FI70592B - Foerfarande foer framstaellning av uricase - Google Patents

Foerfarande foer framstaellning av uricase Download PDF

Info

Publication number
FI70592B
FI70592B FI812868A FI812868A FI70592B FI 70592 B FI70592 B FI 70592B FI 812868 A FI812868 A FI 812868A FI 812868 A FI812868 A FI 812868A FI 70592 B FI70592 B FI 70592B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
uricase
preparation
medium
uric acid
negative
Prior art date
Application number
FI812868A
Other languages
English (en)
Other versions
FI812868L (fi
FI70592C (fi
Inventor
Roberto Olivieri
Eugenio Fascetti
Pierluigi Ciuffolotti
Ludwig Degen
Original Assignee
Eni Ente Naz Idrocarb
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Eni Ente Naz Idrocarb filed Critical Eni Ente Naz Idrocarb
Publication of FI812868L publication Critical patent/FI812868L/fi
Publication of FI70592B publication Critical patent/FI70592B/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI70592C publication Critical patent/FI70592C/fi

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0012Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7)
    • C12N9/0044Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on other nitrogen compounds as donors (1.7)
    • C12N9/0046Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on other nitrogen compounds as donors (1.7) with oxygen as acceptor (1.7.3)
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205Bacterial isolates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/62Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving uric acid
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/265Micrococcus
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215Microorganisms
    • Y10S435/822Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/859Micrococcus

