JP3125954B2 - 新規なホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ及びその製法 - Google Patents
新規なホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ及びその製法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は試料中の炭酸ガス濃度を
測定するのに好適である、新規な性質を有するホスホエ
ノールピルビン酸カルボキシラーゼ及びその製法に関す
るものである。
測定するのに好適である、新規な性質を有するホスホエ
ノールピルビン酸カルボキシラーゼ及びその製法に関す
るものである。
【０００２】
【従来の技術】ホスホエノールピルビン酸カルボキシラ
ーゼは多くの植物、原生動物、大部分の細菌に存在する
ことが報告されている。これらの酵素については「ホス
ホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ」 田口正明及び
香月裕彦、蛋白質、核酸、酵素、Vol.22,No.14(1977)等
に詳しく記載されている。
ーゼは多くの植物、原生動物、大部分の細菌に存在する
ことが報告されている。これらの酵素については「ホス
ホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ」 田口正明及び
香月裕彦、蛋白質、核酸、酵素、Vol.22,No.14(1977)等
に詳しく記載されている。
【０００３】ホスホエノールピルビン酸カルボキシラー
ゼは、ホスホエノールピルビン酸および重炭酸イオンに
作用して、オキザロ酢酸とリン酸イオンを生成する反応
を触媒する。体液、特に血清および血漿中に存在する炭
酸ガスは重炭酸イオン（ＨＣＯ3 -）と平衡状態にあり、
体液中で第２に大きなフラクションである。故に炭酸ガ
スおよび重炭酸イオンは血液中で最も重要な生理学的緩
衝作用系を形成している。このため血清または血漿中の
炭酸ガス含量の測定値は、電解質分散、アニオン不足の
有意な標識であり、これは呼吸、代謝系の酸−塩基不均
衡の医学的診断の助けになっている。例えば血清および
血漿中の重炭酸濃度の正常値は２２〜３２ｍｍｏｌ／ｌ
であるが、異常時には低値で１５ｍｍｏｌ／ｌ、高値で
４０ｍｍｏｌ／ｌと変動する。
ゼは、ホスホエノールピルビン酸および重炭酸イオンに
作用して、オキザロ酢酸とリン酸イオンを生成する反応
を触媒する。体液、特に血清および血漿中に存在する炭
酸ガスは重炭酸イオン（ＨＣＯ3 -）と平衡状態にあり、
体液中で第２に大きなフラクションである。故に炭酸ガ
スおよび重炭酸イオンは血液中で最も重要な生理学的緩
衝作用系を形成している。このため血清または血漿中の
炭酸ガス含量の測定値は、電解質分散、アニオン不足の
有意な標識であり、これは呼吸、代謝系の酸−塩基不均
衡の医学的診断の助けになっている。例えば血清および
血漿中の重炭酸濃度の正常値は２２〜３２ｍｍｏｌ／ｌ
であるが、異常時には低値で１５ｍｍｏｌ／ｌ、高値で
４０ｍｍｏｌ／ｌと変動する。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】上記文献に記載されて
いるようにホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ
には、多くのエフェクターが存在するが、大部分の酵素
はアクチベーターとして高価なアセチルコエンザイム
Ａ、フルクトース−１、６−ジリン酸やグルコース６−
リン酸を必要としている。また、アクチベーターを必要
としないホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼは
一部の細菌およびＣ４植物に見られる。しかしこれらの
起源の酵素にとって問題とされるのは安定性である。す
なわち、炭酸ガス測定試薬の使用ｐＨは、ｐＨ８．０以
上の緩衝液が汎用されている。その理由として炭酸ガス
はアルカリ性ｐＨでは重炭酸イオン形成側に平衡が片寄
り、逆に酸性側では炭酸ガス形成側に平衡が片寄るため
である。上述のＣ４植物のホスホエノールピルビン酸カ
ルボキシラーゼに代表される酵素は、炭酸ガス測定試薬
中での使用ｐＨ（ｐＨ８．０）中で不安定であることは
よく知られた事実である。上記の背景より、高価なアク
チベータを必要とせず、また炭酸ガス測定試薬の使用ｐ
Ｈ（ｐＨ８．０）中で安定なホスホエノールピルビン酸
カルボキシラーゼが求められていた。
いるようにホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ
には、多くのエフェクターが存在するが、大部分の酵素
