FI85269C - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara kumarinderivat. - Google Patents

Description

85269

Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten kumariinijohdan naisten valmistamiseksi

Esillä olevan keksinnön kohteena on menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten emäksisten kumariinijohdannaisten valmistamiseksi.

Keksinnön mukaan valmistettavat yhdisteet vastaavat seuraa-vaa yleistä kaavaa (I): R4 R5 Rfi

KN-CHn X

V *7 III (I) R2°Y\o/io R1 jossa

Rl on halogeeni tai Ci_5-alkyyli-, C2-5~alkenyyli- tai C2-4-alkanoyyliryhmä, R2 on vety, Ci_4-alkyyliryhmä, joka mahdollisesti on subs-tituoitu Ci_4-alkoksikarbonyyliryhmällä, tai C2_5~alke-nyyliryhmä, R5 on 0χ_4 alkyyli- tai fenyyliryhmä, R7 on vety tai di(Ci_4-alkyyli)amino-(Ci_4-alkyyli)ryhmä, R3 ja R4 voivat olla samanlaisia tai erilaisia ja merkitsevät kumpikin Ci_4-alkyyliryhmää tai R3 ja R4 voivat yhdessä merkitä atsiridinyyli-, morfolino-, tiomorfo-lino-, pyrrolidino-, piperidino-, piperatsino-, hydroksi-piperidino-, hydroksietyylipiperidino-, hydroksi-piperatsino- tai hydroksietyylipiperatsinoryhmää, ja R5 on vety.

Näillä yhdisteillä on antiaggregaatio-ominaisuuksia ja muutamilla niistä on myös antituumori- ja antimetastaasiaktivi-teetti.

Keksinnön mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa sinänsä jo tunnetuilla menetelmillä, kuten alistamalla kaavan (II) 2 85269 II (ιι) R1 nrukaiset kumariini johdannaiset Mannich-reaktioon sekundäärisen amiini kanssa ja haluttaessa liittämällä R2~hiilivety-ryhmä saatuun yhdisteeseen, jossa on vapaa fenolihydroksyyli 7-asemassa.

Esillä olevan keksinnön mukaiset yhdisteet ovat aktiivisia verihiutaleaggregaation estämiseksi. Niitä voidaan siitä syystä käyttää kokeellisiin, diagnostisiin ja terapeuttisiin tarkoituksiin eläin- ja humaanilääketieteessä ja etenkin an-titromboottisena lääkeaineena. Esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden eräällä ryhmällä on myös antituumori- ja antimetastaasi-toiminta ja niitä voidaan käyttää tähän tarkoitukseen eläimillä kokeellisiin tarkoituksiin ja lääketieteessä esimerkiksi potilailla, joilla on keuhkosyöpä.

Esillä olevan keksinnön tehtävänä on saada aikaan erilaisia valmistusmenetelmiä uusia kumariinijohdannaisia varten.

Keksinnön tehtävät ja edut selviävät alan ammattimiehille seuraavasta selityksestä ja patenttivaatimuksista.

Kaavassa (I) esiintyvät hiilivetyryhmät ovat alifaattisia, aralifaattisia tai alisyklisiä ryhmiä ja Rg ja R7 voivat merkitä myös aromaattisia hiilivetyyryhmiä. Nämä ryhmät voivat olla substituoimattomia tai substituoituja, tyydyttyneitä tai tyydyttämättömiä ja ne voi olla katkaistu hiili-atomiketjussa heteroatomeilla, kuten hapella, rikillä tai typellä. Näin määritellyistä alifaattisista ryhmistä mainittakoon alkyyliryhmät, joissa on 1 - 5 hiiliatomia, etenkin 1-4 hiiliatomia. Tyydyttymättömät hiilivetyryhmät voivat olla alkenyyliryhmiä, joissa on 2 - 5 hiiliatomia, mieluum- 3 85269 min 2-4 hiiliatomia. Kaikki nämä ryhmät voivat olla suora-ketjuisia tai haarautuneita. Yllä mainituista alisyklisistä ryhmistä mainittakoon etenkin ne, joissa on yksinkertainen tyydyttynyt rengas, so. monosykliset sykloalkyyliryhmät ja etenkin ne, joissa on 3 - 5 hiiliatomia renkaassa ja aivan erityisesti 5 hiiliatomia renkaassa. Voidaan käyttää alisyklisiä tyydyttämättömiä ryhmiä, joissa on 3 - 5, mieluummin 5 hiiliatomia renkaassa. Näissä ryhmissä voi olla yksi tai useampi kaksoissidos niiden syklissä, kuten syklo-alkenyyliryhmät, joissa on yksi kaksoissidos.

Substituoimattomista alkyyliryhmistä mainittakoon ensisijaisesti seuraavat ryhmät: metyyli, etyyli, propyyli, isopro-pyyli, butyyli, isobutyyli tai tert-butyyli. Parhaimpina pidettyjä substituoimattomia alkenyyliryhmiä ovat vinyyli, allyyli, propenyyli, isobutenyyli, 2-butenyyli ja 2-pentenyyli. Esimerkkeinä sykloalkyyliryhmistä mainittakoon syklopropyyli, syklobutyyli ja syklopentyyli. Sopivia substituoimattomia sykloalkenyyliryhmiä ovat esim. syklopente-nyyli.

Halogeenit merkitsevät etenkin fluoria, klooria tai bromia.

C2-4-alkanoyyliryhmät ja Ci_4-alkoksiryhmät vastaavat analogisesti yllä esitettyjä hiilivetyryhmiä.

Keksinnön erään sovellutusmuodon mukaan -Rl on yllä määritelty hiilivetyryhmä, tai halogeeni, kuten fluori, kloori tai bromi.

-R2 on vetyatomi tai jokin edellä mainituista hiilivety-ryhmistä, -R3 ja R4 merkitsevät erikseen jotakin aikaisemmin määritellyistä hiilivetyryhmistä.

Ryhmät R3 ja R4 voivat kumpikin merkitä yllä määriteltyä alkyyliryhmää, jossa on 1 - 4 hiiliatomia. Ryhmät R3 ja R4 voivat myös yhdessä merkitä kaksiarvoista alifaattista hiilivetyryhmää, joka on sidottu typpeen kahdella valenssil-la lähtien kahdesta eri hiiliatomista (alkyleeniryhmät).

* 85269

Alkyleeni- (tai alkyleeniset) ryhmät sisältävät tavallisesti 2 - 7 ja etenkin 2-5 hiiliatomia ja ne voivat sisältää kaksoissidoksia ja ne voivat olla suoraketjuisia tai haarautuneita. Ne muodostavat typpiatomin kanssa hetero-syklisiä monoatsoaattijärjestelmiä, so. atsasykloalkyyli-ryhmiä ja kun tähteiden R3 ja R4 muodostama alkyleeniryhmä on katkaistu heteroatomilla, muodostuu heteroatsasyklo-alkyyliryhmiä. Atsasykloalkyyliryhmistä tulisi etenkin mainita seuraavat: pyrrolidino, piperidino, 3-hydroksi-piperidino- ja 4-hydroksipiperidino. Kaksiarvoisista tai moniarvoisista heteroatomeista, jotka katkaisevat alkyleeni-ryhmän R3, R4 hiiliatomiketjun, tulisi mainita etenkin seuraavat: happi, rikki, typpi tai NH-ryhmä, joka voi olla substituoitu alifaattisella hiilivetyyryhmällä, etenkin al-kyyliryhmällä, jossa on 1 - 7, etenkin 1-4 hiiliatomia, kuten metyylillä, etyylillä tai isopropyylillä, joka voi olla puolestaan substituoitu yhdellä tai useammalla, esimerkiksi 1-3 vapaalla tai suojatulla hydroksyyliryhmällä, kuten jo mainituilla, ja/tai se voi olla katkaistu hiiliatomi-ketjussa heteroatomeilla, kuten yllä jo mainituilla.

Heteroatsasykloalkyyliryhmistä tulisi mainita etenkin seuraavat: morfolino-, tiomorfolino-, piperatsino-, N-etyyli-piperatsino- ja N-hydroksietyylipiperatsino-renkaat.

Ryhmä R5 on vetyatomi.

Rg- ja R7~osat merkitsevät vetyatomia tai yllä määriteltyä hiilivetyryhmää tai aromaattista hiilivetyryhmää, etenkin fenyyliä.

Keksinnön kaavan (I) mukaisista yhdisteistä ovat parhaimpina pidettyjä ne, joissa - Rl on hiilivetyryhmä, jossa on 1 - 5 ja mieluummin 1-4 hiiliatomia, tai halogeeni.

- R2 on vetyatomi tai hiilivetyryhmä, jossa on 1 - 5 ja mieluummin 1-4 hiiliatomia, mahdollisesti substituoi-tuna karboksyyliryhmällä, joka on esteröity 1-4 5 85269 hiiliatomia sisältävällä alkyylillä.

- R3 ja R4 merkitsevät molemmat alkyyliryhmiä, jotka sisäl tävät 1-5, mieluummin 1-4 hiiliatomia, tai R3 ja R4 yhdessä muodostavat 2-7 hiiliatomia sisältävän alky-leeniryhmän, joka voi olla katkaistu hiiliatomiketjussa hapen tai rikin atomilla tai -NH- tai -NR-ryhmällä, jossa R merkitsee l - 7 ja mieluummin 1-4 hiiliatomia sisältävää alkyyliä, joka voi olla substituoitu yhdellä tai useammalla, esimerkiksi 1-3 vapaalla tai eetteröidyllä hydroksyyliryhmällä, joka on johdettu 1 -7 ja mieluummin 1-4 hiiliatomia sisältävästä alifaat-tisesta alkoholista tai esteröity 1-7 hiiliatomia sisältävällä orgaanisella alifaattisella hapolla.

- R5 on vety.

- Rg on hiilivetyryhmä, jossa on 1 - 5, edullisesti 1-4 hiiliatomia, tai fenyyliryhmä, - R7 merkitsee vetyä tai dialkyyliaminoalkyyliryhmää, jolloin alkyyliryhmissä on 1 - 4 hiiliatomia.

Yllä mainituista tuotteista on mainittava etenkin ne, joissa Rl on tyydyttämätön hiilivetyryhmä, etenkin 2-5 hiiliatomia sisältävä alkenyyliryhmä, kuten vinyyli-, allyyli-, 2-butenyyli- ja isobutenyyliryhmä ja joissa R3 ja R4 merkitsevät hiilivetyryhmiä, mieluummin 1-4 hiiliatomia sisältäviä alkyyliryhmiä, tai R3 ja R4 muodostavat yhdessä typpiatomin kanssa piperatsinyyliryhmän. Vaihtoehtoisesti R3 ja R4 merkitsevät yhdessä typpiatomin kanssa morfolino- tai tiomorfolinoryhmää tai pyrrolidino- tai piperidinoryhmää.