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

1 70592 U r i k a a s i n valmistusmenetelmä Förfarande för framställning av uricase Tämä keksintö koskee menetelmää, jolla voidaan valmistaa hyvin aktiivista urikaasientsyymiä (EC 1.7.3.3.), jota voidaan käyttää kliinisessä diagnostiikassa virtsaha-pon määrittämiseen veriseerumista tai virtsasta.
5 Urikaasi on entsyymi, joka katalysoi virtsahapon hapettumista allantoiiniksi, ja sitä ei ole läsnä korkeampien nisäkkäiden kuten ihmisen kudoksissa, mutta sen sijaan sitä on alempien nisäkkäiden kudoksissa, varsinkin sisäelimissä, ja myös enemmän ja vähemmän eräissä mikro-10 organismeissa. Uusi havainto, joka onkin tämän keksinnön ensimmäisenä kohteena, on se, että urikaasia voidaan tuot-ttaa Micrococcus roseus -mikro-organismilla, jonka ei ole aikasemmin tiedetty voivan tuottaa mainittua entsyymiä, ja lisäksi sillä on muihin tunnetun tyyppisiin mikro-orqanis-15 meihin verrattuna se etu, että se tuottaa suuria urikaasi-määriä e 1 atusaineissa , jotka sisältävät virtsahappoa pieninä väkevyyksinä. Edelleen on yllättäen havaittu, että Micrococcus roseus NRRL B 12196 -kannalla tuotetun urikaasin optimaalinen aktiivisuusalue eroaa muilla bakteereilla tuo-20 tetun urikaasin vastaavsta ollen lähellä fysiologisten nesteiden pH-arvoja, ja tämä onkin edullista, koska näin ollen pH:ta ei tarvitse säätää niissä biologisissa näytteissä, joista virtsahappo halutaan määrittää, ja täten vältytään säädön näytteeseen mahdollisesti aiheuttamilta kemiat li-25 silta muutoksilta. Kyseinen mi kro-organismi on eristetty viljelysmaasta Monterotondosta (Rooma) ja sillä on seuraa-vat morfologiset ominaisuudet:
Mikroskooppinen morfologia
Palloja, joiden halkaisija on 1-2,5 mikronia, ja 30 jotka ovat liikkumattomia ja Gram-positiivisia , jakautuvat useammassa kuin yhdessä tasossa ja esiintyvät kuutiomaisissa paakuissa tai epäsäännöllisissä ryhmissä ja joskus pareina tai yksinään.
Makroskooppinen morfologia 55 Pesäkkeet ravintoagarilla: kohonnut, yhtenäinen reu na, ruusunhohtoinen väri, pehmeä pinta, halkaisija 1-2 mm.
_ _ ΤΓΓ.
2 70592
Vinopinta-agar: vaalea ruusunhohtoi nen ihonväri, sileä ja kiiltävä.
Biologiset ominaisuudet
Kasvu glukoosiliemessä: vähäistä sameutta, jossa 5 limaista sakkaa, väri hieman vaaleanpunainen, pH = 6,5.
Kasvu tapahtuu paremmin 10 °C kuin 45 °C:ssa optimaalisen alueen ollessa välillä 25-35 °C.
Mikro-organismi kasvaa glukoosi liuoksessa, joiden natriumklondipitoisuudet ovat 5¾ ja 103!, mutta ei liuoksessa, 10 jonka natriumkloridipitoisuus on 15%.
Ei kasva Simmonsin sitraattiagarissa.
Aerobinen happamuudenmuodostus sokereista "Purple Broth" -alustassa (Dl F CO): ksyloosi, glyseroli, mannitoli, lak toosi, maltoosi, sorboosi, rihoosi, a rahi nousi, rnffinoosi, sel-1S lobioosi negatiivisia; glukoosi, sakkaroosi ja fruktoosi aiheuttivat hieman viivästyneen happamuuden (7-10 vuorokautta).
Arginiinin hydrolyysi: negatiivinen Tärkkelyksen hydrolyysi: positiivinen
Gelatiinin hydrolyysi: negatiivinen 20 Ureaasi: positiivinen H^S: negatiivinen
Katalaasi: positiivinen
Nitrataasi: positiivinen
Indoli: negatiivinen 25 Asetoiini: negatiivinen
Metyylipuna: negatiivinen
Lesitinaasi: negatiivinen L i p a a s i (voi ja oliiviöljy): negatiivinen 30 Kun näitä tietoja verrattiin teoksessa Bergey's
Manual of Determinative Bacteriology, Vili painos, esitettyihin tietoihin, voitiin todeta, että tämän keksinnön sisältämä mikro-organismi kuuluu Micrococc ac e a e-heimoon, Micrococcus-sukuun ja roseus- lajiin. Se on taltioitu 35 Northern Regional Research Centeriin, Peoria, 111., U.5.A., jossa sille on annettu tunnus NRRl B-12196.
Micrococcus roseus NRIU B-12196 -kantaa voidaan viljellä millä tahansa tavanomaisella aerobiselle menetelmällä kuten pintavi 1 je 1mänä tai mieluummin pinnana 1 nisvi1je 1 mäna 3 70592 käyttämällä sekoitettuja fermentore i ta. Elatusalusta, joka voi olla joko kiinteä tai nestemäinen, sisältää assimiloituvan hiili- ja typpi lähteen, fosfori lähteen ja kivennäis-suoloja ja vitamiineja.
5 Viljely void a an suorittaa lämpötila-alueella ID - 40 °C, mielellään alueella 25-35 °C, kasva tuoajän ollessa 10-48 tuntia, mielellään 20-30 tuntia ja pH:n ollessa alueella 6-9, mielellään välillä 7-8.
Sopivia hiililäht. eitä ovat esim. glukoosi, laktaat-10 ti, asetaatti, sakkaroosi, fumaraatti, virtsahappo, maissi-liotusvesi, glyseroli.
Sopivia typpi lähteitä ovat esim. lihahydrolysaatit, kaseiini, soijahydrolysaatit, ammoniakkisuolat. virtsa-aine, nitraatit tai virtsahappo.
15 Urikaasin uuttaminen bakteerimassasta ja mahdollinen puhdistus voidaan suorittaa tavanomaisilla entsymologiassa tunnetuilla menetelmillä. Micrococcus rose us NRRl B -1.2196 -kannasta uutettu urikaasi voidaan immobilisoida polymeeri-matriiseihin kemiallisilla sidoksilla tai ionisidoksilla 20 tai pelkästään fysikaalisella tavalla.
S e u r a a v a f esimerkit v a 1 a i se v a t keksintöä:
Esimerkki 1
Elatusalustan koostumus oli seuraava:
Hiivauute 15g/J
25 virtsahappo 2 g/1 pH säädettiin natriumhydroksilla arvoon 7,2 ja jaettiin 200 m 1:n erissä 500 m 1 : n pulloihin. liuokset steriloitiin (116 °C, 30 m .in) ja pulloihin siirrostettiin NRRL.
B-12196 -kantaa agarvinopinnoilt.a, joissa oli samaa elatus-30 ainetta 2% agarissa, ja pulloja inkuboitiin 24 tuntia 30 °C:ssa orbitaalisekoituksessa nopeudella 200 ’ 1/min. Sen jälkeen solut sentrifugoitiin talteen ja saatiin 3 g massaa (märkäpaino) 200 m 1:s t a elatusliuosta. Saatu solumassa suspendo itiin 60 m 1:a a n fosfaattipuskuria (0,1 M; p H = 8,5 ) 35 ja solut rikottiin täydellisesti käsittelemällä suspensio
French Pressure Cell Press -laitteessa. Saadun uutteen entsyymiaktiivisuus osoitti, että 1 g märkää solumassaa sisälsi 100 urik a a siyk sik köä .
4 70592
Urikaasiaktiivisuus määriteltiin spektrofotometrisesti seuraamalla virtsahapon hajoamista 2 8 3 n m : s s a menetelmällä Mahler et ai.. J. Bin! - Chem. (1955), 2 1 6, 625, jota oli modifioitu seurasvassa kuvatulla tavalla. 7 ml liuosta, 5 joka sisälsi 20 mg virtsa happo a 100 m 1 : s s a fosfaattipuskuria ,0.1 M , p H = 8 , 5 ) , laitettiin 50 ml pulloon 30 aC : s s a sekoitetulle vesihauteelle. Reaktio käynnistettiin lisäämällä pieni määrä entsyymiuutetta. Heti uutel isäyksen jälkeen ja vielä 10 minuutin reaktioajan kuluttua r e a k t ι o s e ok s e s t. a otet-10 tiin 0,5 ml näytteet, jotka lisättiin 4 ml:a an 0,1 M H Cl.
Mäin saatujen liuosten absorbanssi t luettiin arvossa 28 3 nm.
Urikaas iyksikkci määriteltiin siksi määräksi entsyymiä. joka kykenee h a jo tk a maan 1 m i k r o m o o 1 in v i r t sah a p p o a minuutissa edellä kuvatuissa olosuhteissa.
11, Fsimerkki 2
Micrococcus roseus NRRI B-12196 -solu-uute valmiste t t t i i n esimerkin 1 mukaisesti.
Raakauute sent, rifug o itiin ja emäliu oksen sisältämä urikaasi aktiivisuus määriteltiin edellä kuvatulla tavalla 2f) käyttämällä reaktioliuosta, joissa virtsahappo oli liuotettu 0.1 M fosfaattipuskuriin, ja jotka oli säädetty eri pH-arvoihin. Samanaikaisesti määritettiin sellaisten ent-syymiuutteiden aktiivisuudet, jotka oli saatu Bacillus f as t i d i o siis -viljelmistä, samoissa kasvatusolosuhteissa.
2 <·, kuin Micrococcus roseus -kant.aa viljeltiin. Saadut tulokset on esitetty taulukossa 1, jossa kummankin mikro-orga-n i s m ι n vertailuarvoksi p H - a r v o s r> a 9 on merkitty 100.
taulukko 1
Urikaasiakt ii v isuus ptl:n funktiona B. fastidiosus-5C ja M. roseus -uutteissa.
Reaktio seoksen pH Uutettu mikro-organismi M . roseus B_._fast.idosus 6.5 71 13,5 7.0 94 35 357,5 103 57 8.0 106 85 8.5 103 95 9 . U 10 0 10 0

