FI123201B - Maitopohjainen tuote ja valmistusmenetelmä - Google Patents

Maitopohjainen tuote ja valmistusmenetelmä Download PDF

Info

Publication number
FI123201B
FI123201B FI20106137A FI20106137A FI123201B FI 123201 B FI123201 B FI 123201B FI 20106137 A FI20106137 A FI 20106137A FI 20106137 A FI20106137 A FI 20106137A FI 123201 B FI123201 B FI 123201B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
milk
lactose
protein
milk product
retentate
Prior art date
Application number
FI20106137A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI20106137A0 (fi
FI20106137L (fi
FI20106137A (fi
Inventor
Olli Tossavainen
Timo Sibakov
Original Assignee
Valio Oy
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=43064292&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=FI123201(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Valio Oy filed Critical Valio Oy
Priority to FI20106137A priority Critical patent/FI123201B/fi
Publication of FI20106137A0 publication Critical patent/FI20106137A0/fi
Priority to CN201710242072.0A priority patent/CN106962480A/zh
Priority to JP2013535474A priority patent/JP2013540447A/ja
Priority to RU2013124801/10A priority patent/RU2585236C2/ru
Priority to LTEP11785712.8T priority patent/LT2632277T/lt
Priority to CN2011800521287A priority patent/CN103188942A/zh
Priority to DK11785712.8T priority patent/DK2632277T3/en
Priority to AU2011322448A priority patent/AU2011322448B2/en
Priority to US13/880,453 priority patent/US11039626B2/en
Priority to KR1020137013650A priority patent/KR101882038B1/ko
Priority to ES11785712.8T priority patent/ES2666293T3/es
Priority to PCT/FI2011/050934 priority patent/WO2012056106A1/en
Priority to EP11785712.8A priority patent/EP2632277B1/en
Priority to PL11785712T priority patent/PL2632277T3/pl
Publication of FI20106137L publication Critical patent/FI20106137L/fi
Publication of FI20106137A publication Critical patent/FI20106137A/fi
Publication of FI123201B publication Critical patent/FI123201B/fi
Application granted granted Critical
Priority to JP2016102305A priority patent/JP6693807B2/ja

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23CDAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/15Reconstituted or recombined milk products containing neither non-milk fat nor non-milk proteins
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23JPROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J3/00Working-up of proteins for foodstuffs
    • A23J3/30Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis
    • A23J3/32Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents
    • A23J3/34Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents using enzymes
    • A23J3/341Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents using enzymes of animal proteins
    • A23J3/343Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents using enzymes of animal proteins of dairy proteins
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23CDAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/1203Addition of, or treatment with, enzymes or microorganisms other than lactobacteriaceae
    • A23C9/1206Lactose hydrolysing enzymes, e.g. lactase, beta-galactosidase
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23CDAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23CDAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23CDAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/1203Addition of, or treatment with, enzymes or microorganisms other than lactobacteriaceae
    • A23C9/1209Proteolytic or milk coagulating enzymes, e.g. trypsine
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23CDAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/1203Addition of, or treatment with, enzymes or microorganisms other than lactobacteriaceae
    • A23C9/1216Other enzymes
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23CDAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/14Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations in which the chemical composition of the milk is modified by non-chemical treatment
    • A23C9/142Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations in which the chemical composition of the milk is modified by non-chemical treatment by dialysis, reverse osmosis or ultrafiltration
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23CDAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/14Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations in which the chemical composition of the milk is modified by non-chemical treatment
    • A23C9/142Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations in which the chemical composition of the milk is modified by non-chemical treatment by dialysis, reverse osmosis or ultrafiltration
    • A23C9/1422Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations in which the chemical composition of the milk is modified by non-chemical treatment by dialysis, reverse osmosis or ultrafiltration by ultrafiltration, microfiltration or diafiltration of milk, e.g. for separating protein and lactose; Treatment of the UF permeate
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23CDAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/14Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations in which the chemical composition of the milk is modified by non-chemical treatment
    • A23C9/142Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations in which the chemical composition of the milk is modified by non-chemical treatment by dialysis, reverse osmosis or ultrafiltration
    • A23C9/1425Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations in which the chemical composition of the milk is modified by non-chemical treatment by dialysis, reverse osmosis or ultrafiltration by ultrafiltration, microfiltration or diafiltration of whey, e.g. treatment of the UF permeate
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23CDAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/14Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations in which the chemical composition of the milk is modified by non-chemical treatment
    • A23C9/142Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations in which the chemical composition of the milk is modified by non-chemical treatment by dialysis, reverse osmosis or ultrafiltration
    • A23C9/1427Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations in which the chemical composition of the milk is modified by non-chemical treatment by dialysis, reverse osmosis or ultrafiltration by dialysis, reverse osmosis or hyperfiltration, e.g. for concentrating or desalting
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23CDAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/14Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations in which the chemical composition of the milk is modified by non-chemical treatment
    • A23C9/146Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations in which the chemical composition of the milk is modified by non-chemical treatment by ion-exchange
    • A23C9/1465Chromatographic separation of protein or lactose fraction; Adsorption of protein or lactose fraction followed by elution
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23JPROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J3/00Working-up of proteins for foodstuffs
    • A23J3/04Animal proteins
    • A23J3/08Dairy proteins
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23JPROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J3/00Working-up of proteins for foodstuffs
    • A23J3/30Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis
    • A23J3/32Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents
    • A23J3/34Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents using enzymes
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/06Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12YENZYMES
    • C12Y302/00Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01023Beta-galactosidase (3.2.1.23), i.e. exo-(1-->4)-beta-D-galactanase
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12YENZYMES
    • C12Y304/00Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)

