FI56686C - Foerfarande foer framstaellning av 7-aminocefalosporansyraderivat med antibiotisk verkan - Google Patents

Description

ESjF^l [B] (11)KUULUTUSjULKAISU

ffiA L J V ; UTLÄGGNI NGSSKRIFT 0ob06 ^9SSp C Patentti myönnetty 10 03 1930 («)

Patent ceddelat ^ v ^ (51) Kv.ik.*/int.ci.* a 07 D 501/20 0 07 D 501/04 (21) Psttnttihtkemus — Patanunsöknlng 1ÖT5/71 (22) Hakemltpllv» — Aruöknlngtdag 15 . θ6.71 (23) Alkupilvl—Glltlghctsdag 15.06.71 (41) Tullut julkiseksi — Bllvlt offantllg 17.12.71

Patentti- ja rekisterihallitus (44) Nihuvikalpanon |. kuul.julksl.un pvm. -

Patent-och registerstyrelsen Antökan utlagd och utl.ikrlftan publkerad 30.11-79 (32)(33)(31) Pyydetty etuoikeus —Begird priorltet l6.06.70 Ο9.Ο7.7Ο, 3Ο.Ο9.7Ο, IO.I2.7O, 27.OI.7I, 27.OI.7I, 27.OI.7I, O8.O2.7I, 11.02.71, 11.02.71, 26.O2.7i, 3O.OU.7i, 30.0U.71, 30.0U.71, 30.0U.71, 30.0U.71, 30.0U.71, 30.0U.71, 30.0U.71, 30.0U.71, 30.OU.71, 30.0U.71 Englanti-England(GB) 29158/70, 33U15/70, U6556/70, 5873I/7O, 3296/71, 3297/7I, 3298/71, U179/71, UU79/71, UU80/71, — 5588/71, 29158/70, 33U15/70, U6556/70, 5873I/7O, 3296/71, 3297/71, 3298/71, U179/71, UU79/71, UU80/71, 5588/71 (71) Merck & Co., Inc,, Rahway, New Jersey, USA(US) (72) Burton Grant Christensen, Scotch Plains, New Jersey, Meyer Sletzinger,

North Plainfield, New Jersey, Sandor Karady, Elizabeth, New Jersey,

Lovji Dadi Cama, Edison, New Jersey, USA(US) (7U) Oy Kolster Ab (5U) Menetelmä 7-aminokefaiosporaanihappojohdannaisten valmistamiseksi, joilla on antibioottinen vaikutus - Förfarande för framställning av 7~&minocefa-losporansyraderivat med antibiotisk verkan Tämä keksintö koskee menetelmää uusien antibioottien 7-aminokefalosporaanihappojohdannaisten valmistamiseksi, joissa on _ substituentti 7-asemassa.

Penisilliinin keksiminen, jonka todettiin olevan tärkeän ja tehokkaan antibiootin, kiihdytti suurta kiinnostusta tällä alalla.

Sen jälkeen löydettiin erilaisia muita antibiootteja, kuten streptomysiini, tetrasykliinit, novobiosiini ja sen kaltaiset, jotka suuresti lisäsivät lääkäreiden lääkintämahdollisuuksia erilaisten patogeenien aiheuttamien infektioiden hoitamista varten. Onnettomuudeksi näiden antibioottien käyttö on aikaansaanut patogeenien kantoja, jotka kestävät näitä tunnettuja antibiootteja. Lisäksi tunnetuilla antibiooteilla on se haitta, että ne ovat tehokkaita ainoastaan mikro-organismien tiettyjä lajeja vastaan ja eivät ole tehokkaita patogeenien laajaa aluetta vastaan. Näin ollen muiden antibioottien etsiminen on jatkunut.

2 66616

Keksinnön mukaisesti valmistetut uudet kefalosporiinit ovat 3 ... ....

yhdisteitä, joissa on Δ -kefami-runko, nimittäin dehydrotiatsuni- rengas yhteenliittyneenä y3_laktaamin kanssa, joka sisältää substitu-entin 7-asemassa. Näillä uusilla kefalosporiineilla, joita voidaan esittää rakennekaavalla: A1 R ' -NH —-f ^ (I) ^-Νγ^“ϋΗ2Λ COOR8 jossa R' on asetyyli, 2-tienyyliasetyyli, 2-furyyliasetyyli, fenyyli- _ asetyyli, ^,-atsidofenyyliasetyyli tai (fenyyli) -c^-karboksiasetyyli, R^ on alempi alkoksi, erikoisesti metoksi, bentsyylioksi tai alempi- g alkoksi-karbonyyliamino, A on vety tai asetyylioksi, ja R on vety tai natrium tai kalium, on arvokkaita antibioottisia ominaisuuksia.

Kefalosporiini-yhdisteiden nimistön mukaisesti yhdistettä, joka saadaan hydrolysoimalla kefalosporiini C, jota voidaan esittää rakennekaavalla· νη-j"'8^ J,-H^J-CHjOCOCHj

COOH

kutsutaan 7-aminokefalosporaanihapoksi tai 7-ACA. ^ Tässä käytetty sanonta "dekefalosporaanihappo" kuvaa tiettyjä tuotteita, jotka edustavat emäksistä heterosyklistä runkoa, jolla on rakennekaava

O

Ί- -8-N5 L·

COOH

66666

Siten yhdistettä, jolla on kaava h2n_-—

COOH

kutsutaan 3-metyyli-7aminodekefalosporaanihapoksi käytettäessä tätä nimistön järjestelmää.

Keksinnön mukaisia kefalosporiiniyhdisteitä nimitetään myös sopivasti "kefaami,,-yhdisteiksi, jotka sisältävät emäksisen yhteenliit-tyneen rengas ^3-laktaami-tiatsiini-rakenteen 7- /- 0 joka on tunnettu nimellä kefamiini. Siten kefalosporiiniyhdisteitä kutsutaan nimellä "kefeemi" viitaten perusrakenteeseen, jossa on yksinkertainen olefiini-sidos. Esim. tässä nimistöjärjestelmässä kefalosporiinia C, jolla on rakennekaava

,C00H 0 H S

/ n / \ CH(CH2)3-C-N—-< x - NH2 j-CH2OCOCH3 0

COOH

kutsutaan 7-(5'-aminoadipamido)-3-asetoksimetyyli-3-kefeemi-U-karbonihapoksi.

Keksinnön mukaisia uusia kefalosporiineja voidaan käyttää vapaana happona, suolana, kuten alkalimetalli-, maa-alkalimetalli- tai ammoniumsuoloina, esim. natrium-, kalsium-, trietyyliammonium-, prokaiini- ja senkaltaisena suoloina.

Kaavan I mukaiset uudet kefalosporiinit ovat arvokkaita antibiootteja erilaisia gram-positiivisia ja gram-negatiivisia bakteereja 4 56686 vastaan. Vaikkakin yleensä niiden biologiset spektrit ovat samankaltaisia kuin tunnetut kefalosporiini-spektrit,.on näillä uusilla kefalosporiineilla tiettyjä uusia ja odottamattomia ominaisuuksia.

Siten ne yleensä ovat tehokkaita useita mikro-organismeja vastaan, jotka ovat vastustuskykyisiä tunnettuja kefalosporiineja kuten kefaloridiinia ja kefalotiinia vastaan ja jotka ovat vastustuskykyisiä ^?-laktamaasia vastaan, jonka muodostaa kefalosporiinin suhteen vastustuskykyiset patogeenisi, kuten , E. coli ja A. cloacae, kliiniset eristeet. Myös ne ovat yleensä tehokkaampia Proteus-kantoja kuten mirabilis vastaan ja ne ovat tehokkaita sellaisia Proteus morganii kantoja vastaan, jotka ovat vastustuskykyisiä substituoimattomia kefalosporiineja vastaan. Ne ovat myös käyttökelpoisia erotettaessa mikro-organismeja jälelle jääneistä mahdollisista mikro-organismeista farmaseuttisista, lääkinnällisistä ja hammaslääkinnällisistä välineistä ja ne ovat käyttökelpoisia bakteereja tappavina aineina teollisuuskäytöissä, esim vesipohjaisissa maaleissa ja paperitehtaiden 0-vedes-sä haitallisten bakteerien kasvun estämiseksi.

Siten 7-metoksikefalosporiinit, jotka on valmistettu keksinnön mukaisesti, ovat yleensä tehokkaampia kuin 7-(D-5'-amino-5*-karboksi= valeramido)-7-metoksi-kefalosporiinit erilaisia gram-negatiivisia organismeja vastaan ja niillä on suurempi vaikutus gram-positiivisia organismeja vastaan. Esim. nämä 7-metoksikefalosporiinit ovat tehokkaita sellaisia gram-positiivisia patogeenejä kuin Staphylococcus aureus vastaan sellaisella pienimmillä estoväkevyydellä (MIC), joka on niin pieni kuin noin 1,5 ^ug/ml, Streptococcus pyogenes vastaan estoväkevyydellä noin 0,7 ^ug/ml ja Diplococcus pneumoniae vastaan ~ estoväkevyydellä noin 0,7 ^ug/ml; ja gram negatiivisia organismeja kuten Aerobacter aerogenes vastaan estoväkevyydellä noin 3 ^ug/ml,

Proteus vulgaris vastaan estoväkevyydellä noin 1,5 ^ug/ml ja Proteus _ morganii vastaan estoväkevyydellä noin 6 ^ug/ml. Niinpä esim 3-asetoksimetyyli-7-metoksi-7-(2-tienyyliasetamido)-3-kefeemi-l»-kar-bonihapolla on seuraavat aktiviteetit: S. pyogenes MIC 1,56 ^ng/ml ja P. vulgaris MIC 0,78 ^ug/ml.

5 S6686

Seuraavassa taulukossa I on esitetty muutamien keksinnön mukaisesti valmistettujen yhdisteiden entsymaattinen hajoaminen verrattuna 3 tunnettuun yhdisteeseen kefamysiiniin C (SF patentti 45990), kefalotiiniin ja kefaloridiiniin. Taulukossa II on esitetty yhdisteen 3 ja mainittujen tunnettujen yhdisteiden in vivo aktiviteetti .

