FI120398B

FI120398B - Puolisynteettiset taksaanit, joilla on kasvaimia torjuvaa vaikutusta, sekä niiden valmistusmenetelmät, välituotteet ja farmaseuttiset koostumukset

Info

Publication number: FI120398B
Application number: FI970271A
Authority: FI
Inventors: Ezio Bombardelli; Bruno Gabetta; Bellis Paolo De
Original assignee: Indena Spa
Priority date: 1994-07-26
Filing date: 1997-01-23
Publication date: 2009-10-15
Also published as: ATE176464T1; HU222496B1; NO315116B1; NO970296D0; DK0773938T3; HK1011687A1; AU3164195A; RU2134688C1; SK281526B6; CN1332163A; PL187579B1; ES2126919T3; CZ19997A3; HUT76829A; DE69507702T2; BG62851B1; WO1996003394A1; US5756776A; JP2986550B2; CA2195844C

Description

Puolisynteettiset taksaanit, joilla on kasvaimia toijuvaa vaikutusta, sekä niiden valmistusmenetelmät, välituotteet ja farmaseuttiset koostumukset Semisyntetiska taxaner med tumörmotverkande effekt, samt deras framställningsfor-faranden, mellanprodukter och farmaceutiska sammansättningar 5

Tunnettua on, että taksaanirungon käsittävillä diterpeeneillä, erityisesti taksolilla on kasvaimia toruvaa aktiivisuutta, joka kohdistuu moniin ihmisessä esiintyviin kasvaimiin. Näiden lääkeaineiden, erityisesti taksolin käyttöön liittyy kuitenkin eräitä 10 haittoja epätoivotuista sivuvaikutuksista johtuen. Tästä syystä, ja koska nämä kasvaimia toruvat hoidot aiheuttavat nopeasti vastustuskykyä, alalla on toivottavaa saada kehitetyksi uusia molekyylejä, joiden käyttö vähentää kliinisessä käytössä havaittuja ongelmia.

15 Esimerkiksi 4. helmikuuta 1993 julkaistussa julkaisussa WO 93/02067 (Nippon Steel) kuvataan 10-alfa-asetyyli-taksoli, joka on uutettu Taxus-lajin albumiinikudos-viljelmästä ja jolla on selvää sytotoksista aktiivisuutta.

Esillä olevan keksinnön kohteena ovat uudet, taksaanirungon käsittävät, puolisyn-20 teettisesti saadut johdannaiset, joilla on voimakasta kasvaimia toijuvaa aktiivisuutta.

Keksinnön mukaisilla johdannaisilla on kaava (la) V Vv

**CNH /°H

öh A

Ή ^ (la) 2 missä Ri = fenyyli, R2 = tert.-butoksi, R3 = H, R4 = OH, ja kaava (Ib) \V Vy P2CO^H oh «f7\w Ή 5 (Ib) missä Ri = fenyyli, R2 = tert.-butoksi, R3 = asetoksi ja R4 = H.

Kaavan (la) ja (Ib) mukaiset taksaanit valmistetaan esteröimällä kaavan (2) mukaiset uudet syntonit 13-asemasta käyttäen asyloivina aineina sopivalla tavalla aktivoi-10 tuj a isoseriiniketjuj a kiij allisuudessa taksolin j a sen analogien puolisynteesille kuvatulla tavalla (katso esim. EP-A-400971, 1992, Fr. Dem. 86, 10400; E. Didier et ai., Tetrahedron Letters, 35, 2349,1994; E. Didier et ai., edellä, 35,3063,1994).

Mitä tulee kaavaan (2) 9 KNbT 9V-/5 HÖ' \l4_Jl} 3/ 0 ζΤΐ>Η 15 (2) 3 missä: kun siinä on läsnä olefiininen kaksoissidos 11,12-asemassa, niin tällöin R3 on vety-atomi, R4 ja R5 ovat hydroksi-, C2-8-asyylioksi-, alkyylisilyylioksi- tai 2,2,2-trMoorietoksikarbonyyhoksiryhmiä; 5 kun siinä ei ole läsnä olefiinista kaksoissidosta 11,12-asemassa, niin tällöin 12-aseman metyyli on α-orientoitunut, R4 on vetyatomi, ja R3 ja R5 ovat hydroksi-, C2-8-asyylioksi-, alkyylisilyylioksi- tai 2,2,2-trikloorietoksikarbonyylioksiryhmiä.

Erityisesti kaavan (2a) mukaisia syntoneita käytetään kaavan (la) mukaisten uusien 10 taksaanien synteesissä. Toisaalta kaavan (2b) mukaisia syntoneita käytetään kaavan (Ib) mukaisten uusien taksaanien synteesissä.

-s*/ *'vZ*4 /° wo\» l1 3/ \

K

(2a) 15 Syntoneissa (2a) olefiininen kaksoissidos on läsnä 11,12-asemassa ja C2-8-asyyliok-siryhmä tai valinnaisesti suojattu hydroksiryhmä ovat läsnä 10a-asemassa. Näin ollen syntoneissa (2a) R3 on vety, R4 ja R5 ovat hydroksi-, asyylioksi-, alkyylisilyylioksi- (kuten trietyylisilyylioksi, O-TES) tai 2,2,2-trikloorietoksikarbonyylioksiryh-miä (O-CO-O-CH2CCI3,0-TROC).

