ES2995259T3 - Compound for inhibiting pge2/ep4 signaling transduction inhibiting, preparation method therefor, and medical uses thereof - Google Patents

Compound for inhibiting pge2/ep4 signaling transduction inhibiting, preparation method therefor, and medical uses thereof Download PDF

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ES2995259T3 ES20744659T ES20744659T ES2995259T3 ES 2995259 T3 ES2995259 T3 ES 2995259T3 ES 20744659 T ES20744659 T ES 20744659T ES 20744659 T ES20744659 T ES 20744659T ES 2995259 T3 ES2995259 T3 ES 2995259T3
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Jian Sun
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Abstract

Un compuesto de fórmula (I), un método de preparación para el mismo, una composición farmacéutica que contiene un derivado del mismo y sus usos terapéuticos, especialmente la inhibición de la transducción de señales de PGE2/EP4 y sus usos para tratar el cáncer, el dolor agudo o crónico, la migraña, la osteoartritis, la artritis reumatoide, la gota, la bursitis, la espondilitis anquilosante, la dismenorrea primaria, el tumor o la arteriosclerosis. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Compuesto para inhibir la transducción de señales de PGE2/EP4, método de preparación para el mismo y usos médicos del mismo
Campo de la invención
La presente invención pertenece al campo de la medicina, y se refiere a un compuesto de fórmula (I) como se define en la reivindicación 1, un método para preparar el mismo, una composición farmacéutica que comprende el mismo, y un uso del mismo como agente terapéutico, especialmente un inhibidor de la transducción de señales de PGE2/EP4 en el tratamiento del cáncer y la enfermedad inflamatoria crónica.
Antecedentes de la invención
La prostaglandina E2 (PGE2) es uno de los productos principales producidos por la acción de la ciclooxigenasa (COX) sobre el ácido araquidónico. Es bien conocido que está implicado en muchas reacciones fisiológicas y patofisiológicas. La transducción de la señalización intracelular mediada por PGE2 depende de su unión a uno o más receptores específicos de prostaglandina E (EP1-4) en la célula diana, en la que estos receptores están acoplados a diferentes proteínas G. EP4 se expresa en una variedad de tejidos y células, incluyendo el sistema inmune, óseo y articular, cardiovascular, gastrointestinal y respiratorio, así como células cancerosas. El acoplamiento de EP4 con Ga puede activar la adenilato ciclasa (AC) y catalizar la formación del segundo mensajero AMPc. El papel principal del AMPc es unir y activar la proteína quinasa A (PKA), que a su vez fosforila proteínas diana en la célula. Además, EP4 también estimula la ruta no clásica de fosfatidilinositol 3 quinasa (PI3K)/proteína quinasa B (PKB, también conocida como Akt) para promover la supervivencia celular, y activa la quinasa reguladora extracelular (ERK) para promover la migración y la proliferación.
Cada vez más datos preclínicos apoyan el valor terapéutico potencial del antagonista del receptor 4 de prostaglandina E (EP4) en varias indicaciones. La mayoría de los datos científicos indican que los antagonistas selectivos de EP4 pueden ser un fármaco de alivio del dolor inflamatorio eficaz, y su tolerancia intestinal es superior a los NSAID e inhibidores de COX-2, que son los fármacos convencionales en la actualidad. Es importante destacar que los antagonistas de EP4 pueden lograr una mayor seguridad cardiovascular, ya que no interfieren directamente con la biosíntesis de prostaglandina E (PGE2) y otras prostaglandinas (tales como prostaciclina y tromboxano). Los antagonistas del receptor EP4 también pueden tener una aplicación terapéutica en el tratamiento de la migraña, ya que el receptor EP4 está implicado en la vasodilatación cerebral mediada por PGE2, que es un factor importante en la migraña.
La sobreexpresión de COX2 en varios tipos de tumores conduce a un nivel aumentado de PGE2, lo que indica que el bloqueo de la transducción de la señalización de PGE2 con antagonistas selectivos de EP4 durante el tratamiento del cáncer puede ser beneficioso para pacientes con cáncer. Se ha descrito que el receptor EP4 desempeña un papel importante en muchas enfermedades neurodegenerativas, tales como esclerosis múltiple y enfermedad de Alzheimer, en las que está implicado PGE2.
Los estudios han mostrado que la ruta de señalización de PGE2/EP4 está relacionada con la aparición de cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de próstata, cáncer de ovario, cáncer de vejiga, cáncer de hígado y similares. La activación de esta señal en cascada, el nivel elevado de PGE2 en el tumor o la sobreexpresión de EP4 puede inactivar las células inmunitarias antitumorales del huésped, potenciar la proliferación, migración y metástasis de células cancerosas, y promover la angiogénesis relacionada con tumores, promoviendo de este modo la progresión tumoral. Por otro lado, los ratones con inactivación génica de EP4 muestran tumorigénesis retardada en el contexto de la mutación de APCmin en comparación con ratones de tipo silvestre, lo que indica su actividad promotora de tumores.
Los antagonistas selectivos del receptor EP4 pueden inhibir la proliferación de células cancerosas inducida por PGE2 in vitro, y pueden ralentizar la progresión tumoral y la metástasis en diversos modelos tumorales preclínicos. Los antagonistas selectivos del receptor EP4 también bloquean la inducción de células supresoras derivadas de mieloides, restablecen la actividad de las células asesinas naturales y potencian la producción de citoquinas proinflamatorias (TNF-a) e IL-12 por las células mieloides y las células Th1. Estos datos indican que la inhibición de la transducción de la señalización de PGE2/EP4 puede tener valor terapéutico en el cáncer y otras enfermedades inflamatorias crónicas. Por lo tanto, es muy importante inventar nuevos compuestos que puedan bloquear la ruta de transducción de la señalización de PGE2/EP4 para satisfacer las necesidades médicas no satisfechas.
E7046 (es decir, ácido (S)-4-(1-(3-(difluorometil)-1-metil-5-(3-(trifluorometil)fenoxi)-1H-pirazol-4-carboxamido)etil)benzoico) es un antagonista del receptor EP4 desarrollado por Eisai. Cambia el microentorno tumoral actuando sobre el receptor EP4 para promover la función inmunitaria del cuerpo. Se ha demostrado que E7046 tiene una fuerte actividad anticancerosa y beneficio inmunitario en ensayos preclínicos in vitro e in vivo, y las terapias de combinación (por ejemplo, con radioterapia, inhibidores del punto de control inmunitario) pueden inhibir significativamente el crecimiento de una variedad de tumores. Se está realizando un ensayo clínico de fase Ib de E7046 en combinación con radioterapia y quimioterapia (documento WO2015179615A1 y Diana I. Albu et al., Oncoimmunology, 2017, 6(8): e1338239).
MF-766 (es decir, ácido 4-(1-(1-(4-(trifluorometil)bencil)-1H-indol-7-carboxamido)ciclopropil)benzoico) es un antagonista del receptor EP4 desarrollado por Merck para tratar el dolor agudo y crónico, osteoartritis, artritis reumatoide y cáncer (WO2008104055A1).
Las solicitudes de patente existentes relacionadas con antagonistas del receptor EP4 también incluyen, por ejemplo, EP2172447A4, US2018157113A1, WO2017066633A1, WO2017041323A1, WO2018084230A1, WO2018195123 A1 y similares. Todavía es necesario continuar desarrollando antagonistas del receptor EP4 con una alta potencia y selectividad debido a la enorme demanda del mercado.
Resumen de la invención
El objeto de la presente invención es proporcionar un compuesto que inhiba la transducción de la señalización de PGE2/EP4 con una actividad y selectividad elevadas. Con el fin de conseguir este objeto, el inventor ha realizado repetidamente estudios serios, y ha encontrado sorprendentemente un nuevo compuesto de fórmula (I) como se define
en la reivindicación 1 que contiene <o “ K r H>, completando de este modo la presente invención. La presente invención se refiere a un siguiente compuesto de fórmula (I):
o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero del mismo, o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde:
M1, M2, M3, M5, M6, y M7 son cada uno independientemente un átomo de N o C-R4;
M4 se selecciona del grupo que consiste en átomo de N y átomo de C;
el anillo A se selecciona del grupo que consiste en arilo C<6-10>y heteroarilo de 5 a 10 miembros;
Y se selecciona del grupo que consiste en un enlace, alquileno C<1-4>, -CR5R6-, -O-, -Oalquileno C<1-4>-, -NR9alquileno C<1>-<4>-, y -NR9-, en donde el alquileno C<1-4>está sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en átomo de H, átomo de D, halógeno, hidroxi, ciano, amino, nitro, alquilo C<1-4>, alcoxi C<1-4>, haloalquilo C<1-4>, haloalcoxi C<1-4>, hidroxialquilo C<1-4>, cicloalquilo C<3-6>, heterociclilo de 3 a 6 miembros, arilo C<6-10>y heteroarilo de 5 a 10 miembros;
R1 es alquilo C<1-4>, en donde el alquilo C<1-4>está sustituido opcionalmente con uno o más átomos de D;
R2 se selecciona del grupo que consiste en átomo de H, átomo de D y alquilo C<1-4>;
o R1 y R2 junto con el átomo al que están unidos forman un cicloalquilo C<3-6>, en donde el cicloalquilo C<3-6>está sustituido opcionalmente con uno o más átomos de D;
cada R3 es idéntico o diferente y cada uno se selecciona independientemente del grupo que consiste en átomo de H, átomo de D, halógeno, hidroxi, ciano, amino, nitro, alquilo C<1-4>, alcoxi C<1-4>, cicloalquilo C<3-6>, heterociclilo de 3 a 6 miembros, arilo C<6-10>, heteroarilo de 5 a 10 miembros, -C(O)R4, -C(O)OR4, -OC(O)NR7R8, -NR7C(O)OR4, -S(O)mR4, -NR7R8, y -C(O)NR7R8, en donde el alquilo C<1-4>, alcoxi C<1-4>, cicloalquilo C<3-6>, heterociclilo de 3 a 6 miembros, arilo C<6-10>y heteroarilo de 5 a 10 miembros están cada uno independientemente sustituidos opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo C<1-4>, hidroxialquilo C<1-4>, alcoxi C<1-4>, haloalquilo C<1-4>, haloalcoxi C<1-4>, halógeno, hidroxi, ciano, amino y nitro;
R4 se selecciona del grupo que consiste en átomo de H, átomo de D, halógeno, hidroxi, amino, alquilo C<1-4>, alcoxi C<1-4>, cicloalquilo C<3-6>, heterociclilo de 3 a 6 miembros, arilo C<6-10>y heteroarilo de 5 a 10 miembros, en donde el alquilo C<1-4>, alcoxi C<1-4>, cicloalquilo C<3-6>, heterociclilo de 3 a 6 miembros, arilo C<6-10>y heteroarilo de 5 a 10 miembros están cada uno independientemente sustituidos opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo C<1-4>, hidroxialquilo C<1-4>, alcoxi C<1-4>, haloalquilo C<1-4>, haloalcoxi C<1-4>, halógeno, hidroxi, ciano, amino y nitro;
R5 y R6 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en átomo de H, átomo de D, alquilo C<1-4>, cicloalquilo C<3-6>, heterociclilo de 3 a 6 miembros, arilo C<6-10>y heteroarilo de 5 a 10 miembros, en donde el alquilo C<1-4>, cicloalquilo C<3-6>, heterociclilo de 3 a 6 miembros, arilo C<6-10>y heteroarilo de 5 a 10 miembros están cada uno independientemente sustituidos opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo C<1-4>, hidroxialquilo C<1-4>, alcoxi C<1-4>, haloalquilo C<1-4>, haloalcoxi C<1-4>, halógeno, hidroxi, ciano, amino y nitro; o, R5 y R6 junto con el átomo al que están unidos forman un cicloalquilo C<3-6>o heterociclilo de 3 a 6 miembros, en donde el cicloalquilo C<3-6>y heterociclilo de 3 a 6 miembros están cada uno independientemente sustituidos opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno, hidroxi, ciano, amino, nitro, alquilo C<1-4>, alcoxi C<1-4>, haloalquilo C<1-4>, haloalcoxi C<1-4>, hidroxialquilo C<1-4>, cicloalquilo C<3-6>, heterociclilo de 3 a 6 miembros, arilo C<6-10>y heteroarilo de 5 a 10 miembros;
R7 y R8 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en átomo de H, átomo de D, alquilo C<1-4>, haloalquilo C<1-4>, cicloalquilo C<3-6>, heterociclilo de 3 a 6 miembros, arilo C<6-10>y heteroarilo de 5 a 10 miembros, en donde el alquilo C<1-4>, haloalquilo C<1-4>, cicloalquilo C<3-6>, heterociclilo de 3 a 6 miembros, arilo C<6-10>y heteroarilo de 5 a 10 miembros están cada uno independientemente sustituidos opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo C<1-4>, hidroxialquilo C<1-4>, alcoxi C<1-4>, haloalquilo C<1-4>, haloalcoxi C<1-4>, halógeno, hidroxi, ciano, amino y nitro;
R9 se selecciona del grupo que consiste en átomo de H, átomo de D y alquilo C<1-4>, en donde el alquilo C<1-4>está sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en hidroxialquilo C<1>-<4>, alcoxi C<1-4>, haloalquilo C<1-4>, haloalcoxi C<1-4>, halógeno, hidroxi, ciano, amino y nitro;
m es 0, 1 ó 2; y n es 0, 1, 2, 3 ó 4.
En una realización preferida, el compuesto de fórmula (I) es un compuesto de fórmula (II):
en donde M1, M3, M5 y M6 son cada uno independientemente un CH o C-halógeno, M2 es un C-R4 o átomo de N, M7 es un átomo de N, M4 es un átomo de C, y el anillo A, R1, R2, R3, R4, X, Y y n son como se definen en la fórmula (I).
En otra realización preferida, en el compuesto de fórmula (I), Y es un alquileno C<1-4>, y preferiblemente metileno.
En otra realización preferida, en el compuesto de fórmula (I), R1 y R2 son iguales o diferentes y se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en átomo de H, átomo de D y alquilo C<1-4>; o, R1 y R2 junto con el átomo al que están unidos forman un cicloalquilo C<3-6>y preferiblemente ciclopropilo.
En otra realización preferida, el compuesto de fórmula (I) es un compuesto de fórmula (III):
o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero del mismo, o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde:
R1 y R2 son iguales o diferentes y se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en átomo de H, átomo de D y alquilo C<1-4>; o, R1 y R2 junto con el átomo al que están unidos forman un cicloalquilo C<3-6>, y preferiblemente ciclopropilo;
M2 es un átomo de N o C-R4;
R4 se selecciona del grupo que consiste en átomo de H, átomo de D y halógeno; y
X, anillo A, R3 y n son como se definen en la fórmula (I).
En otra realización preferida, en el compuesto de fórmula (I), el anillo A se selecciona del grupo que consiste en fenilo, piridilo, quinolinilo, benzofuranilo, pirazol, isoxazol, benzoxazol y benzotiazol.
En otra realización preferida, en el compuesto de fórmula (I), cada R3 es idéntico o diferente y cada uno se selecciona independientemente del grupo que consiste en átomo de H, átomo de D, halógeno, alquilo C<1-4>, fluoroalquilo C<1-4>, fenilo, fenilo sustituido con hidroxialquilo C<1-4>, morfolinilo, piridilo, pirazolilo, pirazolilo sustituido con alquilo C<1-4>, pirazolilo sustituido con hidroxialquilo C<1-4>, ciclopropilo, isoxazolilo y piperidinilo.
Los compuestos típicos de la presente invención incluyen, pero no se limitan a:
o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero del mismo, o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
El compuesto de la presente invención puede prepararse mediante diversos métodos conocidos para preparar dicho compuesto, por ejemplo, los mostrados en los siguientes esquemas de reacción.
Los siguientes esquemas de reacción ilustran el método para preparar el compuesto de fórmula (I).
Esquema de reacción 1: Un método para preparar el compuesto de fórmula (I)
en donde:
Z = Cl, Br o I; y
R es un alquilo C<1-4>, y preferiblemente metilo; y
M1 a M7, anillo A, X, Y, R1, R2, R3 y n son como se definen en la fórmula (I).
Etapa 1: En esta etapa de reacción, un compuesto de fórmula (I-B) se puede obtener hidrolizando un compuesto de fórmula (I-A) en un disolvente en condiciones alcalinas. La reacción de hidrólisis se puede llevar a cabo en condiciones convencionales: en una situación típica, la reacción se lleva a cabo en condiciones alcalinas, por ejemplo, en presencia de hidróxido sódico, hidróxido potásico o hidróxido de litio. El disolvente seleccionado incluye metanol, etanol, propanol, butanol, 2-metoxietano, 1,4-dioxano, etilenglicol, tetrahidrofurano y 1,2-dimetoxi-etano. La temperatura de reacción puede ser de 0 a 100 °C, normalmente de 20 °C a 60 °C, y la duración de la reacción es de 60 minutos a 10 horas.
