SK278519B6

SK278519B6 - Water soluble inclusive complex of silybinine together with cyclodextrine, preparation method thereof and pharmaceutical composition contaning that complex

Info

Publication number: SK278519B6
Application number: SK3019-91A
Authority: SK
Inventors: Wilfried Wachter; Jozsef Szejtli
Original assignee: Wilfried Wachter; Jozsef Szejtli
Priority date: 1990-10-04
Filing date: 1991-10-03
Publication date: 1997-08-06
Also published as: HU212940B; PL291914A1; FI102459B1; FI102459B; PT99146B; PL168793B1; KR950001012B1; CS301991A3; HU913162D0; FI914642A0; HUT61752A; PT99146A; CZ280043B6; RU2108109C1; FI914642A; KR920007625A

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka inklúznych komplexov silybinínu s cyklodextrínom alebo s jeho derivátmi, spôsobu prípravy týchto inklúznych komplexov a farmaceutických kompozícií, ktoré tieto inklúzne komplexv obsahujú ako účinnú látku.

Doterajší stav techniky

Silybinín je jeden z izomérov tvoriacich silymarín (alebo skupinu silymarínu); presnejšie špecifikované, je izomérom, ktorý je v ňom obsiahnutý v najväčšom množstve. Má nasledujúci všeobecný vzorec:

Silybinín môže byť získaný extrakciou z ovocia Carduus marianus a má zaujímavé antihepatotoxické vlastnosti. Príprava silybinínu je napríklad popísaná v DE-A-3537656.

Samotný silybinín formulovaný s vhodnými excipientmi vo vhodných pomeroch vykazuje zaujímavú antihepatotoxickú účinnosť, čo ho predurčuje k terapeutickému použitiu v oblasti niektorých patologických stavov.

Teraz bolo zistené, že silybinín môže byť výhodne použitý vo forme inklúznych komplexov s cyklodextrínom. Táto skutočnosť tiež tvorí podstatu vynálezu.

Podstata vynálezu

Podstatu vynálezu tvorí zistenie, že silybinín vhodne spracovaný cyklodextrínom zvoleným zo skupiny zahrňujúcej alfa-cyklodextrín, beta-cyklodextrín a gama-cyklodextrín a jeho vhodný derivát, hlavne O-Cl-C4-alkylový a hydroxy-Cl-C4-alkylový derivát, tvorí nový inklúzny komplex, ktorý v porovnaní so silybinínovým izomérom vykazuje zlepšenú biologickú dostupnosť.

Predmetom vynálezu je tiež spôsob prípravy inklúzneho komplexu silybinínu s cyklodextrínom zvoleným zo skupiny zahrňujúcej alfa-cyklodextrín, beta-cyklodextrín a gama-cyklodextrín a jeho vhodný derivát.

Predmetom vynálezu je tiež farmaceutická kompozícia vhodná na perorálne podanie, ktorá ako účinnú látku obsahuje inklúzny komplex silybinínu s cyklodextrínom zvoleným zo skupiny zahrňujúcej alfa-cyklodextrín, betacyklodextrín a gama-cyklodextrín a jeho vhodný derivát.

Výhodne sa používa silybinín, ktorého čistota v suchom stave je vyššia ako 90 % (vysoko výkonná kvapalinová chromatografia HPLC).

Z derivátov cyklodextrínu zahrňujúcich alfa-cyklodextrín, beta-cyklodextrín a gama-cyklodextrín a vhodný derivát, sa obzvlášť výhodne používa beta-cyklodextrín, hydroxypropyl-betacyklodextrín, eptakis-2,6-0-dimctyl-beta-cyklodextrín a eptakis-2,3,6-0-trimetyl-bcta-cyklodextrín.

