NO324570B1 - Agaroseovertrukket, agarosekollagensektretorisk celleperle og fremgangsmate til fremstilling derav samt fremgangsmate for konservering av sekretoriske celler. - Google Patents
Agaroseovertrukket, agarosekollagensektretorisk celleperle og fremgangsmate til fremstilling derav samt fremgangsmate for konservering av sekretoriske celler. Download PDFInfo
- Publication number
- NO324570B1 NO324570B1 NO20051359A NO20051359A NO324570B1 NO 324570 B1 NO324570 B1 NO 324570B1 NO 20051359 A NO20051359 A NO 20051359A NO 20051359 A NO20051359 A NO 20051359A NO 324570 B1 NO324570 B1 NO 324570B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- agarose
- collagen
- bead
- secretory
- coated
- Prior art date
Links
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 title claims abstract description 89
- 210000002955 secretory cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 60
- 239000011324 bead Substances 0.000 title claims description 55
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 31
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 title claims description 25
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 6
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims abstract description 41
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 claims description 84
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 18
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 17
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 17
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 claims description 10
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 2
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 claims description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 claims 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 27
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 25
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 25
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 20
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 18
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 16
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 16
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 15
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 15
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 15
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 15
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 14
- 239000000463 material Substances 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 12
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 12
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 12
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 12
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 10
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 10
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 10
- -1 but not limited to Substances 0.000 description 9
- ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N Streptozotocin Natural products O=NN(C)C(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 8
- 229960001052 streptozocin Drugs 0.000 description 8
- ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N streptozocin Chemical compound O=NN(C)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N 0.000 description 8
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 6
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 6
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 5
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 230000001610 euglycemic effect Effects 0.000 description 5
- 238000007446 glucose tolerance test Methods 0.000 description 5
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 5
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 5
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 5
- 238000002689 xenotransplantation Methods 0.000 description 5
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 4
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 4
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 4
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 4
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 4
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 4
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 4
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 4
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 4
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 4
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 3
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 3
- 108010045569 atelocollagen Proteins 0.000 description 3
- 239000003519 biomedical and dental material Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 3
- 210000002325 somatostatin-secreting cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 2
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 2
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 2
- 206010013883 Dwarfism Diseases 0.000 description 2
- 102000051325 Glucagon Human genes 0.000 description 2
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 2
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 2
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 2
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 2
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 2
- 241000588915 Klebsiella aerogenes Species 0.000 description 2
- 108010059881 Lactase Proteins 0.000 description 2
- 102000015731 Peptide Hormones Human genes 0.000 description 2
- 108010038988 Peptide Hormones Proteins 0.000 description 2
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 2
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 2
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 2
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 2
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 2
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 2
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 229940116108 lactase Drugs 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 2
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UOFGSWVZMUXXIY-UHFFFAOYSA-N 1,5-Diphenyl-3-thiocarbazone Chemical compound C=1C=CC=CC=1N=NC(=S)NNC1=CC=CC=C1 UOFGSWVZMUXXIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 2,6-dimethoxybenzenecarbothioamide Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(N)=S WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HFDKKNHCYWNNNQ-YOGANYHLSA-N 75976-10-2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](C)N)C(C)C)[C@@H](C)O)C1=CC=C(O)C=C1 HFDKKNHCYWNNNQ-YOGANYHLSA-N 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 1
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 241001315286 Damon Species 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- 206010056438 Growth hormone deficiency Diseases 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 206010019663 Hepatic failure Diseases 0.000 description 1
- 208000018121 Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase deficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000009625 Lesch-Nyhan syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 208000001940 Massive Hepatic Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 102000018886 Pancreatic Polypeptide Human genes 0.000 description 1
- 108010067035 Pancrelipase Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 241000287509 Piciformes Species 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 101000983124 Sus scrofa Pancreatic prohormone precursor Proteins 0.000 description 1
- AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N Thyrolar Chemical class IC1=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC=C(O)C(I)=C1 AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 229920006243 acrylic copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 1
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002543 antimycotic Substances 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 229960002170 azathioprine Drugs 0.000 description 1
- LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N azathioprine Chemical compound CN1C=NC([N+]([O-])=O)=C1SC1=NC=NC2=C1NC=N2 LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 1
- 231100000319 bleeding Toxicity 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 1
- 210000001953 common bile duct Anatomy 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 108091007734 digestive enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000038379 digestive enzymes Human genes 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 210000003020 exocrine pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- 230000003176 fibrotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003494 hepatotrophic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 230000003345 hyperglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000864 hyperglycemic agent Substances 0.000 description 1
- 230000002989 hypothyroidism Effects 0.000 description 1
- 208000003532 hypothyroidism Diseases 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 238000002650 immunosuppressive therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 208000007903 liver failure Diseases 0.000 description 1
- 231100000835 liver failure Toxicity 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 230000008384 membrane barrier Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 235000020925 non fasting Nutrition 0.000 description 1
- 230000001453 nonthrombogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 230000005305 organ development Effects 0.000 description 1
- 108010001073 oxyhemoglobin oxidase Proteins 0.000 description 1
- 210000000277 pancreatic duct Anatomy 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000011049 pearl Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 1
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 208000003068 pituitary dwarfism Diseases 0.000 description 1
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920002338 polyhydroxyethylmethacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N rapamycin Natural products COCC(O)C(=C/C(C)C(=O)CC(OC(=O)C1CCCCN1C(=O)C(=O)C2(O)OC(CC(OC)C(=CC=CC=CC(C)CC(C)C(=O)C)C)CCC2C)C(C)CC3CCC(O)C(C3)OC)C ZAHRKKWIAAJSAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 229960002930 sirolimus Drugs 0.000 description 1
- QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N sirolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1C[C@@H](C)[C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@](O)(O2)[C@H](C)CC[C@H]2C[C@H](OC)/C(C)=C/C=C/C=C/[C@@H](C)C[C@@H](C)C(=O)[C@H](OC)[C@H](O)/C(C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1 QFJCIRLUMZQUOT-HPLJOQBZSA-N 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 229960002385 streptomycin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000005495 thyroid hormone Substances 0.000 description 1
- 229940036555 thyroid hormone Drugs 0.000 description 1
- YFDSDPIBEUFTMI-UHFFFAOYSA-N tribromoethanol Chemical compound OCC(Br)(Br)Br YFDSDPIBEUFTMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950004616 tribromoethanol Drugs 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 238000011637 wistar furth rat Methods 0.000 description 1
- 230000037314 wound repair Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
- A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
- A61K9/1652—Polysaccharides, e.g. alginate, cellulose derivatives; Cyclodextrin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/37—Digestive system
- A61K35/39—Pancreas; Islets of Langerhans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
- A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
- A61K9/1658—Proteins, e.g. albumin, gelatin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
- A61K9/5005—Wall or coating material
- A61K9/5021—Organic macromolecular compounds
- A61K9/5036—Polysaccharides, e.g. gums, alginate; Cyclodextrin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/04—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier entrapped within the carrier, e.g. gel or hollow fibres
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0012—Cell encapsulation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0676—Pancreatic cells
- C12N5/0677—Three-dimensional culture, tissue culture or organ culture; Encapsulated cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K2035/126—Immunoprotecting barriers, e.g. jackets, diffusion chambers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/50—Proteins
- C12N2533/54—Collagen; Gelatin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/70—Polysaccharides
- C12N2533/76—Agarose, agar-agar
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Virology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Immunology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Physiology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Oppfinnelsen vedrører en fremgangsmåte for fremstilling av kollagensekretoriske celler i et hydrofilt gelmateriale, innkapsling av kollagensekretoriske celler, samt konservering av de kollagensekretoriske celler.
Description
Oppfinnelsesområde
Den foreliggende oppfinnelse vedrører en agaroseovertrukket, agarose-kollagensekretorisk celleperle, en fremgangsmåte til fremstilling derav, samt en fremgangsmåte for konservering av sekretoriske celler.
Således vedrører oppfinnelsen makroinnkapsling av agarose-kollagensekretoriske celler i et hydrofilt gelmateriale, og konservering av de agarose-kollagensekretoriske celler ved makroinnkapsling.