はアクチベーターとして高価なアセチルコエンザイム
Ａ、フルクトース−１、６−ジリン酸やグルコース６−
リン酸を必要としている。また、アクチベーターを必要
としないホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼは
一部の細菌およびＣ４植物に見られる。しかしこれらの
起源の酵素にとって問題とされるのは安定性である。す
なわち、炭酸ガス測定試薬の使用ｐＨは、ｐＨ８．０以
上の緩衝液が汎用されている。その理由として炭酸ガス
はアルカリ性ｐＨでは重炭酸イオン形成側に平衡が片寄
り、逆に酸性側では炭酸ガス形成側に平衡が片寄るため
である。上述のＣ４植物のホスホエノールピルビン酸カ
ルボキシラーゼに代表される酵素は、炭酸ガス測定試薬
中での使用ｐＨ（ｐＨ８．０）中で不安定であることは
よく知られた事実である。上記の背景より、高価なアク
チベータを必要とせず、また炭酸ガス測定試薬の使用ｐ
Ｈ（ｐＨ８．０）中で安定なホスホエノールピルビン酸
カルボキシラーゼが求められていた。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記問題点
を解決するため鋭意研究を重ねた結果、アセトバクター
・ハンゼニイ（Acetobacter hansenii）IFO14820から高
価なアクチベーターを必要とせず、ｐＨ８．０で安定な
ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼを見い出し
本発明を完成するに至った。
を解決するため鋭意研究を重ねた結果、アセトバクター
・ハンゼニイ（Acetobacter hansenii）IFO14820から高
価なアクチベーターを必要とせず、ｐＨ８．０で安定な
ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼを見い出し
本発明を完成するに至った。
【０００６】すなわち本発明は下記理化学的性質を有す
る新規なホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼで
ある。 （１） 次の反応を触媒する。
る新規なホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼで
ある。 （１） 次の反応を触媒する。
【０００７】
【化３】 （２） 至適作用ｐＨ：７．５〜８．０ （３） ｐＨ安定性：ｐＨ５．０〜８．０（２５℃、２
４時間処理） ｐＨ７．５〜８．５（１０ｍＭ ＭｇＳＯ4 を含むトリ
ス緩衝液中で２５℃、２４時間処理） （４） 至適作用温度：６０℃ （５） 熱安定性：４５℃まで安定（ｐＨ７．０、１５
分間処理） （６） 分子量：３９０，０００±１０、０００（ゲル
ろ過法） １００，０００±５、０００ （ＳＤＳ−ＰＡＧＥ） （７） アセチルＣｏＡで活性化されない。
４時間処理） ｐＨ７．５〜８．５（１０ｍＭ ＭｇＳＯ4 を含むトリ
ス緩衝液中で２５℃、２４時間処理） （４） 至適作用温度：６０℃ （５） 熱安定性：４５℃まで安定（ｐＨ７．０、１５
分間処理） （６） 分子量：３９０，０００±１０、０００（ゲル
ろ過法） １００，０００±５、０００ （ＳＤＳ−ＰＡＧＥ） （７） アセチルＣｏＡで活性化されない。
【０００８】また本発明はアセトバクター属に属し、上
記の新規なホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ
生産能を有する菌株を栄養培地にて培養し、該培養物か
ら新規なホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼを
採取することを特徴とする新規なホスホエノールピルビ
ン酸カルボキシラーゼの製造法である。
記の新規なホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ
生産能を有する菌株を栄養培地にて培養し、該培養物か
ら新規なホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼを
採取することを特徴とする新規なホスホエノールピルビ
ン酸カルボキシラーゼの製造法である。
【０００９】本発明の酵素の起源は上記性質を有するホ
スホエノールピルビン酸カルボキシラーゼを産生しうる
ものであれば植物、微生物など如何なる起源のものを用
いてもよい。好ましくは、上記性質を有するホスホエノ
ールピルビン酸カルボキシラーゼを産生しうるアセトバ
クター属細菌であって、好適な例としてはアセトバクタ
ー・ハンゼニイ(Acetobacter hansenii)IFO14820が挙げ
られる。
スホエノールピルビン酸カルボキシラーゼを産生しうる