Etapa 2: El compuesto de fórmula (I-B) y un compuesto de fórmula (I-C) se someten a una reacción de condensación en un disolvente inerte en presencia de un agente de condensación para obtener un compuesto de fórmula (I-D). Preferiblemente, el agente de condensación se selecciona del grupo que consiste en hexafluorofosfato de 2-(7-azabenzotriazol-1 -il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU), 1 -etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDCI), hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, N,N'-diciclohexilcarbodiimida, N,N’-diisopropilcarbodiimida, tetrafluoroborato de O-(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N-tetrametiluronio, 1-hidroxibenzotriazol, 1-hidroxi-7-azobenzotriazol, hexafluorofosfato de 0-(benzotriazol-1 -il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio, hexafluorofosfato de 2-(7-azobenzotriazol)-N,N,N',N'-tetrametiluronio, hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitris(dimetilamino)fosfonio y hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il-oxitripirrolidinofosfonio, y lo más preferiblemente hexafluorofosfato de 2-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU) y 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDCI). El disolvente inerte se selecciona del grupo que consiste en dimetilformamida, dimetilacetamida, N-metilpirrolidona, dimetilsulfóxido, tetrahidrofurano, dimetoxietano o una mezcla de los mismos. La temperatura de reacción puede ser de 0 a 50 °C, y la duración de la reacción es de 10 horas a 24 horas.
Etapa 3: En esta etapa de reacción, el compuesto de fórmula (I) se puede obtener hidrolizando el compuesto de fórmula (I-D) en un disolvente en condiciones alcalinas. Las condiciones de reacción son las mismas que en la etapa 2.
Esquema de reacción 2: Método I para preparar el compuesto intermedio de fórmula (I-A)
en donde:
Z = Cl, Br o I; y R es un alquilo C<1-4>, y preferiblemente metilo; y
M1 a M7, anillo A, Y, R3 y n son como se definen en la fórmula (I).
En esta etapa de reacción, un compuesto de fórmula (I-1) y un compuesto de fórmula (I-2) se hacen reaccionar en un disolvente inerte en presencia de un álcali para obtener el compuesto de fórmula (I-A). Preferiblemente, el álcali se selecciona del grupo que consiste en ferc-butóxido de potasio, ferc-butóxido de sodio, ferc-butóxido de litio, hidruro de sodio, hidruro de potasio, etóxido de sodio y etóxido de potasio; y el disolvente inerte se selecciona del grupo que consiste en dimetilformamida, dimetilacetamida, N-metilpirrolidona, dimetilsulfóxido, tetrahidrofurano, dimetoxietano o una mezcla de los mismos. La temperatura de reacción puede ser de 0 a 100 °C, normalmente de 20 °C a 60 °C, y la duración de la reacción es de 60 minutos a 10 horas.
Esquema de reacción 3: Método II para preparar el compuesto intermedio de fórmula (I-A)
en donde:
Z = Cl, Br o I; y R es un alquilo C<1-4>, y preferiblemente metilo; y
M1 a M7, anillo A, Y, R3 y n son como se definen en la fórmula (I).
Etapa 1: En esta etapa de reacción, un compuesto de fórmula (I-1) se hace reaccionar con un compuesto de fórmula (I-3) en un disolvente inerte en presencia de un álcali para obtener un compuesto de fórmula (I-4). Las condiciones de reacción son las mismas que en la etapa 1A.
Etapa 2: En esta etapa de reacción, el compuesto de fórmula (I-4) se hace reaccionar con óxido de carbono en metanol o etanol en presencia de un catalizador de paladio, ligando y álcali orgánico para obtener el compuesto de fórmula (I-A). Preferiblemente, el catalizador de paladio se selecciona del grupo que consiste en acetato de paladio, acetilacetonato de paladio (II), propionato de paladio (II), tetraquis(trifenilfosfina)paladio, cloruro de [1,2-bis(diciclohexilfosfino)etano]paladio (II) y bis(diciclohexilfosfino)paladio (0), y el ligando se selecciona del grupo que consiste en trifenilfosfina, 1,2-bis(difenilfosfino)etano, di-ferc-butilneopentilfosfina, bis(2-difenilfosfinoetil)fenilfosfina, 1,2-bis(diciclohexilfosfino)etano, tBuBrettPhos y ((2,4,6-triisopropil)fenil)diciclohexilfosfina. La temperatura de reacción puede ser de 60 a 120 °C, y la duración de la reacción es de 24 horas a 48 horas.
La presente invención también se refiere a una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de fórmula (I) como se ha definido anteriormente en la presente memoria, o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero del mismo, o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y vehículo(s), diluyente(s) o excipiente(s) farmacéuticamente aceptable(s).
La presente invención también se refiere al compuesto de fórmula (I), o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero del mismo, o una mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o la composición farmacéutica que comprende el mismo, para su uso como un medicamento. La presente invención también se refiere al compuesto de fórmula (I), o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero del mismo, o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o la composición farmacéutica que comprende el mismo, para su uso en el tratamiento de una enfermedad mediante la inhibición de la transducción de la señalización de PGE2/EP4.
La presente invención también se refiere al compuesto de fórmula (I), o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero del mismo, o una mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o la composición farmacéutica que comprende el mismo, para su uso en el tratamiento del cáncer, en donde el cáncer se selecciona preferiblemente del grupo que consiste en cáncer de mama, cáncer de cuello uterino, cáncer colorrectal, cáncer endometrial, glioblastoma, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de riñón, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, meduloblastoma, cáncer de ovario, cáncer pancreático, cáncer de próstata, cáncer de piel y cáncer uretral.
La presente invención también se refiere al compuesto de fórmula (I), o el tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero del mismo, o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, o la composición farmacéutica que comprende el mismo, para su uso en el tratamiento del dolor agudo o crónico, migraña, osteoartritis, artritis reumatoide, gota, bursitis, espondilitis anquilosante, dismenorrea primaria, cáncer o arteriosclerosis.
El compuesto o composición farmacéutica, que comprende además opcionalmente un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en anticuerpo anti-CTLA4, anticuerpo anti-PDL1 y anticuerpo anti-PD1, según la presente invención se puede administrar por vía oral, sublingual, intraperitoneal, parenteral, subcutánea, intramuscular, intravenosa, transdérmica, local o rectal. En la composición farmacéutica de la presente invención, para administración oral, sublingual, parenteral, subcutánea, intramuscular, intravenosa, transdérmica, local o rectal, el ingrediente activo puede mezclarse con un vehículo farmacéutico convencional, y administrarse a animales o seres humanos en formas unitarias de administración. Las formas unitarias de administración adecuadas incluyen formas orales, tales como comprimidos, cápsulas de gel, polvos, gránulos y soluciones o suspensiones orales, formas sublinguales o bucales para la administración, formas de administración parenterales, subcutáneas, intramusculares, intravenosas, intranasales o intraoculares y formas de administración rectales.
Cuando se prepara una composición sólida en forma de comprimidos, el ingrediente activo principal se mezcla con un vehículo farmacéutico, tal como gelatina, almidón, lactosa, estearato de magnesio, talco, goma arábiga y similares. Los comprimidos pueden recubrirse con sacarosa u otros materiales adecuados, o bien tratarse de tal manera que tengan una actividad extendida o retardada y liberen continuamente una cantidad predeterminada de ingrediente activo.
Se puede obtener una preparación de cápsulas de gel mezclando el ingrediente activo con un diluyente seguido de vertido de la mezcla resultante en cápsulas blandas o duras.
Una preparación en forma de jarabe o elixir puede comprender el ingrediente activo en combinación con un agente edulcorante, conservante, así como un agente productor de sabor y colorante apropiado.
Los polvos o gránulos dispersables en agua pueden comprender el ingrediente activo mezclado junto con agentes dispersantes, agentes humectantes o agentes de suspensión, así como correctores del sabor o agentes edulcorantes.
Se usan supositorios para la administración rectal, que se preparan con agentes aglutinantes que se funden a la temperatura rectal tales como manteca de cacao o polietilenglicoles.
La suspensión acuosa, solución salina isotónica o solución inyectable estéril (que comprende agentes dispersantes y/o agentes humectantes farmacológicamente compatibles) se usa para administración parenteral, intranasal o intraocular.
El ingrediente activo también puede formularse como microcápsulas, posiblemente con uno o más vehículos aditivos.
El compuesto de la presente invención puede administrarse a una dosis entre 0,01 mg y 1.000 mg al día, y administrarse en una dosis única al día o en varias dosis a lo largo del día, por ejemplo, dos veces al día en dosis iguales. La dosis diaria administrada está ventajosamente comprendida entre 0,1 mg y 1.000 mg, y aún más ventajosamente entre 2,5 mg y 200 mg. Puede ser necesario administrar dosis que excedan estos intervalos, de los que los expertos en la técnica serán conscientes por sí mismos.
En una realización particular de la presente invención, la composición farmacéutica también puede formularse para administración tópica. Puede introducirse en formas comúnmente conocidas para este tipo de administración (es decir, especialmente loción, espuma, gel, dispersión, pulverización) y tales formas comprenden excipientes que permiten particularmente la penetración de la piel para mejorar las propiedades y accesibilidad del ingrediente activo. Además de la composición según la presente invención, estas composiciones típicamente comprenden además un medio fisiológicamente aceptable, que generalmente contiene agua o un disolvente tal como un alcohol, éter o etilenglicol. La composición también puede comprender agentes tensioactivos, conservantes, estabilizantes, emulsionantes, espesantes, otros ingredientes activos que producen un efecto complementario o un efecto posiblemente sinérgico, elementos traza, aceites esenciales, perfumes, colorantes, colágeno, filtros químicos o minerales.
Definiciones
A menos que se indique lo contrario, los términos usados en la memoria descriptiva y las reivindicaciones tienen los significados descritos a continuación.
Dentro del significado de la presente invención, el término "estereoisómero" se refiere a un isómero geométrico (o isómero de configuración) o isómero óptico.
El "isómero geométrico" resulta de la diferente posición de los sustituyentes en un doble enlace que puede tener entonces una configuración Z o E, también denominada configuración cis o trans.
El "isómero óptico" resulta en particular de la diferente posición espacial de los sustituyentes en un átomo de carbono que comprende cuatro sustituyentes diferentes. Este átomo de carbono constituye entonces un centro quiral o centro asimétrico. Los isómeros ópticos incluyen diastereómeros y enantiómeros. Los isómeros ópticos que son imágenes especulares no superponibles entre sí se denominan "enantiómeros". Los isómeros ópticos que no son imágenes especulares superponibles entre sí se denominan "diastereómeros".
Una mezcla que contiene cantidades iguales de dos formas enantioméricas individuales de quiralidad opuesta se denomina una "mezcla racémica".
Dentro del significado de la presente invención, el término "tautómero" se refiere a un isómero constitucional del compuesto obtenido por prototropía (es decir, por migración de un átomo de hidrógeno y cambio de ubicación de un doble enlace). Los diferentes tautómeros de un compuesto son generalmente interconvertibles y están presentes en equilibrio en solución, en proporciones que pueden variar dependiendo del disolvente usado, la temperatura o el pH.
Dentro del significado de la presente invención, se entiende por "farmacéuticamente aceptable" aquel que es útil en la preparación de una composición farmacéutica que es generalmente segura, no tóxica, y ni indeseable biológicamente ni de otro modo y que es aceptable para uso farmacéutico veterinario y humano.
Dentro del significado de la presente invención, se entiende que la "sal farmacéuticamente aceptable" de un compuesto se refiere a sales, que son farmacéuticamente aceptables, como se define en la presente memoria, y que poseen la actividad farmacológica deseada del compuesto parental. Tales sales incluyen:
(1) sales de adición de ácido formadas con ácidos inorgánicos, tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico y similares; o sales de adición de ácido formadas con ácidos orgánicos, tales como ácido acético, ácido bencenosulfónico, ácido benzoico, ácido canforsulfónico, ácido cítrico, ácido etilsulfónico, ácido fumárico, ácido glucoheptónico, ácido glucónico, ácido glutámico, ácido glicólico, ácido hidroxinaftoico, ácido 2-hidroxiletilsulfónico, ácido láctico, ácido maleico, ácido málico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido mucónico, ácido 2-naftalenosulfónico, ácido propiónico, ácido salicílico, ácido succínico, ácido dibenzoil-L-tartárico, ácido tartárico, ácido p-toluenosulfónico, ácido trimetilacético, ácido trifluoroacético y similares; y
(2) sales formadas cuando un protón ácido presente en el compuesto parental se reemplaza por un ion metálico tal como un ion de metal alcalino (por ejemplo, Na+, K+ o Li+), un ion de metal alcalinotérreo (por ejemplo, Ca2+ o Mg2+), o un ion de aluminio; o se coordina con una base orgánica o base inorgánica. Las bases orgánicas aceptables incluyen dietanolamina, etanolamina, N-metilglucamina, trietanolamina, trometamina y similares. Las bases inorgánicas aceptables incluyen hidróxido de aluminio, hidróxido de calcio, hidróxido de potasio, carbonato de sodio e hidróxido de sodio.
Dentro del significado de la presente invención, el término "halógeno" se refiere a un átomo de flúor, bromo, cloro o yodo.
El término "alquilo C<1-4>” se refiere a una cadena hidrocarbonada saturada, lineal o ramificada que comprende de 1 a 4 átomos de carbono. Los ejemplos representativos incluyen los grupos metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, /'sobutilo, sec-butilo, y terc-butilo.
El término "alquileno C<1-4>” se refiere a una cadena hidrocarbonada divalente que comprende de 1 a 4 átomos de carbono. Los ejemplos representativos incluyen -CH<2>-, -CH<2>-CH<2>-, -CH<2>-CH<2>-CH<2>-, y -CH<2>-CH<2>-CH<2>-CH<2>-.
El término "alcoxi C<1-4>” se refiere a un grupo -O-(alquilo C<1-4>), en donde el alquilo C<1-4>es como se ha definido anteriormente. Los ejemplos representativos incluyen metoxi, etoxi, propiloxi y butoxi.
El término "haloalquilo C<1-4>” se refiere a un grupo alquilo C<1-4>sustituido con uno o más halógenos, en donde el alquilo C<1-4>y el halógeno son como se han definido anteriormente.
El término "haloalcoxi C<1-4>” se refiere a un grupo alcoxi C<1-4>sustituido con uno o más halógenos, en donde el alcoxi C<1-4>y el halógeno son como se han definido anteriormente.
El término "hidroxialquilo C<1-4>” se refiere a un grupo alquilo C<1-4>sustituido con hidroxi(s), en donde el alquilo es como se ha definido anteriormente.
El término "cicloalquilo C<3-6>” se refiere a un sistema hidrocarbonado monocíclico saturado o parcialmente insaturado que tiene de 3 a 6 átomos de carbono. Los ejemplos representativos incluyen ciclohexilo, ciclopentilo, ciclobutilo, ciclopropilo y ciclohexenilo.
El término "heterociclilo de 3 a 6 miembros" se refiere a un sistema hidrocarbonado monocíclico saturado o parcialmente insaturado que tiene de 3 a 6 átomos en el anillo, en donde de 1 a 3 átomos en el anillo son heteroátomos seleccionados del grupo que consiste en N, O y S(O)m (en donde m es 0, 1 ó 2). Los ejemplos representativos incluyen pirrolidinilo, imidazolilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, tetrahidrotienilo, dihidroimidazolilo, dihidrofuranilo, dihidropirazolilo, dihidropirrolilo, piperidinilo, piperazinilo y morfolinilo.
El término "arilo C<6-10>” se refiere a un anillo monocíclico todo carbono de 6 a 10 miembros o un anillo condensado policíclico (es decir, cada anillo en el sistema comparte un par adyacente de átomos de carbono con otro anillo en el sistema) que tiene un sistema de electrones n conjugados, por ejemplo, fenilo y naftilo, más preferiblemente un fenilo. El anillo arilo puede estar condensado con el anillo de heteroarilo, heterociclilo o cicloalquilo, en donde el anillo unido a la estructura parental es el anillo arilo. Los ejemplos representativos incluyen:
El término "heteroarilo de 5 a 10 miembros" se refiere a un sistema heteroaromático de 5 a 10 miembros que tiene de 1 a 4 heteroátomos seleccionados del grupo que consiste en oxígeno, azufre y nitrógeno. El heteroarilo de 5 a 10 miembros es preferiblemente un heteroarilo de 5 o 6 miembros que tiene de 1 a 2 heteroátomos, por ejemplo, quinolinilo, imidazolilo, furilo, tienilo, tiazolilo, pirazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, pirrolilo, tetrazolilo, piridilo, pirimidinilo, tiadiazol, pirazinilo y similares. El anillo heteroarilo puede estar condensado con el anillo de arilo, heterociclilo o cicloalquilo, en donde el anillo unido a la estructura parental es el anillo heteroarilo. Los ejemplos no limitantes de los mismos incluyen:
El término "hidroxi" se refiere a un grupo -OH. El término "nitro" se refiere a un grupo -NO<2>. El término "amino" se refiere a un grupo -NH<2>. El término "ciano" se refiere a un grupo -CN. El término "un enlace" se refiere a un enlace covalente representado por "-".
"Opcional" u "opcionalmente" significa que el evento o circunstancia descrito posteriormente puede ocurrir, pero no necesariamente, y tal descripción incluye la situación en la que el evento o circunstancia ocurre o no. Por ejemplo, "el heterociclilo sustituido opcionalmente con un alquilo" significa que un grupo alquilo puede estar presente, pero no necesariamente, y tal descripción incluye la situación de que el heterociclilo esté sustituido con un alquilo y el heterociclilo no esté sustituido con un alquilo.
"Sustituido" se refiere a uno o más átomos de hidrógeno en un grupo, preferiblemente hasta 5, y más preferiblemente 1 a 3 átomos de hidrógeno, sustituidos independientemente con un número correspondiente de sustituyentes. Se entiende que los sustituyentes solo existen en su posición química posible. El experto en la técnica puede determinar sin un esfuerzo excesivo si la sustitución es posible o imposible mediante experimentos o teoría. Por ejemplo, la combinación de amino o hidroxi que tiene átomos de hidrógeno y carbono libres que tienen enlaces insaturados (tales como olefínicos) puede ser inestable.