Inkluzívne komplexy podľa vynálezu môžu byť získané tak, že sa pripraví roztok silybinínu a cyklodextrínu pri pH vyššom ako 7, načo sa nastaví pH na hodnotu nižšiu ako 7 a izoluje sa vytvorený komplex. Tento spôsob zahrňuje suspendovanie silybinínu vo vode a následné pridávanie vhodnej bázy, výhodne hydroxidu amonného, hydroxidu sodného alebo hydroxidu draselného až k dosiahnutiu úplného rozpustenia silybinínu. K takto získanému roztoku sa pridá cyklodextrín alebo jeho derivát v takom množstve, aby sa dosiahol molámy pomer silybinín/cyklodextrín 1:1 až 1:4. Po určitom čase, pohybujúcom sa od 15 minút do niekoľko málo hodín, sa roztok odparí alebo potom, čo bolo odstránené podstatné množstvo použitej prchavej bázy, sa neutralizuje alebo okyslí na pH nižšie ako 7, výhodne na pH 3 až 4, s použitím kyseliny, napríklad kyseliny chlorovodíkovej, kyseliny fosforečnej alebo kyseliny sírovej. Vytvorený komplex sa potom izoluje známymi postupmi, napríklad lyofilizáciou.

Roztok silybinínu a cyklodextrínu môže byť tiež pripravený zmiešaním týchto látok vo vode a pridaním bázy spôsobom, ktorý už bol uvedený.

Inklúzne komplexy podľa vynálezu sú rozpustné vo vode. To znamená, že sa v 10 hmotnostných dieloch vody rozpustí pri teplote 20 °C aspoň jeden hmotnostný diel komplexu podľa vynálezu.

Solubilizácia a rýchlosť uvoľňovania komplexov podľa vynálezu je oveľa vyššia ako solubilizácia a rýchlosť uvoľňovania samotného silybinínu.

Prijateľná rýchlosť uvoľňovania je predpokladom pre použiteľnú absorpciu. Dobrá absorpcia komplexov podľa vynálezu je dôsledkom vysokej hladiny silybinínu, ktoré sa v tomto prípade dosiahne. Rýchlosť uvoľňovania (solubilita), stanovená podľa USP XII (vo vode 37 °C pri pH 7,5 a lopatkovom miešaní) v tomto prípade je aspoň 60 %, výhodne aspoň 75 % a hlavne aspoň 85 %. Najvýhodnejšia rýchlosť uvoľňovania je aspoň 90 %.

Inklúzny komplex silybinínu s cyklodextrínom podľa vynálezu môže byť výhodne formulovaný vo farmaceutickej kompozícii vhodnej pre perorálne podanie s použitím excipientov, ako sú aniónové povrchovo aktívne látky, ako napríklad laurylsulfát, polyalkoholy s molekulovou hmotnosťou od 400 do 20 000, výhodne od 1 500 do 3 000, jednoduché a zosieťované polyvinylpyrolidóny a celulóza a ich deriváty, ako napríklad hydroxypropylmetylcelulóza a nátriumkarboxymetylcelulóza a etylcelulóza.

Najvýhodnejšími perorálnymi farmaceutickými formami sú tabletky, tvrdé alebo mäkké želatínové tobolky a granulovaný produkt vo vreckách.

Prehľad obrázkov na výkresoch

Vynález je bližšie demonštrovaný pomocou pripojených výkresov, na ktorých:

Obr. 1 znázorňuje difrakčný rontgenogram silybinínu, beta-cyklodextrínu, ich fyzikálne zmesi a komplexu podľa príkladu 1,

Obr. 2 znázorňuje difrakčný rontgenogram silybinínu, produktu DIMEB a komplexu z príkladu 7,

Obr. 3 znázorňuje difrakčný rôntgenogram silybinínu, produktu HPbetaCD a komplexu z príkladu 8, Obr. 4 znázorňuje termoanalytické krivky silybinínu,

SK 278519 Β6

Obr. 5 znázorňuje DSC-krivky komplexu z príkladu 7 a fyzikálne zmesi silybinínu a produktu DIMEB, Obr. 6 znázorňuje DSC-krivky komplexu z príkladu 8 a fyzikálne zmesi silybinínu a produktu HPbetaCD Obr. 7 znázorňuje UV-spektrum komplexu z príkladu 7 (1) a komplexu z príkladu 8 (2).