Tutkitut yhdisteet Rl R' -N--S ^

HJ-N^^-CH2“A

o |

COOH

Yhdiste R1 R^~ A

1 2-tienyyliasetyyli OCH^ asetyylioksi 2 2-furyyliasetyyli OCHg asetyylioksi 3 fenyylimalonyyli OCH^ asetyylioksi

Kefamysiini C aminoadipoyyli 0Cfl3 karbamoyylioksi

Kefalotiini tienyyliasetyyli H asetyylioksi "" Kefaloridiini tienyyliasetyyli H pyridinium 6 56686

Taulukko I

Kefalosporiini-analogien entsymaattinen hajoaminen

Inaktivoitumis-% *

Yhdiste Escherichia coli Aerobacter cloacae entsyymi entsyymi 1 16 16 2 0 0 3 0 0

Kefamysiini C 0 71

Kefalotiini >95 74

Kefaloridiini >95 >95

Liuosta 250 ^ig/ml pidetty 37°C:ssa 3 tuntia.

Kuten taulukon I arvoista ilmenee ovat keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet 1, 2, 3 huomattavasti vastustuskykyisempiä entsymaattista hajoamista vastaan kuin vertailuna käytetyt tunnetut yhdisteet.

Taulukko II ^

Kefalosporiini-analogien in vivp aktiviteetti ED50 (/Ug x 2, s.c.)

Yhdiste Staph, aureus E. coli Proteus morganii 3 >2,000 90

Kefamysiini C 15,500 164 151

Kefalotiini 14.0 1,210 >20,000

Kefaloridiini 0.2 133 5,300

Taulukosta II ilmenee että yhdisteen aktiviteetti erikoisesti mikro-organismia Proteus morganii vastaan on selvästi parempi kuin vertailuyhdisteiden aktiviteetti.

56686 7

Keksinnön mukaisia tuotteita voidaan käyttää aktiivisena ainesosana yksinään tai yhdistelmänä erilaisissa farmaseuttisissa valmisteissa. Näitä antibiootteja ja niiden vastaavia suoloja voidaan käyttää kapseleissa tai tableteissa, jauheina tai liuoksina tai suspensioina tai eliksiireinä. Niitä voidaan annostella suun kautta, laskimonsisäisesti tai lihaksensisäisesti. Sopivia kantoaineita, joita voidaan käyttää mainituissa kokoomuksissa, ovat esim. mannitoli, sakkaroosi, glukoosi tai steriilit ndsteet kuten vesi, suolaliuos, w glykolit ja mineraali-, eläin-, kasvis- tai synteettistä alkuperää olevat öljyt, kuten esim. maapähkinäöljy, mineraaliöljy tai seesam-öljy. Myös kantoaineiden lisäksi voidaan kokoomuksissa käyttää muita ainesosia, kuten stabiloimis-, side-, hapettumisenestoaineita, säilöntäaineita, liukkaaksi tekeviä aineita, suspensoimisaineita, viskositeettiaineita tai makuaineita tai senkaltaisia. Lisäksi kokoomuksissa voi olla muita aktiivisia ainesosia antibioottisen vaikutuksen laajemman spektrin aikaansaamiseksi.

Annettava annos riippuu suuressa määrin käsiteltävän kohteen tilasta ja potilaan painosta, jolloin parenteraalinen annostus on edullinen yleisiä infektioita varten ja suun kautta tapahtuva annostelu vatsainfektiota varten. Yleinen päivittäinen annos käsittää noin 15-600 mg aktiivista ainesosaa kg kohti ruumiinpainoa yhtenä tai useampana eränä päivässä. Yleensä päivittäinen annos on alueella noin 80 - 120 mg aktiivista ainesosaa kg kohti ruumiinpainoa.

Tuotteita voidaan annostella yksikköannosmuodoissa, esim. kiin-^ teässä tai nestemäisessä muodossa suun kautta annettavassa annosmuo- dossa. Yksikköannos nestemäisenä tai kiinteänä sisältää yleensä noin 15 - 1500 mg aktiivista ainesosaa laskettuna valmisteen kokonaispai-w nosta; kuitenkin on yleensä edullista käyttää annospitoisuutta noin 250-1000 mg. Parenteraalista annostelua varten sisältää yksikköannos tavallisesti puhdasta yhdistettä lievästi happameksi tehdyssä sterii- -Iissä vesiliuoksessa tai liukoisena jauheena, joka on tarkoitettu liuotettavaksi. Spesifisten tuotteiden tyypilliset valmisteet kuvataan seuraavassa.

Uudet 7-aminokefalosporaanihappojohdannaiset valmistetaan keksinnön mukaisesti siten, että käsitellään 7-diatsokefalosporanaat-tia, jolla on kaava: 8 56686 N2 =|- «sJ-CH/ I 8 * COORö o» e jossa A merkitsee samaa kuin edellä ja R merkitsee samaa kuin R tai esteritähdettä, erikoisesti bentshydryyliä, halogeeniatsidilla ammoniumatsidin läsnäollessa yhdisteen muodostamiseksi, jolla on kaava: h

»3 -—(lN

J,-N j—CH2A

lot C00Rö 8 1 jossa X on halogeeni ja R ja A merkitsevät samaa kuin edellä, sekä että saatua atsidi-välituotetta käsitellään alemmalla alkanolilla, bentsyylialkoholilla tai alempi-alkyyli-karbamaatilla välituotteen muodostamiseksi, jolla on kaava: R1 ..+-Λ

J-CH2A

o ^ la» C00Rö 1 8 * jossa R , R ja A merkitsevät samaa kuin edellä, minkä jälkeen tä-män välituotteen N^-ryhmä pelkistetään aminoryhmäksi vastaavan amii- ^ nin saamiseksi ja aminoryhaä asyloidaan kaavan R'-0H mukaisella hapolla tai sen reaktiokykyisellä johdannaisella, jossa kaavassa R' merkitsee samaa kuin edellä, yhdisteen saamiseksi, jolla on kaava: 1 . - · S.

R'-NH----^

Jr--CH2A

I a i C00R° 18'.

jossa R , R', R ja A merkitsevät samaa kuin edellä, ja että mikäli saatu tuote on esteri se lohkaistaan vastaavaksi vapaaksi hapoksi tai suolaksi ja haluttaessa suola muutetaan vastaavaksi vapaaksi hapoksi tai vapaa happo muutetaan vastaavaksi suolaksi.

Seuraava reaktiokaavio ja sen selitys kuvaa menetelmän eri suoritusmuotoja.

9 56666 N2=|-^ }- O »

COOR

(III)

,+A

J- _ COOR8' (VII) Ψ

Rl SL K3--

)-CH2A

Q t /COOR° \ (VIII) \/

Ra " R1 >SV H S.

H2N : f j _^ R'-N--f o Nr^ ^-nv^-ch2a COOR8 COOR8' (IX) (XI) R1 * ^ h2n--R,i-L_/S\ i -> /-- xJ- cH/

C00H COOH

OO (I) 5668$ 10 1 Q t joissa X, R , R* ja A merkitsevät samaa kuin edellä ja R merkitsee g samaa kuin R tai esteritähdettä.

Edellä kuvatussa menetelmässä 7-diatsokefalosporaanihappoeste-rin (III) annetaan reagoida halogeeniatsidin kanssa, jona on bromi-, kloori- tai jodiatsidi, tertiäärisen amiiniatsidin läsnäollessa, 7-halogeeni-7-atsidokefalosporaanihappoesterin (VII) muodostamiseksi, jonka annetaan reagoida edellä kuvatun nukleofiilisen reagenssin kanssa, jolloin saadaan haluttu 7-R1-7-atsidokefalosporaanihappoes-teri (VIII). Tämä välituote joko pelkistetään ja asyloidaan yhdessä vaiheessa substituoidun kefalosporaaniesterin (XI) muodostamiseksi, ~ joka voidaan sen jälkeen lohkaista suojaryhmän poistamiseksi ja kefa-losporaanihapon tai sen suolan (I) saamiseksi. Vaihtoehtoisesti kuten on esitetty reaktiosarjassa 7-R^-7-atsidokefalosporaanihappoeste- _ ri (VIII) pelkistetään V-R^-V-aminokefalosporaanihappoesteriksi (IX), joka voidaan asyloida 7-R^-7-asyyliaminokefalosporaanihappoesteriksi (XI).

Yleensä on edullista suorittaa edellä esitetyt reaktiot käyttäen kefalosporiiniyhdistettä, jossa karboksiryhmä on suojattu, koska sellaisilla johdannaisilla saadaan halutun tuotteen suurimmat saaliit. Tätä tarkoitusta varten karboksisubstituentti suojataan muodostamalla sopiva esteri, kuten bentsyyli-, bentshydryyli-, p-nitrofenyyli-, trimetyylisilyyli-, trikloorietoksi-, p-metoksibent-syyli-, ftalimidometyyli- tai sukkinimidometyyliesteri, jotka voidaan helposti poistaa tunnetuilla menetelmillä. Yhdisteen (IX) esteriryhmä voidaan lohkaista vapaan hapon (X) saamiseksijoka voidaan asyloida halutun substituoidun kefalosporiinin tai sen suo- ~ lan saamiseksi. Suojaryhmän lohkaiseminen aikaansaadaan helposti tunnetulla tavalla. Esim. aralkyyliryhmä kuten bentsyyliesteri poistetaan käsittelemällä trihalogeenialkaanihapolla, edullisesti trifluorietikkahapolla, tai katalyyttisella hydrauksella ja silyyli-esteri voidaan poistaa hydrolyysillä vapaan hapon tai sen suolan muodostamiseksi .

» 11 $6686

Halogeeniatsidivälituotteen muodostamisen vaihe suoritetaan antamalla diatsoyhdisteen reagoida halogeeniatsidin kanssa lämpötilassa noin 0 - 50°C riittävän ajan halutun yhdisteen muodostamisen saattamiseksi täydelliseksi. Reaktio suoritetaan sopivassa orgaanisessa liuottimessa, joka on inerti reaktiokomponentteihin nähden. Erilaisia liuottimia, jotka eivät sisällä aktiivista vetyä, kuten metyleenikloridia, kloroformia, bentseeniä, tolueenia, eetteriä ja senkaltaisia tai niiden seoksia voidaan käyttää reaktion suorittamiseksi. Yleensä on edullista suorittaa reaktio toisen atsidin kuten ^ litiumatsidin tai tertiäärisen ammoniumatsidin, esim. trietyyliam- moniumatsidin läsnäollessa, koska näissä olosuhteissa vältetään ei-halutun 7-dibromiyhdisteen muodostuminen. Halogeeniatsidia käytetään ^ määrässä, joka on hiukan yli stökiometrisen määrän. Tdsen atsidin määrä ei ole kriitillinen ja yleensä sitä käytetään ylimäärä halutun halogeeniatsido-yhdisteen mahdollisimman suuren saaliin saamiseksi optimiolosuhteissa. Reaktion päätyttyä halogeeniatsidi otetaan talteen ja voidaan puhdistaa edelleen, esim. kromatografoimalla sinänsä tunnetulla tavalla.

