FI105399B - Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten N-syano-3-pyridiinikarboksiamidiinijohdannaisten valmistamiseksi - Google Patents

Description

105399

Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten N-syano-3-pyridiinikarboksiamidii-nijohdannaisten valmistamiseksi - Förfarande för framställning av terapeutiskt användbara N-cyano-3-pyridinkarboxiamidinderivat 5 Tämä keksintö koskee uusien N-syano-3-pyridiinikarboksiamidiiniyhdisteiden, joilla on verisuonia laajentava vaikutus, valmistusta.

Ennen tämän keksinnön tekemistä tekijät havaitsivat, että erilaisilla N-syanokar-boksimidiamidiyhdisteillä oli verenpainetta alentava vaikutus, verisuonia laajentava vaikutus ja vastaava (kuvattu japanilaisissa nähtäväksipannuissa patenttijulkaisuissa 10 163061/1991 ja 218343/1991). On kuitenkin olemassa huomattava tarve paremmista uusista verenpainetta alentavista tai antianginaalisista aineista, kun otetaan huomioon sairauksien eri olosuhteet, elämänlaatu, ts. potilaiden päivittäisen elämän tukeminen ja parantaminen, lääkkeiden sivuvaikutukset ja vastaavat.

Kemialliselta rakenteeltaan läheisiä, edullisia terapeuttisia ominaisuuksia omaavia 15 N-syano-3-pyridiinikarboksimidiamidijohdannaisia on kuvattu myös FI-patenttijul-kaisussa 95244 ja JP-hakemusjulkaisussa 03218343. Keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet eroavat kuitenkin edellä mainittujen julkaisujen yhdisteistä rakenteeltaan. Tämän kemiallisen rakenne-eron ansiosta keksinnön mukaiset yhdisteet tarjoavat huomattavasti paremman aktiivisuuden erityisesti verenpainetta alentavana lää-20 keaineena.

Keksinnön tarkoituksena on tarjota käyttöön menetelmiä valmistaa uusia yhdisteitä, •.:: joilla on verisuonia laajentava vaikutus, ja tarkemmin, yhdisteitä, joilla on verenpai- ··· netta alentava vaikutus tai antianginaalinen vaikutus. Tämä keksintö on toteutunut j|*| sen havainnon pohjalta, että uusilla pyridiinikarboksimidiamidiyhdisteillä on veri- Γ · *: 25 suonia laajentava vaikutus.

« · · ”;i Tämän keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettuja pyridiinikarboksimidi- • · · amidiyhdisteitä esittää seuraava kaava (I):

NCN

• · · Il •M 1 II -a : .·. Π | : H (Ij

·” R2 N

• · « · · • · * • · » · « · « • · · • · 2 105399 jossa kun R1 on hydroksimetyyli-, karboksyyli-, amino-, asetyyliamino-, C2.3-alkyyliami-no-, dimetyyliamino-, bentsyyliamino-, metyylisulfonyyliamino-, bismetyylisulfo-nyyliamino- tai hydroksyyliryhmä, R on vetyatomi ja R on nitroksyyli-, 2-kloori-5 fenyyli- tai fenyyliryhmä; ja kun R1 on vetyatomi, R2 on aminoryhmä, ja R3 .on nitroksyyli-, 2-kloorifenyyli- tai fenyyliryhmä; tai sen happoadditiosuola.

Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista se, mikä on esitetty patenttivaatimuksen 1 tunnusmerkkiosassa.

Kaavan I mukaisista yhdisteistä voidaan valmistaa verenpainetta alentava aine, joka 10 sisältää vaikuttavana ainesosana edellä olevan kaavan (I) mukaista pyridiinikarboks-imidiamidia tai sen happoadditiosuolaa, ja antianginaalinen aine, joka sisältää vaikuttavana ainesosana esillä olevan kaavan (I) mukaista pyridiinikarboksimidiamidia, jossa R3 on nitroksyyliryhmä tai sen happoadditiosuolaa, ja farmaseuttinen koostumus, joka sisältää vaikuttavana ainesosana esillä olevan kaavan (I) mukaista pyri-15 diinikarboksimidiamidia tai sen happoadditiosuolaa.

Kaavan (I) mukaista pyridiinikarboksimidiamidiyhdistettä tai sen happoadditiosuolaa annetaan potilaalle, joka tarvitsee hoitoa korkeaan verenpaineeseen. Kaavan (I) mukaista pyridiinikarboksimidiamidia, jossa R3 on nitroksiryhmä, tai sen happoadditiosuolaa, annetaan angina pectoris -potilaalle.

20 Kuva 1 on reaktiokaavio kaavan (I) esittämän tämän keksinnön yhdisteen valmistuksesta ja kuvaa N-syano-pyridiinikarboksimidiamidiyhdisteen valmistusta, jota esittää kaava (I), jossa R1 on hydroksimetyyliryhmä, karboksyyliryhmä, aminoryhmä, C2-3-• · · alkyyliaminoryhmä, dimetyyliaminoryhmä, bentsyyliaminoryhmä tai hydroksyyli-j.j’· ryhmä, ja R2 on vetyatomi, tai R1 esittää vetyatomia ja R2 esittää aminoryhmää, tai 25 sen happoadditiosuolan valmistusta.

• « ·

Kuva 2 on reaktiokaavio kaavan (I) esittämän tämän keksinnön yhdisteen valmistuk- • · ·

*·1 1 sesta ja kuvaa N-syano-pyridiinikarboksimidiamidiyhdisteen valmistusta, jossa R

on asetyyliaminoryhmä, metyylisulfonamidiryhmä tai bismetyylisulfonyyliamino-ryhmä, ja sen happoadditiosuolan valmistusta.

»· 1 • · « • · · 30 Pyridiinikarboksimidiamidiyhdisteet • · • · · I · · ·

Kuten edellä kuvattiin, esittää tämän keksinnön mukaisia pyridiinikarboksimidiami- . diyhdisteitä seuraava kaava (I): # · · 1 1 t · 1 3 105399

NCN

H (I)

R2 N

jossa kun R1 on hydroksimetyyli-, karboksyyli-, amino-, asetyyliamino-, C2-3-alkyyliami-no-, dimetyyliamino-, bentsyyliamino-, metyylisulfonyyliamino-, bismetyylisulfo- Λ Λ 5 nyyliamino- tai hydroksyyliryhmä, R on vetyatomi ja R on nitroksyyli-, 2-kloori-fenyyli- tai fenyyliryhmä; ja I 4 n kun R on vetyatomi, R on aminoryhmä, ja R on nitroksyyli-, 2-kloorifenyyli- tai fenyyliryhmä.

Tämän keksinnön yhdisteitä, joissa R3 on 2-kloorifenyyli- tai fenyyliryhmä kaavassa Λ 10 (I), esittää kaava (I-a), ja tämän keksinnön yhdisteitä, joissa R kaavassa (I) on nit- roksyyliryhmä, esittää kaava (I-b) (kuva 1).

Tämän keksinnön yhdisteissä on emäksinen typpiatomi, niin että ne voivat muodostaa happoadditiosuoloja. Happoja, joita voidaan käyttää happoadditiosuolojen muodostuksessa, ovat esimerkiksi epäorgaaniset hapot, kuten vetykloridihappo, rikki-15 happo, typpihappo ja fosforihappo, ja orgaaniset hapot, kuten etikkahappo, propio-nihappo, maleiinihappo, öljyhappo, palmitiinihappo, sitruunahappo, meripihkahap-. . po, viinihappo, fumaarihappo, glutamiinihappo, pantoteenihappo, metaanisulfoni- happo, tolueenisulfonihappo ja lauryylisulfonihappo. On tarpeetonta sanoa, että • · *··· lääkkeinä käytettävien happoadditiosuolojen muodostuksessa tulee käyttää farma- : 20 seuttisesti sopivia happoja.

• · · m 9 • · • · ·

Edustavina esimerkkeinä kaavan (I) esittämistä tämän keksinnön mukaisista pyri- * * · ·. diinikarboksimidiamidiyhdisteistä mainitaan seuraavat yhdisteet: « · (1) Siinä tapauksessa, että R3 on 2-kloorifenyyli- tai fenyyliryhmä: • · · • · • · f • · · • * « • · · • » • · · <11 • * * « • · · 9 9 9

4 < I

• · • · · • « * • 9 9 9

• t I « I I

9 9 4 105399

Yhdisteen nro Yhdisteen nimi 1) N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-5-hydroksimetyyli-3-py-ridiinikarboksimidiamidi 2) 5-karboksi-N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-3-pyridiinikar- 5 boksimidiamidi 3) 6-amino-N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-3-pyridiinikar-boksimidiamidi (N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-5-(2-aminopyridiini)- karboksimidiamidi) 10 4) 5-amino-N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-3-pyridiinikar- boksimidiamidi (N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-5-(3-aminopyridimi)kar- boksimidiamidi) 5) 5-asetamidi-N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)-etyyli]-3-pyridiini- 15 karboksimidiamidi (N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-5-[3-(N-asetyyliaim- no)pyridiini]karboksimidiamidi) 6) N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-5-dimetyyliamino-3-pyri-diinikarboksimidiamidi

III

• 9 20 7) N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-5-etyyliamino-3-pyri- : diinikarboksimidiamidi ·· · • · · • · • · · ·;· 8) N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyli)etyyli]-5-isopropyyliamino-3-pyri~ . *: *. diinikarboks-imidiamidi « · · 9) 5-bentsyyliamino-N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-3-pyri- 25 diinikarboksimidiamidi * « · • · « • » · 10) N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-5-metaanisulfonamidi-3-pyridiinikarboksimidiamidi • · » ψ m 9 99 5 105399 (N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-5-[3-(N-metaanisuIfo- nyyliamino)pyridiini]karboksimidiamidi) 11) N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-5-bismetaanisulfonyyli-amino-3-pyridiinikarboksimidiainidi 5 (N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-5-[3 -(N,N-bismetaani- sulfonyyliamino)pyridiini]-karboksimidiamidi 12) 5-amino-N-syano-N,-(2-fenetyyli)-3-pyridiinikarboksimidiamidi 13) N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-5-hydroksi-3-pyridimi-karboksimidiamidi 10 (2) Siinä tapauksessa, että R3 on nitroksiryhmä:

Yhdisteen nro Yhdisteen nimi 14) 5-amino-N-syano-N'-(2-nitroksietyyli)-3-pyridiinikarboksimidi-amidi (N-syano-N'-(2-nitroksietyyli)-5-(3-aminopyridiini)karboksimi-15 diamidi) 15) N-syano-5-etyyliamino-N'-(2-nitroksietyyli)-3-pyridiinikarboks-imidiamidi •. ·. (N-syano-N'-(2-nitroksietyyli)-5-[3-(N-etyyli-amino)pyridiini]- • · 1 karboksimidiamidi) • · » • · ·.: : 20 16) 6-amino-N-syano-N'-(2-nitroksietyyli)-3-pyridiinikarboksimidi- :’· : amidi • · · • · 1 « y/. t (N-syano-N'-(2-nitroksietyyli)-5-(2-aminopyridiini)karboksimi- • · 1 . ' diamidi) : 1 1 ’: 17) N-syano-N'-(2-nitroksietyyli)-5-isopropyyliamino-3 -pyridiinikar- 25 boksimidiamidi « · 1 • · ·.: : (N-syano-N'-(2-nitroksietyyli)-5-[3-(N-isopropyyliamino)pyridii- :2/ ni]karboksimidiamidi) » · • · 1 • · • · 1 1 · 2 • · · • · 6 105399 18) 5-asetyyliamino-N-syano-N'-(2-nitroksietyyli)-3-pyridiinikar- boksimidiamidi (N-syano-N'-(2-nitroksietyyli)-5 -[3 -(N-asetyyliamino)pyridiini]-karboksimidiamidi) 5 Menetelmä pyridiinikarboksimidiamidiyhdisteiden valmistamiseksi Tämän keksinnön mukaiset pyridiinikarboksimidiamidiyhdisteet voidaan valmistaa millä tahansa tarkoitukseen sopivalla menetelmällä, ja esim. seuraavia menetelmiä voidaan käyttää yhdisteiden valmistukseen.

A) Kaavan (1) mukaisten N-syanopyridiinikarboksimidiamidiyhdisteiden valio mistus, jossa kaavassa R1 on hydroksimetyyli-, karboksyyli-, amino-, C2-3-aIkyy-Iiamino-, dimetyyliamino-, bentsyyliamino- tai hydroksyyliryhmä ja R2 on vetyatomi tai R1 on vetyatomi ja R2 on aminoryhmä, sekä niiden happoadditiosuolo-jen valmistus: Nämä yhdisteet voidaan valmistaa kuten kuvassa 1 on esitetty muodostamalla kaa-15 van (II) mukaisesta syanopyridiinistä, jossa on edellä kuvattu R1 ja R2, N-syanopyri-diinikarboksimidaatti (IV) pyridiinikarboksimidaatin (ΠΙ) kautta, ja antamalla sitten N-syanopyridiinikarboksimidaatin (IV) reagoida amiinin (V) tai (VI) kanssa. Huomataan, että pyridiinikarboksimidiamidiyhdiste, jossa R1 on karboksyyliryhmä, voidaan saada käyttämällä lähtöaineena syanopyridiiniä (II), jossa R1 on metoksikar-20 bonyyliryhmä, jolloin syntyy pyridiinikarboksamidiyhdiste pyridiinikarboksimidaatin (III) ja N-syanopyridiinikarboksimidaatin (IV) kautta, ja eliminoimalla siitä me-

• I

tyyliryhmä. Selitys annetaan jäljessä järjestyksessä.

* · • · · 1) Syanopyridiini (Π) ·» · • · · • · “ Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistuksessa käytettävä syanopyridiini voi olla *::i 25 joko tunnettu yhdiste tai yhdiste, joka on valmistettu tunnetulla menetelmällä, kuten • · · esimerkiksi julkaisuissa Journal of Medicinal Chemistry 10, 149-154 (1967), Journal of Heterocyclic Chemistry IT, 397-399 (1974), Heterocycles 22, 117-124 (1984) ·<· :...: tai vastaavissa on esitetty.

