FI57953C - Foerfarande foer framstaellning av 7-aminocefalosporansyraderivat med antibiotisk verkan - Google Patents

Description

r_, .... KUULUTUSJULKAISU

jÄfifc ^ (11) utläggningsskiuft 5 7 9 5 3 c Patentti isyör.nc Ity iO 11 1900

Patent mei-Jelafc V<“"v ^ (51) K».ik?/int.a3 C 07 D 501/57* 501/0*1· SUO M I — Fl N LAN D (21) P«*int*lh«kiimi· — P*t«ncweimln* 772^27 (22) H*kwnltpUvi — AMOkitlngriag 12.08.77 (23) AlkupUvi—GiMghvtsdaf 15.06.71 (41) Tullut lutklMlul — Blhrlt offentllg 12.08 77 PMinttI· J« rekisteri hallitus NShttvSksi^ |. kmL|<illulfun pvm.-

Patent· och ragistarstyralsan ' Anastan mJtfd och utukrtfuo public·»* 31.07.80 " (32)(33)(31) hnri««jr «tuoHc·»»—Beglr* priority 16.06.70 09-07.70, 30.09.70, 10.12.70, 27.01.71, 27.01.71, 27.01.71, 08.02.71, 11.02.71, 11.02.71, 26.02.71, 30.011.71, 30.0U.71, 30.0U.71, 30.0U.71, 30.0U.71, " 30.0U.71. 30.0U.71, 30.0U.71, 30.0U.71, 30.0U.71, 30.0U.71 Englanti-England(GB) 29158/70, 33U15/70, U6556/70, 58731/70, 3296/71, 3297/71, 3298/71, U179/71, UU79/71, UU80/71, 5588/71, 29158/70, 33U15/70, U6556/70, 58731/70, 3296/71, 3297/71, 3298/71, U179/71, UU79/71, UU80/71, 5588/71 (71) Merck & Co., Inc., Rahway, New Jersey, USA(US) (72) Burton Grant Christensen, Scotch Plains, New Jersey, Meyer Sletzinger,

North Plainfield, New Jersey, Sandor ICarady, Elizabeth, New Jersey,

Lovji Dadi Cama, Edison, New Jersey, USA(US) (7U) Oy Kolster Ab (5U) Menetelmä 7-aminokefalosporaanihappojohdannaisten valmistamiseksi, joilla on antibioottinen vaikutus - Förfarande för framställning av 7-aminocefalosporan-syraderivat med antibiotisk verkan (62) Jakamalla erotettu hakemuksesta 1675/71 (patentti 56686) -' Avdelad frän ansökan 1675/71 (patent 56686) Tämä keksintö koskee menetelmää uusien antibioottien 7-ami-nokefalosporaanihappojohdannaisten valmistamiseksi, joissa on substituentti 7-asemassa.

Penisilliinin keksiminen, jonka todettiin olevan tärkeän ja tehokkaan antibiootin, kiihdytti suurta kiinnostusta tällä alalla.

Sen jälkeen löydettiin erilaisia muita antibiootteja, kuten streptomysiini, tetrasykliinit, novobiosiini ja sen kaltaiset, jotka suuresti lisäsivät lääkäreiden lääkintämahdollisuuksia erilaisten patogeenien aiheuttamien infektioiden hoitamista varten. Onnettomuudeksi näiden antibioottien käyttö on aikaansaanut patogeenien kantoja, jotka kestävät näitä tunnettuja antibiootteja. Lisäksi tunnetuilla antibiooteilla on se haitta, että ne ovat tehokkaita ainoastaan mikro-organismien tiettyjä lajeja vastaan ja eivät ole tehokkaita patogeenien laajaa aluetta vastaan. Näin ollen muiden antibioottien etsiminen on jatkunut.

2 57953

Keksinnön mukaisesti valmistetut uudet kefalosporiinit ovat yhdisteitä, joissa on Δ -kefami-runko, nimittäin dehydrotiatsuni-rengas yhteenliittyneenä ^}-laktaamin kanssa, joka sisältää substitu-entin 7-asemassa. Näillä uusilla kefalosporiineilla, joita voidaan esittää rakennekaavalla: 9CH3 R'-NH —-f^SNSj (I)

^-KyJ—CH2A

COOR8 jossa R' on 2-tienyyliasetyyli, 2-furyyliasetyyli, fenyyliasetyyli, cX-atsidofenyyliasetyyli tai fenyylitioasetyyli, A on vety tai karbamoyylioksi ja R on vety tai natrium tai kalium, on arvokkaita antibioottisia ominaisuuksia.

Kefalosporiini-yhdisteiden nimistön mukaisesti yhdistettä, joka saadaan hydrolysoimalla kefalosporiini C, jota voidaan esittää rakennekaavalla

Vn- -\J-CH2OCOCH3

COOH

kutsutaan 7-aminokefalosporaanihapoksi tai 7-ACA.

Tässä käytetty sanonta "dekefalosporaanihappo" kuvaa tiettyjä tuotteita, jotka edustavat emäksistä heterosykldstä runkoa, jolla on rakennekaava

rYM

COOH

3 57953 .

Siten yhdistettä, jolla on kaava

h2n—-/ 'N

o^*-N\^CH3

COOH

kutsutaan 3-metyyli-7aminodekefalosporaanihapoksi käytettäessä tätä - nimistön järjestelmää.

Keksinnön mukaisia kefalosporiiniyhdisteitä nimitetään myös sopivasti "kefaami"-yhdisteiksi, jotka sisältävät emäksisen yhteenliit-„ tyneen rengas ^-laktaami-tiatsiini-rakenteen

>—>kJ

o joka on tunnettu nimellä kefamiini. Siten kefalosporiiniyhdisteitä kutsutaan nimellä "kefeemi" viitaten perusrakenteeseen, jossa on yksinkertainen olefiini-sidos. Esim. tässä nimistöjärjestelmässä kefalosporiinia C, jolla on rakennekaava / S H .s CH(CH„ )«-C-N —-f ^

\ 2 3 I

NH2 y-N CH2OCOCH3 0

COOH

kutsutaan 7-(5'-aminoadipamido)-3-asetoksimetyyli-3-kefeemi-4-karbonihapoksi.

Keksinnön mukaisia uusia kefalosporiineja voidaan käyttää vapaana happona, suolana, kuten alkalimetalli-, maa-alkalimetalli- tai ammoniumsuoloina, esim. natrium-, kalsium-, trietyyliammonium-, prokaiini- ja senkaltaisena suoloina.

Kaavan I mukaiset uudet kefalosporiinit ovat arvokkaita antibiootteja erilaisia gram-posi iivisia ja gram-negatiivisia bekteereja 57953 4 vastaan. Vaikkakin yleensä niiden biologiset spektrit ovat samankaltaisia kuin tunnetut kefalosporiini-spektrit, on näillä uusilla kefalosporiineilla tiettyjä uusia ja odottamattomia ominaisuuksia. Siten ne yleensä ovat tehokkaita useita mikro-organismeja vastaan, jotka ovat vastustuskykyisiä tunnettuja kefalosporiineja kuten kefaloridiinia ja kefalotiinia vastaan ja jotka ovat vastustuskykyisiä ^9-laktamaasia vastaan, jonka muodostaa kefalosporiinin suhteen vastustuskykyiset patogeenisi, kuten E. coli ja A. cloacae, kliiniset eristeet. Myös ne ovat yleensä tehokkaampia Proteus-kantoja kuten mirabilis vastaan ja ne ovat tehokkaita sellaisia Proteus morganii kantoja vastaan, jotka ovat vastustuskykyisiä substituoimattomia kefalosporiineja vastaan. Ne ovat myös käyttökelpoisia erotettaessa mikro-organismeja jälelle jääneistä mahdollisista mikro-organismeista farmaseuttisista, lääkinnällisistä ja hammaslääkinnällisistä välineistä ja ne ovat käyttökelpoisia bakteereja tappavina aineina teollisuuskäytöissä, esim vesipohjaisissa maaleissa ja paperitehtaiden 0-vedes-sä haitallisten bakteerien kasvun estämiseksi.

Siten 7-metoksikefalosporiinit, jotka on valmistettu keksinnön mukaisesti, ovat yleensä tehokkaampia kuin 7-(D-5'-amino-5'-karboksi= valeramido)-7-metoksi-kefalosporiinit erilaisia gram-negatiivisia organismeja vastaan ja niillä on suurempi vaikutus gram-positiivisia organismeja vastaan. Esim. nämä 7-metoksikefalosporiinit ovat tehokkaita sellaisia gram-positiivisia patogeenejä kuin Staphylococcus aureus vastaan sellaisella pienimmillä estoväkevyydellä (MIC), joka on niin pieni kuin noin 1,5 mcg/ml, Streptococcus pyogenes vastaan estoväkevyydellä noin 0,7 mcg/ml ja Diplococcus pneumoniae vastaan estoväkevyydellä noin 0,7 mcg/ml; ja gram negatiivisia organismeja kuten Aerobacter aerogenes vastaan estoväkevyydellä noin 3 mcg/ml, Proteus vulgaris vastaan estoväkevyydellä noin 1,5 mcg/ml ja Proteus morganii vastaan estoväkevyydellä noin 6 mcg/ml. Edellä kuvatuissa esimerkeissä mainittujen spesifisten tuotteiden aktiviteeteista voidaan mainita seuraavat: 3-karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-7-fenyyli= asetamido-3-kefeemi-4-karbonihappo, S. pyogenes MIC 1,56 mcg/ml ja P. vulgaris MIC 1,56 mcg/ml; 3-karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-7-(2-tienyyliasetamido)-3-kefeemi-4-karbonihappo, S. pyogenes MIC 0,78 mcg/ml ja P. morganii MIC 12,5 mcg/ml; 3-karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-7-(2-furyyliasetamido)-3-kefeemi-4-karbonihappo, S. aureus MIC 6,25 mcg/ml ja P. vulgaris MIC 1,56 mcg/ml.

5 57953

Seuraavassa taulukossa I on esitetty muutamien keksinnön mukaisesti valmistettujen yhdisteiden entsymaattinen hajoaminen verrattuna 3 tunnettuun yhdisteeseen kefamysiiniin C (SF patentti 45990) , kefalotiiniin ja kafaloridiiniin. Taulukossa IX on esitetty näiden samojen yhdisteiden in vivo aktiviteetti.

Tutkitut yhdisteet r1 R ' -N --S ^

/-Nv^-CH2-A

o I

C00H

Yhdiste R 1 R1 Λ 1 2-tienyyliasetyyli 0CH3 karbamoyylioksi 2 2-furyylia8etyyli 0CH3 karbamoyylioksi 3 fenyyliasetyyli 0CH3 karbamoyylioksi

Kefamysiini C aminoadipoyyli 0CH3 karbamoyylioksi

Kefalotiini tienyyliasetyyli H asetyylioksi

Kefaloridiini tienyyliasetyyli H pyridinium 57953 6

Taulukko I

Kefalosporiini-analogien entsymaattinen hajoaminen

Inaktivoitumis-% *

Yhdiste Escherichia coli Aerobacter cloacae entsyymi entsyymi 1 0 o 2 16 16 3 20 56

Kefamysiini C 0 71

Kefalotiini >95 74

Kefaloridiini >95 >95 x

Liuosta 250 ^lg/ml pidetty 37 C:ssa 3 tuntia.

Kuten taulukon I arvoista ilmenee ovat keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet 1, 2, 3 huomattavasti vastustuskykyisempiä entsymaattista hajoamista vastaan kuin vertailuna käytetyt tunnetut yhdisteet.

