FI74959B - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt anvaendbara(n''-syanguanidin- och 1,1-diamino-2- (substituerad)etylen)n-alkinyl-n'- -2-/(5-substituerad-2-furyl)alkyltio/ alkyl -derivat samt farmaceutiskt godtagbara salter daerav. - Google Patents

Description

• 'Ate»·! KUULUTUSJULKAISU π Λ ^Β||Γα [Β] Π1) UTLÄGQNINGSSKRIFT 74959 (51) Kv.ik.Vint.Ci.4 C 07 D 307/52

SUOMI-FINLAND

(FI) (21) Patenttihakemus-Patsntansökning 79297** (22) Hakemispäivä - Ansökningsdag 25.09.79

Patentti-ja rekisterihallitus (23) Alkupäivä - Giltighetsdag 25.09.79

Patent- och registerstyrelsen (41) Tullut julkiseksi-Biivit offentiig 27.03.80 (44) Nähtäväksipanon ja kuul.julkaisun pvm. - η it Q7

Ansökan utlagd och utl.skriften publicerad J ' ' ' (86) Kv. hakemus - Int. ansökan (32)(33)(31) Pyydetty etuoikeus - Begärd prioritet 26.09 · 78 USA(US) 9^5968 (71) Bristol-Myers Company, 3*+5 Park Avenue, New York, New York, USA(US) (72) Aido Antonio Algieri, Fayetteville, New York,

Ronnie Ray Crenshaw, Dewitt, New York, USA(US) (7*0 Oy Kolster Ab (5*0 Menetelmä terapeuttisesti käytettävien (N"-syaaniguanidiini- ja 1,1-diamino--2-(substituoi tu)ety1een i)N-a1k inyyli-N'-(-2-/(5-substi tuoi tu-2-furyy1i)alkyy-1 itio/a1 kyy 1 ij-johdannaisten sekä näiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi - Förfarande för framställning av terapeutiskt använd-ba ra(N"-syanguan idin- och 1,1-d iamino-2-(subst i tuerad)ety1 en)N-a1 k iny1-N 1 --{-2-/(5-substituerad-2-fury1)alky 11io/a1 kylj -derivat samt farmaceutiskt god-tagbara salter därav

Keksinnön kohteena on menetelmä terapeuttisesti käytettävien (N"-syaaniguanidiini- ja 1,1-diamino-2-(substltuoitu)etyleeni)-N-alkinyyli-N' - £-2-/ (5-substituo.itu-2-f uryyli) alkyyl.itiq7alkyyli|-johdannaisten valmistamiseksi, joiden kaava on 2 -— r4 R\ I ! ϊ ,

^^N-CH2—- CH2-S-CH2CH2"NHCNH-R

R3 2 74959 jossa R on ainakin 3 hiiliatomia sisältävä alempi alkinyyliryhmä, 2 3 R ja R ovat samoja tai erilaisia ja merkitsevät alempaa alkyyliä 4 tai ainakin 3 hiiliatomia sisältävää alempaa alkinyyliä, R on vety tai alempi alkyyli, ja X on CHN02 tai NCN, sekä näiden johdannaisten myrkyttömien, farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi.

Keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet ovat histamiini-H2-reseptoria salpaavia aineita, jotka ehkäisevät mahahapon erittymistä ja jotka ovat käyttökelpoisia hoidettaessa mahahaavaumia.

Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että yhdisteen, jonka kaava on 2 - R\ I I ί N-CH-A! J-CH -S-CH_CH_-NHCSCH- / 2 \0 ^ 2 2 2 3

RJ

2 3 4 jossa R , R , R ja X merkitsevät samaa kuin edellä, annetaan reagoida yhdisteen kanssa, jonka kaava on h2nr1 jossa R on edellä määritelty, inertissä liuottimessa huoneen lämpötilassa tai sitä korkeammassa lämpötilassa.

Mahahaavan hoidossa kliinisenä tavoitteena on mahahapon erittymisen vähentäminen, perustuen periaatteeseen "ei happoa, ei haavaumaa". Perinteelliseen mahahaavan hoitoon sisältyy ruokavalion kontrollointi ja happoa sitovien aineiden ja peristaltiikkaa hillitsevien aineiden käyttö.

On olemassa todisteita, jotka osoittavat, että histamiini voi olla lopullisena tavallisena syynä mahahapon erittymisen kiihtymiseen. Tämän histamiinin vaikutuksen välittäjinä toimivat ^-reseptorit, eivätkä klassiset antihistamiinit, jotka ovat -reseptorin salpaajia pysty ehkäisemään sitä. Nykyisin tunnetaan lukuisia spesifisiä ^-reseptoria salpaavia aineita (^-reseptorin vasta-aineita) . Nämä yhdisteet ehkäisevät hapon peruserittymistä, samoin kuin muiden tunnettujen mahahapon erittymistä kiihottavien aineiden aiheuttamaa eritystä ja ovat käyttökelpoisia hoidettaessa sulatushaavau-mia.

3 74959

Burimamidi (Ha) oli ensimmäinen kliinisesti tehoava ^-reseptorin vasta-aine. Se ehkäisee mahahapon eritystä eläimillä ja ihmisellä, mutta se absorboituu huonosti suun kautta annettuna.

r6

N -R

i i ϊ

* J-CH-ZCH-CH NH-C-NHCH II

\ N / 2 2 2 J

H

g

Ha; R on H, Z on CU^ r X on S (Burimamidi) g

Hb; R on CHy Z on S, X on S (Metiamidi) g

Ile; R on CH^, Z on S, X on NCN (Simetidiini)

Metiamidi (Hb) on tehokkaampi kuin burimamidi ja tehoaa suun kautta annettuna ihmisellä. Se on kuitenkin melko myrkyllinen (aikaansaa jyväsolukatoa). Simetidiini (Ile) on yhtä tehokas H2~ vasta-aine kuin metiamidi eikä se aiheuta jyväsolukatoa, ja sitä on äskettäin ryhdytty markkinoimaan haavaumien muodostumista ehkäisevänä lääkkeenä; sen puoliintumisaika on kuitenkin suhteellisen lyhyt, joten terapeuttiseksi hoito-ohjeeksi on tarpeen määrätä lukuisia päivittäin annettavia 200 - 300 mg:n tablettiannoksia. Näin ollen tarvitaan haavaumia ehkäiseviä aineita, joiden vaikutusaika on pitempi ja/tai jotka ovat tehokkaampia kuin simetidiini.