Una "composición farmacéutica" se refiere a una mezcla de uno o más de los compuestos según la presente invención o sales o profármacos fisiológicamente/farmacéuticamente aceptables de los mismos con otros componentes químicos, y otros componentes tales como vehículos y excipientes fisiológicamente/farmacéuticamente aceptables. El propósito de la composición farmacéutica es facilitar la administración de un compuesto a un organismo, que conduce a la absorción del ingrediente activo para mostrar actividad biológica.
El término "anticuerpo" como se usa en la presente memoria incluye todos los tipos de inmunoglobulinas, incluyendo IgG, IgM, IgA, IgD e IgE, o fragmentos de las mismas, que pueden aplicarse a la medicina usada en la presente memoria. El anticuerpo puede ser un anticuerpo monoclonal o un anticuerpo policlonal, y puede ser de una especie de cualquier origen, incluyendo, por ejemplo, ratón, rata, conejo, caballo o ser humano. Los fragmentos de anticuerpo que retienen la especificidad por la proteína o epítopo tal como CTLA4, PDL1 o PD1, que se combinan con los anticuerpos usados en la presente invención, también se incluyen en el alcance del término "anticuerpo". Estos fragmentos pueden producirse mediante técnicas conocidas. El anticuerpo puede ser quimérico o humanizado, especialmente cuando se usa para fines terapéuticos.
El término "anticuerpo contra CTLA4" o "anti-CTLA4" se refiere a un anticuerpo contra el antígeno 4 de linfocitos T citotóxicos (CTLA4). Los anticuerpos ejemplares incluyen anticuerpos antagonistas de CTLA4 o anticuerpos contra CTLA4, tales como Ipilimumab (Bristol-Myers Squibb) y Tremelimumab (Pfizer).
El término "anticuerpo contra PDL1" o "anti-PDL1" se refiere a un anticuerpo contra el ligando 1 de muerte programada (PDL1). Los anticuerpos ejemplares incluyen Atezolizumab (Roche), Durvlumab (AstraZeneca), BMS-936559, CK-301 (Check Point Therapeutics), KN035 (Alphamab Oncology), BGB-A333 (BeiGene), CS1001 (Cstone Pharmaceuticals), HLX20 (Henlius Biotech), KL-A167 (Kelun Biotech), f520 (New Era Pharmaceutical), GR1405 (Zhixiang Jintai) y MSB2311 (MabSpace).
El término "anticuerpo contra PD1" o "anti-PD1" se refiere a un anticuerpo contra la proteína 1 de muerte programada (PD1). Los anticuerpos ejemplares incluyen nivolumab (Bristol-Myers Squibb), laborolizumab (Merck), pembrolizumab (Merck Sharp & Dohme), Avelumab (Merck/Pfizer), Pidilizumab (Medivation), AMP-224, AMP-514 (GlaxoSmithKline), Spartalizumab (Novartis), Cemiplimab (nombre comercial Libtayo, Sanofi/Regeneron), Toripalimab (Junshi), Sintilimab (Innovent), Camrelizumab (Hengrui), Tislelizumab (BeiGene), GLS-010 (Gloria Pharmaceuticals), GB226 (Genor Biopharma), CS1003 (Cstone Pharmaceuticals), bAt -1306 (Bio-Thera), HX008 (Hanzhong/Hansi/Akeso), AK105 (Akeso), LZM009 (Livzon Pharm), HLX10 (Henlius Biotech).
Descripción de los dibujos
La Figura 1 muestra el efecto de diferentes dosis del compuesto 6 y E7046 sobre el crecimiento tumoral en el modelo de cáncer colorrectal CT-26.
La Figura 2 muestra el efecto de diferentes dosis del compuesto 6 y E7046 sobre el peso corporal del ratón en el modelo de cáncer colorrectal CT-26.
La Figura 3 muestra el efecto de diferentes dosis del compuesto 6 y anticuerpo anti-PD-1 sobre el crecimiento tumoral cuando se administran solos o en combinación en el modelo de cáncer colorrectal CT-26.
La Figura 4 muestra el efecto de diferentes dosis del compuesto 6 y anticuerpo anti-PD-1 sobre el peso corporal del ratón cuando se administran solos o en combinación en el modelo de cáncer colorrectal CT-26.
La Figura 5 muestra el efecto de diferentes dosis del compuesto 6 y anticuerpo anti-PD-1 sobre el crecimiento tumoral cuando se administran solos o en combinación en el modelo de cáncer de mama EMT-6.
La Figura 6 muestra el efecto de diferentes dosis del compuesto 6 y anticuerpo anti-PD-1 sobre el peso corporal del ratón cuando se administran solos o en combinación en el modelo de tumor de cáncer de mama.
Descripción detallada de la invención
Mediante la lectura de los siguientes ejemplos, el experto en la técnica comprenderá mejor la presente invención.
En los ejemplos de la presente invención, los métodos experimentales que no especifican las condiciones específicas se llevan a cabo generalmente según las condiciones convencionales, o según las condiciones recomendadas por los fabricantes de los materiales o productos. Los reactivos sin una fuente específica son reactivos convencionales disponibles comercialmente.
Las estructuras de los compuestos se identificaron mediante resonancia magnética nuclear (RMN) y/o espectrometría de masas (MS). Los desplazamientos de RMN (5) se dan en 10-6 (ppm). El disolvente para la determinación fue cloroformo deuterado (CDCl<3>), dimetilsulfóxido deuterado (DMSO-d6), metanol deuterado (CD<3>DO) o acetonitrilo deuterado (CD<3>CN). El estándar interno fue tetrametilsilano (TMS). Se usan las siguientes abreviaturas: s para singlete, bs para singlete ancho, d para doblete, t para triplete, q para cuartete, m para multiplete o masivo, dd para doble de doblete, etc.
Cromatógrafo de líquidos-espectrómetro de masas: SHIMADZU LCMS-2020, columna: Kinetex® 5 gm x 30x2,1 mm S/N: H17-247175, temperatura de la columna: 50,0 °C, fase móvil: A: agua (TFA al 0,0375 %), B: acetonitrilo (TFA al 0,01875 %), modo de ionización: ESI, polaridad: positivo.
Elución en gradiente
Espectrómetro de resonancia magnética nuclear: espectrómetro de masas de alta resolución Bruker ARX-500 y espectrómetro de masas de alta resolución Bruker ARX-400. Instrumento de detección de MTT: Lector de microplaca de longitud de onda completa Thermo Scientific Multiskan GO.
Se usa una placa de gel de sílice Qingdao GF254 como placa de cromatografía de gel de sílice de capa fina (TLC). La dimensión de la placa de gel de sílice utilizada en la TLC es de 0,15 mm a 0,2 mm, y la dimensión de la placa de gel de sílice usada en la purificación del producto es de 0,4 mm a 0,5 mm. Generalmente, se usa gel de sílice de malla 200 a 300 de Yantai Huanghai como vehículo para la cromatografía en columna.
A menos que se indique lo contrario, las reacciones se llevaron a cabo en atmósfera de argón o atmósfera de nitrógeno. A menos que se indique lo contrario, la solución en la reacción se refiere a una solución acuosa. A menos que se indique lo contrario, la temperatura de la reacción es temperatura ambiente.
El proceso de reacción en los ejemplos se monitorizó mediante cromatografía en capa fina (TLC).
Abreviaturas comunes
E jem plos
Ejemplo 1: Ácido 3-(1-(1-(4-(trifluorometil)bencil)-1 H-indol-7-carboxamido)ciclopropil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico 1
Etapa 1: Preparación de 1-(4-(trifluorometil)bencil)-1H-indol-7-carboxilato de metilo 1-2
Se disolvieron 1H-indol-7-carboxilato de metilo 1-1 (5,00 g, 28,5 mmoles) y 1-(bromometil)-4-(trifluorometil)benceno (7,75 g, 32,4 mmoles, 5 ml) en DMF (130 ml), seguido de la adición lenta de NaH (1,26 g, 31,3 mmoles, pureza: 60 %) en un baño de hielo. La mezcla resultante se agitó durante 3 horas, seguido de la retirada del baño de hielo. La mezcla resultante se agitó a 20 °C durante 6 horas. La TLC (éter de petróleo/acetato de etilo = 5/1) mostró que la materia prima (Rf = 0,40) se consumió completamente, y se formó un nuevo punto principal (Rf = 0,5). La mezcla de reacción se inactivó después con solución acuosa saturada de NH4Cl (100 ml) y después se extrajo con acetato de etilo (100 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera (200 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró. El residuo resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (ISCO®; columna de gel de sílice 20 g SepaFlash®, gradiente de eluyente acetato de etilo al 0~3 %/éter de petróleo) para obtener el compuesto 1-2 (6,50 g, 18,7 mmoles, rendimiento: 65,5 %) como un sólido de color amarillo. MS (ESI): 334,1 [M+1]+.
Etapa 2: Preparación de ácido 1-(4-(trifluorometil)bencil)-1H-indol-7-carboxílico 1-3
Se añadió una solución acuosa de KOH (2 M, 45 ml) a una solución del compuesto 1-2 (3,00 g, 9,00 mmoles) en metanol (45 ml) y tetrahidrofurano (45 ml). La mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 12 horas. La LCMS mostró que el material de partida se consumió completamente, y se detectó un pico de peso molecular del producto deseado (Rt = 0,948 min). La mezcla de reacción se concentró después a 45 °C para eliminar la mayor parte del metanol y el tetrahidrofurano, se acidificó con ácido clorhídrico acuoso 1 N a pH~6-7, se lavó con ácido clorhídrico 1 N y se extrajo con acetato de etilo (100 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró para obtener el compuesto 1-3 (2,20 g, 6,89 mmoles, rendimiento: 76,5 %) como un sólido de color amarillo. MS (ESI): 320,1 [M+1]+.
Método general para preparar 3-(1-aminociclopropil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metilo A-1
Se añadió tetraisopropóxido de titanio (29,8 g, 99,7 mmoles, 31 ml, pureza: 95 %) a una solución de 3-cianobiciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metilo (22,5 g, 99,2 mmoles) en tolueno (240 ml) en una atmósfera de nitrógeno a -20 °C. Se añadió gota a gota EtMgBr (3 M, 60 ml) en 30 minutos en una atmósfera de nitrógeno a -20 °C, y la temperatura se mantuvo entre -20 ~ -10 °C. Después de agitar durante 30 minutos, se añadió gota a gota BF3-Et2O (27,6 g, 194 mmoles, 24 ml). La mezcla de reacción se agitó a -20 °C durante 30 minutos y después a 25 °C durante 12 horas. La TLC (placa 1: éter de petróleo/acetato de etilo = 3/1) mostró que la materia prima (Rf = 0,61) se consumió completamente, y la TLC (placa 2: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/1) mostró que se formó un producto principal (Rf = 0,24). La mezcla de reacción se inactivó añadiendo lentamente ácido clorhídrico acuoso (1 N, 30 ml) a 0 °C, y después la capa orgánica separada se desechó. La fase acuosa se basificó a pH~12 con solución acuosa 10 M de hidróxido sódico a 0 °C y se extrajo con acetato de etilo (200 ml x 2). La capa orgánica combinada se concentró y el residuo resultante se purificó por cromatografía en columna (sílice, éter de petróleo/acetato de etilo = 20/1 a 1/1) para obtener el compuesto A-1 (3,9 g, 21,7 mmoles, rendimiento: 21,9 %) como un sólido de color amarillo. MS (ESI): 182,3 [M+1]+.
Etapa 3: Preparación de 3-(1-(1-(4-(trifluorometil)bencil)-1H-indol-7-carboxamido)ciclopropil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metilo 1-4
Se añadió DIPEA (742 mg, 5,74 mmoles, 1,0 ml) a una solución del compuesto 1-3 (0,65 g, 2,04 mmoles), compuesto A-1 (378 mg, 2,09 mmoles) y HATU (814 mg, 2,14 mmoles) en DMF (5 ml). La mezcla resultante se agitó durante 8 horas en una atmósfera de nitrógeno a 20 °C. La LCMS mostró que el compuesto de partida 1-3 se consumió, y se detectó un pico de peso molecular principal del producto deseado (Rt = 0,947 min). La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (40 ml) y se lavó con salmuera (50 ml x 2). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna (sílice, éter de petróleo/acetato de etilo = 100/1 a 3/1, Rf = 0,40) para obtener el compuesto 1-4 (0,70 g, producto bruto) como un sólido blanco. MS (ESI): 483,1 [M+1]+.
Etapa 4: Preparación de ácido 3-(1-(1-(4-(trifluorometil)bencil)-1H-indol-7-carboxamido)ciclopropil) biciclo[1.1.1 ]pentano-1 -carboxílico 1
Se añadió LiOHH<2>O (4 M, 1 ml) a una solución del compuesto 1-4 (0,70 g, 1,50 mmoles) en etanol (10 ml). La mezcla resultante se agitó a 65 °C durante 24 horas. La LCMS mostró que la materia prima se consumió completamente, y se detectó un pico de peso molecular principal del producto deseado. La mezcla de reacción se concentró a 50 °C para eliminar la mayor parte del etanol. Se añadieron 30 ml de agua, la mezcla resultante se acidificó a pH~5 con ácido clorhídrico 1 N, y se extrajo con acetato de etilo (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron. El residuo resultante se purificó por HPLC (columna: Phenomenex Synergi C18 150x25x10 gm; fase móvil: [agua (ácido fórmico al 0,225 %)-acetonitrilo]; B %: 50 %-77 %, 10 minutos) para obtener el compuesto 1 (350 mg, 747 gmoles, rendimiento: 52 %) como un sólido de color blanco. MS (ESI): 469,2 [M+1]+.1
1H RMN (400 MHz, DMSO-Ds): 5 12,21 (br s, 1H), 8,55 (s, 1H), 7,72 (dd, J=1,1, 7,8 Hz, 1H), 7,56 (d, J=8,2 Hz, 2H), 7,47 (d, J=3,2 Hz, 1H), 7,19 (dd, J=1,0, 7,2 Hz, 1H), 7,12 - 7,07 (m, 1H), 6,96 (d, J=8,2 Hz, 2H), 6,64 (d, J=3,2 Hz, 1H), 5,70 (s, 2H), 1,70 (s, 6H), 0,57 - 0,51 (m, 2H), 0,34 - 0,27 (m, 2H).
Ejemplo 2: Ácido 3-(1 -(1 -((5-fenilpiridin-2-il)metil)-1 H-indol-7-carboxamido)ciclopropil)biciclo[1.1.1]pentano-1 -carboxílico 2
Etapa 1: Preparación de 2-metil-5-fenilpiridina 2-2
Se añadieron Pd(PPh<3>)<4>(5,04 g, 4,36 mmoles), 4,4,5,5-tetrametil-2-fenil-1,3,2-dioxaborolano (20,0 g, 98,0 mmoles) y K<2>CO<3>(2 M, 66,0 ml) a una solución de 5-bromo-2-metilpiridina 2-1 (15,0 g, 87,2 mmoles) en DME (150 ml) bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agitó a 120 °C durante 6 horas. La TLC (éter de petróleo/acetato de etilo = 5/1) mostró que la materia prima (Rf = 0,6) se consumió, y se formó un nuevo punto (Rf = 0,37). La mezcla de reacción se extrajo con acetato de etilo (100 ml). La capa orgánica se lavó con salmuera (200 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (ISCO®; columna de sílice de 10 g SepaFlash® , el eluyente fue gradiente de acetato de etilo al 2~10 %/éter de petróleo, Rf = 0,46) para obtener el compuesto 2-2 (10,0 g, 59,0 mmoles, rendimiento: 67,7 %) como un líquido de color amarillo. MS (ESI): 170 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, CDCla): 58,75 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,79 (dd, J = 2,4, 8,0 Hz, 1H), 7,61 - 7,55 (m, 2H), 7,51 - 7,44 (m, 2H), 7,43 - 7,35 (m, 1H), 7,23 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 2,62 (s, 3H).
Etapa 2: Preparación de 2-(bromometil)-5-fenilpiridina 2-3
Se añadió peróxido de ácido benzoilbenzoico (720 mg, 2,97 mmoles) a una solución del compuesto 2-2 (5,00 g, 29,5 mmoles) y NBS (5,26 g, 29,5 mmoles) en CCU (100 ml). La mezcla resultante se agitó a 75 °C durante 10 horas. La TLC (éter de petróleo/acetato de etilo = 5/1) mostró que la mayor parte del material de partida (Rf = 0,45) se consumió, y se formó un nuevo punto principal (Rf = 0,57). La mezcla de reacción se concentró a 50 °C, y el residuo resultante se purificó por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (ISCO®; columna de sílice de 10 g SepaFlash®, gradiente de acetato de etilo al 0~3 %/éter de petróleo) para obtener el compuesto 2-3 (1,50 g, 5,85 mmoles, rendimiento: 19,8 %) como un sólido de color rosa. MS (ESI): 248 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-Ds): 58,93 - 8,83 (m, 1H), 8,11 (dd, J = 2,4, 8,1 Hz, 1H), 7,78 - 7,72 (m, 2H), 7,65 (dd, J = 0,6, 8,1 Hz, 1H), 7,55 - 7,49 (m, 2H), 7,48 - 7,42 (m, 1H), 4,76 (s, 2H).
