1 1 1 1 Ό ΪΡ-Ρ TI fip C tj +lfl\rl — ae 5 -P o o

ω O O

O 1z- c c I Z- s c s m w \£y

»H

<D----- Λ rt

20 H

<N

05 Ze=e=cc g meeeecc —

25 -PC

M ^C

C Ή (LI -Ω

O

CN

30 III

1 O O O ηα x I ό 6 J £ fe d 1 --------

C QJ

-Η <D m tor' 00 Ot o rH

•Q W * <N C\| CM <N CM ro ro MH & I»

O <U tw M fe TI -H (U

DK 171402 B1 0 18 I '—- •H tn S θ'» co co ΟΊ cn cr>

XJ Q) C I I I I I I

CO-H··. O O o o o o

•H C! C O Ή i—I —I Ή ·—I —I

I (DX in X X X X X X

Η μ ^ U i—f cn <—i cN m vo 5 U (1) -Η H ‘ * - - < X) > —- in rH »—i in ««i· ·π·

'O

0 M

H Q)rH

xi &ι+>* a ih <u

H 0) W

£ H

,n O' g H 0) 10 c ^ <u > -H i -h co r- η- ο σι r~

Μ Λ* -Η &l CN CN CN in CN CN

Ό >1+J sQ I · · 1 · I

CM c fe3 -i-i σι -η -r a a +> o o »o o o

IC w rj O

μ n I—[—i, £ e l>- I?-

•H

<u------- X2 f0 20 Eh

(N

a a e e c = c E CO c s e c c _______ _____ ———— 25 3 5 0) Ό

Fh XJCeccec

C -H

0) X! o 30 I ^

1 ό f to) ^ d- iI

@s s ^ 35 ------- i c a> -η <u tn X) co <—i · CN CO ·«!· io r-~ oo μΗ S #1 co co co «3· Tf

O (1)Ήϋ h Ό ·Η O

0 1 19 DK 171402 B1

Jj o σι o oo σι σι ί tu c S 1 ' 1 1 1

"2 -5 O O O O O O

c -H C C O -Η Ή rH Ή «Η -< 5 I 55 S X X X x x x W U M fj <* « « «» «» o u

rH ^ (DrH

Λ tn-PX „„ HJ HH Φ 10 -H 0)0) β «Η <7> g u <u -Se-^Ή w c* r~ **· oo Ιί * -5 o> 7 7 7 7 γ 7 Ό >i-P TS * 1 ' 1 1 ' GU G -P Ή 4-» , ----— . .......—--:-- S s as as

15 " O O O

u o o o ° Jt M -< : ' & ' $'£'' Λ Π3 ----- - — —

20 (H

«0 2

CN O -P

03 S c c s 5C C H as O <0 e u 25 ε mceces

i tn P G

rH iH

0) T3 H ,* G e e c e c G ·Ή O Λ 30 rH 0) i ^ ft« ^ <o> <i 35 '—' 1 C Q) _ •iHflJtT'®' 05 rH fT) LT) X) tn r—t · ^ m in io vo vo iH rH ·& 0) o cu hh

fo Π3 -H <U

0 20 DK 171402 B1 _ — •H 00 rj m ή oo o\ σι i σι

C Ό -H ··· I I I o I

-H C C O O O O Ή O

I (1)^; in ft I—I ft X ft W M HO X x x 00 x cUQJ-hh r~- ω σ> co<h 3 _q > < ** ^ *> “*

CM VO CO <H VO H

VO

- " ' — f—j

, I (N

Λ «> OM O Cn ft «-* OH S ° Λ Cn-P* M .

SU II ^ •wow ~ £ ft Mi 10 t n g M 0> _ Ch in C3 — <1) > ro ro ft g ft O <N ft * * - *· Μ ft t n ro ro ro ro <N ^7 “

Ό >i-P Ό I I I I 1 HJ

CMC C, T

63 -P σι ft 1-1 oo μ -11 - —-----· rsi Φ æ æ <n cn 31 '"i rt O O * * & 1-1 S o o i \ · o s y y r„ ri. . ri- λ i s i > i ~ j-( i—Γ g· s i 6 i h ® O i- -i -agSc

, \—f - u I

m itf Q W iH °(fl C

2----Si -m tf fto •3 i L tn c λ; 20 Fh ^ i O -η ω m ^ /} ft Ό U ft <1) >, ft ω >

r\I CM 10 £ U O rC

« ac c r 7 £ <” ω Ό c ft . 2 ^ ' -Hl G tn ft dl Ή <D c

0 1 O -H

----σ H W ft C

c o") e ε d >i -,*73 ·^

K ft d 0) 2 ^ M

----I OM J ? “ T? 25 i tn - λ >1 ’ri, 2 ft > pc ° ri b 2 13 q > t> ft -H >1 Π3 ft S ,° 5 > c., (DT3 c g O >1 5hD*ri.'r^* ^ ,V d CO (3 >1 X ' 'H Cntfld) c-H 7. -p xo _,ft Ό G to

tu X3 3 o λ ri ., c o rH

---- _, H n i°3 -H+Jqj tn >1(U _, ίίΐ > 1 no 0 > ri o -η i n Cl _ O (0 ft tn Λ I I CD—» CM Μ >. Ό 30 ^0Γ·23 μ0ηη

. g aT ft ^ Ό ft 'H

* , J—(° V w -o G > ^ > (3 d Λ <β> (o) * z3 :s .s s s / \ t-q ω ζτί fta> m 01 m r-\ «— U'-'d w Cd) 0 0 , >1 I ft 2 rj V -M ft \/ ft ω ft i c cu c Ή „c Η Ό · M to (]} 35 -----^^- <D C ^ O 0) . \ \ ft ft tn -η tn m \ \ -ρ Λ °o ro 0) 2 2 - Cl ft \ \ g 8 3 B S! a M ft tn «> «> ^ \ \ >ft->Qft 00>h^; \ \ ft cn n

CnO-HtU \\XKX

DK 171402 Bl 21 0

Toksicitet

Der anvendes hanmus af stammen STD-ddy, som vejer ca. 22 til 25 g. Forsøgsforbindelsernes orale LD^Q-værdier (eksempel 14 og 46) hos musene viser sig at være mere 5 end 3.000 mg pr. *g kropsvægt. Disse resultater viser, at toksiciteten af forbindelserne er meget svag.

De foregående forsøgsresultater viser, at tri-peptidderivaterne med formlen I og de farmaceutisk acceptable salte deraf udviser fremragende antihyperten-10 siv virkning med lang varighed og svag toksicitet og derfor kan anvendes som et lægemiddel til behandling af hypertension og kardiovaskulære sygdomme, såsom kongestiv hjertelammelse.

Metoden til indgivelse af tripeptidderivaterne med 15 formlen I ifølge den foreliggende opfindelse kan være oral, parenteral eller intrarectal, men fortrinsvis indgives de oralt. Dosis af tripeptidderivaterne med formlen I eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf varierer afhængigt af typen af sådan en antihypertensivt 2o virksom forbindelse, indgivelsesmetoden, patientens til stand, kropsvægt, alder osv. Dosisen er sædvanligvis på 0,001-5,0 mg pr. kg kropsvægt pr. dag, fortrinsvis 0,01- 3,0 mg pr. kg kropsvægt pr. dag. Da de aktive tripeptid-derivater med formlen I ifølge opfindelsen har en lang-25 varig virkning, er det tilstrækkeligt, at lægemidlet tages én eller to gange om dagen i de anførte totale doser.

Sædvanligvis indgives tripeptidderivatet med formlen I eller dets farmaceutisk acceptable salt til en 30 patient i form af et farmaceutisk præparat omfattende en terapeutisk virksom og ikke-toksisk mængde af sådan en forbindelse og et farmaceutisk acceptabeltbæremateriale eller fortyndingsmiddel. Det farmaceutiske præparat formuleres ved blanding af tripeptidderivatet med formlen I 35 eller dets farmaceutisk acceptable salt med et farmaceu tisk acceptabelt bæremateriale eller fortyndingsmiddel.

Egnede bærematerialer eller fortyndingsmidler er DK 171402 B1 0 22 dem, der sædvanligvis anvendes ved tilberedning af lægemidler, og som ikke reagerer med tripeptidderivaterne med formlen I eller saltene deraf. Specifikke eksempler på sådanne bærematerialer omfatter, lactose, stivelse, saccha- 5 rose, mikrokrystallinsk cellulose, natriumcarboxylmethyl-cellulose, calciumcarboxymethylcellulose, methylcellulose, gelatine, akacie, hydroxypropylcellulose, hydroxypropyl-methylcellulose, polyvinylpyrrolidon, let vandfri kiselsyre, magnesiumstearat, talkum, titandioxid, sorbitanfedt-10 syreestere, glycerider af mættede fedtsyrer, macrogol, pro-pylenglycol og vand. Det farmaceutiske præparat kan være i forskellige dosisformer, såsom tabletter, kapsler, granulater, fine granulater, pulvere, sirupper, stikpiller og injektioner, som formuleres på en gængs måde. Flydende 15 præparater kan være i en sådan form, at de kan opløses eller suspenderes i vand eller andre egnede bærematerialer lige før anvendelse. Tabletterne kan være overtrukne på kendt måde. Om ønsket, kan det farmaceutiske præprat indeholde smagsstoffer, aromastoffer, konserveringsmidler, puf-20 fere, salte til at gøre præparatet isotonisk osv.

Sædvanligvis kan det farmaceutiske præparat indeholde mindst 0,5%, fortrinsvis 1-60% af tripeptidderivatet med formlen I eller dets farmaceutisk acceptable salt som en aktiv bestanddel. Præparatet kan også indeholde andre 25 terapeutisk virksomme forbindelser, såsom et diuretisk middel, f.eks. hydrochlorthiazid, triamteren, spironolacton, furosemid osv.

I det sidstnævnte farmaceutiske præparat kan mængden af det anvendte diuretiske middel f.eks. være 25-50 mg 30 hydrochlorthiazid, 50-100 mg for triamteren, 50-100 mg for spironolacton og 10-160 mg for furosemid, hver pr. 5-10 mg af tripeptidderivatet med formlen I. De samme bærematerialer eller fortyndingsmidler som beskrevet ovenfor kan anvendes i dette præparat, og præparatet kan være i enhver af de oven-35 for beskrevne dosisformer.

Tripeptidderivatet med formlen I og det uretiske middel kan indgives til en patient i enhver af de ovenfor DK 171402 B1 0 23 beskrevne dosisformer.

De følgende eksempler illustrerer den foreliggende opfindelse mere specifikt. Det bør imidlertid forstås, at de ikke begrænser opfindelsens omfang.

5

Eksempel 1 2 1-(N -Benzyloxycarbonyl-L-lysyl-gamma-D-glutamyl)- -indolin-2(S)-carboxylsyre.

1,5 g ethyl-1-(01-ethyl-gamma-D-glutamyl)-indolin- 10 -2(S)-carboxylat (som vil blive omtalt som diester A), 2 6 1,97 g N -benzyloxycarbonyl-N -tert.butoxycarbonyl-L-lysin og 0,99 g l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)-carbodiimid--hydrochlorid (som vil blive omtalt som vandopløseligt carbodiimid-hydrochlorid) omsættes natten over ved stue-•15 temperatur i methylenchlorid under omrøring. Reaktionsblandingen vaskes med 5%'s vandig natriumhydrogencarbonat-opløsning og 10%'s citronsyre, tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til tørhed under formindsket tryk. Remanensen renses ved silicagelsøjlechromatografi (elue- 2o ringsmiddel: chloroform). Omkrystallisation fra n-hexan 2 efterfulgt af filtrering giver 2,7 g ethyl-1-(N -benzyl- oxycarbonyl-N^-tert.butoxycarbonyl-L-lysyl-O^-ethyl-gamma- -D-glutamyl)-indolin-2(S)-carboxylat. En portion (2,3 g) af dette produkt opløses i en blanding af dioxan og vand, 25 og der tilsættes 10 ml IN NaOH. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 1,5 timer. Reaktionsblandingen gøres sur med fortyndet saltsyre, fortyndes med vand og ekstraheres derpå med chloroform. Ekstrakten tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til tørhed under formindsket 30 tryk. Remanensen chromatograferes på en søjle (diameter: 2,5 cm og længde: 40 cm) af "CHP20P" (et produkt fra

Mitsubishi Chemical Co., Ltd., 75-150 pm) under anvendelse af acetonitril/vand (30%—^50% gradient) som et eluerings- middel. Fraktioner indeholdende det ønskede produkt op- 35 samles og koncentreres til tørhed under formindsket tryk.

Remanensen krystalliseres fra ether/n-hexan og opsamles 2 ved filtrering, hvorved fås 1,6 g 1-(N -benzyloxycarbonyl- DK 171402 B1 0 24 -N^-tert.butoxycarbonyl-L-lysyl-gairana-D-glutamyl)-indolin--2(S)-carboxylsyre, som har et smeltepunkt på 121-129°C (sønderdeling) .

20 ml Trifluoreddikesyre sættes til 1,1 g af dette 5 produkt under isafkøling, og blandingen omrøres i 15 minutter og koncentreres derpå til tørhed under formindsket tryk ved stuetemperatur. Remanensen renses ved søjlechro-matografi ("CHP20P"-søjle, 0%—} 60% acetonitril/vand--gradient). De ønskede fraktioner koncentreres under for- 10 mindsket tryk, og koncentreringen stoppes, når krystallerne begynder at udfælde. Remanensen afkøles, og de udfældede krystaller opsamles ved filtrering, hvorved fås 0,68 g af den ønskede forbindelse.

Smeltepunkt: 190-204°C (sønderdeling).

15 [a]^7: _78'5° (IN-NaOH)

Elementæranalyse for C2gH34N40g·1,25Η20: C% H% N%

Beregnet: 58,27 6,38 9,71

Fundet: 58,51 6,48 9,92.

20

Eksempel 2-7 På samme måde som i eksempel 1 syntetiseres de følgende forbindelser.