V nasledujúcej časti popisu bude vynález bližšie objasnený pomocou jeho konkrétnych vyhotovení, ktoré však majú iba ilustračný charakter, a ktoré takto vlastný rozsah vynálezu daný definíciou patentových nárokov, neobmedzujú.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Príprava inklúzneho komplexu silybinínu a betacyklodextrinu (molárny pomer 1:1) g silybinínu (čistota 93 %, 0,019 molov) sa suspenduje v 200 ml deionizovanej vody a k takto získanej suspenzii sa za magnetického miešania v priebehu 10 minút po kvapkách pridá 75 ml 35 % vodného roztoku hydroxidu amonného. Keď je prídavok hydroxidu amónneho skončený, pridá sa k zmesi naraz 24,78 g beta-cyklodextrínu (Fisher 13 %, 0,019 molov). V miešaní sa pokračuje ešte ďalších 35 minút, načo sa za vákua oddestiluje voda pri teplote 50 °C v priebehu 15 minút. Týmto spôsobom sa získa pevný žltý produkt, ktorý sa dvakrát premyje 30 ml acetónu a vysuší, pričom sa získa 24,6 g svetložltého pevného produktu, ktorý je rozpustný vo vode.

Difrakčný rôntgenogram tohto produktu vykazuje charakteristické maximá inkluzívneho komplexu silybinín-beta- cyklodextrín (1:1), (napríklad 20 = 18,8). Teplota topenia komplexu: 250 °C UV (max.) = 287 nm (MeOH).

Tento inklúzny komplex silybinín-beta-cyklodextrín má vyššiu rozpustnosť za rovnakých experimentálnych podmienok ako silybinín a silymarín. Táto skutočnosť je zrejmá z nasledujúcej tabuľky 1, v ktorej sú uvedené hodnoty rozpustnosti inklúzneho komplexu silybinin-beta-cyklodextrín, pripraveného podľa príkladu 1 (148 mg komplexu silybinín-beta-cyklodextrín zodpovedá 40 mg čistého silybinínu), samotného silybinínu (40 mg) a silymarínu v žalúdočnej šťave pri pH 6,8.

Toto vyhodnotenie bolo vykonané podľa uvedenej metódy USP a stanovenie obsahov jednotlivých látok bolo vykonané v UV - svetle porovnaním so známymi štandardami.

Tabuľka 1 Rozpustnosť inklúzneho komplexu silybinín-beta cyklodextrín, silybinínu a silymarínu

Testovaná látka	Rozpustnosť (%) po:
2 min.	4 min. 6 min.	10 min	20 min.
Silybinín	6	6,5 7	8	9
Silymarín	34	47 49	50	55
Inklúzny komplex
silybinin-beta-	74	90 95	97	100
cyklodextrín

Difrakčný rontgenogram inklúzneho komplexu silybinín-beta- cyklodextrín pripraveného podľa príkladu 1, má niekoľko charakteristických výrazných maxím (napríklad 20 = 18,8), ktoré nie sú prítomné v difrakč nom rôntgenograme prášku tvoreného mechanickou zmesou obidvoch komponentov, t.j. silybinínu a beta-cyklodextrínu; okrem toho v difrakčnom rontgenograme inklúzneho komplexu silybinín-beta-cyklodextrín nie sú prítomné maximá (20 = 24,5; 14,6; 32; 22,7), ktoré sú charakteristické pre difrakčný rôntgenogram uvedenej mechanickej zmesi uvedených jednotlivých zložiek.