4

' / \3 *4 O

n.- V· " j\ Ϊ 0 a \ / Η HNi3^ y /5 nd's' γΐ 4 _ 1 2χ ?\ —f

Ph-/ Aeo1L-0 xo (2b)

Syntoneissa (2b) 11- ja 12-asemien hiiliatomit ovat sitoutuneet yksinkertaisella si-5 doksella, 12-aseman metyyli on α-suuntautunut ja asyylioksiryhmä tai valinnaisesti suojattu hydroksiryhmä ovat läsnä ΙΟα-asemassa. Näin ollen syntoneissa (2b) R4 on vety, R3 ja R5 ovat hydroksi-, asyylioksi-, alkyylisilyylioksi- (kuten trietyylisilyyli-oksi, O-TES) tai 2,2,2-trikloorietoksikarbonyylioksiryhmiä (O-CO-O-CH2CCI3, O-TROC).

10

Sen jälkeen, kun syntonit (2) on esteröity 13-asemasta isoseriiniketjulla, suojaavat ryhmät poistetaan kujallisuudesta tunnetuilla tavanomaisilla menetelmillä, jolloin saadaan kaavan (1) mukaiset uudet taksaani! 15 10-deasetyylibakkatiinia ΠΙ (3), jota voidaan eristää Taxus baccata-laiin lehdistä (G.

Chauviere et ah, C.R. Acad. Se. Ser. ΠΙ, 293; 591 [1981]), käytetään ainoana lähtö-tuotteena syntoneiden (2a) ja (2b) valmistuksessa.

Kaavan (2a) mukaiset syntonit, joita ei tunneta kirjallisuudessa, saadaan (kaavio 1) 20 yhdisteestä (3) hapettamalla ne 10-asemasta kupari(2)asetaatilla, jolloin saadaan diketoni (4), ja pelkistämällä tämän jälkeen natriumboorihydridillä serium(3)-suolojen läsnä ollessa.

5

Tuloksena oleva tuote (2a, R3 = H, R4 = R5 = OH), joka on yhdisteen (3) epimeeri 10-asemassa, suojataan sopivalla tavalla 7- ja 10-asemista ja sitä käytetään taksaa-nien (la) syntetisoimiseksi.

5 Kaavio 1 h/ v_l \ m

Fh-· ^ ÄcO^ j q U)

HsNc 1 / ν«βη4 - yA 1 / \ ——2a (R «H, β.-Η,βΟΒΪ HO ) CeCh 3 45 OH ό ^ fi>-—^ —© Ό

Uusi sekotaksaani (5) saadaan sivutuotteena kaaviossa 1 kuvatusta reaktiosarjasta.

vx/ fl Γ

--"\ /°H

Hö' \—

°H 0 d — J

___/ Acer /__o kr- 10 (5) 6

Sekotaksaania (5) voidaan käyttää muiden sellaisten taksaanien syntetisoimiseksi, joilla taksaaneilla on mahdollisesti kasvaimia toruvaa aktiivisuutta.

Esillä olevan keksinnön kohteena ovat myös uudet, sekotaksaanirungon käsittävät, 5 puolisynteettisesti valmistetut johdannaiset, joilla on voimakasta kasvaimia toijuvaa aktiivisuutta. Näillä johdannaisilla on kaava (5a) 0« h To—7 (5a) missä: 10 Ri ja R.2, jotka voivat olla samanlaisia tai erilaisia, ovat Ci-20-alkyyli-, C2-8-alkenyyli-, aryyli- (edullisesti fenyyh-) tai heteroaryyliryhmä. R2 voi olla myös tert.-butoksi.

Kaavan (5a) mukaiset taksaanit valmistetaan esteröimällä kaavan (5) mukainen yh-15 diste 13-asemasta käyttäen asyloivina aineina sopivalla tavalla aktivoituja isoseriini- ketjuja kiijallisuudessa taksolin ja sen analogien puolisynteesille kuvatulla tavalla (katso esim. EP-A-400 971; E. Didier et ai., Tetrahedron Letters, 35, 2349, 1994; E. Didier et ai., edellä, 35,3063,1994). Yhdisteen (5) hydroksiryhmä on voitu valinnaisesti suojata sopivilla suojaavilla ryhmillä tavanomaisten menetelmien mukaisesti.

20

Sen jälkeen, kun yhdiste (5) on esteröity 13-asemasta isoseriiniketjulla, suojaavat ryhmät poistetaan kiqallisuudesta tunnetuilla tavanomaisilla menetelmillä, jolloin saadaan kaavan (5a) mukaiset sekotaksaanit.