• ♦ · » • · m 2) Pyridiinikarboksimidaatin (III) valmistus « « · • « · • · · · 30 Eräänä menetelmistä pyridiinikarboksimidaatin (III) valmistamiseksi syanopyridii- . nistä (II) voidaan mainita Pinnerin menetelmä. Nimittäin käsittelemällä syanopyri- ; diiniä (II) vetykloridikaasulla alkoholissa voidaan saada käytettyä alkoholia vastaava • · * • mm m · 7 105399 alkyylipyridiinikarboksimidaatti. Alkoholeja, joita voidaan käyttää edellä olevassa reaktiossa, ovat esimerkiksi metanoli, etanoli, 1-propanoli, 2-propanoli, 1-butanoli, isobutyylialkoholi ja t-butyylialkoholi. Alkoholia voidaan käyttää myös reaktion liuottimena. Lisäksi sitä voidaan käyttää yksinkertaisesti reagenssina yhdessä mui-5 den liuottimien kanssa. Kun alkoholia käytetään myös reaktioliuottimena, on alkoholin määrä tavallisesti alueella 50-200 moolia 1 moolia kohti syanopyridiiniä. Kun alkoholia käytetään muiden liuottimien läsnäollessa, on edullinen alkoholin määrä 1-5 moolia 1 moolia kohti syanopyridiiniä. Liuottimia, joita voidaan käyttää tässä reaktiossa, ovat esimerkiksi aproottiset liuottimet, kuten heksaani, bentseeni, tolu-10 eeni, dietyylieetteri ja petrolieetteri. Reaktiolämpötila on edullisesti alueella -10-50 °C, erityisesti 0 °C:sta huoneenlämpötilaan.

Reaktion voidaan antaa tapahtua yleensä 1-24 tuntia edellä kuvatuissa reaktio-olosuhteissa.

Edellä mainitulla reaktiolla saatu pyridiinikarboksimidaatti (III) on vetykloridihap-15 posuolan muodossa. Tämä suola voidaan viedä myöhempään reaktioon joko sellaisenaan tai sen jälkeen, kun vetykloridihappo on neutraloitu emäksellä. Lisäksi on mahdollista suorittaa pyridiinikarboksimidaatille (III) tai sen vetykloridihapposuo-lalle eristys ja puhdistus. Tässä tapauksessa voidaan valita mikä tahansa puhdistus-menetelmä, joka tavanomaisesti tunnetaan orgaanisen kemian alalla, kuten kiteytys, 20 tislaus ja pylväskromatografia käyttäen silikageeliä alustana.

Pyridiinikarboksimidaatti (III) voidaan myös valmistaa toisella menetelmällä. Pyridiinikarboksimidaatti (III) voidaan nimittäin saada käsittelemällä syanopyridiiniä (II) katalyyttisellä määrällä metallialkoholaattia alkoholissa. Natriumalkoholaatti ja kaliumalkoholaatti voidaan mainita esimerkkeinä metallialkoholaatista. Alkoholit, 25 joita tässä reaktiossa voidaan käyttää, ja niiden määrät ovat samoja, joita kuvattiin :1·1: Pinnerin menetelmän mukaisessa valmistusprosessissa. Lisäksi tämä reaktio voidaan .:· suorittaa myös edellä kuvattujen muiden liuottimien ollessa samanaikaisesti muka- • ••t na, ja liuottimet, joita tässä reaktiossa voidaan käyttää, ovat samoja kuin edellä . ’ mainittiin. Reaktiolämpötila on edullisesti alueella käytetyn liuottimen jäätymispis- ...# 30 teestä 30 °C:een, erityisesti 0-10 °C. Reaktion voidaan antaa tapahtua yleensä 12-14 tuntia.

V · Tällä reaktiolla saadun pyridiinikarboksimidaatin eristys ja puhdistus voidaan suorit- • · · ’p . ’ taa samalla menetelmällä kuin edellä on esitetty.

• ψ • · · « · • · · » · · « » · « · · • · · 8 105399 3) Konversio N-syanopyridiinikarboksimidaatiksi (TV)

Edellä saatu pyridiinikarboksimidaatti (ΠΙ) tai sen vetykloridihapposuola muuttuu N-syanopyridiinikarboksimidaatiksi (IV), kun sen annetaan reagoida syanamidin kanssa.

5 Käytetty syanamidin määrä on edullisesti 1 mooli tai enemmän, erityisesti 2-3 moolia 1 moolia kohti pyridiinikarboksimidaattia (ΠΙ). Tämä reaktio riippuu reaktioliu-oksen pH.sta, ja optimaalinen pH-arvo on edullisesti 6,0-8,0, edullisemmin 6,5-7,5. Haluttaessa pitää pH edellä mainitulla optimialueella on sopivaa, että reaktio suoritetaan fosforihappopuskuriliuoksessa tai lisäämällä emästä, kuten natriumkarbonaat-10 tia, kun vetykloridihapposuolaa käytetään substraattina. Lisäksi tämä reaktio voidaan suorittaa myös siten, että mukana on samanaikaisesti muita liuottimia. Liuottimia, joita reaktiossa voidaan käyttää, ovat esimerkiksi asetonitriili, dioksaani, tet-rahydrofuraani ja DMF. Reaktiolämpötila on edullisesti alueella 0-50 °C, ja erityisen edullista on toimia huoneenlämpötilan vaiheilla.

15 Reaktion voidaan antaa tapahtua 5-30 tuntia edellä mainituissa reaktio-olosuhteissa.

Näin saatu N-syanopyridiinikarboksimidaatti (TV) voidaan eristää ja puhdistaa samalla menetelmällä kuin edellä kuvattiin, kuten kiteytys, tislaus tai pylväskromato-grafia käyttäen silikageeliä alustana.

4) N-syanopyridiinikarboksimidiamidin valmistus 20 N-syanopyridiinikarboksimidiamidit, joita esittävät kaavat (I-a) ja (I-b), voidaan

I « I

M saada antamalla edellä saadun N-syanopyridiinikarboksimidaatin (IV) reagoida • · amiinin (V) ja (VI) kanssa, vastaavasti. Sopiva amiinin käytetty määrä on 1 mooli

I I I

tai enemmän, edullisesti 1-2 moolia moolia kohti N-syanopyridiinikarboksimidaattia (IV). Tämä reaktio suoritetaan tavallisesti liuottimessa. Liuottimia, joita reaktiossa 25 voidaan käyttää, ovat esimerkiksi orgaaniset liuottimet, kuten metanoli, etanoli, di-·* kloorimetaani, kloroformi, hiilitetrakloridi, dioksaani ja tetrahydrofuraani ja vesi.

Reaktiolämpötila on alueella 0 °C - käytetyn liuottimen kiehumispiste, ja erityisen edullista on toimia huoneenlämpötilan vaiheilla. Tämän reaktion voidaan antaa ta- • · · .···. pahtua yleensä 2-24 tuntia edellä kuvatuissa reaktio-olosuhteissa.

: :': 30 Kaavan (I) ((I-a) ja (I-b)) esittämien N-syanopyridiinikarboksimidiamidien eristys ja - puhdistus reaktioliuoksesta, joka on saatu edellä kuvatulla tavalla, voidaan suorittaa * * * / . samalla menetelmällä kuin mainittiin kohdassa pyridiinikarboksimidaatin (III) eris- 1 tys ja puhdistus.

• * · • · · • · 9 105399 Näin saadut N-syanopyridiinikarboksimidiamidit ((I-a) ja (I-b)) voidaan tehdä hap-poadditiosuoloiksi antamalla niiden reagoida hapon kanssa. Hapot, joita tässä voidaan käyttää, ovat samoja kuin edellä.

6) Kaavan (I) esittämän N-syanopyridiinikarboksimidiamidin valmistus, jossa 5 R1 on asetyyliamino-, metyylisulfonamidi- tai bismetyylisulfonyyliaminoryhmä, ja niiden happoadditiosuolojen valmistus Nämä yhdisteet voidaan valmistaa kuten kuvassa 2 on esitetty käyttämällä lähtöaineena N-syanopyridiinikarboksimidiamidia (I-c), jossa on aminoryhmä ryhmänä R1 kaavassa (I) ja joka on saatu edellä kuvatulla reaktiolla, ja suorittamalla pyridiiniin 10 sitoutuneelle aminoryhmälle asylointi, alkyylisulfonylointi tai bisalkyylisulfonyloin-ti. Tätä valmistusmenetelmää selitetään tarkemmin jäljessä.

Suojattu yhdiste, jota esittää kaava (I-d), voidaan valmistaa suorittamalla aminoryhmälle yhdisteessä (I-c) N-asylointi tai N-alkyylisulfonylointi. N-asylointi tai N-alkyylisulfonylointi voidaan suorittaa millä tahansa tavallisista eri tavoista, ja esi-15 merkiksi seuraava tapa voi sopia tarkoitukseen.

Yhdiste (I-d) voidaan saada antamalla aminoryhmän yhdisteessä (I-c) reagoida asy-loivan tai sulfonyloivan aineen kanssa, kuten happohalogenidin, happoanhydridin tai aktiivisen esterin kanssa; tai antamalla aminoryhmän reagoida karboksyylihapon kanssa lisäämällä kondensoivaa ainetta, kuten 1,3-diklooriheksyylikarbodi-imidiä 20 (DCC) tai l-etyyli-3-(3'-dietyyliaminopropyyli)karbodi-imidiä (WSCI). Käytettäessä asyloivaa ainetta on sopiva määrä asyloivaa ainetta 1 mooli tai enemmän, edulli-

• I

'·'·* sesti 1-2 moolia 1 moolia kohti lähtöainetta (I-c). Tämä reaktio suoritetaan taval- lisesti liuottimessa. Liuottimia, joita voidaan käyttää reaktiossa, ovat esimerkiksi or- • · : gaaniset liuottimet, kuten pyridiini, Ν,Ν-dimetyyliformamidi, dikloorimetaani, klo- {’V 25 roformi, asetonitriili ja tetrahydrofuraani. On suotavaa suorittaa reaktio orgaanisen ·:* emäksen, kuten pyridiinin tai trietyyliamiinin, tai epäorgaanisen emäksen, kuten ka- liumkarbonaatin tai natriumvetykarbonaatin läsnäollessa. Reaktiolämpötila on alu- eella 0 °C:sta käytetyn liuottimen kiehumispisteeseen, ja erityisen edullista on toi- .···. mia huoneenlämpötilan vaiheilla. Käytettäessä kondensoivaa ainetta on sopivaa • · 30 suorittaa reaktio käyttäen karboksyylihappoa ja kondensoivaa ainetta kumpaakin määrä 1 mooli 1 moolia kohti lähtöyhdistettä (I-c), edullisesti kumpaakin ekvimo- • · : laarinen määrä lähtöaineen määrään nähden. Kun tässä reaktiossa käytetään lisäai- L,.: netta, kuten N-hydroksisukkiini-imidiä tai N-hydroksibentsotriatsolia, reaktio tapah- .·! : tuu tasaisesti ja myöskin saanto kasvaa. Tämä reaktio suoritetaan tavallisesti liuot- • «· 35 timessa. Liuottimia, joita voidaan käyttää reaktiossa, ovat esimerkiksi orgaaniset • «« • · 10 105399 liuottimet, kuten Ν,Ν-dimetyyliformamidi, asetonitriili ja tetrahydrofuraani. On mahdollista suorittaa reaktio vedessä, kun käytetään WSCI:tä. Reaktiolämpötila on alueella 0 °C - käytetyn liuottimen kiehumispiste, ja erityisen edullista on toimia huoneenlämpötilan vaiheilla.

5 Näiden reaktioiden voidaan antaa tapahtua yleensä 2-24 tuntia edellä kuvatuissa kahdessa reaktiotilanteessa.

Kaavan (I-d) mukaisen karboksimidiamidin eristys ja puhdistus reaktioliuoksesta, joka on saatu edellä olevassa reaktiossa, voidaan suorittaa samalla menetelmällä kuin kuvattiin kohdassa kaavan (III) mukaisen pyridiinikarboksimidaatin eristys ja 10 puhdistus.

Näin valmistettu N-syanopyridiinikarboksimidiamidi (I-d) voidaan muuttaa happo-additiosuolaksi antamalla reagoida hapon kanssa. Hapot, joita voidaan käyttää reaktiossa, ovat samoja, joita edellä kuvattiin.

Kuten edellä on kuvattu, ovat tämän keksinnön mukaiset pyridiinikarboksimidiami-15 diyhdisteet uusia yhdisteitä, joilla on voimakas verisuonia laajentava vaikutus, tarkemmin verenpainetta alentava vaikutus tai antianginaalinen vaikutus. Tämän keksinnön mukaisia pyridiinikarboksimidiamidiyhdisteitä voidaan antaa verenpainetta alentavina tai antianginaalisina aineina oraalisesti, parenteraalisesti (lihaksen sisään, ihon alle, suonen sisään, ihon kautta) tai kielen alle pantavan tabletin tai peräpuikon 20 muodossa.

Kuten jäljessä olevissa kokeellisissa esimerkeissä kuvataan, määritettiin erityisesti 5-amino-N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-3-pyridiinikarboksimidiamidin ve- ··· : renpainetta alentava vaikutus ajan kuluessa, ja tulokseksi saatiin, että vaikutus oli ••X äärettömän voimakas ja kestävä. 5-amino-N-syano-N,-(2-nitroksietyyli)-3-pyridiini- • · “X 25 karboksimidiamidin verenpainetta alentava vaikutus eli koronaarisuonia laajentava ·*;*. vaikutus määritettiin myös ajan kuluessa, ja sen havaittiin olevan huomattavan voi- • · · *·' ’ makas ja kestävä. Voidaan sanoa, että nämä yhdisteiden edulliset ominaisuudet ovat olleet odottamattomia tämän keksinnön tekijöille.

• V

• · * · ·

Kokeelliset esimerkit • · · 30 Tätä keksintöä kuvataan edelleen yksityiskohtaisesti viitaten farmakologisiin ko-keisiin ja esimerkkeihin jäljessä, mutta niitä ei tulisi pitää sellaisina, että keksintö rajoittuu niihin.

