FI102459B - Menetelmä vesiliukoisen silybiniinin inkluusiokompleksien valmistamise ksi - Google Patents

Description

102459

Menetelmä vesiliukoisen silybiniinin inkluusiokompleksien valmistamiseksi - Förfarande för framställning av inklusions-komplexer med silybinin 5 Tämä keksintö koskee menetelmää vesiliukoisen silybiniinin inkluusiokompleksien valmistamiseksi silybiniinistä ja syklo-dekstriinistä tai sen johdoksesta.

10 Silybiniini on eräs silymariinin (tai silymariiniryhmän) muodostavista isomeereistä - täsmällisemmin se on isomeeriä, jota on läsnä suurimmassa määrin - , ja sillä on kaava: 15 ^\-/0\^-ch2oh A/V0CH3

I n x OH

I II oh OH o 20

Sitä voidaan saada uuttamalla Carduus marianusin hedelmästä, ·. ja sillä on kiinnostava antihepatotoksista aktiivisuutta.

25 Silybiniinin valmistus on kuvattu esimerkiksi DE-patenttijulkaisussa 3537656.

Silybiniinillä sinänsä formuloituna sopivissa suhteissa sopivien apuaineiden kanssa on kiinnostavaa antihepatotoksista ·* .30 aktiivisuutta, mikä tekee sen erityisen kiinnostavaksi useissa patologisissa tiloissa.

Keksinnön mukaisesti inkluusiokomplekseja voidaan aikaansaada siten, että valmistetaan silybiniinin ja syklodekstriinin liuos 35 veteen pH-arvossa yli 7, säädetään liuoksen pH-arvo tasoon 2 102459 alle 7 lisäämällä sopivaa happoa, ja eristetään muodostunut kompleksi.

Edullisesti käytetään silybiniiniä, jonka HPLC-tiitterin vedet-5 tömyys on yli 90 %. a-, (3- ja γ-syklodekstriinistä ja niiden sopivista johdannaisista erityisen edullisia ovat β-syklodeks-triini, hydroksipropyyli-p-syklodekstriini, eptakis-2,6-O-di-metyyli-3-syklodekstriini ja eptakis-2,3,6-0-trimetyyli-p-syk-lodekstriini.

10

Menetelmän edulliseen sovellutusmuotoon liittyy silybiniinin suspendoiminen veteen ja sitten sopivan emäksen, edullisesti ammoniumhydroksidin, natrium- tai kaliumhydroksidin lisäämisen siihen silybiniinin täydelliseen liukenemiseen asti. Näin saa-15 tuun liuokseen lisätään syklodekstriiniä tai sen valittua johdannaista niin paljon, että saadaan silybiniini:syklodekstrii-nimoolisuhde 1:1 - 1:4. Ajanjakson jälkeen, joka vaihtelee välillä 15 min ja muutamia tunteja, liuos haihdutetaan tai sen jälkeen kun pääosa käytetystä haihtuvasta emäksestä on poistet-20 tu, liuoksen pH säädetään neutraaliin tai happamaan pH-arvoon alle 7, edullisesti 3-4, käyttämällä sopivaa happoa, esimerkiksi HCl:ää, H3P04:ää, H2S04:ää. Sitten kompleksi eristetään tunnetuilla tekniikoilla, esimerkiksi lyofilisoimalla. Sily- • · biniinin ja syklodekstriinin liuos voidaan myös valmistaa se-25 koittamalla ne vedessä, ja jatkamalla lisäämällä edellä kuvattua emästä.

Keksinnön mukaan saadut inkluusiokompleksit ovat vesiliukoisia.

. Tämä tarkoittaa, että niillä on liukoisuus ainakin 1 osa 10 30 osaan vettä (painon perusteella) 20°C:ssa.

Keksinnön mukaan saadut kompleksien liukenemis- ja vapautumis-nopeudet ovat paljon suuremmat silybiniiniin verrattuna. Hyväksyttävä vapautumisnopeus on käyttökelpoisen absorption edelly-35 tys. Keksinnön mukaan saatujen kompleksien hyvästä absorptiosta 3 102459 seuraa korkeat silybiniinitasot. Vapautumisnopeus (liukoisuus) on ainakin 60 % USP XII-lapamenetelmällä määritettynä vedessä 37°C:ssa pH-arvossa 7,5, edullisesti ainakin 75 %, ja erityisesti ainakin 85 %. Edullisimmin se on ainakin 90 %.