Taulukko XI

Kefalosporiini-analogien in vivo aktiviteetti ED50 (/ug x 2 , s.c.)

Yhdiste Staph, aureus E. coli Proteus morganii 1 250 530 151 2 151 414 414 3 111 1,000 604

Kefamysiini C 15,500 164 151

Kefalotiini 14.0 1,210 >20,000

Kefaloridiini 0.2 133 5,300 5 7 9 5 3

Taulukosta II ilmenee että yhdisteiden aktiviteetti erikoisesti mikro-organismia Proteus morganii vastaan on selvästi parempi kuin vertailuyhdisteiden aktiviteetti.

Keksinnön mukaisia tuotteita voidaan käyttää aktiivisena ainesosana yksinään tai yhdistelmänä erilaisissa farmaseuttisissa valmisteissa. Näitä antibiootteja ja niiden vastaavia suoloja voidaan käyttää kapseleissa tai tableteissa, jauheina tai liuoksina tai suspensioina tai eliksiireinä. Niitä voidaan annostella suun kautta, laskimonsisäisesti tai lihaksensisäisesti. Sopivia kantoaineita, joita voidaan käyttää mainituissa kokoomuksissa, ovat esim. mannitoli, sakkaroosi, glukoosi tai steriilit nesteet kuten vesi, suolaliuos, glykolit ja mineraali-, eläin-, kasvis- tai synteettistä alkuperää olevat öljyt, kuten esim. maapähkinäöljy, mineraaliöljy tai seesam-^ öljy. Myös kantoaineiden lisäksi voidaan kokoomuksissa käyttää mui ta ainesosia, kuten stabiloimis-, side-, hapettumisenestoaineita, säilöntäaineita, liukkaaksi tekeviä aineita, suspensoimisaineita, viskositeettiaineita tai makuaineita tai senkaltaisia. Lisäksi kokoomuksissa voi olla muita aktiivisia ainesosia antibioottisen vaikutuksen laajemman spektrin aikaansaamiseksi.

Annettava annos riippuu suuressa määrin käsiteltävän kohteen tilasta ja potilaan painosta, jolloin parenteraalinen annostus on edullinen yleisiä infektioita varten ja suun kautta tapahtuva annostelu vatsainfektiota varten. Yleinen päivittäinen annos käsittää noin 15-600 mg aktiivista ainesosaa kg kohti ruumiinpainoa yhtenä tai useampana eränä päivässä. Yleensä päivittäinen annos on alueella noin 80 - 120 mg aktiivista ainesosaa kg kohti ruumiinpainoa.

Tuotteita voidaan annostella yksikköannosmuodoissa, esim. kiinteässä tai nestemäisessä muodossa suun kautta annettavassa annosmuo-dossa. Yksikköannos nestemäisenä tai kiinteänä sisältää yleensä noin "· 15 - 1500 mg aktiivista ainesosaa laskettuna valmisteen kokonaispai nosta; kuitenkin on yleensä edullista käyttää annospitoisuutta noin 250-1000 mg. Parenteraalista annostelua varten sisältää yksikköannos tavallisesti puhdasta yhdistettä lievästi happameksi tehdyssä steriilissä vesiliuoksessa tai liukoisena jauheena, joka on tarkoitettu liuotettavaksi.

Uudet 7-aminokefalosporaanihappojohdannaiset valmistetaan keksinnön mukaisesti siten, että 57953 käsitellään yhdistettä, jolla on kaava: OCH3

NHR2 0 S

H-C-(CH2)3-C-NH--( COOR3 * Δ

-γ-CH2A

COOR8 OI g - jossa A merkitsee samaa kuin edellä, R merkitsee samaa kuin R tai esteritäh- ? 3

dettä, P on alkoksikarbonyyliryhmä, joka mahdollisesti on halocrenoitu, ja R

on esteritähde, kaavan R'-X mukaisella asyylihalogenidilla, jossa R' merkitsee samaa kuin edellä ja X on halogeeni, bis-(tri-metyylisilyyli)-trifluoriasetamidin, N-trimetyylisilyyli-trifluori-asetamidin, N-trimetyylisilyyli-ftalimidin, etyyli-N-trimetyylisilyyli-karbamaatin tai N-trimetyylisilyylibentseenisulfonamidin läsnäollesssa, minkä jälkeen 5-alkoksikarbonyyliamino-5-karboksivaleryyliryhmä yhdisteessä, jolla on kaava: NHR2 0 OCH, q I M 3 a \ H-C-(CH2)3-C-N__S \ COOR3 R’ l

-NN^-CH2A

COOR8 o q gf jossa R', R , R , R ja A merkitsevät samaa kuin edellä, lohkaistaan, ja että mikäli saatu kaavan (I) mukainen tuote on esteri se lohkaistaan vastaavaksi vapaaksi hapoksi tai suolaksi ja haluttaessa suola muutetaan vastaavaksi hapoksi tai vapaa happo muutetaan vastaavaksi suolaksi.

9 57953

Keksinnön edullisen suoritusmuodon mukaan käsitellään yhdistettä, jolla on kaava: OCfL·

0 J

HOOC-CH-(CH,), -CNH--/SN n ' 2 2 ° J-N A-ch2ocnh2 ° I 8

COOR

2 8 jossa F ja R merkitsevät samaa kuin edellä, tai sen esteröityä johdannaista 2-tienyyli- tai 2-furyyliasetyylihalogenidilla ja bis-trimetyyli-silyylitrifluoriasetamidilla, minkä jälkeen saatu välituote lohkaistaan yhdisteen saamiseksi, jolla on kaava:

OCH

° S

29 " R -C-NH-:-ζ N 0 -N Λ—CH.OCNH.

o 1 COOR8 29 ....

jossa R on 2-tienyylimetyyli tai 2-furyylimetyyli.

Keksinnön mukaisesti saadaan uusia tuotteita uudella menetelmällä, jossa 7-asyyliamidokefalosporiini-yhdisteen asyyliryhmä korvataan erilaisilla asyylisubstituenteilla. Tämän uuden menetelmän mukaisesti 7-asyyliamido-kefalosporiini-yhdisteen annetaan reagoida asyloimisaineen kanssa välituotteen 7-diasyyliamidokefa-losporiinin saamiseksi, joka sisältää kaksi erilaista asyylisubsti-tuenttia, ja sen jälkeen alkuperäinen asyyliryhmä lohkaistaan pois uuden 7-asyyliamidokefalosporiiniyhdisteen saamiseksi.

in 57953

Edellä kuvatut reaktiot voidaan suorittaa käyttäen vapaata happoa, vaikkakin on yleensä todettu edulliseksi suojata karboksiryhmä muodostamalla sopiva esteri, joka voidaan helposti poistaa prosessin päätyttyä.

mämän menetelmän ensirrmäinen vaihe käsittää kefalosporiiniyhdisteen tai sen johdannaisen, jossa karboksyyliryhmä on suojattu, reaktion asyloimisaineen, edullisesti asyylihaiogenidin kanssa silyyliyhdisteen läsnäollessa 7-diasyyliamido-yhdisteen saamiseksi. Tämän tuotteen annetaan sitten reagoida alkuperäisen asyyli-substituentin poistamiseksi ja kefalosporiiniyhdisteen saamiseksi, jossa on uusi 7-asyyliamido-suhstituentti.

Ensirrmäinen vaihe diasyloidun tuotteen valmistamiseksi suoritetaan parhaiten saattamalla kefalosporiiniyhdiste hyvään kosketukseen asy loimisaineen kanssa sopivassa liuottimessa negatiivisesti substituoidur. amidin trisubstituoidun silyylijohdannaisen läsnäollessa. Reaktiolämpötila ei ole erikoisesti kriitillinen ja yleensä lämpötilat noin -20 - +1^0 °c ovat tyydyttäviä, vaikkakin on edullista suorittaa reaktio lämpötilassa noin 25 - 40 °C. Erilaisia liuottimia, jotka eivät sisällä aktiivista vetyä, kuten kloroformia, asetonitriiliä, metyleenikloridia, dioksaania, bertseeniä, halogeenibentseeniä, hiilitetrakloridia ja dietyy1ieette-riä käytetään reaktiossa kalkkein sopiviimtin.

Yleensä on edullista suorittaa edellä esitetyt reaktiot käyttäen kefa-losporiiniyhdistettä, jossa karboksiryhmä on suojattu, koska sellaisilla johdannaisilla saadaan halutun tuotteen suurinnat saaliit. Tätä tarkoitusta varten karbok-sisubstituentti suojataan muodostamalla sopiva esteri, kuten bentsyyli-, bents-hydrvyli-, p-nitrofenyyli-, trimetyylisilyyli-, trikloorietoksi-, p-metoksibentsyy-li-, ftalimidcmetyyli- tai sukkinimidcmetyyliesteri, jotka voidaan helposti poistaa tunnetuilla menetelmillä. Lisäksi on yleensä edullista suojata mikä tahansa aminoryhmä, joka on läsnä kefalosporiinilähtöyhdisteestä, koska sellaisilla johdan^ naisilla saadaan haluttujen tuotteiden suurlimat saaliit. Tätä tarkoitusta varten suojataan ryhmät edullisesti substituenteilla, jotka ovat helposti poistettavissa. Sellaiset ryhmät ovat hyvin tunnettuja tällä alalla. Esim. aminoryhmä suojataan sopivimmin sellaisella ryhmällä kuin trikloorietoksikarbonyyli, t-butoksikarbonyyli, bentsoyylimetoksikarbonyyli, trimetyylisilyyli, p~metoksibentsyylioksi, o-nitro-fenyylitio ja senkaltainen.

11

Alkuperäisen asyyliryhmän lohkaisemisvaihe voidaan suorittaa usealla tavalla, nimittäin pidentämällä reaktioaikaa, lisäämällä alkoholia kuten alempaa alkanolia tai alempaa alkyylitiolia, tai hydrolysoimalla vesiliuoksessa, joka sisältää pienen määrän happoa tai emästä. Siten eräissä tapauksissa lohkaiseminen suoritetaan lisäämällä alempaa alkanolia tai alempaa alkyylitiolia, joka sisältää 1-5 hiiliatomia, aralkanolia kuten bentsyylialkoholia tai vastaavaa tiolia. Lohkaisemalla saadaan haluttu monoasyloitu kefalosporiiniyhdiste tai voidaan saada monoasvloituyhdisteiden seos. Viimeksimainitussa tapauksessa haluttu monoasyloitu kefalosporiiniyhdiste otetaan talteen erottamalla, kuten krcmatografoimalla.

Kun aminoadipoyy1i-osan amino-substituentin suojaryhmä, kuten trikloori-etoksikarbonyyli tai t-butoksikarbonyyli poistetaan sopivalla tavalla tapahtuu amino-adipoyy 1 iryhmän valikoiva lohkeaminen. Aminoryhmän suojaryhmän tämä poistaminen johtaa ilmeisesti aminoadipoyy 1 iryhmän sisäiseen syklisoitumiseen, josta tuloksena on alfa-karboksyyliesterin lohkeaminen, jolla on kaava ROOT-/= 0

N

Vaikkakin lohkeamisen mekaniikka on edellä esitetty, niin ei kuitenkaan haluta sitoutua tähän lohkeamisen selitykseen, koska myöhenmät tutkimukset voivat osoittaa, että tuote lohkeaa ja poistuu jollakin muulla tavalla. Tämä lohkeamisen _ selostus on esitetty yksinomaan keksinnön parempaa ymmärtämistä, varten.