• M • · • · * ♦ · • · · • · 11 105399 (1) Kun R3 kaavassa (I) on 2-kloorifenyyliryhmä tai fenyyliryhmä:

Farmakologinen koe 1: Verenpainetta alentava vaikutus spontaanisti korkeaveren-paineiseen rottaan (suonensisäisesti) Tämän keksinnön verenpainetta alentavia vaikutuksia tutkittiin urospuolisilla spon-5 taanisti korkeaverenpaineisilla rotilla (SHR).

Eläimet nukutettiin metaanilla: a-kloraloosi.

Kanyyli upotettiin yhteiseen päänvaltimoon mittaamaan keskimääräistä verenpainetta paineanturin avulla. Koeyhdistettä annettiin kumulatiivisesti 30 minuutin välein kanyylin kautta, joka oli asennettu reisilaskimoon. Verenpaineen vaihtelut määritet-10 tiin prosenttisena muutoksena verenpaineessa ennen koeyhdisteen antamista, ja ED2o (annos, joka alensi verenpainetta 20 %) laskettiin annos-vastekäyrältä.

Tulokset Tämän keksinnön yhdisteiden joukossa olevien edustavien yhdisteiden ED2o-arvot on esitetty taulukossa 1.

15 Taulukko 1

Yhdiste nro ED20 (ug/kg, i.v.) i_KL_ 3_33,3__ ’.0 4_4,6 5__1^3_ i 7 7,9 :*··; 12 28,0 * « · · • · · · • · « • · ·

Farmakologinen koe 2: 5-amino-N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)-etyyli]-3-pyridiini-karboksimidiamidin (N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-5-(3 -aminopyridiini)-karboksimidiamidin; yhdiste nro 4) verenpainetta alentava vaikutus beagle-koiriin.

»M

’ » « « « _ 20 Tämän keksinnön mukaisen 5-amino-N-syano-N'-[2-(2-ldoorifenyyli)-etyyli]-3-py- I · * : #: ridiinikarboksimidiamidin (N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-5-(3-aminopyri- :···* diini)karboksimidiamidin; yhdisteen nro 4) verenpainetta alentavat vaikutukset vah- vistettiin vertaamalla niitä N-syano-N,-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-3-pyridiinikar- » * .•.fj boksimidiamidin vastaavien ominaisuuksien kanssa, jota yhdistettä pidetään hyvin • * 12 105399 tunnettuna yhdisteenä, joka on lähes samanlainen kuin tämän keksinnön yhdiste (ks. japanilainen nähtäväksipantu patenttijulkaisu nro 163061/1991).

Kokeet suoritettiin beagle-koirilla (paino 9,2-10,4 kg) nukutuksessa, joka oli saatu aikaan antamalla suonen sisään 30 mg/kg pentobarbitaalinatriumia. Kanyyli upotet-5 tiin oikeaan reisivaltimoon mittaamaan verenpainetta. Koeyhdistettä annettiin kanyylin kautta, joka oli asennettu oikeaan reisivaltimoon.

Tulokset

Annoksesta riippuvainen lasku verenpaineessa havaittiin annettaessa suonensisäisesti 3-30 pg/kg 5-amino-N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-3-pyridiinikarboks-10 imidiamidia. Verenpainetta alentavan vaikutuksen kesto oli 10, 45 ja 60 minuuttia annoksilla 3, 10 ja 30 pg/kg, vastaavasti. Koska havaittiin verenpaineen lasku annettaessa 10 ja 30 pg/kg N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)-etyyli]-3-pyridiinikarboksimi-diamidia, molempien annosten aiheuttama verenpaineen lasku rekisteröitiin 10 minuutin kuluessa antamisen jälkeen (kuten taulukossa 2 on esitetty).

15 Taulukko 2

Suonensisäisesti annetun 5-amino-N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-3-pyridii-nikarboksimidiamidin verenpainetta alentavat vaikutukset

Verenpainetta alentava vaikutus ( %)__ 5-amino-N-syano-N'-[2-(2-kIoorifenyyli)etyyli]- N-syano-N,-[2-(2-kloorifenyyli)-3-pyridiinikarboksimidiamidi etyyli]-3-pyridiinikarboksimidiami- __ di I » * — 1 I —i !.'.f Aika annostuksen Annos (pg/kg) Annos (pg/kg) jälkeen (min)______ j:’: _3 Ί10 130 3 110 130 rl·! o_ο,ο ο,ο o,o ο,ο o,o_o2o_ :· J_-3,9 -16,0 -29,3 0,0_-23,4 -41,7 2__-12,8 -22,7 -40,0 1,9 -17,7 -39,8 :T: 3__-10,3 -26,7 -42,7 1,9_-13,1 -33,3 5__-6,4 -26,7 -46,7__-4,7 -16,7 7^8_-3,9 -26,7 -44,0___-2,8 10_-3,9 -20,0 -42,7___-0,9 J_5__-16,0 -40,0___ 20__-13,3 -36,0____ i.i : 30__-6,7 -33,3______ 45__ -24,0

• | « — — —-— ' I- —I -*ti ---- . — i ... I

60 -16,0

• « · “—M

• f · * · • · « « · • · « • « 13 105399

Farmakologinen koe 3: 5-amino-N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyH)-etyyli]-3-pyri-diinikarboksimidiamidin (N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-5-(3-aminopyri-diini)karboksimidiamidin) verenpainetta alentavat vaikutukset munuaisten lii-kapainetta sairastaviin beagle-koiriin 5 Beaglet (paino 9,0-11,0 kg) nukutettiin 30 mg/kg:lla pentobarbitaalinatriumia suonensisäisesti. Vasen munuaisvaltimo paljastettiin varovaisesti avaamalla kylki, ommeltiin kahdella silkkiompeleella ja siihen kiinnitettiin 18G:n neula (ulkohalkaisija 1,2 mm) kahteen kohtaan 5 mm:n etäisyydelle toisistaan. Reisivaltimoon upotettiin polyetyleeniputki verenpaineen mittaamiseen (IMG, PE-100), ja putken toinen pää 10 suunnattiin niskan taakse. Polyetyleeniputki täytettiin fysiologisella suolaliuoksella, joka sisälsi 500 U/ml hepariinia, ja suljettiin teräslankatulpalla paitsi verenpainetta mitattaessa. Antibiootteja (penisilliiniä ja streptomysiiniä, valmistaja Meiji Seika) annettiin lihaksen sisään kolme päivää leikkauksen jälkeen infektioiden estämiseksi.

Beaglet, joiden keskimääräinen verenpaine ylitti 120 mmHg kuukauden kuluttua 15 leikkauksesta, otettiin kokeeseen koiriksi, joilla oli 2-munuaista-l-leikattu korkea munuaispaine (2-kidney-l-clipped renal hypertensive).

Kun 5-amino-N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-3-pyridiini-karboksimidiami-dia oli pantu gelatiinikapseliin No. 3, reikä täytettiin laktoosilla (100 meshiä). Kapseli annettiin oraalisesti, ja verenpainetta mitattiin 24 tuntia lääkkeen antamisen jäl-20 keen. Mittaus suoritettiin ilman nukutusta kannattamalla hihnahuovalla. Verenpaine mitattiin kiinnittämällä verenpaineen mittaamiseen tarkoitettu putki paineanturiin v, (TP-400T; valmistanut Nihon Kohden) ja rekisteröitiin piirturilla.

I I <

« I

* ...1 Tulokset • · I « · *·♦ ! *,·,·. Peräkkäinen verenpaineen lasku havaittiin annettaessa oraalisesti 0,25 ja 0,5 mg/kg *\|t 25 keksinnön mukaista 5-amino-N-syano-N,-[2-(2-kloorifenyyli)-etyyli]-3-pyridiinikar- boksimidiamidia (ks. taulukko 3).

• · · ' I * I t

Ml • · • ·

• M

l»l ' 9 · 9 9 9 9 • « » • · * f » »

Ml · m 9 » 9 · • *

• IV V

• ·

V i I

• V · • m 9 9 9 · · • · · •

Taulukko 3 105399 14 5-amino-N-syano-N,-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-3-pyridiinikarboksimidiamidin (N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)-etyyli]-5-(3-aminopyridiini)karboksimidiamidin) vaikutus korkean munuaispaineen omaaviin beaglekoiriin

Aika antamisen jälkeen Keskimääräinen verenpaine (mmHg) (tuntia) Annos (mg/kg p.o.) _____ 0,25__0j50_ 0____122,4 ±4,4 126,6 + 0,5_ _1_ 100,9 ± 7,4_68,1 ±7,4_ 2_85,7 ± 0,3_ 84,8 ±6,1_ 4_102,8 ± 3,9_99,7 ± 12,3_ 6_ 110,1 ±2,6_ 106,2 ± 9,5_ 8_ 112,6 ±3,4 114,4 ±7,3_ 24 1118,8 ±4,8 111,8 ±3,9 5

Farmakologinen koe 4: Verenpainetta alentavan vaikutuksen muutos ajan kuluessa SHR:ssä

Tutkittiin 5-amino-N-syano-N'-(2-fenetyyli)pyridiinikarboksimidiamidin (yhdiste nro 12) verenpainetta alentavaa vaikutusta ajan kuluessa.

« 4 I I i · ,, 10 (1) Koemenetelmä

t « f I I

: Yhdisteen verenpainetta alentava vaikutus havaittiin tajuissaan olevissa urospuoli- * · · j.V sissa spontaanisti korkeaverenpaineisissa rotissa (SHR). Systolinen verenpaine *:* (SBP) mitattiin häntätyynymenetelmällä.

• · · • · · » · ·

Yhdiste nro 12 liuotettiin ekvivalenttiseen seokseen polyetyleeniglykolia 200 ja fy-15 siologista keittosuolaliuosta, ja annettiin oraalisesti suusondin avulla. SBP mitattiin '···' ennen lääkkeen antoa ja 1, 2, 4, 6, 8, 12 ja 24 yhdisteen antamisen jälkeen. Tulokset ‘: ilmaistiin prosenttisena muutoksena ennen antoa havaitussa SBP:ssä.

i • · • · · (2) Tulokset « « • · t : Verenpaineen lasku havaittiin sen jälkeen, kun oli annettu 3,0 mg/kg yhdistettä (12), 20 ja verenpainetta alentava vaikutus kesti 12 tuntia tai enemmän (ks. taulukko 4).

I M » 105359 15

Taulukko 4 5-amino-N-syano-N,-(2-fenetyyli)pyridiinikarboksimidiaiiiidin (yhdiste nro 12) verenpainetta alentava vaikutus SHR.ssä (Tiedot on ilmaistu prosenttisena muutoksena ennen lääkkeen antoa havaitussa 5 SBP:ssä)

Yhdiste nr__Aika ääkkeen antamisen jälkeen (tuntia) _ __1__2__4__6__8 12 24 12 -45,3 -23,9 -42,3 -27,9 -22,8 -15,1 -8,2

Farmakologinen koe 5: Akuutti toksisuus Tämän keksinnön mukaisen 5-amino-N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-3-pyri-diinikarboksimidiamidin (yhdiste nro 4) akuutti toksisuus oraalisesti annettaessa 10 tutkittiin urospuolisilla SD-rotilla (5 viikon ikäisiä). Tuloksena kokeesta ei yksikään rotta kuollut annoksella 50 mg/kg. LD50 oli alueella yli 50 mg/kg.

Esimerkki 1 3-syano-5-hydroksimetyylipyridiinin valmistus 3-syano-5-hydroksimetyylipyridiini on hyvin tunnettu yhdiste, ja voidaan valmistaa ' ·' ·' 15 menetelmällä, joka on kuvattu US-patentissa 5 002 949.

«* f : ; N-syano-N'-[2-(2-kIoorifenyyli)etyyli]-5-hydroksimetyyli-3-pyridiinikarboksimi- • « ♦ i diamidin synteesi • * « *

Kun 3-syano-5-hydroksimetyylipyridiini (0,79 g, 5,9 mmol) oli liuotettu 1-propano- • · · v : liin (30 ml) ja liuokseen oli kuljetettu vetykloridikaasua jäillä jäähdyttäen 30 mi- 20 nuuttia, reaktori suljettiin tiiviisti seoksen sekoittamiseksi huoneenlämmössä 20 tun- tia. Kun reaktio oli tapahtunut, reaktioseos konsentroitiin alipaineessa, ja jäännös ·”*: neutraloitiin kyllästetyllä natriumkarbonaattiliuoksella ja uutettiin kloroformilla M· . \ (30 ml x 3). Kloroformikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja kon- ·;·/· sentroitiin alipaineessa. Jäännös liuotettiin asetonitriiliin (20 ml), ja liuokseen lisät- '···' 25 tiin vesiliuos (30 ml), jossa oli syanamidia (0,50 g, 11,9 mmol), Na2HP04 (0,84 g, 5,9 mmol) ja NaH2P04.2H20 (3,79 g, 23,7 mmol). Seosta sekoitettiin huoneen- ·/·.· lämmössä 10 tuntia. Kun reaktio oli tapahtunut, seos uutettiin kloroformilla (100 ml • · x 3). Kloroformikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin 16 105399 alipaineessa, jolloin saatiin epäpuhdas tuote, joka oli propyyli-N-syano-5-hydroksi-metyyli-3-pyridiinikarboksimidaattia.

Epäpuhdas tuote liuotettiin sitten metanoliin (10 ml), ja seokseen lisättiin 2-(2-kloo-rifenyyli)etyyliamiinia (0,5 g, 3,2 mmol). Saatua seosta sekoitettiin huoneenläm-5 mössä 3 tuntia. Kun reaktio oli tapahtunut, seos konsentroitiin alipaineessa, ja saatu jäännös puhdistettiin silikageeliohutkerroskromatografialla (Merck, No. 5744; kehitys kloroformi:metanoliseoksella = 10:1), ja kiteytettiin edelleen metanoli/dietyyli-eetteriseoksesta, jolloin saatiin otsikon yhdiste (0,12 g, 0,38 mmol) värittömänä jauheena (saanto lähtien 3-syano-5-hydroksimetyylipyridiinistä 6 %).

10 IR (KBr) cm1: 3350, 2200, 1580.

FD-MS m/z 314 (M, Ci6H15N4OCI).