ものであれば植物、微生物など如何なる起源のものを用
いてもよい。好ましくは、上記性質を有するホスホエノ
ールピルビン酸カルボキシラーゼを産生しうるアセトバ
クター属細菌であって、好適な例としてはアセトバクタ
ー・ハンゼニイ(Acetobacter hansenii)IFO14820が挙げ
られる。
【００１０】本発明の酵素を製造するにあたっては、上
記ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ生産菌を
栄養培地に培養し、該培養物からホスホエノールピルビ
ン酸カルボキシラーゼを採取することにより製造でき
る。ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ生産菌
の培養にあたって使用する培地としては、使用菌株が資
化しうる炭素源、窒素源、無機物、その他必要な栄養素
を適量含有するものであれば、合成培地、天然培地いず
れも使用できる。炭素源としては、例えばペプトン類、
肉エキス、酵母エキス等の窒素含有天然物や、塩化アン
モニウム、クエン酸アンモニウム等の無機窒素含有化合
物が使用される。無機物としては、リン酸カリウム、リ
ン酸ナトリウム、硫酸マグネシウム等が使用される。培
地は通常振とう培養、あるいは通気撹拌培養で行う。培
養温度は２０〜４０℃、好ましくは２５〜３０℃、培養
ｐＨ５〜９の範囲で、好ましくは７〜８に制御するのが
良い。これら以外の条件下でも使用する菌株が生育すれ
ば実施できる。培養期間は通常１〜１０日で生育し、菌
体内にホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼが生
産蓄積される。
記ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ生産菌を
栄養培地に培養し、該培養物からホスホエノールピルビ
ン酸カルボキシラーゼを採取することにより製造でき
る。ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ生産菌
の培養にあたって使用する培地としては、使用菌株が資
化しうる炭素源、窒素源、無機物、その他必要な栄養素
を適量含有するものであれば、合成培地、天然培地いず
れも使用できる。炭素源としては、例えばペプトン類、
肉エキス、酵母エキス等の窒素含有天然物や、塩化アン
モニウム、クエン酸アンモニウム等の無機窒素含有化合
物が使用される。無機物としては、リン酸カリウム、リ
ン酸ナトリウム、硫酸マグネシウム等が使用される。培
地は通常振とう培養、あるいは通気撹拌培養で行う。培
養温度は２０〜４０℃、好ましくは２５〜３０℃、培養
ｐＨ５〜９の範囲で、好ましくは７〜８に制御するのが
良い。これら以外の条件下でも使用する菌株が生育すれ
ば実施できる。培養期間は通常１〜１０日で生育し、菌
体内にホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼが生
産蓄積される。
【００１１】本発明の酵素の精製法は一般に使用される
精製法を用いれば良い。例えば、抽出法には超音波破
砕、ガラスビーズを用いる機械的な破砕、フレンチプレ
ス、界面活性剤などいずれを用いてもよい。さらに抽出
液については、硫安やぼう硝などの塩析法、塩化マグネ
シウムや塩化カルシウムなどの金属凝集法、プロタミン
やポリエチレンイミンなどの凝集法、さらにはＤＥＡＥ
（ジエチルアミノエチル）−セファロース、ＣＭ（カル
ボキシメチル）−セファロースなどのイオン交換クロマ
ト法などにより精製することができる。またこれらの方
法で得られた粗酵素液や精製酵素液は、例えば、スプレ
ードライや凍結乾燥により粉末化できる。さらには適当
な担体に固定化して固定化酵素として使用できる。
精製法を用いれば良い。例えば、抽出法には超音波破
砕、ガラスビーズを用いる機械的な破砕、フレンチプレ
ス、界面活性剤などいずれを用いてもよい。さらに抽出
液については、硫安やぼう硝などの塩析法、塩化マグネ
シウムや塩化カルシウムなどの金属凝集法、プロタミン
やポリエチレンイミンなどの凝集法、さらにはＤＥＡＥ
（ジエチルアミノエチル）−セファロース、ＣＭ（カル
ボキシメチル）−セファロースなどのイオン交換クロマ
ト法などにより精製することができる。またこれらの方
法で得られた粗酵素液や精製酵素液は、例えば、スプレ
ードライや凍結乾燥により粉末化できる。さらには適当
な担体に固定化して固定化酵素として使用できる。
【００１２】なおホスホエノールピルビン酸カルボキシ
ラーゼの活性は以下の方法によって測定できる。５０ｍ
Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１０ｍＭ Ｎａ2ＣＯ3、３．２
ｍＭ ホスホエノールピルビン酸、１０ｍＭ ＭｇＳＯ
