FI63420C - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt verksamma tetrahydropyranylderivat av antracyklinglykosider - Google Patents

Description

» Γ·1 ^KUULUTUSJULKAISU r 7 A n ^

Wa W (11) UTLÄGGN INGSSKMFT 6 3 4 2 0 C (45) Pi tantti :.: y"r.: · r ‘y 10 96 1933 ^ T ^ (51) K».lk.3/lntci.3 C 07 H 15/26, 17/04 SUOMI—FINLAND (21) Ntuttwwkwwi»—»»«iwwaiaiiiit 782388 (22) Htkwnlipllv»—An»eknlnj*dtf 02.08.78 * * (23) AlloipUvi—GUUgMtadtg 02.08.78 (41) Tullut JulklMfc·) — Wlvk off«KNg 06 02 79 tattia J» rrtlrtrttallltu· (44) N»uw,. *»!*,««»» ' '

FatMlt· ocn r*gist«ratyr*lMn ' AntOfcsn utUgd och utl.»krtfc«n pubUcarad 2Ö.02.83 (32)(33)(31) Pyydetty ttuoHt*u*-»«ftr4 priority 05.08.77

Japani-Japan(JP) Sho. 52-9^3^8 (71) Zaidanhojin Biseibutsu Kagaku Kenkyukai, lU-23, Kamiosaki 3-chome, Shinagawa-ku, Tokyo, Japani-Japan(JP) (72) Hiroshi Naganava, Tokyo, Kuniaki Tatsuta, Tokyo, Hamao Umezawa,

Tokyo, Tornio Takeuchi, Tokyo, Japani-Japan(JP) (7M Oy Borenius & Co. Ab (5*0 Menetelmä terapeuttisesti vaikuttavien antrasykliiniglykosidien tetrahydropyranyylieetterijohdannaisten valmistamiseksi -Förfarande för framställning av terapeutiskt verksamma tetra-hydropyranylderivat av antracyklinglykosider

Keksinnön kohteena on menetelmä mikrobien ja kasvainten vastaisina aineina käytettävien antrasykliiniglykosidien tetrahydropyranyyli- eetterien valmistamiseksi, joiden yleinen kaava (I) on och3 0 OH I (I) NH2 jossa kaavassa Rj_ tarkoittaa vetyatomia tai hydroksyyli- tai tetrahydropyranyyl ioksiryhmää, ja R2 tarkoittaa hydroksyyli- tai tetrahydropyranyyl ioksiryhmää, jolloin siinä tapauksessa, että R^ tarkoittaa vetyatomia tai hydroksyyliryhmää, tarkoittaa R2 tetrahydro-pyranyylioksiryhmää, sekä näiden yhdisteiden myrkyttömien happo-additiosuolojen valmistamiseksi.

2 63420

Kirjallisuudessa on selitetty joukko antrasykliini-glykosideja. Näistä on daunomysiinillä (US-patentti 3 612 212, GB-patentti 1 003 383) ja adriamysiinillä (US-patentit 3 590 028 ja 3 803 124), joita valmistetaan viljelemällä määrättyjä Streptomyces-mikro-organisroeja, laaja syövänvastainen vaikutus erilaisiin kokeellisesti kehitettyihin tuumoreihin, ja niitä käytetään kliinisesti tehokkaina kemoterapeuttisinä lääkkeinä. Vaikka adriamysiinillä ja dauno-mysiinillä on useita etuja kliinisinä ja syövänvastaisina lääkkeinä, on niillä kuten tunnettua myös vakavia sivuvaikutuksia, joista mainittakoon tukanlähtö, valkosolukato ja myrkyllisyys sydämelle.

Hakija on laajalti tutkinut daunomysiinin ja adriamysiinin kemiallista muuntamista tarkoituksella valmistaen näiden glykosidien uusia johdannaisia, joilla on entistä parempi syövänvastainen vaikutus ja pienentynyt myrkyllisyys (siis pienemmät sivuvaikutukset). Keksinnön mukaan on voitu kehittää adriamysiinin ja daunomysiinin uusia tetra-hydropyranyylieetterijohdannaisia, joilla on haluttu voimakas syövänvastainen vaikutus ja pieni myrkyllisyys.

Tässä selityksessä ja patenttivaatimuksissa käytetyllä sanonnalla "myrkytön happoadditiosuola" tarkoitetaan kaikkia niitä kaavan (I) mukaisten yhdisteiden orgaanisia ja epäorgaanisia happoadditio-suoloja, joita yleisesti käytetään amiinifunktioita sisältävien lääkkeiden pääasiallisesti myrkyttöminä suoloina. Esimerkkeinä mainittakoon, että näitä suoloja voidaan muodostaa käyttämällä rikki-, fosfori-, kloorivety-, bromivety-, typpihappoa, fosfori-hapoketta, etikka-, propioni-, maleiini-, öljy-, palmitiini-, sitruuna-, meripihka-, viini-, fumaari-, glutamiini-, pantoteeni-, lauryylisulfoni-, metaanisulfoni-, naftaleenisulfonihappoa jne.

Sellaiset kaavan (I) mukaiset yhdisteet, joissa substituenttina R2 on tetrahydropyranyylioksiryhmä, esiintyvät erillisinä diastereo-meereinä (jotka mielivaltaisesti seuraavassa on merkitty "isomeeri a" ja "isomeeri b") , jotka eroavat tetrahydropyranyylioksiryhmän C-2-aseman konfiguraation suhteen, mutta nämä yhdisteet voivat myös olla tällaisten Isomeerien seoksia. Keksinnön piiriin kuuluvat sekö erilliset diastereomeerit että näiden seokset.

5 63420

Keksintöä havainnollistavat oheisten piirustusten käyrät.

Kuvio 1 esittää 4’-0-tetrahydropyranyyli-daunomysiinin (isomeeri a) infrapuna-absorptiospektriä (KBr).

Kuvio 2 esittää 4,-0-tetrahydropyranyyli-daunomysiinin (isomeeri b) infrapuna-absorptiospektriä (KBr).

Kuvio 3 esittää 4',14-bis-(O-tetrahydropyranyyli)-adriamysiinin (isomeeri a) infrapuna-absorptiospektriä (KBr).

Kuvio 4 esittää 4',14-bis-(O-tetrahydropyranyyli)-adriamysiinin (isomeeri b) infrapuna-absorptiospektriä (KBr).

Kuvio 5 esittää 14-O-tetrahydropyranyyli-adriamysiinin infrapuna-absorptiospektriä (KBr).

Kuvio 6 esittää 4'-0-tetrahydropyranyyli-adriamysiinin (isomeeri a) infrapuna-absorptiospektriä (KBr).

Kuvio 7 esittää 4'-tetrahydropyranyyli-adriamysiinin (isomeeri b) infrapuna-absorptiospektriä (KBr).

