JP2006516134A - 封入化細胞療法 - Google Patents
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Abstract
Description
細胞療法の療法適用は、糖尿病および神経退行性疾患(例えば、アルツハイマー病、および癲癇)の領域に提案される。加えて、細胞が、身体からの有害な物質の除去に関して、大きな療法上の潜在能力を有していることも示されている。例えば、肝細胞は、高コレステロールレベルの治療のために移植されており、これはWang等〔Wang et al., Transplantation Proceedings, 23: 894-895 (1991)〕により示されている。細胞療法により、通常の薬理学的治療に関する使用に対して、幾つかの利点が提供され、これには以下が含まれる:療法薬の局所デリバリー、連続的なデリバリー、および自然なフィードバック機構に応答する産生を調節する能力(Uludag et al, 2000)。
しかしながら、移植細胞のレシピエント免疫系による拒絶は、特に長期の使用が望まれる場合(例えば、糖尿病患者の膵島移植のケースにおいて)、依然として問題となる(Morris, 1996)。免疫抑制に対する代替として、封入方法が開発されている。これによって移植細胞は、レシピエントの免疫系から、膜障壁により物理的に防御される(Morris, 1996)。封入化細胞の使用が、好適である。というのも免疫抑制薬の全身的な投与が、免疫系の非特異的な抑制による有害な副作用および合併症と関連するからである(Morris, 1996)。
(1)マイクロ封入(microencapsulation)、これは典型的には小さい球状のベシクル(0.3〜1.5mmの直径のサイズの範囲)に、個々の細胞または小細胞集団(small cell masses)を含有するものが関与する、および、
(2)マクロ封入(macroencapsulation)、これは管状またはディスク形状の中空装置(hollow devices)に、大細胞集団(the larger cell masses)を含む(Uludag et al, 2000)。
(a)一般的に、彼らは予定される場所に残存しない;
(b)幹細胞または前駆体細胞(precursor cells)は、彼らが分化することが予定されない細胞へと分化する傾向がある:および
(c)細胞のアポトーシスが発生するか又は前記細胞はさもなければ生存しない。
これらの問題は、本願発明者を、当該技術において更に有利な発明へと導いた。
本発明は、本明細書中に様々な方法および療法を提供する(これらは細胞封入を使用して、細胞療法の効率を増加させる)。
本明細書に使用される全ての専門用語は、本参照によって提供される定義および説明と一致することを意図している。これらのインテグリンは、関連する細胞表面ヘテロ二量体の糖タンパク質のファミリーを含み、これらは細胞接着性の相互作用を媒介することに関与している。
前記インテグリンには、次のものに対するレセプター、フィブロネクチン、ビトロネクチン、コラーゲン、ラミニン、テネイシン、および細胞表面タンパク質IIb/IIIa(これはフィブロネクチン、フィブリノーゲン、ヴォン・ヴィレブランド因子、およびトロンボスポンジンを認識する)が含まれるが、これらに限定されない。白血球接着レセプターLFA-1、Mac-1、およびgp150/95も、インテグリンファミリーのレセプターのメンバーである。係るインテグリンの例には、αvβ1(フィブロネクチンレセプター)、αvβ3(ビトロネクチンレセプター)、およびα3β3(I型コラーゲンレセプター)が含まれる。
適切な合成ヒドロゲルには、ポリビニルアルコール、エチレン―ビニルアルコールのブロック共重合体、ポリスチレンスルホン酸ナトリウム、ビニル―メチル―トリベンジル塩化アンモニウム、およびポリフォスファーゼン(polyphosphazene)が含まれる〔Cohen, S. et al. J. Anal. Chem. Soc., 112, pp. 7832-7833(1990)〕。