Bakgrunn for oppfinnelsen
Sekretoriske celler er celler som er kjennetegnet ved at de utsondrer biologiske produkter, såsom, men ikke begrenset til, hormoner (f.eks. insulin), vekstfaktorer, cytokiner osv. Deres rolle i biologiske prosesser er velkjent og behøver ikke angis her. En rekke sykdommer og patologiske tilstander er forbundet med svikt hos de sekretoriske celler til å arbeide skikkelig, såsom en utilstrekkelig produksjon av de sekretoriske produkter, f.eks. hypotyreoidisme og kretinar dvergvekst, som begge skyldes tyreoidhormonmangel, hypofysær dvergvekst på grunn av pituitøs veksthormonmangel, Lesch-Hyhan-syndrom på grunn av hypoxantin-guanin-fosforibosyltransferasemangel, fulminant hepatitt på grunn av mangel på hepatotrofisk faktor, ekstracellulær matrisesykdom på grunn av kondro-cyttmangel, samt insulinavhengig diabetes på grunn av insulinmangel.
En måte å behandle slike tilstander på er å trans-plantere de sekretoriske celler inn i pasienten. Det transplanterte materiale må for å være klinisk sikkert og effektivt (1) være ikke-immunogenisk, ikke-trombogenis biostabilt og fullstendig ikke-toksisk overfor celler og vev hos verten, (2) opprettholde cellelevedyktighet i lengre tidsrom, (3) muliggjøre fri passasje av nærings-stoffer, sekretorer (en substans som stimulerer sekre-sjon), samt celleprodukter, (4) lette kirurgisk implantering og ny celledannelse, (5) kunne lett fikseres på plass og likeledes fjernes.
Transplantasjon av pankreaseøyer for behandling av insulinavhengig diabetes har vært gjenstand for ny interesse på grunn av teknologiske fremskritt ved isolering av Langerhans-øyer. Som bakgrunn inneholder human pankreas Langerhans-øyer (heretter benevnt "pankreatiske øyer") som er spredd gjennom den eksokrine pankreas med noen konsentrasjoner nær pankreasgangene. De pankreatiske øyer kan sammen anses for å være ett eneste endokrint organ som opptar ca. 1 volum% av pankreasen. Inne i pankreas er små øyer (opp til 160 \ im diameter) tilbøyelig til å fordeles gjennom det eksokrine vev. Disse små øyer representerer 75% av øyene i antall, men bare ca. 15% i volum. Øyer som er mer enn 250 jam i diameter utgjør bare 15% av det totale antall øyer, men 60% av volumet. Disse øyer er lokalisert nær større ganger og blodkar og er ikke omgitt av acinært vev. En menneskepankreas kan inneholde over 1 million øyer, og hver øy består typisk av atskillige tusen celler. Hver øy består av en sentral kjerne av insulinproduserende beta-celler (B-celler) og en om-givende kappe av glukagonholdige alfa-celler (A-celler), somatostatinutskillende delta-celler (D-celler) samt pankreatiske polypeptidholdige celler (PP-celler). Insulinproduserende B-celler utgjør størstedelen av cellene og utgjør ca. 80% av øyene i et menneske.
De kliniske anvendelser av pankreatisk øytransplanta-sjon har vært begrenset av den manglende evne til å hindre allograft-xenograft øyavvisning, dvs. en avvisning av de transplanterte pankreatiske øyer på grunn av at vertens immunsystem angriper de transplanterte pankreatiske øyer.
For å motvirke denne avvisning er de pankreatiske øyer blitt transplantert sammen med administrering av immunsuppressive midler.
Immunsuppressiv terapi har imidlertid vist seg å være et tveegget sverd. Selv om risikoen for avvisning redu-seres svekker den kroppens totale immunitetsforsvar. Forskjellige metoder til å beskytte det transplanterte vev på fra vertens immunforsvar er blitt undersøkt av mange. Som diskutert nedenfor gjenstår det ennå å oppnå effektive, langvarige metoder, selv om forbigående suksess er blitt rapportert (Lacy, Diabetes Reviews, Vol 1(1), 1993, p 76).
De fem hovedløsninger for beskyttelse av det transplanterte vev mot vertens immunforsvar involverer alle forsøk på å isolere det transplanterte vev fra vertens immunsystem. Immunisoleringsmetodene som har vært anvendt frem til i dag omfatter: ekstravaskulære diffusjonskamre, intravaskulære diffusjonskamre, intravaskulære ultra-filtreringskamre, mikroinnkapsling samt makroinnkapsling.
Alle disse metoder har imidlertid sviktet på grunn av ett eller flere av de følgende problemer: en fibrotisk respons hos verten mot det implanterte materiale, ustabilitet av det implanterte materiale, begrenset næringsstoffdiffusjon gjennom semipermeable membraner, sekretor- og produktpermeabilitet, samt diffusjonstidforsinkelse gjennom semipermeable membranbarrierer.
F.eks. ble en fremgangsmåte til mikroinnkapsling for innkapsling av levedyktige celler, vev og andre labile biologiske membraner innenfor en semipermeabel membran av Lim i 1978 (Lim, forskningsrapport til Damon Corporation, 1978). Lim anvendte mikrokapsler av alginat og poly(L-lysin) for å innkapsle Langerhans-øyene. I 1980 ble den første suksessrike anvendelse in vivo av denne nye teknikk i diabetesforskning rapportert (Lim et al., Science, Vol 210, 1990, p 908). Implanteringen av disse mikroinn-kapslede Langerhans-øyer resulterte i undertrykkelse av en euglykemisk tilstand hos diabetiske dyr. Imidlertid fant andre forskere, som gjentok disse forsøk, at alginatet forårsaket en vevreaksjon, og de var ikke i stand til å reprodusere resultatene til Lim et al. (Lamberti et al., Applied Biochemistry and Biotechnology, Vol 10, 1984, p 101; Dupuy et al., Jour. Biomed.'Material and Res., Vol 22, 1988, p 1061; Weber et al., Transplantation, Vol 49, 1990, p 396; og Soon-Shiong et al., Transplantation Proceedings, Vol 22, 1990, p 754). Vannløseligheten til disse polymerer anses nå for å være ansvarlig for disse mikrokapslers begrensede stabilitet og bioforenelighet
(Dupuy et al., supra; Weber et al., supra; Soon-Shiong et al., supra; samt Smidsrod, Faraday Discussion of Chemical Society, Vol 57, 1974, p 263).
Nylig anvendte Iwata et al., (Iwata et al., Jour. Biomedical Material and Res., Vol 26, 1992, p 967) agarose for mikroinnkapsling av allogeniske, pankreatiske øyer og iakttok at den kunne anvendes som et medium for fremstil-lingen av mikroperler. I undersøkelsen ble 1.500-2.000 øyer mikroinnkapslet individuelt i 5 prosentig agarose og implantert i streptozotocin-induserte, diabetiske mus. De transplanterte overlevde i et langt tidsrom og resipientene bibeholdt normalt blodsukkernivå i det uendelige.
Fremgangsmåten deres lider imidlertid av flere ulemper. Den er tungvint og unøyaktig. F.eks. bli mange perler værende delvis overtrukket, og atskillige hundre perler er tomme for agarose. Mer tid er derfor nødvendig for å separere innkapslede øyer fra tomme perler. Dessuten samles de fleste av de implanterte mikroperler i bekken-hulen, og det er nødvendig med et stort antall øyer i fullstendig overtrukne, individuelle perler for å oppnå normalt blodsukkernivå. Dessuten er de transplanterte perler vanskelige å gjenfinne, og er tilbøyelige til å være sprøe og vil lett avgi øyer ved litt skade.
En makroinnkapslingsmetode er også blitt testet. Makrokapsler av forskjellige materialer, såsom poly(2-hydroksyetyl-metakrylat), poly(vinylklorid-akrylsyre), samt celluloseacetat ble fremstilt for immunoisolereing av Langerhans-øyer (se Altman et al., Diabetes, Vol 35, 1986, p 625; Altman et al., Transplantation American Society of Artificial Internal Organs, Vol 30, 1984, p 382; Ronel et al., Jour. Biomedical Material Research, Vol 17, 1983, p 855; Klomp et al., Jour. Biomedical Material Research, Vol 17, 1983, p 865-871). Ved alle disse undersøkelser ble det bare oppnådd en forbigående normalisering av blodsukker-nivået .