Description

Maitopohjainen tuote ja valmistusmenetelmä Keksinnön ala
Keksintö koskee maitopohjaista tuotetta, joka sopii laktoosi-intoleranssista ja/tai maitoproteiinin haittavaikutuksista kärsiville ihmisille. Tarkemmin 5 sanottuna keksintö koskee vähälaktoosista maitopohjaista tuotetta, jossa maito-proteiini hydrolysoidaan proteaasilla vaikuttamatta negatiivisesti maitopohjaisen tuotteen aistinvaraisiin ominaisuuksiin. Keksintö koskee myös menetelmää pro-teiinihydrolysoidun ja vähälaktoosisen maitotuotteen valmistamiseksi.
Keksinnön tausta 10 Maidon suotuisat monimutkaiset vaikutukset nisäkkäiden terveyteen ovat laajalti tiedossa. Esimerkiksi on havaittu voimakas käänteinen korrelaatio maitotuotteiden säännöllisen ja suuren kulutuksen sekä ylipainoisten aikuisten metabolisen oireyhtymän kehittymisen välillä. Lisäksi maito on erinomainen kalsiumin lähde, joka voi vaikuttaa kunnolliseen luun muodostukseen nuoruu-15 dessa. Maitoa ei kuluteta pelkästään sen arvokkaan ravinnekoostumuksen vuoksi vaan siitä on myös tullut päivittäisten aterioiden yhteydessä yleisesti juotava juoma erityisesti lapsilla. Kuitenkin on yhä enemmän ihmisiä, jotka kärsivät gastrointestinaalisista ongelmista käyttäessään maitotuotteita. Ongelmat voivat johtua kahdesta pääsyystä, toisin sanoen laktoosi-intoleranssista ja mai-20 toproteiinin haittavaikutuksista (jaettuna immuunivälitteiseen yliherkkyyteen, eli maitoallergiaan, ja ei-immuunivälitteiseen intoleranssiin, eli maitoproteiini-intoleranssiin). Intoleranssin aiheuttaa substraatin riittämätön pilkkoutuminen suolessa, esimerkiksi laktoosin riittämätön pilkkoutuminen laktaasientsyymillä, ja se pahenee tyypillisesti iän mukana, kun taas maitoallergian aiheuttaa hai- ^ 25 iällinen immuunireaktio eläinten, tyypillisesti lehmän, maidon proteiinille, ja sitä o ^ tavataan normaalisti lapsissa, mutta yleensä se häviää kouluikään mennessä.
Y Nämä oireet vältetään tarjoamalla vähälaktoosisia tai laktoosittomia maitotuot- £5 teitä laktoosi-intolerantikoille ja proteiinimuunnettuja tuotteita, kuten äidin- x maidonvastikkeita, lapsille. Aikuisilla laktoosi-intoleranssi on pääsyy maitotuot- 30 teiden välttämiseen.
£2 Laktoosi-intoleranssin ja maitoproteiiniyliherkkyyden oireet voivat o vaihdella yksilöllisesti mutta ovat hyvin samankaltaisia keskenään. Pääoireet ° ovat gastrointestinaalisia ja sisältävät ilmavaivoja, vatsan kurinaa/möyrintää, turvotusta, vatsakipuja ja vastaavia. Esimerkiksi Hughes et ai. ovat esittäneet, 35 että sulamatta jääneet proteiinit aiheuttavat deaminoinnin ja fermentaation seu- 2
Tauksena kaasunmuodostusta paksusuolessa [(Hughes, R., Magee, E.A.M., Bingham, S., Protein degradation in the large intestine, Curr. Issues Intest. Microbiol. 1(2) (2000): 51:58], JP 2002-000291 kuvaa menetelmän vähälaktoosisen maitoproteiini-5 hydrolysaatin tuottamiseksi niin, että maitoproteiiniraaka-aine käsitellään lak-taasilla ja proteolyyttisellä entsyymillä. Vähälaktoosinen maitosokerin hajoamistuote otetaan talteen nanosuodatuksella. Laktoosin hydrolyysi ja proteolyysi voidaan toteuttaa joko samanaikaisesti tai peräkkäin halutussa järjestyksessä, ja nanosuodatus tehdään kussakin tapauksessa laktoosihydrolyysin jälkeen. 10 Maitoproteiinihydrolysaatin on todettu olevan sopiva laktoosi-intolerantikoille ja ruoka-allergikoille.
US 2002/0192333 A1 kuvaa happokoaguloimisen kestävän maidon, jota on käsitelty proteaasilla maidon kalsiumin saannin parantamiseksi eläimessä. Proteaasikäsitellyn maidon ulkomuoto ja maku säilyvät muuttumatto-15 minä.
US 2005/0244542 A1 kuvaa happokoaguloimisen kestävän maidon, jonka kalsiumin absorboituminen on lisääntynyt ja aistinvaraiset ominaisuudet ovat muuttumattomat. Maito lämmitetään ensin noin 40 °C:seen ja 90 °C:seen ja käsitellään sitten proteaasientsyymillä.
20 Vähälaktoosisia tai laktoosittomia maitotuotteita on ollut markkinoilla saatavilla jo useita vuosia. On kuitenkin havaittu, että hyvin vähälaktoosiset alle 0,01 % laktoosia sisältävät maitotuotteet eivät sovi kaikille laktoosi-intolerantikoille, vaan voivat aiheuttaa gastrointestinaalisia ongelmia joillekin kuluttajille. Näin ollen on edelleen tarpeen saada maitopohjaisia tuotteita, joiden avulla 25 maitotuotteiden aiheuttamat tyypilliset gastrointestinaaliset oireet vältetään.
^ Keksinnön lyhyt kuvaus o ^ Olemme nyt yllättäen todenneet, että vähälaktoosisten maitotuottei- V den aiheuttamia oireita voidaan vähentää muuntamalla näiden tuotteiden maito- o proteiineja proteaasientsyymillä. Tarkemmin sanottuna totesimme yllättäen, että ir 30 jopa vähäinen maitoproteiinien hydrolyysi vähälaktoosisessa maidossa vähensi ^ vatsaoireiden voimakkuutta verrattuna tavalliseen laktoosittomaan maitoon.
CO
S
o δ
CVJ
3
Keksinnön eräänä piirteenä on antaa käyttöön proteiinihydrolysoitu vähälaktoosinen maitotuote, jonka proteiinien ja hiilihydraattien suhde on alueella 0,5-5 painon mukaan. Yllättäen keksinnön mukaisista maitotuotteista puuttuvat proteiinihydrolysoitujen maitotuotteiden tyypilliset proteolyyttisten 5 entsyymien aiheuttamat makuvirheet, mutta niiden ulkomuoto ja aistinvaraiset ominaisuudet, kuten maku ja suutuntuma, ovat samanlaiset kuin tavallisissa maitotuotteissa.
Keksinnön eräänä toisena piirteenä on antaa käyttöön menetelmä proteiinihydrolysoidun vähälaktoosisen maitotuotteen, jonka proteiinien suhde 10 hiilihydraatteihin on alueella 0,5-5 painon mukaan, valmistamiseksi, jossa menetelmässä maitoraaka-aineelle tehdään laktoosin poisto ja proteaasikäsittely.
Piirustusten lyhyt kuvaus
Kuvio 1a esittää koehenkilöiden raportoimia suolisto-oireita ennen kuluttajatestiä.
15 Kuvio 1b esittää muutokset suolisto-oireissa 10 päivän kokeen jäl keen (p=0,039).
Kuvio 2a esittää muutokset oirepisteissä (1-7) ilmavaivojen kohdalla (p=0,014).
Kuvio 2b esittää muutokset oirepisteissä (1-7) turvotuksen kohdalla 20 (p=0,076).
Kuvio 2c esittää muutokset oirepisteissä (1-7) vatsakipujen kohdalla (p=0,47).
Kuvio 2d esittää muutokset oirepisteissä (1-7) kurinan/möyrinnän kohdalla (p=0,039).
cv 25 Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus δ ^ Tässä käytettyinä termejä "proteolysoitu" ja "proteiinihydrolysoitu" Y käytetään synonyymeinä.
£5 Tässä käytettyinä termejä "proteolyysi" ja "proteiinihydrolyysi" käyte- x tään synonyymeinä.
30 Tässä käytettynä termi "maitoraaka-aine" tarkoittaa maitoa, heraa ja £2 maidon ja heran yhdistelmiä sellaisenaan tai tiivisteenä tai esikäsiteltynä halu- o tulla tavalla, esimerkiksi lämpökäsiteltynä. Maitoraaka-aineeseen voidaan lisäni tä ainesosia, joita käytetään yleisesti maitotuotteiden valmistuksessa, esimer kiksi rasvaa, proteiinia, tuhkaa (mineraaleja) tai sokerifraktioita tai vastaavia. 35 Maitoraaka-aine voi siten olla esimerkiksi kokomaitoa, kermaa, vähärasvaista 4 tai rasvatonta maitoa, ultrasuodatettua maitoa, diasuodatettua maitoa, mik-rosuodatettua maitoa, maitoa, josta on poistettu heraproteiinia, maitojauheesta ennastettua maitoa, luomumaitoa tai näiden yhdistelmiä tai jostakin näistä laimennettua maitoa. Maito voi olla peräisin lehmästä, lampaasta, vuohesta, ka-5 melista, hevosesta tai mistä tahansa muusta eläimestä, jonka tuottama maito soveltuu ravinnoksi. Maitoraaka-aine on edullisesti vähärasvaista tai rasvatonta maitoa, edullisemmin rasvatonta maitoa.
Maitoraaka-aine voidaan lämpökäsitellä heraproteiinien denaturoin-nin ja siten maitoproteiinien pilkkoutumisen edistämiseksi.
10 Tässä käytettynä "vähälaktoosinen" tarkoittaa alle 1 %:n laktoosipi- toisuutta proteiinihydrolysoidussa maitotuotteessa. "Laktoositon" tarkoittaa sitä, että maitotuotteen laktoosipitoisuus on 0,5 g/annos (esimerkiksi nestemäisissä maidoissa 0,5 g/244 g, jolloin laktoosipitoisuus on enintään 0,21 %), mutta ei enempää kuin 0,5 %.
