FI110322B

FI110322B - Menetelmä valmistaa terapeuttisesti aktiivista tioalkyylitiokefalosporiinijohdannaista

Info

Publication number: FI110322B
Application number: FI913458A
Authority: FI
Inventors: Tadatoshi Kubota; Masaharu Kume
Original assignee: Shionogi & Co
Priority date: 1990-07-19
Filing date: 1991-07-18
Publication date: 2002-12-31
Also published as: RU2071963C1; ATE181066T1; HU222727B1; CN1058595A; EP0594263B1; IL98745A; PT98362B; NO912821D0; ES2062688T3; PH31091A; CA2047347A1; PT98362A; FI913458A0; ATE110081T1; NO178544B; CA2047347C; FI913458L; NZ238838A; IE912321A1; US5352792A

Description

1 110322

Menetelmä valmistaa terapeuttisesti aktiivista tioalkyylitiokefalosporiinijohdannaista Förfarande för framställning av terapeutiskt aktivt tioalkyltiokefalosporinderivat Tämä keksintö koskee menetelmää valmistaa uusia kefalosporiinijohdannaisia, jolla 5 erityisesti on bakteeri-infektioiden vastainen vaikutus.

Ymmärretään, että kefalosporiinit ovat käyttökelpoisia antibiootteja, joilla on laaja antibakteriaalinen kirjo, ja tähän mennessä on valmistettu ja aikaansaatu erilaisia kefalosporiinijohdannaisia. Vähäisen sensitiivisyyden tai resistenssin omaavien bak-10 teerien kehittymisestä johtuen tarvitaan jatkuvasti parannettuja käyttökelpoisia an-ti bi ootti a i n eitä.

Keksijät olivat tehneet tutkimuksia aikomuksena kehittää uusia ja käyttökelpoisia antibiootteja, ja he syntetisoivat useita kefalosporiinijohdannaisia, joissa on kefee-15 miytimen 3-asemassa tioalkyylitiosivuketju, joka on substituoitu heterosyklisellä ryhmällä, ja arvioivat näiden antibakteriaaliset aktiivisuudet. Nyt keksijät ovat keksineet, että määrätyllä tällaisten yhdisteiden luokalla on voimakasta bakterisidistä tai antibakteriaalista aktiivisuutta, ja niillä havaitaan oraalisesti annettaessa korkea taso veressä.

:.V: 20 :.: ·' Siten keksinnöllä saadaan terapeuttisesti aktiivista tioalkyylitiokefalosporiinijohdan-

.. : ’ naista, jolla on kaava II

Y

i X

asyyli-NH—- s' γ

: ’·' 25 I

O s s

COOH

:... 30 jossa :"' asyyli on D-mandeloyyli tai CrC8-alkanoyyli, joka mahdollisesti on substituoitu yh- •: · ·: dellä tai useammalla seuraavista substituenteista . j · ’ a) fenyyli 2 110322 b) F N_/NH-qCHJj, /N=l—NH-C-OC(CH3)3, /

h_T

5 N _s nh2 “ AJS ; 10 c) =N-OR3, jossa R3 on H, syklopentyyli, trityyli, CrQ-alkyyli, CrC4-alkenyyli, -(CHm)nC(=0)0CH(C6H5)2, -(CHm)nCHO, -C(CH3)2C(=0)0C(CH3)3 tai -C(CH3)2CHO, jossa m ja n on 1 tai 2, ja d) -S-CHX2, jossa X = halogeeni, glykosyyli subsituoituna ryhmällä 15 .N-1 NH-C-OC(CH3)3, ^—s o . . 20 tai glysyyli substituoituna 1) fenyylillä ja : · ' 2) -NH-C(=0)0C(CH3)3:1la tai NH2:lla; .. i: Het on triatsolyyli, joka voi olla substituoitu trityylilla tai Ci-Q-alkyylilla; pyridyyli; . tetratsolyyli, joka mahdollisesti on substituoitu Ci-Q-alkyylilla; tai tiadiatsolyyli, joka mahdollisesti on substituoitu Ci-C4-alkyylilla, 25 R1 on yksinkertainen sidos; R2 on suoraketjuinen tai haarautnut CrQ-alkyleeni; X on rikkiatomi tai sulfoksidiryhmä; ja Y on vetyatomi tai metoksiryhmä, ' · ' tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola.

30 :'' ’ Alla määritellään seuraavat käsitteet tässä kuvatun ja vaaditun keksinnön tarkoituk- siin.

110322 3 116222

Asyylin esimerkkejä ovat alkanoyyli, aroyyli tai homo- tai heterosyklinen aralkano-yyli. Asyyliryhmä voi olla substituoitu sopivalla substituentilla/substituenteilla, ja funktionaaliset ryhmät voivat olla suojattuja kefalosporiinialalla yleensä käytetyillä suojaryhmillä. Edullisia asyyliryhmiä ovat Ci-C8-alkanoyyli, C7-Cn-aroyyli, ja 5- tai 5 6-jäseninen homo- tai heterosyklinen aralkanoyyli, joista kussakin voi mahdollisesti olla substituentti. Esimerkkejä mahdollisista substituenteista ovat mm. Ci-C5-alkyyli, C2-C5-karboksialkyyli, alkenyyli, sykloalkenyyli, amino, imino, hydroksi-imino, Ci-C5-alkyylioksi-imino, Ci-C5-alkenyylioksi-imino, C3-C5-sykloalkyylioksi-imino, karboksi-Ci-C5-aIkyyIitiö, hydroksi, okso, Ci-C5-alkoksi, halogeeni ja vastaavat. Edullisia sub-10 stituentteja ovat halogeenialkyylitio, alkoksi-imino, syklinen alkoksi-imino, alkenyyli-oksi-imino, amino, suojattu amino, hydroksi, okso, hydroksi-imino, suojattu hydroksi-imino, karboksialkoksi-imino, karboksialkenyylioksi-imino ja vastaavat.

Käsite "suoraketjuinen tai haaroittunut Ci-Q-alkyleeni" tarkoittaa metyleeniä, ety-15 leeniä, metyylimetyleeniä ja vastaavia.

Vaikka kaikki edellä määritellyn kaavan I mukaisista soveltuvat keksinnön tarkoitukseen, on määrättyjä edullisia yhdisteitä. Siten erityisen edullisia ovat yhdisteet, joissa R1 on yksinkertainen sidos, R2 on metyleeni, Het on 2-pyridyyli, 1,2,3- tai 1,2,4-::· 20 triatsolyyli, 1,2,3- tai 1,3,4-tiadiatsolyyli, jotka on mahdollisesti kaikki substituoitu metyylillä; X on rikki; Y on vety; ja asyyli on (Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-hydroksi-iminoasetyyli.

Funktionaaliset ryhmät kuten karboksyyli-, amino- ja hydroksyyliryhmät voivat olla :: 25 keksinnön tarkoituksiin tavanomaisesti suojattuja sopivilla suojaryhmillä, joita taval lisesti käytetään kefalosporiiniantibioottien alalla.

Karboksisuojaryhmät valitaan tekniikan tasolla käytetyistä, ja ne toimivat suojaamal-la karboksyyliryhmää kun molekyylin muissa kohdissa suoritetaan reaktiota. Tällaiset 30 ryhmät sisältävät yleensä alle noin 19 hiiliatomia ja sitoutuvat karboksyyliryhmään reversiibelisti molekyylin muihin osiin vaikuttamatta. Tyypillisiä esimerkkejä ovat *:·.’ mm. mahdollisesti substituoitu Ci-C8-alkyyli, esimerkiksi metyyli, metoksimetyyli, , · etyyli, etoksimetyyli, jodimetyyli, propyyli, isopropyyli, butyyli, isobutyyli, etoksietyy- . . li, metyylitioetyyli, metaanisulfonyylietyyli, trikloorietyyli, t-butyyli ja vastaavat; 4 110322 mahdollisesti substituoitu C3-C8-alkenyyli, esimerkiksi propenyyli, allyyli, isoprenyyli, heksenyyli, fenyylipropenyyli, dimetyyliheksenyyli ja vastaavat; mahdollisesti substituoitu C7-Ci9-aralkyyli, esimerkiksi bentsyyli, metyylibentsyyli, dimetyylibentsyyli, metoksibentsyyli, etoksibentsyyli, nitrobentsyyli, aminobentsyyli, difenyylimetyyli, fe-5 nyylietyyli, trityyli, di-t-butyylihydroksibentsyyli, ftalidyyli, fenasyyli ja vastaavat; mahdollisesti substituoitu C6-C12-aryyli, esimerkiksi fenyyli, toluyyli di-isopropyyli-fenyyli, ksylyyli, trikloorifenyyIi, pentakloorifenyyli, indanyyli ja vastaavat; mahdollisesti substituoitu CrC^-amino, joka on esimerkiksi esteri asetonioksiimin, aseto-fenonioksiimin, asetoaldoksiimin, N-hydroksisukkinimidin, N-hydroksiftalimidin kansio sa tai vastaava; mahdollisesti substituoitu C3-Ci2-hiilivetyä sisältävä silyyli, esimerkiksi trimetyylisilyyli, dimetyylimetoksisilyyli, t-butyylidimetyylisilyyli ja vastaavat; mahdollisesti substituoitu C3-Ci2-hiilivetyä sisältävä stannyyli, esimerkiksi trimetyylis-tannyyli ja vastaavat. Toisia karboksisuojaryhmiä ovat farmaseuttisesti aktiivista esteriä muodostavat ryhmät. Esimerkkejä tällaisista ryhmistä ovat mm. l-(happi-15 substituoitu)-C2-Ci5-alkyyliryhmät, esimerkiksi suoraketjuinen, haaroittunut, rengastettu, tai osittain rengastettu alkanoyylioksialkyyli, kuten asetoksimetyyli, asetoksi-etyyli, propionyylioksimetyyli, pivaloyylioksimetyyli, pivaloyylioksietyyli, sykloheksaa-niasetoksietyyli, sykloheksaanikarbonyylioksisykloheksyylimetyyli ja vastaavat; C3-Ci5-alkoksikarbonyylioksialkyyli kuten etoksikarbonyylioksietyyli, isopropoksikar-::. 20 bo nyy I i oksi propyy I i, isopropoksikarbonyylioksietyyli, t-butoksikarbonyylioksietyyli, :.: isopentyylioksikarbonyylioksipropyyli, sykloheksyylioksikarbonyylioksietyyli, syklo- ..!: * heksyylimetoksikarbonyylioksietyyli, bomyylioksikarbonyylioksi-isopropyyli ja vastaa- : '. vat; C2-C8-aIkoksiaIkyyli, kuten metoksimetyyli, metoksietyyli ja vastaavat; C2-C8-2- oksasykloalkyylit, kuten tetrahydropyranyyli, tetrahydrofuranyyli ja vastaavat; sub-:: 25 stituoidut C8-Ci2-a ra I kyy I it, esimerkiksi fenasyyli, ftalidyyli ja vastaavat; Q-Ciraryyli, esimerkiksi fenyyli, ksylyyli, indanyyli ja vastaavat; C2-Ci2-alkenyyli, esimerkiksi allyyli, isoprenyyli, 2-okso-l,3-dioksolyl-4-yylimetyyli ja vastaavat. Edellä olevien kohdalla, karboksyyliryhmän suojaamiseen reaktioiden aikana käytetty suojaryhmä pois-:‘ tetaan tavallisesti reaktion viimeisessä vaiheessa, ja sen vuoksi sen rakenne ei ole :.. 30 oleellinen. Siten, kuten ammattimies voi helposti ymmärtää, suojaryhmät voidaan valita erilaisista ekvivalenteista ryhmistä, mukaan lukien amidit, happoanhydridit •: · · ’ jotka on muodostettu hiilihapon tai karboksyylihappojen kanssa ja vastaavat, mikäli . ·: · tarkoitettu karboksyyliryhmä vain on suojattu kunnolla.

i 110322 5

Hydroksisuojaryhmä on Ci-Ci0-suojaryhmä, joka on tavanomainen kefalosporiinialal-la, ja lisättävissä ja poistettavissa vaikuttamatta molekyylin muuhun osaan haitallisesti. Tyypillisiä esimerkkejä ryhmistä ovat mm. helposti poistettavissa oleva esteriä muodostava ryhmä, esimerkiksi Ci-Ci0-karboksyyliasyyli (alkanoyyli kuten formyyli, 5 asetyyli, propionyyli, pivaloyyli ja C7-Ci0-aroyyli kuten bentsoyyli, toluoyyli, ksyloyy-li), Ci-C10-karboniasyyli (alkoksikarbonyyli, trikloorialkoksikarbonyyli, bentsyylioksi-karbonyyli, p-nitrobentsyylioksikarbonyyli, p-metoksibentsyylioksikarbonyyli, o-nitro-bentsyylioksikarbonyyli, allyylioksikarbonyyli); helposti poistettavissa oleva C2-C,-eetteriä muodostava ryhmä (tetrahydropyranyyli, tetrahydrofuranyyli, metoksime-10 tyyli, metoksietoksimetyyli ja vastaavat), C3-Ci8-vetykarbyylisilyyli (trimetyylisilyyli, trietyylisilyyli, dimetyylifenyylisilyyli, difenyyli-t-butyylisilyyli, dimetyyli-t-pentyylisilyyli ja vastaavat), ja C7-Ci9-reaktiivinen aralkyyli (trifenyylimetyyli ja vastaavat).

Amino-suojaryhmä on CrCi0-suojaryhmä, joka on tavanomainen kefalosporiinialalla, 15 ja on lisättävissä ja poistettavissa vaikuttamatta molekyylin muuhun osaan haitallisesti. Tyypillisiä esimerkkejä ryhmästä ovat mm. CrC8-alkyyli (t-butyyli, metoksime-tyyli, metoksietoksimetyyli, trikloorietyyli, tetrahydropyranyyli ja vastaavat), C7-Ci9-aralkyyli (bentsyyli, metyylibentsyyli, bentshydryyli, trityyli, metoksibentsyyli, nitro-bentsyyli ja vastaavat), Ci-C8-a I kyy I iti o, C6-C12-aryylitio (nitrofenyylitio ja vastaavat), v. 20 C5-C8-sykloalkylideeni, Ci-C8-asyyli [esimerkiksi CrC8-alkanoyyli (formyyli, asetyyli, klooriasetyyli, trifluoriasetyyli ja vastaavat), C2-Ci2-alkoksikarbonyyli (jossa on alkyy-liosana metyyli, etyyli, propyyli, syklopropyylimetyyli, syklopropyylietyyli, isopropyyli, : *. butyyli, isobutyyli, pentyyli, heksyyli, trikloorietyyli, pyridyylimetyyli, syklopentyyli, sykloheksyyli ja vastaavat), C8-Ci9-aralkoksikarbonyyli (jossa on aralkyyliosana bent-:: 25 syyli, bentshydryyli, nitrobentsyyli ja vastaavat), C7-C15-aroyyli (bentsoyyli, nitro- bentsoyyli ja vastaavat), kaksiemäksisen hapon C3-C10 -asyyli (sukkinyyli, ftaloyyli ja vastaavat), kloorisulfonyyli, C0-Ci0-fosforiasyyli (dialkoksifosforyyli, dikloorifosforyyli ja vastaavat)], C3-C9-trialkyylisilyyli, C3-C9-alkoksidialkyylisilyyli tai vastaavat, ja :. · Ci-C8-alkylideeni tai C7-Ci4-aralkylideeni (bentsylideeni, metyylibentsylideeni, nitro- :. 30 bentsylideeni ja vastaavat). Myös happoadditiosuola on aminosuojattu yhdiste. Ami- noon voi olla kiinnittynyt 1 tai 2 edellä olevista suojaryhmistä.

.·:· Keksinnön mukaan saatu kaavan I mukainen kefalosporiinijohdannainen voidaan I . · * · valmistaa käyttämällä mitä hyvänsä tekniikan tasolla käytetyistä tavanomaisista me- 6 110322 netelmistä, jotka käsittävät yleensä sivuketjuhapon, 3-substituentin, kefeemiytimen valmistamisen, 7-asyylisivuketjun ja 3-substituentin lisäämisen, suojaryhmänpoiston ja vastaavat. Kaavan I mukainen yhdiste voidaan kuitenkin valmistaa mukavasti millä hyvänsä seuraavista keksinnön mukaisista menetelmistä 1, 2 ja 3.

5

Menetelmä 1

Ensimmäisessä menetelmässä kaavan I mukainen kefalosporiinijohdannainen voidaan valmistaa lisäämällä asyyliryhmä kaavan III mukaiseen amiiniin: 10 h2n---

COOR

15

III

jossa Het, X, Y, R1 ja R2 on edellä määritelty ja R on vety tai karboksisuojaryhmä, jossa menetelmässä kaavan III mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan hapon kanssa, jolla on kaava: V; 20

• ·: asyyli-OH

> jossa asyyli on mahdollisesti suojattu asyyli, jolloin saadaan kaavan II mukainen yhdiste:

25 Y

LJ i X

asyyli-NH—— s' y—s'R'-u.t o s s

COOH

::i’· 30 ':' jossa asyyli, Het, X, Y, R, R1 ja R2 on edellä määritelty, ja poistetaan suojaryhmä . : kaavan II mukaisesta yhdisteestä. Kaavan II mukaiset sulfoksidit pelkistetään edulli- , “ · sesti ennen suojaryhmän poistamista.

7 110322

Menetelmä 2

Toisessa menetelmässä, kaavan I mukainen kefalosporiinijohdannainen voidaan valmistaa saattamalla kaavan IV mukainen yhdiste: 5 * asyyli-NH——.

J-N

o oso2r3

COOR

10 IV

jossa asyyli on mahdollisesti suojattu asyyli, R3 on alkyyli, ja R, X ja Y on edellä määritelty, reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on kaava:

AcSR^Het 15 jossa Ac on asyyli, ja Het, R1 ja R2 on edellä määritelty, jolloin saadaan kaavan II mukainen yhdiste, ja poistetaan suojaryhmä kaavan II mukaisesta yhdisteestä. Kuten edellä mainittiin, kaavan II mukaiset sulfoksidiyhdisteet pelkistetään edullisesti ennen suojaryhmänpoistoa.

0! 20

Menetelmä 3 : '. Kolmannessa menetelmässä kaavan I mukainen kefalosporiinijohdannainen voidaan valmistaa saattamalla kaavan V mukainen yhdiste: ’’ 25 y asyyli-NH------

O SM

1, ’ * COOR

30 V

: ’ ‘ ‘ jossa asyyli on mahdollisesti suojattu asyyli, R, X ja Y ovat edellä määriteltyjä ja M

: · · on raskasmetalli, reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on kaava:

Hal-R^Het 8 110322 jossa Hal on halogeeniatomi, Het, R1 ja R1 on edellä määritelty, jolloin saadaan kaavan II mukainen yhdiste, ja suoritetaan kaavan II mukaisella yhdisteellä suojaryh-mänpoisto. Kaavan II mukaiset sulfoksidiyhdisteet pelkistetään ennen suojaryhmän-poistoa.

5

Mentelmä 4

Poistetaan suojaus kaavan II mukaisesta yhdisteestä, jossa asyyli ja/tai Het on suojattu amino, hydroksi tai karboksi ja/tai R on karboksisuojaryhmä, tavanomaisella 10 tavalla, jonka jälkeen haluttaessa saatu kaavan I mukainen yhdiste, jossa X on sulf-oksidiryhmä, pelkistetään pelkistimellä, jolloin saadaan kaavan I mukainen ryhmä, jossa X on rikkiatomi, ja/tai saatu kaavan I mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan emäksen kanssa, jolloin saadaan kaavan I mukaisen yhdisteen suola, tai saatu kaavan I mukaisen yhdisteen suola käsitellään hapon kanssa.

15

Kaikki edellä olevia menetelmiä varten tarvittavat lähtöaineet, ts., kefeemiydin, 7-sivuketjuhappo ja 3-substituentti, valmistetaan esimerkiksi kohdassa valmistusmenetelmät kuvatuilla menetelmillä. Keksinnön ei kuitenkaan ole tarkoitettu rajoittavan lähtöaineyhdisteitä niihin, jotka on valmistettu tässä kuvatuilla menetelmillä, ::. 20 vaan kaavan I mukaisen yhdisteen saamiseen voidaan käyttää mitä hyvänsä sa- » » manarvoisia yhdisteitä, jotka on valmistettu tunnetuilla menetelmillä.

: ". Kunkin menetelmän pääpiirteet kuvataan alla. Menetelmän 1 lähtöainemateriaali, kaavan III mukainen 7-amiini ja happo voidaan valmistaa esimerkiksi menetelmillä, ‘: 25 jotka on kuvattu valmistusmenetelmässä 6, ja valmistusmenetelmissä 1 ja 2, vas taavasti.

Amidointi, jolla asyyliryhmä liitetään kefeemiytimen 7-asemaan, voidaan suorittaa :. · saattamalla karboksyylihappo tai sen reaktiivinen johdannainen reagoimaan 7-amii- :. 30 nin tai sen reaktiivisen johdannaisen kanssa. Amidointireaktio voidaan suorittaa tek- ; “ nilkan tasolla hyvin tunnetuissa reaktio-olosuhteissa. Siten amiini saatetaan reagoi maan hapon lievän ylimäärän kanssa sopivassa liuottimessa kondensointireagenssin ,···’ läsnä ollessa lämpötila-alueella noin -30 - 50°C, edullisesti noin -10 - 30°C noin 10 min -10 tunnin ajan, edullisesti noin 30 min - 2 tunnin ajan.

9 110322

Esimerkkejä kondensointireagensseista ovat mm. karbodi-imidi kuten Ν,Ν'-dietyyli-karbodi-imidi, Ν,Ν'-disykloheksyylikarbodi-imidi ja vastaavat; karbonyyliyhdiste kuten karbonyylidi-imidatsoli ja vastaavat; isoksatsoliniumsuola; asyyliaminoyhdiste kuten 2-etoksi-l-etoksikarbonyyli-l,2-dihydrokinoliini; halogenoitu fosforihappo; 5 sulfonyylihalogenidi; tai amidoitu entsyymi ja vastaavat.

Amiini saatetaan edullisesti reagoimaan 1 - 2 karboksyylihappomoolin kanssa 1 - 2 kondensointireagenssimoolin läsnä ollessa liuottimessa, joka ei sisällä aktiivista vetyä, kuten dikloorimetaanissa, kloroformissa, etyyliasetaatissa, asetonitriilissä tai 10 vastaavissa.

7-amiinin reaktiiviset johdannaiset ovat kefeemiyhdisteitä, joiden 7-aminoryhmä aktivoituu erilaisten ryhmien avulla, esimerkiksi silyyliryhmällä kuten trimetyylisilyyli, metoksidimetyylisilyyli, t-butyylidimetyylisilyyli ja vastaavat; stannyyliryhmällä kuten 15 trimetyylistannyyli ja vastaavat; alkyleeniryhmällä, jonka kautta aminoryhmä sitoutuu alkanaaliin, asetoniin, asetyyliasetoniin, asetoasetaattiesteriin, asetoasetoanili-diin, asetasetonitriiliin, syklopentaanidioniin, asetyylibutylolaktoniin ja vastaaviin enamiinin muodostamiseksi; alkylideeniryhmällä kuten 1-halogeenialkylideeni, 1-halogeeniaralkylideeni, 1-alkoksialkylideeni, 1-alkoksiaralkylideeni, 1-alkoksi-l-20 fenoksialkylideeni, alkylideeni, aralkylideeni ja vastaavat; hapolla kuten mineraali- • * ί. i happo, karboksyylihappo, sulfonihappo ja vastaavat, joiden kanssa aminoryhmä ..!: muodostaa suolan; asyylillä, joka on helposti poistettavissa, kuten alkanoyyli ja vas- : . taavat; tai muilla tällaiseen tarkoitukseen käyttökelpoisilla Ci-Cio-ryhmillä. Amiinin reaktiivisia johdannaisia ovat myös mm. yhdisteet, joissa on suojattu muita funktio- * » v 25 naalisia ryhmiä kuin 7-aminoryhmä.

Esimerkkejä karboksyylihapon (asyyli-OH) reaktiivisista johdannaisista ovat mm. symmetrinen - tai sekahappoanhydridi [sekahappoanhydridi mineraalihapon kanssa (fosforihappo, rikkihappo, hiilihappopuoliesteri ja vastaavat), orgaanisen hapon :. 30 kanssa (alkaanihappo, aralkaanihappo, sulfonihappo ja vastaavat), ja vastaavat];

t I

: “ ’ molekyylinsisäinen anhydridi (keteeni, isosyanaatti ja vastaavat); happohalogenidi ; · (sekahappoanhydridi vetyhalogenidin kanssa); happohalogenidi; aktiivinen esteri, , · - ’ esimerkiksi enoliesteri (vinyyliesteri, isopropenyyliesteri ja vastaavat), aryyliesteri (fenyyliesteri, halogeenifenyyliesteri, nitrofenyyliesteri ja vastaavat), heterosyklinen 110322 10 esteri (pyridyyliesteri, bentsotriatsolyyliesteri ja vastaavat), N-hydroksiyhdisteen esteri, diasyylihydroksyyliamiinin esteri (N-hydroksisukkinimidoyyliesteri, N-hydrok-siftalimidoyyliesteri ja vastaavat), tioliesteri (aralkyylitioliesteri, heterosyklinen tio-liesteri ja vastaavat); aktiivinen amidi (aromaattinen amidi, joka on muodostettu 5 imidatsolilla, triatsolilla, 2-etoksi-l,2-dihydrokinoliinilla tai vastaavilla, tai diasyyli-anilidi) ja vastaavat.

Edellä mainitut amiinin ja/tai karboksyylihapon reaktiiviset johdannaiset saavat reagoida happoa sieppaavien reagenssien läsnä ollessa, esimerkiksi epäorgaanisten 10 emästen kuten alkalimetallien tai maa-alkalimetallien oksidit, hydroksidit, karbonaatit, vetykarbonaatit; orgaanisten emästen kuten tertiäärinen amiini, aromaattinen amiini ja vastaavat; oksiraanien kuten alkyleenioksidi, aralkyleenioksidi ja vastaavat; pyridiniumsuolojen kuten tri pyri d i n i u m tri ats i i n i tri kl o ri d i ja vastaavat; adsorboivien aineiden kuten seliitti ja vastaavat. Amiini saatetaan edullisesti reagoimaan 15 karboksyylihapon (asyyli-OH) reaktiivisen johdannaisen 1 - 2 moolin kanssa ja happoa sieppaavan aineen 0 - 2 moolin kanssa inertissä liuottimessa, josta puuttuu aktiivinen vety. Entsymaattisen esterin ja happohalogenidin välinen reaktio etenee jopa vesipitoisessa liuottimessa.

Kun reaktio on edennyt loppuun, reaktioseos säädetään hapolla neutraaliin pH- v, 20 arvoon, uutetaan liuottimena ja konsentroidaan. Jäännös antaa esimerkiksi uudel-

leenkiteyttämällä liuottimesta tai pylväskromatografialla puhdistettuna kaavan II

..!; mukaisen suojatun tuotteen, josta sitten poistetaan suojaryhmä tavanomaisella ta- • * » 1 ', valla, jolloin saadaan lopullinen tuote, kaavan I mukainen kefalosporiinijohdannai- nen.

ν' 25

Menetelmän 2 lähtöaine, kaavan IV mukainen yhdiste, voidaan valmistaa esimerkiksi amidoimalla vastaavasta yhdisteestä, jossa on aminoryhmä 76-asemassa, käyttämällä tunnettuja menetelmiä, joita yleensä käytetään amidoinnille, kuten kuvataan valmistusmenetelmässä 7.

C 30 • *

Toinen lähtöaine, asyylitioalkyylitioyhdiste (Ac-Sf^SF^Het) voidaan valmistaa käsitte-

I » I

·;* lemällä vastaava heterosyklinen tioli natriumhydridillä lämpötilassa alueella noin . * ··* -30 - 30°C liuottimessa kuten dimetyyliformamidi ja vastaavat, jolloin saadaan aika-

' » I

110322 11 limetallimerkaptidi, joka sitten saatetaan reagoimaan halogeenimetyylitiolikarboksy-laatin kanssa, jolloin saadaan asyylitioalkyylitioyhdiste.

Vaihtoehtoisesti alkalimetalliheterosyklinen merkaptidi käsitellään esimerkiksi bromi-5 kloorimetaanilla, jolloin saadaan CIR^R^et, joka käsitellään tiolikarboksylaattisuo-lalla, jolloin saadaan asyylitiometyyliyhdiste AcSR2SR1Het.

Kaavan IV mukaisen yhdisteen ja asyylitioalkyylitioyhdisteen välinen reaktio suoritetaan edullisesti saattamalla kaavan IV mukainen yhdiste reagoimaan yhtä suu-10 ren/suuremman määrän, edullisesti 1-10 ekvivalentin, edullisemmin 1 - 3 ekvivalentin kanssa asetyyli- tai bentsoyylitiometyylitiojohdannaista sopivassa liuottimessa emäksen kuten natriummetoksidin läsnä ollessa lämpötila-alueella noin -90 - 50 °C, edullisesti noin -80 - -10 °C noin 5 min - noin 20 tunnin ajan, edullisesti noin 18 min - noin 7 tunnin ajan.

15

Kaikkia orgaanisia liuottimia voidaan käyttää sillä ehdolla, että ne eivät ole happamia. Esimerkkejä erityisen edullisista liuottimista ovat tetrahydrofuraani, dimetyyli-formamidi, asetonitriili, dimetyyliasetoamidi, heksametyylifosforamidi, dimetyylisulf-oksidi, metanoli, etanoli, propanoli ja vastaavat.

:.V: 20 : · Menetelmä 2 suoritetaan tehokkaasti myös käyttämällä alkalimetallitioalkyylitiojoh- dannaista, joka valmistetaan saattamalla asyylitioalkyylitioyhdiste reagoimaan alka-limetallialkoksidin kanssa.

' · ' 25 Reaktion edettyä loppuun reaktioseos säädetään neutraaliin pH-arvoon hapolla, joka on laimennettu vedellä, ja uutetaan sopivalla liuottimena. Esimerkkejä sopivista liuottimista ovat mm. etyyliasetaatti, dikloorimetaani ja vastaavat. Sitten uute kuivataan, konsentroidaan alennetussa paineessa, haluttaessa, ja jäännös puhdistetaan ' "· sopivasti esimerkiksi uuttamalla, pesemällä, uudelleenkiteyttämällä tai pylväskroma- ' · 30 tografialla silikageelillä. Liuottimia uudelleenkiteytystä varten ovat tolueeni, etyyli- : ’ ’' asetaatti, asetonitriili, dikloorimetaani, metanoli ja vastaavat. Sopivia eluentteja :' ·: kromatografiaa varten on tolueenin ja etyyliasetaatin seokset. Suojaryhmän poistolla . ·: ·. saadaan haluttu kaavan I mukainen kefalosporiinijohdannainen.

12 110322

Vaikka menetelmän 3 lähtöaine, kaavan V mukainen yhdiste, voi olla metallin tai orgaanisen emäksen kuten pyridiinin suola, se on edullisesti hopean suola. Metyyli-tiometyylihalogenidin halogeeniatomi voi olla kloori, bromi tai jodi, jolloin edullinen on jodi.

5

Kaavan V mukainen yhdiste voidaan valmistaa sopivasta lähtöaineesta, esimerkiksi edellä olevasta kaavan IV mukaisesta yhdisteestä, kuten alla kuvataan. Kaavan IV mukainen yhdiste, sulfoksidoinnin jälkeen, mikäli tarpeen, muutetaan 3-tioliksi, joka sitten saatetaan reagoimaan emäksen kanssa suolan saamiseksi, edullisesti hopea-10 suolan.

Sulfoksidointi suoritetaan saattamalla kaavan IV mukainen suojattu yhdiste reagoimaan sopivassa liuottimessa 1-2 moolin kanssa hapetusreagenssia, esimerkiksi vetyperoksidia, peretikkahappoa, m-klooriperbentsoehappoa ja vastaavia lämpö-15 tilassa alueella noin -40 -10 °C noin 10 min - 5 tunnin ajan. Sitten reaktioseos käsitellään natriumtiosulfaatin vesiliuoksella, laimennetaan liuottimena, kuivataan ja konsentroidaan, jolloin saadaan raakatuote. Raakatuote puhdistetaan esimerkiksi pulväskromatografialla silikageelillä eluoiden dikloorimetaanilla, kloroformilla ja vastaavilla, mikäli tarpeen.

v': 20 • ·: 3-tioli valmistetaan 3-sulfonyylioksiyhdisteestä liuottamalla viimeksi mainittu sopi- • · ·; vaan liuottimeen, lisäämällä siihen natriumvetysulfidia, ja antamalla reagoida lämpö- ·’ · tilassa alueella noin -40 - 0 °C noin 30 - 60 min ajan. Seos säädetään neutraaliin pH-arvoon hapolla suolahappo, uutetaan sopivalla orgaanisella liuottimena kuten 25 etyyliasetaatti. Uute kuivataan ja konsentroidaan, jolloin saadaan tioli. Esimerkkejä sopivista liuottimista ovat dimetyyliformamidi, asetonitriili ja vastaavat.

3-tiolin hopeasuola valmistetaan saattamalla mainittu tioli kontaktiin hopeanitraatin ‘ · ‘ pienen ylimäärän kanssa sopivassa liuottimessa lämpötilassa noin -30 - 20 °C noin 30 10 -30 min ajan. Esimerkkejä liuottimista ovat tetrahydrofuraani, dikloorimetaani ja :vastaavat. Hopeasuola erotetaan esimerkiksi laimentamalla reaktioseoksen vedellä, ·:··.’ uuttamalla laimennetun liuoksen dikloorimetaanilla, ja konsentroimalla uutteen.

13 1 10322

Halogenoitu alkyylitiojohdannainen, jolla on kaava: Hal-I^SF^Het, voidaan valmistaa kloorimetyloimalla heterosyklinen tioli bromikloorimetaanilla liuottimessa kuten di-metyyliformamidi emäksen, esimerkiksi natriumhydridin läsnä ollessa. Sitten tulokseksi saatu kloorimetyloitu tuote alistetaan, tarvittaessa, jodikorvausreaktiolle nat-5 riumjodidilla.

Kaavan V mukaisen yhdisteen ja 2-halogenoidun metyylitiojohdannaisen välinen reaktio suoritetaan sopivassa liuottimessa lämpötilassa alueella noin 0 - 30 °C noin 2-20 tunnin ajan. Esimerkkejä sopivista liuottimista ovat heksametyylifosforamidi, 10 dimetyyliformamidi ja vastaavat. Tuote uutetaan orgaanisella liuottimena kuten etyyliasetaatti ja vastaavat, ja uute konsentroidaan. Jäännös puhdistetaan sitten esimerkiksi pylväskromatografialla silikageelillä.

Kaavan II mukaisen sulfoksidin pelkistys suoritetaan käyttämällä mitä hyvänsä pel-15 kistysreagensseista, joita tavallisesti käytetään kefalosporiinialalla, kuten fosforitri-kloridi, tina(2)kloridi ja vastaavat.

Menetelmän 4 mukaan kaavan II mukaisesta tuotteesta poistetaan suojaryhmä, jolloin saadaan keksinnön kaavan I mukainen kefalosporiinijohdannainen. Suoja-:. , 20 ryhmänpolsto suoritetaan tavanomaisilla menetelmillä.