Príklad 2

Príprava inklúzneho komplexu silybinín-betacyklodextrín (molámy pomer 1:1) g silybinínu (čistota 93 %, 0,010 molov) sa suspenduje v 200 ml deionizovanej vody a k takto získanej suspenzii sa za magnetického miešania v priebehu 10 minút po kvapkách pridá 75 ml 35 % vodného roztoku hydroxidu amonného. Po skončení prídavku hydroxidu amonného sa k zmesi naraz pridá 24,78 g beta- cyklodextrínu (Fisher 13 %, 0,010 molov). V miešaní sa pokračuje ďalších 35 minút, načo sa za vákua odstráni prebytok plynného amoniaku, pH sa nastaví pridaním 6 N kyseliny chlorovodíkovej na hodnotu 7 a zmes sa lyofilizuje. Po dvojnásobnom premytí 30 ml acetónu sa získa pevný žltý produkt.

Výťažok produktu: 26,2 gramov, Obsah silybinínu (stanovený HPLC): 24,7 %.

Získaný komplex má rovnaké spektrálne charakteristiky ako produkt z predchádzajúceho príkladu.

Príklad 3

Príprava inklúzneho komplexu silybinín-beta-cyklodextrín (molámy pomer 1:2)

Postupuje sa rovnako ako v predchádzajúcich príkladoch s použitím 35 g čistého silybinínu a 211,7 g beta-cyklodextrínu (zodpovedá 183,7 g sušiny). Získa sa 218 g produktu obsahujúceho (HPLC) 15,41 % silybinínu a 2,5 % KF.

Príklad 4

Príprava inklúzneho komplexu silybinín-gama-cyklodextrín (molámy pomer 1:1)

Postupuje sa rovnako ako v príklade 1 s použitím 5,1 gama-cyklodextrínu s čistotou 98 % a 2,04 g silybinínu s čistotou 91 % (čo zodpovedá 1,857 g čistého silybinínu). Získa sa 5,9 g inklúzneho komplexu silybinínu-gama-cyklodextrín (1:1).

Príklad 5

Príprava inklúzneho komplexu silybinín-DIMEB (eptakis-2,6-0-dimetyl-beta-cyklodextrín) (molámy pomer 1:1)

Postupuje sa rovnako ako v príklade 1 s použitím 32,3 g silybinínu s čistotou 93 % a 82,4 eptakis-2,6-0-dimetyl-beta- cyklodextrínu. Získa sa 97,2 g inklúzneho komplexu silybinín-eptakis-2,6-0-dimetyl-beta-cyklodextrín (1:1).

Produkty získané v predchádzajúcich príkladoch môžu byť použité na prípravu farmaceutických kompozícií pridaním vhodných excipientov postupmi popísanými v ďalej uvedených príkladoch 9 až 13.

Príklad 6

Príprava komplexu silybinín-beta-cyklodextrín (molárny pomer 1:2,75)

109,76 g beta-cyklodextrínu (96,6 mmólov) sa rozpustí v 600 ml destilovanej vody. V takto získanom roztoku sa potom suspenduje 16,94 g silybinínu (35 mmólov). K tejto suspenzii sa potom za miešania v priebehu 10 minút po kvapkách pridá asi 75 ml N vodného roztoku hydroxidu sodného. Dôjde k ľahkému rozpusteniu silybinínu za vzniku žltého roztoku. S cieľom nastaviť pH roztoku na hodnotu medzi 3,2 a 3,4 sa k roztoku pridá 2 N vodný roztok kyseliny fosforečnej (k tomu je potrebné pridať asi 100 až 105 ml uvedeného vodného roztoku kyseliny fosforečnej). V priebehu uvedeného rozpustenia a uvedenej neutralizácie sa udržiava nižšia ako 20 °C použitím ľadového kúpeľa. Roztok stráca farbu pri hodnote pH nižšom ako 5.

Ultrafialové spektrum tohto roztoku ukazuje po zriedení 1:800 50 % etanolom, že silybinín je v roztoku prítomný v neionizovanej forme. Slabo opalizujúci béžovo sfarbený roztok sa potom sfiltruje cez sklenenú fritu 04. Pevný komplex sa z roztoku izoluje lyofilizáciou (mrazovou sublimáciou).