Ή-NMR (90 MHz, CDC13): δ (ppm) 8,72 (1H, brs, H-6), 8,68 (1H, brs, H-2), 7,99 (1H, m, H-4), 7,4-7,2 (4H, QH4CI), 6,82 (1H, brs, NH), 4,78 (2H, CH2OH), 3,82 (2H, m, NHCH2CH2C6H4C1), 3,12 15 (2H, t, NHCH2CH2C6H4CI).

Esimerkki 2 5-karboksimetoksi-3-syanopyridiinin valmistus 3-syano-5-etynyylipyridiini (1,28 g) liuotettiin asetoniin (20 ml), ja lisättiin pisaroit-20 tain kaliumpermanganaatin (350 mg) vesiliuosta (40 ml). Kun lisäys oli suoritettu, reaktioseos kuumennettiin 100 °C:een ja suodatettiin. Suodos konsentroitiin alipai-neessa, ja jäännös liuotettiin DMF:ään (20 ml). Liuokseen lisättiin kaliumkarbo- • · : naattia (1,6 g) ja dimetyylisulfaattia (1 ml), ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä LV 10 minuuttia. Reaktioseokseen lisättiin vettä (10 ml), ja saatu seos uutettiin dietyyli- 25 eetterillä (30 ml x 3). Dietyylieetterikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatil-la, konsentroitiin alipaineessa ja puhdistettiin silikageelipylväskromatografialla (Wako Gel C-200, 10 g; eluointi heksaani:dietyylieetteri-seoksella = 1:1), jolloin .···. saatiin 5-karbometoksi-3-syanopyridiiniä (670 mg; saanto 41 %) värittömänä kiin- teänä aineena.

• · M· :30 IR (KBr) cm11: 2210, 1730.

• · ·

Ml • m • · · • · • · · • · 1 « · · • · · • · · • · 17 105399 5-karboksi-N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-3-pyridiini-karboksiniidiami-din synteesi

Kun 3-karbometoksi-5-syanopyridiini (1,2 g, 7,4 mmol) oli liuotettu 1-propanoliin (40 ml) ja vetykloridikaasua oli kuljetettu liuokseen jäillä jäähdyttäen 20 minuuttia, 5 reaktori suljettiin tiiviisti seoksen sekoittamiseksi 0 °C:ssa 22 tuntia. Kun reaktio oli tapahtunut, reaktioseos konsentroitiin alipaineessa, ja näin saatu jäännös neutraloitiin kyllästetyllä natriumkarbonaattiliuoksella ja uutettiin kloroformilla (50 ml x 3). Kloroformikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla sen jälkeen, kun se oli pesty kyllästetyllä suolaliuoksella, ja konsentroitiin alipaineessa. Jäännös liuotettiin 10 asetonitriiliin (3 ml), ja liuokseen lisättiin vesiliuos (16,5 ml), jossa oli syanamidia (682 mg, 16,2 mmol), Na2HP04 (1,15 g, 8,1 mmol) ja NaH2P04 · 2H20 (5,07 g, 32,5 mmol). Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 18 tuntia ja uutettiin kloroformilla (50 ml x 3). Kloroformikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja kon-sentrotiin alipaineessa. Jäännös puhdistettiin silikageelipylväskromatografialla 15 (Wako Gel C-200, 40 g; eluointi heksaani:etyyliasetaatti-seoksella = 3:1), jolloin saatiin 1,39 g (0,56 mmol) propyyli-N-syano-5-(3-karbometoksipyridiini)karboks-imidaattia (saanto 76 %).

IR (KBr) cm’1: 2960, 2180, 1730, 1610, 1280.

FD-MS m/z 247 (M, Ci2H13N303).

20 ‘H-NMR (500 MHz, CDC13): δ (ppm) 9,41 (1H, d, J=l,8 Hz, H-6), 9,39 (1H, d, J=l,8 Hz, H-2), 8,94 (1H, t, J=l,8 Hz, H-. V: 4), 4,48 (2H, t, J=6,4 Hz, OCH2CH2CH3), 4,01 (3H, s, COOCH3) 1,91 (2H, m, : OCH2CH2CH3), 1,08 (3H, t, J=7,6 Hz, OCH2CH2CH3).

• · · ··’·1. 25 Propyyli-N-syano-5-(3-karbometoksipyridiini)karboksimidaattiin (448 mg, • · 1,81 mmol) lisättiin, kun se ensin oli liuotettu metanoliin (10 ml), 2-(2-kloori-fenyyli)etyyliamiinia (340 mg, 2,19 mmol), ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä • « · *·’ ’ 105 minuuttia. Kun reaktio oli tapahtunut, lisättiin reaktioseokseen eetteriä (30 ml), ja valkoinen sakka kerättiin suodattamalla ja liuotettiin metanoliin (30 ml). Lisättiin 30 40 % natriumhydroksidin vesiliuos (2 ml), ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä • 1 · 16 tuntia. Reaktioseos neutraloitiin happamalla ioninvaihtohartsilla Dowex 50W x : 8(H+). Hartsi poistettiin suodattamalla, ja suodos konsentroitiin alipaineessa, jolloin * · · · ’ saatiin otsikon yhdiste (509 mg, saanto 86 %) värittömänä jauheena.

• · · • 1 · « 1 1 • » • · • «« 18 105399 IR(KBr) cm'1: 3220, 2160, 1590, 1435, 1380, 750.

'H-NMR (90 MHz, CDCI3): δ (ppm) 9,62 (1H, m, NH), 9,16 (1H, d, J=l,76 Hz, H-2), 8,75 (1H, d, J=2,19 Hz, H-6), 7,40 (1H, dd, J=l,76, 2,19 Hz, H-4), 7,2-7,2 (4H, QH^Cl), 3,70 (2H, m, 5 NHCH2CH2C6H4C1), 3,07 (2H, t, J=6,82 Hz, NHCH2CH2C6H4C1).

Esimerkki 3 6-amino-3-syanopyridiinin valmistus 6-amino-3-syanopyridiini on hyvin tunnettu yhdiste ja voidaan valmistaa menetel-10 millä, joita on kuvattu esimerkiksi julkaisuissa Heterocycles, 22, 1, 117-124 (1984); tai Journal of Heterocyclic Chemistry, J4, 3, 397-399 (1974).

6-amino-N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-3-pyridiinikarboksimidiamidin (N-syano-N*-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-5-(2-aminopyridiini)karboksimidiami-din) synteesi 15 Kun 6-amino-3-syanopyridiini (1,0 g, 8,4 mmol) oli liuotettu 1-propanoliin (50 ml) ja vetykloridikaasua oli kuljetettu liuokseen lämpötilassa 0-10 °C 30 minuuttia, reaktori suljettiin tiiviisti seoksen sekoittamiseksi 0 °C:ssa 21 tuntia. Kun reaktio oli tapahtunut, reaktioseos konsentroitiin alipaineessa, ja kyllästettyä natriumvetykar-bonaattiliuosta (50 ml) lisättiin konsentroituun seokseen pH:n säätämiseksi emäksi-20 seksi. Seos uutettiin kloroformilla (50 ml x 3). Kloroformikerros kuivattiin ve- ’ <: ' dettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin alipaineessa, jolloin saatiin epäpuhdas « · · :: tuote, joka oli propyyli-6-amino-3-pyridiinikarboksimidaattia (1,56 g).

I I * • · · :·!·. Epäpuhdas tuote liuotettiin sitten seokseen, jossa oli asetonitriiliä (6 ml) ja DMF:ää • · (2 ml), ja liuokseen lisättiin vesiliuos (20 ml), jossa oli NaH2P04.2 H20 (5,24 g, ”.Y.' 25 33,6 mmol), Na2HP04 (1,19 g, 8,38 mmol) ja syanamidia (706 mg, 16,8 mmol). Se- ’ osta sekoitettiin huoneenlämmössä 18 tuntia. Kun reaktio oli tapahtunut, saostunut väritön jauhe kerättiin talteen suodattamalla ja pestiin vedellä, jolloin saatiin pro-pyyli-N-syano-6-amino-3-pyridiinikarboksimidaattia (1,45 g, saanto 85 %).

• ♦ · • « a

Sp. 150 °C

• « · · 30 IR (ΚΒγ) cm*1: 3380, 2180, 1650, 1580, 1295.

; ‘H-NMR (500 MHz, CDC13): δ (ppm) · f • · 0 « • · · ( M • · 19 105399 8,74 (1H, d, J=2,4 Hz, H-6), 8,04 (1H, dd, J=2,4, 9,2 Hz, H-4), 7,20 (1H, brs, NH2), 6,53 (1H, dl J=9,2 Hz, H-3), 4,27 (2H, t, J=6,7 Hz, OCH2CH2CH3), 1,75 (2H, m, OCH2CH2CH3), 0,97 (3H, t, J=7,3 Hz, OCH2CH2CH3).

Propyyli-N-syano-6-amino-3-pyridiinikarboksimidaatti (200 mg, 0,98 mmol) ja 2-5 (2-kloorifenyyli)etyyliamiini (170 mg, 1,09 mmol) liuotettiin metanolin (10 ml) ja DMF.n (1,5 ml) seokseen, ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 2,5 tuntia. Reak-tioseos konsentroitiin alipaineessa ja sille suoritettiin silikageelipylväskromatografia (Wako Gel C-200, 25 g), ja eluointi suoritettiin kloroformi:metanoliseoksella (30:1), jolloin saatiin otsikon yhdiste (250 mg, saanto 85 %) värittömänä jauheena.

10 Sp. 222 °C

IR (KBr) cm’1: 3220, 2160, 1570, 740.

Ή-NMR (90 MHz, CDC13): δ (ppm) 8,91 (1H, brs, NH), 8,13 (1H, d, J=2,5 Hz, H-6), 7,60 (1H, dd, J=2,5, 8,6 Hz, H-4), 7,45-7,2 (4H, CöHtCl), 6,60 (2H, brs, NH2), 6,48 (1H, d, J=8,6 Hz, H-3), 3,56 (2H, 15 m, NHCH2CH2C6H4C1), 3,02 (2H, t, J=7,0 Hz, NHCH2CH2C6H4C1).

Esimerkki 4 5-amino-3-syanopyridiinin valmistus 5-amino-3-syanopyridiini on hyvin tunnettu yhdiste ja voidaan valmistaa menetel-•. ·. millä, joita on kuvattu esimerkiksi julkaisussa Journal of Medicinal Chemistry, JO, Ϊ.:’ 20 2,149-154(1967).

« 4 « ·.: : 5-amino-N-syano-N,-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-3-pyridiinikarboksimidiamidin (N-syano-N'-[2-(2-kIoorifenyyli)etyyli]-5-(3-aminopyridiini)karboksimidiami-·· din) synteesi

• •M

·♦· • * *

Kun 5-amino-3-syanopyridiini (380 mg, 3,19 mmol) oli liuotettu 1-propanoliin 25 (15 ml) ja vetykloridikaasua oli kuljetettu liuokseen lämpötilassa 0-5 °C 15 minuut- tia, reaktori suljettiin tiiviisti seoksen sekoittamiseksi huoneenlämmössä 22 tuntia.

• · ·

Kun reaktio oli tapahtunut, liuotin haihdutettiin pois alipaineessa, ja kyllästetty nat-: .·. riumvetykarbonaatin vesiliuos (50 ml) lisättiin konsentroituun seokseen pH:n sää- ’···. tämiseksi emäksiseksi. Seos uutettiin kloroformilla (50 ml x 3). Kloroformikerros t * m 30 kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, konsentroitiin alipaineessa ja sille suori- :. ’i tettiin silikageelipylväskromatografia (Wako Gel C-200, 25 g), ja eluointi suoritet- • · * • · · 20 105399 tiin kloroformi:metanoliseoksella (8:1), jolloin saatiin propyyli-5-amino-3-pyridiini-karboksimidaatti (526 mg, saanto 92 %) värittömänä öljynä.

IR (pelkkänä) cm*1: 3330, 3200, 1630, 1590, 1080.

lH-NMR (90 MHz, CDC13): δ (ppm) 5 8,37 (1H, brs, H-2), 8,14 (1H, d, J=2,6 Hz, H-6), 7,31 (1H, m, H-4), 4,18 (2H, t, J=6,6 Hz, OCH2CH2CH3), 1,77 (2H, m, OCH2CH2CH3), 1,03 (3H, t, J=7,0 Hz, OCH2CH2CH3).

Propyyli-5-amino-3-pyridiinikarboksimidaatti (110 mg, 0,6 mmol) liuotettiin sitten asetonitriiliin (1 ml), lisättiin vesiliuos (2 ml), jossa oli NaH2P04.2 H20 (375 mg, 10 2,4 mmol), Na2HPC>4 (85 mg, 0,6 mmol) ja NH2CN (50 mg, 1,2 mmol). Seosta se koitettiin huoneenlämmössä 19 tuntia. Kun reaktio oli tapahtunut, reaktioseos uutettiin kloroformilla (20 ml x 3), ja kloroformikerros kuivattiin vedettömällä nat-riumsulfaatilla ja konsentroitiin alipaineessa, jolloin saatiin epäpuhdas öljy, joka oli propyyli-5-amino-N-syano-3-pyridiinikarboksimidaatti (100 mg, saanto 82 %).

15 IR (pelkkänä) cm*1: 3350, 2200, 1610, 1320, 760.

^-NMR (90 MHz, CDC13): δ (ppm) 8,51 (1H, d, J=2,0 Hz, H-2), 8,27 (1H, d, J=2,6 Hz, H-6), 7,72 (1H, dd, J=2,0, 2,6 Hz, H-4), 4,39 (2H, t, J=6,6 Hz, OCH2CH2CH3), 4,12 (2H, brs, NH2), 1,83 (2H, m, OCH2CH2CH3), 1,05 (3H, t, J=7,7 Hz, OCH2CH2CH3).

« * < «

( I I

20 Liuokseen, jossa oli propyyli-5-amino-N-syano-3-pyridiinikarboksimidaattia c t (100 mg, 0,49 mmol) metanolissa (1 ml), lisättiin 2-(2-kloorifenyyli)etyyliamiinia (155 mg, 1,0 mmol), ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 20 tuntia. Kun reaktio • · · ·· ·* oli tapahtunut, reaktioseos konsentroitiin alipaineessa, ja jäännös kiteytettiin dietyy- lieetteri/etyyliasetaattiseoksesta, jolloin saatiin otsikon yhdiste (100 mg, 0,33 mmol, ··· : 25 saanto 68 %) värittöminä kiteinä.