Menetelmän seuraava vaihe käsittäen halogeenisubstituentin korvaamisen nukleofiilisella ryhmällä suoritetaan antamalla halogeeniatsidin reagoida aineen kanssa, joka voi liittää ryhmän korvaten halogeenin. Tämä reaktio suoritetaan edullisesti sopivan inertin liuottimen, kuten metyleenikloridin, kloroformin, bentseenin, tolueenin, eetterin, petrolieetterin ja senkaltaisen läsnäollessa; myös tässä on edullista välttää liuotinta, joka sisältää aktiivista yetyä. Keksinnön mukaisesti nukleofiilinen korvaus-reagenssi on alkanoli, bent-syylialkoholi tai alkyylikarbamaatti kuten metanoli, etanoli tai etyy-likarbamaatti, joka aikaansaa halogeeniryhmän korvautumisen ja metoksin, etoksin, bentsyylioksin tai etoksikarbonyyliaminon liittymisen. Reaktio suoritetaan edullisesti happoa sitovan aineen kuten alkaalin tai edullisesti tertiäärisen amiinin, kuten pyridiinin läsnäollessa ja käyttämällä tarkoituksenmukaista suolaa ja suorittamalla reaktio raskasmetallin suolan, kuten hopeaoksidin tai hopeatetrafluoriboraatin läsnäollessa.

Edellä kuvatun menetelmän seuraavassa vaiheessa 7-atsido-7-R^-yhdiste pelkistetään sen jälkeen vastaavan 7-amino-7-R^-yhdisteen saamiseksi. Erilaisia menetelmiä voidaan käyttää tämän pelkistämisen suorittamiseksi, mutta yleensä on edullista suorittaa atsidon pelkistäminen aminoksi katalyyttisellä hydrauksella käyttäen jalometalli- 56686 12 katalyyttiä kuten platinaa, palladiumia tai niiden oksideja. Nämä menetelmät suoritetaan sinänsä tunnetulla tavalla. Vaihtoehtoisesti pelkistys voidaan suorittaa sopivan asyloimisaineen läsnäollessa halutun 7-asyyliamido-7-R^-yhdisteen saamiseksi. Asyloiminen suoritetaan sinänsä tunnetulla tavalla esim. käsittelemällä asyylihaloge-nidilla tai karbonihappoanhydridillä.

Seuraavat esimerkit kuvaavat keksintöä;

Esimerkki 1 A. Bentsyyli-7-diatsokefalosporanaatti

Seosta, jossa on 10 g natriumnitriittiä, 4,5 g bentsyyli-7- ~ aminokefalosporanaatti-p-tolueenisulfonihapposuolaa, 300 ml metyleeni= kloridia ja 300 ml vesi/jäätä, ravistellaan erotussuppilossa. Lisätään 1,6 g p-tolueenisulfonihappo-monohydraattia kolmessa erässä ^ 20 minuutin aikana. Erotussuppiloa ravistellaan voimakkaasti tänä aikana. Metyleenikloridikerros erotetaan, kuivataan natriumsulfaa-tilla ja haihdutetaan vähennetyssä paineessa tilavuuteen 40 ml.

B. Bentsyyli-7-atsido-7-bromikefalosporanaatti

Bentsyyli-7-diatsokefalosporanaatin liuokseen 40 ml:ssa metyleenikloridia lisätään 40 ml nitrometaania ja saatu liuos jäähdytetään jäähauteella. Tähän liuokseen lisätään 80 ml trietyyli* ammoniumatsidia metyleenikloridissa, joka on valmistettu seuraavas-sa kuvatulla tavalla. Tähän reaktioseokseen lisätään sitten 40 ml metyleenikloridia, joka sisältää bromiatsidia, joka on valmistettu seuraavassa kuvatulla tavalla, samalla hyvin sekoittaen. Sen jälkeen kun kaasun kehittyminen päättyy lisätään 200 ml 0,1N natriumsulfaattia ja seosta ravistellaan voimakkaasti. Sen jälkeen orgaaninen kerros erotetaan ja lisätään 200 ml vettä. Tähän seokseen lisätään sitten kiirteätä natriumbikarbonaattia pienissä erissä siihen saakka kunnes vesifaasi pysyy pH-arvossa 7 ravistamisen jälkeen. Orgaaninen kerros erotetaan, kuivataan magnesiumsulfaatilla ja haihdutetaan vähennetyssä paineessa, jolloin saadaan 4,8 g raakaa bentsyyli-7-atsido- 7-bromikefalosporanaattia ruskeana öljynä. Tuote puhdistetaan kro-matografoimalla käyttäen 120 g silikageeliä ja duoimalla heksaani/ bentseenillä 1:1 ja 1:3 suhteessa tuotteen duoimiseksi. Fraktiot, jotka sisältävät puhtaan tuotteen, yhdistetään ja haihdutetaan bentsyyli-7-atsido-7-bromikefalosporanaatin saamiseksi. IR (neste-kalvo): 4,7 ^u (atsidi), 5,60 ^u (β-laktaamikarbonyyli), 5,75 ^u (esterit). NMR™^ (100MHz): 2,01 (/(S, 3H, 3 o 13 56686 CH3C-0), 3,42 cf (AB, 2H, S-CHj-), 4,68 ja 4,71 (f(singletit, C-6 vedyt). Ohutkerroskromatografiässä Rf on 0,70 silikageelillä 6 käyttäen 1 %:sta metanolia kloroformissa.

Trietyyliammoniumatsidin liuos valmistetaan sekoittamalla 6,0 g natriumatsidia, 20 ml vettä ja 50 ml metyleenikloridia, jäähdyttämällä tämä reaktioseos 0°C:een ja lisäämällä 6 ml väkevää rikkihappoa. Saadun reaktioseoksen annetaan olla 10 minuuttia, kerrokset erotetaan ja vesikerros pestään pienellä määrällä metyleenikloridia, joka lisätään ennakolta erotettuun metyleenikloridifaasiin. Sen jälkeen kun on kuivattu kalsiumkloridillä, neutraloidaan metyleeni= kloridiliuos pH-arvoon 7 trietyyliamiinilla ja lopuksi säädetään 100 mlrksi metyleenikloridilla.

^ Bromiatsidiliuos valmistetaan jäähdyttämällä seos, jossa on 26 g natriumatsidia, 80 ml metyleenikloridia ja 6,4 g bromia, 0°C:seen, lisäämällä 20 ml väkevää kloorivetyhappoa, antamalla reaktioseoksen seistä jäähauteella 3 tuntia, erottamalla orgaaninen faasi, pesemällä vesifaasi pienellä määrällä metyleenikloridia, joka lisätään erotettuun orgaaniseen faasiin, ja säätämällä tilavuuteen 100 ml metyleenikloridilla.

C. Bentsyyli-7-atsido-7-metoksikefalosporanaatti Bentsyyli-7-atsido-7-bromikefalosporanaatin liuosta metanolis- sa käsitellään yhdellä ekvivalentilla kuivaa hopeafluoriboraattia. Ruskeanvärinen sakka muodostuu nopeasti. Seosta sekoitetaan 22°C:ssa 2 3/4 tuntia. Kiinteä aine poistetaan suodattamalla ja suodos haihdutetaan raa'an bentsyyli-7-atsido-7-metoksikefalosporanaatin saamiseksi. Raakatuote kromatografoidaan silikageelillä käyttäen 2 %:sta kloroformia bentseenissä. Halutulla tuotteella on seuraa-vat arvot: NMR™^ (osittainen, 100 MHz) 2,02 cf (S, 3H, w 0 3 CHgC-0), 3,60(7^8, 3H, OCH^). IR (nestekalvo): voimakas absorptio kohdassa 4,70 ^u (atsidi), 5,60 ^u (,β-lakt aami), 6,74 j\x (esterit). Ohutkerroskromatografiässä Rf on 0,65 silikageelillä G 1 %:lla me-tanolilla kloroformissa.

D. Bentsyyli-7-asetamidi-7-metoksikefalosporanaatti Seos, jossa on 70,5 mg bentsyyli-7-atsido-7-metoksikefalo= sporanaattia, 69,5 mg platinaoksidia ja 5,0 ml etikkahappoanhydridiä, hydrataan ilmakehän paineessa 16 tuntia. Liuotin haihdutetaan vähennetyssä paineessa ja raakatuote kromatografoidaan käyttäen 12 g 66686 14 silikageeliä ja uuttaen kloroformilla sekä kloroformilla, jossa on 1-5 % metanolia. Raaka bentsyyli-7-asetamido-7-metoksikefalospora-naatti eluoidaan 1 %:lla metanolilla kloroformissa. Tuotteella on seuraavat arvot: IR (nestekalvo) 3,0 ^u (laktaami-karbonyyli).

5,75 ,u (esterit), 5,93 ja 5,60 ,u (amidi) ja ei absorptiota koh- ' TMS '

dassa 4,7 ,u (atsidi). NMR„ , ... . , WTI

* / CDC13 (osittainen, 100 MHz): 0 0 2,01 /(S, CH3C-0), 2,07 ja 2,10/(singletit, CHgC-NH), 3,50^/(singletit, OCH^), OCH^), 5,20 (singletit, C-6 vety). Ohutkerroskromatografian mukaan Rf on 0,40 silikageelillä G käyttäen ^ 5 %:sta metanolia kloroformissa.

E. Kalium-7-asetamido-7-metoksikefalosporanaatti

Liuos, jossa on 25 mg bentsyyli-7-asetamido-7-metoksikefalospo-ranaattia 3 ml:ssa 1:1 vesipitoista metanolia, hydrataan käyttäen 2 5 mg 10 % Pd/C-katalyyttiä paineessa 2,8 kg/αη 1 tunti. Seos suodatetaan ja suodoksen pH säädetään arvoon 8 kaliumbikarbonaatilla.

Vesiliuos lyofilisoidaan kalium-7-asetamido-7-metoksikefalosporanaa-tin saamiseksi.

