FI118853B - Makrokapseloituja erittäviä soluja - Google Patents

Makrokapseloituja erittäviä soluja Download PDF

Info

Publication number
FI118853B
FI118853B FI962841A FI962841A FI118853B FI 118853 B FI118853 B FI 118853B FI 962841 A FI962841 A FI 962841A FI 962841 A FI962841 A FI 962841A FI 118853 B FI118853 B FI 118853B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
agarose
cells
cell
bead
secreting cells
Prior art date
Application number
FI962841A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI962841A0 (fi
FI962841A (fi
Inventor
Albert L Rubin
Kanti Jain
Original Assignee
Rogosin Inst
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Rogosin Inst filed Critical Rogosin Inst
Publication of FI962841A0 publication Critical patent/FI962841A0/fi
Publication of FI962841A publication Critical patent/FI962841A/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI118853B publication Critical patent/FI118853B/fi

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/1652—Polysaccharides, e.g. alginate, cellulose derivatives; Cyclodextrin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/37—Digestive system
    • A61K35/39—Pancreas; Islets of Langerhans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/1658—Proteins, e.g. albumin, gelatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/5005—Wall or coating material
    • A61K9/5021—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/5036—Polysaccharides, e.g. gums, alginate; Cyclodextrin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/04—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier entrapped within the carrier, e.g. gel or hollow fibres
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/0012—Cell encapsulation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0676—Pancreatic cells
    • C12N5/0677—Three-dimensional culture, tissue culture or organ culture; Encapsulated cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K2035/126—Immunoprotecting barriers, e.g. jackets, diffusion chambers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
    • C12N2533/50—Proteins
    • C12N2533/54—Collagen; Gelatin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
    • C12N2533/70—Polysaccharides
    • C12N2533/76—Agarose, agar-agar