15 Keksinnön eräänä piirteenä on antaa käyttöön proteiinihydrolysoitu vähälaktoosinen maitotuote, jonka proteiinien suhde hiilihydraatteihin on alueella noin 0,5-5 painon mukaan. Suhde on edullisesti alueella 0,5-3. Eräässä suoritusmuodossa proteiinien suhde hiilihydraatteihin on noin 1.
Eräässä suoritusmuodossa proteiinien suhde tuhkaan on alueella 20 3-9 painon mukaan, edullisesti 3,5-7,5 painon mukaan.
Eräässä suoritusmuodossa proteiinien, hiilihydraattien ja tuhkan suhde on noin 1,12:1:0,26.
Vähälaktoosisia ja laktoosittomia maitotuotevalmisteita tunnetaan yleisesti. On esitelty useita prosesseja laktoosin poistamiseksi maidosta. Ta-25 vanomainen entsymaattinen prosessi laktoosin pilkkomiseksi tunnetaan yleisesti alalla ja käsittää vaiheen, jossa lisätään homeesta tai hiivasta saatua lak-
CM
5 taasia maitoon siten, että laktoosi pilkkoutuu monosakkarideiksi, toisin sanoen
C\J
^ glukoosiksi ja galaktoosiksi, yli 80-prosenttisesti.
T Laktoosi voidaan myös poistaa maitoraaka-aineesta esimerkiksi ° 30 käyttämällä kalvotekniikkaa. Yleisesti käytetään neljää peruskalvosuodatus- | prosessia: käänteisosmoosia (RO), nanosuodatusta (NF), ultrasuodatusta (UF) ^ ja mikrosuodatusta (MF). Näistä UF sopii lähinnä laktoosin erottamiseen mai-
CO
^ dosta. Käänteisosmoosia käytetään yleisesti tiivistämiseen, ultra-ja mikrosuo- ° datusta fraktiointiin ja nanosuodatusta sekä tiivistämiseen että fraktiointiin. On ^ 35 olemassa paljon kirjallisuutta, joka liittyy laktoosin poistoon maidosta erilaisilla ka I votekn i i ko i 11 a.
5
Lisäksi tunnetaan kromatografinen erotusprosessi laktoosin poistamiseksi maidosta, esimerkiksi Harju, M., EP 0226035. Esimerkiksi alalla tunnetussa menetelmässä maito fraktioidaan siten, että laktoosifraktio erotetaan ja suolat ovat proteiinifraktiossa tai proteiinirasvafraktiossa. Menetelmälle on 5 ominaista, että kationinvaihtohartsi tasapainotetaan saattamalla sen kationi-koostumus vastaamaan maidon kationikoostumusta ja maito käsitellään kro-matografisesti kolonnissa tasapainotetulla kationinvaihtohartsilla noin 50-80 °C:n lämpötilassa käyttämällä vettä eluoinnissa. Menetelmän etuna on se, että kaikki maulle olennaiset yhdisteet pysyvät maidossa.
10 Lisäksi laktoosi voidaan saostaa maitofraktioista. Laktoosin kiteyt- tämisen prosesseihin ja erotusprosesseihin liittyvää kirjallisuutta on runsaasti.
Esillä olevassa keksinnössä laktoosi voidaan poistaa maidosta millä tahansa alalla tunnetulla tavalla, kuten kalvotekniikoilla käyttämällä yhtä tai useampaa erilaista kalvosuodatusta mukaan lukien mikrosuodatus, ultrasuodatus, 15 nanosuodatus, diasuodatus ja käänteisosmoosi, laktoosihydrolyysillä, kro-matografialla, saostamalla tai millä tahansa näiden yhdistelmällä yhdessä tai useammassa vaiheessa. Esillä olevassa keksinnössä voidaan käyttää mitä tahansa alalla tunnettua laktoosihydrolyysiä varten tarkoitettua laktaasientsyymiä. Eräässä keksinnön suoritusmuodossa laktoosi poistetaan kalvotekniikoilla.
20 Eräässä suoritusmuodossa keksinnön mukaisen maitotuotteen lak- toosipitoisuus on alle 1 painoprosenttia, edullisesti alle 0,1 painoprosenttia, vielä edullisemmin alle 0,01 painoprosenttia.
Keksinnössä maidon proteiinihydrolyysi voidaan tehdä millä tahansa alalla tunnetulla tavalla. Hydrolyysissä voidaan käyttää mitä tahansa sopivaa 25 proteaasientsyymiä. Proteiinin entsymaattinen pilkkominen on alalla yleisesti tunnettua, ja menetelmä käsittää vaiheen, jossa maitoon lisätään proteaasient-
CM
5 syymiä tai sen sekoituksia yleisesti tunnetuista entsyymi lähteistä, toisin sanoen c\j . kasveista ja mikro-organismeista, siten että proteiini pilkkoutuu peptideiksi ja v aminohapoiksi.
° 30 Proteiinihydrolysoidun vähälaktoosisen maitotuotteen proteiinihydro- | lyysiaste on ainakin 60 mg tyrosiinia litrassa proteiinihydrolysoitua maitoa, jon- ^ ka proteiinipitoisuus on noin 3,5 % (w/w).
CO
^ Keksinnön mukaisesti proteiinihydrolysoidun vähälaktoosisen maito- ? tuotteen liukoisen tyrosiinin pitoisuus on enintään 500 mg litrassa tuotetta, jon- ^ 35 ka proteiinipitoisuus on noin 3,5 % (w/w). Muissa suoritusmuodoissa liukoisen tyrosiinin määrä litraa kohden on 70 mg, 80 mg, 90 mg, 100 mg, 110 mg, 120 6 mg, 130 mg, 140 mg, 150 mg, 160 mg, 170 mg, 180 mg, 200 mg, 220 mg, 240 mg, 260 mg, 280 mg, 300 mg, 320 mg, 340 mg, 360 mg, 380 mg, 400 mg, 420 mg, 440 mg, 460 mg, 480 mg ja 500 mg.
Keksinnön eräänä toisena piirteenä on antaa käyttöön menetelmä 5 proteiinihydrolysoidun vähälaktoosisen maitotuotteen, jonka proteiinien suhde hiilihydraatteihin on alueella 0,5-5 painon mukaan, valmistamiseksi, jossa menetelmässä maitoraaka-aineelle tehdään laktoosin poisto ja proteaasikäsittely.
Laktoosin poistoja proteaasikäsittely voidaan tehdä samanaikaisesti tai peräkkäin, toisin sanoen, laktoosin poisto tehdään ennen proteaasikäsitte-10 lyä, sen aikana tai sen jälkeen. Eräässä suoritusmuodossa laktoosin poisto tehdään ennen proteaasikäsittelyä.
Eräässä keksinnön suoritusmuodossa laktoosi poistetaan maitoraa-ka-aineesta laktaasientsyymikäsittelyllä.
Eräs toinen keksinnön mukaisen menetelmän suoritusmuoto käsit-15 tää vaiheet, joissa: a) maitoraaka-aineelle tehdään yksi tai useampi kalvosuodatus vähälaktoosisen maitotuotteen tuottamiseksi, b) haluttaessa vähälaktoosinen maitotuote hydrolysoidaan laktaasil-la laktoosittoman maitotuotteen tuottamiseksi, 20 c) vähälaktoosiselle tai laktoosittomalle maitotuotteelle tehdään pro teaasikäsittely proteiinihydrolysoidun vähälaktoosisen maitotuotteen tuottamiseksi.
Eräässä keksinnön suoritusmuodossa vähälaktoosisessa maitotuotteessa oleva jäännöslaktoosi hydrolysoidaan vaiheessa b) monosakkarideiksi, 25 mikä on alalla tunnettua. Tämä voidaan tehdä kaupallisesti saatavissa olevilla laktaasientsyymeillä sinänsä tunnetulla tavalla. Eräässä suoritusmuodossa
CM
5 vaiheiden b) ja c) laktaasi-ja proteaasikäsittelyt tehdään samanaikaisesti.
CM
. Eräässä toisessa keksinnön suoritusmuodossa vähälaktoosinen V maitotuote valmistetaan vaiheilla, joissa: ° 30 a) maitoraaka-aineelle tehdään ultrasuodatus ultrasuodatusreten- | taatin ja ultrasuodatuspermeaatin tuottamiseksi, ^ b) ultrasuodatuspermeaatille tehdään nanosuodatus nanosuodatus- co ^ permeaatin ja nanosuodatusretentaatin tuottamiseksi, o δ
CM
7 c) nanosuodatuspermeaatti palautetaan ultrasuodatusretentaattiin vähälaktoosisen maitotuotteen tuottamiseksi.
Vielä eräässä suoritusmuodossa vähälaktoosinen maitotuote valmistetaan vaiheilla, joissa: 5 a) maitoraaka-aineelle tehdään ultrasuodatus ultrasuodatusreten- taatin ja ultrasuodatuspermeaatin tuottamiseksi, b) ultrasuodatuspermeaatille tehdään nanosuodatus nanosuodatus-permeaatin ja nanosuodatusretentaatin tuottamiseksi, c) nanosuodatuspermeaatti tiivistetään käänteisosmoosilla (RO) 10 RO-retentaatin ja RO-permeaatin tuottamiseksi, d) RO-retentaatti palautetaan ultrasuodatusretentaattiin vähälaktoosisen maitotuotteen tuottamiseksi.
Vielä eräässä suoritusmuodossa maitoraaka-aineelle tehdään mik-rosuodatus vähälaktoosisen maitotuotteen tuottamiseksi mikrosuodatusreten-15 taattina. Mikrosuodatuksessa heraproteiinit, jotka sisältävät pääasiassa β-laktoglobuliinia ja a-laktalbumiinia, tiivistetään mikrosuodatuspermeaatiksi ja kaseiini mikrosuodatusretentaatiksi. Siten mikrosuodatus mahdollistaa maito-raaka-aineessa olevien β-laktoglobuliinin ja a-laktalbumiinin osuuksien muuttamisen halutulla tavalla. Mikrosuodatus voidaan tehdä korkeassa lämpötilas-20 sa, esimerkiksi noin 50 °C:ssa, tai alennetussa lämpötilassa, esimerkiksi 10 °C:ssa. Mikrosuodatuksen diasuodatuksessa on mahdollista käyttää hana-vettä tai maidon eri kalvoprosesseista saatuja fraktioita, kuten nanosuodatus-permeaattia, ultrasuodatuspermeaattia, RO-retentaattia, kromatografisesti erotettua fraktiota tai näiden yhdistelmää tai jonkin laimennosta. Diasuodatusväli-25 aine (diavesi) voi myös olla peräisin eri prosesseista.