5

Uusi silybiniinin inkluusiokompleksi syklodekstriinin kanssa voidaan sopivasti formuloida farmaseuttisiin koostumuksiin, jotka soveltuvat oraaliseen antoon, käyttämällä apuaineita, kuten anionisia pinta-aktiivisia aineita, kuten natriumlau-10 ryylisulfaatti, polyalkoholit, joiden molekyylipaino on 400 - 20000, edullisesti 1500 - 3000, yksinkertaiset ja risti-liitetyt polyvinyylipyrrolidonit, selluloosa ja johdannaiset, kuten hydroksipropylimetyyliselluloosa, natriumkarboksimetyy-liselluloosa ja etyyliselluloosa.

15

Edullisimpia oraalisia farmaseuttisia muotoja ovat tabletit, kovat tai pehmeät gelatiinikapselit ja pusseissa olevat rakeistetut tuotteet.

20 Kuvassa 1 esitetään röntgendiagrammit silybiniinistä, β-syklo-dekstriinistä, näiden fysikaalisesta seoksesta ja esimerkin 1 kompleksista.

Kuvassa 2 esitetään silybiniinin, DIMEDin ja esimerkin 7 25 kompleksin röntgendiffraktiomalli.

Kuvassa 3 esitetään silybiniinin, DIMEDin ja esimerkin 8 kompleksin röntgendiffraktiomalli.

30 Kuvassa 4 esitetään silybiniinin lämpöanalyyttiset käyrät.

Kuvassa 5 esitetään esimerkin 7 kompleksin, ja silybiniinin ja DIMEDin fysikaalisen seoksen DSC-käyrät.

* • · 4 102459

Kuvassa 6 esitetään esimerkin 8 kompleksin, ja silybiniinin ja HPPCD:n fysikaalisen seoksen DSC-käyrät.

Kuvassa 7 esitetään (1) esimerkin 7 ja (2) esimerkin 8 komp-5 leksin UV-spektri.

Seuraavat esimerkit esitetään keksinnön kuvaamiseksi sitä rajoittamatta .

10 Esimerkki 1

Silybiniini:β-syklodekstriini-inkluusiokompleksin (moolisuhde 1:1) valmistus 15 10 g silybiniiniä (tiitteri 93 %, 0,018 mol) suspendoidaan 200 ml:aan deionisoitua vettä, ja lisätään magneettisekoitti-mella sekoittaen 75 ml 35-% ammoniumhydroksidia tipoittain 10 min aikana. Kun lisäys on suoritettu loppuun, siihen lisätään 1 erässä 24,78 g β-syklodekstriiniä (Fisher 13 %; 20 0,019 mol) . Sekoitusta jatketaan vielä 35 min ajan, ja sitten vesi tislataan pois 15 min aikana tyhjössä 50°C:ssa. Muodostuva keltainen kiinteä aine pestään kahdesti 30 ml:11a asetonia ja kuivataan, jolloin saadaan 24,6 g vaaleankeltaista kiinteää **' ainetta, joka on vesiliukoista, ja jonka röntgenanalyysi osoit- 25 taa silybiniini:β-syklodekstriini-inkluusiokompleksista (1:1) (esimerkiksi 20=18,8) johtuvan tunnusomaisen huipun; sulamispiste 250°C.

UV (maks) 287 nm (MeOH).

: - 30 Keksinnön mukaisella inkluusiokompleksilla nähdään suurempi liukeneminen verrattuna samoissa koeolosuhteissa joko silybi-niinillä tai silymariinilla nähtyyn.

• · 5 102459 Tämä ominaispiirre käy ilmi taulukon 1 kaaviosta, jossa esitetään liukenemiskäyrät silybiniinisβ-syklodekstriini-komp-leksille, joka on valmistettu esimerkin 1 mukaisesti (148 mg kompleksia vastaa 40 mg puhdasta silybiniiniä), silybiniinil-le (40 mg) ja silymariinille liuotettuna mahahappoon pH-ar-vossa 6,8.

Arviointi on suoritettu USP-lapamenetelmän mukaisesti, ja määritykset on suoritettu UV:llä tunnettuihin standardeihin verrattuna.