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

118853
Makrokapseloituja erittäviä soluja Keksinnön ala Tämä keksintö koskee erittävien solujen makrokap-5 selointia hydrofiiliseen geelimateriaaliin, makrokapseloituja erittäviä soluja, makrokapseloitujen erittävien solujen käyttöä, ja erittävien solujen säilömistä makrokapse-loinnilla.
Keksinnön tausta 10 Erittävät solut ovat soluja, joille on tunnus omaista, että ne erittävät biologisia tuotteita, kuten, näihin rajoittumatta, hormoneja (esim. insuliinia), kasvutekijöitä, sytokiineja ja niin edelleen. Niiden tehtävä biologisissa prosesseissa on tunnettu, eikä sitä tarvitse 15 tässä tuoda esiin. Joukko tauteja ja patologisia tiloja liittyy erittävien solujen kyvyttömyyteen toimia oikella tavalla, kuten eritettävien tuotteiden vajavaiseen tuottoon, esim. hypotyroidismi ja kretinismi, jotka molemmat johtuvat kilpirauhashormonin puutteesta, aivolisäkeperäi-20 nen lyhytkasvuisuus, joka johtuu aivolisäkkeen kasvuhormonin puutteesta, Leschin-Hyhanin syndrooma, joka johtuu hy-poksantiini-guaniinifosforibosyylitransferaasin puuttees-##*·· ta, fulminantti maksan vajaatoiminta, joka johtuu hepato- :V: trofisen tekijän puutteesta, soluväliainetauti, joka joh- ;*·.· 25 tuu kondrosyyttien puutteesta, ja insuliinista riippuva • ♦ . diabetes, joka johtuu insuliinin puutteesta.
Eräs lähestymistapa tällaisten tilojen hoitoon on • · · siirtää erittäviä soluja potilaaseen. Siirretyn materiaa- . . Iin, ollakseen kliinisesti turvallista ja tehokasta, täy- • · * *)** 30 tyy (1) olla ei-immunogeenistä, ei-trombogeenistä, biolo- • φ *·”* gisesti pysyvää ja täysin myrkytöntä isännän soluille ja :*·*: kudoksille, (2) säilyttää solujen elinkyky pitkän aikaa, (3) päästää ravinteet, eritystä stimuloivat aineet ja so- ··· lujen tuotteet kulkemaan vapaasti, (4) tehdä kirurginen • · 35 implantaatio ja solujen uudelleenymppäys helpoksi ja (5) • * *···* olla helppoja panna paikalleen ja myös helppoja irrottaa.
2 118853
Haimasaarekeitten siirto insuliinista riippuvan diabeteksen hoitamiseksi on ollut aihe, johon kiinnostus on herännyt uudelleen johtuen tekniikan edistymisestä Lan-gerhansin saarekkeitten eristämisessä. Taustatiedoksi sa-5 nottakoon, että ihmisen haima sisältää Langerhansin saa rekkeita (tästedes "haimasaarekkeita"), jotka ovat hajallaan haiman eksokriinisessä osassa, joidenkin keskittymien ollessa lähellä haimatiehyitä. Haimasaarekkeita yhdessä voidaan ajatella yhtenä endokriinisenä elimenä, joka vie 10 noin 1 %:n haiman tilavuudesta. Haimassa pieniä saarekkeita (enintään 160 pm halkaisijaltaan) on yleensä koko eksokriinisessä kudoksessa. Nämä pienet saarekkeet edustavat 75 % saarekkeista lukumäärältään, mutta vain noin 15 % tilavuudeltaan. Saarekkeet, joiden halkaisija on yli 15 250 pm, muodostavat vain 15 % saarekkeiden kokonaismääräs tä, mutta 60 % tilavuudesta. Nämä saarekkeet sijaitsevat suurehkojen tiehyiden ja verisuonten lähellä, eivätkä ne ole rakkulakudoksen ympäröimiä. Ihmisen haima voi sisältää yli miljoona saareketta, ja jokainen saareke tyypillisesti 20 sisältää tuhansia soluja. Kukin saareke muodostuu keskellä olevasta, insuliinia tuottavien beeta-solujen (B-solujen) muodostamasta ytimestä sekä ympäröivästä vaipasta, jossa • · . on glukagoinia sisältäviä alfa-soluja (A-soluja), somato- • · · ·;·; statiinia erittäviä delta-soluja (D-soluja) ja haiman po- *.1.1 25 lypeptidiä sisältäviä soluja (PP-soluja). Insuliinia tuot- • · tavat B-solut muodostavat solujen pääosan, ja käsittävät jopa noin 80 % saarekkeista ihmisellä, i Haimasaarekkeiden siirtämisen kliinisiä sovelluksia on rajoittanut kyvyttömyys estää saarekesiirrännäisen (sa-30 masta tai eri lajista) hyljintää, ts. siirrettyjen haima- • · .···. saarekkeiden hyljintää, joka johtuu isännän immuunijärjes- #]·] telmän hyökkäyksestä siirrettyjä haimasaarekkeita vastaan.
: .1 Hyljinnän torjumiseksi haimasaarekkeiden siirron yhteydes- • · · sä on annettu Immunosuppressiivisia lääkkeitä.
• · • 1 • · · ·· • · • · • 1 1 118853 3
Immunosuppressiohoito on kuitenkin osoittautunut kaksiteräiseksi miekaksi; vaikkakin se vähentää hyljintä-riskiä, se heikentää yleisesti kehon immunologista puolustusta. Monet tutkijat ovat tutkineet erilaisia menetelmiä 5 siirretyn kudoksen suojaamiseksi isännän immuunivasteelta. Kuten seuraavassa tarkastellaan, vaikka tilapäisestä menestyksestä on raportoitu (ks. Lacy, Diabetes Reviews 1 (1):76 (1993), tehokkaat pitkäkestoiset menetelmät ovat vielä saavuttamatta.
10 Viiteen pääasialliseen lähestymistapaan, joilla siirrettyä kudosta suojataan isännän immuunivasteelta, kaikkiin kuuluu pyrkimys eristää siirretty kudos isännän immuunisysteemistä. Tähän mennessä käytettyihin immuno-eristystekniikoihin kuuluvat: suonenulkoiset diffuusiokam-15 miot, suonensisäiset diffuusiokammiot, suonenulkoiset ult-rasuodatuskammiot, mikrokapselointi ja makrokapselointi. Kaikki nämä menetelmät ovat kuitenkin epäonnistuneet johtuen yhdestä tai useammasta seuraavista ongelmista: isännän fibroosivaste siirrännäismateriaalia kohtaan, siirrän-20 näismateriaalin epästabiilius, ravinteiden rajoitettu diffuusio puoliläpäisevien kalvojen läpi, eritystä stimuloi-, vien aineiden ja tuotteiden läpäisevyys sekä diffuusion viive puoliläpäisevien kalvojen läpi.
··· •••j Esimerkiksi Lim kehitti vuonna 1978 mikrokapseloin- ·.*.* 25 timenetelmän elinkelpoisten solujen, kudosten ja muiden • « ·.*·; herkkien biologisten kalvojen sulkemiseksi puoliläpäisevän :.·.·* kalvon sisään. (Lim, tutkimusraportti yhtiölle Damon Cor- :T: poration (1978)). Lim käytti alginaattia ja poly-L-lysii- niä olevia mikrokapseleita Langerhansin saarekkeiden kap-30 seloimiseksi. Vuonna 1980 raportoitiin tämän uuden tek- • · .···, niikan ensimmäinen onnistunut in vivo -sovellus diabetes- φ · *·* tutkimuksessa ((Hm ym.. Science 210:908 (1980)). Näiden ·· · : *.: mikrokapseloitujen Langerhansin saarekkeiden implantointi • · · johti euglykeemisen tilan yllä pitämiseen diabeettisissa :*. 35 eläimissä. Kuitenkin muut tutkijat näitä kokeita toistaes- *·· • · • · • · * 118853 4 saan havaitsivat alginaatin aiheuttavan kudosreaktion eivätkä pystyneet toistamaan Limin ym. tuloksia (Lamberti ym., Applied Biochemistry and Biotechnology 10:101 (1984), Dupuy ym., Jour. Biomed. Material and Res. 22:1061 (1988), 5 Weber ym., Transplantation 49:396 (1990) ja Soon-Shiong ym., Transplantation Proceedings 22:754 (1990)). Näiden polymeerien vesiliukoisuuden katsotaan nyt olevan vastuussa näiden mikrokapseleiden rajoitetusta stabiilisuudesta ja biologisesta yhteensopivuudesta in vivo. ((Dupuy ym., 10 em. teos, Weber ym., em. teos, Soon-Shiong ym., em. teos ja Smidsrod, Faraday Discussion of Chemical Society 57:263 (1974)).
Äskettäin Iwata ym. (iwata ym., Jour. Biomedical Material and Res. 26:967 (1992)) käyttivät agaroosia sa-15 masta lajista saatujen haimasaarekkeiden mikrokapseloin-tlin ja keksivät, että sitä voitiin käyttää väliaineena mikrohelmien valmistukseen. Heidän tutkimuksessaan 1 500 -2 000 saareketta kapseloitiin erikseen 5-prosenttiseen agariin ja implantoitiin streptotsotosiinilla indusoitui-20 hin diabeettisiin hiiriin. Siirrännäinen pysyi hengissä pitkän aikaa, ja saajat pysyivat normoglykeemisinä rajoit-. tamattoman kauan.
. Tämä menetelmä kuitenkin kärsii useista haitoista.
• · · ***j Se on hankala ja epätäsmällinen. Esimerkiksi monet helmet *·’.· 25 jäävät osittain peitetyiksi, ja useita satoja tyhjiä aga- • · roosihelmiä muodostuu. Siten kapseloitujen saarekkeiden erotteluun tyhjistä helmistä tarvitaan ylimääräistä aikaa.
:T: Lisäksi useimmat implantoidut mikrohelmet kertyvät lantio- onteloon, ja täysin peitetyissä yksittäisissä helmissä .*.*. 30 tarvitaan suuri määrä saarekkeita normoglykemian saavutta- • · .*··. miseksi. Lisäksi siiretyt helmet on vaikea ottaa pois, ne • * ovat yleensä hauraita, ja niistä vapautuu helposti saarek- * * · ί .* keitä niiden vahingoittuessa lievästi.
• · ·
Myös makrokapselointimenettelyä on kokeiltu. Eri 35 materiaaleista, kuten poly-2-hydroksietyylimetakrylaatis- • · · • · « · • · * 118853 5 ta, polyvinyylikloridi-koakryylihaposta ja selluloosa-ase-taatista olevia makrokapseleita tehtiin Langerhansin saarekkeiden immunoeristämistä varten. (Ks. Altman ym., Diabetes 35:625 (1986), Altman ym., Transplantation American 5 Society of Artificial Internal Organs 30:382 (1984), Rone-1 ym., Jour. Biomedical Material Research 17:855 (1983), Klomp ym., Jour. Biomedical Material Research 17:865-871 (1983)). Kaikissa näissä tutkimuksissa saavutettiin vain tilapäinen verensokerin normalisoituminen.
10 Archer ym., Journal of Surgical Research, 28:77 (1980), käyttivät akryylikopolymeeristä, onttoa kuitua eri lajista peräisin olevien saarekesiirrännäisten hyljinnän tilapäiseen estämiseen. He raportoivat hajallaan olevien, diabeettisiin hamstereihin onttokuiduissa siirrettyjen 15 vastasyntyneen hiiren haimasiirrännäisten pitkäaikaisesta hengissäpysymisestä. Äskettäin Lacy ym., Science 254: 1782 - 1784 (1991), varmistivat heidän tuloksensa, mutta havaitsivat euglykemian olevan ohimenevä vaihe. He havaitsivat, että kun saarekkeita injisoidaan kuituun, ne aggre-20 goituvat onttokuidun sisällä ja johtavat nekroosiin saare- kemassojen keskiosissa. Keskiosan nekroosi estää siirrän-. näisen pituuden kasvattamisen. Tämän ongelman ratkaisemi seksi he käyttivät alginaattia saarekkeiden hajaannuttami-··*! seksi kuidussa. Tätä menetelmää käyttäen he pääsivät siir- *·*.* 25 rännäisen pitkäaikaiseen hengissäpysymiseen. Kuitenkaan • · ·.**: tätä koetta ei ole toistettu laajasti. Siksi kalvon toi- minta saarekkeiden siirron väliaineena ihmisissä on ky-seenalainen.