12 57953

Amino- ja karboksi-funktioilla olevien suojaryhmien lohkaiseminen suoritetaan sinänsä tunnetulla tavalla. Siten esim. trikloorietoksikarbonyyliryhmä poistetaan antamalla reagoida sinkin ja etikkahapon kanssa ja t-butoksikarbonyyli-ja bentshydryyli-ryhmän poistetaan antamalla reagoida trifluorietikkahapon kanssa.

Keksinnön mukaisen menetelmien täydellistä ymmärtämistä varten esitetään seuraavat suoritusmuodot. Siten 7-(D-5'-amino-5'-karboksivaleramido)-3-karbamoyyli-oksimetyyli-7-metoksi-3-kefeemi-4-karbonihappo muutetaan vastaavaksi 7-(2-tienyyliasetamido)-yhdisteeksi seuraavien reaktioiden avulla:

NIL· 0 JI

' ' " ' OCIL· s.

H-C--(CH2)3C-N- \ COOll _N Λ -CH^OCONIL· .'f

COOII

0 ti C0CII2CC13

NH O H

1 " 1 OCIL· S

H-C-(CH )3C-N-_I—/ N

COOH _N ✓ -CHo0C0mL· S Y 2 2

COOH

t O \ /

II

C-0CH2CC13

NH O II

’ " ’ OCIL· S

H-c-(ch2)3c-n-_rL·/ \ COOCH0„ _N x -CH-OCONIL· 2 // VX 2 2

0 T

COOCH02 13 5795 3

I I

C.-UO"2C.CT3 CM ,3> 1511 0 ' 2 OCH ' ' ' " c-o 3 Sv ^ H-C--(CH2)3C-N·----^ \ COOCH0„ N A -CM„OCONII„

!— T

COOCII02

V

,- 0 II

II " ' OCH. Sv _N Λ -ClIo0C0NIIo // Y 2 2 COOCH02 ]/ - 0 11 ΠΓΗ II "' 3 /\ -N / -CH-OCOHII- o'' \

COOH

14 57953

Kuvatussa prosessissa lähtöyhdiste asyloidaan antamalla reagoida trikloorietoksikarbonyylikloridin kanssa N-trikloorietoksi-karbonyyli-johdannaisen saamiseksi, joka alkyloidaan difenyylidi-atsometaanilla, jolloin saadaan dibentshydryyliesteri. Annettaessa saadun kefalosporiiniyhdisteen reagoida trimetyylisilyylitrifluori-asetamidin ja 2-tienyyliasetyylikloridin kanssa saadaan 7-^(0-5^ trikloorietoksikarbonyyliamino-5’-karboksivaleryyli)-(2-tienyyli-asetyyliamino^-yhdiste. Tämä aminoadipoyyliryhmä lohkaistaan sitten antamalla reagoida sinkin kanssa hapon läsnäollessa, jolloin saadaan 3-karbamoyylioksimetyyli-7-(2-tienyyliasetamidodekefalospo-raanihapon bentshydryyliesteri, josta poistetaan suojaryhmä bentshyd-ryyliryhmä ja muodostetaan vapaa happo. Tämä tuote voidaan muuttaa suolaksi sinänsä tunnetulla tavalla.

Asyloimisaineita, jotka on määritelty R':n yhteydessä, voidaan käyttää 2-tienyyliasetyylikloridin asemesta edellä kuvatussa reaktiokaaviossa vastaavien 7-asyyliamidokefeemiyhdisteiden muodostamiseksi. Käytettäessä sellaisia asyloimisaineita on vältettävä asyloimisaineiden käyttö, jotka sisältävät substituentteja, jotka vaikuttavat reaktion aikana. Tämä trans-asyloimismenetelmä on arvokas edistys tällä alalla, koska sillä aikaansaadaan keino valmistaa kefalosporiineja, jotka sisältävät erilaisia 7-syyliamido-suhstituentteja aminoadipqyyliamido-ryhrnän asemesta ja tällöin vältetään tarve muuttaa ensinnä tunnetut kefalosporiinit vastaavaksi 7-amino-kefalosporaanihappo-yhdisteeksi ja sen jälkeen asyloida tämä tuote.

Seuraavat esimerkit kuvaavat keksintö.

15 5 7 9 5 3

Esimerkki 1 3-k arb funoy y 1 i ok s i juo ty y 1 i - 7-me t ok s i - f e ny y 1 i as e t tun i do - 3-k e f e emi - - karbonihappo

Vaihe A: 7/2>-(D~5'-trikloorietoksikarbonyyliamino-5'-karboksivaleramido)-3_ karbanoyylioksiaetyyli-7-metoksi-3-kefeemi-l*-karbonihappo 7 ^&-(D-5-enino-5-knrboksivaIeraraido)-3-karbaTioyylioksiinetyyli-7 "Vietoksi ~3~ kefeem?.-l«-karbonihapon mono-natriumsuola (20,5 g) liuotetaan seokseen, jossa on 80 ml asetonia ja 2^0 ml 10 2:sta dinaliumvetyfosfaattia. Tähän liuokseen lisätään pisaroittain 25 g (118 mnoolia) trikloorietoksikarbonyylikloridia 80 ml:ssa asetonia. Lisäyksen aikana liuoksen pH pidetään arvossa 9>1 lisäämällä 2,U N natrium-hydroksidiliuosta. 30 minuutin kuluttua seos uutetaan etyyliasetaatilla, etyyli-asetaattikerros poistetaan ja vesikerros tehiään happameksi pH-arvoon 2,5 väkevällä kloorivetyhapolla, Saostunut tuote uutetaan etyyliasetaatilla. Sen jälkeen kun on kuivattu natriumsuifaati11a ja liuotin poistettu tyhjössä, saadaan otsikoitu yhdiste öljynä. UV: (CI^OH) Amaks. 262,5 £=5^50

NMR: (liuotin - DMS0, dg) ^=3,^3 (0-C1L·, s), U,73 (2-Η„, osaksi näkyvä), h Ai CC1T

* (CH2-0, s), 5,12 (6-11, s),^,7U (10-H2, osaksi näkyvä).

Vaihe B: 7^^-(D-5,-trikloorietoksikarbonyylianino-5'-karboksivaleramido)- 3-karbaraoyylioksimetyyli-7~metoksi-3-kefeemi-li-karbonihapon dibentshydryylieoteri.

Liuokseen, jossa on edellä saatua 7^>-(D-5 '-trikloorietoksikarbonyyliamino-5,-karboksivaleramido)-3-karbaInoyylioksiπletyyli-7-lnetoksi-3-kc;feerni-l4-karbonihappoa 500 nl:ssa etyyliasetaattia, lisätään 17 g difenyylidiatsometaania 200 ml:ssa eetteriä. Sen jälkeen kun on sekoitettu yli yön uutetaan peräkkäin natriumbikarbonaatilla ja natriumkloridi liuoksella. Liuotin haihdutetaan kuivatusta liuoksesta, jolloin saadaan raakatuote, joka puhdistetaan kromatografoimalla silikageelillä. Eluoimista varten käytetään kloroformin etyyliasetaatin seosta 2:1. Tällä aineella on yksinkertainen täplä TLC-kromatografiassa. UV: (Cii^Oll) ^maks. 2Ö50yum £7000 NMR: (liuotin - CDC13) (0-CHj, s), 3,35 (2-H2, osaksi näkyvä, 14,69 (Sfi^o, s), 5,03 (6-11, s), ^14,88 (lO-llg, osaksi näkyvä).

5795 3

Vaihe C: '^/^-/Jd-5 ’--trikloorietoksikarbonyyliamino-5 1-karboksivalcryyli) fenasetyyliaining7“3_karl)amoyyliokr.inetyyli-T-:netokGi-3-kefeemi-U-karbonihapon dibentshydryyliesteri

Seoksen, jossa on 1,1 e (1,18 millimoolia) 7//^*(D“5’-ti’ikloorietoksikarbo-nyyliamino-5 ’ -karboksivaleranido)-3"karbamoyylioksimotyyli-7-raetoksi-3-kefecmi-l<-karbonihapon dibcnt.shydryyliesteri, 5 ml asetonitriili ä ja 3 ml bis-trimetyyli-silyyli-trifluoriar.etamidia annetaan olla huoneenlämpötilassa 6 tuntia. Tämän jälkeen haihtuvat tuotteet poistetaan suurtyhjössä ja jäännös liuotetaan 3 ml:aan metyleenikloridia. Tähän liuokseen lisätään 0,23 ml (1,79 millimoolia) fenyyliase-tyylikloridia ja seoksen annetaan seistä huoneen lämpötilassa 65 tuntia. Sen jälkeen liuos haihdutetaan ja jäännös liuotetaan 5 ml:aan tetrahydrofuraania ja 0,7 ml:aan 2,5 N kloorivetyhappoa. 20 minuutin reaktioajan jälkeen liuotin haihdutetaan ja jäännös jaetaan metyleenikloridin ja natriumbikarbonaattiliuoksen kesken. Orgaaninen kerros pestään natriumkloridiliuoksella, kuivataan ja haihdutetaan kuiviin. Siten saatu raakatuote puhdistetaan kromatocrafoimalla silik.'geelilla käyttäen kloroformi/etyyliasetaattia 95:5 eluanttina. Otsikoitu yhdiste on homogeeninen ohutkerros kronatografiassa. UV: (ClI^OH) ^jnoks. 26ä0^um 6650 NMR: (liuotin - CDC13) (.=3,50 (0-CII3, s), 3,31 (2-Hg, osaksi näkyvä), CC1 !»,67 (CH^-O, s), 5»0ä (6-H, s), l<,96 (10-Hg, osaksi näkyvä), 3,95 (13-Η?, s).

Vaihe D: 3-kar,bamoyylioksimetyyli-7metoksi-7/^-i‘enyyliasetamido-3-kefeemi-t|-karbonihapon bentshydryyliesteri

Liuokseen, jossa on lOU mg '^/^i-£(D-5 '-trikloorietoksikarbonyylianino-S'-karboksivaleryyli )fenasetyyliamino/-3-karbamoyylioksinetyyli-7-metoksi-3-kefeemi-U-karbonihapon dibentshydryyliesteriä 1 ml:ssa 90 3:sta etikkahappo/vettä, sekoitetaan 100 mg:n kanssa sinkkipölyä 5 tuntia. Sen jälkeen liuos suodatetaan ja liuotin poistetaan tyhjössä. Jäännös jaetaan metyleenikloridin ja veden kesken ja metyleeni-kloridikerros uutetaan natriumbikarbonaatilla ja natriumkloridiliuoksella. Kuivaamisen ja haihduttamisen jälkeen saadaan raakatuote, joka puhdistetaan ohutkerroskro-matografialla käyttäen silikalevyä ja kloroformin ja etyyliasetaatin seosta 3:2. Tuotteelle on tunnusomaista IR- ja NMR-spektrit. IR: (CHC13) 1700, 1730 ja 1680 cm-1 UV: (CJ^OH) maks. 261»0^u m 5870 MMR: (liuotin - CDC13) ¢/=3,^0 (0-CH3, s), 3,33 (2-Hg, osaksi nflkyvä), 5,01 (6-il, s), U,83 (lO-Hg, osaksi näkyvä), 3,60 (13-Hg, s).