2 1-(N -Benzyloxycarbonyl-L-ornithinyl)-gamma-D-gluta- 25 myl)-indolin-2(S)-carboxylsyre (eksempel 2).

Smeltepunkt: 204-211° (sønderdeling) [a]^7: -79,0° (IN-NaOH)

Elementæranalyse for C27H32N4°8 *1,25H20: C% H% N% 30 Beregnet: 57,59 6,18 9,95

Fundet: 57,58 6,10 9,81.

2 1- (N -Phenethyloxycarbonyl-L-lysyl-gamma-D-gluta-myl)-indolin-2(S)-carboxylsyre (eksempel 3).

35 Smeltepunkt: 199-204°C.

[a]p6: -82,1° (IN-NaOH).

DK 171402 B1 0 25

Elexnentæranalyse for C29H36N4°8-1'5H20: C* H% N*

Beregnet: 58,48 6,60 9,41

Fundet: 58,25 6,82 9,41.

5 2 1- (N -Cyclohexyloxycarbonyl-L-lysyl-gamma-D-gluta-myl)-indolin-2(S)-carboxylsyre (eksempel 4).

Smeltepunkt: 197-205°C.

[a]£7: -85,3° (lN-NaOH).

10 Elementæranalyse for C27H38N4°8*^'75H20: C% H% N%

Beregnet: 56,09 7,24 9,69

Fundet: 56,15 7,59 9,84.

2 15 1-(N -Methoxycarbonyl-L-lysyl-gamma-D-glutamyl)- -indolin-2(S)-carboxylsyre (eksempel 5).

[a]p8: -86,8° (lN-NaOH).

Elementæranalyse for C29H36H4V2H20: C% H% N% 20 Beregnet: 51,36 6,43 10,90

Fundet: 51,36 6,66 10,89.

2 1-(N -n-Octyloxycarbonyl-L-lysyl-gamma-D-glutamyl)--indolin-2(S)-carboxylsyre (eksempel 6).

25 Smeltepunkt: 199-202°C.

[a]^8: -82,3° (lN-NaOH).

Elementæranalyse for C29H44N4°8-1 2 3 4 5'5H20! C% H« N%

Beregnet: 56,02 7,94 9,01 30 Fundet: 56,29 7,98 9,13.

2 1-(N -Cycloheptyloxycarbonyl-L-lysyl-gamma-D-gluta- 3 myl)-indolin-2(S)-carboxylsyre (eksempel 7).

4

Smeltepunkt: 190-195°C.

5 35 [a]: -84,6° (lN-NaOH).

DK 171402 B1 0 26

Elementæranalyse for C28H40N4°8 *1,75H20: C% H% N%

Beregnet: 56,79 7,40 9,46

Fundet: 56,68 7,46 9,39.

5

Eksempel 8 2 1-[N -(2-Furoyl)-L-lysyl-gamma-D-glutamyl]-indolin--2(S)-carboxylsyre.

2,0 g 2-Furancarboxylsyre, 2,26 g N-hydroxysuccinimid 10 og 3,76 g vandopløseligt carbodiimid-hydrochlorid omrøres natten over ved stuetemperatur i tetrahydrofuran (THF)/me-thylenchlorid. Reaktionsblandingen koncentreres til tørhed under formindsket tryk, og remanensen ekstraheres med ethyl-acetat. Det organiske lag vaskes successivt med 10%'s 15 saltsyre, mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning og mættet vandig natriumchloridopløsning, tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til tørhed under formindsket tryk. Remanensen omkrystalliseres fra isopropanol, og der fås 2,8 g N-(2-furoyloxy)-succinimid (smeltepunkt: 20 126-127°C). Til en opløsning af 1,79 g af det dannede sue- g cinimid og 2,0 g N -benzyloxycarbonyl-L-lysin i THF/vand sættes 2,9 g triethylamin, og blandingen omrøres natten over ved stuetemperatur. THF afdampes under formindsket tryk, og den tilbageværende opløsning indstilles til en pH-værdi på 25 2-3 med 10%'s saltsyre og ekstraheres derpå med ethylacetat.

Ekstrakten tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til tørhed under formindsket tryk. Remanensen renses ved søjlechromatografi ("CHP20P"-søjle, 30% —> 60% acetoni-tril/vand-gradient), hvorved fås 2,3 g N -(2-furoyl)-N - 2 g 30 -benzyloxycarbonyl-L-lysin, [a]p : -4,6° (methanol). En portion (1,35 g) af dette produkt og 1,0 g af diester A opløses i methylenchlorid, og der tilsættes 0,66 g vandopløseligt carbodiimid-hydrochlorid. Blandingen omrøres natten over ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen vaskes 35 successivt med 10%'s saltsyre, mættet vandig natriumhydro-gencarbonatopløsning og vand, tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til tørhed under formindsket tryk.

DK 171402 B1 0 27

Remanensen genudfældes fra ether/ethanol, hvorved fås 1,8 2 6 1 g ethyl-l-[N -(2-furoyl)-N -benzyloxycarbonyl-L-lysyl-0 - -ethyl-gamma-D-glutamyl]-indolin-2(S)-carboxylat (smp.: 120-123°C). Til en opløsning af 1,65 g af den fremkomne 5 ethylester i dioxan sættes 6,85 ml lN-NaOH, og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 1 time. Blandingen gøres derpå sur med 10%'s saltsyre og ekstraheres derpå med ethyl-acetat. Det organiske lag vaskes med mættet vandig natrium-chloridopløsning, tørres over vandfrit natriumsulfat og 10 koncentreres under formindsket tryk. Remanensen krystalliseres fra petroleumsether/ethylacetat og opsamles ved fil- 2 6 trering, hvorved fås 1,50 g 1-[N -(2-furoyl)-N-benzyl-oxycarbonyl-L-lysyl-gamma-D-glutamyl]-indolin-2(S)-carboxylsyre. Til en methanolopløsning af 1,35 g af dette 15 produkt sættes 0,35 g ammoniumformiat og 0,4 g 10%'s palladium-carbon, og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 7 timer. Katalysatoren fjernes, og methanolet afdampes under formindsket tryk. Derpå tilsættes ethylacetat, og blandingen ekstraheres med 10%'s saltsyre. Ekstrakten 20 chromatograferes på en søjle af "CHP20P" under anvendelse af acetonitril/vand (0%—> 60% gradient) som et eluerings-middel til dannelse af en fraktion indeholdende ca. 70% af det ønskede produkt. Fraktionen renses ved søjlechroma-tografi (en søjle af "ODS-Q3", et produkt fra Wako Pure 25 Chemical Co., Ltd., som har en diameter på 4 cm og en længde på 30 cm; acetonitril/1%'s trifluoreddikesyre, 1:9), hvorved fås 0,65 g af et pulver. Pulveret chromato-graferes yderligere på en søjle af "CHP20P" (0%—>60% ace-tonitril/vand-gradient) og koncentreres til tørhed under 30 formindsket tryk. Remanensen opløses i vand og lyofiliseres, hvilket giver 0,3 g af den ønskede forbindelse.

[<x)£5: -67,1° (lN-NaOH)

Elementæranalyse for C25H3oN4°8* 2,25H20: C% H% N% 35 Beregnet: 54,10 6,27 10,09

Fundet: 54,16 6,17 9,98.

DK 171402 B1 0 28

Eksempel 9 På samme måde som i eksempel 8 fremstilles 1-(L--prolyl-L-lysyl-gamma-D-glutamyl)-indolin-2(S)-carboxylsyre.

5 [al^6: ""'l0 (lN-NaOH).

Elementæranalyse for 0251^,.1^0^ · 3,51^0 C% H% N%

Beregnet: 51,71 7,29 12,06

Fundet: 51,48 7,31 12,02.

10

Eksempel 10 2 1-[N -[3-(4-Imidazolyl)-propenoyl]-L-lysyl-gamma- -D-glutamyl]-indolin-2(S)-carboxylsyre 0,56 g Ammoniumformiat og 0,4 g 10%'s palladium- 15 carbon sættes til en ethanolopløsning af 2,1 g ethyl-1-2 6 -(N -benzyloxycarbonyl-N-tert.butoxycarbonyl-L-lysyl- -O^-ethyl-gamma-D-glutamyl)-indolin-2(S)-carboxylat (se eksempel 1), og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 1 time. Katalysatoren fjernes ved filtrering, og moder- 20 luden koncentreres under formindsket tryk. Ethylacetat sættes til remanensen, og blandingen vaskes med mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning og mættet vandig natriumchloridopløsning og tørres derpå over vandfrit £ natriumsulfat, hvorved fås 1,7 g ethyl-1-(N -tert.butoxy-25 carbonyl-L-lysyl-0 -ethyl-gamma-D-glutamyl)-indolin-2(S)--carboxylat (smp. 114-117°C). Til en opløsning af 1,4 g af produktet og 0,4 g urocansyre i dimethylformamid (DMF)/-methylenchlorid sættes 1,17 g vandopløseligt carbodiimid-hydrochlorid, og blandingen omrøres natten over ved stue-30 temperatur. Opløsningsmidlet afdampes under formindsket tryk. Remanensen krystalliseres i mættet vandig natrium-hydrogencarbonatopløsning og opsamles ved filtrering. Krystallerne vaskes med vand og genudfældes fra ether/ethanol, og der fås 1,4 g af et pulver. Dette renses ved silicagel-35 søjlechromatografi (methanol/chloroform, 1:1), hvilket giver 1,0 g af et pulver. En portion (0,9 g) af det dannede pulver opløses i 20 ml dioxan, og der tilsættes 3,8 ml lN-NaOH.

DK 171402 B1 0 29

Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 3 timer, neutraliseres med vandig kaliumhydrogensulfatopløsning og koncentreres under formindsket tryk. Remanensen opløses i vand. Opløsningen indstilles til en pH-værdi på 5 med vandig 5 kaliumhydrogensulfatopløsning og chromatograferes på en søjle af "CHP20P" (0%—*60% acetonitril/vand-gradient), hvorved fås 0,65 g af et pulver. En portion (0,55 g) af dette pulver henstilles sammen med 20 ml trifluoreddike-syre under isafkøling i 30 minutter, hvorpå trifluoreddike-10 syren afdampes under formindsket tryk ved stuetemperatur. Remanensen chromatograferes på en søjle af ”CHP20P" (0% —>30% acetonitril/vand-gradient), og de fremkomne rensede fraktioner koncentreres. Remanensen lyofiliseres, hvorved fås 0,33 g af den ønskede forbindelse.

15 [(x] : -43,1° (lN-NaOH) .

Elementæranalyse for C26H32N6°7-3H20! C% H% N%

Beregnet: 52,52 6,44 14,13

Fundet: 52,38 6,50 14,14.

20

Eksempel 11 o (2S,3aS,7aS)-1-(N -Benzyloxycarbonyl-L-lysyl-gamma--D-glutamyl)-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre.

15,8 g Vandopløseligt carbodiimid-hydrochlorid 25 sættes til en methylenchloridopløsning indeholdende 24,5 g N-benzyloxycarbonyl-O^-ethyl-G-glutaminsyre, 17,5 g ethyl--(2S,3aS,7aS)-octahydro-lH-indol-D-carboxylat-hydrochlorid og 7,58 g triethylamin, og blandingen omrøres natten over ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen vaskes successivt 30 med mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning, vand, 10%'s saltsyre og vand, tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til tørhed under formindsket tryk, hvilket giver 34,1 g af et olieagtigt materiale. Det olieagtige materiale opløses i 400 ml ethanol, og der tilsættes 3 g 35 10%'s palladium-carbon. Medens blandingen omrøres ved stue temperatur tilsættes 12 g ammoniumformiat i tre delte portioner. Efter 1 time fjernes katalysatoren ved filtrering, DK 171402 Bl 30 0 og filtratet gøres surt med saltsyre og koncentreres til tørhed under formindsket tryk. Remanensen opløses i vand og vaskes med ethylacetat. Det vandige lag alkaliseres med natriumhydrogencarbonat og ekstraheres med methylen-5 chlorid. Det organiske lag tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til tørhed under formindsket tryk, hvorved fås 23,5 g ethyl-(2S,3aS,7aS)-1-(O^-ethyl-gamma--D-glutamyl)-octahydro-lH-indol-2-carboxylat (som vil blive omtalt som diester B) som et olieagtigt stof. En 10 portion (23 g) af diester B opløses i 150 ml ethanol, og der tilsættes 210 ml ΙΝ-NaOH. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 5,5 timer, gøres sur med saltsyre og koncentreres under formindsket tryk. Den tilbageværende opløsning renses ved søjlechromatografi (en søjle af "CHP20P", 15 0%—i 30% acetonitril/vand-gradient). De rensede fraktioner koncentreres til tørhed under formindsket tryk, hvilket giver 6,31 g af et produkt. De utilstrækkeligt rensede fraktioner koncentreres til tørhed under formindsket tryk. Remanensen opløses i vand, neutraliseres med natriumhydrogencarbonat 20 og renses igen ved søjlechromatografi (en søjle af "CHP20P", 0%—^30% acetonitril/vand-gradient), hvorved fås 8,70 g af et produkt. Disse produkter kombineres, og der fås 15,01 g (2S,3aS,7aS)-1-(gamma-D-glutamyl)-octahydro-lH-indol-2--carboxylsyre (smp. 191-192°C). Til en vandig opløsning af 25 2 g af det dannede produkt og 2,68 ml triethylamin sættes 2 40 ml THF. Under omrøring tilsættes 3,06 g N -benzyloxycar- g bonyl-N -tert.butoxycarbonyl-L-lysin-N-hydroxysuccinimid-ester. Blandingen omrøres natten over ved stuetemperatur og koncentreres derpå under formindsket tryk. Den tilbage-30 værende opløsning blandes med 10% citronsyre og ekstraheres med ethylacetat. Det organiske lag vaskes med mættet natri-umchloridopløsning, tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres under formindsket tryk, hvorved fås 3,96 g af et pulver. En portion (3,46 g) af dette pulver får lov til 35 at stå i 35 ml trifluoreddikesyre i 20 minutter under isaf-køling og koncentreres derpå til tørhed under formindsket tryk. Remanensen opløses i vand, indstilles til en pH-værdi DK 171402 Bl 31 0 på 4 med natriumhydrogencarbonat og renses ved søjlechroma-tografi (en søjle af "CHP20P", 0%—£60% acetonitril/vand-gradient). De ønskede fraktioner koncentreres til tørhed under formindsket tryk, hvorved fås 1,6 g af den ønskede 5 forbindelse som et hvidt pulver.