Taulukko 1 i

SILYBINIINI:SYKLODEKSTRIINI-KOMPLEKSIN LIUOTUSTESTI

Il M ... ......

'i m .......................

il Y

V I * -o- Silybiniini n I -·-. silymariini | I -Hi-| β-syklod./silybiniini (I / i’ll f / »» /............................

r*·) /

^ Jf..P - a · · · e -—---------—"O

O' 2 4 il e |(| 12 H 10 uTi aika (min)

Esimerkin 1 mukaisen inkluusiokompleksin röntgensädediffrak-tiodiagrammille on tunnusomaista joidenkin merkittävien huippujen läsnäolo (esimerkiksi 20*18,8), jotka eivät sisälly röntgensädediffraktiodiagrammaan jauheesta, joka on muodostettu sekoittamalla nämä 2 komponenttia mekaanisesti; lisäksi edellä mainitun inkluusiokompleksin röntgendiffraktio-diagrammissa ei ole läsnä niitä huippuja (20*24,5; 14,6; 32; 22,7), jotka ovat tunnusomaisia näiden 2 komponentin mekaanisen seoksen diffraktiodiagrammille.

« • · 6 102459 4r

Esimerkki 2 '

Silybiniini:fl-syklodekstriini-inkluusiokompleksin (moolisuhde 1:1) valmistaminen 10 g silybiniiniä (tiitteri 93 %, 0,019 mol) suspendoidaan 200 ml:aan deionisoitua vettä, ja lisätään magneettisekoitti-mella sekoittaen 75 ml 35-% ammoniumhydroksidia tipoittain 10 min aikana. Kun lisääminen on suoritettu loppuun, lisätään 1 erässä 24,78 g β-syklodekstriiniä (Fisher 13 %; 0,019 mol). Pidetään sekoitusta yllä vielä 35 min ajan, ja sitten kaasumainen ammoniakkiylimäärä poistetaan tyhjössä, pH säädetään 6N suolahappoa lisäämällä pH-arvoon 7, se lyofilisoidaan, pestään kahdesti kulloinkin 30 lm:11a asetonia, jolloin saadaan 26,2 g keltaista kiinteää ainetta (silybiniinin HPLC-tiitteri 24,7 % t.a.), jolla on edellisessä esimerkissä saadun tuotteen spektritunnusmerkit.

Esimerkki 3

Silybiniini:fi-syklodekstriini-inkluusiokompleksin (moolisuhde 1:2) valmistaminen

Suoritetaan edeltävissä esimerkeissä kuvatut operaatiot käyttämällä 35 g puhdasta silybiniiniä ja 211,7 g β-syklodekst-riiniä vastaten 183,7 g:aa vedetöntä. Saadaan 218 g tuotetta, jonka silybiniinitiitteri on 15,41 % ja KF· 2,5 %.

Esimerkki 4

Silybiniini:^-syklodekstriini-inkluusiokompleksin (moolisuhde 1:1) valmistaminen

Suoritetaan esimerkissä 1 kuvattu operaatio käyttäen 5,1 g ^ -syklodekstriiniä, jonka tiitteri on 98 %, ja 2,04 g silybiniiniä, jonka tiitteri on 91 %, vastaten 1,857 g puhdasta silybiniiniä. Saadaan 5,9 g silybiniini:^-syklodekstriini-inkluusiokompleksia (1:1).

4 7 102459

Esimerkki 5 t-

Silybiniini:DIMED (eptakis-2,6-O-dimetyyli-fl-syklodekstrii-ni)-inkluusiokompleksin (moolisuhde 1:1) valmistaminen

Suoritetaan esimerkissä 1 kuvattu operaatio käyttäen 32,3 g silybiniiniä, jonka tiitteri on 93 % ja 82,4 g DIMEBiä. Saadaan 97,2 g silybiniini:eptakis-2,6-O-dimetyyli-fl-syklodekst-riini-inkluusiokompleksia (1:1).

Edellä olevissa esimerkeissä saatuja tuotteita voidaan käyttää valmistettaessa farmaseuttisia koostumuksia lisäämällä sopivia apuaineita ja seuraavissa esimerkeissä 9-13 kuvatuilla tavoilla.