Vaihe E: 3-karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-7/i-fonyyliasetamido-3-kefeemi-U-karbonihappo 17 mg 3“karbamoyylioksimetyyli-7-mctoksi-7/?'-fenyyliasctanido-3-kefeeni-l»-karbonihapon bentcliydryyliesteriä liuotetaan 0,2 ml:aan anisolia ja käsitellään 17 57953 0,5 ml:11a trifluorietikkahappoa 5 minuuttia. Sen jälkeen seos väkevöi-dään nopeasti suurtyhjössä ja laimennetaan etyyliasetaatilla. Tuote poistetaan etyyliasetaattiliuoksesta uuttamalla natriumfosfaattipusku-rilla pH 7,5. Puskuriliuos tehdään happameksi pH-arvoon 2,5 laimealla kloorivetyhapolla ja otsikoitu yhdiste poistetaan uuttamalla etyyliasetaatilla. Liuoksen kuivaamisen ja haihduttamisen jälkeen saadaan tuote. Analyyttinen näyte saadaan kiteyttämällä uudelleen etyyliasetaatista,^. 159-161ÖC. UV: (pH 7 puskuri) ^maks. 2670yUm £8650 IR: (CH3CN) 1780, 1735 ja 1700 NMR: (liuotin - CDgCN + D20)£=3,42 (0-CHg, s), 3,35 (2-H2, osaksi näkyvä), 5,01 (6-H,s) , 4,83 (10-H2, d), 3,01 (13-H2, s).

Alkuaineanalyysi yhdisteelle ci8H19°7N3S: Löydetty: C, 51,29; H, 4,54;

Laskettu: C, 51,47; H, 4,73.

2 g edellä mainittua happoa liuotetaan 1 pisaraan metanolia ja käsitellään liuoksella, jossa on 2 mg dibentsyylietyleenidiamiinidi-asetaattia etyyliasetaatissa. Otsikoidun yhdisteen dibentsyylietyleeni-diamiinisuola saostuu seistessä neulamaisina kiteinä, sp. 140-143°C.

UV: (CH30H) ^maks. 263/um £8600,

Esimerkki 2 3-karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-^-fenyyliasetamido-3- kefeemi-4-karbonihappo

Vaihe A: ^-^(D-S'-trikloorietoksikarbonyyliamino-S’-karboksi-valeryyli)-fenyyliasetyyliamino^-3-karbamoyylioksime-tyy 1 i-7- m etoksi-3 -tefeemi-4-karborahapon dibentslydryyliesteri 9,3 g (10 millimoolia) ^-(D-5-trikloorietoksikarbonyyliamino- 5-karboksivaleramido)-3-karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-3-kefeemi-4-karbonihapon di-bentshydryyliesterin liuosta, 7,8 g (40 millimoolia) M-trimetyylisilyyliftalimidiä ja 5,3 ml (40 millimoolia) fenyyliasetyy-likloridia 50 ml:ssa asetoninitriiliä kuumennetaan 40°Gssa 20 tuntia. Sen jälkeen seos jäähdytetään huoneenlämpötilaan ja suodatetaan. Suodos haihdutetaan kuiviin ja sekoitetaan heksaanin kanssa. Liukenematon tähde, joka sisältää ^-^TD-S'-trikloorietoksikarbonyyliamino-S'-karb-oksivaleryyli)fenyyliasetyyliamino/-3-karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi- 3-kefeemi-4-karbonihapon dibentshydryyliesterin, käytetään puhdistamatta seuraavassa vaiheessa.

Vaihe B: 3-karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-^-fenyyliasetamido- 3-kefeemi-4-karbon ihapon bent shydryy1ie steri Vaiheesta A saatu raakatuote liuotetaan seokseen, jossa on 50 ml etyyliasetaattia, 45 ml etikkahappoa ja 5 ml vettä. Tähän liuokseen lisätään 20 g sink-kijauhetta ja seosta sekoitetaan huoieenlämpötilassa 4tuntia. Tämän jälkeen yli- m 57953 I * määrä sinkki poistetaan suodattamalla ja suodos jaetaan etyyliasetaatin ja veden kesken. Orgaaninen kerros pestään natriumbikarbonaattiliuoksclla ja vedellä, kuivataan ja liuotetaan, oitten saatu raakatuote puhdistetaan kromatografoimalla käyttäen 1 kg silikagceliä ja eluoiden kloroformi, hekr.aanin ja metanolin seoksella (l*7:ä7:6). Saadulla tuotteella on esimerkin 1, vaiheessaD kuvatut fysikaaliset ominaisuudet.

Vaihe C: 3-karbamoyyli oks imetyyli-7~metoks i-'^’-fenyyli as et ami do-3-ke feerai -ä-karbonihappo

Otsikoitu yhdiste valmistetaan esimerkin 1 vaiheessa S kuvatulla tavalla ja sillä on samat fysikaaliset ominaisuudet kuin esimerkin 1 tuotteella.

Esimerkki 3 3-karbamoyylioks imetyyli-7-metoks 2-tienyyliaset ami do)-3~ke feemi-b- karbonihappo

Vaihe A: 7/^-/10-5'-trikloorietoksikarbonyyliamino-5'-karboksivaleryyli)- 2-tienyyliasetyyliamino?-3"karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-3-kefeemi-li-karbonihapon di-bentshydryyli-esteri Seosta, jossa on 6,0 g (6,3 millimoolia) T^-(D_5,-trikloorietoksikarbo-nyyliamino-5'-karboksivaleramido)-3-karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-3-kefeemi-ä-karbonihapon dibentsyyliesteri , ItJ g (1)0 millimoolia) H-trimetyylisilyyli-trifluo-riasetamidia, 3,1*2 ml (25 millimoolia) 2-tienyyliasetyylikloridia ja 50 ml kloroformia, lämmitetään Vf°C:ssa 16 tuntia. Sen jälkeei. kun liuotin on poistettu haihduttamalla uutetaan raaka reaktioseos heksaanilla ja puhdistetaan edelleen krona-tografoimalla käyttäen 1 kg silikageeliä ja eluoiden 10 % :11a.etyyliasetaatilla kloroformissa. UV: (CH^OH) / maks. 2Ö5^um 65310 NMR: (liuotin - CDC1 ) <f=3,53 (-0CH , s),/~ 3,1* (2-H^, d), . , CC1 0 * d * (CH^-O, s), 5,05 (6-H, s),-— 5,0 (lO-Hg, osaksi näkyvä), U,15 (15-II2, s).

Vaihe B: 3-karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-7/5“(2-tienyyliasetanido)-3-kefeemi-*4-karbonihapon bentshydryyliesteri ä,2 g (3,8 millimoolia) 7/2>-£(D-51 -trikloorietoksikarbonyylicmino-5'-karheksi vale ryy li )-2-ti e nyy li asetyyli amino}-3-karbamoyyli oks ime tyyli-7-metoksi-3-ke f ee-mi-li-karbonihapon di-bentshydryyli-esteriä liuotetaan 30 ral:aan etyyliasetaattia ja lisätään 30 ml 90 i»:sta vesipitoista etikkahappoa ja 12 g sinkkipölyä. Seosta sekoitetaan voimakkaasti 5 1/2 tuntia huoneenlämpötilassa. Sen jälkeen kun sinkki on suodatettu pois poistetaan ylimäärä etikkahappoa pesemällä etyyliasetaattiliuos vedellä. Otsikoitu yhdiste eristetään esimerkin 1 vaiheessa D kuvatulla tavalla. Sille on tunnusomaista TLC:llä (7 £ ci^OH CHCl^n-heksäänissä 1:1) yksinkertaisen täplän antavana aineena. IR: (CHCl^) ΐγ1*0, 1800 cm_1; UVr/maks. 26 3^um £5300 IIMR: (liuotin - CUCJ^) j = 3j»5 (-0CH3, s), ~ 3(2-Hg, d), 5,02 (6-Π, s),^,92 .(10-11,,, osaksi näkyvä), 3,85 (13-H.,, s).

19 5 7 9 5 3

Vaihe C: 3"karbamoyylioksimetyyli-7“metoksi-7/3-(2-tienyyliaseta:nido)-3-kefeemi-lt-karbonihappo

Kylmää liuosta, jossa on 1,36 G 3-korbamoyylioksimetyy].i-7~metoksi-iy5>-(2“tienyyliaseta’nido)-3-kefeemi-l»-karbonihapon bentshydryyliesteriä 10,3Q mlrssa anisolia, sekoitetaan 5,1*1* ml:n kanssa trifluorietikkahappoa 0°C:ssa 3 tuntia. Haihtuvat aineet poistetaan suurtyhjössä ja tuote kiteytetään uudelleen etyyliasetaatista, sp. l65-l67°C.

UV: (pH γ puskuri) Amoks. 263,um föQl.O; o ( OH)=+199° 236yum £11*000 ''D U 3° ' IIMR: (liuotin - CD3CII + D20) J =3,1*8 (-0CH3, s), ^ 3,1» (2-Hg, osaksi näkyvä), 5»05 (6-H, s), U,91 (lO-Hg, d), 3,86 (13-Hg, s).

Alkuaineanalyysi ci6fIi7N3°7S2:

Lask.: C, M,96; H, 1*,01; H, 9,83; " Löyd.: C, M,86; H, 3,99i N, 9,21; S, 15,00.

Vaihe D: Natrium-3-karbajnoyylioksirnetyyli-7-metoksi-7y^-(2-tienyyliasetamid i 3-kefeemi-l+-karboksylaatti

Suspensiota, jossa on 1 g 3-karbanoyylioksimetyyli-7_metoksi-7/3-(2-tie-nyyliasetamido)-3_kefeemi-lt-karbonihappoa 100 ml:ssa tislattua vettä, sekoitetaan huoneenlämpötilassa samalla kun vähitellen lisätään 0,2 e natriumbikarbonaattia.

Sen jälkeen kun on muodostunut liuos ja pH on säädetty olennaisesti neutraaliksi (pH = 6-7) annos suodatetaan lyofilisoimispulloon. Suodos lyofilisoidaan.

Saadaan 1 c amorfista natrium-3-karbamoyylioksimetyyli-7~metoksi-7/3-(2-tienyyliasetamidi)-3~kefeeni-U-karboksylaattia, joka edustaa 99 #:i» talteenottoa. UV: (pH 7 puskuri): EfS 198 at 262 nm, 315 at 236 nm. ir (KBr): 1760 (laktaami). = 103,1° (C=l, pH 7 puskuri).

_ Esimerkki H

3-karbamoyylioksimetyyli-y3 -(2-furyyliasetamido)-7-metoksi-3-kefeemi-I<-karbonihappo

Vaihe A: ^/3-i(lD-5,”trikloorietoksikarbonyylia,nino-5,~karboksivaleryyli)-2-furyyli as etyyli aminj?-3-karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-3~kefeemi-l*-karbonihapon di-bentshydryyliesteri

Seosta, jossa on 9,3 g y(3-(D-5,-trikloorietoksikarbonyyliaraino-5,-karboksi-valeranido)-3-karbanoyylioksimctyyli-7-netoksi-3-kefeemi-l*-karbonihapon di-bentshydryyliesteriä, 7,0 ml bis-(trimetyylisilyyli)-trifluoriasetomidia, U,7 ml 2-furyy-liasetyylikloridia ja 50 ml dikloorimetaania, lämmitetään l»7°C:ssa l6 tuntia.