[a]^6: -40,0° (lN-NaOH).

Elementæranalyse for C28H40N4°8’1'75H2°: C% H% N%

Beregnet: 56,79 7,40 9,46 10 Fundet: 56,88 7,47 9,33.

Eksempel 12 2

Ethyl-(2S,3aS,7aS)-1-(N -benzyloxycarbonyl-L-orni- thinyl-gamma-D-glutamyl)-octahydro-lH-indol-2-carboxylat.

2 15 I 20 ml methylenchlorid opløses 1,81 g N -benzyloxy- carbonyl-N^-tert.butoxycarbonyl-L-ornithin og 1,75 g af diester B, og 1,04 g vandopløseligt carbodiimid-hydrochlorid sættes til opløsningen. Blandingen omrøres natten over ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen vaskes successivt 20 med 10%'s citronsyre, vand, mættet vandig natriumhydrogen-carbonatopløsning og vand, tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til tørhed under formindsket tryk, hvorved fås 3,2 g af et viskost olieagtigt produkt. En portion (3,0 g) af det olieagtige produkt opløses i 20 25 ml trifluoreddikesyre og henstilles med isafkøling i 15 minutter. Trifluoreddikesyren afdampes under formindsket tryk. Remanensen blandes med vandig natriumhydrogencarbonat-opløsning og ekstraheres med ethylacetat. Det organiske lag ekstraheres med 10%'s saltsyre. Det vandige lag alka-30 liseres med natriumhydrogencarbonat og ekstraheres med ethylacetat. Det organiske lag tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til tørhed under formindsket tryk, i hvilket giver 1,2 g af et viskost olieagtigt produkt. Det olieagtige produkt opløses i ethanol, og der tilsættes 3 35 DK 171402 B1 0 32 ml lN-NaOH. Blandingen omrøres i 30 minutter under isafkøling. Opløsningen blandes med 3 ml IN saltsyre og koncentreres under formindsket tryk. Remanensen renses ved søjlechromatografi (en søjle af "CHP20P", 0%—>60% aceto- 5 nitril/vand-gradient). De rensede fraktioner koncentreres til tørhed under formindsket tryk. Remanensen lyofiliseres, hvorved fås 0,60 g af den ønskede forbindelse som et hvidt pulver.

[<x]25: -46,0° (ethanol).

10 Elementæranalyse for 5H20 C% H% N%

Beregnet: 57,89 7,54 9,31

Fundet: 57,74 7,33 9,29.

15 Eksempel 13 2 (2S,3aS,7aS)-1-(N -Benzyloxycarbonyl-L-ornithinyl--gamma-D-glutamyl)-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre.

0,5 g Af den endelige forbindelse fremstillet i eksempel 12 opløses i ethanol, og der tilsættes 5 ml lN-NaOH.

20 Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 3 timer, og der tilsættes 5 ml IN saltsyre. Blandingen koncentreres derpå under formindsket tryk, og remanensen chromatograferes på en søjle af ,,CHP20P" (0%—>60% acetonitril/vand-gradient) .

De rensede fraktioner koncentreres til tørhed under for- 25 mindsket tryk. Remanensen lyofiliseres, hvorved fås 0,30 g af den ønskede forbindelse som et hvidt pulver.

[aj26: -39,4° (lN-NaOH).

Elementæranalyse for C27H38N4°8’2H20: 30 C% H% N%

Beregnet: 55,66 7,27 9,62

Fundet: 55,39 7,08 9,49. 1 2 33 DK 171402 B1 0

Eksempel 14 (28,338/735)-1-(N -Nicotinoyl-L-lysyl-gamma-D-gluta-myl)-oct3hydro-lH-indol-2-carboxylsyre.

Metode a) 5 Til en blanding af 20 ml THF og 3 ml vand sættes 4,42 6 2 g N -benzyloxycarbonyl-N -tert.butoxycarbonyl-L-lysin-N--hydroxysuccinimidester, 2,89 g (2S,3aS,7aS)-1-(gamma-D--glutamyl)-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (se eksempel 11) og 2,6 ml triethylamin, og blandingen omrøres i 5 timer 10 ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen koncentreres under formindsket tryk. Remanensen blandes med vandig mættet natriumchloridopløsning og vaskes med ethylacetat. Det vandige lag gøres surt med 10%’s citronsyre og ekstraheres med ethylacetat. Det organiske lag vaskes med mættet natri-15 umchloridopløsning, tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til tørhed under formindsket tryk, hvorved fås 5,19 g af en remanens. Remanensen renses ved søjlechroma-tografi (en søjle af "CHP20P", 0%—>60% acetonitril/vand-gradient). De fremkomne fraktioner koncentreres til tørhed 20 under formindsket tryk. Remanensen opløses i dioxan/vand og lyofiliseres, hvorved fås 4,7 g (28,3aS,7aS)-1-(N^-benzyl-oxycarbonyl-N -tert.butoxycarbonyl-L-lysyl-gamma-D-gluta-myl)-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre. En portion (2,27 g) af produktet opløses i 50 ml trifluoreddikesyre og henstil-25 les i 15 minutter under isafkøling og koncentreres derefter til tørhed under formindsket tryk. Remanensen opløses i vand, indstilles til en pH-værdi på 4 og chromatograferes på en søjle af "CHP20P" (0%—^50% acetonitril/vand-gradient). De ønskede fraktioner koncentreres under formindsket tryk, 30 hvorved fås 1,15 g (2S,3aS,7aS)-1-(N^-benzyloxycarbonyl-L--lysyl-gamma-D-glutamyl)-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre som et glasagtigt produkt. En portion (1,0 g) af det glas-agtige produkt opløses i en blanding af Ν,Ν-dimethylformamid og THF, der tilsættes 0,5 ml triethylamin og 0,39 g 35 N-(nicotinoyloxy)-succinimid, og blandingen omrøres natten over ved stuetemperatur. Fortyndet saltsyre sættes til reak- DK 171402 B1 0 34 tionsblandingen, og blandingen ekstraheres med ethylacetat. Ekstrakten tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til tørhed under formindsket tryk. Det fremkomne glasagtige produkt opløses i 25 ml ethanol, og der tilsættes 5 0,6 g ammoniumformiat og 0,3 g 10%'s palladium-carbon. Blan dingen omrøres ved stuetemperatur i 3 timer. Katalysatoren fjernes ved filtrering, og moderluden koncentreres til tørhed under formindsket tryk. Remanensen chromatograferes på en søjle af "CHP20P" (0%—>60% acetonitril/vand-gradient).

10 De ønskede fraktioner koncentreres til tørhed under formindsket tryk. Remanensen lyofiliseres, og der fås 0,5 g af den ønskede forbindelse.

[a]*8: -27,2° (H20) .

Elementæranalyse for ·2,251^0: 15 C% H% N%

Beregnet: 54,58 7,31 12,24

Fundet: 54,62 7,25 12,20

Metode b) 20 18 g D-glutaminsyre og 31,75 g natriumcarbonat op løses i 200 ml vand, og derpå tilsættes 37,5 g N-carbo-ethoxyphthalamid under isafkøling. Blandingen omrøres derpå ved stuetemperatur i 4 timer. De uopløselige materialer fjernes ved filtrering. Opløsningen gøres sur med 6N salt-25 syre og henstilles natten over ved 4°C. De udfældede krystaller opsamles ved filtrering, vaskes med koldt vand og tørres, hvorved fås 33,2 g N-phthaloyl-D-glutaminsyre (smp. 162-164°C). En portion (30 g) af denne forbindelse sættes til 90 ml eddikesyreanhydrid, og blandingen omrøres 30 ved 55°C, indtil forbindelsen opløses. Straks efter opløsning afkøles opløsningen, og der tilsættes 150 ml vandfri ether/n-hexan (2:1). De udfældede krystaller opsamles ved filtrering, og der fås 18,2 g N-phthaloyl-D-glutaminsyre- anhydrid (smp. 203-206°C). 6,13 g (2S,3aS,7aS)-octahydro-35 DK 171402 B1 0 35 -lH-indol-2-carboxylsyre opløses i 40 ml pyridin, og der tilsættes 9,39 g N-phthaloyl-D-glutaminsyreanhydrid. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 2 timer. Ethylacetat sættes til reaktionsblandingen, og blandingen vaskes suc-5 cessivt med fortyndet saltsyre og vandig natriumchlorid- opløsning og tørres. Opløsningsmidlet afdampes, og remanensen krystalliseres fra en lille mængde ethylacetat. Krystallerne opsamles ved filtrering, vaskes med ether og tørres, hvorved fås 13,1 g (2S,3aS,7aS)-l-(N-phthaloyl-10 -gamma-D-glutamyl)-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (smp. 194-198°C). Den fremkomne forbindelse opløses i 200 ml ethanol, og der tilsættes 6,13 g hydrazin-monohydrat. Blandingen omrøres natten over ved stuetemperatur, og der tilsættes 60 ml vand. Opløsningen indstilles til en pH-værdi 15 på 4-5 med 12N saltsyre, og bundfaldet fjernes ved filtrering. Moderluden koncentreres. Remanensen chromatograferes på en søjle af "HP-20" (et produkt fra Mitsubishi Chemical Co., Ltd.). Søjlen vaskes med vand og elueres med 70%'s methanol. Fraktioner indeholdende det ønskede produkt kon-20 centreres under formindsket tryk, og der fås 6,13 g (2S,3aS,-7aS)-1-(gamma-D-glutamyl)-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (smp. 191-192°C). En portion (1,8 g) af denne forbindelse og 1,28 g natriumcarbonat opløses i en blanding af 40 ml acetonitril og 30 ml vand. Opløsningen afkøles til -10°C, 25 og under omrøring tilsættes 2,1 g N6-benzyloxycarbonyl-L- -lysin-N-carboxylsyreanhydrid. Blandingen omrøres ved -10°C i 2 timer. Reaktionsblandingen adskilles i to lag. Det vandige lag vaskes med kold acetonitril, og der tilsættes 200 ml ethanol. Bundfaldet fjernes ved filtrering. Moderluden 30 koncentreres og chromatograferes på en søjle af "CHP20P" (0%—) 60% acetonitril/vand-gradient). Fraktioner indeholdende det ønskede produkt koncentreres til tørhed under formindsket tryk, og der fås 1,9 g (2S,3aS,7aS)-(N^-benzyloxy-carbonyl-L-lysyl-gamma-D-glutamyl)-octahydro-lH-indol-2-35 -carboxylsyre. Dette produkt opløses i 30 ml ethanol, og der tilsættes 0,9 g ammoniumformiat og 0,5 g 10%'s palladium-carbon. Blandingen omrøres natten over ved stuetemperatur.

DK 171402 B1 0 36

Katalysatoren fjernes ved filtrering, og moderluden koncentreres til tørhed under formindsket tryk. Remanensen chromatograferes på en søjle af "CHP20P" (0%—> 30% aceto-nitril/vand-gradient). Fraktioner indeholdende det ønskede 5 produkt koncentreres til tørhed under formindsket tryk. Remanensen lyofiliseres, hvorved fås 1,05 g (2S,3aS,7aS)--1-(L-lysyl-gamma-D-glutamyl)-octahydro-lH-indol-2-car-boxylsyre [[a]^°: -5,4° (1^0)]. En portion (1,0 g) af den fremkomne carboxylsyre og 0,46 g natriumcarbonat op-10 løses i en blanding af 10 ml THF og 30 ml vand, og med kraftig omrøring og isafkøling tilsættes 0,39 g nicotinoyl-chlorid-hydrochlorid. Blandingen omrøres yderligere i 2 timer. Reaktionsblandingen koncentreres under formindsket tryk og indstilles til en pH-værdi på 2-3 med fortyndet 15 saltsyre. Opløsningen chromatograferes på en søjle af "CHP20P" (0%—i· 60% acetonitril/vand-gradient) . Fraktioner indeholdende det Ønskede produkt koncentreres til tørhed under formindsket tryk og lyofiliseres, hvorved fås 0,15 g af den ønskede forbindelse.

20

Metode c)

En blanding af 5,0 g D-glutaminsyre og 7,1 g natrium- carbonat opløses i en blanding af 170 ml vand og 200 ml acetonitril, og der tilsættes en opløsning af 11 g N6-ben- 2 25 zyloxycarbonyl-L-lysin-N -carboxylsyreanhydrid i acetonitril ved -10°C under omrøring. Blandingen omrøres yderligere i 2 timer ved -10°C. Det vandige lag vaskes med kold acetonitril, neutraliseres og koncentreres under formindsket tryk. Remanensen renses ved "CHP20P"-søjlechroma-3Q tografi (0%—» 50% acetonitril/vand-gradient) og omkrystalliseres fra fortyndet alkohol, hvorved fås 6,3 g N^-ben-zyloxycarbonyl-L-lysyl-D-glutaminsyre (smp. 149-150°C).