Sp. 184 °C

• · • · · IR (pelkkänä) cm1: 3200, 2170, 1570.

• * :i FD-MS m/z 299 (M, C15H14N5C1).

'H-NMR (90 MHz, CDC13): δ (ppm) ;·*.· 30 8,08 (1H, d, J=2,6 Hz, H-6), 7,83 (1H, brs, H-2), 7,57,2 (5H, H-4, QHjCl), 3,73 ;:.j (2H, t, J=7,3 Hz, NHCH2CH2C6H4C1), 3,13 (2H, t, J=7,3 Hz, NHCH2CH2QH4CI).

• · 21 105399

Esimerkki 5 5-asetamidi-N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyIi)etyyIi]-3-pyridiinikarboksimidiami-din (N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyIi)etyyli]-5-[3-(N-asetyyIiamino)pyridiini]kar-boksimidiamidin) synteesi 5 Liuokseen, jossa oli 5-amino-N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)-etyyli]-3-pyridiinikar-boksimidiamidia (100 mg, 0,33 mmol) pyridiinissä (1 ml), lisättiin etikkahappoan-hydridiä (20 mg, 0,34 mmol), ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 5,5 tuntia. Kun reaktio oli tapahtunut, reaktioseos kaadettiin jääveteen, ja syntynyt sakka kerättiin suodattamalla, pestiin kylmällä vedellä ja kiteytettiin metanoli/dietyylieetteri-10 seoksesta, jolloin saatiin otsikon yhdiste (86 mg, saanto 75 %) värittömänä öljynä.

Sp. 230 °C.

IR (KBr) cm'1: 3230, 2160, 1700, 1580, 720.

FD-MS m/z 341 (M, Ci7Hi6NSOC1) !H-NMR (90 MHz, CDC13): 5 (ppm) 15 10,43 (1H, brs, NHCOCH3), 9,41 (1H, brs, NH), 8,87 (1H, d, J=2,4 Hz, H-6), 8,33 (1H, d, J=2,0 Hz, H-2), 8,24 (1H, dd, J=2,0, 2,4 Hz, H-4), 7,5-7,-3 (4H, C6H4C1), 3,63 (2H, m, NHCH2CH2C6H4C1), 3,08 (2H, t, J=3,2 Hz, NHCH2CH2C6H4C1), 2,12 (3H, s, NHCOCH3).

Esimerkki 6 « I · lit 20 3-syano-5-dimetyyliaminopyridiinin valmistus

f I

«ti i :': Liuokseen, jossa oli 5-amino-3-syanopyridiiniä (0,50 g, 4,20 mmol) DMF.ssä (5 ml), lisättiin NaH (60 % öljyssä) (0,37 g, 9,26 mmol) jäillä jäähdyttäen, ja seosta sekoitettiin 20 minuuttia. Metyylijodidia (0,58 ml, 9,31 mmol) DMF:ssä (2 ml) li-sättiin pisaroittain jäillä jäähdyttäen. Seosta sekoitettiin 2 tuntia samalla kun läm-25 pötilan annettiin nousta huoneenlämpöön. Jäitä lisättiin reaktioseokseen, ja seos ...t uutettiin dietyylieetterillä (30 ml x 3). Dietyylieetterikerros pestiin kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin alipai- • · neessa. Näin saatu jäännös puhdistettiin silikageelipylväskromatografialla (Wako i Gel C-200, 20 g; eluointi kloroformi:metanoliseoksella = 200:1), jolloin saatiin 3- 30 syano-5-dimetyyliaminopyridiini (145 mg, saanto 23 %).

• » * m

V·: Sp. 104 °C

• · • · · • · • · 22 105399 IR (KBr) cm'1: 2230, 1595, 1450, 1375, 1235, 695.

•H-NMR (90 MHz, CDC13): δ (ppm) 8,28 (1H, d, J=3,l Hz, H-6), 8,18 (1H, d, J=l,5 Hz, H-2), 7,09 (1H, dd, J=l,5, 3,1 Hz, H-4), 3,03 (6H, s, N(CH3)2).

5 N-syano-N'-[2-(2-kloonfcnyyli)etyylil-5-dimetyyliamino-3-pyridiinikarboksimi-diamidin synteesi

Liuokseen, jossa oli 3 syano-5-dimetyyliaminopyridiiniä (140 mg, 0,95 mmol) 1-propanolissa (15 ml), kuljetettiin vetykloridikaasua jäillä jäähdyttäen 30 minuuttia. Reaktori suljettiin tiiviisti, ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 20 tuntia. Kun 10 reaktio oli tapahtunut, reaktioseos konsentroitiin alipaineessa, ja jäännös neutraloitiin natriumkarbonaatilla ja uutettiin kloroformilla (50 ml x 3). Kloroformikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin alipaineessa. Jäännös liuotettiin asetonitriiliin (5 ml) ja liuokseen lisättiin vesiliuos (10 ml), jossa oli sy-anamidia (80 mg, 1,9 mmol), Na2HP04 (135 mg, 0,95 mmol) ja NaH2P04 · 2H20 15 (593 mg, 3,80 mmol). Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 10 tuntia. Kun reaktio oli tapahtunut, reaktioseos uutettiin kloroformilla (30 ml), ja kloroformikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin alipaineessa, jolloin saatiin vaaleankeltaista siirappia.

Liuokseen, jossa tämä siirappi oli liuotettu metanoliin (10 ml), lisättiin 2-(2-kloori-20 fenyyli)etyyliamiinia (170 mg, 1,09 mmol), ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 4 tuntia. Kim reaktio oli tapahtunut, reaktioseos konsentroitiin alipaineessa, ja jään- < < < nös puhdistettiin silikageelipylväskromatografialla (Wako Gel C-200, 20 g; eluointi kloroformiimetanoliseoksella = 100:1), ja kiteytettiin edelleen metanoli/dietyylieet- K « 1 teriseoksesta, jolloin saatiin otsikon yhdiste (219 mg, 0,67 mmol) saannolla 70 %.

• · · • ·

·:· 25 Sp. 158 °C

····

• M

5-: ; IR (KBr) cm1: 3400, 2160, 1575, 1430.

FD-MS m/z 327 (M, Ci7H18N5C1).

C: 'H-NMR (90 MHz, CDCI3): δ (ppm) \’j 9,25 (1H, brs, NHCH2CH2C6H4C1), 8,26 (1H, d, J=2,9 Hz, H-6), 7,95 (1H, d, J=l,8 : λ 30 Hz, H-2), 7,5-7,2 (4H, C^Cl), 7,11 (1H, dd, J=l, 8, 2 Hz, H-4), 3,63 (2H, m, NHCH2CH2C6H4Cl), 3,05 (2H, m, NHCH2CH2C6H4C1), 2,98 (6H, s, N(CH3)2).

• · « · · · • · · • · · • · • · • · « • · · • · 23 105399

Esimerkki 7 3-syano-5-etyyIiaminopyridiinin valmistus

Liuokseen, jossa oli 5-amino-3-syanopyridiiniä (300 mg, 2,52 mmol) metanolissa (10 ml), lisättiin asetaldehydiä (1,42 ml, 25,1 mmol), ja seosta sekoitettiin huoneen-5 lämmössä 10 minuuttia. Sitten lisättiin natriumsyanoboorihydridiä (950 mg, 15,1 mmol), ja lisättiin vielä etikkahappoa reaktioseoksen pH:n säätämiseksi noin 6:een. Seosta sekoitettiin 5 tuntia. Kun reaktio oli tapahtunut, reaktioseos neutraloitiin natriumkarbonaatin vesiliuoksella ja uutettiin dietyylieetterillä (30 ml x 3). Dietyylieetterikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin ali-10 paineessa. Näin saatu jäännös puhdistettiin silikageelipylväskromatografialla (Wako Gel C-200, 20 g; eluointi kloroformi:metanoliseoksella = 200:1), jolloin saatiin 3-syano-5-etyyliaminopyridiiniä (200 mg, 1,36 mmol, saanto 54 %).

Sp. 110°C.

IR (pelkkänä) cm'1: 2210, 1585, 1450, 1180, 690.

15 'H-NMR (90 MHz, CDC13): δ (ppm) 8,2-8,1 (2H, H-2, H-6), 6,99 (1H, dd, J=l,8, 2,9 Hz, H-4), 4,08 (1H, brs, NH), 3,61 (2H, m, NHCH2CH3), 1,25 (3H, d, J=6,4 Hz, NHCH2CH3).

N-syano-N,-[2-(2-kIoorifenyyli)etyyli]-5-etyyliamino-3-pyridHnikarboksimidi- . . amidin synteesi « « f « 20 Liuokseen, jossa oli 3-syano-5-etyyliaminopyridiiniä (380 mg, 2,59 mmol) 1-propa-; nolissa (40 ml), kuljetettiin vetykloridikaasua jäillä jäähdyttäen 30 minuuttia. Reak- tori suljettiin tiiviisti, ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 20 tuntia ja kon- ·♦ * sentroitiin alipaineessa. Kim jäännös oli neutraloitu kyllästetyllä natriumkarbonaatin *· ··, vesiliuoksella ja uutettu kloroformilla (50 ml x 3), kloroformikerros kuivattiin vedet- • · · 25 tömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin alipaineessa, jolloin saatiin epäpuhdas ... tuote, joka oli propyyli-5-etyyliamino-3-pyridiinikarboksimidaattia. Epäpuhdas tuo- • · te liuotettiin sitten asetonitriiliin (5 ml) ja liuokseen lisättiin vesiliuos (18 ml), jossa ♦··' oli syanamidia (210 mg, 5,0 mmol), Na2HP04 (355 mg, 2,5 mmol) ja NaH2P04 · 2 : H20 (1,56 g, 10 mmol), ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä yön yli. Kun reaktio • · · · .**; 30 oli tapahtunut, reaktioseos uutettiin kloroformilla (30 ml x 3), ja kloroformikerros *»· .* . kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin alipaineessa. Saatu jään- • · · *· *j nös puhdistettiin siliakageelipylväskromatografialla (Wako Gel C-200, 30 g; eluointi • · · • M • · 24 105399 heksaani/etyyliasetaattiseoksella), jolloin saatiin propyyli-N-syano-5-etyyliamino-3-pyridiinikarboksimidaatti (322 mg, 1,38 mmol) värittömänä öljynä (saanto 54 %).

IR (KBr) cm'1: 2960, 2200, 1600, 1460, 1330.

]H-NMR (90 MHz, CDC13): δ (ppm) 5 8,41 (1H, d, J=2,0 Hz, H-6), 8,18 (1H, d, J=2,9 Hz, H-2), 7,61 (1H, dd, J=2,0, 2,9

Hz, H-4), 4,39 (2H, t, J=6,5 Hz, OCH2CH2CH3), 3,95 (1H, brs, NH), 3,22 (2H, m, NHCH2CH3), 1,82 (2H, m, OCH2CH2CH3), 1,31 (3H, t, 1=1,2 Hz, NHCH2CH3), 1,06 (3H, t, J=6,8 Hz, OCH2CH2CH3).

Liuokseen, jossa oli propyyli-N-syano-5-etyyliamino-3-pyridiini-karboksimidaattia 10 (98 mg, 0,42 mmol) metanolissa (3 ml), lisättiin 2-(2-kloorifenyyli)etyyliamiinia (79 mg, 0,51 mmol), ja seosta sekoitettiin 105 minuuttia. Jäännös, joka saatiin konsentroimalla alipaineessa, puhdistettiin silikageelipylväskromatografialla (Wako Gel C-200, 30 g; eluointi kloroformiimetanoliseoksella = 100:1) ja kiteytettiin edelleen dietyylieetteristä, jolloin saatiin otsikon yhdiste (110 mg, 0,34 mmol) värittöminä 15 kiteinä 80 %:n saannolla.

Sp. 168 °C

IR (KBr) cm'1: 3230, 2170, 1560, 1445, 750.

FD-MS m/z 327 (M, Ci7H18N5C1).

‘H-NMR (90 MHz, CDC13): δ (ppm) 20 7,95 (1H, d, J=2,6 Hz, H-6), 7,79 (1H, d, J=l,8 Hz, H2), 7,4-7,0 (5H, H-4,

CeEtCl), 4,35 (1H, brs, NHCH2CH2C6H4C1), 3,76 (2H, m, NHCHjCH^HtCl), ': 3,3-2,9 (4H, NHCH2CH2C6H4C1, NHCH2CH3), 2,88 (1H, brs, CH2CH3), 1,26 (3H, i.:': t, J=7,1 Hz, NHCH2CH3).

• · · • · ·

Esimerkki 8 • • · t ·

• M

v : 25 3-syano-5-isopropyyliaminopyridiinin valmistus .···. Samalla tavalla kuin 3-syano-5-etyyliaminopyridiinin valmistuksessa saatiin 3- • · III syano-5-isopropyyliaminopyridiini.

• « ·

Sp. 82 °C.

♦ · · r • · ♦ I·· *·;·* IR (pelkkänä) cm*1: 2210, 1585, 1450, 1180, 690.

• · • · V ί 30 'H-NMR (90 MHz, CDCI3): δ (ppm) • · · • · 25 105399 8,2-8,1 (2H, H-2, H-6), 6,99 (1H, dd, J=l,8, 2,9 Hz, H-4), 4,08 (1H, brs, NH), 3,61 (1H, m, NHCH(CH3)2), 1,25 (6H, d, J=6,4 Hz, NHCH(CH3)2).