Keksinnön mukaisista erityisistä yhdisteistä mainittakoon seuraavat: 4-metyyli-6-dimetyyliaminometyyli-7-hydroksi-8-allyylikuma- riini 4-metyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli)-7-hydroksi-8-allyyliku-mariini 4-metyyli-6-[[4-(2-hydroksietyyli)-l-piperatsinyyli]metyy-li]-7-hydroksi-8-allyylikumariini 6 B 5 269 [4-metyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli)-8-allyylikumariini-7-yyli]oksi-etikkahapon etyyliesteri 4-metyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli)-7-allyylioksi-8-allyyli-kumariini 2-[4-metyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli)-8-allyylikumariini-7-yyli]oksi-2-metyylipropionihapon etyyliesteri 4-fenyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli)-7-hydroksi-8-allyyli-kumariini 4-fenyyli-6-[[4-(2-hydroksietyyli)-1-piperatsinyyli]metyy-li]-7-hydroksi-8-allyylikumariini 4-fenyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli)-7-allyylioksi-8-allyyli-kumariini [4-fenyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli)-8-allyylikumariini-7-yyli]oksi-etikkahapon etyyliesteri 2- [4-fenyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli)-8-allyylikumariini-7-yyli]oksi-2-metyylipropionihapon etyyliesteri 4-metyyli-6-(1-pyrrolidinyylimetyyli)-7-hydroksi-8-allyyli-kumariini 4-metyyli-6-(l-piperidinyylimetyyli)-7-hydroksi-8-allyyli-kumariini 4-metyyli-6-[4-hydroksi-l-piperidinyyli)metyyli]-7-hydroksi- 8-allyylikumariini 4-metyyli-6-[(4-hydroksi-l-piperidinyyli)metyyli]-7-hydrok-si-8-allyylikumariini 4-metyyli-6-[(3-hydroksi-l-piperidinyyli)metyyli]-7-hydrok-si-8-allyylikumariini 3- (2-dietyyliaminoetyyli)-4-metyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli ) -7-hydroksi-8-kloorikumariini 7 85269 [3-(2-dietyyliaminoetyyli)-4-metyyli-6-(4-morfolinyylimetyy-li)-8-kloorikumariini-7-yyli]oksi-etikkahapon esteri 3- (2-dietyyliaminoetyyli)-4-metyyli-6-(4-morfolinyylimetyy-li)-7-allyylioksi-8-kloorikumariini 2- [3-(2-dietyyliaminoetyyli)-4-metyyli-6-(4-morfolinyylime-tyyli)-8-kloorikumariini-7-yyli]oksi-2-metyylipropionihapon etyyliesteri 4- metyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli)-7-hydroksi-8-kloorikuma-riini 4-metyyli-6-dietyyliaminometyyli-7-hydroksi-8-kloorikuma- riini 4-fenyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli)-7-hydroksi-8-kloorikuma-riini 3- (2-dietyyliaminoetyyli)-4-metyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli )-7-metoksi-8-kloorikumariini 4- metyyli-6-dimetyyliaminometyyli-7-hydroksi-8-kloori-kumariini 4.8- dimetyyli-6-dimetyyliaminometyyli-7-hydroksikumariini 4.8- dimetyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli)-7-hydroksikumariini 4-fenyyli-6-dimetyyliaminometyyli-7-hydroksi-8-allyylikuma- riini

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet voivat olla muodostettu suoloiksi tunnetuilla menetelmillä ja nämä suolat ovat myös esillä olevan keksinnön kohteena. Näistä suoloista ovat etenkin tärkeitä ne, jotka on saatu lisäämällä happoja. Nämä saadaan tavanomaisella tavalla käsittelemällä sopivilla hapoilla. Edullisesti voidaan käyttää terapeuttisesti sopivia happoja, kuten kloorivety-, bromivety-, rikki-, fosforihap-poja, metaanisulfoni-, omena-, viini- ja meripihkahappoa. Ei-terapeuttisia happoja voidaan kuitenkin myös käyttää, β 85269 jolloin saadaan suoloja, joita voidaan käyttää tuotteiden puhdistamiseksi, kuten pikriinihappoa ja pikrolonihappoa. Kaavan I mukaiset yhdisteet, joissa Rx merkitsee vetyä (esitettävissä kaavan IA mukaisina yhdisteinä) voidaan muuntaa metallisuoloiksi tai orgaanisiksi emäksiksi muodostamalla suolaksi fenoliryhmä 7-asemassa näiden emästen kanssa. Nämä suolat ovat myös keksinnön kohteena ja niitä voidaan käyttää happoadditiosuolojen tai vapaiden yhdisteiden sijasta farmaseuttisiin tai lääketarkoituksiin. Erityisesti on mainittava alkalimetallisuolat, esimerkiksi natrium- tai ka-liumsuolat samoin kuin ammoniumsuolat.

Julkaisussa Ind. Vet. Med. J. 1 (1977) 11-19 on esitetty lukuisia yhdisteitä, jotka sisältävät keskenään hyvin erilaisia polysyklisiä rakenteita. Julkaisussa on lueteltu nafta-leeniset, fenantreeniset ja kumariiniset rakenteet. Viite-julkaisussa esitettyjen yhdisteiden yhteisenä tekijänä on kaavan -CH2n (CH2 CH2 Cl)2 tai -CH2N (CH2 CH 0H)2 mukaiset typpipitoiset "sinappi"-substituentit.

Julkaisussa Ind. J. Chem. 13 (1975) 1103 ja 1105 on puolestaan mainittu kaksi kumariiniyhdistettä, jotka kumpikin sisältävät 6-asemassaan aminometyyliryhmän. Yhdisteet ovat 4-metyyli-6-piperidinometyyli-7-metoksikumariini ja 4-metyyli-6-morfolinometyyli-7-metoksikumariini.

Edellä mainituissa julkaisuissa kuvatut yhdisteet eroavat rakenteellisesti esillä olevan hakemuksen mukaisista yhdisteistä. Niissä ei ole yllä määriteltyjä substituentteja molekyylin 6- ja 8-asemissa. Niinpä tekniikan tason yhdisteissä ei esim. esiinny dialkyyliaminometyyliryhmää 6-asemassa, puhumattakaan siitä, että tunnetussa tekniikassa ehdotettaisiin juuri esillä olevan hakemuksen mukaisia substituenttiyhdistelmiä.

Hakemuksessamme esitettyjen farmakologisten ominaisuuksien kannalta on oleellisen tärkeää, että 8-asemassa on 9 85269 substituentti. Tämä substituentti voi olla hiilivetyryhmä tai halogeeni. Tunnetun tekniikan mukaisissa yhdisteissä vastaavassa asemassa on vetyryhmä. Esillä olevat keksinnön mukaiset yhdisteet eivät sisällä typpipitoista sinappiryhmää kuten viitejulkaisuissa esitetyt yhdisteet. Mainittu typpipitoinen sinappiryhmä antaa tunnetun tekniikan mukaisille yhdisteille niiden antituumoriaktiivisuuden. Keksinnön yhteydessä on yllättäen todettu, että hakemuksen mukaisilla yhdisteillä - sanotun ryhmän puuttumisesta huolimatta - on kasvainten vastainen vaikutus, mikä käy ilmi alla esitettävän taulukon 2 sisältämistä tuloksista.

Kaavan (I) mukaiset yhdisteet ja niiden suolat ovat aktiivisia verihiutaleaggregaation estämiseksi. Esimerkiksi näillä yhdisteillä on tämä aktiviteetti in vitro 10 y/ml:n -1000 y/ml:n konsentraatiossa, kuten seuraavat esimerkit osoittavat.

Koe A

Aggregaatio arvioidaan aggregometrillä ELVI 840 Bornin menetelmän mukaisesti (Nature 194, 927, 1962).

Uuden Seelannin kanit nukutetaan kloorialoosin ja uretaanin seoksella (40 mg/kg + 500 mg/kg), kaulavaltimo kanyloidaan ja otetaan 40 ml verta ja lisätään välittömästi 3,8% nat-riumsitraattia. Kaksi erillistä sentrifugointia suoritetaan (1000 ja vastaavasti 6000 kierrosta minuutissa) jolloin saadaan PRP (proteiinirikas plasma) ja PPP (proteiiniköyhä plasma); ensiksi mainittu laimennetaan toisella, jolloin ve-rihiutalekonsentraatioksi saadaan 300.000/mm3 (lasku suoritetaan Buerker-laitteessa). Esillä olevan keksinnön mukaiset verihiutaleaggregaatiota estävän aktiviteetin omaavat yhdisteet lisätään halutuissa konsentraatioissa ja inkuboidaan 30 minuuttia 37°C:ssa aggregointlaineilla. Verihiutaleaggregaa-tio stimuloidaan lisäämällä ADP:tä 20 μg/ml:n konsentraatiossa.

Tulokset on esitetty PRP:hen lisätyllä ADP:llä indusoidun verihiutaleiden hyperaggregaation eston prosenttimääränä 10 85269 20 μ9/ιη1:η konsentraatiossa. Taulukossa esitetyt tulokset koskevat testejä, jotka on saatu aikaan 100 y/ml:lla yksittäistä yhdistettä. Ensinunäisessä sarakkeessa numeroilla esitetyt eri yhdisteet ovat tunnistettavissa toisen sarakkeen numeroilla, jotka koskevat tässä selityksessä esitettyjä esimerkkejä.

li 8 5 269

Taulukko 1

Verlhiutaleaqgreqaatiota estävä aktiviteetti

Yhdisteet ADP:llä (20 pg/ml) indusoidun verihiutaleiden hyperaggregaa-tion esto aktiivin yhdisteen 100 γ/mlm konsentraatiossa _%:elna_ 19 (esim. 1) 40 25 (esim. 2) 19 26 (esim. 3) 23 27 (esim. 4) 32 28 (esim. 5) 54 29 (esim. 6) 19 44 (esim. 7) 20 49 (esim. 8) 25 50 (esim. 9) 25 51 (esim. 10) 37 52 (esim. 11) 22 58 (esim. 17) 25 62 (esim. 18) 23 67 (esim. 19) 18 68 (esim. 20) 41 69 (esim. 21) 29 76 (esim. 22) 27 102 (esim. 23) 12 105 (esim. 24) 28 117 (esim. 12) 44 121 (esim. 13) 51 124 (esim. 14) 38 130 (esim. 26) 29 132 (esim. 25) 13 188 (esim. 27) 19 200 (esim. 15) 21 201 (esim. 16) 32 i2 85269

Keksinnön mukaisilla kaavaa (I) vastaavilla eri tuotteilla, kuten 4-metyyli-6-dimetyyliaminometyyli-7-hydroksi-8-allyy-likumariinilla ja sen suoloilla, esimerkiksi hydrokloridilla (yhdiste 19) ja 4-metyyli-6-[[4-(2-hydroksietyyli)-l-pipe-ratsinyyli)metyyli]-7-hydroksi-8-allyylikumariinilla ja sen suoloilla, kuten dihydrokloridilla (yhdiste 26) on myös an-tituumori- ja antimetastaattiaktlviteetti, kuten on osoitettu hiirillä in vivo suoritetuilla farmakologisilla kokeilla. Tämä aktiviteetti voidaan nähdä esimerkiksi sen jälkeen, kun on annettu 0,2 mg/kg:n - 10 mg/kg:n annoksia oraalisesti, kuten on osoitettu seuraavilla kokeilla.

Koe B

1 x 105 3LL-karsinoomasoluja (Lewis-keuhkokarsinooma) istutetaan lihaksen sisäisellä injektiolla noin 20 - 22 g painavien koiraspuolisten C57Bl/6J-kannan hiirien käpäliin. Tämä suoritettiin kirjallisuudesta tunnetulla tavalla (Poggi A. et ai. Cancer Res. 3Τ_, 272-277, 1977). Kasvaimen kasvua tarkasteltiin 25. päivään asti siirron jälkeen. Tuona päivänä eläimet tapettiin ja primäärinen kasvain ja keuhkot poistettiin primäärisen kasvaimen ja metastaasien määrän kasvun arvioimiseksi. Farmakologinen käsittely oraalisesti alkaa 2 päivää ennen kasvaimen siirtoa ja jatkuu eläinten tappaami-seen asti. Aineet liuotetaan vesijohtoveteen ja vaihdetaan joka 24 tunnin kuluttua.

Erillisessä kokeessa yhdisteiden antikoagulointiaktiviteetti todetaan samalla hiirikannalla samoina annoksina, joita käytettiin antimetastaasiaktiviteetin arvioimiseksi.

vaikutus koagulointiin mitataan trombotestillä retro-orbi-taalisesta ontelosta otetulla hiussuoniverellä (Owren, P.A. et ai. Lancet 11, 754-758, 1959).

Taulukossa 2 on esitetty tulokset, jotka on saatu aikaisemmin mainitulla kahdella kumariinijohdannaisella 19 ja 26 verrattuna Warfariiniin, joka on hyvin tunnettu antituumori-ja antimetastaasiyhdiste ja joka on myös kumariinijohdannai- i3 85269 nen. Warfariinin antimetastaasiaktiviteetti on laajalti tunnettu sekä kokeellisesti (Zacharski, L.R. et ai. Cancer 44, 732-741, 1979 ja Poggi A. et ai. Lancet i, 163-164, 1978) että kliinisesti (Zacharski, L.R. et ai. J. Am. Med. Assoc. 245, 831-835, 1981). Todellakin Warfariinillä on antimeta-staasivaikutus "Lewis-keuhkokarsinoomaan", joka on syngeeni-nen C57Bl/6J-kannan hiirillä ja saa aikaan spontaaneja metastaaseja keuhkoissa kasvainsolujen lihaksen sisäisen istutuksen jälkeen. Tämä vaikutus mitataan metastaasien määrän avulla (Zacharski, L.R. et ai. Cancer 44, 732-741, 1979 ja Poggi, A. et ai. Lancet i 163-164, 1978).