Esimerkki 2 A. Bentshydryyli-7-aminokefalosporanaatti

Lietteeseen, jossa on 6,8 g (0,025 moolia) 7-amino-kefalospo-raanihappoa 300 ml:ssa peroksidista vapaata dioksaania, lisätään huoneen lämpötilassa samalla sekoittaen 4,3 g (0,022 moolia) p-tolueenisulfonihappo-monohydraattia. Kirkas liuos väkevöidään tyhjössä ja huuhdotaan kahdesta dioksaanilla.

Jäännös liuotetaan 300 ml:aan dioksaania huoneenlämpötilassa ja lisätään 15 minuutin aikana pisaroittain liuos, jossa on 10 g (0,05 moolia) difenyylidiatsometaania 25 ml:ssa dioksaania. Viinin-väristä liuosta sekoitetaan vielä 30 minuuttia ja sen jälkeen li-sätään 25 ml MEOH ylimäärän QjCNj hajottamiseksi. Seos väkevöidään tyhjössä ja jäännös jaetaan 200 ml:n CHjC^ ja 200 ml vettä kesken, joka sisältää 10 g KjHPO,^ (pH = 8,5). Orgaaninen faasi pestään vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään tyhjössä öljyksi.

öljyä sekoitetaan 100 ml:n kanssa eetteriä 1 tunti. Sakka suodatetaan, pestään eetterillä ja kuivataan vakiopainoon. 4,7 g.

(43 %). sp. = 126-128°C. Analyysi laskettu: C, 63,0; H, 5,01; N, 6,37. Löydetty: C, 62,7; H, 5,18; N, 5,18. IR CHCl3:ssa on 5,6 ^u (y?-laktaami C=0) ja 5,8 ^u (esteri C = 0). NMR CDCl3:ssa on 56686 o 15 1,85c/ (singletti, NH2); 2,0(/ (singletti, CHgC); 3 ,45c/(kaksois , CH2S); 4,8c/(singletti, CH2OAC); 4,7c/(kaksois, CgH); 4,9 c/( kaksois, C7H); 6,98 cf (kaksois, ^.CH); ja 7,4^(singletti,

fenyyli). Q

t B. Bentsyyli-7-diatsokefalosporanaatti

Sekoitettuun seokseen, jossa on 1,6 g natriumnitriittiä, 30 ml vettä ja 40 ml CH2C12 0°C:ssa, lisätään 880 mg (0,002 moolia) bentshydryyli-7-aminokefalosporanaattia ja sen jälkeen liuos, jossa — on 760 mg (0,004 moolia) p-tolueenisulfonihappoa 5 ml:ssa vettä, muutamien minuuttien aikana. Seosta sekoitetaan 0°C:ssa 20 minuuttia, sen jälkeen orgaaninen faasi erotetaan, pestään 10 ml:11a jää-^ vettä, kuivataan natriumsulfaatilla 0°C:ssa, suodatetaan ja väke- vöidään tyhjössä huoneen lämpötilassa, jolloin saadaan 900 mg bentshydryyli-7-diatsokefalosporanaatin lasimaista ainetta. IR on 4.8 yU (voimakas N=N, 5,6 (^3-laktaami CsO) ja 5,8 ^u (esteri C-0). NMR CDCl~:ssa on 2,0^/( singletti, CH3C; 3,4//(kaksois, CH2S); 4.8 (singletti, CH20AC); 5,6^/(singletti, CgH); 6,98 (singletti,

^ Q

CH. ); ja 7,4 (singletti, fenyyli).

^ Q

C. Bentshydryyli-7-bromi-7-atsidokefalosporanaatti Liuokseen, jossa on 900 mg bentshydryyli-7-diatsokefalospora- naattia 20 ml:ssa CH2C12 ja 10 mlrssa CH3N02 0-10°C:ssa lisätään yh-dellä kertaa trietyyliammoniumatsidiliuosta (Et3&HN ) iva^mis'tus kuvataan myöhemmin) ja sen jälkeen BrNg-liuosta (valmistus kuvataan myöhemmin) ja sen jälkeen 50 ml vettä sekä kiinteätä NaHC03 pH-w. arvoon 8 saakka.

Orgaaninen kerros eroistaan ja uutetaan kahdesti 20 ml :11a vettä, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään tyhjössä, jolloin saadaan 900 mg (83 %) bentshydryyli-7-bromi-7-atsido-kefalospora-naattia.

NMR vahvistaa rakenteen. Ohutkerroskromatografia silikagee-lillä käyttäen CHC13 osoittaa päätäplän kohdassa Rf 0,2. Kromatogra-foitaessa 900 mg raakatuotetta käyttäen 25 g silikageeliä ja eluoiden CHCl3:lla saadaan 400 mg (39 %) yhden täplän antavaa ainettä öljynä.

S6686 16 IR CHCl3:ssa on 4,72 (N3), 5,56 (^-laktaami C=0 ja 5,75 (esteri C=0). NMR CDCl^ssa on 2,0,/(singletti, 0 CH3C); 3,38(/(CH2S); 4,7(/(singletti CHjO); 4,9</(C6H); 6,95</ Q.^ ' •(singletti ">CH); ja 7,4£^(singletti, fenyyli).

Q

BrNg-liuoksen valmistus 8 ml:aan CH2C12 0°C:ssa lisätään 2,66 g (0,04 moolia) NaN3 ja sen jälkeen 0,65 g (0,0042 moolia) bromia. Tähän sekoitettuun seokseen 0°C:ssa lisätään pisaroittain 2 ml väkevää kloorivetyhappoa. ""

Seosta sekoitetaan 3 tuntia 0°C:ssa.

Orgaaninen kerros dekantoidaan pois ja vesipitoinen kerros uutetaan 5 ml:11a CH2C12· Yhdistettyä orgaanista faasia pidetään -io°C:ssa.

EtgÄjjNg-liuoksen valmistus

Lietteeseen, jossa on 1,5 g NaNg 5 ml:ssa vettä ja 10 ml:ssa CH2C12 -10°C:ssa, lisätään pisaroittain -10° - 0°C:ssa 4 ml 50 %:sta H2S04· Orgaaninen faasi kaadetaan erilleen vesipitoisesta tahnasta ja vesipitoinen uute pestään 5 ml:11a CaCl2. Yhdistetty orgaaninen faasi kuivataan CaCl2:lla. Dekantoitu HNj-liuos saatetaan pH-arvoon 7 Et3N:llä ja siten saatu trietyyliammoniumatsidi pidetään -10°C:ssa.

D. Bentshydryyli-7-metoksi-7-atsidokefalosporanaatti Liuokseen, jossa on 400 mg (0,00072 moolia) bentshydryyli-7-bromi-7-atsidokefalosporanaattia 30 ml:ssa metanolia, lisätään 150 mg (0,0008 moolia) AgBF^. Seosta sekoitetaan pimeässä 2 1/2 tuntia.

Seos väkevöidään tyhjössä ja jäännös otetaan 50 ml:aan CH2C12· Suodattamisen jälkeen suodos huuhdotaan kahdesti kyllästetyllä NaHCOg-liuoksella, kahdesti vedellä, kuivataan vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja väkevöidään tyhjössä, jolloin saadaan 300 mg (83 %) kiteitä, sp. .145-148°C.

IR CHCl3:ssa 4,72 (Ng-nauha), 5,6^u (β -laktaami) ja 5,75,u (esteri C=0). NMR 2,0 </( singletti, „ ' CH3C); 3,4</(CH2S); 3 ,6/( singletti , OCHg); 4,88 </( singletti , CgH); 4,9c/ (CH-O); 6,98c/(singletti, Q\ ^CH); ]a 7,4 (singletti, fenyyli).

66686

Analyysi laskettu: C, 58,4; H, 4,45; N, 11,3; S, 6,5. Löydet tyä, 58,56; H, 4,65; N, 11,30; S, 5,70.

E. Bentshydryyli-7-metoksi-7-aminokefalosporanaatti 1,0 g bentshydryyli-7-atsido-7-metoksikefalosporanaattia liuotetaan 100 ml:aan dioksaania. Lisätään 1,0 g platinaoksidia ja reaktioseosta sekoitetaan vedyn alla ilmakehän paineessa 1 tunti. Lisätään toinen 1,0 g platinaoksidia ja reaktioseosta pidetään uudelleen vedyn alla ja sekoitetaan 3 tuntia siihen saakka kunnes atsidi on täydellisesti reagoinut, mikä määrätään infrapuna-analyysin avulla. Liuotin poistetaan vähennetyssä paineessa ja jäännös otetaan ^ 50 ml:aan kloroformia ja suodatetaan silikageelin G lävitse kloro formissa 10 ml:n sintratussa suppilossa. Aine eluoidaan kloroformilla siihen saakka kunnes saadaan 200 ml kloroformiuutetta. Kloro-^ formi poistetaan vähennetyssä paineessa, jolloin saadaan 0,632 g bentshydryyli-7-metoksi-7-aminokefalosporanaattia.

F. Bentshydryyli-7-metoksi-7-(2-tienyyliasetamido)-kefalo-sporanaatti 0,632 g bentshydryyli-7-metoksi-7-aminokefalosporanaattia otetaan 25 ml:aan metyleenikloridia ja jäähdytetään 0°C:seen. Lisätään pisaroittain 30 sekunnin aikana 0,6 ml 2-tienyyliasetyylikloridia ja sen jälkeen 0,6 ml pyridiiniä 60 sekuntia myöhemmin. Reaktioseosta sekoitetaan 0°C:ssa 15 minuuttia ja kaadetaan murskattuun jäähän. Seosta sekoitetaan ja orgaaninen kerros erotetaan ja pestään kerran 20 ml:11a vettä, kerran 20 ml:11a 5 %:sta natriumbikarbonaattia ja vielä kerran 20 ml:11a vettä. Metyleenikloridi kuivataan ja haihdu-- tetaan kuiviin, jolloin saadaan 1,417 g raakatuotetta. Tämä aine pannaan kolonniin, jossa on 60 g silikageeliä bentseenissä, ja kolon-ni eluoidaan bentseenillä, jolloin otetaan 100 ml:n fraktioita, ja sen jälkeen 300 ml metyleenikloridi/bentseeniä (1:1) 3 fraktiona ja 500 ml metyleenikloridia 5 fraktiona. Tuote poistetaan kolonnista eluoimalla 400 ml:11a kloroformia 4 fraktiona, jolloin saadaan 0,592 g. Tämä aine otetaan 25 ml:aan metyleenikloridia ja sekoitetaan huoneenlämpötilassa 20 ml:n kanssa liuosta, jossa on 0,120 g natriumbikarbonaattia vedessä, 1/2 tuntia. Kerrokset erotetaan ja orgaaninen kerros pestään vedellä, kuivataan ja haihdutetaan kuiviin, jolloin saadaan 0,420 g bentshydryyli-7-metoksi-7-(2-tienyyliaset-amido)kefalosporanaattia, joka antaa yksinkertaisen täplän ohutker- o -° 56686 roskromatografialevyllä. IR: 3,05 (NH); 5,62 (/?-laktaami C); 5,75 ,u (esteri C-0); 5,92 ,u (amidi C). NMR: 2,6-3,2 tau (CcHc & H ' H ' 65 N s I I) protonit)\ 4,94 tau (S, 6H)v 5,05 tau g (CH.-OAc); 6,11 tau (S, L—CH2 i 6,52 tau (S, OCH,); \ S S 3 6.64 tau (-CH2-S); 7,99 tau (S, CHg-CsO).