Etapa 3: Preparación de 1-((5-fenilpiridin-2-il)metil)-1H-indol-7-carboxilato de metilo 2-4
De acuerdo con un método similar al método para preparar el compuesto 1-2, se hizo reaccionar 1 H-indol-7-carboxilato de metilo 1-1 con el compuesto 2-3. El compuesto deseado 2-4 (1,50 g, 4,38 mmoles, rendimiento: 72,4 %) se obtuvo como un sólido de color amarillo. MS (ESI): 343,2 [M+1]+.1
1H RMN (400 MHz, DMSO-Ds): 58,76 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,94 (dd, J = 2,3, 8,2 Hz, 1H), 7,83 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,69 - 7,61 (m, 3H), 7,51 - 7,35 (m, 4H), 7,10 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,75 - 6,66 (m, 2H), 5,74 (s, 2H), 3,70 (s, 3H).
Etapa 4: Preparación de ácido 1-((5-fenilpiridin-2-il)metil)-1H-indol-7-carboxílico 2-5
De acuerdo con un método similar al método para preparar el compuesto 1-3, el compuesto 2-4 se hidrolizó para obtener el compuesto 2-5 (0,80 g, producto bruto) como un sólido de color amarillo, que se usó directamente en la siguiente etapa. MS (ESI): 329,2 [M+1]+.
Etapa 5: Preparación de 3-(1-(1-((5-fenilpiridin-2-il)metil)-1H-indol-7-carboxamido)ciclopropil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metilo 2-6
Esta reacción se llevó a cabo de acuerdo con un método similar al método para preparar el compuesto 1-4 para obtener el compuesto 2-6 (0,50 g, producto bruto) como un sólido de color blanco. MS (ESI): 429,3 [M+1]+.
Etapa 6: Preparación de ácido 3-(1-(1-((5-fenilpiridin-2-il)metil)-1H-indol-7-carboxamido)ciclopropil) biciclo[1.1.1 ]pentano-1 -carboxílico 2
Esta reacción se llevó a cabo de acuerdo con un método similar al método para preparar el compuesto 1 para obtener el compuesto 2 como un sólido de color blanco. MS (ESI): 478,1 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-D6): 58,84 (br s, 1H), 8,52 (s, 1H), 8,04 - 7,92 (m, 1H), 7,73 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,69 - 7,63 (m, 2H), 7,55 - 7,47 (m, 3H), 7,46 - 7,39 (m, 2H), 7,22 - 7,16 (m, 1H), 7,14 - 7,07 (m, 1H), 6,67 (d, J = 3,1 Hz, 1H), 6,42 (br d, J = 8,1 Hz, 1H), 5,76 (br s, 2H), 1,72 (s, 6H), 0,659 - 0,56 (m, 2H), 0,41 - 0,38 (m, 2H).
Ejemplo 3: Ácido 3-(1-(1-(quinolin-2-ilmetil)-1 H-indol-7-carboxamido)ciclopropil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico 3
De acuerdo con un método de preparación similar al método descrito en el Ejemplo 1, el compuesto 1-2 se reemplazó con 1-(quinolin-2-ilmetil)-1H-indol-7-carboxilato de metilo, por consiguiente, el compuesto 3 se obtuvo como un sólido de color amarillo claro. MS (ESI): 452,1 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-Ds): 5 8,49 (s, 1H), 8,26 (br, 1H), 8,04 - 7,90 (m, 2H), 7,83 - 7,70 (m, 2H), 7,66 - 7,53 (m, 2H), 7,20 - 7,15 (m, 1H), 7,13 - 7,06 (m, 1H), 6,68 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,52 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 5,87 (s, 2H), 4,2 (br, 1H), 1,69 (s, 6H), 0,47 - 0,44 (m, 2H), 0,29 - 0,22 (m, 2H).
Ejemplo 4: Ácido 3-(1-(1-(4-clorobencil)-1 H-indol-7-carboxamido)ciclopropil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico 4
De acuerdo con el método descrito en el Ejemplo 1, el compuesto 1-2 se reemplazó con 1-(4-clorobencil)-1H-indol-7-carboxilato de metilo, por consiguiente, el compuesto 4 se obtuvo como un sólido de color blanquecino. MS (ESI): 434,1 [M+1]+.1
1H RMN (400 MHz, CDCla): 57, 77 (dd, J = 0,9, 7,9 Hz, 1H), 7,23 - 7,14 (m, 3H), 7,14 - 7,07 (m, 2H), 6,72 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,63 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,06 (s, 1H), 5,60 (s, 2H), 1,94 (s, 6H), 0,76 - 0,68 (m, 2H), 0,52 - 0,46 (m, 2H).
Ejemplo 5 Ácido 3-(1 -(1 -((6-fenilpiridin-3-il)metil)-1 H-indol-7-carboxamido)ciclopropil)biciclo[1.1.1]pentano-1 -carboxílico 5
Etapa 1: Preparación de 5-metil-2-fenilpiridina 5-2
Se añadieron una solución acuosa de K<2>CO<3>(2,00 M, 17,5 ml) y Pd(PPh3)4 (1,34 g, 1,16 mmoles) a una solución de 2-bromo-5-metilpiridina 5-1 (4,00 g, 23,2 mmoles) y 4,4,5,5-tetrametil-2-fenil-1,3,2-dioxaborolano a (5,31 g, 26,0 mmoles) en DME (40,0 ml) bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agitó a 110 °C durante 15 horas. La TLC (éter de petróleo/acetato de etilo = 20/1) mostró que la materia prima (Rf = 0,55) se consumió completamente, y se formó un nuevo punto principal (Rf = 0,50). La mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y se extrajo con acetato de etilo (20,0 ml x 3). La capa orgánica combinada se lavó con agua (20,0 ml x 2) y salmuera (20,0 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna (sílice, éter de petróleo/acetato de etilo = 1/0 ~ 30/1) para obtener el compuesto 5-2 (4,50 g, 19,8 mmoles, rendimiento: 57,0 %) como un aceite de color amarillo. MS (ESI): 170,1 [M+1]+.
Etapa 2: Preparación de 5-metil-2-fenilpiridina 5-3
Se añadió AIBN (217 mg, 1,33 mmoles) a una solución del compuesto 5-2 (3,00 g, 13,2 mmoles) y NBS (2,83 g, 15,9 mmoles) en CCU (30,0 ml) bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agitó durante 14 horas en una atmósfera de nitrógeno a 70 °C. La TLC (éter de petróleo/acetato de etilo = 20/1) mostró que la mayor parte de la materia prima (Rf = 0,40) se consumió y se formó un nuevo punto principal (Rf = 0,33). Se añadió agua (20,0 ml) y la mezcla de reacción se extrajo con CH<2>Cl<2>(20 ml x 3). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (20,0 ml x 2), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna (sílice, éter de petróleo/acetato de etilo = 1/0 ~ 20/1) para obtener el compuesto 5-3 (1,80 g, 4,81 mmoles, rendimiento: 36,2 %) como un sólido de color amarillo claro. MS (ESI): 248,1 [M+1]+.
Etapas 3 a 6: Preparación de ácido 3-(1-(1-((6-fenilpiridin-3-il)metil)-1H-indol-7-carboxamido)ciclopropil) biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico 5
La conversión del compuesto 5-3 al producto final se llevó a cabo de acuerdo con un método similar al método usado en el Ejemplo 2, por consiguiente, el compuesto 5 se obtuvo como un sólido de color blanquecino. MS (ESI): 478,2 [M+1]+.1
1H RMN (400 MHz, CDCla): 512,24 (s, 1H), 8,73 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 8,15 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,89 (dd, J = 8,0 Hz, 2H), 7,78 (dd, J = 8,0 Hz, 1H), 7,59 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,44 - 7,39 (m, 3H), 7,26 - 7,22 (m, 1H), 7,17 - 7,16 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 7,12 - 7,09 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,66 - 6,65 (m, 1H), 6,21 (s, 1H), 5,69 (s, 2H), 1,92 (s, 6H), 0,72 - 0,70 (m, 2H), 0,53 - 0,52 (m, 2H).
Ejemplo 6: Ácido 3-(1 -(1 -(benzofuran-2-ilmetil)-1 H-indol-7-carboxamido)ciclopropil)biciclo[1.1.1]pentano-1 -carboxílico 6
Etapa 1: Síntesis de benzofuran-2-ilmetanol 6-1
Se añadieron sucesivamente benzofuran-2-carbaldehído (3 g, 20,5 mmoles) y metanol anhidro (40 ml) a un matraz de reacción, y la mezcla resultante se enfrió hasta 0 °C. Se añadió borohidruro de sodio (0,545 g, 14,4 mmoles) a la misma por lotes, y la temperatura se mantuvo por debajo de 25 °C. Después de completar la adición, la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Después de la finalización de la reacción, el disolvente se eliminó a presión reducida. Se añadió una solución acuosa 1 N de HCl (15 ml) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. La mezcla se ajustó a pH 8-9 con solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y se extrajo con acetato de etilo (10 ml x 3). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida para eliminar el disolvente y obtener el compuesto 6-1 (3,0 g, 20,27 mmoles, rendimiento: 98,9 %) como un aceite de color amarillo. MS (ESI): 149,1 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, CDCla) 5: 7, 55 (dd, J = 8,4, 7,2 Hz, 1H), 7,47 (dd, J = 8,8, 7,6 Hz, 1H), 7,29 - 7,19 (m, 2H), 6,66 (s, 1H), 4,77 (d, J = 4,8 Hz, 2H).
Etapa 2: Síntesis de 2-(bromometil)benzofurano 6-2
Se añadieron sucesivamente el compuesto 6-1 (2,47 g, 16,7 mmoles) y diclorometano seco (32 ml) a un matraz de reacción, y la mezcla resultante se enfrió hasta 0 °C. Se añadió lentamente gota a gota a la misma tribromuro de fósforo (1,72 ml, 18,4 mmoles). Después de completar la adición, la mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 1 hora. La TLC (éter de petróleo:acetato de etilo = 9:1) mostró que la reacción se había completado. La mezcla de reacción se ajustó a pH 8-9 con solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio, y se extrajo con diclorometano (10 ml x 3). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida para eliminar el disolvente y obtener el compuesto 6-2 (3,36 g, rendimiento: 95,9 %) como un aceite de color amarillo.
Después, de acuerdo con el método descrito en el Ejemplo 1, se reemplazó 1-(bromometil)-4-(trifluorometil)benceno con el compuesto 6-2, por consiguiente, se obtuvo ácido 3-(1-(1-(benzofuran-2-ilmetil)-1H-indol-7-carboxamido)ciclopropil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico 6 como un sólido de color blanquecino. MS (ESI): 441,1 [M+1]+.1
1H RMN (400 MHz, DMSO-Ds): 5 12,21 (s, 1H), 8,73 (s, 1H), 7,69 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 7,45 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 7,24 - 7,06 (m, 4H), 6,60 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,18 (s, 1H), 5,76 (s, 2H), 1,76 (s, 6H), 0,63 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 0,50 (t, J = 5,6 Hz, 2H).
Ejemplo 7: Ácido 3-(1-(5-cloro-1-((5-fenilpiridin-2-il)metil)-1H-indol-7-carboxamido)ciclopropil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico 7
Etapa 1: Preparación de 5-cloro-1H-indol-7-carboxilato de metilo 7-2
Se añadieron Pd(dppf)ChCH<2>Cl<2>(98,0 mg, 120 pmoles), dppf (112 mg, 202 pmoles) y TEA (2,80 ml) a una solución de 7-bromo-5-cloro-1H-indol 7-1 (1,40 g, 6,07 mmoles) en metanol (50,0 ml). La mezcla resultante se purgó con monóxido de carbono y se agitó durante 48 horas en una atmósfera de CO (4,0 MPa) a 130 °C. La LC-MS mostró que la materia prima se consumió completamente y se detectó el peso molecular del producto deseado (RT = 0,880). La mezcla se concentró a presión reducida, y el residuo resultante se purificó por cromatografía en columna (sílice, éter de petróleo/acetato de etilo = gradiente de elución de 1/0 ~ 20/1, Rf = 0,55) para obtener el compuesto 7-2 (900 mg, 4,29 mmoles, rendimiento: 70,7 %) como un sólido de color amarillo. MS (ESI): 210,0 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, CDCla): 59,85 (s, 1H), 7,87 (d, 1H, J = 2,0 Hz), 7,84 (d, 1H, J = 1,8 Hz), 7,4 - 7,4 (m, 1H), 6,6 - 6,6 (m, 1H), 4,02 (s, 3H).
Etapas 2 a 5: Preparación de ácido 3-(1-(5-cloro-1-((5-fenilpiridin-2-il)metil)-1H-indol-7-carboxamido)ciclopropil) biciclo[1.1.1 ]pentano-1 -carboxílico 7
De acuerdo con el método descrito en el Ejemplo 1, el intermedio 7-2 se convirtió en el producto final como un sólido de color blanquecino. MS (ESI): 512,1 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds): d 12,24 (s, 1H), 8,73 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 8,63 (s, 1H), 7,85 (dd, J = 2,2, 8,2 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,66 - 7,57 (m, 3H), 7,47 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 7,43 - 7,35 (m, 1H), 7,10 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 6,65 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,41 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,69 (s, 2H), 1,66 (s, 6H), 0,55 - 0,48 (m, 2H), 0,36 - 0,33 (m, 2H).
Ejemplo 8: Ácido 3-(1-(5-cloro-1-(4-(trifluorometil)bencil)-1H-indol-7-carboxamido)ciclopropil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico 8
De acuerdo con el método descrito en el Ejemplo 1, el compuesto 1-2 se reemplazó con 5-cloro-1-(4-(trifluorometil)bencil)-1H-indol-7-carboxilato de metilo, por consiguiente, el compuesto 8 se obtuvo como un sólido de color blanco. MS (ESI): 503,1 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 58,45 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 7,55 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 7,34 (s, 1H), 7,31 (s, 1H), 7,30 (d, 1H, J = 3,2 Hz), 6,89 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 6,71 (s, 1H), 6,69 (s, 1H), 6,40 (d, 1H, J = 3,2 Hz), 5,43 (s, 2H), 1,43 (s, 6H), 0,3 - 0,3 (m, 2H), 0,0 - 0,0 (m, 2H).
Ejemplo 9: Ácido 4-(1 -(1 -(4-(trifluorometil)bencil)-1 H-indol-7-carboxamido)cidopropil)bicido[2.2.2]octano-1 -carboxílico 9
Etapa 1: Preparación de 4-carbamoilbicido[2.2.2]octano-1-carboxilato de metilo 9-2
Se añadió CDI (4,21 g, 25,9 mmoles) a una solución de ácido 4-(metoxicarbonil)bicido[2.2.2]octan-1-carboxílico 9-1 (5,00 g, 23,5 mmoles) en diclorometano (50 ml). La mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 1 hora. Se añadieron DIEA (3,99 g, 30,8 mmoles) y NH4Cl (1,51 g, 28,2 mmoles). La mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 2 horas. La TLC (éter de petróleo/acetato de etilo = 1/1, I 2) mostró que la materia prima (Rf = 0,50) se consumió, y se formó un nuevo punto principal (Rf = 0,45). La mezcla de reacción se acidificó a pH~3 con una solución acuosa 1 N de ácido clorhídrico y se extrajo con diclorometano (30 ml x 3). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (50 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró al vacío para obtener el compuesto en bruto 9-2 (4,00 g, 18,9 mmoles, rendimiento: 80,3 %) como un sólido de color blanco. MS (ESI): 211,1 [M+1]+. Este producto se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación.
Etapa 2: Preparación de 4-cianobiciclo[2.2.2]octano-1-carboxilato de metilo 9-3
Se añadió TFAA (9,06 g, 43,1 mmoles) a una solución del compuesto 9-2 (4,00 g, 18,9 mmoles) en piridina (49,0 g, 619 mmoles) a 0 °C. La mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 1 hora. La TLC (éter de petróleo/acetato de etilo = 3/1) mostró que la materia prima (Rf = 0,25, placa 1) se consumió, y se detectó un nuevo punto (Rf = 0,56, placa 2). La mezcla de reacción se acidificó a pH = 2~3 con una solución acuosa 5,0 N de ácido clorhídrico y se extrajo con diclorometano (50 ml x 3). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (80 ml x 3), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna (éter de petróleo/acetato de etilo = 50/1 ~3/1) para obtener el compuesto 9-3 (1,10 g, 5,69 mmoles, rendimiento: 30,0 %) como un sólido de color blanco. MS (ESI): 194,1 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, CDCla): 53,66 (s, 3H), 2,03 - 1,92 (m, 6H), 1,89 - 1,77 (m, 6H).
Etapa 3: Preparación de 4-(1-aminociclopropil)biciclo[2.2.2]octano-1-carboxilato de metilo 9-4
Se añadió gota a gota Ti(O-Et)4 (1,05 g, 4,58 mmoles) a una solución del compuesto 9-3 (800 mg, 4,14 mmoles) en tolueno (15 ml) a 25 °C. La mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 15 minutos. Se añadió gota a gota EtMgBr (3 M, 2,76 ml) a -20 °C, y la mezcla resultante se agitó a -20 °C durante 15 minutos. Se añadió gota a gota BF3-Et2O (1,20 g, 8,43 mmoles) a -20 °C, y la mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 24 horas. La LC-MS mostró que la materia prima se consumió, y se detectó el peso molecular deseado (detectado a RT = 0,838). Se añadieron 10 ml de solución acuosa 1 N de ácido clorhídrico y 15 ml de agua, y la mezcla resultante se lavó con acetato de etilo (15 ml x 3). La solución acuosa se basificó a pH = 8~9 con solución acuosa 10 M de NaOH y se extrajo con acetato de etilo (25 ml x 3). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (50 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró al vacío para obtener un residuo. El residuo se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación. El compuesto 9-4 (0,200 g, producto bruto) se obtuvo como un aceite de color amarillo. MS (ESI): 224,1 [M+1]+.