4、０．１４ｍＭ ＮＡＤＨ、５０Ｕ／ｍｌマレートデ
ヒドロゲナーゼを含む反応混液２．９ｍｌをキュベット
（ｄ＝１ｃｍ）に調製し、３０℃で約５分間予備加温す
る。次に酵素溶液０．１ｍｌを添加し、ゆるやかに混和
後、水を対照に３０℃に制御された分光光度計で３４０
ｎｍの吸光度変化を２〜３分間記録し、その初期直線部
分から１分間あたりの吸光変化を求める（△ＯＤｔｅｓ
ｔ）。盲検は酵素溶液の代わりに５０ｍＭ リン酸緩衝
液（ｐＨ７．０）を加え、同様に操作を行って、１分間
当りの吸光度変化を求める（△ＯＤｂｌａｎｋ）。ホス
ホエノールピルビン酸カルボキシラーゼの活性は、上記
条件で１分間に１マイクロモルのＮＡＤＨを消費する酵
素量を１単位（Ｕ）とする。
ラーゼの活性は以下の方法によって測定できる。５０ｍ
Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１０ｍＭ Ｎａ2ＣＯ3、３．２
ｍＭ ホスホエノールピルビン酸、１０ｍＭ ＭｇＳＯ
4、０．１４ｍＭ ＮＡＤＨ、５０Ｕ／ｍｌマレートデ
ヒドロゲナーゼを含む反応混液２．９ｍｌをキュベット
（ｄ＝１ｃｍ）に調製し、３０℃で約５分間予備加温す
る。次に酵素溶液０．１ｍｌを添加し、ゆるやかに混和
後、水を対照に３０℃に制御された分光光度計で３４０
ｎｍの吸光度変化を２〜３分間記録し、その初期直線部
分から１分間あたりの吸光変化を求める（△ＯＤｔｅｓ
ｔ）。盲検は酵素溶液の代わりに５０ｍＭ リン酸緩衝
液（ｐＨ７．０）を加え、同様に操作を行って、１分間
当りの吸光度変化を求める（△ＯＤｂｌａｎｋ）。ホス
ホエノールピルビン酸カルボキシラーゼの活性は、上記
条件で１分間に１マイクロモルのＮＡＤＨを消費する酵
素量を１単位（Ｕ）とする。
【００１３】
【発明の効果】本発明では高価なエフェクターを必要と
せず、またｐＨ８．０で安定性の良いホスホエノールピ
ルビン酸カルボキシラーゼが得られる。該酵素を用いる
ことにより安価に安定性のよい炭酸ガス測定試薬が得ら
れる。
せず、またｐＨ８．０で安定性の良いホスホエノールピ
ルビン酸カルボキシラーゼが得られる。該酵素を用いる
ことにより安価に安定性のよい炭酸ガス測定試薬が得ら
れる。
【００１４】
【実施例】以下、実施例を挙げて本発明を具体的に示
す。 実施例１ ポリペプトン０．５％、酵母エキス０．５％、グルコー
ス０．５％、硫酸マグネシウム０．０５％を含む培地
（ｐＨ７．Ｏ）１００ｍｌを５００ｍｌ容坂口フラスコ
に移し、１２１℃、１５分間オートクレーブを行った。
種菌として、アセトバクター・ハンゼニイ（Acetobacte
r hansenii）IFO14820を一白金耳植菌し、３０℃で４８
時間培養し、種培養液とした。次に同培地６１を１０ｌ
容ジャーファーメンターに移し１２１℃で１５分間オー
トクレーブを行い、放冷後、種培養液１００ｍｌを移
し、３００ｒｐｍ，通気量２１／分、３０℃で４８時間
培養した。培養液を遠心分離にて集菌し、５０ｍＭリン
酸緩衝液（ｐＨ７．０）に懸濁した。本液をフレンチプ
レスで処理し、遠心分離を行い、上清液を得た。得られ
た粗酵素液を硫安分画、ＤＥＡＥ−セファロースクロマ
トグラフィー、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフ
ィー、セファデックスＧ−２００によるゲルろ過により
比活性８４Ｕ／ｍｇにまで精製した。
す。 実施例１ ポリペプトン０．５％、酵母エキス０．５％、グルコー
ス０．５％、硫酸マグネシウム０．０５％を含む培地
（ｐＨ７．Ｏ）１００ｍｌを５００ｍｌ容坂口フラスコ
に移し、１２１℃、１５分間オートクレーブを行った。
種菌として、アセトバクター・ハンゼニイ（Acetobacte
r hansenii）IFO14820を一白金耳植菌し、３０℃で４８
時間培養し、種培養液とした。次に同培地６１を１０ｌ
容ジャーファーメンターに移し１２１℃で１５分間オー
トクレーブを行い、放冷後、種培養液１００ｍｌを移
し、３００ｒｐｍ，通気量２１／分、３０℃で４８時間
培養した。培養液を遠心分離にて集菌し、５０ｍＭリン
酸緩衝液（ｐＨ７．０）に懸濁した。本液をフレンチプ
レスで処理し、遠心分離を行い、上清液を得た。得られ
た粗酵素液を硫安分画、ＤＥＡＥ−セファロースクロマ
トグラフィー、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフ
ィー、セファデックスＧ−２００によるゲルろ過により
比活性８４Ｕ／ｍｇにまで精製した。
【００１５】得られたホスホエノールピルビン酸カルボ
キシラーゼは下記の特性を有していた。 （１）下記の反応を触媒した。
キシラーゼは下記の特性を有していた。 （１）下記の反応を触媒した。
【００１６】