Archer et al., Journal of Surgical Research, Vol 28, 1980, p 77 anvendte hulfibrer av akrylkopolymer for å hindre temporær avvisning av øyxenoplantater. De rappor-terte langvarig overlevelse av dispergerte neonatale, murine bukspyttkjerteltransplantater i hulfibrer som ble transplantert inn i hamstere med diabetes. Nylig har Lacy et al., Science, Vol 254, 1991, p 1782-1784 bekreftet deres resultater, men fant at den euglykemiske tilstand var en forbigående fase. Det viste seg at når øyene inji-seres i fiberen aggregerer de inne i det hule rør og resulterer i nekrose i den sentrale del av øymassene. Den sentrale nekrose hindret prolongasjon av transplantatet. For å løse dette problem anvendte de alginat for å disper-gere øyene i fiberen. Ved å benytte denne metode var de i stand til å oppnå langvarig transplantatoverlevelse. Men dette forsøk er ikke blitt gjentatt i stor grad. Derfor er membranens funksjon som et øytransplantasjonsmedium i mennesker usikker.
US '4997443 beskriver en fremgangsmåte for fremstilling av en transplanterbar, kunstig vevsmatriks som omfatter polymerisering i en vandig løsning inneholdende matrikspolymerforløpere, en reversibel gelpolymerforløper og levedyktige celler. Matrikspolymerforløperen er for eksempel kollagen, den reversible gelpolymerforløperen er for eksempel agarose og de levedyktige cellene er for eksempel pankreatiske øyer.
WO 9324076 omhandler et transplantat overtrukket med en membran som omfatter ett lag av geldannende polymer, for eksempel agarose, og en kationisk aminosyrepolymer og ett ytre lag omfattende en anionisk aminosyrepolymer. Transplantatet kan være pankreatiske øyer.
FR 2686250 handler om injiserbare sammensetninger som omfatter mikrokapsler bestående av atelokollagen eller en blanding av denne med et polysakkarid, spesielt et glykosaminoglykan i en suspensjon i et viskøst, biokompatibelt støttemateriale. Det viskøse biokompatible støttemateriale kan for eksempel være alginat.
Det foreligger således et behov for å oppnå sekretorisk celletransplantasjon, særlig overlevelse av pankreatisk øyallotransplantat og -xenotransplantat uten anvendelse av kroniske, immunosuppressive midler.
Det har i forbindelse med den foreliggende oppfinnelse overraskende vist seg at makroinnkapsling av sekretoriske celler i et hydrofilt gelmateriale resulterer i en funksjonell, ikke-immunogenisk makroperle som kan transplanteres inn i dyr og lagres i lang tid. Makroinn-kapslingen av de sekretoriske celler ifølge oppfinnelsen bevirker en effektiv og håndterbar metode for transplantasjon av sekretoriske celler. Makroinnkapslingsmetoden kan også benyttes for makroinnkapsling av andre biologiske stoffer, såsom enzymer, mikroorganismer, trofiske midler som inkluderer rekombinant fremstilte trofiske midler, cytotoksiske midler samt kjemoterapeutiske midler. De makroinnkapslede biologiske midler kan administreres for å behandle tilstander som det er kjent at reagerer på det biologiske middel.
Oppsummering av oppfinnelsen
Det er derfor et formål med den foreliggende oppfinnelse å frembringe en agarose-kollagensekretorisk cellemakroperle som kan transplanteres inn i dyr for å behandle tilstander forårsaket av en svekket funksjon og vertens sekretoriske celler.
Det er et annet formål med oppfinnelsen å frembringe en agarose-kollagensekretorisk cellemakroperle som kan lagres i lengre tidsrom.
For å oppnå disse og andre formål er det ifølge oppfinnelsen frembrakt en fremgangsmåte til fremstilling av en agaroseovertrukket, agarose-kollagensekretorisk celle-mikroperle.
Ifølge oppfinnelsen er det også frembrakt en fremgangsmåte til konservering av sekretoriske celler, kjennetegnet ved at det dannes agaroseovertrukne, agarose-kollagensekretoriske cellemakroperler, og at de agarose-kollagensekretoriske cellemakroperler inkuberes.
Celleperlen i følge oppfinnelsen er således kjennetegnet ved at den er en agaroseovertrukket, agarose-kollagensekretorisk celleperle.
Fremgangsmåten til fremstilling av celleperlen i følge oppfinnelsen er således kjennetegnet ved
(a) suspendering av sekretoriske celler i en løsning som inneholder kollagen, (b) tilsetning av agarose til de suspenderte sekretoriske celler fra trinn (a) til dannelse av sekretoriske celler suspendert i en blanding av agarose og kollagen,-(c) dannelse av en halvfast kollagen-agarose-perle fra de suspenderte sekretoriske celler fra trinn (b), (d) behandling av den halvfaste kollagen-agarose-perle fra trinn (c) for polymerisering av kollagen i den halvfaste perle, hvorved det dannes en fast kollagen-agaroseperle, samt (e) overtrekking av den faste perle fra trinn (d) med agarose for å oppnå en agaroseovertrukket, agarose-kollagensekretorisk celleperle. Fremgangsmåte for konservering av sekretoriske celler er således kjennetegnet ved (a) dannelse av agaroseovertrukne, agarose-kollagensekretoriske celleperler; og (b) inkubering av de sekretoriske celleperler.
Ytterligere utførelser av oppfinnelsen er angitt i underkravene 2-5, 7-8 og 10-11.
Kort beskrivelse av tegningene
Fig. 1 og 2 viser agaroseovertrukne, kollagen-agarosepankreatiske øymakroperler. Fig. 3 viser glukosenivåene hos diabetiske mus transplantert med agaroseovertrukne, kollagen-agarosepankreatiske øymakroperler. Fig. 4 viser glukosenivåene hos diabetiske mus transplantert med agaroseovertrukne, gelskumpankreatiske øymakroperler. Fig. 5 viser glukosenivåene hos diabetiske mus transplantert med agaroseovertrukne, agarosemakroperler. Fig. 6 viser glukosenivåene hos diabetiske mus transplantert med frie pankreatiske øyer. Fig. 7 viser glukosenivåene hos diabetiske mus transplantert med agaroseovertrukne, kollagen-agarosemakroperler og frie pankreatiske øyer. Fig. 8 viser en glukosetoleransetest for normale mus, streptozotocininduserte diabetiske mus, streptozotocin-induserte diabetiske mus som mottar allotransplantatet i nyren "(KCT-mus)", samt streptozotocininduserte diabetiske mus som mottar agaroseovertrukne, agarose-kollagenpankreatiske øymakroperler; agaroseovertrukne, gelskumpankreatiske øymakropeler samt agaroseovertrukne agarosepankreatiske øymakroperler (samlet heretter betegnet "perlemus").
Detaljert beskrivelse av oppfinnelsen
Oppfinnelsen vedrører makroinnkapsling av biologiske stoffer, særlig agarose-kollagensekretoriske celler i et hydrofilt gelmateriale, fortrinnsvis agarose-kollagensekretoriske celler og konserverende biologiske midler, fortrinnsvis agarose-kollagensekretoriske celler ved makroinnkapsling. Det hydrofile gelmateriale omfatter kollagen-agarose.
Termen biologisk stoff angir en levende organisme og produkter derav, f.eks. proteiner, enzymer, hormoner, polypeptider, serum, antistoffer samt antibiotika og også genetisk bearbeidete celler. Biologiske stoffer omfatter enzymer, f.eks. glukoseoksidase, laktasekompleks, mikroorganismer, f.eks. Klebsiella aerogenes, for fjerning av ammoniakk og urea, trofiske stoffer som omfatter rekombinant produsert trofiske stoffer, rekombinant fremstilt veksthormon, samt cytotoksiske stoffer.
Betegnelsen sekretorisk celler omfatter en pankreatisk øy selv om en pankreatisk øy teknisk ikke er en sekretorisk celle men for det meste.en klump sekretoriske celler fordelt gjennom bukspyttkjertelen og omfattende dens endokrine del. I mennesker består de av minst fire forskjellige typer sekretoriske celler: alfa-celler som avsondrer den hyperglykemiske faktor glukagon; beta-celler som er de mest tallrike (70-80%) og avsondrer insulin; delta-celler som avsondrer somatostatin, samt polypeptid-celler som avsondrer polypeptidhormon.
