FI106556B - Menetelmä puolisynteettisten glykosaminoglykaanien valmistamiseksi - Google Patents
Menetelmä puolisynteettisten glykosaminoglykaanien valmistamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI106556B FI106556B FI931741A FI931741A FI106556B FI 106556 B FI106556 B FI 106556B FI 931741 A FI931741 A FI 931741A FI 931741 A FI931741 A FI 931741A FI 106556 B FI106556 B FI 106556B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- water
- nucleophilic
- semi
- heparin
- acid
- Prior art date
Links
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 title claims abstract description 62
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 16
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 3
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims abstract description 44
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims abstract description 44
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical group OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 42
- 229920002971 Heparan sulfate Chemical group 0.000 claims abstract description 38
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 18
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L sulfate group Chemical group S(=O)(=O)([O-])[O-] QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 31
- 239000012434 nucleophilic reagent Substances 0.000 claims description 25
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 16
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 15
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 13
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 11
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 10
- -1 heterocyclic amines Chemical group 0.000 claims description 8
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 7
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 claims description 6
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 6
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 claims description 5
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 claims description 5
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000539 dimer Substances 0.000 claims description 4
- 125000003700 epoxy group Chemical group 0.000 claims description 4
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 150000002989 phenols Chemical group 0.000 claims description 4
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 claims description 4
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical group S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 3
- 150000001298 alcohols Chemical group 0.000 claims description 3
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 claims description 3
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 3
- 239000002585 base Substances 0.000 claims description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical class [H]N([H])* 0.000 claims description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Chemical group 0.000 claims description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 3
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000001414 amino alcohols Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000005365 aminothiol group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 claims description 2
- 150000004662 dithiols Chemical group 0.000 claims description 2
- 150000002429 hydrazines Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 2
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 claims description 2
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 claims description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical group CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000010953 base metal Substances 0.000 claims 1
- AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L calcium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ca+2] AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 239000000920 calcium hydroxide Substances 0.000 claims 1
- 229910001861 calcium hydroxide Inorganic materials 0.000 claims 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 claims 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims 1
- 229940042795 hydrazides for tuberculosis treatment Drugs 0.000 claims 1
- 150000002443 hydroxylamines Chemical class 0.000 claims 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims 1
- 239000012312 sodium hydride Substances 0.000 claims 1
- 229910000104 sodium hydride Inorganic materials 0.000 claims 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 claims 1
- 150000003573 thiols Chemical group 0.000 claims 1
- 230000002785 anti-thrombosis Effects 0.000 abstract description 18
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 abstract description 12
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 3
- 230000002429 anti-coagulating effect Effects 0.000 abstract 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 19
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 13
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 12
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 11
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 10
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 10
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 10
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical class ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 125000000600 disaccharide group Chemical group 0.000 description 7
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 7
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 7
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 7
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 6
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 6
- AEMOLEFTQBMNLQ-VCSGLWQLSA-N alpha-L-iduronic acid Chemical class O[C@@H]1O[C@@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-VCSGLWQLSA-N 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 4
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 4
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N thioglycolic acid Chemical compound OC(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 3
- 150000002118 epoxides Chemical class 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 3
- VRVRGVPWCUEOGV-UHFFFAOYSA-N 2-aminothiophenol Chemical compound NC1=CC=CC=C1S VRVRGVPWCUEOGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N Acetamide Chemical compound CC(N)=O DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010008488 Glycylglycine Proteins 0.000 description 2
- WTDHULULXKLSOZ-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine hydrochloride Chemical compound Cl.ON WTDHULULXKLSOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- 239000004158 L-cystine Substances 0.000 description 2
- 235000019393 L-cystine Nutrition 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 229940043257 glycylglycine Drugs 0.000 description 2
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 2
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012038 nucleophile Substances 0.000 description 2
- ZJLMKPKYJBQJNH-UHFFFAOYSA-N propane-1,3-dithiol Chemical compound SCCCS ZJLMKPKYJBQJNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid group Chemical group S(O)(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N (+/-)-DABA Natural products NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHJVRSWLHSJWIN-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O NHJVRSWLHSJWIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CHJFZKBUNXDBEL-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-aminoacetyl)amino]ethanesulfonic acid Chemical compound NCC(=O)NCCS(O)(=O)=O CHJFZKBUNXDBEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AFLBTVGQCQLOFJ-UHFFFAOYSA-N 2-[[1-(2,6-diaminohexanoyl)pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid Chemical compound NCCCCC(N)C(=O)N1CCCC1C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O AFLBTVGQCQLOFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 2-acetamido-3-sulfanylpropanoic acid Chemical compound CC(=O)NC(CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- OGMADIBCHLQMIP-UHFFFAOYSA-N 2-aminoethanethiol;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCCS OGMADIBCHLQMIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000022 2-aminoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 description 1
- WOVJYCOXFSGLMS-UHFFFAOYSA-N 4-(2-aminoethyl)-2-hydroxybenzoic acid Chemical compound NCCC1=CC=C(C(O)=O)C(O)=C1 WOVJYCOXFSGLMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YJSMIMJDRSWLQQ-UHFFFAOYSA-N 4-(3-aminopropyl)-2-hydroxybenzoic acid Chemical compound NCCCC1=CC=C(C(O)=O)C(O)=C1 YJSMIMJDRSWLQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JQFZHHSQMKZLRU-IUCAKERBSA-N Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N JQFZHHSQMKZLRU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 235000008733 Citrus aurantifolia Nutrition 0.000 description 1
- 241001025137 Daltonia <moss> Species 0.000 description 1
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 1
- MFBYPDKTAJXHNI-VKHMYHEASA-N Gly-Cys Chemical compound [NH3+]CC(=O)N[C@@H](CS)C([O-])=O MFBYPDKTAJXHNI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N L-N-acetyl-Cysteine Chemical compound CC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 description 1
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 125000002357 L-cystinyl group Chemical group O=C([*])[C@@](N([H])[H])([H])C([H])([H])SSC([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[H] 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011941 Tilia x europaea Nutrition 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910001854 alkali hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000008044 alkali metal hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-UKFBFLRUSA-N alpha-D-glucosamine Chemical compound N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-UKFBFLRUSA-N 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000852 azido group Chemical group *N=[N+]=[N-] 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-QIUUJYRFSA-N beta-D-glucuronic acid Chemical compound O[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-QIUUJYRFSA-N 0.000 description 1
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 description 1
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-aminopropionic acid Natural products NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N cysteamine Chemical compound NCCS UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940097265 cysteamine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- VFNGKCDDZUSWLR-UHFFFAOYSA-N disulfuric acid Chemical compound OS(=O)(=O)OS(O)(=O)=O VFNGKCDDZUSWLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- WSYUEVRAMDSJKL-UHFFFAOYSA-N ethanolamine-o-sulfate Chemical compound NCCOS(O)(=O)=O WSYUEVRAMDSJKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YVKSGVDJQXLXDV-BYPYZUCNSA-N ethyl (2r)-2-amino-3-sulfanylpropanoate Chemical compound CCOC(=O)[C@@H](N)CS YVKSGVDJQXLXDV-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003191 femoral vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 description 1
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- BEBCJVAWIBVWNZ-UHFFFAOYSA-N glycinamide Chemical compound NCC(N)=O BEBCJVAWIBVWNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZNQNBZMBZJQJO-YFKPBYRVSA-N glyclproline Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 description 1
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 description 1
- JEGUKCSWCFPDGT-UHFFFAOYSA-N h2o hydrate Chemical compound O.O JEGUKCSWCFPDGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 239000004571 lime Substances 0.000 description 1
- VVNXEADCOVSAER-UHFFFAOYSA-N lithium sodium Chemical compound [Li].[Na] VVNXEADCOVSAER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229960003151 mercaptamine Drugs 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 125000001181 organosilyl group Chemical group [SiH3]* 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000446 sulfanediyl group Chemical group *S* 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002537 thrombolytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000008320 venous blood flow Effects 0.000 description 1
- GSQBIOQCECCMOQ-UHFFFAOYSA-N β-alanine ethyl ester Chemical compound CCOC(=O)CCN GSQBIOQCECCMOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0075—Heparin; Heparan sulfate; Derivatives thereof, e.g. heparosan; Purification or extraction methods thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H5/00—Compounds containing saccharide radicals in which the hetero bonds to oxygen have been replaced by the same number of hetero bonds to halogen, nitrogen, sulfur, selenium, or tellurium
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
106556
Menetelmä puolisynteettisten glykosaminoglykaanien valmistamiseksi
Keksintö koskee sellaisten uusien puolisynteettis-5 ten glykosaminoglykaanien synteesi, joilla on 2-asemassa modifioidun a-L-iduroni-2-O-sulfaattihapon hepariini- tai heparaanirakenne, joissa glykaaneissa sulfaattiryhmä on kokonaan tai osittain substituoitu nukleofiilisellä radikaalilla .
10 Näillä uusilla puolisynteettisillä glykosaminogly-
kaaneilla, joilla on yleinen kaava IV
OR OR OR
-p-K?h / iA°w X _e_KjH / lK?h .A. _C_^°K / lKj·1 A_ »K50,‘ CSO.‘ XHSO,' OH HHCOCH, R, H, > —>?L Ji L J»
IV
on hyvät farmaseuttiset ominaisuudet sikäli, että ne voi-20 vat myös imeytyä oraalisesti ja niillä on hyvä antitrom-boottinen aktiivisuus yhdistettynä pieneen verenvuotovaa-raan ja vähentyneeseen antikoagulatiiviseen aktiivisuuteen.
' ' Julkaistussa EP-patenttihakemuksessa 0 347 588 esi- 25 tettiin kuvaus hepariini- ja heparaanirakenteen omaavien : glykosaminoglykaanien rakenteellisesta modifikaatiosta ·;··; emäksisessä väliaineessa ja sitä seuraavasta tekniikan j·.1. tasoon nähden uusien johdannaisten erotuksesta reaktio- • · seoksesta, osoitettuna selvästi kemiallisten ja fysikaa- » » · 30 listen ominaisuuksien ja erityisesti 13C-NMR-spektrin avul- ... la.