Kliiniseltä kannalta käsittely Warfariinilla yhdessä klassisten menetelmien, kuten kemoterapian ja sädehoidon kanssa pidentää keuhkokarsinoomaa sairastivien potilaiden eloon-jääntiaikaa. Kuitenkin Warfariinillä on antituumoriterapi-assa se haitta, että sillä on vahva antikoagulointiaktivi-teetti ja näyttää, että sen antituumoritoimintamekanismi on pääasiallisesti yhdistettynä tähän aktiviteettiin (Donati, M.B. et ai. Brit. J. Haematol. 44, 173-182, 1980).

Taulukossa 2 on esitetty "trombotestillä" mitattu antikoagu-lointivaikutus, primäärikasvaimen painon laskulla mitattu antituumorivaikutus ja antimetastaasivaikutus, joka osoitetaan keuhkoissa läsnäolevien metastaasien määrällä. Vaikka Warfariinin ja kahden uuden esillä olevan keksinnön mukaisen tuotteen antituumori- ja antimetastaasivaikutukset ovat melko samankaltaisia, vahvaa antikoagulointivaikutusta ei esiinny näissä kahdessa uudessa keksinnön mukaisessa tuotteessa. Tämä ei ole ainoastaan täysin odottamaton tulos, vaan se merkitsee myOs hyvin tärkeää keksinnön mukaisten uusien kumariinijohdannaisten etua, mitä tulee niiden käyttöön antituumori- ja antimetastaasiaineina.

3 14 85269 3 σ\ σ\ ro oo

•H #> #» Λ *V

co -=r o ro o\j ctf 3 XÖ + I +l +1 +1 P in 3 xd oo p- -=r co 3 XÖ Λ Λ Λ Λ PE Ρ CM Ρ C7\ 0) CM Ρ Ρ ε 3 0 ΚΩ Ο ΓΟ CT\ 3 3 co CT\ ro -=r P -H rO VO in ΓΟ •H 3 ίπ a +i +i +i +i 3 Xd •H xd 3 C— p· P CT\

•H g ·Η OO C— ΓΟ CO

3 -H 3 O CM C"— t'-

H 3 0 MO MD VO

3 3 S

3 <p 3 3

S

•H t— C— CM

cd p *> « « '3 3 p p p 3 a> P P -H +1+1 P o 3D -=r ro -=r 3 E »N Λ Λ 3 O p o cr\ ro

O 3 rO 00 CM IO

> E4 tH

•H

P

CM P

O) O 0)

« P

W -H

d > D ·Η

‘..DP M

< X O bO

-;·. EH 3 3 X io ro in - - ·Η 3 ·> ·> " 3 3 bO o o o 3 e

_· ‘ 3 P CM

- . P 3

3 CO

- 3 .14 P o 3 3 3 g 3 o ω .·.·. -Η < βϋ ir\ ir\ p - - - £ \ «i *\ *\ 3 3 bÖ p p cm 3 e

P

3 ....; 3 P w

* I t *H

3 3 3 3 Ό : D ^ <"n "..· O p ro - T-3 p * ·. ·Η P Ή · · — · 3 3 H 3 ε s •H 3 i—I ·Η ·Η ·Η .'. ^ ·Η ρ 0 3 3 3 ·. *: 3 3 3 3 3 3 3 ·Η ρ — w E Ό 3 3 3 D Ο 3 σ\ κο

« >-* « 3 Ρ CM

is 85269

Yhdisteet, jotka ovat esillä olevan keksinnön kohteena, omaavat alhaisen toksisuuden, kuten voidaan osoittaa akuutin toksisuuden testeillä annettaessa oraalisesti kahdelle eläinlajille:

Koe C

Akuutti toksisuus rotassa: Spraque Dawley-rottien (koiras-ja naaraspuolisia) ryhmiä käsiteltiin porrastetuilla annoksilla, jotka olivat 0,125 g/kg - 10 g/kg yllä mainittuja yhdisteitä vesipitoisissa liuoksissa. Yhdisteet annetaan oraalisesti intuboimalla. Seuraava kuolema voi olla välitön tai se voi tapahtua milloin tahansa 14 päivän kuluessa käsittelyn jälkeen.

Letaalinen annos 50(LD5q), so. annos, joka saa aikaan 50%:ssa eläinten kuoleman, arvioidaan Litchfieldin ja Wilco-xonin menetelmällä (J. Pharmacol. Ex. Ther. 96, 99-113, 1949). Kahdelle yhdisteelle määritetty LD50 osoittaa alhaisen toksisuuden, kuten nähdään taulukosta 3.

TAULUKKO 3

Tutkittujen yhdisteiden akuutti toksisuus rotassa annettaessa niitä oraalisesti vesipitoisessa liuoksessa

Yhdiste 19 (esim. l) LD5Q 2 g/kg

Yhdiste 26 (esim. 3) LD50 3,16 g/kg

Koe D

Akuutti toksisuus hiiressä: Swiss-hiirten (koiras- ja naaraspuolisia ) ryhmiä käsiteltiin porrastetuilla annoksilla, jotka olivat 0,125 g/kg - 5 g/kg yhdisteitä 19 ja 26. Yhdisteet annettiin oraalisesti intuboimalla ja veteen liuotettuina.

Seuraava kuolema voi olla välitön tai se voi tapahtua milloin tahansa 14 päivän kuluessa käsittelyn jälkeen. Letaali- i6 85269 nen annos 50 (LD50), so. annos, joka aiheuttaa 50%:ssa eläinten kuoleman, arvioidaan Litchfieldin ja Wilcoxonin menetelmällä (J. Pharmacol. Exp. Ther. 96, 99-113, 1949).

Taulukko 4 osoittaa, että yhdisteet ovat toksisempia hiiressä kuin rotassa. On kuitenkin tunnettu tosiasia, että erilaiset tulokset saadaan toksikologiselta kannalta eläinlajien mukaisesti.

TAULUKKO 4

Tutkittujen yhdisteiden akuutti toksisuus hiiressä annettaessa niitä oraalisesti vesipitoisissa liuoksissa

Yhdiste 19 (esim. 1) LD50 1,21 g/kg

Yhdiste 26 (esim. 3) LD50 1,95 g/kg

Esillä olevan keksinnön kaavojen I mukaisia kumariinijohdannaisia ja niiden suoloja voidaan käyttää verihiutaleaggre-gaatiota estävinä lääkeaineina terapeuttisesti ja/tai profy-laktisesti. Annokset vaihtelevat potilaan olosuhteiden, iän ja tilan mukaisesti. Yleisesti päivittäinen oraalinen annos on noin 20 - 500 mg noin 70 kg painavalle nisäkkäälle. Keksinnön mukaisia yhdisteitä, joilla on antituumori- ja anti-metastaasitoiminta, voidaan käyttää pääasiassa erilaisten tuumorien hoitamiseksi.

Esillä olevan keksinnön mukaisten kaavan I yhdisteiden valmistusmenetelmä on seuraava: A) alistetaan kaavan (II) i7 85269 «5 «6 fpr (II) R1 mukainen kumariinijohdannainen, jossa kaavassa Y on vety ja Rl, R5, Rg ja R7 merkitsevät samaa kuin yllä kaavan (I) yhteydessä, Mannich-reaktioon kaavan HNR3R4 mukaisen sekundaarisen amiinin kanssa, jossa kaavassa R3 ja R4 merkitsevät samaa kuin yllä kaavan (I) yhteydessä, liuottimen läsnäollessa noin 20*...120*C:n lämpötilassa ja valinnanvaraisesti muutetaan tämän jälkeen yhdiste, jossa on OH-ryhmä 7-ase-massa, yhdisteeksi, jossa R2 on muu kuin vety, hydrokarby-loinnilla käyttämällä yhdistettä, jolla on kaava R2X, jossa kaavassa R2 edustaa kaavan (I) yhteydessä määriteltyä hiilivety-ryhmää ja X edustaa halogeenia tai hydroksyyliryhmää, joka on esteröity rikkihapolla, rikkihapokkeella tai piiha-polla, tai alifaattisella sulfonihapolla, jossa on 1...7 hiiliatomia tai monosyklisellä aromaattisella sulfonihapolla, jolloin alkylointi suoritetaan liuottimessa ja emäksisen yhdisteen läsnäollessa.

B. Alistetaan Claisen- tai Pries-reaktioon kaavan III

K Ϊ5 l6 (III) R1°^Y^Sso

H

mukainen yhdiste, jossa kaavassa R3, R4, R5, Rg ja R7 merkitsevät samaa kuin yllä kaavan (I) yhteydessä ja R^ merkitsee substituoitua tai substituoimatonta hiilivetytähdet-tä.

C. Alistetaan Friedel-Crafts-reaktioon kaavan (IV) 18 85269

Se R, R4 P I 6 r3/ 2y^ li nnT 7 k U (IV)

H

mukainen yhdiste mainitun ryhmän Ri liittämiseksi, jossa kaavassa tähteillä Ri, R2, R3, R4, Rs, Re ja R7 on kaavan (I) yhteydessä esitetty merkitys.

Saatu suola muunnetaan valinnanvaraisesti suolakseen.

Yllä mainitussa menetelmässä A Mannich-reaktio voidaan suorittaa tunnetulla tavalla. Formaldehydiä voidaan käyttää sellaisenaan tai se voidaan muodostaa in situ, esimerkiksi käyttämällä aineita,jotka tuottavat formaldehydiä, kuten po-lymeroituja tai kondensoituja aldehydejä, esimerkiksi para-formaldehydiä tai heksametyleenitetramiinia. Mannich-reak-tiossa voidaan käyttää kaikkia suositeltuja tai kirjallisuudessa esitettyjä liuottimia. Sopivimpia liuottimia ovat ali-faattiset alkoholit, kuten 1-5 hiiliatomia sisältävät, tai alifaattiset karboksyylihapot, kuten 2-4 hiiliatomia sisältävät. Etenkin käytetään edullisesti etyylialkoholia tai etikkahappoa, joko sellaisenaan tai vettä sisältävänä.

Amiinia HNR3R4 voidaan käyttää sen vapaassa muodossa tai sen suolana, kuten hydrokloridina tai sulfaattina. Sekundäärisiä amiineja, jotka ovat etenkin sopiva yhdisteiden (I) valmistamiseksi, ovat dimetyyliamiini, dietyyliamiini, pyrrolidii-ni, morfoliini, piperidiini, 3-hydroksipiperidiini, 4-hyd-roksipiperidiini, N-etyylipiperatsiini ja N-hydroksietyyli-piperatsiini. Mannich-menetelmän mukainen kondensaatio suoritetaan yleensä noin 20 - 120eC:n lämpötilassa ja mieluummin noin 50 - 90eC:ssa.

Menetelmässä B yllä mainittu Ri kaavan III mukaisissa yhdisteissä voi olla esimerkiksi tyydyttämätön alifaattinen hyd- » 85269 rokarbyyliryhmä, etenkin alkenyyliryhmä, jossa on kaksoissi-dos beta- tai gamma-asemassa, kuten allyyliryhmä, joka on siirretty β-asemassa käyttämällä Claisen-reaktiota, joka suoritetaan sinänsä tunnetulla tavalla. Esimerkiksi lähtöyh-diste kuumennetaan sopivaan lämpötilaan, kuten 130 -230°C:seen liuottimen kanssa tai ilman sitä. Liuottimena voidaan käyttää tertiääristä aromaattista emästä, kuten di-metyylianiliiniä tai dietyylianiliiniä.

Rl voi kuitenkin merkitä myös substituoitua hydrokarbyyli-ryhmää, esimerkiski asyyliryhmää, kuten asetyyli-, propio-nyyli-, butyryyliryhmää jne. Tässä tapauksessa Fries-reakti-ota käytetään Ri-ryhmän siirtämiseksi 8-asemassa ja se suoritetaan tunnetulla menetelmällä, esimerkiksi sopivien kata-lysaattoreiden, kuten aluminiumkloridin läsnäollessa liuot-timessa, joka voi olla esimerkiksi hiilisulfidi tai hiili-tetrakloridi, huoneenlämpötilan ja liuottimen kiehumispisteen välillä olevassa lämpötilassa.

Yllä mainitussa menetelmässä C saadaan joitakin kaavan I mukaisia yhdisteitä, joissa Ri voi olla substituoitu tai subs-tituoimaton alifaattinen, aralifaattinen tai alisyklinen hydrokarbyyliryhmä, joka on liitetty 8-asemassa käyttämällä Friedel-Crafts-reaktiota tunnetulla menetelmällä.