Esimerkki 6

Silybiniini-B-syklodekstriini-kompleksin (moolisuhde 1:2,75) valmistus 109,76 g fi-syklodekstriiniä (96,6 mmol) lisättiin liuotettiin 600 mlsaan tislattua vettä; liuokseen lisättiin 16,94 g silybiniiniä (35 mmol), jolloin saatiin suspensio. Noin 75 ml IN natriumhydroksidiliuosta lisättiin tipoittain 10 min aikana jatkuvasti sekoittaen. Silybiniini liukeni helposti, jolloin saatiin keltainen liuos. Lisättiin 2N fosforihappoa pH-arvon säätämiseksi välille 3,2 - 3,4 (tarvitaan noin 100 - 105 ml fosforihappoa). Liuoksen lämpötila pidettiin liuotus- ja neutralisointiprosessin aikana alle 20 °C:ssa jäähaudetta käyttämällä. Liuoksen väri katosi pH-arvossa alle 5. Liuoksen UV-spektrit l:800-laimennoksen jälkeen 50 %:lla (tilavuus/ti-lavuus) etanolia osoitti, että silybiniini oli läsnä ei-io-·; nisoidussa muodossa liuoksessa. Hieman samea beigensävyinen liuos suodatettiin 04-lasisuodattimen läpi. Kiinteä kompleksi eristettiin kirkkaasta liuoksesta pakastekuivaamalla.

Saatiin 140 g silybiniini-B-syklodekstriini-kompleksia. Aktiivisen valmistusaineen pitoisuus: 12,1 % (paino/paino) UV- * 8 102459 t» I · spektrometrialla mitattuna. Painonmenetys kuivauksessa (105 °C;ssa tyhjössä 2 tuntia): 9,5 % (paino/paino).

Vapautumiskokeet silybiniinillä, silymariinilla ja tämän esimerkin kompleksilla suoritettiin USP XXII:n mukaan, lapalaite pH-arvossa 7,5 37 °C:ssa. Kokeet osoittivat kompleksilla 96-% vapautumisen (liukoisuuden) vastakohtana silybiniinin 0-% vapautumiseen ja silymariinin 53-% kokonaisvapautumisen vastaten 37,1-% silybiniinin vapautumista.

Esimerkki 7

Silybiniini/2,6-di-0-metyyli-fl-syklodekstriini-kompleksin , (moolisuhde 1:2,2) valmistaminen i

Toistettiin esimerkin 6 menetelmä paitsi, että käytettiin 110 g 2,6-di-0-metyyli-fl-syklodekstriiniä (DIMED; 82 mmol) ja 18 g silybiniiniä (37 mmol).

Saatiin 140 g silybiniini/DIMED-kompleksia. Aktiivisen valmistusaineen pitoisuus: 12,6 % (paino/paino) UV-spektromet-rialla mitattuna. Painonmenetys kuivauksessa (105 °C:ssa tyhjössä 2 tuntia): 5,0 % (paino/paino).

Esimerkki 8

Silybiniini/hydroksipropyyli-fl-syklodekstriini-kompleksin (moolisuhde 1:2,2) valmistaminen 100 g hydroksipropyyli-B-syklodekstriiniä (HP CD) 76 mmol, PS * 3,0 (PS " keskimääräinen substituutioaste/syklodekstriini-yksikkö) liuotettiin 700 ml:aan vettä. Lisättiin 17 g silybiniiniä (35 mmol), jolloin tulokseksi saatiin suspensio.

Liuokseen lisättiin tipoittain 70 ml IN natriumhydroksidia 10 min aikana. Liuoksen jatkokäsittely oli identtinen DIMED-kompleksin valmistuksen kanssa, ja saatiin 130 g silybinii-ni/HPBCD-kompleksia. Aktiivisen valmistyusaineen pitoisuus: 12,7 % (painop/paino). Painonmenetys kuivauksessa (105 °C:ssa ’ tyhjössä 2 tuntia): 7,0 %.

9 102459 it

Esimerkkien 7 ia 8 kompleksien röntqenanalvvsi.