Som forklart ovenfor må transplantert materiale være forenlig med verten. Agarose har en lang historie når det gjelder anvendelse i biologisk forskning, og dens kvalitet er godt kontrollert. Kollagen er det rikeligste protein i pattedyr, bevirker fast mekanisk understøttelse og funk-sjonerer som det biologiske sted for cellereplikasjon, differensiering, organogenese, individuell vekst og sår-reparasjon. Kollagen har også bioforenlighet. Gelskum er ikke-immunogenisk og har vært anvendt mye i kirurgiske prosesser. Det tolereres også godt av sekretoriske celler.
De biologiske stoffer, fortrinnsvis sekretoriske celler, isoleres først under anvendelse av velkjente prosesser. I en foretrukket utførelse dyrkes pankreatiske øyer ved enten 4°C, 24°C eller 37°C før de makroinnkapsles. Denne metode gjør det mulig å velge bare overlevende øyer etter isoleringen. Dessuten blir øyene mindre immunogenisk, noe som resulterer i beskyttelse av makroperler fra fibrose.
I en utførelsesform av oppfinnelsen suspenderes et biologisk stoff, fortrinnsvis pankreatiske øyer og mer foretrukket 50.000-700.000 pankreatiske øyer, i en vandig løsning av kollagen, fortrinnsvis 0,5-2% atellokollagen-løsning. Atellokollagen oppnås ved å behandle kollagen med pepsin, som fjerner antigeniske telopeptider som er an-svarlige for intermolekylær tverrbinding av kollagen. 0,5-5% agarose, fortrinnsvis ca. 1%, tilsettes deretter til de suspenderte pankreatiske øyer til dannelse av pankreatiske øyer suspendert i en blanding av kollagen og agarose. Blandingen som inneholder de pankreatiske øyer overføres deretter til en halvfast perle på i og for seg velkjent måte, fortrinnsvis ved å dyppe blandingen på mineralolje eller en "Teflon"-plate. Den halvfaste "perle overføres deretter til et antibiotisk medium, vaskes og inkuberes deretter under standardbetingelser for å polymerisere kollagenet, fortrinnsvis ved 37°C i en fuktig, 5 prosentig CO2-atmosfære, hvorved det dannes en fast kollagen-agarosemakroperle.
Det beskrives at det kan spres et biologisk middel, fortrinnsvis pankreatiske øyer og mer foretrukket 50.000-700.000 pankreatiske øyer, på overflaten (3-5 cm) av en gelatinsvamp. Gelatinsvampen rulles deretter til en kule. Agarose, 3-5%, helles på kulen til dannelse av en perle.
Det beskrives og at det kan anbringes et biologisk middel, fortrinnsvis pankreatiske øyer og mer foretrukket 50.000-700.000 pankreatiske øyer, i en agaroseløsning inneholdende fra 0,5 til 5% agarose, fortrinnsvis ca. 1% agarose. Blandingen omdannes deretter til en makroperle ved å bringe blandingen i kontakt med mineralolje eller Teflon. Perlen overføres deretter til et antibiotisk medium, vaskes og inkuberes natten over, fortrinnsvis ved 37°C, i en fuktig, 5 prosentig CC^-atmosfære.
I de ovenfor beskrevne utførelsesformer og beskrivelser overtrekkes makroperlene jevnt med agarose, fortrinnsvis ved å rulle perlen 3-4 ganger i en Teflon-skje som inneholder 500-2.000 ul 5%-10% agarose. Tilsvarende angir betegnelsen makroperler med biologisk middel makroinnkapslede biologiske midler i form av en perle.
Makroperlene- kan brukes som en vehikkel for avgivelse av det biologiske middel til kroppen hvor midlet vil utføre sin kjente funksjon. Mer enn én type biologisk middel kan innkapsles i en perle. F.eks. kan en mikroperle inneholde flere enzymer, såsom hemoglobin og glukoseoksidase. En slik perle kan administreres for fjerning av bilirubin. Disse perler kan anvendes enten for oral administrering av fordøyelsesenzymer (laktasekompleks) eller for selektiv fjerning av uønskede aminosyrer fra kroppen. Innkapsling av enzymene vil også hindre ned-brytning av enzymet i lumen. Dessuten kan rekombinante genprodukter sikkert avgis under anvendelse av innkapsling som medium. Genet K. aerogenes kan f.eks. makroinnkapsles i makroperler for fjerning av urea og ammoniakk. Når det biologiske middel er immunogent overfor verten muliggjør makroperlen administrering av det biologiske middel uten anvendelse av immunsuppressiv eller med nedsatte mengder immunsuppressiv.
De sekretoriske makroperler kan brukes for å behandle tilstander forårsaket av en svekket funksjon hos de sekretoriske celler i individet, f.eks. insulinavhengig diabetes, vekstfaktorforstyrrelse samt hormonelle forstyr-relser, ved transplantering av de sekretoriske cellemakroperler inn i individet. Makroperlene kan innføres på passende sted for den spesielle behandling. F.eks. kan makroperler som inneholder hepatocytter implanteres i bukhulen for å behandle sykdommer relatert til manglende leverfunksjon. En bruk av transplantering av 5-10 pankreatiske øymakroperler som hver inneholder 50.000-700.000 pankreatiske øyer, inn i en pasient for behandling av insulinavhengig diabetes. Makroperlene kan innføres i bukhulen.
De sekretoriske cellemakroperler kan transplanteres i en pasient i en mengde som er tilstrekkelig til å behandle tilstanden. En mengde som er tilstrekkelig til å oppnå dette defineres som en "terapeutisk effektiv mengde" eller "effektiv mengde". Mengder som er effektive for denne anvendelse vil avhenge av hvor alvorlig tilstanden er, pasi-entens generelle tilstand, administreringsmåte, plasser-ingen av makroperlene og om de sekretoriske cellemakroperler administreres i kombinasjon med andre legemidler.
De sekretoriske makroperler kan brukes for allogenisk og xenogenisk transplantasjon i kombinasjon med immunsuppressiva, eller uten immunsuppressiva. Pasienter kan behandles som har kronisk eller akutt insulinavhengig diabetes ved xenotransplantering av animalske, pankreatiske øyer, f.eks. fra gris, storfe, mus, rotte, hakkespette eller vilkårlig annen egnet art inn i pasienten uten anvendelse av immunsuppressiva. De sekretoriske cellemakroperler kan også administreres i kombinasjon med andre terapeutiske midler, f.eks. den vanlig anvendte trippellegemiddelterapi (cyklosporin, azatioprin og hydrokortison), rapamycin, deoksypergualin eller antistoffer, for behandling av tilstanden.
Makroperlene kan også anvendes i følge oppfinnelsen som en innretning for lagring av de biologiske midler, fortrinnsvis sekretoriske celler, i lengre tidsrom. For å opprettholde levedyktigheten til de biologiske midler, fortrinnsvis sekretoriske celler, inkuberes de biologiske midler, fortrinnsvis de sekretoriske cellemakroperler, inntil de transplanteres inn i dyret.
Når de sekretoriske celler er pankreatiske øyer inkuberes de pankreatiske øymakroperler ved en temperatur på fra 24°C til 37°C.
EKSEMPLER
Eksempel I
Isolering av pankreatiske øyer
Pankreatiske øyer ble isolert fra rotter ved modifi-sering av metoden som er beskrevet av Gotoh et al., Transplantation, Vol 40, 1985, p 437.
Kollagenaseløsning (kolllagenasetype XI, Sigma Chemical, St. Louis, MO; 1 mg/ml inneholdende 2 mg/ml av Sigma, type V, storfeserumalbumin og 1 mg/ml CaC^) injisert inn i bukspyttkjertelen via den vanlige gallegang (Gotoh et al., Transplantation, Vol 40, 1985, p 437, se ovenfor). Bukspyttkjertelen ble fjernet og oppsamlet i en kolbe som ble holdt på is. Etter at bukspyttkjertler fra 4 rotter var blitt oppsamlet ble kolben anbrakt i et vannbad ved 38°C i 30 minutter. Det resulterende oppløste vev ble vasket fire ganger i kald (8°C) HBSS (Hank's løsning med balanserte salter).