^-antagonistien kehittämistä on selitetty, edellisessä kappaleessa käsitellyt mukaan lukien, artikkeleissa C. R. Ganellin et ai., Federation Proceedings, 35 (1976), s. 1924, ja Drugs of the Future, 1 (1976), s. 13, sekä niissä mainituissa viitteissä. Samoin seuraavissa patenttijulkaisuissa: BE-patentista 841 814 (Farmdoc 90568X) tunnetaan histamiinin stimuloiman mahahapon erittymisen inhibiittoreita, joiden kaava on

X

het-ch2z(ch2)2nhcnhy 4 74959 jossa HET on yksi kahdeksasta nimetystä heterosyklisestä renkaasta (joissa kaikissa on ainakin yksi typpi, paitsi furyyli), joissa voi olla substituenttina alempi alkyyli, hydroksi, amino tai halogeeni, Z on rikki tai CH2, X on S, CHN02, NCN tai NH, Y on NH2, alempi alk-yyliamino, di-alempi-alkyyliamino, alempi alkoksi, fenyylietyyli, imidatsolyylietyyli, allyyli, trifuorietyyli tai (CH2)nR, jossa n on 1 - 21 ja R on OH, alempi alkoksi, NH2 tai alempi alkyyliamino; edellyttäen, että X:n ollessa NH, Y on trifuorietyyli tai (CH2)nR; ja X:n ollessa NCN, Y ei voi olla amino tai alkyyliamino.

BE-patentista 857 388 tunnetaan histamiini-H2-reseptorin inhibiittoreita, joiden kaava on R1 ^ ] (1 Ϊ "n-A-L J--(CH_) X (CH- ) NHCNHR3 ιτ 6 Π L· Iti R2 1 2 jossa R ja R ovat samoja tai erilaisia ja ovat vety, alempi alkyyli, sykloalkyyli, alempi alkenyyli, aralkyyli tai alempi alkyyli- 4 4 ryhmä, joka on happiatomin tai ryhmän NR katkaisema, jossa R on 1 2 vety tai alempi alkyyli, tai R ja R yhdessä typpiatomin kanssa muodostavat heterosyklisen renkaan, jossa on valinnaisesti happiatomi 4 tai NR -ryhmä; A on alempi alkyleeni; m on 2 - 4; n on 1 tai 2, tai 0 silloin kun X on rikki, tai CH„; X on happi, rikki tai CH0; Y on 5 6 5 ^ ^ rikki, happi, NR tai CHR ; R on vety, nitro, syano, alempi alkyyli, aryyli, alkyylisulfonyyli tai aryylisulfonyyli; R6 on nitro, 3 aryylisulfonyyli tai alkyylisulfonyyli; ja R on vety, alempi alkyyli, alempi alkenyyli tai alkoksialkyyli.

US-patentista 4 112 234 tunnetaan histamiini-H2-reseptor.in inhibiittoreita, joiden kaava on N-CH3

| [ NCN

\ ^-CH-SCH-CH-NHCNH-R1 ^ fg z z 2.

H

jossa R on suora- tai sivuketjuinen alkinyyliryhmä, jossa on 3 - 9 hiiliatomia, ja menetelmiä niiden valmistamiseksi.

5 74959

Vaikkakin tämän keksinnön mukaisesti valmistettujen yhdisteiden on esitetty olevan rakenteeltaan kaavan I mukaisia, alan asiantuntijoille on selvää, että yhdisteet, joissa X on CHNC>2, voivat esiintyä tautomeerimuotoina seuraavasti: H R5 \ /

C

RNH—C—NHR1 HR5 HR5

CH 7-CH

I i A-- I 1

RNH—C =NR N RN = C—NHR

R2 -1-®4

\ I I

jossa R = N-CH_ L J—CH -S-CH0-CH0- r3/ 2 2 2 2

Lisäksi nämä yhdisteet voivat esiintyä kahtena geometrisenä isomeerinä, so, cis/trans-isomeereinä kaksoissidoksen ansiosta.

6 74959 Tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa erilaisten vaihtoehtoisten reaktiokaavioiden mukaisesti, kuten on kuvattu alla ensisijaisten yhdisteiden Ik ja Im osalta.

Kaavio I

i i (CH3)2NCH2-1^ J)— CH2SCH2CH2NH2 + ^C=CHN02 —> CH3S ^

III IV

_1 i) »HN°2 (CH3)2NCH2—CH2SCH2CH2NHC-SCH3

V

| I CKN°2

V + H2NCH2C=CH -^ (CH3) 2NCH2-1s^ ^j-CH2SCH2CH2NHCNHCH2C=CH

Ik 7 74959

Kaavan III mukaista yhdistettä valmistetaan BE-patent.in 857 388 mukaisella menetelmällä. Analogisia ja homologisia yhdisteitä valmistetaan BE-patentin 857 388 mukaisilla menetelmillä, tai analogisilla menetelmillä. Kaavan IV mukaista yhdistettä valmistetaan artikkeleissa Chem. Ber. 100 (1967), s. 591 ja Acta Chem.

Seand., 21 (1967), s. 2797 selostetuilla menetelmillä. Kaavion I mu kaiset reaktiovaiheet suoritetaan inertissä liuottimessa huoneen lämpötilassa tai sitä korkeammassa lämpötilassa. Lähtöaineina käytettäviä alkinyyliamiineja (edellä kuvattua propargyyliamiinia) on joko saatavissa kaupallisina tuotteina tai niitä voidaan valmistaa artikkeleissa Bull. Soc. Chim. Fr. (1958), s. 490; Bull. Soc. Chim. Fr. (1967), s. 588; Bull. Soc. Chim. Fr. (1967), s. 592; Annales de Chimie (Paris), 3 (1958), s. 656; ja J. Org. Chem., 21 (1956), s. 791 selostettujen menetelmien mukaisesti.