Claims (5)

1. Menetelmä urikaasin valmistamiseksi mikro-orqa- nismin avulla aerobisissa olosuhteissa elatusaineessa, joka sisältää assimiloituvan hiili-, typpi- ja fosforilähteen sekä kivennäissuoloja, t u n n e t t u s i i t ä , e t - 5 ta mikro-organismi on Micrococcus roseus NRRiB-12196.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä urikaasin valmistamiseksi, tunnettu siitä, että vil-jelylämpötila on välillä 10 - 40 °C.
3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä urikaasin 10 valmistamiseksi, t u n n e t t u s i i t ä , että v i 1 - jelylärnpötila on välillä 2 5 - 35 °C.
4. Edellä olevien patenttivaatimusten mukainen menetelmä urikaasin valmistamiseksi, t u n n e t t u s i i -t ä , että elatusaineen pH on välillä 6-9. 15
5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä urikaasin valmistamiseksi, t u n n e t t u s i i t ä , että ela tusaineen pH on välillä 7 - 8.
FI812868A 1980-09-19 1981-09-15 Foerfarande foer framstaellning av uricase FI70592C (fi)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IT2475780 1980-09-19
IT24757/80A IT1141061B (it) 1980-09-19 1980-09-19 Procedimento per la produzione di uricasi

Publications (3)

Publication Number Publication Date
FI812868L FI812868L (fi) 1982-03-20
FI70592B true FI70592B (fi) 1986-06-06
FI70592C FI70592C (fi) 1986-09-24

Family

ID=11214644

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI812868A FI70592C (fi) 1980-09-19 1981-09-15 Foerfarande foer framstaellning av uricase

Country Status (18)