Kuviot 8...14 esittävät edellä esitettyjen yhdisteiden protoni-ydin-magneettisiä resonanssispektrejä (100 MHz, CDCl^) samassa järjestyksessä kuin niiden infrapuna-absorptiospektrit on edellä esitetty.

Keksinnön mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi käytetyt lähtömateriaalit, siis adriamysiini ja daunomysiini, voidaan kuvata seuraavilla kaavoilla: 63420 1 9 ^ in 0 η h λ M2 J41 Jz 13" 1 2 C-CH3 3 *T 5T oi [7

OCH-j 0 OH

O daunomysiini 5' yf— *·Α> Νΐχ, HO^—/ I 2' 1¾ 1 9 10 O lii J* J&2 Ali i® 13» 14

2 C"CH20H

I I 9> 4T 5 rr 6T (7

OCH-j 0 OH

0 adriamysiini 5r-0v *'M A, HO^l—/ I 2' NHg

Daunomysiinissä on kaksi reaktiivista hydroksyyliryhmää (jolloin ei lasketa mukaan molempia fenolisia hydroksyyliryhmiä) asemissa C-9 ja C-4’, ja adriamysiinissS on kolme reaktiivista hydroksyyliryhmää (jälleen lukuunottamatta molempia fenolisia ryhmiä) asemissa C-9, C-14 ja C-4'. Hakijat ovat todenneet, että sopivissa olosuhteissa esiintyy näiden yhdisteiden eri reaktiivisten hydroksyyliryhmien eri reaktio-kykyjä, ja näitä eroja voidaan käyttää haluttujen uusien johdannaisten valmistamiseksi. Lähemmin selitettynä on todettu, että suspendoita-essa tai liuotettaessa adriamysiinin tai daunomysiinin vapaa emäs tai sen happoadditiosuola (esim. hydrokloridi) inerttiin orgaaniseen 5 63420 1iuott imeen ja saattamalla nämä yhdisteet reagoimaan 3,4-dihydro-2H-pyraanin kanssa happokatalysaattorin ollessa läsnä, muodostuu lähtömateriaalina käytettyjen glykosidien erilaisia uusia tetra-hydropyranyyli-eetter ijohdannaisia. Kulloinkin muodostuneet reaktio-tuotteet, eri tuotteiden väliset suhteet ja reaktiotuotokset vaih-televat käytettyjen reaktio-olosuhteiden mukaan, joista mainittakoon esim. liuotin, happokatalysaattor i, reaktiokomponenttien suhteet, lämpötila, reaktioajan pituus, jne.

Keksinnön mukaan saadaan menetelmä yleisen kaavan (I) mukaisen antrasykliiniglykosidijohdannaisen tai sen myrkyttömän happoadditio-suolan valmistamiseksi, joka menetelmä tunnetaan siitä, että liitetään yksi tai kaksi tetrahydropyranyyliryhmää kaavan (II) mukaisen yhdisteen asemassa C-4' tai C-14, tai näissä molemmissa asemissa oleviin hydroksyyliryhmiin 0 OH »· OCHj 0 OH 0 •Ö HO \-f NH2 jossa kaavassa R tarkoittaa vetyatomia tai hydroksyyliryhmää siten, että 3,4-dihydro-2H-pyraani saatetaan reagoimaan kaavan II mukaisen yhdisteen tai sen happoadditiosuolan kanssa inertissä orgaanisessa liuottimessa, jossa läsnä on happokatalysaattoria, ja mahdollisesti poistetaan tetrahydropranyyliryhmä asemasta 14 osittain hydrolysoimalla tai alkoholysoimalla saatu di-tetrahydropyranyyliyhdiste, ja tarvittaessa muutetaan saatu kaavan (1) mukainen yhdiste myrkyttömäksi happoadditiosuolakseen tai muutetaan happoadditiosuola vapaaksi emäkseksi.

Yleiset reaktiot kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi selviävät seuraavista kaavoista: 6 6 3 4 2 0

Kaava I

O OH ft /——\ happokateilysaattori «, 0 0H i * \_) -* „0 daunonysiini > 0 - JT—0 I V-O-PDal /CH_j \J ♦•-0-PDbj yjy ™* I 0 OH o OCH^ 0 OH I X )

O \—/ 9-O-PD

φ HHg o <L O 63420

Kaava II ^ ^ Ji „„

OCH^ O 0K

0 /—\ happokatalysaattori · ° adrianysiini NHg C~ s °* « αλ OCH, O OH [

9 O lA-O-PA

0 ** /=^

VV

j ψ . ! f s /~\ o^o

OCH? O OH T

O

fi?\ fv f 4' jlA-di-O-PAaT)

<y*. -di-O-PAbJ

L

hydrolyysi tai alkoholyysi V

° <?H ίϊ OCH^ O OH f 0 qA ::::¾ 8 63420

Adriainysiinin tai daunomysiinin reaktiivinen hydroksyyliryhmä muutetaan eetteröimällä tetrahydropyranyylioksiryhmäksi.

Lähtömateriaalina käytetty glykosidi voi esiintyä vapaana emäksenä tai happoadditiosuolana. Koska reaktion tuloksena saatujen tetra-hydropyranyylieetterituotteiden happoadditiosuolat voidaan tunnettujen menetelmien avulla muuttaa vastaaviksi vapaiksi emäksiksi tai myrkyttömiksi happoadditiosuoloiksi, ei lähtömateriaalin tarvitse olla myrkytöntä.

Tetrahydropyranylointireaktiossa voidaan käyttää mitä tahansa ei-reaktiivista orgaanista liuotinta, jonka esimerkkeinä mainittakoon hentseeni, tolueeni, ksyleeni, dimetyyliformamidi, asetonitriili ja tetrahydrofuraani. Reaktioliuottimena voi olla yksi ainoa liuotin tai liuottimien seos. Liuottimena käytetään varsin edullisesti vedetöntä dimetyyliformamidia.

Happokatalys siat torina voi olla jokin orgaaninen happo, (esim. muurahaista! trifluorietikkahappo) tai epäorgaaninen happo (esim. kloorivety-happo, fosforihappo). Orgaaniset sulfonihapot edustavat happokataly-saattorien erästä edullista luokkaa, ja varsinkin käytetään aromaattisia sulfonihappoja, esim. p-tolueenisulfonihappoa tai bentseenisulfoni-happoa, varsin edullisesti p-tolueenisulfonihappoa.

Reaktiolämpötila ei ole kriittinen. Eetteröimisreaktion hyviä tuloksia on saavutettu huoneenlämmössä, vaikka myös voidaan käyttää tätä korkeampia tai alempia lämpötiloja.