形成されたマイクロカプセルを、ポリイオン(例えば、ポリリジン)の吸着により更にコートすることができ、これはアルギナートで再びコートすることができる。多くの細胞タイプ(膵島、肝細胞、PC l12細胞、軟骨細胞、および線維芽細胞が含まれる)が、この方法により封入されている。
例えば、下垂体機能不全の治療のための成長ホルモン、インシュリン、下垂体不全に引き続く甲状腺機能低下症の治療のための甲状腺刺激ホルモン(TSH)、および他のホルモンなどのホルモンを発現する導入遺伝子;
Apo1および脂質代謝に関与している他のタンパク質/酵素(例えば、リポ蛋白リパーゼ)などの有益なリポタンパク質を発現する導入遺伝子;
プロスタサイクリンおよび他の血管作動性の物質を発現する導入遺伝子;
抗オキシダントおよびフリーラジカルスカヴェンジャーを発現する導入遺伝子;
免疫メディエータ(例えば、可溶性TNFレセプター)、またはサイトカインレセプターアンタゴニスト(例えば、IL1ra)の障害レベル(damaging levels)の作用を中和するための、可溶性サイトカインレセプターを発現する導入遺伝子;
病理学的な細胞接着プロセス(例えば、炎症性の疾患において発生するもの)を妨害するための、可溶性の接着分子(例えば、ICAM-1)を発現する導入遺伝子;
細胞の感染を阻害するための、ウイルスに対する可溶性レセプター(例えば、HIVに対するCD4、CXCR4、CCR5)を発現する導入遺伝子;
感染と戦う免疫応答を活性化するための、サイトカイン(例えば、IL-2)を発現する導入遺伝子;
導入遺伝子としての嚢胞性線維症遺伝子。
肺性血管疾患(例えば、肺性高血圧)または全身性の脈管性疾患(vascular disease)の治療に使用するためのエラスターゼ阻害剤;
骨形成タンパク質(BMP)およびBMPレセプター1および2、エンドグリン(endoglin)およびセロトニンレセプターまたは遺伝に基づく肺動脈性高血圧症の治療に関する摂取機構(uptake mechanisms)をコードしている遺伝子;
アテローム性動脈硬化症または動脈性動脈瘤の治療に使用するための、組織抑制性のメタロプロテアーゼ(tissue inhibiting metaloproteinases);
肺性高血圧の治療に使用するための、カリウムチャンネルまたはカリウムチャンネルモジュレーター;
肺性高血圧、ARDS、および肺線維症の治療に使用するための、抗酸化物(例えば、スーパーオキシドジスムターゼ);
炎症性の血管病、例えば、アテローム性動脈硬化症または動脈性動脈瘤の治療に使用するための、抗炎症性因子(例えば、サイトカイン、IL-10、およびIL-4);
特に、電気穿孔法により、高度のトランスフェクションが提供される;これは如何なる外来物質(foreign material)の使用も必要としない。しかしながら、電気穿孔法、リポフェクション、およびポリカチオンのタンパク質の使用以外の他の方法(例えば、アデノおよびレトロウイルスを含む、遺伝子移入のウイルス性の方法)を、使用してもよい。これらの方法および技術は、当業者に周知であり、そして本発明の方法における使用に容易に適用可能である。電気穿孔法は、真皮性の線維芽細胞宿主細胞およびEPCsでの使用に関して、最も好適な技術である;これにより高いトランスフェクション率が、外来物質の使用を必要とすることなく提供される。ポリカチオン性のタンパク質は、平滑筋細胞での使用に有用である。別の態様において、本発明者らは良好なトランスフェクションが、前記遺伝子を又は所望の遺伝子を含有しているプラスミドを前記カプセルへと導入することにより達成し得ることを見出した。前記カプセルが分解する際に、前記細胞は前記遺伝子を取込む(おそらくエンドサイトーシスにより)。
それらは、トランスフェクトされた細胞から発現及び分泌され得る、そして患者の正常な循環を通じて、他の下流の器官(ここで、それらは療法の効果を発揮する)へと移動する。従って、本発明の方法の好適な用途は肺疾患の治療におけるものであるが(というのも発現産物が、最初に患者の肺システムと接触するからである)、係る治療に限定されるものではない。
トランスフェクション体は、患者の他の身体器官の治療に関して設計された産物を発現している導入遺伝子を含有することができる。肺システムにおいて発現される係る産物は、他の既定の器官を標的とし、そして患者の天然の循環システムによってそこに運搬される。