N-syano-N’-l^-^-kloorifenyltyetyylil-S-isopropyyliamino-S-pyridiinikarboksimi- diamidi 5 Liuokseen, jossa oli 3-syano-5-isopropyyliaminopyridiiniä (118 mg, 0,73 mmol) 1-propanolissa (20 ml), kuljetettiin vetykloridikaasua jäillä jäähdyttäen 30 minuuttia. Reaktori suljettiin tiiviisti, ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 17 tuntia. Kun reaktio oli täysin tapahtunut, reaktioseos konsentroitiin alipaineessa, ja jäännös neutraloitiin kyllästetyllä natriumkarbonaatin vesiliuoksella ja uutettiin kloroformil-10 la (50 ml x 3). Kloroformikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin alipaineessa, jolloin saatiin keltainen siirappi. Siirappiin lisättiin sitten vesiliuos (6 ml), jossa oli syanamidia (61 mg, 1,45 mmol), Na2HP04 (104 mg, 0,73 mmol) ja NaH2P04.2H20 (456 mg, 2,92 mmol), ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 22 tuntia. Kun reaktio oli tapahtunut, reaktioseos uutettiin kloro-15 formilla (30 ml x 3), ja kloroformikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin alipaineessa, jolloin saatiin propyyli-N-syano-5-isopropyyliamino- 3-pyridiinikarboksimidaatti (80 mg, 0,33 mmol) keltaisena siirappina (saanto 44 %).

IR (pelkkänä) cm1: 2950, 2180, 1580, 1445, 1310.

‘H-NMR (90 MHz, CDC13): δ (ppm) 20 8,38 (1H, d, J=l,8 Hz, H-6), 8,16 (1H, d, J=3,l Hz, H-2), 7,58 (1H, dd, J=l,8, 3,1

Hz, H-4), 4,38 (2H, t, J=6,4 Hz, OCH2CH2CH3), 4,09 (1H, brs, NH), 3,66 (1H, m, NHCH(CH3)2), 1,86 (2H, m, OCH2CH2CH3), 1,26 (6H, d, J=6,l Hz, NHCH(CH3)2), 1,05 (3H, t, J=7,3 Hz, OCH2CH2CH3).

··· · • · · • · · :· \ Liuokseen, jossa oli propyyli-N-syano-5-isopropyyliamino-3-pyridiinikarboksimi- • · · ···'· 25 daattia (98 mg, 0,42 mmol) metanolissa (3 ml), lisättiin 2-(2-kloorifenyyli)etyyli- ' amiinia (79 mg, 0,51 mmol), ja seosta sekoitettiin 105 minuuttia. Kun reaktio oli ta pahtunut, reaktioseos konsentroitiin alipaineessa, ja saatu jäännös puhdistettiin sili- • · · kageelipylväskromatografialla (Wako Gel C-200, 30 g; eluointi kloroformi:metano-liseoksella = 100:1), ja kiteytettiin edelleen dietyylieetteristä, jolloin saatiin otsikon . ‘30 yhdiste (110 mg, 0,34 mmol) värittöminä kiteinä 80 %:n saannolla.

• * * • « * « O IR (KBr) cm'1: 2960, 2160, 1555, 1440.

: ‘H-NMR (90 MHz, CDC13): δ (ppm) ; 7,98 (1H, d, J=2,6 Hz, H-6), 7,78 (1H, d, J=l,8 Hz, H-2), 7,5-7,2 (4H, C^Cl), *· " 7,12 (1H, dd, J=l,8, 2,6 Hz, H-4), 6,62 (1H, brt, NHCH2CH2C6H4C1), 4,11 (1H, 26 105399 NHCH(CH3)2), 3,76 (2H, m, NHCH2CH2C6H4C1), 3,46 (1H, m, NHCH(CH3)2), 3,14 (2H, t, J=6,6 Hz, NHCH2CH2C6H4C1), 1,24 (6H, d, J=6,4 Hz, NHCH(CH3)2).

Esimerkki 9 S 5-bentsyyliamino-3-syanopyridiinin valmistus

Samalla tavalla kuin 3-syano-5-etyyliaminopyridiinin valmistuksessa saatiin 5-bent-syyliamino-3-syanopyridiini.

Sp. 131 °C.

IR (KBr) cm'1: 3220, 2220, 1610, 1580, 700.

10 ‘H-NMR (90 MHz, CDC13): δ (ppm) 8,36 (1H, d, J=l,5 Hz, H-2), 8,23 (1H, d, J=2,9 Hz, H-6), 7,91 1H, dd, J=l,5, 2,9 Hz, H-4), 7,5-7,2 (5H, CH2Ph), 4,48 (2H, s, CH2Ph).

5-bentsyyliamino-N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-3-pyridiinikarboksimi-diamidin synteesi 15 Liuokseen, jossa oli 5-bentsyyliamino-3-syanopyridiiniä (250 mg, 1,19 mmol) 1-propanolissa (30 ml), johdettiin vetykloridikaasua jäillä jäähdyttäen 30 minuuttia. Reaktori suljettiin tiiviisti, ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 16 tuntia. Kun reaktio oli tapahtunut, reaktioseos konsentroitiin alipaineessa ja jäännös neutraloitiin natriumkarbonaatin vesiliuoksella ja uutettiin kloroformilla (50 ml x 3). Klorofor- 11« 20 mikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin alipaineessa.

1 « Jäännöksen liuokseen asetonitriilissä (2 ml) lisättiin sitten vesiliuos (20 ml), jossa ΓΛ oli syanamidia (100 mg, 2,38 mmmol), Na2HP04 (170 mg, 1,20 mmol) ja ··· NaH2P04 · 2H20 (743 mg, 4,76 mmol), ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 24

MM

tuntia. Reaktioseos uutettiin kloroformilla (50 ml x 3), ja kloroformikerros kuivattiin 25 vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin alipaineessa. Jäännös puhdistettiin silikageelipylväskromatografialla (Wako Gel C-200, 30 g; eluointi heksaaniietyyli-*·.*.:* asetaattiseoksella = 4:1), jolloin saatiin propyyli-5-bentsyyliamino-N-syano-3-pyri- diinikarboksimidaatti (206 mg, 0,7 mmol) siirappina.

i » * « * « · ♦ ‘*.*..*. Liuokseen, jossa oli propyyli-5-bentsyyliamino-N-syano-3-pyridiinikarboksimidaat- i · 30 tia (114 mg, 0,38 mmol) metanolissa (2 ml), lisättiin 2-(2-kloorifenyyli)etyyliamii- • · nia (72 mg, 0,46 mmol), ja seosta sekoitettiin 105 minuuttia. Kun reaktio oli tapah- « * !.*·: tunut, reaktioseos konsentroitiin alipaineessa, ja saatu jäännös puhdistettiin silika- 27 105399 geelipylväskromatografialla (Wako Gel C-200, 20 g; eluointi kloroformi.metanoli-seoksella = 200:1), ja kiteytettiin edelleen dietyylieetteristä, jolloin saatiin otsikon yhdiste (126 mg, 0,32 mmol) värittöminä kiteinä 85 %:n saannolla.

Sp. 146 °C.

5 IR (KBr) cm’1: 2180, 1560, 1445, 750.

FD-MS m/z 389 (M, C22H20N5C1).

'H-NMR (90 MHz, CDC13): δ (ppm) 7,94 (1H, d, J=2,6 Hz, H-6), 7,82 (1H, d, J=l,8 Hz, H-2), 7,4-7,0 (10H), 4,92 (1H, brs, NH), 4,29 (2H, brd, J=5,5 Hz, NHCH2Ph), 3,8-3,6 (3H, NH, 10 NHCH2CH2C6H4C1), 3,09 (2H, t, J=6,6 Hz, NHCH2CH2C6H4C1).

Esimerkki 10 N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-5-metaani-sulfonamido-3-pyridiinikar-boksimidiamidin (N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyIi]-5-[3-(N-metaanisulfo-nyyliamino)pyridiini]-karboksimidiamidin synteesi 15 Liuokseen, jossa oli 5-amino-N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)-etyyli]-3-pyridimikar-boksimidiamidia (110 mg, 0,39 mmol) pyridiinissä (2 ml), lisättiin vedetöntä me-taanisulfonihappoa (65 mg, 0,37 mmol), ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 5 tuntia. Kun reaktio oli tapahtunut, reaktioseokseen lisättiin jäätä ja kyllästettyä natriumkarbonaatin vesiliuosta (20 ml), ja seos uutettiin etyyliasetaatilla (30 ml x 3). ,Y: 20 Etyyliasetaattikerros pestiin kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivattiin vedettömällä 1 · natriumsulfaatilla ja konsentroitiin alipaineessa. Saadulle jäännökselle suoritettiin

( ' I

: .·. silikageelipylväskromatografia (Wako Gel C-200, 20 g) ja eluoitiin kloroformi:me- ··’·1 tanoliseoksella (50:1), jolloin saatiin otsikon yhdiste (45 mg, saanto 32 %) vä- • · *’ I rittömänä jauheena.

···· ί’Γϊ 25 Sp. 205 °C.

IR (KBr) cm’1: 3400, 2150, 1590, 1555, 1150.

FD-MS m/z 378 (M+l, C16Hi6N502SC1).

’H-NMR (90 MHz, CDC13): δ (ppm) i 10,42 (1H, brs, NHS02CH3), 9,46 (1H, brs, NH), 8,87 (1H, d, J=2,4 Hz, H-6), 8,39 30 (lH, d, J=2,0 Hz, H-2), 7,76 (1H, dd, J=2,0, 2,4 Hz, H-4), 7,5-7,3 (4H, Ph), 3,66 . (5H, NHCH2CH2Ph, NHS02CH3), 3,16 (2H, NHCH2CH2Ph).

• 1· ♦ · · • · · f M • · 28 105399

Esimerkki 11 N-syano-N’-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-5-bis(inetaanisulfonyyliamino)-3-pyndii-nikarboksimidiamidin (N-syano-N’-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-5-[3-(N,N-bisme-taanisulfonyyliamino)pyridiini]karboksimidiamidin) synteesi 5 Liuokseen, jossa oli 5-amino-N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-3-pyridiinikar-boksimidiamidia (108 mg, 0,36 mmol) asetonitriilin (1 ml) ja DMF:n (1 ml) seoksessa, lisättiin trietyyliamiinia (144 mg, 1,43 mmol) ja metaanisulfonyylikloridia (88 mg, 0,77 mmol), ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 2,5 tuntia. Kun reaktio oli tapahtunut, reaktioseos kaadettiin jään ja kyllästetyn suolaliuoksen päälle ja uu-10 tettiin etyyliasetaatilla (30 ml x 3). Etyyliasetaattikerros pestiin kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin alipaineessa. Saadulle jäännökselle suoritettiin silikageelipylväskromatografia (Wako Gel C-200, 20 g) ja eluoitiin kloroformi.metanoliseoksella (100:1), jolloin saatiin otsikon yhdiste (89 mg, saanto 54 %) värittömänä jauheena.

15 Sp. 210 °C.

IR (KBr) cm'1: 3230, 2160, 1580.

*H-NMR (90 MHz, CDC13): 8 (ppm) 9,60 (1H, brs, NH), 8,94 (1H, d, J=2,4 Hz, H-6), 8,83 (1H, d, J=l,8 Hz, H-2), 8,23 (1H, dd, J=l,8, 2,4 Hz, H-4), 7,4-7,2 (4H, Ph), 3,83 (8H, 2xNHS02CH3, 20 NHCH2CH2Ph), 3,08 (2H, t, J=7,8 Hz, NHCH2CH2Ph).

« 1

Esimerkki 12 < ·« « ·

III

{ 5-amino-N-syano-N’-(2-fenetyyli)-3-pyridiinikarboksimidiamidin synteesi «M · ·· · • · · ·· Liuokseen, jossa oli propyyli-5-amino-N-syano-3-pyridiinikarboksimidaattia (310 mg, 1,51 mmol) metanolissa (5 ml), lisättiin fenetyyliamiinia (230 mg, 25 1,90 mmol), ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 2 tuntia. Kun reaktio oli tapah tunut, reaktioseos konsentroitiin alipaineessa ja jäännös kiteytettiin metanoli/dietyy-lieetteriseoksesta, jolloin saatiin otsikon yhdiste (222 mg, 0,84 mmol) vaaleankel-•"”: täisinä kiteinä (saanto 56 %).

Ml

j.f: Sp. 158 °C

• · 30 ’H-NMR (90 MHz, CDC13): 8 (ppm) • · · • · · · · I · · o · 29 105399 9,21 (1H, brd, NH), 8,07 (1H, d, J=2,6 Hz, H-6), 7,76 (1H, d, J=2,0 Hz, H-2), 7,4- 7,2 (5H, Ph), 7,00 (1H, dd, J=2,0, 2,6 Hz, H-4), 5,70 (2H, brs, NH2), 3,58 (2H, m, NHCH2CH2Ph), 2,88 (2H, t, J=6,9 Hz, NHCH2CH2Ph).

Esimerkki 13 5 3-syano-5-hydroksipyridiinin valmistus 4- hydroksinikotiiniamidia (0,69 g, 5 mmol), joka oli valmistettu kansainvälisessä patenttijulkaisussa 8606628 kuvatulla menetelmällä, liuotettiin pyridiiniin (50 ml). Lisättiin trifluori-etikkahappoanhydridiä (2,52 g, 12 mmol), ja seosta sekoitettiin 0°C:ssa 20 tuntia. Reaktioseos, johon oli lisätty vettä (20 ml), konsentroitiin alipai- 10 neessa ja uutettiin kloroformilla (50 ml x 3). Kloroformikerros pestiin vedellä (50 ml), kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin alipaineessa, jolloin saatiin jäännös. Jäännös puhdistettiin silikageelipylväskromatografialla (Wako Gel C-200, 20 g; eluointi kloroformi:metanoliseoksella = 100:1), jolloin saatiin 3-syano- 5- hydroksipyridiini (0,42 g, 3,5 mmol) (saanto 70 %).

15 IR (pelkkänä) cm'1: 3250, 2920, 2180.

’H-NMR (90 MHz, CDC13): δ (ppm) 8,86 (1H, d, J=l,9 Hz, H-2), 8,40 (1H, d, J=2,5 Hz, H-6), 7,42 (1H, dd, J=l,9, 2,5 Hz, H-4).