Kaavio II

"J Π CHNO_ I* 10« _ (CH3)2NCH2-CH2SCH2CH2NH2 + R S-CNHCH2C=CH ->

III VI

] Γ chno9 I I n

-> (CH3)2NCH2—CH2SCH2CH2NHCNHCH2C=CH

Ik

Reaktio suoritetaan inertissä liuottimessa huoneen lämpötilassa tai sitä korkeammassa lämpötilassa. Kuten alan asiantuntijal- 10 le on ilmeistä, R voi olla mikä tahansa sellainen substituentti, 8 74959 että -SR^ on sopiva tavanomainen poistuva ryhmä. Täten voi olla alempi alkyyli, aryyli tai substituoitu aryyli (esim. p-nitrofenyy-li), tai näiden kaltainen ryhmä. Kaavan VI mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa vaihtoehtoisin menetelmin, kuten menetelmällä, jota 1 0 on kuvattu alla valmistettaessa yhdistettä VI, jossa R on metyyli. Ch3s

^C=CHN02 + H2NCH2C5CH

CH3S

IV

VI

CH3S^ y/ C=CHN02 + H2NCH2C=CH '

CH-S

3 II

o

VII

Kaavan VII mukaista yhdistettä valmistetaan BE-patentissa 841 626 selostetuilla menetelmillä, ja analogisia yhdisteitä voidaan valmistaa analogisilla menetelmillä. Alan asiantuntijalle on selvää, että jos edellä käytetty propargyyliamiini korvataan erilaisella al-kinyyliamiinilla, muodostuu kaavan VI mukaista yhdistettä, jossa on erilainen alkinyyliryhmä. Saadun yhdisteen voidaan vuorostaan antaa reagoida kaavan III mukaisen yhdisteen kanssa, jolloin muodostuu kaavan I mukaista yhdistettä, jossa on erilainen alkinyyliryhmä.

9 74959

Kaavio III

CHNO~

10 K

HSCH2CH2NH2 + R S-CNHCH2CfCH -->

VI

CHN0„

Il 2

-HSCH2CH2NHCNHCH2C=CH

IX

I | (CH ) NCH —L J— CH„Z + IX -^ il l \ o ^ 2

X

Tf CHN0o I I n

-> (CH3)2NCH2-l^ CH2SCH2CH2NHCNHCH2C5CH

Ik 10 74959

Reaktiovaiheet suoritetaan inertissä liuottimessa huoneen lämpötilassa tai sitä korkeammassa lämpötilassa. Yhdistettä VI valmistetaan kuten edellä kaavion II yhteydessä on selitetty. Yhdisteessä X oleva substituentti Z on tavallinen poistuva ryhmä. Sopivia tässä reaktiossa käytettäviä poistuvia ryhmiä ovat esimerkiksi 11 11 fluori, kloori, bromi, jodi, -O..SR , jossa R on alempi alkyyli J 1 2 12 (esim. metaanisulfonaatti), -O^SR , jossa R on aryyli tai substi-tuoitu aryyli (esim. bentseenisulfonaatti, p-bromibentseenisulfonaat-ti tai p-tolueenisulfonaatti) , -O^SF, asetoksi ja 2,4-d.initrofenok-si. On edullista käyttää kaavan X mukaista yhdistettä, jossa Z on kloori. Kaavan X mukaista yhdistettä ja sen kanssa analogisia yhdisteitä, voidaan valmistaa menetelmillä, joita on selitetty BE-paten-tissa 857 388.

Kaavio IV

1 Π CHNO- I I ίο II 2 _.

(CH3)2NCH2—^ CH2SCH2CH2NH2 + R SCNHCH2C=CH '

III XI

il CHNO- I il

_(CH3)2NCH2—^ CH2SCH2CH2NHCNHCH2C-CH

Ik ,, 74959

Reaktio suoritetaan inertissä liuottimessa huoneen lämpötilassa tai sitä korkeammassa lämpötilassa. Kaavan XI mukaista yhdistettä, jossa on edellä selitetty, valmistetaan hapettamalla kaavan VI mukaista yhdistettä tavanomaisella tavalla.

Kaavio V

--Π NCN

Il 1 n 11 (CH3)2NCH2-, CH2SCH2CH2NH2 + R S-CNHCH2=CH---- ^ C>

III XII

" 7 NCN

I 1 n

-> (CH3)2NCH2—^ y- CH2SCH2CH2NHCNHCH2CfCH

Im

Reaktio suoritetaan inertissä liuottimessa huoneen lämpötilassa tai sitä korkeammassa lämpötilassa. Kaavan XII mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa menetelmillä, jotka tunnetaan US-patenttiha- 1 0 kemuksesta 936 668. Esimerkiksi yhdistettä XII, jossa R on metyyli, voidaan valmistaa antamalla dimetyylisyaaniditioimidokarbonaatin reagoida propargyyliamiinin kanssa. Dimetyylisyaaniditioimidokarbonaat-tia voidaan valmistaa artikkelissa J. Org. Chem., 32 (1967), s. 1566 selitetyllä tavalla.

12 74959

Analogisia yhdisteitä voidaan valmistaa analogisilla menetelmillä.

Kaavio VI

NCN

10*' HSCH2CH2NH2 + R S-CNHCH2C=CH ->

XII

NCN

II

-> HSCH2CH2NHCNHCH2C-CH

XIII

(CH } 0NCH_—1V j— CH_Z + XIII --> J ύ L· ^ q ^ £·

X

"ί Π NCN

1 I n

-----(CH3) 2NCH2-kv ^-CH2SCH2CH2NHCNHCH2C-CH

Im 13 74 95 9

Reaktio, joka on analoginen edellä kaavion III yhteydessä selitetyn reaktion kanssa, suoritetaan inertissä liuottimessa huoneen lämpötilassa tai sitä korkeammassa lämpötilassa. Kaavan XII mukaista yhdistettä ja homologisia ja analogisia yhdisteitä, joissa on muita alkinyyliryhmiä, on selitetty US-patenttihakemuksessa 906 901 .

Kaavio VII

| NCN

(ch3) 2nch2-^x ch2sch2ch2nh2 + r10scnhch2c=ch >

0 O

III XIV

j J

-> (CH3)2NCH2-^ ^J-C^SC^CH^HCNHCH^HCH

Im

Reaktio, joka on analoginen edellä kaavion IV yhteydessä selitetyn reaktion kanssa, suoritetaan inertissä liuottimessa huoneen lämpötilassa tai sitä korkeammassa lämpötilassa. Kaavan XIV mukaisia yhdisteitä valmistetaan hapettamalla kaavan XIV mukaista yhdistettä tavanomaisilla tavoilla.

14 74959

Kaavio VIII

i NCN

(CH3)2NCH2-l^ CH2SCH2CH2NHCSCH3 + H2NCH2CfCH -^

XV

I j NCN

-> (CH3) 2NCH2-·^ y— CH2SCH2CH2NHCNHCH2C=CH

Im

Reaktio, joka on analoginen edellä esitetyn kaavion I toisen vaiheen kanssa, suoritetaan inertissä liuottimessa huoneen lämpötilassa tai sitä korkeammassa lämpötilassa. Kaavan XV mukaista yhdistettä valmistetaan BE-patentin 857 388 mukaisella menetelmällä.