Etapa 4: Preparación de 4-( 1-(1 -(4-(trifluorometil)bencil)- 1H-indol-7-carboxamido)cidopropil)bicido[2.2.2]octano-1 -carboxilato de metilo 9-5
Se añadieron el compuesto 9-4 (92,3 mg, 413 gmoles), HATU (160 mg, 420 gmoles) y DIPEA (185 gl, 1,06 mmoles) a una solución del compuesto 1-3 (120 mg, 375 gmoles) en DMF (2,00 ml). La mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 1 hora. La LC-MS mostró que el compuesto de partida 1-3 se consumió, y se detectó el peso molecular del producto deseado (RT = 1,051). Se añadieron 10 ml de agua, y la mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (10 ml x 3). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera (20 ml x 2), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna (éter de petróleo/acetato de etilo = 50/1 ~3/1, placa 1: éter de petróleo/acetato de etilo = 3/1, Rf = 0,45) para obtener el compuesto 9-5 (140 mg, 236 gmoles, rendimiento: 62,9 %) como un sólido de color blanco. MS (ESI): 525,2 [M+1]+.
Etapa 5: Preparación de ácido 4-(1-(1-(4-(trifluorometil)bencil)-1H-indol-7-carboxamido)ciclopropil) biciclo[2.2.2]octano-1 -carboxílico 9
Una solución acuosa de LiOHH<2>O (4 M, 1,86 ml) se añadió a una solución del compuesto 9-5 (140 mg, 236 gmoles) en metanol (2,00 ml). La mezcla resultante se agitó a 60 °C durante 1 hora. La LC-MS mostró que la materia prima se consumió completamente, y se detectó el peso molecular del producto deseado (RT = 1,022). La mezcla de reacción se concentró para eliminar el metanol. Se añadieron 9 ml de solución acuosa 1 N de ácido clorhídrico y la mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (15 ml x 3). La fase orgánica combinada se concentró al vacío y el residuo resultante se purificó por HPLC preparativa (columna: Shim-pack C18 150 x 25 x 10 gm; fase móvil: [agua (ácido fórmico al 0,225 %)-acetonitrilo]; B %: 45 %-75 %, 10 min) para obtener el compuesto 9 (75,6 mg, 146 gmoles, rendimiento: 61,9 %) como un sólido de color verde claro. m S (ESI): 511,2 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, CDCla): 57.78 (dd, J = 1,2, 7,9 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 7,22 (dd, J = 1,0, 7,2 Hz, 1H), 7,16 - 7,10 (m, 2H), 6,86 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 6,66 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 5,95 (s, 1H), 5,74 (s, 2H), 1,77 - 1,72 (m, 6H), 1,46 - 1,41 (m, 6H), 0,78 - 0,72 (m, 2H), 0,34 - 0,28 (m, 2H).
Ejemplo 10: Ácido 3-(1-(1-((5-morfolinopiridin-2-il)metil)-1H-indol-7-carboxamido)ciclopropil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico 10
Etapa 1: Preparación de 5-bromo-2-(bromometil)piridina 10-2
Se añadieron NBS (22,7 g, 127 mmoles) y BPO (1,30 g, 5,35 mmoles) a una solución de 5-bromo-2-metilpiridina 10-1 (20,0 g, 116 mmoles) en tetraclorometano (200 ml). La mezcla resultante se agitó a 76 °C durante 12 horas. La TLC (éter de petróleo/acetato de etilo = 30/1) mostró que el compuesto 10-1 (Rf = 0,6) se consumió, y se formaron dos nuevos puntos (Rf = 0,65, Rf = 0,7). La mezcla de reacción se lavó con agua (70,0 ml x 3), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna (sílice, éter de petróleo/acetato de etilo = 1/0 - 5/1, Rf = 0,65). El compuesto 10-2 (9,00 g, rendimiento: 30,3 %, pureza: 98,3 %) se identificó por LCMS como un aceite de color amarillo pálido. MS (ESI): 249,1 [M+1]+.1
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 58,55 (d, J = 2,32 Hz, 1H), 7,74 (dd, J = 8,31,2,45 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 8,31 Hz, 1H), 4,45 (s, 2H).
Etapa 2: Preparación de 1-((5-bromopirídin-2-il)metil)-1H-indol-7-carboxilato de metilo 10-3
Se añadió NaH (1,03 g, 43,0 mmoles) a una solución de 1 H-indol-7-carboxilato de metilo 1-2A (7,54 g, 43,0 mmoles) en DMF (40,0 ml) a 0 °C en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 30 minutos. Se añadió una solución de 5-bromo-2-(bromometil)piridina 10-2 (9,00 g, 35,8 mmoles) en DMF (40,0 ml) a 0 °C en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 30 minutos. La LC-MS mostró que el compuesto de partida 1-2A se consumió completamente. La mezcla de reacción se diluyó con agua (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo (300 ml x 2). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (100 ml x 2), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna (sílice, éter de petróleo/acetato de etilo = 1/0 a 2/1) para obtener el compuesto 10-3 (6,80 g, rendimiento: 54,4 %, pureza: 99,0 %) como un sólido de color pardo. MS (ESI): 345,1 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, CDCla): 58,52 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,74 (dd, J = 1,2, 7,9 Hz, 1H), 7,60 - 7,50 (m, 2H), 7,13 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 7,06 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 6,44 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,61 (s, 2H), 3,68 (s, 3H).
Etapa 3: Preparación de ácido 1-((5-bromopiridin-2-il)metil)-1H-indol-7-carboxílico 10-4
Se añadió una solución de LiOHH<2>O (9,9 g, 176 mmoles) en agua (90,0 ml) a una solución del compuesto 10-3 (6,8 g, 19,7 mmoles) en metanol (90,0 ml) y THF (90,0 ml). La mezcla resultante se agitó a 25 °C durante 12 horas. La LC-MS mostró que el compuesto 10-3 se consumió completamente, y se detectó el peso molecular deseado (RT = 0,861). La mezcla de reacción se concentró para eliminar el metanol y el THF, se acidificó a pH = 5~6 con una solución acuosa de ácido clorhídrico (1 M) y precipitó una gran cantidad de sólido. La mezcla se filtró, y el sólido se recogió para obtener el compuesto 10-4 (4,00 g, rendimiento: 61,3 %) como un sólido de color blanco.<m>S (ESI): 331,1 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 58,57 (s, 1H), 7,87 - 7,93 (m, 1H), 7,78 - 7,83 (m, 1H), 7,57 (d, J = 3,30 Hz, 1H), 7,47 - 7,53 (m, 1H), 7,05 - 7,14 (m, 1H), 6,65 - 6,70 (m, 1H), 6,48 - 6,56 (m, 1H), 5,75 - 5,84 (m, 2H).
Etapa 4: Preparación de ácido 1-((5-morfolinopiridin-2-il)metil)-1H-indol-7-carboxílico 10-5
Se añadieron morfolina (126 mg, 1,45 mmoles, 127 gl), XPhos (69,1 mg, 144 gmoles) y Cs2CO3 (944 mg, 2,90 mmoles) a una solución del compuesto 10-4 (240 mg, 724 gmoles) en dioxano (12,0 ml). La mezcla resultante se desgasificó y se purgó con nitrógeno 3 veces. Se añadió Pd<2>(dba)<3>(66,3 mg, 72,4 gmoles) y la mezcla resultante se agitó durante 2 horas a 120 °C en una atmósfera de nitrógeno. La LCMS mostró que el compuesto 10-4 se consumió completamente, y se detectó el peso molecular deseado (RT = 0,233). La mezcla se filtró y el filtrado se concentró. El residuo resultante se purificó por HPLC preparativa (neutra) para obtener el compuesto 10-5 (120 mg, rendimiento: 41,9 %, pureza: 85,4 %) como un sólido de color amarillo pálido. MS (ESI): 337,1 [M+1]+.
Etapa 5: Preparación de 3-(1-(1-((5-morfolinopiridin-2-il)metil)-1H-indol-7-carboxamido)ciclopropil) biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metilo 10-6
Una mezcla del compuesto 10-5 (50,0 mg, 148 gmoles), 3-(1-aminociclopropil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metilo A1 (27,0 mg, 149 gmoles), HATU (57,0 mg, 149 gmoles) y DIEA (57,8 mg, 447 gmoles, 78,0 gl) en DMF (1,0 ml) se agitó a 25 °C durante 4 horas. La LCMS mostró que el compuesto 10-5 se consumió completamente, y se detectó el peso molecular deseado (RT = 0,792). La TLC (acetato de etilo) mostró que el compuesto 10-5 (Rf = 0,30) se consumió completamente, y se formaron dos nuevos puntos (Rf = 0,41, Rf = 0,6). La mezcla de reacción se diluyó con agua (5 ml) y se extrajo con acetato de etilo (10 ml x 2). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (20 ml x 2), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró. El residuo resultante se purificó por TLC preparativa (sílice, acetato de etilo, Rf = 0,6) para obtener el compuesto 10-6 (60,0 mg, rendimiento: 80,8 %) como un sólido de color blanco. MS (ESI): 501,1 [M+1]+.
Etapa 6: Preparación de ácido 3-(1-(1-((5-morfolinopiridin-2-il)metil)-1H-indol-7-carboxamido)ciclopropil) biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico 10
Se añadió una solución de LiOHH<2>O (49,0 mg, 1,17 mmoles) en agua (0,3 ml) a una solución del compuesto 10-6 (60,0 mg, 119 gmoles) en etanol (3,00 ml). La mezcla resultante se agitó a 65 °C durante 12 horas. La LCMS mostró que el compuesto 10-6 se consumió completamente, y se detectó el peso molecular deseado (RT = 0,777). La mezcla de reacción se acidificó a pH 6 a 7, y se purificó directamente por HPLC preparativa (columna: Phenomenex Synergi C18 150 x 25 x 10 gm; fase móvil: [agua (FA al 0,225 %)-Ac N]; B %: 12 %-42 %, 10 minutos) para obtener el compuesto 10 (16,6 mg, rendimiento: 28,3 %, pureza: 99,4 %) como un sólido de color amarillo pálido. MS (ESI): 487,2 [M+1]+.1
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds): d 12,24 (s, 1H), 8,50 (s, 1H), 8,17 (d, J = 2,81 Hz, 1H), 7,67 (dd, J = 7,83, 1,22 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 3,18 Hz, 1H), 7,10 - 7,15 (m, 2H), 7,08 - 7,03 (m, 1H), 6,59 (d, J = 3,18 Hz, 1H), 6,30 (d, J = 8,68 Hz, 1H), 5,52 (s, 2H), 3,73 - 3,69 (m, 4H), 3,08 - 3,05 (m, 4H), 1,70 (s, 6H), 0,62 - 0,58 (m, 2H), 0,50 - 0,45 (m, 2H).
Ejemplo 11: Ácido 3-(1 -(1 -([2,3'-bipiridin]-6'-ilmetil)-1 H-indol-7-carboxamido)ciclopropil)biciclo[1.1.1]pentano-1 -carboxílico 11
Etapa 1: Preparación de ácido 1-([2,3’-bipiridin]-6’-ilmetil)-1H-indol-7-carboxílico 11-1
Se añadió Pd(PPh3)4 (44,0 mg, 38,0 pmoles) a una solución del compuesto 10-4 (200 mg, 603 pmoles), ácido piridin-2-ilborónico (80,0 mg, 650 pmoles) y Na2CO3 (212,0 mg, 2,00 mmoles) en agua (1,5 ml) y dioxano (6 ml). La mezcla resultante se agitó durante 8 horas en una atmósfera de nitrógeno a 100 °C. La LCMS mostró que el compuesto 10-4 se consumió, y se detectó el peso molecular deseado (RT = 0,794). La mezcla de reacción se filtró, y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo resultante se purificó por HPLC de fase inversa (FA al 0,1 %) para obtener el compuesto 11-1 (120 mg, rendimiento: 29,6 %, pureza: 96,2 %) como un sólido de color blanco.<m>S (ESl): 330,3 [M+1]+.
Etapa 2: Preparación de 3-(1-(1-([2,3’-bipiridin]-6’-ilmetil)-1H-indol-7-carboxamido)ciclopropil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metilo 11-2
Una mezcla del compuesto 11-1 (50,0 mg, 150 pmoles), 3-(1-aminociclopropil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metilo A1 (27,0 mg, 149 pmoles), HATU (57,0 mg, 149 pmoles) y DIEA (57,8 mg, 447 pmoles, 78,0 pl) en DMF (1,0 ml) se agitó a 25 °C durante 4 horas. La LCMS mostró que el compuesto 11-1 se consumió completamente, y se detectó el peso molecular deseado (RT = 0,692). La mezcla de reacción se diluyó con agua (5 ml) y se extrajo con acetato de etilo (10 ml x 2). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera (20 ml x 2), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró. El residuo resultante se purificó por TLC preparativa (SiO<2>, acetato de etilo, Rf = 0,5) para obtener el compuesto 11-2 (58,0 mg, rendimiento: 79 %) como un sólido de color blanco. MS (ESl): 493,1 [M+1]+.
Etapa 3: Preparación de ácido 3-(1-(1-([2,3'-bipiridin1-6'-ilmetil)-1H-indol-7-carboxamido)ciclopropil) biciclo[1.1.1 ]pentano-1 -carboxílico 11
Se añadió una solución de LiOHH<2>O (49,0 mg, 1,17 mmoles) en agua (0,3 ml) a una solución del compuesto 11-2 (58,0 mg, 117 pmoles) en etanol (3,00 ml). La mezcla resultante se agitó a 65 °C durante 12 horas. La LCMS mostró que el compuesto 11-2 se consumió completamente, y se detectó el peso molecular deseado (RT = 0,777). La mezcla de reacción se acidificó a pH 6 a 7, y se purificó directamente por HPLC preparativa (columna: Phenomenex Synergi C18 150 x 25 x 10 pm; fase móvil: [agua (FA al 0,225 %)-ACN]; B %: 12 %-42 %, 10 minutos) para obtener el compuesto 11 (24 mg, 50,2 pmoles, rendimiento: 42,9 %) como un sólido de color amarillo pálido. MS (ESI): 479,5 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 12,34 (s, 1H), 9,14 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,66 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 8,43 (s, 1H), 8,18 (dd, J = 2,2, 8,2 Hz, 1H), 7,98 - 7,93 (m, 1H), 7,89 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 7,37 (dd, J = 4,9, 7,1 Hz, 1H), 7,13 (s, 1H), 7,08 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,64 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,39 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,69 (s, 2H), 1,61 (s, 6H), 0,49 (s, 2H), 0,34 - 0,33 (m, 2H).
Ejemplo 12: Ácido 3-(1-(1-([3,3'-bipiridin]-6-ilmetil)-1 H-indol-7-carboxamido)ciclopropil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico 12
De acuerdo con un método de preparación similar al método descrito en el Ejemplo 11, el compuesto 11-0 en la Etapa 1 se reemplazó con ácido piridin-3-ilborónico, por consiguiente, el compuesto 12 se obtuvo como un sólido de color amarillo claro. MS (ESl): 479,5.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 512,21 (s, 1H), 8,85 (dd, J = 11,25, 1,83 Hz, 2H), 8,60 (dd, J = 4,71, 1,53 Hz, 1H), 8,46 - 8,48 (m, 1H), 8,08 (dt, J = 8,07, 1,90 Hz, 1H), 7,93 (dd, J = 8,13, 2,38 Hz, 1H), 7,72 (dd, J = 7,82, 1,10 Hz, 1H), 7,49 - 7,53 (m, 2H), 7,14 - 7,18 (m, 1H), 7,07 - 7,12 (m, 1H), 6,66 (d, J = 3,18 Hz, 1H), 6,39 (d, J = 8,19 Hz, 1H), 5,73 (s, 2H), 1,63 (s, 6H), 0,51 - 0,56 (m, 2H), 0,33 - 0,39 (m, 2H).
Ejemplo 13: Ácido 3-(1-(1-([3,4'-bipiridin]-6-ilmetil)-1 H-indol-7-carboxamido)ciclopropil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico 13
De acuerdo con un método de preparación similar al método descrito en el Ejemplo 11, el compuesto 11-0 en la Etapa 1 se reemplazó con ácido piridin-4-ilborónico, por consiguiente, el compuesto 13 se obtuvo como un sólido de color amarillo claro. MS (ESI): 479,5.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 12,20 (s, 1H), 8,90 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,67 - 8,63 (m, 2H), 8,47 (s, 1H), 7,99 (dd, J = 2,4, 8,3 Hz, 1H), 7,74 - 7,68 (m, 3H), 7,52 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 7,19 - 7,14 (m, 1H), 7,12 - 7,07 (m, 1H), 6,66 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,40 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,74 (s, 2H), 1,65 (s, 6H), 0,57 - 0,52 (m, 2H), 0,39 - 0,33 (m, 2H).