En portion (6,0 g) af dette produkt og 3,0 g natriumcar-bonat opløses i en blanding af 100 ml vand og 40 ml THF, 35 og med omrøring under isafkøling tilsættes en THF-opløsning af 3,2 g N-(nicotinoyloxy)-succinimid. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 2 timer. Reaktionsblandingen neutrali- DK 171402 B1 0 37 seres og koncentreres under formindsket tryk. Den tilbageværende opløsning indstilles til en pH-værdi på 2 og underkastes "CHP20P"-søjlechromatografi (0%—>60% acetonitril/-vand-gradient). Fraktioner indeholdende det ønskede pro- 5 dukt koncentreres til tørhed under formindsket tryk, hvor- 2 6 ved fås 4,8 g N -nicotinoyl-N -benzyloxycarbonyl-L-lysyl--D-glutaminsyre. En portion (4,0 g) af dette produkt omrøres i 100 ml eddikesyreanhydrid i 2 timer og koncentreres til tørhed under formindsket tryk ved en lav temperatur, 10 og remanensen opløses i 50 ml methylenchlorid. Opløsningen vaskes med vand og tørres, og opløsningsmidlet afdampes, 2 6 hvorved fås 3,5 g groft renset N -nicotinoyl-N -benzyloxy-carbonyl-L-lysyl-D-glutaminsyreanhydrid. Det fremkomne an-hydrid (3,5 g) sættes til en opløsning af 1,2 g (2S,3aS,-15 7aS)-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre i 15 ml pyridin, og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 2 timer. Reaktionsblandingen koncentreres til tørhed under formindsket tryk ved stuetemperatur. Remanensen opløses i vand, og opløsningens pH-værdi indstilles til 2. Opløsningen underkastes 20 "CHP20P"-søjlechromatografi (0%—^ 60% acetonitril/vand- gradient). Fraktioner indeholdende det ønskede produkt koncentreres til tørhed under formindsket tryk, hvorved 2 6 fås 1,3 g (2S,3aS,7aS)-l-(N -nicotinoyl-N -benzyloxycar-bonyl-L-lysyl-gamma-D-glutamyl)-octahydro-lH-indol-2-car-25 boxylsyre. Denne forbindelse opløses i 25 ml ethanol, og der tilsættes 1,2 g ammoniumformiat og 0,5 g 10%'s palladium-carbon. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 3 timer. Katalysatoren fjernes ved filtrering, og moderluden koncentreres til tørhed ved "CHP20P"-søjlechromatografi 30 (0%—> 60% acetonitril/vand-gradient) og lyofiliseres, hvor ved fås 0,8 g af det samme slutprodukt som fremstillet ved metode a) ovenfor. 1 DK 171402 B1 0 38

Eksempel 15-20

De følgende forbindelser syntetiseres på den samme måde som i eksempel 14 (metode a)) .

2 1-(N -Cyclohexylmethoxycarbonyl-L-lysyl-gamma-D-gluta-5 myl)-indolin-2(S)-carboxylsyre (eksempel 15 ).

Smeltepunkt: 186-191°C.

[a]p7: -84,4° (ΙΝ-NaOH).

Elementæranalyse for C28H40N4°8-1'5H208 C% H% N% 10 Beregnet: 57,23 7,38 9,53

Fundet: 57,33 7,67 9,64.

1-(D-Prolyl-L-lysyl-gamma-D-glutamyl)-indolin-2(S) --carboxylsyre (eksempel 16 ).

15 Smeltepunkt: 209-216°C (sønderdeling).

[a]30: -66,3° (lN-NaOH).

Elementæranalyse for 3,51^0: C% H% N%

Beregnet: 51,71 7,29 12,06 20 Fundet: 51,58 7,40 12,08.

DK 171402 Bl 39 0 2 (2S,3aS,7aS)-l-[N -(Pyridin-2-carbonyl)-L-lysyl- -ganuna-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 19).

[a]^5: -19,2° (H20).

5 Elementæranalyse for C26H37N5°7 ·1,75H20: C% H% N%

Beregnet: 55,45 7,25 12,44

Fundet: 55,74 7,05 12,42.

2 10 (2S , 3aS,7aS)-1-[N -(4-methoxybenzoyl)-L-lysyl-gamma- -D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 20) .

[ot] q6 : -15,2° (H20) .

Elementæranalyse for C28H40N4°8’3'5H20: 15 C% H% N%

Beregnet: 53,92 7,60 8,98

Fundet: 53,77 7,33 9,13.

Eksempel 21 2 20 (2S,3aS,7aS)-1-[N -Phenethyloxycarbonyl-L-lysyl-gamma- -D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre.

5,12 g N,N'-disuccinimylcarbonat, 2,44 g phenethyl-alkohol og 0,49 g 4-dimethylaminopyridin omrøres i methy-lenchlorid i 3 dage. Reaktionsblandingen vaskes med vand, 25 tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til tørhed under formindsket tryk. Remanensen krystalliseres fra ether. Krystallerne opsamles ved filtrering, hvorved fås 3,5 g N-(phenethyloxycarbonyloxy)-succinimid (smp. 69-72°C).

2,53 g N6-tert.butoxycarbonyl-L-lysin opløses i en blanding 30 af 30 ml acetonitril og 50 ml 5%'s kaliumcarbonat, og der tilsættes 2,9 g N-(phenethyloxycarbonyloxy)-succinimid. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 1 time. Reaktionsblandingen vaskes med chloroform. Det vandige lag gøres surt med 10%'s citronsyre og ekstraheres med chloroform.

35 Ekstrakten tørres over vandfrit natriumsulfat og koncen-

O

40 DK 171402 B1 treres til tørhed under formindsket tryk, hvorved fås 4,5 6 2 g N -tert.butoxycarbonyl-N -phenethyloxycarbonyl-L-lysin som et olieagtigt produkt. En portion (1,26 g) af det olieagtige produkt og N,N1-disuccinimidylcarbonat omrøres 5 i ethylacetat i 3 timer, og derpå tilsættes en ethylacetat-opløsning indeholdende 1,0 g (2S,3aS,7aS)-l-(gamma-D-gluta-myl)-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre og 0,256 g pyridin, og blandingen omrøres yderligere i 5 timer. Reaktionsblandingen ekstraheres med 5%'s natriumhydrogencarbonatopløs-10 ning. Ekstrakten gøres sur med 10%'s citronsyre og ekstraheres med ethylacetat. Det organiske lag tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til tørhed under formindsket tryk. Remanensen opløses i 20 ml trifluoreddike-syre, henstilles ved stuetemperatur i 20 minutter og kon-15 centreres derefter til tørhed under formindsket tryk.

Remanensen underkastes "CHP20P,'-søjlechromatografi (0%—? 60% acetonitril/vand-gradient). Fraktioner indeholdende det ønskede produkt koncentreres til tørhed under formindsket tryk. Remanensen opløses i dioxan/vand og lyofiliseres, 20 hvorved fås 0,3 g af den ønskede forbindelse.

[a]22: -36,9° (ΙΝ-NaOH).

Elementæranalyse for C29H42N4°8*2H2°*0'25C4H8°2: C% H% N%

Beregnet: 56,95 7,65 8,85 25 Fundet: 56,92 7,87 8,64.

Eksempel 22 2 (2S,3aS,7aS)-1-(N -Benzoy1-L-lysy1-gamma-D-gluta- myl)-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre.

30 (1) 2,0 g Natriumcarbonat opløses i 10 ml vand, og der tilsættes 4,83 g (2S,3aS,7aS)-1-(gamma-D-glutamyl)-octa- hydro-lH-indol-2-carboxylsyre. Efter at der er dannet en opløsning tilsættes 40 ml THF. Med kraftig omrøring til- 2 6 sættes gradvis 7,46 g N -benzyloxycarbonyl-N -tert.butoxy-35 DK 171402 B1 0 41 carbonyl-L-lysin-N-hydroxysuccinimidester. Blandingen omrøres natten over ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen koncentreres halvt, gøres sur med 10%'s citronsyre og ekstraheres med ethylacetat. Det organiske lag vaskes med 5 mættet vandig natriumchloridopløsning, tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til tørhed under formindsket tryk, hvorved fås 9,17 g (2S,3aS,7aS)-l-(N^--benzyloxycarbonyl-N®-tert.butoxycarbonyl-L-lysyl-gamma--D-glutamyl)-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre.

10 (2) En portion (6,2 g) af den fremkomne carboxylsyre opløses i 60 ml ethanol, og der tilsættes 1,0 g 10%'s palladium-carbon. Med omrøring tilsættes lidt efter lidt 2,5 g ammoniumformiat. Blandingen omrøres i 4 timer. Katalysatoren fjernes ved filtrering. Moderluden koncentreres 15 til tørhed, og ethylacetat sættes til remanensen. Det fremkomne pulver opsamles ved filtrering, og der fås 3,9 g (2S,3aS,7aS)-1-(N6-tert.butoxycarbonyl-L-lysyl-gamma-D--glutamyl)-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre.

(3) En portion (1,0 g) af den fremkomne carboxylsyre 20 opløses i 7 ml vand, og der tilsættes 0,55 g natriumhydro-gencarbonat og 12 ml THF. Med kraftig omrøring tilsættes 0,46 g N-benzoyloxysuccinimid, og blandingen omrøres natten over ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen koncentreres halvt, gøres sur med 10%'s citronsyre og ekstraheres 25 med methylenchlorid. Det organiske lag vaskes med vand, tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til tørhed under formindsket tryk.

(4) Til remanensen sættes 20 ml trifluoreddikesyre under isafkøling, og blandingen omrøres i 15 minutter. Trifluor- 30 eddikesyren afdampes under formindsket tryk. Remanensen chromatograferes på en søjle af "CHP20P" under anvendelse af acetonitril/vand (0%-» 50% gradient). Fraktioner indeholdende det ønskede produkt koncentreres til tørhed under formindsket tryk. Remanensen lyofiliseres, hvorved fås 35 0,50 g af den ønskede forbindelse.

DK 171402 B1 0 42 [α]^5: -23,1° (H20).

Elementæranalyse for c27H2gN^O^·2,25H20: C% H% N%

Beregnet: 56,78 7,50 9,81 5 Fundet: 56,91 7,29 10,03.

Eksempel 23-45

De følgende forbindelser syntetiseres på den samme måde som i eksempel 22.

2 10 1-[N -(4-Methoxyphenylethoxycarbonyl)-L-lysyl-gamma- -D-glutamyl)-indolin-2(S)-carboxylsyre (eksempel 23 ). Smeltepunkt: 197-202°C.

[a]^1: -74,2° (ΙΝ-NaOH).

Elementæranalyse for ‘I^O: 15 C% H% N%

Beregnet: 58,53 6,39 9,10

Fundet: 58,53 6,43 9,14.

2 (2S,3aS,7aS)-1-(N -Isonicotinoyl-L-lysyl-gamma-D-20 -glutamyl)-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 24) .

[a]^5: -29,8° (H20).

Elementæranalyse for C26H37N5°7‘1'5H20: C% H% N% 25 Beregnet: 54,16 7,34 12,15

Fundet: 54,25 7,06 12,23.

(2S,3aS,7aS)-1-(N -Cyclopentyloxycarbonyl-L-lysyl-30 -gamma-D-glutamyl)-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 25).

[a]^5: -37,1° (H20).

Elementæranalyse for C26H42N4°8*1'5H20: C% H% N% 35 Beregnet: 55,21 8,02 9,90

Fundet: 55,05 7,77 10,05.

2 DK 171402 Bl 43 0 (2S,3aS,7aS)-1-(N -Cyclohexyloxycarbonyl-L-lysyl--gamma-D-glutamyl)-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 26).

[a]p5: -31,9° (H20).

5 Elementæranalyse for C27H44N40g*l,75H20: C% H% N%

Beregnet: 55,51 8,20 9,59

Fundet: 55,53 8,42 9,55.

2 10 (2S,3aS,7aS)-l-[N -(Cyclobutyloxycarbonyl)-L- -lysyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 27).

[a]£5: -40,7° (H20).

Elementæranalyse for C25H40N4V2H2O: 15 C% H% N%

Beregnet: 53,56 7,91 9,99

Fundet: 53,57 7,60 9,93.

2 1-(N -Cyclobutyloxycarbonyl-L-lysyl-gamma-D-gluta-20 myl)-indolin-2(S)-carboxylsyre (eksempel 28) .

Smeltepunkt: 197-204°C.

[<x]^7: -84,0° (lN-NaOH) .

Elementæranalyse for C^H^N^g* 1,75H20: C% H% N% 25 Beregnet: 54,49 7,12 9,78

Fundet: 54,67 7,40 9,53. 1 1-(N -Cyclohexylethoxycarbonyl-L-lysyl-gamma-D-gluta-30 myl)-indolin-2(S)-carboxylsyre (eksempel 29).

Smeltepunkt: 192-195°C.

[ajp1: -78,8° (lN-NaOH).

Elementæranalyse for C29H42N4°8,:L' 5H20: C% H% N% 35 Beregnet: 57,89 7,54 9,31

Fundet: 57,82 7,74 9,36.

2 44 DK 171402 B1 0 1-(N -Nicotinoyl-L-lysyl-gamma-D-glutamyl)-indolin--2(S)-carboxylsyre (eksempel 30).

Smeltepunkt: 218-222°C.

[ajp1: -66,5° (ΙΝ-NaOH).

5 Elementæranalyse for · 2,25H20: C% H% N%

Beregnet: 55,16 6,32 12,37

Fundet: 55,24 6,57 12,24.

Λ 10 1-(N -Cyclobutancarbonyl-L-lysyl-gamma-D-glutamyl)- -indolin-2(S)-carboxylsyre (eksempel 31).

Smeltepunkt: 209-215°C.

[a]^1 2 3 4 5 6: -96,6° (ΙΝ-NaOH).

Elementæranalyse for C25H34N4°7 · 1,51^0: 15 C% H% N%

Beregnet: 56,70 7,04 10,58

Fundet: 56,64 7,06 10,46.

2 1-(N -Cyclopentyloxycarbonyl-L-lysyl-gamma-D-gluta-20 myl)-indolin-2(S)-carboxylsyre (eksempel 32).

Smeltepunkt: 198-203°C.

[a]^3: -79,3° (ΙΝ-NaOH).

Elementæranalyse for * 2,251^0: C% H% N% 25 Beregnet: 54,49 7,12 9,78

Fundet: 54,67 7,40 9,53.

2 1-[N -(2-Pyridinethoxycarbonyl)-L-lysyl-gamma-D-gluta-30 myl]-indolin-2(S)-carboxylsyre (eksempel 33).