【化４】
【００１７】（２）Ｋｍ値 ホスホエノールピルビン酸に対するＫｍ値は０．２１ｍ
Ｍであった。 （３）至適ｐＨ ５０ｍＭ ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６．０〜７．５）、５０
ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．５〜９．０）中での酵
素活性を測定した。その結果は図１に示す通りであっ
て、至適ｐＨ７．５〜８．０であった。 （４）安定ｐＨ Britton-Robinson's緩衝液（ｐＨ３−１２）で２５℃、
２４時間保存してその残存活性を測定した。その結果、
安定ｐＨはｐＨ５．０〜８．０であった。また１０ｍＭ
ＭｇＳＯ4 存在下、トリス塩酸緩衝液（７．５〜９．
０）で２５℃、２４時間保存してその残存活性を測定し
た。その結果、安定ｐＨはｐＨ７．５〜８．５であった
（図２）。 （５）至適温度 各温度における酵素活性を測定した。その結果は図３に
示す通りであって至適温度は６０℃であった。 （６）熱安定性 本発明の酵素を５０ｍＭ Ｋ−リン酸（ｐＨ７．０）中
で１５分間保温した後、残存する酵素活性を測定した。
その結果は図４に示す通りであって４５℃まで安定であ
った。 （７）至適マグネシウム濃度 硫酸マグネシウムを１〜５０ｍＭに変化させて酵素活性
を測定した。その結果は図５に示す通りであって２〜１
０ｍＭが至適であった。 （８）分子量 ３９０，０００±１０，０００（ＴＳＫ−ｇｅｌ Ｇ−
３０００ＳＷを用いたゲルろ過法） １００，０００±５，０００ （ＳＤＳ−ＰＡＧＥ） （９）等電点 等電点電気泳動法で６．０±０．１であった。 （１０）アセチルＣｏＡ、ＡＤＰの影響は以下の通りで
あった。
Ｍであった。 （３）至適ｐＨ ５０ｍＭ ＭＥＳ緩衝液（ｐＨ６．０〜７．５）、５０
ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．５〜９．０）中での酵
素活性を測定した。その結果は図１に示す通りであっ
て、至適ｐＨ７．５〜８．０であった。 （４）安定ｐＨ Britton-Robinson's緩衝液（ｐＨ３−１２）で２５℃、
２４時間保存してその残存活性を測定した。その結果、
安定ｐＨはｐＨ５．０〜８．０であった。また１０ｍＭ
ＭｇＳＯ4 存在下、トリス塩酸緩衝液（７．５〜９．
０）で２５℃、２４時間保存してその残存活性を測定し
た。その結果、安定ｐＨはｐＨ７．５〜８．５であった
（図２）。 （５）至適温度 各温度における酵素活性を測定した。その結果は図３に
示す通りであって至適温度は６０℃であった。 （６）熱安定性 本発明の酵素を５０ｍＭ Ｋ−リン酸（ｐＨ７．０）中
で１５分間保温した後、残存する酵素活性を測定した。
その結果は図４に示す通りであって４５℃まで安定であ
った。 （７）至適マグネシウム濃度 硫酸マグネシウムを１〜５０ｍＭに変化させて酵素活性
を測定した。その結果は図５に示す通りであって２〜１
０ｍＭが至適であった。 （８）分子量 ３９０，０００±１０，０００（ＴＳＫ−ｇｅｌ Ｇ−
３０００ＳＷを用いたゲルろ過法） １００，０００±５，０００ （ＳＤＳ−ＰＡＧＥ） （９）等電点 等電点電気泳動法で６．０±０．１であった。 （１０）アセチルＣｏＡ、ＡＤＰの影響は以下の通りで
あった。
【００１８】
【表１】
【００１９】（１）既知酵素との比較 本発明の酵素と酢酸菌由来の既知酵素を比較すると以下
の通りであった。
の通りであった。
【００２０】
【表２】
【００２１】また他起源の既知酵素と比較した。
【表３】
【００２２】第１表〜第３表から明らかなように、本発
明の酵素はアセチルコエンザイムＡに活性化されず、Ａ
ＤＰに阻害されず、かつ至適ｐＨが７．５〜８．０にあ
り、試料中の炭酸ガスの測定に適している。
明の酵素はアセチルコエンザイムＡに活性化されず、Ａ
ＤＰに阻害されず、かつ至適ｐＨが７．５〜８．０にあ
り、試料中の炭酸ガスの測定に適している。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の酵素の至適ｐＨを示す。
【図２】本発明の酵素の安定ｐＨを示す
【図３】本発明の酵素の至適温度を示す。
【図４】本発明の酵素の熱安定性を示す。
【図５】本発明の酵素の至適マグネシウム濃度を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 平５−111397（ＪＰ，Ａ) 特開 平４−228074（ＪＰ，Ａ) Ａｒｃｈ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．, 122（1979），ｐ．109 Ｊ．Ｂｃｔｅｒｉｏｌ．，98 （1968），ｐ．1005 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12N 9/88 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (2)