Tässä selityksessä käytetty termi "myrkytön, farmaseuttisesti hyväksyttävä happoadditiosuola" tarkoittaa tämän keksinnön mukaisen yhdisteen mono- tai di-suolaa myrkyttömän, farmaseuttisesti hyväksyttävän orgaanisen tai epäorgaanisen hapon kanssa. Sellaiset hapot ovat ennestään tunnettuja ja niitä ovat esimerkiksi kloorivetyhappo, brom.ivetyhappo, rikkihappo, sulfamiinihappo, fosforihappo, typpihappo, maleiinihappo, fumaarihappo, meripihkahappo, oksaalihappo, bentsoehappo, metaanisulfonihappo, etaanidisulfon.ihappo, bentseeni-sulfon.ihappo, et.ikkahappo, propionihappo, viinihappo, sitruunahappo, kamferisulfonihappo ja näiden kaltaiset hapot. Suoloja valmistetaan alalla tunnetuilla menetelmillä.

is 74959

Termi "alempi alkyyli" tarkoittaa suora- tai sivuketjuista alkyyliryhmää, jossa on 1 - 6 hiiliatomia.

Käytettäessä tämän keksinnön mukaisesti valmistettuja farmakologisesti vaikuttavia yhdisteitä terapeuttisesti, niitä annetaan tavallisesti farmaseuttisena seoksena, joka sisältää oleellisesti vaikuttavana aineosana ainakin yhtä vaikuttavaa yhdistettä perusmuodossa tai myrkyttömän farmaseuttisesti hyväksyttävän happoadditio-suolan muodossa, farmaseuttisesti hyväksyttävän kantajan kanssa.

Farmaseuttisia seoksia voidaan antaa suun kautta, parente-raalisesti tai peräpuikon muodossa. Hyvin monet erilaiset annosmuodot ovat käyttökelpoisia. Käytettäessä kiinteätä kantajaa valmiste voi olla tablettina, sijoitettuna kovaan gelatiinikapseliin jauheen tai lääkerakeen, lääkenapin tai pastillin muodossa. Jos käytetään nestemäistä kantajaa, valmiste voi olla siirapin, emulsion, pehmeän gela-tiinikapselin, injektoitavaksi soveltuvan steriilin liuoksen, tai vesipitoisen tai vedettömän nestemäisen suspension muodossa. Farmaseuttisia seoksia valmistetaan halutun valmisteen valmistukseen soveltuvilla tavallisilla menetelmillä.

Kukin annosyksikkö sisältää vaikuttavaa aineosaa lähinnä noin 10 - noin 250 mg, edullisesti noin 20 - noin 200 mg. Annostus tapahtuu edullisesti yhtäsuurina annoksina 2-4 kertaa päivässä; annoksen ollessa edullisesti noin 50 - noin 100 mg, ja edullisesti noin 100 - 750 mg vuorokaudessa.

Histam.iini-H2_reseptorin vasta-aineet ovat osoittautuneet tehokkaiksi mahaerityksen inhibiittoreiksi eläimillä ja ihmisellä (Brimblecombe et ai., J. Int. Med. Res., 3 (1975), s. 86. Histamiini-^-reseptorin vasta-aineen, simetidiinin, kliininen arviointi on osoittanut sen olevan tehokas terapeuttinen aine hoidettaessa mahahaavaa (Gray et ai., Lancet, 1 (8001), (1977) s. 4). Esimerkkien 1 ja 2 mu kaisesti valmistettuja yhdisteitä (joista käytetään seuraavassa nimityksiä BL-5966 ja BL-5993) on verrattu erilaisissa kokeissa simeti-diiniin ja rakenteeltaan läheiseen kaavan XVI mukaiseen yhdisteeseen.

Kaavan XVI mukainen yhdiste

Ί 7 CHNO

I n

(CH3) NCH CH SCH CH NHCNHCH XVI

,6 74959 tunnetaan BE-patentista 857 388. BL-5966:n on osoitettu olevan tehokkaampi kuin simetidiini tai kaavan XVI mukainen yhdiste sekä his-tamiini-I^-reseptorin vasta-aineena eristetyssä marsun sydämen eteisessä että mahaerityksen inhibiittorina rotilla ja koirilla.

Histamiini-H^-reseptori-antagonistimääritys eristetyssä marsun sydämen eteisessä

Histamiini aiheuttaa konsentraatiosta riippuvaa supistusno-peuden lisääntymistä eristetyssä, spontaanisesti sykkivässä marsun sydämen oikeassa eteisessä. Black et ai., Mature, 236 (1972), s. 385 nimittivät reseptoreita, joilla oli vaikutusta histamiinin tähän vaikutustapaan, histamiini-H2-reseptoreiksi tiedottaessaan burimamidin, näiden reseptoreiden kanssa kilpailevan vasta-aineen ominaisuuksista. Myöhemmät Hughes'in ja Coret'in tutkimukset, Proc. Soc. Exp.

Biol. Med., 148 (1975), s. 127, samoin kuin Verma ja McNeill, J. Pharmacol. Exp. Ther., 200 (1977), s. 352, tukevat Black'in ja hänen työtovereidensa päätelmää, että histamiinin positiivista sykintää säätävää vaikutusta eristetyssä marsun sydämen oikeassa eteisessä välittävät histamiini-^-reseptorit. Black et ai., Agents and Actions, e (1 973), s. 133, ja Brimblecombe et ai., Fed. Proc., 35 (1976), s. 1931, ovat käyttäneet eristettyä marsun sydämen oikeata eteistä tutkittaessa histamiini-^-reseptorin vasta-aineiden vaikutuksia. Nykyiset vertailevat tutkimukset suoritettiin käyttämällä menetelmän muunnelmaa, jota menetelmää ovat selostaneet Reinhardt et ai.,

Agents and Actions, 4 (1974), s. 217.