Keksinnön mukaiseen maitotuotteeseen voidaan lisätä muita ai-
C\J
5 nesosia, kuten maitoa tai erilaisia maidon luonnollisia ainesosia, kuten maidon
C\J
. mineraaleja, myös vettä, vitamiineja jne. Erilaiset maidon ainesosat voidaan V saada aikaan millä tahansa sopivalla erotusmenetelmällä, kuten kalvosuoda- ° 30 tuksella, kromatografialla ja niin edelleen. Nämä ainesosat voidaan lisätä kek- jr sinnön mukaiseen maitotuotteeseen antamaan maitotuotteelle haluttu rasva-, ^ proteiini- ja laktoosipitoisuus. Lisäainesosat voidaan lisätä keksinnön mukai- eo £ seen lopulliseen proteolysoituun maitotuotteeseen tai keksinnön mukaisen ? tuotteen valmistusmenetelmän yhden tai useamman vaiheen aikana.
C\J
8
Eräässä keksinnön suoritusmuodossa maitoraaka-ainetta lämpökä-sitellään esimerkiksi lämpöalueella 65-95 °C 15 sekunnista 10 minuuttiin ennen laktoosin poistamista, jotta ainakin osa heraproteiineista denaturoituu ja heraproteiinit erottuvat selektiivisesti. Edullisesti heraproteiinien erotus tehdään 5 kalvotekniikalla, edullisemmin mikrosuodatuksella.
Eräässä keksinnön suoritusmuodossa proteiinihydrolysoidulle maitotuotteelle tehdään proteaasin inaktivointikäsittely. Inaktivointiolosuhteet riippuvat menetelmässä käytetystä entsyymistä. Esimerkiksi kuumentaminen 85 °C:ssa yhden minuutin ajan riittää inaktivoimaan useimmat entsyymit.
10 Inaktivointikäsittely voidaan tehdä missä tahansa sopivassa vai heessa tuotteen valmistusmenetelmässä. Esimerkiksi inaktivointikäsittely voidaan tehdä samanaikaisesti, kun käytetään tavanomaisia lämpökäsittelyolo-suhteita maidon patogeenien tuhoamiseksi. Esimerkkejä keksinnössä käytettävistä lämpökäsittelyistä ovat pastörointi, korkeapastörointi tai lämmitys pastö-15 rointilämpötilaa alemmassa lämpötilassa riittävän kauan. Erityisesti voidaan mainita UHT-käsittely (esimerkiksi maito 138°C:ssa, 2-4 s), ESL-käsittely (esimerkiksi maito 130 °C:ssa, 1-2 s), pastörointi (esimerkiksi maito 72 °C:ssa, 15 s) tai korkeapastörointi (95 °C:ssa, 5 min). Lämpökäsittely voi olla suoraa (höyryä maitoon, maitoa höyryyn) tai epäsuoraa (putkilämmönvaihdin, levy-20 lämmönvaihdin, pintakaavinlämmönvaihdin). Tuotteen lämpökäsittelyn on oltava riittävä inaktivoimaan proteaasientsyymit, jotta vältetään aistinvaraisiin ominaisuuksiin kohdistuvat haittavaikutukset.
Kuvioiden 1 ja 2 koetulokset osoittavat yllättävästi, että jopa vähäinen maitoproteiinien hydrolyysi keksinnön mukaisessa maidossa vähensi 25 herkkien ihmisten vatsaoireiden voimakkuutta verrattuna tavalliseen laktoosittomaan maitoon. Keksinnön mukaisen maitotuotteen aistinvaraiset ominaisuu-
C\J
5 det, kuten maku, suutuntuma ja ulkomuoto, yllättäen säilyvät erinomaisina ja
C\J
. vastaavat normaalien maitotuotteiden ominaisuuksia. Keksinnön tuotteilla ei V esimerkiksi ole kitkerää makua, joka on tyypillinen proteiinihydrolysoiduille mai- ° 30 totuotteille ja johtuu proteolyysissä muodostuneista peptideistä.
| Keksinnön mukaista vähälaktoosista proteiinihydrolysoitua maito- ^ tuotetta voidaan käyttää raaka-aineena kaikenlaisten hapanmaitotuotteiden
CO
^ ja/tai hapatettujen tuoretuotteiden, tyypillisesti jugurtin, piimän, viilin ja hapate- ? tun kerman, smetanan, rahkan, kirnupiimän, kefiirin, maitotehojuomien, muiden 00 35 hapanmaitotuotteiden, valmistuksessa ja kaikenlaisten jauheiden valmistuk sessa.
9
Keksinnön mukainen menetelmä soveltuu nykyaikaiseen kompo-nenttivalmistukseen, jossa rasva-, proteiini- ja laktoosipitoisuuksiltaan erilaiset maidon osat yhdistetään tunnetulla tavalla juuri ennen aseptista pakkausta.
Keksinnön mukaista menetelmää voidaan käyttää sekä panostuo-5 tannossa että jatkuvassa tuotannossa. Edullisesti keksinnön mukaista prosessia käytetään panostuotannossa.
Seuraavat esimerkit esitetään keksinnön havainnollistamiseksi edelleen rajoittamatta keksintöä kuitenkaan niihin. Keksinnön mukaisten maitotuotteiden liukoinen tyrosiini analysoitiin Matsubara et ai.:n muunnetun menetel-10 män mukaisesti [Matsubara, H., Hagihara, B., Nakai, M., Komaki, T., Yonetani, T, Okunuki, K., Crystalline bacterial proteinase II. General properties of crystalline proteinase of Bacillus subtilis N’, J. Biochem. 45 (4) (1958) 251-258], Analyysi tehtiin näytteille, joita oli keitetty 4 minuuttia 100 °C:ssa ja sitten sent-rifugoitu. Liukoinen tyrosiini määritettiin supernatantille sentrifugoinnin [3000 rcf 15 (relative centrifucal force), 15 min] jälkeen.
Esimerkki 1 30 litraa pastöroitua (72 °C, 15 s) maitoa, jonka rasvapitoisuus oli 1,5%, ultrasuodatettiin 50 °C:ssa laboratoriossa käytettävällä Labstak-ultra-suodattimella konsentraatiosuhteessa 1,5 käyttämällä GR61 PP-kalvoja, joiden 20 raja-arvo oli 20 000 Da. Sekä saatu ultrasuodatusretentaatti (20 I) että saatu ultrasuodatuspermeaatti (10 I) otettiin talteen.
Ultrasuodatuspermeaatti, joka sisälsi pääasiassa laktoosia (10 I), nanosuodatettiin huoneenlämpötilassa konsentraatiokertoimella 4 Millipore Nanomax-50 -nanosuodatuskalvojen läpi, jolloin laktoosi pidättäytyi nanosuo-25 datusretentaattiin (2,5 I) ja yksiarvoiset ionit läpäisivät kalvon (NaCI-retentio ^ <65 %) ja kerääntyivät nanosuodatuspermeaattiin (7,5 I). Nanosuodatusreten- ™ taatti soveltuu jatkokäyttöön vähämineraalisena laktoosifraktiona.
V Nanosuodatuspermeaatti (7,5 I) tiivistettiin huoneenlämpötilassa 0 käyttämällä käänteisosmoosikalvoja Nanomax-95 (Millipore) konsentraatioker- 1 30 toimella 10, jolloin nanosuodatuspermeaatin sisältämät mineraalit tiivistyivät
CL
käänteisosmoosiretentaatiksi (NaCI-retentio > 94 %). RO-retentaatti on käyttö- ” kelpoinen laktoosittoman maidon valmistuksessa mineraalien palauttamisessa
CO
° tai mineraalikoostumuksen lisäämisessä tai täydentämisessä.
o
CVJ
10 692 g ultrasuodatusretentaattia ja 105 g RO-retentaattia valmistettuna edellä mainitulla tavalla ja 203 g vettä sekoitettiin. Sekoitukseen lisättiin 4 g HA-laktaasia (Chr. Hansen A/S, Tanska) ja 4,7 mg Alcalase 2.4 L FG -proteaasia (Novozymes Inc., Tanska) ja 0,81 mg Flavourzyme 1000 L:ää 5 (Novozymes Inc., Tanska). Sekoituksen annettiin hydrolysoitua 6 °C:ssa 24 tuntia, jona aikana laktoosipitoisuus vähenee alle 0,01 %:n ja liukoisen tyrosii-nin pitoisuus sekoituksessa lisääntyy määrään 150 mg/l maitoa.
Taulukko 1 esittää edellä mainitulla tavalla valmistettujen ult-rasuodatusretentaatin ja RO-retentaatin koostumukset. Proteolysoidun maito-10 tuotteen koostumus ja aistinvaraiset ominaisuudet ovat samanlaiset kuin tavallisen kevytmaidon ja maku on kuin kevytmaidon, mutta proteolysoitu maitotuote on täysin laktoositon (laktoosi <0,01%) ja liukoisen tyrosiinin pitoisuus siinä on lisääntynyt (151 mg/l). Proteiini:hiilihydraatti:tuhka-suhde keksinnön mukaisessa maitotuotteessa oli 3,35:3,0:0,79, toisin sanoen 1,12:1:0,26.
15 Taulukko 1. Proteolysoidun laktoosittoman maidon (rasvattomien kiintoaineiden kokonaismäärä, NFTS, noin 7,3 painoprosenttia) valmistus
Ainesosa UF- RO-retentaatti Keksinnön Kevyt- retentaatti mukainen maito k=1,5 proteolysoitu laktoositon ____maito__
Kokonaisproteiini, %__4,79__0,34__3,35__3,3
Laktoosi, %__4,37__0J5__<0,01__4,64
Glukoosi+galaktoosi, %__-__:__3^)__-
Rasva, % 2,22 0 1,5 1,5 C\J----- 5 Tuhka, % 0,91 1,52 0,79 0,79
(M
+ Kuiva-aine, %_ 12,49 1,90 8,84 10,39 (- = ei mitattu) o | Saatu proteolysoitu maitotuote lämpökäsiteltiin (125 °C, 4 s) ja pa- in. 20 kattiin aseptisesti säilyvyysajan varmistamiseksi ja entsyymien inaktivoimisek- 00 ^ si. Proteolysoitu maitotuote jäähdytettiin 6 °C:seen. Aistinvaraiset ominaisuu- o £ det olivat erinomaiset.
CM
11
Esimerkki 2