Esimerkiksi sopiva johdannainen, joka sisältää R* ryhmän, kuumennetan ja sidotaan halogeeniin ja oksihydryyliin (haloidi, alkoholi) yhdisteellä IV sopivassa lämpötilassa, kuten 50 - 120*C:ssa, liuottimen tai katalysaattorin läsnäollessa.

Liuottimina voidaan käyttää hiilivetyjä, kuten petrolieette-riä, karbosyklisiä alifaattisia happoja, kuten etikkahappoa, haloideja tai orgaanisia sulfideja, kuten hiilisulfidia ja katalysaattoreina käytetään Lewis-happoja, kuten booritri-fluoridia, sinkkikloridia, aluminiumkloridia, ferrikloridia tai rikkihappokloridia.

Menetelmässä C voi merkitä myös kloori- tai bromiatomia. Tässä tapauksessa halogenointireaktio suoritetaan liittämäl- 20 8 5 269 13 kloori- tai bromiatomi tunnetulla aromaattisten yhdisteiden halogenoinnin menetelmällä. Esimerkiksi yhdiste IV käsitellään kloorilla tai bromilla ja jollakin niiden johdannaisista liuottimen läsnäollessa ja mahdollisesti myös katalysaattorin läsnäollessa sopivassa lämpötilassa.

Vaihtoehtoinen hiilivetyryhmän R2 liittäminen jonkin edellä mainitun menetelmän mukaisesti saatuihin kaavan IA mukaisiin yhdisteisiin voidaan suorittaa eetteröintireaktion avulla käyttämällä eetteröintiainetta, joka on johdettu R2~hydroksi alkoholista. Näitä eetteröintiaineita ovat esimerkiksi R2X-alkylointiaineet, joissa R2 merkitsee hiilivetyyryhmää, kuten on jo esitetty kaavan I yhteydessä, ja X merkitsee ryhmää, joka on johdettu hydroksyylin tai etenkin esterin, kuten vetyhappoesterin (ja tästä syystä halogeenin) tai epäorgaanisen hapon, kuten rikkihapon, rikkihapokkeen tai piihapon, tai orgaanisten sulfonihappojen, kuten alemmista alifaattisista, 1-7 hiiliatomia sisältävistä hiilivedyistä johdettujen sulfonihappojen, kuten metaanisulfoni-hapon tai aromaattisista hiilivedyistä, etenkin monosykli-sistä hiilivedyistä johdettujen sulfonihappojen, kuten para-tolueenisulfonihapon tai bentseenisulfonihapon funktionaalisesta muunnosta. X voi merkitä siten yleisesti halogeeniato-mia, etenkin klooria, bromia tai jodia tai alkyyli- tai aryylisulfonyylioksi-, kuten metyyli- tai etyylisulfonyyli-oksi- tai bentseeni- tai tolueenisulfonyylioksiryhmää.

Yllä mainittu esteröintireaktio, jota seuraava kaavio esittää, voidaan suorittaa tunnetulla tavalla. Yhdiste R2X saatetaan reagoimaan kaavan IA mukaisten yhdisteiden tai mahdollisesti myös niiden fenolisuolojen kanssa sopivassa liu-ottimessa.

2i 8 5269 R. R, R, R.

^YyV ^VvY’ -► hoAA/° Κ'·ΚΧ,ο/γ^>

Rl 1 bis R, 1

Reaktioseokseen tulisi lisätä sopivaa emäksistä yhdistettä, esimerkiksi epäorgaanista emästä, kuten alkali- tai maa-alkalimetallien hydraatteja tai emäksisiä suoloja, kuten natrium- tai kaliumkarbonaattia, tai tertiäärisiä orgaanisia emäksiä, kuten pyridiiniä, kinoliiniä, kollidiiniä tai Huenig-emästä.

Sopivimpia liuottimia edellä esitettyyn alkylointireaktioon ovat alifaattiset alkoholit, kuten sellaiset, jotka sisältävät 1-5 hiiliatomia, alifaattiset ketonit tai aproottiset liuottimet, etenkin voidaan käyttää asetonia, metyylietyyli-ketonia, dimetyylisulfoksidia ja sulfolaania.

Joissakin keksinnön mukaisten yhdisteiden valmistusmenetelmissä R2 voi merkitä hydroksyylin suojaryhmää, joka, on substituoitavissa vedyllä, so. 7-asemassa oleva hydroksyyli voidaan tilapäisesti suojata vastaavien menetelmien reaktioiden aikana ja vapauttaa se lopuksi. Tämä hydroksyyliryhmän tilapäinen suojaaminen voi tapahtua muuntamalla funktionaa-lisesti, kuten on esitetty kirjallisuudessa, etenkin este-röimällä tai eetteröimällä. Estereistä mainittakoon ne, jotka on valmistettu alifaattisten, aralifaattisten tai aromaattisten, 1-15 hiiliatomia sisältävien happojen, kuten edellä mainittujen, ja myös happojen kanssa, jotka muodostavat helposti saippuoitavia estereitä, esimerkiksi halogenoi-tujen alempien alifaattisten happojen, kuten trikloori- tai trifluorietikkahapon kanssa. Nämä esteriryhmät voidaan sitten saippuoida hydroksyyliryhmän tuottamiseksi hyvin tunne- 22 85269 tuilla menetelmillä, kuten alkalisella tai mahdollisesti happamella hydrolyysillä. Eetteristä voidaan käyttää te'rti-ääristen alifaattisten alkoholien, kuten tert-butyylialkoholin eettereitä, jotka voidaan hydrolysoida happamissa olosuhteissa. Alifaattisten alkoholien, kuten bentsyyli- tai nitrobentsyylialkoholin eettereitä voidaan myös valmistaa ja erottaa sitten pelkistyksen avulla tunnetulla tavalla. Samat suojaryhmät voivat toimia myös mahdollisesti tilapäisesti hydroksyyliryhmän R5 suojaamiseksi, joka vapautetaan sitten samalla tavalla. Itsenäisesti tunnetulla tavalla hydro-karbyylisubstituenteissa suojatussa muodossa läsnäolevat osat voidaan myös vapauttaa, so. muuntaa funktionaalisesti, milloin suojaryhmät on helposti eliminoitu. Vapaat funktionaaliset ryhmät voidaan vastaavasti, mikäli edullista, muuntaa niiden funktionaalisiksi johdannaisiksi. Funktionaalisen, vapaan tai muunnetun ryhmän muunto toiseksi funktionaaliseksi ryhmäksi, yleisen valmistusmenetelmän kohde, voidaan suorittaa kirjallisuudessa esitettyjen menetelmien mukaisesti.

Yllä olevien menetelmien mukaisesti saatavat yhdisteet voidaan eristää reaktioseoksesta tunnetulla tavalla, esimerkiksi uuttamalla orgaanisilla liuottimilla, kuten alifaattisil-la klooratuilla hydrokarbideilla, kuten metyleenikloridilla, kloroformilla, dikloorietaanilla, tai estereillä, kuten etyyliasetaatilla, butyyliasetaatilla jne.

Ennen reaktiotuotteiden eristämistä nämä voidaan muuntaa niiden suoloiksi, jotka voidaan sitten puhdistaa. Näistä suoloista on mahdollista saada reaktiotuotteita tunnetulla tavalla, esimerkiksi lisäämällä emästä, kuten alkalimetallin hydraattia tai ammoniumyhdistettä, tai sopivalla ioninvaih-timella.

Yllä olevissa menetelmissä käytetyt lähtöyhdisteet ovat hyvin tunnettuja samoin kuin menetelmät, millä ne valmistetaan. Esimerkiksi yhdisteet II, joita käytetään menetelmän A mukaisesti johdannaisten I ja IA valmistamiseksi, voidaan valmistaa kaavan 23 85269 s.

Ηγ*γΗ

HO'^y'^OH

R, mukaisista resorsinolijohdannaisista, joissa tähteillä ja R5 on kaavan I yhteydessä esitetty merkitys, kondensoimalla betakarbonyylihappoestereillä tai kumariini- tai kumariini-happoyhdisteistä, jotka ovat vapaita toivotuista substituen-teista, joihin nämä liitetään. Menetelmien B ja C mukaiset lähtöyhdisteet saadaan yleisesti Pechmannin tai vastaavasti Perkinin reaktioilla, kun näiden menetelmien lähtötuotteet voidaan saada resorsinoleista tai fluoriglusiineista, jotka on mahdollisesti substituoitu tai funktionaalisesti muunnettu tunnetuilla reaktioilla, kuten liittämällä ryhmä -CH2-NR3R4 menetelmässä A käytetyn kaltaisella Mannich-reaktiolla. Jos resorsiini- tai kumariinihappolähtöyhdisteet sisältävät reaktiivisia funktionaalisia karbonyyli-, kuten ketoniryhmiä etenkin, on sopivaa tai tarpeellista suojata ne ennen erilaisia reaktioita, kuten Mannich-tyyppistä konden-sointireaktiot.

Funktionaalisten karbonyyliryhmien suojaaminen suoritetaan esimerkiksi jollakin tunnetulla menetelmällä, esim. etylee-niglykolin vaikutuksessa vedettömissä olosuhteissa happamen katalysaattorin läsnäollessa. Kun Mannich-kondensaatio on suoritettu, funktionaaliset karbonyyliryhmät voidaan regeneroida hydrolyysillä happamessa vesipitoisessa liuottimessa.

Esillä olevan keksinnön mukaisia kaavan I (ja siten myös kaavan IA) kumariinijohdannaisia voidaan käyttää lääkeaineina farmaseuttisissa valmisteissa, jotka on tarkoitettu annettaviksi ihmisille tai eläimille lihaksensisäisesti, ihonalaisesti tai ihonsisäisesti, ruiskeiden muodossa tai letkun avulla suoneen. Nämä valmisteet voidaan siten valmistaa aktiivisten yhdisteiden liuoksiksi tai aktiivisten yhdistei- 24 85269 den jäädytyskuivatuiksi jauheiksi sekoitettaviksi yhden tai useamman täyteaineen tai laimentimen kanssa, jotka ovat sopivia farmaseuttisesti ja jotka sopivat yllä mainittuihin antotapoihin ja joilla on fysiologisten nesteiden kanssa yhteensopiva osmoottisuus.

Edelleen esillä olevan keksinnön mukaiset kaavan I (ja siten myös kaavan IA) terapeuttiset yhdisteet voivat olla nestemäisessä tai puolinestemäisessä muodossa ja ne voidaan antaa suun tai peräsuolen kautta tablettien, sokeripäällysteisten pillereiden, liivateoperkulaattien, suppositorioiden, pehmeiden liivatekapseleiden muodossa, joihin on sekoitettu farmaseuttisesti sopivia täyteaineita, jotka ovat sopivia tähän tarkoitukseen, tai voiteiden, salvojen tai suihkeiden muodossa paikalliseen, kuten ulkoiseen käyttöön. Esillä olevan keksinnön mukaiset valmisteet sisältävät yleensä 0,01 - 10 paino-% aktiivista aineosaa liuoksissa, suihkeissa, salvoissa ja voiteissa, ja 1 - 100, mielummin 5-50 paino-% aktiivista aineosaa kiinteissä muodoissa olevissa valmisteissa. Annettava annostus riippuu määräyksestä, halutusta vaikutuksesta ja antotavasta.

Valmisteet voidaan antaa suoraan eläimille tai ihmisille jollakin halutulla antotavalla. Farmaseuttisia koostumuksia voidaan valmistaa kasvainpatologioiden tai verihiutalehyper-aggregaatiopatologioiden hoitamiseksi.

Farmaseuttiset koostumukset valmistetaan esim. käyttämällä lasista valmistettua kaksoissäiliötä. Ensimmäinen sisältää aktiivisen aineen jäädytyskuivatun jauheen muodossa yhdessä farmaseuttisesti sopivan täyteaineen kanssa. Toinen säiliö on täytetty liuottimen halutulla määrällä. Juuri ennen käyttöä kahden pullon sisällöt sekoitetaan ja aktiivinen aineosa, joka on jäädytyskuivatun jauheen muodossa, liuotetaan nopeasti injisoitvan liuoksen valmistamiseksi. Esillä olevassa keksinnössä parhaimpana pidetty farmaseuttinen muoto muodostuu säiliöstä, jossa aktiivinen aineosa on jäädy-tyskuivattu jauhe, koska aktiivinen aineosa on osoittautunut stabiilimmaksi kuivassa, jauhetussa muodossa kuin nesteenä.