7

Kaavan (2b) mukaiset syntonit, joita ei tunneta kitjallisuudessa, saadaan myös 10-deasetyylibakkatiinista III (3) (kaavio 2). Ollaan todettu, että vastaava 13-ketojohdannainen (6) saadaan, kun (3) hapetetaan m-klooriperbentsoehapolla (MC-PBA). Sen jälkeen, kun 7-aseman hydroksyyli on suojattu trietyylisilyylikloridilla 5 (TESC1), yhdisteen (6) pelkistäminen natriumboorihydridillä serium(3)suolojen läsnä ollessa tuottaa syntonia (2b) (R3 = OH, R4 = H, R5 = O-TES), jota voidaan käyttää kaavan (Ib) mukaisten taksaanien synteesissä. Syntoneiden (2b) 12-asemassa sijaitsevan metyylin a-orientoituminen on päätelty perinpohjaisten, ydinmagneettisen resonanssin avulla toteutettujen tutkimusten perusteella.

10 8 rt

B

9 m m i m < ? S ϊ

* I

<N

«n s .'8 Y N—o s i 11 *- ® li *· W Φ x * "Vi “N.g'l / Jf 1 w et

I I

9

Esillä olevan keksinnön mukaiset tuotteet seulottiin niillä olevan, erilaisiin kasvain-solulinjoihin kohdistuvan sytotoksisen vaikutuksen suhteen, verraten niiden vaikutusta taksolin vaikutukseen. Taulukossa 1 on esitetty yhdisteillä 13-[(2R,3S)-3-fe-nyyli-2-hydroksi-3-tert.-butoksikarbonyyliamino-propanoyyli] -10-epi-10-deasetyyli-5 bakkatiini III (la, Ri = Ph, R2 = tBuO, R3 = H, R4 = OH), 13-[(2R,3S)-3-fenyyli-2-hydroksi-3 -tert.-butoksikarbonyyliamino-propanoyyli] -10-deasetyyli-11,12-dihydro-bakkatiini III (Ib, Rj = Ph, R2 = tBuO, R3 = OH, R4 = H), 13-[(2R,3S)-3-fenyyli-2-hydroksi-3-tert.-butoksikarbonyyliamino-propanoyyli]-C-seko-10-deasetyylibakka-tiini ΠΙ (5a, Ri = Ph, R2 = tBuO) sekä 13-[(2R,3S)-3-isobutyyli-2-hydroksi-3-kapro-10 yyhamino-propanoyyli]-C-seko-10-deasetyylibakkatiini (5a, Ri = isobutyyli, R2 = pentyyli) saadut ICso-tulokset taksolin vastaaviin arvoihin verrattuna.

10 9 _ m Ο Ί, Ν„ 'Ί Μ ι .5 qriMn ο ο ο ο ο νο /—.

3 II 11 -Η -Η -Η -Η -Η -Η § S p? pj ο φ π « co o >3 S X cn ι-T rf ro o oo rt „3 -1 X m ro CM '<?

•1—j PL| Q r—i I

K l II

11 & (2 a x o

Il o" * e k (—Γ η O "“l co co <—i es es 3 „ Il «N O o' o' ©" es

qq p4 t -H -H -H -H -H -H

V j-γ K o m q n o

", oi S HrT VO ri VO en (N O

<2 “ Ι ΐ s 1 S Ä f? | L £ o> 'öb W H—1 »—i »r^ o ^ -ι-i O O O O oo Ö

5 O -h -H -H -H -H -H CN

O χ <0 X ^ CD e<q © +

Il /5 <> co </o vo p-' in m ä H - a g uf w 7 ® 7 s * s 9 8 0 + 11 x ? «s rg _ vo K « oo (N es es es es ,-ι „ § w P" Γ- O C~~ O C~~ X X v=T)

PH “ X

ill ^ a

6 I II

- 1 ^ X S1 x Ö & cö O >, to OS ,-v ·γτ> ^ P X x g ö 3 a u § 3 3 il I | | t -a | ι

χ x J2 ” ^ Ö ö 5 X

“o p a <3 <3 ^ 3 ι co Ö 0) 1) co go to ^ ö H .2 -52 '3 3 P4 ,2 o <ö XBgSSQ o ^ 3 ^ 11 s M 1 a ö Ο ΓΓ ov o t> x

X" ,—< *—1 OV CN Cu £Li X

§ « 2 a s [1 o Ö s

Hm J < <! W S S oo 11 en es es^ t> ia* en o' o' o' o" en"

ö £ S' '-l -H -H -H -H -H

.3 ^ O -H to >o i> ι-h ’f? X> rO -S' O .-Γ CN (N 1-Γ io

;a m o « es (N

3 -2 ft

g II II

I έ £

O

in o

>—I

^ § O (3Q °i CN, is,

M +- fS O O O O

5 II ^ -H -H -H -H -H

-H o en es «o en „—„ cö „ ι/’) i—i en en i—i i—i P3 Ό ,p en en b P" ·ή t 11 1 a a i " jg

Sf 3b M Λ «ι-Γ co ιο VO f-».

|>k .rH CO O O O O 00 S

-P *3 -H -H -H -H -H -H s £ 8 °„ "fr <3 en o ^ 0 3 l'-" en" un" o' in' + • S H ^ ON 05 II ^ ω _ Ph pd ω f « *° s