Reaktioaika vaihtelee kulloinkin valittujen reaktio-olosuhteiden mukaan, joista esimerkkeinä mainittakoon lämpötila, katalysaattori, liuotin, jne. Optimaalinen reaktioaika määrätyn tuotteen tai tuoteseoksen valmistamiseksi voidaan määrittää kokeellisesti myöhemmin selitettävän ohutkerroskokeen kromatografoinnin avulla. Edullisia tuloksia saavutetaan yleensä käyttämällä reaktioaikoja, jotka ovat noin 20...noin 50 tuntia.

Kulloinkin saadut reaktiotuotteet ja saavutetut reaktion tuotokset riippuvat useista tekijöistä, kuten lähtömateriaalien konsentraatiosta, reaktiokomponenttien suhteesta, jne. Daunomysiiniä lähtömateriaalina käytettäessä saadaan pääasiallisina tuotteina 4'-0-tetrahydropyranyyli-daunomysiiniä (josta seuraavassa käytetään lyhennettä 4'-0-PD) ja 9 63420 9-O-tetrahydropyranyyli-daunomysiiniä (3osta seuraavassa käytetään lyhennettä 9-0-PD). Nämä tuotteet voidaan ilmaista reaktioseoksessa piihappogeelillä suoritetun ohutkerroskromatografian avulla (Merck Co 60?25^)» käyttämällä kehittimenä kloroformin, metanolin ja etikka-hapon seosta tilavuussuhteessa 80:20:4. Tuotteet esiintyvät R^-arvolla 0,74 (4*-0-PD)ja Rf-arvolla 0,15 (9-0-PD).

Tuote 4'-0-PD erotettiin kahdeksi komponentiksi, joiden Rf-arvot olivat 0,46 ja 0,65 käyttämällä ohutkerroskromatografiaa piihappogeelin avulla ja kehitteenä kloroformin ja metanolin seosta tilavuussuhteessa 10:1. Näiden komponenttien todettiin olevan tuotteen 4'-0-PD-diastereomeerejä. Komponentit Rf = 0,46 ja Rf = 0,65 merkittiin mielivaltaisesti 4'-0-PDa (isomeeri a) ja 4'-0-PDb (isomeeri b).

Käytettäessä lähtömateriaali-glykosidina adriamysiiniä todettiin edellä selitetyn piihappogeelin avulla suoritetun ohutkerroskromatografian perusteella päätuotteiksi 14-0-tetrahydropyranyyli-adriamysiini (josta seuraavassa käytetään lyhennettä 14-0-PA), jonka » 0,12, ja kaksi komponenttia, jotka olivat 4',14-di-(0-tetrahydropyranyyli)-adriamysii-nin diastomeerejä eli 4’,l4-di-(0-tetrahydropyranyyli)-adriamysiini (isomeeri a), josta lyhenteenä käytetään 4’,14-di-0-PAa, R^ * 0,55 ja 4',14-di-(O-tetrahydropyranyyli)-adriamysiini (isomeeri b), lyhenne 4,-14-di-0-PAb), Rf = 0,75. Yhdistettä 4’,14-di-(0-tetrahydropyranyyli)-adriamysiiniä voidaan myös sanoa 4',14-bis-(O-tetrahydropyranyyli)-adriamysiiniks i.

Komponenttien 4',14-di-O-PAa diastereomeeriseosta voidaan myös valmistaa suurin tuotoksin setter öimällä 14-O-tetrahydropyranyyli-adriamysiiniä tai sen happoadditiosuolaa 3,4-dihydro-2H-pyraanilla inertissä orgaanisessa liuottimessa, jossa läsnä on happokatalysaattoria.

Käyttämällä hyödyksi C-14-primäärisen hydroksyyliryhmän ja 0-4’-sekundäärisen hydroksyyliryhmän reaktiviteettien eroa voidaan komponenttien 41,14-di-O-PAa ja 4'»14-di-O-PAb (tai niiden happoadditiosuolan) asemassa C-14 oleva tetrahydropyranyyliryhmä selektiivisesti poistaa hydrolysoimalla tai alkoholysoimalla siten, että saadaan hyvin tuotoksin komponenttien 4’-0-PAa ja 4*-0-PAb vastaavia diastereomeerejä. Tetrahydropyranyyli oksiryhmä voidaan muuttaa hydroksiryhmäksi esim. hydrolysoimalla hapon, esim. epäorgaanisen tai orgaanisen hapon vesiliuoksen avulla, tai alkoholysoimalla alkoholin tai fenolin, esim. C.j-Cg-alkanolii '0 63420 avulla. Erään edullisen menetelmän mukaan suoritetaan käsittely laimealla etikkahappoliuoksella tai p-tolueenisulfon.ih.apon metanoli-liuoksella huoneenlämmössä noin 30 minuuttia.. .5 tuntia. Sivureaktiot voidaan vähentää suorittamalla hydrolysoiminen tai alkoholisoiminen pimeässä.

Kaavan (i) mukaiset tuotteet voidaan eristää reaktioseoksesta tavanomaisin menetelmin. Niinpä voidaan tetrahydropyranylaatioreaktion tuotteet ottaa talteen neutraloimalla reaktioseos emäksisellä aineella, esim. alkalimetallikarbonaatilla tai -bikarbonaatilla, uuttamalla neutraloitu reaktioseos veteen sekoittumattomalla orgaanisella liuottimena, esim. etyyliasetaatilla,kloroformilla, metyleenikloridilla, metyylisiobutyyliketonilla, jne., uuttamalla orgaaninen uutos orgaanisen tai epäorgaanisen hapon laimealla vesiliuoksella, neutraloimalla hapan vesikerros emäksellä, uuttamalla neutraloitu vesikerros veteen sekoittu-mattomalla orgaanisella liuottimena ja haihduttamalla orgaaninen uutos kuiviin. Täten saatu tummanpunainen kuivattu jauho voidaan puhdistaa kromatografoimalla piihappogeeliä sisältävässä pylväässä, tai pienestä näytteestä kyseenollen, soveltamalla preparatiivista ohutkerroskromato-grafointia. Hydrolysointi- tai alkoholiaointireaktion tuloksena saadut tuotteet voidaan ottaa talteen reaktioseoksesta neutraloimalla emäksisen aineen avulla, uuttamalla neutraloitu reaktioseos veteen sekoittu-mattomalla orgaanisella liuottimena ja haihduttamalla orgaaninen uutos kuiviin.

Diastereomeerien (isomeerien a ja b) seoksena saadut tuotteet voidaan edellä selitetyllä tavalla erottaa ohutkerroskromatografoimalla pii-happogeelin avulla erillisiksi isomeereiksi a ja b pääasiallisesti puhtaina.