Získa sa 140 g komplexu silybinín-beta-cyklodextrín. Obsah účinnej látky (merané UV-spektrofotometriou): 12,1 % hmotnostných. Strata pri sušení (pri teplote 105 °C za vákua počas 2 hodín) je 9,5 % hmotnostných.

Boli vykonané testy určujúce rýchlosť uvoľňovania silybinínu samotného, silymarínu a komplexu silybinín-beta-cyklodextrín s použitím metódy USP XXII (lopatkové miešanie pri pH 7,5 a teplote 37 °C). Tieto testy preukázali 96 % solubilitu uvedeného komplexu v porovnaní s 0 % solubilitou silybinínu a 53 % celkovou solubilitou silymarínu, zodpovedajúcou 37 % solubilite silybinínu.

Príklad 7

Príprava komplexu silybinín-2,6-di-0-metyl-beta-cyklodextrín (molámy pomer 1:2,2)

Postupuje sa rovnako ako v príklade 6 s výnimkou spočívajúcou v tom, že sa použije 110 g 2,6-di-0-metyl-beta-cyklo-dextrínu (DIMEB, 82 mmólov) a 18 g silybinínu (37 mmólov). Získa sa 140 g komplexu silybinínDIMEB. Obsah účinnej zložky (merané UV-spektrofotometriou): 12,6 % hmotnostných. Strata hmotnosti sušením (pri 105 °C za vákua počas dvoch hodín): 5,0 % hmotnostných.

Príklad 8

Príprava komplexu silybinín-hydroxypropyl-beta-cyklodextrín (molámy pomer 1:2,2)

100 g hydroxypropyl-beta-cyklodextrínu (HPbetaCD, 76 mmólov;, stredný stupeň substitúcie na cyklodextrínovú jednotku [PS] = 3,0) sa rozpustí v 700 ml vody. K takto získanému roztoku sa potom pridá 17 g silybinínu (35 mmólov) a k rezultujúcej suspenzii sa v priebehu desiatich minút po kvapkách pridá asi 70 ml IN vodného roztoku hydroxidu sodného. Ďalšie spracovanie roztoku je rovnaké ako pri príprave DIMEB-komplexu a ziska sa 130 g komplexu silybinin-HPbetaCD. Obsah účinnej zložky: 12,7 % hmotnostných.

Strata hmotnosti sušením (pri 195 °C za vákua počas 2 hodín): 7,0 % hmotnostných.

Rôntgenová difrakčná analýza komplexov z príkladov 7 a 8 Difrakčné rontgenogramy čistého silybinínu, DIMEB a HPbetaCD a zodpovedajúcich komplexov boli zaznamenané na Philipsovom práškovom di&aktometri s použitím Cu-K-žiarenia. Z porovnaní rôtgenových difrakčných matríc (obr. 2, 3) vyplýva, že u komplexov zmizlo 20 charakteristických maxím kryštalického silybinínu a DIMEB, pričom tieto komplexy majú v obidvoch prípadoch úplne odlišnú štruktúru.

Termoanalytické štúdie

Termoanalytické štúdie boli vykonané na Du Pontovom termálnom analyzátorovom systéme 990. Na tomto zariadení boli získané TG-(termogravimetria), DTG-(diferenčná termografía), DSC-(diferenčná skanovacia kalorimetria) a TDA (termálna evolučná analýza) krivky samotných účinných látok, ich mechanických zmesí s DIMEB a HPbetaCD a ich komplexov s DIMEB a HPbetaCD.