Uoppløst vev, store lymfeknuter og annet fremmed materiale ble fjernet ved gjentatt mobilisering av vevet etterfulgt av fjerning av supernatanten. Rensede øyer ble isolert på diskontinuerlig Ficoll-gradient bestående av 25%, 23%, 21% og 11% Ficoll-lag fremstilt i Euro-Collins-løsning (Frescenius AG, Gluchen Steinweg, Homburg V.D.H.) og sentrifugert ved 2.000 omdr./min. i 16 minutter. Øyene ble oppsamlet fra grenseflaten mellom 11% og 21% og grenseflaten mellom 21% og 23% Ficoll-sjiktene. Øyer fra hver fraksjon ble oppsamlet og vasket fire ganger i HBSS-løsning inneholdende 10% kalvefosterserum.
De oppsamlede øyceller ble overført til petriskåler inneholdende RPMI komplett medium, dvs. kaldt RPMI 1640-medium (GIBCO, Grand Island, NY) supplert med 25 mM HEPES, varmeinaktivert storfefosterserum (10%) og antibiotisk-antimykotisk løsning (1 ml/100 ml) som inneholdt: 100 \ x. q/ ml penicillin, 100 ug/ml streptomycinsulfat og 25 ug/ml amfotericin B. Eventuelt gjenværende acinært, vaskulært, duktulært eller lymfeknuteformet vev som ikke inneholdt øyer ble identifisert ved hjelp av et mikroskop og ble fjernet ved hjelp av en steril pipette med tynn tupp. Sluttrenhet ble bestemt ved farging av øypreparatet med difenyltiokarbazon.
Etter isolering ble øyene inkubert i bakteriologiske plastskåler (100 mm), som inneholdt 10 ml RPMI-medium ved 37°C i en fuktig atmosfære inneholdende 5% C02 i 4 dager. Mediet ble skiftet hver dag, og øyene ble deretter enten transplantert direkte eller makroinnkapslet.
Eksempel II
A. Fremstilling av agaroseovertrukne, agarose- kollagen-pankreatiske øymakroperler
1.000 pankreatiske øyer oppnådd ved fremgangsmåten i eksempel I ble vasket fire ganger i komplett RPMI-medium som beskrevet i eksempel I, men uten kalvefosterserum. De pankreatiske øyer ble deretter tilsatt til et rør som inneholdt 50 p,l av 1 prosentig atelokollagen-løsning i fosfatbufret salt for suspendering av de pankreatiske øyer. 100 |j,l av 1 prosentig, lavviskøs agaroseløsning (Sigma type XII) fremstilt enten i RPMI eller i MEM (mini-malt essensielt medium), holdt på 60°C, ble deretter tilsatt til suspensjonen av kollagen-pankreatiske øyer. Innholdet i røret ble deretter umiddelbart overført som én eneste stor dråpe, enten på sterilisert mineralolje som ble holdt på romtemperatur, eller på en "Teflon"-plate. Etter 1 minutt ble dråpen en halvfast mikroperle som deretter ble overført til et antibiotisk RPMI-medium ved 37°C. Makroperlene ble deretter vasket tre ganger med det samme medium for fjerning av all olje. Til slutt ble de skyllet to ganger med komplett medium (37°C) og inkubert natten over ved 37°C i en fuktig atmosfære som inneholdt 5% CC>2. I dette tidsrom polymeriserte kollagenet, og de pankreatiske øyer hvilte på kollagenfiberen.
Neste dag ble de faste makroperler overført til en "Teflon"-skje som inneholdt ca. 1 ml 5% agarose i RPMI-eller MEM-medium. De faste makroperler ble deretter rullet i denne løsning 2-3 ganger for å overtrekke dem jevnt. Før agarosen størknet ble makroperlene overført til mineralolje i en "Teflon"-skål for å oppnå makroperler med glatt overflate. Etter 60 sekunder ble makroperlene fjernet fra mineraloljen og vasket tre ganger med antibiotisk RPMI-medium og deretter to ganger med det komplette RPMI-medium. De ble deretter inkubert natten over ved 37°C i en fuktig atmosfære som inneholdt 5% CO2. Agaroseovertrukne, agarose-kollagenpankreatiske øymakroperler er vist i fig.
1 og 2.
B. Fremstilling av agaroseovertrukne gelatinsvamp-pankreatiske øymakroperler
Et lite stykke gelatinsvamp (gelskum), 3 rnrn^, Dle først neddykket i komplett RPMI-medium. Mediet ble klemt ut, og gelskummet ble hensatt i 1 minutt. 1.000 pankreatiske øyer, som var fremstilt ifølge eksempel I, ble vasket fire ganger med antibiotisk RPMI-medium. De ble deretter suspendert i 10 jil antibiotisk RPMI-medium. De ble ved hjelp av en plastpipette med tynn tupp overført og spredd på overflaten av gelskummet. Etter 20 sekunder ble gelskummet rullet til en liten kule. 50 ul 5% agarose ble helt på overflaten av kulen for å danne en pankreatisk øymakrokule.
For å dekke makrokulen jevnt med 5% agarose ble 500 fil 5% agarose tilsatt til makroperlen i en "Teflon"-skje og rullet 3-4 ganger. Før agarosen størknet ble makroperlen overført til mineralolje, og skålen ble rotert for å oppnå en glatt overflate på makroperlen. Makroperlen ble vasket 3-4 ganger i antibiotisk RPMI-medium og deretter skyllet to ganger med komplett RPMI-medium. Den ble inkubert natten over før den ble anvendt til transplantasjon.
C. Fremstilling av agaroseovertrukne agarosepankreatiske øymakroperler
1.000 pankreatiske øyer oppnådd ved fremgangsmåten i eksempel I ble først vasket fire ganger i antibiotisk RPMI-medium. De pankreatiske øyer ble overført til et rør som inneholdt 50 jil antibiotisk RPMI-medium og suspendert
i dette. 100 \ il 1 prosentig agaroseløsning ble deretter tilsatt til røret. Hele innholdet i røret ble umiddelbart overført, som én eneste stor dråpe, til enten sterilisert mineralolje eller en "Teflon"-plate. Etter 1 minutt størknet dråpen til en makroperle. Makroperlen ble over-ført til antibiotisk RPMI-medium som ble holdt på 37°C.
Oljen ble deretter fjernet ved vasking av makroperlene tre ganger med samme medium og deretter skylling to ganger med komplett RPMI-medium. Perlene ble inkubert natten over ved 37°C i en fuktig atmosfære som inneholdt 5% CO2.
Neste dag ble disse perler overført til en "Teflon"-skje som inneholdt 1 ml 5% agarose i enten RPMI- eller i MEM-medium for å overtrekke makroperlene jevnt med agarose. Perlene ble deretter rullet forsiktig 2-3 ganger i agarose. De ble deretter overført til mineralolje i en "Teflon"-skål før agarosen størknet. Etter 60 sekunder ble perlene fjernet fra mineraloljen og vasket tre ganger i antibiotisk RPMI-medium og to ganger i komplett RPMI-medium. Perlene ble deretter inkubert natten over.
Eksempel III - Transplantasjon av pankreatiske øymakroperler i mus
A. Resipientmus og donorrotter
Det ble anvendt hannmus av stammene C57BL/6 og BALB/c. Resipientmusene ble gjort diabetiske ved hjelp av én eneste intravenøs injeksjon av streptozotocin (170-200 mg/kg).
Plasmaglukosenivåer på fastende hjerte ble bestemt før frembringelse av diabetes. Alle blodsukkernivåer i resipientmusene ble overvåket ved hjelp av blodprøver fra haleblodåren med en ExacTech Pen Sensor. Bare de mus som hadde serumglukosenivåer på over 400 mg/dl på transplanta-sjonsdagen ble anvendt.
Wistar Furth-rotter ble anvendt som donorer for xenotransplantasjon.
B. Xenotransplantasjon av pankreatiske øymakroperler inn i bukhulen
På tidspunktet for xenotransplantasjon ble pankreatiske øymakroperler fra henholdsvis eksempel II(A), II(B) og II(C) overført forsiktig til separate plater som inneholdt antibiotisk RPMI-medium. For å fjerne alle serum-proteiner ble mediet forandret tre ganger. Diabetiske resipientmus ble bedøvet med avertin. Et midtlinjeinnsnitt ble utført for innføring av én eneste pankreatisk øymakro-perle i den frie bukhule. En to-lags lukking av snittet ble utført med en absorberende sutur. Kontrollmus mottok enten en tom makroperle intraperitonealt, frie pankreatiske øyer intraperitonealt eller en tom makroperle sammen med frie pankreatiske donorøyer.