3 ta]p7: -69,3° (ΙΝ-NaOH).

4 • Elementæranalyse for C28H35N5°8 5 C% H% N% 6

Beregnet: 55,12 6,53 11,48 7 35 Fundet: 54,91 6,37 11,33.

2 45 DK 171402 B1 0 1- (N -Benzoyl-L-lysyl-gamma-D-glutamyl)-indolin-2 (S)--carboxylsyre (eksempel 34).

Smeltepunkt: 202-208°C.

[a]24: -77,2° (lN-NaOH).

5 Elementæranalyse for 2N^O^’2H20: C% H% N%

Beregnet: 57,85 6,47 9,99

Fundet: 57,97 6,32 10,20 2 10 1-[N -(4-Morpholinethoxycarbonyl)-L-lysyl-gamma-D- -glutamyl]-indolin-2(S)-carboxylsyre (eksempel 35).

[d]25: -57,4° (lN-NaOH).

Elementæranalyse for * 2,25H20: C% H% N% 15 Beregnet: 48,57 7,40 10,49

Fundet: 48,70 7,23 10,45.

2 1-[N -(3-Pyridinmethoxycarbonyl)-L-lysyl-gamma-D--glutamyl]-indolin-2(S)-carboxylsyre (eksempel 36).

20 [d]25: -64,2° (lN-NaOH).

Elementæranalyse for C27H33N5°8·2,75H20: C% H% N%

Beregnet: 53,59 6,41 11,57

Fundet: 53,41 6,14 11,56.

25 (2S,3aS,7aS)-1-[N2-(4-Chlorbenzyloxycarbony1)-L--lysyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxyl-syre (eksempel 37).

[d]22: -30,8° (lN-NaOH).

30

Elementæranalyse for C28H39C^N4°8 *1,5H20: C% H% N% Cl%

Beregnet: 54,06 6,81 9,01 5,70 35 Fundet: 53,95 6,65 8,80 5,56.

2 46 DK 171402 B1 0 (2S,3aS,7aS)-1-[N -(4-Methylbenzyloxycarbonyl)-L--lysyl-gamma-D-glutamyl] -octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 38).

[a]22: -31,9° (ΙΝ-NaOH).

5 Elementæranalyse for C29H42N4°8*1/751^0: C% H% N%

Beregnet: 57,46 7,57 9,24

Fundet: 57,37 7,51 9,07.

10 (2S,3aS,7aS)-1-[N2-(2-Chlorbenzyloxycarbonyl)-L- -lysyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 39).

[a]22: -32,8° (ΙΝ-NaOH).

Elementæranalyse for C28H39C3"N408* 1,251^0: 15 C% H% N% Cl%

Beregnet: 54,45 6,77 9,07 5,74

Fundet: 54,55 6,81 8,90 5,60.

(2S,3aS,7aS)-1-[N2-(2-Methylbenzyloxycarbonyl)-L-20 -lysyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 40).

[a]22: -35,8° (ΙΝ-NaOH).

Elementæranalyse for C2gH^2N40g* 1/75Η20: C% H% N% 25 Beregnet: 57,46 7,57 9,24

Fundet: 57,68 7,63 9,01.

2 (2S,3aS,7aS)-1-[N -(2-Fluorbenzyloxycarbonyl)-L--lysyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-lK-indol-2-carboxylsyre (eksempel 41) .

30 [α^2: _32'5° UN-NaOH).

Elementæranalyse for C28H39FN4Og·1,5H20* 0,5C4Hg02: C% H% N% F%

Beregnet: 55,46 7,14 8,62 2,92 35 Fundet: 55,63 7,08 8,54 3,01.

0 47 DK 171402 B1 (2S,3aS,7aS)-1-[N1-(α-Naphthylmethoxycarbonyl)-L--lysyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxyl-syre (eksempel 42) .

[a]p1: -36,3° (lN-NaOH).

5 Elementæranalyse for C32H42N4O8*1,5H2O*0'25C4H8O: C% H% N%

Beregnet: 60,08 7,18 8,49

Fundet: 59,78 7,41 8,37.

10 (2S,3aS,7aS)-1-[N1-(α-Naphthylethoxycarbony1)-L- -lysyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxyl-syre (eksempel 43).

[a]22: -38,8° (lN-NaOH).

Elementæranalyse for '2*^0*0,5C4Hg02: 15 C% H% N%

Beregnet: 59,64 7,44 7,95

Fundet: 59,87 7,17 7,91.

2 (2S,3aS,7aS)-1-[N -(4-Phenylbenzyloxycarbonyl)-L-20 -lysyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxyl-syre (eksempel 44) .

[a]27: -39,1° (lN-NaOH).

Elementæranalyse for C34H44N4Og*l,5H2O*0,5C4HgO2: C% H% N% 25 Beregnet: 61,09 7,26 7,92

Fundet: 61,23 7,26 7,85.

35 (2S,3aS,7aS)-1-[N -(Phenoxycarbonyl)-L-lysyl-gamma--D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 30 43 .

[o]29: -17,7° (lN-NaOH).

DK 171402 B1 0 48

Elementæranalyse for C27H38N4°8♦IH2O·0,SC^HgC^: C% H% N%

Beregnet: 57,22 7,29 9,20

Fundet: 56,95 7,13 9,49.

5

Eksempel 46 2 (2S,3aS,7aS)-1-[N -(4-Hydroxybenzoyl)-L-lysyl-gamma--D-glutamyl)-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre.

I 5 ml vand opløses 1,30 g (2S,3aS,7aS)-l-(N6-ben-10 zyloxycarbonyl-L-lysyl-gamma-D-glutamyl)-octahydro-lH--indol-2-carboxylsyre og 0,25 g natriumcarbonat, og der tilsættes 10 ml THF. Med kraftig omrøring tilsættes 0,7 g N-(4-hydroxybenzoyloxy)-succinimid, og blandingen omrøres natten over ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen 15 koncentreres halvt, gøres sur med 10%'s citronsyre og ekstraheres med methylenchlorid. Det organiske lag vaskes med vand, tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til tørhed under formindsket tryk. Remanensen chro-matograferes på en søjle af "CHP20P" (diameter 2,5 cm og 20 længde 40 cm) under anvendelse af acetonitril/vand (30%—^ 70% gradient) som elueringsmiddel. Fraktioner indeholdende det ønskede produkt koncentreres til tørhed under formindsket tryk, hvorved fås 0,6 g af en remanens. Remanensen opløses i 10 ml 25%'s HBr/AcOH, og blandingen omrøres ved 25 stuetemperatur i 1 time. Derpå tilsættes 100 ml ether, og det dannede hvide bundfald opsamles ved filtrering og chromatograferes på en søjle af "CHP20P" (diameter 2,5 cm og længde 40 cm) under anvendelse af acetonitril/vand (0%—40% gradient) . Fraktioner indeholdende det ønskede 30 produkt koncentreres til tørhed under formindsket tryk.

Remanensen lyofiliseres, hvorved fås 0,3 g af den ønskede forbindelse.

[a]£7: -17,4° (H20).

Elementæranalyse for α27Η38Ν408* 1,51^0: 35 C% H% N%

Beregnet: 56,53 7,20 9,77

Fundet: 56,71 7,09 9,95.

49 DK 171402 B1 0

Eksempel 47-62

De følgende forbindelser syntetiseres på samme måde som i eksempel 46.

2 (2S,3aS,7aS)-1-[N -(2-Thiophencarbonyl)-L-lysyl-5 -gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 47)· [a]^6: -23,1° (Η-,Ο) .

Elementæranalyse for C25H36N4°7S*H20: C% H% N% S% 10 Beregnet: 54,14 6,91 10,10 5,78

Fundet: 54,09 6,74 10,14 5,99.

2 (2S,3aS,7aS)-l-[N -(3-Quinolincarbonyl)-L-lysyl--gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre 15 (eksempel 4fl).

[a]p4: -25,8° (lN-NaOH).

Elementæranalyse for C3oH39N5°7*2H20: C% H% N%

Beregnet: 58,33 7,02 11,34 20 Fundet: 58,46 7,30 11,24.

(2S,3aS,7aS)-1-[N^-(2-Chlornicotinoyl)-L-lysyl--gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 49).

25 [a]p6: -42,6° (H20).

Elementæranalyse for C26H38C1N5°7*1,5H20: C% H% N% Cl%

Beregnet: 52,66 6,'6 3 11,81 5,98

Fundet: 52,75 6,68 11,76 5,89.

30 2 (2S,3aS,7aS)-1-[N -(4-Chlorbenzoyl)-L-lysyl-gamma--D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 50) · [a]^5: -25,9° (lN-NaOH).

35 0 50 DK 171402 B1

Elementæranalyse for C% H% N% Cl%

Beregnet: 54,77 6,81 9,46 5,99

Fundet: 55,07 7,09 9,26 5,79 5 2 (2S,3aS,7aS)-1-[N -(Indolin-2(S)-carbonyl)-L-lysyl- -gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 51) .

[a]p5: -64,3° (ΙΝ-NaOH).

10 Elementær analyse for * 2,251^0: C% H% N%

Beregnet: 56,90 7,47 11,44

Fundet: 56,99 7,61 11,15.

2 15 (2S,3aS,7aS)-1-[N -(2-Thianaphthencarbonyl)-L-lysyl- -gamma-D-glutamy1]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 52) .

[<x]p6: -16,5° (ΙΝ-NaOH) .

Elementæranalyse for C29H38N4°7S · 21^0: 20 C% H% N% S%

Beregnet: 55,93 6,80 9,00 5,15

Fundet: 56,08 6,63 8,87 4,94. 1 35 (2S,3aS,7aS)-1-[N -(2-Quinoxalincarbonyl)-L-lysyl-25 -gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 53) .

[a]^6: -15,3° (ΙΝ-NaOH).

Elementæranalyse for * 1,251^0: C% H% N% 30 Beregnet: 57,56 6,75 13,89

Fundet: 57,48 7,00 13,96.

DK 171402 B1 51 .

0 2 (2S,3aS,7aS)-1-[N -(2-Isoquinolincarbonyl)-L-lysyl- -gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 54).

[a]26: -51/8° (lN-NaOH).

5 Elementæranalyse for C3øH39N5°7*1H20: C% H% N%

Beregnet: 60,09 6,89 11,68

Fundet: 59,89 6,66 11,61.

10 (2S,3aS,7aS)-l-IN1-(6-Methoxynicotinoyl)-L-lysyl- -gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 55).

[a]27: -18,0° (Ho0).

D 1

Elementæranalyse for C27H3gN5°8'1,51^0: 15 C% H% N%

Beregnet: 55,09 7,19 11,90

Fundet: 55,09 7,44 11,77 (2S,3aS,7aS)-1-[N1-(6-Ethoxynicotinoyl)-L-lysyl--gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre 2o (eksempel 56).

la]27: -16,4° (I^O) .

Elementær analyse for C28H41N5°8 · 21^0: C% H% N%

Beregnet: 54,98 7,42 11,45 25 Fundet: 55,00 7,70 11,27.

(2S,3aS,7aS)-1-[N1-(6-Chlornicotinoyl)-L-lysyl--gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 57).

30 [a]27: -21,4° (H20) .

Elementæranalyse for C26H36^N5°7 * 2H2^: C% H% N% Cl%

Beregnet: 51,87 6,70 11,63 5,89

Fundet: 51,78 6,44 11,86 6,05.

35 52.

DK 171402 Bl 0 2 (2S,3aS,7aS)-1-[N -(2-Hydroxybenzoyl)-L-lysyl-gamma- -D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 58) .

[a]8S: -21,0° (H20).

5 Elementæranalyse for C27H38N4°8*1'85H20: C% H% N%

Beregnet: 56,98 7,17 9,84

Fundet: 56,83 7,26 9,89.

2 10 (2S,3aS,7aS)-1-[N -(6-n-Propoxynicotinoyl)-L-lysyl- gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 59).

la]81: -25,2° (lN-NaOH).

Elementæranalyse for C29H43N5°8 * 1/5H20: 15 C% H% N%

Beregnet: 56,48 7,52 11,36

Fundet: 56,56 7,22 11,36.

2 (2S,3aS,7aS)-1-[N -(2-Isopropoxynicotinoyl)-L-lysyl-20 -gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 60).

[a]81: -26,4° (lN-NaOH).

Elementæranalyse for C29H43N5°8*8H2^; C% H% N% 25 Beregnet: 55,67 7,57 11,19

Fundet: 55,41 7,80 11,05.

2 (2S,3aS,7aS)-1-[N -(3-Hydroxybenzoyl)-L-lysy1-gamma--D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 30 61).

[a]81: -29,8° (lN-NaOH).

Elementæranalyse for C^H^gN^Og'l^SI^O: C% H% N%

Beregnet: 56,98 7,17 9,84 35 Fundet: 57,07 7,16 9,79.

53 DK 171402 B1 0 o (25,338,7aS)-1-(N -(4-Hydroxy-3-methoxybenzoyl)-L--lysyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxyl-syre (eksempel 62-1).

[a)p8: -17,9° (H20).

5 Elementæranalyse for C28H40N4V2H2O! C% H% N%

Beregnet: 54,89 7,24 9,14

Fundet: 54,95 7,26 9,04.

o 10 (2S,3aS,7aS)-l-[N -(3-Hydroxy-4-methoxybenzoyl)-L- -lysyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxyl-syre (eksempel 62-2).

[a]81: -40,0° (ΙΝ-NaOH).

Elementæranalyse for C28H40N4°9-3'25H2Oi 1S C% H% N%

Beregnet: 52,95 7,38 8,82

Fundet: 52,86 7,07 8,97.

(2S,3aS,7aS)-1-N^-[(2-Hydroxy-4-methylbenzoyl)-L-20 -lysyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxyl-syre (eksempel 62-3).

[a]p5: +37,4° (ΙΝ-NaOH).

Elementæranalyse for C2gH^QN^0g·1H20: C% H% N% 25 Beregnet: 58,12 7,32 9,68

Fundet: 57,92 7,12 9,46.