\ H

Q o

5 CS

S cö + " & 2 ql «S _ (¾ 52 S' oo es es es es es ^2 „ 3 o ^ e- i> i> i> o- ^

P3 m M

R 2 S

^ -3- S

p4 8 -rt

^ ö -S

eS _ -g! g

»n _ S S H

Ö Cö O in -g

•a S ¥ o g | -S

1 i s d j ΐ | ® Ί -¾ g a p, -e -g ja f-1 ,—1 ö ö S § Jf, 3

1 ö S S 03 OT — M

S g <Ν<Ν^ΛϋΟ S

«e ft .s H 3 ,_i <d <! ffi S S en 12

Isoseriiniketjussa erilaisia substituentteja käsittävät yhdisteet käyttäytyvät samankaltaisella tavalla. Näihin yhdisteisiin liittyy yllättäviä etuja taksoliin verrattuna muille kasvaimia torjuville aineille kuten adriamysiinille ja cis-platinalle vastustuskykyisten solulinjojen tapauksessa. Taksolin ja näiden tuotteiden väliset erot ovat tätäkin ilmei-5 sempiä in vivo -malleissa, josta esimerkkinä voidaan mainita kateenkorvaton ja karvaton hiiri, johon on istutettu ihmiskasvain. Samoin ollaan todettu, että niiltä keksinnön mukaisilta yhdisteiltä, joissa R2 on alkyyli- tai alkenyyliryhmä, puuttuu yllättävällä tavalla sydämelle myrkyllinen aktiivisuus erona taksolille ja sen tunnetuille johdannaisille, joten niitä voidaan käyttää edullisella tavalla sydänsairaissa potilais-10 sa, joita ei voida hoitaa taksolilla eikä sen tunnetuilla johdannaisilla.

Esillä olevan keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan sisällyttää sopiviin farmaseuttisiin valmisteisiin ruuansulatuskanavan ulkopuolisesti ja suun kautta tapahtuvaa antamista varten. Laskimon sisäisesti annettaessa käytetään pääasiassa polyetoksiloi-15 dun risiiniöljyn ja etanolin seoksia tai liposomivalmisteita, jotka on valmistettu luonnollisesta fosfatidyylikoliinista tai luonnollisten fosfolipidien seoksista kolesterolin läsnä ollessa.

Esitetyt esimerkit havainnollistavat edelleen tätä keksintöä.

20

Esimerkki 1. 10-dehydro-10-deasetyylibakkatiini III:n (4) valmistus 10 g 10-deasetyylibakkatiini III:ta (3) suspendoidaan 350 ml:aan metanolia, ja tähän suspensioon lisätään 65 g Cu(OAc)2:ta. Tätä suspensiota sekoitetaan jatkuvasti huo-25 neen lämpötilassa 120 tuntia. Suolat poistetaan suodattamalla ja liuos käsitellään kromatografisesti silikageelillä (100 g), eluoiden heksaanin ja etyyliasetaatin 6:4-seoksella. Petrolieetteristä kiteyttämällä saadaan 9,5 g yhdistettä (4), M+ m/z 542.

Esimerkki 2. 10-deasetyyli-10-epibakkatiini III:n (2a, R3 = H, R4=Rs= OH) ja C-3 0 seko-10-deasetyylibakkatiini ΠΙ:η (5) valmistus 13

Liuokseen, joka sisältää 300 mg yhdistettä (4) 5 ml:ssa metanolia, lisätään yksi ekvivalentti yhdistettä CeClr3H20, seosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa 5 minuuttia, sitten siihen lisätään 80 mg yhdistettä NaBELj. Tätä liuosta käsitellään NH4CI-liuoksella, se uutetaan etyyliasetaatilla ja käsitellään kromatografisesti silikageelillä, 5 jota eluoidaan heksaanin ja etyyliasetaatin 3:7-seoksella. Tällä tavalla saadaan 98 g yhdistettä (2a) (M+ m/z 544) ja 120 mg yhdistettä (5) (M+ m/z 546).

10-deasetyyli-10-epibakkatiini ni:lla on seuraava ^-NMR-spektri (CDCI3): H2, d 5,68 J 6,8; H3, d 4,26 J 6,8; H5, d 5,03 J 7,1; H7/13, m 4,76; HIO, hr s 5,20; 10 OH, 10 br s 3,44; H16, s 1,14; H17, s 1,68; H18, s 2,22; H19, s 1,13; H20a, d 4,33; H20b, d 4,18; Ac, s 2,31; Bnz, br 8,12 J 8, br 17,60 J 8, br 117,49 J 8.

Esimerkki 3. 10-deasetyyli-13 -dehydrobakkatiini III:n (6) valmistus 15 3 g meta-klooriperbentsoehappoa ja 1 g natriumasetaattia lisätään suspensioon, joka sisältää 1 g 10-deasetyylibakkatiini M:ta (3) 100 mkssa CTLCkda. Tätä suspensiota sekoitetaan jatkuvasti 120 tunnin ajan huoneen lämpötilassa, ja sitten se laimennetaan yhdisteen Na2C03 vesiliuoksella. Orgaaninen faasi pestään 5 % Na2C03-liuoksella ja haihdutetaan kuiviin. Jäännös puhdistetaan silikageelillä, jota eluoidaan 20 heksaanin ja etyyliasetaatin 3:7-seoksella. Tällä tavalla saadaan 789 mg yhdistettä (6), M+ m/z 542.