Country Link
US (1) US4389485A (fi)
JP (1) JPS57115177A (fi)
AR (1) AR226750A1 (fi)
AT (1) AT375398B (fi)
BE (1) BE890413A (fi)
CA (1) CA1160170A (fi)
CH (1) CH650528A5 (fi)
DE (1) DE3137049C2 (fi)
DK (1) DK148360C (fi)
ES (1) ES506360A0 (fi)
FI (1) FI70592C (fi)
FR (1) FR2490673A1 (fi)
GB (1) GB2084157B (fi)
IE (1) IE51591B1 (fi)
IT (1) IT1141061B (fi)
NL (1) NL8104319A (fi)
NO (1) NO159862C (fi)
PT (1) PT73696B (fi)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0671425B2 (ja) * 1985-06-05 1994-09-14 サッポロビール株式会社 ウリカ−ゼおよびその製造法
US6913915B2 (en) 2001-08-02 2005-07-05 Phoenix Pharmacologics, Inc. PEG-modified uricase

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR6301M (fi) * 1967-03-29 1968-09-09
US4062731A (en) * 1976-07-21 1977-12-13 Eastman Kodak Company Production of uricase from micrococcus luteus
JPS6031472B2 (ja) * 1978-12-14 1985-07-22 協和醗酵工業株式会社 酸性ウリカ−ゼ

Also Published As

Publication number Publication date
CH650528A5 (it) 1985-07-31
FI812868L (fi) 1982-03-20
DK148360C (da) 1985-11-11
DE3137049C2 (de) 1983-01-20
NO159862C (no) 1989-02-15
JPS57115177A (en) 1982-07-17
US4389485A (en) 1983-06-21
PT73696B (en) 1982-12-10
NL8104319A (nl) 1982-04-16
GB2084157A (en) 1982-04-07
DK148360B (da) 1985-06-17
JPH0260313B2 (fi) 1990-12-14
ES8302088A1 (es) 1983-01-01
ES506360A0 (es) 1983-01-01
IE812180L (en) 1982-03-19
FI70592C (fi) 1986-09-24
IE51591B1 (en) 1987-01-21
AR226750A1 (es) 1982-08-13
FR2490673A1 (fr) 1982-03-26
NO813162L (no) 1982-03-22
BE890413A (fr) 1982-03-18
NO159862B (no) 1988-11-07
PT73696A (en) 1981-10-01
CA1160170A (en) 1984-01-10
GB2084157B (en) 1983-11-02
AT375398B (de) 1984-07-25
ATA403481A (de) 1983-12-15
FR2490673B1 (fi) 1984-04-13
DK387181A (da) 1982-03-20
IT1141061B (it) 1986-10-01
IT8024757A0 (it) 1980-09-19
DE3137049A1 (de) 1982-04-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4283494A (en) Microbial lipase, process for its preparation and microbiologically pure culture therefor
KR100339723B1 (ko) 미생물을사용한아미드화합물의제조방법
Werch et al. The decomposition of pectin and galacturonic acid by intestinal bacteria
FI70592B (fi) Foerfarande foer framstaellning av uricase
JPS62289A (ja) α−ケト酸からのL−α−アミノ酸の酵素学的製造方法
US4418146A (en) Preparation of D-N-carbamyl-α-aminoacids and micro-organisms for carrying out this preparation
US4385120A (en) Thermostable glycerokinases and process for its production
NAKAGAWA et al. Terferol, an inhibitor of cyclic adenosine 3', 5'-monophosphate phosphodiesterase I. Isolation and characterization
EP0032987A1 (en) Thermophilic aspartase, processes for producing, culture used, and L-aspartic acid preparation process using the same
SU676177A3 (ru) Способ получени биомассы микроорганизмов
Schuster et al. A synthetic medium for continuous culture of the S‐layer carrying Bacillus stearothermophilus PV 72 and studies on the influence of growth conditions on cell wall properties
Hasegawa Distribution in organisms and stereospecificity of β-hydroxyisobutyrate dehydrogenase
Karube et al. Bacteriolysis by immobilized enzymes
RU1549227C (ru) Способ получения комплекса литических ферментов
JPS61231996A (ja) グアニジノ酢酸分解酵素の安定化法
CA1150654A (en) Process for the production of citric acid
Procházka et al. Esterases in mycobacteria: I. Carboxylic ester hydrolases in a submerged culture of Mycobacterium phlei
SU1386657A1 (ru) Питательна среда дл культивировани кампилобактерий
JP3125954B2 (ja) 新規なホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ及びその製法
FR2472608A1 (fr) Nouvelle glucose-6-phosphate-deshydrogenase, son procede de preparation et compositions coenzymatiques la contenant
GB1571877A (en) Microbial lipase and its preparation
SU767196A1 (ru) Способ выращивани продуцентов литических ферментов
JPH0248231B2 (ja) Shinkikishiranaazeoyobisonoseizoho
SU1479513A1 (ru) Способ получени формиатдегидрогеназы
JPS6075283A (ja) 新菌株

Legal Events

Date Code Title Description
MM Patent lapsed
MM Patent lapsed

Owner name: ENI - ENTE NAZIONALE IDROCARBURI