ラット線維芽細胞を、アガロースで個々に封入した。空のカプセルを、様々なパーセントの組成に調製し、そして細胞培養条件で21日まで維持した。前記カプセルは、多くの部分は未変化(intact)のままであった。クランピング(共に固着している2または3カプセル)は、5日目に発生し、一貫して増加した。
幾つかのケースにおいて、アガロースの「小滴(blobs)」が形成されていた。
細胞は、Hank's緩衝化塩類溶液に懸濁され、4%アガロース(これはビオチン化されていてもよい)に添加される。混合物は、次に不活性な油(ジメチルポリシロキサン)に滴下して添加される。これは、次に即座に最高速度で1分間ボルテックスされ、そして即座にアイスバスに10分間配置される。混合物は、次に1800RPMで10分間遠心分離され、引き続いて油相および水相が封入化細胞を含有している最終相(final phase)を得るために除去される。封入化細胞は、次にHank's緩衝化塩類溶液で洗浄され、70ミクロンの細胞ストレーナー(cell strainer)を通して濾過される。
二重染色により、アポトーシス細胞がネクローシス性のものから区別される。図1は次の事項を示している。その事項とは、封入処置は、即時型の(B)有害な(detrimental)効果を、非封入化細胞(A)と比較した際に、有していないということである。しかしながら、24時間後(C)カプセルにおいて、封入化集団のかなりのパーセンテージが、アポトーシス性であるか又はアポトーシスの結果死亡した。
例えば、フィブリノーゲンに関して提唱される範囲(suggested ranges)は、1.5〜5mg/400mLアガロースサンプルである。フィブロネクチンに関して提唱される範囲は、25〜200mg/400mLアガロースサンプルである。ビトロネクチンに関して提唱される範囲は、1.5〜5 mg/400mLアガロースサンプルである。封入プロセスに続いて、カプセルに残っているフィブリノーゲン量を定量するために、GeminiTMスペクトラマックスプレートリーダーを使用した。標準曲線を段階希釈を用いて準備し、サンプルにおけるオレゴングリーン(Oregon green)の蛍光強度およびフィブリノーゲンの濃度の関係を取得した。例えば、1.5mgのフィブリノーゲンをアガロースの400ml(187万のマイクロカプセル)サンプルに付加することにより、0.0055ng/マイクロカプセルの取込が生じた。
また、フィブリノーゲンの付加により、アガロースゲルを脱出し、フラスコに接着する細胞のパーセンテージが増加することが見出された。
カプセルにおけるラット線維芽細胞の生存を増加させるため、フィブリノーゲンをアガロースゲルに取込ませた。ゲルごとの全体濃度(overall concentration per gel)は、0.0055ngフィブリノーゲンであることが見出された。フィブリノーゲンの添加は、細胞の良好な生存を生じた。前記細胞は、非常に健康であるように思われた。また、フィブリノーゲンの付加で次の事項が見出された。その事項とは、より大きなパーセンテージの細胞が、カプセルから脱出し、フラスコへと接着していたことである。
たとえ有意な療法の効果がトランスフェクトされた細胞の運搬に伴って観察されたにせよ、この療法が至適化される場合には、細胞に基づく発現の適切な特性決定が実施される必要がある。インビトロでの細胞集団の一過性(プラスミドに基づく)トランスフェクションは、広い範囲の療法タンパク質合成を生じ得る(個々の細胞において測定された場合)。そして、これは細胞毎に導入されている様々なプラスミドコピー数の結果であるようである。トランスフェクション効率(導入遺伝子の検出可能なレベルを発現している細胞の数として単純に測定した)は、全ての遺伝子療法実験において測定された主要エンドポイント(primary endpoint)である。理想的には全ての細胞が均等に導入遺伝子発現を有するであろう、しかしながら、実際上はインビトロトランスフェクション効率は低い可能性がある(10-20%程度に低い、だが本発明者らは95%トランスフェクション効率を現在達成している)。そしてトランスフェクトされた細胞における遺伝子発現のレベルは可変的である。単一細胞に基づく遺伝子発現プロファイルおよび発現したタンパク質の分析の理解は、改善された、細胞に基づく療法を開発することに関して重要である。