Siten on olemassa tarve saada aikaan erittävien •V* 30 solujen siirto, erityisesti pitää hengissä haimasaarekkei- .···. den samasta ja eri lajista peräisin olevat siirrännäiset • · käyttämättä kroonisia immunosuppressiivisia aineita.
i .* Keksijät ovat yllättävästi havainneet, että erittä- .··· vien solujen makrokapselointi hydrofiiliseen geelimateri- * :·. 35 aaliin johtaa toimivaan, ei-immunogeeniseen makrohelmeen, «· • · • « ♦ ·· 6 118853 joka voidaan siirtää eläimiin, ja jota voidaan varastoida pitkiä aikoja. Tämän keksinnön mukainen erittävien solujen makrokapselointi tuo tarjolle tehokkaamman ja hallittavissa olevan erittävien solujen siirtomenetelmän. Makrokapse-5 lointimenetelmää voidaan käyttää myös muiden biologisten agenssien, kuten entsyymien, mikro-organismien, troofisten aineiden, mukaan luettuina rekombinanttituotetut troofiset aineet, sytotoksisten aineiden ja kemoterapeuttisten aineiden makrokapselointiin. Makrokapseloituja biologisia 10 agensseja voidaan antaa sellaisten tilojen hoitoon, joilla tiedetään olevan vaste biologiselle agenssille.
Keksinnön yhteenveto
Siksi tämän keksinnön on tarkoitus tuoda käytettäväksi erittävien solujen makrohelmi, joka voidaan siirtää 15 eläimiin sellaisten tilojen hoitamiseksi, jotka johtuvat isännän erittävien solujen heikentyneestä toiminnasta.
Lisäksi tämän keksinnön on tarkoitus tuoda käytettäväksi erittävien solujen makrohelmi, jota voidaan säilyttää pitkän aikaa.
20 Näiden ja muiden tavoitteiden saavuttamiseksi käy tettäväksi on tuotu tämän keksinnön erään suoritusmuodon t *!*" mukaisesti agaroosipintaisen erittävien solujen agaroosi- ;· makrohelmen tuottamismenetelmä, joka käsittää sen, että ···· ·*.*· a) suspensoidaan erittävät solut agaroosiin, • · .\tj 25 b) muodostetaan makrohelmi kyseisistä vaiheen a .*,·] suspensoiduista erittävistä soluista, « · · c) inkuboidaan kyseistä vaiheen b makrohelmeä kos- • · · • t · * teassa ilmassa, d) pinnoitetaan kyseinen vaiheen c makrohelmi aga- • f # *.*.* 30 roosilla agaroosipintaisen erittävien solujen agaroosimak- ··· rohelmen muodostamiseksi.
jV. Edelleen, keksinnön mukaisen menetelmän avulla • · .···. saatava agaroosipintainen erittävien solujen agaroosimak- • · ** rohelmi on tuotu käytettäväksi.
• 35 Keksinnön eräänä toisena puolena tuodaan käytettä- väksi agaroosipintaisen, erittävien solujen agaroosimakro-helmen, joka on saatavissa keksinnön mukaisen menetelmän 7 118853 avulla, käyttö terapeuttisesti tehokkaana määränä valmistettaessa lääkevalmistetta, joka on tarkoitettu erittävien solujen heikentyneestä toiminnasta johtuvien tilojen hoitoon potilaassa.
5 Keksinnön vielä eräänä puolena tuodaan käytettä väksi erittävien solujen säilöntämenetelmä, joka käsittää sen, että muodostetaan agaroosipintaisia erittävien solujen agaroosimakrohelmiä, jotka on saatavissa keksinnön mukaisen menetelmän avulla ja inkuboidaan kyseisiä erittävi-10 en solujen makrohelmiä.
Tämän keksinnön muita tavoitteita, piirteitä ja etuja käy ilmi seuraavasta yksityiskohtaisesta kuvauksesta. On kuitenkin ymmärrettävä, että yksityiskohtainen kuvaus ja spesifiset esimerkit, vaikkakin ne viittaavat kek-15 sinnön edullisiin suoritusmuotoihin, on annettu vain ha-vainnollistamistarkoituksessa, sillä tästä yksityiskohtaisesta kuvauksesta ammattimiehille tulee ilmeiseksi erilaisia keksinnön henkeen ja suojapiiriin kuuluvia muutoksia ja muunnelmia.
20 Piirrosten lyhyt kuvaus
Kuvioissa 1 ja 2 nähdään agaroosipintaisia hai- *:·*: masaarekkeiden kollageeni-agaroosimakrohelmiä.
·;· Kuviossa 3 nähdään glukoositasot diabeettisissa ···· hiirissä, joihin on siirretty agaroosipintaisia haimasaa- • ' · .·. · 25 rekkeiden kollageeni-agaroosimakrohelmiä.
s SS
Kuviossa 4 nähdään glukoositasot diabeettisissa SS· hiirissä, joihin on siirretty agaroosipintaisia haimasaa- • s s rekkeiden geelivaahtomakrohelmiä.
Kuviossa 5 nähdään glukoositasot diabeettisissa !.V 30 hiirissä, joihin on siirretty agaroosipintaisia haimasaa- • s· rekkeiden agaroosimakrohelmiä.
Kuviossa 6 nähdään glukoositasot diabeettisissa • · . . § , ,···. hiirissä, joihin on siirretty vapaita haimasaarekkeita.
• ·
Kuviossa 7 nähdään glukoositasot diabeettisissa ·· : **· 35 hiirissä, joihin on siirretty agaroosipintaisia kollagee- ··· ni-agaroosimakrohelmiä ja vapaita haimasaarekkeita.
8 118853
Kuvio 8 esittää glukoosirasituskoetta normaaleille hiirille, streptotsotosiinilla indusoiduille diabeettisil-le hiirille, streptotsotosiinilla indusoiduille diabeetti-sille hiirille, jotka ovat saaneet samasta lajista peräi-5 sin olevan siirrännäisen munuaiskapseliin ("KCT-hiiret"), ja streptotsotosiinilla indusoiduille diabeettisille hiirille, jotka ovat saaneet agaroosipintaisia haimasaarek-keiden agaroosi-kollageenimakrohelmiä, agaroosipintaisia haimasaarekkeiden geelivaahtomakrohelmiä ja agaroosipin-10 täisiä haimasaarekkeiden agaroosimakrohelmiä (joihin yhdessä viitataan termillä "helmihiiret").
Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus Tämä keksintö koskee biologisten agenssien, edullisesti erittävien solujen, makrokapselointia hydrofiili-15 seen geelmateriaaliin, makrokapseloituja biologisia agens-seja, ja edullisesti erittäviä soluja, makrokapseloitujen biologisten agenssien, edullisesti erittävien solujen, käyttöä ja biologisten agenssien, edullisesti erittävien solujen, säilömistä makrokapseloinnilla. Hydrofiilinen 20 geelimateriaali käsittää agaroosin ja kollageeni-agaroosi-ja gelatiinisieni-agaroosiyhdistelmät. Gelatiinisienestä ·;·*: käytetään vastedes nimitystä geelivaahto ("gelfoam").
·)· Termi biologinen agenssi tarkoittaa elävää eliötä «*·· ja sen tuotteita, esim. proteiineja, entsyymejä, hormone- ,·. · 25 ja, polypeptidejä, seerumia, vasta-aineita ja antibiootte- • ·· ja sekä myös geneettisesti muokattuja soluja. Biologisiin • · · "* agensseihin kuuluvat entsyymit, esim. glukoosioksidaasi, » · t laktaasikompleksi, mikro-organismit, esim. Klebsiella ae-rogenes ammoniakin ja urean poistamista varten, troofiset • « V.: 30 aineet, mukaan luettuina yhdistelmä-DNA-menetelmin tuote- ·*· !,,,ϊ tut troofiset aineet, esim. yhdistelmä-DNA-menetelmin tuo- ··,·. tettu kasvuhormoni, ja sytotoksiset aineet.
• f [·« Termi erittävä solu sisältää haimasaarekkeen, * i *1* vaikka teknisesti haimasaareke ei ole erittävä solu, vaan ϊ *·* 35 useimmiten rypäs erittäviä soluja, joita ryppäitä on ha-
• M
!.„! jallaan koko haimassa, ja jotka käsittävät sen endokriini sen osan. Ihmisissä ne koostuvat ainakin neljästä erilai- 9 118855 sesta erittävien solujen tyypistä: alfa-solut, jotka erittävät hyperglykemiatekijää, glukagonia, beeta-solut, joita on runsaimmin (70 - 80 %) ja jotka erittävät insuliinia, delta-solut, jotka erittävät somatostatiinia, ja polypep-5 tidisolut, jotka erittävät polypeptidihormonia.
Kuten aiemmin on selitetty, siirretyn materiaalin täytyy olla isännän kanssa yhteensopivaa. Agaroosilla on pitkä historia biologisessa tutkimuksessa, ja sen laatu on tarkoin valvottu. Kollageeni on nisäkkäissä runsaimmin 10 esiintyvä proteiini, joka tarjoaa vankan mekaanisen tuen ja toimii solujen replikaation, erilaistumisen, elinten muodostumisen, yksilön kasvun ja haavan paranemisen biologisena tilana. Kollageenilla on myös hyvä biologinen yhteensopivuus. Geelivaahto ei ole immunogeenistä, ja sitä 15 on käytetty laajasti kirurgisissa menetelmissä. Myös erittävät solut sietävät sitä hyvin.
Biologiset agenssit ja edullisesti erittävät solut eristetään ensin sinänsä tunnetulla tavalla. Edullisessa suoritusmuodossa haimasaarekkeita viljellään joko 4 °C:n, 20 24 °C:n tai 37 °C:n lämpötilassa ennen kuin ne makrokapse- loidaan. Tällä menetelmällä voidaan valikoida vain ne saa-, rekkeet, jotka selviävät hengissä eristystrauman jälkeen.
Saarekkeista tulee myös vähemmän immunogeenisiä, mikä suo- ...: jaa makrohelmiä fibroosilta.
• · V.: 25 Keksinnön eräässä suoritusmuodossa biologinen ag- « · !,*·· enssi, edullisesti haimasaarekkeet ja edullisemmin noin S S*S 50 000 - 700 000 haimasaareketta, suspensoidaan kollagee- ·*·': nin vesiliuokseen, edullisesti noin 0,5 - 2-prosenttiseen atelokollageeniliuokseen. Atelokollageeniä saadaan käsit- ,V. 30 telemällä kollageeniä pepsiinillä, mikä poistaa antigeeni- • · · set telopeptidit, jotka vastaavat kollageenimolekyylien • · "* välisestä silloittumisesta. Sitten noin 0,5 - 5 % agaroo- ·· · : *.· siä, edullisesti noin 1 %, lisätään suspensoituihin hai- • · · masaarekkeisiin kollageenin ja agaroosin seokseen suspen-35 soitujen haimasaarekkeiden muodostamiseksi. Sitten hai-
• M
«·· • · • · ··· 118853 10 masaarekkeet sisältävä seos muutetaan puolikiinteäksi helmeksi sinänsä tunnetulla tavalla, edullisesti pudottamalla seos mineraaliöljyn tai Teflon -kalvon päälle. Sitten puo-likiinteä helmi siirretään antibiootteja sisältävään ela-5 tusaineeseen, pestään, ja sitten inkuboidaan standardiolo-suhteissa kollageenin polymerisoimiseksi, edullisesti 37 °C:n lämpötilassa kostutetussa 5 % C02:a sisältävässä ilmakehässä, jolloin muodostuu kiinteä kollageeni-agaroo-simakrohelmi.
10 Keksinnön eräässä toisessa suoritusmuodossa biolo ginen agenssi, edullisesti haimasaarekkeet ja edullisemmin noin 50 000 - 700 000 haimasaareketta, levitetään gelatii-nisienen pinnalle (3 - 5 cm). Sitten gelatiinisieni pyöritetään palloksi. Agaroosia, 3 - 5-prosenttlsta, kaadetaan 15 pallon päälle helmen muodostamiseksi.
Keksinnön vielä eräässä suoritusmuodossa biologinen agenssi, edullisesti haimasaarekkeet ja edullisemmin noin 50 000 - 700 000 haimasaareketta, viedään agaroosiliuok-seen, jossa on välillä noin 0,5 - 5 % agaroosia, edulli-20 sesti noin 1 % agaroosia. Sitten seos muutetaan makrohel-meksi saattamalla seos yhteyteen mineraaliöljyn tai teflonin kanssa. Sitten helmi siirretään antibiootteja sisältävään elatusaineeseen, pestään, ja inkuboidaan yön yli, edullisesti 37 °C:n lämpötilassa kostutetussa 5 % C02:a :.V 25 sisältävässä ilmakehässä.