25 8 5 269

Farmaseuttisia valmisteita voidaan käyttää oraalisesti, eli suun kautta annettuina, kasvainpatologioissa tai verihiuta-lehyperaggregaatioon liittyvissä patologioissa. Valmisteet voidaan valmistaa myös mahanestettä kestävissä muodoissa.

Esillä olevaan keksintöön kuuluvat myös yllä mainittujen menetelmien muunnelmat, joissa menetelmät katkaistaan määrätyssä pisteessä tai joissa väliyhdistettä käytetään lähtöyh-disteenä, minkä jälkeen suoritetaan seuraavat vaiheet, tai joissa lähtötuotteet valmistetaan in situ. Seuraavat esimerkit havainnollistavat esillä olevan keksinnön tuotteita, valmistusmenetelmiä ja farmaseuttisia valmisteita . Mikäli toisin ei ole esitetty, tässä käytetyt prosenttimäärät ovat painoprosentteja ja lämpötilat Celsius-asteita.

Esimerkki 1 4-metyyll-6-dimetyyliaminometvvll-7-hydroksi-8-allyylikuma-rilnin hydrokloridi. 30 g 4-metyyli-7-hydroksi-8-allyyliku-mariiniä sekoitetaan etanolin (350 ml), dimetyyliamiinin 33%:sen vesipitoisen liuoksen (24,3 g) ja paraformaldehydin (5,5 g) kanssa. Seosta kuumennetaan palautusjäähdyttäen 48 tuntia jatkuvasti sekoittaen; etanoli haihdutetaan sitten tyhjössä. Jäännös otetaan etyyliasetaattiin ja orgaaninen liuos uutetaan IN kloorivetyhapolla. Hapan vesipitoinen kerros tehdään alkaliseksi natriumbikarbonaatilla ja uutetaan etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattiuute kuivataan vedettömän natriumsulfaatin päällä ja suodattamisen jälkeen konsentroidaan pieneen tilavuuteen; kiteisen hydrokloridin saostuminen saadaan aikaan lisäämällä kaasumaista kloorivetyhappoa. Sakka erotetaan ja kiteytetään etanolista; kun kiteet on suodatettu ja kuivattu, saadaan 4-metyyli-6-dimetyyliaminoetyyli- 7-hydroksi-8-allyylikumariinin hydrokloridi.

Sp. 216*, Rf 0,46 [ohutkerroskromatografia (silika*) kloro-formi-metanoli-etikkahappo-vesi (25 + 15 + 4 + 2)].

26 8 5269

Esimerkki 2 4-metyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli)-7-hydroksi-8-allvvliku-marlinln hvdrokloridl. 32,4 g 4-metyyli-7-hydroksi-8-allyy-likumariinia sekoitetaan etanolin (300 ml), morfoliinin (13 g) ja paraformaldehydin (4,5 g) kanssa. Seos kuumennetaan 60*:seen 48 tunnin kuluessa sekoittaen samalla keskeytymättä; etanoli haihdutetaan sitten tyhjössä. Natriumbikarbonaatin kyllästettyä liuosta lisätään jäännökseen ja seos uutetaan sitten metyleenikloridilla. Orgaaninen liuos uutetaan 3 kertaa IN kloorivetyhapolla ja vesipitoinen hapan kerros neutraloidaan vesipitoisella 32%:sella ammoniumhyd-roksidilla; näin muodostettu liuos suodatetaan sitten. Sakka kuivataan tyhjössä ja käsitellään sitten etyyliasetaatilla; kiteisen hydrokloridin saostus saadaan aikaan lisäämällä kaasumaista kloorivetyhappoa. Sakka erotetaan ja kiteytetään sitten etanolilla; kiteiden suodattamisen ja kuivattamisen jälkeen saadaan 4-metyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli)-7-hyd-roksi-allyylikumariinin hydrokloridi.

Sp. 234*, Rf 0,78 [ohutkerroskromatografia (silika) kloro-formi-metanoli-vesi-ammoniumhydroksidi 32% (130 + 25 + 2,8 + 0,5)].

Esimerkki 3 4-metyyli-6-Γ Γ4-(2-hydroksietyyli)-1-plperatsinyylilmetyy-in-7-hydroksi-8-allyylikumariinln dikloorihydraattl. 21,6 g 4-metyyli-7-hydroksi-8-allyylikumariinia sekoitetaan etanolin (250 ml), l-(2-hydroksietyyli)piperatsiinin (16,9 g) ja formaldehydin 35%:sen vesipitoisen liuoksen (11,2 g) kanssa. Seos kuumennetaan 70°:seen 48 tunnin kuluessa sekoittamalla samalla keskeytymättä; etanoli haihdutetaan sitten tyhjössä. Natriumbikarbonaatin vesipitoinen liuos lisätään sitten jäännökseen ja seos uutetaan metyleenikloridilla. Orgaaninen liuos uutetaan 3 kertaa IN kloorivetyhapolla ja hapan vesipitoinen kerros tehdään alkaliseksi natriumbikarbonaatilla ja uutetaan tolueenilla. Tolueeniliuos kuivataan vedettömän natriumsulfaatin päällä, suodatetaan ja liuotin eliminoidaan 27 8 5 2 6 9 sitten tyhjössä. Jäännös otetaan etyyliasetaattiin ja kiteisen hydrokloridin muodostuminen saadaan aikaan lisäämällä kaasumaista kloorivetyhappoa. Sakka erotetaan ja kiteytetään 95%:sella etanolilla; kiteiden suodattamisen ja kuivattamisen jälkeen saadaan 4-metyyli-6-[[4-(2-hydroksietyyli)-l-piperatsinyyli]metyyli]-7-hydroksi-8-allyylikumariinin di-kloorihydraatti.

Sp. 201e, Rf 0,52 [ohutkerroskromatografia (silika) kloro-formi-metanoli-vesi-32%:nen ammoniumhydroksidi (130 + 25 + 2,8 + 0,5)].

Esimerkki 4 Γ4-metyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli)-8-allyyllkumarilni--7-yyli]-oksietikkahapon etyyliesteri. 16 g 4-metyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli)-7-hydroksi-8-allyylikumariiniä sekoitetaan tolueenin (300 ml) ja natriumhydridin (1,25 g) kanssa. Seos kuumennetaan asteittain 60*C:seen sekoittaen samalla keskeytymättä. 30 minuutin kuumentamisen jälkeen liuotin haihdutetaan tyhjössä. Jäännös liuotetaan 100 ml:11a dlme-tyylisulfoksidia ja tähän liuokseen, joka pidetään huoneenlämpötilassa, lisätään 9,8 g etyyliklooriasetaattia. 12 tunnin kuluttua lisätään 300 ml tolueenia ja orgaaninen seos pestään vedellä. Tolueeniliuos haihdutetaan pieneen tilavuuteen tyhjössä ja kiteisen hydrokloridin muodostuminen saadaan aikaan lisäämällä kaasumaista kloorivetyhappoa. Sakka erotetaan ja kiteytetään sitten etanolista. Kiteiden suodattamisen ja kuivattamisen jälkeen saadaan 4-metyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli )-(etoksyyli-karbonyylimetoksi)-8-allyyliku-mariinin hydrokloridi.

Sp. 176*C, Rf 0,85 [ohutkerroskromatografia (silika) kloro-formi-metanoli-etikkahappo-vesi (25 +15+4+2)].

28 85269

Esimerkki 5 4-metyyll-6-(4-morfolinvvllmetyyll)-7-allvvlloksl-8-allvvll-kumarlinl(N)hydrokloridi. 16 g 4-metyyli-6-(4-morfolinyyli-metyyli)-7-hydroksi-8-allyylikumariinia käsitellään esimerkissä 4 esitetyllä tavalla hydrokloridin saostumiseen asti.

6,1 g allyylibromidia käytetään etyyliklooriasetaatin sijasta. Sakka erotetaan ja kiteytetään etanolista. Kiteiden suodattamisen ja kuivattamisen jälkeen saadaan 4-metyyli-6-(morfolinyylimetyyli)-7—allyylioksi-8-allyylikumariinin hydrokloridi.

Sp. 203eC, Rf 0,76 [ohutkerroskromatografia (silika) kloro-formi-metanoli-vesi-32-%:nen ammoniumhydroksidi (130 + 25 + 2,8 + 0,5)].

Esimerkki 6 2-Γ4-metyyll-6-(4-morfollnyyllmetyyli)-8-allyylikumarin-7-yyin-oksi-2-metyyllpropionihapon etyyllesterln hydrokloridi . 9,5 g 4-metyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli)-7-hydroksi-8-allyyli-kumariiniä sekoitetaan tolueenin (300 ml) ja nat-riumhydridin (0,8 g) kanssa. Seos kuummennetaan asteittain 60eC:seksi sekoittamalla samalla keskeytymättä. 30 minuuttia kestävän kuumentamisen jälkeen liuotin haidutetaan tyhjössä. Jäännös liuotetaan 100 ml:11a dimetyylisulfoksidia ja 5,9 g etyyli—bromi-isobutyraattia lisätään liuokseen, joka pidetään 60*C:n lämpötilassa. 48 tunnin kuluttua lisätään 300 ml tolueenia ja orgaaninen seos pestään vedellä. Tolueeniliuos vähennetään pieneen tilavuuteen tyhjössä ja kiteisen hydrol-koridin muodostuminen saadaan aikaan lisäämällä kaasumaista kloorivetyhappoa. Sakka erotetaan ja kiteytetään etanolilla. Kiteiden suodattamisen ja kuivattamisen jälkeen saadaan 2--[4-metyyli-6-(4-morfolimyylimetyyli)-8-allyylikumarin-7--yyli]-oksi-2-metyylipropionihapon etyyliesterin hydrokloridi.

Sp. 171*C, Rf 0,79 [ohutkerroskromatografia (silika) kloro-formi-metanoli-vesi-32-%:nen ammoniumhydroksidi (130 +25+ 2,8+0,5)].

Esimerkki 7 29 85269 4-fenyyll-6-(4-morfollnyyllmetyyll)-7-hydroksl-8-allyyll-kumarllnln hydroklorldl. 20 g 4-fenyyli-7-hydroksi-8-allyy-likumariiniä sekoitetaan 80%:sen vesipitoisen etanolin (200 ml), morfoliinin (6,3 g) ja 35%:sen vesipitoisen formaldehydit iuoksen (6,2 g) kanssa. Käytetään esimerkissä 1 esitettyä menetelmää hydrokloridin saostumiseen asti. Sakka erotetaan ja kiteytetään etanolilla; kiteiden suodattamisen ja kuivattamisen jälkeen saadaan 4-fenyyli-6-(4-morfolinyy-limetyyli)-7-hydroksi-8-allyylikumariinin hydrokloridi.

Sp. 208°, Rf 0,87 [ohutkerroskromatografia (silika) kloro-formi-metanoli-vesi-32%:nen ammoniumhydroksidi (130 + 25 + 2,8 + 0,5)].

Esimerkki 8 4-fenyyli-6-Γ Γ4-(2-hydroksietyyli)-1-piperatsinyyli ]metyy-in-7-hydroksl-8-allvvllkumariinin dlhvdrokloridi. 15 g 4-fe-nyyli-7-hydroksi-8-allyylikumariiniä sekoitetaan etanolin (200 ml), l-(2-hydroksietyyli)piperatsiinin (7 g) ja 35%:sen vesipitoisen formaldehydiliuoksen (4,6 g) kanssa. Seosta kuumennetaan palautusjäähdyttäen 48 tuntia pitämällä samalla jatkuvassa sekoituksessa. Etanoli haihdutetaan sitten tyhjössä. Jäännös otetaan etyyliasetaattiin ja orgaaninen liuos uutetaan IN kloorivetyhapolla. Vesipitoinen hapan kerros tehdään alkaliseksi natriumbikarbonaatilla; muodostuu suspensio, joka suodatetaan sitten. Sakka tyhjökuivatetaan ja sitten se käsitellään etyyliasetaatilla; kiteisen hydrokloridin saostuminen saadaan aikaan lisäämällä vesipitoista kloorivetyhappoa. Sakka erotetaan ja kiteytetään etanolilla; kiteiden suodattamisen ja kuivattamisen jälkeen saadaan . . 4-fenyyli-6-[[4-(2-hydroksietyyli)-1-piperatsinyyli]metyy- li]-7-hydroksi-allyylikumariinin dihydrokloridi.