G. Natrium-7-metoksi-7-(2-tienyyliasetamido)kefalosporanaatti.

0,420 g bentshydryyli-7-metoksi-7-(2-tienyyliasetamido)-kefalosporanaattia liuotetaan 3,5 ml:aan anisolia ja käsitellään 10 ml:11a trifluorietikkahappoa huoneenlämpötilassa 10 minuuttia.

Trifluorietikkahappo ja anisoli poistetaan vähennetyssä paineessa yllä pitäen lämpötilaa noin 40°C ja jäännös otetaan 25 ml:aan klo- ^ rofdrmia ja käsitellään 20 ml :11a vettä, joka sisältää 0,120 g natriumbikarbonaattia. Seosta sekoitetaan 1/2 tuntia huoneenlämpötilassa ja orgaaninen faasi erotetaan ja pestään vedellä. Yhdistetty vesipitoinen faasi pestään kahdesti metyleenikloridilla ja lyofilisoi-daan, jolloin saadaan 0,328 g natrium-7-metoksi-7-(2-tienyyliasetami-do)kefalosporanaattia ruskehtavana aineena. IR: 5,65^u (/i-laktaami), 5,91 j\\ (amidi-karbonyyli). NMR (DMS0Dg): 2,65 tau (singletti) ja 3,06 tau (kaksois) (tienyyli-protonit); 5,04 tau (singletti, 6H)j 5,16 tau giCHj-O-C-CHg) j 6,19 tau (singletti, [P ^jl_CH ^ 6.65 tau (singletti, OCH^); 6,77 tau, (-S-CH2); 8,01 tau (CH^-C).

Esimerkki 3

Bentshydryyli-7-amino-7-metoksikefalosporanaatti 500 mg platinaoksidia lisätään liuokseen, jossa on 500 mg (0,07 mm) esimerkin 2D mukaan saatua bentshydryyli-7-atsido-7-metoksikefalosporanaattia 50 ml:ssa p-dioksaania 250 ml:n pyöröpoh-jaisessa pullossa. Reaktioastia pannaan vedyn alle huoneenlämpötilaan ja ilmakehän paineeseen ja sekoitetaan magneettisesti voimakkaasti. Tunnin kuluttua lisätään 500 mg tuoretta platinaoksidia ja reaktiota jatketaan samoissa olosuhteissa vielä 3 tuntia. Dioksaani poistetaan tyhjössä huoneenlämpötilassa ja jäännös otetaan 5 ml:aan kloroformia. Katalyytti poistetaan antamalla seoksen kulkea 15 g:n lävitse silikageeliä G, joka on täytetty sintrattuun lasisuppiloon Tuote eluoidaan 400 ml:11a kloroformia tyhjössä. Kloroformi haihdutetaan tyhjössä, jolloin saadaan 300 mg bentshydryyli-7-amino-7-metoksikefalosporanaattia keltaisena öljynä.

$6686 19

Esimerkki Η

Natrium-7-metoksi-7-(2-furyyliasetamido)kefalosporanaatti

Esimerkin 2D mukaan valmistettua bentshydryyli-7-metoksi-7-atsidokefalosporanaattia (1,00 g) hydrataan loo ml:ssa dioksaania 1 tuntia käyttäen 1 g Pt02, ja sen jälkeen 3 tuntia käyttäen toinen g PtOg. Liuotin poistetaan tyhjössä lämpötilassa alle 30°C. Jäännös otetaan kloroformiin ja suodatetaan kerrcteen läpi, jossa on noin 1 tuuma silikageeliä (ohutkerroskromatografia-aste), pestään kloroformilla, jolloin kokonaistilavuudeksi saadaan noin 500 ml. Pois-- tettaessa kloroformi tyhjössä saadaan bentshydryyli-7-metoksi-7- aminokefalosporanaatti.

Lisätään 40 ml metyleenikloridia ja sen jälkeen 0°C:ssa en-sinnä 0,7 ml 2-furyyliasetyylikloridia ja sitten 1 ml pyridiiniä.

Seh jälkeen kun on sekoitettu 25 minuuttia 0°C:ssa lisätään vettä ja sekoittamista jatketaan vielä muutama minuutti. Kerrokset eroi-tetaan, orgaaninen kerros pestään peräkkäin 1 %:lla vesipitoisella HgPO^cllä, vedellä ja kyllästetyllä natriumbikarbonaatin vesiliuoksella. Sen jälkeen kun metyleenikloridiliuos on kuivattu magnesium-sulfaatilla, suodatettu ja liuotin haihdutettu pois saadaan bents-hydryyli-7-metoksi-7-(2-furyyliasetamido)-kefalosporanaatti. Se puhdistetaan kromatografoimalla käyttäen 60 g neutraalia silikageeliä (Brinkmann*in 70-325 mesh ASTM) ja eluoidaan kloroformi/etyyliasetaa-tilla 4:1. Sen Rf on kolonnissa 0,69-0,45 ja TLCillä samassa järjestelmässä todetaan olevan 0,69-0,57, yksinkertainen täplä. Sen IR-spektrillä (CHCl^-liuos) on nauhat kohdissa 3,0^u (N-H), 5,61^u (^-laktaami), 5,76^u (esterit) ja 5,9^u (amidi). NMR CDCl^issa nauhat kohdissa 8,05 tau (3H, singletti, -COCHg), 6,65, 6,70 tau (2H, S-CH2“), 6,55 tau (3H, singletti, -OCH^), 6,32 tau (2H, sing-^ letti, furyyli-CH2~), 4,85 5,05, 5,15, 5,35 tau (2H, AB qt., J = 14 Hz, -CHjOAc), 4,97 tau (1H, singletti, Cg-H), 3,72 tau (2H, m, furyyli^-H), 3,09 tau (1H, singletti, -CHQ2), 2,7 tau (6H, m, fenyyli ja furyyliy^-H).

0,57 g tätä yhdistettä käsitellään 0°C:ssa 5 minuuttia 0,8 ml:11a anisolia ja 4,0 ml:11a trifluorietikkahappoa. TFA ja anisoli poistetaan alle 30°C tyhjössä ja lisätään 2 ml lisää anisolia ja haihdutetaan kuten edellä. . Jäännös otetaan muutamaan ml:aan vettä, joka sisältää 0,1 g NaCHOg, ja lyofilisoidaan jauheeksi, joka pestään eetterillä ja kuivataan, jolloin saadaan 0,45 g natrium-7-metoksi-7-(2-furyyliasetamido)kefalosporanaattia. Sen IR-spektrillä (CHCl^-liuos) S6686 20 on nauhat kohdissa 3,l^u (leveä, N-H), 5,67^,u (jfl-laktaami), 5,75^,u (esteri), 5,92^u (amidi) ja 5,18^ (COONa). Sen NMR-spektrillä D20:ssa on nauhat kohdissa 7,92 tau (3H, -COCH^), 6,60, 6,66 tau (2H, S-CH^-)» 6,97 tau (3H,-OCH3), 6,20 tau (2H, furyyli-CH2-), 5,38 tau (HDO), 5,13 tau (2H, CH20Ac), 9,88 tau (1H, Cg-H), 3,63 tau (2H, furyyli/3-H), 2,53 tau (1H, furyyli^-H). UV-spektrillä pH 7 puskurissa on Xmaks. 263 nm, E% = 191. Sen TLC:llä (silikageeli, asetoni-AcOH 9:1) on 0,68.

Esimerkki 5 A. Bentshydryyli-7-atsido-7-bromi-3-desasetoksikefalosporanaatti

Seosta, jossa on 7,57 g bentshydryyli-7-aminodesasetoksikefa-losporanaattia, 2,79 g natriumnitriittiä, 19,7 ml 2N rikkihappoa, 900 ml vettä ja 900 ml metyleenikloridia, sekoitetaan 1 tunti suljetussa jääkylmässä pullossa. Kerrokset erotetaan kylminä. Vesikerros pestään metyleenikloridilla ja yhdistetyt CH2Cl2-kerrokset kuivataan magnesium-sulfaatilla ja haihdutetaan vähennetyssä paineessa 30°C tilavuuteen noin 125 ml bentshydryyli-7-diatsodesasetoksikefalosporanaatin liuosta.

Sinä aikana kun edellä kuvattua redctioseosta sekoitetaan valmistetaan trietyyliammoniumatsidi ja bromiatsidi. Seos, jossa on 11,7 g natriumatsidia, 9,7 ml väkevää rikkihappoa laimennettuna tilavuuteen 90 ml vedellä ja 190 ml metyleenikloridia, sekoitetaan 30 minuuttia suljetussa järjestelmässä jäähauteella. Kerrokset erotetaan kylminä ja vesipitoinen jäännös pestään 10 ml :11a kylmää metyleenikloridia. CH2Cl2“ker-rokset yhdistetään, kuivataan magnesiumsulfaatilla samalla pitäen jäähauteella ja jaetaan kahteen yhtä suureen osaan. Toiseen lisätään 9,9 ml trietyyliamiinia, toiseen lisätään 9,93 g N-bromisukkinimidiä. Molempia liuoksia säilytetään jäähauteella käyttöön saakka.

7-diatso-yhdiste noin 125 ml:ssa metyleenikloridia 500 ml:n pyöröpohjaisessa pullossa, joka on suojattu kalsiumkloridiputkella ja sekoitettu magneettisesti, jäähdytetään kiinteä-C02/asetoni-hauteessa -90°C:seen (sisälämpötila). Haudelämpötila pidetään -90 - -50°C:ssa reaktion aikana. Trietyyliammoniumatsidiliuos lisätään yhdellä kertaa.