!.1 2 3·· Kaikissa edellä mainituissa suoritusmuodoissa mak- : i|: rohelmet päällystetään tasaisesti agaroosilla, edullisesti pyöräyttämällä helmeä 3-4 kertaa Teflon-lusikassa, jossa on noin 500 - 2 000 μΐ 5 - 10-prosenttista agaroosia. Sa-30 maan tapaan termi "biologisen agenssin makrohelmet", kuten • · · sitä tässä käytetään, tarkoittaa makrokapseloituja biolo- • · "1 gisia agensseja helmen muodossa.
: '.· Makrohelmiä voidaan käyttää vehikkellnä biologisen a·· agenssin viemiseksi kehoon, jossa agenssi suorittaa omaa, ;·] 35 tunnettua tehtäväänsä. Samaan helmeen voidaan kapseloida • ·· M • · 2 • · 3 118853 11 useampaa kuin yhdentyyppistä biologista agenssla. Esimerkiksi makrohelmi voi sisältää useita entsyymejä, kuten hemoglobiinin ja glukoosioksidaasin. Tällainen helmi voidaan antaa bilirubiinin poistamiseksi. Näitä helmiä voi-5 daan antaa joko ruuansulatusentsyymien suun kautta antamista varten (laktaasikompleksl) tai ei-toivottujen aminohappojen poistamiseksi selektiivisesti kehosta. Entsyymien kapselointi estää myös entsyymin hajotusta ruoansulatuskanavassa. Lisäksi rekombinanttigeenituotteita voidaan 10 antaa turvallisesti kapseloinnin välityksellä. Esimerkiksi K. aerogenes -geeni voidaan makrokapseloida makrohelmiin urean ja ammoniakin poistamista varten. Silloin, kun biologinen agenssi on immunogeeninen isännässä, makrohelmi mahdollistaa biologisen agenssin antamisen immunosuppres-15 santtia käyttämättä tai alemmilla määrillä immunosuppres-santtia.
Erittäviä makrohelmiä voidaan käyttää hoitamaan tiloja, jotka johtuvat erittävien solujen heikentyneestä toiminnasta potilaassa, esim. insuliinista riippuvaa dia-20 betesta, kasvutekijöiden puutoshäiriöitä ja hormonihäiriöitä, siirtämällä erittävien solujen makrohelmiä potilaaseen. Makrohelmet voidaan sijoittaa asianmukaiseen paik-* 1 2 3 kaan kutakin hoitoa varten. Esimerkiksi hepatosyyttejä sisältävät makrohelmet voidaan implantoida vatsaonteloon » · *,V 25 sellaisten tautien hoitamiseksi, jotka liittyvät maksan S'1.· toimimattomuuteen. Edullinen sovellus on 5 - 10 haimasaa- : rekemakrohelmen, joista kukin sisältää 50 000 - 700 000 ··· :1·1· haimasaareketta, siirtäminen potilaaseen insuliinista riippuvan diabeteksen hoitamiseksi. Makrohelmet voidaan .·.·. 30 sijoittaa vatsaonteloon.
« · « I·'·' Erittävien solujen makrohelmiä siirretään potilaa- *!’ seen määrä, joka on riittävä tilan hoitamiseksi. Tämän * 1.· saavuttamiseksi tarvittava määrä määritellään " terapeutti- : sesti tehokkaaksi määräksi" tai "vaikuttavaksi määräksi".
··· ··1 35 Tähän käyttöön tehokkaat määrät riippuvat tilan vakavuu- • ··
M
• · 2 • · 3 118853 12 desta, potilaan yleistilasta, antoreitistä, makrohelmien sijoituksesta ja siitä, annetaanko makrohelmiä yhdessä muiden lääkkeiden kanssa.
Erittäviä makrohelmiä voidaan käyttää samasta ja 5 toisesta lajista tehtyyn kudossiirtoon yhdessä immunosup-pressanttien kanssa tai edullisesti ilman immunosuppres-santteja. Edullisessa suoritusmuodossa potilaita, joilla on krooninen tai akuutti insuliinista riippuva diabetes, hoidetaan tekemällä toista lajia olevan eläimen, esim. 10 sian, naudan, hiiren, rotan, kalan ("picin") tai minkä tahansa muunlajisen eläimen haimasaarekkeiden siirto potilaaseen immunosupressantteja käyttämättä. Erittävien solujen makrohelmiä voidaan antaa tilan hoitamiseksi yhdessä muiden hoitavien aineiden kanssa, esim. yleisesti käytet-15 tävän kolmoislääkehoidon (syklosporiini, atsatiopriini ja hydrokortisoni), rapamysiinin, deoksisperguliinin tai vasta-aineiden kanssa.
Makrohelmiä voidaan käyttää keinona biologisten agenssien ja edullisesti erittävien solujen säilyttämlsek-20 si pitkiä aikoja. Biologisten agenssien ja edullisesti erittävien solujen makrohelmien, elinkyvyn säilyttämiseksi biologisten agenssien, ja edullisesti erittävien solujen * ' makrohelmiä, inkuboidaan kunnes ne siirretään eläimeen.
Kun erittävät solut ovat haimasaarekkeita, haima- • · *.V 25 saarekemakrohelmiä inkuboidaan 24 °C:n tai 37 °C:n lämpö- • · : ·.: tilassa.
• · : Esimerkit ·*· :*;*· Esimerkki 1
Haimasaarekkeiden eristys ,V. 30 Haimasaarekkeita eristettiin rotista muunnelmalla • t t menetelmästä, jonka ovat esittäneet Gotoh ym., Transplan- **:** tation 40:437 (1985).
·· i : Kollagenaasiliuosta (tyypin Xl kollagenaasi, Sigma ί.,,ί Chemical, St. Louis, MO, 1 mg/ml, joka sisälsi 2 mg/ml ··) 35 Sigman tyypin V naudan seerumin albumiinia ja 1 mg/ml • ·· ♦ ♦ • · ··· 118853 13
CaCl2:a) injisoitiin haimaan yhteisen sappitiehyen kautta (Gotohym., Transplantation 40:437 (1985), em. teos). Haima poistettiin ja otettiin talteen pulloon, jota pidettiin jäillä. Kun haimat oli kerätty neljästä rotasta, pullo 5 pantiin vesihauteelle 38 eC:n lämpötilaan 30 minuutiksi. Saatu digestoitu kudos pestiin neljästi kylmällä (8 eC) HBSS:llä (Hanksin tasapainotetulla suolaliuoksella).
Digestoitumaton kudos, suuret imusolmukkeet ja muu ylimääräinen materiaali poistettiin liikuttelemalla kudos-10 ta yhä uudelleen, jonka jälkeen supernatantti aina poistettiin. Puhdistetut saarekkeet eristettiin epäjatkuvalla Ficoll-gradientilla, joka koostui 25-, 23-, 21- ja 11-pro-senttisista Ficoll-kerroksista, jotka oli tehty Euro-Col-lins-liuokseen (Frescenius AG, Gluchen Steinweg, Homburg 15 V.D.H.), ja sentrifugoitiin nopeudella 2 000 rpm 16 mi nuuttia. Saarekkeet kerättiin talteen 11- ja 21-prosent-tisten ja 21- ja 23-prosenttisten Ficoll-kerrosten välisestä rajapinnasta. Kummastakin fraktiosta saadut saarekkeet yhdistettiin ja pestiin neljästi HBSS-liuoksella, 20 joka sisälsi 10 % naudan sikiön seerumia.
Sitten yhdistetyt saarekesolut siirrettiin petri-maljoille, jotka sisälsivät täydellistä RPMI-elatusainet- • · ta, ts. kylmää RPMI 1640 -elatusainetta (GIBCO, Grand Is- ***; land, NY), jota oli täydennetty 25 mM HEPES:illä, lämpö- • · · 25 inaktivoidulla naudan sikiön seerumilla (10 %) ja antibi-*· *· ootti-antimykoottiliuoksella (1 ml/100 ml), joka sisältää 100 pg/ml penisilliiniä, 100 pg/ml streptomysiinisulfaat-·.· * tia ja 25 pg/ml amfoterisilni B:tä. Kaikki jäljelle jäänyt muualta kuin saarekkeista tuleva rakkula-, suoni-, tiehyt-:V: 30 tai imusolmukekudos tunnistettiin preparointimikroskoopin avulla ja poistettiin huolellisesti ohutkärkisellä sterii-Iillä pipetillä. Lopullinen puhtaus määritettiin värjää- • · · mällä saarekepreparaatti difenyylitiokarbatsonilla.
• « *·;·* Eristyksen jälkeen saarekkeita inkuboitiin muovi- 35 silla bakteerimaljoilla (100 mm), joilla oli 10 ml RPMI- • · · • · * · ··# 118853 14 elatusainetta, 37 eC:n lämpötilassa kosteassa Ilmakehässä, jossa oli 5 % C02:a, 4 päivää. Elatusaine vaihdettiin päivittäin, ja sitten saarekkeet joko siirrettiin suoraan tai makrokapseloitiin.
5 Esimerkki II
A. Agaroosipintaisten, haimasaarekkeiden agaroosi-kollageenimakrohelmien valmistus
Tuhat esimerkin 1 mukaisella menetelmällä saatua haimasaareketta pestiin neljästi esimerkissä 1 kuvatun 10 mukaisella täydellisellä RPMI-elatusaineella, mutta ilman naudan sikiön seerumia. Sitten haimasaarekkeet vietiin putkeen, joka sisälsi 50 μΐ 1-prosenttista atelokolla-geeniliuosta fosfaattipuskuroidussa suolaliuoksessa haimasaarekkeiden suspensoimiseksi. 100 μΐ 1-prosenttista 15 alhaisen viskositeetin agaroosin (Sigman tyyppi XII) 60 eC:n lämpötilassa pidettyä liuosta, joka oli valmistettu joko RPMIihin tai MEM:miin ("minimal essential medium", minimielatusaine), lisättiin sitten kollageeni-hai-masaarekesuspensioon. Sitten putken sisältö siirrettiin 20 välittömästi yhtenä suurena pisarana joko huoneenlämmössä pidetyn steriilin mineraaliöljyn päälle tai TeflonR-kal-voile. Minuutin kuluttua pisarasta tuli puolikllnteä mak- • * . rohelmi, joka sitten siirrettiin antibiootit sisältävään ·»· *"; RPMl-elatusaineeseen 37 eC:n lämpötilaan. Makrohelmet pes- • · · *·*] 25 tiin kolmesti samalla elatusaineella kaiken öljyn poista- • · · *· *· miseksi. Lopuksi ne huuhdottiin kahdesti täydellisellä \i.: elatusaineella (37 eC) ja inkuboitiin yön yli 37 °C:n läm- • · · V : pötilassa kosteassa ilmakehässä, jossa oli 5 % C02:a. Tänä aikana kollageeni polymerisoitui, ja haimasaarekkeet le-30 päsivät kollageenisäikeellä.
• · ·1; Seuraavana päivänä kiinteät makrohelmet siirrettiin «··
Teflon -lusikalle, joka sisälsi noin 1 ml 5-prosenttista • · · agaroosia RPMI- tai MEM-elatusaineessa. Sitten kiinteitä '···* makrohelmiä pyöräytettiin tässä liuoksessa 2-3 kertaa nii- **·.. 35 den pinnoittamiseksi tasaisesti. Ennen kuin agaroosi jäh- ··· • · • · l5 1 1 8853 mettyi, makrohelmet siirrettiin mineraaliöljyyn tai Tef-lonR-maljalle sileäpintaisten makrohelmien saamiseksi. 60 sekunnin kuluttua makrohelmet otettiin pois mineraaliöljystä ja pestiin kolmesti antibiootit sisältävällä RPMI-5 elatusaineella ja sitten kahdesti täydellisellä RPMI-ela-tusaineella. Sitten niitä inkuboitiin yön yli 37 eC:n lämpötilassa kosteassa ilmakehässä, jossa oli 5 % C02:a. Aga-roosipintaisia, haimasaarekkeiden agaroosi-kollageenimak-rohelmiä nähdään kuvioissa 1 ja 2.
10 B. Agaroosipintaisten, haimasaarekkeiden gelatii ni sienimakrohelmien valmistus
Pientä palaa gelatiinisientä (geelivaahtoa), 3 mm2, liotettiin ensin täydellisessä RPMI-elatusaineessa. Ela-tusaine puristettiin ulos, ja geelivaahdon annettiin olla 15 minuutin ajan. Tuhat esimerkin I mukaisesti valmistettua haimasaareketta pestiin neljästi antibiootit sisältävällä RPMI-elatusaineella. Sitten ne suspensoitiin 10 pl:aan antibiootit sisältävää RPMl-elatusainetta. Ne siirrettiin ohutkärkisellä muovipipetillä ja levitettiin geelivaahdon 20 pinnalle. 20 sekunnin kuluttua geelivaahto pyöritettiin pieneksi palloksi. 50 μΐ 5-prosenttista agaroosia kaadet-tiin pallon pinnalle haimasaarekkeiden makrohelmen muodos- • t , tamiseksi.