Esimerkki 4. 10-deasetyyli-11,12-dihydro-7-trietyylisilyyli-bakkatiini IILn (2b, R3 = OH, R4 = H, R5 = O-TES) valmistus 25 1,6 g yhdistettä (6) liuotetaan metyleenikloridiin ja siihen lisätään 370 mg 4-dime-tyyliaminopyridiiniä ja 2,5 ml trietyylisilyylikloridia. Sen jälkeen, kun reaktioseosta on pidetty 2 tuntia huoneen lämpötilassa, se laimennetaan metyleenikloridilla ja pestään vedellä. Orgaaninen faasi väkevöidään kuiviin. Tällöin saadaan 1,72 g jäännös-30 tä, joka sekoitetaan 150 ml:aan 95 % etanolia ja sitä käsitellään 9 g:lla yhdistettä ΝβΒΗφ Kolmen tunnin kuluttua seos laimennetaan NH4Cl-liuoksella ja tuote uute- 14 taan etyyliasetaatilla. Sitten toteutetaan kromatografinen käsittely silikageelin avulla, eluoiden heksaanin ja etyyliasetaatin 7:3-seoksella, minkä jälkeen saadaan 800 mg yhdistettä (2b) (R3 = OH, R4 = H, R5 = O-TES).

5 Esimerkki 5. 1 l,12-dihydro-7-TES-bakkatiini ΠΙ:η (2b, R3 = OH, R4 = H, R5 = O-TES) ja 11,12-dihydrobakkatiini ΠΙ:η (2b, R3 = O Ac, R4 = H, R5 = OH) valmistus 500 mg 10-deasetyyli-l 1,12-dihydro-7-trietyylisilyylibakkatiini III:ta (2b, R3 = OH, R4 = H, R5 = O-TES) saatetaan reagoimaan vedettömässä pyridiinissä asetyyliklori-10 din kolmen ekvivalentin kanssa 0 °C:ssa 6 tunnin ajan. Reaktioseos laimennetaan vedellä ja se uutetaan metyleenikloiidilla. Liuottimen haihduttamisen jälkeen jäännös kiteytetään asetonin ja heksaanin seoksesta. 510 mg ll,12-dihydro-7-TES-bak-katiini III:sta saadaan. M+ m/z 702 III. Tämä tuote Luotetaan metanoliin ja sitä käsitellään laimealla HCl-liuoksella täydellisen desilyloitumisen toteuttamiseksi. Reak-15 tioseos laimennetaan vedellä, se uutetaan etyyliasetaatilla ja kiteytetään metanolin vesiliuoksesta. Tällä tavalla saadaan 400 mg 11,12-dihydrobakkatiini Hirtä, M+ m/z 588.

Esimerkki 6. 13 -[(2R,3 S)-3-fenyyli-2-hydroksi-3 -tert.-butoksikarbonyyliamino- 20 propanoyyli]-l 1,12-dihydrobakkatiini Hirn (Ib, Rt = Ph, R2 = tBuO, R3 = OAc, R4 = H) valmistus 500 mg 11,12-dihydrobakkatiini Hirtä (2b, R3 = OAc, R4 = H, R5 = O-TES) liuotetaan 20 mlraan tolueenia, ja siihen liuotetaan edelleen 0,45 g (4S,5R)-N-tert.-butoksi-25 karbonyyli-2,2-dimetyylifenyyli-5-oksatsolidiinikarboksyylihappoa, disykloheksyy-likarbodi-imidiä (1,03 ekvivalenttia) sekä N,N-dimetyyhaminopyridiiniä (0,2 ek-viv.) 80 °Crssa 2 tunniksi. Reaktioseos pestään vedellä siten, että reagenssiylimäärä saadaan poistetuksi, sitten se haihdutetaan kuiviin. Jäännöstä käsitellään metanolilla, joka sisältää 1 % muurahaishappoa, 4 tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Metanoli-30 liuos laimennetaan vedellä, se neutraloidaan ja uutetaan etyyliasetaatilla. Orgaaninen faasi väkevöidään kuiviin ja jäännöstä käsitellään liuoksella, joka sisältää 1,5 ekviv.

15 di-tert.-butyylikarbonaattia ja natriumbikarbonaattia 15 ml:ssa tetrahydrofuraania. Reaktioseos laimennetaan vedellä, se uutetaan etyyliasetaatilla ja heteroasetaattifaasi väkevöidään kuiviin. Jäännös sekoitetaan ldoorivetyhapolla happamaksi tehtyyn metanoliin desilyloinnin viemiseksi loppuun. Sitten liuos laimennetaan vedellä ja se 5 uutetaan etyyliasetaatilla. Jäännös, joka saadaan haihduttamalla heteroasetaattifaasi kuiviin, käsitellään kromatografisesti silikageelillä, jota eluoidaan asetonin ja hek-saanin l:l-seoksella reaktion epäpuhtauksien poistamiseksi. Tällä tavalla saadaan 580 mg tuotetta, M+ m/z 851.