21 56686

Bromiatsidiliuos lisätään 5 minuutin aikana -30 - -25°C:ssa. Nämä poistetaan hauteelta ja annetaan tulla 0°C:seen 20 minuutin aikana.

10 g dinatriumvetyfosfaattia 300 ml:ssa vettä sekoitetaan reaktioseoksen kanssa ja kerrokset erotetaan. Metyleenikloridikerros kuivataan magnesiumsulfaatilla ja haihdutetaan, jolloin saadaan 10,3 g raakaa tuotetta, joka kromatografoidaan käyttäen 125 g silikageeliä ja eluoiden bentseenillä. Fraktiot otetaan talteen silloin kun keltainen väri saavuttaa kolonnin pohjan; fraktio 1 = 3,8 g; fraktio 2 - 1,3 g; kokonaissaalis bentshydryyli-7-atsido-7-bromi-3-desasetoksi= _ kefalosporänaattia on 5,1 g. Molemmat fraktiot kiteytyvät heti.

Bentshydryyli-7-atsido-7-bromi-3-desasetoksikefalosporanaatilla, sp. 122°C, on tunnusomaista IR, NMR ja alkuaineanalyysi. Laskettu ^ yhdisteelle ClgH17N403S; C, 51,97; H, 3,53; N, 11,54. Löydetty: C, 52,23; H, 3,59; N, 11,63.

B. Bentshydryyli-7-atsido-7-metoksi-3-desasetoksikefalospora-naatti

Valmistetaan liuos, jossa on 5,1 g (10,5 millimoolia) bentshyd-ryyli-7-atsido-7-bromi-3-desasetoksikefalosporanaattia 50 mlrssa metyleenikloridia ja 200 ml:ssa metanolia. Lisätään 0,844 ml (10,5 millimoolia) pyridiiniä ja 2,084 g hopeafluoriboraattia (10,8 mmoo-lia) 10 ml:ssa metanolia ja reaktioseosta sekoitetaan 22°C:ssa 16 1/2 tuntia. Seos suodatetaan ja suodos haihdutetaan vähennetyssä paineessa. Jäännös kromatografoidaan käyttäen 125 g silikageeliä ja eluoimal-la bentseenillä. Fraktio 1 otetaan talteen kun keltainen väri lähestyy kolonnin pohjaa. Fraktiot 2-9 yhdistetään ja sekoitetaan meta-nolin kanssa. Metoksiatsido kiteytyy, sp. 115-117°C, 3,156 g ja sille on tunnusomaista IR, NMR ja alkuaineanalyysi. Laskettu yhdisteelle C22H20N4°4S: C» 60»54» h» i*»62» n> 12,84. Löydetty: C, 60,42; H, ^ 4,36; N, 12,93.

C. Bentshydryyli-7-(D-e(-atsidofenyyliasetamido)-7-metoksi-3-desasetoksikefalosporanaatti

Seosta, jossa on 1,51 g bentshydryyli-7-atsido-7-metoksi-3-desasetoksikefalosporanaattia, 150 ml dioksaania ja 1,5 g platinaok-sidia, sekoitetaan vedyn alla 1 tunti. Lisätään toinen 1,5 g kata-lyttiä ja seos hydrataan vielä 1 tunti. Reaktioseos haihdutetaan vähennetyssä paineessa (5· 35°C). Jäännös otetaan kloroformiin ja johdetaan silikageeli-piimaan (1:1) lävitse 120 ml:ssa sintratussa suppilossa. Noin 500 ml eluaattia otetaan talteen. Suodos haihdutetaan ja prosessi poistetaan 60 ml:n sintratussa suppilossa.

56686 22

Suodos (noin 500 ml) haihdutetaan vähennetyssä paineessa ja jäännös kuivataan typellä, jolloin saadaan 2 g bentshydryyli-7-amino- 7-metoksidesasetoksikefalosporanaattia.

Bentshydryyli-7-amino-7-metoksidesasetoksikefalosporanaatti otetaan 50 ml:aan metyleenikloridia ja sekoitetaan magneettisesti jäähauteella. Liuokseen lisätään 1,63 g D^-atsidofenyyliasetyyli-kloridia. 3 minuutin kuluttua lisätään 1,M- ml pyridiiniä.

Liuosta sekoitetaan jäähauteella 25 minuuttia, kaadetaan 50 mlraan jäävettä ja kerrokset erotetaan. Metyleenikloridikerros pestään 40 ml:11a laimeata vesipitoista natriumbikarbonaattia ja 50 ml:11a vettä ja kuivataan yli yön jääkaapissa magnesiumsulfaatilla. Seos suodatetaan, haihdutetaan ja kuivataan, jolloin saadaan 2,0 g tuotetta. Tuote kromatografoidaan käyttäen 100 g silikageeliä ja eluoiden bentseenillä ja bentseeni/kloroformi-seoksilla. Fraktiot 16-20 (bentseeni/kloroformi 1:3) sisältää tuotteen bentshydryyli-7-(D-o(-atsidofenyyliasetamido)-7-metoksi-3-desasetoksikefalosporanaatin (834 mg), jolle on tunnusomaista IR ja NMR.

D. 7-(D-of-atsidofenyyliasetamido)-7-metoksi-3-desasetoksi= kefalosporaanihappo

Liuos, jossa on 708,4 mg bentshydryyli-7-(D-tJ^-atsidofenyyli= asetamido)-7-metoksi-3-desasetoksikefalosporanaattia 2 ml:ssa anisolia, jäähdytetään jäähauteella ja lisätään 8 ml trifluorietikkahappoa. Reaktioliuosta pidetään 0°C:ssa 10 minuuttia ajoittain sekoittaen.

Liuos haihdutetaan vähennetyssä paineessa ja huuhdotaan ja haihdutetaan kahdesti anisolin kanssa. Jäännös otetaan 30 ml:aan metyleenikloridia ja uutetaan kolmasti 5 ml:11a natriumbikarbonaatin kyllästettyä vesiliuosta. Yhdistetyt vesifaasit pestään kahdesti 5 ml:11a metyleenikloridia ja säädetään pH-arvoon 1,8 2,5 N HCl:llä ja sitten uutetaan nejästi 10 ml:11a etyyliasetaattia. Uutteet kuivataan magnesiumsulfaatilla ja haihdutetaan vähennetyssä paineessa ^ 45°C:ssa ja pannaan sen jälkeen suoraan pumppuun. Haluttu tuote 7-(D-flf-atsidofenyyliasetamido)-7-metoksi-3-desasetoksikefalosporaanihapolle (487,4 mg) on tunnusomaista IR ja NMR.

Esimerkki 6 A. Bent shydryy1i-7-(2-karboks i-2-fenyy1iasetamido)-7-metoksi= kefalosporanaatti 23 S6686

Liuokseen, jossa on 0,5 g esimerkin 2 E mukaan valmistettua bentshydryyli-7-amino-7-metoksikefalosporanaattia 15 ml:ssa mety-leenikloridia, lisätään monobentshydryyli-fenyylimalonyylikloridia (valmistus kuvattu myöhemmin) ja sen jälkeen 0,5 ml pyridiiniä. Saatua reaktioseosta sekoitetaan 30 minuuttia ja sitten lisätään 12 ml vettä. Vesipitoista seosta sekoitetaan 5 minuuttia ja kerrokset erotetaan. Metyleenikloridiosa pestään 2,5NHCl:llä, vedellä, kahdesti natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja kyllästetyllä natrium= " kloridilla. Liuotinkerros kuivataan sitten magnesiumsulfaatilla, suodatetaan ja haihdutetaan alle 25°C vähennetyssä paineessa, jolloin saadaan 0,695 g bentshydryyli-7-(2-karboksi-2-fenyyliasetamido)-7-— netoksikefalosporanaattia. Tämä kromatografoidaan käyttäen 50 g neutraalia silikageeliä ja eluoidaan kloroformilla, jolloin saadaan 400 mg tuotetta lasimaisena massana. IR: 3,03^u (NH), 5,62^u (/*> -laktaami), 5,78^u (esteri), 5,88^u (amidi). NMR: (CClj^): 8,18 tau (3H, singletti, asetyyli), 7,0 tau (2H, S-CHj-), 6,80, 6,73 tau (3H, kaksois, diastereometrinen OCHA's), 5,2 tau (4H, moninkertainen, -CH20-, Cg protoni, malonyyli CH), 3,17 tau (2H, CHQ2)» 2,8 tau (2OH, aromaattinen), 2,0 tau (1H, amidi NH).

Edellä käytetty monobentshydryyli-fenyylimalonyylikloridi valmistetaan seuraavasti: liuokseen, jossa on 19,25 g fenyylima- lonihappoa 165 ml:ssa etyyliasetaattia, lisätään liuos, jossa on 25 g difenyylidiatsometaania 100 ml:ssa etyyliasetaattia 15 minuutin aikana 15-20°C:ssa. Liuosta sekoitetaan vielä 10 minuuttia ja lisätään 500 ml vettä ja 15°C:ssa lisätään riittävästi 50 %:sta natriums hydroksidia reaktioseoksen tekemiseksi alkaaliseksi. Seoksen liuotinkerros erotetaan ja uutetaan kahdesti natriumbikarbonaatin vesi-^ liuoksella. Yhdistetyt vesiliuokset pestään kahdesti etyyliasetaa tilla, jäähdytetään, tehdään happameksi kloorivetyhapolla ja uutetaan kolmasti etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattiuutteet pestään kahdesti vedellä, kerran natriumkloridin kyllästetyllä liuoksella ja sitten kuivataan magnesiumsulfaatilla. Liuotin haihdutetaan sitten pois lämpötilassa alle 25°C vähennetyssä 24 66686 paineessa öljyksi, joka kiteytetään 200 mlrsta 1:3 eetteriä petrolieetteristä, jolloin saadaan 20,9 g monobentshydryyli-fenyylimalonaattia, sp. 119»5~122°C.

Lietteeseen, jossa on 0,7 6 tätä monoesteriä 5 ml:ssa vettä, lisätään 2,10 ml 0,962 N natriumhydroksidia. Liuosta sekoitetaan 3 minuuttia, suodatetaan ja jäähdy tyskuivat aan monoesterinatriumsuolan saamiseksi. Tähän natriumsuolaan lisätään 5 ml bentseeniä ja lietettä käsitellään 0°C:ssa 1,5 ml:11a oksalyylikloridia.