M* *"j Makrohelmen pinnoittamiseksi tasaisesti 5-prosent- • f *·*·| 25 tisella agaroosilla, 500 μΐ 5-prosenttista agaroosia li- *. *: sättiin makrohelmelle TeflonR-lusikassa, ja pyöräytettiin 3-4 kertaa. Ennen kuin agaroosi jähmettyi, makrohelmet ί,ϊ ί siirrettiin mineraaliöljyyn, ja maljaa pyöritettiin sileän pinnan saamiseksi makrohelmeen. Makrohelmi pestiin 3-4 ·’·*; 30 kertaa antibiootit sisältävässä RPMI-elatusaineessa ja .*··. sitten huuhdottiin kahdesti täydellisellä RPMI-elatusai neella. Sitä inkuboitiin yön yli ennen siirtoon käyttämis- • t » : ·* tä.
• * · • · • · ··· • · • · • · · 1 • · • · • n 118853 16 C. Agaroosipintaisten, haimasaarekkeiden agaroosi- makroheImien valmistus
Tuhat esimerkin 1 mukaisella menetelmällä saatua haimasaareketta pestiin ensin neljästi antibiootit sisäl-5 tävällä RPMl-elatusaineella. Haimasaarekkeet siirrettiin putkeen, joka sisälsi 50 μΐ antibiootit sisältävää RPMI-elatusainetta ja suspensoitiin siihen. Sitten 100 μΐ 1-prosenttista agaroosiliuosta lisättiin putkeen. Putken koko sisältö siirrettiin välittömästi yhtenä suurena pisa-10 rana joko steriiliin mineraaliöljyyn tai teflon-kalvolle. Minuutin kuluttua pisara jähmettyi makrohelmeksi. Makro-helmi siirrettiin antibiootit sisältävään RPMI-elatusai-neeseen, jota pidettiin 37 °C:n lämpötilaan. Sitten öljy poistettiin pesemällä makrohelmet kolmesti samalla elatus-15 aineella ja sitten huuhtomalla ne kahdesti täydellisellä RPMI-elatusaineella. Helmiä inkuboitiin yön yli 37 °C:n lämpötilassa kosteassa ilmakehässä, jossa oli 5 % C02:a.
Seuraavana päivänä nämä helmet siirrettiin Teflon-lusikalle, joka sisälsi 1 ml 5-prosenttista agaroosia joko 20 RPM1- tai MEM-elatusaineessa. Makrohelmien pinnoittamiseksi tasaisesti agaroosilla helmiä pyöräytettiin sitten va- . rovasti 2-3 kertaa agaroosissa. Sitten ne siirrettiin mi- • · , neraaliöljyyn teflonmaljalle ennen kuin agaroosi jähmet- ·«· tyi. 60 sekunnin kuluttua makrohelmet otettiin pois mine- *·*·* 25 raaliöljystä ja pestiin kolmesti antibiootit sisältävällä :.*·: RPMI-elatusaineella ja kahdesti täydellisellä RPMI-elatus- * aineella. Sitten helmiä inkuboitiin yön yli.
: Esimerkki III
Haimasaarekemakrohelmien siirtäminen hiiriin ·*·*· 30 A. Saajahiiret ja luovuttajarotat t · .**·. Käytetyt hiiret olivat C57BL/6- ja BALB/c-kannois- ta. Saajahiiristä tehtiin diabeettisia yhdellä i.v.-injek- • tiolla streptotsotosiinia (170 - 200 mg/kg).
Plasman glukoosiarvot ilman paastoa määritettiin ·*·., 35 ennen diabeteksen indusoimista. Kaikkia verensokerin arvo- « ·· • * • ·
«M
118853 17 ja saajahiirissä seurattiin häntälaskimoverinäytteistä ExacTech-kynäsensorilla. Vain niitä hiiriä käytettiin, joiden seerumin glukoositaso oli yli 22,2 mmol/1 (yli 400 mg/dl) siirtopäivänä.
5 Wistar Furth -rottia käytettiin luovuttajina lajien välisessä siirrossa.
B. Toisesta lajista saatujen haimasaarekemakrohel-mien siirto vatsaonteloon
Lajista toiseen tehtävän siirron hetkellä esimerk-10 kien II A, II B ja vastaavasti II C mukaisia haimasaareke-makrohelmlä siirrettiin varovasti erillisille maljoille, jotka sisälsivät antibiootillista RPMl-elatusainetta. Kaikkien seerumin proteiinien poistamiseksi elatusaine vaihdettiin kolmesti. Diabeettiset saajahiiret nukutettiin 15 avertiinilla. Keskiviivan viilto tehtiin yksittäisen hai-masaarekemakrohelmen viemiseksi vapaaseen vatsaonteloon. Viilto suljettiin absorboituvalla ompeleella kahdessa kerroksessa. Kontrollihiiret saivat joko tyhjän makrohelmen i.p. (intraperitoneaalisesti), vapaita haimasaarekkeita 20 i.p. tai tyhjän makrohelmen yhdessä vapaiden luovuttajan haimasaarekkeiden kanssa.
Siirron jälkeen kunkin saajan veren glukoosi tar- . kastettiin päivittäin tai joka toinen päivä, kunnes se ··· saavutti normaalialueen; sen jälkeen veren glukoosi tar- • · ***** 25 kastettiin vain 2-3 kertaa viikossa. Siirrännäiset kat- • · *· *: sottiln teknisesti onnistuneiksi, jos seerumin glukoosi *.:.: oli alle 11,1 mmol/1 (200 mg/dl) ja pysyi siellä seuraa- ·»· V ' vissa verenotoissa. Siirrännäisen katsottiin tulleen hyljityksi, jos seerumin glukoosipitoisuus nousi yli ***** 30 11,1 mmol/1 (200 mg/dl) ohimenevän normoglykeemisen jakson • * .*·*. jälkeen. Siirrännäisten katsottiin epäonnistuneen tai tul- leen "primääristi toimimattomiksi", jos veren glukoosi ei • · · 1 ·* koskaan tullut normaaliksi (ts. pysyi jatkuvasti yli :...· 11,1 mmol/1 (200 mg/dl)).
·· • * • »« M· • · • · • · · 118853 18 C. Vatsaontelonsisäinen glukoosirasituskoe
Noin 70 - 84 päivää siirron jälkeen suoritettiin glukoosirasituskokeita. Glukoosiliuosta (1,0 g painokiloa kohti) injisoitiin vatsaontelonsisäisesti hiiriin, jotka 5 olivat paastonneet 6 tuntia (klo 9 - 15). Verinäytteet otettiin sekä ennen injektiota että sen jälkeen (0, 30, 60 ja 120 minuuttia) plasman glukoosiarvojen määrittämiseksi ExachTech-kynäsensorilla.
Vertailun vuoksi sokerirasituskokeita tehtiin noΓΙΟ maaleille C57BL/6- ja BALB/c-hiirille, joihin ei ollut siirretty haimasaarekkeita, ja streptotsotsiinilla indusoiduille diabeettisille BALB/c-hiirille, joihin oli siirretty vapaita haimasaarekkeita munuaiskapseliin ("KCT"-hiiret).
15 Kontrollikokeet suoritettiin sen varmistamiseksi, että euglykeeminen tila saavutettiin diabeettisissä hiirissä makrokapseloitujen haimasaarekkeiden välityksellä eikä itse makrohelmien. Siksi valmistettiin tyhjiä aga-roosipintaisia agaroosi-kollageenimakrohelmiä ja agaroo-20 sipintaisia geelivaahtomakrohelmiä samalla tavalla kuin esimerkkien II A ja B mukaiset helmet.
(i((. D. Vatsaontelonsisäisen toisesta lajista tehdyn • t . siirron ja glukoosirasituskokeen tulokset • ' · "*j Haimasaarekemakrohelmien implantoinnin yhteydessä * · · *;*·[ 25 havaitut muutokset plasman glukoosin ei-paastoarvoissa *· *: STZ-diabeettisilla streptotsotosiinilla indusoiduilla C57BL/6-hiirillä esitetään kuvioissa 3 ja 4. Agaroosipin- ··· V · täisten, haimasaarekkeiden agaroosi-kollageenimakrohelmien ja agaroosipintaisten, haimasaarekkeiden geelivaahtomakro- :V« 30 helmien saajilla normoglykeeminen tila säilyi yli 60 päi- • · .***. vää, ja tänä aikana näiden hiirten paino lisääntyi keski- ··» määrin 3 grammaa. Kun agaroosipintaisia haimasaarekkeiden • · ! ·* agaroosimakrohelmiä siirrettiin, kaksi kuudesta eläimestä tuli normoglykeemiseksi 21 - 33 päivää siirron jälkeen 35 (kuvio 5) ja pysyi euglykeemisenä siitä lähtien. Kaikilla ··· • · • ♦ 118853 19 muilla transplantoiduilla eläimillä euglykeeminen tila jäi saamatta. Tyhjät makrohelmet (n - 6) eivät vaikuttaneet veren glukoosiin.
Kun vapaita haimasaarekkelta slirrettin vatsaonte-5 lon sisään, kuusi seitsemästä siirron saaneesta eläimestä tuli normoglykeemiseksi päivää siirron jälkeen; kuitenkin tämä tila säilyi niillä vain 3-10 päivää (kuvio 6). Kun vapaita haimasaarekkelta siirrettiin yhdessä tyhjien, aga-roosipintaisten agaroosi-kollageenimakrohelmien tai aga-10 roosipintaisten geelivaahtornakrohelmien kanssa, kaikista eläimistä tuli normoglykeemisiä 24 tunnin sisällä, ja ne pysyivät sellaisina yli 12 päivää (kuvio 7). Myöhemmin kaikista eläimistä tuli hyperglykeemisiä. Eläimillä, joissa oli tyhjiä makrohelmiä, ei nähty kudosreaktiota 90 päi-15 vän seurannan aikana.
Tulokset, jotka saatiin glukoosirasituskokelden suorituksen jälkeen, esitetään kuviossa 8. Normaaleissa BALB/c- ja C57BL/6-hiirissä ja "KCT"-hiirissä plasman glukoosi oli huipussa 30 minuutin kohdalla ja palasi perusta-20 solle 120 minuuttiin mennessä.
Samankaltaiset tulokset saatiin, kun testattiin makrokapseloitu j a haimasaarekkelta ja kapseloimattomia • a . munuaiskapseliin siirrettyjä haimasaarekkelta.
·«· ·;1; Näiden kokeiden tulokset osoittavat, että agaroo- • · · *·’·’ 25 sipintaisilla halmasaarekkeiden agaroosi-kollageenimakro- a · *· 1: helmillä, agaroosipintaisilla halmasaarekkeiden agaroosi- M.: geelivaahtomakrohelmillä ja agaroosipintaisilla saarekkei- ··· !.! i den agaroosimakrohelmillä nähdään ominaisuudet, joita kei notekoiselta hybridielimeltä vaaditaan. Vaikka kaikki kol- ·1·1· 30 me tyyppiä erittävät menestyksellisesti insuliinia, aga- • · .1·1. roosipintaiset agaroosi-kollageenimakrohelmet ja agaroosi- • ta „·. pintaiset agaroosi-geelivaahtomakrohelmet ovat sopivampia • · · *(>** keinotekoisiksi biohybridielimiksi johtuen niiden tulosten yhdenmukaisuudesta, jotka saatiin mahdollisimman pienellä ·1·,, 35 määrällä eläimiä, joille tehtiin kudossiirrot. Lisäksi a • •a a a a a a«a 118853 20 millään kolmesta helmityypistä ei nähty haittavaikutuksia. Makrohelmet pysyivät vapaina vatsaontelossa ilman, että niillä nähtiin kudosreaktioita tai tarttumista mihinkään elimeen. Siten nämä biohydridihaimasaarekkeet suorittavat 5 tehtävänsä yhtä tehokkaasti makrokapseloiduissa helmissä kuin luonnollisessa ympäristössään, haimassa.
Kaikissa näissä hiirissä plasman glukoosi oli huipussa 30 minuutin kohdalla ja palasi perustasoon 120 minuuttiin mennessä.
10 Esimerkki 4
Haimasaarekkeiden pidentynyt säilytysaika Esimerkkien IA, B ja C mukaisesti valmistetuista makrokapseloiduista helmistä, joita oli inkuboitu 4 viikkoa 37 eC:n lämpötilassa täydellisessä RPMl-elatusainees-15 sa, testattiin niiden pitkäaikaissäilytysominaisuudet in vivo ja in vitro. Havaittiin, että makrokapseloidut hai-masaarekkeet, joita oli inkuboitu 4 viikkoa, olivat toiminnallisesti samankaltaisia kuin ne, joita oli inkuboitu päivän ajan.
20 Tämä esimerkki osoittaa, että tämän keksinnön mukaista makrokapselointimenetelmää voidaan käyttää erittä- vien solujen säilömiseen ja edullisesti haimasaarekkeiden • s , säilömiseen.
• "s s
• SSS
• s • s s • · s • s • s • s · s S· e m • • s s s s s • se s·· • · · • s s •
s S
• · s sss s s sss • s s s • ss • • s s • s • s • ·
• SS
s s s sss s • s s s
s SS
• 1
SS
s s • s
• SS