Hartley-urosmarsut (350 - 450 g) tapettiin iskulla päähän. Sydän leikattiin pois ja pantiin Petri-maljaan, jossa oli hapetettua (95 % happea, 5 % hiilidioksidia) modifioitua Krebs'in liuosta (NaCl 6,6, KC1 0,35, MgS04 . 7H20 0,295, KH2P04 0,162, CaCl2 0,238, NaHCO^ 2,1 ja dekstroosia 2,09 g/1). Spontaanisesti sykkivästä oikeasta eteisestä leikelti.in pois muut kudokset ja kumpaankin päähän liitettiin silkkilanka (4-0). Eteinen ripustettiin 20 ml:n lihaskam-mioon, jossa oli 32°C:ssa pidettyä hapetettua modifioitua Krebs'in liuosta. Eteisen supistukset tallennettiin isometrisesti Grass FT 0,03 voimansiirtojärjestelmän avulla ja supistusvoiman ja nopeuden rekisteröinnit tehtiin Beckman RP Dynograph'illa.

17 74959

Eteiseen kohdistettiin 1 g:n lepojännitys ja sen annettiin tasaantua tunnin ajan. Tasapa.inotusajan päätyttyä kylpyyn lisättiin _5 lähes maksimikonsentraatio histamiini-dihydroklor.id.ia (3x10 moolia) ja huuhdeltiin kudoksen preparoimiseksi. Sitten kylpyyn lisättiin histamiinia kumulatiivisesti, käyttämällä 1/2 log 10-.interval- -7 leja, kylvyn loppukonsentraation saamiseksi välille 1x10 - 3 x 10 . Histamiinin aiheuttaman eteisen sykintänopeuden lisääntymisen annettiin tasaantua ennen seuraavaa perättäistä konsentraation lisäystä. Maksimireaktio ilmaantui poikkeuksetta konsentraation ollessa 3 x 10 moolia. Histamiini huuhdeltiin pois useaan kertaan ja eteisen annettiin palautua kontrollinopeuteen. Sen jälkeen lisättiin koeyhdistettä (3x10^ moolia) ja 30 minuutin inkuboinnin jälkeen histamiini-konsentraat.io-reaktio uusittiin lisäämällä suurempia kon-sentraatio.ita.

Histamiinin ED^^-arvot (histamiinin konsentraatio, joka lisäsi sup.istusnopeutta 50 % maksimista) ja 95 % luotettavuusrajat ennen koeyhdisteen lisäämistä ja sen jälkeen, saatiin regressioanalyysin avulla (ks. Finney, Probit Analysis, 3rd ed., Cambrigde (1971)). Konsentraatio-reaktio-käyrän siirtymäkertoimet laskettiin seuraavasti:

ED

50 histamiini + yhdiste

Siirtymäkerroin = - ED^q histamiini BL-5966:n, BL-5993:n ja yhdisteen XVI osalta saadut kertoimet ilmoitettiin sitten suhteina simetidiinin osalta saatuun kertoimeen.

koeyhdisteen siirtymäkerroin - 1

Aktiivisuussuhde = - simetidiinin siirtymäkerroin - 1 Näissä tutkimuksissa saadut tulokset on koottu taulukkoon 1. Simet.idiini ja yhdiste XVI siirsivät histamiinin konsentraatio-reak-tio-käyrää oikealle kerto.imin 25,26 ja vastaavasti 38,61; BL-5966:n ja BL-5993:n siirtäessä käyrää oikealle kertoiltiin 181,67 ja vastaavasti 23,78. Kertoimien konsentraatio-reaktio-käyrän siirtymän perusteella yhdiste XVI oli noin 1,55 kertaa aktiivisempi kuin simetidii- 18 74959 ni/ BL-5966 oli noin 7,45 kertaa aktiivisempi kuin simetidiini ja BL-5933 oli noin 0,94 kertaa niin aktiivinen kuin simetidiini h.ista-miini-I^-reseptorin vasta-aineina eristetyssä marsun sydämen oikeassa eteisessä. BL-5966 oli tämän kokeen mukaisesti noin 4,80 kertaa aktiivisempi kuin yhdiste XVI.

19 74959 i- "·"' —I _ - j

j <D

T3 Ö | CO -P CO -P 3 d (0 3 -H d 1/1 1/1 ^ cn -p 3 ! ° I in I ΤΓ I <Tl Η Ό -P ! _? ! I n I ^ to >-H4-l,rH IrH I r-' to 3 -p -P <d

3 ·Ρ φ P

to -p £ p

•H ^ -P CD

> <! CO > •H — 11 ——— ..... — 11^1·————— - ------ ---

•H

-P

^ o c P :<0 d -p p CD cB >1 I ίο I r-t I r~~ I oo d cö :td I |CN I ο Ιο I t-~ P P X :(0 I " 1 I In ή 4J O £ d m too I r—i in

-H d -Η >,·Ρ I (N lm I 03 |CN

CD (1) -P *P o n

CD CO X P P

-p d <3 ·ρ p Λ O CD -P 0) 3 « P CO Λί to____________________ _____ d —

·· iH

£ S w o> ^ ___.

o —v n O ill a. ττ.-ν ίο n in en n o mb

n -, '5 (^^'ησι rr N CN^ tNOP

x ^ n cn n n n-s3

Tj CQ to wcDto oooin ·—to r~<N oo o o o cd o oo r- λ; "3 $ -PWiHcn η cn .-c r-~ ,η n 3 -HOcn - I ^i ^ I n I ^1 -n I n I v I i

° ^ on ο -T

3 _ ^ 1/1 σν n r-t o in no nt oc

r™ C -p -η -Γ-. ^ N n o n r-t r-t Γ- <D

f - n N N n n nnO

Sfl ° £ £ σ> to to 3 d in to -π n 3 n I (0 a σι > v PI <D ^

ffl ------II

-0 0 2 > A Xl S 2 2 2

Cm n< 10 10 1/1 10

X g 2 II II II II

e ;£ ιΛ I O I o to I o φ ,p I iH I H I r—i I Ή

α> >, C I I I I

+> W Q> IX IX IX IX

•H d d ^ 01 ^ o Ό 3 0 ,3 w « >i p----- d

*· £ I

G 2 com CNCN CN (N CN tN

*H JtB

d co _ -____ H to •H >i T3 -P P CD -P -P Φ CO £ Ή

•P P CD Ή H

co cu -P -P d -p > CO d *p *p d *p ^ d *P d *p

-r-t -p ,—I -p -pi—I -P '—I *p 1 I

I Ό -ΡΡΌ -P P OJ -p <p lO -P ^ ^ ; Jd £ Ο -P £ Ο -P Soo £0m ;>h (BP+j dPcn nJpcn (ΒΡσι 4J-PCU p +J -p ppm ppin cod£ cod'd coai wai •p o -p -pop: -p o tP -p o j

x x in xx >h xx PQ xx CQ

20 7 4 9 5 9

Mahaneritystä ehkäisevän vaikutuksen määrittäminen mahaport-ti 2 tuntia suljettuna olleella rotalla (Shay)

Mahaportin sulkemismenetelmän ovat kehittäneet Shay et ai. (Gastroenterology, 5 (1945), s. 53) mahahaavojen puhkaisututkimus-ta varten; menetelmän tultua tunnetuksi sitä on käytetty myös keinona tutkia rotan mahaneritystä (Shay et ai., Gastroenterology, 26 (1954), s. 906, ja Brodie, D. A., Am. J. Dig. Dis., 11 (1966), s. 231). Tämän menetelmän muunnelmaa on nykyään käytetty yhdisteiden mahaneritystä ehkäisevän vaikutuksen arvioimiseksi.