Puhtaan silybiniinin, DIMEDin, HP-BCD:n ja kompleksinäyttei-den röntgenjauhediffraktiodiagrammit rekisteröitiin Philips-jauhediffraktometrillä Cu-K-säteilyä käyttämällä. Röntgenmal-leja (kuvat 2 ja 3) vertaamalla kiteisen silybiniinin ja DIMEDin tunnusomaiset 20 huippua katosivat, komplekseilla nähtiin molemmissa tapauksissa täysin erilainen rakenne.

Termodynaamiset tii-hlcinmlcamt

Termodynaamiset tutkimukset suoritettiin Du Pont 990 Thermal Analyeer-järjestelmällä. Lääkkeen saunoin kuin sen mekaanisten seosten DIMEDin ja HP-£CD:n kanssa ja kompleksien T6 (termo-gravimetria), DTG (differentiaalinen TG), DSC (differentiaalinen skannauskalorimetria) ja TEA (lämmönkehitysanalyysi) otettiin samanaikaisesti.

Silybiniinin DSC-käyrät (kuva 4) osoittavat, että lääkkeen hajoaminen alkaa noin 130 *C:ssa ja jopa 160 °C:een havaitaan noin 4 - 5-% painonmenetys. Lääkkeen toinen hajoamisvaihe alkaa yli 250 *C:ssa syklodekstriinin hajoamisen alueella. Hajoamisvaihe alhaisemmassa lämpötilassa on sopiva komplek-soituneiden ja kompleksoitumattomien tuotteiden differentioi-miseen. Kompleksien DSC-käyrät (kuvat 5, 6) osoittavat, että silybiniinin hajoaminen havaitaan korkeammassa lämpötilassa vain noin 175 - 180 °C:ssa.

Esimerkkien 7 ia 8 kompleksien liukoisuusominaisuudet.

250 mg DIMEDiä ja HPBCD:tä voidaan liuottaa helposti 2 ml saan tislattua vettä ja pB-arvossa 1,4 suolahappoon, jolloin tulokseksi saadaan kirkas liuos. Vesiliuosten OV-spektrit -: rekisteröitynä l:750-laimentamisen jälkeen 50-% (tilavuus/ti- lavuus) etanolilla - osoittaa kiistatta, että silybiniini sisältyy sekä DIMEDiin että HP£CD:hen ionisoimattomassa muodossa (kuva 7).

10 102459

Vesiliuosten pH-arvo: DIMED-kompleksi: 3,3 HP-BCD-kompleksi: 3,4 1 päivä liuottamisen jälkeen DlMED-kompleksiliuoksessa ei havaittu saostumista. DIMED-kompleksiliuos pysyi kirkkaana yli 10 päivän varastoinnin ajan. Mitatut UV-spektrit pysyivät muuttumattomina osoittaen silybiniinikompleksien hyvän sta-biilisuuden liuoksissa.

Esimerkki 9

Farmaseuttisia koostumuksia, jotka sisältävät silybiniini:B-syklodekstriini-inkluusiokompleksin (moolisuhde * 1:2).

titrattavissa oleva silybiniini 40,0 mg B-syklodekstriini 164,7 mg

Pharmacoat 606 10,0 mg natriumlauryylisulfaatti 15,0 mg polyetyleeniglykoli 15,0 mg laktoosi 103,8 mg magnesiumstearaatti 1,5 mg

Kokoa "1" olevat kovat gelatiinikapselit.

Silybiniiniä ja B-syklodekstriiniä sekoitetaan vesi/metanoli-liuoksessa (7:3) 45 °C:ssa 2 tunnin ajan, sitten metanoli haihdutetaan, ja tuote lyofilisoidaan.

Lyofilisoitu tuote vaivataan 2-% paino/tilavuus Pharmacoat 606:n kanssa metyleenikloridi/etanoli-liuoksessa (9:1). Näin saatu tuote granuloidaan 1,2-mm silmäkoon verkolla, kuivataan ja kaavitaan 0,840-mm silmäkoon verkolla. Granuloitu tuote suljetaan kokoa ”1" oleviin kapseleihin.

Sideliuos voidaan korvata polyvinyylipyrrolidoniliuoksella etanoli/vedessä tai gelatiinin vesiliuoksella. Polyetyleenig-lykolin molekyylipaino voi vaihdella välillä 1500 - 10000.