N-syano-N'-[2-(2-kIoorifenyyli)etyyli]-5-hydroksi-3-pyridiini-karboksimidiami- « · \v 20 din synteesi • · · • ·

Liuokseen, jossa oli 3-syano-5-hydroksipyridiiniä (0,42 g, 3,50 mmol) 1-propano- • · · *.IY lissa (40 ml), kuljetetettiin vetykloridikaasua jäillä jäähdyttäen 30 minuuttia. Reak- " tori suljettiin tiiviisti, ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 20 tuntia. Kun reaktio • « · ·;” oli tapahtunut, reaktioseos konsentroitiin alipaineessa. Jäännöksen liuokseen ase- : 25 tonitriilissä (20 ml) lisättiin sitten vesiliuos (30 ml), jossa oli syanamidia (0,88 g, 20,9 mmol), Na2HP04 (1,5 g, 10,6 mmol) ja NaH2P04.2H20 (3,27 g, 21,0 mmol), • »t # ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 6 tuntia. Reaktioseoksen pH säädettiin ar- * 1 ”: voon 7,0 kyllästetyllä natriumvetykarbonaatin vesiliuoksella ja uutettiin kloroformil- ; la (50 ml x 3). Kloroformikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja kon- 3O sentroitiin alipaineessa, jolloin saatiin epäpuhdas tuote, joka oli propyyli-N-syano- •: ·1 5-hydroksi-3-pyridiinikarboksimidaatti (0,26 g).

• » * · · • I I * · • · ·

• M

» · 30 105399

Liuokseen, jossa oli propyyli-N-syano-5-hydroksi-3-pyridiinikarboksimidaattia (0,26 g) metanolissa (5 ml), lisättiin 2-(2-kloorifenyyli)etyyliamiinia (0,22 g, 1,4 mmol), ja seosta sekoitettiin 4 tuntia. Kun reaktio oli tapahtunut, reaktioseos konsentroitiin alipaineessa, ja saatu jäännös uutettiin kloroformilla (50 ml x 3). Kloro-5 formikerros pestiin vedellä (100 ml), kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin alipaineessa. Jäännös puhdistettiin silikageelipylväskromatografialla (Wako Gel C-200, 30 g; eluointi kloroformi:metanoliseoksella = 50:1), ja kiteytettiin edelleen dietyylieetteristä, jolloin saatiin otsikon yhdiste (0,16 g, 0,53 mmol) värittöminä kiteinä. (Saanto 3-syano-5-hydroksipyridiinistä lähtien 15 %).

10 IR (KBr) cm1: 3250, 2200, 1590.

FD-MS m/z 300 (Ml C15H13N4OCI).

'H-NMR (90 MHz, CDC13): δ (ppm) 8,35 (1H, d, J=l-8 Hz, H-6), 8,22 (1H, J=2,6 Hz, H-2), 7,54 (1H, dd, J=l,8, 2,6 Hz, H-4), 7,4-7,1 (4H, C6H4CI, 3,08 (2H, t, CeHjCl), 3,70 (2H, m, NHCH2CH2C6H4C1) 15 J=7,3Hz,NHCH2CH2C6H4Cl).

(2) Kun R3 kaavassa (I) on nitroksyyliryhmä:

Farmakologinen koe 6: Verisuonia laajentava vaikutus rotan aortassa (1) Koemenetelmä Tämän keksinnön yhdisteen fysiologista vaikutusta tutkittiin menetelmällä, jossa 20 käytettiin rotan irrotettua aorttaa.

1 1 · I ·

II

:: Rinta-aortta irrotettiin urospuoliselta Wistar-rotalta (paino 250-350 g), jonka veri oli : laskettu pois niin että se kuoli, jolloin saatiin rengaspreparaatteja, joiden leveys oli Γ·\· 3 mm. Preparaatit suspendoitiin elinhauteeseen, joka oli täytetty Krebs-Ringerin ··· liuoksella, jonka läpi oli ilmastettu 37 °C:ssa kaasuseosta 95 % 02 ja 5 % C02. Pre- • · · 25 paraattiin kohdistettiin 1 g:n lepojännitys. Kun jännitys preparaatissa oli stabiloitunut, elinhauteen liuos vaihdettiin ekvimolaariseen määrään liuosta, jossa oli 40 mM ,..., KC1, preparaatin jännitteen nostamiseksi. Kun KCl.n aiheuttama jännitys tuli stabii-

Uksi, koeyhdistettä annettiin kumulatiiivisesti elinhauteeseen preparaatin jänmtyk-sen laukaisemiseksi. Laukeamisvaste ilmaistiin KCl.n indusoiman supistuksen pro-30 senttisena inhiboitumisena, ja ICso-arvo (konsentraatio, joka inhiboi 50 % KCl:n in-dusoimasta jännityksestä) laskettiin keskimääräisestä konsentraatio-vaste-käyrästä Probitin menetelmällä.

• · · • t 1 • · · • « · • »· • · 31 105399 (2) Tulokset Tämän keksinnön yhdisteiden joukossa olevien edullisten yhdisteiden ICso-arvot on esitetty taulukossa 5.

Taulukko 5

Yhdiste nro IC5q (M) 14_2,2 x l O'5 _15_ 1,0 x 10‘5 16 12,7 x1ο·6 5

Farmakologinen koe 7: Verenpainetta alentava vaikutus SHR:ään 5-amino-N-syano-N,-(2-nitroksietyyli)-3-pyridiinikarboksimidiamidin (N-syano-N-(2-nitroksietyyli)-5-(3-aminopyridiini)karboksimidiamidin); (yhdiste nro 14) ja N-syano-5-etyyliamino-N'-(2-nitroksietyyli)-3-pyridiinikarboksimidiamidin (N-syano-10 N'-(2-nitroksietyyli)-5-[3-(N-etyyliaminopyridiini)]karboksimidiamidin); (yhdiste nro 15) verenpainetta alentavat vaikutukset vahvistettiin vertaamalla niitä N-syano-N'-(2-nitroksietyyli)-3-pyridiinikarboksimidiamidin (japanilaisessa nähtäväksipan-nussa patenttijulkaisussa nro 163061/1991 kuvattu yhdiste) vaikutukseen vertailu-yhdisteenä, jota pidetään hyvin tunnettuna, tämän keksinnön yhdisteen kanssa lähes 15 samanlaisena yhdisteenä.

(1) Koemenetelmä I · « · f « « , «'. Tämän keksinnön verenpainetta alentavia vaikutuksia tutkittiin tajuissaan olevilla, » · spontaanisti korkeaverenpaineisilla rotilla (SHR). Systolinen verenpaine mitattiin • · | Y. * häntätyynymenetelmällä.

• · · • · γ{· 20 Kumpikin yhdisteistä 14 ja 15 liuotettiin ekvivalenttiseen seokseen polyetyleenigly- köli 200:aa ja fysiologista suolaliuosta, ja vertailuyhdiste liuotettiin fysiologiseen suolaliuokseen. Yhdisteitä annettiin oraalisesti suusondin avulla. SBP mitattiin en-.···. nen yhdisteen antoa ja 1, 2, 4, 6, 8, 12 ja 24 tuntia sen antamisen jälkeen. Tulokset on ilmoitettu prosenttisena muutoksena SBP:ssä, joka havaittiin ennen antamista.

• · · 25 (2)Tulokset •«# · «· · • «

Lasku verenpaineessa havaittiin annettaessa 3,0 mg/kg numeroita 14 ja 15. Molem-pien lääkkeiden aikaansaama verenpainetta alentava vaikutus kesti 12 tuntia tai kau- • · • · · * «· • * 32 105399 emmin (ks. taulukko 6). Toisaalta verenpainetta alentava vaikutus havaittiin myös annoksella 3,0 mg/kg vertailuyhdistettä, mutta se kesti noin 6 tuntia (ks. taulukko 6).

Taulukko 6: 5-amino-N-syano-N'-(2-nitroksietyyli)-3-pyridiini-karboksimidiamidin (yhdiste nro 14), N-syano-5-etyyliamino-N'-(2-nitroksietyyli)-3-pyridiinikarboks-5 imidiamidin (yhdiste nro 15) ja N-syano-N'-(2-nitroksietyyli)-3-pyridiinikarboksimi-diamidimetaanisulfonihapon (vertailuyhdiste) verenpainetta alentava vaikutus SHR:ään (Tiedot on ilmaistu prosenttisena muutoksena ennen yhdisteen antamista havaitussa SBP.ssä)

Yhdiste nro Aika ääkkeenannon jälkeen (tuntia) _ __l__2_4_6 8_12_24_

Vertailuyhdiste -55,9 -41,4 -10,6 -6,8_____ 14 _-56,9 -49,2 -42,6 -17,9 -20,5 -22,2 -3,7 15 -60,2 -47,2 -24,3 -23,9 -25,9 -27,7 -9,8 10 Farmakologinen koe 8: 5-amino-N-syano-N'-(2-nitroksietyyli)-3-pyridiinikarboks-imidiamidin (yhdiste nro 14) koronäärisuonia laajentava vaikutus beaglekoiriin Tämän keksinnön 5-amino-N-syano-N'-(2-nitroksietyyli)-3-pyridiinikarboksimidi-amidin (yhdiste nro 14) koronäärisuonia laajentava vaikutus varmistettiin vertaamalla sitä N-syano-N'-(2-nitroksietyyli)-3-pyridiinikarboksimidiamidimetaanisulfoniha-15 pon vaikutuksiin (yhdiste, joka on kuvattu japanilaisessa nähtäväksipannussa pa-. . tenttijulkaisussa nro 163061/1991), jonka ajatellaan olevan hyvin tunnettu, tämän keksinnön yhdisteen kanssa lähes samanlainen yhdiste.

• · ·«« : (1) Koemenetelmä ··« · v ' • · · * · · " Koira (paino 8,3 kg) nukutettiin 30 mg/kg:lla pentobarbitaalinatriumia suonensisäi- • · · ·;” 20 sesti. Hengitysyhteys huoneilmaan säilytettiin pehmustetulla henkitorviputkella.

v : Lääke annettiin reisilaskimon kautta, ja koronäärisuonten virtaus mitattiin koetti- mella, joka oli liitetty vasenta koronäärivaltimoa kiertävälle alueelle.

• · · • · • · (2) Tulokset • Kun 5-amino-N-syano-N'-(2-nitroksietyyli)-3-pyridiinikarboksimidiamidia (yhdiste «M · .···. 25 nro 14) annettiin suonensisäisesti annos 10 pg/kg, ja koronäärivirtauksessa havait tiin kasvua ja se säilyi 15 minuuttia tai kauemmin. Kun koronäärivirtauksen kasvu lii havaittiin N-syano-N'-(2-nitroksietyyli)-3-pyridiinikarboksimidiamidimetaanisulfo-

I I I

• · · 33 105399 nihapolla (vertailuyhdiste) annoksella 10 pg/kg, se kesti vain 10 minuuttia tai vähemmän.

Taulukko 7: 5-amino-N-syano-N'-(2-nitroksietyyli)-3-pyridiini-karboksimidiamidin (yhdiste nro 14) ja N-syano-N'-(2-nitroksietyyli)-3-pyridiinikarboksimidiamidime-5 taanisulfonihapon (vertailuyhdiste) vaikutukset koronäärisuonten verenvirtaukseen annettuna suonensisäisesti annoksena 10 pg/kg (nukutettu koira) (Tiedot on ilmaistu prosenttisena muutoksena verrattuna verenvirtaukseen ennen yhdisteen antamista)

Yhdiste nro Aika annostuksen jälkeen (min)__ _J__3_5_JJ)_^5_20_ U_ 200,0 123,8 71,4 19,0 19,0 0,0

Vertailuyhdiste 219,0 42,9 14,3 0,0___

Farmakologinen koe 9: Akuutti toksisuus 10 Tämän keksinnön mukaisen 5-amino-N-syano-N'-(2-nitroksietyyli)-3-pyridiinikar-boksimidiamidin (yhdiste nro 14) akuutti toksisuus oraalisesti annettaessa tutkittiin urospuolisilla SD-rotilla (5 viikon ikäisiä). Tulokseksi saaiin, että LD50 oli noin 600 mg/kg.

Esimerkki 14 15 5-amino-N-syano-N'-(2-nitroksietyyIi)-3-pyridiini-karboksimidiamidin valmis-y: tus /·;1 Liuokseen, jossa oli 2-nitroksietyyliamiinihydrokloridia (140 mg, 0,98 mmol) i DMF:ssä (1 ml), lisättiin natriummetoksidia (42 mg, 0,78 mmol), minkä jälkeen li- sättiin liuos, jossa oli propyyli-5-amino-N-syano-3-pyridiinikarboksimidaattia ..1·1 20 (100 mg, 0,49 mmol) metanolissa (1 ml), joka on kuvattu esimerkissä 4, ja seosta :T: sekoitettiin huoneenlämmössä 3 tuntia. Kun reaktio oli tapahtunut, reaktioseos haih dutettiin alipaineessa. Jäännös suspendoitiin veteen ja uutettiin kloroformilla. Kloro-.··1. formikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin alipaineessa.

. ,··. Näin saatu jäännös puhdistettiin silikageelipylväskromatografialla metanolin ja klo- ''' 25 reformin muodostamalla sekaliuoksella eluenttina, jolloin saatiin otsikon yhdiste ίi (77 mg, saanto 63 %) värittöminä kiteinä.

• 1 1 * 9 « 9

/1. Sp. 121 °C

· 9 • · · » · · • 99 34 105399 IR (KBr) cm'1: 3230, 2160, 1640, 1570, 1280.

^-NMR (90 MHz, CDC13): δ (ppm) 8,12 (1H, d, J=2,6 Hz), 7,93 (1H, d, J=2,0 Hz), 7,24 (1H, dd, J=2,6, 2,0 Hz), 4,74 (2H, t, J=5,2 Hz), 3,80 (2H, t, J=5,2 Hz).

5 MS 250 (M+), 188 [(M-0N02)+].

Esimerkki 15 N-syano-5-etyyliamino-N’-(2-nitroksietyyli)-3-pyridiinikarboksimidiamidin valmistus

Liuokseen, jossa oli 2-nitroksietyyliamiinihydrokloridia (659 mg, 4,62 mmol) 10 DMF:ssä (1 ml), lisättiin natriummetoksidia (227 mg, 4,20 mmol), minkä jälkeen lisättiin liuos, jossa oli propyyli-N-syano-5-etyyliamino-3-pyridiinikarboksimidaattia (195 mg, 0,84 mmol) DMF:ssä (1 ml), joka on kuvattu esimerkissä 7, ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 3 tuntia. Kun reaktio oli tapahtunut, reaktioseos haihdutettiin alipaineessa. Jäännös suspendoitiin veteen ja uutettiin kloroformilla. Kloro-15 formikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin alipaineessa. Näin saatu jäännös puhdistettiin silikageelipylväskromatografialla käyttäen metano-lin ja kloroformin sekaliuotinta eluenttina, jolloin saatiin otsikon yhdiste (208 mg, saanto 89 %) värittöminä kiteinä.