..!Karboksisuojaryhmien suojaryhmänpoisto voidaan suorittaa inertissä liuottimessa : ".· tavanomaista menetelmää käyttämällä. Esimerkiksi kun karboksisuojaryhmä on re aktiivinen esteriä muodostava ryhmä, se voidaan poistaa käsittelemällä suojattu 25 tuote inertissä liuottimessa hapolla, emäksellä, puskuriliuoksella, ioninvaihtohartsilla ja vastaavilla. Kun karboksisuojaryhmä on riittämättömän reaktiivinen esteriä muodostava ryhmä, se voidaan aktivoida ennen suojaryhmänpoistoa tunnetuilla menetelmillä. Aktivointi suoritetaan esterin tyypistä riippuen seuraavasti: trikloorietyylies-'.*** tereitä käsitellään metallilla ja hapolla; p-nitrobentsyyliestereitä käsitellään hydro- 30 genoimalla; ditionihapon suoloilla; tai metallilla ja hapolla; fenasyyliestereitä käsitel-:' * ’ lään säteilyttämällä valolla. Karboksisuojaryhmät, jotka ovat aralkyylejä, voidaan *:··.’ poistaa katalyyttisellä hydrogenoinnilla palladiumilla, platinalla, nikkelillä ja vastaavil- . : ’ la. Karboksisuojaryhmät, jotka ovat tertiäärisiä alkyylejä, syklopropyylimetyyli, 2-al- . · · ·. kenyylejä, aralkyylejä tai sulfonyylietyyli, voidaan poistaa käsittelemällä tuote hapol- 14 110322 la kationinsieppausaineen kuten anisolin, bentseenitiolin ja vastaavien läsnä ollessa, vaadittaessa. Esimerkkejä hapoista ovat mm. mineraalihapot; Lewis-hapot kuten alumiinikloridi, tina(4)kloridi, titaniumtetrakloridi ja vastaavat; sulfonihapot kuten bentseenisulfonihappo, metaanisulfonihappo, trifluorimetaanisulfonihappo ja vastaa-5 vat; vahvat karboksyylihapot kuten trifluorietikkahappo ja vastaavat. Kun karboksi-suojaryhmä on 2-alkenyyli, se voidaan poistaa käsittelemällä tuote triaryylifosfiini/-palladium-kelaattiyhdisteillä. Kun karboksisuojaryhmä on fenasyyli, 2-alkenyyli, hyd-roksiaralkyyli tai vastaava, se voidaan poistaa käsittelemällä tuote alkalilla tai nuk-leofiilisellä reagenssilla. Kuten ammattimies voi ymmärtää, suojaryhmän poistoon 10 käytetään myös muita samanarvoisia menetelmiä.

Suojatusta hydroksista voidaan poistaa suojaryhmä tavanomaisesti esimerkiksi voimakkaan karboksyylihapon, Lewis-hapon (esimerkiksi alumiinikloridi, bis(alkyylistan-nyylijoksidi) ja vastaavien vaikutuksella, vaadittaessa kationinsieppausreagenssin 15 läsnä ollessa eetterisidoksen katkaisemiseksi, hapon tai emäksen vaikutuksella este-riryhmän hydrolysoimiseksi, ja vastaavilla. Tämä reaktio suoritetaan tavallisesti liuot-timessa -10 - 50 °C:ssa 30 min -10 tunnin ajan, jolloin saadaan kohteena oleva hydroksiyhdiste.

V, 20 Suojatusta aminosta voidaan poistaa suojaryhmä tavanomaisesti esimerkiksi seu- raavaita tavalla: ..! ·' a) Alkoksikarbonyyli (t-butoksikarbonyyli ja vastaava), tai vastaava aminosuojaryh- : mä: voimakkaan hapon (trifluorietikkahappo, trifluorimetaanisulfonihappo ja vastaa vat), Lewis-hapon (alumiinikloridi, tina(4)kloridi, titaanikloridi, sinkkikloridi ja vastaa-ν’ 25 vat), ja muiden happojen vaikutuksella, vaadittaessa kationinsieppausreagenssin (anisoli, bentseenitioli ja vastaavat) läsnä ollessa.

b) Aralkoksikarbonyyli (karbobentsoksi, metyylikarbobentsoksi, difenyylimetoksikar-:· bonyyli ja vastaavat) tai vastaava amino-suojaryhmä: mainitun Lewis-hapon ja ka- v 30 tioninsieppausreagenssin vaikutuksella, tai vedyllä (katalyyttinen hydrogenointi pal- : ’" ladium- tai nikkelikatalysaattoria ja vastaavia käyttämällä).

. · · · * c) Alempi alkanoyyli (formyyli, asetyyli, klooriasetyyli ja vastaavat), Schiffin emästä muodostava ryhmä (kahdenarvoinen hiiliryhmä, esimerkiksi etylideeni, propylideeni, 110322 15 bentsylideeni, substituoitu bentsylideeni ja vastaavat), aralkyyli (trityyli, substituoitu trityyli ja vastaavat), aryylitio (fenyylisulfenyyli ja vastaavat), tetrahydropyranyyli, silyyli tai stannyyli (trimetyylistannyyli, trimetyylisilyyli ja vastaavat), tai vastaavat: hapon (suolahappo, rikkihappo, metaanisulfonihappo, ja vastaavat) tai vastaavien 5 vaikutuksella.

d) Muut: kullekin suojaryhmälle spesifiset meneetlmät (esimerkiksi tiourea halo-geeniasetyylille tai N-alkyyliditiokarbamaatille; hydratsiini kaksiemäksiselle happo-asyylille; fosforipentakloridi ja alkanoli amidille; ja vastaavat).

10

Edellä olevat ja samanlaisia suojaryhmänpoistoja kuvataan esimerkiksi teoksissa J.F.W. McOmie, toimittaja, "Protective Groups in Organic Chemistry" s. 183 (1973) PLEUM Press, N.Y.; S. Patai, toimittaja, "The Chemistry of Functional Groups" (1969). Interscience Pubi., John Wiley & Sons Ltd. Lontoo; Flynn, toimittaja, 15 "Cephalosporins and Penicillins" Academic Press, N.Y. (1972), ja vastaavissa.

Keksinnön tuloksena saatu kaavan I mukainen vapaa happo muutetaan, haluttaessa, farmaseuttisesti hyväksyttäviksi suoloiksi alla kuvatuilla tavanomaisilla menetelmillä. Tällaisia suoloja voidaan muodostaa vastaavalla emäksellä, jota käytetään v, 20 kefalosporiiniantibioottien alalla lääketieteelliseen tarkoitukseen, esimerkiksi, kevyt- :.: metallisuolat kuten litium-, natrium-, kalium-, magnesium-, kalsium- tai alumiinisuo- la, jotka antavat fysiologisesti hyväksyttäviä ioneja. Muita edullisia suoloja ovat sel-: ‘. laiset, jotka on muodostettu Ci-Ci2-alkyyliammoniumilla kuten trimetyyliammoniu- milla, trietyyliammoniumilla, metyylimorfoliniumilla ja vastaavilla; tai Cr-Cg-aromaat-25 tiset emäkset kuten pyridinium, kollidinium, pikolinium, kinolinium, dimetyylianilini-um ja vastaavat. Lisäksi kaavan I mukainen kefalosporiinijohdannainen voidaan suojata millä hyvänsä edellä mainituista C2-Ci5-farmaseuttisesti aktiivista esteriä muodostavista ryhmistä jotta saataisiin estereitä, joilla on bakterisidisiä aktiivisuuksia :* oraalisessa ja parenteraalisessa annossa, erityisesti oraalisessa annossa.

C 30 : ’ ’ ’ Kaavan I mukaisen vapaan hapon karboksylaattisuoloja voidaan saada tavanomai- : · ·. sella tavalla saattamalla kaavan I mukainen happo reagoimaan emäksen tai emäk- sen heikon karboksyylihapposuolan kanssa. Kaavan I mukainen happo esimerkiksi , · · ·, neutralisoidaan emäksellä (kevytmetallin hydroksidi, karbonaatti tai bikarbonaatti), 110322 16 tai alistetaan vaihtohajotukselle alemman karboksyylihapon suolan kanssa (natrium-asetaatti, natriumlaktaatti, natrium-2-etyyliheksanoaatti ja vastaavat). Tulokseksi saatu suola voidaan eristää erottamalla ulos laimentamalla reaktioseoksen sopivalla liuottimena, johon suola liukenee vaivoin tai niukasti, tai lyofilisoimalla.

5

Reaktio etenee yleensä loppuun noin 1 - 10 min sisällä lämpötilassa alle noin 50 °C.

Kun sivureaktioita ei havaita, reaktion voidaan antaa jatkua lisäajanjakson.

Kaavan I mukaisen yhdisteen karboksylaattisuolat antavat hapolla käsiteltäessä kaa-10 van I mukaisen yhdisteen. Niinpä tämä keksintö aikaansaa edelleen menetelmän kaavan I mukaisen yhdisteen tuottamiseksi käsittelemällä kaavan I mukaisen yhdisteen suolaa hapolla.

Kun kaavan I mukaisessa yhdisteessä on emäksinen ryhmä kuten amino, se voidaan 15 saattaa reagoimaan hapon kanssa, esimerkiksi suolahapon tai etikkahapon, jolloin saadaan edellä mainittu happoadditiosuola kefalosporiinialalle tavanomaisella tavalla käsittelemällä esimerkiksi kaavan I mukaista yhdistettä noin 1 - 2 moolilla happoa noin 0 - 50 °C:ssa noin 10 - 90 min ajan.

v, 20 Edellä mainittuja reaktioita suoritetaan yleensä lämpötilassa alueella noin -80 - !.: 100 °C, edullisesti noin -40 - 50 °C ajan noin 10 min - 20 tuntia. Kun tuote on stabii- li, reaktioaikaa voidaan pidentää. Edellä mainittuihin reaktioihin sisällytetään mah-: dollisesti mitä hyvänsä tavanomaisista tekniikoista, kuten reaktioliuotin, vedettömät olosuhteet, inertin kaasun lisääminen, sekoittaminen ja vastaavia.

0' 25

Esimerkkejä reaktion liuottimista edellä mainituissa menetelmissä ovat hiilivedyt kuten pentaani, heksaani, oktaani, bentseeni, tolueeni, ksyleeni ja vastaavat; halo-genoidut hiilivedyt kuten dikloorimetaani, kloroformi, hiilitetrakloridi, dikloorietaani, *.’· trikloorietaani, klooribentseeni ja vastaavat; eetterit kuten dietyylieetteri, metyyli- .. 30 isobutyylieetteri, dioksaani, tetrahydrofuraani ja vastaavat; ketonit kuten asetoni, ; ”' metyylietyyliketoni, sykloheksanoni ja vastaavat; esterit kuten etyyliasetaatti, isobu- *:··. tyyliasetaatti, metyylibentsoaatti ja vastaavat; nitrohiilivedyt kuten nitrometaani, ,·.··’ nitrobentseeni ja vastaavat; nitriilit kuten asetonitriili, bentsonitriili ja vastaavat; amidit kuten formamidi, asetamidi, dimetyyliformamidi, dimetyyliasetamidi, heksa- 17 110322 metyylifosforamidi ia vastaavat; sulfoksidit kuten dimetyylisulfoksidi ja vastaavat; karboksyylihapot kuten muurahaishappo, etikkahappo, propionihappo ja vastaavat; orgaaniset emäkset kuten dietyyliamiini, trietyyliamiini, pyridiini, pikoliini, kollidiini, kinoliini ja vastaavat; alkoholit kuten metanoli, etanoli, propanoli, heksanoli, oktano-5 li, bentsyylialkoholi ja vastaavat; vesi; ja muut teollisten liuottimien sarjat, tai näiden seos.

Haluttu tuote eristetään reaktioseoksesta poistamalla kontaminoivat aineet kuten reagoimattomat lähtöaineet, sivutuotteet tai liuottimet käyttämällä tavanomaisia 10 menetelmiä kuten uutto, haihdutus, pesu, konsentrointi, saostus, suodatus, kuivaus ja vastaavat. Eristetty tuote alistetaan tavanomaiselle jatkokäsittelylle kuten adsorptio, eluointi, tislaus, saostus, uudelleenkiteytys, kromatografia ja vastaavat, tai mikä hyvänsä näiden yhdistelmä.

15 Vaikka edellä mainitut menetelmät 1, 2 ja 3 ovat edullisia kaavan I mukaisen yhdisteen valmistukseen, tämä keksintö ei ole rajoittunut näissä menetelmissä valmistettuihin yhdisteisiin, vaan kaikki kaavan I mukaiset yhdisteet, jotka on valmistettu millä hyvänsä muilla ammattimiehen hyvin tuntemilla menetelmillä, kuuluvat tämän keksinnön suoja-alaan.

:Λ 20 :.: Keksinnön mukainen yhdiste alistettiin in vitro- ja in vivo- kokeille jotta määritettäi- ..!: ’ siin voimakkuus antibioottina. In vitro-testissä kaavan I mukainen yhdiste osoittau- : '. tui hyvin tehokkaaksi gram-positiivisia bakteereja vastaan, esimerkiksi Staphylococ cus aureus ja Streptococcus pvoaenes. samoin kuin gram-negatiivisissa bakteereis-:: 25 sa, esimerkiksi Escherichia coli. Enterobacter cloacar. Pseudomonas aeruginosa.

Proteus vulgaris. Proteus mirabilis. Serratia marcescens. Haemophilus influenzae. Klebsiella pneumoniae ja Moroania moroanii.

Siksi tämä keksintö aikaansaa menetelmän bakteereja vastaan taistelemiseksi saat-:. 30 tamalla bakteerit kontaktiin kaavan I mukaisen yhdisteen tehokkaan määrän kanssa.

•: · ·. Kaavan I mukaisen yhdisteen in vivo-absorptionopeus oraalisen annon jälkeen mää- .;. ‘ ritettiin antamalla keksinnön mukaista yhdistettä hiirelle ja mittaamalla taso veressä.

110322 18

Tulokset osoittivat, että kaavan I mukainen yhdiste antaa korkean veritason oraalisella annolla, mikä on osoitus erinomaisesta absorptionopeudesta.

Niinpä kaavan I mukainen yhdiste on tehokas antibiootti oraalisella ja parenteraali-5 sella annolla ja käyttökelpoinen hoidettaessa infektioita, jotka aiheutuvat laajasta joukosta bakteereita, jotka ovat herkkiä kaavan I mukaista yhdistettä kohtaan.

Edelleen eräässä näkökannassa aikaansaadaan menetelmä bakteeri-infektioiden hoitoon tai kontrollointiin ihmisellä, eläimillä, helposti pilaantuvissa materiaaleissa, 10 tai infektion vastaisena aineena, jossa menetelmässä annetaan tehokas määrä kaavan I mukaista yhdistettä.

Tämä keksintö aikaansaa myös farmaseuttisia formulaatioita, jotka sisältävät aktiivisena valmistusaineena tehokkaan määrän kaavan I mukaista yhdistettä, sen farma-15 seuttisesti hyväksyttävää suolaa, tai sen hydroksi- ja/tai aminosuojattua johdannaista.

Kaavan I mukainen yhdiste voidaan formuloida oraaliseen antoon tavallisiin formu-laatioihin kuten kapselit, tabletit, rakeet, jauheet, ja suspensiot yhdessä farmaseut-v, 20 tisesti hyväksyttävien väliaineiden, laimennusaineiden tai täyteaineiden kanssa. Pa- :.· renteraaliseen antoon kaavan I mukainen yhdiste formuloidaan esimerkiksi ihonalai- sesti, lihaksensisäisesti, laskimonsisäisesti tai vatsaontelonsisäisesti injisoitaviksi : liuoksiksi tai suspensioiksi. Lisäksi keksinnön mukainen yhdiste voidaan formuloida voiteeseen, peräpuikkoon, linimenttiin ja vastaaviin. Kaavan I mukaisen yhdisteen :: 25 sopivat päivittäisannokset voivat olla välillä noin 10 mg ja noin 4000 mg, edullisesti noin 100 mg ja noin 2000 mg oraalisessa annossa, ja noin 10 mg ja noin 4000 mg, edullisesti noin 50 mg ja noin 2000 mg parenteraalisessa annossa.

•.' * Seuraavat esimerkit esitetään keksinnön edelleen kuvaamiseksi, eikä niitä pidä kat- :.. 30 soa keksintöä rajoittaviksi.

Esimerkeissä käytetyt lyhenteet selitetään alla: 19 110322

Ac = asetyyli; At = 2-aminotiatsol-4-yyli; Bh = difenyylimetyyli; Boc = t-butoksi-karbonyyli; Et = etyyli; Me = metyyli; Ph = fenyyli; PMB = p-metoksibentsyyli;

Tr = trityyli.

5 Valmistusmenetelmä 1 asyylitiometyyli NaSHet-> AcSCH2SHet 1) Het = 1,2,3-triatsoli 10

Suspensioon, jossa on l,2,3-triatsoli-4-tiolinatriumsuolaa (38 g; 309 mmol) dimetyy-liformamidissa (150 ml) -20°C:ssa lisätään tipoittain kloorimetyylitioliasetaattia (37,4 g; 300 mmol) yli 10 minuutin ajan, ja seosta sekoitetaan samassa lämpötilassa 30 minuuttia ja huoneenlämpötilassa 2 tuntia, laimennetaan vedellä ja uutetaan 15 etyyliasetaatilla. Uute pestään vedellä, vesipitoisella natriumvetykarbonaatilla ja vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään alipaineessa. Kiteinen jäännös pestään heksaanilla, kuivataan ja kiteytetään uudelleen eetteristä, jolloin saadaan 4-asetyylitiometyylitio-l,2,3-triatsolia (38,9 g).

Saanto 69 %

O.’ 20 sp.:88-89°C

NMR δ (CDCI3) ppm: 2,36 (s, 3H), 4,37 (s, 2H), 6,3 (brs, 1H), 7,73 (s, 1H) IR v (CHCI3) cm1: 3430, 3152, 1693, 1131 * 2) Het = 1,2,4-triatsoli 0’ 25

Liuokseen, jossa on l,2,4-triatsoli-3-tiolia (2,23 g; 22,1 mmol) dimetyyliformamidis-sa (30 ml) lisätään natriumhydridiä (60 % öljyssä; 840 mg; 21 mmol), ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 10 minuuttia. Tähän liuokseen lämpötilassa välillä -50°C ja -60°C lisätään liuos, jossa on kloorimetyylitioliasetaattia (2,50 g; 30 20,1 mmol) dimetyyliformamidissa (5 ml) ja seosta sekoitetaan samassa lämpötilas sa 20 minuuttia, sekoitetaan toisen trityylikloridin (6,70 g; 24 mmol) ja pyridiinin (1,94 ml; 24,0 mmol) kanssa, sekoitetaan jäillä jäähdyttäen 28 tuntia, laimennetaan . j.' vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuiva taan natriumsulfaatilla ja väkevöidään alipaineessa. Jäännös puhdistetaan silikagee- 20 1 10322 j

Iillä kromatograafisesti (tolueenhetyyliasetaatti = 20:1) ja kiteytetään eetteristä, jolloin saadaan 3-asetyylitiometyylitio-l-trityyli-l,2,4-triatsolia (3'37 9)·

Saanto: 39 %. Värittömiä kiteitä, sp.: 124-125°C

5 NMR δ (CDCI3) ppm: 2,32 (s, 3H), 4,50 (s, 2H), 7,1-7,2 (m, 6H), 7,3-7,4 (m, 9H), 7,90 (s, 1H) IR v (CHCI3) cm1: 1690, 1490, 1472, 1444, 1383, 1352, 1271, 1228, 1131 3) Het = 5-tetratsolyyli 10

Liuokseen, jossa on tetratsoli-5-tiolia (3,00 g; 29,41 mmol) dimetyyliformamidissa (50 ml) lisätään jäillä jäähdyttäen natriumhydridiä (60 % suspensio öljyssä; 2,59 g; 64,75 mmol), ja seosta sekoitetaan jäillä jäähdyttäen 5-6 minuuttia. Seokseen lisätään liuos, jossa on kloorimetyylitioliasetaattia (4,39 g; 35,26 mmol) dimetyyliform-15 amidissa (10 ml), ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 2 tuntia. Reaktioseos laimennetaan 10 % suolahapolla (11 ml) ja vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla.

Uute pestään kyllästetyllä suolavedellä, kuivataan natriumsulfaatilla, suodatetaan ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä pylväskromatograafisesti (toluee-ni:etyyliasetaatti = 1:1) ja saatu jäännös pestään n-heksaanin ja eetterin seoksella, * ♦ v. 20 jolloin saadaan 5-asetyylitiometyylitiotetratsolia (2,49 g) värittöminä kiteinä.

• ·

Saanto: 45 %

..:· sp.:90°C

• · · ! NMR δ (CDCI3) ppm: 2,42 (s, 3H), 4,68 (s, 2H), 8-9 (brs, 1H) IR v (CHCI3) cm1: 3072br, 1692, 1500, 1356, 1131 V’ 25 4) Het = 2-pyridyyli

Liuokseen, jossa on 2-merkaptopyridiiniä (1,11 g; 9,98 mmol) dimetyyliformamidis- i ‘V· sa (10 ml) lisätään natriumhydridiä (400 mg; 60 % dispersio öljyssä), ja seosta se- - 30 koitetaan huoneenlämpötilassa 2-3 minuuttia. Tähän reaktioseokseen lisätään ;’ ‘ -30°C:ssa liuos, jossa on kloorimetyylitioliasetaattia (1,12 g, 9,00 mmol) dimetyyli- ; · formamidissa (2 ml), ja seosta sekoitetaan lämpötilassa välillä -20°C ja -30°C yksi , ·!·’ tunti. Reaktioseos laimennetaan etyyliasetaatilla, pestään vedellä ja kyllästetyllä ·*· suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan 21 110322 silikageelillä kromatograafisesti (tolueeni:etyyliasetaatyti = 20:1), jolloin saadaan 2-asetyylitiometyylitiopyridiiniä (1,43 g) keltaisena öljynä.

Saanto: 72 % NMR δ (CDCIa) ppm: 2,35 (s, 3H), 4,65 (s, 2H), 7,03 (ddd, J=7,4Hz, J=4,9Hz, 5 J=l,0Hz, 1H), 7,18 (ddd, J=8,0Hz, J=l,0Hz, J=l,0Hz, 1H), 7,51 (ddd, J=8,0Hz, J=7,4Hz, J=l,8Hz, 1H), 8,47 (ddd, J=4,9Hz, J=l,8Hz, J=l,0Hz, 1H) IR v (CHCI3) cm1: 1686, 1576, 1556, 1452, 1414, 1353, 1123, 956 5) Het = l,2,3-triatsol-4-yyli: bentsoyylijohdosta käyttäen 10 1. Suspensioon, jossa on l,2,3-triatsol-4-yylitiolinatriumsuolaa (10,0 g; 81,3 mmol) dimetyyliformamidissa (100 ml) lisätään jäillä jäähdyttäen bromikloorimetaania (100 ml), ja seosta sekoitetaan yksi tunti samassa lämpötilassa. Reaktioseos laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään kyllästetyllä suolaliuoksel-15 la, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään, jolloin saadaan 4-kloorimetyylitio- 1,2,3-triatsolia (10,21 g) värittöminä kiteinä.

Saanto: 84 % sp.: 79-80°C

NMR δ (CDCI3) ppm: 4,93 (s, 2H), 7,91 (s, 1H), 9,6-10,2 (brs, 1H).

0. 20 IR v (Nujoli) cm1: 3140, 1499, 1393, 1246, 1230, 117, 1002 • · 4 1 • * ,.! · 2. Liuokseen, jossa on tiobentsoehappoa (470 mg; 3,4 mmol) dimetyyliformamidissa • * · : . (1 ml) lisätään jäillä jäähdyttäen natriumhydridiä (136 mg; 3,4 mmol; 60 % disper sio öljyssä) ja sitten 10 minuutin kuluttua 4-kloorimetyylitio-l,2,3-triatsolia (449 mg; v 25 3 mmol), ja seosta sekoitetaan jäillä jäähdyttäen 10 minuuttia ja huoneenlämpöti lassa 4 tuntia. Reaktioseos laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään vesipitoisella 5 % natriumvetykarbonaatilla, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti (tolueenketyyli-asetaatti = 5:1), jolloin saadaan 4-bentsoyylitiometyylitio-l,2,3-triatsolia (417 mg).

*» 30 Saanto: 55 %.

; ‘ Kiteyttämällä tämä tuote uudelleen heksaanin ja eetterin seoksesta saadaan värit- ; > tömiä neulasia.

, sp.: 72,5 - 73,5°C

110322 22 NMR δ (CDCI3) ppm: 4,57 (s, 2H), 7,4-7,65 (m, 3H), 7,75 (s, 1H), 7,9-7,96 (m, 1H) IR v (CHCI3) cm'1: 3425, 3146, 1667, 1206, 1175, 911

Valmistusmenetelmä 2 kloorimetyyli 5

NaSHet -> CICH2SHet 1) Het = trityyIi-1,2,4-triatsol-4-yyIi 10 Liuokseen, jossa on l,2,4-triatsol-3-yylitiolia (10,0 g; 99 mmol) dimetyyliformami-dissa (100 ml) lisätään jäillä jäähdyttäen natriumhydridiä (60 % dispersio öljyssä; 3,96 g; 99 mmol), ja seosta sekoitetaan samassa lämpötilassa 10 minuuttia, jolloin saadaan natrium-l,2,4-triatsol-3-yylimerkaptidiä, sekoitetaan bromikloorimetaanin (100 ml) kanssa ja sekoitetaan samassa lämpötilassa 14 tuntia. Reaktioseos laimen-15 netaan etyyliasetaatilla, pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natrium-sulfaatilla ja väkevöidään. Liuokseen, jossa on jäännöstä, 3-kloorimetyyiitio-l,2,4-triatsolia, dimetyyliformamidissa (100 ml) lisätään jäillä jäähdyttäen trityylikloridia (27,6 g; 99 mmol) ja trietyyliamiinia (13,8 ml), ja seosta sekoitetaan 30 minuuttia jäillä jäähdyttäen. Reaktioseos laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla.

20 Uute pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöi-:.: : dään. Jäännös kiteytetään eetteristä, jolloin saadaan trityyli-3-kloorimetyylitio-l,2,4- ..!: ’ triatsolia (20,2 g) valkoisina kiteinä.

: . ’ Saanto: 52 %

sp.: 121 - 122°C

25 NMR δ (CDCI3) ppm: 5,18 (s, 2H9, 7,17-7,2 (m, 6H), 7,3-7,4 (m, 9H), 7,95 (s, 1H) IR v (CHCI3) cm1: 1599, 1492, 1472, 1445, 1389,1365, 1353, 1325 2) Het = l-metyyli-l,2,4-triatsol-3-yyli 812-metyyli-l,2,4-triatsol-3-yyli 30 1. Seokseen, jossa on 1,2,4-triatsol-3-yyIitiolia (10,1 g; 0,10 mol) ja p-metoksibent- ' “ syylikloridia (17,2 d; 0,11 mmol) dikloorimetaanissa (50 ml) lisätään seos, jossa on • *: vesipitoista IN natriumhydroksidia (105 ml) ja tetrabutyyliammoniumbromidia (750 mg; 2,3 mmol), ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 16 tuntia. Reak-, · · . tioseos uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuiva- 23 1 10322 taan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös kiteytetään tolueenista, jolloin saadaan 3-p-metoksibentsyylitio-l,2,4-triatsolia (16/71 g) värittöminä kiteinä.

Saanto: 76 % sp.: 100 - 101°C

5 NMR δ (CDCI3) ppm: 3,77 (s, 3H), 4,32 (s, 2H), 6,79-6,83, 7,23-7,27 (A2B2, 4H), 7,0-7,8 (brs, 1H), 8,13 (s, 1H) IR v (CHCI3) cm1: 3400, 3120br, 1611, 1512, 1485, 1465, 1441, 1302 2. Liuokseen, jossa on 3-p-metoksibentsyylitio-l,2,4-triatsolia (10,0 g; 45,2 mmol) 10 metanolissa (100 ml) lisätään jäillä jäähdyttäen liuos, jossa on diatsometaania eetterissä (valmistettu 15 g:sta N-nitrosometyyliureaa), ja seosta sekoitetaan yksi tunti. Reaktioseos väkevöidään ja puhdistetaan Lobar-pylväskromatograafisesti (toluee-ni:etyyliasetaatti = 1:2 -1:3), jolloin saadaan 3-p-metoksibentsyylitio-2-metyyli- 1,2,4-triatsolia 15 [5,17 g; NMR δ (CDCI3) ppm: 3,63 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 4,34 (s, 2H), 6,80-6,84, 7,19-7,24 (A2B2, 4H), 7,88 (s, 1H).

IR v (CHCI3) cm1: 1611, 1511, 1476, 1464, 1440, 1360, 1302 Saanto: 49 %] ja 3-p-metoksibentsyylitio-l-metyyli-l,2,4-triatsolia [3,60 g: .:. 20 NMR δ (CDCI3) ppm: 3,78 (s, 3H), 3,87 (s, 3H), 4,31 (s, 2H), 6,80-6,85, 7,30-7,34 :.: (A2B2, 4H), 7,99 (s, 1H).

IR v (CHCI3) cm1: 1612, 1512, 1465, 1440, 1421, 1356, 1302 Saanto: 34 %] 3. Liuokseen, jossa on 3-p-metoksibentsyylitio-2-metyyli-l,2,4-triatsolia (5,09 g: 25 21,7 mmol) dikloorimetaanin (40 ml) ja metanolin (40 ml) seoksessa lisätään ho- peaperkloraattia (5,90 g; 25,9 mmol), ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 1,5 tuntia. Reaktioseos laimennetaan metanolilla (100 ml) ja saadut 3-argentiotio-2-metyyli-l,2,4-triatsolikiteet otetaan talteen suodattamalla, pestään metanolilla ja * kuivataan. Suspensioon, jossa on tätä tuotetta dimetyyliformamidissa (40 ml) lisä- 30 tään bromikloorimetaania (40 ml) ja litiumkloridia (2,82 g; 65,2 mmol), ja seosta sekoitetaan 22 tuntia huoneenlämpötilassa. Reaktioseos sekoitetaan kyllästetyn suo-•:·: laliuoksen ja etyyliasetaatin kanssa ja suodatetaan liukenemattoman aineksen pois- . ·: · tamiseksi. Orgaaninen kerros erotetaan, pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuiva- . · * ·, taan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromato- 24 1 10322 graafisesti (tolueenketyyliasetaatti = 4:1), jolloin saadaan 3-kloorimetyylitio-2-metyyli-l,2,4-triatsolia (1,62 g) värittömä öljynä.

Saanto: 46 % NMR δ (CDCI3) ppm: 3,87 (s, 3H), 5,19 (s, 2H), 7,96 (s, 1H) 5 IR v (CHCI3) cm'1: 1479, 1395, 1360 4. Liuokseen, jossa on 3-p-metoksibentsyylitio-l-metyyli-l,2,4-triatsolia (3,55 g; 15,1 mmol) dikloorimetaanin (30 ml) ja metanolin (30 ml) seoksessa lisätään ho-peaperkloraattia (4,11 g; 18,1 mmol) ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 1,5 10 tuntia. Reaktioseos laimennetaan metanolilla (100 ml) ja saadut 3-argentiotio-l-metyyli-l,2,4-triatsolikiteet otetaan talteen suodattamalla, pestään metanolilla ja kuivataan. Liuokseen, jossa on tätä tuotetta dimetyyliformamidissa (30 ml) lisätään bromikloorimetaania (30 ml) ja litiumkloridia (1,96 g; 45,3 mmol) ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 21 tuntia. Reaktioseokseen lisätään kyllästettyä suolaliu-15 osta ja etyyliasetaattia ja suodatetaan liukenemattoman aineen poistamiseksi. Orgaaninen kerros erotetaan, pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natrium-sulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti (tolueeni:etyyliasetaatti = 2:1), jolloin saadaan 3-kloorimetyylitio-l-metyyli-l,2,4-triatsolia (1,05 g) värittömänä öljynä.

20 Saanto: 43 % NMR δ (CDCI3) ppm: 3,93 (s, 3H), 5,21 (s, 2H), 8,06 (s, 1H) ..!:' IR v (CHCI3) cm'1: 1509, 1471, 1424, 1392, 1359.

3) Het = 1,2,3-tiadiatsolyyli 25

Liuokseen, jossa on l,2,3-tiadiatsoli-5-tiolinatriumsuoladihydraattia (puhtaus: 70,9 %; 2,50 g; 10,07 mmol) dimetyyliformamidissa (20 ml) lisätään jäillä jäähdyttäen bromikloorimetaania (20 ml) yhtenä annoksena, ja seosta sekoitetaan jäillä '· ‘ jäähdyttäen 1,5 tuntia. Reaktioseos laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatil- 30 la. Uute pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla, suodate-: ‘ ’ taan ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä pylväskromatograafisesti ·:··.’ (tolueeni:etyyliasetaatti = 20:1), jolloin saadaan 5-kloorimetyylitio-l,2,3-tiadiatsolia . ·: · (1,60 g) värittömänä öljynä.

Saanto: 95 % 25 1 10322 NMR δ (CDCI3) ppm: 4,93 (s, 2H), 8,69 (s, 1H) IR v (CHCI3) cm1: 1419, 1395, 1256, 1102 4) Het = l,3,4-tiadiatsol-2-yyli 5

Liuokseen, jossa on l,3,4-tiadiatsoli-2-tiolia (4,72 g; 40 mmol) dimetyyliformamidis-sa (80 ml) lisätään jäillä jäähdyttäen natriumhydridiä (69 % dispersio öljyssä; 1,76 g; 1,1 ekvivalenttia; 44 mmol) annoksissa, ja seosta sekoitetaan 15 minuuttia. Saatuun liuokseen lisätään bromikloorimetaania (80 ml), ja seosta sekoitetaan sa-10 massa lämpötilassa toiset 2 tuntia. Reaktioseos laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaa-tilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti (toluee-ni:etyyliasetaatti = 20:1), jolloin saadaan 2-kloorimetyylitio-l,3,4-tiadiatsolia (6,05 g) värittömänä öljynä.

15 Saanto: 91 % NMR δ (CDCI3) ppm: 5,32 (s, 2H), 9,16 (s, 1H) IR v (CHCI3) cm1: 1389, 1373, 1232, 1061.

5) Het = 2-metyyli-l,3,4-tiadiatsol-5-yyli 20

Liuokseen, jossa on 2-metyyli-l,3,4-tiadiatsoli-5-tiolia (2,64 g; 20 mmol) dimetyyli-•..: formamidissa (40 ml) lisätään jäillä jäähdyttäen natriumhydridiä (880 mg; 60 % : · dispersio öljyssä; 1,1 ekvivalenttia; 22 mmol) annoksissa, ja seosta sekoitetaan 10 minuuttia. Saatuun liuokseen lisätään bromikloorimetaania (40 ml), ja seosta sekoi-25 tetaan samassa lämpötilassa uudestaan yksi tunti 30 minuuttia. Reaktioseos laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti (tolueeni:etyyliasetaatti = 10:1), jolloin saadaan 5-kloorimetyylitio-2-metyyli-l,3,4-' · ‘ tiadiatsolia (3,3 g) värittömänä öljynä.

30 Saanto: 91 % NMR δ (CDCIa) ppm: 2,79 (s, 3H, 5,24 (s, 2H) : · · ’ IR v (CHCI3) cm'1: 1430, 1392, 1380, 1232, 1189.

6) Het = l-metyyli-5-tetratsolyyli 26 1 10322

Liuokseen, jossa on l-metyylitetratsoli-5-tiolinatriumsuolaa (2,00 g; 14,5 mmol) dimetyyliformamidissa (20 ml) lisätään jäillä jäähdyttäen bromikloorimetaania (20 ml) yhtenä annoksena, ja seosta sekoitetaan 1,5 tuntia. Reaktioseos laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, 5 kuivataan natriumsulfaatilla, suodatetaan ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä pylväskromatograafisesti (tolueeni:etyyliasetaatti = 20:1 -10:1), jolloin saadaan 5-kloorimetyylitio-l-metyylitetratsolia värittöminä kiteinä (1,73 g).

Saanto: 72 % sp.: 55 - 56°C

10 NMR δ (CDCh) ppm: 4,03 (s, 3H), 5,29 (s, 2H) IR v (CHCh) cm'1: 1467, 1408, 1384, 1278, 1235, 1171.

7) Het = 2-metyylitetratsol-5-yyli 15 1. Liuokseen, jossa on 5-p-metoksibentsyylitiotetratsolia (7,00 g; 31,5 mmol) meta- nolissa (150 ml) lisätään jäillä jäähdyttäen liuos, jossa on diatsometaania eetterissä (valmistettu 14 g:sta N-nitrosometyyliureaa), ja seosta sekoitetaan yksi tunti ja sitten väkevöidään. Jäännös puhdistetaan Lobar-pylväskromatograafisesti (tolueeni :etyyliasetaatti = 5:1), jolloin saadaan 5-p-metoksibentsyylitio-2-metyylitetratsolia 20 [4,86 g; NMR δ (CDCI3) ppm: 3,78 (s, 3H), 4,29 (s, 3H), 4,38 (s, 2H), 6,81-6,85, 7,30-7,34 (A2B2,4H) : IR v (CHCI3) cm'1: 1611, 1512, 1390, 1324, 1303.