Claims (14)

118853
1. Menetelmä agaroosipintaisen erittävien solujen agaroosimakrohelmen valmistamiseksi, tunnettu siitä, 5 että menetelmä käsittää sen, että: a) suspensoidaan erittävät solut agaroosiin, b) muodostetaan makrohelmi kyseisistä vaiheen a suspensoiduista erittävistä soluista, c) inkuboidaan kyseistä vaiheen b makrohelmeä kos- 10 teassa ilmassa, d) pinnoitetaan kyseinen vaiheen c makrohelmi aga- roosilla agaroosipintaisen erittävien solujen agaroosimakrohelmen muodostamiseksi.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 15 tunnettu siitä, että vaihe d käsittää kyseisen vaiheen c kiinteän makrohelmen pyörittämisen 5-prosenttisessa aga-roosissa, kyseisen pyöritetyn kiinteän makrohelmen saattamisen yhteyteen mineraaliöljyn kanssa ja kyseisen pyöritetyn makrohelmen pesemisen kyseisen agaroosipintaisen erit-20 tävien solujen agaroosimakrohelmen muodostamiseksi.
3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, *:**: tunnettu siitä, että kyseiset erittävät solut ovat hai- ··· masaarekkeita. »···
4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, • · · .·. : 25 tunnettu siitä, että kyseiset haimasaarekkeet ovat ih- • ·· misen haimasaarekkeita, naudan haimasaarekkeita tai sian • · * ' i < · I" haimasaarekkeita. Il*
*** 5. Agaroosipintainen erittävien solujen agaroosi- makrohelmi, joka on saatavissa minkä tahansa patenttivaa- *.*.* 30 timuksen 1-4 mukaisen menetelmän avulla. *··
6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen agaroosipintai-nen erittävien solujen agaroosimakrohelmi, tunnettu • · ,···. siitä, että kyseinen erittävä solu on haimasaareke.
• · *!’ 7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen agaroosipintai- ·· : *·· 35 nen erittävien solujen agaroosimakrohelmi, tunnettu ··· • · « t ·** 118853 siitä, että kyseinen haimasaareke on ihmisen haimasaareke, naudan haimasaareke tai sian haimasaareke.
8. Agaroosipintaisen, erittävien solujen agaroo-simakrohelmen, joka on saatavissa minkä tahansa patentti- 5 vaatimuksen 1-4 mukaisen menetelmän avulla, käyttö terapeuttisesti tehokkaana määränä valmistettaessa lääkevalmistetta, joka on tarkoitettu erittävien solujen heikentyneestä toiminnasta johtuvien tilojen hoitoon potilaassa.
9. Patenttivaatimuksen 8 mukainen käyttö, tun-10 nettu siitä, että mainittu tila on insuliinista riippuvainen diabetes.
10. Patenttivaatimuksen 8 tai 9 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että kyseiset erittävät solut ovat hai-masaarekkeita, edullisesti ihmisen haimasaarekkeita, nau- 15 dan haimasaarekkeita tai sian haimasaarekkeita.
11. Minkä tahansa patenttivaatimuksen 8-10 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että käytetään noin 5-10 makrohelmeä.
12. Menetelmä erittävien solujen säilömiseksi, 20 tunnettu siitä, että menetelmä käsittää sen, että: a) muodostetaan agaroosipintaisia erittävien solu- *:··: jen agaroosimakrohelmiä, jotka on saatavissa minkä tahansa ··· patenttivaatimuksen 1-4 mukaisen menetelmän avulla, ja »·«· b) inkuboidaan kyseisiä erittävien solujen makro- * · .·, · 25 helmiä. t
·· .* 13. Patenttivaatimuksen 12 mukainen menetelmä, • · · » » · tunnettu siitä, että kyseinen erittävä solu on hai- • · · *·* * masaareke.
14. Patenttivaatimuksen 13 mukainen menetelmä, • · *.*.· 30 tunnettu siitä, että kyseistä haimasaareketta inkuboi- daan 24 °C:n tai 37 °C:n lämpötilassa. ·* · • · · 9 · • · ··· • · • · *·· ·· • · • e· ··· • * • · • •e 118853
FI962841A 1994-01-13 1996-07-12 Makrokapseloituja erittäviä soluja FI118853B (fi)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US18126994A 1994-01-13 1994-01-13
US18126994 1994-01-13
US9500400 1995-01-12
PCT/US1995/000400 WO1995019430A1 (en) 1994-01-13 1995-01-12 Macroencapsulated secretory cells