DSC-krivky silybinínu (obr. 4) ukazujú, že rozklad tejto látky začína pri asi 130 °C a až 160 °C, pričom bola stanovená strata hmotnosti asi 4 až 5 %. Druhý rozkladný stupeň silybinínu začína pri teplote vyššej ako 250 °C v oblasti rozkladu cyklodextrínu. Rozkladný stupeň prebiehajúci pri nižšej teplote je vhodný na odlíšenie komplexovaného a nekomplexovaného produktu. DSC-krivky komplexov (obr. 5, 6) ukazujú, že k rozkladu silybinínu dochádza iba pri vyššej teplote asi 175 až 180 °C.

Rozpustnosť komplexov z príkladov 7 a 8

250 mg DIMEB- a HPbetaCD-komplexu sa ľahko rozpustí v 2 ml destilovanej vody, pričom pri pH 1,4 nastavenej kyselinou chlorovodíkovou dochádza k vyčíreniu roztoku. UV-spektrum vodných roztokov zaznamenané po zriedení 1:750 50 % etanolom ukazuje nad akúkoľvek pochybnosť, že silybinín je v komplexe s DIMEB a HPbetaDC v neionizovanej forme (obr. 7). pH vodných roztokov: DIMEB komplex: 3,3 HPbetaCD-komplex: 3,4

V prípade roztoku DIMEB-komplexu nedochádza jeden deň po príprave tohto roztoku k žiadnemu vylučovaniu pevnej fázy. Roztok DIMEB-komplexu zostáva číry počas skladovania viac ako 10 dní. Tiež UV-spektrá zostávajú v priebehu uvedenej doby nezmenené, čo ukazuje na dobrú stabilitu uvedených komplexov silybinínu v roztokoch.

Príklad 9

Farmaceutická kompozícia obsahujúca inklúzny komplex silybinín-beta-cyklodextrín (molámy pomer 1:2)

Silybinín 40,0mg

Beta-cyklodextrín 164,7mg

Pharmacoat 606 10,0mg

Laurylsulfát sodný 15,0mg

Polyetylénglykol 15,0mg

Laktóza 103,8mg

Stearát horečnatý 1,5mg

Tvrdé želatínové tobolky veľkosti 1.

SK 278519 Β6

Silybinín a beta-cyklodextrín sa miešajú v zmesi vody a metanolu v objemovom pomere 7:3 pri teplote 45 °C počas dvoch hodín, načo sa metanol odparí a zvyšný roztok sa lyofilizuje. Takto získaný lyofilizovaný produkt sa premieša s 2 % roztokom Pharmacoatu 606 v zmesi metylénchloridu a etanolu v objemovom pomere 9:1. Získaná zmes sa granuluje na site s veľkosťou ôk 1,2 mm, vysuší a oddelí sa od odpadu na site s veľkosťou ôk 0,840 mm. Granulovaný produkt sa potom zapuzdrí do želatínových toboliek veľkosti 1.

Uvedený spojivový roztok môže byť nahradený roztokom polyvinylpyrolidónu v zmesi etanolu a vody alebo vodným roztokom želatíny. Molekulová hmotnosť polyetylénglykolu sa môže pohybovať od 1 500 do 10 000.

Príklad 10

Farmaceutická kompozícia obsahujúca inklúzny komplex silybinín-beta-cyklodextrín (molámy pomer 1:2,75) Komplex silybinín-betacyklodextrín 330,0 mg

Pharmacoat 606 10,0mg

Laurylsulfát sodný 15,0mg

Polyetylénglykol 15,0mg

Laktóza 103,8mg

Stearát horečnatý 1,5mg

Inklúzny komplex sa rozotrie s 2 % roztokom Pharmacoatu 606 v zmesi metylénchloridu a etanolu. Takto získaná zmes sa potom granuluje na site s veľkosťou ôk 1,2 mm, vysuší a získané granule sa odtriedia od odpadu na site s veľkosťou ôk 0,840 mm. Granulovaný produkt sa potom zapuzdrí do toboliek veľkosti 1.

Príklad 11

Farmaceutická kompozícia obsahujúca inklúzny komplex silybinín-gama-cyklodextrín (molámy pomer 1:2)

Postupuje sa rovnako ako v príklade 9 s použitím: Silybinínu 40,0 mg a

Gama-cyklodextrínu 188,1 mg.