Väritön öljy.

25 Saanto: 65 %] ja 5-p-metoksibentsyylitio-l-metyylitetratsolia [2,71 g; NMR δ (CDCh) ppm: 3,79 (s, 3H), 3,80 (s, 3H), 4,49 (s, 2H), 6,82-6,86, 7,27-7,31 (A2B2,4H) : . 30 IR v (CHCh) cm'1: 1613, 1513, 1465, 1305.

’ Värittömät kiteet.

Saanto: 36 %] 110322 27 2. Liuokseen, jossa on 5-p-metoksibentsyylitio-2-metyylitetratsolia (4,86 g; 20,59 mmol) dikloorimetaanin (40 ml) ja metanolin (40 ml) seoksessa lisätään hopea perkloraattia (6,17 g; 26,78 mmol), ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 2 tuntia. Reaktioseos laimennetaan metanolilla (100 ml) ja saadut 5-argentiotio-2-5 metyyIitetratsoIikiteet otetaan talteen suodattamalla, pestään metanolilla ja kuiva taan. Liuokseen, jossa on tätä tuotetta dimetyyliformamidissa (40 ml) lisätään bro-mikloorimetaania (40 ml) ja litiumkloridia (2,67 g; 61,7 mmol), ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 20 tuntia. Reaktioseos sekoitetaan kyllästetyn suolaliuoksen ja etyyliasetaatin kanssa ja suodatetaan liukenemattoman aineksen poistamiseksi. Or-10 gaaninen kerros erotetaan, pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natrium-sulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti (tolueeni:etyyliasetaatti = 20:1), jolloin saadaan 5-kloorimetyylitio-2-metyylitetrat-solia (1,91 g) värittömänä öljynä.

Saanto: 56 % 15 NMR δ (CDCIs) ppm: 4,37 (s, 3H), 5,23 (s, 2H) IR v (CHCI3) cm'1: 1440, 1422, 1410, 1395, 1325.

Valmistusmenetelmä 3 substituutio jodilla Nai ::. 20 CICH2SHet-> ICH2SHet • · ...” 1) Het = l-metyyli-l,2,4-triatsol-3-yyli • ·

Liuokseen, jossa on 3-kloorimetyylitio-l-metyyli-l,2,4-triatsolia (981 mg; 6,0 mmol) :25 asetonissa (10 ml) lisätään natriumjodidia (1,78 g; 12 mmol), ja seosta sekoitetaan 50°C:ssa 3 tuntia. Reaktioseos laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla.

Uute pestään vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään, jolloin saadaan 3-jodimetyylitio-l-metyyli-l,2,4-triatsolia (1,50 g) keltaisena öljynä.

NMR δ (CDCI3) ppm: 3,94 (s, 3H), 4,75 (s, 2H), 8,07 (s, 1H).

30 ” 2) Het = 2-metyyli-l,2,4-triatsol-3-yyli *;· Liuokseen, jossa on 3-kloorimetyylitio-2-metyyli-l,2,4-triatsolia (981 mg; 6,0 mmol) asetonissa (10 ml) lisätään natriumjodidia (1,78 g; 12,0 mmol), ja seosta sekoite- 28 110322 taan 50°C:ssa 3 tuntia. Reaktioseos laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään, jolloin saadaan 3-jodimetyylitio-2-metyyli-l,2,4-triatsolia (1,47 g) keltaisena öljynä.

NMR δ (CDCIa) ppm: 3,84 (s, 3H), 4,71 (s, 2H), 7,98 (s, 1H).

5 3) Het = l,2,3-tiadiatsol-5-yyli

Liuokseen, jossa on 5-kloorimetyylitio-l,2,3-tiadiatsolia (999 mg; 6,00 mmol) asetonissa (10 ml) lisätään natriumjodidia (1,78 g; 12,00 mmol), ja seosta sekoitetaan 10 50°C:ssa 2 tuntia. Jäähdyttämisen jälkeen reaktioseos laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään kerran vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla, suodatetaan ja väkevöidään, jolloin saadaan 5-jodimetyylitio-l,2,3-tiadiatsolia ruskeana öljynä (1,55 g).

NMR δ (CDCIs) ppm: 4,53 (s, 2H), 8,62 (s, 1H).

15 4) Het = l,3,4-tiadiatsol-2-yyli

Liuokseen, jossa on 2-kloorimetyylitio-l,3-4-tiadiatsolia (849 mg; 5,1 mmol) asetonissa (10 ml) lisätään natriumjodidia (1,5 g; 2,0 ekvivalenttia; 10 mmol), ja seosta v, 20 sekoitetaan 50°C:ssa 3 tuntia. Jäähdyttämisen jälkeen reaktioseos laimennetaan ve- della ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään, jolloin saadaan 2-jodimetyylitio-l,3,4-tiadiatsolia (1,2 g, sisältää : noin 10 % lähtöyhdisteenä kloorimetyyliyhdistettä) keltaisena öljynä.

NMR δ (CDCI3) ppm: 4,85 (s, 2H), 9,14 (s, 1H).

0’ 25 5) Het = 2-metyyli-l,3,4-tiadiatsol-5-yyli

Liuokseen, jossa on 5-kloorimetyylitio-2-metyyli-l,3,4-tiadiatsolia (730 mg; 4 mmol) asetonissa (6 ml) lisätään natriumjodidia (1,2 g; 2,0 ekvivalenttia; 8 mmol), ja seos-30 ta sekoitetaan 55°C:ssa 2 tuntia. Reaktioseos laimennetaan vedellä ja uutetaan : ’ etyyliasetaatilla. Uute pestään vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään, :" jolloin saadaan 5-jodimetyylitio-2-metyyli-l,3,4-tiadiatsolia (1,05 g) keltaisena öljy- ,··*’ nä.

NMR δ (CDCI3) ppm: 2,79 (s, 3H), 4,78 (s, 2H) 29 1 10322 6) Het = l-metyylitetratsol-5-yyli

Liuokseen, jossa on 5-kloorimetyylitio-l-metyylitetratsolia (987 mg; 6,0 mmol) asetonissa (10 ml) lisätään natriumjodidia (1,78 g; 12 mmol), ja seosta sekoitetaan 5 50°C:ssa 3 tuntia. Jäähdyttämisen jälkeen reaktioseos laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla, suodatetaan ja väkevöidään, jolloin saadaan 5-jodimetyylitio-l-metyylitetratsolia keltaisena öljynä (1,33; sisältää noin 20 mol-% kloridia).

NMR δ (CDCIa) ppm: 3,98 (s, 3H), 4,76 (s, 2H) 10 7) Het = 2-metyylitetratsol-5-yyli

Liuokseen, jossa on 5-kloorimetyylitio-2-metyylitetratsolia (987 mg; 6,0 mmol) asetonissa (10 ml) lisätään natriumjodidia (1,78 g; 12,00 mmol), ja seosta sekoitetaan 15 50°C:ssa 3 tuntia. Reaktioseos laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla.

Uute pestään vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään, jolloin saadaan 5-jodimetyylitio-2-metyylitetratsolia (1,43 g) keltaisena öljynä.

NMR δ (CDCI3) ppm: 4,38 (s, 3H), 4,74 (s, 2H) v, 20 Valmistusmenetelmä 4 muunnos Het:ssä ..!: 1) Lisäämällä trityyliä saadaan trityyli-l,2,3-triatsol-4-yyliä

Suspensioon, jossa on l,2,3-triatsol-4-tiolinatriumsuolaa (109 g; 870 mmol) dime-25 tyyliformamidissa (300 ml) lisätään tipoittain lämpötilassa välillä -20°C ja -30°C kloo-rimetyylitioliasetaattia (109 g; 870 mmol), ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 2 tuntia. Reaktioseokseen lisätään jäillä jäähdyttäen trityylikloridia (292 g; 1,05 mmol) ja pyridiiniä (84,6 ml; 1,05 mol) ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 18 tuntia, laimennetaan dikloorimetaanilla, pestään kyllästetyllä suolaliuokset 30 la, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään alipaineessa. Jäännös kiteytetään eetteristä, jolloin saadaan 4-asetyylitiometyylitio-l-trityyli-l,2,3-triatsolia (183 g).

: *· Saanto: 49 % sp.: 115 - 116°C. Värittömiä kiteitä.

110322 30 NMR δ (CDCI3) ppm: 2,29 (s, 3H), 4,34 (s, 2H), 7,05-7,15 (m, 6H), 7,3-7,4 (m, 9H), 7,47 (s, 1H) IR v (CHCI3) cm'1: 1688, 1488, 1442, 1199, 1128, 1072, 1033, 954 5 2) Lisäämällä metyyliä saadaan (l/2)-metyyli-l,2,3-triatsol-4-yyliä

Liuokseen, jossa on 4-asetyylitiometyylitio-l,2,3-triatsolia (6 g; 31,75 mmol) tetra-hydrofuraanissa (30 ml) lisätään tipottain -78°C:ssa liuos, jossa on IM litiumbis-(trimetyylisilyyli)amidia tetrahydrofuraanissa (35 ml; 35 mmol), ja seosta sekoite-10 taan samassa lämpötilassa 5 minuuttia ja lisätään metyylitrifluorimetaanisulfonaattia (4,0 ml; 35 mmol). Sekoitetaan samassa lämpötilassa 2 tuntia, minkä jälkeen reak-tioseos laimennetaan 10 % suolahapolla (26 ml) ja vedellä, ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään vesipitoisella natriumvetykarbonaatilla ja kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikagee-15 Iillä kromatograafisesti (n-heksaani:etyyliasetaatti = 1:2), jolloin saadaan 4-asetyyli-tiometyylitio-3-metyyli-l,2,3-triatsolia [2,22 g; NMR δ (CDCIs) ppm: 2,32 (s, 3H), 4,13 (s, 5H), 7,77 (s, 1H)

IR v (CHCI3) cm'1: 1698, 1429, 1355, 1263, 1226, 1205, 1127, 1100, 957 sp.: 37-38°C

» · V. 20 Saanto: 34 %], • » i.i 4-asetyylitiometyylitio-l-metyyli-l,2,3-triatsolia [884 mg; ..!: NMR δ (CDCh) ppm: 2,35 (s, 3H), 4,11 (s, 3H), 4,33 (s, 2H), 7,59 (s, 1H) • · * : \ IR v (CHCI3) cm1: 1691, 1434, 1354, 1285, 1131, 1106, 1048, 1031, 956

sp.:71-72°C

* » v 25 Saanto: 14 %] ja 4-asetyylitiometyylitio-2-metyyli-l,2,3-triatsolia [175 mg; NMR δ (CDCI3 ppm: 2,35 (s, 3H), 4,20 (s, 3H), 4,30 (s, 2H), 7,56 (s, 1H) IR v (CHCI3) cm'1: 1691, 1446, 1369, 1130, 1006, 990, 956 * · ‘ Öljy. Saanto: 3 %] :.Γ 30 t t I · > » i » 31 1 10322

Valmistusmenetelmä 5 7-asyylin lisääminen H2N·^—rSs a syy li -NH"·*,— QT-^-f^S O 2 «e -- (j~^'yX)SO 2 Me COOBh COOBh 5 1) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-pentenoyyli

Suspensioon, jossa on 76-amino-3-metaanisulfonyyloksi-3-kefem-4-karboksyyli-10 happodifenyylimetyyliesterihydrokloridia (1,49 g; 3 mmol) ja (Z)-2-(2-t-butoksi-karbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-pentenoinihappoa (1,03 g; 3,45 mmol) dikloorime-taanissa (30 ml) lisätään -30°C:ssa N-metyylimorfoliinia (1,1 ml; 10 mmol) ja 2 minuutin kuluttua fenyylidikloorifosfaattia (0,49 ml; 3,27 mmol), ja seosta sekoitetaan samassa lämpötilassa yksi tunti ja 20 minuuttia. Reaktioseos sekoitetaan IN suola-15 hapon (6 ml) kanssa ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään vedellä, vesipitoisella 5 % natriumvetykarbonaatilla ja kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natrium-sulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös (2,6 g) liuotetaan kuumaan isopropanoliin (100 ml), jäähdytetään ja erotettu vaalean keltainen jauhe otetaan talteen suodattamalla, jolloin saadaan 78-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-::: 20 pentenoyyliamino]-3-metaanisulfonyylioksi-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyyli- :.: : metyyliesteriä (2,01 g).

Saanto: 91 % : ’.: NMR δ (CDCI3) ppm: 1,12 (t, J=7,6Hz, 3H), 1,54 (s, 9H), 2,52,7 (m, 2H), 2,85 (s, ""· 3H), 3,55, 3,80 (ABq, J=18Hz, 2H), 5,09 (d, J=5Hz, 1H), 5,95 (dd, J=5Hz, J=8Hz, :: ; 25 1H), 6,45 (t, J=7,4Hz, 1H), 6,74 (s, 1H), 6,86 (s, 1H), 7,2- 7,5 (m, 10H), 7,80 (d, J=8Hz, 1H).

IR v (CHCI3) cm1 : 3400, 1786, 1725, 1669, 1545, 1367, 1287, 1220, 1156.

:. * · ’. 2) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-imino- 30 asetyyli -: · ·: Suspensioon, jossa on (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi- iminoetikkahappoa (41,7 g; 78,8 mmol) dikloorimetaanissa (600 ml) lisätään , · · ·. -30°C:ssa N-metyylimorfoliinia (7,575 g; 75 mmol), ja seosta sekoitetaan 10 minuut- 32 1 10322 tia, sekoitetaan 76-amino-3-metaanisulfonyylioksi-3-kefem-4-karboksyylihappodife-nyylimetyyliesterihydrokloridin (37,27 g; 75 mmol) kanssa, sekoitetaan samassa lämpötilassa 50 minuuttia, sekoitetaan l-etyyli-3-(3-dimetyyliaminopropyyli)karbodi-imidihydrokloridin (14,38 g; 75 mmol) kanssa, sekoitetaan jäillä jäähdyttäen 3 tun-5 tia, laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään vedellä, kuivataan ja väkevöidään alipaineessa. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromatograa-fisesti (0,5 % etikkahappoa sisältävä tolueeni : etyyliasetaatti = 10:1) ja eluaattia käsitellään eetteri-heksaanilla, jolloin saadaan 76-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyli-aminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetamido]-3-metaanisulfonyylioksi-3-kefem-10 4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (57,42 g).

Väritön jauhe.

Saanto: 79 %.

Tämä tuote sisältää noin 5 % 2-kefemisomeeria.

NMR δ (CDCI3) ppm: 1,48 (s, 9H), 2,78 (s, 3H), 3,45, 3,76 (ABq, J=18,6 Hz, 2H), 15 5,13 (d, J=5Hz, 1H), 6,06 (dd, J=5Hz, J=8,8Hz, 1H), 6,96 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 7,2-7,5 (m, 26H).

IR v (CHCI3) cm1: 3400, 1793, 1724, 1690, 1543, 1513, 1493, 1445, 1368, 1285, 1222, 1157.

::' 20 3) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-imino- :.: asetyyli

Suspensioon, jossa on 76-amino-3-metaanisulfonyylioksi-3-kefem-4-karboksyyli- ..... happodifenyylimetyyliesterihydrokloridia (37,27 g; 75 mmol) ja (Z)-2-(2-t-butoksi- 25 karbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoetikkahappoa (45,63 g; 86 mmol) dikloorimetaanissa (600 ml) lisätään -30°C:ssa N-metyylimorfoliinia (27,2 ml; 0,25 mol) yli 3 minuuttia. 4 minuutin kuluttua seokseen lisätään fenyylidikloorifos-faattia (12,3 ml; 82 mmol). Sekoitetaan yli 3 tuntia, minkä jälkeen seos laimenne-:.' · “ taan 10 % suolahapolla (40 ml) ja vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään :30 vedellä, vesipitoisella natriumvetykarbonaatilla, laimealla suolahapolla ja vedellä, ;' ‘' kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään alipaineessa. Jäännös liuotetaan isopro- •; · ·; panoliin (2 litraa) lämmittämällä ja jäähdyttämällä, jolloin saadaan 76-[(Z)-2-(2-t- butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetamido]-3-metaanisulfo-!.. nyylioksi-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (67 g).

33 1Ί 0322 Väritön jauhe.

Saanto: 92 %.

4) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoasetyyli 5

Suspensioon, jossa on 7B-amino-3-metaanisulfonyylioksi-3-kefem-4-karboksyyli-happodifenyylimetyyliesterihydrokloridia (994 mg; 2 mmol) ja (Z)-2-(2-t-butoksi-karbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoetikkahappoa (662 mg; 2,2 mmol) dikloorimetaanissa (16 ml) lisätään -30°C:ssa N-metyylimorfoliinia (0,72 ml; 10 6,6 mmol) ja fenyylidikloorifosfaattia (0,33 ml; 2,2 mmol), ja seosta sekoitetaan samassa lämpötilassa 2,5 tuntia. Reaktioseos sammutetaan lisäämällä 10 % suolahappoa (5 ml) ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään vedellä, 5 % vesipitoisella natriumvetykarbonaatilla ja vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti (tolueeni: etyyliasetaatti = 15 2:1, sisältää 0,5 % etikkahappoa), jolloin saadaan 76-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbo- nyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoasetyyli]amino-3-metaanisulfonyylioksi-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (1,07 g).

Saanto: 72 %.

NMR δ (CDCI3) ppm: 1,53 (s, 9H), 2,83 (s, 3H), 3,63, 3,88 (ABq, J=19Hz, 2H), 4,09 V 20 (s, 3H), 5,18 (d, J=5Hz, 1H), 6,04 (dd, J=5Hz, J=9Hz, 1H), 6,95 (s, 1H), 7,2-7,5 (m, 13H).

34 1 10322 sältää 0,5 % etikkahappoa), jolloin saadaan 78-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliamino- tiatsol-4-yyli)-2-syklopentyylioksi-iminoasetamido]-3-metaanisulfonyylioksi-3-kefem- 4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (1/86 g) valkoisena vaahtona.

Saanto: 78 % 5 NMR δ (CDCI3) ppm: 1,53 (s, 9H), 1,3-2,0 (m, 8H), 2,80 (s, 3H), 3,61, 3,88 (ABq, J=19Hz, 2H), 4,9-5,0 (m, 1H), 5,17 (d, J=5Hz, 1H), 6,04 (dd, J=5 Hz, J=9Hz, 1H), 6,96 (s, 1H), 7,3-7,5 (m, 12H), 8,6 (brs, 1H).

IR v (CHCI3) cm1: 3400, 1792, 1724, 1685, 1543, 1367, 1226, 1220, 1158.

10 6) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-(2-propenyylioksi- imino)asetyyli

Suspensioon, jossa on 76-amino-3-metaanisulfonyylioksi-3-kefem-4-karboksyylihap-podifenyylimetyyliesterihydrokloridia (1,49 g; 3 mmol) ja (Z)-2-(2-t-butoksikarbo-15 nyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-(2-propenyylioksi-imino)etikkahappoa (1,13 g; 3,46 mmol) dikloorimetaanissa (30 ml) -30°C:ssa lisätään N-metyylimorfoliinia (1,1 ml; 10 mmol) ja yhden minuutin kuluttua fenyylidikloorifosfaattia (0,49 ml; 3,27 mmol), ja seosta sekoitetaan samassa lämpötilassa 2 tuntia. Reaktioseos sekoitetaan IN suolahapon (6 ml) ja veden (30 ml) kanssa ja uutetaan etyyliasetaatilla.

: V 20 Uute pestään vedellä, 5 % vesipitoisella natriumvetykarbonaatilla ja vedellä, kuiva- i ; taan natriumsulfaatilla ja puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti (tolueeni : etyyliasetaatti = 5:1, sisältää 0,5 % etikkahappoa), jolloin saadaan 7B-[(Z)-2-(2-t-i ' butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-(2-propenyylioksi-imino)asetamido]-3- metaanisulfonyylioksi-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (1,83 g) 25 vaalean keltaisena vaahtona, saanto: 79 %.

NMR δ (CDCI3) ppm: 1,53 (s, 9H), 2,82 (s, 3H), 3,61, 3,86 (ABg, J=20Hz, 2H), 4,80 (d, J=6Hz, 2H), 5,17 (d, J=5Hz, 1H), 5,23-5,40 (m, 2H), 5,94-6,13 (m, 2H), 6,95 (s, : ‘' · 1H), 7,2-7,5 (m, 12H), 8,6 (brs, 1H).

30 IR v (CHCI3) cm1: 3400, 1792, 1725, 1686, 1544, 1367, 1286, 1223, 1219, 1160.

35 110322

Valmistusmenetelmä 6 7-sivuketjuhappo 1) (Z)-2-(2-t-Butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2trityylioksi-iminoetikkahappo

5 N-,r<:ax)Et H-ir?<»0H mrSCOOH

HjtrS'NOH -- BocNH^S' KOH -' BocNH-V NOTr 1. Suspensioon, jossa on (Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-hydroksi-iminoetikkahappo-etyyliesteriä (86 g; 0,4 mol) dikloorimetaanissa (1200 ml) lisätään 4-dimetyyliamino- 10 pyridiiniä (9,6 g; 79 mmol) ja sitten di-t-butyylidikarbonaattia (240 ml; 1,04 mol) tipoittain huoneenlämpötilassa, ja seosta sekoitetaan 19 tuntia. Reaktioseos sekoitetaan 0,5N suolahapon (500 ml) kanssa ja dikloorimetaanikerros erotetaan. Orgaaninen kerros pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väke-vöidään. Jäännös laimennetaan etanolilla (200 ml) ja väkevöidään jälleen. Liuok-15 seen, jossa on jäännöstä etanolissa (300 ml) lisätään jäillä jäähdyttäen tipoittain liuos, jossa on natriumhydroksidia (64 g; 1.6 mol) vedessä (300 ml), ja seosta sekoitetaan jäillä jäähdyttäen 30 minuuttia ja huoneenlämpötilassa 19 tuntia. Reaktioseos sekoitetaan väkevöidyn suolahapon (140 ml) ja jääveden (1000 ml) kanssa ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja . y 20 väkevöidään. Saatu kiteinen jäännös pestään vedellä, kuivataan ja pestään eetteril- : . · lä, jolloin saadaan (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-hydroksi- .: iminoetikkahappoa (86,3 g) värittöminä kiteinä.

:v sp.: 170 - 173°C (hajaantuminen).

!..! NMR δ (CDCI3-CD3SOCD3) ppm: 1,55 (s, 9H), 7,38 (s, 1H), . y 25 IR v (Nujol) cm1: 3640, 3510, 3125, 2520br, 1730, 1635, 1600, 1530, 1295, 1165, 1000.

2. Liuokseen, jossa on (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-hydroksi-iminoetikkahappoa (86,3 g; 0,30 mol) dimetyyliformamidissa (600 ml) lisätään ka- 30 liumkarbonaattia (92 g; 0,67 mol) ja trifenyylimetyylikloridia (100 g; 0,36 mol), ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 3 päivää. Reaktioseos kaadetaan seokseen, jossa on väkevöityä suolahappoa (111 ml) ja jäävettä (1500 ml) ja uutetaan etyyli-. . asetaatilla. Uute pestään vedellä, vesipitoisella 5 % natriumvetykarbonaatilla, 2 % suolahapolla ja kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöi-35 dään. Jäännös kiteytetään dikloorimetaanista, jolloin saadaan (Z)-2-(2-t-butoksi- 36 110322 karbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoetikkahappoa (144 g) värittöminä kiteinä.

Saanto: 91 % sp.: 157 - 158°C

5 NMR δ (CDCI3-CD3SOCD3) ppm: 1,50 (s, 9H), 7,04 (s, 1H), 7,27,4 (m,15H).

IR v (Nujol) cm'1: 3200, 1726, 1697, 1563, 1281, 1243, 1155.

2) (Z)-2-(2-t-Butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-pentenoinihappo

10 ClCH2C0CH2C00Me fl—|K>COOMe H-irC“COOH

S”C(NH2 ) 2 -· HWcHEt -- BocNH-V cHEt

EtCHO

1. Liuokseen, jossa on 4-klooriasetoetikkahappometyyliesteriä (700 mg; 4,65 mmol) 15 ja propionialdehydiä (405 mg; 6,97 mmol) ja etikkahappoa (28 mg; 0,47 mmol) dikloorimetaanissa (3 ml) lisätään liuos, jossa on piperidiiniä (24 mg; 0,28 mmol) dikloorimetaanissa (0,5 ml), ja seosta sekoitetaan -27°C:ssa 120 minuuttia. Reak-tioseos pestään laimealla suolahapolla ja vedellä ja väkevöidään alipaineessa alle 15°C:ssa, jolloin saadaan 4-kloori-2-propylideeniasetoetikkahappometyyliesteriä 20 (818 mg).

: . · Saanto: 92 % NMR δ (CDCIs) ppm: 1,08 (t, J=7,5Hz, 3H), 1,55 (t, J=7,5Hz, 3H), 2,2- 2,8 (m, 2H), : \: 3,78 (s, 3H), 3,82 (s, 3H), 4,35 (s, 2H), 4,40 (s, 2H), 7,0-7,4 (m, 1H).

1 * ,y 25 2. Liuokseen, jossa on 4-kloori-2-propylideeniasetoetikkahappometyyliesteriä t (818 mg; 4,29 mmol) dimetyyliformamidissa (2,1 ml) lisätään natriumbromidia (957 mg; 9,3 mmol), ja seosta sekoitetaan 22°C:ssa 2 tuntia, jolloin saadaan liuos, jossa on 4-bromi-2-propylideeniasetoetikkahappometyyliesteriä.

. \ [NMR δ (CDCI3) ppm: 1,15 (t, J=7,5Hz, 3H), 2,50 (q, J=7,5Hz, 3H), 2,53 (q, :*·· 30 J=7,5Hz, 2H), 3,82 (s, 3H), 3,90 (s, 3H), 4,15 (s, 2H), 4,22 (s, 2H), 7,10 (t, J=7,5Hz, 1H), 7,12 (t, J=7,5Hz, 1H)].

Tämä liuos laimennetaan dikloorimetaanilla (0,7 ml), sekoitetaan liuoksen kanssa, » . . jossa on tioureaa (354 mg; 4,65 mmol) dimetyyliformamidissa (1,4 ml), ja sekoite- ' ·: taan lämpötilassa välillä -15°C ja 30°C 25 minuuttia. Reaktioseos pestään vesipitoi- 35 sella natriumhydroksidilla ja kyllästetyllä suolaliuoksella, väkevöidään alle 15°C:ssa 110322 37 alipaineessa, sekoitetaan asetonin (1,8 ml) kanssa, ja neutraloidaan 35 % suolahapolla. Erotetut kiteet pestään asetonilla ja kuivataan, jolloin saadaan (1)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-pentenoinihappometyyliesterihydrokloridia (452 mg).

Saanto: 43 % 5 sp.: 79 - 80°C (hajaantuminen).

Alkuaineanalyysillä saadaan C9H12N2O2SHCI H20:a vastaavat arvot.

NMR δ (CD3OD) ppm: 1,14 (t, J=8Hz, 3H), 2,61 (qd, J=7,6Hz, 2H), 3,84 (s, 3H), 6,71 (t, J=7,6Hz, 1H), 6,83 (s, 1H).

IR v (CHCh) cm1: 3360, 3095, 1721, 1635, 1592, 1235.

10 3. Liuosta, jossa on (Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-pentenoinihappometyyliesteri-hydrokloridia (550 mg; 2,2 mmol) dikloorimetaanissa (3 ml) ravistellaan 7 % vesipitoisen natriumvetykarbonaatin (3,8 ml) kanssa. Orgaaninen kerros erotetaan ja väkevöidään 1,7 ml:aan. Saatu liuos sekoitetaan liuoksen kanssa, jossa on di-t- 15 butyylidikarbonaattia (0,53 ml; 2,3 mmol = 1,05 ekvivalenttia) ja pyridiiniä (57 pl; 0,72 mmol) tai dimetyyliaminopyridiiniä (27 mg; 0,22 mmol) dikloorimetaanissa (0,8 ml) ja sekoitetaan 25°C:ssa 6 tuntia. Reaktioseos sekoitetaan 1,6 % suolahapon (1,72 ml) kanssa ja sekoitetaan. Orgaaninen kerros erotetaan, pestään vesipitoisella natriumvetykarbonaatilla, kuivataan ja väkevöidään alipaineessa. Jäännös

I I

v, 20 puhdistetaan silikageelillä pylväskromatograafisesti, jolloin saadaan (Z)-2-(2-t- I. butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-pentenoinihappometyyliesteriä (528 mg) ..!! öljynä.

• Saanto: 71 % NMR δ (CDCIs) ppm: 1,10 (t, J=7,6Hz, 3H), 1,52 (s, 9H), 2,42 (qd, J=7,6Hz, 2H), 7' 25 3,85 (s, 3H), 6,76 (t, J=7,6Hz, 1H), 6,89 (s, 1H).

IR v (CHCI3) cm1: 3680, 1723, 1522, 1218.

4. Liuokseen, jossa on (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-pente-noinihappometyyliesteriä (425 mg; 1.4 mmol) isopropanolissa (1,3 ml) ja vedessä 30 (3,7 ml) lisätään natriumhydroksidia (163 mg; 4,1 mmol), ja seosta sekoitetaan 65°C:ssa 90 minuuttia. Reaktioseoksen pH säädetään arvoon 4,7 35 % suolahapolla ; · ja pidetään 20°C:ssa yksi tunti. Erotetut kiteet otetaan talteen suodattamalla, pes- _.!. * tään isopropanolilla ja kuivataan, jolloin saadaan (Z)-2-(2-t-butoksi-karbonyyli- •. · aminotiatsol-4-yyli)-2-pentenoinihappoa (325 mg).

38 1 10322

Saanto: 86 % sp.: 187°C (hajaantuminen).

NMR δ (CDCIs) ppm: 1,09 (t, J=7,6Hz, 3H), 1,55 (s, 9H), 2,64 (qd, J=7,6Hz, 2H), 6,69 (t, J=7,6Hz, 1H), 6,96 (s, 1H).

5 IR v (CHCb) cm1: 3160, 2548br, 1721, 1685, 1556, 1252, 1156.

Valmistusmenetelmä 7 muut muunnokset kefemrenkaassa 1) 76-Amiinin valmistus: Het = l,2,3-triatsol-4-yyli 10

Liuokseen, jossa on 76-fenyyliasetamido-3-(l,2,3-triatsol-4-yyli)tiometyylitio-3- kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (629 m9' ·* mmo0 dikloorimetaa- nissa (7 ml) lisätään jäillä jäähdyttäen pyridiiniä (162 μΙ; 2 mmol) ja fosforipenta-kloridia (380 mg; 1,8 mmol), ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 40 minuut-15 tia. Liuos lisätään tipoittain liuokseen, jossa on 1,3-butaanidiolia (0,46 ml) dikloori-metaanissa (2 ml) -30°C:ssa. Sekoitetaan jäillä jäähdyttäen 30 minuuttia, minkä jälkeen reaktioseos laimennetaan vedellä ja uutetaan dikloorimetaanilla. Uute kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään alipaineessa. Jäännöksestä saadaan jauhe (518 mg), jossa on 78-amino-3-(l,2,3-triatsol-4-yyli)-tiometyylitio-3-kefem-4-,' 20 karboksyylihappodifenyylimetyyliesterihydrokloridia etyyliasetaatti-dikloorimetaa- I, * nista. Tämä jauhe (100 mg) suspentoidaan dikloorimetaanissa, ravistellaan 5 % ,,;; vesipitoisen natriumvetykarbonaatin kanssa, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöi-

I I I

• ', dään alipaineessa. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti, jolloin saadaan 76-amino-3-(l,2,3-triatsol-4-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karboksyylihappo-' ,· 25 difenyylimetyyliesteriä (10 mg).

Saanto: 10 % NMR δ (CDCI3-CD3OD) ppm: 3,61, 3,73 (ABq, J=17Hz, 2H), 4,07, 4,14 (ABq, J=14Hz, 2H), 4,74 (d, J=5Hz, 1H), 4,95 (d, J=5Hz, 1H), 6,96 (s, 1H), 7,2-7,5 (m, 0* 10H), 7,56 (s, 1H).

:' 30 IR v (CHCI3) cm1: 1776,1726.

» · < · 1 t t * Ψ * t 1 t a 39 11G322 2) 76-Amiinin valmistus: Het = trityyli-l,2,3-triatsol-4-yyli 1) Liuokseen, jossa on 78-fenyyliasetamido-3-(l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (10,0 g; 15,9 mmol) dikloorime-5 taanissa (100 ml) lisätään jäillä jäähdyttäen pyridiiniä (1,54 ml; 19,1 mmol) ja tri-tyylikloridia (5,32 g; 19,1 mmol), ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa yksi tunti. Reaktioseos sekoitetaan 10 % suolahapon (2 ml) kanssa, laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Liuokseen, jossa on jäännöstä dikloorimetaanissa (50 ml) lisätään jäil-10 lä jäähdyttäen pyridiiniä (2,57 ml; 31,8 mmol) ja fosforipentakloridia (5,96 g; 28,6 mmol), ja seosta sekoitetaan 30 minuuttia. Reaktioseos lisätään tipoittain liuokseen, jossa on 1,3-butaanidiolia (8,6 ml; 95,9 mmol) dikloorimetaanissa (25 ml) -30°C:ssa, ja seosta sekoitetaan lämpötilassa välillä -20°C ja -30°C 10 minuuttia ja jäillä jäähdyttäen 40 minuuttia. Reaktioseos sekoitetaan veden kanssa, laimenne-15 taan dikloorimetaanilla, pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös jauhetaan eetterin kanssa, pestään eetterillä, liuotetaan dikloorimetaaniin, pestään 5 % vesipitoisella natriumvetykarbonaatilla, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromato-graafisesti (tolueeni: etyyliasetaatti = 2:1), jolloin saadaan 78-amino-3-(trityyli-::: 20 l;2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä l.i (6,70 g; vaalean keltainen vaahto,

Saanto: 56 % j ’ V NMR δ (CDCI3) ppm: 3,62, 3,82 (ABq, J=17,6Hz, 2H), 4,05, 4,16 (ABq, J= 13,4Hz, " ·': 2H), 4,66 (d, J=5,0Hz, 1H), 4,87 (d, J=5,0Hz, 1H), 6,90 (s, 1H), 7,05-7,5 (m, 25H), 0 : 25 7,45 (s, 1H).

IR v (CHCI3) cm1 : 3410, 1782, 1731, 1605, 1496, 1450, 1390, 1368) ja 76-amino-3-(l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyli-esteriä (2,72 g; vaalean keltainen kiteinen jauhe, saanto: 33 % : / · I NMR δ (CDCI3) ppm: 3,58, 3,73 (ABq, J=17,5Hz, 2H), 4,05, 4,14 (ABq, J= 13,7Hz, " 30 2H), 4,73 (d, J=5,0Hz, 1H), 4,94 (d, J=5,0Hz, 1H), 6,97 (s, 1H), 7,25-7,5 (m, 10H), ;··· 7,56 (s, 1H).

•:··; IR v (CHCI3) cm1: 3430, 1780, 1730, 1602, 1495, 1451, 1388, 1362.

sp.: 112- 115°C).

40 1 10322 3) Hapetus sulfoksidiksi

Liuokseen, jossa on 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-oksi-iminoasetamido]-3-metaanisulfonyylioksi-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyyli-5 metyyliesteriä (30,0 g; 30,9 mmol) dikloorimetaanissa (300 ml) -30°C:ssa lisätään m-klooriperbentsoehappoa (7,33 g; puhtaus 80 %; 1,1 ekvivalenttia; 34,0 mmol), ja seosta sekoitetaan lämpötilassa välillä -20°C ja -30°C 20 minuuttia. 20 minuutin kuluttua reaktioseos sekoitetaan vesipitoisen 5 % natriumtiosulfaatin (15 ml) kanssa, laimennetaan dikloorimetaanilla, pestään vesipitoisella 5 % natriumvetykarbonaatilla 10 ja kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä pylväskromatograafisesti (tolueeni: etyyliasetaatti = 5 : 1 - 3 : 1), jolloin saadaan 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetyyliamino]-3-metaanisulfonyylioksi-3-kefem-4-karboksyyliappo-difenyylimetyyliesterin Ιβ-oksidia (28,9 g) vaalean ruskeana vaahtona.