10 Esimerkki 7. 13-[(2R,3 S)-3 -bentsoyyliamino-3 -fenyyli-2-hydroksipropanoyyli] - 11,12-dihydrobakkatiini III:n (lb, Ri = R2 = Ph, R3 = OAc, R4 = H) valmistus 500 mg 1 l,12-dihydro-7-TES-bakkatiinia (2b, R3 = OAc, R4 = H, R5 = O-TES) liuotetaan 20 niliaan tolueenia, ja siihen liuotetaan edelleen 1,5 g (4S,5R)-N-bentsoyyli-15 2,2-dimetyyli-4-fenyyli-5-oksatsolidiinikarboksyylihappoa, disykloheksyylikarbodi-imidiä (1,03 ekvivalenttia) sekäN,N-dimetyyHaminopyridiiniä (0,2 ekviv.) 80 °C:ssa 2 tunniksi. Reaktioseos pestään vedellä siten, että reagenssiylimäärä saadaan poistetuksi, sitten se haihdutetaan kuiviin. Jäännöstä käsitellään metanolilla, joka sisältää 1 % muurahaishappoa, 4 tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Metanoliliuos laimenne-20 taan vedellä, se neutraloidaan ja uutetaan etyyliasetaatilla. Orgaaninen faasi väkevöidään kuiviin ja jäännös sekoitetaan ldoorivetyhapolla happamaksi tehtyyn me-tanoliin desilyloinnin viemiseksi loppuun. Sitten liuos laimennetaan vedellä ja se uutetaan etyyliasetaatilla. Jäännös, joka saadaan haihduttamalla heteroasetaattifaasi kuiviin, käsitellään kromatografisesti silikageelillä, jota eluoidaan asetonin ja hek-25 saanin l:l-seoksella reaktion epäpuhtauksien poistamiseksi. Tällä tavalla saadaan 530 mg tuotetta, M+ m/z 855.

Esimerkki 8. 13-[(2R,3S)-3-fenyyli-2-hydroksi-3-tert.-butoksikarbonyyliamino-propanoyyli]-10-epi-10-deasetyylibakkatiini Ulin (la, Ri = Ph, R2 = tBuO, R3 = H, 30 R4 = OH) valmistus 16 500 mg 10-deasetyyli-10-epibakkatiini HI:ta (2a, R3=H, R4=Rs= OH) liuotetaan 15 ml:aan vedetöntä pyridiiniä ja liuosta käsitellään 5 minuuttia 80 °C:ssa kolmella ekvivalentilla trikloorietoksikarbonyylikloridia (TROC-C1), minkä jälkeen seos jäähdytetään huoneen lämpötilaan. 1 ml metanolia lisätään TROC-Cl-ylimäärän hajottami-5 seksi. Tämä liuos laimennetaan jäävedellä ja se uutetaan kloroformilla, orgaaninen faasi pestään kloorivetyhapon laimealla liuoksella. Orgaaninen faasi haihdutetaan kuiviin ja jäännöstä käsitellään huoneen lämpötilassa 24 tuntia tolueeniliuoksella, joka sisältää kolme ekvivalenttia (4S,5R)-N-tert.-butoksikarbonyyli-2,2-dimetyyli-4-fenyyli-5-oksatsolidiinikarboksyylihappoa, 3 ekvivalenttia disykloheksyylikarbodi-10 imidiä sekä 0,2 ekvivalenttia Ν,Ν-dimetyyliaminopyridiiniä. Reaktioseos pestään vedellä ja orgaaninen faasi haihdutetaan kuiviin tyhjössä. Jäännös sekoitetaan me-tanoliin ja sitä käsitellään yhdellä ekvivalentilla p-tolueenisulfonihappoa 48 tunnin ajan, sitten seos laimennetaan vedellä ja se uutetaan etyyliasetaatilla. Orgaaninen faasi haihdutetaan tyhjössä ja jäännös sekoitetaan 200 ml:aan etikkahapon ja etyy-15 liasetaatin l:l-seosta ja sitä käsitellään 3 tunnin ajan 30 °C:ssa 11 ekvivalentilla sinkkijauhetta. Kiinteä materiaali poistetaan suodattamalla ja liuos laimennetaan vedellä, uutetaan etyyliasetaatilla ja käsitellään kromatografisesti silikageelillä, jota eluoidaan etyyliasetaatin ja heksaanin l:4-seoksella. Tällä tavalla saadaan 512 mg tuotetta (la), M+ m/z 807.

20

Esimerkki 9. 7,9-ditrietyylisilyyli-C-seko-10-deasetyylibakkatiini III:n valmistus

Liuokseen, joka sisältää yhdistettä (5) (200 mg, 0,37 mmol) vedettömässä dimetyyli-formamidissa (DMF) (5 ml), lisätään imidatsolia (75 mg, 1,11 mmol, 3 mooliekviv.) 25 ja trietyylisilyylikloridia (TES) (186 ml, 167,3 mg, 1,11 mmol, 3 mooliekviv.) j a tätä reaktioseosta sekoitetaan 10 minuuttia huoneen lämpötilassa. Reaktio tarkastetaan TLC-menetelmällä (3:7 heksaani: etyyliasetaatti, lähtöaineen Rf on 0,10, tuotteen Rf on 0,80). Reaktio pysäytetään lisäämällä vettä ja tuotetta Celite®, ja sakka poistetaan suodattamalla ja se pestään vedellä DMF:n poistamiseksi, sitten CHCbilla tuotteen 30 poistamiseksi. Pylväskromatografisen (9:1 heksaani:etyyliasetaatti -seoksella si- 17 lanolin eluoirniseksi, sitten 6:4 heksaanhetyyliasetaatti -seoksella tuotteen eluoimi-seksi) puhdistuksen jälkeen saatiin 146 mg otsikon mukaista yhdistettä (51 %).