Príklad 12

Farmaceutická kompozícia obsahujúca inklúzny komplex silybinín-beta-cyklodextrín (molámy pomer 1:4)

Postupuje sa rovnako ako v príklade 9, pričom sa použije:

Silybinín 40,0 mg

Beta-cyklodextrín 328,4 g

Pharmacoat 606 10,0 mg

Laurylsulfát sodný 15,0 mg

Polyetylénglykol 15,0mg

Laktóza 129,1mg

Stearát horečnatý 1,5mg.

Tvrdé želatínové tobolky veľkosti 0

Príklad 13

Farmaceutická kompozícia obsahujúca inklúzny komplex silybinín-DIMEB (molárny pomer 1:2)

Postupuje sa rovnako ako v príklade 9, pričom sa použije:

Silybinín 40,0 mg a

DIMEB 220,77 mg.

Absorpcia komplexov podľa vynálezu bola vyhodnotená pri perorálnom podaní, pričom bola skúmaná a meraná hladina silybinínu v žlči pomocou vysoko výkonnej kvapalinovej chromatografie (HPLC). Tento test bol zvolený pretože je známe, že účinné látky skupiny silymarínu sa najviac koncentrujú práve v žlči.

Tieto experimenty boli vykonané s krysami Wistar majúcimi telesnú hmotnosť 180 až 200 g. Testované kompozície boli týmto pokusným zvieratám podávané gastrickou intubáciou. Pokusné zvieratá nedostali počas 16 hodín potravu. Testovaná kompozícia bola rozpustená vo vode obsahujúcej 10 % arabskej gumy, pričom každému pokusnému zvieraťu bolo vždy podaných 5 ml uvedeného roztoku na jeden kilogram telesnej hmotnosti.

Bezprostredne po podaní testovanej zlúčeniny boli pokusné zvieratá anestetizované a operované s cieľom zaškrtiť spoločný žlčovod a zasunúť katéter do žlčovodu , pomocou ktorého sa odoberá žlč počas 24 hodín. S cieľom analytického stanovenia sa vždy 1 ml žlče spracuje spôsobom, popísaným v publikácii: D. Lorenz a kol., Pharmacokinetic Studies with Silymarin in Human Sérum and Bile - Meth. and Find. Exptl. Clin. Pharmacol. 6 (10), 655 - 661 (1984).

Výsledky získané týmto testom sú uvedené v nasledujúcej tabuľke 2, pričom:

- pri teste A bolo podaných 20 mg/kg silymarínu vo forme známej komerčnej formulácie, čo zodpovedá 8 mg/kg čistého silybinínu,

- pri teste B bolo podaných 8,79 mg/kg silybinínu majúceho čistotu 91 % (stanovené vysoko výkonnou kvapalinovou chromatografiou - HPLC), čo zodpovedá 8 mg/kg čistého silybinínu; silybinín je podaný ako taký, bez excipientov,

- pri teste C bolo podaných 29,2 mg/kg inkluzívneho komplexu silybinín-beta-cyklodextrín, popísaného v príklade 1, ktorý má obsah silybinínu 27,4 %, čo zodpovedá 8 mg/kg čistého silybinínu.

Tabuľka 2

Produkt	Počet zvierat	Objem žlče	Žlč 0-24 hod. pg/ml	0-24 hod. gg/krysa	% vylúčeného silybinínu
Silybinín (test B)	12	12,2	1,0	11,9	0,6
Silybinín (test A)	15	11,4	6,4	73,8
Komplex z príkladov 1	14	14,3	17,6	256,6	11,7
(test C)

Priemerný objem žlče produkovaný v priebehu 24 hodín kontrolnými krysami (nebola podaná účinná látka) bol 13,4 ml.