Sp. 250·, Rf 0,74 [ohutkerroskromatografia (silika) kloro-formi-metanoli-etikkahappo-vesi (25 +15+4+2)].

30 8 5 2 6 9

Esimerkki 9 4-fenyyli-6- (4-morfolinyylimetyyli) -7-allyylioksi-e-allyyli-kumarilnihydrokloridi. 20 g 4-fenyyli-6-(4-morfolinyyli-me-tyyli)-7-hydroksi-8-allyylikumariinia sekoitetaan tolueenin (300 ml) ja natriumhydridin (1,35 g) kanssa. Seos kuumennetaan asteittain 60*:seen sekoittamalla samalla keskeytymättä. 30 minuuttia kestävän kuumentamisen jälkeen liuotin haihdutetaan tyhjössä. Jäännös liuotetaan 100 ml:11a dime-tyylisulfoksidia ja 6,4 g:11a allyylibromidia; 12 tunnin kuluttua lisätään 300 ml tolueenia ja orgaaninen seos pestään vedellä. Tolueeniliuos uutetaan IN kloorivetyhapolla ja vesipitoinen liuos tehdään alkaliseksi natriumkarbonaatilla ja sitten se uutetaan metyylikloridilla. Metyleenikloridiliuos kuivataan vedettömän natriumsulfaatin päällä ja liuotin eliminoidaan tyhjössä suodattamisen jälkeen. Jäännös otetaan tolueeniin ja kiteisen hydrokloridin muodostuminen saadaan aikaan lisäämällä kaasumaista kloorivetyhappoa. Sakka kootaan ja sitten se kiteytetään etanolilla; kiteiden suodattamisen ja kuivattamisen jälkeen saadaan 4-fenyyli-6-(4-morfo-linyyli-metyyli)-7-allyylioksi-8-allyylikumariinin hydroklo-ridi.

Sp. 208*, Rf 0,87 [ohutkerroskromatografia (silika) kloro-formi-metanoli-vesi-32%:nen ammoniumhydroksidi (130 + 25 + 2,8 + 0,5)].

Esimerkki 10 Γ4-fenyyll-6-(4-morfollnyyllmetyyll)-8-allyyllkumarin-7-vy-liloksi-etikkahapon etyyliesterln hydrokloridl. 24 g 4-fe-nyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli)-7-hydroksi-8-allyylikumarii-niä sekoitetaan tolueenin (300 ml) ja natriumhydridin (1,6 g) kanssa. Seos kuumennetaan asteittain 60°:seen sekoittamalla samalla keskeytymättä; 30 minuuttia kestävän kuumentamisen jälkeen liuotin haihdutetaan tyhjössä. Jäännös liuotetaan 100 ml:11a dimetyylisulfoksidia ja 8 g etyylikloridi-asetaattia lisätään liuokseen, joka pidetään 60*:n lämpötilassa; 24 tunnin kuluttua lisätään 300 ml tolueenia ja or- 3i 85269 gaaninen seos pestään vedellä. Tolueeniliuos uutetaan IN kloorivetyhapolla ja hapan vesipitoinen liuos tehdään alka-llseksi natriumbikarbonaatilla. Näin muodostuu suspensio, joka suodatetaan sitten. Sakka tyhjökuivatetaan ja sitten otetaan tolueeniin; kiteisen hydrokloridin saostuminen saadaan aikaan lisäämällä kaasumaista kloorivetyhappoa. Sakka erotetaan ja kiteytetään sitten etanolilla; kiteiden suodattamisen ja kuivattamisen jälkeen saadaan [4-fenyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli)-8-allyylikumarin-7-yyli]oksi-etikkaha-pon etyyliesterin hydrokloridi.

Sp. 108e, Rf 0,88 [ohutkerroskromatografia (silika) kloro-formi-metanoli-vesi-32%:nen ammoniumhydroksidi (130 + 25 + 2,8 + 0,5) ].

Esimerkki 11 2-Γ 4-fenyyll-6-(4-morfollnyylimetyyli)-8-allyyllkumarin-7-yyinoksl-2-metvvllproplonlhapon etyyliesterin hydrokloridi. 20 g 4-fenyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli)-7-hydroksi-8-allyy-liku-mariiniä sekoitetaan tolueenin (300 ml) ja natriumhyd-ridin (1,35 g kanssa, seos kuumennetaan asteittain 60*:seen sekoittamalla samalla jatkuvasti. 30 minuutin kuumentamisen jälkeen liuotin haihdutetaan tyhjössä. Jäännös liuotetaan 100 ml:11a dimetyylisulfoksidia ja 11,7 g etyyli-a-bromi-isobutyraattia lisätään liuokseen, joka pidetään 60*:n lämpötilassa. 72 tunnin kuluttua lisätään 300 ml tolueenia orgaaniseen seokseen, joka pestään sitten vedellä. Tolueeniliuos uutetaan IN kloorivetyhapolla ja vesipitoinen liuos tehdään alkaliseksi natriumbikarbonaatilla; näin muodostuu suspensio, joka suodatetaan tämän jälkeen. Sakka tyhjökuivatetaan ja sitten se otetaan tolueeniin; kiteisen hydrokloridin saostuminen saadaan aikaan lisäämällä kaasumaista kloorivetyhappoa. Sakka erotetaan ja kiteytetään etanolisella liuoksella lisäämällä etyyliasetaattia; kiteiden suodattamisen ja kuivattamisen jälkeen saadaan 2-[4-fenyyli-6-(4-mor-folinyy-limetyyli)-8-allyylikumarin-7-yyli]oksi-2-metyyli-propionihapon etyyliesterin hydrokloridi.

Sp. 191*, Rf 0,83 [ohutkerroskromatografia (silika) kloro- 32 8 5269 formi-metanoli-vesi-32%:nen ammoniumhydroksidi (130 + 25 + 2,8 + 0,5)].

Esimerkki 12 4-metyyll-6-(1-pyrrolldlnyyllmetyyll)-7-hydroksl-8-allvyll-kumarllnln hydroklorldl. 25 g 4-metyyli-7-hydroksi-8-allyy-likumariiniä sekoitetaan absoluuttisen etanolin (300 ml), pyrrolidiinin (8,3 g) ja paraformaldehydin (3,4 g) kanssa. Menettely on sama kuin esimerkissä 1 hydrokloridin saostumi-seen asti. Sakka erotetaan ja sitten se kiteytetään etanolilla; kiteiden suodattamisen ja kuivattamisen jälkeen saadaan 4-metyyli-6-(l-pyrrolidinyylimetyyli)-7-hydroksi-8-al-lyylikumariinin hydroklorldl.

Sp. 116°, Rf 0,62 [ohutkerroskromatografia (silika) kloro-formi-metanoli-etikkahappo-vesi (25 + 15 + 4 + 2)].

Esimerkki 13 4-metvyll-6-dietyyllamlnometyyll-7-hydroksl-8-allyyllkuma-rllnln hydroklorldl. 25 g 4-metyyli-7-hydroksi-8-allyyliku-mariiniä sekoitetaan etanolin (350 ml), dietyyliamiinin (8,9 g) ja paraformaldehydin (3,9 g) kanssa. Seosta kuumennetaan palautusjäähdyttäen 60 tuntia pitäen samalla jatkuvassa sekoituksessa; etanoli haihduteteaan sitten tyhjössä. Jäännös otetaan etyyliasetaattiin ja orgaaninen liuos uutetaan IN kloorivetyhapolla. Vesipitoinen hapan kerros tehdään alkaliseksi natriumbikarbonaatilla ja sitten se uutetaan me-tyleenikloridilla. Metyleenikloridiliuos kuivataan vedettömän natriumsulfaatin päällä, suodatetaan ja sitten liuotin eliminoidaan tyhjössä. Jäännös otetaan etyyliasetaattiin ja kiteisen hydrokloridin muodostuminen saadaan aikaan kaasumaisella kloorivetyhapolla. Sakka erotetaan ja kiteytetään sitten isopropanolilla; kiteiden suodattamisen ja kiteyttä-misen jälkeen saadaan 4-metyyll-6-dietyyliaminometyyli-7-hydroksi-8-allyylikumariinin hydroklorldl.

Sp. 188e, Rf 0,72 [ohutkerroskromatografia (silika) kloro-formi-metanoli-etikkahappo-vesi (25 + 15 + 4 + 2)].

Esimerkki 14 33 85269 4-metvvll-6-(1-piperldyyllmetyyll)-7-hydroksl-8-allyyli-kumarllnln hydroklorldl. 25 g 4-metyyll-7-hydroksi-8-allyy-likumariiniä sekoitetaan etanolin ( 300 ml), piperldllnln (9,9 g) ja paraformaldehydln (3,4 g) kanssa. Seosta kuumennetaan palautusjäähdyttäen 96 tuntia pitäen samalla jatkuvassa sekoituksessa. Etanoli haihdutetaan tyhjössä, minkä jälkeen menettely on sama kuin esimerkissä 8 hydroklorldln saostumlseen asti. Sakka erotetaan ja sitten se kiteytetään etanolilla, kiteiden suodattamisen ja kuivattamisen jälkeen saadaan 4-metyyli-6-(1-piperidyylimetyyli)-7-hydroksi-8-allyyli-kumariinin hydroklorldl.

Sp. 234·, Rf 0,84 [ohutkerroskromatografia (silika) kloro-formi-metanoli-vesi-32%:nen ammoniumhydroksidi (130 + 25 + 2,8 + 0,5) ].

Esimerkki 15 4-metyyll-6-f(4-hydroksl-l-plperldvvll)metvvlll-7-hydrok-sl-8-allyyllkumarllnln hydroklorldl. 30 g 4-metyyli-7-hyd-roksi-8-allyylikumariiniä sekoitetaan etanolin (300 ml), 4-hydroksipiperidiinin (14,1 g) ja paraformaldehydln (4,2 g) kanssa. Menettely on sama kuin esimerkissä 8 hydroklorldln saostumlseen asti. Sakka erotetaan ja sitten se kiteytetään etanolilla, kiteiden suodattamisen ja kuivattamisen jälkeen saadaan 4-metyyli-6-[(4-hydroksi-l-piperidyyli)metyyli]- 7-hydroksi-8-allyylikumariinin hydroklorldl.

Sp. 252°, Rf 0,55 [ohutkerroskromatografia (silika) kloro-formi-metanoli-etikkahappo-vesi (25 + 15 + 4 + 2)].

Esimerkki 16 4-metyyll-6-r(3-hydroksl-l-plperldyyll)metyyin-7-hydrok-sl-8-allyyllkumarllnln hydroklorldl. 30 g 4-metyyli-7-hyd-roksi-8-allyylikumariiniä sekoitetaan etanolin (300 ml), 3-hydroksipiperidiinin (14,1 g) ja paraformaldehydln (4,2 g) kanssa. Seosta kuumennetaan palautusjäähdyttäen 24 tuntia 34 85269 pitäen samalla jatkuvassa sekoituksessa. Etanoli haihdutetaan tyhjössä ja menettely on sitten sama kuin esimerkissä 13 hydrokloridin muodostumiseen asti. Sakka erotetaan ja sitten etanolista kiteytetään liuos lisäämällä etyyliasetaattia; kiteiden suodattamisen ja kuivattamisen jälkeen saadaan 4-metyyli-6-[(3-hydroksi-l-piperidyyli)metyyli]- 7-hydroksi-8-allyylikumariinin hydrokloridi.

Sp. 184°, Rf 0,46 [ohutkerroskromatografia (silika) metylee-nikloridi-etyyliasetaatti-metanoli (70 + 30 + 5)].

Esimerkki 17 3-(2-dletyyliamlnoetyyli)-4-metyyli-6-(4-morfollnvylimetyy-11)-7-hydroksi-8-kloorlkumarllnln dlhydroklorldl. 6,19 g 3-(2-dietyyliaminoetyyli)-4-metyyli-7-hydroksi-8-kloorikuma-riiniä sekoitetaan etanolin (200 ml), morfoliinin (3,5 g) ja 35%:sen vesipitoisen formaldehydin (1,7 g) kanssa. Seosta kuumennetaan palautusjäähdyttäen 24 tuntia pitäen samalla jatkuvassa sekoituksessa. Etanoli haihdutetaan sitten tyhjössä ja jäännös otetaan etyyliasetaattiin; näin muodostuu suspensio, joka suodatetaan sitten; orgaaninen liuos uutetaan IN kloorivetyhapolla. Vesipitoinen hapan kerros tehdään alkaliseksi natriumbikarbonaatilla ja sitten se uutetaan me-tyleenikloridilla. Metyleenikloridiliuos kuivataan vedettömän natriumsulfaatin päällä ja suodattamisen jälkeen liuotin eliminoidaan tyhjössä. Jäännös otetaan etyyliasetaattiin ja kiteisen hydrokloridin muodostuminen saadaan aikaan lisäämällä kaasumaista kloorivetyhappoa. Sakka erotetaan ja kiteytetään 95%:sesta etanolista; kiteiden suodattamisen ja kuivattamisen jälkeen saadaan 3-(2-dietyyliaminoetyyli)-4-metyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli)-7-hydroksi-8-kloorikuma-riinin dihydrokloridi.