Liuotin poistetaan haihduttamalla, raaka real.tioseos uutetaan heksaanilla ja jäännöstä käytetään puhdistamatta seuraavassa vaiheessa. CClj H MR: (liuotin - CDCl^ /=3,1*8 (-0CII , s), 3,08 (2-H , d), 14,63 (fHg , s), 5,02 (6-11, s), ^1.,08 (10-H2, d), 3,72 (13-Hg, s). 0- 20 $7953

Vaihe B: 7^-(2-furyyliasetamido)-3-karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-3-kefeemi-li-karbonihapon bentshydryyliesteri Vaiheesta A saadun di-bentshydiyyliesterin annetaan reagoida sinkkipölyn ja etikkahapon kanssa esimerkin 3 vaiheessa B kuvatulla tavalla. Kiteyttäraisen jälkeen kloroformi/heksaanista on puhtaalla tuotteella seuraavat fysikaaliset ominaisuudet: Sp. l68°-171°C.

IB: (C1IC13) 1800, 1720, 1700 UV: Ainaks. 265^ f7200 UMK: (liuotin - CD CH) <T=3,^3 (-0CH.J, s), 3,39 (2-H2, osaksi näkyvä), 5,0 (6-11, s), 1» ,75 (10-H2, d), 3,6U (13-H2, s).

Vaihe C: 3-karbamoyylioksinetyyli-7-nietoksi-7/2>-(2-furyyliasetamdo)-3-kefeemi-l»-karbonihappo 3-karbamoyylioksimetyyli-7~metoksi-7/^-(2-furyyliasetaraido)-3-kefeemi-l*-karbonihappo valmistetaan vaiheesta B saadusta tuotteesta esimerkin'. 3 vaiheessa C kuvatulla tavalla. Uudelleenkiteyttämisen jälkeen etyyliasetaatista t>n tuotteen sulamispiste 156-l6l°C.

UV: (pH 7 puskuri) ^maks. 265^vm £7200 IR on yhdenmukainen rakenteen kanssa.

NMR: (liuotin - CD^N + DgO) cie3,Ul* (-0CH3, s) ^3,38 (2-Hg, osaksi näkyvä), 5,02 (6-11, s), »4,82 (10-Hg, d), 3,66 (13-H?, s).

Esimerkki 5 3-karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-7y£-tiofenoksiasetamido-3-kefeemi-l4- karbonihappo

Vaihe A: -£(D-5-trikloorietoksikarbonyyliamino-5~karboksivaleryyli)- t i o f e nok s i as e t ami dq7~ 3~k arb amoyy li ok s i me ty y 1 i-7 ~me t oks i - 3~ke f e emi-U-karbonihapon di-bentshydryyliesteri Esimerkin 4 vaiheessa A kuvatulla menetelmällä ja korjaamalla 2-furyyli-asetyylikloridi ekvimolaarisella määrällä fenyylitioasetyylikloridia saadaan ^Ä-£(D-5-trikloorictoksikarbonyylianino-5-karboksivaleryyli )-ticfenoUsiasetanido)- 3-karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-3_kefeemi-U-karbonihapon di-bentshydryyliesteri . NMR: (liuotin - CDC13) <f=3,33 (-0CH3, s),— 3,23 (2-H2, osaksi näkyvä), 1:,37 CC1 (Cll2? u), 5,0 (6-H, s), ΜΤ (10-II2, u), 3,60 (13-H2, s).

0

Vaihe B: 3-karbamoyylioksimetyyli-7“metoksi-'i^/l>-tiofenoksiaseta.’nido-3“ kefeemi-h-karbonihapon bentshydryyliesteri Esimerkin 4 vaiheessa B kuvatulla tavalla ja käyttämällä y$-/3D-5_tri-kloorietoksikarbonyyliuriino-5-karbokoivalcryyli )-tiofenoksiasetomidcJ-3-karbojno-yylioksimetyyli-7-mctekoi-3-kefeomi-l)-karbonihapon di-bentshydryyliesteriä 21 5795 3 7^-(00-51 "trikloorietoksikarbonyyli amino-5 '-karboksivaleryyli)-2-furyyliasetyyli-amincj7-3~karboinoyylioks imetyyli-7-metoksi-3-kei'cemi-Jt-karbonihnpon di-bentshydryy-liesterin asemesta saadaan kronatografoiraalla suoritetun puhdistuin!sen jälkeen olennaisesti puhdas tuote, jolla on yksinkertainen täplä ohutkerroskronatografiassa (TLC). IR on yhdenmukainen rakenteen kanssa.

UV: j^maks. 27li^um £11350 111-jR: (liuotin - CDCl^) ^=3,3¾ (-QCH^, s), 3,2k osaksi näkyvä, 5,0 (6-H, s), »4,88 (10-1I2, d), 3,68 (13-H2, s).

Vaihe C: S-karbamoyylioksiiaetyyli-'f-metoksi-T^-tiofenoksiasetaraido-S” kefeemi-»4-karbonihappo

Otsikoitu yhdiste valmistetaan vaiheessa B saadusta tuotteesta noudattaen esimerkin 3 / vaiheessa C kuvattua menetelmää. Tuotteella on yksinkertainen täplä TLC:n mukaan. Sp.: 119-123°C.

UV: (pH 7 puskuri) ^maks. 2»47^ura £ 10ä00 1JMR: (liuotin - CD^CII + DgO) =3,33 (-OCH^, s), 3,3»* (2-Hg, osaksi näkyvä), 5,0 (6-Π, s), U,82 (10-H2, s), 3,71 (13-Hg, s).

Esimerkki 6 Ψ - (D ,L-o(-ats idofenyy li ase tyyli ami do) - 3-karbamoyy li oksimetyy Ιί-7-met oksi- 3-ke f e emi -1* -k arbon i h appo

Vaihe A: 7/^“(D-5~tevt.-butoksikarbonyyliamino-5-karboksivaleramido)-3“ karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-3-kefeemi-U-karbonihappo 50,0 g '^£-(D-5-air.ino-5_karboksi\'aleramido)-3-karbemoyylioksimetyyli-7*-me-toksi-3"kefeemi-»4-karbonihappoa liuotetaan seokseen, jossa on 1500 ml 5 i*:sta di-kaliumvetyfosfaattia ja 1000 ml asetonia, ja pH säädetään arvoon 9,5 käyttäen 2,5 H natriumhydroksidiliuosta. Tähän sekoitettuun liuokseen lisätään 50 ml tert.-butoksi-karbonyyliatsidia ja pii ylläpidetään arvossa 9»5 20 tunnin ajan. Sen jälkeen reak-ticseos uutetaan etyyliasetaatilla, etyyliasetaattikerros hylätään ja vesipitoinen kerros jäähdytetään 0°C:seen, sekoitetaan 1200 ml:n kanssa etyyliasetaattia ja tehdään happameksi pH-arvoon 2,5 väkevällä kloorivetyhapolla. Etyyliasetaattikerros erotetaan, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään tyhjössä ja saatua kiinteätä ainetta käytetään puhdistamatta edelleen.

IR: 1790 ψ? -laktaami), 1700 UV: (pH 7 puskuri) Amaks. 2o3 £ 6320

HiiR: (liuotin - DMSO, d^) <T=3»30 (-0CII3, s), 3,»*2 (2-H2, osaksi näkyvä), 5,06 (6-11, s), »4,78 (10-H, d), 1,38 (t-Bu, s).

Vaihe H: “j/?»-(l)-5-tert .-butoksikarbonyyliamino-5-karboksivaleramido)-3- karba:noyylioksimctyyli-7-metoki-.i-3“kefecmi-l4-karbonihapon di-bent: hydryyliesteri

Liuokseen, jossa on 15,0 g 7^/2-(D~5“tcrt .-butoksikarbonyylia’nino-5-karbokoi 72 5 795 3 vajer.''r::i<lo)-3-karbamoyylioksimetyyli-7-Ketok5i-3-kefeemi-)i-karbonihappoa 500 ml :ssa etyyliasetaattia, lisätään 5,5 C difcnyylidiatsometaania ja 70 ml:ssa eetteriä. Reaklioseos lämmitetään liO°C:seen samalla sekoittaen ja 30 minuutin kuluttua käsitellään vielä 5,5 C;lla difcnyylidiatsometaania 70 ml:ssa eetteriä. 3 tunnin kuluttua liuotin poistetaan tyhjössä ja korvataan seoksella, jossa on 500 ml metanolia ja 20 ml vettä. Mctanoli-vesiliuos uutetaan neljästi heksaanilla ja sitten haihdutetaan tyhjössä. Jäännös liuotetaan etyyliasetaattiin, kuivataan natriunsulfnätillä ja haihdutetaan tyhjössä, jolloin saadaan otsikoitu yhdistejota käytetään puhdistamatta seuraavassa vaiheessa.

HMR: (liuotin - CDCl^) <5=3,60 (-OCH^, s), 3,1* (2-H,,, osaksi näkyvä), 5,10 (6-11, s), ,95 (10-H, osaksi näkyvä).

Vaihe C: lp? ' -tert.-butoksikarbonyyliamino-5' -karboksivaleryyli )- D,L->*£-atsidofcnyyliasetyyli anino7“3“karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-3-kefeemi-U-karbonihapon di-bentshydryyliesteri Seosta, jossa on 10,8 g 7/^*(D-5-tert.-butoksikarbonyyliaraino-5-karboksi-valerarnido)-3-karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-3_kefeemi-U-karbonihapon di-bents-hydryyliesteriä, 100 ml kloroformia, 16,2 g bis-(trimetyylisilyyli)-tri fluoriaset-amidia ja D,L-«vi:atsido-fenyyliasetyylikloridia, lämmitetään l*5°C:ssa 16 tuntia.

Seos laimennetaan 300 ml:lla kloroformia, pestään 2 £:lla vesipitoisella bikarbo-naatilla ja natriumkloridin kyllästetyllä vesiliuoksella, kuivataan natriumsulfaa-tilln ja haihdutetaan öljyksi, joka puhdistetaan saostamalla tuote kloroformi- l liuoksesta heksaanilla. Vaaleankeltaista kiinteätä ainetta käytetään seuraavassa vaiheessa puhdistamatta.

IR: 1750 (^-laktanni, 1, 1735, 2100 (-M ) NMR: (liuotin - CDCl^) ¢/=3,70 (-OCH^, s), 3»2 (, osaksi näkyvä).

Vaihe D: 7^?-(D,L-To£:atsidofeuyyliasetyylianido)-3-karbamoyylioksimetyyli- 7-met oksi-3~ke feemi-B-karboni happo

Liuos, jossa on 13,0 g Τ^>-^Γθ-5'-tert.-butoksikarbonyyliamino-51-karboksivaleryyli )-D ,L-o<=atsidofenyyliasetyyliamin97-3-karbamoyylioksimetyyli-7-nictoksi- 3-kefeemi-ä-karbonihapon di-bentshydryyliesteriä 13 ml:ssa anisolia, kaadetaan 65 ml:aan kylmää (0°C) trifluorietikkahappoa. 5 minuutin kuluttua liuos kaadetaan 1300 ml:aan sekoitettua, kylmää (0°C) eetteriä. Saostunut aine otetaan talteen ja jaetaan dinatriumhappofosfaatin' 10 £:sen vesiliuoksen ja etyyliasetaatin kesken. Etyyliasetaattikerros hylätään ja vesipitoinen kerros peitetään tuoreella etyyliasetaatilla ja sekoitetaan pH-arvoon 2 saamiseksi kylmässä 60 3:sen vesipitoisen fosfori hapon kanssa. Ktyyliasetaattikerros otetaan talteen, pestään natriurklori-diri kyllästetyllä vesiliuoksella ja sen jälkeen kuivataan natriumsuifaati11a.