• · *··1 Seuraavassa julkaistussa EP-patenttihakemuksessa ···1 0 380 943 kuvattiin toinen rakenteellinen modifikaatio :1·.· emäksisessä tai neutraalissa väliaineessa, jolloin käy- • · • 35 tettiin lähtöaineina tuotteita, jotka olivat muodostuneet « « · • · · » · 1 ♦ • · » ♦ « 2 106556 reaktio-olosuhteissa, jotka on kuvattu EP-julkaisussa 0 347 588, ja glykosaminoglykaaneista, joilla on heparii-ni- tai heparaanirakenne ja joita käytettiin lähtöaineina EP-julkaisussa 0 347 588, jolloin saatiin aikaan useita 5 uusia tuotteita, jotka eroavat EP-julkaisussa 0 347 588 kuvatuista tuotteista ja ovat uusia tekniikan tasoon nähden, osoitettuna selvästi kemiallisten ja fysikaalisten ominaisuuksien ja erityisesti 13C-NMR-spektrin avulla.
EP-julkaisussa 0 347 588 kuvattujen tuotteiden ke-10 mialliset ja fysikaaliset ominaisuudet ja seuraavan rakenteellisen tutkimuksen tulokset, jonka tutkimuksen ovat kuvanneet Jaseia M., Rej R., Sauriol F., Periin A.S. julkaisussa Can. J. Chem. 67, 1449 - 1456 (1989), ja jossa on erityisesti pyritty selittämään rakenteellisen modifi-15 kaation reaktiomekanismi emäksisessä väliaineessa, ovat osoittaneet, että näillä johdannaisilla on modifikaatio, joka koskee vain yhtä sakkaridiyksiköistä, jotka ovat tunnusomaisia hepariini- tai heparaanirakenteen omaaville glykosaminoglykaaneille, tarkemmin sanottuna a-L-iduroni-20 hapon yksikköä, jonka hapon 2-asema on sulfatoitu, ja joka modifikaatio käsittää tämän yksikön transformaation 2,3-epoksiguloniyksiköksi.
Samoin on osoitettu, että puolisynteettisille glykosaminoglykaaneille, joissa on yksi 2,3-epoksiguloniyk- 25 sikkö, ja myös glykosaminoglykaaneille, joilla on heparii- • · • *·· ni- tai heparaanirakenne, tapahtuu samanlaisissa reaktio- *!**J olosuhteissa, kuin EP-julkaisussa 0 380 943 on kuvattu, rakenteellinen modifikaatio, joka myös koskee a-L-iduroni- • · hapon sakkaridiyksikköä, jonka hapon 2-asema on sulfatoi- 30 tu, ja joka käsittää tämän sakkaridiyksikön transformaa- .···, tion sulfatoimattoman α-L-iduronihapon tai a-L-galakturo- * · nihapon yksiköksi käytettyjen reaktio-olosuhteiden mukai-sesti.
·.'·· Sitten EP-julkaisussa 0 347 588 kuvataan puolisyn- 35 teettisiä glykosaminoglykaaneja, jotka sisältävät epoksi- • · l i a « « « « • · • · « · < 3 106556 funktionaalisuuden cc-L-iduroni-2-O-sulfaattihapon yksikön 2- ja 3-asemien välillä, käytettyinä alkutilanteessa ja niiden saamiseksi tarvittuja reaktio-olosuhteita, kun taas EP-julkaisussa 0 380 943 kuvataan tuotteita, jotka on saa-5 tu epoksidin jatkotransformaatiolla, jolloin on todistettu, että niissä on sulfatoimattoman «-L-iduroni- tai a-L-galakturonihapon yksi yksikkö, ja niiden saamiseksi tarvittuja reaktio-olosuhteita, kun käytettiin lähtöaineena epoksidia itseään tai vaihtoehtoisesti käyttäen lähtöai-10 neina itse glykosaminoglykaaneja, joilla on hepariini- tai heparaanirakenne ja joita käytettiin lähtöaineina EP-julkaisussa 0 347 588.
Tämän keksinnön tavoitteena on saada aikaan hepariini- tai heparaanirakenteen omaavia uusia puolisynteet-15 tisiä glykosaminoglykaaneja, joille on tunnusomaista, että ne sisältävät α-L-iduronihapon yksikön, jonka hapon 2-asema on substituoitu nukleofiilisellä radikaalilla.
Nyt kuvatut uudet johdannaiset edustavat jatkokehitystä, mitä tulee tekniikan tasoon ja erityisesti mitä 20 tulee edellä mainittuihin julkaistuihin EP-patenttihake-muksiin. Edellä mainituissa patenteissa patenttivaatimusten kohteena olivat tuotteet, jotka oli saatu emäksisessä vesipitoisessa väliaineessa käyttäen vettä nukleofiilinä.
I M ( ' 1 Tässä patenttihakemuksessa uudet tuotteet saadaan reak- 25 tiolla useiden huolellisesti valittujen nukleof iilisten • · j reagenssien kanssa ja sellaisissa olosuhteissa, että ai- *:··· kaansaadaan vastaavan nukleofiilisen ryhmän liittyminen ·1·'· uronihapon 2-asemaan.
• ·
Keksinnön kohteena on menetelmä edellä mainittujen • · · 30 tuotteiden saamiseksi käyttäen lähtöaineina sopivaa nuk- ... leofiiliä ja EP-julkaisussa 0 347 588 kuvattuja epokside- :::1 ja.
•y' Esillä oleva keksintö koskee menetelmää hepariini- tai heparaanirakenteen omaavien puolisynteettisten gly- • · ·;·· 35 kosaminoglykaanien syntetisoimiseksi, joiden kaava on • · · · • · · « • « 4 106556 OB m. ^. ,03 0_Κ?Η / lK°h /A. _cJ\oH / lK°w /Λ. -0-N°h / \Ι\2η A.
t MH50," CSO,' PHSO,’ OH HHCOCH, < *, 5 L J, L J, L -I.
JK
jossa p + q = m, jolloin p on muu kuin 0, ja m ja n ovat 10 kokonaislukuja 1 - 100, R merkitsee vetyä tai sulfaat-tiryhmää (S03~) ja -Z(R2)R1 merkitsee nukleofiilistä radikaalia, joka on peräisin nukleofiilisestä reagenssista, joka on valittu ryhmästä primaariset ja sekundaariset amiinit, sekundaariset heterosykliset amiinit, aminoalko-15 holit, aminotiolit, aminohapot, aminoesterit, peptidit, alkoholit, fenolit, merkaptaanit, ditiolit, tiofenolit, hydroksyyliamiinit, hydratsiinit, hydratsidit ja nat-riumatsidi.
Menetelmälle on tunnusomaista, että 2,3-epoksigu-20 lonirakenteen omaava puolisynteettinen glykosaminoglykaa-ni, jonka kaava on ' ' or ^OH HHCOCKj , , < 2 5 HHSO, oso> KH501 • · • · • · · _ «J n • L J? L u • · m • « • · jossa p, q, n ja R tarkoittavat samaa kuin edellä, ja joka 30 on saatu käsittelemällä hepariinimateriaalin vesipitoista ... liuosta alkalimetalli- tai maa-alkalimetalliemäksellä, • · ΓΙΙ jonka konsentraatio on 0,01 - 1 N, jolloin läsnä on aika- • · ··*’ limetallin tai maa-aikaiimetalIin suola, jonka konsent- : raatio on 0 - IN, ja jolloin mahdollisesti on läsnä kata- ·;··· 35 lyyttinen määrä natriumboorihydridipelkistintä, 0,5 - 24 • · » · · • · · • · · · • ♦ « • · 106556 tunnin ajan lämpötilassa 35 - 70 °C; saatetaan reagoimaan edellä mainitun nukleofiilisen reagenssin kanssa, jolloin läsnä on polaarinen liuotin ja sellainen määrä epäorgaanista tai orgaanista emästä, joka riittää muodostamaan 5 suolan mistä tahansa happoryhmistä, jotka ovat läsnä nukleof iilisissä reagensseissa ja/tai vapauttamaan nämä nuk-leofiiliset reagenssit mistä tahansa suoloista, joita niillä voi olla happoluonteisten aineiden kanssa, mahdollisesti inertissä kaasuatmosfäärissä; sekoittaen 24 - 96 10 tuntia lämpötilassa 10 - 30 °C, reaktioseos laimennetaan vedellä, kun reaktioliuos on muu kuin vesi, vesipitoisen liuoksen pH säädetään neutraaliksi lisäämällä vetyklori-dihapon vesiliuosta, ylimääräinen nukleofiilinen reagenssi mahdollisesti poistetaan uuttamalla liuottimena, joka ei 15 ole veden kanssa sekoittuva, tai suodattamalla, vesi- pi-toiselle liuokselle suoritetaan mahdollisesti dialyysi juoksevalla vedellä ja tislatulla vedellä ja tuote eristetään lyofilisoimalla sitä sisältävä vesipitoinen liuos tai saostamalla lisäämällä sopivaa liuotinta.
20 Ilmaisun "hepariini- tai heparaanirakenteen omaavat glykosaminoglykaanit" tarkoitetaan merkitsevän polysakkarideja, joiden moolimassa on välillä noin 3 000 - noin 50 000 Daltonia ja joille on tunnusomaista, että niissä on ·"· disakkaridiyksikkö, joka koostuu uronihaposta (joka voi i 25 olla a-L-iduroni-tai β-D-glukuronihappo) ja a-D-glu-! kosamiinista liittyneinä vaihtelevassa järjestyksessä 1,4- ·;··· glykosidisilla sidoksilla, kuten on kuvattu julkaisuissa
Lindhal U., Kjellen L., Thrombosis and Haemostasis 66. 44 - 48 (1991) ja Turnbull J.E., Gallagher J.T., Biochem.