* 102459 11 * * ggime£kfe&_10

Farmaseuttinen koostumus, joka sisältää silybiniini:B-syklo-dekstriini-inkluusiokompleksia (moolisuhde 1:2,75) silybiniini:3-syklodekstriini-inkluusiokompleksi 330 mg

Pharmacoat 606 10,0 mg natriumlauryylisulfaatti 15,0 mg polyetyleeniglykoli 15,0 mg laktoosi 103,8 mg magnesiumstearaatti 1,5 mg

Inkluusiokompleksi vaivataan 2-% paino/tilavuus Pharmacoat 606:n kanssa metyleenikloridi/etanoli-liuoksessa (9:1). Näin saatu tuote granuloidaan 1,2-mm silmäkoon verkolla, kuivataan ja kaavitaan 0,840-mm silmäkoon verkolla. Granuloitu tuote suljetaan kokoa "1" oleviin kapseleihin.

Sideliuos voidaan korvata polyvinyylipyrrolidoniliuoksella etanoli/vedessä tai gelatiinin vesiliuoksella. Polyetyleeni-glykolin molekyylipaino voi vaihdella välillä 1500 - 10000.

Esimerkki 11

Farmaseuttinen koostumus, joka sisältää silybiniinisjf-syklo-dekstriini-inkluusiokompleksia (moolisuhde 1:2)

Opetraatio suoritetaan esimerkissä 9 kuvatulla tavalla käyttämällä: titrattavissa oleva silybiniini 40,0 mg V~syklodekstriini 188,1 mg : Esimerkki 12

Farmaseuttinen koostumus, joka sisältää silybiniini:B-syklo-dekstriini-inkluusiokompleksia (moolisuhde 1:4)

Operaatio suoritetaan esimerkissä 9 kuvatulla tavalla käyttämällä: 12 102459 titrattavissa oleva; silybiniini 40,0 mg β-syklodekstriini 328,4 mg

Pharmacoat 606 10,0 mg natriumlauryylisulfaatti 15,0 mg polyetyleeniglykoli 15,0 mg laktoosi 129,1 mg magnesiumstearaatti 1,5 mg

Kokoa "0" olevat kovat gelatiinikapselit.

Esimerkki 13

Farmaseuttinen koostumus, joka sisältää silybiniini:DIMED-inkluusioKompleksia (moolisuhde 1:2)

Operaatio suoritetaan esimerkissä 9 kuvatulla tavalla käyttämällä: titrattavissa oleva silybiniini 40,0 mg DIMED 220,77 mg

Keksinnön mukaisten kmpleksien absorptio on arvioitu antamalla tutkittavan koostumuksen vesiliuosta oraalisesti ja mit- ' taamalla silybiniinin sappitasot HPLC:llä. Tämä testi on edullinen, koska on hyvin tunnettua, että silymariinin tyyppiset lääkkeet saavuttavat sapessa korkeimman konsentraation.

. . Testit on suoritettu 180 - 200 g painavilla Wistar-rotilla, joillle tutkittavat koostumukset annettiin mahaputkella.

Eläimiä pidettiin tyhjällä vatsalla 16 tunnin ajan. Testattava koostumus liuotettiin veteen, joka sisälsi 10 % arabiku-mia, ja valmistettiin liuoksia niin, että kaikille eläimille annettiin kulloinkin määrä 5 ml/kg mainittua liuosta.

Eläimet nukutettiin välittömästi käsittelyn jälkeen, ja leikattiin yhteisen sappitiehyen tarkastamiseksi. Sinne asetettiin pieni putki, ja sappi kerättiin 24 tunnin aikana. Ana-lyyttistä määritystä varten 1 ml sappea käsiteltiin tavalla, joka kuvataan seuraavassa julkaisussa: D. Lorenz et ai.; 13 102459

Pharmacokinetic Studies with Silymarin in Human Serum and Bile - Meth. and Find. Exptl. Clin. Pharmacol. 6(10) (1984) 655-661. Testeistä saadut tulokset esitetään luetteloiduina seuraavassa taulukossa 2, jossa: - testissä A annettiin 20 mg/kg silymariinia tunnetun kaupallisen formulaation mukaan, joka vastaa 8 mg/kg puhdasta sily-biniiniä, -testissä B annettiin 8,79 mg/kg silybiniiniä, jonka HPLC-tiitteri oli 91 %, ja joka vastasi 8 mg/kg puhdasta silybiniiniä, käytettiin sellaisenaan ilman täyteaineita, -testissä C annettiin 29,2 mg/kg esimerkissä kuvattua sily-biniini:3-syklodekstriini-inkluusiokompleksia, jolla on sily-biniinin HPLC-tiitteri 27,4 %, vastaten 8 mg/kg puhdasta silybiniiniä .