Esimerkki 10. 13-[(2R,3S)-3-fenyyh-2-hydroksi-3-tert.-butoksikarbonyyliamino- 5 propanoyyli]-C-seko-10-deasetyylibakkatiini ΠΙ:η (5a, Ri = Ph, R2 = tBuO) valmistus

Liuokseen, joka sisältää esimerkissä 9 saatua tuotetta (126 mg, 0,16 mmol) vedettömässä tolueenissa (5 ml), lisätään 67,5 mg disykloheksyylikarbodi-imidiä (0,327 10 mmol, 2 mooliekviv.), 105 mg (4S,5R)-N-Boc-2-(2,4-dimetoksifenyyli)-4-fenyyli-5-oksatsolidiinikarboksyylihappoa (0,327 mmol, 2 mooliekviv.) sekä 5 mg 4-dimetyy-liaminopyridiiniä. Tätä seosta kuumennetaan 60 °C:ssa 24 tuntia ja se laimennetaan yhdisteen NaHCC>3 kylläisellä vesiliuoksella ja etyyliasetaatilla. Jäännös puhdistetaan pylväskromatografisesti (8:2 heksaanketyyliasetaatti), jolloin saadaan 175 mg 15 13-esteriä (95 %). Jäännös sekoitetaan 50 mkaan metanoli/HCl-seosta (0,01 %) ja reaktioseos jätetään huoneen lämpötilaan 1 tunniksi. Liuos tehdään emäksiseksi siten, että pH-arvoksi saadaan 5 ja se väkevöidään kuiviin tyhjössä. Jäännös käsitellään kromatografisesti silikageelipylväällä, jota eluoidaan metyleenildoridin ja me-tanolin 98:2-seoksella. Etyyliasetaatista kiteyttämisen jälkeen saadaan 85 mg otsikon 20 mukaista yhdistettä.

Esimerkki 11. 13-[(2R,3S)-3-isobutyyh-2-hydroksi-3-kaproyyliamino-propanoyy-li]-C-seko-10-deasetyylibakkatiini ΙΠ:η (5a, Ri = isobutyyli, R2 = pentyyli) valmistus 25 Liuokseen, joka sisältää esimerkissä 9 saatua tuotetta (126 mg, 0,16 mmol) vedettömässä tolueenissa (5 ml), lisätään 67,5 mg disykloheksyylikarbodi-imidiä (0,327 mmol, 2 mooliekviv.), 140 mg (4S,5R)-N-kaproyyli-2-(2,4-dimetoksife-nyyli)-4-isobutyyli-5-oksatsolidiinikarboksyylihappoa (0,327 mmol, 2 mooliekviv.) sekä 5 mg 4-dimetyyliaminopyridiiniä. Tätä seosta kuumennetaan 60 °C:ssa 30 24 tuntia ja se laimennetaan yhdisteen NaHCCh kylläisellä vesiliuoksella ja etyy liasetaatilla. Jäännös puhdistetaan pylväskromatografisesti (8:2 heksaani: etyyli- 18 asetaatti), jolloin saadaan 175 mg 13-esteriä (95 %). Jäännös sekoitetaan 50 ml:aan metanoli/HCl-seosta (0,01 %) ja reaktioseos jätetään huoneen lämpötilaan 1 tunniksi. Liuos tehdään emäksiseksi siten, että pH-arvoksi saadaan 5, ja se vä-kevöidään kuiviin tyhjössä. Jäännös käsitellään kromatografisesti silikageelipyl-5 väällä, jota eluoidaan metyleenikloridin ja metanolin 98:2-seoksella. Etyyliasetaatista kiteyttämisen jälkeen saadaan 88 mg otsikon mukaista yhdistettä.

Claims

19 Patenttivaatiniukset

1. Yhdiste, joka on 13-[(2R,3 S)-3 -fenyyli-2-hydroksi-3 -tert.-butoksikarbonyyliami-no-propanoyylij-lO-epi-lO-deasetyylibakkatiim lilja jolla on kaava (la) V V7 R^cjNH o hv )^ruy /0H 3/ ÖH OH -Y -ti (la) missä Ri = fenyyli, R2 = tert.-butoksi, R3 = H, R4 = OH.