• · · 30 J. 273, 553 - 559 (1991). Koska α-L-iduronihapon 2-asema voi olla sulfatoitu ja glukosamiini voi olla N-asetyloitu, • · *···’ N-sulfatoitu, 6-O-sulfatoitu, 3-0-sulfatoitu substituent- • · · ' ’ a « ···’ tien vaihtelevien asemien mukaan, on mahdollista olla vä- hintään 10 erilaista disakkaridiyksikköä, joiden yhdisty- • 35 minen voi aikaansaada suuren määrän erilaisia sekvenssejä.
• a • « « a a a «ta a a a a a · a a a · · 6 106556
Muistaen tyypillisimmät disakkaridiyksiköt ja tavallisimmat sekvenssit voidaan sanoa kohtuudella, että yleisen kaavan I voidaan katsoa kuuluvan glykosaminoglykaaneihin, joilla on hepariini- tai heparaanirakenne 5
OR . .OR
_0_faiH _/ lN°H /L _0J\oh / lN°h /L
OSO,· SJHSO,' OH NHCOCHj 10 L J a L -> n
A B
joissa R merkitsee vetyä tai sulfaattiryhmää (S03") ja jos-15 sa m ja n ovat kokonaislukuja välillä 1 - 100.
Luonnollista alkuperää olevissa hepariinirakentei-sissa glykosaminoglykaaneissa m:n arvo on suuri ja disak-karidiyksikkö A edustaa noin 80 %:a disakkaridiyksiköistä: sitä vastoin luonnollista alkuperää olevissa heparaanira-20 kenteisissa glykosaminoglykaaneissa n:n arvo on suuri ja disakkaridiyksikkö B edustaa noin 80 %:a disakkaridiyksiköistä .
Yleisen kaavan I ja yleisten kaavojen III ja IV ' ' tarkoitetaan ilmaisevan tärkeimpien sakkaridiyksiköiden 25 koostumuksen, mutta niiden ei tarkoiteta viittaavan yksi- • · j köiden järjestykseen.
·:··· Kuten alan ammattimiehet tietävät, on mahdollista valmistaa luonnollista alkuperää olevien glykosaminogly- • · kaanien kemiallinen modifikaatio, esimerkiksi N-desulfa- • · · 30 toinnin reaktioilla, minkä jälkeen mahdollisesti suorite- ... taan N-asetylointireaktioita, jolloin saadaan myös puoli- • · ·” synteettisiä N-desulfatoituja hepariineja tai N-desulfa- ♦ · ···1 toitu-N-asetyloituja hepariineja. Lisäksi näille glykos- aminoglykaaneille, olivatpa ne luonnollisia tai puolisyn- ·;··♦ 35 teettisiä, voidaan suorittaa depolymerisointiprosesseja, • · • · « • « · • · · · • « 7 106556 joiden avulla moolimassa saadaan tasoille, jotka ovat yleensä välillä 3 000 - 10 000 Daltonia.
Tässä keksinnössä kuvattu rakenteellinen modifiointi uusien hepariini- tai heparaanirakenteen omaavien puo-5 lisynteettisten glykosaminoglykaanien saamiseksi viittaa a-L-iduroni-2-O-sulfaattihapon yksikköön, jossa hapossa tapahtuu 0-sulfaattiryhmän osittainen tai täydellinen selektiivinen substituutio 2-asemassa nukleofiilisellä ryhmällä, mikä sitten onkaan haluttu yhdiste, jolla on hepa-10 riini- tai heparaanirakenne. Todellakin sen lisäksi, että tässä keksinnössä kuvattu kemiallinen menetelmä on selektiivinen, sitä voidaan käyttää hepariini- tai heparaanirakenteen omaaville glykosaminoglykaaneille, jotka edustavat kaikkia mahdollisia sekvenssejä; so. se riippuu sakkaridi-15 yksikön funktionalisaation tyypistä ja asteesta, joka yksikkö edeltää tai seuraa sekvenssissä a-L-iduroni-2-O-sul-faattihapon yksikköä, joka happo on rakenteellisen modi-fiointireaktioh kohteena.
Uusien tuotteiden rakenne kuvataan yleisellä kaa-20 valla IV
JZy^jL -0-/\°η fiu /i- «lii I t1HS0 " CSO,' WISO, OH KHCOCH, ' < Ns, 25 L L 1 • · • · * · ·
IV
• · ·1.1. jossa p + q = m, japon muu kuin 0, ja m, njaR ovat • · .·;·. edellä määritellyt, ja jossa -ZCR^R-l merkitsee nukleo- 30 fiilistä ryhmää, joka on liitetty tässä keksinnössä kuva- ... tulla menetelmällä. Tällä tavalla saatuihin yhdisteisiin • « *** viitataan "hepariini- tai heparaanirakenteen omaavina puo- • · ·;·' lisynteettisinä glykosamiiniglykaaneina, joilla on yleinen kaava IV, jossa -Z(R2)R·,^ vastaa ...".
« « · • « • tl • · · « • · · · « 8 106556
Rakenteellinen modifiointireaktio, joka käsittää nukleofiilisen radikaalin osittaisen tai täydellisen liittämisen α-L-iduronihapon 2-asemaan, ei johda glykosamino-glykaanien depolymerisaatioon tai niitä muodostavien poly-5 sakkaridiketjujen moolimassan jakauman muuttumiseen, ja tästä syystä tätä reaktiota voidaan käyttää minkä tahansa moolimassan omaaville glykosaminoglykaaneille, joilla on hepariini- tai heparaanirakenne. Saaduille tuotteille voidaan kuitenkin suorittaa tunnettuja kemiallisia tai entsy-10 maattisia depolymerisointiprosesseja.
Erityisen edullisia tätä keksintöä toteutettaessa ovat radikaalit -Z{R2)R17 jotka ovat peräisin seuraavista nukleofiilisistä reagensseista: glysiini, glysyyliglysii-ni, L-kysteiini, asetyyli-L-kysteiini, L-kysteiinietyyli-15 esteri, 2-aminotiofenoli, 1,3-propaaniditioli, kysteamii- ni, natriumatsidi, 2-aminoetyylibisulfaatti, tauriini, tioglykolihappo, β-alaniinietyyliesteri, L-kystiini, hyd-roksyyliamiini, glysyylitauriini, kysteinyylitauriini, glysyylikysteiini, glysyylifenyylialaniini, glysyylityro-20 siini, 2-aminoetanoli, glysiiniesteri 2-aminoetanolin kanssa, glysiiniamidi 2-aminoetanolin kanssa, arginyyli-lysiini, arginiini, lysiini, 2-aminoetanoliesteri etikka-hapon kanssa, salisyylihappo, metioniini, glysyyliprolii-ni, gamma-aminovoihappo, lysyyliprolyyliarginiini, treo-25 nyylilysyyliproliini, treonyylilysiini, prolyyliarginiini, lysyyliproliini, koliini, 4-(3-aminopropyyli) -2-hydroksi-bentsoehappo ja 4- (2-aminoetyyli) -2-hydroksibentsoehappo.
Mahdollisen emäksen käyttö voi olla selvästi tar- • ♦ peetonta, kun nukleofiilinen reagenssi ei sisällä happo- • · · 30 luonteisia ryhmiä ja/tai ei muodosta suoloja happoluontei-sen aineen kanssa. Reaktio suoritetaan liuottamalla kaavan • · · • · *···1 III mukaisen 2,3-epoksigulonirakenteen omaava puolisyn- • · · ♦ · ...1 teettmen glykosaminoglykaani liuottimeen ja lisäämällä :’.J liuosta, joka sisältää nukleof iilisen reagenssin ja mah- • · 35 dollisen epäorgaanisen tai orgaanisen emäksen.
» · • · • « · • · · »JO · · • · • » o 9 106556
Reaktioseosta pidetään samalla sekoittaen mahdollisesti inertin kaasun, edullisesti typen, atmosfäärissä, kun nukleofiilinen reagenssi hapettuu helposti lämpötila-välillä 10 - 30 °C 24 - 96 tuntia.
5 Reaktion lopussa reaktioseos laimennetaan vedellä, kun käytetty liuotin ei ole vesi, sitten vesipitoisen liuoksen pH säädetään neutraaliksi lisäämällä vetykloridi-hapon vesiliuosta. Ylimääräinen nukleofiilinen reagenssi voidaan mahdollisesti poistaa, esimerkiksi uuttamalla 10 liuottimena, joka ei ole veteen sekoittuva, kloroformilla tai dietyylieetterillä, tai suodattamalla, kun se ei ole vesipitoiseen väliaineeseen liukoinen neutraalissa pH:ssa. Kirkasta vesipitoista liuosta voidaan edelleen puhdistaa myöhemmässä vaiheessa dialyysillä jakorajana 3 000 Dalto-15 nia ensin juoksevassa vedessä ja sitten tislatussa vedessä. Lopuksi yleisen kaavan IV mukaisen hepariini- tai he-paraanirakenteen omaava puolisynteettinen glykosaminogly-kaani eristetään lyofilisoimalla vesipitoinen liuos, joka sisältää sen, tai saostamalla lisäämällä sopivaa liuo-20 tinta.
Käytettävä nukleofiilisen aineen määrä on välillä 1 - 200 mooliekvivalenttia yleisen kaavan III mukaisen glykosaminoglykaanin dimeeriyksikköön nähden, joka gly-kaani sisältää epoksiryhmän, edullisesti käytetään 10 - *«c 25 100 ekvivalenttia. Liuotin valitaan ryhmästä, jonka ποιοι*·.. dostavat vesi ja polaariset liuottimet, kuten dimetyyli- ....j asetamidi, dimetyyli f ormamidi, asetonitriili, dioksaani, ;·,·. tetrahydrofuraani tai niiden seokset veden kanssa. Epäor- • · .·· gaanisista emäksistä edullisia ovat alkali- tai maa-alka- • · · • · · 30 limetallihydroksidit, edullisesti natrium- tai kaliumhyd-roksidi, kun taas edullisia orgaanisia emäksiä ovat ter- • ♦ *···* tiaariset amiinit, kuten trietyyliamiini.