Kokeessa käytettiin Long Evans-urosrottia (280 - 300 g). Eläimet pantiin erillisiin häkkeih.in ja pidettiin ravinnotta 24 tuntia (annettiin vapaasti vettä). Eetterinukutuksessa vatsa avattiin keskiviivaa pitkin ja mahaportin ympärille sijoitettiin puuvilla-lankasidos. Haavan sulkemisen jälkeen eetterin anto lopetettiin ja vatsaontelon sisäisesti annettiin 1 mg/kg joko yhdistettä BL-5966, BL-5993, yhdistettä XVI, simetidiiniä tai väliainetta. Kaikki yhdisteet on liuotettu yhteen ekvivalenttiin hydrokloridia ja saattamalla sopivaan tilavuuteen vedellä. Eläimet palautettiin häkkeihinsä, joista vesipullot oli poistettu, ja 2 tunnin kuluttua ne tapettiin eetterillä. Maha poistettiin ja 2 tunnin mahakeräymä tyhjennettiin asteikolla varustettuun koeputkeen tilavuuden määrittämiseksi. Happamuus mitattiin titraamalla 1 ml:n näyte pH-arvoon 7,0 0,02-n nat- riumhydroksidillä käyttämällä automaatti-byrettiä ja potentiometrista pH-mittar.ia (Radiometer) . Titrattavissa oleva happo laskettiin mikroekvivalentteina kertomalla tilavuus (ml) hapon konsentraatiol-la (mekv/1). Hapon tuoton ehkäisvprosentti lasketaan seuraavasti: hapon tuotos-kontrolli - hapon tuotos-lääke .

hapon tuotos-kontrolli x

Koetulokset on koottu taulukkoon 2. Nämä tulokset osoittavat, että 2 tuntia mahaportti suljettuna olleella rottapreparaat.il-la BL-5966 on 5,81 kertaa, BL-5993 on 0,83 kertaa ja yhdiste XVI on 2,31 kertaa niin tehokas kuin simetidiin.i. On myös ilmeistä, että BL-5966 on 2,52 kertaa tehokkaampi kuin yhdiste XVI.

21 74959

Taulukko 2 BL-5966:n, BL-5993:n, yhdisteen XVI ja simetidi.inin vaikutus maha-hapon tuotokseen 2 tuntia rtiahaportti suljettuna olleella rotalla.

-.-1-m---

Yhdiste Annos(ip)Mahahapon ED50 Tehokkuu- tuotoksen suhde pnol/kg ehkäisy-% pmol/kg BL-5966 5 83 2, 5 59 1(80 5,81 1/25 36 0/625 27 BL-5"3 20 71 12.5 0/83 10 34 20 89

Yhdiste 10 77 4,52 2,31 XVI 5 42 40 72

Simeti- diini 20 57 10 41 10, 4 1, 00 5 53 _1 2/ 5 1 9 __ a) kunkin annoksen osalta käytettiin ainakin 5 eläintä 22 7495 9

Eritystä ehkäisevän vaikutuksen määrittäminen mahafistelin saaneilla koirilla

Thomas-tyyppisiä (Thomas, J. E., Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 46 (1971), s. 260) ruostumattomasta teräksestä valmistettuja kanyylejä kiinnitettiin jäniskoirien (10 - 12 kg) mahoihin juuri mahaport-tirauhasen alueen suulle lähelle mahalaukun isokaarretta pitkäaikaisen mahafLstelin aikaansaamiseksi. Eläinten annettiin toipua ainakin 2 kuukautta ennen kokeiden suorittamista. Koiria pidettiin ravinnotta 18 tuntia ennen kutakin koetta, niiden saadessa vettä vapaasti. Koirat sijoitettiin kannatinsiteeseen ja lääkkeen antoa varten raaja-laskimoon kiinnitettiin 20 cm:n neulakatetri (C. R. Baird, Inc.), jossa oli 5 cm:n neula (17 gauge). Mahan eritteitä koottiin joka 15 minuutin kuluttua valuttamalla avatusta kanyylistä. Peruseritteitä koottiin kahdesti peräkkäin 15 minuutin välein, ja jos näiden todettiin olevan liiallisia (>4 ml/15 min; pH < 5,0), eläintä ei käytetty kokeessa. Noudatettiin menetelmän muunnelmaa, jota ovat selostaneet Grossman ja Konturek, Gastroenterology, 66 (1974), s. 517. Heti toisen peruskeräyksen jälkeen Harvard Infusion Pump-laitteella ruiskutettiin 90 minuutin ajan histamiinia (100 jug/kg/h (6 ml/h) . Samalla ruiskutettiin nopeasti (30 s) 0,1 ml/kg joko BL-5966:tta, simeti-diiniä (liuotettu lisäämällä 1 ekvivalentti suolahappoa) ja saatettu sopivan tilavuiseksi 1-n suolaliuoksella) tai 1-n suolaliuosta, ja sen jälkeen histamiinin ruiskutusta jatkettiin vielä 60 minuutin ajan (kokonaisruiskutusaika 2,5 tuntia). Aina 15 minuutin kuluttua mahanestenäyte mitattiin lähimmän 0,5 ml:n tarkkuudella ja titratta-vissa oleva happamuus 0,02-n natriumhydroksidilla (lopullinen pH 7,0) mitattiin automaattiburetillä ja pH-mittarilla (Radiometer). Hapon tuotoksen estymisprosentti laskettiin samalla tavalla kuin edellä menetelmässä, jossa käytettiin rottaa, jonka mahaportti oli suljettu.

Kokeiden tulokset on koottu taulukkoon 3. On ilmeistä, että BL-5966 on 11,5 kertaa tehokkaampi kuin simetidiini mahahapon tuotoksen ehkäisyn suhteen koirilla, joilla on mahafisteli.