Sp. 174·, Rf 0,56 [ohutkerroskromatografia (silika) kloro-formi-metanoli-vesi-32%:nen ammoniumhydroksidi (130 + 25 + 2,8 + 0,5)].

35 85269

Esimerkki 18 Γ 3-(2-dletyyllamlnoetvvll)-4-metyyll-6-(4-morfolinyylimetvv-ll)-8-kloorlkumarln-7-yyinoksletlkkahapon etyyllesterln di-hydrokloridi. 18 g 3-(2-dietyyliaminoetyyli)-4-metyyli-6-(4-morfollnyyllmetyyll)-7-hydroksi-8-kloorikumariiniä sekoitetaan asetonin (300 ml), kaliumkarbonaatin (12,2 g) ja etyy-liklooriasetaatin (5,4 g) kanssa; seos kuumennetaan asteittain kiehumispisteeseen pitäen samalla jatkuvassa sekoituksessa ja sitten sitä keitetään palautusjäähdyttäen 24 tuntia. Liuotin haihdutetaan sitten tyhjössä. Jäännös otetaan 300 ml:aan tolueenia ja seos käsitellään vedellä. Tolueeni-kerros erotetaan ja sitten se uutetaan IN kloorivetyhapolla; vesipitoinen hapan liuos tehdään alkaliseksi natriumbikarbonaatilla; näin muodostuu suspensio, joka suodatetaan sitten. Sakka tyhjökuivatetaan ja sitten se otetaan tolueeniin; kiteisen hydrokloridin muodostuminen saadaan aikaan lisäämällä kaasumaista kloorivetyhappoa.

Sakka erotetaan ja kiteytetään etanolista; kiteiden suodattamisen ja kuivattamisen jälkeen saadaan [3-(2-dietyyliami-noetyyli)-4-metyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli)-8-kloorikuma-rin-7-yyli]oksietikkahapon etyyliesterin dihydrokloridi.

Sp. 1820 , Rf 0,62 [ohutkerroskromatografia (silika) kloro-formi-metanoli-etikkahappo-vesi (25 + 15 + 4 + 2)].

Esimerkki 19 3-(2-dletyyllamlnoetyyli)-4-metyyli-6-(4-morfollnyyllmetyv-li)-7-allyylloksl-8-kloorlkumarilnin hydroklorldl. 16 g 3-(2-dietyyliaminoetyyli)-4-metyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli )-7-hydroksi-8-kloorikumariiniä sekoitetaan asetonin (300 ml), kaliumkarbonaatin (10,8 g) ja allyylibromidin (4,8 g) kanssa. Menettely on sitten sama kuin esimerkissä 18 hydrokloridin saostumiseen asti. Sakka erotetaan ja kiteytetään etanolisesta liuoksesta lisäämällä etyylieetteriä; kiteiden suodattamisen ja kuivattamisen jälkeen saadaan 3-(2-dietyyliaminoetyyli)-4-metyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli)-7-allyylioksi-8-kloorikumariinin hydrokloridi.

36 85269

Sp. 150*, Rf 0,35 [ohutkerroskromatografia (silika) kloro-formi-metanoli-etikkahappo-vesi (25 + 15 + 4 + 2)].

Esimerkki 20 2-Γ 3-(2-dletvvllamlnoetyyll)-4-metyyll-6-(4-morfolinvvllme-tvyll)-8-kloorlkumarln-7-yyinoksl-2-metyyllproplonlhapon etyyllesterln dihydrokloridi. 16 g 3-(2-dietyyliaminoetyy-11)-4-metyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli)-7-hydroksi-8-kloori-kumariiniä sekoitetaan tolueeniin (300 ml) ja natriumhydri-din (1 g) kanssa; seos kuumennetaan asteittain 60*:n lämpötilaan pitämällä samalla jatkuvassa sekoituksessa; 30 minuutin kuumentamisen jälkeen liuotin haihdutetaan tyhjössä. Jäännös liuotetaan 100 ml;11a dimetyylisulfoksidia ja 7, 6 g etyyli- -bromi-isobutyraattia lisätään liuokseen, joka pidetään huoneenlämpötilassa; 48 tunnin kuluttua lisätään 300 ml tolueenia ja orgaaninen seos pestään vedellä. Tolueeniliuos uutetaan IN kloorivetyhapolla ja hapan vesipitoinen liuos uutetaan metyleenikloridillä sen jälkeen, kun se on tehty alkaliseksi natriumkarbonaatilla. Metyleenikloridiliuos kuivataan vedettömän natriumsulfaatin päällä, suodatetaan ja liuotin eliminoidaan sitten tyhjössä. Jäännös otetaan tolueeniin ja kiteisen hydrokloridin muodostuminen saadaan aikaan lisäämällä kaasumaista kloorivetyhappoa. Sakka erotetaan ja kiteytetään etanolista; kiteiden suodattamisen ja kuivattamisen jälkeen saadaan 2-[3-(2-dietyyliaminoetyyli)- 4-metyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli)-8-kloorikumarin-7-yy-li]oksi-2-metyylipropionihapon etyyliesterin dihydrokloridi. Sp. 148*, Rf 0,51 [ohutkerroskromatografia (silika) kloro-formi-metanoli-etikkahappo-vesi (25 + 15 + 4 + 2)].

Esimerkki 21 4-metyyll-6-(4-morfollnyyli)-7-hydroksi-8-kloorlkumarllnln hydrokloridl. 20 g 4-metyyli-7-hydroksi-8-kloorikumariinlä sekoitetaan etanolin (300 ml), morfoliinin (16,5 g) ja 35%:sen vesipitoisen formaldehydiliuoksen (8 g) kanssa. Seosta keitetään palautusjäähdyttäen 48 tuntia pitämällä sa- 37 85269 maila jatkuvassa sekoituksessa ja 12 tunnin kuluttua saadaan suspensio, joka suodatetaan sitten. Sakka liuotetaan mety-leenlklorldlln ja orgaaninen liuos uutetaan vesipitoisella 10%:n etlkkahapon liuoksella; orgaaninen liuos uutetaan sitten (3 kertaa) IN kloorlvetyhapolla. Vesipitoinen kloorive-tykerros tehdään alkaliseksi natriumbikarbonaatilla; näin muodostuu suspensio, joka suodatetaan sitten. Sakka tyhjö-kuivatetaan ja sitten se käsitellään etyyliasetaatilla; kiteisen hydrokloridin saostuminen saadaan aikaan lisäämällä kaasumaista kloorivetyhappoa. Sakka erotetaan sitten ja kiteytetään metanolista. Kiteiden suodattamisen ja kuivattamisen jälkeen saadaan 4-metyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli)-7-hydroksi-8-kloorikumariinin hydrokloridi.

Sp. 227°, Rf 0,80 [ohutkerroskromatografia (silika) kloro-formi-metanoli-etikkahappo-vesi (25 +15+4+2)].

Esimerkki 22 4-metvvll-6-dletvvllamlnometyyli-7-hydroksi-8-kloorlkumarli-nln hydrokloridi. 21 g 4-metyyli-7-hydroksi-8-kloorikumarii-niä sekoitetaan etanolin (180 ml), kloroformin (20 ml), di-etyyliamiinin (9,5 g) a 35%:sen vesipitoisen formaldehydi-liuoksen (11,2 g) kanssa. Seosta keitetään palautusjäähdyt-täen 20 tuntia pitäen samalla jatkuvassa sekoituksessa; etanoli ja kloroformi haihdutetaan tyhjössä. Jäännös liuotetaan metyleeniklori-etyyliasetaatti-metanoli-seoksessa (7 + 3 + 1) ja liuosta käytetään kromatografiseen erotukseen silikal-la eluoimalla liuottimien samalla seoksella. Näin saadaan 4-metyyli-6-dietyyliaminometyyli-7-hydroksi-8-kloorikumarii-ni. Se käsitellään sitten etyyliasetaatilla ja sitten lisättäessä kaasumaista kloorivetyhappoa muodostuu kiteinen hydrokloridi. sakka erotetaan ja kiteytetään etyyliasetaatista. Kiteiden suodattamisen ja kuivattamisen jälkeen saadaan 4-metyyli-6-dietyyliaminometyyli-7-hydroksi-8-kloorikumarii-nin hydrokloridi.

Sp. 202*, Rf 0,67 [ohutkerroskromatografia (silika) kloro-formi-metanoli-etikkahappo-vesi (25 + 15 + 4 + 2)].

Esimerkki 23 38 8 5269 4-fenyyll-6-(4-morfolinvvllmetvvli)-7-hydroksi-8-kloorikuma-rlinin hydrokloridi. 20 g 4-fenyyli-7-hydroksi-8-klooriku-mariiniä sekoitetaan etanolin (300 ml), morfoliinin (12,1 g) ja paraformaldehydin (4,2 g) kanssa. Seosta keitetään palautus jäähdyttäen 96 tuntia pitämällä samalla jatkuvassa sekoituksessa; se saatetaan huoneenlämpötilaan ja 12 tunnin kuluttua saadaan suspensio, joka sitten suodatetaan. Sakka liuotetaan IN kloorivetyhappoon ja muodostuva liuos uutetaan (3 kertaa) metyleenikloridilla. Liuottimen haihdutus tuottaa metyleenikloridiliuoksen, josta saadaan kloridijäännös. Sakka kiteytetään etyyliasetaatista; kiteiden suodattamisen ja kuivattamisen jälkeen saadaan 4-fenyyli-6-(4-morfolinyylime-tyyli)-7-hydroksi-8-kloorikumariinin hydrokloridi.

Sp. 225*, Rf 0,79 [ohutkerroskromatografia (silika) kloro-formi-metanoli-vesi 32%:nen ammoniumhydroksidi (130 + 25 + 2,8 + 0,5)].

Esimerkki 24 3-(2-dietyyliaminoetvvli)-4-metyyll-6-(4-morfolinyylimetvv-li)-7-metoksi-8-kloorikumariinin dihydroklorldl. 24,5 g 3-(2-dietyyliaminoetyyli)-4-metyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli)- 7-hydroksi-8-kloorikumariiniä sekoitetaan tolueenin (300 ml), ja natriumhydraatin (1,6 g) kanssa; seos kuumennetaan asteittain 60*:seen sekoittaen samanaikaisesti jatkuvasti; 30 minuutin kuumentamisen jälkeen liuotin haihdutetaan tyhjössä. Jäännös liuotetaan 100 ml:11a dimetyylisul-foksidia ja 7,5 g dimetyylisulfaattia lisätään liuokseen, joka pidetään 80*:n lämpötilassa; 48 tunnin kuluttua lisätään 300 ml tolueenia ja orgaaninen seos pestään vedellä. Tolueeniliuos uutetaan IN kloorivetyhapolla ja hapan vesipitoinen liuos tehdään alkaliseksi natriumbikarbonaatilla; näin muodostuu suspensio, joka suodatetaan sitten. Sakka tyhjökuivatetaan ja otetaan tolueeniin; kiteinen hydrokloridi muodostuu lisättäessä kaasumaista kloorivetyhappoa.

39 85269

Sakka erotetaan ja kiteytetään etanolista. Kiteiden suodattamisen ja kuivattamisen jälkeen saadaan 3-(2-dietyyliamino-etyyll)-4-metyyli-6-(4-morfolinyylimetyyli)-7-metoksi-8-kloorlkumarllnln dlhydrokloridi.

Sp. 181*, RF 0,41 [ohutkerroskromatografia (slllka) kloro-formi-metanoli-etlkkahappo-vesi (25 + 15 + 4 + 2)].