• · * ...* Keksinnön edullisessa aspektissa reaktio suorite- ;\· taan liuottamalla yleisen kaavan III mukaisen hepariini- « · 35 tai heparaanirakenteen omaava puolisynteettinen glykosami- • · • · · • « « • » » · » » * » · • · • » · 10 106556 noglykaani veteen ja lisäämällä sekoittaen vesipitoinen liuos, joka sisältää 10 - 100 mooliekvivalenttia nukleo-fiilistä reagenssia yleisen kaavan III mukaisen glykosami-noglykaanin dimeeriyksikköön nähden, joka glykaani sisäl-5 tää epoksiryhmän, ja sellainen määrä natriumhydroksidia, joka riittää muodostamaan suolan mistä tahansa happoryh-mistä, jotka ovat nukleofiilisessä reagenssissa läsnä, ja/tai vapauttamaan tämän nukleofiilisen reagenssin mahdollisesta suolasta happoluonteisten aineiden kanssa. 10 Reaktioseosta, jossa puolisynteettisen glykosaminoglykaa-nin pitoisuus on edullisesti välillä 1 - 5 %, pidetään samalla sekoittaen mahdollisesti inertin kaasun atmosfäärissä huoneenlämpötilassa 24 - 96 tuntia. Reaktion lopussa seoksen pH saatetaan neutraaliksi vesipitoisella vetyklo-15 ridihapolla, ylimääräinen nukleofiilinen reagenssi voidaan poistaa passiivisen uuton avulla liuottimena, joka ei ole veden kanssa sekoittuva, tai suodattamalla, ja sitten reaktioliuokselle voidaan suorittaa dialyysi jakorajana 3 000 Daltonia ensin juoksevalla vedellä ja sitten tisla-20 tulla vedellä 6-24 tunnin aikana. Lopuksi liuokselle suoritetaan lyofilisointi tai siihen lisätään sopivaa liuotinta, jolloin saadaan yleisen kaavan IV mukaisen he-pariini- tai heparaanirakenteen omaava puolisynteettinen '· ’ *: glykosaminoglykaani .
·;· 25 Tällä tavalla saatujen puolisynteettisten glykos- • · · · ·*·., aminoglykaanien piirteenä on, että niistä puuttuu a-L- • iduronihapon 2-O-sulfaattiryhmä, joka on substituoitu he-teroatomilla, typellä, rikillä tai hapella, joka on osa • · *..I nukleofiilisiä reagensseja, kuten amiineja, aminohappoja, • · · * 30 aminoestereitä, peptidejä, alkoholeja, merkaptaaneja, fe noleja, tiofenoleja. Tällä tavalla liitetään kovalenttinen • « sidos hepariini- tai heparaanirakenteen omaavien gly- *·· kosaminoglykaanien molekyylin ja nukleof iilisen ryhmän .·. : väliin, mikä edellä mainittujen glykosaminoglykaanien ra- • « 35 kenteellisia ominaisuuksia modifioimalla parantaa niiden • · • · • · · • · · t t» « « · o • · • · 11 106556 mahdollisuuksia imeytyä oraalisesti ja säilyttää niiden luonteenomaiset antitromboottiset ominaisuudet sillä tavalla edullisesti, että ne vähentävät merkittävästi ve-renvuotoaikaa ja antikoagulatiivista aktiivisuutta. Vas-5 taaviin hepariini- tai heparaanirakenteen omaaviin luonnon glykosaminoglykaaneihin nähden tässä keksinnössä kuvatuilla hepariini- tai heparaanirakenteen omaavilla puolisynteettisillä glykosaminoglykaaneilla on siten se etu, että niillä on antitromboottinen ja trombolyyttinen ak-10 tiivisuus, joka on pohjimmiltaan yhtä suuri, yhdistettynä alhaisempaan verenvuodon vaaraan, kuten eläimillä in vivo toteutetuilla farmakologisilla verenvuotokokeilla on selvästi osoitettu, ja se, että ne imeytyvät oraalisesti.
Tämän keksinnön mukaisesti valmistettujen uusien 15 puolisynteettisten glykosaminoglykaanien biologinen aktiivisuus määritettiin joillakin tavallisilla hepariiniko-keilla; tarkemmin sanottuna suoritettiin kokeita, jotka koskivat APTT:tä, verenvuotoaikaa ja antitromboottista aktiivisuutta.
20 APTT-aktiivisuus määritettiin julkaisun Larrieu M.J. ja Weiland G., Rev. Hematol., 12, 199 (1957) mene telmän mukaisesti.
Jokainen tuote tutkimuksessa liuotettiin plasmaan, joka oli otettu talteen rotista, joita oli pidetty paas-·;· 25 tolia, sen jälkeen tehtiin skalaarilaimennokset menetel-
MM
·*·,. mään tarvittavien pitoisuuksien aikaansaamiseksi. Kullekin • tuotteelle tehtiin 10 määritystä ja kunkin tuotteen ak-tiivisuus ilmaistiin pitoisuustermeinä μg/ml, mikä kaksin- • * kertaistaa APTT:n ajan.
• · · • · * * 30 Saadut arvot vahvistavat, että uusilla puolisyn teettisillä glykosaminoglykaaneilla on vähentynyt antikoa- • · gulatiivinen tehokkuus tavanomaiseen hepariiniin verrat- • · · *.a.: tuna.
: Verenvuotoaika määritettiin rotassa julkaisussa 35 Dejana E. et ai, Thromb. Haemost., 48., 108 (1982) kuvatun « « • · « • « · • - c « » « 12 106556 menetelmän mukaisesti ja tulos ilmoitettiin laskemalla uusilla puolisynteettisillä glykosaminoglykaaneilla käsiteltyjen rottien verenvuodon lisääntymisen ajan prosentuaalinen osuus verrattuna kontrollirottiin.
5 Uusilla puolisynteettisillä glykosaminoglykaaneilla oli vähentynyt verenvuotoaika tavanomaiseen hepariiniin verrattuna. Antitromboottinen aktiivisuus määritettiin rotassa laskimon veren virtauksen pysähtymisen tromboosi-kokeen avulla, joka on kuvattu julkaisussa Reyers S. et 10 ai, Thromb. Res., 18, 669 - 674 (1980). Veritulpan muodostuksen ehkäisykyvyn arvioimiseksi tuotteet injektoitiin laskimonsisäisesti reisilaskimoon 10 minuuttia ennen alaonttolaskimon suonen sitomista. 2 tunnin kuluttua veritulpat poistettiin, kuivattiin ja punnittiin.
15 Antitromboottinen aktiivisuus ilmaistiin sekä esiintymistiheyden prosentuaalisena osuutena (prosentuaalinen osuus rotista, joilla oli veritulppa) että veritulpan painon vähenemisenä verrattuna kontrolliveritulppaan.
Molemmissa tapauksissa tulokset ilmaistiin ED50:nä 20 mg/kg:na.
Saadut tulokset osoittivat, että uusien puolisynteettisten glykosaminoglykaanien antitromboottinen aktiivisuus on samanlainen kuin tavanomaisella hepariinilla.
Vapaiden aminoryhmien määritys suoritettiin UV-sä-..*·* 25 teilyn/näkyvän valon spektrofotometrian avulla 358 nm:n aallonpituudella tuotteella, joka oli saatu reaktiolla ·;··· trinitrobentseenisulfonihapon (TNBSm) kanssa julkaisussa
Satake K. et ai, J. Biochem. , 47., 654 (1960) kuvatun me- • · ♦ · .·;·. netelmän mukaisesti, kun taas rikin määritys suoritettiin • · · 30 potentiometrian avulla. Spesifinen kiertovoima mitattiin ... vesipitoisessa liuoksessa 1 %:n pitoisuudessa.
• ♦ *···* 13C-NMR-spektrit toteutettiin 50,3 MHz:n taajuudella • · ·..* Varian Gemini 200 -spektrometrillä käyttäen 3-(trimetyyli- ;*·.· silyyli) propionihapon natriumsuolaa, jonka hapon 2,2- ja * · • » * * · • · « • « • « · • ♦ · • ·· <- · • 6 < • · • · 13 106556 3,3-asemat oli deuteroitu (D4), sisäisenä vertailustandar-dina.
Tavanomaisella hepariinilla, joka on otettu vertailuksi tässä keksinnössä kuvattujen uusien glykosaminogly-5 kaanien biologisen aktiivisuuden arvioimiseksi, on seuraa- vat farmakologisen aktiivisuuden arvot edellä kuvattujen kokeiden mukaisesti: APTT (2T) =2,5 jtig/ml
Verenvuotoaika: 111 % 0,5 mg/kg:n pitoisuudessa 10 Antitromboottinen aktiivisuus (ED50) :
Painohäviö = 0,20 mg/kg Esiintymistiheys-% = 0,40 mg/kg Tavanomaiseen hepariiniin liittyvät kemialliset ja fysikaaliset tulokset vertailuna ja määritettynä edellä mai-15 nituilla menetelmillä ovat:
Vapaita aminoryhmiä =0,3 % S = 10,9 % 13C-NMR (ppm) : 177,5; 105,1; 102,1; 99,5; 80,1; 78,7; 73,9; 72,4; 72,0; 69,2; 62,6; 60,8; 56,7; 24,8.
20 [Λ] 546 = +60° [a] §89 = +49°
Seuraavat esimerkit valaisevat keksintöä.
Esimerkki 1 ί’“ Hepariini- tai heparaanirakenteen omaava puolisyn- *;· 2 5 teettinen glykosaminogly kaani, jolla on yleinen ·«·« ·1·<# kaava IV, jossa -Z on N-glysyyli
Liuos, joka sisältää 3 760 mg glysiiniä ja 2 000 mg ··.·. natriumhydroksidia 22,5 ml :ssa vettä, lisätään huoneenläm- ♦ ♦
Potilassa liuokseen, joka sisältää 2,5 ml:ssa vettä 500 mg * · · * 30 EP-julkaisun 0 347 588 esimerkissä 3 kuvatun 2,3-epoksigu- lonirakenteen omaavaa puolisynteettistä glykosaminoglykaa- » « *··.1 nia.