Publications (3)

Publication Number Publication Date
FI962841A0 FI962841A0 (fi) 1996-07-12
FI962841A FI962841A (fi) 1996-09-12
FI118853B true FI118853B (fi) 2008-04-15

Family

ID=22663563

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI962841A FI118853B (fi) 1994-01-13 1996-07-12 Makrokapseloituja erittäviä soluja

Country Status (19)

Country Link
US (3) US5643569A (fi)
EP (3) EP0742818B1 (fi)
JP (4) JP3948742B2 (fi)
KR (1) KR100474803B1 (fi)
CN (1) CN1087779C (fi)
AT (3) ATE320482T1 (fi)
AU (1) AU681240C (fi)
CA (1) CA2181156C (fi)
DE (3) DE69533437T2 (fi)
DK (2) DK1666585T3 (fi)
ES (3) ES2260568T3 (fi)
FI (1) FI118853B (fi)
HK (1) HK1084693A1 (fi)
IL (1) IL112330A (fi)
NO (2) NO323228B1 (fi)
NZ (3) NZ278809A (fi)
PT (3) PT742818E (fi)
RU (2) RU2208636C2 (fi)
WO (1) WO1995019430A1 (fi)

Families Citing this family (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5830492A (en) * 1992-02-24 1998-11-03 Encelle, Inc. Bioartificial devices and cellular matrices therefor
US5834005A (en) * 1992-02-24 1998-11-10 Encelle, Inc. Bioartificial devices and cellular matrices therefor
US6231881B1 (en) 1992-02-24 2001-05-15 Anton-Lewis Usala Medium and matrix for long-term proliferation of cells
US5824331A (en) * 1992-02-24 1998-10-20 Encelle, Inc. Bioartificial devices and cellular matrices therefor
ATE320482T1 (de) * 1994-01-13 2006-04-15 Rogosin Inst Makroeingekapselte sekretorische zellen
USRE39542E1 (en) * 1994-01-13 2007-04-03 The Rogosin Institute Preparation of agarose coated, solid agarose-collagen beads containing secretory cells
JPH11501512A (ja) * 1995-03-03 1999-02-09 メタボレックス，インコーポレイティド ゲル化ポリマーによる新規の被包方法
US5916790A (en) * 1995-03-03 1999-06-29 Metabolex, Inc. Encapsulation compositions, and methods
US6419920B1 (en) 1995-10-25 2002-07-16 Trans Karyotic Therapies, Inc. Hybrid matrix implants and explants
US5965125A (en) 1995-10-25 1999-10-12 Transkaryotic Therapies, Inc. Hybrid matrix implants and explants
EP0822857A1 (en) * 1996-02-23 1998-02-11 Circe Biomedical, Inc. Novel artificial pancreas
US7297331B2 (en) * 1996-04-03 2007-11-20 The Rogosin Institute Beads containing restricted cancer cells producing material suppressing cancer cell proliferation
US6303151B1 (en) * 1996-04-03 2001-10-16 The Rogosin Institute Cancer-cell proliferation-suppressing material produced by cancer cells restricted by entrapment
US6224912B1 (en) * 1996-04-03 2001-05-01 The Rogo Institute Cancer-cell proliferation-suppressing material produced by cancer cells restricted by entrapment
KR100477296B1 (ko) * 1996-04-03 2005-05-16 더 로고신 인스티튜트 확산성의생물학적산물생산세포를함유하는이식가능한아가로오스-콜라겐비드,및그의용도
WO1997036495A1 (en) * 1996-04-03 1997-10-09 The Rogosin Institute Implantable agarose-collagen beads containing cells which produce a diffusible biological product, and uses thereof
US5888497A (en) * 1996-04-03 1999-03-30 The Rogosin Institute Agarose coated agarose beads containing cancer cells that produce material which suppresses cancer cell proliferation
HU230275B1 (hu) 1996-09-13 2015-11-30 Shire Human Genetic Therapies, Inc Eljárás tisztított humán alfa-galaktozidáz-A készítmények előállítására, és a tisztított készítményeket tartalmazó gyógyászati készítmények, alfa-gal-A-deficienciából eredő rendellenességek kezelésében történő alkalmazásra
AU8577498A (en) * 1997-07-22 1999-02-16 General Hospital Corporation, The Modulation of multicellular aggregates by solid stress
US5922339A (en) * 1998-01-27 1999-07-13 Usala; Anton-Lewis Compositions and methods for biocompatible implants
US6365385B1 (en) * 1999-03-22 2002-04-02 Duke University Methods of culturing and encapsulating pancreatic islet cells
US6303355B1 (en) 1999-03-22 2001-10-16 Duke University Method of culturing, cryopreserving and encapsulating pancreatic islet cells
US6391576B1 (en) * 1999-10-13 2002-05-21 Japan Bioindustry Association Method for isolating a microbe
US6279656B1 (en) 1999-11-03 2001-08-28 Santrol, Inc. Downhole chemical delivery system for oil and gas wells
DE60115433T2 (de) 2000-05-31 2006-08-03 Encelle, Inc. Verfahren zur behandlung von chronischen geschwüren
CA2450650C (en) * 2002-12-24 2007-08-28 An-Go-Gen Inc. Encapsulated cell therapy
WO2004075855A2 (en) 2003-02-26 2004-09-10 Biomed Solutions, Llc Process for in vivo treatment of specific biological targets in bodily fluid
US20050053586A1 (en) 2003-09-04 2005-03-10 Bryan Conn Entrapped stem cells and uses thereof
US20060121077A1 (en) * 2004-11-11 2006-06-08 Lawrence Gazda Method for treating patients with implants of islets which have been kept in long term, in vitro culture
ATE547004T1 (de) * 2005-09-26 2012-03-15 Rogosin Inst Inc Sekretionszellenhaltige macrobeads, die seakem- gold-agarose enthalten, und ihre verwendungen
US20070116680A1 (en) * 2005-11-18 2007-05-24 Rensselaer Polytechnic Institute Stem cells within gel microenvironments
EP2029727B1 (en) 2006-06-16 2012-04-11 FMC Biopolymer AS Alginate coated, collagen matrix cellular device, preparative methods, and uses thereof.
CN101600792B (zh) * 2007-01-24 2012-03-21 皇家飞利浦电子股份有限公司 处理培养的细胞的方法
JP2010536373A (ja) 2007-08-23 2010-12-02 イントレキソン コーポレーション 疾患を診断するための方法および組成物
CA2715080C (en) 2007-09-28 2021-09-28 Intrexon Corporation Therapeutic gene-switch constructs and bioreactors for the expression of biotherapeutic molecules, and uses thereof
DE102010040687A1 (de) 2010-09-14 2012-03-15 Hamilton Bonaduz Ag Verfahren zum Herstellen von Wirkstoff-Beads
GB2489320A (en) 2011-03-21 2012-09-26 Univ Reading Transport of cells by encapsulating in a hydrogel
DE102011050024A1 (de) * 2011-04-29 2012-10-31 Hamilton Bonaduz Ag Analysevorrichtung für eine berührungslose Analyse der Ausformung eines transparenten Körpers und Verfahren zur Durchführung der berührungslosen Analyse
BR112014015804B1 (pt) * 2012-01-31 2022-10-18 The Rogosin Institute, Inc Método para produzir uma composição de matéria
KR101327630B1 (ko) * 2012-03-05 2013-11-13 울산대학교 산학협력단 아텔로콜라겐을 이용한 췌도세포 이식용 담체의 제조방법 그리고 이를 이용하여 제조된 인공췌장
UY38389A (es) 2018-09-27 2020-04-30 Sigilon Therapeutics Inc Dispositivos implantables para terapia celular y métodos relacionados
WO2024081310A1 (en) 2022-10-11 2024-04-18 Sigilon Therapeutics, Inc. Engineered cells and implantable elements for treatment of disease
WO2024081309A1 (en) 2022-10-11 2024-04-18 Sigilon Therapeutics, Inc. Engineered cells and implantable elements for treatment of disease