Ejemplo 14: Ácido 3-(1 -(1 -((5-(1 -metil-1 H-pirazol-4-il)piridin-2-il)metil)-1 H-indol-7-carboxamido)ciclopropil) biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico 14
De acuerdo con un método de preparación similar al método descrito en el Ejemplo 11, el compuesto 11-0 en la Etapa 1 se reemplazó con ácido (1-metil-1H-pirazol-4-il)borónico, por consiguiente, el compuesto 14 se obtuvo como un sólido de color blanco. MS (ESI): 482,2.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 5 12,20 (s, 1H), 8,69 (d, J = 1,71 Hz, 1H), 8,50 (s, 1H), 8,15 (s, 1H), 7,85 (d, J = 0,61 Hz, 1H), 7,68 - 7,72 (m, 2H), 7,48 (d, J = 3,18 Hz, 1H), 7,14 - 7,16 (m, 1H), 7,06 - 7,10 (m, 1H), 6,63 (d, J = 3,18 Hz, 1H), 6,28 (d, J = 8,19 Hz, 1H), 5,62 (s, 2H), 3,86 (s, 3H), 1,69 (s, 6H), 0,54 - 0,57 (m, 2H), 0,39 - 0,43 (m, 2H).
Ejemplo 15: Ácido 3-(1 -(1 -((5-(1 H-pirazol-4-il)piridin-2-il)metil)-1 H-indol-7-carboxamido)ciclopropil) biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico 15
De acuerdo con un método de preparación similar al método descrito en el Ejemplo 11, el compuesto 11-0 en la Etapa 1 se reemplazó con ácido (1H-pirazol-4-il)borónico, por consiguiente, el compuesto 15 se obtuvo como un sólido de color amarillo claro. MS (ESl): 467,2.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 512,30 (s, 1H), 8,74 (d, J = 1,59 Hz, 1H), 8,51 - 8,47 (m, 1H), 8,32 - 7,86 (m, 2H), 7,72 (dd, J = 17,03, 8,04, 1,71 Hz, 2H), 7,48 (d, J = 3,18 Hz, 1H), 7,16 - 7,13 (m, 1H), 7,10 - 7,05 (m, 1H), 6,63 (d, J = 3,18 Hz, 1H), 6,29 (d, J = 8,19 Hz, 1H), 5,62 (s, 2H), 1,68 (s, 6H), 0,56 - 0,53 (m, 2H), 0,43 - 0,40 (m, 2H).
Ejemplo 16: Ácido 3-(1 -(1 -((5-(1 -(3-hidroxipropil)-1 H-pirazol-4-il)piridin-2-il)metil)-1 H-indol-7-carboxamido)ciclopropil) biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico 16
De acuerdo con un método de preparación similar al método descrito en el Ejemplo 11, el compuesto 11-0 en la Etapa 1 se reemplazó con 3-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborano-2-il)-1H-pirazol-1-il)propan-1-ol, por consiguiente, el compuesto 16 se obtuvo como un sólido de color blanco. MS (ESI): 526,2.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 12,20 (s, 1H), 8,70 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 8,46 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,72 -7,67 (m, 2H), 7,48 (d, J = 3,1 Hz, 1H), 7,13 (s, 1H), 7,08 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,62 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 6,29 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 5,62 (s, 2H), 4,16 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 3,39 (s, 2H), 1,95 - 1,89 (m, 2H), 1,64 (s, 6H), 1,24 (s, 1H), 0,57 - 0,51 (m, 2H), 0,42 (d, J = 1,2 Hz, 2H).
Ejemplo 17: Ácido 3-(1-(1-((5-(3-hidroxipiperidin-1-il)piridin-2-il)metil)-1 H-indol-7-carboxamido)ciclopropil) biciclo[1.1.1 ]pentano-1 -carboxílico 17
De acuerdo con un método de preparación similar al método descrito en el Ejemplo 11, el compuesto 11-0 en la Etapa 1 se reemplazó con piperidin-3-ol y se añadieron Cs2CO3 (787 mg, 2,42 mmoles), ácido 2-(dimetilamino)acético (25 mg, 242 pmoles) y yoduro cuproso (70,0 mg, 367 pmoles) en DMSO. La reacción se llevó a cabo durante 13 horas a 127 °C en una atmósfera de nitrógeno. Las otras etapas de reacción fueron las mismas, por consiguiente, el compuesto 17 se obtuvo como un sólido de color amarillo pálido. MS (ESI): 501,1.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 12,20 (s, 1H), 8,46 (s, 1H), 8,13 (d, J = 2,29 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 7,32 Hz, 1H), 7,40 (d, J = 3,20 Hz, 1H), 7,12 (d, J = 7,32 Hz, 1H), 7,04 - 7,09 (m, 2H), 6,57 (d, J = 3,02 Hz, 1H), 6,29 (d, J = 8,51 Hz, 1H), 5,47 (s, 2H), 5,32 (t, J = 4,89 Hz, 1H), 3,49 - 3,60 (m, 4H), 3,17 (d, J = 5,03 Hz, 1H), 2,00 (d, J = 7,32 Hz, 2H), 1,76 (s, 1H), 1,64 (s, 6H), 1,46 (d, J = 2,20 Hz, 1H), 0,55 (s, 2H), 0,41 - 0,46 (m, 2H).
Ejemplo 18: Ácido 3-(1-(1-((5-ciclopropilpiridin-2-il)metil)-1H-indol-7-carboxamido)ciclopropil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico 18
De acuerdo con un método de preparación similar al método descrito en el Ejemplo 11, el compuesto 11-0 en la Etapa 1 se reemplazó con ácido ciclopropilborónico, por consiguiente, el compuesto 18 se obtuvo como un sólido de color blanco. MS (ESI): 442,2.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 5 12,20 (s, 1H), 58,43 (s, 1H), 8,28 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,68 (dd, J = 1,2, 7,8 Hz, 1H), 7,44 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 7,20 - 7,11 (m, 2H), 7,09 - 7,03 (m, 1H), 6,60 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,20 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 5,58 (s, 2H), 1,88 (s, 1H), 1,64 (s, 6H), 0,97 - 0,89 (m, 2H), 0,66 - 0,61 (m, 2H), 0,59 - 0,54 (m, 2H), 0,40 - 0,31 (m, 2H).
Ejemplo 19: Ácido 3-(1-(1-((5-(2-(hidroximetil)fenil)piridin-2-il)metil)-1 H-indol-7-carboxamido)ciclopropil) biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico 19
De acuerdo con un método de preparación similar al método descrito en el Ejemplo 11, el compuesto 11-0 en la Etapa 1 se reemplazó con ácido (2-(hidroximetil)fenil)borónico, por consiguiente, el compuesto 19 se obtuvo como un sólido de color blanco. MS (ESI): 508,2.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 512,20 (s, 1H), 8,53 (s, 1H), 8,48 (d, J = 1,75 Hz, 1H), 7,73 (dd, J = 7,88, 1,00 Hz, 1H), 7,61 (dd, J = 8,07, 2,19 Hz, 1H), 7,53 - 7,58 (m, 2H), 7,41 (td, J = 7,47, 1,19 Hz, 1H), 7,34 (td, J = 7,47, 1,19 Hz, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,08 - 7,12 (m, 1H), 6,66 (d, J = 3,13 Hz, 1H), 6,29 (d, J = 8,00 Hz, 1H), 5,74 (s, 2H), 4,34 (s, 2H), 1,72 (s, 6H), 0,54 - 0,59 (m, 2H), 0,32 - 0,37 (m, 2H).
Ejemplo 20: Ácido 3-(1-(1-(benzofuran-2-ilmetil)-1H-indol-7-carboxamido)etil)biciclo[1.1.1] pentano-1-carboxílico 20, ácido (S)-3-(1-(1-(benzofuran-2-ilmetil)-1H-indol-7-carboxamido)etil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico 20-5 y ácido (R)-3-(1 -(1 -(benzofuran-2-ilmetil)-1 H-indol-7-carboxamido)etil)biciclo[1.1.1]pentano-1 -carboxílico 20-6
Etapa 1: Preparación de 3-(clorocarbonil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metilo 20-1
Una solución de ácido 3-(metoxicarbonil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico (100 mg, 0,59 mmoles) en SOCl<2>(2 ml) se agitó a 80 °C durante 1,5 horas. La mezcla de reacción se concentró para obtener el compuesto 20-1 (110 mg, rendimiento: 100 %) como un sólido de color blanco, que se usó en la siguiente etapa sin purificación.
Etapa 2: Preparación de 3-acetilbiciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metilo 20-2
Se añadió gota a gota MeLi (0,88 ml, 1,6 M en THF, 1,4 mmoles) a una suspensión de CuI (134 mg, 0,71 mmoles) en THF anhidro (2 ml) a 0 °C en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se enfrió hasta -78 °C y se añadió gota a gota una solución del compuesto 20-1 (110 mg, 0,59 mmoles) en THF anhidro (2 ml). La mezcla de reacción se agitó a -78 °C durante 2 horas. Se añadió metanol (0,6 ml) y la mezcla resultante se calentó hasta temperatura ambiente. Se añadió una solución saturada de NH4Cl (10 ml) y la mezcla resultante se extrajo con EtOAc (20 ml x 3). La capa orgánica combinada se lavó con agua y salmuera, se secó sobre Na2SO4 anhidro, se filtró y se concentró. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, eluyendo con hexano/EtOAc de 5:1 a 2:1 (v/v)) para obtener el compuesto 20-2 (75 mg, rendimiento: 76 %), como un sólido de color amarillo pálido. MS (ESI): 169,1 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, CDCl3) 5: 3,62 (s, 3H), 2,24 (s, 6H), 2,07 (s, 3H).
Etapa 3: Preparación de 3-(1-aminoetil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metilo 20-3
Una mezcla del compuesto 20-2 (293 mg, 1,74 mmoles), NH4OAc (805 mg, 10,46 mmoles) y NaBHaCN (164 mg, 2,61 mmoles) en MeOH (6 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La LCMS mostró que la reacción se había completado. La mezcla de reacción se concentró y se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, eluyendo con DCM/MeOH de 30:1 (v/v) a 10:1 (v/v)) para obtener el compuesto 20-3 (800 mg, producto bruto, rendimiento: 100 %) como un aceite transparente. MS (ESI): 170,1 [M+1]+.
Etapa 4: Preparación de 3-(1-(1-(benzofuran-2-ilmetil)-1H-indol-7-carboxamido)etil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metilo 20-4
Se añadió DIPEA (197 mg, 1,53 mmoles) a una solución del compuesto 20-3 (150 mg, 0,51 mmoles), ácido 1-(benzofuran-2-ilmetil)-1H-indol-7-carboxílico (800 mg, 0,51 mmoles) y HATU (232 mg, 0,61 mmoles) en d Mf (6 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La LCMS mostró que la reacción se había completado. La mezcla de reacción se vertió en agua (5 ml) y se extrajo con acetato de etilo (15 ml x 3). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró al vacío. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, eluyendo con PE/EtOAc de 5:1 a 1:2 (v/v)) para obtener el compuesto 20-4 (117 mg, rendimiento: 52 %) como un sólido de color amarillo pálido. MS (ESI): 443,0 [M+1]+.
Etapa 5: Preparación de ácido 3-(1-(1-(benzofuran-2-ilmetil)-1H-indol-7-carboxamido)etil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico 20
Se añadió LiOHH<2>O (2 M, 0,15 ml, 0,30 mmoles) a una solución del compuesto 20-4 (106 mg, 0,24 mmoles) en MeOH (4 ml). La mezcla resultante se agitó a 50 °C durante la noche. La LCMS mostró que la reacción se había completado. La mezcla de reacción se acidificó a pH ~5 con HCl 1 M, y se extrajo con acetato de etilo (15 ml x 3). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró al vacío para obtener el compuesto 20 (80 mg, rendimiento: 78 %) como un sólido de color blanquecino. MS (ESI): 429,0 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5: 12,29 (br s, 1H), 8,32 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,57 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 7,50 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7, 44 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,22 - 7,09 (m, 4H), 6,61 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 6,39 (s, 1H), 5.91 (d, J = 16,0 Hz, 1H), 5,68 (d, J = 16,0 Hz, 1H), 4,18 - 4,11 (m, 1H), 1,82 (s, 6H), 0,93 (d, J = 6,8 Hz, 3H).
Etapa 6: Preparación de ácido (R)-3-(1-(1-(benzofuran-2-ilmetil)-1H-indol-7-carboxamido)etil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico 20-5 y ácido (S)-3-(1-(1-(benzofuran-2-ilmetil)-1H-indol-7-carboxamido)etil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico 20-6
El racemato 20 (80 mg, 0,19 mmoles) se separó por HPLC quiral (CHIRALPAK AD-3 (4,6x100 mm, 3 gm), fase móvil: MeOH, temperatura de la columna: 35 °C) para obtener los compuestos 20-5 (20 mg, Rt = 1,68 min, rendimiento: 50 %) y 20-6 (20 mg, Rt = 3,09 min, rendimiento: 50%), siendo ambos sólidos de color blanco.
Compuesto 20-5, MS (ESI): 429,0 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5: 12,29 (br s, 1H), 8,34 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,57 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 7,50 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,44 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,22 - 7,06 (m, 4H), 6,61 (d, J = 2,8 Hz, 1H), 6,39 (s, 1H), 5.92 (d, J = 16,0 Hz, 1H), 5,68 (d, J = 16,0 Hz, 1H), 4,18 - 4,11 (m, 1H), 1,82 (s, 6H), 0,93 (d, J = 6,8 Hz, 3H).
Compuesto 20-6, MS (ESI): 429,0 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5: 12,46 (br s, 1H), 8,34 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,57 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 7,50 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,44 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,22 - 7,05 (m, 4H), 6,61 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,39 (s, 1H), 5.92 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 5,68 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 4,18 - 4,11 (m, 1H), 1,83 (s, 6H), 0,93 (d, J = 6,8 Hz, 3H).
Ejemplo 21: Ácido 3-(1-(1-((5-fluorobenzofuran-2-il)metil)-1 H-indol-7-carboxamido)ciclopropil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico 21
Etapa 1: Síntesis de 5-fluorobenzofuran-2-carboxilato de metilo 21-1
Se añadieron sucesivamente 5-fluoro-2-hidroxibenzaldehído 21-0 (3,0 g, 21,41 mmoles), bromoacetato de metilo (4,91 g, 32,12 mmoles), carbonato de potasio (5,91 g, 42,82 mmoles) y N,N-dimetilformamida (120 ml) a un matraz de reacción. La solución de reacción se calentó hasta 80 °C y se agitó durante una noche en una atmósfera de nitrógeno. Después de la finalización de la reacción, la solución de reacción se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo (200 ml x 3). La fase orgánica se lavó sucesivamente con agua y salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida para eliminar el disolvente. El producto bruto resultante se purificó por columna de gel de sílice [eluyente: éter de petróleo-acetato de etilo (20:1-5:1)] para obtener el compuesto 21-1 (2,1 g, rendimiento: 51,8 %) como un sólido de color amarillo. MS (ESI): 195,2 [M+1]+.
Etapa 2: Síntesis de (5-fluorobenzofuran-2-il)metanol 21-2
Se añadieron el compuesto 21-1 (2,1 g, 10,82 mmoles) y tetrahidrofurano (50 ml) a un matraz de reacción. La mezcla resultante se agitó en una atmósfera de nitrógeno y se enfrió hasta 0 °C en un baño de hielo. Se añadió lentamente a esto tetrahidroaluminio de litio (2,05 g, 54,10 mmoles) en lotes, y la temperatura se mantuvo a 0 °C. Después de completar la adición, la solución de reacción se agitó a 0 °C durante 1 hora. Se añadieron sucesivamente y lentamente gota a gota agua (2 ml), solución acuosa de hidróxido de sodio al 15 % (2 ml) y agua (4 ml) a la solución de reacción, y la temperatura se mantuvo a 0 °C. Después de la finalización de la adición, la solución de reacción se calentó hasta temperatura ambiente, y se agitó durante 1 hora. La solución de reacción se filtró, y el filtrado se recogió y se secó sobre sulfato de sodio anhidro para obtener el compuesto 21-2 (1,71 g, rendimiento: 95,1 %) como un aceite incoloro. MS (ESI): 149,2 [M+1]+.
Etapa 3: Síntesis de 2-(bromometil)-5-fluorobenzofurano 21-3
Se añadieron el compuesto 21-2 (1,0 g, 6,02 mmoles) y diclorometano anhidro (20 ml) a un matraz de reacción. La mezcla resultante se agitó y se enfrió hasta 0 °C en un baño de hielo. Se añadió a la misma lentamente gota a gota tribromuro de fósforo (1,8 g, 6,62 mmoles). Después de completar la adición, la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. La TLC (éter de petróleo:acetato de etilo = 5:1) mostró que la reacción se había completado y que el disolvente se retiró a presión reducida. El residuo resultante se ajustó a pH 8-9 con solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y se extrajo con diclorometano (20 ml x 3). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida para eliminar el disolvente y obtener el compuesto 21-3 (1,3 g, rendimiento: 94,3 %) como un sólido de color amarillo.<m>S (ESI): 228,0 [M+1]+.