* -» ♦
Reaktioseosta pidetään sekoittumassa huoneenlämpö- : tilassa 48 tuntia, sitten pH säädetään neutraaliksi lisää- • · 35 mällä vetykloridihappoa ja sen jälkeen liuokselle suorite- • · · • · · • te t » « • » 14 106556 taan dialyysi jakorajana 3 000 Daltonia 12 tunnin aikana juoksevassa vedessä ja 6 tunnin aikana tislatussa vedessä ja lopuksi lyofilisoidaan. Saadaan 520 mg otsikon tuotetta, jolla on seuraavat analyyttiset ja farmakologiset 5 ominaisuudet:
Vapaita aminoryhmiä = 1,35 % 13C-NMR (ppm): 178,1; 104,8; 102,0; 98,7; 80,3; 79,2; 77,3; 71,8; 69,2; 62,9; 60,8; 53,6.
[a] 546 = +4 8° 10 [a]|°9 = +39° APTT (2T) = 18,0 μς/ml Antitromboottinen aktiivisuus (EDS0) :
Painohäviö = 0,23 mg/kg Esiintymistiheys-% = 0,75 mg/kg 15 Esimerkki 2
Hepariini- tai heparaanirakenteen omaava puolisynteettinen glykosaminoglykaani, jolla on yleinen kaava IV, jossa -Z(R2)R1 on N-glysyyli-N-glysyyli
Reaktio suoritetaan samoissa olosuhteissa kuin esi-20 merkissä 1 on kuvattu käyttäen 6 600 mg:aa glysyyliglysii-niä 3 760 mg:n sijasta glysiiniä ja lisäämällä reaktioai-kaa 96 tunniksi.
Saadaan 630 mg otsikon tuotetta, jolla on seuraavat * analyyttiset ominaisuudet: ··· 25 Vapaita aminoryhmiä = 4,9 % * * « · 13C-NMR (ppm): 180,0; 178,6; 176,6; 104,8; 103,4; 98,7; 80,0; 79,2; 77,0; 72,4; 71,8; 69,8; 69,2; 62,9; 61,0; • · 53,1; 46,2; 43,9.
[..f [a] 5°6 = +56° V * 30 [a] 589 = +46° M· • 9 9 9 999 9 9 9 • · 9 • * • · · • M t « * • I t > « • « f • • « « « * » • - 6 9 *l>i> 9 9 9 · * 0 15 106556
Esimerkki 3
Hepariini- tai heparaanirakenteen omaava puolisynteettinen glykosaminoglykaani, jolla on yleinen kaava IV, jossa — Z (R2) Rx on L-p-amino-p-karbetok-5 sietyylitio
Reaktio suoritetaan samoissa olosuhteissa kuin esimerkissä 1 on kuvattu käyttäen 8 780 mg:aa L-kysteiinimo-nohydraattivetykloridia 3 76 0 mg:n sijasta glysiiniä ja 4 000 mg:aa natriumhydroksidia 2 000 mg:n sijasta.
10 Saadaan 570 mg otsikon tuotetta, jolla on seuraavat analyyttiset ja farmakologiset ominaisuudet:
Vapaita aminoryhmiä = 10,4 % 13C-NMR (ppm) : 177,0; 175,2; 104,2; 97,2; 78,1; 77,5; 72,2; 71,2; 69,0; 62,2; 60,3; 56,1; 50,1; 36,5.
15 [a]2sl6 = +37° [Ct]l°85 = +30° APTT (2T) = 16,6 μg/ml Antitromboottinen aktiivisuus (ED50) :
Painohäviö = 0,40 mg/kg 20 Esiintymistiheys-% = 0,72 mg/kg
Verenvuotoaika: 63 % 0,5 mg/kg:n pitoisuudella 114 % 1 mg/kg:n pitoisuudella Esimerkki 4 f
Hepariini- tai heparaanirakenteen omaava puolisyn-•j' 25 teettinen glykosaminoglykaani, jolla on yleinen kaava IV, jossa -ZfRj)!^ on L-p-amino-p-karbetok-sietyylitio JV. Reaktio suoritetaan samoissa olosuhteissa kuin esi- • · ]···, merkissä 1 on kuvattu käyttäen 9 280 mg:aa L-kysteiini- • · · 30 etyyliesterivetykloridia 3 760 mg:n sijasta glysiiniä.
Saadaan 550 mg otsikon tuotetta, jolla on seuraavat ana- • · *···* lyyttiset ja farmakologiset ominaisuudet: * * *
Vapaita aminoryhmiä = 11,4 % 9 13C-NMR (ppm): 177,8; 175,4; 104,5; 98,4; 78,6; 77,8; 72,6; 35 71,8; 69,1; 66,5; 60,3; 56,2; 55,9; 50,2; 36,9; 15,9.
• * « · • · * t 4 · • - * · ♦ · • · 16 106556 [a] 1°6 = +49° [CC] gag = +43° ÄPTT (2T) =10,3 pg/ml Antitromboottinen aktiivisuus (ED50) : 5 Painohäviö = 0,15 mg/kg
Esiintymistiheys-% = 0,53 mg/kg Verenvuotoaika: 70 % o,5 mg/kg:n pitoisuudella 100 % 1 mg/kg:n pitoisuudella Esimerkki 5 10 Hepariini- tai heparaanirakenteen omaava puolisyn teettinen glykosaminoglykaani, jolla on yleinen kaava IV, jossa -Z on 2-aminofenyylitio
Reaktio suoritetaan, samoissa olosuhteissa kuin esimerkissä 1 on kuvattu käyttäen 6 300 mg:aa 2-aminotiofeno-15 lia 3 760 mg:n sijasta glysiiniä ja lisäämällä reaktioai-kaa 72 tunniksi. Reaktion lopussa, sen jälkeen kun pH on säädetty neutraaliksi lisäämällä vetykloridihappoa, ylimääräinen aminotiofenoli poistetaan uuttamalla se kloroformilla. Sitten vesipitoiselle liuoksella suoritetaan 20 dialyysi ja lyofilisointi, kuten esimerkissä 1 on kuvattu, jolloin saadaan 690 mg otsikon tuotetta, jolla on seuraani vat analyyttiset ja farmakologiset ominaisuudet: , Vapaita aminoryhmiä =4,7% 13C-NMR (pprn) : 151,0; 139,2; 133,9; 122,8; 120,6; 119,8; 25 104,8; 103,6; 98,6; 79,2; 75,8; 72,8; 71,9; 69,3; 62,8; 60,6; 54,2; 52,6.
Tv C«]L°6 = +53° :T: [oc]l8°9 = +42° APTT (2T) =8,3 μς/πιΐ .*··. 3 0 Antitromboottinen aktiivisuus (ED50) : • ♦ · .·♦·. Painohäviö = 1,12 mg/kg *** Esiintymistiheys-% = 1,72 mg/kg • · • » # • «· « • · • · • · · aa* « «aa 17 106556
Esimerkki 6
Hepariini- -tai heparaanirakenteen omaava puolisynteettinen glykosaminoglykaani, jolla on yleinen kaava IV, jossa -ZiRjJR! on l-propaanitioli-3-tio 5 Reaktio suoritetaan samoissa olosuhteissa kuin esi merkissä 1 on kuvattu typpiatmosfäärissä käyttäen 5 390 mg:aa 1,3-propaaniditiolia 3 760 mg:n sijasta glysiiniä ja lisäämällä reaktioaikaa 90 tunniksi.
Saadaan 630 mg otsikon tuotetta, jolla on seuraavat 10 analyyttiset ominaisuudet:
Vapaita aminoryhmiä = 2,6 % S = 6,1 % 13C-NMR (ppm) : 178,4; 104,9; 99,3; 80,2; 79,2; 77,9; 75,7; 73,0; 71,8; 69,2; 62,9; 60,8; 49,4; 40,1; 35,1; 34,2; 15 25,3.
[a] 546 = +55° [cc] Us = +47°
Esimerkki 7
Hepariini- tai heparaanirakenteen omaava puolisyn-20 teettinen glykosaminoglykaani, jolla on yleinen kaava IV, jossa -ZiR^jRx on 1,l-etaanidisulfaatti-2-, amino
Reaktio suoritetaan samoissa olosuhteissa kuin esi- ( < « 4 <·! merkissä 1 on kuvattu käyttäen 7 050 mg:aa 2-aminoetyyli- < « : " 25 disulfaattia 3 760 mg:n sijasta glysiiniä ja suodattamalla reaktioseos ennen kuin sille suoritetaan dialyysi.
s Saadaan 510 mg otsikon tuotetta, jolla on seuraavat analyyttiset ja farmakologiset ominaisuudet:
Vapaita aminoryhmiä = 1,1 % .···. 30 S = 6,2 % • · 13C-NMR (ppm): 178,9; 104,8; 102,8; 98,8; 80,5; 79,2; 77,1; T* 71,8; 70,4; 69,2; 62,4; 60,9; 49,6.
•'N [a] |°6 - +52° [a] 589 = +43° : !·. 35 APTT (2T) = 6,1 /xg/ml « · · * « · · • « 18 106556
Antitromboottinen aktiivisuus (ED50) :
Painohäviö = 0,66 mg/kg Esiintymistiheys-% = 1,77 mg/kg Esimerkki 8 5 Hepariini- tai heparaanirakenteen omaava puolisyn teettinen glykosaminoglykaani, jolla on yleinen kaava IV, jossa -Z^)!^ vastaa taurinyyliä
Reaktio suoritetaan samoissa olosuhteissa kuin esimerkissä 1 on kuvattu käyttäen 6 260 mg:aa tauriinia 3 760 10 mg:n sijasta glysiiniä ja lisäämällä reaktioaikaa 72 tunniksi .