15 Saanto: 95 % NMR δ (CDCIs) ppm: 1,50 (s, 9H), 2,74 (s, 3H), 3,35, 3,89 (ABq, J=18,6 Hz, 2H), 4,55 (d, J=5,0Hz, 1H) 6,31 (dd, J=5,0Hz, J=10,lHz, 1H), 7,00 (s, 2H), 7,15-7,50 (m, 25H), 7,88 (d, J=10,lHz, 1H), 8,33 (bs, 1H).

IR v (CHCIa) cm1: 3400, 1806, 1725, 1687, 1543, 1510, 1493, 1368, 1282, 1227, 20 1188,1154.

..!: ’ 4) Tiolin aikaansaaminen substituutiolla

Liuokseen, jossa on 76-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-:: 25 oksi-iminoasetamido]-3-metaanisulfonyylioksi-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyyli- metyyliesterin Ιβ-oksidia (25,0 g; 25,3 mmol) dimetyyliformamidissa (200 ml) -30°C:ssa lisätään natriumhydrosulfidihydraattia (70 %; 5,07 g; 2,5 ekvivalenttia; 63,4 mmol), ja seosta sekoitetaan lämpötilassa välillä -20°C ja -30°C yksi tunti. Re-aktioseos sekoitetaan 10 % suolahapon (20 ml) kanssa, laimennetaan vedellä ja 30 uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla : “' ja väkevöidään. Jäännös liuotetaan tolueeniin ja väkevöidään kuiviin, jolloin saadaan ·:··.' 76-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetamidi]-3- . ·: \ merkapto-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesterin Ιβ-oksidia (23,3 g; . · · ·. sisältää 8 W/W% tolueenia) keltaisena vaahtona.

41 1 10322

Saanto: 91 % NMR δ (CDCIa) ppm: 1,49 (s, 9H), 3,27, 3,67 (ABq, J=18,4Hz, 2H), 4,50 (d, J=4,8Hz, 1H), 5,12 (bs, 1H), 6,25 (dd, J=4,8Hz, J=10,0Hz, 1H), 6,90 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 7,15-7,61 (m, 25H), 7,84 (d, J=10,0Hz, 1H), 8,41 (bs, 1H).

5 IR v (CHCI3) cm1: 3396, 1799, 1715, 1686, 1543, 1509, 1493, 1445, 1383, 1369, 1277, 1155.

Esimerkki 1 3-substituutio tioliasylaatilla 10 asyyli asyyli -ΝΗ^-γ^ o^N-poso2Me -- SHet COOBh COOBh 15 1) Asyyli = fenyyliasetyyli

Het = l,2,3-triatsol-4-yyli

Liuokseen, jossa on 4-asetyylitiometyylitio-l,2,3-triatsolia (920 mg; 4,87 mmol) di- : V 20 metyyliformamidissa (24 ml) -60°C:ssa lisätään tipoittain liuos, jossa on natriumme- • » : .·' toksidia metanolissa (1,28N: 7,5 ml). Sekoitetaan samassa lämpötilassa 30 minuut- *·· tia, minkä jälkeen lisätään tipottain liuos, jossa on 76-fenyyliasetamido-3-metaani- : ‘ ‘ sulfonyylioksi-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (2,32 g; 4 mmol) dimetyyliformamidissa (8 ml). 30 minuutin kuluttua reaktioseos neutraloidaan 10 % : Y 25 suolahapolla, laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään vedel lä, kuivataan natriumsulfaatilla ja puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti. Jae kiteytetään etyyliasetaatista, jolloin saadaan 76-fenyyliasetamido-3-(l,2,3-triatsol-4-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (1,14 g).

Saanto: 45 % Y’ 30 sp.: 169 - 171°C (hajaantuminen).

. :‘ NMR δ (CDCI3-CD3OD) ppm: 3,52, 3,62 (ABq, J=17Hz, 2H), 3,64 (s, 2H), 4,07, 4,11 .!"; (ABq, J= 14Hz, 2H), 4,95 (d, J=5Hz, 1H), 5,74 (d, J=5 Hz, 1H), 6,92 (s, 1H), 7,2- ,;.· 7,5 (m, 15H), 7,57 (s, 1H), ' Ϋ IR v (KBr) cm1: 3400, 3300, 1784, 1700, 1650, 1520, 1375, 1220, 1770.

35 42 1 10322 2) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-pentenoyyli Het = l,2,3-triatsol-4-yyli 5 Liuokseen, jossa on 4-asetyylitiometyylitio-l,2,3-triatsolia (230 mg; 1,22 mmol) di-metyyliformamidissa (6 ml) lisätään tipoittain 1,26N natriummetoksidia metanolissa (1,9 ml) -60°C:ssa, ja seosta sekoitetaan 20 minuuttia, sekoitetaan liuoksen kanssa, jossa on 76-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-pentenoyyliamino]-3-metaanisulfonyylioksi-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (740 mg; 10 1 mmol) dimetyyliformamidissa (3 ml), ja sekoitetaan samassa lämpötilassa 40 mi nuuttia. Reaktioseos laimennetaan 10 % suolahapolla (2 ml) ja vedellä (30 ml) ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti (tolueeni : etyyliasetaatti = 2:1), jolloin saadaan 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-pentenoyyliamino]-3-15 (l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (553 mg) värittömänä vaahtona.

Saanto: 70 % NMR δ (CDCIa) ppm: 1,14 (t, J=7,6Hz, 3H), 1,54 (s, 9H), 2,55-2,75 (m, 2H), 2,9-3,3 (leveä, 2H), 3,91, 4,07 (ABq, J=12Hz, 2H), 4,98 (d, J=4,4Hz, 1H), 5,5-5,6 (leveä, :, v 20 1H), 6,44 (t, J=7,4Hz, 1H), 6,82 (s, 1H), 6,83 (s, 1H), 7,2-7,5 (m, 10H), 7,62 (s, 1H), 8,11 (d, J=8Hz, 1H).

.; I * IR v (CHCI3) cm1: 3420, 3330, 3150, 1758, 1712, 1665, 1551, 1218, 1155.

: ', 3) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-syklopentyylioksi- iminoasetyyli 0’ 25

Het = l,2,3-triatsol-4-yyli

Liuokseen, jossa on 4-asetyylitiometyylitio-l,2,3-triatsolia (374 mg; 1,98 mmol) dimetyyliformamidissa (9 ml) lisätään tipoittain 1,26N natriummetoksidia metanolissa 30 (3,1 ml), ja seosta sekoitetaan -60°C:ssa 25 minuuttia. Tähän seokseen lisätään ‘ tipoittain liuos, jossa on 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-syklo- : · · ’ pentyylioksi-iminoasetamido]-3-metaanisulfonyylioksi-3-kefem-4-karboksyylihappo- .difenyylimetyyliesteriä (1,20 g; 1,5 mmol) dimetyyliformamidissa (4,5 ml), ja seosta sekoitetaan samassa lämpötilassa 40 minuuttia, sekoitetaan etikkahapon (0,3 ml) 43 110322 kanssa, laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään vedellä, 5 % vesipitoisella natriumvetykarbonaatilla ja vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla, ja puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti (tolueeni: etyyliasetaatti = 3:1 — 2 : 1). Eluointiaines kiteytetään tolueenista ja kiteytetään uudelleen etyyliasetaatis-5 ta, jolloin saadaan 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsoli-4-yyli)-2-syklopen-tyylioksi- iminoasetamido]-3-(l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karbok-syylihappodifenyylimetyyliesteriä (274 mg).

Saanto: 22 % sp.: 198°C (hajaantuminen).

10 NMR δ (CDCI3-CD3OD) ppm: 1,55 (s, 9H), 1,3-2,0 (m, 8H), 3,56, 3,72 (ABq, J=17Hz, 2H), 4,15 (s, 2H), 4,9-5,0 (m, 1H), 5,06 (d, J=4,8Hz, 1H), 5,86 (d, J=4,8Hz, 1H), 6,97 (s, 1H), 7,3-7,5 (m, UH), 7,60 (s, 1H).

IR v (KBr) cm1: 3330, 3200, 1785, 1725, 1698, 1660, 1570, 1525, 1370, 1241, 1220, 1160.

15 4) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-(2-propenyylioksi-imino)asetyyli

Het = l,2,3-triatsol-4-yyli 20 : : Liuokseen, jossa on 4-asetyylitiometyylitio-l,2,3-triatsolia (230 mg; 1,22 mmol) di- T metyyliformamidissa (6 ml) lisätään tipoittain 1,26N natriummetoksidia metanolissa : '. (1,9 ml) -60°C:ssa, ja seosta sekoitetaan samassa lämpötilassa 25 minuuttia ja jäähdytetään -78°C:een. Reaktioseokseen lisätään tipoittain liuos, jossa on 7B-[(Z)-•.: 25 2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-(2-propenyylioksi-imino)asetamido]-3- metaanisulfonyylioksi-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (770 mg; 1 mmol) dimetyyliformamidissa (3 ml), ja seosta sekoitetaan samassa lämpötilassa 40 minuuttia. Reaktioseos laimennetaan IN suolahapolla (2 ml) ja vedellä (50 ml), ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja 30 puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti (tolueeni : etyyliasetaatti = 2:1). Elu-: ” ‘ ointiaines kiteytetään tolueenista, jolloin saadaan 76-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyli- *: · · aminotiatsol-4-yyli)-2-(2propentyylioksi-imino)asetamido]-3-(l,2,3-triatsol-4-yyli- .'. ‘ tiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (415 mg) värittö- '.· minä kiteinä.

110322 44

Saanto: 51 % sp.: 167 - 170°C (hajaantuminen).

NMR δ (CDCI3-CD3OD) ppm: 1,55 (s, 9H), 3,54, 3,69 (ABq, J=17Hz, 2H), 4,16 (s, 2H), 4,82 (d, J=5,8Hz, 2H), 5,07 (d, J=4,6Hz, 1H), 5,26 (dd, j=l,4 Hz, J=10,6Hz, 5 1H), 5,37 (dd, J=l,4Hz, J=17,4Hz, 1H), 5,86 (d, J=4,6Hz, 1H), 6,04 (ddt, J=5,8Hz, J=10,6Hz, J=17,4Hz, 1H), 6,97 (s, 1H), 7,3-7,5 (m, 11 H), 7,60 (s, 1H).

IR v (CHCI3) cm'1: 3400, 3300, 3200, 1782, 1717, 1696, 1658, 1534,1370, 1281, 1240, 1221, 1154.

10 5) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyHaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-imino- asetyyli

Het = l,2,3-triatsol-4-yyli 15 Liuokseen, jossa on 4-asetyylitiometyylitio-l,2,3-triatsolia (11,50 g; 61 mmol) dime-tyyliformamidissa (300 ml) lisätään tipoittain liuos, jossa on natriummetoksidia (1,28 N; 94 ml) metanolissa, lämpötilassa välillä -60°C ja -50°C. Sekoitetaan 20 minuuttia, minkä jälkeen liuos, jossa on 76-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol- 4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetamido]-3-metaanisulfonyylioksi-3-kefem-4-karboksyyli-20 happodifenyylimetyyliesteriä (48,55 g; 50 mmol) dimetyyliformamidissa (190 ml) ! lisätään tipoittain seokseen yli 7 minuutin ajan samassa lämpötilassa. 50 minuutin , · kuluttua reaktioseos laimennetaan etikkahapolla (10 ml) ja vedellä (2 litraa) ja uute- : , taan etyyliasetaatilla. Uute pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natrium- sulfaatilla ja väkevöidään alipaineessa. Jäännös kiteytetään tolueenista ja kiteyte-v 25 tään uudelleen etyyliasetaatin ja tolueenin seoksesta, jolloin saadaan 76-[(Z)-2-(2-t- butoksikarbonyyliamino-4-tiatsolyyli)-2-trityylioksi-iminoasetamido]-3-(l,2,3-triatsol- 4-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä värittöminä kiteinä (29,14 g). f* Saanto: 57 % 30 sp.: 190-200°C (haj.) NMR δ (CDCI3-CD3OD) ppm: 1,53 (s, 9H), 3,45, 3,63 (ABq, J=17,2Hz, 2H), 4,12, < , * ;. 4,15 (ABq, J=14,2Hz, 2H), 5,08 (d, J=5Hz, 1H), 5,88 (d, J=5Hz, 1H), 6,98 (s, 1H), :. * 7,08 (s, 1H), 7,2-7,5 (m, 25H), 7,60 (s, 1H).

45 1 10322 IR v (KBr) cm'1: 3390, 3210, 1800, 1725, 1688, 1555, 1495, 1449, 1375, 1275, 1245, 1225, 1155.

6) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-imino-5 asetyyli

Het = l,2,3-triatsol-4-yyli (tiolibentsoaatin kanssa)

Liuokseen, jossa on 4-bentsoyylitiometyylitio-l,2,3-triatsolia (150 mg; 0,60 mmol) 10 dimetyyliformamidissa (3 ml) -60°C:ssa lisätään liuos, jossa on natriummetoksidia metanolissa (1,26 N; 0,95 ml), ja seosta sekoitetaan 80 minuuttia lämpötilassa välillä -50°C ja -60°C. Seokseen lisätään -70°C:ssa liuos, jossa on 76-[(Z)-2-(2-t-butoksi-karbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetamido]-3-metaanisulfonyylioksi-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (485 mg; 0,5 mmol) dimetyyli-15 formamidissa (2 ml), ja seosta sekoitetaan -70°C:ssa 20 minuuttia. Reaktioseos sekoitetaan etikkahapon (0,1 ml) kanssa, laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös kiteytetään tolueenista, jolloin saadaan 7B-[(Z)-2-(2-t-but-oksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetamido]-3-(l,2,3-triatsol-4-. .: 20 yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (227 mg) värit- :.: : töminä kiteinä.

..! Saanto: 44 % : ‘ ·: NMR δ (CDCI3-CD3OD) ppm: 1,53 (s, 9H), 3,45, 3,63 (ABq, J=17,2Hz, 2H), 4,12, ' 4,15 (ABq, J=14,2Hz, 2H), 5,08 (d, J=5Hz, 1H), 5,88 (d, J=5Hz, 1H), 6,98 (s, 1H), : : 25 7,08 (s, 1H), 7,2-7,5 (m, 25H), 7,60 (s, 1H).

IR v (KBr) cm1: 3390, 3210, 1800, 1725, 1688, 1555, 1495, 1449, 1375, 1275, 1245, 1225, 1155.

46 1 10322 7) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-imino-asetyyli

Het = l-trityyli-l,2,3-triatsol-4-yyli 5

Liuokseen, jossa on 4-asetyylitiometyylitio-l-trityyli-l,2,3thatsolia (25,0 g; 58 mmol) dimetyyliformamidin (300 ml) ja tetrahydrofuraanin (100 ml) seoksessa -78°C:ssa lisätään tipoittain liuos, jossa on natriummetoksidia metanolissa (1,35 N; 37,8 ml; 51 mmol). Sekoitetaan 15 minuuttia, minkä jälkeen liuos, jossa on 78-[(Z)-2-(2-t-10 butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetamido]-3-metaanisulfo-nyylioksi-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (45,0 g; 46,3 mmol) dimetyyliformamidin (120 ml) ja tetrahydrofuraanin (45 ml) seoksessa lisätään seokseen -78°C:ssa yli 5 minuuttia. Sekoitetaan yksi tunti -78°C:ssa, minkä jälkeen reaktioseos laimennetaan 10 % suolahapolla (19 ml) ja vedellä (1,5 I) ja uutetaan 15 etyyliasetaatilla. Uute pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaa-tilla ja väkevöidään alipaineessa. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromatograafi-sesti (tolueeni : etyyliasetaatti = 15 -10 : 1) ja hierretään heksaani-eetterissä, jolloin saadaan 78-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-imino-asetamido]-3-(l-trityyli-l,2,3-triatsol-4-yyli)-tiometyylitio-3-kefem-4-karboksyyli-20 happodifenyylimetyyliesteriä valkoisena jauheena (49,1 g). Saanto: 84 % NMR δ (CDCI3) ppm: 1,50 (s, 9H), 3,31, 3,56 (ABq, J=17Hz, 2H), 4,05 (s, 2H), 4,97 (d, J= 4,8Hz, 1H), 5,84 (dd, J=4,8Hz, J=8,7Hz, 1H), 6,86 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), j 7,05-7,4 (m, 41H), 7,45 (s, 1H), 8,4-8,7 (brs, 1H).

IR v (CHCI3) cm’1: 3400, 1783, 1718, 1685, 1541, 1490, 1443, 1368, 1154.

25 8) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoasetyyli Het = 1 -1 r i tyy I i-l,2,3-triatsol -4-yy I i :. 30 Liuokseen, jossa on 4-asetyylitiometyylitio-l-trityyli-l,2,3-triatsolia (414 mg; : ’ ‘' 0,96 mmol) dimetyyliformamidin (5 ml) ja tetrahydrofuraanin (2,5 ml) seoksessa •:··; lisätään 1,28N natriummetoksidia (0,69 ml; 0,88 mmol) -78°C:ssa, ja seosta sekoite- .taan 12 minuuttia. Tähän seokseen lisätään tipoittain liuos, jossa on 78-[(Z)-2-(2-t-!.. butoksikarbonyy!iaminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoasetyyli]amino-3-metaanisulfo- 47 110322 nyylioksi-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (594 mg; 0,8 mmol) dimetyyliformamidissa (2,5 ml) yli 2 minuuttia, ja seosta sekoitetaan samassa lämpötilassa yksi tunti. Seokseen lisätään 10 % suolahappoa (1 ml) reaktion sammuttamiseksi ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään vedellä, kuivataan natriumsul-5 faatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti (tolu-eeni : etyyliasetaatti = 2:1), jolloin saadaan 78-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliamino-tiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoasetyyli]amino-3-(l-trityyli-l,2,3-triatsol-4-yyli)tio-metyylitio-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyyli-metyyliesteriä valkoisena vaahtona (579 mg).

10 Saanto: 70 % NMR δ (CDCIa) ppm: 1,52 (s, 9H), 3,65, 3,81 (ABq, J=18Hz, 2H), 4,10, 4,19 (ABq, J=12Hz, 2H), 5,02 (d, J=4,8Hz, 1H), 5,90 (dd, J=4,8Hz, J=8,8Hz, 1H), 6,87 (s, 1H), 7,0-7,5 (m, 27H), 8,8 (brs, 1H).

IR v (CHCIa) cm1: 3400, 1780, 1720, 1680, 1540, 1370.

15 9) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-imino-asetyyli

Het = l-metyyli-l,2,3-triatsol-4-yyli 20 :.· Liuokseen, jossa on 4-asetyylitiometyylitio-l-metyyli-l,2,3triatsolia (392 mg; 1,93 mmol) dimetyyliformamidin (6 ml) ja tetrahydrofuraanin (2 ml) seoksessa • *. -78°C:ssa lisätään tipoittain liuos, jossa on 1,28 N natriummetoksidia (1,33 ml; 1,70 mmol) metanolissa. Sekoitetaan 15 minuuttia, minkä jälkeen seokseen lisätään :,: 25 liuos, jossa on 78-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi- iminoasetamido]-3-metaanisulfonyylioksi-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyyli-metyyliesteriä (1,50 g: 1,54 mmol) dimetyyliformamidissa (5 ml). Sekoitetaan yksi tunti samassa lämpötilassa, minkä jälkeen reaktioseos neutraloidaan 10 % suolaha-'*,'· polla, laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään kyllästetyllä :.. 30 suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään alipaineessa. Jäännös ; ‘ puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti (tolueeni : etyyliasetaatti = 3:2), jol- •: · ·; loin saadaan 76-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi- . J. ’ iminoasetamido]-3-(l-metyyli-l,2,3-triatsol-4-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karbok- λ. syylihappodifenyylimetyyliesteriä (1,43 g).

48 1 10322

Saanto: 90 %. Väritön vaahto.

NMR δ (CDCIa) ppm: 1,49 (s, 9H), 3,35, 3,51 (ABq, J=16,8Hz, 2H), 3,92 (s, 3H), 4,08 (s, 2H), 5,06 (d, J=4,7Hz, 1H), 5,91 (dd, J=8,6Hz, J=4,7Hz, 1H), 6,93 (s, 1H), 6,99 (s, 1H), 7,15-7,50 (m, 26H), 7,66 (d, J=8,6Hz, 1H), 8,83 (brs, 1H).

5 IR v (CHCh) cm1 : 3390, 1781, 1714, 1684, 1540, 1490, 1443, 1366, 1281, 1218, 1153, 970.

10) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-imino-asetyyli 10

Het = 2-metyyli-l,2,3-triatsol-4-yyli

Liuokseen, jossa on 4-asetyylitiometyylitio-2-metyyli-l,2,3-triatsolia (392 mg; 1,93 mmol) dimetyyliformamidin (8 ml) ja tetrahydrofuraanin (4 ml) seoksessa lisä-15 tään tipoittain liuos, jossa on 1,28 N natriummetoksidia (1,33 ml; 1,70 mmol) meta- nolissa -78°C:ssa, ja seosta sekoitetaan 15 minuuttia. Seokseen lisätään liuos, jossa on 76-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoaset-amido]-3-metaanisulfonyylioksi-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (1,50 g; 1,54 mmol) dimetyyliformamidissa (5 ml). Sekoitetaan yksi tunti samassa 20 lämpötilassa, minkä jälkeen reaktioseos neutraloidaan 10 % suolahapolla, laimenne- i.: taan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, ..!:' kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään alipaineessa. Jäännös puhdistetaan sili- : ‘. kageelillä kromatograafisesti (n-heksaani: etyyli asetaatti = 1:1), jolloin saadaan 78-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetyyli-: 25 amino]-3-(2-metyyli-l,2,3-triatsol-4'yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karboksyylihappo- difenyylimetyyliesteriä (1,45 g) värittömänä vaahtona.

Saanto: 91 %.

NMR δ (CDCI3) ppm: 1,50 (s, 9H), 3,32, 3,43 (ABq, J=16,8Hz, 2H), 3,98 (s, 2H), 4,10 (s, 3H), 5,07 (d, J=4,9Hz, 1H), 5,86 (dd, J=8,3Hz, J=4,9Hz, 1H), 6,90 (s, 1H), 30 6,99 (s, 1H), 7,15-7,45 (m, 25H), 7,49 (s, 1H), 7,61 (d, J=8,3Hz, 1H), 8,85 (brs, c’ 1H)· IR v (CHCI3) cm1: 3402, 1785, 1717, 1686, 1543, 1493, 1445, 1369,1280, 1155, .·ί·* 1115,1079,972,910.

49 110322 11) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-imino- asetyyli

Het = l-trityyli-l,2,4-triatsol-3-yyli 5

Liuokseen, jossa on 3-asetyylitiometyylitio-l-trityyli-l,2,4-triatsolia (1,17 g; 2,71 mmol) dimetyyliformamidin (10 ml) ja tetrahydrofuraanin (5 ml) seoksessa lisätään tipoittain liuos, jossa on natriummetoksidia metanolissa (1,28N; 2,0 ml; 2,56 mmol) -78°C:ssa, ja seosta sekoitetaan 15 minuuttia. Tähän seokseen lisätään 10 tipoittain liuos, jossa on 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetamido]-3-metaanisulfonyylioksi-3-kefem-4-karboksyylihappo-difenyylimetyyliesteriä (2,40 g; 2,47 mmol) dimetyyliformamidissa (5 ml). Sekoitetaan 50 minuuttia samassa lämpötilassa, minkä jälkeen reaktio sammutetaan 10 % suolahapolla (0,95 ml), laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pes-15 tään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään alipaineessa. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti (tolueeni: etyyliasetaatti = 3:1), jolloin saadaan 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetamido]-3-(l-trityyli-l,2,4-triatsol-3-yyli)tiometyylitio-3-kefem- 4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä värittömänä vaahtona (1,93 g).

20 NMR δ (CDCI3) ppm: 1,50 (s, 9H), 3,30, 3,41 (ABq, J=17,4Hz, 2H), 4,17 (s, 2H), 4,95 (d, J= 4,9Hz, 1H), 5,90 (dd, J=4,9Hz, J=8,5Hz, 1H), 6,94 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 7,05-7,55 (m, 41H), 7,89 (s, 1H), 8,4-8,6 (brs, 1H).

: '! IR v (CHCI3) cm1: 3398, 1781, 1715, 1683, 1540, 1490, 1442, 1367, 1270, 1154.

25 12) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-imino- asetyyli

Het = 5-tetratsolyyli 30 Liuokseen, jossa on 5-asetyylitiometyylitiotetrasolia (478 mg; 2,52 mmol) dimetyyliformamidissa (30 ml) lisätään -70°C:ssa jäähdyttäen tipoittain liuos, jossa on 1,26 N natriummetoksidia metanolissa (3,9 ml), ja seosta sekoitetaan lämpötilassa välillä • J ·’ -60°C ja -65°C 25 minuuttia. Jäähdyttäen -70°C:ssa reaktioseokseen lisätään tipoit- , · · . tain liuos, jossa on 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi- 110322 50 iminoasetyyli]amino-3-metaanisulfonyylioksi-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyyli-metyyliesteriä (2,00 g; 2,06 mmol) dimetyyliformamidissa (7 ml), ja seosta sekoitetaan lämpötilassa välillä -65°C ja -70°C 40 minuuttia. Reaktioseos sekoitetaan 10 % suolahapon (0,5 ml) kanssa, laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute 5 pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla, suodatetaan ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä pylväskromatograafisesti (tolueeni: etyyliasetaatti = 1:1- etyyliasetaatti - etyyliasetaatti sisältää 0,5 % etikkahappoa), jolloin saadaan 78-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetyyli]amino-3-(tetratsol-5-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karboksyylihappo-10 difenyylimetyyliesteriä vaalean keltaisena vaahtona (968 mg), jossa on tunnistamatonta sivutuotetta (noin 10 %).

NMR δ (CDCI3-CD3OD) ppm: 1,52 (s, 9H), 3,58, 3,71 (ABq, J=17,6Hz, 2H), 4,46 (s, 2H), 5,10 (d, J=4,8Hz, 1H), 5,99 (d, J=4,8Hz, 1H), 6,95 (s, 1H), 7,06 (s, 1H), 7,15- 7,50 (m, 25H).

15 IR v (CHCI3) cm1: 3402, 3200br, 1786, 1717, 1672, 1544, 1492, 1446, 1369, 1280, 1154.

13) Asyyli = 2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetyyli 20 Het = 2-pyridyyli : Liuokseen, jossa on 2-asetyylitiometyylitiopyridiiniä (249 mg; 1,25 mmol) dimetyyli- : . formamidin (4 ml) ja tetrahydrofuraanin (2 ml) seoksessa lisätään -78°C:ssa jääh dyttäen tipoittain 1,26N natriummetoksidi-metanoliliuos (0,87 ml; 1,10 mmol), ja :: 25 seosta sekoitetaan -78°C:ssa 15 minuuttia. Tähän reaktioseokseen lisätään liuos, jossa on 78-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-imino-asetamido]-3-metaanisulfonyylioksi-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyli-esteriä (971 mg; 1,00 mmol) dimetyyliformamidissa (2 ml), ja seosta sekoitetaan -78°C:ssa yksi tunti. Reaktioseos sekoitetaan 10 % suolahapolla reaktion pysäyttämi-30 seksi, laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään laimealla vesipitoisella natriumvetykarbonaatilla ja kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan nat-•: · · riumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti (tolueeni : etyyliasetaatti = 4:1) ja silikageelillä uudelleen kromatograafisesti (tolu-> i ·. eeni : etyyliasetaatti = 7:1), jolloin saadaan 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliamino- 110322 51 tiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetamido]-3-(pyrid-2-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä värittömänä vaahtona (753 mg).

Saanto: 73 % NMR δ (CDCI3) ppm: 1,51 (s, 9H), 3,42, 3,56 (ABq, J=17,2Hz, 2H), 4,45 (s, 2H), 5 5,04 (d, J=4,9Hz, 1H), 5,87 (dd, J=4,9Hz, J=8,6Hz, 1H), 6,90 (s, 1H), 7,01 (ddd, J=7,4Hz, J=4,9Hz, J=l,0Hz, 1H), 7,03 (s, 1H), 7,11-7,53 (m, 28H), 8,41 (ddd, J=4,9Hz, J=l,8Hz, J=l,0Hz, 1H), 8,55 (brs, 1H).

IR v (CHCI3) cm'1: 3402, 1784, 1717, 1686, 1574, 1543, 1514, 1493, 1450, 1369, 1282, 1154.

10

Esimerkki 2 3-substituutio jodidilla O 0 I asyyli -ΝΗ'γ-γ^, asyyli O^-f^SAg -- (^N'fV'SHet 15 COOBh OOOBh i 1) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-imino-asetyyli :V 20

» I

: ‘ Het = trityyli-l,2,4-triatsol-3-yyli

Suspensioon, jossa on trityyli-3-kloorimetyylitio-l,2,4-triatsolia (11,75 g; 30,0 mmol) asetonissa (150 ml) lisätään natriumjodidia (9,00 g; 60,0 mmol), ja seosta sekoite-; ’ 25 taan 50°C:ssa 3 tuntia. Reaktioseos laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatil la. Uute pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöi-dään, jolloin saadaan trityyli-3-jodimetyylitio-l,2,4-triatsolia keltaisina kiteinä [NMR δ (CDCI3) ppm: 4,70 (s, 2H), 7,1 - 7,2 (m, 6H), 7,3 - 7,4 (m, 9H), 7,96 (s, 1H); 13 g], 30 Liuokseen, jossa on 76-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-oksi-iminoasetyyliamino]-3-argentiotio-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyli-’’ esterin 1-oksidia (16,8 g; 15 mmol) heksametyylifosforiamidissa (90 ml) lisätään trityyli-3jodimetyylitio-l,2,4-triatsolia (13 g), ja seosta sekoitetaan huoneenlämpöti-'lassa 3 tuntia. Reaktioseos laimennetaan etyyliasetaatilla, sekoitetaan kyllästetyn 35 suolaliuoksen kanssa ja suodatetaan seliitin läpi. Orgaaninen kerros erotetaan, pes- 110322 52 tään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti (tolueeni : etyyliasetaatti = 5:1-3 : 1), jolloin saadaan 78-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-okSHminoasetyyliamino]-3-(trityyli-l,2,4-triatsol-3-yylitiometyyiitio)-3-kefem-4-5 karboksyylihappodifenyylimetyyliesterin 1-oksidia (11,29 g) vaalean ruskeana vaahtona.

Saanto: 59 %.

NMR δ (CDCI3) ppm: 1,49 (s, 9H), 3,19, 3,82 (ABq, J=18,5Hz, 2H), 4,19 (d, J=4,6Hz, 1H), 4,16, 4,22 (ABq, J=13,7Hz, 2H), 6,19 (dd, J=4,6Hz, J=10,lHz, 1H), 10 6,97 (s, 1H), 7,05-7,5 (m, 41H), 7,90 (s, 1H), 8,04 (d, J=10,lHz, 1H), 8,30 (brs, 1H).

IR v (CHCI3) cm'1: 3400, 1804, 1725, 1689, 1543, 1496, 1449, 1371, 1040.

2) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-imino-15 asetyyli f

Het = l-metyyli-l,2,4-triatsol-3-yyli

Liuokseen, jossa oli 76-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-:;. 20 oksi-iminoasetyyliamino]-3-argentiotio-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyli- esterin 1-oksidia (3,37 g; 3 mmol) heksametyylifosforiamidissa (20 ml) lisätään ..! i 3-jodimetyylitio-l-metyyli-l,2,4-triatsolia (1,50 g), ja seosta sekoitetaan huoneen- f · < i lämpötilassa 3 tuntia. Reaktioseos laimennetaan kyllästetyllä suolaliuoksella ja etyy liasetaatilla ja suodatetaan liukenemattoman aineksen poistamiseksi. Orgaaninen 25 kerros erotetaan, pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti (tolueeni : etyyliasetaatti = 1:1), jolloin saadaan 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetyyliamino]-3-(l-metyyli-l,2,4-triatsol-3-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesterin 1-oksidia (1,82 g) keltaisen rus-30 keana vaahtona.

Saanto: 58 %.

NMR δ (CDCU) ppm: 1,46 (s, 9H), 3,76 (s, 3H), 3,49, 4,12 (ABq, J=18,4Hz, 2H), . · I · ‘ 4,28 (s, 2H), 4,46 (d, J=4,8Hz, 1H), 6,24 (dd, J=4,8Hz, J=9,8Hz, 1H), 6,93 (s, 1H), 110322 53 6,98 (s, 1H), 7,2-7,55 (m, 25H), 7,91 (s, 1H), 8,02 (d, J=9,8 Hz, 1H), 8,66 (brs, 1H).

IR v (CHCI3) cm-1: 3410, 1803, 1724, 1689, 1545, 1510, 1497, 1450, 1372, 1042.

5 3) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-imino- asetyyli

Het = 2-metyyli-l,2,4-triatsol-3-yyli 10 Liuokseen, jossa on 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-oksi-iminoasetyyliamino]-3-argentiotio-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyli-esterin 1-oksidia (3,37 g; 3 mmol) heksametyylifosforiamidissa (20 ml) lisätään liuos, jossa on 3-jodimetyylitio-2-metyyli-l,2,4-triatsolia (1,47 g) heksametyylifosforiamidissa (3 ml), ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 3 tuntia. Reaktioseos 15 laimennetaan kyllästetyllä suolaliuoksella ja etyyliasetaatilla ja suodatetaan liukenemattoman aineksen poistamiseksi. Orgaaninen kerros erotetaan, pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti (tolueeni: etyyliasetaatti = 1:1), jolloin saadaan 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetyyli-' ·. 20 amino]-3-(2-metyyli-l,2,4-triatsol-3-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappo- I difenyylimetyyliesterin 1-oksidia (1,76 g) ruskeana vaahtona.

. *· Saanto: 56 %.

! \ NMR δ (CDCI3) ppm: 1,47 (s, 9H), 3,66 (s, 3H), 3,47, 3,97 (ABq, J=18,8Hz, 2H), 4,38 (d, J=4,8Hz, 1H), 4,22, 4,48 (ABq, J=13,7Hz, 2H), 6,25 (dd, J=4,8 Hz, ν' 25 J=10,0Hz, 1H), 6,96 (s, 1H), 6,97 (s, 1H), 7,2-7,5 (m, 25H), 7,79 (s, 1H), 8,02 (d, J=10,0Hz, 1H), 8,59 (brs, 1H).

IR v (CHCfe) cm'1: 3400, 1805, 1722, 1688, 1542, 1509, 1496, 1449, 1371, 1041.

i * > t · > » * * · I » • · » 4) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-imino- asetyyli 54 110322

Het = l,2,3-tiadiatsol-5-yyli 5

Liuokseen, jossa on 76-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli- oksi-iminoasetyyli]amino-3-merkapto-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyli-esterin Ιβ-oksidia (puhtaus 92 %; 3,0 g; 3,0 mmol) tetrahydrofuraanissa (20 ml) lisätään liuos, jossa on hopeanitraattia (560 mg; 3,3 mmol) vedessä (3 ml), ja seos-10 ta sekoitetaan jäillä jäähdyttäen 20 minuuttia. Reaktioseos laimennetaan vedellä ja uutetaan dikloorimetaanilla. Uute pestään kerran vedellä, kuivataan natriumsulfaatil-la, suodatetaan ja väkevöidään, jolloin saadaan 78-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyli-aminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetyyli]amino-3-argentiotio-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesterin 16-oksidia (3,37 g) keltaisen ruskeana vaah-15 tona. Liuokseen, jossa on tätä hopeasuolaa heksametyylifosforiamidissa (20 ml) lisätään liuos, jossa on 5-jodimetyylitio-l,2,3-tiadiatsolia (1,55 g) heksametyylifosforiamidissa (3 ml), ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 3 tuntia. Reaktioseos sekoitetaan kyllästetyn suolaliuoksen kanssa ja uutetaan etyyliasetaatilla. Liukenematon aines erotetaan suodattamalla, minkä jälkeen uute pestään vedellä, kuiva-v, 20 taan natriumsulfaatilla, suodatetaan ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silika- • geelillä pylväskromatograafisesti (tolueeni : etyyliasetaatti = 3:1-2: 1), jolloin * ,] * saadaan 78-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-imino- » · asetyyli]amino-3-(l,2,3-tiadiatsol-5-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karboksyylihappo-difenyylimetyyliesterin lB-oksidia (1,49 g) vaaleahkona jauheena.