Taulukko 2 tuote eläinten sapen sappi 0-24h % eritet- luku- tila- 0-24h /jg/rotta tyä sily- määrä vuus pg/ml biniiniä silybi- niini 12 12,2 1,0 11,9 0,6 (testi B) silybi- niini 15 11,4 6,4 73,8 2,7 (testi A) esimerkin 1 kompleksi 14 14,3 17,6 256,6 11,7 . (testi C)

Keskimääräinen tuotetun sapen määrä 24 tunnissa käsittelemättömällä rotalla on 13,4 ml.

Saatujen tietojen arviointi osoittaa, että keksinnön mukaista inkluusiokompleksia aktiivisena valmistusaineena sisältävän 14 102459 koostumuksen anto sallii saavuttaa, käyttämällä kaikissa testeissä samaa aktiivisen valmistusaineen määrää, yli kaksinkertaistuneet silybiniinikonsentraatiotasot verrattuna testissä A saatuihin, ja lähes 20-kertaiset testissä B saatuihin verrattuna.

Lisäkokeessa arvioitiin silymariinin, silybiniinin ja esimerkin 6 kompleksin resorptiota. Tätä varten silybiniinin eritys rotan sapessa tutkittiin tavanomaisella mallikokeella. Nukutetut koiraspuoliset Wistar SPF-rotat, joita pidettiin tavanomaisissa olosuhteissa, kanyloitiin yhteiseen sappitiehyee-seen. Sen jälkeen kun oli annettu testiyhdistettä (5 mg sily- i biniiniä/kg), sappinestettä kerättiin 5 tunnin ajan. Sappinesteen silybiniinisisältö määritettiin kvantitatiivisella ohutlevykromatografiällä. Tulokset olivat seuraavanlaiset: silybiniinin erittymis-% rotan sapessa: silymariini: 11,9 %** silybiniini: 0,21 %a> kompleksi: 17,3 %3> 1) Keskiarvo laskettu 5 kokeesta 2) Keskiarvo laskettu 10 kokeesta 3) Keskiarvo laskettu 7 kokeesta

Edellä olevat tiedot osoittavat, että kompleksia absorboituu enemmän ja helpommin kuin silybiniiniä ja silymariinia.

Claims (6)

102459

1. Menetelmä vesiliukoisen silybiniinin inkluusiokompleksien valmistamiseksi silybiniinistä ja syklodekstriinistä tai sen 5 johdoksesta, tunnettu siitä, että valmistetaan silybiniinin ja syklodekstriinin liuos veteen pH-arvossa yli 7, säädetään liuoksen pH-arvo tasoon alle 7 lisäämällä sopivaa happoa, ja eristetään muodostunut kompleksi. 10

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että suspendoidaan silybiniini veteen, lisätään sopivaa emästä silybiniinin liuottamiseksi, lisätään syklodekstriini, säädetään pH-arvo tasolle alle 7 lisäämällä sopivaa happoa ja 15 eristetään kompleksi, tai suspendoidaan silybiniini ja syklodekstriini veteen, lisätään sopivaa emästä komponenttien liuottamiseksi, säädetään pH-arvo tasolle alle 7 lisäämällä sopivaa happoa, ja eristetään komp-20 leksi.

3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että silybiniinin moolisuhde syklodekstrii-niin on 171 - 1:4. 25

4. Jonkin patenttivaatimuksen 1-3 mukainen menetelmä, t u n - . n e t t u siitä, että syklodekstriini on β-syklodekstriiniä.

5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tunnettu 30 siitä, että silybiniinin moolisuhde β-syklodekstriiniin on 1:2, 1:2,75 tai 1:4.

6. Jonkin patenttivaatimuksen 1-5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että syklodekstriini on valittu joukosta 35 eptakis-2,6-0-dimetyyli^-syklodekstriini ja O-hydroksipropyy-Ιΐ-β-syklodekstriini. 102459