(2S,3aS,7aS)-1-[N^-(6-Hydroxy-beta-naphthoyl)-L--lysyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxyl-30 syre (eksempel 62-4).

[a]81: -2,8° (ΙΝ-NaOH) .

Elementæranalyse for C21H4gN40g*2,5H20: C% H% N%

Beregnet: 58,02 7,07 8,73 35 Fundet: 57,90 7,09 8,58.

54 DK 171402 B1 0 2 (25,335,738)-1-(N -(3,5-Dimethoxy-4-hydroxybenzoyl)- -L-lysyl-gamma-D-glutamyl] -octahydro-lH-indol-2-carboxyl- syre (eksempel 62-5).

[a]26: -4,1° (ΙΝ-NaOH).

5 Elementæranalyse for C29H42N4°10 *2/5H20: C% H% N%

Beregnet: 53,45 7,27 8,60

Fundet: 53,57 7,24 8,77.

10 (2S,3aS,7aS)-1-[N2-(3-Hydroxy-2-naphthoyl)-L-lysyl- -gamma-D-glutamyl)-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 62-6).

[et]26: + 15,6° (ΙΝ-NaOH) .

Elementæranalyse for C31H40N4O8'2,5H2O: 15 C% H% m

Beregnet: 58,02 7,07 8,73

Fundet: 57,82 6,74 8,47.

(2S,3aS,7aS)-l-[N2-(2-Hydroxy-5-methoxybenzoyl)-L-2o -lysy1-gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxyl-syre (eksempel 62-7).

[et]26: +22,1° (ΙΝ-NaOH).

Elementæranalyse for C28H40N4°9’1,5Η20: C% H% N% 25 Beregnet: 55,71 7,18 9,28

Fundet: 55,56 7,09 9,31.

(2S,3aS,7aS)-1-[N2-(4-Hydroxy-3-aminobenzoyl)-L--lysyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre 30 (eksempel 62-8).

[a]26: -15,3° (H20).

Elementæranalyse for C27H2gNt-Og · 1,75H20: C% H% N%

Beregnet: 54,67 7,22 11,81 35 Fundet: 54,81 7,31 11,79.

0 55 DK 171402 B1 (28,335,738)-1-[N2-(2-Hydroxy-5-brombenzoyl)-L-lysyl--gamma-D-glutamyl)-oct3hydro-lH-indol-2-c3rboxylsyre (eksempel 62-9).

[a]26: +10,8° (1N-N30H).

5 Elementærsnslyse for C27Hg^N^OgBr· 1,751^0: C% H% N% Br%

Beregnet: 49,36 6,21 8,53 12,16

Fundet: 49,42 6,25 8,50 12,01 10 (2S,3aS,73S)-1-[N2-(2-Hydroxy-5-methylbenzoyl)-L- -lysyl-gamma-D-glutamyl)-octahydro-lH-indol-2-carboxyl-syre (eksempel 62-10).

[a]28: +23,2° (ΙΝ-NaOH).

Elementæranalyse for C3qH42N409 ' 1 / 25H2O: 15 C% H% N%

Beregnet: 57,63 7,17 8,96

Fundet: 57,51 7,20 8,88.

(2S,3aS,7aS)-1-[N2-(2-Hydroxy-6-methylbenzoyl)-L--lysyl-gamma-D-glutamyl)-octahydro-lH-indol-2-carboxyl-20 syre (eksempel 62-11).

[a]28: +45,2° (ΙΝ-NaOH).

Elementæranalyse for C30H42N4°9-1'5H2O: C% H% N*

Beregnet: 57,22 7,20 8,90 25 Fundet: 57,18 7,25 8,81.

(2S,3aS,7aS)-1- [N2-(2-Hydroxy-4-chlorbenzoy1)-L--lysyl-gamma-D-glutamyl)-octahydro-lH-indol-2-carboxyl-syre (eksempel 62-12).

30 [a]80: +29'3° (ΙΝ-NaOH).

Elementæranalyse for C27^37C^4°8 *1' ^H20: C% H% N% Cl%

Beregnet: 53,33 6,63 9,21 5,83

Fundet: 53,41 6,72 9,18 5,79.

35 56 DK 171402 B1 0 2 (2S,3aS,7aS)-1-[N -(2-Hydroxy-5-chlorbenzoyl)-L-lysyl- -gamma-D-glutamyl)-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 62-13).

[a]p°: +17,2° (lN-NaOH).

5 Elementæranalyse for C27Hg^ClN^Og· 1,51^0: C% H% N% Cl%

Beregnet: 53,33 6,63 9,21 5,83

Fundet: 53,21 6,75 9,23 5,65.

10 Eksempel 63 2 1-(N -Pyrazinoyl-L-lysy1-gamma-D-glutamyl)-indolin--2(S)-carboxylsyre.

(1) 0,26 g Pyrazinsyre opløses i en blanding af 3 ml dimethylformamid og 20 ml methylenchlorid, og der tilsættes 15 1,1 g ethyl-1-(N^-tert.butoxycarbonyl-L-lysyl-O^-ethyl- -gamma-D-glutamyl)-indolin-2(S)-carboxylat og 0,84 g 1--ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)-carbodiimid-hydrochlorid. Blandingen omrøres natten over ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen vaskes successivt med mættet vandig natri-2o umhydrogencarbonatopløsning og vand, tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til tørhed under formindsket tryk. Remanensen underkastes silicagelsøjlechromatografi (2%'s methanol/chloroform), hvorved fås 0,8 g ethyl-1- 6 2 1 -(N -tert.butoxycarbonyl-N -pyrazinoyl-L-lysyl-0 -ethyl- 25 -gamma-D-glutamyl)-indolin-2(S)-carboxylat som et viskost olieagtigt materiale.

(2) 0,8 g Af forbindelsen fremstillet i (1) opløses i dioxan, og der tilsættes 3,5 ml lN-NaOH. Blandingen omrøres under isafkøling i 1,5 timer. Reaktionsblandingen koncen- 30 treres, gøres sur med 10%'s citronsyre og chromatograferes på en søjle af "CHP20P" under anvendelse af acetonitril/-vand (0%—> 60% gradient) som elueringsmiddel. Fraktioner indeholdende det ønskede produkt koncentreres til tørhed under formindsket tryk. Remanensen genudfældes fra petro-

C

35 leumsether/ethylacetat. Ved filtrering fås 0,55 g 1-(N - 2 -tert.butoxycarbonyl-N -pyrazinoyl-L-lysyl-gamma-D-gluta-myl)-indolin-2(S)-carboxylsyre.

DK 171402 B1 0 57 (3) 10 ml Trifluoreddikesyre sættes til en portion (0,45 g) af den endelige forbindelse fremstillet i (2) ovenfor, og blandingen omrøres under isafkøling i 20 minutter. Tri-fluoreddikesyren afdampes, og remanensen chromatograferes 5 på en søjle af "CHP20P” under anvendelse af acetonitril/-vand (0%—*30% gradient) som elueringsmiddel. Fraktioner indeholdende det ønskede produkt koncentreres til tørhed under formindsket tryk, og remanensen lyofiliseres, hvorved fås 0,27 g af den ønskede forbindelse.

10 [d]p5; -74,4° (ΙΝ-NaOH).

Elementæranalyse for C25H30N6°7’2 ' 5H2°: C% H% N%

Beregnet: 52,53 6,17 14,70

Fundet: 52,52 6,27 14,54.

15

Eksempel 64 2

Mononatrium-(2S,3aS,7aS)-1-(N -nicotinoyl-L-lysyl- -gamma-D-glutamyl)-octahydro-lH-indol-2-carboxylat.

2 I 5 ml vand opløses 0,57 g (2S,3aS,7aS)-1-(N -20 -nicotinoyl-L-lysyl-gamma-D-glutamyl)-octahydro-lH-indol--2-carboxylsyre (se eksempel 14 ), og der tilsættes 1 ml ΙΝ-NaOH. Den fremkomne vandige opløsning underkastes "CHP20P"-søjlechromatografi (0%—>20% acetonitril/vand-gradient). Fraktioner indeholdende det ønskede produkt 25 koncentreres til tørhed under formindsket tryk. Remanensen lyofiliseres, hvorved fås 0,25 g af den ønskede forbindelse.

[a] 26: -24,6° (H2<5) .

Eksempel 65 2 30 (2S,3aS,7aS)-1-[N -Methoxybenzoyl)-L-lysyl-gamma- -D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre.

(1) 1,0 g O-Anissyre, 0,76 g N-hydroxysuccinimid og 1,39 g vandopløseligt carbodiimid-hydrochlorid opløses i 15 ml methylenchlorid, og opløsningen omrøres natten ved 35 stuetemperatur. Bundfaldet fjernes ved filtrering. Moderluden koncentreres under formindsket tryk, og remanensen omkrystalliseres fra isopropanol, hvorved fås 1,47 g N-(2- 0 58 DK 171402 B1 -methoxybenzoyloxy)-succinimid (smp. 180-182°C).

(2S,3aS,7aS)-1-(N^-Benzoyloxycarbonyl-L-lysyl-gamma--D-glutamyloctahydro-lH-indol-2-carboxylsyre opløses i 6 ml vand, og der tilsættes natriumcarbonat og 10 ml THF.

5 Med kraftig omrøring tilsættes N-(2-methoxybenzoyloxy)--succinimid. Blandingen omrøres natten over ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen gøres sur med 10%'s citronsyre og ekstraheres med methylenchlorid. Det organiske lag tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til tørhed 10 under formindsket tryk. Remanensen chromatograferes på en søjle af "CHP20P" under anvendelse af acetonitril/vand (30%—» 70% gradient) som elueringsmiddel. Fraktioner indeholdende det ønskede produkt koncentreres til tørhed under formindsket tryk, hvorved fås 1,0 g (2S,3aS,7aS)-1-[N^- 2 15 -benzyloxycarbonyl-N -(2-methoxybenzoyl)-L-lysy1-gamma-D- -glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre.

(2) I 10 ml ethanol opløses 1,0 g (2S,3aS,7aS)-1-[N6- 2 -benzyloxycarbonyl-N -(2-methoxybenzoyl)-L-lysyl-gamma-D--glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre, og der til-20 sættes 1,18 g cyclohexen og 0,2 g 10%'s palladium-carbon. Blandingen omrøres ved 60°C i 2 timer. Katalysatoren fjernes ved filtrering, og moderluden koncentreres til tørhed under formindsket tryk. Remanensen underkastes "CHP20P"-søjlechromatografi (0%—> 50% acetonitril/vand-gradient).

25 Fraktioner indeholdende det ønskede produkt koncentreres under formindsket tryk. Remanensen lyofiliseres, hvorved fås 0,34 g af den ønskede forbindelse.

[a]£5: -14,9° (H20).

Elementæranalyse for C28H40N4°8*21^0: 30 C% H% N%

Beregnet: 56,36 7,43 9,39

Fundet: 56,63 7,18 9,33.

35 DK 171402 B1 0 59

Eksempel 66-68

De følgende forbindelser syntetiseres på samme måde som i eksempel 65.

2 1-(N -Cyclohexylcarbonyl-L-lysyl-gamma-D-glutamyl)-5 -indolin-2(S)-carboxylsyre (eksempel 66).

Smeltepunkt: 207-212°C.

[a]26: -90,3° (lN-NaOH).

Elementæranalyse for C27 H38N4°7*2H20: C% H% N% 10 Beregnet: 51,23 1,41 9,89

Fundet: 57,42 7,52 9,94.

2 (2S,3aS,7aS)-1-[N -(4-Phenylbenzoyl)-L-lysyl-gamma--D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 15 67)* [a]26: -11,6° (lN-NaOH).

Elementæranalyse for * 1» 5Η20· 0 , SC^HgC^· C% H% N%

Beregnet: 62,02 7,29 8,27 20 Fundet: 61,98 7,15 8,35.

2 (2S,3aS,7aS)-1-[N -(4-Fluorbenzoyl)-L-lysyl-gamma--D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (eksempel 68) .

25 ta]29: ~31'8° UN-NaOH) .

Elementæranalyse for C27H37H4°7F'2H20! C% Η» N% F%

Beregnet: 55,47 7,07 9,58 3,25

Fundet: 55,59 7,36 9,46 3,03.

30

Eksempel 69 2 1-[N -(3,4-Methylendioxybenzyloxycarbonyl)-L-lysyl- -gamma-D-glutamyl]-indolin-2(S)-carboxylsyre.

2 6 2,5 g N -Tert.butoxycarbonyl-N -(3-nitro-2-pyridin-35 sulfenyl)-L-lysin og 2,2 g ethyl-l-(0^-ethyl-gamma-D--glutamyl)-indolin-2(S)-carboxylat opløses i methylen-chlorid, og der tilsættes 2,0 g l-ethyl-3-(3-dimethyl- 60 DK 171402 B1

O

aminopropyl)-carbodiimid-hydrochlorid. Blandingen omrøres natten over ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen vaskes successivt med mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløs-ning, 5%'s vandig kaliumhydrogensulfatopløsning og vandig 5 natriumchloridopløsning, tørres over vandfrit natriumsul fat og koncentreres til tørhed under formindsket tryk.

Remanensen omkrystalliseres fra ethanol, hvorved fås 3,6 g 2 6 ethyl-l-[N -tert.butoxycarbonyl-l-N -(3-nitro-2-pyridin- sulfenyl)-L-lysyl-O^-ethyl-gamma-D-glutamyl]-indolin-2(S)- 27 o 10 -carboxylat. [a]p : -28,2° (dimethylformamid) .

3,5 g Af denne ester omrøres med 30 ml trifluor-eddikesyre under isafkøling i 30 minutter. Trifluoreddike-syren afdampes, og ethylacetat og 5%'s kaliumcarbonat sættes til remanensen. Blandingen omrystes kraftigt. Det 15 organiske lag vaskes med vandig natriumchloridopløsning, tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres under formindsket tryk. Remanensen omkrystalliseres fra ether/- g ethanol, hvorved fås 2,6 g ethyl-l-[N-(3-nitro-2-pyridin-sulfenyl)-L-lysyl-O^-ethyl-gamma-D-glutamyl]-indolin-2(S)-20 -carboxylat. Smp. 95-102°C. [a]^: -39,6° (dimethylformamid) .