Sp. 100 °C

20 IR (KBr) cm'1: 3230, 2170, 1630, 1550, 1275.

V: ‘H-NMR (90 MHz, CDC13): δ (ppm) Q 8,28 (1H, bit), 7,97 (1H, d, J=2,6 Hz), 7,89 (1H, d, J=l,8 Hz), 7,12 (1H, dd, 1=2,6, i j*; 1,8 Hz), 4,70 (2H, t, J=5,0 Hz), 3,83 (2H, m), 3,15 (2H, m), 1,25 (3H, t, J=7,2 Hz), MS 278 (M+), 216 [(M-ON02)+].

• · ♦ 25 Esimerkki 16 • ·· • · · » · * 6-amino-N-syano-N'-(2-nitroksietyyli)-3-pyridiini-karboksimidiamidin valmis-.···. tus m · • · · • · ·

Liuokseen, jossa oli 2-nitroksietyyliamiinihydrokloridia (1,36 g, 9,54 mmol) : DMF:ssä (3,5 ml), lisättiin natriummetoksidia (470 mg, 8,7 mmol), minkä jälkeen .···. 30 lisättiin liuos, jossa oli propyyli-N-syano-6-amino-3-pyridiinikarboksimidaattia (355 mg, 1,74 mmol) DMF:ssä (2 ml), joka on kuvattu esimerkissä 3, ja seosta se- • * * koitettiin huoneenlämmössä 3 tuntia. Kun reaktio oli tapahtunut, reaktioseos haihdu- • · « • «I • · 35 105399 tettiin alipaineessa. Jäännös suspendoitiin veteen ja uutettiin kloroformilla. Kloro-formikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin alipaineessa.

Näin saatu jäännös puhdistettiin silikageelipylväskromatografialla käyttäen metano-lin ja kloroformin sekaliuotinta eluenttina, jolloin saatiin otsikon yhdiste (284 mg, 5 saanto 74 %) värittöminä kiteinä.

Sp. 108 °C

IR (KBr) cm'1: 3230, 2160, 1640, 1570, 1280.

Ή-NMR (90 MHz, CDCI3): δ (ppm) 9,00 (1H, bit), 8,23 (1H, dd, J=2,42, 0,66 Hz), 7,66 (1H, dd, J=8,79-2,64 Hz), 6,72 10 (2H, brs), 6,50 (1H, dd, J=8,79, 0,88 Hz), 4,70 (2H, t, J=5,27 Hz), 3,66 (2H, m).

MS 250 (M+), 188 [(M-ON02)+].

Esimerkki 17 N-syano-N'-(2-nitroksietyyli)-5-isopropyyliamino-3-pyridiinikarboksimidiami-din valmistus 15 Liuokseen, jossa oli 2-nitroksietyyliamiinihydrokloridia (95 mg, 0,67 mmol) DMF:ssä (1 ml), lisättiin natriummetoksidia (25 mg, 0,46 mmol) ja sen jälkeen liuos, jossa oli propyyli-N-syano-5-isopropyyliamino-3-pyridiinikarboksimidaattia (80 mg, 0,33 mmol), joka on kuvattu esimerkissä 8, DMF.ssä (1 ml), ja seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 3 tuntia. Kim reaktio oli tapahtunut, reaktioseos kon-20 sentroitiin kuiviin alipaineessa. Jäännös suspendoitiin veteen ja uutettiin kloroformilla. Kloroformikerros kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroi- r « t tiin alipaineessa. Näin saatu jäännös puhdistettiin silikageelipylväskromatografialla • · käyttäen eluenttina metanolin ja kloroformin muodostamaa sekaliuotinta, jolloin • · · ^ !;Y saatiin otsikon yhdiste (26 mg, saanto 27 %) värittöminä kiteinä.

• · · • · • · 4

·:· 25 Sp. 123 °C

MH • · · * IR (KBr) cm'1: 3220, 2200, 1640, 1590, 1560, 1280, 1000, 845.

Ή-NMR (90 MHz, CDCI3): δ (ppm) C.: 7,97 (1H, d, J=3,9 Hz), 7,86 (1H, d, J=l,5 Hz), 7,03 (1H, dd, J=3,9, 1,5 Hz), 4,62 ’!!!· (2H, t, J=5,0 Hz), 3,80 (1H, m), 3,57 (1H, m), 1,25 (6H, d, J=6,4 Hz).

: λ 30 MS 292 (M+), 230 [(M-ON02)+].

« · · · • ♦ ♦ « · • · M» « · • · · • · · * · · · · « * · · 36 105399

Esimerkki 18 S-asetyyliamino-N-syano-N’-^-nitroksietyylij-S-pyridHnikarboksimidiamidin valmistus 5-amino-N-syano-N'-(2-nitroksietyyli)-3-pyridiinikarboksimidiamidin (105 mg, 5 0,42 mmol) (ks. esimerkki 14) liuokseen pyridiinissä (1 ml) lisättiin asetyylikloridia (45 μΐ, 0,63 mmol), ja seoksen annettiin reagoida huoneenlämmössä 1 tunti. Kun reaktio oli tapahtunut, lisättiin kylmää natriumvetykarbonaatin vesiliuosta, ja seos uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyliasetaattikerros pestiin suolaliuoksella, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja konsentroitiin alipaineessa. Näin saatu jäännös 10 puhdistettiin silikageelipylväskromatografialla käyttäen metanolin ja kloroformin sekaliuotinta eluenttina, jolloin saatiin otsikon yhdiste (116 mg, saanto 95 %) hygroskooppisena jauheena.

IR (KBr) cm'1: 2180, 1680, 1635, 1565, 1450, 1280.

‘H-NMR (90 MHz, CDC13): 6 (ppm) 15 10,5 (1H, brs), 9,54 (1H, brt), 8,90 (1H, d, J=2,4 Hz), 8,42 (1H, d, J=2,0 Hz), 8,27 (1H, dd, J=2,4, 2,0 Hz), 4,75 (2H, t, J=5,1 Hz), 3,73 (2H, m), 3,31 (3H, s).

MS 292 (M+), 230 [(M-ON02)+].

Teollinen hyödynnettävyys Tämän keksinnön yhdisteillä on verisuonia laajentava vaikutus, tarkemmin, veren-20 painetta alentava vaikutus tai antianginaalinen vaikutus, jolloin ne ovat käyttökel-y. poisia verenpainetta alentavina aineina tai antianginaalisina aineina.

e s • · · * · * · · • · « III · • · f

I I I

• · t f · t • · · • · · · • · · • · · • · « • · ·

• I

• · f · « IM » • * « · · t ff · ( « % « · · « « · · • « « • * • · • · · « · • · · • ·« • w 9 m • · · • · · • ·

Claims (5)

37 105399

1. Menetelmä kaavan (I) esittämän N-syano-3-pyridiinikarboksiamidiiniyhdisteen tai sen happoadditiosuolan valmistamiseksi käytettäväksi lääkeaineena: NCN | H (I) 2A 4? R2 N 5 jossa kun R1 on hydroksimetyyli-, karboksyyli-, amino-, asetyyliamino-, C2-3-alkyyli-amino-, dimetyyliamino-, bentsyyliamino-, metyylisulfonyyliamino-, bismetyylisul-fonyyliamino- tai hydroksyyliryhmä, R on vetyatomi ja R on nitroksyyli-, 2-kloorifenyyli- tai fenyyliryhmä; ja 10 kun R1 on vetyatomi, R2 on aminoryhmä, ja R3 on nitroksyyli-, 2-kloorifenyyli- tai fenyyliryhmä, tunnettu siitä, että a) kaavan (I) mukaisen yhdisteen, jossa R1 on hydroksimetyyli-, karboksyyli-, amino-, C2-3-alkyyliamino-, dimetyyliamino-, bentsyyliamino- tai hydroksyyliryhmä •. v 15 jaR on vetyatomi tai R on vetyatomi, R on aminoryhmä ja R on kuten aiemmin '[[['. on määritelty, valmistamiseksi kaavan (IV) mukaisen N-syanopyridiinikarboksimi- : ·*· daattijohdannaisen ··♦ · ·« ♦ 5.V NCN m»! η li ... rV Il O 4? (IV) .··*, R2 N « 1*4 jossa R1 ja R2 ovat kuten aiemmin on määritelty ja R' on CM-alkyyliryhmä, anne- ; *' ‘; 20 taan reagoida kaavan (V) tai (VI) mukaisen yhdisteen kanssa, • · · • » « · · • · ♦ · • · • · · « · 38 105399 r^i J (V) .ONOo h2n h2n (VI) R4 jossa R4 on klooriatomi tai vetyatomi, jotta saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R1, R2 ja R3 ovat kuten aiemmin on määritelty; tai b) kaavan (I) mukaisen yhdiste, jossa R1 on asetyyliamino-, metyylisulfonyyli-5 amino- tai bismetyylisulfonyyliammoryhmä, R on vetyatomi ja R on kuten aiemmin on määritelty, valmistamiseksi seuraavan kaavan (I-c) mukaisen yhdisteen ami-noryhmä N-asetyloidaan tai N-metyylisulfonyloidaan kaavan (I-d) mukaisen yhdisteen saamiseksi: NCN NCN Tr- Tj - N N I-C I-d 10 jossa R5 on asetyyliamino-, metyylisulfonyyliamino- tai bismetyylisulfonyyli-aminoryhmä ja R3 on kuten aiemmin on määritelty, ,' ja haluttaessa muodostetaan happoadditiosuola käsittelemällä sopivalla hapolla.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan * · « . kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R on hydroksimetyyli-, amino-, asetyyliamino-ί* ·: 15 tai C2-3-alkyyliaminoryhmä, R2 on vetyatomi ja R3 on nitroksyyli-, 2-kloorifenyyli- tai fenyyliiyhmä, tai sen happoadditiosuola. «·· « i » *·" *

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa R1 on vetyatomi, R2 on aminoryhmä ja R3 on niitti roksyyli-, 2-kloorifenyyli- tai fenyyliryhmä, tai sen happoadditiosuola. »f 1 « I ( t

4. Förfarande enligt patentkrav 1 eller 2, kännetecknat av att man framställer 5-amino-N-cyano-N'-[2-(2-klorfenyl)etyl]-3-pyridinkarboxamidm eller ett syra-additionssalt därav.

4. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmiste- f « · '·«<] taan 5-amino-N-syano-N'-[2-(2-kloorifenyyli)etyyli]-3-pyridiinikarboksiamidiini tai * '! ’ sen happoadditiosuola. • · • » · « «« • · « · • · · • «· • « 39 105399

5. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 5-amino-N-syano-N'-(2-nitroksietyyli)-3-pyridiinikarboksiamidiini tai sen hap-poadditiosuola. 5 1. Förfarande för framställning av en N-cyano-3-pyridinkarboxiamidinförening för att användas som läkemedel, representerad av formeln (I): NCN I h R N där när R1 är en hydroximetyl-, karboxyl-, amino-, acetylamino-, C2-3-alkylamino-, di-10 metylamino-, bensylamino-, metylsulfonylamino-, bismetylsulfonylamino- eller hydroxylgrupp, R2 är en väteatom och R3 är en nitroxyl-, 2-klorfenyl- eller fenyl-grupp; och när R1 är en väteatom, R2 är en aminogrupp, och R3 är en nitroxyl-, 2-klorfenyl-. ·. eller fenylgrupp; eller r r * 15 dess syraadditionssalt, • · · • · · • · · · . kännetecknat av att • · • « ···· a) för att framställla en förening enligt formeln (I), där R är en hydroximetyl-, : karboxyl-, amino-, C2.3-alkylamino-, dimetylamino-, bensylamino- eller hydroxyl grupp och R2 är en väteatom eller R1 är en väteatom, R2 är en aminogrupp och R3 är 20 som definierats tidigare, ett N-cyanopyridinkarboximidatderivat enligt formeln (IV), • · · • · * ' NCN • f • · « « · a « a « ^ ΧΊ JL J (IV> 40 105399 där R1 och R2 är som deflnierats tidigare och R' är en C^-alkylgrupp, omsättes med en forening enligt formeln (V) eller (VI), /V J (V) ONO? h2n h2n (VI) R4 där R4 är en kloratom eller en väteatom, för erhällande av en förening enligt formeln 5 (I), där R1, R2 och R3 är som defmierats tidigare; eller b) för att framställa en förening enligt formeln (I) där R1 är en acetylamino-, me-tylsulfonylamino- eller bismetylsulfonylaminogrupp, R2 är en väteatom och R3 är som defmierats tidigare, aminogruppen i en förening enligt följande formel (I-c) N-acetyleras eller N-metylsulfonyleras för erhällande av en förening enligt formeln 10 (I-d): NCN NCN I-c I-d < • i • I f I « e ‘ ' där R är en acetylamino-, metylsulfonylamino- eller bismetylsulfonylaminogrupp : och R3 är som deflnierats tidigare, ·· · • · · • · •» · och, om sä önskas, bildas ett syraadditionssalt genom behandling med en lämplig 15 syra. I · · ... 2. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat av att man framställer en för- ening med formeln (I) där R är en hydroximetyl-, amino-, acetylamino- eller ’··' C2-3-alkylaminogrupp, R2 är en väteatom och R3 är en nitroxyl-, 2-klorfenyl- eller • « 41 105399

5. Förfarande enligt patentkrav 1 eller 2, kännetecknat av att man framställer 5 5-amino-N-cyano-N'-(2-mtroxietyl)-3-pyridinkarboxamidin eller ett syraadditions- salt därav. « * » 4 4 f « • · · • · · · • · · • · · · f · · • * · • · · · • · · • · • * · * · • · • · · • · · • « 9 « f f • t • · • · · * « · t · I » · • · · • «