Edellä selitettyjen reaktioiden tuloksena saadut tuotteet voidaan ottaa talteen vapaana emäksenä, happoadditiosuolana tai myrkyttömänä happo-additiosuolana. Vapaat emäkset voidaan helposti muuttaa myrkyttömiksi happoadditiosuoloiksi, jotka lääkintätehonsa kannalta ovat pääasiallisesti yhtä tehokkaita kuin vastaavat vapaat emäkset. Suolat muodostetaan, eristetään, puhdistetaan ja muotoillaan soveltamalla menetelmiä, joita yleensä käytetään suolojen muodostamiseksi antibiootteja, esim. antrasykliiniglykosidiantibiootteja varten. Niinpä vapaa emäs voidaan saattaa reagoimaan myrkyttömän hapon kanssa sopivassa liuottimessa ja suola ottaa talteen lyofHolmalla tai saostamalla liukenevuutta vähentäviin aineen avulla, esim. liuottimena, johon haluttu suola liukenee 11 63420 vain huonosti. Happoadditiosuolana esiintyvät tuotteet voidaan muuttaa vastaaviksi vapaiksi emäksiksi neutraloimalla emäksisen aineen avulla. Myrkylliset happoadditiosuolat voidaan lopuksi muuttaa myrkyttömiksi happoadditiosuoloiksi neutraloimalla ja sitten käsittelemällä myrkyttömällä hapolla, kuten edellä on selitetty.

Fysikaalis-kemialliset ominaisuudet

Keksinnön mukaiset yhdisteet esiintyvät kiinteässä muodossa amorfisena tai kiteisenä punaisena jauheena. Vapaina emäksinä nämä yhdisteet liukenevat etyyliasetaattiin, kloroformiin ja etanoliin, ja liukenevat vähän veteen, n-heksaaniin, petrolieetteriin, jne. Yhdisteiden etanoli-liuokset ja happamet liuokset ovat väriltään punaiset, ne antavat positiivisen ninhydriinireaktion, eivätkä pelkistä Fehlings’in liuosta. Kuviot 1...H ja seuraava taulukko 1 esittävät näiden tuotteiden alkuaineanalyysia, sulamispistettä (hajoamispistettä), ominaiskiertoa (C = 0,2 GHGl^:ssa), ultravioletti- ja näkyviä ahsorptiospektrejä (metanolissa), infrapuna-absorptiospektrejä (KBr-tabletti) ja ydin-magneettisia resonanssispektrejä (100 MHz, CDCl^).

12 6 3 4 2 0 m «» o M- in tn · r- o ^ v '“M ι-n '—* r- % σ\ o cm ^ o a w <! oo m (Ti tn in o cm

Ph ... o cm tn oo tn I O vo >- in •h—' ir in O vo CM '“'tn « « i ww —« T- o in o

P ^-N Ift On O

V £> !“ + tn « O mo

I CM CO CO W/-N r- T- .*· VO

··· CM ^ BO ww cvj

*“ H-VOH- CO—HCMn O VO O n-VO

• vo T- λ k m nm- ον cnc- «

” m · CB J C~ CMw CM

*. ·. #. CO · O I o · ^ O ä a · · t~i nj o >w H- oo « —. J· »“ r- jC O w ri ir <-* in T- — O in ..

Ph O' O cv m t- t- o o t 00 in Ov · r~ w* ^ o··. -M- w 00 —' iovot- o tn o σι o- n •h vo in cvi σν m- c~

"Ö *—* * cm «cm «m X

I VO -”n - ^ « O

N in vo CO ^ + O n in n tn v~ h™ n- co H-nj cm o vt o x

i · · · tn · ri Ί· tn vo r- U

- v vo i- co · o cm o wtnwr- ..

m· vo « » -n in b ^ m ^ tn Η-Ort -j in O tn o cm h ,*i 4i £ ^ ® ·£ ·® · w in cp m o osa c- »- w o cm cm -3· m s p o ^ •S ^ •g ..in 2 ^ a) cm 2 m . -h a 5 co m ho •ri _ _ _ rivo

Co 'n ' * '—' .— O Lj C Ht cm o in —* -^n ho o ri O CM CM in · O «“ O oo e ... « hj-cti'-'cm +» o Ä n vo cm cm tn cm a) ^ ai is P vo vo cm « en vo Bo

p P, '— — r- « '-S -M- r~ OfH

® i tn ^ O - m ϋ m tn o cp c- t*- σι '-v + o uv n « fis·

•h i m- ιλ σι i— etj m tn in n o O

f· ~ · · · O · ri cm tn ^ tn in o h «- T- vo e- «o cm m T- co u ^

ri VO · * n K, in tö . >w w> o (D

•ri »-OcflJvOCMCMOCM g cj E Η-σνχιο · cm m m m ϋΛ o o _ s vo »- ^—1 ·\ΐ o cm cv] 'ϊ m +.> 3 ·* 2 o m A <a μ ·~· 0 3

Il ^ 9 -h ? H in N ^ H 5 ri *- t- O m fr) d -hj-^cm ιη'-Η^-'-> φη o CM CM '— cy> ·.— Ln ho -h *H ... O rt* CO ^ h— o +-> en s t- vo n in tn cm mo —' o, >> ·? vo cm cm · σι vo S· VH Ph www t- « --> ri- f- ri i vo »— o » in s ► S O CM e— -M- σ> + in 1Λ -n · H ·— φ i oo cm cm ’“ri tn tn o ή> +i - . · . O * ri CM tn v-' ·Μ~ O 6. <—» m *t- o vo cm c^ «o cm fp w m h- co •H \0 · * *n K, CQ · '«—1* 'w> im

ri h- tn ri i hk- cm cm o cm B

e ...... h- σ A ιβ · cm in co tn e o x a vo f w sj o tvi cm ?· m ri ri ^ fi

•d 1 -H

o o +> -rH +> 'Ί ^ +H ri -τ' o a nj >i -p -h o in o :»» o 03 w o -3 g ί? >> on >,

ri <o >, ® +» ,α-^ S

fH -H H +»fn ri s o >, -P rt tM O tn ai tn e e

Ph C 'Λ q -W P H i xt)w o

+» rt -h a ^ o | > S

®« ri rt n <a*o >»·* “ h~ »e -p a ή ή S > ^ ri •p-ptJ p -h a rt h 3 p a +» o cu p ri ® m ri ccMrtfiPit'aio +> a riPri p<>»rH ή . i i ® h- »- m % a ^ |

H ·Η H ^ H φ I S

^ Ό cd ->h h—n —s O Ja ίΰ ,ί C ^ C'JO ίΛ LfN \o Ή >η ρς »«-/ -w^ Hl 63420 13 ra § γΗ •Η -Ρ