En portion (1,0 g) af den fremkomne ester opløses i 30 ml methylenchlorid, der tilsættes 0,21 g N-methyl-morpholin og 1,07 g N-(3,4-methylendioxybenzyloxycarbonyl-25 oxy)-succinimid, og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 3 timer. Reaktionsblandingen vaskes successivt med mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning, 5%'s vandig kaliumhydrogensulfatopløsning og vand, tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til tørhed under formindsket 30 tryk. Remanensen omkrystalliseres fra ethanol/methanol, . 2 hvorved fås 1,1 g ethyl-1-[N -(3,4-methylendioxybenzyloxy- 6 1 carbonyl)-N -(3-nitro-2-pyridinsulfenyl)-L-lysyl-0 -ethyl- -gamma-D-glutamyl]-indolin-2(S)-carboxylat. Smp. 130-135°C.

[a]^: -23,2° (dimethylformamid).

35 En portion (1,0 g) af dette produkt oparbejdes som i det andet trin af eksempel 63, hvorved fås 0,8 g 1- 2 6 -[N -(3,4-methylendioxybenzyloxycarbony1)-N -(3-nitro-2- DK 171402 B1 0 61 -pyridinsulfenyl)-L-lysyl-gamma-D-glutamyl]-indolin-2(S)--carboxylsyre. Smp. 100-110°C. [a]p7: -70,5° (ΙΝ-NaOH) .

En portion (0/74 g) af produktet opløses i 10 ml dioxan, og 10 ml 0,5N saltsyre tilsættes. Blandingen omrøres ved 45°C 5 i 4 timer. Reaktionsblandingen neutraliseres og koncentreres, og remanensen gøres sur med IN saltsyre og underkastes "CHP20P"-søjlechromatografi (0%—» 60% acetonitril/vand-gradient). Fraktioner indeholdende det ønskede produkt koncentreres, og de udfældede krystaller opsamles ved fil-10 trering, hvorved fås 45 mg af den ønskede forbindelse.

Smeltepunkt: 198-202°C.

[2]^7: -67,3° (ΙΝ-NaOH).

Elementæranalyse for ^gH^N^O^Q · 21^0: C% H% N% 15 Beregnet: 54,88 6,04 8,83

Fundet: 55,16 6,14 8,83.

Eksempel 70 (2S,3aS,7aS)-1-[N-Benzyloxycarbonyl-S-(3-amino-20 propyl)-L-cysteinyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol--2-carboxylsyre.

13 g L-Cysteinhydrochloridhydrat opløses i en blanding af 100 ml ethanol og 50 ml vand, og der tilsættes 2N-NaOH. Medens opløsningen holdes ved en pH-værdi på 10, 25 tilsættes 16 g 3-(tert.butoxycarbonylamino)-propylbromid. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 4 timer. Efter neutralisering koncentreres reaktionsblandingen til tørhed under formindsket tryk. Remanensen opløses i 15%'s vandig ammoniak og underkastes "CHP20P"-søjlechromatografi 30 (0%—>30% acetonitril/vand-gradient). Fraktioner indehold ende det ønskede produkt koncentreres under formindsket tryk. De udfældede krystaller opsamles ved filtrering, hvorved fås 10,3 g S-(3-tert.butoxycarbonylaminopropyl)--L-cystein. Smp. 193°C (sønderdeling). En portion (3,0 g) 35 af produktet opløses i en vand/THF-opløsning indeholdende 3,0 g kaliumcarbonat, og med kraftig omrøring tilsættes 2,76 g benzyloxycarbonylchlorid. Blandingen omrøres ved DK 171402 B1 0 62 stuetemperatur i 3 timer. Reaktionsblandingen vaskes med ether, gøres sur med 10%'s citronsyre og ekstraheres med chloroform. Det organiske lag tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres under formindsket tryk, hvorved fås 5 2,8 g N-benzyloxycarbonyl-S-(3-tert.butoxycarbonylamino- propyl)-L-cystein som en olie. Dicyclohexylaminsaltet af denne forbindelse har et smeltepunkt på 125-127°C. En portion (1,76 g) af det olieagtige produkt opløses i 20 ml acetonitril, og 0,43 g N-hydroxysuccinimid og 0,77 g N,N-10 -dicyclohexylcarbodiimid sættes til opløsningen. Blandingen omrøres i 2 timer. Bundfaldet fjernes ved filtrering, og chloroform sættes til moderluden. Blandingen vaskes successivt med mættet vandig natriumhydrogencarbonatopløsning og vandig natriumchloridopløsning, tørres over vand-15 frit natriumsulfat og koncentreres til tørhed under formindsket tryk, hvorved fås 2,2 g af et pulver. 0,6 g Na-triumhydrogencarbonat og 1,07 g (2S,3aS,7aS)-1-(gamma-D--glutamyl)-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre opløses i en blanding af 24 ml THF og 12 ml vand, og 2,2 g af det oven-20 nævnte pulver sættes til opløsningen. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 3 timer. Reaktionsblandingen neutraliseres og koncentreres under formindsket tryk. Remanensen gøres sur med 5%'s vandig kaliumhydrogensulfatopløsning og underkastes "CHP20P"-søjlechromatografi (30% -> 70% acetoni-25 tril/vand-gradient). Fraktioner indeholdende det ønskede produkt koncentreres under formindsket tryk, hvorved fås 0,6 g (2S,3aS,7aS)-l-[N-benzyloxycarbonyl-S-(3-tert.butoxy-carbonylaminopropyl)-L-cysteinyl-gamma-D-glutamyl]-octa-hydro-lH-indol-2-carboxylsyre. En portion (0,58 g) af dette 30 produkt oparbejdes som i det fjerde trin af eksempel 22, hvorved fås 0,33 g af den ønskede forbindelse.

[a]^7: -26,7° (H20).

Elementæranalyse for C28H40^4°8S· 11^0: C% H% N% S% 35 Beregnet: 55,07 6,93 9,17 5,25

Fundet: 55,00 6,78 9,16 5,47.

0 63 DK 171402 B1

Eksempel 71 (2S,3aS,7aS)-1-[N-Benzyloxycarbonyl-S-(3-aminopropyl)--L-cysteinyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-car-boxylsyresulfoxid.

5 0,5 g (2S,3aS,7aS)-l-[N-Benzyloxycarbonyl-S-(3- -tert.butoxycarbonylaminopropyl)-L-cysteinyl-gamma-D-gluta-myl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (se eksempel 75) opløses i methylenchlorid, og der tilsættes 0,16 g m--chlorperbenzoesyre. Blandingen omrøres ved stuetemperatur 10 il time. Reaktionsblandingen koncentreres til tørhed under formindsket tryk. Remanensen underkastes "CHP20P"-søjle-chromatografi (30% 70% acetonitril/vand-gradient). Frak tioner indeholdende det ønskede produkt koncentreres til tørhed under formindsket tryk, hvorved fås 0,33 g af en 15 remanens. Remanensen oparbejdes som i det fjerde trin af eksempel 22, hvorved fås 0,23 g af den ønskede forbindelse.

[a]p4: -28,0° (lN-NaOH).

Elementæranalyse for C28H40N4°8S·2H20: C% H% N% S% 20 Beregnet: 52,16 6,88 8,69 4,97

Fundet: 52,29 6,97 8,82 4,65.

Eksempel 72 (2S,3aS,7aS)-1-[N-Benzyloxycarbonyl-S-(2-amino-25 ethyl)-L-cysteinyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol- -2-carboxylsyresulfoxid.

Den ønskede forbindelse syntetiseres på samme måde som i eksempel 71.

[a]p8: -34,0° (lN-NaOH).

30 Elementæranalyse for C^H^gN^^S·1H20: C% H% N% S%

Beregnet: 52,93 6,58 9,14 5,23

Fundet: 52,60 6,61 9,29 5,52.

35 DK 171402 Bl 2

Eksempel 73 64 0

Ethyl-1-(N -benzyloxycarbonyl-L-lysyl-gamma-D--glutamyl)-indolin-2(S)-carboxylat.

11,6 g Ethyl-indolin-2(S)-carboxylat-hydrochlorid, 5 5,2 g triethylamin og 19 g a-benzyl-N-benzyloxycarbonyl-D- -glutamat opløses i 150 ml methylenchlorid, og der tilsættes 15,6 g vandopløseligt carbodiimid-hydrochlorid. Blandingen omrøres natten over ved stuetemperatur. Reaktionsopløsningen vaskes successivt med 10%'s saltsyre, vandig 10 natriumhydrogencarbonatopløsning og vandig natriumchlorid-opløsning og tørres. Opløsningsmidlet afdampes, og remanensen omkrystalliseres fra ethanol/ether, hvorved fås 16,0 g ethyl-1-(N-benzyloxycarbonyl-O^-benzyl-gamma-D-glutamyl)--indolin-2(S)-carboxylat (smp. 114-116°C).

15 En portion (5,0 g) af denne ester suspenderes i en blanding af 100 ml methanol og 30 ml vand, og 5 ml eddikesyre, 4,6 g ammoniumformiat og 0,5 g 10%'s palladium-carbon sættes til suspensionen. Blandingen omrøres ved 50°C i 1 time. Katalysatoren fjernes ved filtrering. Moderluden 23 indstilles til en pH-værdi på 7 og koncentreres. Den tilbageværende opløsning afkøles. De udfældede krystaller opsamles ved filtrering og omkrystalliseres fra ethanol/-vand-(l:l), hvorved fås 2,2 g ethyl-1-(gamma-D-glutamyl)-indolin--2(S)-carboxylat (smp. 197-200°C, sønderdeling). En por-25 tion (2,0 g) af denne ester og 0,66 g natriumcarbonat opløses i 25 ml vand, og der tilsættes en opløsning af 3,3 g 2 6 N -benzyloxycarbonyl-N -tert.butoxycarbonyl-L-lysin-N- -hydroxysuccinimidester i 25 ml THF. Blandingen omrøres natten over ved stuetemperatur. Tetrahydrofuranet afdampes, 30 og der tilsættes 5%'s vandig kaliumhydrogensulfatopløs- ning. De udfældede krystaller opsamles ved filtrering og omkrystalliseres fra ethanol/ether, hvorved fås 3,3 g ethyl-2 6 -1-(N -benzyloxycarbonyl-N -tert.butoxycarbonyl-L-lysyl- -gamma-D-glutamyl)-indolin-2(S)-carboxylat. En portion 35 DK 171402 B1 0 65 (0,7 g) af denne ester omrøres med 10 ml trifluoreddike-syre under isafkøling i 20 minutter. Reaktionsblandingen koncentreres til tørhed under formindsket tryk, og remanensen underkastes ,,CHP20P”-søjlechromatografi (0% —} 50% 5 acetonitril/vand-gradient). Fraktioner indeholdende det ønskede produkt koncentreres, og de udfældede krystaller opsamles ved filtrering, hvorved fås 0,34 g af den ønskede forbindelse.

Smeltepunkt: 188-191°C. ίο [a]p6: "63'9° (DMF) .

Elementæranalyse for C30H38N4O8*^75H2O: C%_ H% N%

Beregnet: 58,67 6,81 9,12

Fundet: 58,71 6,84 9,40.

15

Eksempel 74

Den følgende forbindelse syntetiseret på samme måde som i eksempel 73.

o

Ethyl-(2S,3aS,7aS)-l-(N -benzyloxycarbonyl-L-lysyl-20 -gamma-D-glutamyl)-octahydro-lH-indol-2-carboxylat.

Elernentæranalyse for C3oH44N4°8* 1 * 751^0: C% H% N%

Beregnet: 58,10 7,72 9,03

Fundet: 58,07 7,49 8,98.

25

Eksempel 75 2 1 1-(N -Benzyloxycarbonyl-L-lysyl-0 -ethyl-gamma- -D-glutamyl)-indolin-2(S)-carboxylsyre.

4,3 g Vandopløseligt carbodiimid-hydrochlorid, 4,0 30 g l-benzyloxycarbonyl-indolin-2(S)-carboxylsyre, 1,2 g tert.butanol og 1,05 g 4-dimethylaminopyridin omrøres i methylenchlorid under isafkøling i 2 timer og derpå ved stuetemperatur natten over. Reaktionsblandingen vaskes successivt med 10%'s citronsyre, vandig natriumhydrogen- 35 carbonatopløsning og vandig natriumchloridopløsning og DK 171402 B1 0 66 tørres. Opløsningsmidlet afdampes, og remanensen renses ves silicagelsøjlechromatografi, hvorved fås 4,4 g tert.butyl-l-benzyloxycarbonyl-indolin-2(S)-carboxylat som en olie. Den fremkomne ester (4,0 g) opløses i en 5 blanding af tert.butanol, dioxan og methanol, og der tilsættes 5,7 g ammoniumformiat og 0,5 g 10%'s palladium-carbon. Blandingen omrøres i 6 timer ved stuetemperatur. Katalysatoren fjernes ved filtrering, og opløsningsmidlet afdampes. Vandig natriumhydrogencarbonatopløsning sættes 10 til remanensen, og blandingen ekstraheres med ethylacetat.