23 7 4 9 5 9

Taulukko 3 BL-5966:n ja simetidiinin vaikutus mahahapon tuotokseen koirilla, joilla on mahafisteli

Yhdiste Annos (iv) ^ Hapon tuo- ED Tehokkuus- . . toksen eh- 50 suhde pmol/kg käistymis-% pmol/kg BL-5966 0/375 2 90 °'1875 3 46 0/12 11/5 0/0938 3 47 0/0469 3 32 3/0 8 73

Simeti- diini 1/ 5 11 53 1, 32 1,0 _ 0/7 5_3_37___ N = kunkin annoksen osalta käytettyjen koirien lukumäärä 24 7 4 9 5 9

Esimerkki 1 1-nitro-2-(2-propinyyliamino)-2- £ 2-LK5-dimetyyliaroinometyy-li-2-furyyli)metyylitio7etyyliam.ino J -etyleeni (BL-5966) A. 1-nitro-2-metyylitio-2- { -2-/.(5-dimetyyliaminometyyli-2-furyyli)metyyl.itio7etyyliam.inoJ etyleeni

Seosta, jossa oli 2-^(5-dimetyyliaminometyyl.i-2-furyyl.i) -metyylitio7etyyliamiinia (12,86 g, 60 mmoolia) (valmistettu BE-paten-tissa 857 388 selitetyllä menetelmällä) ja 1 ,1 -b.is (metyylitio)-2-nitroetyleeniä (9,91 g, 60 mmoolia) (valmistettu menetelmän mukaisesti, jota on selitetty artikkeleissa Chem. Ber., 100 (1967), s. 591 ja Acta Chem. Scand., 21 (1967), s. 2797) asetonitriilissä (150 ml), sekoitettiin ja lämmitettyyn kiehuttaen typpisuojakaasussa 15,5 tuntia. Liuotin poistettiin haihduttamalla vakuumissa ja raakatuote kro-matografoit.iin käyttämällä silikageeli- ja metyleenikloridi-metanoli-grad.ienttieluointia. Sopivat fraktiot yhdistettiin, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (12, 6 g).

B. 1-nitro-2- (2-propinyyliamino) -2- ^2-/,( 5-dimetyyliaminometyy-li-2-furyyli)metyylitio^etyyliamino] etyleeni (BL-5966) Seosta, jossa oli vaiheen A tuotetta (3,04 g, 9,17 mmoolia) ja tislattua propargyyliamiinia (6 ml) asetonitriilissä (30 ml), sekoitettiin ja lämmitettiin kiehuttaen typpisuojakaasussa 19 tuntia. Reaktioseos haihdutettiin kuiviin vakuumissa ja jäännös kromatogra-foitiin käyttämällä sil.ikageeliä ja metyleeniklor.idi-metanoli-gra-dienttieluointia. Sopivat fraktiot yhdistettiin ja haihdutettiin kuiviin. Jäännös liuotettiin lämpimään asetonitriiliin, käsiteltiin puu-hiilen kanssa ja laimennettiin sitten dietyylieetterillä, jolloin saatiin otsikon yhdistettä, sp. 125 - 127°C.

Analyysi yhdisteelle C-]5H22N4°3S

laskettu: C 53,23 H 6,55 N 16,56 S 9,48 saatu: C 53,25 H 6,53 N 16,95 S 9,67.

Esimerkki 2 1-nitro-2- (2-propinyyliamino) -2- •f2-^.(5-dimetyyliaminometyy-li-2-furyyli)metyylitio7etyyliamino 1 etyleeni (BL-5966) A. 1-metyylitio-1-(2-propinyyliamino)-2-nitroetylee n i

Liuos, jossa oli propargyyliamiinia (1,10 g, 0,02 moolia) 22 ml:ssa metanolia, lisättiin pisaroittain sekoitettuun suspensioon, jossa oli 1-metyylisulfinyyli-1-metyylitio-2-nitroetyleeniä (valmistettu BE-patentissa 841 526 selitetyn menetelmän mukaisesti)25°C:ssa.

25 749 5 9

Liuoksen oltua tunnin ajan ympäristön lämpötilassa se haihdutettiin kuiviin vakuumissa, trituroitiin 20 ml:ssa kylmää isoprop-yylialkoholia ja suodatettiin. Kiteyttämällä uudelleen isopropyylial-koholista saatiin otsikon yhdistettä, sp. 131 - 132°C.

B. 1-nitro-2- (2-propinyyliam.ino) -2-f2/.(5-dimetyyliaminometyyli-furyyli)metyylltio7etyyliamino3 etyleeni (BL-5966)

Vaiheessa A saadun tuotteen liuoksen annetaan reagoida noin ekvimolaarisen määrän kanssa 2-/ (5-dimetyyliaminometyyl.i-2-f uryyli) -metyylitig^etyyliamiinia, jolloin saadaan esimerki 1 mukaisen jatkokäsittelyn ja kromatografoinnin jälkeen otsikon yhdistettä.

Vaiheessa A valmistettua tuotetta voidaan vaihtoehtoisesti valmistaa antamalla suunnilleen ekvimolaaristen määrien 1,1-b.is-(metyylitio)-2-nitroetyleeniä ja propargyyliamiinia reagoida inertis-sä liuottimessa.

Esimerkki 3 N-syano-N1 - (2-propin-1-yyli) -N"- {"2-/,(5-dimetyyl.iam.inometyy-li-2-furyyli)metyylitio7etyyli3 guanidiini (BL-5993)

Seosta, jossa oli N-syano-N'- ^2-/(5-dimetyyliaminometyyli- 2-f uryyli) metyylitio^etyy li -S-metyyli-.isotioureaa (4,0 g, 12,8 mmoolia) (valmistettu BE-patentissa 857 388 selitetyn menetelmän mukaisesti) ja tislattua propargyyliamiinia (4,0 ml) metanolissa (20 ml) sekoitettiin kiehumislämpötilassa typpisuojakaasussa 19 tuntia. Reak-tioseos haihdutettiin kuiviin vakuumissa ja jäljelle jäänyt öljy kro-matografoitiin käyttämällä silikageeliä ja metyleenikloridi-metanoli-gradienttieluointia. Sopivat fraktiot yhdistettiin, jolloin saatiin tuotetta (2,04 g). Kiteyttämällä uudelleen asetonitriilistä puuhii-likäsittelyä käyttäen saatiin otsikon yhdistettä, sp. 122 - 124°C. Analyysi yhdisteelle 0^112^^05 laskettu: C 56,40 H 6,63 N 21,93 S 10,04 saatu: C 56,35 H 6,72 N 22,07 S 10,10.