10 minuutin kuluttua 0°C:ssa ja 5 minuutin kuluttua 25°C:ssa seos haihdutetaan lämpötilassa alle 25°C vähennetyssä paineessa ja jäännös väkevöidään kahdesti hiili- ” tetrakloridista. Kuivissa olosuhteissa suodatetaan tuote 5 ml:ssa hiilitetrakloridia ja väkevöidään monobentshydryyli-fenyylimalonyylikloridin saamiseksi.

B. Dinatrium-7~(2-karboksi-2-fenyyliasetamido)-7~metoksikefalosporanaatti 1+00 mg bentshydryyli-7-(2-karboksi-2-fenyyliasetaaido)-7-metoksikefalosp0-ranaattia käsitellään 0°C:ssa 2 minuuttia 1,2 ml:11a anisolia ja 6 ml:11a trifluo-rietikVahappoa. Saatu reaktiotuote jäähdytetään, haihdutetaan alhaisessa lämpötilassa ja suurtyhjössä, laimennetaan anisolilla ja haihdutetaan uudelleen 25°C:ssa. Jäännös käsittäen vapaan hapon otetaan 20 ml:aan 1 molaarista natriumbikarbonaat-tiliuosta, pestään neljästi pienellä määrällä metyleenikloridia, tehdään happameksi HCl:llä, kyllästetään NaCl:llä ja uutetaan neljästi 10 ml:lla etyyliasetaattia. Liuotinuutteet pestään kahdesti kyllästetyllä natriumkloridilla, kuivataan magnesiumsulfaatilla, suodatetaan ja haihdutetaan vähennetyssä paineessa, jolloin saadaan 218 mg 7-(2-karboksi-2-fenyyliasetamido)-7~metoksikefalosporaanihappoa keltaisena siirappina. Tämä liuotetaan 3 ml:aan vettä, joka sisältää 79 mg natriumbikarbonaattia ja jäähdytyskuivataan. Jäähdytyskuivattu liuos liuotetaan 5 ml:aan vettä, suodatetaan ja lyofilisoidaan uudelleen, jolloin saadaan 182 mg dinatrium- 7-(2-karboksi-2-fenyyliasetamido)-7~metoksikefalosporanaattia. Siten saatu tuote yhdistetään 550 mg:n kanssa toisesta käsittelystä saatua samaa tuotetta ja liuotetaan 10 ml:aan vettä. Saatu liuos suodatetaan ja lyofilisoidaan, jolloin saadaan 6U7 mg tuotetta. UV (pH 7): /(maks . 265 nm., E- 6300. NMR (D^O): 7,90 tau (3H, singletti, asetyyli), 6,70, 6,5^ tau (2H, 2 AB kvartetit, diastereomeerinen S-CH^-), 6,50, 6,38 tau (3H, kaksois, diastereomeerinen OCHA's), 5,22 tau (2H, leveä s, -CHgO), 1* ,85 tau (lii, singletti, Cg protoni), 2,55 tau (5H, singletti, aromaattinen). Suuri HOD-piikki peittää malonyyliprotoni-adsorption. Elektroforeesilla pH-arvossa 7 tuote liikkuu kuten di ani on i, yksinkertainen täplä. 10 iS:sen vesiliuoksen pH on 8,8. Laskettu yhdisteelle C20Hi8N2S0LIia2 + Na2C°3 +

NaHC03 + H20: C, 38,59; H, 3,09; N, U.21; 3, 1*,0l; tuhka (Ha:na) 15,19-Löydetty: C, 38,99; H, 3,10; N, *4,17; S, 91; tuhka (Na:na) 15,3.

25 66686

Esimerkki 7 A. Bentshydryyli-7"&tsido-7-bentsyylioksikefalosporanaatti

Seosta, jossa on 2,¾ o bentshydryyli-7-atsido-7-bromikefalosporanaattia, joka on valmistettu esimerkissä 2C kuvatulla tavalla, ja 1,5 g hopeatetrafluori-boraattia 10 ml:ssa bentsyylialkoholia, sekoitetaan huoneenlämpötilassa 3 tuntia. Seos laimennetaan 300 ml:11a eetteriä ja hopeasuolat poistetaan suodattamalla.

Suodos pestään vesipitoisella natriumbikarbonaatilla, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan vähennetyssä paineessa. Ylimäärä bentsyylialkoholia poistetaan suurtyhjöpumpussa samalla magneettisesti sekoittaen 18 tunnin aikana ja jäännös kromatografoidaan silikageelillä. Eluoitaessa heksaanilla ja sen jälkeen kasvavilla väkevyyksillä metyleenikloridia heksaanissa ja haihduttamalla tuotetta sisältävät fraktiot saadaan bentshydryyli-7-atsido-7_bentsyylioksikefalosporanaattia.

B. Bentshydryyli-7-bentsyylioksi-7-fenyyliasetamidokefalosporanaatti

Liuos, jossa on 1,2 g bentshydryyli-7-atsido-7-bentsyylioksikefalospora- naattia 25 ml:ssa kuivaa etyyliasetaattia, hydrataan kun läsnä on 1,2 g 10 >i:sta palladiumia hiilellä, 18 tuntia huoneenlämpötilassa. Katalyytti poistetaan suodattamalla .ia lisätään 1,0 g fenyylietikkahappoanhydridiä suodatettuun liuokseen ja seosta pidetään 1+5 minuuttia huoneenlämpötilassa. Saatu reaktioseos laimennetaan 200 ml:11a eetteriä, lisätään 200 ml pH 7 fosfaattipuskuria ja seosta sekoitetaan voimakkaasti 1/2 tuntia. Eetterikerros eroitetaan, pestään vedellä, kuivataan ja haihdutetaan vähennetyssä paineessa. Jäännös kromatografoidaan käyttäen 50 g sili-kageeliä ja eluoiden 5 #:lla etyyliasetaatilla metyleenikloridissa, jolloin haihduttamalla saadaan bentshydryyli-7“bentsyylioksi-7-fenyyliasetamic'.okefalosporanaatti.

C. Natrium-7_bentsyylioksi-7-fenyyliasetamidokefalosporanaatti

Liuosta, jossa on 0,5 g bentshydryyli-7-bentsyylioksi-7-fenyyliasetamido- kefalosporanaattia 3,5 ml:ssa anisolia, käsitellään 10 ml:lla trifluorietikkahappoa ^ huoneenlämpötilassa 10 minuuttia. Trifluorietikkahappoanisoli poistetaan vähennetyssä paineessa lämpötilassa alle U0°C ja jäännös otetaan 25 ml:aan kloroformia ja käsitellään 20 ml:11a vettä, joka sisältää 0,15 g natriumbikarbonaattia. Seosta sekoitetaan 1/2 tuntia huoneen lämpötilassa ja orgaaninen faasi erotetaan ja pestään vedellä. Yhdistetyt vesifaasit pestään kahdesti metyleenikloridilla ja vesi-kerros ja pesunesteet yhdistetään ja lyofilisoidaan natrium-7~bentsyylioksi-7-fenyyliasetamidokefalosporanaatin saamiseksi.

36 56686

Esimerkki 8 A. Bentshydryyli-7-atsido-7-etoksikefalosporanaatti Liuokseen, jossa on 217 mg esimerkin 2 C mukaan valmistettua bentshydryyli-7-atsido-7-bromikefalosporanaattia 15 ml:ssa absoluuttista etanolia, lisätään 31,6 ml pyridiiniä ja 78 mg hopeafluoribo-ranaattia ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 2 tuntia suojattuna valolta ja kosteudelta. Seos haihdutetaan kuiviin tyhjössä ja jäännös kromatografoidaan käyttäen 20 g silikageeliä. Eluoitaessa - kloroformilla saadaan 121 mg bentshydryyli-7-atsido-7-etoksikefalospo-ranaattia, sp. 1*4*4,5-1*45°C.

B. Bentshydryyli-7-etoksi-7-(tienyyliasetamido)kefalosporanaatti _ Liuosta, jossa on 320 mg bentshydryyli-7-atsido-7-etoksikefa- losporanaattia 30 ml:ssa dioksaania, sekoitetaan 320 mg:n kanssa pla-tinaoksidia huoneenlämpötilassa vetykaasussa 1 tunti. Lisätään vielä 320 mg katalyyttiä ja hydrausta jatketaan 5 tuntia. Seos haihdutetaan tyhjössä kuiviin ja jäännös otetaan kloroformiin ja suodatetaan sili-kageelin 2 tuuman paksun pylvään lävitse ja haihdutetaan, jolloin jä-lelle jää bentshydryyli-7-amino-7-etoksikefalosporanaatti keltaisena öljynä. Tämä liuotetaan metyleenikloridiin ja jäähdytettyyn liuokseen lisätään samalla sekoittaen 0,2 ml tienyyliasetyylikloridia ja 0,2 ml kuivaa pyridiiniä. Seosta sekoitetaan 15 minuuttia 0°C:ssa, sitten kaadetaan jäähän ja metyleenikloridikerros eroitetaan, pestään vesipitoisella natriumbikarbonaattiliuoksella, kuivataan ja haihdutetaan.

Jäännös kromatografoidaan käyttäen 20 g silikageeliä. Eluoitaessa kloroformilla saadaan 120 mg bentshydryyli-7-etoksi-7-(tienyyliaset= amido)kefalosporanaattia. TLC 2 % MeOH:ssa Rf 0,73. IR: 5,65^u (laktaami); 5,85, 5,95 (esteri); 6,0 (amidi). NMR: 8,82 tau (CHjCHg), 8,0 tau (singletti, 0

If OCCHg), 6,6*4-6,67 tau (kaksois, SCH^), 6,1*4 tau (singletti, tienyyli Cl·^)» *4,96 tau (singletti, 6H).

$ 77 66686 C. Natrium-7-etoksi-7-(tienyyliasetamido)kefalosporanaatti

Liuos, jossa on 0,9 g bentshydryyli-7-etoksi-7-tienyyliaset= amidokefalosporanaattia 6,35 ml:ssa anisolia ja 17,1 ml:ssa trifluo-rietikkahappoa, pidetään huoneenlämpötilassa 5 minuuttia ja sitten haihdutetaan suurtyhjössä. Jäännös sekoitetaan veden ja metyleeni= kloridin kanssa ja pH säädetään arvoon 5,8 lisäämällä natriumbikarbo-naattiliuosta. Vesikerros erotetaan ja tehdään happameksi pH-arvoon 2 ja kumimainen sakka suodatetaan pois. Se liuotetaan butyyliase-— taattiin, suodatetaan ja suodosta sekoitetaan veden kanssa samalla lisäten natriumbikarbonaattiliuosta pH-arvoon 6,5 saakka. Vesipitoinen uute haihdutetaan ja jäähdytyskuivataan, jolloin jälelle jää 0,2 ^ g natrium-7-etoksi-7-(tienyyliasetamido)-kefalosporanaattia. Pyöreä- paperikromatografia butanoli/etanoli/vedessä (M:1:5) antaa täplän, jonka Rf on 0,55. Analyysi: laskettu: C, *46,74; Ή, 4,14; N, 6,06. Löydetty: C, 47,73; H, 4,09; N, 5,73.