Det organiske lag vaskes med vandig natriumchloridopløs-ning og tørres. Opløsningsmidlet afdampes. Remanensen blandes med 1,3 g oxalsyre og omkrystalliseres fra ether/-isopropanol, hvorved fås 3,9 g tert.butyl-indolin-2(S)-15 -carboxylat-oxalat (smp. 123-125°C). En methylenchlorid-opløsning af 2,6 g tert.butyl-indolin-2(S)-carboxylat, 3,7 g a-ethyl-N-benzyloxycarbonyl-D-glutamat og 3,8 g vandopløseligt carbodiimid-hydrochlorid omrøres ved stuetemperatur i 4 timer. Reaktionsblandingen vaskes succes-20 sivt med vandig natriumhydrogencarbonatopløsning, 5%'s vandig kaliumhydrogensulfatopløsning og tørres. Opløsningsmidlet afdampes, og remanensen omkrystalliseres fra n-hexan/ethanol, hvorved fås 4,0 g tert.butyl-1-(N-ben-zyloxycarbonyl-O^-ethyl-gamma-D-glutamyl)-indolin-2(S)-25 -carboxylat. Dette produkt opløses i ethanol, og der tilsættes 2,6 g ammoniumformiat og 1,0 g 10%'s palladium-carbon. Blandingen omrøres ved stuetemperatur i 6 timer. Katalysatoren fjernes ved filtrering, og opløsningsmidlet afdampes. Remanensen blandes med vandig natriumhydrogen-30 carbonatopløsning og ekstraheres med ethylacetat. Det organiske lag vaskes med vand og tørres. Opløsningsmidlet afdampes, hvorved fås 2,6 g af et olieagtigt materiale.

En portion (2,4 g) af det olieagtige materiale, 2,67 g 2 g N -benzyloxycarbonyl-N -tert.butoxycarbonyl-L-lysin og 1 2,08 g vandopløseligt carbodiimid-hydrochlorid omrøres i DK 171402 B1 0 67 methylenchlorid i 2 timer. Reaktionsblandingen vaskes successivt med vandig natriumhydrogencarbonatopløsning og 5%'s vandig kaliumhydrogensulfatopløsning og tørres. Opløsningsmidlet afdampes, hvorved fås 4,7 g af et glasagtigt 5 materiale. En portion (0,7 g) af det glasagtige materiale omrøres med 10 ml trifluoreddikesyre under isafkøling i 10 minutter. Blandingen koncentreres til tørhed under formindsket tryk, og remanensen underkastes "CHP20P,,-søjle-chromatografi. Fraktioner indeholdende det ønskede produkt 10 koncentreres, hvorved fås 0,24 g af den ønskede forbindelse.

Smeltepunkt: 207-212°C.

(a]26: -3,2° (DMF).

Elementæranalyse for C3Q H38N4°8'°'75H20: c% h% m 15 Beregnet: 60,44 6,68 9,40

Fundet: 60,63 6,54 9,43.

Eksempel 76

Pr. 1.000 20 tabletter (2S,3aS,7aS)-1-(N2-Nicotinoyl-L-lysyl--gamma-D-glutamyl)-octahydro-lH-indol- -2-carboxylsyre ............................ 25 g

Majsstivelse ............................... 28 g 25 Lactose .................................... 60 g

Mikrokrystallinsk cellulose ................ 30 g

Hydroxypropylcellulose ..................... 5 g

Let vandfri kiselsyre ...................... 1 g

Magnesiumstearat ........................... 1 g 30

De ovennævnte bestanddele blendes, granuleres og komprimeres til 1.000 tabletter, som hver vejer 150 mg, ved en gængs metode. Tabletterne overtrækkes yderligere med hydroxypropylmethylcellulose, talkum, titandioxid 35 og sorbitanfedtsyreester på en gængs måde. Der fås 1.000 overtrukne tabletter.

Eksempel 77 68 DK 171402 B1 0

Pr. 1.000 tabletter (25,338,733)-1-(N2-Nicotinoyl-L-lysyl-5 -gamma-D-glutamyl)-octahydro-lH-indol- -2-carboxylsyre ............................ 100 g

Majsstivelse ............................... 66 g

Lactose .................................... 50 g

Mikrokrystallinsk cellulose ................ 30 g 10 Let vandfri kiselsyre ...................... 2 g

Magnesiumstearat ........................... 2 g

De ovennævnte bestanddele blendes, granuleres og fyldes i 1.000 kapsler ved en gængs metode.

15

Eksempel 78

De samme procedurer som i eksempel 76 og 77 gentages, 2 bortset fra, at (2S,3aS,7aS)-l-[N -(4-hydroxybenzoyl)-L- -lysyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxyl- 2 20 syre anvendes i stedet for (2S,3aS,7aS)-1-(N -nicotinoyl)--L-lysyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxyl-syre. Således fremstilles der henholdsvis tabletter og kapsler.

De følgende forbindelser kan syntetiseres som i 25 de foregående eksempler.

2 (2S,3aS,7aS)-1-[N -(4-Hydroxyphenylethoxycarbonyl)- -L-lysyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxyl- syre (som i eksempel 21) .

2 1-[N -[(5-Hydroxypyridin-2-yl)-methoxycarbonyl]- 30 -L-lysyl-gamma-D-glutamyl]-indolin-2(S)-carboxylsyre (som i eksempel 33) .

2 1- [N - [ (5-Methoxypyridin-2-yl)-methoxycarbonyl] --L-lysyl-gamma-D-qlutamyl]-indolin-2(S)-carboxylsyre (som i eksempel 33) .

35 69 DK 171402 B1 (2S,3aS,7aS)-1-[N2-[(3-Chlorpyridin-2-yl)-methoxy-carbonyl]-L-lysyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol--2-carboxylsyre (som i eksempel 22) .

(2S, 3aS,7aS) -1- [N- [ (3-Methylpyridin-2-yl) -methoxy-5 carbonyl]-L-lysyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol- -2-carboxylsyre (som i eksempel 22).

2 (2S,3aS,7aS)-1-[N -(Cyclopentylcarbonyl)-L-lysyl--gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre (som i eksempel 17) .

2 10 (2S,3aS,7aS)-i-[N -(4-iso-Propylbenzyloxycarbonyl)- -L-lysyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxyl- syre (som i eksempel 46) .

2 1- [N - (4-Dimethylaminobenzoyl) -L-lysyl-gamma-D--glutamyl]-indolin-2 (S)-carboxylsyre (som i eksempel 46).

15 (28,335,738)-1-[N2-[(2-Methylpyridin-5-yl)-carbonyl]- -L-lysyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxyl-syre (som i eksempel 14). .

(2S,3aS,7aS)-1-[N2-[(2-Hydroxypyridin-5-yl)-carbonyl] -L-lysyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carb-20 oxylsyre (som i eksempel 14).

(2S,3aS,7aS)-1-[N2-[(2-Pyrrolidinylpyridin-5-yl)-carbonyl] -L-lysyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-IH-indol-2-carboxylsyre (som i eksempel 14).

(2S,3aS,7aS)-1-[N2-[(2-Morpholinylpyridin-5-yl)-carb-2 5 onyl-L-lysy1-gamma-D-glutamyl]-octahydro-IH-indol-2-carboxyl-syre (som i eksempel 14).

(2S,3aS,7aS)-1-[N2-[(2-Dimethylaminopyridin-5-yl)-L--lysyl-gamma-D-glutamyl]-octahydro-IH-indol-2-carboxylsyre (som i eksempel 14).

30

Claims (17)

1. 70 DK 171402 B1
2. 1. Tripeptidderivat med den almene formel , T4CH0^NH0 5 , 2 m 2 ch2 COOR2 Rl-W-CO-NH-CH-CO-NH-CH4CH2^-CO-R3 (τ 10 hvori R1 betyder en C1_10“alkylgruppe/ en C4_7-cycloalkyl- eller C5_7-cycloalkyl-lavere alkylgruppe, en phenyl- eller phenyl -lavere alkylgruppe, hvori benzenringen eventuelt kan være substitueret med 1-4 substituenter valgt blandt halogen, 15 lavere alkyl, lavere alkoxy, phenyl, methylendioxy, ethylen-dioxy, amino, di-(lavere alkyl)-amino og hydroxy, en naphthyl- eller naphthyl-lavere alkylgruppe, hvori naphthalenrin-gen eventuelt kan være substitueret med 1-3 substituenter valgt blandt halogen, lavere alkyl, lavere alkoxy og hydroxy, 20 en heterocyclisk eller heterocyclisk-lavere alkylgruppe, hvori den heterocycliske gruppe er en mættet eller umættet 5- eller 6-leddet ring indeholdende 1-3 heteroatomer valgt blandt nitrogen-, oxygen- eller svovlatomer, og eventuelt kan være substitueret med 1-3 substituenter valgt blandt 25 halogen, lavere alkyl, lavere alkoxy, amino, di-(lavere alkyl)-amino, hydroxy, oxo og en mættet 5- eller 6-leddet nitrogenholdig heterocyclisk gruppe, og yderligere eventuelt kan være kondenseret til en benzenring, eller en imidazolyl-vinylgruppe; R2 betyder et hydrogenatom, en Ci-io-alkylgruppe 30 eller en benzylgruppe, R3 betyder en 2(S)-carboxy-indolin-1-yl- eller 2-carboxy-(2S,3aS,7aS)-octahydroindol-l-yl-gruppe, W betyder en enkeltbinding eller -0-, T betyder en enkeltbinding, -S- eller -S-, og 35 0 m er 2 eller 3, forudsat, at α-carbonatornet i den basiske aminosyredel har L-konfiguration, medens a-carbonatomet i 71 DK 171402 B1 2(S)-carboxylsyre eller et salt deraf.
3. 7. Forbindelse ifølge krav 5, kendetegnet ved, at den er (2S,3aS,7aS)-1-(N2-nicotinoyl-L-lysyl-gamma--D-glutamyl)-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre eller 1-(N2- 5 -nicotinoyl-L-lysyl-gamma-D-glutamyl)-indolin-2(S)-carboxylsyre eller et salt deraf.
4. 8. Forbindelse ifølge krav 5, kendetegnet ved, at den er (2S,3aS,7aS)-1-[N2-(2- eller 4-hydroxy- eller 2- eller 4-C1_3~alkoxy-substiuteret benzoyl)-L-lysyl-gamma-
5. 10 -D-glutamyl]-octahydro-IH-indol-2-carboxylsyre eller 1-[N2--(2- eller 4-hydroxy- eller 2- eller 4-C1_3-alkoxysubstitue-ret benzoyl)-L-lysyl-gamma-D-glutamyl]-indolin-2(S)-carboxylsyre, eller et salt deraf.
6. 9. Forbindelse ifølge krav 8, kendetegnet 15 ved, at den er (2S,3aS,7aS)-1-[N2-(4-hydroxybenzoyl)-L-lysyl -gamma-D-glutamyl) -octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre eller 1-[N2-(4-hydroxybenzoyl)-L-lysyl-gamma-D-glutamyl]-indolin--2(S)-carboxylsyre eller et salt deraf.
7. 10. Forbindelse ifølge krav 7, kendetegnet 20 ved, at den er (2S,3aS,7aS)-1-(N2-nicotinoyl-L-lysyl-gamma- -D-glutamyl)-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre eller dens salt.
8. 11. Forbindelse ifølge krav 9, kendetegnet ved, at den er (2S,3aS,7aS)-1-[N2-(4-hydroxybenzoyl)-L-lysyl- 25 gamma-D-glutamyl]-octahydro-lH-indol-2-carboxylsyre eller dens salt.
9. 12. Antihypertensivt middel, kendetegnet ved, at det omfatter et tripeptidderivat med formlen I eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf ifølge krav l.
10. 13. Farmaceutisk præparat, kendetegnet ved, at det omfatter et tripeptidderivat med formlen I eller et farmaceutisk acceptabelt salt deraf ifølge krav 1 og et farmaceutisk acceptabelt bæremateriale eller fortyndingsmiddel.
11. 14. Farmaceutisk præparat, kendetegnet ved, at det omfatter et tripeptidderivat med formlen I eller 72 DK 171402 B1 et farmaceutisk acceptabelt salt deraf ifølge krav 1, et diuretisk middel og et farmaceutisk acceptabelt bæremateriale eller fortyndingsmiddel.
12. 15. Fremgangsmåde til fremstilling af et tripeptid-5 derivat ifølge krav l, kendetegnet ved (a) omsætning af en forbindelse med den almene formel T-4CH-4——NH-R^ , 2 m CH2
13. 10 R1-W-C0-NH-CH-C00H (II) hvori R1, W, T, m og konfigurationen ved Qi-carbonatomet i den basiske aminosyredel har den samme betydning som i krav 1, og R5 betyder et hydrogenatom eller en aminobeskyttelsesgrup-15 pe, eller et reaktivt derivat ved carboxylgruppen, med en forbindelse med den almene formel COOR2
14. 20 H2N-CH4CH2^2-CO-R3 (III) hvori R2, R2 og konfigurationen ved α-carbonatomet i gluta-minsyredelen har den samme betydning som i krav 1, 25 eller et syreadditionssalt deraf, eller (b) omsætning af en forbindelse med den almene formel R1-W-C00H (IV) 30 hvori R1 og W har den samme betydning som i krav 1, eller et reaktivt derivat deraf ved carboxylgruppen, med en forbindelse den almene formel T-(CH_·)-NH-R5 . 2 m
15. 35 CH2 COOR H2N-CH-CO-NH-CH-fCH2)-2-CO-R3 (V) 73 DK 171402 B1 hvori R2, R3, T, m og konfigurationerne ved α-carbonat ornerne i den basiske aminosyredel og glutaminsyredelen har den samme betydning som i krav 1, og R5 har den ovennævnte betydning , 5 eller et syreadditionssalt deraf, eller (c) omsætning af en forbindelse med den almene formel T4CH0*·—NH-R5 i 2 m ~ CH2 COOR^
16. 10 R1-W-CO-NH-CH-CO-NH-CH-fCH2^2-COOH (VI) hvori R1, R2, T, W, m og konfigurationerne ved a-carbonato-merne i den basiske aminosyredel og glutaminsyredelen har den samme betydning som i krav 1, og R5 har den ovennævnte 15 betydning, eller et reaktivt derivat deraf ved carboxylgruppen eller et intramolekylært anhydrid deraf, med en forbindelse med den almene formel
17. 20 R3-H (VII) hvori R3 har den ovennævnte betydning, eller et syreadditionssalt deraf, og, om nødvendigt, fjernelse af beskyttelsesgruppen, som 25 kan forekomme i den dannede forbindelse, og/eller omdannelse af forbindelsen til et salt.