26 74959

Esimerkki 4 N-syano-N1-(2-propin-1-yyli)-N"- f2-/L( 5-dimetyyliaminometyy-11-2-furyyli)metyylitio7etyylij guanidiini (BL-5993) A. N-syano-N1-(2-propin-1-yyli)-S-metyyli-isotiourea Liuosta, jossa oli dimetyyli-syanodit.ioimidokarbonaattia (valmistettu menetelmän mukaisesti, jota on selitetty artikkelissa J. Org. Chem., 32 (1967), s. 1566) (16,0 g, 0,109 moolia) ja prop-argyyliamiinia (6,03 g, 0,109 moolia) asetonitriilissä (320 ml) sekoitettiin kiehuttaen 4 tuntia ja sitten 25°C:ssa 12 tuntia. Jatkokäsittelyn jälkeen saatiin otsikon yhdistettä (13,58 g, 81 %), sp. 160 - 164°C.

B. N-syano-N*- (2-propin-1-yyl.i)-N"- ^2-/.(5-d.imetyyliaminometyy-li-2-furyyli)metyylitio^etyyli 1 guanidiini (BL-5993) Vaiheessa A saadun tuotteen annetaan reagoida suunnilleen ekvimolaarisen määrän kanssa 2-^_(5-dimetyyliaminometyyli-2-furyyli)-metyylitio^etyyliamiinia reagoimattomassa liuottimessa, jolloin saadaan esimerkin 3 mukaisen jatkokäsittelyn ja kromatografoinnin jälkeen otsikon yhdistettä.

Esimerkki 5 1 -nitro-2- (2-propinyyliam.ino) -2- {2-/(5- /ZN-metyyli-N-prop-argyyliaraino/metyyli ^ -2-furyyli)metyylitio7etyyl.iamino ] -etyleeni

Annettaessa furfuryylialkoholin ja N-metyylipropargyyliamii-nihydrokloridin reagoida paraformaldehydin kanssa artikkelin J. Chem. Soc. (1958), s. 4728 yleismenetelmän mukaisesti ja käsittelemällä tuotetta systeamiini-hydrokloridin kanssa ja sen jälkeen neutraloimalla, saadaan 2- (5- £^N-metyyli-N-propargyyliamino/metyyli 3-2- furyyli)metyylitio ~j etyyliamiinia. Kun viimeksi mainitun tuotteen annetaan reagoida 1,1-bis-(metyylitio)-2-nitroetyleenin kanssa ja sitten propargyyliamiinin kanssa esimerkin 1 mukaisen menetelmän mukaisesti saadaan otsikon yhdistettä, sp. 125 - 126,5°C.

27 74959

Esimerkki 6 1-nitro-2- (2-propinyyliamino)-2- C 2-/_(3-metyyli-5-dimetyyli-amj nometyyli-2-furyyli)metyylitio/etyyliamino ^ etyleeni A. 2-/J3-metyyli-5-dimetyyliaminometyy li-2-furyyli) metyyli t.io7-etyyliamino

Antamalla 3-metyyli-2-furfuryylialkoholin (valmistettu menetelmän mukaisesti, jota on selitetty artikkelissa J. Am. Chem. Soc., 72 (1950), s. 2195) ja dimetyyliamiini-hydrokloridin reagoida para-formaldihydin kanssa yleismenetelmän mukaisesti, jota on selitetty artikkelissa J. Chem. Soc. (1958), s. 4728, ja käsittelemällä saatua tuotetta systeamiini-hydrokloridin kanssa ja sen jälkeen neutraloimalla, saadaan otsikon tuotetta.

B. 1-nitro-2- (2-prop.inyy liamino) -2- £ 2-LK 3-me tyyli-5-d ime tyyli -aminometyyli-2-furyy11)metyylitio/etyyliamino \ etyleeni

Kun vaiheessa A saadun tuotteen annetaan reagoida esimerkin 1 mukaisen menetelmän vaiheiden A ja B mukaisesti, saadaan otsikon tuotetta, sp. 121,5 - 123°C.

Esimerkki 7 N-syano-N1- (2-propin-1-yyli)-N"- |^2-/.(3-metyyli-5-dimetyyli-aminometyyli-2-furyyli)metyylitio7etyyli.l guanidiini Kun dimetyylisyanoditioimidokarbonaatin alkoholiliuoksen annetaan reagoida 2-^(3-metyyli-5-dimetyyliaminometyyli-2-furyyli)-metyylitio7etyyliamiin.in kanssa, ja saatua N-syano-N'- ^2-^13-metyy-li-5-dimetyyliaminometyyli-2-furyyli)metyylitio7etyyli -S-metyyli-isotioureaa käsitellään propargyylin kanssa esimerkin 3 yleismenetelmän mukaisesti, saadaan otsikon yhdistettä, sp. 98 - 101,5°C.

Claims (1)

1. 28 74959 Patenttivaatimus Menetelmä terapeuttisesti käytettävien (N"-syaaniguanidii-ni- ja 1,1-diamino-2-(substituoitu)etyleeni)N-alkinyyli-N'- {/-2-/(5-substituoitu-2-furyyli) alkyylitio^alkyyli J - johdannaisten valmistamiseksi , joiden kaava on 2 --r4 R \ I I Ϊ ^ N-CH„-V ^- CH--S-CH CH -NHCNH-R1 ^ 2^0^ 2 22 R3^ jossa R on ainakin 3 hiiliatomia sisältävä alempi alkinyyliryhmä, R ja R ovat samoja tai erilaisia ja merkitsevät alempaa alkyyliä tai ainakin 3 hiiliatomia sisältävää alempaa alk.inyyliä, R4 on vety tai alempi alkyyli, ja X on CHNC>2 tai NCN, sekä näiden johdannaisten myrkyttömien, farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että yhdisteen, jonka kaava on 2 --r4 r\ i I ; N-CH„—k J-CH -S-CH.CH -NHCSCH., ^ 2 2 2 2 3 R3 2 3 4 jossa R , R , R ja X merkitsevät samaa kuin edellä, annetaan reagoida yhdisteen kanssa, jonka kaava on H2NR1 jossa R on edellä määritelty, inertissä liuottimessa huoneen lämpötilassa tai sitä korkeammassa lämpötilassa.