Etter transplantasjon ble hver resipients blodglukose kontrollert daglig eller hver annen dag inntil den nådde det normale område. Deretter ble blodglukosen kontrollert bare 2-3 ganger per uke. Transplantater ble ansett for å være teknisk vellykkede dersom serumglukosen var under 200 mg/dl ble værende der etter tre på hverandre følgende blødninger. Et transplantat ble ansett for å være blitt avvist dersom serumglukosekonsentrasjonen steg til over 200 mg/dl etter en periode med transient normalt blodsukkerinnhold. Transplantater ble ansett for å ha sviktet eller å ha blitt "primært ikke-funksjonelle" dersom blod-sukkernivået aldri ble normalt (dvs. konstant ble værende over 200 mg/dl).
C. Intraperitoneal glukosetoleransetest
Ca. 70-84 dager etter implantering ble det utført glukosetoleransetester. Glukoseløsning (1,0 g/kg kropps-vekt) ble injisert intraperitonealt i mus som hadde fastet i 6 timer (fra 9.00 til 15.00). Både før og etter injeksjon (0, 30, 60 og 120 minutter) ble det tatt blodprøver for å bestemme plasmaglukosenivåer under anvendelse av ExacTech Pen Sensoren.
For sammenligningens skyld ble det utført glukosetoleransetester på normale C57BL/6 og BALB/c mus, på C57BL/6 og BALB/c mus tilført streptozotocin, hvori det ikke var blitt transplantert pankreatiske øyer, samt på diabetiske BALB/c mus tilført streptozotocin hvortil det var transplantert frie pankreatiske øyer i nyren ("KCT"-mus) .
Kontrollforsøk ble utført for å sikre at den euglykemiske tilstand i diabetiske mus var blitt oppnådd via de makroinnkapslede pankreatiske øyer og ikke av makroperlene selv. Tomme agaroseovertrukne, agarose-kollagenmakroperler og agaroseovertrukne gelskummakroperler ble derfor fremstilt på samme måte som perlene i eksemplene II(A) og (B).
D. Resultater av testene vedrørende intraperitoneal xenotransplantasjon og glukosetoleranse
Ved implantering av pankreatiske øymakroperler er forandringene som ble iakttatt i det ikke-fastende plasma-glukosenivå hos STZ-diabetiske C57BL/6 mus tilført streptozotocin vist i fig. 3 og 4. Resipientene av agaroseovertrukne, agarose-kollagenpankreatiske øymakroperler og agaroseovertrukne, gelskumpankreatiske øymakroperler beholdt en tilstand med normalt blodsukkerinnhold i mer enn 60 dager, og i løpet av dette tidsrom økte kropps-vekten til disse mus gjennomsnittlig 3 g. Når agarose-dekkede, agarosepankreatiske øymakroperler ble transplantert oppnådde fra 2-6 dyr normalt blodsukkerinnhold etter 21-33 dager etter transplantasjon (fig. 5) og ble deretter euglykemiske. Alle øvrige transplanterte dyr oppnådd ikke en euglykemisk tilstand. Tomme makroperler (n=6) påvirket ikke blodglukose.
Når frie pankreatiske øyer ble transplantert intraperitonealt oppnådd 6 av 7 transplanterte dyr normalt blodsukkerinnhold 1 dag etter transplantasjon. Men de opprettholdt denne tilstand i bare 3-10 dager (fig. 6). Når frie pankreatiske øyer ble transplantert med tunge perler fremstilt av agaroseovertrukne, agarose-kollagenmakroperler eller agaroseovertrukne gelskummakroperler oppnådde alle dyr normalt blodsukkerinnhold innen 24 timer og ble værende slik i mer enn 12 dager (fig. 7) . Deretter ble alle dyr hyperglykemiske. Dyr som bare inneholdt tomme makroperler oppviste ingen vevreaksjon i de 90 dager de ble fulgt.
Resultatene som ble oppnådd etter utførelse av glukosetoleransetestene er vist i fig. 8. I normale BALB/c-mus og C57BL/6-mus samt i "KCT"-mus nådde plasma-glukoseinnholdet en topp etter 30 minutter og vendte tilbake til grunnlinjenivåene etter 120 minutter.
Lignende resultater ble oppnådd når makroinnkapslede pankreatiske øyer og ikke-innkapslede pankreatiske øyer som var transplantert i nyren ble testet.
Resultatene av disse forsøk viser at de agaroseovertrukne, agarose-kollagenøymakroperler, de agaroseovertrukne, agarose-gelskumpankreatiske øymakroperler samt de agaroseovertrukne agarosemakroperler har de egenskaper som er nødvendige for et hybrid kunstig organ. Selv om alle tre typer avsondrer insulin med suksess er agaroseovertrukne, agarose-kollagenmakroperler og agaroseovertrukne, agarose-gelskummakroperler mer egnet som biohybride kunstige organer på grunn av jevnheten i resultater som oppnås i det minste antall transplanterte dyr. Dessuten viste alle tre typer perler ingen skadelige virkninger. Makroperlene ble værende frie i bukhulen og viste hverken vevreaksjon eller vedheft til noe organ. Følgelig utfører disse biohybride pankreatiske øyer sin funksjon så effektivt i de makroinnkapslede perler som i sitt natur-lige voksested, bukspyttkjertelen.
I alle musene nådde plasmaglukosenivået en topp etter 30 minutter og vendte tilbake til grunnlinjenivåene etter 120 minutter.
Eksempel IV
Langvarig lagringslevetid for pankreatiske øyer
Makroinnkapslede perler fremstilt ifølge eksemplene I(A), (B) og (C), som var inkubert i 4 uker ved 37°C i komplett RPMI-medium, ble testet for sine langtidskonser-verende egenskaper in vivo og in vitro. Det viste seg at de makroinnkapslede pankreatiske øyer som var inkubert i 4 uker funksjonelt tilsvarte de som var inkubert i 1 dag.
Dette eksempel viser at fremgangsmåten til makroinnkapsling ifølge oppfinnelsen kan benyttes for konservering av sekretoriske celler, fortrinnsvis konservering av pankreatiske øyer.
Claims (11)
1. Fremgangsmåte til fremstilling av en agaroseovertrukket, agarose-kollagensekretorisk celleperle, karakterisert ved(a) suspendering av sekretoriske celler i en løsning som inneholder kollagen, (b) tilsetning av agarose til de suspenderte sekretoriske celler fra trinn (a) til dannelse av sekretoriske celler suspendert i en blanding av agarose og kollagen, (c) dannelse av en halvfast kollagen-agarose-perle fra de suspenderte sekretoriske celler fra trinn (b), (d) behandling av den halvfaste kollagen-agarose- .perle fra trinn (c) for polymerisering av kollagen i den halvfaste perle, hvorved det dannes en fast kollagen-agaroseperle, samt (e) overtrekking av den faste perle fra trinn (d) med agarose for å oppnå en agaroseovertrukket, agarose-kollagensekretorisk celleperle.
2. Fremgangsmåte i samsvar med krav 1, karakterisert ved at trinn (e) omfatter rulling av den faste perle fra trinn (d) i 5% agarose, bringing av den rulte, faste perle i kontakt med mineralolje,
samt vasking av den rulte perle for å oppnå den agaroseovertrukne, agarose-kollagensekretoriske celleperle.
3. Fremgangsmåte i samsvar med krav 1, karakterisert ved at de sekretoriske celler er pankreatiske øyer.
4. Fremgangsmåte i samsvar med krav 3, karakterisert ved at de pankreatiske øyer er pankreatiske øyer fra menneske, storfe eller svin.
5. Fremgangsmåte i samsvar med krav 3, karakterisert ved at perlen inneholder fra 50.000 til 700.000 pankreatiske øyer.
6. Agaroseovertrukket, agarose-kollagensekretorisk celleperle.
7. Celleperle i samsvar med krav 6, karakterisert ved at den sekretoriske celle er en pankreatisk øy.
8. Celleperle i samsvar med krav 7, karakterisert ved at den pankreatiske øy er en pankreatisk øy fra menneske, storfe eller svin.