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4391909A (en) * 1979-03-28 1983-07-05 Damon Corporation Microcapsules containing viable tissue cells
US4352883A (en) * 1979-03-28 1982-10-05 Damon Corporation Encapsulation of biological material
US4409331A (en) * 1979-03-28 1983-10-11 Damon Corporation Preparation of substances with encapsulated cells
SE441009B (sv) * 1982-03-08 1985-09-02 Kjell Nilsson Sett att immobilisera levande biomaterial i perlformiga polymerer
US4798786A (en) * 1982-05-06 1989-01-17 Stolle Research And Development Corporation Living cells encapsulated in crosslinked protein
CA1196862A (en) * 1983-06-01 1985-11-19 Anthony M.F. Sun Microencapsulation of living tissue and cells
US4663286A (en) * 1984-02-13 1987-05-05 Damon Biotech, Inc. Encapsulation of materials
US4902295A (en) * 1985-08-26 1990-02-20 Hana Biologics, Inc. Transplantable artificial tissue
US4997443A (en) * 1985-08-26 1991-03-05 Hana Biologics, Inc. Transplantable artificial tissue and process
SE8604684L (sv) * 1986-11-03 1988-05-04 Excorim Kommanditbolag Sett att belegga fasta partiklar med en hydrofil gel samt genom settet belagda partiklar
US5053332A (en) * 1989-07-24 1991-10-01 Cook Richard B Agarose beads, preferably incorporating biological materials
US5227298A (en) * 1990-08-17 1993-07-13 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Method for microencapuslation of cells or tissue
FR2686250A1 (fr) * 1992-01-16 1993-07-23 Coletica Compositions injectables contenant en suspension des microcapsules a base de collagene, leur utilisation biomedicale et des compositions pharmaceutiques.
ATE207727T1 (de) * 1992-05-29 2001-11-15 Univ California Beschichtetes transplantat sowie herstellungsverfahren dafür
WO1994012161A1 (en) * 1992-11-24 1994-06-09 Clover Consolidated, Limited Cytoprotective, biocompatible, retrievable macrocapsules
ATE320482T1 (de) * 1994-01-13 2006-04-15 Rogosin Inst Makroeingekapselte sekretorische zellen
US5888497A (en) * 1996-04-03 1999-03-30 The Rogosin Institute Agarose coated agarose beads containing cancer cells that produce material which suppresses cancer cell proliferation
US6224912B1 (en) * 1996-04-03 2001-05-01 The Rogo Institute Cancer-cell proliferation-suppressing material produced by cancer cells restricted by entrapment

Also Published As

Publication number Publication date
ES2309849T3 (es) 2008-12-16
HK1084693A1 (en) 2006-08-04
DK1666585T3 (da) 2009-01-12
EP1666585A1 (en) 2006-06-07
ATE408005T1 (de) 2008-09-15
RU2177503C2 (ru) 2001-12-27
EP0742818A1 (en) 1996-11-20
NO324570B1 (no) 2007-11-26
JP3989492B2 (ja) 2007-10-10
EP0742818A4 (en) 2002-01-09
NZ509363A (en) 2006-02-24
PT1666585E (pt) 2008-12-10
ATE275194T1 (de) 2004-09-15
NO962955L (no) 1996-09-11
JP4435134B2 (ja) 2010-03-17
PT1418228E (pt) 2006-09-29
CA2181156C (en) 2001-10-16
DE69535842D1 (de) 2008-10-23
NO20051359L (no) 1996-09-11
JPH09510868A (ja) 1997-11-04
DE69533437D1 (de) 2004-10-07
FI962841A0 (fi) 1996-07-12
ATE320482T1 (de) 2006-04-15
USRE38027E1 (en) 2003-03-11
EP0742818B1 (en) 2004-09-01
DE69534865T2 (de) 2006-08-17
MX9602765A (es) 1998-06-30
KR100474803B1 (ko) 2005-03-10
AU681240C (en) 2006-12-07
CN1141650A (zh) 1997-01-29
EP1666585B1 (en) 2008-09-10
IL112330A0 (en) 1995-03-30
RU2208636C2 (ru) 2003-07-20
DE69534865D1 (de) 2006-05-11
JP2005137376A (ja) 2005-06-02
NZ329619A (en) 1999-09-29
NZ278809A (en) 1998-03-25
DK1418228T3 (da) 2006-07-17
FI962841A (fi) 1996-09-12
CN1087779C (zh) 2002-07-17
JP3948742B2 (ja) 2007-07-25
ES2227544T3 (es) 2005-04-01
AU681240B2 (en) 1997-08-21
USRE40555E1 (en) 2008-10-28
CA2181156A1 (en) 1995-07-20
KR20050005235A (ko) 2005-01-13
PT742818E (pt) 2004-12-31
JP2007020585A (ja) 2007-02-01
IL112330A (en) 1999-01-26
EP1418228A1 (en) 2004-05-12
DE69533437T2 (de) 2005-09-15
WO1995019430A1 (en) 1995-07-20
NO962955D0 (no) 1996-07-15
NO323228B1 (no) 2007-02-05
AU1526795A (en) 1995-08-01
JP2006345875A (ja) 2006-12-28
ES2260568T3 (es) 2006-11-01
EP1418228B1 (en) 2006-03-15
US5643569A (en) 1997-07-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI118853B (fi) Makrokapseloituja erittäviä soluja
US6365385B1 (en) Methods of culturing and encapsulating pancreatic islet cells
US6303355B1 (en) Method of culturing, cryopreserving and encapsulating pancreatic islet cells
USRE39542E1 (en) Preparation of agarose coated, solid agarose-collagen beads containing secretory cells
AU2005201605B2 (en) Methods of Microencapsulating Pancreatic Islet Cells
MXPA96002765A (en) Secretor cells macroencapsula

Legal Events

Date Code Title Description
FG Patent granted

Ref document number: 118853

Country of ref document: FI

MA Patent expired