25 Saanto: 47 % NMR δ (CDCIs) ppm: 1,48 (s, 9H), 3,23, 3,91 (ABq, J=17,6Hz, 2H), 3,91, 4,09 (ABq, J= 14,1Hz, 2H), 4,49 (d, J=4,8Hz, 1H), 6,31 (dd, J=4,8Hz, J=10,0Hz, 1H), 6,98 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 7,15-7,5 (m, 25H), 7,96 (d, J=10,0Hz, 1H), 8,45 (brs, 1H), 8,47 (s, 1H).

30 IR v (CHCI3) cm1: 3400, 1804, 1718, 1690, 1543, 1510, 1493, 1446, 1369, 1226, 1154, 1031.

’ I I

1 1

( I I

I I I

5) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-imino- asetyyli 55 110322

Het = l,3,4-tiadiatsol-2-yyli 5 1. Liuokseen, jossa on 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-tri-tyylioksi-iminoasetamido]-3-merkapto-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyli-esterin Ιβ-oksidia (2,78 g; 3 mmol) tetrahydrofuraanissa (20 ml) lisätään liuos, jossa on hopeanitraattia (560 mg; 1,1 ekvivalenttia; 3,3 mmol) vedessä (3 ml) jäillä 10 jäähdyttäen. 10 minuutin kuluttua reaktioseos laimennetaan vedellä ja uutetaan dikloorimetaanilla. Uute pestään vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöi-dään, jolloin saadaan jäännöstä (3,4 g) ruskeana vaahtona. Suspensioon, jossa on tätä hopeasuolaa heksametyylifosforiamidissa (20 ml) lisätään 2-jodimetyylitio-! 1,3,4-tiadiatsolia (1,2 g) huoneenlämpötilassa ja seosta sekoitetaan 17 tuntia. Reak- 15 tioseos laimennetaan kyllästetyllä suolaliuoksella ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute suodatetaan kiinteän aineen poistamiseksi, pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kroma-tograafisesti (tolueeni : etyyliasetaatti = 3 : 1 - 2 : 1), jolloin saadaan 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetamido]-3-(l,3,4-1 20 tiadiatsol-2-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesterin 1B- ’ .' oksidia (776 mg) as vaalean ruskeana vaahtona.

·_· Saanto: 25 % ;..;. NMR δ (CDCIs) ppm: 1,49 (s, 9H), 3,74, 3,98 (ABq, J=18Hz, 2H), 4,29, 4,84 (ABg, . ·. · ’ J= 14Hz, 2H), 4,55 (d, J=4,8Hz, 1H), 6,27 (dd, J= 4,8Hz, J=10Hz, 1H), 6,98 (s, 25 1H), 7,00 (S, 1H), 7,2-7,5 (m, 25H), 7,86 (d, J=10Hz, 1H), 8,45 (brs, 1H), 9,00 (s, 1H).

IR v (CHCI3) cm1: 3400, 1802, 1718, 1688, 1544, 1369, 1154.

. · · · * 2. Liuos, jossa on 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi- 30 iminoasetamido]-3-merkapto-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesterin 1β- oksidin hopeasuolaa (0,2 g) heksametyylifosforiamidissa (2 ml) jaetaan kahteen annokseen, toiseen lisätään 2-kloorimetyylitio-l,3,4-tiadiatsolia (0,05 g) ja toiseen : 2-bromimetyylitio-l,3,4-tiadiatsolia (0,05 g). Seisotetaan huoneenlämpötilassa 10 tuntia, minkä jälkeen kummankin annoksen ohutkerroskromatografia (tolueeni: 110322 56 etyyliasetaatti = 2 : 1) antaa saman Rf-arvon kappaleessa 1 kuvatun tuotteen kanssa (rf = 0,2).

3. 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoaset- 5 amido]-3-merkapto-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesterin ^'Oksidia (1,85 g; 2 mmol) lisätään liuokseen, jossa on 2-jodimetyylitio-l,3,4-tiadiatsolia (675 mg; 2,6 mmol) dimetyyliformamidissa (10 ml) -50°C:ssa. Seokseen lisätään tipoittain pyridiiniä (0,21 ml; 2,6 mmol), ja seosta sekoitetaan -50°C:ssa yksi tunti. Reaktioseos sekoitetaan IN suolahapon (3 ml) kanssa, laimennetaan vedellä ja uu-10 tetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja väke-vöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti (tolueeni: etyyliasetaatti = 3 : 1 - 2 : 1), jolloin saadaan 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetamido]-3-(l,3,4-tiadiatsol-2-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesterin lB-oksidia vaalean ruskeana vaahtona 15 (305 mg). Saanto: 15 % 6) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-imino-asetyyli ; ‘ i 20 Het=2-metyyli-l,3,4-tiadiatsol-5-yyli : · ‘! _ Liuokseen, jossa on 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli- ' _ '. oksi-iminoasetamido]-3-merkapto-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyli- _ · . esterin lB-oksidia (1,85 g; 2 mmol) tetrahydrofuraanissa (12 ml) lisätään liuos, jos- 25 sa on hopeanitraattia (373 mg; 1,1 ekvivalenttia; 2,2 mmol) vedessä (2 ml) jäillä jäähdyttäen, ja seosta sekoitetaan 10 minuuttia. Reaktioseos laimennetaan vedellä ja uutetaan dikloorimetaanilla. Uute pestään vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja t . väkevöidään, jolloin saadaan hopeasuolaa ruskeana vaahtona (2,1 g). Suspensioon, • ·. ’ jossa on tätä suolaa heksametyylifosforotriamidissa (10 ml) lisätään 5-jodimetyylitio- • 30 2-metyyli-l,3,4-tiadiatsolia (1,05 g), ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 4 tuntia. Reaktioseos laimennetaan kyllästetyllä suolaliuoksella ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute suodatetaan kiinteän aineen poistamiseksi, pestään kyllästetyllä suola-:,: : liuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silika- geelillä kromatograafisesti (tolueeni: etyyliasetaatti = 3 : 1 - 2 : 1), jolloin saadaan 110322 57 76-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetamido]-3-(2-metyyli-l,3,4-tiadiatsol-5-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyyli-metyyliesterin 16-oksidia vaalean keltaisena vaahtona (382 mg).

Saanto: 18 % 5 NMR δ (CDCI3) ppm: 1,49 (s, 9H), 2,68 (s, 3H), 3,76, 3,97 (ABq, J=19Hz, 2H), 4,23, 4,75 (ABq, J=14Hz, 2H), 4,60 (d, J=4,6Hz, 1H), 6,28 (dd, J=4,6 Hz, J=10Hz, 1H), 6,97 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 7,2-7,5 (m, 25H), 7,89 (d, J=10 Hz, 1H), 8,5 (brs, 1H).

IR v (CHCI3) cm1: 3400, 1802, 1718, 1686, 1543, 1369, 1218, 1154.

10 7) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-imino- asetyyli

Het = l-metyyli-5-tetratsolyyli 15 1. Liuokseen, jossa on 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli- oksi-iminoasetyyli]amino-3-merkapto-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyli-esterin lB-oksidia (puhtaus 92 %; 3,0 g; 3,0 mmol) tetrahydrofuraanissa (20 ml) lisätään liuos, jossa on hopeanitraattia (560 mg; 3,3 mmol) vedessä (3 ml) jäillä jäähdyttäen, ja seosta sekoitetaan 20 minuuttia. Reaktioseos laimennetaan vedellä .' ! 20 ja uutetaan dikloorimetaanilla. Uute pestään vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla, suodatetaan ja väkevöidään, jolloin saadaan 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliamino-!!'; tiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetyyli]amino-3-argentiotio-3-kefem-4-karboksyyli- happodifenyylimetyyliesterin lB-oksidia keltaisena ruskeana vaahtona (3,37 g).

25 2. Liuokseen, jossa on tätä hopeasuolaa heksametyylifosforiamidissa (20 ml) lisä tään liuos, jossa on 5-jodimetyylitio-l-metyylitetrasolia (1,33 g) heksametyylifosforiamidissa (3 ml), ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 16 tuntia. Reaktioseos . . laimennetaan kyllästetyllä suolaliuoksella ja uutetaan etyyliasetaatilla. Liukenematon ’.. aines erotetaan suodattamalla, minkä jälkeen uute pestään vedellä, kuivataan natri- · 30 umsulfaatilla, suodatetaan ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä pyl- väskromatograafisesti (tolueeni : etyyliasetaatti = 3 : 1 - 2 : 1), jolloin saadaan 76-] [(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetyyli]amino-3- : t: (l-metyyli-5-tetratsolyyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyli- : . esterin 16-oksidia ruskeana vaahtona (773 mg).

58 1 10322

Saanto: 24 % NMR δ (CDCI3) ppm: 1,48 (s, 9H), 3,75 (s, 3H), 3,73, 3,89 (ABq, J=17,6 Hz, 2H), 4,22, 4,76 (ABq, J=14,2Hz, 2H), 4,50 (d, J=4,6Hz, 1H), 6,27 (dd, J=4,6Hz, J=10,2Hz, 1H), 6,97 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 7,10-7,50 (m, 25H), 7,73 (d, J=10,2Hz, 5 1H), 8,48 (brs, 1H).

IR v (CHCI3) cm'1: 3400, 1802, 1718, 1686, 1543, 1510, 1493, 1446, 1369, 1275, 1227, 1154, 1031.

8) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-imino-asetyyli 10

Het = 2-metyylitetratsol-5-yyli

Liuokseen, jossa on 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-oksi-iminoasetyyliamino]-3-argentiotio-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyli-15 esterin 1-oksidia (3,37 g; 3 mmol) heksametyylifosforiamidissa (20 ml) lisätään liuos, jossa on 5-jodimetyylitio-2-metyylitetrasolia (1,43 g) heksametyylifosforiamidissa (3 ml), ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 3 tuntia. Reaktioseos laimennetaan kyllästetyllä suolaliuoksella ja etyyliasetaatilla ja suodatetaan. Suodoksen or-, , gaaninen kerros erotetaan, pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natrium- 20 sulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti (tolueeni : etyyliasetaatti = 4 : 1 - 3 : 1), jolloin saadaan 78-[(Z)-2-(2-t-butoksikar-!:': bonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetyyliamino]-3-(2-metyylitetratsol-5- yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesterin 1-oksidia . . (1,43 g) keltaisena vaahtona.

25 Saanto: 45 % NMR δ (CDCI3) ppm: 1,47 (s, 9H), 3,50, 4,02 (ABq, J=17,9Hz, 2H), 4,22 (s, 3H), 4,24, 4,41 (ABq, J=13,9Hz, 2H), 4,49 (d, J=4,8Hz, 1H), 6,27 (dd, J=4,8 Hz, J=10,0Hz, 1H), 6,95 (s, 1H), 6,99 (s, 1H), 7,2-7,5 (m, 25H), 7,91 (d, J= 10,0Hz, 1H), 8,45 (brs, 1H).

30 IR v (CHCI3) cm1: 3410, 1806, 1725, 1690, 1543, 1510, 1496, 1450, 1382, 1372, :·.· 1320, 1044.

59 1 10322

Esimerkki 3 muunnokset Het:ssä 1) Trityylin poistaminen trityyli-l,2,4-triatsolirenkaasta 5 Liuokseen, jossa on 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-oksi-iminoasetyyliamino]-3-(trityyli-l,2,4-triatsol-3-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesterin 1-oksidia (11,3 g) asetonissa (60 mi) lisätään jäillä jäähdyttäen tolueeni-p-sulfonihappomonohydraattia (1,68 g; 8,83 mmol), ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 4 tuntia. Reaktioseos laimennetaan etyy-10 liasetaatilla, pestään vesipitoisella 5 % natriumetykarbonaatilla ja kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silika-geelillä kromatograafisesti (tolueeni: etyyliasetaatti = 1 : 1 -1: 2), jolloin saadaan 76-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetyyli-amino]-3-(l,2,4-triatszol-3-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyyli-15 metyyliesterin 1-oksidia (2,84 g) ruskeana vaahtona.

Saanto: 31 % NMR δ (CDCI3-CD3OD) ppm: 1,51 (s, 9H), 3,58, 4,06 (ABq, J=17,8Hz, 2H), 4,30 (s, 2H), 4,62 (d, J=4,7Hz, 1H), 6,22 (d, J=4,7Hz, 1H), 6,89 (s, 1H), 7,03 (s, 1H), 7,15- 7,4 (m, 25H), 8,01 (s, 1H).

j ‘ . 20 IR v (CHCI3) cm1: 3380, 3200br, 1803, 1720, 1690, 1547, 1510, 1497, 1450, 1372, 1040.

2) 1,2,3-Triatsolirenkaan metyloinnit asemissa 1, 2 ja 3 25 Liuokseen, jossa on 78-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-oksi-iminoasetamido]-3-(l,2,3-triatsol-4-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karboksyyli-happodifenyylimetyyliesteriä (6,00 g; 5,87 mmol) dikloorimetaanin (60 ml) ja tetra-hydrofuraanin (30 ml) seoksessa lisätään -50°C:ssa di-isopropyylietyyliamiinia (1,12 g; 6,43 mmol). Sekoitetaan lämpötilassa välillä -40°C ja -50°C 3 minuuttia, ’ . 30 minkä jälkeen seokseen lisätään trifluorimetaanisulfonihappometyyliesteriä (0,73 ml; 6,45 mmol). Sekoitetaan samassa lämpötilassa 30 minuuttia, minkä jälkeen reaktioseos sammutetaan 10 % suolahapolla (2,4 ml), laimennetaan vedellä ja uutetaan : i etyyliasetaatilla. Uute pestään vedellä ja kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan nat- : . riumsulfaatilla ja väkevöidään alipaineessa. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kro- 110322 60 matograafisesti (tolueeni : etyyliasetaatti = 3 : 2), jolloin saadaan 76-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetamido]-3-(3-metyyli- l,2,3-triatsol-4-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä [1,84 g; saanto: 30 % 5 NMR δ (CDCI3-CD3OD) ppm: 1,52 (s, 9H), 3,43, 3,55 (ABq, J=17,3Hz, 2H), 3,87, 3,94 (ABq, J=13,7Hz, 2H), 3,95 (s, 3H), 5,12 (d, J=4,8Hz, 1H), 5,99 (d, J= 4,8Hz, 1H), 6,96 (s, 1H), 7,06 (s, 1H), 7,15-7,50 (m, 25H), 7,73 (s, 1H).

IR v (CHCI3) cm'1: 3398, 3300, 1784, 1714, 1683, 1540, 1490, 1443, 1366, 1277, 1220, 1153, 1114, 1077, 970, 910.], 76-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-10 yyli)-2-trityylioksi-iminoasetamido]-3-(l-metyyli-l,2,3-triatsol-4-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (2,71 g; saanto: 46 %) ja 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliamino-4-tiatsolyyli)-2-trityylioksi-iminoasetarnido]-3-(2-metyyli-l,2,3-triatsol-4-yyli)-tiometyylitio-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyyli-metyyliesteriä (0,51 g; saanto: 8 %).

15 3) 1,2,4-Triatsolirenkaan metyloinnit

Liuokseen, jossa on 78-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetyyliamino]-3-(l,2,4-triatsol-3-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-, ; 20 karboksyylihappodifenyylimetyyliesterin 1-oksidia (2,71 g; 2,61 mmol) tetrahydrofu- raanissa (50 ml) -78°C:ssa lisätään liuos, jossa on litiumbis(trimetyylisilyyli)amidia tetrahydrofuraanissa (IM; 2,9 ml), ja seosta sekoitetaan -78°C:ssa 10 minuuttia, ' ' sekoitetaan trifluorimetaanisulfonihappometyyliesterin (0,33 ml; 2,92 mmol) kanssa, , . ja sekoitetaan -78°C:ssa 30 minuuttia. Reaktioseos sekoitetaan 10 % suolahapon 25 (2,1 ml) kanssa, laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään vesipitoisella natriumvetykarbonaatilla ja kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan nat-riumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti (etyyliasetaatti), jolloin saadaan 7B-[(Z)- 2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-!.. yyli)-2-trityylioksMminoasetyyliamino]-3-(4-metyyli-l,2,4-triatsol-3-yylitiometyylitio)- ': . 30 3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesterin 1-oksidia (0,73 g) vaalean rus keana vaahtona.

Saanto: 27 % 110322 61 NMR δ (CDCI3-CD3OD) ppm: 1,51 (s, 9H), 3,31 (s, 3H), 3,85 (s, 2H), 4,12, 4,70 (ABq, J=14,6Hz, 2H), 4,74 (d, J=4,8Hz, 1H), 6,26 (d, J=4,8Hz, 1H), 6,96 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 7,2-7,5 (m, 25H), 8,11 (brs, 1H).

IR v (CHCI3) cm1: 3400, 1805, 1722, 1690, 1545, 1507, 1497, 1450, 1372, 1040.

5

Esimerkki 4 sulfoksidi 0 asyyli '»»γΥ5] 10 »J-Vs^SIfat — O^V5''31'* COOBh COOBh 1) Pelkistys: Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetyyli 15

Het = l-metyyli-l,2,4-triatsol-3-yyli

Liuokseen, jossa on 76-(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetyyliamino]-3-(l-metyyli-l,2,4-triatsol-3-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-20 karboksyylihappodifenyylimetyyliesterin 1-oksidia (1,78 g; 1,69 mmol) dimetyylifor-mamidissa (15 ml) -20°C:ssa lisätään fosforitrikloridia (0,42 ml; 4,18 mmol), ja seos-ta sekoitetaan samassa lämpötilassa 20 minuuttia. Reaktioseos kaadetaan kahteen ; ’· kerrokseen kylmää vesipitoista natriumvetykarbonaattia ja etyyliasetaattia. Orgaani- ,nen kerros erotetaan, pestään vedellä ja kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan nat-25 riumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti (tolueeni : etyyliasetaatti = 2:1), jolloin saadaan 78-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyli-aminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetamido]-3-(l-metyyli-l,2,4-triatsol-3-yyli-tiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (1,59 g) ruskeana vaahtona.

30 Saanto: 91 % ; ,· NMR δ (CDCI3) ppm: 1,50 (s, 9H), 3,41, 3,49 (ABq, J=17,8Hz, 2H), 3,76 (s, 3H), 4,25 (s, 2H), 5,05 (d, J=4,6Hz, 1H), 5,85 (dd, J=4,6Hz, J=8,2Hz, 1H), 6,89 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 7,2-7,5 (m, 25H), 7,77 (d, J=8,2Hz, 1H), 7,89 (s, 0 1H), 9,0-9,3 (brs, 1H), :... 35 IR v (CHCI3) cm'1: 3410, 1790, 1725, 1690, 1542, 1509, 1496, 1449, 1372.

2) Pelkistys: Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi- iminoasetyyli „ 110322 62

Het = 2-metyyli-l/2,4-triatsol-3-yyli 5

Liuokseen, jossa on 76-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-oksHminoasetyyliamino]-3-(2-metyyli-l,2,4-triatsol-3-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesterin 1-oksidia (1,73 g; 1,64 mmol) dimetyyli-formamidissa (15 ml) lisätään -20°C:ssa fosforitrikloridia (0,41 ml; 4,08 mmol), ja 10 seosta sekoitetaan samassa lämpötilassa 20 minuuttia. Reaktioseos kaadetaan kahteen kylmään kerrokseen vesipitoista natriumvetykarbonaattia ja etyyliasetaattia ja sekoitetaan. Orgaaninen kerros erotetaan, pestään vedellä ja kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikagee-lillä kromatograafisesti (tolueeni : etyyliasetaatti = 2:1), jolloin saadaan 76-[(Z)-2-15 (2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetyyliamino]-3-(2-metyyli-l,2,4-triatsol-3-yylitio-metyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyyli-metyyliesteriä (1,60 g) tumman ruskeana vaahtona.

Saanto: 94 % NMR δ (CDCIs) ppm: 1,49 (s, 9H), 3,37, 3,46 (ABq, J=17,9Hz, 2H), 3,69 (s, 3H), ! · *; 20 4,29, 4,48 (ABq, J=13,4Hz, 2H), 5,01 (d, • » J=4,6Hz, 1H), 5,91 (dd, J=4,6 Hz, J=8,6Hz, 1H), 6,93 (s, 1H), 6,95 (s, 1H), 7,2-7,5 • · (m, 25H), 7,83 (d, J= 8,6Hz, 1H), 7,84 (s, 1H), 9,15-9,3 (brs, 1H).

: · IR v (CHCI3) cm'1: 3420, 1790, 1724, 1690, 1542, 1497, 1450, 1372.

25 3) Pelkistys: Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi- iminoasetyyli

Het = 4-metyyli-l,2,4-triatsol-3-yyli 30 Liuokseen, jossa on 76-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-oksi-iminoasetyyliamino]-3-(4-metyyli-l,2,4-triatsol-3-yylitiometyylitio-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesterin 1-oksidia (706 mg; 0,671 mmol) dimetyyli-; _ formamidissa (8 ml) lisätään fosforitrikloridia (0,17 ml; 1,69 mmol), ja seosta sekoi- : '' tetaan -20°C:ssa 30 minuuttia. Reaktioseos kaadetaan kahteen jääkylmään kerrok- 63 1 10322 seen vesipitoista 5 natriumvetykarbonaattia ja etyyliasetaattia. Orgaaninen kerros erotetaan, pestään vedellä ja kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatil-la ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti (etyyliasetaatti), jolloin saadaan 78-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-5 oksi-iminoasetyyliamino]-3-(4-metyyli-l,2,4-triatsol-3-yylitio)metyylitio-3-kefem-4- karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (404 mg) vaalean ruskeana vaahtona.

Saanto: 58 %.

NMR δ (CDCIa) ppm: 1,46 (s, 9H), 3,31 (s, 3H), 3,43, 3,56 (ABq, J=17,2Hz, 2H), 4,34, 4,67 (ABq, J=14,2Hz, 2H), 5,04 (d, J=5,0Hz, 1H), 5,94 (dd, J=5,0 Hz, 10 J=8,5Hz, 1H), 6,91 (s, 1H), 6,95 (s, 1H), 7,2-7,5 (m, 25H), 8,05 (s, 1H), 8,27 (d, J=8,5Hz, 1H), 9,7-10,1 (brs, 1H).

IR v CHCI3) cm'1: 3410, 1789, 1723, 1689, 1542, 1507, 1495, 1448, 1370.

4) Pelkistys: Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-15 iminoasetyyli

Het = l,2,3-tiadiatsol-5-yyli , , Liuokseen, jossa on 78-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli- ; 20 oksi-iminoasetyyli]amino-3-(l,2,3-tiadiatsol-5-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karbok- syylihappodifenyylimetyyliesterin 16-oksidia (1,46 g; 1,38 mmol) dimetyyliformami-dissa (12 ml) lisätään -20°C:ssa jäähdyttäen fosforitrikloridia (0,35 ml; 3,48 mmol), ’ ‘ ja seosta sekoitetaan -20°C:ssa 20 minuuttia. Reaktioseos kaadetaan kahteen ker-

’ * I

rokseen 5 % vesipitoista natriumvetyvetykarbonaattia (35 ml) ja etyyliasetaattia 25 jäillä jäähdyttäen. Orgaaninen kerros erotetaan, pestään vedellä ja kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla, suodatetaan ja väkevöidään. Saatu jäännös puhdistetaan silikageelillä pylväskromatograafisesti (tolueeni: etyyliasetaatti = 5 : 1), jolloin saadaan 76-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetyyli]amino-3-(l,2,3-tiadiatsol-5-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karboksyyli-30 happodifenyylimetyyliesteriä keltaisena vaahtona (1,24 g).

Saanto: 86 % :" NMR δ (CDCI3-CD3OD) ppm: 1,52 (s, 9H), 3,51, 3,67 (ABq, J=17,6Hz, 2H), 4,00, • t 4,16(ABq, J=13,7Hz, 2H), 5,13 (d, J=5,0Hz, 1H), 6,02 (d, J=5,0Hz, 1H), 6,99 (s, 1H), 7,05 (s, 1H), 7,15-7,50 (m, 25H), 8,51 (s, 1H).

64 1 10322 IR v (CHCI3) cm1: 3400, 1789, 1718, 1686, 1543, 1492, 1445, 1369, 1277, 1225, 1154.

5) Pelkistys: Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyii)-2-trityylioksi-5 iminoasetyyli

Het = l,3,4-tiadiatsol-2-yyli

Liuokseen, jossa on 7-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-10 iminoasetamido]-3-(l,3,4tiadiatsol-2-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappo- difenyylimetyyliesterin Ιβ-oksidia (760 mg) (0,72 mmol) dimetyyliformamidissa (7 ml) lisätään fosforitrikloridia (180 pi; 2,5 ekvivalenttia; 1,79 mmol) -30°C:ssa, ja seosta sekoitetaan 30 minuuttia. Reaktioseos kaadetaan vesipitoiseen 5 % natrium-vetykarbonaattiin (70 ml) ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään vedellä, kuiva-15 taan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromato- graafisesti (tolueeni : etyyliasetaatti = 4:1), jolloin saadaan 7-[(Z)-2-(2-t-butoksi-karbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetamido]-3-(l,3,4-tiadiatsol-2-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä vaalean keltai-. . sena vaahtona (544 mg).

20 Saanto: 73%.

NMR δ (CDCIs) ppm: 1,50 (s, 9H), 3,51, 3,67 (ABq, J=17Hz, 2H), 4,53, 4,58 (ABq, »· J=14 Hz, 2H), 5,07 (d, J=4,8Hz, IM), 5,98 (dd, J= 4,8Hz, J=9Hz, 1H), 6,97 (s, 1H), 1 ; 7,03 (s, 1H), 7,2-7,5 (m, 25H), 7,58 (d, J=9Hz, 1H), 8,6 (brs, 1H), 8,98 (s, 1H), IR v (CHCI3) cm1: 3400, 1787, 1719, 1690, 1544, 1370, 1220, 1155, 25 65 1 10322 6) Pelkistys: Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliamino-tiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetyyli

Het = 2-metyyli-l,3,4-tiadiatsol-5-yyli 5

Liuokseen, jossa on 7-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetamido]-3-(2-metyyli-l,3/4-tiadiatsol-5-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karbok-syylihappodi-fenyylimetyyliesterin Ιβ-oksidia (362 mg; 0,339 mmol) dimetyyliform-amidissa (3 ml) lisätään fosforitrikloridia (85 μΙ; 2,5 ekvivalenttia; 0,85 mmol) 10 -30°C:ssa, ja seosta sekoitetaan 30 minuuttia. Reaktioseos kaadetaan 5 % natrium- vetykarbonaattiin (25 ml) ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromato-graafisesti (tolueeni: etyyliasetaatti = 4:1), jolloin saadaan 7-[(Z)-2-(2-t-butoksi-karbonyyliamino-4-tiatsolyyli)-2-trityylioksi-iminoasetamido]-3-(2-metyyli-l,3,4-tia-15 diatsol-5-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä vaalean keltaisena vaahtona (246 mg).

Saanto: 69 %.

NMR δ (CDCh) ppm: 1,50 (s, 9H), 2,69 (s, 3H), 3,53, 3,68 (ABq, J=18Hz, 2H), 4,50 (s, 2H), 5,07 (d, J=5Hz, 1H), 6,00 (dd, J=5Hz, J=9Hz, 1H), 6,97 (s, 1H), 7,03 (s, r » ; *': 20 1H), 7,2-7,5 (m, 25H), 7,69 (d, J=9Hz, 1H), 8,85 (brs, 1H), » * IR v CHCI3) cm1: 3400, 1787, 1720, 1690, 1543, 1369, 1219, 1155, « · * · · « · * ' 7) Pelkistys: Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi- , . iminoasetyyli 25

Het = l-metyyli-5-tetratsolyyli

Liuokseen, jossa on 76-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-tri-tyylioksi-iminoasetyyli]amino-3-(l-metyyli-5-tetratsolyyli)tiometyylitio-3-kefem-4-30 karboksyylihappodifenyylimetyyliesterin 16-oksidia (745 mg; 0,708 mmol) dimetyyli-

• I

formamidissa (7 ml) lisätään -20°C:ssa jäähdyttäen fosforitrikloridia (0,18 ml; 1,79 mmol), ja seosta sekoitetaan -20°C:ssa 20 minuuttia. Reaktioseos kaadetaan kahteen kerrokseen 5 % vesipitoista natriumvetykarbonaattia (20 ml) ja etyyliasetaattia jäillä jäähdyttäen. Orgaaninen kerros erotetaan, pestään vedellä ja kylläste 110322 66 tyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla, suodatetaan ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä pylväskromatograafisesti (tolueeni: etyyliasetaatti = 3 : 1), jolloin saadaan 78-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-oksi-iminoasetyyli]amino-3-(l-metyyli-5-tetratsolyyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karbok-5 syylihappodifenyylimetyyliesteriä ruskeana vaahtona (608 mg).

Saanto: 83 % NMR δ (CDCI3-CD3OD) ppm: 1,52 (s, 9H), 3,57, 3,73 (ABq, J=17,6Hz, 2H), 3,81 (s, 3H), 4,56 (s, 2H), 5,09 (d, J=5,0Hz, 1H), 6,02 (d, J=5,0Hz, 1H), 6,94 (s, 1H), 7,05 (s, 1H), 7,15- 7,50 (m, 25H).

10 IR v CHCI3) cm1: 3400, 1788, 1717, 1686, 1543, 1492, 1446, 1369, 1279, 1227, 1154.

8) Pelkistys: Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetyyli 15

Het = 2-metyylitetratsol-5-yyli

Liuokseen, jossa on 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-oksi-iminoasetyyliamino]-3-(2-metyylitetratsol-5-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-kar-20 boksyylihappodifenyylimetyyliesterin 1-oksidia (1,38 g; 1,31 mmol) dimetyyliform-

I I

: \ amidissa (15 ml) -20°C:ssa lisätään fosforitrikloridia (0,33 ml; 3,28 mmol), ja seosta ;; ; sekoitetaan samassa lämpötilassa 20 minuuttia. Reaktioseos kaadetaan kahteen kylmään kerrokseen vesipitoista natriumvetykarbonaattia ja etyyliasetaattia ja sekoitetaan. Orgaaninen kerros erotetaan, pestään vedellä ja kyllästetyllä suolaliuoksella, 25 kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kro-matograafisesti (tolueeni : etyyliasetaatti = 5:1), jolloin saadaan 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetyyliamino]-3-(2-metyyli-tetratsol-5-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä ’ (1,20 g) keltaisena vaahtona.

, 30 Saanto: 88 % NMR δ (CDCI3) ppm: 1,50 (s, 9H), 3,40 (brs, 2H), 4,25 (s, 3H), 4,28 (s, 2H), 5,07 (d, J=4,8Hz, 1H), 5,85 (dd, J=4,8Hz, J=8,2Hz, 1H), 6,89 (s, 1H), 6,98 (s, 1H), 7,2- 7,5 (m, 25H), 7,57 (d, J=8,2Hz, 1H), 8,7-8,9 (brs, 1H).

IR v (CHCI3) cm1: 3420, 1792, 1725, 1690, 1542, 1497, 1450, 1392, 1372, 1323.

67 1 10322 9) Hapetus: Asyyli = 2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetyyli

Het = 1,2,3-triatsol-4-yy I i 5

Liuokseen, jossa on 78-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-oksHminoasetamido]-3-(l,2,3-triatsol-4-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karboksyyli-happodifenyylimetyyliesteriä (511 mg; 0,5 mmol) dikloorimetaanin (10 ml) ja me-tanolin (10 ml) seoksessa lisätään m-klooriperbentsoehappoa (puhtaus: 80 %; 10 54 mg; 0,25 mmol) -30°C:ssa, ja seosta sekoitetaan yksi tunti. Reaktioseos laimen netaan vesipitoisella 5 % natriumtiosulfaatilla ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uuteliuos pestään vesipitoisella natriumvetykarbonaatilla, laimennetaan suolahapolla ja kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään alipaineessa.

Jäännös puhdistettiin silikageelillä kromatograafisesti (tolueeni-etyyliasetaatti = 2:1 15 -1 : 1), jolloin saadaan 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-tri- tyylioksi-iminoasetamido]-3-(l,2,3-triatsol-4-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karbok-syylihappodifenyylimetyyliesterln 1-oksidia (232 mg).

Saanto: 45 % , , Osa lähtöaineesta (236 mg: 48 %) saatiin takaisin.

I I

/ 20 NMR δ (CDCI3) ppm: 1,42 (s, 9H), 3,45, 3,94 (ABq, J=18Hz, 2H), 3,83, 4,09 (ABq, • » J=14Hz, 2H), 4,54 (d, J=4,8Hz, 1H), 6,18 (dd, J=4,8Hz, J=9Hz, 1H), 6,94 (s, 1H), ;;': 6,96 (s, lH), 7,2-7,6 (m, 26H), 8,02 (d, J=9Hz, 1H).

1 I

1 * IR v (CHCI3) cm1: 3380, 3200, 1799, 1716, 1690, 1545, 1370, 1155.

• ta ’ 25 Esimerkki 5 amidointi Η2ΝΥ~Γ^ asyyli - oJ-H-fS-SHet 3Q C0°Bh COOBh » es 110322 i i 1) Asyyli = difluorimetyylitioasetyyli Het = l,2,3-triatsol-4-yyli 5 Liuokseen, jossa on 7B-amino-3-(l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (550 mg; 1,08 mmol) ja difluorimetyylitio-etikkahappoa (160 mg; 1,13 mmol) dikloorimetaanissa (8 ml) lisätään -30°C:ssa jäähdyttäen N-metyylimorfoliinia (0,27 ml; 2,46 mmol) ja fenyylidikloorifosfaattia (0,19 ml; 1,27 mmol), ja seosta sekoitetaan -30°C:ssa yksi tunti. Reaktioseos sekoi-10 tetaan 10 % suolahapon (1 ml) kanssa, laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään vesipitoitoiseIla suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä pylväskromatograafisesti (tolueeni : etyyliasetaatti =1:1), jolloin saadaan 76-difluorimetyylitioasetamido-3-(l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä 15 (475 mg) vaalean keltaisena vaahtona.

Saanto: 69 % NMR δ (CDCI3) ppm: 3,56 (s, 2H), 3,59 (s, 2H), 4,05 (s, 2H), 4,99 (d, J= 4,8Hz, 1H), 5,79 (dd, J=8,7Hz, J=4,8Hz, 1H), 6,90 (s, 1H), 6,91 (t, J=56,2 Hz, 1H), 7,1-7,5 (m, 10H), 7,59 (s, 1H), 7,68 (d, J=8,7Hz, 1H), • 20 IR v (CHCI3) cm1: 3430, 3300br, 1785, 1690, 1512, 1496, 1454, 1378, 1333.

2) Asyyli = N-t-butoksikarbonyyli-2-fenyyliglysyyli

Het = trityyli-l,2,3-triatsol-4-yyli 25

Liuokseen, jossa on 76-amino-3-(trityyli-l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (914 mg; 1,21 mmol) ja D-N-t-butoksikarbo-nyyli-2-fenyyliglysiiniä (320 mg; 1,27 mmol) dikloorimetaanissa (9 ml) lisätään • ‘ '· -30°C:ssa jäähdyttäen N-metyylimorfoliinia (0,31 ml; 2,82 mmol) ja fenyylidikloori- 30 fosfaattia (0,22 ml; 1,47 mmol), ja seosta sekoitetaan samassa lämpötilassa 50 mi-nuuttia. Reaktioseos sekoitetaan 10 % suolahapon kanssa (1 ml), laimennetaan :' vedellä ja uutetaan etyyliasetaatillla. Uute pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kui vataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kroma-tograafisesti (tolueeni:etyyIiasetaatti = 10:1), jolloin saadaan 76-(D-N-t-bitoksi- 69 110322 karbonyyli-2-fenyyliglysyyliamino)-3-(trityyli-l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (510 mg) värittömänä vaahtona. Saanto: 42 % NMR δ (CDCI3) ppm: 1,42 (s, 9H), 3,22, 3,44 (ABq, J=17,5Hz, 2H), 3,93, 3,98 (ABq, 5 J=13,3Hz, 2H), 4,81 (d, J=4,8Hz, 1H), 5,20 (d, 3=6,0Hz, 1H), 5,62 (d, J=6,0Hz, 1H), 5,76 (dd, J=4,8Hz, J=9,lHz, 1H), 6,50 (d, J=9,lHz, 1H), 6,91 (s, 1H), 7,05- 7.15 (m, 6H), 7,25-7,45 (m, 24H), 7,59 (s, 1H).