Etapas 4 a 7:
De acuerdo con el método descrito en el Ejemplo 1, se reemplazó 1-(bromometil)-4-(trifluorometil)benceno con el compuesto 21-3, por consiguiente, el compuesto 21 se obtuvo como un sólido de color blanquecino. MS (ESI): 459,1 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-Ds): 5 12,24 (s, 1H), 8,72 (s, 1H), 7,77 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,46 - 7,52 (m, 2H), 7,22 - 7,29 (m, 2H), 7,02 - 7,09 (m, 2H), 6,60 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,21 (s, 1H), 5,75 (s, 2H), 1,69 (s, 6H), 0,59 - 0,62 (m, 2H), 0,45 - 0,48 (m, 2H).
Ejemplo 22: Ácido 3-(1-(1-((6-fluorobenzofuran-2-il)metil)-1 H-indol-7-carboxamido)ciclopropil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico 22
De acuerdo con el método descrito en el Ejemplo 21, el compuesto 21-0 se reemplazó con 4-fluoro-2-hidroxibenzaldehído, por consiguiente, el compuesto 22 se obtuvo como un sólido de color blanquecino. MS (ESI): 459,1 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-Ds): 5 12,24 (s, 1H), 8,72 (s, 1H), 7,69 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,46 - 7,67 (m, 2H), 7,39 - 7,42 (d, J = 8,0, 1H), 7,22 - 7,24 (d, J = 7,9, 1H), 7,02 - 7,09 (m, 2H), 7,03 (s, 1H), 6,64 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,6 (s, 1H), 5,75 (s, 2H), 1,69 (s, 6H), 0,64 - 0,62 (m, 2H), 0,44 - 0,46 (m, 2H).
Ejemplo 23: Ácido 3-(1 -(1 -(benzo[d]oxazol-2-ilmetil)-1 H-indol-7-carboxamido)ciclopropil)biciclo[1.1.1]pentano-1 -carboxílico 23
De acuerdo con el método descrito en el Ejemplo 21, el compuesto 21-0 se reemplazó con benzo[d]oxazol-2-carboxilato de metilo, por consiguiente, el compuesto 23 se obtuvo como un sólido de color blanco. MS (ESI): 442,2 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5: 12,20 (s, 1H), 8,57 (s, 1H), 7,87 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,69 - 7,6 (m, 2H), 7,56 - 7,52 (m, 2H), 7,34 - 7,18 (m, 2H), 6,67 (s, 1H), 6,23 (s, 2H), 1,72 (s, 6H), 0,56 - 0,47 (m, 4H).
Ejemplo 24: Ácido 3-(1 -(1 -(benzo[d]tiazol-2-ilmetil)-1 H-indol-7-carboxamido)ciclopropil)biciclo[1.1.1]pentano-1 -carboxílico 24
De acuerdo con el método descrito en el Ejemplo 21, el compuesto 21-0 se reemplazó con benzo[d]tiazol-2-carboxilato de metilo, por consiguiente, el compuesto 24 se obtuvo como un sólido de color blanco. MS (ESI): 458,2 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5: 12,20 (s, 1H), 8,57 (s, 1H), 7,87 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,69 - 7,6 (m, 2H), 7,46 - 7,42 (m, 2H), 7,34 - 7,18 (m, 2H), 6,67 (s, 1H), 6,03 (s, 2H), 1,72 (s, 6H), 0,56 - 0,47 (m, 4H).
Ejemplo 25: Ácido 3-(1 -(1 -(benzofuran-2-ilmetil)-1 H-pirrolo[3,2-c]piridin-7-carboxamido)ciclopropil) biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico 25
Etapa 1: Síntesis de 1-(benzofuran-2-ilmetil)-7-bromo-1H-pirrolo[3,2-c]piridina 25-1
Se añadió t-BuOK (1,53 g, 13,63 mmoles) a una solución de 7-bromo-1H-pirrolo[3,2-c]piridina 25-0 (1,79 g, 9,09 mmoles) en DMF (80 ml) a 0 °C, seguido de la adición del compuesto 6-2 (2,5 g, producto bruto, 11,36 mmoles). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se vertió en agua (200 ml) y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 2). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró al vacío. El producto bruto resultante se purificó por cromatografía en columna (éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1-5/1) para obtener el compuesto 25-1 (2,5 g, rendimiento: 84 %) como un aceite de color amarillo. MS (ESI): 327,0 [M+1]+.
Etapa 2: Síntesis de 1-(benzofuran-2-ilmetil)-1H-pirrolo[3,2-c]piridin-7-carboxilato de metilo 25-2
Se añadieron Pd(OAc)<2>(171 mg, 0,764 mmoles), Ph2P(CH2)3PPh2 (318 mg, 0,764 mmoles) y TEA (2,31 g, 22,9 mmoles) a una solución del compuesto 25-1 (2,5 g, 7,64 mmoles) en MeOH (21 ml) y DMF (14 ml). La mezcla resultante se agitó durante 48 horas en una atmósfera de CO a 80 °C. La mezcla de reacción se vertió en agua (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 2). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró al vacío. El producto bruto resultante se purificó por cromatografía en columna (éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1-2/1) para obtener el compuesto 25-2 (1,3 g, rendimiento: 55 %) como un aceite de color amarillo. MS (ESI): 307,2 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5: 9,02 (s, 1H), 8,58 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,77 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,56 (dd, J = 7,2, 0,8 Hz, 1H), 7,44 - 7,42 (m, 1H), 7,24 - 7,18 (m, 2H), 6,85 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,56 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 5,89 (s, 2H), 3,91 (s, 3H).
Etapa 3: Síntesis de ácido 1-(benzofuran-2-ilmetil)-1H-pirrolo[3,2-c]piridin-7-carboxílico 25-3
Se añadió una solución acuosa de NaOH (2 M, 4,9 ml, 9,8 mmoles) a una solución del compuesto 25-2 (2 g, 1,96 moles) en THF (10 ml) y metanol (10 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se concentró para eliminar MeOH y THF. El residuo resultante se vertió en agua (30,0 ml) y se acidificó a pH~6 con una solución acuosa 1 N de ácido clorhídrico. El precipitado resultante se recogió por filtración para obtener el compuesto 25-3 (350 mg, rendimiento: 61 %) como un sólido de color blanco. MS (ESI): 293,0 [M+1]+.1
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5: 13,60 (br s, 1H), 9,02 (s, 1H), 8,61 (s, 1H), 7,77 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 7,54 (dd, J = 7,6, 0,8 Hz, 1H), 7,43 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 7,26 - 7,16 (m, 2H),<6 ,86>(d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,50 (s, 1H), 6,01 (s, 2H).
Etapa 4: Síntesis de 3-(1-(1-(1-(benzofuran-2-ilmetil)-1H-pirrolo[3,2-c]piridin-7-carboxamido)ciclopropil) biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metilo 25-4
Se añadió DIPEA (77 mg, 0,6) a una solución del compuesto 25-3 (60 mg, 0,2 mmoles), compuesto A-1 (41 mg, 0,22 mmoles) y HATU (114 mg, 0,3 mmoles) en DMF (5 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se vertió en agua (10 ml) y se extrajo con acetato de etilo (10 ml x 3). La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre Na<2>SO<4>, se filtró y se concentró al vacío. El producto bruto resultante se purificó por cromatografía en columna (éter de petróleo/acetato de etilo = 10/1 ~2/1) para obtener el compuesto 25 4<( 60>mg, rendimiento: 64 %) como un aceite de color amarillo. MS (ESI): 456,0 [M+1]+.
Etapa 5: Síntesis de ácido 3-(1-(1-(benzofuran-2-ilmetil)-1H-pirrolo[3,2-c]piridin-7-carboxamido)ciclopropil) biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico 25
Se añadió una solución acuosa de LiOHH<2>O (2 M, 0,33 ml, 0,66 mmoles) a una solución del compuesto 25-4 (60 mg, 0,13 mmoles) en MeOH (3 ml). La mezcla resultante se agitó a 50 °C durante la noche. La mezcla de reacción se concentró para eliminar el MeOH. El residuo resultante se acidificó a pH~5 con una solución acuosa 1 M de ácido clorhídrico. El precipitado resultante se recogió por filtración para obtener el compuesto 25 (30 mg, rendimiento: 51 %) como un sólido de color blanco. MS (ESI): 441,1 [M+1]+. MS (ESI): 442,2 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5: 12,25 (s, 1H), 8,99 (s, 1H), 8,92 (s, 1H), 8,30 (s, 1H), 7,64 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,49 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,25 - 7,15 (m, 2H), 6,78 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,31 (s, 1H), 5,82 (s, 2H), 1,76 (s,<6>H), 0,64 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 0,53 (t, J = 1<,6>Hz, 2H).
Ejemplo 26: Ácido 3-(1 -(1 -(benzofuran-2-ilmetil)-1 H-pirrolo[3,2-c]piridin-7-carboxamido)etil)biciclo[1.1.1]pentano-1 -carboxílico 26, ácido (S)-3-(1 -(1 -(benzofuran-2-ilmetil)-1 H-pirrolo[3,2-c]piridin-7-carboxamido)etil) biciclo[1.1.1]pentano-1 -carboxílico 26-1, ácido (R)-3-(1 -(1 -(benzofuran-2-ilmetil)-1 H-pirrolo[3,2-c]piridin-7-carboxamido)etil)biciclo[<1>.<1>.<1>]pentano-<1>-carboxílico 26-2
De acuerdo con el método del Ejemplo 23, el compuesto A1 se reemplazó con el compuesto 21-3. El compuesto 26 se obtuvo como un sólido de color blanquecino. MS (ESI): 430,1 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5: 12,29 (s, 1H), 8,92 (s, 1H), 8,56 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,27 (s, 1H), 7,69 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,24 - 7,16 (m, 2H), 6,78 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,47 (s, 1H), 5,92 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 5,74 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 4,15 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 1,83 (s,<6>H), 0,94 (d, J =<6 ,8>Hz, 3H).
El racemato 26 (80 mg, 0,19 mmoles) se separó por HPLC quiral (CHIRALPAK AD-3 (4,6x100 mm, 3 pm), fase móvil: MeOH) para obtener los compuestos 26-1 (Rt = 1,68 min, 20 mg, rendimiento: 50 %) y 26-2 (Rt = 3,09 min, 20 mg, rendimiento: 50 %), siendo ambos sólidos de color blanco.
El compuesto 26-1 fue un sólido de color blanco. MS (ESI): 430,1 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5: 12,29 (s, 1H), 8,92 (s, 1H), 8,56 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,27 (s, 1H), 7,69 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,24 - 7,16 (m, 2H), 6,78 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,47 (s, 1H), 5,92 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 5,74 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 4,15 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 1,83 (s,<6>H), 0,94 (d, J =<6 ,8>Hz, 3H).
El compuesto 26-2 fue un sólido de color blanco. MS (ESI): 430,1 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5: 12,29 (s, 1H), 8,92 (s, 1H), 8,56 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,27 (s, 1H), 7,69 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,24 - 7,16 (m, 2H), 6,78 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,47 (s, 1H), 5,92 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 5,74 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 4,15 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 1,83 (s,<6>H), 0,94 (d, J =<6 ,8>Hz, 3H).
De acuerdo con el método descrito en el Ejemplo 23, se usaron compuestos apropiados como materiales de partida, por consiguiente, se obtuvieron los siguientes compuestos de ejemplo:
Ejemplo 29: Ácido 3-(1-(1-(benzofuran-2-ilmetil-d)-1 H-indol-7-carboxamido)ciclopropil)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico 29
Etapa 1: Síntesis de benzofuran-2-ilmetan-d-ol 29-1
Se añadieron sucesivamente el compuesto 6-0 (3 g, 20,5 mmoles) y metanol anhidro (40 ml) a un matraz de reacción, y la mezcla resultante se enfrió hasta 0 °C. Se añadió a esto borohidruro de sodio-d4 (0,545 g, 14,4 mmoles) por lotes, y la temperatura se mantuvo por debajo de 25 °C. Después de la finalización de la adición, la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Después de la finalización de la reacción, el disolvente se eliminó a presión reducida. Se añadió una solución acuosa 1 N de HCl (15 ml) y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. La mezcla se ajustó a pH 8-9 con solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y se extrajo con acetato de etilo (10 ml x 3). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida para eliminar el disolvente y obtener el compuesto 29-1 (3,0 g) como un aceite de color amarillo. MS (ESI): 150,1 [M+1]+.
Etapa 2: Síntesis de 2-(bromometil-d)benzofurano 29-2
Se añadieron sucesivamente el compuesto 29-1 (2,47 g, 16,7 mmoles) y diclorometano seco (32 ml) a un matraz de reacción, y la mezcla resultante se enfrió hasta 0 °C. Se añadió lentamente gota a gota al mismo tribromuro de fósforo (1,72 ml, 18,4 mmoles). Después de completar la adición, la mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante 1 hora. La TLC (éter de petróleo:acetato de etilo = 9:1) mostró que la reacción se había completado. La mezcla de reacción se ajustó a pH 8-9 con solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio, y se extrajo con diclorometano (10 ml x 3). La fase orgánica combinada se lavó con salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida para eliminar el disolvente y obtener el compuesto 29-2 (3,31 g, rendimiento: 95 %) como un aceite de color amarillo. El producto se usó directamente en la siguiente etapa.
A continuación, de acuerdo con el método descrito en el Ejemplo 6, el compuesto 6-2 se reemplazó con el compuesto 29-2, por consiguiente, el compuesto 29 se obtuvo como un sólido de color blanco. MS (ESI): 442,1 [M+1]+.1
1H RMN (400 MHz, DMSO-Ds): 5 12,24 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 7,77 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,43 - 7,30 (m, 2H), 7,28 - 7,21 (m, 2H), 7,17 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,14 - 7,09 (m, 1H), 6,64 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,21 (s, 1H), 6,06 (s, 1H), 5,95 (s, 1H), 1,76 (s, 6H), 0,64 - 0,62 (m, 2H), 0,52 - 0,49 (m, 2H).
Ejemplo 30: Ácido 3-(1 -(1 -(1 -benzofuran-2-ilmetil-d2)-1 H-indol-7-carboxamido)ciclopropil)biciclo[1.1.1]pentano-1 -carboxílico 30
Etapa 1: Síntesis de benzofuran-2-ilmetan-d2-ol 30-1
Se añadieron benzofuran-2-carboxilato de metilo 30-0 (1,9 g, 10,8 mmoles) y tetrahidrofurano (50 ml) a un matraz de reacción. La mezcla resultante se agitó en una atmósfera de nitrógeno y se enfrió hasta 0 °C en un baño de hielo. Se añadió lentamente a esto tetrahidroaluminio-d4 de litio (2,2 g, 54,10 mmoles) en lotes, y la temperatura se mantuvo a 0 °C. Después de completar la adición, la solución de reacción se agitó a 0 °C durante 1 hora. Se añadieron sucesivamente y lentamente gota a gota agua (2 ml), solución acuosa de hidróxido de sodio al 15 % (2 ml) y agua (4 ml) a la solución de reacción, y la temperatura se mantuvo a 0 °C. Después de la finalización de la adición, la solución de reacción se calentó hasta temperatura ambiente, y se agitó durante 1 hora. La solución de reacción se filtró, y el filtrado se recogió y se secó sobre sulfato de sodio anhidro para obtener el compuesto 30-1 (1,48 g, rendimiento: 91 %) como un aceite incoloro. MS (ESI): 151,2 [M+1]+. A continuación, de acuerdo con el método del Ejemplo 6, el compuesto 6-1 se reemplazó con el compuesto 30-1. El compuesto 30 se obtuvo como un sólido de color blanco. MS (ESI): 443,1 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-Ds): 5 12,24 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 7,77 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,43 - 7,30 (m, 2H), 7,28 - 7,21 (m, 2H), 7,17 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,14 - 7,09 (m, 1H), 6,64 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,21 (s, 1H), 6,06 (s, 1H), 1,76 (s, 6H), 0,64 - 0,62 (m, 2H), 0,52 - 0,49 (m, 2H).
Ejemplo 31: Ácido 3-(1 -(1 -(1 -(benzofuran-2-ilmetil)-1 H-indol-7-carboxamido)ciclopropil-2,2,3,3-d4)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico 31
Etapa 1: Síntesis del reactivo de Grignard deuterado
Se añadieron éter (50 ml), bromoetano-d5 (5,6 g, 50 mmoles) y barras de magnesio (1,32 g, 55 mmoles) a un matraz de fondo redondo seco equipado con un tubo de reflujo. La mezcla resultante se agitó bajo una atmósfera de nitrógeno. Se añadió una pequeña cantidad de yodo, y la mezcla de reacción se calentó a reflujo. Cuando se consumió la mayoría de las barras de magnesio, se paró el calentamiento. El reactivo de Grignard deuterado resultante 31-1 se usó para la siguiente etapa.