Saadaan 560 mg otsikon tuotetta, jolla on seuraavat analyyttiset ja farmakologiset ominaisuudet:
Vapaita aminoryhmiä = 1,2 % 15 S = 7,19 % 13C-NMR (ppm): 178,7; 104,9; 102,3; 99,0; 80,8; 79,3; 77,4; 71,8; 69,3; 62,9; 60,8; 52,4; 46,4.
[a]^6 = +62° [a] 589 = +50° 20 APTT (2T) = 12 μg/ml
Antitromboottinen aktiivisuus (ED50) : , Painohäviö = 0,52 mg/kg ((El
Esiintymistiheys-% = 1,31 mg/kg
I I I
Esimerkki 9 ( i « t ; " 25 Hepariini- tai heparaanirakenteen omaava puolisyn- ”·**· teettinen glykosaminoglykaani, jolla on yleinen «· · • kaava IV, jossa -Z vastaa (S) -karboksimetyyli- ·*·*· tioa
Reaktio suoritetaan typpiatmosfäärissä samoissa .···. 30 olosuhteissa kuin esimerkissä 1 on kuvattu käyttäen 7 416 • · mg:aa tioglykolihappoa ja 6 450 mg:aa natriumhydroksidia *!* 20 ml:ssa vettä ja lisäämällä reaktioaikaa 72 tunniksi.
4 « ·.**: Saadaan 450 mg otsikon tuotetta, jolla on seuraavat analyyttiset ja farmakologiset ominaisuudet: : .·. 35 Vapaita aminoryhmiä = 1,2 % • · » ♦ · « · · 19 106556 13C-NMR (ppm): 180,8; 178,1; 104,1; 99,2; 79,0; 72,7; 71,8; 69,2; 62,5; 60,6; 50,5; 40,1.
[a] \l6 = +59° [a]i°9 = +50° 5 Antitromboottinen aktiivisuus (ED50) :
Painohäviö = 0,40 mg/kg Esiintymistiheys-% = 1,22 mg/kg Esimerkki 10
Hepariini- tai heparaanirakenteen omaava puolisyn-10 teettinen glykosaminoglykaani, jolla on yleinen kaava IV, jossa -Z vastaa (S) -2-aminoetyyli- tioa
Reaktio suoritetaan typpiatmosfäärissä samoissa olosuhteissa kuin esimerkissä 1 on kuvattu käyttäen 5 700 15 mg:aa kysteamiinivetykloridia 3 760 mg:n sijasta glysiiniä ja lisäämällä reaktioaikaa 72 tunniksi.
Saadaan 490 mg otsikon tuotetta, jolla on seuraavat analyyttiset ominaisuudet:
Vapaita aminoryhmiä = 34 % 20 13C-NMR (ppm) : 178,1; 104,6; 98,4; 79,1; 77,7; 72,7; 71,8; 69,1; 62,8; 60,5; 50,4; 41,5; 40,6; 36,0; 33,0.
; [CC]|4°6 = +54° [a]"9 = +46°
I I I
Esimerkki 11 < “ 25 Hepariini- tai heparaanirakenteen omaava puolisyn- • · teettinen glykosaminoglykaani, jolla on yleinen • kaava IV, jossa -ZfRjJRi vastaa B-alaniinietyylies- : : : teriä
Reaktio suoritetaan samoissa olosuhteissa kuin esi- .··1. 30 merkissä 1 on kuvattu käyttäen 7 680 mg:aa β-alaniinietyy- * · · · ,···, liesterivetykloridia 3 760 mg:n sijasta glysiiniä ja li- *11 säämällä reaktioaikaa 72 tunniksi.
• ·
Saadaan 480 mg otsikon tuotetta, jolla on seuraavat ""· analyyttiset ominaisuudet: ; 35 Vapaita aminoryhmiä = 8,1 % III · I · · · · 20 106556 13C-NMR (ppm): 178,1; 104,8; 102,1; 100,5; 98,6; 97,3; 79,5; 75,5; 72,2; 71,6; 68,8; 65,2; 64,6; 62,4; 60,5; 39,2; 38,2; 36,1; 34,6; 15,9.
[a] He = +60° 5 [a] lag = +49°
Esimerkki 12
Hepariini- tai heparaanirakenteen omaava puolisynteettinen glykosaminoglykaani, jolla on yleinen kaava IV, jossa vastaa atsidoa 10 500 mg julkaistun EP-patenttihakemuksen 0 347 588 esimerkissä 3 kuvattua 2,3-epoksigulonirakenteen omaavaa puolisynteettistä glykosaminoglykaania ja 6 500 mg nat- riumatsidia 20 ml:ssa vettä solubilisoidaan typpiatmos-fäärissä. Reaktioseosta pidetään sekoittumassa huoneen-15 lämpötilassa 96 tuntia ja sitten liuokselle suoritetaan dialyysi 12 tunnin aikana juoksevassa vedessä ja 6 tunnin aikana tislatussa vedessä sen jälkeen kun se on neutraloitu vetykloridihapon vesipitoisella liuoksella. Saatu liuos lyofilisoidaan, jolloin saadaan 410 mg otsikon tuotetta, 20 jolla on seuraavat analyyttiset ja farmakologiset ominaisuudet :
Vapaita aminoryhmiä = 1,8 % 13C-NMR (ppm): 178,1; 102,9; 98,1; 80,2; 79,1; 76,4; 72,8; 71,8; 69,8; 68,9; 63,8; 62,6; 60,5.
: ' 25 [a] 546 = +72 ° [a] las = +60° : * : Antitromboottinen aktiivisuus (ED50) :
Painohäviö = 0,2 0 mg/kg Esiintymistiheys-% = 0,64 mg/kg • · · • · • · • · · • · ·· · •
( 4 I
< 4 · < « « I « < « « 4 « « « • 44 21 106556
Esimerkki 13
Hepariini- tai heparaanirakenteen omaava puolisynteettinen glykosaminoglykaani, jolla on yleinen kaava IV, jossa vastaa (N) -hydroksyyliami- 5 noa
Reaktio suoritetaan samoissa olosuhteissa kuin esimerkissä 1 on kuvattu käyttäen 3 470 mg:aa hydroksyyli-amiinivetykloridia 3 760 mg:n sijasta glysiiniä. Reaktion lopussa liuoksen pH muuttuu neutraaliksi ja siten vesipi-10 toisen vetykloridihapon lisääminen liuoksen neutraloimi-seksi on tarpeetonta.
Saadaan 500 mg otsikon tuotetta, jolla on seuraavat analyyttiset ja farmakologiset ominaisuudet:
Vapaita aminoryhmiä =1,7% 15 13C-NMR (ppm) : 178,6; 178,1; 104,8; 101,5; 98,0; 80,1; 79,2; 76,2; 72,2; 71,7; 69,1; 67,1; 65,7; 62,6; 60,7.
[α]^°6 = + 66° ia]l°B9 = +57° APTT (2T) =19,3 ^g/ml 20 Verenvuotoaika: 40,8 % 0,5 mg/kg:n pitoisuudella 74,2 % 1 mg/kg:n pitoisuudella , 135,8 % 2 mg/kg:n pitoisuudella
' ; < C
Antitromboottinen aktiivisuus (ED50) : r i i <<: Painohäviö = 0,74 mg/kg • '· 25 Esiintymistiheys-% = 1,44 mg/kg ·:**: Esimerkki 14 :*·*: Hepariini- tai heparaanirakenteen omaava puolisyn- •*;*j teettinen glykosaminoglykaani, jolla on yleinen kaava IV, jossa -ZtRjjRj vastaa L-kystinyyliä .···, 30 4 000 mg natriumhydroksidia ja 12 010 mg L-kystii- • · niä liuotetaan 70 ml:aan vettä ja lisätään liuos, joka *;* sisältää 500 mg julkaistun EP-patenttihakemuksen 0 347 588 < « esimerkissä 3 kuvattua 2,3-epoksigulonirakenteen omaavaa puolisynteettistä glykosaminoglykaania 2,5 ml:ssa vettä.
: 35 Reaktioseosta pidetään sekoittumassa 48 tuntia huoneen- 4 « « · 4 · « 22 106556 lämpötilassa ja sitten neutraloidaan lisäämällä vesipitoista vetykloridihappoa. Kiinteä jäännös, joka muodostuu, suodatetaan sitten pois ja kirkkaalle liuokselle suoritetaan dialyysi 12 tunnin aikana juoksevalla vedellä 5 ja 6 tunnin aikana tislatulla vedellä ja lopuksi lyofili-soidaan.
Saadaan 730 mg otsikon tuotetta, jolla on seuraavat analyyttiset ja farmakologiset ominaisuudet:
Vapaita aminoryhmiä = 10,5 % 10 13C-NMR (ppm): 178,1; 104,8; 102,1; 98,7; 97,4; 79,7; 75,7; 72,0; 69,0; 62,6; 60,5; 56,3; 41,3.
[<X]|406 = +42° [a]s89 = +32° APTT (2T) = 18,4 μg/ml 15 Esimerkki 15
Hepariini- tai heparaanirakenteen omaava puolisynteettinen glykosaminoglykaani, jolla on yleinen kaava IV, jossa -Z(R2)R! on N-glysyyli
Reaktio suoritetaan samoissa olosuhteissa kuin esi-20 merkissä 1 on kuvattu käyttäen 500 mg:aa EP-julkaisun 0 347 588 esimerkissä 5 kuvattua 2,3-epoksigulonirakenteen omaavaa puolisynteettistä glykosaminoglykaania.
Saadaan 510 mg otsikon tuotetta, jolla on seuraavat .·; analyyttiset ominaisuudet: ί 25 Vapaita aminoryhmiä = 1,2 % :*·: 13C-NMR (ppm): 178,3; 104,8; 102,1; 98,6; 80,1; 79,1; 77,3; :*·*: 71,7; 69,0; 62,6; 60,7; 53,6.