Rasvatonta maitoa käsiteltiin esimerkin 1 mukaisesti paitsi, että se ultrasuodatettiin konsentraatiokertoimella 3,7 ja ultrasuodatuspermeaatti lisäksi nanosuodatettiin konsentraatiokertoimella 4. 266 g saatua ultrasuodatusreten-5 taattia ja 369 g saatua nanosuodatuspermeaattia ja 364 g rasvatonta maitoa sekoitettiin. Laktaasi- ja proteaasientsyymikäsittelyt tehtiin esimerkin 1 mukaisesti. Proteolysoidun maitotuotteen, jonka rasvattomien kiintoaineiden pitoisuus oli noin 8,4 painoprosenttia, koostumus ja aistinvaraiset ominaisuudet olivat samanlaiset kuin esimerkin 1 mukaisesti saadussa tuotteessa. Liukoisen 10 tyrosiinin pitoisuus on lisääntynyt (148 mg/l).
Taulukko 2. Proteolysoidun laktoosittoman maidon (NFTS > 8,25 painoko) valmistus rasvattomasta maidosta (36,4 %), ultrasuodatusretentaatis-ta (26,6 %) ja nanosuodatuspermeaatista (36,9 %)
Ainesosa UF- N F- Rasvaton Keksinnön retentaatti permeaatti maito mukainen k=3,7 proteolysoitu laktoositon _____maito_
Kokonaisproteiini, %__12,5__0__3J5__4^6_
Laktoosi, %__5J__0J4__4,6__<0,01
Glukoosi+galaktoosi, %__:__:__:__3J_
Rasva, %__0^2__0__0£5__0,07
Tuhka, %__1J5__0JM__0J7__0,78
Kuiva-aine, %__18,5__ty3__^6__8J5_ ^ (- = ei mitattu) δ ™ 15 Esimerkki 3 T Rasvatonta maitoa käsiteltiin esimerkin 1 mukaisesti paitsi, että pro- Γ1'' ° teaasikäsittely 6 °C:ssa tehtiin laktaasikäsittelyn jälkeen. Proteolysoidun maito- | tuotteen koostumus ja aistinvaraiset ominaisuudet olivat samanlaiset kuin esi- merkin 1 mukaisesti saadussa tuotteessa.
CO
o 20 Esimerkki 4 δ ^ Rasvatonta maitoa käsiteltiin esimerkin 1 mukaisesti paitsi, että pro- teaasikäsittely 6 °C:ssa tehtiin ennen laktaasikäsittelyä. Proteolysoidun maito- 12 tuotteen koostumus ja aistinvaraiset ominaisuudet olivat samanlaiset kuin esimerkin 1 mukaisesti saadussa tuotteessa.
Esimerkki 5
Vakioidun maidon (10 kg), jonka rasvapitoisuus oli 1,5 %, lämpötila 5 säädettiin 6 °C:seen. Vakioituun maitoon lisättiin 0,8 g HA-laktaasia (Chr. Hansen A/S, Tanska) ja 47 mg Alcalase 2.4 L FG -proteaasia (Novozymes Inc., Tanska) ja 8,1 mg Flavourzyme 1000 L:ää (Novozymes Inc., Tanska). Saadun sekoituksen annettiin hydrolysoitua 6 °C:ssa 24 tuntia. Tämän jälkeen proteo-lysoitu maitotuote lämpökäsiteltiin esimerkin 1 mukaisesti. Proteolysoitu maito-10 tuote on samanlainen kuin tavallinen vähälaktoosinen kevytmaito ja maistuu samalta kuin vähälaktoosinen maito mutta on hieman makeampaa kuin tavallinen maito. Liukoisen tyrosiinin pitoisuus on lisääntynyt (147 mg/l).
Esimerkki 6
Rasvatonta maitoa mikrosuodatettiin 50 °C:n suodatuslämpötilassa 15 käyttämällä 0,1 pm:n kalvoa (Synder FR, Synder Filtration, USA) konsentraa- tiokertoimella 3 tilavuuden suhteen. Suurin osa heraproteiineista poistettiin mikrosuodatuspermeaattiin. Mikrosuodatuksella aikaansaatu mikrosuodatusre- tentaatti diasuodatettiin käyttämällä ultrasuodatuspermeaattia (DSS GR61 PP,
Alfa Laval AS, Tanska) ja syöttämällä ultrasuodatuspermeaatti mikrosuodatus- 20 retentaattiin samalla nopeudella kuin mikrosuodatuspermeaattia poistui dia- suodatuksesta. Ultrasuodatuspermeaatin määrä oli sama kuin rasvattoman maidon syöttövaiheessa. Diasuodatuksessa käytetyn ultrasuodatuspermeaatin määrällä voidaan säätää lopullisen mikrosuodatusretentaatin heraproteiinipitoi- suutta. Diasuodatusvaiheen jälkeen ultrasuodatuspermeaatti lisättiin mikrosuo- ^ 25 datusretentaattina saatuun maitotiivisteeseen maitotiivisteen proteiinipitoisuu- o den säätämiseksi vastaamaan alkuperäisen maidon pitoisuutta. Toisin sanoen Y maito laimennettiin vastamaan alkuperäisen maidon alkuperäistä proteiinipitoi- £5 suutta. Mikrosuodatusjärjestelmällä poistettiin 78 % maidon β-laktoglobulii- x nista.
CC
30 Maitotuotteelle, toisin sanoen ultrasuodatuspermeaatilla vakioidulle £2 mikrosuodatusretentaatille (taulukko 3), tehtiin laktaasi-ja proteaasikäsittely ja o se lämpökäsiteltiin esimerkin 1 mukaisesti, δ
CVJ
13
Taulukko 3. Heraproteiinipitoisuudeltaan alhaisen maidon (ultrasuoda-tuspermeaatilla vakioidun mikrosuodatusretentaatin) valmistus käyttämällä mikrosuodatusta
Ainesosa Rasvaton Maito (UF-perme- Maito maito aatilla vakioitu MF- (UF-permeaatti) __(MF-syöttö) retentaatti)__
Kokonaisproteiini, %__314__315__0,24_
Laktoosi, %__47__413__4i8_
Rasva, %__0J__0J__0,02
Tuhka, %__075__0J7__0,49
Kuiva-aine, %__9J__97__5J3_ β-laktoglobuliini, g/l__37__71__:_ g-laktalbumiini, g/l__17__0,37__-_ (- = ei mitattu) 5
Keksinnön mukaisen proteolysoidun maitotuotteen koostumus ja aistinvaraiset ominaisuudet olivat lähellä tavallisen rasvattoman maidon koostumusta ja ominaisuuksia. Proteolysoitu maitotuote maistuu samalta kuin rasvaton maito mutta on täysin laktoositon (laktoosi <0,01 %), sen liukoisen tyro-10 siinin pitoisuus on lisääntynyt (>150 mg/l) ja sillä on alhainen heraproteiinipitoi-suus (a-laktalbumiinin suhde β-laktoglobuliiniin < 1).
Esimerkki 7
Rasvatonta maitoa käsiteltiin esimerkin 6 mukaisesti paitsi, että se mikrosuodatettiin suodatuslämpötilassa 10 °C konsentraatiokertoimella 3,3 ^ 15 kertaa tilavuus ja tuotettu mikrosuodatusretentaatti diasuodatettiin käyttämällä o maidon hydrolysoitua 3 %:n ultrasuodatuspermeaattia. Diasuodatusvaiheen A jälkeen maidon hydrolysoitu ultrasuodatuspermeaatti ja maidon mineraaleja 7 lisättiin mikrosuodatusretentaattina saatuun maitotiivisteeseen maitotiivisteen proteiinipitoisuuden säätämiseksi vastaamaan alkuperäisen maidon pitoisuut-£ 20 ta. Maitotuotteelle, toisin sanoen hydrolysoidulla ultrasuodatuspermeaatilla ja £5 maidon mineraaleilla vakioidulle mikrosuodatusretentaatille (taulukko 4), tehtiin S entsyymikäsittely ja se lämpökäsiteltiin esimerkin 1 mukaisesti, δ
CVJ
14
Taulukko 4. Heraproteiinipitoisuudeltaan alhaisen maidon (ultrasuoda-tuspermeaatilla vakioidun mikrosuodatusretentaatin) valmistus käyttämällä mikrosuodatusta
Ainesosa Rasvaton maito Maito (hydroly- Hydrolysoitu (MF-syöttö) soidulla UF-per- maito meaatilla ja maito- (UF-permeaatti) mineraaleilla vaki- ___oitu UF-retentaatti)__
Kokonaisproteiini, %__3^4__3J5__0,24_
Laktoosi, %__4J__0J__0,01
Glukoosi + galaktoosi, %__-__3/5__4 J_
Rasva, %__0J__0J__0,02
Tuhka, %__0/75__08__0,49
Kuiva-aine, %__9/1__05__5JS_ β-laktoglobuliini, g/l__3^2__04__:_ g-laktalbumiini, g/l_ 1^2_ 0,15_ :_ (- = ei mitattu) 5
Keksinnön mukaisen proteolysoidun maitotuotteen koostumus ja aistinvaraiset ominaisuudet olivat lähellä tavallisen rasvattoman maidon koostumusta ja ominaisuuksia. Proteolysoitu maitotuote maistuu hieman makealta rasvattomalta maidolta ja sen liukoisen tyrosiinin pitoisuus on lisääntynyt (>150 10 mg/l) ja sillä on alhainen heraproteiinipitoisuus (a-laktalbumiinin suhde β-laktoglobuliiniin < 1).
Esimerkki 8
CM
o Esimerkissä 1 valmistettua keksinnön mukaista proteolysoitua mai- 4- totuotetta käytettiin kuluttajatestissä, jossa keksinnön mukaista proteolysoitua ^ 15 maitotuotetta verrattiin laktoosittomaan kevytmaitoon (kontrolli). Osallistuja (N)
O
oli yhteensä 90, ja näistä 48 henkilöä (kuluttajaa) proteolysoidun maidon ryh-£ mässä (laktoosia < 0,01 % ja liukoisen tyrosiinin pitoisuus > 150 mg/l) ja 42 £5 henkilöä (kuluttajaa) kontrollimaitoryhmässä (laktoosia < 0,01 %). Kaikki henki- 5 löt käyttivät maitotuotetta päivittäin ainakin 2 dl 10 päivän kokeen aikana (sok- 5 20 kotesti). Oireita seurattiin ja ne raportoitiin oirepäiväkirjaan. Kunkin oireen, il-
CVJ
mavaivojen, turvotuksen, vatsakivun ja kurinan/möyrinnän, voimakkuus mitattiin asteikolla "0" (ei oireita) - "7" (vaikeita oireita).
15
Kuten kuviosta 1b ilmenee, muutos vatsaongelmissa (oiresumma) oli proteolysoidun maidon ryhmässä suurempi kuin kontrolliryhmässä (p=0,039). Muutos kunkin oireen voimakkuudessa esitetään kuvioissa 2a-2d. Keksinnön mukainen proteolysoitu maitotuote vähensi merkittävästi ilmavaivoja (p=0,014) 5 (kuvio 2a) ja kurinaa/möyrintää (p=0,039) (kuvio 2d). Havaittiin myös vähemmän turvotusta (p=0,076) (kuvio 2b) ja vatsakipua (p=0,47) (kuvio 2c).
C\J
δ c\j i o
X
cc
CL
CO
δ o δ c\j