発現レベルおよび発現の持続時間を検査するために、本発明者らは、ELISA'sを用いて、VEGF発現を包括的に調査するための幾つかの実験を実施した(集団に基づく)。図4は、トランスフェクトされた細胞に関する、ELISA VEGFタンパク質分泌の結果を示す。また、封入化細胞からのVEGFの分泌を、ELISAアッセイを用いて定量した。
適切な捕獲抗体とタンパク質との比率は、少なくとも8:1であることが決定された。
理想的には、高度に分泌している細胞が捕獲されることを保証するために、高比率を使用することがより良いであろう。蛍光強度は、封入化細胞により分泌されたVEGFの量と相関していた。
本発明者らは、カプセルにおけるラット線維芽細胞の生存度と封入化細胞の生存におけるフィブリノーゲン&フィブロネクチンの効果とを調査した。
封入に際し、細胞は非常に球形に見え、様々なタイムピリオドの間そのままである。彼らは接着集団であるにもかかわらず、彼らは周囲のアガロースマトリックスに広がり接着しなかった(図7)。オーバータイム(Over time)では、彼らはアポトーシス性であるように思われる。そして膜統合性は、多くの細胞において失われる。図7において示されるように、黒矢印は、カプセル中の細胞の球形形態を示している。白矢印は、アポトーシス性および/または膜統合性を失った細胞を示している。
アポトーシスおよびネクローシスに関して二重染色を用いて、本発明者らは次の事項を決定した。つまり、細胞の小パーセンテージが、封入プロセスの結果として、アポトーシス性であることを決定した。
この数は、カプセルにおいて24時間後に、細胞の約28%にまで増加する(図4)。
結果は次の事項を指摘している。その事項とは、封入媒体における、フィブロネクチン並びにフィブロネクチンおよびフィブリノーゲンの組み合わせが、ラット線維芽細胞の生存度を65%から約85%に増加させたことである(図9)。
本発明者らは、フィブロネクチン、フィブリノーゲン、ビトロネクチン、および3つの接着分子の組み合わせの効果を、添加型アガロースマトリックスに対する細胞接着を促進することにおいて調査した。
本発明者らは、封入化ラット線維芽細胞の生存度を、代謝活性を検査することにより更に調査した。
本発明者らは、前記カプセル中の細胞の生存度を改善するための及び前記カプセルの脱出を奨励するための、成長因子および接着分子の適切な組み合わせを決定した。また、成長因子を取込ませる他の方法を調査した。修飾された細胞が生存可能で且つ機能して、療法上の遺伝子を発現することを確実にするために、最適の生存条件が重要である。
更なるデータを、フィブロネクチンおよびフィブリノーゲンの、封入化ラット線維芽細胞の生存度における効果について集めた。図13は、アガロースに付加された異なる添加物の結果としての平均蛍光強度とアポトーシス性およびネクローシス性の細胞のパーセンテージにおけるアガロース添加物の効果とを示す。各実験に対し、百万細胞を封入した。アポトーシス細胞(アネキシンVにより検出される)およびネクローシス細胞のパーセンテージを、プロピジウムイオダイド染色により検出した。細胞を、添加物無しの4%アガロースに又はフィブロネクチンまたはフィブリノーゲン&フィブロネクチンを添加された4%アガロースゲルに封入した。結果は次の事項を示している。その事項とは、アポトーシス細胞のパーセンテージが、フィブロネクチンで下方に向かい、そしてフィブリノーゲンおよびフィブロネクチンのアガロースマトリックスへの付加により有意に減少したことである。結果は、前記細胞の生存度における改善を示す初期データを確証する。実験による生存度は、統計学的に有意であった。
生存度の増加は、添加型アガロース中に封入されたヒト繊維芽細胞において観察される。