•.T: [«] S46 = +42° ta] = +36° ·♦· 30 Esimerkki 16 • · • · V,'.' Heparaanirakenteen omaava puolisynteettinen glykos- *Γ aminoglykaani, jolla on yleinen kaava IV, jossa -Z(R2)R1 on N-glysyyli ·:·*: Käsittelemällä naudan pernasta saatua kaupallista . 35 heparaania (OPOCRIN) EP-julkaisussa 0 347 588 kuvatun me- • t · • i · « 23 106556 netelmän mukaisesti on valmistettu yleisen kaavan III mukainen 2,3-epoksigulonirakenteen omaava puolisynteettinen glykosaminoglykaani, jolla on seuraavat analyyttiset ominaisuudet : 5 Vapaita aminoryhmiä = 2,5 % 13C-NMR (ppm): 178,0; 177,4; 105,1; 99,6; 98,1; 97,1; 81,0; 78,8; 76,2; 73,3; 71,8; 70,9; 62,1; 60,3; 56,6; 55,9; 54,1; 53,1; 24,5.
[a] 1°6 = +102° 10 [a] 1°9 = +87° 500 mg tätä yleisen kaavan III mukaista 2,3-epoksigulonirakenteen omaavaa puolisynteettistä glykosaminogly-kaania saatetaan reagoimaan glysiinin kanssa samoissa olosuhteissa kuin esimerkissä 1 on kuvattu.
15 Saadaan 480 mg otsikon tuotetta, jolla on seuraavat analyyttiset ominaisuudet:
Vapaita aminoryhmiä = 3,0 % 13C-NMR (ppm): 178,0; 177,5; 105,2; 102,0; 99,6; 98,7; 81,1; 80,3; 79,1; 76,3; 73,4; 71,9; 69,2; 62,5; 60,5; 20 56,0; 53,6; 24,5.
[a]|°6 = +80° , [a] 589 = +68° t iiii a « a • ♦ • · · • · · • · • · ··· • · · • · · • · · • · • · * «aa • · · • # • · « . « « aa· a a · • · • a · • · · a 1 a · aa • · • ·
»M
Claims (5)
1. Menetelmä hepariini- tai heparaanirakenteen omaavien puolisynteettisten glykosaminoglykaanien synteti-5 soimiseksi, joiden kaava on -.j&O- ° -f N--< US0- OH KHCOCH, I MHSO, OSO HfliU, Λ/1\„ 5
10. L J, L Jo IV jossa p + q = m, jolloin p on muu kuin 0, ja m ja n ovat kokonaisulukuja 1 - 100, R merkitsee vetyä tai sulfaat-15 tiryhmää (S03~) ja -Z(R2)R1 merkitsee nukleof iilistä radikaalia, joka on peräisin nukleofiilisestä reagenssis-ta, joka on valittu ryhmästä primaariset ja sekundaariset amiinit, sekundaariset heterosykliset amiinit, ami-noalkoholit, aminotiolit, aminohapot, aminoesterit, 20 peptidit, alkoholit, fenolit, merkaptaanit, ditiolit, tiofenolit, hydroksyyliamiinit, hydratsiinit, hydratsidit ja natriumatsidi, tunnettu siitä, että 2,3-epok-, sigulonirakenteen omaava puolisynteettinen glykos- aminoglykaani, jonka kaava on ί ‘ 25 ~ c cH ° A V * 0 HHSO,* OSO,' HHSO," 0« NHCOCH, J? L Jq L J" .·*. 30 $ · • · · .···. III *·’ jossa p, q, n ja R tarkoittavat samaa kuin edellä, ja joka li on saatu käsittelemällä hepariinimateriaalin vesipitoista liuosta alkalimetalli- tai maa-alkalimetalliemäksellä, « ; 3 5 jonka konsentraatio on 0,01 - IN, jolloin läsnä on aika- ι i « iti · II· • · • · M I 106556 limetallin tai maa-alkalimetallin suola, jonka konsent-raatio on 0 - 1 N, ja jolloin mahdollisesti on läsnä katalyyttinen määrä natriumboorihydridipelkistintä, 0,5 - 24 tunnin ajan lämpötilassa 35 - 70 °C; saatetaan reagoimaan 5 edellä mainitun nukleofiilisen reagenssin kanssa, jolloin läsnä on polaarinen liuotin ja sellainen määrä epäorgaanista tai orgaanista emästä, joka riittää muodostamaan suolan mistä tahansa happoryhmistä, jotka ovat läsnä nukleof iilisissä reagensseissa ja/tai vapauttamaan nämä nuk-10 leofiiliset reagenssit mistä tahansa suoloista, joita niillä voi olla happoluonteisten aineiden kanssa, mahdollisesti inertissä kaasuatmosfäärissä; sekoittaen 24 - 96 tuntia lämpötilassa 10 - 30 °C, reaktioseos laimennetaan vedellä, kun reaktioliuos on muu kuin vesi, vesipitoisen 15 liuoksen pH säädetään neutraaliksi lisäämällä vetyklori-dihapon vesiliuosta, ylimääräinen nukleofiilinen reagenssi mahdollisesti poistetaan uuttamalla liuottimena, joka ei ole veden kanssa sekoittuva, tai suodattamalla, vesipitoiselle liuokselle suoritetaan mahdollisesti dialyysi juok-20 sevalla vedellä ja tislatulla vedellä ja tuote eristetään lyofilisoimalla sitä sisältävä vesipitoinen liuos tai saostamalla lisäämällä sopivaa liuotinta.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n-n e t t u siitä, että nukleof iilisen reagenssin määrä on 4 « ; 1·« 25 1 - 200 mooliekvivalenttia kaavan III mukaisen epoksiryh- ·:2! män sisältävän puolisynteettisen glykosaminoglykaanin di- ·1·1: meeriyksikköön nähden. • · .1J‘.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n- • 1 · n e t t u siitä, että polaarinen liuotin on dimetyy- #...# 30 liasetamidi, dimetyyliformamidi, asetonitriili, dioksaani, IV. tetrahydrofuraani tai niiden seos veden kanssa. • · *;1
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n- • · :.1·· net t u siitä, että käytettävä emäs on natrium- *:2: hydroksidi, kaliumhydroksidi tai trietyyliamiini. • · • « » • » · • · » · 2 • · • 1 1 106556
5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan III mukainen 2,3-epok-sigulonirakenteen omaava puolisynteettinen glykosamino-glykaani liuotetaan veteen, lisätään sekoittaen mahdol-5 lisesti inertissä kaasuatmosfäärissä vesipitoiseen liuokseen, joka sisältää 10 - 100 mooliekvivalenttia nukleo-fiilistä reagenssiä kaavan III mukaisen glykosamino-glykaanin dimeeriyksikköön nähden, joka glykaani sisältää epoksiryhmän, ja sellaisen määrän natriumhydroksidia, joka 10 riittää muodostamaan suolan mistä tahansa happoryhmistä, jotka ovat läsnä nukleofiilisessä reagenssissä, ja/tai vapauttamaan nukleofiilisen reagenssin mahdollisesta suolasta happoluonteisen aineen kanssa, sitten reaktioseosta pidetään huoneenlämpötilassa 24 - 96 tuntia, että tämän 15 jälkeen reaktioseoksen pH säädetään neutraaliksi vesi pitoisella vetykloridihapolla, kun reaktioseoksen pH ei ole neutraali, että ylimääräinen nukleofiilinen reagenssi voidaan mahdollisesti poistaa passiivisella uutolla liuottimen kanssa, joka ei ole veden kanssa sekoittuva, tai 20 suodattamalla, että reaktioliuokselle voidaan mahdollisesti suorittaa dialyysi juoksevalla vedellä ja tislatulla . vedellä 6-24 tunnin aikana ja että tuote eristetään 4 4 4 « liuoksesta lyofilisoinnin avulla tai lisäämällä sopivaa t « · ·«<'< liuotinta. • 1 • « « 1 < • · ·· ♦ ♦ 1 ♦ • · • · ♦ ♦ · • · · ♦ ··· • · • · ♦ · · ·«« • · • ♦ • · · « · 0 • · « • · • · · • · · • !' I · 1 1 • · • · « I < 106556
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ITBO920141A IT1260137B (it) | 1992-04-17 | 1992-04-17 | Glicosaminoglicani semisintetici a struttura eparinica od eparanica modificati nella posizione 2 dell'acido alfa-l-iduronico-2-0-solfato |
| ITBO920141 | 1992-04-17 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI931741A0 FI931741A0 (fi) | 1993-04-16 |
| FI931741A FI931741A (fi) | 1993-10-18 |
| FI106556B true FI106556B (fi) | 2001-02-28 |
Family
ID=11338176
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI931741A FI106556B (fi) | 1992-04-17 | 1993-04-16 | Menetelmä puolisynteettisten glykosaminoglykaanien valmistamiseksi |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5430133A (fi) |
| EP (1) | EP0565863B1 (fi) |
| JP (1) | JP2702376B2 (fi) |
| KR (1) | KR0171624B1 (fi) |
| AT (1) | ATE154616T1 (fi) |
| AU (1) | AU658498B2 (fi) |
| CA (1) | CA2093147C (fi) |
| DE (1) | DE69311619T2 (fi) |
| DK (1) | DK0565863T3 (fi) |
| ES (1) | ES2103992T3 (fi) |
| FI (1) | FI106556B (fi) |
| GR (1) | GR3024419T3 (fi) |
| IL (1) | IL105112A (fi) |
| IT (1) | IT1260137B (fi) |
| NO (1) | NO305992B1 (fi) |
| NZ (1) | NZ247196A (fi) |
| TW (1) | TW239148B (fi) |
| ZA (1) | ZA931798B (fi) |
Families Citing this family (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5696100A (en) * | 1992-12-22 | 1997-12-09 | Glycomed Incorporated | Method for controlling O-desulfation of heparin and compositions produced thereby |
| IT1264101B1 (it) * | 1993-03-29 | 1996-09-10 | Alfa Wassermann Spa | Processo per la sintesi di glicosaminoglicani semisintetici a struttura eparinica od eparanica modificati nella posizione 2 |
| IT1264102B1 (it) * | 1993-03-29 | 1996-09-10 | Alfa Wassermann Spa | Processo per la sintesi di glicosaminoglicani semisintetici contenenti acido alfa-l-galatturonico sostituito con radicali |