Claims (21)

1. Proteiinihydrolysoitu vähälaktoosinen maitotuote, jonka proteiinien suhde hiilihydraatteihin on alueella noin 0,5-5 painon mukaan, edullisesti noin 0,5-3.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen proteiinihydrolysoitu maitotuote, jossa proteiinien ja hiilihydraattien suhde on noin 1.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen proteiinihydrolysoitu maitotuote, jossa proteiinihydrolyysin aste on ainakin 60 mg tyrosiiniä/litra proteiini-hydrolysoitua maitotuotetta.
4. Jonkin edeltävän patenttivaatimuksen mukainen proteiinihydroly soitu maitotuote, jossa proteiinien suhde tuhkaan on alueella 3-9 painon mukaan, edullisesti 3,5-7,5 painon mukaan.
5. Jonkin edeltävän patenttivaatimuksen mukainen proteiinihydrolysoitu maitotuote, jossa proteiini:hiilihydraatti:tuhka-suhde on noin 1,12:1:0,26.
6. Jonkin edeltävän patenttivaatimuksen mukainen proteiinihydroly soitu maitotuote, jossa maitotuotteen laktoosipitoisuus on alle 1 painoprosenttia, edullisesti alle 0,1 painoprosenttia, vielä edullisemmin alle 0,01 painoprosenttia.
7. Jonkin edeltävän patenttivaatimuksen mukainen proteiinihydroly- 20 soitu maitotuote, jossa tuote on ulkonäöltään ja aistinvaraisilta ominaisuuksiltaan kuin normaali maito.
8. Menetelmä proteiinihydrolysoidun vähälaktoosisen maitotuotteen, jonka proteiinien suhde hiilihydraatteihin on alueella 0,5-5 painon mukaan, valmistamiseksi, jossa menetelmässä maitoraaka-aineelle tehdään laktoosin 25 poisto ja proteaasikäsittely. C\J
£ 9. Patenttivaatimuksen 8 mukainen menetelmä, jossa laktoosin ™ poisto tehdään ennen proteaasikäsittelyä, sen aikana tai sen jälkeen, edulli- V sesti ennen proteaasikäsittelyä.
10. Patenttivaatimuksen 8 tai 9 mukainen menetelmä, jossa laktoosi 30 sin poisto tehdään kalvotekniikalla, laktoosihydrolyysillä, kromatografialla, sa- ^ ostamalla tai millä tahansa näiden yhdistelmistä, edullisesti kalvotekniikalla.
” 11. Patenttivaatimuksen 10 mukainen menetelmä, jossa maitoraa- co ° ka-aineelle tehdään laktaasientsyymikäsittely. o CVJ
12. Patenttivaatimuksen 10 mukainen menetelmä, jossa a) maitoraaka-aineelle tehdään yksi tai useampia kalvosuodatuksia vähälaktoosisen maitotuotteen tuottamiseksi, b) haluttaessa vähälaktoosinen maitotuote hydrolysoidaan laktaasil-5 la laktoosittoman maitotuotteen tuottamiseksi, c) vähälaktoosiselle tai laktoosittomalle maitotuotteelle tehdään pro-teaasikäsittely proteiinihydrolysoidun vähälaktoosisen maitotuotteen tuottamiseksi.
13. Patenttivaatimuksen 12 mukainen menetelmä, jossa 10 a) maitoraaka-aineelle tehdään ultrasuodatus ultrasuodatusreten- taatin ja ultrasuodatuspermeaatin tuottamiseksi, b) ultrasuodatuspermeaatille tehdään nanosuodatus nanosuodatus-permeaatin ja nanosuodatusretentaatin tuottamiseksi, c) nanosuodatuspermeaatti palautetaan ultrasuodatusretentaattiin 15 vähälaktoosisen maitotuotteen tuottamiseksi.
14. Patenttivaatimuksen 13 mukainen menetelmä, jossa lisätään maidon mineraaleja edullisesti proteiinihydrolysoituun maitotuotteeseen tai ultrasuodatusretentaattiin.
15. Patenttivaatimuksen 12 mukainen menetelmä, jossa 20 a) maitoraaka-aineelle tehdään ultrasuodatus ultrasuodatusreten- taatin ja ultrasuodatuspermeaatin tuottamiseksi, b) ultrasuodatuspermeaatille tehdään nanosuodatus nanosuodatus-permeaatin ja nanosuodatusretentaatin tuottamiseksi, c) nanosuodatuspermeaatti tiivistetään käänteisosmoosilla (RO) 25 RO-retentaatin ja RO-permeaatin tuottamiseksi, d) RO-retentaatti palautetaan ultrasuodatusretentaattiin vähälaktoo- C\l 5 sisen maitotuotteen valmistamiseksi. CM .
16. Patenttivaatimuksen 15 mukainen menetelmä, jossa lisätään V vettä ja maidon mineraaleja edullisesti proteiinihydrolysoituun maitotuottee- Γ1'' ° 30 seen tai ultrasuodatusretentaattiin.
17. Patenttivaatimuksen 12 mukainen menetelmä, jossa maitoraa- ^ ka-aineelle tehdään mikrosuodatus vähälaktoosisen maitotuotteen tuottami en ^ seksi mikrosuodatusretentaattina.
18. Patenttivaatimuksen 17 mukainen menetelmä, jossa lisätään ^ 35 maidon mineraaleja mikrosuodatusretentaattiin.
19. Patenttivaatimuksen 12 mukainen menetelmä, jossa vaiheet b) ja c) tehdään samanaikaisesti.
20. Jonkin patenttivaatimuksen 8-19 mukainen menetelmä, jossa maitoraaka-aine lämpökäsitellään ennen laktoosin poistoa ja/tai proteaasikäsit- 5 telyä.
21. Jonkin edeltävän patenttivaatimuksen 8-20 mukainen menetelmä, jossa proteiinihydrolysoidulle maitotuotteelle tehdään proteaasin inakti-vointikäsittely. C\J δ c\j i o X cc CL CO δ o δ c\j
FI20106137A 2010-10-29 2010-10-29 Maitopohjainen tuote ja valmistusmenetelmä FI123201B (fi)