23 5 7 9 5 3

Haihtuvat aineet poistetaan tyhjössä, jolloin saadaan otsikoitu yhdiste.

UV: ^maks. 264 .um £7 537 , u _ . . .

/ (pH 7 puskuri) 231 ^um £1356 IR: 1760 (^-laktaami) 1705, 2105 (-N3> NMR: (liuotin - CD3CN) ¢/=3,36 (-0CH3, s), 3,50 (-OCHg, s), 3,40 (2-H2, osaksi näkyvä), 5,06 (6-H, s), 4,86 (10-H, s), 5,15 (13-H,s).

Esimerkki 7 7^tf-(D ,L-/-aminofenyyliasetyyliamido) -3-karbamoyylioksimetyyli- 7-metoksi-3-kefeemi-4-karbonihappo

Liuosta, jossa on 1,0 g -(D,L-o(-atsidofenyyliasetyyliamido)- 3-karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-3-kefeemi-4-karbonihappoa 10 ml:ssa etikkahappoa ja 90 ml:ssa vettä 0°C:ssa, sekoitetaan 5,0 g:n kanssa sinkkipölyä 10 minuuttia ja suodatetaan. Suodos huuhdotaan vetysul-^ fidillä, suodatetaan ja suodos jäähdytyskuivataan, jolloin saadaan valkoista ainetta, joka pestään eetterillä ja kuivataan tyhjössä, jolloin saadaan otsikoitu yhdiste valkoisena jauheena.

UV: (pH 7 puskuri) ^maks. 264^um ^6525 IR: 1770 (/3-laktaami) 2650 , 1550 (HN3+) NMR: (liuotin - D20 + HC03>) (/=3,78 (-0CH3,s), 3,84 (-OCHg, s), 3,90 (2-H2, osaksi näkyvä).

Esimerkki 8 3-metyyli-7-metoksi-/^-(2-tienyyliasetamido-3-kefeemi-4-karboni-hapon dibentsyylietyleenidiamiinisuola

Vaihe A: y^-(D-5-amino-5-karboksivaleramido)-3-metyyli-7-metoksi-3-kefeemi-4-karbonihappo 10 %:sta palladiumia hiilellä suspensoidaan veteen (80 ml) ja ^ käsitellään vedyllä. Katalyytti suodatetaan ja suspensoidaan uudelleen veteen (50 ml) ja tähän seokseen (2,67 g) lisätään ^-(D-5-amino- 5-karboksivaleramido)-3-karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-3-kefeemi-^ 4-karbonihapon natriumsuolaa (1,0 g) vedessä (10 ml). Saatua seosta ravistellaan 22 tuntia huoneen lämpötilassa. Katalyytti poistetaan suodattamalla ja pestään vedellä (50 ml). Yhdistetty pesuneste ja suodos väkevöidään kuiviin, jolloin saadaan 52,8 %:n saaliina 7/?-(D- 5-amino-5-karboksivaleramido)-3-metyyli-7-metoksi-3-kefeemi-4-karboni-happo (528 mg).

UV: )maks. 265 .um; β = 100 /1 /1 cm

Vaihe B: 7/)-(D-5-tert.-butoksikarbonyyliamino-5-karvoksivaler-amido)-7-metoksi-3-metyyli-3-kefeemi-4-karbonihapon dibentsyylietyleenidiamiinisuola 24 57953 ^tf-(D-5-amino-5-karboksvaleramido)-7-metoksi-3-metyyli-3-kefee-mi-4-karbonihapon dinatriumsuolan (11,5 g) liuos, joka saadaan vaiheessa A, liuotetaan veteen (150 ml) ja asetoniin (50 ml). pH säädetään arvoon 9-9,1 natriumhydroksidilla ja lisätään 10 ml tert.-butyyliat-sidoformaattia. Reaktioseosta sekoitetaan 16 tuntia huoneen lämpötilassa samalla kun lisätään natriumhydroksidia pH:n pitämiseksi arvossa 9-9,1. Reaktioseos uutetaan 100 ml:11a etyyliasetaattia ja orgaaninen kerros hylätään. Tuote saostetaan alentamalla pH arvoon 2,5 laimealla kloorivetyhapolla. Sakka otetaan talteen sentrifugoimalla ja muutetaan dibentsyylietyleenidiamiinisuolaksi, joka kiteytetään etyyliasetaatista. Saadaan 4,3 g ^-(D-5-tert.-butoksikarbonyyliamino-5-karboksivaleramido)-7-metoksi-3-metyyli-3-kefeemi-4-karbonihapon di-bentsyylietyleenidiamiinisuolaa, sp. 177-179°C (hajoaa).

UV: ^ maks. 263/Um, 238 E*%Qm = 98,2, 81,1

Alkuaineanalyysi yhdisteelle C^gH^gNgOgS:

Lask.: C, 59,42* H, 6,74; N, 9,63; Löyd.: C, 60,02; H, 6,80; N, 9,79.

Vaihe C: 3-metyyli-7-metoksi-^-(2-tienyyliasetamido-3-kefeemi- 4-karbonihapon dibentsyylietyleenidiamiinisuola ^(?-(D-5-tert. -butoksikarbonyyliamino-5-karboksivaleramido)-3-metyyli-7-metoksi-3-kefeemi-4-karbonihappoa käsitellään 200 ml:11a (0,1N) vesipitoista laimeata kloorivetyhappoa ja 100 ml:11a etyyliasetaattia vapaan hapon uuttamiseksi. Liuokseen, jossa on 1,33 g (2,7 millimoolia) vapaata happoa 10 ml:ssa metyleenikloridia, lisätään 2,2 ml bis-trimetyylisilyylitrifluoriasetamidia ja 0,5 ml monotrime-tyylisilyylitrifluoriasetamidia. Sen jälkeen lisätään 1,1 ml 2-tienyyliasetyylikloridia ja reaktioseosta sekoitetaan 18 tuntia typpikaasussa 43°C:ssa. Liuotin poistetaan tyhjössä ja jäännös jaetaan etyyliasetaatin ja vesipitoisen fosfaattipuskurin (pH 7,5) kesken. Vesikerros tehdään happameksi laimealla kloorivetyhapolla ja saostunut tuote uutetaan etyyliasetaatilla. Lisättäessä dibentsetyleenidiamiinia saadaan haluttu tuote kiteytymään suolana (250 mg) suhteessa 2 ekvivalenttia tuotetta ja 1 mooli dibentsyylietyleenidiamiinia. Kiteytettäessä suola uudelleen etanolista saadaan olennaisesti puhdas tuote, sp. 153-155°C (hajoaa) ennakolta tummuen.

Alkuaineanalyysi yhdisteelle C^gH^^SgNgO^Q:

Lask.: C, 56,54; H, 5,36; N, 8,60; S, 13,12; Löyd.: C, 55,75; H, 5,16; N, 8,37; S, 12,16 25 5 7 9 5 3

Esimerkki 9 3-karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-’^-(2-tienyyliasetamido)-3- kefeemi-9-karbonihappo A. Di(metoksimetyyli)-3-karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-·^-(D-5-trikloorietoksikarbonyyliamino-5'-karboksivaleramido)- 3-kefeemi-4-karboksylaatti

Kylmään suspensioon, jossa on 9,85 g (disykloheksyyliemiini)-3-karbaanoyyli-oksimetyyli-7-metoksi-7 fi~ (D-5'-tr ikloorietoks Ikarbonyy1iamino-5'-karboksivalerami-, d.o) -3-kefeemi-4-karboksylaattia metyleenlkloridissä (kuivattu molekulaariseuloilla, 170 ml) 0°C:ssa, lisätään liuos, jossa on 1,69 g kloorimetyylimetyy-lieetteriä 50 ml:ssa metyleenikloridia pisaroittain 60 minuutin ai-^ kana samalla sekoittaen. Lisäyksen päätyttyä suspensiota sekoitetaan 0°C:ssa 2 tuntia. Seos suodatetaan seliittikerroksen lävitse ja kerros uutetaan metyleenikloridilla (30 ml x 3). Suodos haihdutetaan kuiviin tyhjössä 5-10°C:ssa ja jäännöstä ravistellaan 20 ml:n kanssa metyleenikloridia ja 200 ml:n kanssa jäävettä. Orgaaninen kerros eroitetaan, pestään edelleen 200 ml:11a jäävettä, 200 ml:11a kylmää 0,1 %:sta NaHCO^-liuosta, 200 ml:11a vettä ja 50 ml:11a NaCl:n vesiliuosta ja kuivataan magnesiumsulfaatilla. Suodattamisen jälkeen liuotin poistetaan tyhjössä, jolloin saadaan 6,25 g tuotetta lasimaisena aineena.

26 5795 3 B. Di(metoksimetyyli)-3-karbomoyylioksimetyyli-7-metoksi-7/9 51 “trikloo- rietoksikarbonyyliamino-5'-karboksivaleryyli)-tienyyliasetyyliaminö?-3- kefeerai-U-karboksylaatti

Liuokseen, jossa on 10 g di(metoksiraetyyli)-3-karbainoyylioksimetyyli-7-metoksi-7//5-(D-5-trikloorietoksikarbonyyliamino-5,-karboksivaleramido)-3-kereerai-U-karboksylaattia 80 ml:ssa sculakuivattua metyleenikloridia, lisätään 13,5 nil cL~pineeniä, 12,1 ml etyyli-N-trimetyylisilyylikarbamaattia ja 7»0 ml 2-tienyyli-asetyylikloridia. Liuosta sekoitetaan 17 tuntia typpiatmosfäärissä samalla lievästi paluujäähdyttäen 50°C:ssa öljyhauteella. Sitten liuos jäähdytetään huoneen lämpötilaan, käsitellään 500 ml:11a vesiliuosta, jossa on 10 ?:sta natriumkloridia ja 2,5 #:sta natriumbikarbonaattia, lisätään 30 ml metanolia ja seosta sekoitetaan voimakkaasti 15 minuuttia ympäristön lämpötilassa. Kerrokset erotetaan, vesikerros pestään 20 ml:lla metyleenikloridia, yhdistetyt metyleenikloridikerrokset pestään 30 ml:11a natriumkloridin kyllästettyä vesiliuosta, natriumkloridiliuosta pestään takaisin 30 ml:11a metyleenikloridia ja yhdistetyt metyleenikloridiliuokset kuivataan magnesiumsulfaatilla, suodatetaan ja kakku pestään kahdesti kakun 3-kertai-sella tilavuudella metyleenikloridia. Yhdistetyt metyleenikloridiliuos ja pesunesteet väkevöidään tyhjössä tilavuuteen 50 ml, lisätään pisaroittain samalla voimakkaasti sekoittaen 500 ml jääkylmää heksaania ja sen jälkeen kun on annettu seistä 15 minuuttia heksaanikerros dekandoidaan kumimaisesta aineesta suodattamalla seliit-tikerroksen lävitse. Kumimaincn aine ja kerros pestään 50 ml:11a heksaania, sitten seliittikerros pestään 50 ml:lla metyleenikloridia ja tätä metyleenikloridiliuosta käytetään kumimaiseen aineen liuottamiseksi. Sitten metyleenikloridiliuos pannaan heksaanin saostuksen kautta uudelleen. Saatu tuote (li,8 g) di(netoksimetyyli)- 3-karbamoyylioksiπetyyli-7"metoksi-7y^”Z(D-5,-trikloorietoksikarbonyyliamino-5'-karboksivaleryyli)-tienyyliasetyyliamino/-3-kefeemi-l*-karboksylaatti liuotetaan 230 ml:aan etyyliasetaattia ja käytetään seuraavassa vaiheessa.