本実験では、細胞を4%アガロースに封入した。細胞を4グループに分け、異なる培養条件下で24時間培養して、細胞外タンパク質を細胞培養培地へ付加することへの効果を調査した。生存度結果を、非封入細胞のコントロールグループと比較した。第1グループは、DMEM+10%FBS+2%P/S(4%Ags)の正規(regular)のラット線維芽細胞培養条件で24時間インキュベーションした封入化細胞を含むものであった。第2、第3、および第4グループは、DMEM+10%FBS+2%P/Sに様々な濃度の可溶性のフィブロネクチンおよびフィブリノーゲンを添加したものでインキュベーションされた封入化細胞であった。
グループ4%AgsL*は、0.5μg/mLフィブロネクチンおよび25μg/mLのフィブリノーゲン中で培養された封入化細胞を表している。グループ4%AgsM*は、2μg/mLのフィブロネクチンおよび100μg/mLのフィブリノーゲン中で培養された封入化細胞を表している。最後に、グループ4%AgsH*は、5μg/mLのフィブロネクチンおよび250μg/mLのフィブリノーゲン中で培養された封入化細胞を表している。フィブロネクチンおよびフィブリノーゲンの溶液への添加(即ち、細胞培養培地中に、封入媒体に対抗するものとして)は、細胞の生存度に有害な効果を有しているように思われるが、フィブロネクチンおよびフィブリノーゲンの選択された濃度での添加は、用量依存的な効果を有していなかった。
結果を、アネキシンV&プロピジウムイオダイド染色により得た。y-軸は、アネキシンVおよびPI陽性の封入化細胞のパーセンテージを表す。
本発明者らは、FXIIIの封入化細胞の生存における効果を調査した。
簡単に説明すると、40マイクログラムのベータ-ガラクトシダーゼプラスミドを200マイクロリッターの4%アガロースへと付加し、そして空のカプセルを調製した。カプセルを、次に臭化エチジウムで染色し、そしてUV光下で観察した。プラスミドの取込みを観察した(DNAのアガロース マイクロカプセル中への取込を示す)。
本発明者らは、封入化ラット骨髄ストローマ細胞(BMSC)の生存度を調査した。可塑性(plasticity)、多能性(pluripotentiality)、単離の容易性、および高いインビトロ拡大ポテンシャルの性質を有していることから、骨髄ストローマ細胞(BMSC)は細胞および遺伝子療法に関する魅力的な道具となる。係る細胞は、患部組織へと帰巣しなければならず、細胞外マトリックスへと適切に移植され、そして一度移植されたら適切な細胞系統へと分化する。非造血性細胞は、間充織幹細胞または骨髄ストローマ細胞と称され、彼らの多分化能形質に関して調査されている(Bianco et al. 2001, Theise et al. 2002, Cognet et al. 2000, Jiang et al. 2002, Krause et al. 2001)。これらの細胞は、多分化能性(多様な細胞タイプへと分化する能力を有する)であることが認められている;また、骨髄、骨、軟骨、および結合性組織に関する、持続性前駆体(long-lasting precursors)として機能する(Cognet et al. 1999)。
本発明者らは、肺微小血管系中での骨髄ストローマ細胞の移植ポテンシャルを改善することにおける、封入の役割を調査した。
CMTMR標識細胞を、正常なFisher344ラットの頚静脈へと注射により運搬した。動物を、選択された時間ポイント(15分、1d、3d、&7d)で殺傷した。そして肺を摘出し、試験した。前記肺からの組織を、固定し、共焦点顕微鏡で分析した。結果は、非封入化骨髄ストローマ細胞の有意な移植物が前記肺に15分に存在していることを示している。図20に示されるように、注射後1日および3日では、CMTMR標識された非封入化細胞の証拠は存在しない。しかしながら、骨髄ストローマ細胞を富化アガロース(enriched agarose)に封入したことにより、運搬後3日で肺微小血管系に蛍光標識細胞の移植が生じた。図21のイメージのトップパネルは、封入化細胞(運搬後1日)を高拡大率で示している。封入化細胞および細胞のクラスターは、運搬後7日(下部パネル)でも観察され、長期間の移植を指摘している。
上記の実施例において、本発明者らは、ラット線維芽細胞およびラット骨髄ストローマ細胞における封入の効果を試験した。本発明者らは、ヒト線維芽細胞における封入の効果も調査した。