IR v (CHCI3) cm1: 3420, 1788, 1710, 1697, 1495, 1455, 1448, 1370.

10 3) Asyyli = D-mandeloyyli

Het = trityyli-l,2,3-triatsol-4-yyli

Liuokseen, jossa on 78-amino-3-(trityyli-l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-15 karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (800 mg; 1,06 mmol) ja D-(-)-manteli-happoa (242 mg; 1,59 mmol) dikloorimetaanissa (4 ml) lisätään disykloheksyyli-karbodi-imidia (328 mg; 1,59 mmol), ja seosta sekoitetaan jäillä jäähdyttäen yksi tunti. Reaktioseos väkevöidään, laimennetaan etyyliasetaatilla ja suodatetaan kiinteän aineen poistamiseksi. Suodos pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan nat-20 riumsulfaatilla ja väkevöidään alipaineessa. Jäännös puhdistetaan Lobar-pylväskro-: matograafisesti (tolueeni: etyyliasetaatti = 2:1), jolloin saadaan 76-D-manteli- amido-3-(trityyli-l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodi-: fenyylimetyyliesteriä (466 mg) keltaisena vaahtona.

Saanto: 50 % : 25 NMR δ (CDCI3) ppm: 3,41 (d, J=3,3Hz, 1H), 3,57, 3,78 (ABq, J=17,4Hz, 2H), 4,06, 4.16 (ABq, J=13,4Hz, 2H), 4,91 (d, J=4,8Hz, 1H), 5,15 (d, J=3,3 Hz, 1H), 5,69 (dd, J=4,8Hz, J=9,2Hz, 1H), 6,88 (s, 1H), 6,98 (d, J=9,2Hz, 1H), 7,05-7,15 (m, 6H), 7,25-7,4 (m, 24H), 7,45 (s, 1H), :' IR v (CHCI3) cm1: 3600, 3400, 1788, 1725, 1692, 1602, 1509, 1495, 1450, 1375, 30 1315.

70 110322 4) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)asetyyli Het = tri tyy I i-l,2,3-tria tso I -4-yy I i 5 Liuokseen, jossa on 78-amino-3-(tntyyli-l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (800 mg; 1,06 mmol) ja 2-(2-t-butoksikar-bonyyliaminotiatsol-4-yyli)etikkahappoa (287 mg; 1,11 mmol) dikloorimetaanissa (8 ml) lisätään -30°C:ssa jäähdyttäen N-metyylimorfoliinia (0,27 ml; 2,46 mmol) ja fenyylidikloorifosfaattia (0,19 ml; 1,27 mmol), ja seosta sekoitetaan -30°C:ssa 10 40 minuuttia. Reaktioseos sammutetaan 10 % suolahapolla (1 ml), laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromato-graafisesti (tolueenketyyliasetaatti = 3:1), jolloin saadaan 76-[2-(2-t-butoksikarbo-nyyliaminotiatsol-4-yyli)asetamido]-3-(trityyli-l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-15 kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (812 mg) vaalean keltaisena vaah tona.

Saanto: 77 % NMR δ (CDCI3) ppm: 1,57 (s, 9H), 3,41 (s, 2H), 3,72, 3,75 (ABq, J=17,8 Hz, 2H), 4,02, 4,06 (ABq, J=13,6Hz, 2H), 4,79 (d, J=4,6Hz, 1H), 5,54 (dd, J=8,0Hz, ; 20 J=4,6Hz, 1H), 6,57 (s, 1H), 6,76 (s, 1H), 7,05-7,15 (m, 6H), 7,25- 7,5 (m, 19H), : : 7,44 (s, 1H), 7,76 (d, J=8,0Hz, 1H).

; IR v CHCh) cm1: 3420, 3340, 3170, 1780, 1718, 1672, 1604, 1545, 1497, 1450, j · 1372, 1328.

25 5) Asyyli = 2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)glyoksyyli

Het = trityyli-l,2,3-triatsol-4-yyli ' ' Liuokseen, jossa on 7B-amino-3-(trityyIi-1,2,3-triatsol-4-yyIitiometyyIitio)-3-kefem-4- ; 30 karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (800 mg; 1,06 mmol) ja 2-(2-t-butoksikar- bonyyliaminotiatsol-4-yyli)glyoksyylihappoa (303 mg; 1,11 mmol) dikloorimetaanissa ‘'· (8 ml) lisätään -30°C:ssa jäähdyttäen N-metyylimorfoliinia (0,27 ml) (2,46 mmol) ja ‘ fenyylidikloorifosfaattia (0,19 ml; 1,27 mmol), ja seosta sekoitetaan -30°C:ssa yksi tunti. Reaktioseos sekoitetaan 10 % suolahapon (1 ml) kanssa, laimennetaan vedel- 110322 71 lä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromatograafi-sesti (tolueeni : etyyliasetaatti = 2:1), jolloin saadaan 76-[2-(2-t-butoksikarbonyyli-aminotiatsol-4-yyli)glyoksyyliamino]-3-(trityyli-l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-5 kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (679 mg) keltaisena vaahtona. Saanto: 64 % NMR δ (CDCI3) ppm: 1,55 (s, 9H), 3,67, 3,85 (ABq, J=17,lHz, 2H), 4,10, 4,21 (ABq, J=13,3Hz, 2H), 5,00 (d, J=4,7Hz, 1H), 5,70 (dd, J=9,2Hz, J=4,7 Hz, 1H), 6,91 (s, 10 1H), 7,05-7,15 (m, 6H), 7,2-7,45 (m, 19H), 7,47 (s, 1H), 8,19 (d, J=9,2Hz, 1H), 8,5-8,6 (brs, 1H), 8,86 (s, 1H).

IR v (CHCI3) cm'1: 3400, 1788, 1725, 1702, 1672, 1565, 1512, 1495, 1480, 1448, 1372.

15 6) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-imino- asetyyli

Het = l,2,3-triatsol-4-yyli 20 Suspesnioon, jossa on 7B-amino-3-(l,2,3-triatsol-4-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-kar-boksyylihappodifenyylimetyyliesterihydrokloridia (110 mg; 2,0 mmol) ja (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoetikkahappoa (122 mg; 0,23 mmol) dikloorimetaanissa (3 ml) lisätään N-metyylimorfoliinia (72 μΙ; 0,66 mmol) ja fenyylidikloorifosfaattia (33 μΙ; 0,22 mmol) -30°C:ssa. Sekoitetaan 2 25 tuntia, minkä jälkeen reaktioseos laimennetaan 10 % suolahapolla ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään vedellä, kuivataan, puhdistetaan silikageelillä kromato-graafisesti ja kiteytetään tolueenista, jolloin saadaan 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbo-nyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetamido]-3-(l,2,3-triatsol-4-yyli)-'; t ’ tiometyylitio-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (110 mg).

30 sp.: 190-200°C (haj.) :” NMR δ (CDCI3-CD3OD) ppm: 1,53 (s, 9H), 3,45, 3,63 (ABq, J=17,2Hz, 2H), 4,12, :" ·' 4,15 (ABq, J=14,2Hz, 2H), 5,08 (d, J=5Hz, 1H), 5,88 (d, J=5Hz, 1H), 6,98 (s, 1H), : T 7,08 (s, 1H), 7,2-7,5 (m, 25H), 7,60 (s, 1H).

110322 72 IR v KBr) cm1: 3390, 3210, 1800, 1725, 1688, 1555, 1495, 1449, 1375, 1275, 1245, 1225, 1155.

7) Asyyli = (Z)-2-(2-trityyliaminotiatsol-4-yyli)-2-(difenyylimetoksikarbonyylimetoksi-5 imino)asetyyli

Het = trityy I i-1,2,3-tria tsol-4-yyl i

Liuokseen, jossa on 78-amino-3-(trityyli-l,2,3-triatsol-4-yylitionrietyylitio)-3-kefem-4-10 karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (800 mg; 1,06 mmol) ja (Z)-2-(2-trityyliami- notiatsol-4-yyli)-2-(difenyylimetoksikarbonyylimetoksi-imino)etikkahappoa (?28 mg; 1,11 mmol) kloorimetaanissa (8 ml) lisätään -30°C:ssa jäähdyttäen N-metyylimorfo-liinia (0,27 ml; 2,46 mmol), fenyylidikloorifosfaattia (0,19 ml; 1,27 mmol), ja seosta sekoitetaan -30°C:ssa 30 minuuttia. Reaktioseos sekoitetaan 10 % suolahapon 15 (1 ml) kanssa, laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään kyl lästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageeliilä kromatograafisesti (tolueenketyyliasetaatti = 10:1), jolloin saadaan 73-[(Z)-2-(2-trityyliaminotiatsol-4-yyli)-2-(difenyylimetoksikarbonyyli-metoksi-imino)asetamido]-3-(trityyli-l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-20 karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (1,07 g) vaalena keltaisena vaahtona.

Saanto: 73 % : NMR δ (CDCI3) ppm: 3,32, 3,62 (ABq, J=17,lHz, 2H), 4,07, 4,12 (ABq, J= 13,2 Hz, 2H), 4,90 (d, J=5,0Hz, 1H), 4,93, 5,03 (ABq, J=17,0Hz, 2H), 5,80 (dd, J=9,lHz, ' ’ J=5,0Hz, 1H), 6,81 (s, 1H), 6,87 (s, 1H), 6,93 (s, 1H), 7,0-7,4 (m, 51H), 7,45 (s, 25 1H), 8,11 (d, J=9,1 Hz, 1H).

IR v (CHCI3) cm1: 3410, 1790, 1740, 1688, 1526, 1498, 1451, 1380.

8) Asyyli = (Z)-2-(2-trityyliaminotiatsol-4-yyli)-2-[(S)-l-difenyylimetoksikarbonyyli-etoksi-iminojasetyyli 30

Het = tri tyy I i -1,2,3-t ria tso I -4-yy I i . :* Liuokseen, jossa on 76-amino-3-(trityyli-l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4- karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (800 mg; 1,06 mmol) ja (Z)-2-(2-trityyli- 73 110322 aminotiatsol-4-yyli)-2-[(S)-l-difenyylimetoksikarbonyylietoksi-imino]etikkahappoa (744 mg; 1,12 mmol) dikloorimetaanissa (8 ml) lisätään -30°C:ssa jäähdyttäen N-metyylimorfoliinia (0,27 ml; 2,46 mmol) ja fenyylidikloorifosfaattia (0,19 ml; 1,27 mmol), ja seosta sekoitetaan -30°C:ssa yksi tunti. Reaktioseos seoitetaan 10 % 5 suolahapon (1 ml) kanssa, laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään vesipitoisella suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti (tolueeni : etyyliasetaatti = 10 : 1), jolloin saadaan 7B-{(Z)-2-(2-trityyliaminotiatsol-4-yyli)-2-[(S)-l-difenyyli-metoksikarbonyylietoksi-imino]asetamido}-3-(trityyli-l,2,3-triatsol-4-yylitiometyyli-10 tio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (1,05 g) keltaisena vaahtona.

Saanto: 70 % NMR δ (CDCIa) ppm: 1,65 (d, J=7,2Hz, 3H), 3,41, 3,66 (ABq, J=16,8Hz, 2H), 4,12, 4,16 (ABq, J=13,4Hz, 2H), 4,91 (d, J=4,6Hz, 1H), 5,20 (q, J=7,2 Hz, 1H), 5,82 (dd, J=8,7Hz, J=4,6Hz, 1H), 6,77 (s, 1H), 6,85 (s, 1H), 6,87 (s, 1H), 7,07,4 (m, 51H), 15 7,45 (s, 1H), 8,22 (d, J=8,7Hz, 1H), IR v (CHCI3) cm1: 3400, 1787, 1730, 1685, 1523, 1493, 1447, 1375.

9) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-(l-difenyylimetoksi-karbonyylivinyylioksi-imino)asetyyli 20 : : Het = trityyli-l,2,3-triatsol-4-yyli : · Liuokseen, jossa on 7B-amino-3-(trityyli-l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4- karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (800 mg; 1,06 mmol) ja (Z)-2-(2-t-butoksi-25 karbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-(l-difenyylimetoksikarbonyylivinyylioksi-imino)- etikkahappoa (disykloheksyyliamiinisuolaa 786 mg; 1,12 mmol) dikloorimetaanissa (8 ml) lisätään -30°C:ssa jäähdyttäen N-metyylimorfoliinia (0,15 ml; 1,36 mmol) ja fenyylidikloorifosfaattia (0,19 ml; 1,27 mmol), ja seosta sekoitetaan -30°C:ssa 40 ’ ' minuuttia. Reaktioseos sekoitetaan 10 % suolahapon (1 ml) kanssa, laimennetaan 30 vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä pylväs-kromatograafisesti (tolueeni: etyyliasetaatti = 5:1), jolloin saadaan 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-(l-difenyylimetoksikarbonyylivinyylioksi- 110322 74 imino)asetamido]-3-(trityyli-l,2/3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-(kefem-4-karboksyy-lihappodifenyylimetyyliesteriä (936 mg) keltaisena vaahtona.

Saanto: 70 % NMR δ (CDCI3) ppm: 1,53 (s, 9H), 3,33, 3,51 (ABq, J=18,0Hz, 2H), 4,07 (s, 2H), 5 4,80 (d, J=4,8Hz, 1H), 5,66 (s, 1H), 5,73 (dd, J=4,8Hz, J=9,0Hz, 1H), 5,89 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 6,93 (s, 1H), 7,0-7,4 (m, 36H), 7,45 (s, 1H), 7,68 (d, J=9,0Hz, 1H), 8,7-9,1 (brs, 1H).

IR v (CHCI3) cm'1: 3400, 1786, 1724, 1695, 1545, 1494, 1445, 1370.

10 10) Asyyli = (Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-(l-t-butoksikarbo- nyyli-l-metyylietoksi-imino)asetyyli

Het = t ri tyy I i -1,2,3-tri a tso I -4-yy I i 15 Liuokseen, jossa on 78-amino-3-(trityyli-l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (800 mg; 1,06 mmol) ja (Z)-2-(2-t-butoksi-karbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-(l-t-butoksikarbonyyli-l-metyylietoksi-imino)etikka-happoa (479 mg; 1,12 mmol) dikloorimetaanissa (8 ml) lisätään -30°C:ssa jäähdyttäen N-metyylimorfoliinia (0,27 ml) (2,46 mmol) ja fenyylidikloorifosfaattia (0,19 ml; 20 1,27 mmol), ja seosta sekoitetaan -30°C:ssa 50 minuuttia. Reaktioseos sekoitetaan :·'· 10 % suolahapon (1 ml) kanssa, laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla.

··.: Uute pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöi- : · dään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä pylväskromatograafisesti (tolueeni:etyyli- asetaatti = 10:1 - 5:1), jolloin saadaan 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-25 4-yyli)-2-(l-t-butoksikarbonyyli-l-metyylietoksi-imino)asetamido]-3-(trityyli-l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (855 mg) keltaisena vaahtona.

Saanto: 69 % : ; NMR δ (CDCIs) ppm: 1,39 (s, 9H), 1,53 (s, 9H), 1,61 (s, 3H), 1,63 (s, 3H), 3,63, 30 3,84 (ABq, J=17,3Hz, 2H), 4,09, 4,20 (ABq, J=13,4Hz, 2H), 5,01 (d, J= 4,9Hz, 1H), 5,94 (dd, J=9,0Hz, J=4,9Hz, 1H), 6,88 (s, 1H), 7,05-7,4 (m, 26 H), 7,46 (s, 1H), 8,19 (d, J=9,0Hz, 1H), 8,1-8,4 (brs, 1H).

!·’ IR v (CHCI3) cm1: 3420, 1788, 1725, 1687, 1545, 1495, 1445, 1371.

75 1 10322

Esimerkki 6 rakenteelliset erot 1) R2 = metyleeni 5 1. Suspensioon, jossa on natriumatsidia (19,0 g; 0,283 mol) dimetyyliformamidissa (130 ml) lisätään trityylikloridia (76,0 g; 0,273 mol), ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 5 tuntia. Reaktioseos laimennetaan vedellä ja uutetaan eetterillä. Uute pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuvataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään, jolloin saadaan trityyliatsidia. Liuokseen, jossa on tätä atsidia asetonissa (300 ml) 10 lisätään metyylipropiolaattia (24 ml; 0,27 mol), ja seosta kuumennetaan refluksoi-den 6 päivää. Reaktioseos jäähdytetään huoneenlämpötilaan ja laimennetaan eete-rillä. Erotetut kiteet otetaan talteen suodattamalla, jolloin saadaan l-trityyli-1,2,3-triatsol-4-yylikarboksyylihappometyyliesteriä (62,0 g) värittöminä kiteinä.

Saanto 62 %

15 sp.: 189-190°C

NMR δ (CDCIa) ppm: 3,93 (s, 3H), 7,05-7,15 (m, 6H), 7,3-7,4 (m, 9H), 8,02 (s, 1H).

IR v (CHCI3) cm1: 1722, 1544, 1492, 1444, 1338.

2. Suspensioon, jossa on litiumalumiinihydridiä (6,17 g; 0,163 mol) tetrahydrofuraa-20 nissa (600 ml) lisätään jäillä jäähdyttäen 1 -trityyIi-1,2,3-triatsol-4-yyIikarboksyyIi- • · happometyyliesteriä (40,0 g; 0,108 mol), ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa ··.: yksi tunti. Reaktioseokseen lisätään tipottain vesipitoista tetrahydrofuraania jäillä ·' · jäähdyttäen. Seos neutraloidaan 10 % suolahapolla, suodatetaan liukenemattoman aineksen poistamiseksi, laimennetaan etyyliasetaatilla, pestään kyllästetyllä suolaliu- t > » »

25 oksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Saadut kiteet pestään eetterillä, jolloin saadaan 1 -1rityyIi-l,2,3-triatsol-4-yylimetanolia (33,4 g) valkoisina kiteinä, saanto: 91 % sp.: 200-291°C

:; ‘; NMR δ (CDCI3) ppm: 2,4-2,9 (brs, 1H), 4,76 (s, 2H), 7,05- : _ 30 7,15 (m, 6H), 7,3-7,4 (m, 9H), 7,43 (s, 1H).

:';; IR V (CHCI3) cm’1: 3600, 3600-3200br, 1600, 1490, 1443.

·;· 3. Liuokseen, jossa on l-trityyli-l,2,3-triatsol-4-yylimetanolia (8,00 g; 23,5 mmol) , · dikloorimetaanin (150 ml) ja dimetyyliformamidin (15 ml) seoksessa -40°C:ssa lisä- 110322 76 tään trietyyliamiinia (3,9 ml; 28,0 mmol) ja metaanisulfonyylikloridia (2,2 ml; 28,4 mmol), ja seosta sekoitetaan lämpötilassa välillä -30°C ja -40°C 25 minuuttia. Reak-tioseos laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Liuokseen, jossa on 5 jäännöstä asetonissa (150 ml) lisätään kaliumtioliasetaattia (4,02 g; 35,2 mmol) ja natriumjodidia (7,03 g; 46,9 mmol), ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 2 tuntia. Reaktioseos laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla.

Uute pestään vedellä ja kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja 10 väkevöidään. Saadut kiteet pestään eetterillä, jolloin saadaan 4-asetyylitioasetyyli-tiometyyli-l-trityyli-l,2,3-triatsolia (8,01 g) valkoisina kiteinä.

Saanto: 86 % sp.: 172-173°C

NMR δ (CDCIs) ppm: 2,32 (s, 3H), 4,19 (s, 2H), 7,05-7,15 (m, 6H), 7,3-7,4 (m, 15 10H).

IR v (CHCI3) cm'1: 1685, 1491, 1444.

4. Suspensioon, jossa on litiumalumiinihydridiä (1,07 g; 28,2 mmol) tetrahydrofu-raanissa (100 ml) lisätään jäillä jäähdyttäen 4-asetyylitiometyyli-l-trityyli-l,2,3- 20 triatsolia (7,50 g; 18,8 mmol), ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 40 mi-nuuttia. Reaktioseokseen lisätään vesipitoista tetrahydrofuraania tipoittain, ja seos • ••J neutraloidaan 10 % suolahapolla. Liuos suodatetaan ja suodos laimennetaan etyyli- • * » '· . asetaatilla, pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väke vöidään. Jäännös kiteytetään eetteristä ja pestään eetterillä, jolloin saadaan 1-tri-25 tyyli-l,2,3-triatsol-4-yylimetyylimerkaptaania (5,14 g) valkoisina kiteinä.

Saanto: 77 % sp.: 140-141°C

NMR δ (CDCI3) ppm: 1,99 (t, J=7,8Hz, 1H), 3,84 (d, J=7,8Hz, 2H), 7,1-7,2 (m, 6H), 7,3-7,4 (m, 10H).

; , 30 IR v (CHCI3) cm'1: 1491, 1444.

5. Liuokseen, jossa on l-trityyli-l,2,3-triatsol-4-yylimetyylimerkaptaania (3,00 g; * · . *:· 8,40 mmol) dimetyyliformamidissa (10 ml) lisätään natriumhydridiä (60 % dispersio .1 * · öljyssä; 370 mg; 9,25 mmol), ja seosta sekoitetaan 5 minuuttia huoneenlämpötilas-

* 1 I

77 110322 sa. Reaktioseos lisätään liuokseen, jossa on bromikloorimetaania (15 ml) dimetyyli-formamidissa (15 ml) -30°C:ssa, ja seosta sekoitetaan lämpötilassa välillä -20°C ja -30°C 30 minuuttia. Reaktioseos laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla.

5 Uute pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöi-dään. Liuokseen, jossa on jäännöstä asetonissa (30 ml) lisätään kaliumtioasetaattia (1,92 g; 16,8 mmol), ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa yksi tunti. Reaktioseos laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään vedellä, kuivataan natriumsulfaatillla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä 10 kromtograafisesti (tolueeni:etyyliasetaatti = 10:1) ja kiteytetään eetteristä, jolloin saadaan 4-asetyylitiometyylitiometyyli-l-trityyli-l,2,3-triatsolia (2,65 g) värittöminä kiteinä.

Saanto: 71 % sp.: 106°C

15 NMR δ (CDCI3) ppm: 2,32 (s, 3H), 3,89 (s, 2H), 4,04 (s, 2H), 7,1-7,2 (m, 6H), 7,3-7,4 (m, 9H), 7,93 (s, 1H).

IR v (CHCI3) cm'1: 1690, 1491, 1440.

6. 3-substituutio asylaatilla: I · '·'· 20 Liuokseen, jossa on 4-asetyylitiometyylitiometyyli-l-trityyli-l,2,3-triatsolia (756 mg; • · • t !: 1,70 mmol) dimetyyliformamidin (8 ml) ja tetrahydrofuraanin (4 ml) seoksessa lisä- f 78 110322 j !

Saanto: 60 % NMR δ (CDCI3) ppm: 1,50 (s, 9H), 3,35, 3,51 (ABq, J=17,0Hz, 2H), 3,77 (s, 4H), 5,04 (d, J=4,6Hz, 1H), 5,89 (dd, J=4,6Hz, J=8,4Hz, 1H), 6,89 (s, 1H), 7,02 (s, 1H), 7,05-7,60 (m, 42H), 8,65 (brs, 1H).

5 IR v (CHCI3) cm'1: 3400, 1784, 1717, 1686, 1542,1492,1445,1369.

7. suojauksen poisto:

Liuokseen, jossa on 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-oksi-iminoasetamido]-3-(l-trityyli-l,2,3-triatsol-4-yylimetyylitiometyylitio)-3-kefem-10 4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (1,13 g; 0,884 mmol) anisolin (3 ml) ja nitrometaanin (12 ml) seoksessa -40°C:ssa lisätään liuos, jossa on alumiinikloridia (0,94 g; 7,07 mmol) anisolissa (3 ml), ja seosta sekoitetaan lämpötilassa välillä -30°C ja -40°C yksi tunti. Reaktioseos sekoitetaan IN suolahapon (7,5 ml) kanssa ja laimennetaan vedellä. Vesiliuos pestään etyyliasetaatilla. Vesikerros väkevöidään 15 alipaineessa jäljelle jääneiden orgaanisten liuottimien poistamiseksi, kromatografoi-daan styreeni-divinyylibentseenikopolymeeripylväässä (metanoli:vesi = 4:1). Saatu jauhe pestään etyyliasetaatilla, jolloin saadaan 7B-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-hydroksi-iminoasetamido]-3-(l,2,3-triatsol-4-yylimetyylitiometyylitio-3-kefem-4-karboksyylihappoa (318 mg) vaalean keltaisen valkoisena jauheena.

20 Saanto: 68 % : : NMR δ (D20-NaHC03) ppm: 3,53, 3,79 (ABq, J=17,4Hz, 2H), 3,77, 3,87 (ABq, • !J=13,8 Hz, 2H), 4,00, 4,03 (ABq, J=14,8Hz, 2H), 5,26 (d, J=4,6Hz, 1H), 5,83 (d, * - » * *. J=4,6Hz, 1H), 6,99 (s, 1H), 7,88 (s, 1H).

IR v (KBr) cm1: 3100br, 1760, 1655, 1600, 1525, 1385, 1345.

25 Tämä yhdiste on tehokas antibakteeri Morgania morganii SR9:ää (0,1 μΙ/ml) ja En-terobacter cloacae SR233:a (0,8 pg/ml) vastaan ja sillä havaitaan oraalisesti annettaessa korkea taso veressä (12,1 pg/ml; 15 minuuttia, hiiriä).

i t * * » ' ·; 30 2) R1 = metyylimetyleeni * » 1 ’: * 1. Liuokseen, jossa on l,2,3-triatsol-4-yylitiolinatriumsuolaa (2,00 g; 16,3 mmol) i 1 . ·: · dimetyyliformamidissa (8 ml) -30°C:ssa lisätään 1-kloorietyylitioliasetaattia (2,40 g; 94 %; 16,3 mmol) dimetyyliformamidissa (3 ml), ja seosta sekoitetaan huoneen- 79 1 10322 lämpötilassa yksi tunti. Reaktioseos laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöi-dään. Jäännös puhdistetaan silikageeliilä kromatograafisesti (tolueeni : etyyliasetaatti = 2:1), jolloin saadaan 4-( 1 -asetyyIitioetyylitio)-1,2,3-triatsolia (2,90 g) värit-5 tömänä öljynä.

Saanto: 88 % NMR δ (CDCIs) ppm: 1,67 (d, J=7,0Hz, 3H), 2,30 (s, 3H), 4,93 (q, J=7,0Hz, 1H), 7,85 (s, 1H), 9,5-10,5 (brs, 1H).

IR v (CHCh) cm'1: 3440, 3160br, 1692, 1487, 1445, 1378, 1358.

10 2. Liuokseen, jossa on ^-(l,2,3-triatsol-4-yylitio)etyylitioliasetaattia (127 mg; 0,626 mmol) dimetyyliformamidissa (4 ml) -70°C:ssa lisätään liuos, jossa on litium-metoksidia metanolissa (1,8 N; 0,67 ml; 1,21 mmol), ja seosta sekoitetaan yksi tunti lämpötilassa välillä -55°C ja -60°C. Tähän liuokseen lisätään -78°C:ssa liuos, jossa on 15 76-fenyyliasetyyliamino-3-trityylifluorimetaanisulfonyylioksi-3-kefem-4-karboksyyli-happodifenyylimetyyliesteriä (316 mg; 0,5 mmol) dimetyyliformamidissa (3 ml), ja seosta sekoitetaan -78°C:ssa 10 minuuttia. Reaktioseos sekoitetaan 10 % suolahapon (1 ml) kanssa, laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös 20 puhdistetaan silikageeliilä kromatograafisesti (tolueeni:etyyliasetaatti = 1:1), jolloin •: : saadaan seos, jossa on 76-fenyyliasetyyliamino-3-[l -(l,2,3-triatsol-4-yyIitio)etyyli]- : tio-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä ja sen 2-kefeemisomeeria : (100 mg). Toistamalla kromatografia, 76-fenyyliasetyyliamino-3-[l -(l,2,3-triatsol-4- yylitio)etyyli]tio-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteri voidaan eristää.

: ·: ; 25 NMR U (CDCI3) ppm: 1,47 (d, J=6,8Hz, 3H), 3,55, 3,80 (ABq, J=17,2Hz, 2H), 3,63 (s, 2H), 4,55 (q, J=6,8Hz, 1H), 4,96 (d, J=4,8Hz, 1H), 5,78 (dd, J =4,8Hz, J=8,8Hz, 1H), 6,95 (s, 1H), 7,1-7,4 (m, 16H), 7,50 (s, 1H).

‘ : 3) 7a-metoksi 30 :,,, 1. Liuokseen, jossa on 7B-amino-3-(trityyli-l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3- '·’· kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (8,02 g; 10,7 mmol) bentseenissä • * .': . (200 ml) lisätään 3,5-di-t-butyyli-4-hydroksibentsaldehydiä (3,00 g; 12,8 mmol), ja . *. seosta kuumennetaan 1,5 tuntia atseotrooppisesti tislaten ja seos väkevöidään. Liu- 110322 80 okseen, jossa on jäännöstä bentseenin (100 ml) ja dikloorimetaanin (70 ml) seoksessa -30°C:ssa lisätään magnesiumsulfaattia (5,3 g) ja nikkeliperoksidia (10,7 g), ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa yksi tunti. Reaktioseos suodatetaan kiinteän aineksen poistamiseksi. Suodokseen -40°C:ssa lisätään 4A molekyyliseulassa kui-5 vattua metanolia (180 ml), ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa yksi tunti ja reaktioseos väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti (to-lueeni:etyyliasetaatti = 20:1), jolloin saadaan 78-(3,5-di-t-butyyli-4-hydroksibentsyli-deeni)amino-70-metoksi-3-(trityyli-l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (8,58 g) keltaisena vaahtona.

10 Saanto: 80 % NMR δ (CDCI3) ppm: 1,46 (s, 18H), 3,57 (s, 3H), 3,52, 3,70 (ABq, J=16,9 Hz, 2H), 4,09, 4,11 (ABq, J=13,8Hz, 2H), 5,07 (s, 1H), 5,63 (s, 1H), 6,91 (s, 1H), 7,05-7,5 (m, 25H), 7,48 (s, 1H), 7,69 (s, 2H), 8,55 (s, 1H).

IR v (CHCI3) cm1: 3630, 1770, 1631, 1600, 1585, 1497, 1447, 1429, 1377.

15 2. Liuokseen, jossa on 78-(3,5-di-t-butyyli-4-hydroksibentsylideeni)amino-7a-metoksi-3-(trityyli-l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappo-difenyylimetyyliesteriä (8,39 g; 8,40 mmol) tetrahydrofuraanin (40 ml) ja metanolin (160 ml) seoksessa lisätään Girard T-reagenssia (2,11 g; 12,6 mmol), vettä (0,1 ml) 20 ja etikkahappoa (0,1 ml), ja seosta sekoitetaan huoneenlämpötilassa 2 tuntia. Reak-: tioseos väkevöidään, laimennetaan jäävedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute : pestään kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään.

·' Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti (tolueeni:etyyliasetaatti = 10:1 - 3:1), jolloin saadaan 76-amino-7a-metoksi-3-(trityyli-l,2,3-triatsol-4-yyli-25 tiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (5,10 g) vaalean keltaisena vaahtona.

Saanto: 78 %.

NMR δ (CDCIa) ppm: 3.50 (s, 3H), 3,48, 3,66 (ABq, J=15,8Hz, 2H), 4,15 (s, 2H), 4,85 (s, 1H), 6,89 (s, 1H), 7,05-7,5 (m, 25H), 7,50 (s, 1H).

:·; , 30 IR v (CHCI3) cm1: 1777, 1705, 1602, 1495, 1446, 1378.

3. Liuokseen, jossa on 76-amino-7a-metoksi-3-(trityyli-l,2,3-triatsol-4-yylitiometyyli- ;': * tio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (1,50 g; 1,92 mmol) dikloori- ; ‘metaanissa (10 ml) -40°C:ssa lisätään N-metyylimorfoliinia (0,48 ml; 4,37 mmol), 81 110322 difluorimetyylitioetikkahappoa (299 mg; 2,11 mmol) ja sitten fenyylidikloorifosfaattia (0,34 ml; 2,27 mmol), ja seosta sekoitetaan lämpötilassa välillä -30°C ja -40°C yksi tunti. Reaktioseos sekoitetaan 10 % suolahapon (2 ml) kanssa, laimennetaan vedellä ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute pestään laimealla suolahapolla, vesipitoisella 5 5 % natriumvetykarbonaatilla ja kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivataan natrium- sulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös puhdistetaan silikageelillä kromatograafisesti (tolueeni:etyyliasetaatti = 3:1), jolloin saadaan 7B-difluorimetyylitioasetyyliamino-7a-metoksi-3-(trityyli-l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihap-podifenyylimetyyliesteriä (1,55 g) vaalean keltaisena vaahtona.

10 Saanto: 89 % NMR δ (CDCI3) ppm: 3,47, 3,54 (ABq, J=15,0Hz, 2H), 3,60 (s, 5H), 4,05, 4,13 (ABq, J=13,6Hz, 2H), 4,98 (s, 1H), 6,84 (s, 1H), 6,94 (t, J=55,8Hz, 1H), 7,05-7,4 (m, 26H), 7,49 (s, 1H).

IR v (CHCI3) cm1: 3380, 1778, 1696, 1600, 1495, 1447, 1382.

15 4. Liuokseen, jossa on 7B-difluorimetyylitioasetyyliamino-7a-metoksi-3-(trityyli- l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (1,51 g; 1,66 mmol) anisolin (2,4 ml) ja dikloorimetaanin (6 ml) seoksessa lisätään jäillä jäähdyttäen trifluorietikkahappoa (6 ml), ja seosta sekoitetaan jäillä jäähdyttä-: . 20 en 50 minuuttia ja huoneenlämpötilassa 20 minuuttia. Reaktioseos jäähdytetään jäillä, sekoitetaan veden (2 ml) ja etyyliasetaatin kanssa, pestään vedellä, kuivataan : natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös liuotetaan etyyliasetaattiin ja uutetaan : · vesipitoisella 5 % natriumvetykarbonaatilla. Vesiuutteen pH säädetään arvoon 2,0 -3,0 10 % suolahapolla ja uutetaan etyyliasetaatilla. Uute kuivataan natriumsul-25 faatilla ja väkevöidään. Jäännös jauhetaan eetterin ja heksaanin seoksen kanssa, jolloin saadaan 78-difluorimetyylitioasetyyliamino-7a-metoksi-3-(l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio-3-kefem-4-karboksyylihappoa (195 mg) vaalean keltaisena vaahtona.

*; * Saanto: 24 % : ; , 30 NMR δ (D20-NaHC03) ppm: 3,55 (s, 3H), 3,36, 3,65 (ABq, J=17,Hz, 2H), 3,74 (s, ‘ 2H), 4,11, 4,19 (ABq, J=13,8Hz, 2H), 5,15 (s, 1H), 7,11 (t, J=55,4 Hz, 1H), 7,98 (s, ·:··: 1H).

. : · ’ IR v (KBr) cm-1: 3240br, 1770, 1680, 1520, 1365.

82 110322

Esimerkki 7 suojauksen poisto asyyliNH-^S. asyyli fflk.r_fS.i " (T-N^-s-SHet

COOBh COOH

5 1) Asyyli = difiuorimetyylitioasetyyli Het = l,2,3-triatsol-4-yyli 10

Liuokseen, jossa on 7B-difluorimetyylitioasetamido-3-(l,2,3-triatsol-4-yylitiometyyli-tio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (451 mg; 0,710 mmol) di-kloorimetaanin (3 ml) ja anisolin (1,2 ml) seoksessa lisätään trifluorietikkahappoa (3 ml), ja seosta sekoitetaan jäillä jäähdyttäen yksi tunti. Reaktioseos väkevöidään 15 kuivaksi ja jäännös jauhetaan eetterin kanssa, pestään ja kuivataan, jolloin saadaan 76-difluorimetyylitioasetamido-3-(l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappoaa valkoisena jauheena.