| US6127347A (en) * | 1994-01-12 | 2000-10-03 | Univ Michigan | Non-anticoagulant chemically modified heparinoids for treating hypovolemic shock and related shock syndromes |
| US5583121A (en) * | 1994-01-12 | 1996-12-10 | Michigan State University | Non-anticoagulant chemically modified heparinoids for treating hypovolemic shock and related shock syndromes |
| US6255295B1 (en) | 1996-12-23 | 2001-07-03 | Nutramax Laboratories, Inc. | Aminosugar, glycosaminoglycan or glycosaminoglycan-like compounds, and s-adenosylmethionine composition for the protection, treatment, repair, and reduction of inflammation of connective tissue |
| HUP0201712A3 (en) * | 1999-06-30 | 2003-03-28 | Weitz Jeffrey I Ancaster | Clot associated coagulation factors inhibiting heparin compositions |
| US7259152B2 (en) | 2000-06-07 | 2007-08-21 | Alfa Wasserman, Inc. | Methods and compositions using sulodexide for the treatment of diabetic nephropathy |
| JP2004507562A (ja) * | 2000-09-08 | 2004-03-11 | ハミルトン シビック ホスピタルズ リサーチ ディベロップメント インコーポレイテッド | 抗血栓性組成物 |
| EP2284535A1 (en) | 2002-03-11 | 2011-02-16 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Low molecular weight heparins |
| GB0216861D0 (en) * | 2002-07-19 | 2002-08-28 | Univ Birmingham | Saccharide libraries |
| US9139876B1 (en) | 2007-05-03 | 2015-09-22 | Momenta Pharmacueticals, Inc. | Method of analyzing a preparation of a low molecular weight heparin |
| WO2009014715A2 (en) * | 2007-07-23 | 2009-01-29 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Enzymatic synthesis of sulfated polysaccharides without iduronic acid residues |
| US8435795B2 (en) * | 2010-01-19 | 2013-05-07 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Evaluating heparin preparations |
| CN103209997B (zh) * | 2010-09-14 | 2016-03-16 | 国立大学法人宫崎大学 | 高纯度肝素及其制备方法 |
| ES2910476T3 (es) | 2010-12-23 | 2022-05-12 | Univ North Carolina Chapel Hill | Síntesis quimioenzimática de heparinas de peso molecular ultra bajo estructuralmente homogéneas |
| WO2012115952A1 (en) | 2011-02-21 | 2012-08-30 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Evaluating heparin preparations |
| DE102011077393A1 (de) * | 2011-06-10 | 2012-12-13 | Johannes Reinmüller | Antiinfektives Mittel |
| JP6670235B2 (ja) | 2013-06-17 | 2020-03-18 | ザ ユニバーシティ オブ ノース カロライナ アット チャペル ヒルＴｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｏｆ Ｎｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ Ａｔ Ｃｈａｐｅｌ Ｈｉｌｌ | 可逆的ヘパリン分子、その製法及びその使用方法 |
| CN116622006A (zh) | 2017-03-10 | 2023-08-22 | 北卡罗来纳大学查珀尔希尔分校 | 短效的基于肝素的抗凝血剂化合物和方法 |
| WO2019010216A1 (en) | 2017-07-03 | 2019-01-10 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | ENZYMATIC SYNTHESIS OF HOMOGENEOUS CHONDROITIN SULFATE OLIGOSACCHARIDES |
| JP7495061B2 (ja) | 2017-11-03 | 2024-06-04 | ザ ユニバーシティ オブ ノース カロライナ アット チャペル ヒル | 抗炎症作用を有する硫酸化オリゴ糖 |
| CN112437667B (zh) | 2018-06-20 | 2024-05-28 | 北卡罗来纳大学查珀尔希尔分校 | 细胞保护方法和组合物 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4987223A (en) * | 1981-12-23 | 1991-01-22 | Choay S.A. | Derivatives of the uronic acid |
| IT1234508B (it) * | 1988-06-10 | 1992-05-19 | Alfa Wassermann Spa | Derivati eparinici e procedimento per la loro preparazione |
| DE3821271A1 (de) * | 1988-06-23 | 1989-12-28 | Solco Basel Ag | Derivatisiertes heparin, verfahren zu dessen herstellung und arzneimittel, welches dieses enthaelt |
| IT1234826B (it) * | 1989-01-30 | 1992-05-29 | Alfa Wassermann Spa | Derivati eparinici e procedimento per la loro preparazione |
| US5464942A (en) * | 1990-07-24 | 1995-11-07 | Seikagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Phospholipid- or lipid-linked glycosaminoglycan and process for producing the same |
| US5200523A (en) * | 1990-10-10 | 1993-04-06 | Monsanto Company | Synthesis of nojirimycin derivatives |
| IT1260136B (it) * | 1992-04-17 | 1996-03-28 | Alfa Wassermann Spa | Glicosaminoglicani semisintetici contenenti acido alfa-l-galatturonicosostituito con radicali nucleofili in posizione 3 |
-
1992
- 1992-04-17 IT ITBO920141A patent/IT1260137B/it active IP Right Grant
-
1993
- 1993-03-10 AT AT93103848T patent/ATE154616T1/de not_active IP Right Cessation
- 1993-03-10 ES ES93103848T patent/ES2103992T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1993-03-10 DK DK93103848.3T patent/DK0565863T3/da active
- 1993-03-10 EP EP93103848A patent/EP0565863B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-03-10 DE DE69311619T patent/DE69311619T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1993-03-12 ZA ZA931798A patent/ZA931798B/xx unknown
- 1993-03-18 NZ NZ247196A patent/NZ247196A/en unknown
- 1993-03-19 TW TW082102014A patent/TW239148B/zh active
- 1993-03-19 IL IL10511293A patent/IL105112A/xx not_active IP Right Cessation
- 1993-03-30 NO NO931184A patent/NO305992B1/no not_active IP Right Cessation
- 1993-04-01 CA CA002093147A patent/CA2093147C/en not_active Expired - Fee Related
- 1993-04-13 US US08/046,248 patent/US5430133A/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-04-13 AU AU36895/93A patent/AU658498B2/en not_active Ceased
- 1993-04-16 JP JP5089976A patent/JP2702376B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1993-04-16 FI FI931741A patent/FI106556B/fi not_active IP Right Cessation
- 1993-04-17 KR KR1019930006473A patent/KR0171624B1/ko not_active IP Right Cessation
-
1997
- 1997-08-13 GR GR970402062T patent/GR3024419T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2702376B2 (ja) | 1998-01-21 |
| ITBO920141A1 (it) | 1993-10-17 |
| IL105112A0 (en) | 1993-07-08 |
| KR0171624B1 (ko) | 1999-02-01 |
| DE69311619D1 (de) | 1997-07-24 |
| ZA931798B (en) | 1993-11-22 |
| EP0565863B1 (en) | 1997-06-18 |
| FI931741A0 (fi) | 1993-04-16 |
| DK0565863T3 (da) | 1997-12-15 |
| IT1260137B (it) | 1996-03-28 |
| EP0565863A3 (en) | 1993-11-10 |
| US5430133A (en) | 1995-07-04 |
| EP0565863A2 (en) | 1993-10-20 |
| AU3689593A (en) | 1993-10-21 |
| NO931184L (no) | 1993-10-18 |
| NO931184D0 (no) | 1993-03-30 |
| TW239148B (fi) | 1995-01-21 |
| CA2093147C (en) | 1999-01-26 |
| AU658498B2 (en) | 1995-04-13 |
| DE69311619T2 (de) | 1997-12-11 |
| IL105112A (en) | 1997-01-10 |
| GR3024419T3 (en) | 1997-11-28 |
| JPH0616703A (ja) | 1994-01-25 |
| KR930021650A (ko) | 1993-11-22 |
| CA2093147A1 (en) | 1993-10-18 |
| NZ247196A (en) | 1995-02-24 |
| ES2103992T3 (es) | 1997-10-01 |
| ATE154616T1 (de) | 1997-07-15 |
| FI931741A (fi) | 1993-10-18 |
| ITBO920141A0 (it) | 1992-04-17 |
| NO305992B1 (no) | 1999-08-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI106556B (fi) | Menetelmä puolisynteettisten glykosaminoglykaanien valmistamiseksi | |
| FI106555B (fi) | Menetelmä puolisynteettisten glykosaminoglykaanien valmistamiseksi | |
| EP2103631B1 (en) | Mercapto-group modified macromolecule derivative and cross-linked material | |
| Coneski et al. | Synthesis of nitric oxide-releasing polyurethanes with S-nitrosothiol-containing hard and soft segments | |
| FI101541B (fi) | Menetelmä trisakkaridiyksikön sisältävien terapeuttisesti käyttökelpoi sten hiilihydraattijohdannaisten valmistamiseksi | |
| US5110918A (en) | Process for preparing EDTA-free heparins, heparin fractions and fragments | |
| FI105100B (fi) | Menetelmä puolisynteettisten glykosaminoglykaanien valmistamiseksi, jotka sisältävät nukleofiilisillä radikaaleilla 3-asemassa substituoitua alfa-L-galakturonihappoa | |
| FI105101B (fi) | Menetelmä hepariini- tai heparaanirakenteen omaavien puolisynteettisten glykoaminoglykaanien valmistamiseksi | |
| KR920003692B1 (ko) | 다당류의 해중합 및 황산염화 방법 | |
| CZ431699A3 (cs) | Směsi oligosacharidů s antitrombotickou účinností | |
| JPH0643446B2 (ja) | キトサン６−スルフエ−トおよびその製法 | |
| AU2002327578B2 (en) | Saccharide sulfation methods | |
| WO2003072612A1 (en) | Nitro-derivatives of low molecular weight heparin |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MA | Patent expired |