従って、本発明の本当の範囲および精神(spirit)は、例示された例よりむしろ、本願の特許請求の範囲の請求項及びそれらの適法な均等物に包含されている。
Claims (37)
- 調製細胞を調製する方法であって、前記細胞をインビトロで細胞封入媒体に封入して、インビボの細胞療法に使用するための封入産物を形成することを含み、前記封入産物がインテグリン結合パートナーを含む方法。
- 請求項1記載の方法であって、前記インテグリン結合パートナーは、コラーゲン、フィブロネクチン、フィブリノーゲン、ラミニン、トロンボスポンジン、ビトロネクチン、X因子、C3bi、Ig様細胞接着分子(ICAM-1、2.3、3)、1型コラーゲン、血管性の細胞接着分子(VCAM-1)、粘膜のアドレッシン細胞接着分子-1(MAdCAM-1)、ビトロネクチン、コラーゲン、ラミニン、LFA、Mac-1、テネイシン、ヴォン・ヴィレブランド因子、トロンボスポンジン、X因子、FXIII、FXIIIa、Arg-Gly-Asp、Leu-Asp-Val、His-His-Leu-Gly-Gly-Ala-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val、配列Arg-Gly-Asp、Leu-Asp-Valを含んでいるインテグリン結合パートナー、および配列His-His-Leu-Gly-Gly-Ala-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Valを含んでいるインテグリン結合パートナーからなる群から選択される方法。
- 請求項2記載の方法であって、前記インテグリン結合パートナーがフィブリノーゲンである方法。
- 請求項2記載の方法であって、前記インテグリン結合パートナーがフィブロネクチンである方法。
- 請求項3記載の方法であって、前記インテグリン結合パートナーが更にフィブロネクチンを含む方法。
- 請求項1記載の方法であって、前記封入産物が更にFXIIIを含む方法。
- 請求項5記載の方法であって、前記封入産物が更にFXIIIを含む方法。
- 請求項2記載の方法であって、前記封入産物が更にFXIIIaを含む方法。
- 請求項2記載の方法であって、前記インテグリン結合パートナーが、認識配列argine-glycine-asparate(RGD)を含有する方法。
- 請求項1記載の方法であって、前記インテグリン結合パートナーが、前記調製細胞と結合する方法。
- 請求項10記載の方法であって、前記インテグリン結合パートナーが、前記調製細胞と封入前に結合する方法。
- 請求項1記載の方法であって、前記インテグリン結合パートナーが、前記調製細胞と結合しない方法。
- 請求項1記載の方法であって、前記インテグリン結合パートナーが、前記細胞封入媒体中に存在する方法。
- 請求項1記載の方法であって、前記インテグリン結合パートナーが、前記細胞封入媒体の表面に存在する方法。
- 請求項1記載の方法であって、前記細胞封入媒体が、フィブリンを有するアガロース、フィブロネクチンを有するアグラロース、フィブロネクチンおよびフィブリノーゲンの組み合わせ、植物由来のガム、アルカリ金属アルギナートおよびアガロース、セルロース及びその派生物、ゼラチン、キトサン、および細胞外マトリックス(ECM)成分からなる群から選択される方法。
- 請求項1記載の方法であって、前記細胞封入媒体が、前記細胞の生存と機能とに適合性の天然のポリマーである方法。
- 請求項1記載の方法であって、前記細胞封入媒体が、前記細胞の生存と機能とに適合性の合成ポリマーである方法。
- 請求項1記載の方法であって、多くの前記封入産物が、1つの調製細胞を封入ごとに含む方法。
- インビボで使用するための調製細胞を調製する方法であって、前記細胞をインビトロで細胞封入媒体に封入して、封入産物を形成することを含み、前記封入産物はインテグリン結合パートナーを含み、前記封入産物は1細胞を含有する方法。
- インビボで後に使用するために、保存または輸送される調製細胞を調製する方法であって、前記細胞をインビトロで細胞封入媒体に封入して、封入産物を形成することを含み、前記封入産物はインテグリン結合パートナーを含む方法。