Saanto: 77 % NMR δ (D20-NaHC03) ppm: 3,47, 3,67 (ABq, J=17,4Hz, 2H), 3,68 (s, 2H), 4,12, 20 4,24 (ABq, J=13,4Hz, 2H), 5,11 (d, J=4,6Hz, 1H), 5,66 (d, J=4,6Hz, 1H), 7,09 (t, JHF=55,4Hz, 1H), 8,01 (s, 1H).

,.;: · IR v (KBr) cm’1: 3400br, 3260, 1765, 1662, 1545, 1360, 1333.

* » “11: Tämä yhdiste on tehokas antibakteeri Staphylococcus aureus Smith:iä (0,1 pg/ml) : ’: * 25 vastaan ja sillä havaitaan oraalisesti annettaessa korkea taso veressä (28 pg/ml; 15 minuuttia, hiiriä).

2) Asyyli = fenyyliasetyyli » · > · 30 Het = l,2,3-triatsol-4-yyli » · I · · »· » .... · Suspensioon, jossa on 76-fenyyliasetyyliamino-3-(l,2,3-triatsol-4-yyli)tiometyylitio- .;. * 3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (186 mg; 0,296 mmol) dikloori- ;,. metaanissa (3 ml) lisätään jäillä jäähdyttäen anisolia (0,45 ml) ja trifluorietikkahap- 35 poa (0,45 ml), ja seosta sekoitetaan yksi tunti 40 minuuttia. Reaktioseos väkevöi- 83 110322 dään, hierretään heksaanin kanssa ja pestään etyyliasetaatilla, jolloin saadaan 76-fenyyliasetyyliamino-3-(l,2,3-tnatsol-4-yyli)tiometyylitio-3-kefem-3-karboksyyli-happoa valkoisena kiinteänä aineena (67 mg).

Saanto: 49 % 5 NMR δ (D20-NaHC03) ppm: 3,40, 3,56 (ABq, J=17Hz, 2H), 3,66, 3,70 (ABq, J=15Hz, 2H), 4,07, 4,20 (ABq, J=14Hz, 2H), 5,03 (d, J=5Hz, 1H), 5,61 (d, J=5Hz, 1H), 7,3-7,5 (m, 5H), 7,90 (s, 1H).

IR v (KBr) cm-1: 3440, 1775, 1705, 1660, 1540, 1353, 1238.

10 Tällä yhdisteellä on voimakas antibakteriaalinen aktiivisuus Staphylococcus aureus Smith:iä (0,05 pg/ml) ja 209P JC-l:ä (0,05 pg/ml) vastaan ja sillä havaitaan oraalisesti annettaessa korkea taso veressä (15 pg/ml; 15 minuuttia, hiiriä).

3) Asyyli = D-mandeloyyli 15

Het = (trityyli - H)-l,2,3-triatsol-4-yyli

Liuokseen, jossa on 76-D-manteliamido-3-(trityyli-l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (445 mg; 0,502 mmol) anisolin ‘ . 20 (0,8 ml) ja dikloorimetaanin (2 ml) seoksessa lisätään jäillä jäähdyttäen trifluorietik- ·' kahappoa (2 ml), ja seosta sekoitetaan jäillä jäähdyttäen 30 minuuttia ja huoneen- ; lämpötilassa 20 minuuttia. Reaktioseos laimennetaan metanolilla (10 ml) ja väkevöi-

( I

: dään. Jäännös liuotetaan laimeaan natriumvetykarbonaatin vesiliuokseen, pestään etyyliasetaatilla, tehdään happameksi 10 % suolahapolla ja uutetaan etyyliasetaatil-25 la. Uute kuivataan natriumsulfaatilla ja väkevöidään. Jäännös jauhetaan eetterin kanssa, jolloin saadaan 76-D-manteliamido-3-(l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio-3-kefem-4-karboksyylihappoa (59,2 mg) kellertävän valkoisena jauheena.

Saanto: 25 % : ‘ NMR δ (D20-NaHC03) ppm: 3,39, 3,62 (ABq, J=17,4Hz, 2H), 4,10, 4,21 (ABq, ♦ I · : ; > 30 J=13,8 Hz, 2H), 5,07 (d, J=4,8Hz, 1H), 5,27 (s, 1H), 5,62 (d, J=4,8Hz, 1H), 7,46 (s, 5H), 8,02 (s, 1H).

': ’ IR v (KBr) cm1: 3360br, 1770, 1673, 1520, 1452, 1365.

i » r » » » 84 110322 Tällä yhdisteellä havaitaan oraalisesti annettaessa korkea taso veressä (18,5 pg/ml; 15 minuuttia, hiiriä).

4) Asyyli = (Z)-2-[2-(t-butoksikarbonyyllamino - amino)tiatsol-4-yyli]-2-pentenoyyli 5

Het = l,2,3-triatsol-4-yyli

Liuokseen, jossa on 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-penteno-yyliamino]-3-(l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyyli-10 metyyliesteriä (537 mg; 0,68 mmol) anisolin (2 ml) ja nitrometaanin (8 ml) seoksessa -30°C:ssa lisätään liuos, jossa on alumiinikloridia (0,54 g; 4 mmol) anisolissa (2 ml), ja seosta sekoitetaan yksi tunti. Reaktioseos laimennetaan etanolilla (3 ml), sekoitetaan 5 minuuttia, sekoitetaan IN suolahapon (8 ml) ja veden (200 ml) kanssa, pestään etyyliasetaatilla ja väkevöidään alipaineessa jäljelle jääneiden orgaanis-15 ten liuottimien poistamiseksi. Saatu vesiliuos kromatografoidaan styreeni-divinyyli-bentseenikopolymeerilla (metanoli:vesi = 4:1), jolloin saadaan 76-[(Z)-2-(2-amino-tiatsol-4-yyli)-2-pentenoyyliamino]-3-(l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappoa (156 mg) valkoisena kiinteänä aineena.

Saanto: 44 % 20 NMR δ (D20-NaHC03) ppm: 1,07 (t, J=7,8Hz, 3H), 2,24 (quin, J=7,8Hz, 2H), 3,50, I. | 3,72 (ABq, J=17Hz, 2H), 4,12, 4,24 (ABq, J=14Hz, 2H), 5,19 (d, J=4,8 Hz, 1H), .,; 5,79 (d, J=4,8Hz, 1H), 6,37 (t, J=8Hz, 1H), 6,50 (s, 1H), 8,03 (s, 1H).

IR v (KBr) cm1: 3400br, 1763, 1655, 1530, 1388, 1348.

.: 25 5) Asyyli = l,2,3-triatsol-4-yyli

Suspensioon, jossa on 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-oksi-iminoasetamido]-3-(l,2,3-triatsol-4-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karboksyyli-:happodifenyylimetyyliesteriä (9,2 g; 9 mmol) anisolin (18 ml) ja nitrometaanin :30 (72 ml) seoksessa lisätään tipottain liuos, jossa on alumiinikloridia (9,6 g; 72 mmol) anisolissa (31 ml) -30°C:ssa. Sekoitetaan yksi tunti samassa lämpötilassa, minkä :: jälkeen reaktioseos sammutetaan etanolilla (25 ml), sekoitetaan useita minuutteja, .laimennetaan IN suolahapolla (75 ml) ja vedellä (500 ml) ja pestään etyyliasetaatil-!.. la. Vesikerros erotetaan, väkevöidään orgaanisten liuottimen poistamiseksi, saate- 110322 85 taan styreeni-divinyylibentseenikopolymeeriadsorbenttipylvään läpi. Tuote eluoidaan metanolin ja veden seoksella (4:1), jolloin saadaan 76-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-hydroksi-iminoasetamido]-3-(l,2,3-triatsol-4-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karbok-syylihappoa vaalean keltaisena jauheena (4,19 g).

5 Saanto: 90 % NMR δ (D20-NaHC03) ppm: 3,51, 3,75 (ABq, J=17,2Hz, 2H), 4,14, 4,25 (ABq, J=13,9Hz, 2H), 5,21 (d, J=4,7Hz, 1H), 5,84 (d, J=4,7Hz, 1H), 6,99 (s, 1H), 8,07 (s, 1H).

IR v KBr) cm1: 3280, 3100, 1760, 1660, 1590, 1525, 1385, 1345, 1175, 995.

10 Tämä yhdiste on tehokas antibakteeri Escherichia coli 7437:ää (0,02 pg/ml) ja Ente-robacter cloacae SR233:a (0,8 pg/ml) vastaan ja sillä havaitaan oraalisesti annettaessa korkea taso veressä (29,6 pg/ml; 15 minuuttia, hiiriä).

15 6) Asyyli = (Z)-2-[2-(t-butoksikarbonyyliamino - amino)tiatsol-4-yyli]-2-metoksi- iminoasetyyli

Het = l-(trityyli - H)-l,2,3-triatsol-4-yyli 20 Liuokseen, jossa on 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi- ;. iminoasetyyli]amino-3-(l-trityyli-l,2,3-triatsol-4-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karbok- ; syylihappodifenyylimetyyliesteriä (570 mg; 0,55 mmol) anisolin (1,7 ml) ja nitrome- • .: taanin (5 ml) seoksessa -30°C:ssa lisätään liuos, jossa on alumiinikloridia (0,51 g; 3,83 mmol) anisolissa (1,8 ml), ja seosta sekoitetaan 30 minuuttia. Reaktioseos se-25 koitetaan IN suolahapon (4 ml) ja etyyliasetaatin (10 ml) kanssa, sekoitetaan huoneenlämpötilassa 5 minuuttia, kaadetaan liuokseen, jossa on natriumvetykarbonaat-tia (3,2 g) vedessä (100 ml), ja sekoitetaan useita minuutteja. Liukenematon aines erotetaan suodattamalla, minkä jälkeen reaktioseos pestään etyyliasetaatilla, väke-:‘ ' vöidään tyhjössä orgaanisten liuottimien poistamiseksi. Saatu vesikerros puhdiste- 30 taan styreeni-divinyylibentseenikopolymeerikromatograafisesti (vesi:metanoli = : ‘ 10:1), jolloin saadaan 7B-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli-2-metoksi-iminoasetyyli]- •; · ·; amino-3-(l,2,3-triatsol-4-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karboksyylihapponatrium- .:.' suolaa valkoisena vaahtona (194 mg).

!.. Saanto: 64 % 110322 86 NMR δ (D20) ppm: 3,48, 3,67 (ABq, J=17Hz, 2H), 3,99 (s, 3H), 4,11, 4,23 (ABq, J=14Hz, 2H), 5,17 (d, J=5Hz, 1H), 5,80 (d, J=5Hz, 1H), 7,02 (s, 1H), 7,97 (s, 1H). IR v KBr) cm1: 3400, 1753, 1660, 1605, 1390, 1040.

5 Tällä yhdisteellä on voimakas antibakteriaalinen actiivisuus Proteus vulgaris CN329:ää (0,02 pg/ml) ja Morgania morganii SR9:ää (0,1 pg/ml) vastaan ja korkea taso veressä (15 pg/ml; hiiri 15 minuuttia) oraalisesti annettaessa.

7) Asyyli = (Z)-2-[2-t-butoksikarbonyyliamino - amino)tiatsol-4-yyli]-2-syklopentyyli-10 oksi-iminoasetyyli

Het = l,2,3-triatsol-4-yyli

Suspensioon, jossa on 76-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-syklo-15 pentyylioksi-iminoasetamido]-3-(l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (258 mg; 0,304 mmol) anisolin (1 ml) ja nitrometaanin (4 ml) seoksessa -30°C:ssa lisätään liuos, jossa on alumiinikloridia (0,25 g; 1,88 mmol) anisolissa (1 ml), ja seosta sekoitetaan 50 minuuttia. Reak-tioseos laimennetaan etanolilla (2 ml), sekoitetaan samassa lämpötilassa 5 minuut-20 tia, sekoitetaan IN suolahapon (4 ml) ja veden (200 ml) kanssa ja sekoitetaan huoneenlämpötilassa 5 minuuttia. Vesikerros erotetaan, pestään etyyliasetaatilla, väke-vöidään alipaineessa jäljelle jääneiden orgaanisten liuottimien poistamiseksi ja kro-matografoidaan styreeni-divinyylibentseenikopolymeerilla (metanoli: vesi = 4:1), jolloin saadaan 76-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-syklopentyylioksi-iminoaset-: 25 amido]-3-(l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappoa (93 mg) valkoisena kiinteänä aineena.

Saanto: 53 % NMR δ (D20-NaHC03) ppm: 1,4-2,0 (m, 8H), 3,50, 3,70 (ABq, J=17Hz, 2H), 4,13, :! · · 4,23 (ABq, J=14Hz, 2H), 5,17 (d, J=4,8Hz, 1H), 5,77 (d, J=4,8Hz, 1H), 6,98 (s, C 30 1H), 8,03 (s, 1H).

: · · ’ IR v (KBr) cm1: 3300br, 1765, 1665, 1526, 1385, 1343.

Tämä yhdiste on tehokas antibakteeri Escherichia coli EC-14:a (0,8 pg/ml) ja Pseu-. domonas aeruginosa A25619:a (0,8 pg/ml) vastaan.

87 110322 8) Asyyli = (Z)-2-[2-(t-butoksikarbonyyliamino - amino)tiatsol-4-yyli]-2-(2-propenyylioksi-imino)asetyyli

Het = l,2,3-triatsol-4-yyli 5

Liuokseen, jossa on 78-[(Z)-2-(2-t-butoksikarobnyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-(2-propenyylioksi)asetamido]-3-(l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karbksyyli-happodifenyylimetyyliesteriä (376 mg; 0,46 mmol) anisolin (1,5 ml) ja nitrometaanin (6 ml) seoksessa -30°C:ssa lisätään liuos, jossa on alumiinikloridia (0,37 g; 10 2,8 mmol) anisolissa (1,5 ml), ja seosta sekoitetaan 50 minuuttia. Reaktioseos se koitetaan etanolin (2 ml) kanssa ja sekoitetaan samassa lämpötilassa 5 minuuttia ja sekoitetaan IN suolahapon (5 ml) ja veden (200 ml) kanssa. Vesikerros erotetaan, pestään etyyliasetaatilla ja väkevöidään alipaineessa jäljelle jääneiden liuottimien poistamiseksi. Saatu vesikerros kromatografoidaan styreeni-divinyylibentseenikopo-15 lymeerilla (metanoli:vesi = 4:1). Eluointiaine pestään etyyliasetaatilla, jolloin saadaan 78-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(2-propenyylioksi-imino)asetamido]-3-(l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappoa (127 mg) valkoisena kiinteänä aineena.

Saanto: 50 %.

20 NMR δ (D20-NaHC03) ppm: 3,48, 3,67 (ABq, J=17Hz, 2H), 4,11, 4,24 (ABq, J=14Hz, 2H), 4,72 (d, J=5,6Hz, 2H), 5,18 (d, J=4,6Hz, 1H), 5,30 (dd, J=l,6 Hz, J=10,6Hz, 1H), 5,37 (dd, J=l,6Hz, J=17,4Hz, 1H), 5,82 (d, J=4,6Hz, 1H), 6,07 I 1 (ddt, J=5,6Hz, J=10,6Hz, J=17,4Hz, 1H), 7,03 (s, 1H), 7,99 (s, 1H).

IR v (KBr) cm1: 3450, 3270, 1753, 1653,1618, 1545, 1532, 1384, 1357,1021, •V’ 25 1000.

Tämä yhdiste on tehokas antibakteeri Escherichia coli EC-14:a (0,4 pg/ml) ja Ente-robacter cloacae SR233:a (0,8 pg/ml) vastaan.

88 110322 9) Asyyli = N-(t-butoksikaarbonyyli - H)-2-fenyyliglysyyli Het = (trityyli - H)-l,2,3-triatsol-4-yyli 5 Liuokseen, jossa on 78-(N-t-butoksikarbonyyli-2-fenyyliglysyyliamino)-3-(trityyli- l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (480 mg; 0,487 mmol) anisolin (1,2 ml) ja dikloorimetaanin (3 ml) seoksessa lisätään jäillä jäähdyttäen trifluorietikkahappoa (3 ml), ja seosta sekoitetaan jäillä jäähdyttäen 30 minuuttia ja huoneenlämpötilassa 50 minuuttia. Reaktioseosta ravistelit) laan jääveden ja etyyliasetaatin kanssa jäillä jäähdyttäen. Vesikerros erotetaan, vä-kevöidään jäljelle jääneiden orgaanisten liuottimien poistamiseksi alipaineessa ja pylväskromatografoidaan styreeni-divinyylibentseenikopolymeerihartsilla (metano-li:vesi = 4:1). Jäännös jauhetaan etyyliasetaatista, jolloin saadaan 76-(2-fenyyli-glysyyliamino)-3-(l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappoa 15 (157 mg) valkoisena jauheena.

Saanto: 67 % NMR δ (D20) ppm: 3,46, 3,67 (ABq, J=17,lHz, 2H), 4,25, 4,31 (ABq, J=14,2 Hz, 2H), 5,13 (d, J=4,4Hz, 1H), 5,27 (s, 1H), 5,66 (d, J=4,4Hz, 1H), 7,54 (s, 5H), 8,07 (s, 1H).

20 IR v (KBr) cm1: 3400, 3060br, 1763, 1690, 1595, 1458, 1388, 1345.

10) Asyyli = 2-[2-(t-butoksikarbonyyliamino - amino)tiatsol-4-yyli]asetyyli

Het = (trityyli - H)-l,2,3-triatsol-4-yyli 25

Liuokseen, jossa on 76-[2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)asetamido]-3-(trityyli-l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyyli-metyyliesteriä (779 mg; 0,784 mmol) anisolin (3 ml) ja nitrometaanin (12 ml) seok-:.' · sessa -40°C:ssa lisätään liuos, jossa on alumiinikloridia (0,83 g; 6,24 mmol) anisolis- :, 30 sa (3 ml), ja seosta sekoitetaan lämpötilassa välillä -30°C ja -40°C 50 minuuttia.

Reaktioseos sekoitetaan IN suolahapon (6,3 ml) kanssa, laimennetaan vedellä, pes-•; · · tään etyyliasetaatilla ja väkevöidään alipaineessa jäljelle jääneiden orgaanisten liuot- . I. ’ timien poistamiseksi. Saatu liuos kromatografoidaan styreeni-divinyylibentseeniko- polymeerilla (metanoli: vesi = 4 : 1) ja saatu jauhe pestään etyyliasetaatilla, jolloin 89 110322 saadaan 7B-[2-(2-aminotiatsol-4-yyli)asetamido]-3-(l,2,3-triatsol-4-yylitiometyyli-tio)-3-kefem-4-karboksyylihappoa (225 mg) valkoisena jauheena.

Saanto: 59 % NMR δ (D20-CD30D-NaHC03) ppm: 3,57 (s, 2H), 3,43, 3,60 (ABq, J=17,4Hz, 2H), 5 4,08, 4,20 (ABq, J=13,8Hz, ZH), 5,06 (d, J=4,7Hz, 1H), 5,65 (d, J=4,7 Hz, 1H), 6,49 (s, 1H), 7,92 (s, 1H).

IR v (KBr) cm'1: 3510, 3260br, 1759, 1664, 1579, 1551, 1401, 1352, 1326.

Tämä yhdiste on tehokas antibakteeri Staphylococcus aureus Smith:iä (0,1 pg/ml), 10 Escherichia coli EC-14:a (0,8 pg/ml) ja Proteus vulgaris CN-329:ää (0,8 pg/ml) vastaan ja sillä havaitaan oraalisesti annettaessa korkea taso veressä (17,1 pg/ml; 15 minuuttia, hiiriä).

11) Asyyli = 2-[2-(t-butoksikarbonyyliamino - amino)tiatsol-4yyli]glyoksylyyli 15

Het = (trityyli - H)-l,2,3-triatsol-4-yyli

Liuokseen, jossa on 7B-[2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)glyoksylyyli- amino]-3-(trityyli-l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodi- : 20 fenyylimetyyliesteriä (649 mg; 0,644 mmol) anisolin (2,5 ml) ja nitrometaanin » (10 ml) seoksessa -40°C:ssa lisätään liuos, jossa on alumiinikloridia (0,69 g; 5,19 mmol) anisolissa (2,5 ml), ja seosta sekoitetaan lämpötilassa välillä -30°C ja -40°C 50 minuuttia. Reaktioseos sekoitetaan IN suolahapon (5,2 ml) kanssa, laimennetaan vedellä, pestään etyyliasetaatilla ja väkevöidään alipaineessa jäljelle , 25 jääneiden orgaanisten liuottimien poistamiseksi. Jäljelle jäänyt vesiliuos kromatogra- foidaan analyyttisessä styreeni-divinyylibentseenikopolymeeripylväässä (metanoli: vesi = 3:2). Saatu jauhe pestään etyyliasetaatilla, jolloin saadaan 76[2-(2-amino-tiatsol-4-yyli)glyoksylyyliamido]-3-(l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-:· karboksyylihappoa (130 mg) keltaisena jauheena.

30 Saanto: 40 % ' ‘ NMR δ (CD3SOCD3) ppm: 3,83 (s, 2H), 4,44 (s, 2H), 5,19 (d, J=4,6Hz, 1H), 5,68 (dd, J=8,2Hz, J=4,6Hz, 1H), 7,40 (s, 2H), 7,87 (s, 1H), 7,9-8,1 (brs, 1H), 9,81 (d, V J=8,2Hz, 1H).

IR v (KBr) cm'1: 3300br, 3120, 1764, 1660, 1620, 1519, 1480, 1355.

90 110322 Tämä yhdiste on tehokas antibakteeri Escherichia coli EC-14:a (0,4 pg/ml) vastaan.

12) Asyyli = (Z)-2- [2-(t-butoksikarbonyyliamino - amino)tiatsol-4-yyli]-2-(trityyli -5 H)oksi-iminoasetyyli

Het = (trityyli - H)-l,2,3-triatsol-4-yyli

Liuokseen, jossa on 7β- [(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsoi-4-yyli)-2-trityyli-10 oksi-iminoasetamido]-3-(l-trityyli-l,2,3-tnatsol-4-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (29 g; 22,9 mmol) anisolin (50 ml) ja nit-rometaanin (200 ml) seoksessa lisätään tipoittain liuos, jossa on alumiinikloridia (20,7 g; 156 mmol) anisolissa (50 ml) lämpötilassa välillä -30°C ja -40°C ja seosta sekoitetaan yksi tunti samassa lämpötilassa. Reaktioseos laimennetaan IN suola-15 hapolla (200 ml) ja vedellä ja pestään etyyliasetaatilla. Vesikerros väkevöidään orgaanisen liuottimen poistamiseksi alipaineessa ja saatetaan styreeni-divinyylibent-seenikopolymeeriadsorbenttipylvään läpi. Tuote eluoidaan vesipitoisella metanolilla (4 : 1), jolloin saadaan 76-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-hydroksi-iminoaset-amido]-3-(l,2,3-triatsol-4-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karboksyylihappoa (8,07 g) : , 20 vaalean keltaisena jauheena.

: Saanto: 68 %.

I NMR δ (D20-NaHC03) ppm: 3,51, 3,75 (ABq, J=17,2Hz, 2H), 4,14, 4,25 (ABq, : ’ J=13,9Hz, 2H), 5,21 (d, J=4,7Hz, 1H), 5,84 (d, J=4,7Hz, 1H), 6,99 (s, 1H), 8,07 (s, 1H).

‘ 25 IR v (KBr) cm1: 3280, 3100, 1760, 1660, 1590, 1525, 1385, 1345, 1175, 995.

Tämä yhdiste on tehokas antibakteeri Escherichia coli 7437:ää (0,02 pg/ml) ja Ente-robacter cloacae SR233:a (0,8 pg/ml) vastaan ja sillä havaitaan oraalisesti annetta-•,' * essa korkea taso veressä (29,6 pg/ml; 15 minuuttia, hiiriä).

!' 30 i I 91 110322 13) (eristetty dinatriumsuolana)

Asyyli = (Z)-2-[2-(trityyliamino - amino)tiatsol-4-yyli]-2(difenyylimetoksikarbonyyli -karboksi)metoksi-iminoasetyyli 5

Het = (trityyli - H)-l,2,3-triatsol-4-yyli

Liuos, jossa on 7B-[(Z)-2-(2-trityyliaminotiatsol-4-yyli-2-(difenyylimetoksikarbo-nyylimetoksi-imino)asetamido]-3-(trityyli-l,2,3-triatsol-4-yylitioetyylitio)-3-kefem-4-10 karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (1,04 g; 0,749 mmol) 98 % muurahaishapon (16 ml) ja veden (0,8 ml) seoksessa sekoitetaan huoneenlämpötilassa 3 tuntia. Reaktioseos väkevöidään. Jäännös pestään eetterillä, suodatetaan ja kuivataan. Liuokseen, jossa on tätä jäännöstä anisolin (2 ml) ja nitrometaanin (8 ml) seoksessa -40°C:ssa lisätään liuos, jossa on alumiinikloridia (0,50 g; 3,76 mmol) anisolissa 15 (2 ml), ja seosta sekoitetaan lämpötilassa välillä -30°C ja -40°C yksi tunti. Reaktio- seos laimennetaan IN suolahapolla (3,8 ml) ja vedellä, pestään etyyliasetaatilla ja väkevöidään alipaineessa orgaanisten liuottimien poistamiseksi. Jäljelle jäänyt vesi-liuos kromatografoidaan styreeni-divinyylibentseenikopolymeerilla (metanoli: vesi = 4 : 1).

20 : Jäännös pestään etyyliasetaatilla ja saatu jauhe liuotetaan laimeaan vesipitoiseen 1 natriumvetykarbonaattiin ja puhdistetaan kromatograafisesti analyyttisella styreeni- . ’ divinyylibentseenillä (vesi). Eluaatti lyofilisoidaan ja jauhetaan etyyliasetaatilla, jol- 1 * loin saadaan 7B-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2(natriumoksikarbonyylimetoksi- 25 imino)asetamido]-3-(l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappo-natriumsuolaa (121 mg) vaalean keltaisen valkoisena jauheena.

Saanto: 26 %.

NMR δ (D20) ppm: 3,49, 3,70 (ABq, J=17,4Hz, 2H), 4,12, 4,24 (ABq, J=13,8 Hz, ;. 2H), 4,57 (s, 2H), 5,18 (d, J=4,8Hz, 1H), 5,82 (d, J=4,8Hz, 1H), 7,04 (s, 1H), 8,02 30 (s, 1H).

IR v (KBr) cm'1: 3600-2400br, 1760, 1655, 1595, 1530, 1390, 1350, 1320.

» · ,:, * Tämä yhdiste on tehokas antibakteeri Proteus mirabilis PR-4:ää (0,006 pg/ml) ja ;,. Proteus vulgaris CN-329:ää (0,006 pg/ml) vastaan.

j 92 110322 14) (eristetty dinatriumsuolana)

Asyyli = (Z)-2-[2-(trityyliamino - amino)tiatsol-4-yyli]-2-[(S)-l-(difenyylimetoksi-karbonyyli - karboksi)etoksi-imino]asetyyli 5

Het = (trityyli - H)-lf2,3-triatsol-4-yyli

Liuosta, jossa on 76-{(Z)-2-(2-trityyliaminotiatsol-4-yyli)-2[(S)-l-difenyylimetoksi-karbonyylietoksi-imino]asetamido}-3-(trityyli-l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-10 kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (1,01 g; 0,720 mmol) 98 % muurahaishapon (16 ml) ja veden (0,8 ml) seoksessa sekoitetaan huoneenlämpötilassa 3 tuntia. Reaktioseos väkevöidään ja jäännös pestään eetterillä, suodatetaan ja kuivataan. Tuote liuotetaan anisolin (2 ml) ja nitrometaanin (8 ml) seokseen, jäähdytetään -40°C:ssa, sekoitetaan liuoksen kanssa, jossa on alumiinikloridia (0,48 g; 15 3,61 mmol) anisolissa (2 ml), ja sekoitetaan lämpötilassa välillä -30°C ja -40°C 1,5 tuntia. Reaktioseos sekoitetaan IN suolahapon (3,6 ml) kanssa, laimennetaan vedellä, pestään etyyliasetaatilla, ja väkevöidään alipaineessa jäljelle jääneiden orgaanisten liuottimien poistamiseksi. Saatu vesipitoinen liuos kromatografoidaan styreeni-divinyylibentseenikopolymeerilla (metanoli: vesi = 4:1). Saatu jauhe pestään etyy-’ 20 liasetaatilla, liuotetaan laimeaan vesipitoiseen natriumvetykarbonaattiin, ja puhdiste taan analyyttisesti styreenidivinyylibentseenikopolymeerikromatograafisesti (vesi), ja lyofilisoidaan. Lyofilisaatti pestään etyyliasetaatilla ja jauhetaan, jolloin saadaan 78- » {(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-[(S)-l-natriumoksikarbonyylietoksi-imino]aset-' ' amido}-3-(l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4karboksyylihapponatrium- 25 suolaa (103 mg) vaalean kellertävän valkoisena jauheena.

Saanto: 23 %.

NMR δ (DzO) ppm: 1,46 (d, J=7,0Hz, 3H), 3,48, 3,67 (ABq, J=17,2Hz, 2H), 4,11, 4,23 (ABq, J=13,8Hz, 2H), 4,65 (q, J=7,0Hz, 1H), 5,18 (d, J=4,8Hz, 1H), 5,84 (d, \1 · J=4,8Hz, 1H), 7,02 (s, 1H), 7,98 (s, 1H).

!1 30 IR v (KBr) cm'1: 3600-2400br, 1760, 1655, 1590, 1528, 1388, 1350.

Tämä yhdiste on tehokas antibakteeri Proteus mirabilis PR4:ää (0,01 pg/ml), Prote-j.‘ us vulgaris CN-329:ää (0,006 pg/ml) ja Escherichia coli EC-14:a (0,2 pg/ml) vas- taan.

93 110322 15) Asyyli = (Z)-2-[2-(t-butoksikarbonyyliamino - amino)tiatsol-4-yyli]-2-[l-(difenyylimetoksikarbonyyli - karboksi)vinyylioksi-imino]asetyyli

Het = (trityyli - H)-l,2,3-triatsol-4-yyli 5

Liuokseen, jossa on 78-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-(l-difenyylimetoksikarbonyylivinyylioksi-imino)asetamido]-3-(trityyli-l,2,3-triatsol-4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (910 mg; 0,723 mmol) anisolin (3 ml) ja nitrometaanin (12 ml) seoksessa -40°C:ssa lisätään 10 liuos, jossa on alumiinikloridia (0,77 g; 5,79 mmol) anisolissa (3 ml), ja seosta sekoitetaan lämpötilassa välillä -30°C ja -40°C 50 minuuttia. Reaktioseos sekoitetaan i IN suolahapon (5,8 ml) kanssa, laimennetaan vedellä, pestään etyyliasetaatilla ja väkevöidään alipaineessa jäljelle jääneiden orgaanisten liuottimien poistamiseksi. Saatu vesiliuos kromatografoidaan styreeni-divinyylibentseenikopolymeerilla (meta-15 noli: vesi = 4:1), ja saatu jauhe pestään etyyliasetaatilla, jolloin saadaan 78- [(Z> 2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-(l-karboksivinyylioksi-imino)asetamido]-3-(l,2,3-triatsol- 4-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappoa (326 mg) vaalean keltaisen valkoisena jauheena.

Saanto: 77 %.

20 NMR δ (D20-NaHC03) ppm: 3,48, 3,68 (ABq, J=17,4Hz, 2H), 4,11, 4,23 (ABq, : J=13,9 Hz, 2H), 5,168 (d, J=l,7Hz, 1H), 5,171 (d, J=4,8Hz, 1H), 5,32 (d, J=l,7Hz, 1H), 5,87 (d, J=4,8Hz, 1H), 7,21 (s, 1H), 8,00 (s, 1H).

IR v (KBr) cm1: 3600-2400br, 1766, 1660, 1630, 1580, 1530, 1390, 1360.

25 Tämä yhdiste on tehokas antibakteeri Proteus mirabilis PR4:ää (<0,003 pg/ml) ja Serratia marcescens SR1005:ä (0,8 pg/ml) vastaan.

16) Asyyli = (Z)-2-[2-(t-butoksikarbonyyliamino - amino)tiatsol-4-yyli]-2-[(l-t- '; t' * butoksikarbonyyli - karboksi)-l-metyylietoksi-imino]asetyyli :·; . 30 :. Het = (trityyli - H)-l,2,3-triatsol-4-yyli j Liuokseen, jossa on 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-(l-t- .· butoksikarbonyyli-l-metyylietoksi-imino)-asetamido]-3-(trityyli-l,2,3-triatsol-4- 94 110322 yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (822 mg; 0,706 mmol) anisolin (3 ml) ja nitrometaanin (12 ml) seoksessa -40°C:ssa lisätään liuos, jossa on alumiinikloridia (0,75 g; 5,64 mmol) anisolissa (3 ml), ja seosta sekoitetaan lämpötilassa välillä -30°C ja -40°C yksi tunti. Reaktioseos sekoitetaan IN 5 suolahapon (5,7 ml) kanssa, laimennetaan vedellä, pestään etyyliasetaatilla ja väke-vöidään alipaineessa jäljelle jääneiden orgaanisten liuottimien poistamiseksi. Saatu liuos kromatografoidaan styreeni-divinyylibentseenikopolymeerilla (metanoli: vesi = 4 : 1) ja saatu jauhe pestään etyyliasetaatilla, jolloin saadaan 78-[(Z)-2-(2-amino-tiatsol-4-yyli)-2-(l-karboksi-l-metyylietoksi-imino)asetamido]-3-(l,2,3-triatsol-4-10 yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappoa (299 mg) vaalean kellertävän valkoisena jauheena.

Saanto: 71 %.

NMR δ (D20-NaHC03) ppm: 1,48 (s, 3H), 1,50 (s, 3H), 3,50, 3,69 (ABq, J= 17,4Hz, 2H), 4,12, 4,24 (ABg, J=13,9Hz, 2H), 5,19 (d, J=4,9Hz, 1H), 5,82 (d, J=4,9Hz, 1H), 15 6,99 (s, 1H), 8,01(s, 1H), IR v (KBr) cm1: 3600-2400br, 1768, 1670, 1635, 1580, 1535, 1385, 1360, Tämä yhdiste on tehokas antibakteeri Proteus mirabilis PR4:ää (0,01 pg/ml), Serra-tia marcescens A13880:aa (0,8 pg/ml) ja Pseudomonas aeruginosa A25619:ää 20 (1,6 pg/ml) vastaan.

; 17) Asyyli = (Z)-2- [2-(t-butoksikarbonyyliamino - a m i no)ti a tsol-4-yy li ] - 2-(tri tyy I i - H)oksi-iminoasetyyli 25 Het = l-metyyli-l,2,3-triatsol-4-yyli

Liuokseen, jossa on 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyli-aminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-oksi-iminoasetamido]-3-(l-metyyli-l,2,3-triatsol-4-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-;. ’ karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (708 mg; 0,683 mmol) anisolin (2 ml) ja •: . 30 nitrometaanin (8 ml) seoksessa lisätään tipoittain liuos, jossa on alumiinikloridia :. (727 mg; 5,47 mol) anisolissa (2 ml) -40°C:ssa, ja seosta sekoitetaan yksi tunti läm- ’· Potilassa välillä -30°C ja -40°C. Reaktioseos laimennetaan IN suolahapolla (5,5 ml) ja vedellä ja pestään etyyliasetaatilla. Vesikerros väkevöidään alipaineessa orgaani-: sen liuottimen poistamiseksi ja saatetaan styreeni-divinyylibentseenikopolymeeri- 95 110322 adsorbenttipylvään läpi. Tuote eluoidaan metanoli-vedellä (4 : 1), jolloin saadaan 78-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-hydroksi-iminoasetamido]-3-(l-metyyli-l,2,3-triatsol-4-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4karboksyylihappoa vaalean keltaisena jauheena (96,3 mg). Saanto: 27 %.