Ο ' ' O LA

✓-Χ ✓"Ν. ^Χ. 00 Ο 'Φ -Φ ^ CM Ο Γ— '-'Τ' " ΙΛ τ- τ- —'-'-'Ο Ο

• · · Ο •d-'—1 00 CO

jQ CT CD CM O t^o CJMA

<s1 la m CM OVd- ·« Il

^ CM ' ' »^O W

O τ— «d" LA (T\ --x + ΙΑ'-'ίηΟ O

| [— CM O T- «J LOOfA-r- LA

_ . . . o · rt ia lala·»---- W

-d- CTi vOCMC— · O CMP '—LA'—'LA O

LA · · ·η t\ CT 03'—' 03 · Γ— OOrt Si d" OCMO'- ··

...... CM 00 Λ I o 1 CMLAC0LA tA

O K S M) τ- —' '—I O CM CM xj· LA (H

w o "-χο rt

LA CM ''N -H

,^χ τ~ τ- O ^"x 1H

CM O Π— LA—"VO O rt LA H· x- wO Τ- LA u • . · O 'd- CA'-^'— b0

rt σι vo cm O lacm F-c— O

*ai ia m CM 1-<AC— -P

p, v_^ s S—/ t— xd" LA rt

| ''"X O ·1 ·- S

0 1Λ 1Λ r C~ ^ P

| CO to OJ -r- rt LTV ί<Λ O O f-j _ . . . o · rt ld tA'—ia O rW 'd1

CT' VO CM C— »O CMP ---------- 01 LA

LA · 1 -na CM 03 ·'—^ ' O CM

[— CM rt | tA o CM O CM in Ph

...... CM [--,£) IÖ · CM LP» CO 1°1 fH O

O W Ϊ3 CD V- x-' o CMCM'd-LPi 03 CD

•P ·

'-n P? O

'-'LA'·-' P O

o <- O o S—N tc\1- C~^-N ·Η

CM O ^ O LA'—"x~ IA HO

ir\ τ— Γ— LA x—'CD'—'CD 03 rt . . τ- · •d-CJM·---' 03 03

CJ~\ cD · CM CA CM (Τ' C— M S

<3} la cm cd CM •.'d'C'— O

p. —1 ^—' -—f τ— x «LA p | CM ^-xO^-x - P '-x O τ- la tA o '"χ + οοο'-χ rt oi 1 f— CM fA CM rt xd-xd-LDLA P 03 ,φ ...o · rt xt IA—'T- CA Ή Λ

i- CA LO CM f- · O CMP x-AA^t- -H P

LA · · 1n> Ks, CM CO · CO'-' P CO

Γ— LAOS I x“ O CM O CM M

...... CM CA P lö · CM LA 00 IA M

O W 5¾ LD τ- X-' χχ^Ι O CM CM xd" LA

CÖ i rt

O -H

•H -P

P> -P

•H O P rf +> co o rt rt o >» o χ-^ o rt t3 >> rt o ro t3 03 H -H 03 -P LA P-^x >,

•H rt rt-P rt rd rtR P

-pew pm oi g rt o • rt -H -H -H K M trt'-' rt w -P 03 ΗΡΛ!01> o p curtrt >>«> ω o >>·η a rt ra -h -p >i -H -h > ^ U -v .

-h rt-P rtcMrt:rt-P„a rt +> a o; 03 rt rt1 rt 0^^03 -p

T- 03 -P Ä AC H H -HO I I Of'- -P

to S -d rt P CO o II P=J ho ^ M

H -H rd H 3 pTirt^A ^ '-χ ^-χο-~χ^χ rt rtPrt'-^ CMtA xd- IA g lp)

Ed >d -rt x— X-» χ-' χ-' X-' w H 63420

Keksinnön raukaisten yhdisteiden 4'-0-PDa, 41 2-0-PDb, 4',14-di-O-PAa, 4',H-di-O-PAb, 14-0-PA, 4'-0-PAa ja 4’-0-PAb rakennetta voidaan tutkia analysoimalla yhdisteisiin sitoutuneiden tetrahydropyranyyliryhmien määrä, jonka todetaan olevan joko yksi tai kaksi tetrahydropyranyyli-ryhraän C-2-asemassa olevan metiiniprotonin ja C-3, C-4» C-5 ja C-6 asemien metyleeniprotonin signaalin voimakkuuden perusteella. Tetra-hydropyranyyliryhmän sidosasema voidaan analysoida sen ansiosta, että daunos-amiinin puoliskossa oleva C-4'-protoni kemiallisesti siirtyy kohti alempaa kenttää (verrattuna daunomysiiniin) C-4'-asemassa muodostuneen glykosidisidoksen takia.

Yhdisteiden 4'-0-PDa ja 41-0-PDb, 4’-0-PAa ja 4'-0-PAb ja 4'rH-di-O-PAa ja 4 ’ f H-di-O-PAb rakenteen eron katsotaan johtuvan tetrahydro-pyranyyliryhmän C-2-asemassa olevan R- ja S-absoluuttisen rakenteen erotuksesta, koska kemialliset siirrot ja kytkentävakiot (J-arvo) C-2- ja C-3-protonien luona eroavat toisistaan. Isomeerien a ja b absoluuttinen rakenne on yhä tuntematon. Taulukossa 2 on esitetty tetrahydropyranyyliryhmän C-2-asemän ja daunos-amiinipuoliskon C-4’-protonin kemialliset siirtymät (kuvioiden 8...H perusteella).

Taulukko 2

Protoni 4'-THP1 14-THP1 DS4,s1 __(milj.osaa)_(mil j, osaa) (milj.osaa)

Yhdiste 4’-O-PDa 4.38 - 3.62 4 1-0-PDb 4.72 - 3.64 4 f-0-PAa 4.36 - 3.70 4 1-O-PAb 4.72 - 3.70 4’,14-di-O-PAa 4.38 4.70 3.60 4’, H-di-O-PAb 4.72 4,72 3.66 14-0-PA - 4.71 3.48

Daunomysiini - - 3.49 THP: substituoidun tetrahydropyranyyliryhmän C-2-metiinin kemiallinen siirtyminen 2 DS4’: daunos-amiinin C-4'-metiinin kemiallinen siirtyminen

Edellisen perusteella todettiin keksinnön mukaisten yhdisteiden rakenteen vastaavan edellä esitettyjä kaavoja.

15

Antibioottinen vaikutus 634 20

Kaavan (I) mukaisilla yhdisteillä on todettu olevan mikrobeja vastustava vaikutus useisiin patogeenisiin mikro-organismeihin. Seuraavas-sa taulukossa 3 on esitetty keksinnön mukaisten edustavien yhdisteiden minimi-estokonsentraatiot, määritettynä viljelyliemen laimennus-menetelmän mukaan.

Taulukko 3 Estävä minimikonsentraatio (MIC, mcg./ml.)