Priority Applications (15)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI20106137A FI123201B (fi) 2010-10-29 2010-10-29 Maitopohjainen tuote ja valmistusmenetelmä
PL11785712T PL2632277T3 (pl) 2010-10-29 2011-10-26 Produkt mleczny i sposób przygotowania
AU2011322448A AU2011322448B2 (en) 2010-10-29 2011-10-26 Milk product and preparation method
ES11785712.8T ES2666293T3 (es) 2010-10-29 2011-10-26 Producto lácteo y método de preparación
RU2013124801/10A RU2585236C2 (ru) 2010-10-29 2011-10-26 Молочный продукт и способ его получения
LTEP11785712.8T LT2632277T (lt) 2010-10-29 2011-10-26 Pieno produktas ir gamybos būdas
CN2011800521287A CN103188942A (zh) 2010-10-29 2011-10-26 乳制品和制备方法
DK11785712.8T DK2632277T3 (en) 2010-10-29 2011-10-26 Milk product and manufacturing process
CN201710242072.0A CN106962480A (zh) 2010-10-29 2011-10-26 乳制品和制备方法
US13/880,453 US11039626B2 (en) 2010-10-29 2011-10-26 Milk product and preparation method
KR1020137013650A KR101882038B1 (ko) 2010-10-29 2011-10-26 우유제품 및 그의 제조방법
JP2013535474A JP2013540447A (ja) 2010-10-29 2011-10-26 乳製品および調製方法
PCT/FI2011/050934 WO2012056106A1 (en) 2010-10-29 2011-10-26 Milk product and preparation method
EP11785712.8A EP2632277B1 (en) 2010-10-29 2011-10-26 Milk product and preparation method
JP2016102305A JP6693807B2 (ja) 2010-10-29 2016-05-23 乳製品および調製方法

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI20106137 2010-10-29
FI20106137A FI123201B (fi) 2010-10-29 2010-10-29 Maitopohjainen tuote ja valmistusmenetelmä

Publications (4)

Publication Number Publication Date
FI20106137A0 FI20106137A0 (fi) 2010-10-29
FI20106137L FI20106137L (fi) 2012-04-30
FI20106137A FI20106137A (fi) 2012-04-30
FI123201B true FI123201B (fi) 2012-12-14

Family

ID=43064292

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI20106137A FI123201B (fi) 2010-10-29 2010-10-29 Maitopohjainen tuote ja valmistusmenetelmä

Country Status (13)

Country Link
US (1) US11039626B2 (fi)
EP (1) EP2632277B1 (fi)
JP (2) JP2013540447A (fi)
KR (1) KR101882038B1 (fi)
CN (2) CN106962480A (fi)
AU (1) AU2011322448B2 (fi)
DK (1) DK2632277T3 (fi)
ES (1) ES2666293T3 (fi)
FI (1) FI123201B (fi)
LT (1) LT2632277T (fi)
PL (1) PL2632277T3 (fi)
RU (1) RU2585236C2 (fi)
WO (1) WO2012056106A1 (fi)