5 NMR δ (D20-NaHC03) ppm: 3,50, 3,81 (ABq, J=17,4Hz, 2H), 4,11 (s, 3H), 4,12, 4,22 (ABq, J=14,0Hz, 2H), 5,24 (d, J=4,6Hz, 1H), 5,83 (d, J=4,6Hz, 1H), 6,99 (s, 1H), 8,09 (S, 1H), IR v (KBr) cm1: 3252, 2928, 1770, 1650, 1620, 1523, 1404, 1348, 1181, 1019.

10 Tämä yhdiste on tehokas antibakteeri Escherichia coli 7437:ää (0,02 pg/ml), Ente-robacter cloacae SR233:a (0,8 pg/ml) ja Haemofilus influenzae SR3508:aa (0,1 pg/ml) vastaan.

18) Asyyli = (Z)-2-[2-(t-butoksikarbonyyliamino - amino)tiatsol-4-yyli)-2-(trityyli -15 H)oksi-iminoasetyyli

Het = 2-metyyli-l,2,3-triatsol-4-yyli

Liuokseen, jossa on 76-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-20 oksi-iminoasetamido]-3-(2-metyyli-l,2,3-triatsol-4-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4- karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (1,39 g; 1,34 mmol) anisolin (5 ml) ja nitro-: metaanin (20 ml) seoksessa lisätään tipoittain liuos, jossa on alumiinikloridia • · (1,43 g; 10,8 mmol) anisolissa (5 ml) -40°C:ssa. Sekoitetaan lämpötilassa välillä -30°C ja -40°C yksi tunti, minkä jälkeen seos laimennetaan IN suolahapolla (11 ml) 25 ja vedellä ja pestään etyyliasetaatilla. Vesikerros väkevöidään alipaineessa orgaanisten liuottimien poistamiseksi ja saatetaan styreenidivinyylibentseenikopolymeeri-adsorbenttipylvään läpi. Tuote eluoidaan metanoli-vedellä (4 : 1), jolloin saadaan 78-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-hydroksi-iminoasetamido]-3-(2-metyyli-l,2,3-'; ' triatsol-4-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karboksyylihappoa vaalean keltaisena jauhee- •; . 30 na (534 mg).

:. Saanto: 75 %.

96 1 10322 NMR δ (D20-NaHC03) ppm: 3,52, 3,80 (ABq, J=17,3Hz, 2H), 4,17 (s, 3H), 4,18, 4,25 (ABq, J=13,7Hz, 2H), 5,23 (d, J=4,8Hz, 1H), 5,82 (d, J=4,8Hz, 1H), 6,99 (s, 1H), 7,84 (s, 1H), IR v (KBr) cm'1: 3288, 1768, 1663, 1606, 1530, 1365, 1255, 1177, 1005.

5 Tämä yhdiste on tehokas antibakteeri Escherichia coli 7437:ää (0,02 pg/ml) vastaan.

19) Asyyli = (Z)-2-[2-(t-butoksikarbonyyliamino - amino)tiatsol-4-yyli]-2-(trityyli -10 H)oksi-iminoasetyyli

Het = 3-metyyli-l,2,3-triatsol-4-yyli

Liuokseen, jossa on 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-15 oksi-iminoasetamido]-3-(3-metyyli-l,2,3-triatsol-4-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (900 mg: 0,869 mmol) anisolin (4 ml) ja nitrometaanin (16 ml) seoksessa lisätään liuos, jossa on alumiinikloridia (924 mg; 6,95 mmol) anisolissa (2 ml) -40°C:ssa, ja seosta sekoitetaan yksi tunti lämpötilassa välillä -40°C ja 30°C. Reaktioseos laimennetaan lN-suolahapolla (7 ml) ja vedellä ja 20 pestään etyyliasetaatilla. Vesikerros väkevöidään alipaineessa orgaanisen liuottimen poistamiseksi ja saatetaan styreeni-divinyylibentseenikopolymeeriadsorbenttipylvään • läpi. Tuote eluoidaan metanoli-vedellä (4 : 1), jolloin saadaan 78-[(Z)-2-(2-amino- tiatsol-4-yyli)-2-hydroksi-iminoasetamido]-3-(3-metyyli-l,2,3-triatsol-4-yyli)tiome-tyylitio-3-kefem-4-karboksyylihappoa vaalean keltaisena jauheena (366 mg).

25 Saanto: 80 %.

NMR δ (D20-NaHC03) ppm: 3,53, 3,78 (ABq, J=17,4Hz, 2H), 4,08 (s, 3H), 4,14, 4,27 (ABq, J=14,lHz, 2H), 5,23 (d, J=4,5Hz, 1H), 5,84 (d, J=4,5Hz, 1H), 6,98 (s, 1H), 7,95 (s, 1H).

:IR v (KBr) cm'1: 3204, 2984, 1768, 1664, 1610, 1529, 1382, 1347, 1262, 1176, . 30 1127,996.

: ‘’ Tämä yhdiste on tehokas antibakteeri Escherichia coli 7437:ää (0,02 pg/ml) ja Ente- : ’ robacter cloacae SR233:a (0,4 pg/ml) vastaan.

110322 97 20) Asyyli = (Z)-2- [2-(t-butoksikarbonyyliamino - amino)tiatsol-4-yyli]-2-(trityyli -H)oksi-iminoasetyyli

Het = l-(trityyli - H)-l,2,4-triatsol-4-yyli 5

Liuokseen, jossa on 70-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-oksi-iminoasetamido]-3-(l-trityyli-l,2,4-triatsol-3-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (1,89 g; 1,50 mmol) anisolin (7 ml) ja nit-rometaanin (28 ml) seoksessa lisätään tipoittain liuos, jossa on alumiinikloridia 10 (1,99 g; 15 mmol) anisolissa (7 ml) lämpötilassa välillä -30°C ja -40°C, ja seosta sekoitetaan samassa lämpötilassa yksi tunti. Reaktioseos laimennetaan IN suolahapolla (15 ml) ja vedellä ja pestään etyyliasetaatilla. Vesikerros väkevöidään alipaineessa orgaanisten liuottimien poistamiseksi ja saatetaan styreeni-divinyylibent-seenikopolymeeriadsorbenttipylvään läpi. Tuote eluoidaan metanoli-vedellä (2 : 3), 15 jolloin saadaan 76-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-hydroksi-iminoasetamido]-3-(l,2,4-triatsol-3-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karboksyylihappoa vaalean keltaisena jauheena (418 mg).

Kokonaissaanto: 34 %.

' ; 20 NMR δ (D20-NaHC03) ppm: 3,54, 3,79 (ABq, J=17,4Hz, 2H), 4,42 (s, 2H), 5,21 (d, J=4,3Hz, 1H), 5,83 (d, J=4,3Hz, 1H), 6,98 (s, 1H), 8,40 (s, 1H).

; IR v (KBr) cm1: 3280, 3132, 1768, 1665, 1605, 1530, 1390, 1349, 1273, 1178, 1004.

25 Tämä yhdiste on tehokas antibakteeri Escherichia coli 7437:ää (0,02 pg/ml), Ente-robacter cloacae SR233:a (0,8 pg/ml) ja Klebsiella pneumoniae SRl:ä (0,05 pg/ml) vastaan.

98 1 10322 21) Asyyli = (Z)-2- [2-(t-butoksikarbonyyliamino - amino)tiatsol-4-yyli]-2-(trityyli -H)oksi-iminoasetyyli

Het = l-metyyli-l,2,4-triatsol-3-yyli 5

Liuokseen, jossa on 78-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-oksi-iminoasetyyliamino]-3-(l-metyyli-l,2i4-triatsol-3-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (1,52 g; 1,47 mmol) anisolin (5 ml) ja nit-rometaanin (20 ml) seoksessa -40°C:ssa lisätään liuos, jossa on alumiinikloridia 10 (1,56 g; 11,7 mmol) anisolissa (5 ml), ja seosta sekoitetaan lämpötilassa välillä -30°C ja -40°C yksi tunti. Reaktioseos sekoitetaan IN suolahapon (12 ml) kanssa, laimennetaan vedellä, pestään etyyliasetaatilla, väkevöidään jäljelle jääneiden orgaanisten liuottimien poistamiseksi ja saatetaan styreeni-divinyylibentseenikopoly-meeriadsorbenttipylvään läpi. Adsorboitu tuote eluoidaan vesi-metanolilla (1: 4).

15 Eluaatti väkevöidään, jolloin saadaan jauhe ja pestään etyyliasetaatilla, jolloin saadaan 76-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-hydroksi-iminoasetyyliamino]-3-(l-metyyli- l,2,4-triatsol-3-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappoa (628 mg) keltaisena jauheena.

Saanto: 81 %.

: 20 NMR δ (D20-NaHC03) ppm: 3,55, 3,83 (ABq, J=17,2Hz, 2H), 3,89 (s, 3H), 4,40 (s, 2H), 5,24 (d, J=4,7Hz, 1H), 5,82 (d, J=4,7Hz, 1H), 6,99 (s, 1H), 8,36 (s, 1H).

IR v (KBr) cm 1: 3200br, 1765, 1660, 1630, 1600, 1520, 1380, 1348.

25 22) Asyyli = (Z)-2-[2-(t-butoksikarbonyyliamino - amino)tiatsol-4-yyli]-2-(trityyli - H)oksi-iminoasetyyli

Het = 2-metyyli-l,2,4-triatsol-3-yyli ; _ 30 Liuokseen, jossa on 78-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli- oksi-iminoasetyyliamino]-3-(2-metyyli-l,2,4-triatsol-3-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (1,54 g; 1,49 mmol) anisolin (5 ml) ja nit-rometaanin (20 ml) seoksessa -40°C:ssa lisätään liuos, jossa on alumiinikloridia (1,58 g; 11,9 mmol) anisolissa (5 ml), ja seosta sekoitetaan lämpötilassa välillä 110322 99 I -30°C ja -40°C 50 minuuttia. Reaktioseos sekoitetaan IN suolahapon (12 mi) kanssa, 1 laimennetaan vedellä, pestään etyyliasetaatilla, väkevöidään jäljelle jääneiden or gaanisten liuottimien poistamiseksi, ja saatetaan styreeni-divinyylibentseenikopoly-meeriadsorbenttipylvään läpi. Absorboitu tuote eluoidaan vesi-metanolilla (1 : 4).

5 Eluaatti väkevöidään, jolloin saadaan jauhe, joka pestään etyyliasetaatilla, jolloin saadaan 76-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-hydroksi-iminoasetyyli]-3-(2-metyyli- l,2,4-triatsol-3-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappoa (654 mg).

Saanto: 83 %.

NMR δ (D20-NaHC03) ppm: 3,54, 3,81 (ABq, J=17,4Hz, 2H), 3,85 (s, 3H), 4,44, 10 4,50 (ABq, J=14,lHz, 2H), 5,21 (d, J=4,8Hz, 1H), 5,83 (d, J=4,8Hz, 1H), 6,98 (s, 1H), 8,03 (s, 1H).

IR v KBr) cm'1 : 3200br, 1765, 1655, 1600, 1525, 1473, 1382, 1345.

23) Asyyli = (Z)-2-[2-(t-butoksikarbonyyliamino - amino)tiatsol-4-yyli]-2-(trityyli -15 H)oksi-iminoasetyyli

Het = 4-metyyli-l,2,4-triatsol-3-yyli

Liuokseen, jossa on 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-20 oksi-iminoasetyyliamino]-3-(4-metyylil,2,4-triatsol-3-yylitiometyylitio-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (378 mg : 0,365 mmol) anisolin (1 ml) ja nitrometaanin (4 ml) seoksessa -40°C:ssa lisätään liuos, jossa on alumiinikloridia (388 mg; 2,92 mmol) anisolissa (1 ml), ja seosta sekoitetaan lämpötilassa välillä -30°C ja -40°C 50 minuuttia. Reaktioseos sekoitetaan IN suolahapon (3 ml) kanssa, 25 laimennetaan vedellä, pestään etyyliasetaatilla, väkevöidään alipaineessa jäljelle jääneiden orgaanisten liuottimien poistamiseksi, ja puhdistetaan kromatograafisesti styreeni-divinyylibentseenikopolymeerihartsilla (metanoli: vesi = 4:1). Saatu jauhe pestään etyyliasetaatilla, jolloin saadaan 78-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-‘* hydroksi-iminoasetyyliamino]-3-(4-metyyli-l,2,4-triatsol-3-yylitiometyylitio)-3-kefem- *; , 30 4-karboksyylihappoa (150 mg) keltaisena jauheena.

Saanto: 78 %.

100 1 10322 NMR δ (D2ONaHC03) ppm: 3,69 (s, 3H), 3,53, 3,80 (ABq, J=17,5Hz, 2H), 4,35, 4.50 (ABq, 13,4Hz, 2H), 5,19 (d, J=4,9Hz, 1H), 5,83 (d, J=4,9Hz, 1H), 7,00 (s, 1H), 8.50 (s, 1H).

IR v (KBr) cm1: 3200br, 1767, 1655, 1630, 1605, 1520, 1377, 1340.

5 Tämä yhdiste on tehokas antibakteeri Escherichia coli EC-14:a (0,05 μΙ/ml) ja Mor-gania morganii SR9:ää (0,1 μΙ/ml) vastaan.

24) Asyyli = (Z)-2-[2-(t-butoksikarbonyyliamino - amino)tiatsol-4-yyli]-2-(trityyli -10 H)oksi-iminoasetyyli

Het = l,2,3-tiadiatsol-5-yyli

Liuokseen, jossa on 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-15 oksi-iminoasetyyli]amino-3-(l,2,3-tiadiatsol-5-yyli)tiometyylitio-3-kefern-4-karbok-syylihappodifenyylimetyyliesteriä (1,21 g; 1,16 mmol) anisolin (4 ml) ja nitrome-taanin (16 ml) seoksessa lisätään lämpötilassa välillä -30°C ja -40°C jäähdyttäen liuos, jossa on alumiinikloridia (1,23 g; 9,25 mmol) anisolissa (4 ml), ja seosta sekoitetaan lämpötilassa välillä -30°C ja -40°C 50 minuuttia. Reaktioseokseen lisätään t 20 IN suolahappoa (10 ml), laimennetaan vedellä ja pestään etyyliasetaatilla. Vesiker-ros väkevöidään orgaanisten liuottimien poistamiseksi, puhdistetaan styreeni-* divinyylibentseenikopolymeerikromatograafisesti (metanoli : vesi = 4 : 1) ja saatua : jauhe pestään etyyliasetaatilla, jolloin saadaan 7B-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2- hydroksi-iminoasetyyli]amino-3-(l,2,3-tiadiatsol-5-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-25 karboksyylihappoa keltaisena jauheena (440 mg).

Saanto: 71 %.

NMR δ (D20-NaHC03) ppm: 3,58, 3,88 (ABq, J=17,4Hz, 2H), 4,37, 4,48 (ABg J=14,lHz, 2H), 5,25 (d, J=4,7Hz, 1H), 5,83 (d, J=4,7Hz, 1H), 6,97 (s, 1H), 8,76 (s, 1H).

30 IR v (KBr) cm1: 3200br, 1760, 1655, 1600, 1520, 1380, 1340, 1200, 1170. ί' Tämä yhdiste osoittaa voimakasta antibakteriaalista aktiivisuutta Escherichia coli » i r 7437:ää (0,01 pg/ml), Escherichia coli SR377:ää (0,4 pg/ ml), Morgania morganii SR9:ää (0,05 pg/ml) ja Enterobacter cloacae SR233:a (0,4 pg/ml) vastaan.

110322 101 25) Asyyli = (Z)-2-[2-(t-butoksikarbonyyliamino - amino)tiatsol-4-yyli]-2-(trityyli -H)oksi-iminoasetyyli

Het = l,3,4-tiadiatsol-2-yyli 5

Liuokseen, jossa on 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-oksi-iminoasetamido]-3-(l,3,4-tiadiatsol-2-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyyli-happodifenyylimetyyliesteriä (535 mg; 0,51 mmol) anisolin (1 ml) ja nitrometaanin (4 ml) seoksessa lisätään liuos, jossa on alumiinikloridia (0,61 g; 4,6 mmol) anisolis-10 sa (2 ml) -30°C:ssa ja seosta sekoitetaan 40 minuuttia. Reaktioseos sekoitetaan etanolin (2 ml) kanssa, sekoitetaan 5 minuuttia samassa lämpötilassa, laimennetaan IN suolahapolla (6 ml) ja vedellä (200 ml) ja pestään etyyliasetaatilla. Vesikerros väkevöidään alipaineessa orgaanisten liuottimien poistamiseksi ja saatetaan styree-ni-divinyylibentseenikopolymeeripylvään läpi. Adsorboitu aines eluoidaan metanoli -15 vedellä (4 : 1). Eluaatti väkevöidään, jolloin saadaan 7B-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-hydroksi-iminoasetamido]-3-(l,3,4-tiadiatsol-2-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappoa vaalean keltaisena kiinteänä aineena (201 mg).

Saanto: 74 %.

NMR Ö (D20-NaHC03) ppm: 3,60, 3,89 (ABq, J=17Hz, 2H), 4,57, 4,64 (ABq, :‘: 20 J=14Hz, 2H), 5,24 (d, J=5Hz, 1H), 5,83 (d, J=5Hz, 1H), 6,98 (s, 1H), 9,41 (s, 1H).

;,:'; IR v (KBr) cm1: 3300, 1765, 1665, 1600, 1370.

Tämä yhdiste on tehokas antibakteeri Escherichia coli SR377:ää (0,4 pg/ml), Ente-‘: robacter cloacae SR233:a (0,4 pg/ml) ja Morgania morganii SR9:ää (0,1 pg/ml) vas- 25 taan.

26) Asyyli = (Z)-2-[2-(t-butoksikarbonyyliamino - amino)tiatsol-4-yyli]-2-(trityyli -H)oksi-iminoasetyyli :. 30 Het = 2-metyyli-l,3,4-tiadiatsol-5-yyli ;: Liuokseen, jossa on 7B-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli- oksi-iminoasetamido]-3-(2-metyyli-l,3,4-tiadiatsol-5-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (388 mg; 0,368 mmol) anisolin (1 ml) ja 110322 102 nitrometaanin (4 ml) seoksessa -30°C:ssa lisätään liuos, jossa on alumiinikloridia (0,45 g; 9,2 ekvivalenttia; 3,4 mmol) anisolissa (1,5 ml), ja seosta sekoitetaan 40 minuuttia. Reaktioseos sekoitetaan etanolin (2 ml) kanssa, sekoitetaan 5 minuuttia samassa lämpötilassa ja laimennetaan IN suolahapolla (6 ml) ja vedellä (200 ml).

5 Vesikerros erotetaan, pestään etyyliasetaatilla, väkevöidään alipaineessa orgaanisten liuottimien poistamiseksi, ja saatetaan styreeni-divinyylibentseenikopolymeeri-pylvään läpi. Pylväs eluoidaan metanoli-vedellä (4 : 1). Eluaatti väkevöidään, jolloin saadaan 76-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-hydroksi-iminoasetamido]-3-(2-metyyli- l,3,4-tiadiatsol-5-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappoa (149 mg).

10 Saanto: 75 %.

NMR δ (D20-NaHC03) ppm: 2,72 (s, 3H), 3,58, 3,87 (ABq, J=17Hz, 2H), 4,51, 4,57 (ABq, J=14Hz, 2H), 5,23 (d, J=5Hz, 1H), 5,83 (d, J=5Hz, 1H), 6,97 (s, 1H).

IR v (KBr) cm1: 3200, 1772, 1668, 1605, 1515, 1390, 1340.

15 Tämä yhdiste on tehokas antibakteeri Escherichia coli 7437:ää (0,02 pg/ml), Ente-robacter cloacae SR233:a (0,8 pg/ml), Escherichia coli SR377:ää (0,8 pg/ml), ja Morgania morganii SR9:ää (0,05 pg/ml) vastaan.

27) Asyyli = (Z)-2-[2-(t-butoksikarbonyyliamino - amino)tiatsol-4-yyli]-2-(trityyli -20 H)oksi-iminoasetyyli J' Het = tetratsol-5-yyli

Liuokseen, jossa on 73-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-tri-:.: 25 tyylioksi-iminoasetyyli]amino-3-(5-tetratsolyyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karboksyyli- happodifenyylimetyyliesteriä (942 mg; sisältää noin 10 % sivutuotetta) anisolin (3 ml) ja nitrometaanin (12 ml) seoksessa lisätään lämpötilassa välillä -30°C ja -40°C jäähdyttäen liuos, jossa on alumiinikloridia (980 mg; 7,37 mmol) anisolissa (3 ml), :‘ * ja seosta sekoitetaan lämpötilassa välillä -30°C ja -40°C yksi tunti. Reaktioseos lai- :, 30 mennetaan IN suolahapolla (7,5 ml) ja vedellä, pestään etyyliasetaatilla, väkevöi dään alipaineessa orgaanisten liuottimien poistamiseksi ja styreeni-divinyylibent-seenikopolymeerikromatografoidaan (metanoli : vesi = 2:3). Saatu jauhe pestään :.' etyyliasetaatilla, jolloin saadaan 76-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)2-hydroksi-imino- 110322 103 asetyyli]amino-3-(tetratsol-5-yyli)tiometyylitio-3-kefem-4-karboksyylihappoa vaalean keltaisena jauheena (289 mg).

Saanto: 28 % (78-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityylioksi-iminoasetyyli]amino-3-metaanisulfonyylioksi-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyyli-5 metyyliesteristä).

NMR δ (D20-NaHC03) ppm: 3,47, 3,65 (ABg, J=17,4Hz, 2H), 4,38, 4,43 (ABq, J=13,7Hz, ZH), 5,18 (d, J=4,6Hz, 1H), 5,83 (d, J=4,6Hz, 1H), 6,99 (s, 1H).

IR v (KBr) cm1: 3200br, 1765, 1650, 1600, 1525,1385, 1345, 1175.

10 Tämä yhdiste osoittaa voimakasta antibakteriaalista aktiivisuutta Escherichia coli 7437:ää (0,01 pg/ml) vastaan.

28) Asyyli = (Z)-2-[2-(t-butoksikarbonyyliamino - amino)tiatsol-4-yyli]-2-(trityyli -H)oksi-iminoasetyyli 15

Het = l-metyyli-5-tetratsolyyli

Liuokseen, jossa on 76-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-oksi-iminoasetyyli]amino-3-(l-metyyli-5-tetratsolyyli)tiometyylitio-3-kefem-4- t 20 karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (576 mg; 0,555 mmol) anisolin (2 ml) ja nitrometaanin (8 ml) seoksessa lisätään lämpötilassa välillä -30°C ja -40°C jäähdyt-täen liuos, jossa on alumiinikloridia (591 mg; 4,44 mmol) anisolissa (2 ml), ja seosta sekoitetaan lämpötilassa välillä -30°C ja -40°C yksi tunti. Reaktioseos laimennetaan IN suolahapolla (5 ml) ja vedellä ja pestään etyyliasetaatilla. Vesikerros väkevöi-v ’ 25 dään alipaineessa orgaanisten liuottimien poistamiseksi, ja puhdistetaan styreeni- divinyylibentseenikopolymeerikromatograafisesti (metanoli: vesi =4:1). Saatu jauhe pestään etyyliasetaatilla, jolloin saadaan 7B-[(Z)-2-(2aminotiatsol-4-yyli)-2-hydroksi-iminoasetyyli]amino-3-(l-metyyli-5-tetratsolyyli)tiometyylitio-3-kefem-4-:· karboksyylihappoa keltaisena jauheena (200 mg).

30 Saanto: 68 %.

’ NMR δ (D20-NaHC03) ppm: 3,59, 3,90 (ABq, J=17,4Hz, 2H), 4,00 (s, 3H), 4,58, 4,63 (ABg, J=13,8Hz, 2H), 5,24 (d, J=4,9Hz, 1H), 5,83 (d, J=4,9Hz, 1H), 6,98 (s, 1H).

IR v (KBr) cm1: 3300br, 1765, 1660, 1605, 1525, 1385, 1345, 1170.

104 110322 Tämä yhdiste osoittaa vahvaa antibakteriaalista aktiivisuutta Escherichia coli 7437:ää (0,02 pg/ml), Escherichia coli SR377:ää (0,4 pg/ml), Morgania morganii SR9:ää (0,1 pg/ml) ja Enterobacter cloacae SR233:a (0,8 pg/ml) vastaan.

5 29) Asyyli = (Z)-2-[2-(t-butoksikarbonyyliamino - amino)tiatsol-4-yyli]-2-(trityyli -H)oksi-iminoasetyyli

Het = 2-metyylitetratsol-5-yyli 10

Liuokseen, jossa on 70-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-oksi-iminoasetyyliamino]-3-(2-metyylitetratsol-5-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodifenyylimetyyliesteriä (1,16 g; 1,12 mmol) anisolin (4 ml) ja nitro-metaanin (16 ml) seoksessa -40°C:ssa lisätään liuos, jossa on alumiinikloridia 15 (1,19 g : 8,95 mmol) anisolissa (4 ml), ja seosta sekoitetaan lämpötilassa välillä -30°C ja -40°C yksi tunti. Reaktioseos sekoitetaan IN suolahapon (9 ml) kanssa, laimennetaan vedellä, pestään etyyliasetaatilla, väkevöidään jäljelle jääneiden orgaanisten liuottimien poistamiseksi ja saatetaan styreeni-divinyylibentseenikopoly-meeriadsorbenttipylvään läpi. Adsorboitu aines eluoidaan vesi-metanolilla (1 : 4) ja : ’ ' 20 väkevöidään, jolloin saadaan jauhetta, joka pestään etyyliasetaatilla, jolloin saadaan 78-(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-hydroksi-iminoasetamido]-3-(2-metyylitetratsol-5-;· yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappoa (466 mg) keltaisena jauheena.

Saanto: 79 %.

NMR δ (D20-NaHC03) ppm: 3,58, 3,88 (ABq, J=17,3Hz, 2H), 4,36 (s, 3H), 4,50 (s, 0' 25 2H), 5,26 (d, J=4,7Hz, 1H), 5,82 (d, J=4,7Hz, 1H), 6,98 (s, 1H).

IR v (KBr) cm1: 3300br, 1767, 1660, 1630, 1600, 1528, 1387, 1340, 1321.

30) Asyyli = (Z)-2-[2-(t-butoksikarbonyyliamino - amino)tiatsol-4-yyli]-2-(trityyli -H)oksi-iminoasetyyli ; 30 • · Het = 2-pyridyyli

Liuokseen, jossa on 76-[(Z)-2-(2-t-butoksikarbonyyliaminotiatsol-4-yyli)-2-trityyli-oksi-iminoasetamido]-3-(2-pyridyylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappodi- 105 110o22 fenyylimetyyliesteriä (722 mg; 0,70 mmol) anisolin (2 ml) ja nitrometaanin (8 ml) seoksessa lisätään -40°C:ssa jäähdyttäen liuos, jossa on alumiinikloridia (744 mg; 5,59 mmol) anisolissa (2 ml), ja seosta sekoitetaan lämpötilassa välillä -30°C ja -40°C yksi tunti. Reaktioseos laimennetaan IN suolahapolla (6 ml) ja vedellä, pes-5 tään etyyliasetaatilla, väkevöidään alipaineessa orgaanisten liuottimien poistamiseksi, ja saatetaan styreeni-divinyylibentseenikopolymeeripylvään läpi. Adsorboitu aines eluoidaan metanoli-vedellä (4 : 1). Eluaatti väkevöidään. Jäännös pestään etyyliasetaatilla ja kuivataan, jolloin saadaan 78-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-hydroksi-iminoasetyyliamino]-3-(2-pyridyylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappoa 10 (289 mg).

Saanto: 79 %.

NMR δ (D20-NaHC03) ppm: 3,55, 3,78 (ABq, J=17,2Hz, 2H), 4,43, 4,49 (ABq, J=14,0Hz, 2H), 5,16 (d, J=4,6Hz, 1H), 6,96 (s, 1H), 7,23 (ddd, J=7,5 Hz, J=4,9Hz, J=0,8Hz, 1H), 7,46 (brd, J=8,0Hz, 1H), 7,74 (ddd, J=8,0Hz, J=7,5Hz, J=l,6 Hz, 15 1H), 8,39 (brd, J=4,9Hz, 1H).

IR v KBr) cm1: 3320, 2976, 1764, 1665, 1619, 1575, 1530, 1415, 1353, 1120.

Tämä yhdiste on tehokas antibakteeri Escherichia coli 7437:ää (0,01 pg/ml) vastaan ja sillä havaitaan oraalisesti annettaessa korkea taso veressä (18,7 pg/ml; 15 mi-:' ’ 20 nuuttia, hiiriä).

;· Kunkin yhdisteen koe tehtiin seuraavasti: * Antibakteriaalinen aktiivisuus in vitro : 25

Liuos, jossa on koeyhdistettä 0,01N vesipitoisessa natriumvetykarbonaatissa saate-tiin agaarilevylle kaksinkertaisella laimennusmenetelmällä ja minimaaliset gram-negatiivista ja gram-positiivista bakteeria hillitsevät konsentraatiot mitattiin Japan : \ Society of Chemotherapy'n standardimenetelmällä, y 30

Veren taso 15 minuuttia oraalisen antamisen jälkeen

Koeyhdiste (40 mg/kg) arabikumin 5 % suspensiossa annettiin hiirelle (paino noin ! 25 g) suoniletkun läpi. 15 minuutin kuluttua veri erotettiin sydänontelosta ja koeyh- 106 110322 disteen konsentraatio mitattiin levyviljely-menetelmällä käyttämällä Escherichia coli 7437:ä.

Esimerkki 8 Lääkeformulaatiot 5 1) Rakeet 76-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-hydroksi-iminoasetyyliamino]-3-(l,2,3-triatsol-4--yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappo 100 mg 10 laktoosi 600 mg maissitärkkelys 290 mg hydroksipropyyliselluloosa 10 mg

Edelliset ainekset granuloidaan tavanomaisella märkämenetelmällä ja 1 g kutakin 15 pakataan raeformulaationa ja annetaan kolmesti päivässä potilaalle, joka on saanut sensitiivisen bakteerin aiheuttaman tartunnan.

2) Tabletit ; :' 20 76-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoasetyyliamino]-3-(l,2,3-triatsol-4-- yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappo 100 mg laktoosi 65 mg maissitärkkelys 32 mg hydroksipropyyliselluloosa 2 mg ; V 25 magnesiumstearaatti 1 mg

Edelliset ainekset granuloidaan tavanomaisella märkämenetelmällä ja formuloidaan tablettikoneella, jolloin saadaan tabletteja, joiden halkaisija on 7,5 mm ja annetaan : (. kahdesti päivässä potilaalle, joka on saanut sensitiivisen bakteerin aiheuttaman tar- ; 30 tunnan.

I i 107 110322 3) Kovakapselit 76-[(Z)-2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-metoksi-iminoasetyyliamino]-3-(l,2,4-triatsol-3-yylitiometyylitio)-3-kefem-4-karboksyylihappo 100 mg 5 maissitärkkelys 47 mg magnesiumstearaatti 1,5 mg talkkijauhe 1,5 mg

Edelliset ainekset granuloidaan tavanomaisella märkämenetelmällä ja täytetään ko-10 vakelatiinikapseleihin, koko No. 4 ja annetaan kahdesti päivässä potilaalle, joka on saanut sensitiivisen bakteerin aiheuttaman tartunnan.

Claims

108 1 10322 Patenttivaatimus

1. Menetelmä valmistaa terapeuttisesti aktiivista tioalkyylitiokefalosporiinijohdannais-ta, jolla on kaava II 5 y asyyli-NH ----- ^ J>-N /R\ /^-Het O S S COOH II 10 jossa asyyli on D-mandeloyyli tai Ci-C8-alkanoyyli, joka mahdollisesti on substituoitu yhdellä tai useammalla seuraavista substituenteista a) fenyyli b)

15. N_^'NH-C(CH3)3> —NH-C-OC(CH3)3, / ΛΙΓ N_/ nh2 v 20 “ ζ I : c) =N-OR3, jossa R3 on H, syklopentyyli, trityyli, Ci-Q-alkyyli, Ci-Cralkenyyli, ’ ": -(CHm)nC(=0)0CH(C6Hs)2, -(CHm)nCHO, -C(CH3)2C(=0)0C(CH3)3 tai -C(CH3)2CHO, 25 jossa m ja n on 1 tai 2, ja d) -S-CHX2, jossa X = halogeeni, glykosyyli subsituoituna ryhmällä N- NH-jpOC(CH3)3, · ^-s o 30 : ‘ ’ tai glysyyli substituoituna 1) fenyylillä ja : · · 2) -NH-C(=0)0C(CH3)3:lla tai NH2:lla; . ·: ·. Het on triatsolyyli, joka voi olla substituoitu trityylilla tai CrC4-alkyylilla; pyridyyli; , · ·. tetratsolyyli, joka mahdollisesti on substituoitu Ci-C4-alkyylilla; tai tiadiatsolyyli, 109 110322 joka mahdollisesti on substituoitu Ci-C4-alkyylilla/ R1 on yksinkertainen sidos; R2 on suoraketjuinen tai haarautnut Cj-Q-alkyleeni; X on rikkiatomi tai sulfoksidiryhmä; ja 5 Y on vetyatomi tai metoksiryhmä, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola, tunnettu siitä, että 1. saatetaan kaavan III mukainen yhdiste Y ! /ΧΙΟ H2N-~~--i-S N o y s S COOR jossa 111 15. on vety tai karboksisuojaryhmä, ja Het, R1, R2, X ja Y tarkoittavat samaa kuin edellä, reagoimaan hapon kanssa, jolla on kaava asyyli-OH 20 jossa asyyli on mahdollisesti suojattu asyyli, jolloin saadaan kaavan II mukainen yhdiste; ,y X asyyli-NH—___^ :·' 25 Π o y s s COOH . 11 30 jossa asyyli, Het, R, R1, R2, X ja Y tarkoittaa samaa kuin edellä, no 110322 2. saatetaan kaavan IV mukainen yhdiste ί Y X asyyli-NH-^ ^ \

5 O ^ 0S02r3 COOR IV jossa asyyli, R, X ja Y tarkoittavat samaa kuin edellä ja R3 on alkyyli, reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on kaava 10 AcSR2SR1Het jossa Ac on asyyli ja Het, R1 ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellä, jolloin saadaan kaavan II mukainen yhdiste; 15 3. saatetaan kaavan V mukainen yhdiste Y asyyli—HH-—\ , o SM

20 COOR V jossa asyyli, R, X ja Y tarkoittavat samaa kuin edellä ja M on raskasmetalli, reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on kaava 25 Hal-R2-SR1Het jossa Hai on halogeeni ja :. 30 Het, R1 ja R2 tarkoittavat samaa kuin edellä, jolloin saadaan kaavan II mukainen :' * ‘ yhdiste; •: · ·' 4) poistetaan suojaus kaavan II mukaisesta yhdisteestä, jossa asyyli ja/tai Het on , · ί · ’ suojattu amino, hydroksi tai karboksi ja/tai R on karboksisuojaryhmä, tavanomaisel la tavalla, jonka jälkeen haluttaessa saatu kaavan I mukainen yhdiste, jossa X on m 110322 sulfoksidiryhmä, pelkistetään pelkistimellä, jolloin saadaan kaavan I mukainen ryhmä, jossa X on rikkiatomi, ja/tai saatu kaavan I mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan emäksen kanssa, jolloin saadaan kaavan I mukaisen yhdisteen suola, tai saatu kaavan I mukaisen yhdisteen suola käsitellään hapon kanssa. 5

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään lähtöaineita, jossa ryhmä Het on 1,2,3- tai 1,2,4-triatsolyyli, 1,2,3- tai 1,3,4-tiadiatsolyyli, josta kukin voi olla substituoitu metyylillä.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään läh töainetta, jossa Ri on yksinkertainen sidos; R2 on metyleeni; Het on 1,2,3- tai 1,2,4-triatsolyyli, 1,2,3- tai 1,3,4-tiadiatsolyyli, joista kukin voi olla substituoitu metyylillä; X on rikki; Y on vety; ja asyyli on 2-(2-aminotiatsol-4-yyli)-2-hydroksi-iminoasetyyli. > · · 112 110322