2, Yhdiste, joka on 13-[(2R,3S)-3-fenyyli-2-hydroksi-3-tert,-butoksikarbonyyliarni-10 no-propanoyyli]-l 1,12-dihydrobakkatiini Eija jolla on kaava (Ib) \V Vv 7\i k (lb) missä Ri = fenyyli, R2 = tert.-butoksi, R3 = asetoksi ja R4 = H. 20

3. Menetelmä patenttivaatimusten 1 ja 2 mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, jossa menetelmässä syntonit, joilla on kaava (2) Hy/iFyii 9V/5 Hei Jr 7 n l—* (2) 5 missä: kun 11,12-asemassa on läsnä olefiininen kaksoissidos, niin tällöin R3 on vety, R4 ja Rs ovat hydroksi-, C2-8-asyylioksi-, alkyylisilyylioksi- tai 2,2,2-trikloorietoksikar-bonyylioksiryhmä; kun 11,12-asemassa ei ole läsnä olefiinista kaksoissidosta, niin tällöin 12-aseman 10 metyyli on α-orientoitunut, R4 on vety, R3 ja R5 ovat hydroksi-, C2-8-asyylioksi-, alkyylisilyylioksi- tai 2,2,2-trikloorietoksikarbonyylioksiryhmä; esteröidään tunnettujen menetelmien mukaisesti sopivalla tavalla aktivoidulla ja/tai suojatuilla isoseriinijohdannaisilla, jolloin 13-asemaan saadaan asyyliryhmä R.CONH O OH 15 (missä Ri ja R2 ovat patenttivaatimuksissa 1 ja 2 esitettyjen määritelmien mukaisia), minkä jälkeen suojaavat ryhmät poistetaan tunnetuilla menetelmillä. 21

4. Välituotteena toimiva yhdiste, jolla on kaava (2) / *3 R Λ V ^R4 X> ην/^ΓΓ'11 \/ /s Hö' ViJi 3/ \ Ph—^ Ac°L-_-,P (2) missä: 5 kun 11,12-asemassa on läsnä olefiininen kaksoissidos, niin tällöin R3 on vety, R4 ja R5 ovat hydroksi-, C2-8-asyylioksi-, alkyylisilyylioksi- tai 2,2,2-trikloorietoksikarbo-nyylioksiryhmä; kun 11,12-asemassa ei ole läsnä olefiinista kaksoissidosta, niin tällöin 12-aseman metyyli on α-orientoitunut, R4 on vety, R3 ja R5 ovat hydroksi-, C2-s-asyylioksi-, 10 alkyylisilyylioksi- tai 2,2,2-triMoorietoksikarbonyylioksiryhmä.

5. Välituotteena toimiva yhdiste, jolla on kaava (5) v-/ i Γ --°H HC^ '—tS-< 0H Ö d f Ή » (5) 22

6. Puolisynteettinen sekotaksaani, jolla on kaava 5a -J OH R2CONH \ OH i --{ -\^P· (5a) 5 missä: Ri ja R2, jotka voivat olla samanlaisia tai erilaisia, ovat Ci_2o-alkyyli-, C2-8-al-kenyyli-, aryyli- tai heteroaryyliryhmä; R2 voi olla myös tert.-butoksiryhmä.

7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen yhdiste, joka on 13-[(2R,3 S)-3 -fenyyli-2-hydrok-10 si-3-tert.-butoksikarbonyyliamino-propanoyyli]-C-seko-l O-deasetyylibakkatiini ΠΙ ja jolla on kaava 5a -·/ OH f^CONH \\ / OH <^H i ---{ "H P missä Ri = fenyyli, R2 - tert.-butoksi. 23

8. Patenttivaatimuksen 6 mukainen yhdiste, joka on 13-[(2R,3S)-3-isobutyyli-2-hydroksi-3 -kaproyyliamino-propanoyyli] -C-seko-10-deasetyylibakkatiini III, j olla on kaava 5a, jossa Ri = isobutyyli, R2 = pentyyli.

9. Menetelmä patenttivaatimuksen 6 mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, jossa menetelmässä kaavan 5 j r ---^ OH H</ Y-) OH 0 d J-V f pk-—/ /__0 Fh-\ tsr (5) mukainen yhdiste esteröidään tavanomaisten menetelmien mukaisesti iso-10 seriiniketjusta sopivalla tavalla aktivoiduilla ja/tai suojatuilla johdannaisilla, jolloin 13-asemaan saadaan asyyliryhmä ft COHH O oa (missä Ri ja R2 ovat patenttivaatimuksessa 6 esitettyjen määritelmien mukaisia), minkä jälkeen suojaavat ryhmät poistetaan tavanomaisilla menetelmillä. 15

10. Farmaseuttiset koostumukset, jotka sisältävät patenttivaatimusten 1 - 2 ja 6 - 8 mukaisia taksaaneja. 24

11. Patenttivaatimuksen 10 mukaiset farmaseuttiset koostumukset, joilla on kasvaimia toijuvaa vaikutusta.

12. Patenttivaatimusten 1 — 2 ja 6 - 8 mukaisten taksaanien käyttö syövän hoidossa käyttökelpoisten lääkkeiden valmistamiseksi.

13. Patenttivaatimuksen 6 mukaisten taksaanien, joissa R.2 on alkyyli- tai alkenyyli-ryhmä, käyttö sellaisten lääkkeiden valmistamiseksi, joita voidaan käyttää syövän 10 hoitamiseksi sydänsairaissa potilaissa. 25