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FI125332B (fi) * 2011-11-11 2015-08-31 Valio Oy Menetelmä maitotuotteen valmistamiseksi
DK2730170T3 (en) 2012-11-13 2016-05-30 Dmk Deutsches Milchkontor Gmbh Allergen-free food compositions
DE102013103541A1 (de) * 2013-04-09 2014-10-09 Growth Finance Plus Ag Flüssiges Tierfutter für Hauskatzen oder Hunde und Verfahren zu seiner Herstellung
MX2016000661A (es) * 2013-07-17 2016-06-07 Gervais Danone Sa Proceso para preparar un producto lácteo fermentado con una cantidad reducida de lactosa y propiedades nutricionales y organolépticas mejoradas.
US20170000148A1 (en) 2013-12-23 2017-01-05 Goodman Fielder New Zealand Limited An Improved Beverage And Method Of Manufacture
MX360129B (es) * 2014-12-18 2018-09-24 Com De Lacteos Y Derivados S A De C V Proceso para la separación de la lactosa de la leche para la producción de leche deslactosada.
US11291214B2 (en) * 2015-04-06 2022-04-05 Dupont Nutrition Biosciences Aps Proteases for high protein fermented milk products
DK3123868T3 (en) * 2015-07-25 2018-12-10 Dmk Deutsches Milchkontor Gmbh PROCEDURE FOR MANUFACTURING MILK PRODUCTS WITH DEFINED LACTOSE CONTENT
DK3158871T3 (en) * 2015-10-19 2018-08-06 Dmk Deutsches Milchkontor Gmbh PROCEDURE FOR THE MANUFACTURE OF LACTOSE-FREE MILK PRODUCTS
MX2016000156A (es) * 2016-01-07 2017-07-06 Com De Lácteos Y Derivados S A De C V Proceso para la produccion de leche deslactosada con alto contenido de proteina y calcio y leche sin dulzor.
WO2017144730A1 (en) 2016-02-26 2017-08-31 Danmarks Tekniske Universitet Milk allergy prevention and treatment
RU2642496C2 (ru) * 2016-06-14 2018-01-25 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Астраханский государственный технический университет" Способ получения жира из внутренностей рыб
CN106857819A (zh) * 2016-10-21 2017-06-20 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 易消化牛奶及其制备方法
AU2017351523A1 (en) * 2016-10-31 2019-05-16 Meiji Co., Ltd. Method for producing whey protein hydrolysate having superior flavor
WO2018102658A1 (en) 2016-12-02 2018-06-07 Fairlife, Llc Non-browning lactose-free milk powder and methods of making same
IT201600132159A1 (it) * 2016-12-29 2018-06-29 Granarolo S P A Processo di preparazione di un latte lactose-free
KR102174320B1 (ko) * 2018-11-26 2020-11-04 주식회사 푸드마스터그룹 반려동물용 우유의 제조방법
CN109548872A (zh) * 2018-12-07 2019-04-02 新疆旺源生物科技集团有限公司 一种低乳糖驼乳的制备方法
US11109604B2 (en) 2019-05-09 2021-09-07 Memtec LLC Dairy processing systems and methods
CN112088942A (zh) * 2019-06-17 2020-12-18 内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司 一种添加藜麦颗粒的脱乳糖乳制品及其制备方法
CN112088941A (zh) * 2019-06-17 2020-12-18 内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司 一种脱乳糖的乳制品及其制备方法
JPWO2023008491A1 (fi) * 2021-07-27 2023-02-02
WO2023055902A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Dupont Nutrition Biosciences Aps Method for reducing sugar in food stuff

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FI73000C (fi) 1985-11-14 1987-08-10 Valio Meijerien Foerfarande foer specifik avskiljning av laktos ur mjoelk.
DK589785A (da) 1985-12-18 1987-06-19 Samuelsson Ernst Gunnar Peptidpraeparat, fremgangsmaade til fremstilling deraf samt anvendelse af peptidpraeparatet
ES2193327T3 (es) 1997-12-12 2003-11-01 Nestle Sa Procedimiento de fabricacion de un alimento a base de hidrolizado de proteinas.
EP1087668B1 (en) 1998-06-17 2004-09-15 New Zealand Dairy Board Bioactive whey protein hydrolysate
JP3290145B2 (ja) * 1998-09-30 2002-06-10 雪印乳業株式会社 乳素材及びその製造方法
EP1062873A1 (en) 1999-12-13 2000-12-27 N.V. Nutricia Improved infant formula, protein hydrolysate for use in such an infant formula, and method for producing such a hydrolysate
US6365218B1 (en) * 2000-02-04 2002-04-02 Abbott Laboratories Pediatric formula and methods for providing nutrition and improving tolerance
JP2002000291A (ja) 2000-06-27 2002-01-08 Morinaga Milk Ind Co Ltd 乳糖含量の少ない乳蛋白質加水分解物の製造方法
RU2193327C2 (ru) 2000-07-04 2002-11-27 Вологодская государственная молочно-хозяйственная академия им. Н.В.Верещагина Способ производства пахты низколактозной с гидролизованным белком
US20020192333A1 (en) 2001-04-27 2002-12-19 Christensen Jorge Florin Milk resistant to acid coagulation, method and milk-based product
FI115752B (fi) * 2002-05-14 2005-07-15 Valio Oy Menetelmä käytettäväksi vähälaktoosisen tai laktoosittoman maitotuotteen valmistamiseksi
US20070166447A1 (en) * 2002-08-27 2007-07-19 Select Milk Producers, Inc. Dairy compositions and method of making
US7070825B2 (en) * 2002-09-10 2006-07-04 Abbott Laboratories Infant formula
JP4580138B2 (ja) * 2002-09-17 2010-11-10 雪印乳業株式会社 殺菌済み軟質ナチュラルチーズ及びその製造方法
NZ539110A (en) 2002-10-02 2008-04-30 Chr Hansen As Milk improved by treatment with proteases and methods for its preparation
US6787168B1 (en) 2003-03-18 2004-09-07 James W. Sawhill Peptide product
CA2456790A1 (en) 2004-02-03 2005-08-03 Saputo Inc. Lactose-free milk and process for making same
US7618669B2 (en) 2005-06-01 2009-11-17 Mead Johnson Nutrition Company Low-lactose partially hydrolyzed infant formula
CN1899054A (zh) * 2006-07-17 2007-01-24 颜贻谦 去糖牛奶的制作方法
FI120953B (fi) 2007-06-26 2010-05-31 Valio Oy Menetelmä hyvin säilyvän vähälaktoosisen tai laktoosittoman maitotuotteen valmistamiseksi
DK176760B1 (da) 2007-10-03 2009-06-29 Arla Foods Amba Process for producing lactose-free milk
CN101185475A (zh) * 2007-12-03 2008-05-28 黄磊 一种乳肽的制备方法
BRPI0917837A8 (pt) 2008-08-29 2016-06-07 Valio Ltd produto de leite livre de lactose e de baixa lactose e processo para produção destes
US8986768B2 (en) * 2008-08-29 2015-03-24 Valio Ltd. Low-lactose and lactose-free milk product and process for production thereof

Also Published As

Publication number Publication date
CN106962480A (zh) 2017-07-21
JP6693807B2 (ja) 2020-05-13
FI20106137A0 (fi) 2010-10-29
RU2013124801A (ru) 2014-12-10
PL2632277T3 (pl) 2018-07-31
LT2632277T (lt) 2018-06-11
KR101882038B1 (ko) 2018-07-25
WO2012056106A1 (en) 2012-05-03
JP2016182124A (ja) 2016-10-20
AU2011322448A1 (en) 2013-05-02
AU2011322448B2 (en) 2014-07-03
KR20140067955A (ko) 2014-06-05
DK2632277T3 (en) 2018-05-28
US11039626B2 (en) 2021-06-22
JP2013540447A (ja) 2013-11-07
EP2632277A1 (en) 2013-09-04
CN103188942A (zh) 2013-07-03
EP2632277B1 (en) 2018-03-21
US20130230623A1 (en) 2013-09-05
FI20106137L (fi) 2012-04-30
RU2585236C2 (ru) 2016-05-27
FI20106137A (fi) 2012-04-30
ES2666293T3 (es) 2018-05-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI123201B (fi) Maitopohjainen tuote ja valmistusmenetelmä
JP6932815B2 (ja) 酪農調合物及びその製法
US10993454B2 (en) Milk-based product and a method for its preparation
AU2010311316B2 (en) Whey protein product and a method for its preparation
US20120232023A1 (en) Whey protein product and a method for its preparation
CA2761492C (en) Product and process for its preparation
JP2023524913A (ja) 運動能力向上のためのタンパク質強化飲料

Legal Events

Date Code Title Description
FG Patent granted

Ref document number: 123201

Country of ref document: FI

Kind code of ref document: B