Kokeiltu yhdiste

Koeorganismi_^-O-PDa 4'-0-PDb 4'-0-PAa 4'-0-PAb

Staph, aureus 6.25 6.25 6.25 6.25

PDA 209P

Staph.aureus 12,5 5.12 6,25 6.25

Smith

Bacillus subtilis 3.12 1.56 3.12 3.12 mra-

Bacillus cereus 6.25 6.25 6.25 6.25 2OTH7J702-

Bacillus megaterium 6.25 3.12 3.12 3.12

IFF

Sareina lutea 0.39 0.39 0.78 0.78

Pel 1ÖÖ1

Micrococcus flavus 0.78 1.56 3.12 3.12 PDA 16

Corynebacterium bovis 0.78 0.78 3.12 3.12 1810

Pseudomonas aeruginosa >100 >50 is 100 >100 Ä3

Escherichia coli >100 >100 >100 >100 m_---

Mycobacterium smegmatis 6.25 6.25 100 100 atoct ϊτπ---

Candida albicans >50 >25 >100 ^ 50 Tämän taulukon 3 mukaan voidaan keksinnön mukaisia yhdisteitä käyttää antibiootteina, varsinkin gram-positiivisia bakteereja vastaan.

Syövänvastainen vaikutus

Kaavan (i) mukaisilla yhdisteillä on standardikokeiden perusteella selvä syövänvastainen vaikutus ja pieni myrkyllisyys.

16 63420 A. Keksinnön mukaisilla yhdisteillä on todettu olevan selvä estävä vaikutus viljelyssä olevien 11210-leukemia-solujen kasvuun ja nukleiini-happ osynteesiin.

Niinpä ympättiin 11210-soluja (5 x 10^ solua/ml) RPMI 1640 väliaineeseen (Roswell Park Memorial Institute 1640), jossa oli 20% vasikan-seerumia, jolloin viljely suoritettiin 37 °C:ssa ja läsnä oli 0,1 ja 0,5 yug/nl keksinnön mukaisia yhdisteitä COg-inkubaattorissa. Solujen määrä laskettiin jaksottain, ja kasviin estymisprosentti määritettiin kuten taulukossa 4 on näytetty.

Taulukko 4

Tetrahydropyranyylijohdannaisten kasvua estävä vaikutus 11210-soluihin viljelyssä

Konsentraatio Estomäärä %

Yhdisteet 0,1 0,3 /ug/ml 4'-0-PDa 79.2 95.0 4*-0-PDb 74.6 88.8

Daunomysiini 68.8 72.7 4'-0-PAa 65.9 81.1 4'-O-PAb 78.1 92.9 14-0-PA 7.6 58.3 4'vH-di-O-PAa 37.5 80.8 4',14-di-O-PAb 25.5 72.1

Adriamysiini 70.7 84.2

Keksinnön mukaisten yhdisteiden vaikutusta nukleiinihapposynteesiin tutkittiin seuraavasti:

Suspendoitiin 1 x 10^-solua/ml 1210-soluja RPMI-väliaineeseen, jossa oli 10% vasikanseerumia,esiviljeltiin 37 °C:ssa 1...2 tuntia C02-inkubaattorissa, minkä jälkeen keksinnön mukaisia yhdisteitä lisättiin väliaineeseen eri konsentraatioin. 15 minuuttia kestäneen hautomisen jälkeen lisättiin ^C-uridiinia (0,05 yuCi/ml) tai ^C-tymidiiniä (0,05 yuCi/ml) ja haudottiin 37 °C:ssa 60 minuuttia. Tämän jälkeen väliaineeseen lisättiin trikloorietikkahappoa (TOA, 10%) reaktion keskeyttämiseksi ja happoon liukenemattomien materiaalien 3aostamiseksi, minkä jälkeen sakka pestiin kolmasti TCA:n 5...10% muurahaishappo-liuokoella. Kadioaktiviteetti mitattiin ja lausuttiin lisätyn aineen 50% e 31 o ko n s e n t r aa t i o n a.

63420 17

Taulukko 5

Lisätyn ^C-tymidiinin ja ^C-uridiinin 505b estävä konsentraatio viljelyssä oleviin 11210-soluihin 505b estävä konsentraatio

Yhdisteet Uridiini Tymidiini 4’-0-PDa 0.13 0.28 4'-0-PDb 0.20 0.32

Daunoraysiini 0.40 0.70 41-0-PAa 0.20 0.37 4'-0-PA’o 0.24 0.50 14-0-PA 0.17 0.42 4’,14-di-O-PAa 0.23 0.55 4’,14-di-O-PAb 0.24 0.97

Adriaraysiini 0.50 2.1 B. Kokeiltaessa keksinnön mukaisia yhdisteitä erilaisiin kokeellisesti käytettyihin eläinten kasvaimiin todettiin näillä yhdisteillä olevan selvä syövänvastainen vaikutus ja vähentynyt myrkyllisyys verrattuna adriamysiiniin ja daunomysiiniin. Näin ollen näitä yhdisteitä voidaan käyttää lääkinnässä nisäkkäiden kasvaimien kasviin vastustamisessa.

Esimerkkinä ympättiin BDP..-hiiriin intraperitoniaalisesti L1210- g ' leukemiasoluja 1 x 10 solua/hiiri. 24 tunnin kuluttua ymppäyksestä hiirille annettiin keksinnön mukaisia yhdisteitä intraperitoniaalisesti kerran päivässä kymmenen peräkkäisen päivän aikana, ja koe-eläimiä tarkastettiin 45 päivän aikana. Syövänvastainen vaikutus todettiin eloonjäämispäivien lisääntymisellä (ϊ/C, verrattuna vertailu-hiirien eloonjäämispäiviin, joille oli annettu fysiologista suolaliuosta. Tulokset on esitetty taulukossa 6.

18 · 6 3420

Taulukko 6

Tetrahydropyranyylij ohdannaisten syövänvastäinen vaikutus (T/C, %)

Annos (mg/kg/päivä)

Yhdisteet 5 2.5 1.25 0.6 0.5 0.15 4*-0-PBa > 520 >520 122 115 96 90 4' -0-PDb > 520 256 122 115 105 90 4’-0-PAa - 175 180 187 120 127 4' -0-PAb >375 >360 >573 293 160 113 14-0-PA 142 130 126 113 110 103 4’,H-di-O-PAa 154 115 109 96 103 96 4’,14-di-O-PAb 161 109 103 103 96 115

Adriamysiini myrkky- kuolema 231 218 230 165 128 Tässä kokeessa käytettyjen hiirien myrkkykuoleman ja ruumiinpainon-menetyksen antamista tuloksista nähdään, että keksinnön mukaisten johdannaisten myrkyllisyys on 1/3...1/2 pienempi kuin keksinnön lähtö-materiaaleina käytetyn adriamysiinin ja daunomysiinin myrkyllisyys.