C. Metoksimetyyli-Vkarbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-7 /3 -(2-tienyyli-asetami do)-3_kefeemi-^-karboksylaatti

Etyyliasetaattiliuos lisätään 500 ml:an, 3-kaulaiseen, pyöröpohjäiseen pulloon, joka on varustettu lämpömittarilla, mekaanisella sekoittajalla ja typpijoh-dolla. Lisätään 50,6 g sinkkipölyä ja liuosta sekoitetaan samalla kun lisätään 11,5 ml jääctikkaa. Sen jälkeen kun kaikki reagenssit on lisätty tapahtuu reaktio typpiatmosfäärissä 25°C:ssa 1 tunnin ajan. Sinkki suodatetaan pois ja pestään etyyliasetaatilla (2 x 75 ml). Suodos pestään kahdesti 150 ml:lla vettä ja kerran 150 ml:11a kylmiä 2,5 $:sta natriumbikarbonaattia ja sen jälkeen kerran 100 ml:11a 27 57953 kyllästettyä natriumkloridia. Etyyliasetaattiliuos kuivataan natriumsulfaatilla, suodatetaan ja väkevöidään, jolloin saadaan 6,U g tuotetta kumimaisena aineena.

Jäähdytettyyn (0-U°C), laipalla varustettuun kolonniin (2,5 cm sisähalkaisija pannaan tuote, jossa on 6¾ g silikageeliä (60-200 meshia) 200 mlrssa metyleeniklo-ridia. Silikageelin annetaan laskeutua ja ylimäärä metyleenikloridia juoksutetaan pois kerroksen pintaan. Siihen lisätään 6,U g jäännöstä mahdollisimman pienessä määrässä metyleenikloridia (5—10 ml), pullo ja kolonni pestään hyvin metyleeniklo-ridilla (10 ml) ja sen jälkeen kolonni eluoidaan kahdella litralla Uo #:sta etyy-liasetaatti/bentseeni-liuosta ottamalla 60 ml:n fraktioita. Sen jälkeen fraktiot _ väkevöidään kuiviin. Fraktiot 10-1Ö, jotka sisältävät tuotteet, haihdutetaan, jolloin saadaan 2,9 g (metoksimetyyli)-3-karbamoyylioksimetyyli-7-raetoksi-ir/£-(2-tienyyliasetamido)-3~kefeerai-U-karboksylaattia.

^ Tuote (2,6U g) liuotetaan metyleenikloridiin (150 ml) ja suodatetaan. Tähän liuokseen lisätään etanolia (20 ml) ja väkevöidään huoneen lämpötilassa pyörivässä haihduttimessa tilavuuteen noin 20 ml: Tähän tilavuuteen lisätään vielä 20 ml etanolia ja väkevöidään tilavuuteen noin 30 ml. Liuos ympätään ja annetaan kiteytyä, jolloin saadaan 2,1 g puhdasta esteriä, sp. 151-153°C.

D. 3-karbamoyylioksimetyyli-7_metoksi-7yi>-(2-tienyyliasetamido)-3-kefeemi-ä-karbonihappo

Suspensiota, jossa on 920 mg metoksimetyyliesteriä 9,2 ml:ssa metanolia (sisältäen 10 % väkevää HCl), sekoitetaan huoneen lämpötilassa 50 minuuttia.

Reaktion päättyminen todetaan tlc-analyysin avulla käyttämällä etyyliasetaatti/ bentseeni 6:k järjestelmää. Lisätään varovaisesti kylmä liuos, jossa on 1,65 g NaHCO^ ^0 mlrssa vettä, ja kirkas liuos väkevöidään tilavuuteen 30-35 ml huoneen lämpötilassa tyhjössä. Vesiliuos uutetaan etyyliasetaatilla neutraalisten epäpuh-tauksien poistamiseksi ja orgaaninen kerros hylätään. Vesikerros jäähdytetään 0-5°C:seen, kaadetaan päälle etyyliasetaattia (Uo ml) ja pH säädetään arvoon 1,8 kylmällä 10 #:lla HClrllä samalla jatkuvasti sekoittaen. Kerrokset erotetaan ja etyyliasetaattikerros pestään kolmasti 3 ml:11a jäävettä. Vesikerros ja pesunesteet yhdistetään ja sen jälkeen uutetaan takaisin kahdesti 20 ml:11a etyyliasetaattia. Toinen etyyliasetaattiuute pestään kahdesti kylmällä vedellä ja yhdistetään ensimmäisen uutteen kanssa. Liuotin haihdutetaan kuiviin ja huuhdotaan 10 ml:11a bentseeni/metanolia (8:2) ja kuivataan vakiopainoon 830 mg. Kiteytettäessä raakatuote uudelleen metanoli/etyyliasetaatista saadaan 630 mg 3-karbanoyyli-oksirnetyyli-7-raetoksi-y^ -(2-tienyyliasetamido)-3-kefeemi-ä-karbonihappoa.

57953 k 28

Esimerkki 10 S-karbaniDyylioksimetyyli-V-metoksi-?/®-(2-tienyyliasetamido)“3-kefeemi-4- karbonihappo A. 3-karbanoyylioksiinetyyli-7-metoksi-7/^-(D-5-trikloorietoksikarbonyyli-amino-5-karboksivaleramido)-3-kefeemi-4-karbonihapon di-bentsyylioksi-metyyliesteri

Suspensiota, jossa on 985 mg 3-karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-7/£-(D-5-triklcorietoksikarbonyyliamino-5-karboksivaleramido)-3-kefeemi-4-karbonihapon bis-disykloheksyyliamiinisuolaa 17 mlrssa metyleenikloridia 0-l°C:ssa, käsitellään 0,294 ml:11a kloorimetyylibentsyylieetteriä 5 ml:ssa metyleenikloridia 52 minuutin aikana. 4 tunnin kuluttua reaktioseos suodatetaan ja suodosta käsitellään kahdesti 5 ml :11a kylmää kyllästettyä natriumbikarbonaattia, kahdesti 10 ml:11a jäävettä, sitten kuivataan natriumsulfaatilla ja suodatetaan. Suodos väkevöidään jäännökseksi, se lietetään 15 ml:n kanssa isopropyylieetteriä ja otsikoitu tuote saadaan kiinteänä aineena suppilossa (726 mg).

B. 3-karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-7/&- φ- 5-trikloorietoksikarbonyyliami-no-5-karboksivaleryyli-(2-tienyyliasetyyli)amino?-3-kefeemi-4-karboni-hapon di-bentsyylioksimetyyliesteri

Liuosta, jossa on 0,20 g di-bentsyylioksimetyyliesteriä 1,6 ml:ssa metyleenikloridia, käsitellään 0,222 ml:11a «a(rpineeniä, 0,20 ml:11a etyyli-N-trimetyy-lisilyylikarbamaattia ja 0,115 ml:11a 2-tienyyliasetyylikloridia paluujäähdytys-lämpötilassa 23 tuntia. Reaktioseos uutetaan 2 ml:11a jääkylmää liuosta, joka sisältää 2,5 % natriumbikarbonaattia ja 10 % natriumkloridia ja metyleenikloridi-liuos pestään 2 ml:11a kyllästettyä natriumkloridiliuosta, kuivataan magnesiumsulfaatilla, suodatetaan ja suodos lisätään 50 ml:aan kylmää heksaania otsikoidun tuotteen saamiseksi saostumana; paino 0,161 g.

C. Bentsyylioksimetyyli-3-karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi- 7/3 -(2-tienyyliasetamido ) -3-kefeemi-4-karboksylaatti

Liuosta, jossa on 0,150 g kohdan B mukaan valmistettua imidiä 4,1 ml:ssa dioksaania, joka sisältää 0,20 ml etikkahappoa, käsitellään 0,86 g:11a aktivoitua sinkkiä 2 1/2 tuntia. Reaktioseos suodatetaan ja jäännös pestään suppilossa 20 ml:11a kloroformia. Yhdistetty suodos pestään kahdesti 20 ml:11a vettä, 10 ml:11a kylmää kyllästettyä natriumbikarbonaattia, 10 ml:11a kyllästettyä natriumkloridia, sitten kuivataan magnesiumsulfaatilla, suodatetaan ja väkevöidään 0,143 g:n saamiseksi jäännöstä, joka sisältää bentsyylioksimetyyliesterin.

29 5 7 9 5 3 D. 3-karbaiiDyylioksijnetyyli-7-inetoksi-y<i>-(2-tienyyliasetaJiu.do)-3-kefeemi-4 -karbonihappo 25,4 mg bentsyylioksimetyyliesteriä liuotetaan 0,25 ml:aan liuosta, joka on tehty 9 ml: s ta metanolia ja 1 ml:sta väkevää kloori vetyhappoa. 1 tunnin kuluttua reaktio on päättynyt ja tuote eroitetaan väkevöimällä tyhjössä, jolloin saadaan 44 %:n saalis.

Esimerkki 11 3 -karbamoyy 1 ioks ime tyyli- 7 -metoks i- 7/2> - ( 2-tienyyliasetamido )-3-kefeemi-4- karbonihapon metoks imetyy lies teri A. 7-<D-5-klooriasetajnidoadipamido)-7-metoksi-3-karbamDyylioksimetyyli-3-kefeemi-4-karbonihappo 14,2 g (63,6 %:n puhdas) l/5>-(D-5-amino-5-karboksivaleramido) -3-karbarrD-yy1ioks imetyy1i-7-metoksi-3-kefeemi-4-karbonihapon mononatriumsuolaa liuotetaan 200 ml:aan jääkyljieä vesiliuosta, jossa on 4,9 ml .85 % H^PO^ (säädetty pH-arvoon 7,0 50 % NaOH) ja joka on kylmävaippaisessa Waring-sekoittajassa. pH-elektrodi ripustetaan liuokseen ja samalla kun sekoitetaan mahdollisiirman voimakkaasti pH säädetään arvoon 11,0. 4,0 ml:n määrä juuri tislattua klooriasetyylikloridia lisätään ja pH:ta ylläpidetään arvossa 10,5-11,0 lisäämällä Na0H:ta. Samalla tavalla panostetaan lisää happokloridia (4,0 ml, sitten 2,0 ml) ja 10 minuutin voimakkaan sekoituksen jälkeen voidaan todeta juuttuminen otsikoiduksi yhdisteeksi tapahtuneen täydellisesti ohutkerroskromatografiän avulla.

Reaktioseosta sekoitetaan yhtä suuren tilavuuden kanssa etyyliasetaattia ja tehdään happameksi väkevällä HCl:llä pH-arvoon 1,7 saakka 0°C:ssa. Kerrokset erotetaan ja uuttaminen toistetaan käyttäen neljää uutta tilavuutta etyyliasetaattia, joka sisältää 1 ml etikkahappoa. Yhdistetyt uutteet kuivataan natriumsulfaa-tiliä, väkevöidään tyhjössä ja keltainen Öljymäinen tähde saostetaan 300 ml:sta bentseeniä. Otsikoitu raakayhdiste (5,35 g, 51 %, noin 60 % puhdasta) otetaan talteen sentrifugoimalla.

B. 3-karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-7- (D- 5-klooriasetamidoadipamido)-3-kefeemi-4-karbonihapon di-metoksimetyyliesteri 100 mliaan seulakuivattua metyleenikloridia lisätään 1,35 ml syurkollidiinia ja 2,68 g (5,13 mmoolia) kohdan A mukaan saatua tuotetta. Vaaleankeltainen suspensio jäähdytetään 5°C:seen typpiatmosfäärissä ja lisätään 20,335 ml:n erää CICH^OCH^ samalla nopeasti sekoittaen ja pitärrällä reaktiolämpötila 5-lU°C:ssa.