9. Fremgangsmåte for konservering av sekretoriske celler, karakterisert ved(a) dannelse av agaroseovertrukne, agarose-kollagensekretoriske celleperler; og (b) inkubering av de sekretoriske celleperler.
10. Fremgangsmåte i samsvar med krav 9, karakterisert ved at den sekretoriske celle er en pankreatisk øy.
11. Fremgangsmåte i samsvar med krav 10, karakterisert ved at den pankreatiske øy inkuberes ved fra 24°C til 37°C.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US18126994A | 1994-01-13 | 1994-01-13 | |
| PCT/US1995/000400 WO1995019430A1 (en) | 1994-01-13 | 1995-01-12 | Macroencapsulated secretory cells |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO20051359L NO20051359L (no) | 1996-09-11 |
| NO324570B1 true NO324570B1 (no) | 2007-11-26 |
Family
ID=22663563
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO19962955A NO323228B1 (no) | 1994-01-13 | 1996-07-15 | En agaroseovertrukket, agarosesekretorisk celleperle, en fremgangsmate for fremstilling derav, samt en fremgangsmate for konservering av agarosesekretoriske celler. |
| NO20051359A NO324570B1 (no) | 1994-01-13 | 2005-03-16 | Agaroseovertrukket, agarosekollagensektretorisk celleperle og fremgangsmate til fremstilling derav samt fremgangsmate for konservering av sekretoriske celler. |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO19962955A NO323228B1 (no) | 1994-01-13 | 1996-07-15 | En agaroseovertrukket, agarosesekretorisk celleperle, en fremgangsmate for fremstilling derav, samt en fremgangsmate for konservering av agarosesekretoriske celler. |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US5643569A (no) |
| EP (3) | EP0742818B1 (no) |
| JP (4) | JP3948742B2 (no) |
| KR (1) | KR100474803B1 (no) |
| CN (1) | CN1087779C (no) |
| AT (3) | ATE320482T1 (no) |
| AU (1) | AU681240C (no) |
| CA (1) | CA2181156C (no) |
| DE (3) | DE69535842D1 (no) |
| DK (2) | DK1418228T3 (no) |
| ES (3) | ES2260568T3 (no) |
| FI (1) | FI118853B (no) |
| HK (1) | HK1084693A1 (no) |
| IL (1) | IL112330A (no) |
| NO (2) | NO323228B1 (no) |
| NZ (3) | NZ278809A (no) |
| PT (3) | PT1418228E (no) |
| RU (2) | RU2208636C2 (no) |
| WO (1) | WO1995019430A1 (no) |
Families Citing this family (43)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5830492A (en) * | 1992-02-24 | 1998-11-03 | Encelle, Inc. | Bioartificial devices and cellular matrices therefor |
| US5834005A (en) * | 1992-02-24 | 1998-11-10 | Encelle, Inc. | Bioartificial devices and cellular matrices therefor |
| US6231881B1 (en) | 1992-02-24 | 2001-05-15 | Anton-Lewis Usala | Medium and matrix for long-term proliferation of cells |
| US5824331A (en) * | 1992-02-24 | 1998-10-20 | Encelle, Inc. | Bioartificial devices and cellular matrices therefor |
| ES2260568T3 (es) * | 1994-01-13 | 2006-11-01 | The Rogosin Institute | Celulas secretoras macroencapsuladas. |
| USRE39542E1 (en) * | 1994-01-13 | 2007-04-03 | The Rogosin Institute | Preparation of agarose coated, solid agarose-collagen beads containing secretory cells |
| US5916790A (en) * | 1995-03-03 | 1999-06-29 | Metabolex, Inc. | Encapsulation compositions, and methods |
| JPH11501512A (ja) * | 1995-03-03 | 1999-02-09 | メタボレックス，インコーポレイティド | ゲル化ポリマーによる新規の被包方法 |
| US6419920B1 (en) | 1995-10-25 | 2002-07-16 | Trans Karyotic Therapies, Inc. | Hybrid matrix implants and explants |
| US5965125A (en) * | 1995-10-25 | 1999-10-12 | Transkaryotic Therapies, Inc. | Hybrid matrix implants and explants |
| AU6496996A (en) * | 1996-02-23 | 1997-09-10 | Circle Biomedical, Inc. | Novel artificial pancreas |
| US7297331B2 (en) | 1996-04-03 | 2007-11-20 | The Rogosin Institute | Beads containing restricted cancer cells producing material suppressing cancer cell proliferation |
| US5888497A (en) * | 1996-04-03 | 1999-03-30 | The Rogosin Institute | Agarose coated agarose beads containing cancer cells that produce material which suppresses cancer cell proliferation |
| KR100477296B1 (ko) * | 1996-04-03 | 2005-05-16 | 더 로고신 인스티튜트 | 확산성의생물학적산물생산세포를함유하는이식가능한아가로오스-콜라겐비드,및그의용도 |
| DE69738170T2 (de) * | 1996-04-03 | 2008-01-24 | The Rogosin Institute | Konditioniertes Medium und diffusionsfähiges biologisches Material gewonnen durch Inkubierung von eingeschlossenen Zellen |
| US6224912B1 (en) | 1996-04-03 | 2001-05-01 | The Rogo Institute | Cancer-cell proliferation-suppressing material produced by cancer cells restricted by entrapment |
| US6303151B1 (en) * | 1996-04-03 | 2001-10-16 | The Rogosin Institute | Cancer-cell proliferation-suppressing material produced by cancer cells restricted by entrapment |
| KR100547402B1 (ko) | 1996-09-13 | 2006-02-01 | 트랜스케리오틱 쎄러피스, 인코포레이티드 | α-갈락토시다아제 Ａ 결핍을 치료하는 방법 |
| AU8577498A (en) * | 1997-07-22 | 1999-02-16 | General Hospital Corporation, The | Modulation of multicellular aggregates by solid stress |
| US5922339A (en) * | 1998-01-27 | 1999-07-13 | Usala; Anton-Lewis | Compositions and methods for biocompatible implants |
| US6365385B1 (en) * | 1999-03-22 | 2002-04-02 | Duke University | Methods of culturing and encapsulating pancreatic islet cells |
| US6303355B1 (en) | 1999-03-22 | 2001-10-16 | Duke University | Method of culturing, cryopreserving and encapsulating pancreatic islet cells |
| US6391576B1 (en) * | 1999-10-13 | 2002-05-21 | Japan Bioindustry Association | Method for isolating a microbe |
| US6279656B1 (en) | 1999-11-03 | 2001-08-28 | Santrol, Inc. | Downhole chemical delivery system for oil and gas wells |
| WO2001091774A2 (en) | 2000-05-31 | 2001-12-06 | Encelle, Inc. | Method of treating chronic ulcers |
| JP2006516134A (ja) * | 2002-12-24 | 2006-06-22 | アン−ゴ−ゲン・インコーポレイテッド | 封入化細胞療法 |
| WO2004075855A2 (en) | 2003-02-26 | 2004-09-10 | Biomed Solutions, Llc | Process for in vivo treatment of specific biological targets in bodily fluid |
| US20050053586A1 (en) | 2003-09-04 | 2005-03-10 | Bryan Conn | Entrapped stem cells and uses thereof |
| US20060121077A1 (en) * | 2004-11-11 | 2006-06-08 | Lawrence Gazda | Method for treating patients with implants of islets which have been kept in long term, in vitro culture |
| CA2622529C (en) * | 2005-09-26 | 2014-02-18 | Lawrence Gazda | Secretory cell-containing macrobeads comprising seakem gold agarose, and uses thereof |
| US20070116680A1 (en) * | 2005-11-18 | 2007-05-24 | Rensselaer Polytechnic Institute | Stem cells within gel microenvironments |
| EP2029727B1 (en) * | 2006-06-16 | 2012-04-11 | FMC Biopolymer AS | Alginate coated, collagen matrix cellular device, preparative methods, and uses thereof. |
| US20100124775A1 (en) * | 2007-01-24 | 2010-05-20 | Koninklijke Philips Electronics N.V. | Process for treating cultured cells |
| AU2008289461A1 (en) | 2007-08-23 | 2009-02-26 | Intrexon Corporation | Methods and compositions for diagnosing disease |
| EP2205249B1 (en) | 2007-09-28 | 2018-11-07 | Intrexon Corporation | Therapeutic gene-switch constructs and bioreactors for the expression of biotherapeutic molecules, and uses thereof |
| DE102010040687A1 (de) | 2010-09-14 | 2012-03-15 | Hamilton Bonaduz Ag | Verfahren zum Herstellen von Wirkstoff-Beads |
| US10655120B2 (en) | 2011-03-21 | 2020-05-19 | The University Of Newcastle Upon Tyne | Transport of cells in hydrogels |
| DE102011050024A1 (de) | 2011-04-29 | 2012-10-31 | Hamilton Bonaduz Ag | Analysevorrichtung für eine berührungslose Analyse der Ausformung eines transparenten Körpers und Verfahren zur Durchführung der berührungslosen Analyse |