C. Edellä kohdissa A ja B esitetty selvä syövänvastainen vaikutus todistettiin tutkimalla keksinnön mukaisten yhdisteiden stabiliteettia maksan NADPH-sytokromi-P450-reduktaasin inaktivointiin. Lähemmin selitettynä rotan maksahomogenaatista puhdistettu NADPH-sytokromi-P450-reduktaasi haudottiin yhdessä keksinnön mukaisten yhdisteiden kanssa 25 °C:ssa 25 minuuttia typpikaasussa, ja muodostunut hautomis-tuote 7-deoksiaglykoni määritettiin taulukossa 7 esitetyin tuloksin.

Taulukko 7 63420 19 tetrahydropyranyylijohdannaisten stabiliteetti rotan NADPH-sytokromi-P450-reduktaasiin nähden

Tuote (ninoolia/putki)

Yhdisteet (7-deoksiaglykonia) 4'-O-PDa 37.3 4'-O-PDb 46.6

Daunomysiini 65.8 4'-O-PAa 10.9 4'-0-PAb 15.8 14-O-PA 18.4 4', 14-di-O-PAa 13.1 4', 14-di-O-PAb 15.8

Adriamysiini 47.2

Reaktioseoksen koostumus:

NADPH 0,2 mM

tris-HCl (pH 8,0) 0,1 mM

substraattia 0,1 mM

entsyymiä 4,6 g/ml (tris-HCl = tris-(hydroksimetyyli)-aminometaani)

Seuraavat esimerkit havainnollistavat keksintöä.

Esimerkki 1

Menetelmä 4'-O-tetrahydropyranyyli-daunomysiinin valmistamiseksi (4'-O-PDa ja 4'-O-PDb)

Liuokseen, jossa oli 60 mg daunomysiinihydrokloridia 5 ml:ssa vedetöntä dimetyyliformamidia, lisättiin 1 ml 3,4-dihydro-2H-pyraania ja 20 6 3 4 2 0 katalyyttinen määrä p-tolueenisulfonihappoa. Reaktioseoksen annettiin seistä yli yön huoneenlämmössä pimeässä, minkä jälkeen se lisättiin 20 ml:aan natriumbikarbonaatin 0,1 N vesiliuosta ja uutettiin kloroformilla (10 ml x 4). Tämän jälkeen kloroformiuutos uutettiin etikka-hapon 1% vesiliuoksella (10 ml x 10), ja saatu hapan vesikerros neutraloitiin natriumbikarbonaatilla ja uutettiin sitten uudelleen kloroformilla (20 ml x 10). Kloroformikerros kuivattiin vedettömän natrium-sulfaatin avulla ja konsentroitiin. Täten saatiin 44 mg jäännöstä, johon kohdistettiin preparatiivinen ohutkerroskromatografointi pii-happogeelin avulla (Merck Co. eOFgtj^)» ja kehitettiin kloroformin ja metanolin seoksella 10:1 tilavuusosaan.

Ohutkerroksesta raavittiin pois piihappogeelikaistat, jotka vastasivat R^-arvoja = 0,46 ja 0,65, minkä jälkeen eluoitiin kloroformin ja metanolin seoksella 10:1 tilavuussuhteessa ja haihdutettiin kuiviin.

Jokainen jäännös liuotettiin metyleenikloridiin, jäädytettiin lisäämällä jäädyttäen t-butanolia, ja kuivattiin alennetussa paineessa.

Täten saatiin 10,1mg punaisenruskeaa kiinteää tuotetta, joka oli yhdistettä 4'-0-PDa, ja 10,5 mg punaista kiinteää tuotetta 4'-0-PDb vastaavista R^-fraktioista 0,46 ja 0,65.

4*-0-PDa ja 4’-0-PDb ovat 4’-0-tetrahydropyranyyli-daunomysiinin diastereomeerejä, joiden fysikaalis-kemialliset ominaisuudet edellä on esitetty taulukossa 1.

Esimerkki 2

Menetelmä 4',14-0-bis-(tetrahydropyranyyli)-adriamysiinin (4’,14-di-0-PAa ja 4’,14-di-O-PAb) ja 14-0-tetrahydropyranyyli- adriamysiinin (14-0-PA) valmistamiseksi adriamysiinistä

Liuokseen, jossa oli 150 mg adriamysiinihydrokloridia 10 ml:ssa vedetöntä dimetyyliformamidia, lisättiin 2 ml 5,4-dihydro-2H-pyraania ja katalyyttinen määrä p-tolueenisulfonihappoa. Reaktioseoksen annettiin olla 48 tuntia huoneenlämmössä, minkä jälkeen se lisättiin 20 ml:aan natriumbikarbonaatin 0,1 N vesiliuosta ja uutettiin etyyliasetaatilla (20 ml x 5). Tämän jälkeen etyyliasetaattikerros uutettiin etikkahapon 1% vesiliuoksella (40 ml x 4), hapan vesikerros neutraloitiin natriumbikarbonaatilla ja uutettiin kloroformilla (20 ml x 10). Kloroformikerros kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin avulla ja haihdutettiin kuiviin. Täten saatiin 160 mg kiinteää ainetta, joka kehitettiin ja puhdistettiin soveltamalla preparatiivista ohutkerroskromatograf oint ia piihappogeelin avulla ja käyttämällä klorofor- 21 63420 min 3a metanolin seosta 10:1 tilavuussuhteessa. Ohutkerroksesta poistettiin raapimalla kaistat Rf = 0,12 ja 0,55» ja puhdistettiin esimerkissä 1 selitetyllä tavalla.

Täten saatiin 35 mg punaista kiinteää H-O-PA, 16 mg punaista kiinteää 4*,14-di-O-PAa ja 14 mg punaista kiinteää 4*»14-di-O-PAb vastaavista Rf-fraktioista 0,12, 0,55 ja 0,73.

4',14-di-0-PAa ja 4’»14-di-0-PAb ovat 4'»14-bis-(0-tetrahydropyranyyli)-adriamysiinin diastereomeerejä, joiden fysikaalis-kemialliset ominaisuudet on edellä esitetty taulukossa 1·

Esimerkki 3

Menetelmä 4',14-bis-(0-tetrahydropyranyyli)-adriamysiinin valmistami seksi 14-0-tetrahydropyranyyli-adriamysiinistä

Liuokseen, jossa oli 35mg 14-0-PA 2 ml:ssa vedetöntä dimetyyliforma-midia, lisättiin 0,5 ml 3,4-dihydro-2H-pyraania ja katalyyttinen määrä p-tolueenisulfonihappoa. Reaktioseoksen annettiin olla 40 tuntia huoneenlämmössä pimeässä, minkä jälkeen se lisättiin 10 ml:aan natriumbikarbonaatin 0,02 N vesiliuosta ja uutettiin etyyliasetaatilla (5 ml x 4). Etyyliasetaattikerros uutettiin etikkahapon 1# vesiliuoksella (10 ml x 3), hapan vesikerros neutraloitiin natriumbikarbonaatilla ja uutettiin kloroformilla (10 ml x 5). Kloroformikerros kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin avulla ja haihdutettiin kuiviin.