Esimerkki 9

Natrium-7-etoksikarbonyyliamino-7-(2-tienyyliasetamido)- kefalosporanaattia A. Bentshydryyli-7-atsido-7-(etoksikarbonyyliamino)-kefalospo-ranaatti 3,9 g esimerkin 2 C mukaan valmistettua bentshydryyli-7-atsido- 7-bromikefalosporanaattia lisätään 36 g:aan etyylikarbamaattia, jota on ylläpidetty 65°C:ssa. Saatuun seokseen lisätään annoksittain sulatteena 3,6 g hopeatetrafluoriboraattia liuotettuna 18 g:aan etyyli= karbamaattia ja reaktioseosta pidetään 67-70°C:ssa 5 minuuttia. Sitten seos kaadetaan eetteriin samalla sekoittaen ja saatu liete suodatetaan Celiten lävitse hopeabromidin poistamiseksi. Eetteri uutetaan peräkkäin 100 ml:11a vettä, 100 ml:11a natriumbikarbonaatin kyllästettyä vesiliuosta ja kahdella 100 min erällä vettä. Uutettu eette-riliuos kuivataan natriumsulfaatilla ja sitten haihdutetaan vähennetys sä paineessa. Saatu jäännös sekoitetaan kolmasti pienen määrän vettä ja sen jälkeen liuotetaan kloroformiin. Kloroformiliuos kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan kuiviin, jolloin saadaan 2,1 g bents-hydryyli-7-atsido-7-(etoksikarbonyyliamino)kefalosporanaattia.

$6686 28 B. Bentshydryyli-7-amino-7-(etoksikarbonyyliamino)-kefalosporanaatti 1,0 g bentshydryyli-7-atsido-7-(etoksikarbonyyliamino)-kefalosporanaattia liuotetaan 100 ml:aan dioksaania. Lisätään 1,0 g platinaoksidia ja reaktioseosta sekoitetaan typen alla ilmakehän paineessa 1 tunti. Lisätään vielä 1,0 g platinaok- ' sidia ja reaktioseos pannaan uudelleen vedyn alle ja sekoitetaan 3 tuntia siihen saakka kunnes atsidi on täydellisesti reagoinut määrättynä infrapuna-analyysin avulla. Liuotin poistetaan vähennetyssä paineessa ja jäännös otetaan 50 ml:aan kloroformia ja suodatetaan silikageelin G lävitse kloroformissa 60 ml:n sintra-tussa lasisuppilossa. Saatu aine eluoidaan kloroformilla siihen saakka kunnes 200 ml kloroformia on otettu talteen. Sen jälkeen kloroformi poistetaan vähennetys- -sä paineessa, jolloin saadaan bentshydryyli-7-amino-7-(etoksikarbonyyliamino)-· kefalosporanaatti (0,6 g).

C. Bentshydryyli-7_etoksikarbonyyliamino-7_(2-tienyyliasetamido)kefalospora-naatti 0,6 g vaiheessa B saatua bentshydryyli-7-aniino-7-(etoksikarbonyyliamino)-kefalosporanaattia otetaan 25 mlraan metyleenikloridia ja jäähdytetään 0°C:seen.

Lisätään pisaroittain 30 sekunnin aikana 0,6 ml (0,038 moolia) 2-tienyyliase-tyylikloridia ja sen jälkeen 0,6 ml (0,01 moolia) pyridiiniä 60 sekuntia myöhemmin. Reaktioseosta sekoitetaan 0°C:ssa 15 minuuttia ja kaadetaan murskattuun jäähän.

Seosta sekoitetaan ja orgaaninen kerros erotetaan ja pestään kerran 20 ml:lla vettä, kerran 20 ml:lla 5 /»:sta natriumbikarbonaattia ja uudelleen 20 ml:lla vettä. Metyleenikloridiseos kuivataan sen jälkeen ja haihdutetaan kuiviin, jolloin saadaan 1,1+2 g raakaa bentshydryyli-7-etoksikarbonyyliamino-7_(2-tienyyliasetamido)-kefalosporanaattia. Tämä aine pannaan kolonniin, jossa on 60 g silikageeliä bent-seenissä, ja kolonni eluoidaan bentseenillä, jolloin otetaan 100 ml:n fraktioita ja sen jälkeen 300 ml metyleenikloridi/bentseeniä (1:1) kolmena fraktiona ja 500 ml metyleenikloridia viitenä fraktiona. Tuote poistetaan kolonnista eluoimalla klorofor-. millä (1+00 ml) neljänä fraktiona, jolloin saadaan 0,55 G bentshydryyli-7-etoksi-karbonyyliamino-7-(2-tienyyliasetamido)-kefalosporanaattia. Tämä aine otetaan 25 ml:aan metyleenikloridia ja sekoitetaan huoneenlämpötilassa 20 ml:n kanssa liuosta, jossa on 0,120 g natriumbikarbonaattia vedessä, 0,5 tuntia. Saadut kerrokset erotetaan sitten ja orgaaninen kerros pestään vedellä, kuivataan ja haihdutetaan kuiviin, jolloin saadaan 0,1« g bentshydryyli~7-etoksikarbonyyliamino-7-(2-tienyyli-asetamido)kefalosporanaattia.

D. Natrium-7~etoksikarbonyyliamino-7~(2-tienyyliasetamido)-kefalosporanaatti 0,U g benushydryyli-7-etoksikarbonyyliamino-7-(2-tienyyliasetrjnido)kefalo:;po- ranaattia liuotetaan 2,5 nl:aan anisolia ja käsitellään 10 ml:lla trifluorietikka-happoa huoneenlämpötilassa 10 minuut.i ia. Trifluorietikkahappo ja anisoli poistetaan 29 56666 vähennetyssä paineessa samalla kun lämpötilaa ylläpidetään alle UO°C ja jäännös otetaan 25 ml:aan kloroformia ja käsitellään 20 ml:lla vettä, joka sisältää 0,120 g natriumbikarbonaattia. Seosta sekoitetaan 0,5 tuntia huoneenlämpötilassa ja orgaaninen faasi erotetaan ja pestään vedellä. Yhdistetty vesipitoinen faasi pestään sitten kahdesti metyleenikloridilla ja lyofilisoidaan, jolloin saadaan 0,32 g natrium-7-etoksikarbonyyliamino-7-(2-tienyyliasetamido)-kefalosporanaattia ruskehtavana aineena.

Claims (1)

1. 30 56696 Patenttivaatimus: Menetelmä 7-aminokefalosporaanihappojohdannaisten valmistamiseksi, joilla on antibioottinen vaikutus ja joilla on kaava: R1 R’-NH--f (I) S- \j^CH2A COOR8 jossa R' on asetyyli, 2-tienyyliasetyyli, 2-furyyliasetyyli, fenyyli-asetyyli, oC-atsidofenyyliasetyyli tai (fenyyli)-o^-karboksiasetyyli, R* on alempi alkoksi, erikoisesti metoksi, bentsyylioksi tai alempi- p alkoksi-karbonyyliamino, A on vety tai asetyylioksi, ja R on vety tai natrium tai kalium, tunnettu siitä, että käsitellään 7-diatsokefalosporanaattia, jolla on kaava: N2 =|-("N ^-y4-CH2A I O I C00Rö 8* 8 jossa A merkitsee samaa kuin edellä ja R merkitsee samaa kuin R tai esteritähdettä, erikoisesti bentshydryyliä, halogeeniatsidilla ammoniumatsidin läsnäollessa yhdisteen muodostamiseksi, jolla on kaava: χ S N3--f N J'- 8 ’ C00Rö 8 1 jossa X on halogeeni ja R ja A merkitsevät samaa kuin edellä, sekä että saatua atsidi-välituotetta käsitellään alemmalla alkanolilla, 3i S6666 benteyylialkoholilla tai alempi-alkyyli-karbamaatilla välituotteen muodostamiseksi, jolla on kaava: R1 2 3 4 5 N3--^ ^CH2A COOR8' jossa R^“, R8 ja A merkitsevät samaa kuin edellä, minkä jälkeen tämän välituotteen N3-ryhmä pelkistetään aminoryhmäksi vastaavan amiinin saamiseksi ja aminoryhmä asyloidaan kaavan R'-0H mukaisella hapolla tai sen reaktiokykyisellä johdannaisella, jossa kaavassa Rf merkitsee samaa kuin edellä, yhdisteen saamiseksi, jolla on kaava: R1 R’-NH--[ ^-NN(— CH2A COOR8' 8' 2 jossa R , R', R ja A merkitsevät samaa kuin edellä, 3 ja että mikäli saatu tuote on esteri se lohkaistaan vastaavaksi va 4 paaksi hapoksi tai suolaksi ja haluttaessa suola muutetaan vastaa 5 vaksi vapaaksi hapoksi tai vapaa happo muutetaan vastaavaksi suolaksi. 32 *>6686 Förfarande för fraraställning av 7-aminocefalosporansyraderivat med antibiotisk verkan med formeln R1 R'-NH--f (I, '\J—'CH2A COOR1 väri R' är acetyl, 2-tienylacetyl, 2-furylacetyl, fenylacetyl,^-azido-fenyläcetyl eller (fenyl)-^-karboxiacetyl, R1 är lägre alkoxi, speciellt metoxi, bensyloxi eller lägre-alkoxi-karbonylamino, A är väte eller O acetyloxi, och R är väte eller natrium eller kalium, k ä n n e -t e c k n a t därav, att 7-diazocefalosporanatet med formeln n_/S\ COOR1' 81 8 väri A har ovannämnda betydelse och R betecknar det samma som R eller betecknar en esterrest, speciellt benshydryl, behandlas med halogen-azid i närvaro av ammoniumazid för bildande av en förening med formeln -Us /-CH2A Q 1 COOR0 ' väri X är halogen och R och A har ovannämnda betydelse, och att den erhällna azid-mellanprodukten behandlas med en lägre alkanol, bensylalkohol eller lägre-alkyl-karbamat för bildande av en mellan-