Esimerkki 25 4-metvvli-7-6-dlmetyyllamlnometyyli-7-hydroksl-8-kloorlkuma-rllnln hydroklorldl. 30 g 4-metyyli-7-hydroksi-8-kloorikuma-rliniä sekoitetaan etanolin (200 ml), 33%:sen vesipitoisen dimetyyliamiiniliuoksen (38,2 g) ja paraformaldehydin (8,5 g) kanssa. Seosta keitetään palautusjäähdyttäen 72 tuntia sekoittamalla samalla jatkuvasti. Etanoli haihdutetaan tyhjössä. Menettely on sitten sama kuin esimerkissä 8 hyd-rokloridin saostumiseen asti. Sakka erotetaan ja kiteytetään etyyliasetaatista; kiteiden suodattamisen ja kuivattamisen jälkeen saadaan 4-metyyli-7-6-dimetyyliamino-metyyli-7-hydroksi-8-kloorikumariinin hydrokloridi.

SP. 238*, Rf 0,27 [ohutkerroskromatografia (silika) kloro-formi-metanoli-etikkahappo-vesi (25 + 15 + 4 + 2)].

Esimerkki 26

4 x g-tilmetyyIl-$zdimetyyUamlnpmetyyli-7-hydr9kglkttmarUn;U

hydrokloridi. 30 g 4,8-dimetyyli-7-hydroksikumariinia sekoitetaan etanolin (300 ml), kloroformin (50 ml), 33%:sen vesipitoisen dimetyyliamiiniliuoksen (27,1 g) ja paraformaldehydin (6 g) kanssa. Seosta keitetään palautusjäähdyttäen 48 tuntia sekoittamalla samalla jatkuvasti. Etanoli ja kloroformi haihdutetaan tyhjössä. Menettely on sitten sama kuin esimerkissä 13 hydrokloridin muodostumiseen asti. Sakka erotetaan ja sitten se kiteytetään 95%.sesta etanolista; kiteiden suodattamisen ja kuivattamisen jälkeen saadaan 4,8-dime-tyyli-6-dimetyyliaminometyyli-7-hydroksikumariinin hydrokloridi.

Sp. 252°, Rf 0,77 [ohutkerroskromatografia (silika) kloro-formi-metanoli-etikkahappo-vesi (25 + 15 + 4 + 2)).

Esimerkki 27 40 85269 4,8-dlmetyyll-6-f4-morfollnyyllmetyyll)-7-hydrokslkumarllnln hydroklorldl. 30 g 4,8-dimetyyli-7-hydroksikumariiniä sekoitetaan 85%:sen vesipitoisen etanolin (300 ml), morfoliinin (13,8 g) ja paraformaldehydin (4,8 g) kanssa. Seosta keitetään palautusjäähdyttäen 96 tuntia sekoittamalla samalla jatkuvasti; sitten se saatetaan 5*:n lämpötilaan ja 12 tunnin kuluttua saadaan suspensio, joka sitten suodatetaan. Sakka tyhjökuivatetaan ja sitten se käsitellään etyyliasetaatilla. Kiteisen hydrokloridin saostuminen saadaan aikaan lisäämällä kaasumaista kloorivetyhappoa. Sakka erotetaan ja kiteytetään etanolista. Kiteiden suodattamisen ja kuivattamisen jälkeen saadaan 4,8-dimetyyli-6-(4-morfolinyylimetyy-li)-7-hydroksikumariinin hydrokloridi.

Sp. 238’, Rf 0,84 [ohutkerroskromatografia (silika) kloro-formi-metanoli-etikkahappo-vesi (130 + 25 + 2,8 + 0,5)].

Esimerkki 28 4-fenyyli-6-dlmetyyliamlnometvvll-7-hydroksl-8-allvvllkuma-rilnin hydrokloridi. 18 g 4-fenyyli-7-hydroksi-8-allyyliku-mariiniä sekoitetaan etanolin (250 ml), 18,5%:sen vesipitoisen dimetyyliamiiniliuoksen (23,4 g) ja 35%:sen vesipitoisen formaldehydiliuoksen (5,6 g) kanssa. Seosta keitetään palautus jäähdyttäen 60 tuntia sekoittamalla samalla jatkuvasti. Etanoli haihdutetaan tyhjössä. Menettely on sitten sama kuin esimerkissä 8 hydrokloridin saostumiseen asti. Sakka erotetaan ja kiteytetään 95%:sesta etanolista. Kiteiden suodattamisen ja kuivattamisen jälkeen saadaan 4-fenyyli-6-dimetyy-liaminometyyli-7-hydroksi-8-allyylikumariinin hydrokloridi. Sp. 199*, Rf 0,82 [ohutkerroskromatografia (silika) kloro-formi-metanoli-etikkahappo-vesi (25 +15+5+2)].

Esimerkki 29 4i 85269 4-metvvli-6-dimetyyllamlnometvvll-7-hvdroksl-8-allvvllkuma-rllnln hydroklorldl. 7-metoksi-4-metyyllkumarilnl saatetaan reagoimaan paraformaldehydln (1 mooli) ja vetyklorldln kanssa, jotta saataisiin 6-kloorimetyyli-7-metoksi-4-metyyli-kumariini (I. Org. Chem. 25 (1960) 1713), Tätä yhdistettä käsitellään dlmetyyllamllnllla tolueenllluoksessa 100*C:ssa kuuden tunnin ajan ja suljetussa mittalasissa, jolloin saadaan 6-dimetyyliaminometyyli-7-metoksi-4-metyylikumariiniä. Mainittu yhdiste dimetyloldaan, jolloin saadaan 6-dimetyyli-aminometyyli-7-hydroksi-4-metyylikumariini, josta alkyloi-malla allyyllbromldllla saadaan 6-dlmetyylllaminometyyll-7-allyylloksl-4-metyyllkumarllnl. Lämmittämällä tätä yhdistettä 130°C:n lämpötilassa dletyyllanllllnln läsnäollessa muodostuu 4-metyyli-6-dimetyyliaminometyyli-7-hydroksi-8-allyyli-kumarllnlä, jonka vetyklorldl sulaa 216°C:ssa. Rf-arvo on 0,46 [ohutkerroskromatografla (sllikageell) kloroformi-metanoll-etlkkahappo-vesl (25+15+4+2)].

Esimerkki 30 8-asetyyli-6-dimetyyllaminometyyli-7-hydroksi-4-metyyllkuma-rllnln hydroklorldl. Esimerkissä 29 valmistettu 6-dimetyyli-aminometyyli-7-hydroksi-4-metyylikumariini saatetaan reagoimaan etikkahappoanhydridin kanssa sen muuttamiseksi vastaavaksi 7-asetaattiyhdisteeksi, jota puolestaan käsitellään alumiinikloridilla kuumassa nitrobentseenissä, jolloin saadaan 8-asetyy11-6-d imetyy1iaminometyy11-7-hyd roks1-4-metyy11-kumariini. Tämän yhdisteen vetyklorldl sulaa 220*C:ssa, Rf 0,50 [ohutkerroskromatografla (sllikageell) kloroformi-metanoli-etikkahappo-vesi (25+15+4+2)].

Esimerkki 31 8-lsopropyyli-6-dlmetyyllamlnometyyll-7-hydroksl-4-metyyll-kumarllnln vetyklorldl. Esimerkissä 29 valmistettu 6-dimetyyliaminometyyli-7-hydroksi-4-metyylikumariini sus-pendoidaan bentseeniin ja sitä käsitellään propeenilla boo- 42 85269 ritrifluoridin läsnäollessa 0*C:ssa. Eristetään 8-isopro-pyyli-6-dimetyyliaminometyyli-7-hydroksi-4-metyyllkumariiniä. Tämän yhdisteen vetykloridi sulaa 210*C:ssa, Rf 0,40 [ohut-kerroskromatografia (slllkageell) kloroformi-metanoli-etlkkahappo-vesl (25+15+4+2)].

Claims (8)

1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten kaavan (I) R4 *5 ^6 SN-CH, JL JC «r iTT *7 m R1 mukaisten kumariinijohdannaisten tai niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, jossa kaavassa Rl on halogeeni tai Ci_5-alkyyli-, C2-5-alkenyyli- tai C2-4-alkanoyyliryhmä, R2 on vety, Ci_4~alkyyliryhmä, joka mahdollisesti on subs-tituoitu Ci_4-alkoksikarbonyyliryhmällä, tai C2-5~alke-nyyliryhmä, Rg on Ci_4 alkyyli- tai fenyyliryhmä, R7 on vety tai di(Ci_4~alkyyli)amino-(Ci_4-alkyyli)ryhmä, R3 ja R4 voivat olla samanlaisia tai erilaisia ja merkitsevät kumpikin Ci-4-alkyyliryhmää tai R3 ja R4 voivat yhdessä merkitä atsiridinyyli-, morfolino-, tiomorfo-lino-, pyrrolidino-, piperidino-, piperatsino-, hydroksi-piperidino-, hydroksietyylipiperidino-, hydroksi-piperatsino- tai hydroksietyylipiperatsinoryhmää, ja R5 on vety, tunnettu siitä, että a) alistetaan kaavan (II) r5 r6 «JUCX {ii) R1 mukainen kumariinijohdannainen, jossa kaavassa Y on vety ja «4 85269 Rl, R5, Rö ja R7 merkitsevät samaa kuin yllä kaavan (I) yhteydessä, Mannich-reaktioon kaavan HNR3R4 mukaisen sekundaarisen amiinin kanssa, jossa kaavassa R3 ja R4 merkitsevät samaa kuin yllä kaavan (I) yhteydessä, liuottimen läsnäollessa noin 20°...120*C:n lämpötilassa ja valinnanvaraisesti muutetaan tämän jälkeen yhdiste, jossa on OH-ryhmä 7-ase-massa, yhdisteeksi, jossa R2 on muu kuin vety, hydrokarby-loinnilla käyttämällä yhdistettä, jolla on kaava R2X, jossa kaavassa R2 edustaa kaavan (I) yhteydessä määriteltyä hiilivety-ryhmää ja X edustaa halogeenia tai hydroksyyliryhmää, joka on esteröity rikkihapolla, rikkihapokkeella tai piiha-polla, tai alifaattisella sulfonihapolla, jossa on 1...7 hiiliatomia tai monosyklisellä aromaattisella sulfonihapolla, jolloin alkylointi suoritetaan liuottimessa ja emäksisen yhdisteen läsnäollessa, b) alistetaan Claisen- tai Fries-reaktioon kaavan (III) R. f5 I 6 SN-CH,v R R3 s 2vv^ 7 I I (III) H mukainen yhdiste, jossa kaavassa R3, R4, R5, Rg ja R7 merkitsevät samaa kuin yllä kaavan (I) yhteydessä ja Ri merkitsee substituoitua tai substituoimatonta hiilivetytähdet-tä, tai c) alistetaan Friedel-Crafts-reaktioon kaavan (IV) 45 85269 H l5 l6 r-,^ |T ίΓ 3 (IV) H mukainen yhdiste mainitun ryhmän liittämiseksi, jossa kaavassa tähteillä , R2, R3, R4, R5, Rg ja R7 on kaavan (I) yhteydessä esitetty merkitys, ja muunnetaan valinnanvaraisesti saatu tuote sen suolaksi.

2. Patenttivaatimuksen 1 a) mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittu Mannich-reaktio suoritetaan käyttämällä paraformaldehydiä etanolissa tai etikkahapossa ja amiinia HNR3R4 vapaassa muodossa 50...90*:n lämpötilassa.

3. Patenttivaatimuksen 1 a) mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että alkylointireaktio suoritetaan aproot-tisessa liuottimessa emäksisen yhdisteen läsnäollessa.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä tunnet-n e t t u siitä, että alkylointi suoritetaan kaavan (I) mukaisen yhdisteen alkalimetallisuolalla, jossa R2 on vety, käyttämällä liuottimena dimetyylisulfoksidia noin huoneenlämpötilassa.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että mainittu Ci_5-alkyyliryhmä on metyyli, etyyli, propyyli, isopropyyli, butyyli, isobutyyli tai tert-butyyli.

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että mainittu C2-5-alkenyyliryhmä on vinyyli, allyyli, propenyyli, isobutenyyli, 2-butenyyli tai 2-pentenyyli.

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että valmistetaan 4-metyyli-6-dimetyyliamino- 46 8 52 69 metyyli-7-hydroksi-8-allyylikumariini tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.

8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että valmistetaan 4-metyyli-6-([4-(2-hydroksi-etyyli)-1-piperatsinyyli]-metyyli}-7-hydroksi-8-allyyli-kumariini tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola. <7 85269