Rozbor získaných výsledkov ukazuje, že podaním kompozície obsahujúcej ako účinnú látku inklúzny komplex, je pri inak rovnakých množstvách účinnej látky vo všetkých testoch koncentračná hladina silybinínu viac ako dvojnásobná v porovnaní s kompozíciou pri teste A a takmer dvadsaťnásobná v porovnaní s kompozíciou použitou v stupni B.

V ďalšom teste bola vyhodnotená resorpcia silymarínu, silybinínu a komplexu z príkladu 6. S týmto cieľom bola stanovená exkrécia silybinínu v krysej žlči pri konvenčných modelových podmienkach. Anestetizovaní krysí samčekovia Wistar SPF držaní pri konvenčných podmienkach boli podrobení zákroku, pri ktorom

SK 278519 Β6 im bola do žlčovodu zavedená kanyla. Po intragastrickom podaní testovanej zlúčeniny (5 mg silybinínu/kg) bola odoberaná žlčová kvapalina počas 5 hodín. Obsah silybinínu v žlčovej kvapaline bol stanovený kvantitatívnou chromatografiou na tenkej vrstve.

Boli získané nasledujúce výsledky:

8. Použitie aspoň jedného komplexu podľa niektorého z nárokov 1 až 6 na prípravu farmaceutickej kompozície pre hepatoterapiu.

výkresov

Percentuálna exkrécia silybinínu v krysej žlči:
Silymarín:	11,90 g¹’
Silybinín:	0,21 g²’
Komplex:	17,30 g³⁾

⁰ priemer vypočítaný z 5 experimentov ²⁾ priemer vypočítaný z 10 experimentov priemer vypočítaný zo 7 experimentov

Uvedené výsledky ukazujú, že komplex podľa vynálezu je viac a ľahšie absorbovaný ako silybinín a silymarín.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Vo vode rozpustný inklúzny komplex silybinínu s cyklodextrínom o rozpustnosti vo vode aspoň 60 %, stanovené metódou USP XXII, pričom cykolodextrín je zvolený zo skupiny zahrňujúcej alfa-cyklodextrín, beta-cyklodextrín, gama-cyklodextrín a ich derivát)', vyznačujúci sa tým, že molámy pomer silybinínu k cyklodextrínuje 1:1 až 1:4
2. Vo vode rozpustný inklúzny komplex podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že ako cyklodextrín obsahuje beta- cyklodextrin.
3. Vo vode rozpustný komplex podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že molámy pomer silybinínu k beta-cyklodextrínuje 1:2, 1:2,75 alebo 1:4.
4. Vo vode rozpustný inklúzny komplex podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že cyklodextrín je zvolený zo skupiny zahrňujúcej eptakis-2,6-0-dimetyl-beta-cyklodextrín, eptakis-2,3,6-0-trimetyl-beta-cyklodextrín a O-hydroxypropyl-beta- cyklodextrín.
5. Spôsob prípravy inklúzneho komplexu podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa prípravu roztoku silybinínu a cyklodextrínu vo vode pri pH vyššom ako 7, nastavenie pH získaného roztoku na pH nižšie ako 7 pridaním kyseliny a izoláciu vytvoreného komplexu.
6. Spôsob podľa nároku 7, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa suspendovanie silybinínu vo vode, pridanie bázy s cieľom rozpustiť silybinín, pridanie cyklodextrínu, zníženie pH na hodnotu nižšiu ako 7 pridaním kyseliny a izoláciu komplexu alebo suspendovanie silybinínu a cyklodextrínu vo vode, pridanie bázy za účelom rozpustenia týchto zlúčenín, nastavenie pH na hodnotu nižšiu ako 7 pridaním kyseliny a izoláciu komplexu.
7. Farmaceutická kompozícia, vyznačujúca sa tým, že obsahuje terapeuticky účinné množstvo aspoň jedného inklúzneho komplexu podľa niektorého z nárokov 1 až 6, prípadne v kombinácii s farmaceutický prijateľnými nosičmi a/alebo prísadami.