Seosta sekoitetaan 45 minuuttia ja lisätään 10 % lisää kollidiinia ja CIQ^OCH^. Kaikkiaan 1,75 tunnin kuluttua seos suodatetaan. Suodos pestään kolmasti 50 ml:n erillä jäävettä, 50 ml:11a kyllästettyä NaCl-liuosta ja kuivataan natriumsulfaa-Lilla. Suodaletut uutteet väkevöidään tyhjössä, jolloin saadaan 1,80 g raakaa dies-teriä, joka puhdistetaan krorratografoinalla käyttäen 30 g karkeata silikageeliä.

30 5 7 9 5 3

Eluoitaessa 400-500 ml:11a saadaan sivutuotteet ja eluoimalla 500 ml :11a etyyliasetaattia saadaan 1,22 g valkoista amorfista otsikoitua diesteriä.

C. Di (metoks imetyyli)-3-karbamoyy1ioksimetyy1i-7-metoksi-7 /i-/D-5-kloori~ asetamidoadipoyyli-(2-tienyyliasetyyli)-amino/-3-kef earii-4-karboksy laa tt i 100 mg:aan kohdan B mukaan saatua tuotetta suljetussa hypopuliossa lisätään 0,350 ml etanolista vapaata CHCl^, 0,068 ml etyyli-N-trimetyylisilyylikarba-raattia (0 ,395 mmoolia) ja 2-tienyyliasetyylikloridia (0,034 ml, 0,274 mmoolia) Homogeenista seosta kuumennetaan 4 tuntia 50°C:ssa ja sen jälkeen annetaan seistä 25 tuntia huoneen lämpötilassa. Reaktioseos saostetaan 3 tilavuudesta kuivaa heksaania ja sakka otetaan talteen sentrifugoimalla, liuotetaan CH^Cl^^aan ja - liuos väkevöidään tyhjössä vaaleankeltaiseksi vaahdoksi; saalis 80 mg. Chutkerros-kronatografia ja NMR-spektri osoittaa, 'että tämä aine on olennaisesti puhdas otsikoitu yhdiste.

D. 3 -karbamoyy lioks imetyy li- 7 -metoks i-1/2> - (2 -t ienyyliaset amido) - 3-ke feemi- 4-karöonihapon metoksimetyyliesteri

Kohdan C mukaan saatu raaka imidi (20 mg) 0,250 ml:ssa absoluuttista etanolia käsitellään 5 mg:11a tioureaa 24 tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Metoksimetyyliesteri todetaan olevan läsnä ohutkerroskromatografian avulla ja lähtöimidi on täydellisesti reagoinut.

Vaihtoehtoisesti raakaa imidiä (25 mg) ja sinkkipölyä (100 mg) käsitellään seoksella, jossa on 0,5 ml etyyliasetaattia ja 0,025 ml jääetikkaa. 4 tunnin kuluttua huoneenlämpötilassa otsikoidun tuotteen läsnäolo todetaan ohutkerroskro-matografian avulla.

Esimerkki 12

Metoksimetyyli-3-karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-7(2-tienyyliasetamido)- 3-kefeemi-4-karboksylaatti

Seokseen, jossa on 6,75 ml ς/,-pieneeniä ja 12 ml dikloorietaania, lisätään 5,55 mg N-trimetyylisilyylibentseenisulfonamidia, 3,5 ml 2-tienyyliasetyylikloridia ja 500 mg metoksimetyyli- Ψ -(D-5-trikloorietoksikarbonyyliamino-5-karboksivalerami-do)-3-karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-3-kefeemi-4-karboksylaattia. Saatua reaktio-seosta kuumennetaan paluujäähdyttäen 65°C:ssa 10 tuntia. 3,4 ml saatua liuosta 31 57953 jäähdytetään kuivalla jäällä ja sitten lämmitetään paluujäähdytyslämpötilaan. Saatu liuos sisältäen kiinteitä kiteitä laimennetaan 100 ml:ksi dikloorietannilla. Saadun liuoksen analyysi osoittaa että läsnä on l»l,8 mg otsikoitua tuotetta.

Esimerkki 13 3-karbaraoyylioksimetyyli-7“metoksi-7/3-(2-tienyyliasetamido)-3-kefeemi-l*~ karbonihappo

Lietteeseen, jossa on 200 mg '£/2»-(D-5,“t-butoksikarbonyyliamino-5,-karboksi-valeramido)-3-karbamoyylioksimetyyli-7-metoksi-3-kefeemi-U-karbonihappoa 2 ml:ssa etanolista vapaata kloroformia, lisätään U32 mg N-trimetyylisilyylitrifluoriasetami-- dia ja 0,56 mg trietyyliamiinia. Tähän seokseen lisätään 182 ^ul tienyyliasetyyli- kloridia. Liuosta kuumennetaan öljyhauteella U5°C:ssa 9 1/2 tuntia. Sitten seos jäähdytetään lisäämällä n-heksaania. Liuos sentrifugoidaan ja heksaani kaadetaan pois kumiinaisesta aineesta. Tämä käsittely toistetaan ja heksaanifraktiot hylätään. Kumimainen aine liuotetaan 10 ml:aan muurahaishappoa 30 minuutin aikana. Muurahaishappo poistetaan tyhjössä. Kiinteä aine jaetaan etyyliasetaatin (3 ml) ja veden (3 ml) kesken ja pH säädetään arvoon 2,5. Etyyliasetaattikerros väkevöidään kuiviin. Sekä TLC-analyysi että neste-kromatografia osoittaa 3-karbamoyylioksimetyyli-7~nie-toksi-7^0 -(2-tienyyliasetarnido)-3-kefeemi-l4-karbonihapon läsnäolon. Raakatuote puhdistetaan preparatiivisella TLC:llä käyttäen silikageelilevyjä ja liuotinta, jossa on bentseeniä, metanolia ja etikkahappoa suhteessa 50:10:6, jolloin saadaan 20 mg otsikoitua yhdistettä.

Esimerkki lh 3-karbamoyylroksimetyyli-7-metoksi-7/2'*'(2-tienyyliasetamido)-3-kefeemi-li*" karbonihappo

Lietteeseen, jossa on 200 mg 7/>-(D-5-araino-5-karboksivaleramido)-3-karbemo-yylioksimetyyli-7~metoksi-3-kefeerai-ä-karbonihappoa 2 ral:ssa etanolista vapaata kloroformia, lisätään 1*30 mg N-trimetyylisilyylibentseenisulfonamidia ja 0,6 mg trietyyliamiinia. Tähän seokseen lisätään 162 ^ul tienyyliasetyylikloridia. Liuosta kuumennetaan öljyhauteella l*5°C:ssa 10 tuntia. Sitten seos jäähdytetään lisäämällä n-heksaania. Liuos sentrifugoidaan ja heksaani kaadetaan pois kumimaisesta aineesta. Tämä käsittely toistetaan kahdesti ja heksaanifraktiot hylätään. Kumimainen aine jaetaan etyyliasetaatin (3 ml) ja veden (3 ml) kesken ja pH säädetään arvoon 2,5. Etyyliasetaattikerros väkevöidään kuiviin, jolloin saadaan sekä Tl.C-analyysin että neste-kromatcgrafian mukaen raaka 3~karbaraoyylioksimetyyli-7-metoksi-7y£-(2-tienyyliasetur.ido)-3-kefoewi-l»-karbonihappo. Ruokatuote puhdistetaan preparatiivisella TI.C:llä käyttäen silikageelilevyjä ja liuotinta, jossa on bentseeniä, metanolia ja etikkahappoa suhteessa 50:10:6, jolloin saadaan 25 mg otsikoitua yhdistettä.

Claims (1)

1. 57953 32 Patenttivaatimus: Menetelmä 7-aminokefalosporaanihappojohdannaisten valmistamiseksi, joilla on antibioottinen vaikutus ja joilla on kaava: )CH3 R ' -NH--— JCH2A CD 0 ' 8 COOR0 jossa R' on 2-tienyyliasetyyli, 2-furyyliasetyyli, fenyyliasetyyli, o^-atsidofenyyliasetyyli tai fenyylitioasetyyli, A on vety tai karba- O moyylioksi, ja R on vety tai natrium tai kalium, tunnettu siitä, että käsitellään yhdistettä, jolla on kaava: 0CH3 NHR2 0 S f lt / h-c-(ch2>3-c-nh--r COOR3 l Γ„ Λ ^-CH2A COOR8 81 8 jossa h merkitsee samaa kuin edellä, R merkitsee samaa kuin R tai esteritähdettä, o 3 K cai alkoksikarbonyyliryhmä, joka mahdollisesti on halogenoitu, ja R on esteri-tähde, kaavan R'-X mukaisella asyylihaloaenidilla, jossa R’ merkitsee samaa kuin edellä ja X on halogeeni, bis-(tri-metyylisilyyli)-trifluoriasetamidin, N-trimetyylisilyyli-trifluori-asetamidin, N-trimetyylisilyyli-ftalimidin, etyyli-N-trimetyylisilyyli-karbamaatin tai N-trimetyylisilyylibentseenisulfonamidin läsnäollesssa, minkä jälkeen 5-alkoksikarbonyyliamino-5-karboksivaleryyliryhmä yhdisteessä, jolla on kaava: NHR2 0 OCH- c i n 3 ύ \ H-C-(CH-).-C-N__-—^ N COOR3 R’ 1 // —CH2A COOR8 33 57953 2 3 81 jossa R*, R , R , R ja A merkitsevät samaa kuin edellä, lohkaistaan, ja että mikäli saatu kaavan (I) mukainen tuote on esteri se lohkaistaan vastaavaksi vapaaksi hapoksi tai suolaksi ja haluttaessa suola muutetaan vastaavaksi hapoksi tai vapaa happo muutetaan vastaavaksi suolaksi. 57953 34 Förfarande för framställning av 7-aminocefalosporansyraderivat med antibiotisk aktivitet och med formeln DCH3 / SN> R'-NH--f ^ J,-Nn^L CH2A (I) () COOR8 väri R' är 2-tienylacetyl, 2-furylacetyl, fenylacetyl, c<-azidofenyl- ö acetyl eller fenyltioacetyl, A är väte eller karbamoyloxi, och R är väte eller natrium eller kalium, kännetecknat därav, att man behandlar en förening med formeln 0CH3 NHR2 0 S I II / \ h-c-(ch2)3-c-nh--r COOR3 l ru Δ S--CH2A COOR8' 81 8 väri A har ovan amivna betydelse, P betecknar detsamma san R eller betecknar en 2 3 esterrest, P.' är en a]>oxikarhonylorupp, san eventuellt är halogenerad, och R är en f esterrest, med en ecylhalogenid med formeln R'-X, väri R har ovan angivna betydelse och X är halogen, i närvaro av bis-(trimetylsilyl)-trifluoracetamid, N-trimetylsilyl-trifluoracetamid, N-trimetylsilyl-ftalimid, etyl-N-trimetylsilylkarbamat eller N-trimetylsilylbensen-sulfonamid, varefter 5-alkoxikarbonylamino~5-karboxivalerylgruppen i föreningen med formeln: NHR2 0 OCH, H-C-(CH2)3-C-N 4—Y N COOR3 R’ J>-NY*J-CV I o· COOR0