Saatu jäännös kromatografoitiin käyttämällä piihappogeelin ohutkerrosta esimerkissä 2 selitetyllä tavalla, jolloin saatiin 8,4 mg punaista kiinteää 4*»14-di-O-PAa ja 8,1 mg punaista kiinteää 4’,14-di-O-PAb vastaavista R^-fräktioista 0,55 ja 0,75. Näiden tuotteiden fysikaalis-kemialliset ominaisuudet olivat samat kuin esimerkin 2 mukaan saatujen yhdisteiden.

Esimerkki 4

Menetelmä 4'-O-tetrahydropyranyyli-adriamysiinin valmistamiseksi 4*»Η-bis-(O-tetrahydropyranyyli)-adriamysiinistä a) liuotettiin 12,4 mg 4',14-di-O-PAa 1,5 ml:aan etikkahapon 10# vesi- liuosta, ja reaktioseoksen annettiin olla 4,5 tuntia huoneenlämmössä pimeässä. Tämän jälkeen reaktioseos lisättiin 10 ml:aan vettä, neutraloitiin natriumbikarbonaattijauheella ja uutettiin kloroformilla (15 mix 2).

28 63420

Kloroformikerros kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin avulla ja haihdutettiin kuiviin. Täten saatiin 11 mg jäännöstä, joka puhdistettiin ohutkerroskromatografoimalla piihappogeelin avulla, kuten edellä on selitetty, ja käyttämällä kloroformin ja metanolin seosta 10:1 tilavuussuhteessa. Pääkaista kohdassa * 0,32 poistettiin raapimalla ja eluoitiin kloroformin ja metanolin seoksella 10:1 tilavuusosaa. Eluaatti haihdutettiin kuiviin. Jäännös liuotettiin metyleenikloridiin, lisättiin t-butanolia jäähdyttäen jäätymispisteeseen asti, ja kuivattiin alennetussa paineessa. Täten saatiin 7 mg punaista kiinteää 4'- 0-PAa, jonka fysikaalis-kemialliset ominaisuudet on esitetty taulukossa 1.

b) liuotettiin 16 mg 4', H-di-O-PAb 5 ml:aan 0,005 N p-tolueenisulfoni-hapon metanoliliuosta, ja reaktioseoksen annettiin olla tunnin ajan huoneenlämmössä pimeässä. Tämän jälkeen reaktioseos neutraloitiin 10 ml:11a natriumbikarbonaatin 0,01 N vesiliuosta ja uutettiin kloroformilla (10 ml x 4). Klorof ormikerros kuivattiin vedettömän natrium-sulfaatin avulla, ja käsittelyä jatkettiin kohdassa a) selitetyllä tavalla. Täten saatiin 7,2 mg punaista kiinteää 4'-0-PAb, jonka R^-arvo 0,49 piihappogeeliä olevassa ohutkerroksessa edellä selitetyissä olosuhteissa. Tämän yhdisteen fysikaalis-kemialliset ominaisuudet on esitetty taulukossa 1.

4*-0-PAa ja 4'-0-PAb ovat 4'-0-tetrahydropyranyyli-adriamysiinin di-astereomeerejä.

Esimerkki 5 Suolan muodostaminen

Niiden menetelmien havainnollistamiseksi, joita voidaan käyttää happo-additiosuolojen valmistamiseksi, voidaan 4’-0-PDa, 4’-0-PDb, 4',14-di- 0-PAa, 4’,14-di-O-PAb, 14-0-PA, 4'-0-PAa tai 4'-0-PAb vapaat emäkset liuottaa etyyliasetaattiin ja lisätä yksi ekvivalentti suolahappoa. Lyofiloimalla saadaan vastaava hydrokloridisuola.

Claims (2)

1. 23 Patenttivaatimus 6 3420 Menetelmä mikrobien ja kasvainten vastaisina aineina käytettävien antrasykliiniglykosidien tetrahydropyranyylieetterien valmistamiseksi, joiden yleinen kaava (I) on O*2* 1 OCH, 0 OH L 5 (I) 0 NH2 jossa kaavassa tarkoittaa vetyatomia tai hydroksyyli- tai tetra-hydropyranyyl ioks i ryhmää, ja R2 tarkoittaa hydroksyyli- tai tetra-hydropyr anyyl ioks i ryhmää , jolloin siinä tapauksessa, että R^ tarkoittaa vetyatomia tai hydroksyyliryhmää, tarkoittaa R2 tetrahydro-pyranyylioksiryhmää, sekä näiden yhdisteiden myrkyttömien happo-additiosuolojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että liitetään yksi tai kaksi tetrahydropyranyyliryhmää kaavan (II) mukaisen yhdisteen asemassa C-4' tai C-14, tai näissä molemmissa asemissa oleviin hydroksyyliryhmiin 0 w
2. 0. OH 5 OCHj 0 OH 0 NHj jossa kaavassa R tarkoittaa vetyatomia tai hydroksyyliryhmää siten, 24 63420 että 3,4-dihydro-2H-pyraani saatetaan reagoimaan kaavan II mukaisen yhdisteen tai sen happoadditiosuolan kanssa inertissä orgaanisessa 1 iuottimessa, jossa läsnä on happokatalysaattoria, ja mahdollisesti poistetaan tetrahydropyranyyliryhmä asemasta 14 osittain hydrolysoimalla tai alkoholysoimalla saatu di-tetrahydropyranyyliyhdiste, ja tarvittaessa muutetaan saatu kaavan (I) mukainen yhdiste myrkyttömäksi happoadditiosuolakseen tai muutetaan happoadditiosuola vapaaksi emäkseksi. Förfarande för framställning av som mikrober och tumörer motverkande ämnen användbara tetrahydropyranyletrar av antracyklinglykosider med den allmänna formeln (I) samt ogiftiga syraadditionssalter av dessa föreningar 0CH3 o oh »0 0 m2 1 vilken formel R^ betecknar en väteatom eller en hydroxyl- eller tetrahydropyranyloxigrupp, och R2 betecknar en hydroxyl- eller tetrahydropyranyloxigrupp, varvid i det fall att R* betecknar en väteatom eller en hydroxylgrupp, betecknar R2 en tetrahydropyranyloxigrupp, kännetecknat därav, att man ansluter en eller tvä tetrahydropyranylgrupper i hydroxylgrupperna i ställning C-4' eller C-14 eller i b£da ställningarna tili en förening med formeln (II)