- 【請求項１】 下記理化学的性質を有する新規なホスホ
エノールピルビン酸カルボキシラーゼ。 （１） 次の反応を触媒する。 【化１】 （２） 至適作用ｐＨ：７．５〜８．０ （３） ｐＨ安定性：ｐＨ５．０〜８．０（２５℃、２
４時間処理） ｐＨ７．５〜８．５（１０ｍＭ ＭｇＳＯ4 を含むトリ
ス緩衝液中で２５℃、２４時間処理） （４） 至適作用温度：６０℃ （５） 熱安定性：４５℃まで安定（ｐＨ７．０、１５
分間処理） （６） 分子量：３９０，０００±１０、０００（ゲル
ろ過法） １００，０００±５、０００ （ＳＤＳ−ＰＡＧＥ） （７） アセチルＣｏＡで活性化されない。 - 【請求項２】 アセトバクター属に属し、下記理化学的
性質を有する新規なホスホエノールピルビン酸カルボキ
シラーゼ生産能を有する菌株を栄養培地にて培養し、該
培養物から新規なホスホエノールピルビン酸カルボキシ
ラーゼを採取することを特徴とする新規なホスホエノー
ルピルビン酸カルボキシラーゼの製造法。 （１） 次の反応を触媒する。 【化２】 （２） 至適作用ｐＨ：７．５〜８．０ （３） ｐＨ安定性：ｐＨ５．０〜８．０（２５℃、２
４時間処理） ｐＨ７．５〜８．５（１０ｍＭ ＭｇＳＯ4 を含むトリ
ス緩衝液中で２５℃、２４時間処理） （４） 至適作用温度：６０℃ （５） 熱安定性：４５℃まで安定（ｐＨ７．０、１５
分間処理） （６） 分子量：３９０，０００±１０、０００（ゲル
ろ過法） １００，０００±５、０００ （ＳＤＳ−ＰＡＧＥ） （７） アセチルＣｏＡで活性化されない。
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| JP11324893A JP3125954B2 (ja) | 1993-05-14 | 1993-05-14 | 新規なホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ及びその製法 |
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|---|---|---|---|
| JP11324893A JP3125954B2 (ja) | 1993-05-14 | 1993-05-14 | 新規なホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ及びその製法 |
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| Publication Number | Publication Date |
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| JPH06319541A JPH06319541A (ja) | 1994-11-22 |
| JP3125954B2 true JP3125954B2 (ja) | 2001-01-22 |
Family
ID=14607337
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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| JP11324893A Expired - Lifetime JP3125954B2 (ja) | 1993-05-14 | 1993-05-14 | 新規なホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ及びその製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3125954B2 (ja) |
-
1993
- 1993-05-14 JP JP11324893A patent/JP3125954B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Ａｒｃｈ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，１２２（１９７９），ｐ．１０９ |
| Ｊ．Ｂｃｔｅｒｉｏｌ．，９８（１９６８），ｐ．１００５ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06319541A (ja) | 1994-11-22 |
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