- 請求項1記載の方法であって、前記細胞封入媒体が導入遺伝子を含有する方法。
- 請求項1記載の方法であって、前記調製細胞が導入遺伝子を含有する方法。
- 請求項22記載の方法であって、前記導入遺伝子を前記封入媒体に含ませることに引き続いて、前記導入遺伝子が前記細胞へと取込まれる方法。
- 請求項1記載の調製細胞の、それを必要とする患者へ投与する細胞療法のための使用。
- 請求項24記載の使用であって、前記投与が心臓間である使用。
- 請求項1記載の方法であって、前記封入産物が、前記封入産物に対し外部である宿主細胞に影響し得る外部因子を更に含む方法。
- 請求項26記載の方法であって、前記外部因子が、DCAM、ICAM、およびVCAMからなる群から選択される方法。
- 請求項1〜23もしくは26の何れか1項に記載の方法または請求項24もしくは25に記載の使用であって、前記細胞が、線維芽細胞、内皮細胞、平滑筋細胞、前駆/幹細胞(例えば、骨髄、脂肪、または末梢血からの)、真皮性線維芽細胞、EPC(内皮の前駆細胞)、または他の間充織幹細胞、髄ストローマ細胞(MSC)、および上皮細胞からなる群から選択される方法または使用。
- 請求項1〜23もしくは26の何れか1項に記載の方法または請求項24もしくは25に記載の使用であって、前記細胞が、線維芽細胞および骨髄ストローマ細胞からなる群から選択される方法または使用。
- 哺乳類における、細胞に基づく療法のためのキットであって、効果的な量のインテグリン結合パートナーと、それを使用して細胞封入媒体を調製するための説明書とを含むキット。
- 請求項30記載のキットであって、前記説明書が、それを必要とする患者への投与を更に記載するキット。
- 請求項31記載のキットであって、前記説明書が、細胞に基づく遺伝子療法による投与を記載するキット。
- 請求項30記載のキットであって、封入媒体を更に含むキット。
- 請求項32記載のキットであって、前記説明書が、生存可能な、トランスフェクトされた哺乳類細胞を用いた投与を記載し、前記トランスフェクトされた哺乳類細胞が少なくとも1つの発現可能なアポトーシス阻害因子をコード化している導入遺伝子を含有しているキット。
- 請求項34記載のキットであって、前記哺乳類細胞が、真皮性線維芽細胞、平滑筋細胞、前駆細胞、内皮の前駆細胞、上皮性の前駆細胞、平滑筋前駆細胞、幹細胞、および内皮細胞からなる群から選択されるキット。
- 請求項30〜35の何れか1項に記載のキットであって、前記インテグリン結合パートナーは、コラーゲン、フィブロネクチン、フィブリノーゲン、ラミニン、トロンボスポンジン、ビトロネクチン、X因子、C3bi、Ig様細胞接着分子(ICAM-1、2、3)、1型コラーゲン、血管性の細胞接着分子(VCAM-1)、粘膜のアドレッシン細胞接着分子-1(MAdCAM-1)、ビトロネクチン、コラーゲン、ラミニン、LFA、Mac-1、テネイシン、ヴォン・ヴィレブランド因子、トロンボスポンジン、X因子、FXIII、FXIIIa、Arg-Gly-Asp、Leu-Asp-Val、His-His-Leu-Gly-Gly-Ala-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val、配列Arg-Gly-Asp、Leu-Asp-Valを含んでいるインテグリン結合パートナー、および配列His-His-Leu-Gly-Gly-Ala-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Valを含んでいるインテグリン結合パートナーからなる群から選択されるキット。
- 請求項30〜36の何れか1項に記載のキットであって、前記細胞封入媒体が、フィブリンを有するアガロース、フィブロネクチンを有するアグラロース、フィブロネクチンおよびフィブリノーゲンの組み合わせ、植物由来のガム、アルカリ金属アルギナートおよびアガロース、セルロース及びその派生物、ゼラチン、キトサン、および細胞外マトリックス(ECM)成分からなる群から選択されるキット。
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