| HUE034618T2 (en) | 2012-01-31 | 2018-02-28 | The Rogosin Inst Inc | An improved process for producing macros |
| KR101327630B1 (ko) * | 2012-03-05 | 2013-11-13 | 울산대학교 산학협력단 | 아텔로콜라겐을 이용한 췌도세포 이식용 담체의 제조방법 그리고 이를 이용하여 제조된 인공췌장 |
| UY38389A (es) | 2018-09-27 | 2020-04-30 | Sigilon Therapeutics Inc | Dispositivos implantables para terapia celular y métodos relacionados |
| WO2024081309A1 (en) | 2022-10-11 | 2024-04-18 | Sigilon Therapeutics, Inc. | Engineered cells and implantable elements for treatment of disease |
| WO2024081310A1 (en) | 2022-10-11 | 2024-04-18 | Sigilon Therapeutics, Inc. | Engineered cells and implantable elements for treatment of disease |
Family Cites Families (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4391909A (en) * | 1979-03-28 | 1983-07-05 | Damon Corporation | Microcapsules containing viable tissue cells |
| US4352883A (en) * | 1979-03-28 | 1982-10-05 | Damon Corporation | Encapsulation of biological material |
| US4409331A (en) * | 1979-03-28 | 1983-10-11 | Damon Corporation | Preparation of substances with encapsulated cells |
| SE441009B (sv) * | 1982-03-08 | 1985-09-02 | Kjell Nilsson | Sett att immobilisera levande biomaterial i perlformiga polymerer |
| US4798786A (en) * | 1982-05-06 | 1989-01-17 | Stolle Research And Development Corporation | Living cells encapsulated in crosslinked protein |
| CA1196862A (en) * | 1983-06-01 | 1985-11-19 | Anthony M.F. Sun | Microencapsulation of living tissue and cells |
| US4663286A (en) * | 1984-02-13 | 1987-05-05 | Damon Biotech, Inc. | Encapsulation of materials |
| US4997443A (en) * | 1985-08-26 | 1991-03-05 | Hana Biologics, Inc. | Transplantable artificial tissue and process |
| US4902295A (en) * | 1985-08-26 | 1990-02-20 | Hana Biologics, Inc. | Transplantable artificial tissue |
| SE8604684L (sv) * | 1986-11-03 | 1988-05-04 | Excorim Kommanditbolag | Sett att belegga fasta partiklar med en hydrofil gel samt genom settet belagda partiklar |
| US5053332A (en) * | 1989-07-24 | 1991-10-01 | Cook Richard B | Agarose beads, preferably incorporating biological materials |
| US5227298A (en) * | 1990-08-17 | 1993-07-13 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Method for microencapuslation of cells or tissue |
| FR2686250A1 (fr) * | 1992-01-16 | 1993-07-23 | Coletica | Compositions injectables contenant en suspension des microcapsules a base de collagene, leur utilisation biomedicale et des compositions pharmaceutiques. |
| WO1993024076A1 (en) * | 1992-05-29 | 1993-12-09 | The Regents Of The University Of California | Coated transplant and method for making same |
| WO1994012161A1 (en) * | 1992-11-24 | 1994-06-09 | Clover Consolidated, Limited | Cytoprotective, biocompatible, retrievable macrocapsules |
| ES2260568T3 (es) * | 1994-01-13 | 2006-11-01 | The Rogosin Institute | Celulas secretoras macroencapsuladas. |
| US5888497A (en) * | 1996-04-03 | 1999-03-30 | The Rogosin Institute | Agarose coated agarose beads containing cancer cells that produce material which suppresses cancer cell proliferation |
| US6224912B1 (en) * | 1996-04-03 | 2001-05-01 | The Rogo Institute | Cancer-cell proliferation-suppressing material produced by cancer cells restricted by entrapment |
-
1995
- 1995-01-12 ES ES03028476T patent/ES2260568T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-12 KR KR10-2002-7006924A patent/KR100474803B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1995-01-12 AU AU15267/95A patent/AU681240C/en not_active Expired
- 1995-01-12 DK DK03028476T patent/DK1418228T3/da active
- 1995-01-12 AT AT03028476T patent/ATE320482T1/de active
- 1995-01-12 ES ES06004970T patent/ES2309849T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-12 DE DE69535842T patent/DE69535842D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-12 EP EP95906814A patent/EP0742818B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-12 PT PT03028476T patent/PT1418228E/pt unknown
- 1995-01-12 PT PT06004970T patent/PT1666585E/pt unknown
- 1995-01-12 NZ NZ278809A patent/NZ278809A/en not_active IP Right Cessation
- 1995-01-12 NZ NZ509363A patent/NZ509363A/en not_active IP Right Cessation
- 1995-01-12 NZ NZ329619A patent/NZ329619A/en not_active IP Right Cessation
- 1995-01-12 PT PT95906814T patent/PT742818E/pt unknown
- 1995-01-12 AT AT95906814T patent/ATE275194T1/de active
- 1995-01-12 JP JP51910195A patent/JP3948742B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-12 DK DK06004970T patent/DK1666585T3/da active
- 1995-01-12 EP EP03028476A patent/EP1418228B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-12 EP EP06004970A patent/EP1666585B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-12 DE DE69533437T patent/DE69533437T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-12 CN CN95191589A patent/CN1087779C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-12 ES ES95906814T patent/ES2227544T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-12 CA CA002181156A patent/CA2181156C/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-12 RU RU2001117583/13A patent/RU2208636C2/ru active
- 1995-01-12 RU RU96115926/13A patent/RU2177503C2/ru active
- 1995-01-12 DE DE69534865T patent/DE69534865T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-12 WO PCT/US1995/000400 patent/WO1995019430A1/en active IP Right Grant
- 1995-01-12 AT AT06004970T patent/ATE408005T1/de active
- 1995-01-13 IL IL11233095A patent/IL112330A/en not_active IP Right Cessation
- 1995-06-07 US US08/483,728 patent/US5643569A/en not_active Ceased
-
1996
- 1996-07-12 FI FI962841A patent/FI118853B/fi not_active IP Right Cessation
- 1996-07-15 NO NO19962955A patent/NO323228B1/no not_active IP Right Cessation
-
1999
- 1999-06-30 US US09/345,196 patent/USRE38027E1/en not_active Expired - Lifetime
-
2004
- 2004-11-01 US US10/979,527 patent/USRE40555E1/en not_active Expired - Lifetime
-
2005
- 2005-02-03 JP JP2005027914A patent/JP3989492B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2005-03-16 NO NO20051359A patent/NO324570B1/no not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-06-15 HK HK06106884A patent/HK1084693A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2006-09-25 JP JP2006258762A patent/JP2006345875A/ja active Pending
- 2006-10-17 JP JP2006282280A patent/JP4435134B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO324570B1 (no) | Agaroseovertrukket, agarosekollagensektretorisk celleperle og fremgangsmate til fremstilling derav samt fremgangsmate for konservering av sekretoriske celler. | |
| US6372244B1 (en) | Retrievable bioartificial implants having dimensions allowing rapid diffusion of oxygen and rapid biological response to physiological change, processes for their manufacture, and methods for their use | |
| US6783964B2 (en) | Microencapsulated pancreatic islet cells | |
| USRE39542E1 (en) | Preparation of agarose coated, solid agarose-collagen beads containing secretory cells | |
| AU2005201605B2 (en) | Methods of Microencapsulating Pancreatic Islet Cells | |
| MXPA96002765A (en) | Secretor cells macroencapsula | |
| Sun | Xenotransplantation of encapsulated porcine islets |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Patent expired |