Etapa 2: Síntesis de 3-(1-aminociclopropil-2,2,3,3-d4)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metilo
Se añadió tetraisopropóxido de titanio (5,9 g, 21 mmoles, 6 ml, pureza: 95 %) a una solución de 3-cianobiciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metilo (3,0 g, 20 mmoles) en tolueno (50 ml) en una atmósfera de nitrógeno a -20 °C. El compuesto 31-1 (1 M, 42 ml, 42 mmoles) se añadió gota a gota en 30 minutos en una atmósfera de nitrógeno a -20 °C, y la temperatura se mantuvo entre -20 ~ -10 °C. Después de agitar durante 30 minutos, se añadió gota a gota BF3-Et2O (6 g, 42 mmoles, 5,2 ml). La mezcla de reacción se agitó a -20 °C durante 30 minutos y después a 25 °C durante 12 horas. La TLC (placa 1: éter de petróleo/acetato de etilo = 3/1) mostró que la materia prima (Rf = 0,61) se consumió completamente. La TLC (placa 2: éter de petróleo/acetato de etilo = 1/1) mostró que se formó un producto principal (Rf = 0,24). La mezcla de reacción se inactivó añadiendo lentamente ácido clorhídrico acuoso (1 N, 30 ml) a 0 °C. La capa orgánica separada se desechó. La fase acuosa se basificó a pH~12 con solución acuosa 10 M de hidróxido sódico a 0 °C y se extrajo con acetato de etilo (200 ml x 2). La capa orgánica combinada se concentró. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna (sílice, éter de petróleo/acetato de etilo = 20/1 a 1/1) para obtener 3-(1-aminociclopropil-2,2,3,3-d4)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metilo (1,2 g, 6,4 mmoles, rendimiento: 32 %) como un sólido de color amarillo. MS (ESI): 186,1 [M+1]+. A continuación, de acuerdo con el método del Ejemplo 6, el compuesto A1 se reemplazó con 3-(1-aminociclopropil-2,2,3,3-d4)biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metilo A1-d4. El compuesto 31 se obtuvo como un sólido de color blanquecino. MS (ESI): 445,1 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-D6): 5 12,24 (s, 1H), 8,75 (s, 1H), 7,77 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,43 - 7,30 (m, 2H), 7,28 - 7,21 (m, 2H), 7,17 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,14 - 7,09 (m, 1H), 6,64 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,21 (s, 1H), 6,06 (s, 1H), 5,75 (s, 2H), 1,76 (s, 6H).
Ejemplo 32: Ácido 3-(1 -(1 -(1 -(benzofuran-2-ilmetil)-5-fluoro-1 H-indol-7-carboxamido)ciclopropil)biciclo[1.1.1]pentano-1 -carboxílico 32
Etapa 1: Síntesis de 1-(benzofuran-2-ilmetil)-7-bromo-5-fluoro-1H-indol 32-1
Se añadieron el compuesto 6-2 (251 mg, 1,17 mmoles) y N,N-dimetilformamida (10 ml) a un matraz de reacción, y la mezcla resultante se enfrió hasta 0 °C en un baño de hielo con agitación. Se añadieron sucesivamente terc-butóxido de potasio (171 mg, 1,52 mmoles) y 7-bromo-5-fluoro-1 H-indol 32-0 (295 mg, 1,40 mmoles). Después de completar la adición, la solución de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Después de la finalización de la reacción, la solución de reacción se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo (100 ml x 3). La fase orgánica se lavó sucesivamente con agua y salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida para eliminar el disolvente. El producto bruto resultante se purificó por columna de gel de sílice [eluyente: éter de petróleo-acetato de etilo (20:1-10:1)] para obtener el compuesto 32-1 (390 mg, rendimiento: 96,5 %) como un aceite de color amarillo. MS (ESI): 344,1 [M+1]+.
Etapa 2: Síntesis de 1-(benzofuran-2-ilmetil)-5-fluoro-1H-indol-7-carboxilato de metilo 32-2
Se añadieron sucesivamente el compuesto 32-1 (390 mg, 1,14 mmoles), acetato de paladio (26 mg, 0,12 mmoles), 1,3-bis(difenilfosfina)propano (47 mg, 0,12 mmoles), metanol (5 ml), N,N-dimetilformamida (10 ml) y trietilamina (344 mg, 3,41 mmoles) a un matraz de reacción. El sistema de reacción se purgó tres veces con un globo de monóxido de carbono y se agitó en una atmósfera de monóxido de carbono a 90 °C durante 48 horas. Después de la finalización de la reacción, la solución de reacción se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo (50 ml x 3). La fase orgánica se lavó sucesivamente con agua y salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida para eliminar el disolvente. El producto bruto resultante se purificó por columna de gel de sílice [eluyente: éter de petróleo-acetato de etilo (30:1-1:1)] para obtener el compuesto 32-2 (173 mg, rendimiento: 47,1 %) como un aceite de color amarillo. MS (ESI): 324,1 [M+1]+.
Etapa 3: Síntesis de ácido 1-(benzofuran-2-ilmetil)-5-fluoro-1H-indol-7-carboxílico 32-3
Se añadieron sucesivamente el compuesto 32-2 (173 mg, 0,54 mmoles), tetrahidrofurano (5 ml), metanol (5 ml) y NaOH 2 M (1,34 ml, 2,68 mmoles) a un matraz de reacción, y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Después de la finalización de la reacción, el disolvente se eliminó a presión reducida. Se añadió agua (5 ml) y la mezcla resultante se ajustó a pH 1-2 con solución acuosa 1 M de HCl. La mezcla se filtró, y la torta del filtro se lavó con agua para obtener el compuesto 32-3 (156 mg, rendimiento: 94,5 %) como un sólido de color amarillo. MS (ESI): 310,0 [M+1]+.
Etapa 4: Síntesis de 3-(1-(1-(1-(benzofuran-2-ilmetil)-5-fluoro-1H-indol-7-carboxamido)ciclopropil) biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxilato de metilo 32-4
Se añadieron sucesivamente el compuesto 32-3 (90 mg, 0,29 mmoles), compuesto A-1 (63 mg, 0,35 mmoles), HATU (133 mg, 0,35 mmoles), N,N-dimetilformamida (4 ml) y N,N-diisopropiletilamina (75 mg, 0,58 mmoles) a un matraz de reacción, y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante una noche. Después de la finalización de la reacción, la solución de reacción se vertió en agua y se extrajo con acetato de etilo (10 ml x 3). La fase orgánica se lavó sucesivamente con agua y salmuera saturada, se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se concentró a presión reducida para eliminar el disolvente. El producto bruto resultante se purificó por columna de gel de sílice [eluyente: éter de petróleo-acetato de etilo (10:1-2:1)] para obtener el compuesto 32-4 (112 mg, rendimiento: 81,8 %) como un sólido de color amarillo. MS (ESI): 473,1 [M+1]+.
Etapa 5: Síntesis de ácido 3-(1-(1-(1-(benzofuran-2-ilmetil)-5-fluoro-1H-indol-7-carboxamido)ciclopropil) biciclo[1.1.1]pentano-1-carboxílico 32
Se añadieron sucesivamente el compuesto 32-4 (112 mg, 0,24 mmoles), metanol (5 ml) y solución acuosa 2 M de LiOH (0,18 ml, 0,36 mmoles) a un matraz de reacción, y la mezcla resultante se calentó hasta 50 °C y se agitó durante una noche. Después de la finalización de la reacción, el disolvente se eliminó a presión reducida. Se añadió agua (4 ml) y la mezcla resultante se ajustó a pH 5-6 con solución acuosa 1 M de HCl. La mezcla se filtró, y la torta del filtro se lavó con agua y se secó para obtener el compuesto 32 (15 mg, rendimiento: 13,9 %) como un sólido de color blanco. MS (ESI): 459,1 [M+1]+.
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5: 12,24 (s, 1H), 8,83 (s, 1H), 7,58 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 7,49 - 7,41 (m, 3H), 7,23 - 7,12 (m, 2H), 7,05 (dd, J = 12,0, 7,2 Hz, 1H), 6,59 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,18 (s, 1H), 5,72 (s, 2H), 1,73 (s, 6H), 0,61 (q, J = 4,8 Hz, 2H), 0,49 (q, J = 5,6 Hz, 2H).
Ejemplo de ensayo 1: Determinación de AMPc en MCF7 (Ensayo de actividad biológica)
(a) Se inocularon células MCF7 (ATCC, 6.000 células/pocillo/40 pl) en una placa de cultivo celular de 384 pocillos que contenía un medio (DMEM que contenía FBS al 10 % y 1X PS), y se incubaron durante la noche a 37 °C y CO<2>al 5 %.
(b) Se retiró el medio, se añadieron 40 pl/pocillo de medio sin suero y las células se incubaron a 37 °C y CO<2>al 5 % durante 5 horas.
(c) El medio se reemplazó con 18 pl/pocillo de tampón HBSS (Hepes 20 mM, BSA al 0,1 %, IBMX 500 pM). (d) El compuesto en DMSO se diluyó (dilución 1/5, dosis 9 0).
(e) Se añadieron 2 pl del compuesto en d) a 98 pl de tampón HBSS.
(f) Se añadió 1 pl/pocillo del compuesto diluido en e) a las células, con una concentración de partida final de 1 pM, y las células se incubaron a 37 °C durante 1 hora.
(g) Las células se estimularon con 1 pl/pocillo de PGE2 (solución madre en DMSO 10 mM) (concentración final: 10 nM y concentración final de DMSO: 0,2 %), y se incubaron a 37 °C durante 30 min.
(h) Después de la incubación, se añadieron 10 pl/pocillo de AMPc-d2 y 10 pl/pocillo de anti-AMPc, RT 1h.
(i) Se leyeron las señales de HTRF (665 nm/615 nm) en Envision.
Análisis de datos:
Control alto: E7046 1 pM // Control bajo: DMSO
Fondo: 30 pl/pocillo de tampón de lisis 10 pl/pocillo de anti-AMPc
Datos analíticos: datos original - fondo
% de Inhibición: 100 - 100 x (control alto - datos analíticos)/(control alto - control bajo)
Los resultados mostraron que los compuestos de la presente invención tenían una excelente actividad en la inhibición de la transducción de señales de PGE2/EP4.
Ejemplo de ensayo 2: Ensayo de aclaramiento en células hepáticas
Tipo de células hepáticas: ratón // Catálogo de productos: M00505
Especie: ICR/CD-1 // Sexo: macho // Fuente: BioreoclmationIVT
1. Preparación de la solución de trabajo
(a) Se prepararon soluciones madre 10 mM del compuesto de ensayo y el control positivo en un disolvente apropiado (DMSO).
(b) Se mezclaron 198 pl de acetonitrilo al 50 %/agua al 50 % y 2 pl de solución 10 mM en un tubo cónico separado para obtener compuesto de ensayo 100 pM y control positivo.
2. Preparación de células hepáticas
(a) El medio de incubación y el medio de descongelación de las células hepáticas se colocaron en un baño de agua a 37 °C, y se calentaron durante al menos 15 minutos antes de su uso.
(b) Se transfirió un vial de células hepáticas crioconservadas desde el almacenamiento, asegurando que el vial se mantuvo a una temperatura baja hasta que se realizó el proceso de descongelación. Las células se descongelaron colocando el vial en un baño de agua a 37 °C y agitando suavemente el vial durante 2 minutos. Después de completar la descongelación, el vial se pulverizó con etanol al 70 % y se transfirió a una cabina de seguridad biológica.
(c) Las células hepáticas se transfirieron a un tubo cónico de 50 ml que contenía el medio de descongelación mediante una punta de pipeta de gran diámetro. El tubo cónico de 50 ml se colocó en una centrífuga y se centrifugó a 100 g durante 10 minutos. Después de completar la centrifugación, el medio de descongelación se retiró por succión y las células hepáticas se resuspendieron en medio suficiente para producir 1,5x106 células/ml.
3. Procedimientos del ensayo de estabilidad
(a) Se pipetearon 198 pl de células hepáticas en cada pocillo de una placa no recubierta de 96 pocillos. La placa se colocó en una incubadora para calentar las células hepáticas durante 10 minutos.
(b) Se pipetearon 2 pl de compuesto de ensayo 100 pM o control positivo en cada pocillo de la placa no recubierta de 96 pocillos para iniciar la reacción. La placa se colocó en la incubadora en el momento establecido.
(c) El contenido de los pocillos se transfirió en 25 pl de alícuotas en los puntos de tiempo de 0, 15, 30, 60, 90 y 120 minutos. La alícuota se mezcló con 6 volúmenes (150 pl) de acetonitrilo que contenía estándar interno IS (alprazolam 100 nM, cafeína 200 nM y tolbutamida 100 nM) para detener la reacción. La muestra se mezcló en vórtice durante 5 minutos y se centrifugó a 3.220 g durante 45 minutos. Una alícuota de 100 pl de sobrenadante se diluyó con 100 pl de agua ultrapura, y la mezcla se usó para el análisis de LC/MS/MS. Todas las incubaciones se realizaron por duplicado.
(d) Análisis de datos: Todos los cálculos se realizaron usando Microsoft Excel. El área del pico se determinó mediante el cromatograma de iones extraídos. La semivida (t1/2) in vitro del compuesto parental se determinó mediante el análisis de regresión del porcentaje de desaparición del compuesto frente a la curva de tiempo.
La semivida (t1/2) in vitro se determinó mediante el valor de pendiente k:
t1/2 = 0,693 / k
El t1/2 in vitro (en minutos) se convirtió en aclaramiento intrínseco in vitro (CLint, en pl/min/0,5x106 células) utilizando la siguiente ecuación (promedio de determinaciones repetidas):
CLint = kV/N
V = Volumen de incubación (0,2 ml) // N = Número de células hepáticas por pocillo (0,1x106 células)
Los resultados mostraron que los compuestos de la presente invención tenían una excelente estabilidad en células hepáticas, teniendo de este modo una excelente estabilidad metabólica.
Ejemplo de ensayo 3: Efecto inhibidor del compuesto 6 sobre el tumor colorrectal CT-26 en ratón
Estudio de eficacia en tumor de aloinjerto: cada ratón hembra BALB/c de 6 semanas de edad se inoculó por vía subcutánea con 1x106 células cancerosas CT26 (National Experimental Cell Resource Sharing Service Platform, Número de Recurso 3111CCCC). Cuando el tumor alcanzó aproximadamente 60 a 80 mm3, los ratones portadores de tumor se agruparon aleatoriamente en el grupo de vehículo o grupo de tratamiento. El compuesto 6 se administró oralmente (p.o.) en una suspensión de MC al 0,5 % a una dosis de 10, 30 ó 150 mg/kg, una vez al día. A los ratones del grupo de vehículo se les administró por vía oral agua destilada cada día, y el tiempo de administración fue el mismo que el del grupo del compuesto 6. El volumen del tumor y el peso corporal se registraron de 2 a 3 veces a la semana. Los resultados se muestran en la Figura 1 y la Figura 2.
Puede observarse a partir de la Figura 1 que, cuando se administran solas, diferentes dosis del compuesto 6 y E7046 tenían un efecto inhibidor significativo sobre el crecimiento del tumor CT-26. A la misma dosis, el compuesto 6 fue significativamente mejor que E7046. La Figura 2 muestra que el compuesto 6 y E7046 no tuvieron un efecto significativo sobre el peso corporal del ratón.
Ejemplo de ensayo 4: Efecto inhibidor del compuesto 6 y el anticuerpo anti-PD-1 administrados solos o en combinación sobre el tumor colorrectal CT-26 en ratón
Estudio de eficacia en tumor de aloinjerto: cada ratón hembra BALB/c de 6 semanas de edad se inoculó por vía subcutánea con 1x106 células cancerosas CT26. Cuando el tumor alcanzó aproximadamente 60 a 80 mm3, los ratones portadores de tumor se agruparon aleatoriamente en el grupo de vehículo o grupo de tratamiento. Cuando se administra solo o en combinación, el compuesto 6 se administró oralmente (p.o.) en una suspensión de MC al 0,5 % a una dosis de 30 ó 150 mg/kg, una vez al día. Cuando se administró solo o en combinación, el anticuerpo anti-PD-1 (anti-PD-1 de ratón Invivomab (CD279), Abcam) se administró por vía intraperitoneal a una dosis de 5 mg/kg, una vez cada 4 días, para un total de 3 veces (Q4D x 3). A los ratones del grupo de vehículo y del grupo al que se administró el anticuerpo contra PD-1 solo se les administró por vía oral agua destilada cada día, y el tiempo de administración fue el mismo que el del grupo del compuesto 6. El volumen del tumor y el peso corporal se registraron de 2 a 3 veces a la semana. Los resultados se muestran en la Figura 3 y la Figura 4.
Puede observarse a partir de la Figura 3 que, cuando el compuesto 6 se administró solo o en combinación con el anticuerpo anti-PD-1, tuvo un buen efecto inhibidor sobre el crecimiento del tumor CT-26 en ratón. La Figura 4 muestra que, cuando el compuesto 6 se administró solo o en combinación con el anticuerpo anti-PD-1, no tuvo un efecto significativo sobre el peso corporal del ratón.
Ejemplo de ensayo 5: Efecto inhibidor del compuesto 6 y el anticuerpo anti-PD-1 administrados solos o en combinación sobre el tumor de mama EM-6 en ratón
Estudio de eficacia en tumor de aloinjerto: cada ratón hembra BALB/c de 6 semanas de edad se inoculó por vía subcutánea con 5x105 células cancerosas EMT-6. Cuando el tumor alcanzó aproximadamente 60 a 80 mm3, los ratones portadores de tumor se agruparon aleatoriamente en el grupo de vehículo o grupo de tratamiento. Cuando se administra solo o en combinación, el compuesto 6 se administró oralmente (p.o.) en una suspensión de MC al 0,5 % a una dosis de 30 mg/kg, una vez al día. Cuando se administró solo o en combinación, el anticuerpo anti-PD-1 (anti-PD-1 de ratón Invivomab (CD279), Abcam) se administró por vía intraperitoneal a una dosis de 20 mg/kg en la primera administración, y a una dosis de 10 mg/kg en las siguientes administraciones una vez cada 5 días. A los ratones del grupo de vehículo y del grupo al que se administró el anticuerpo PD-1 solo se les administró por vía oral agua destilada cada día, y el tiempo de administración fue el mismo que el del grupo del compuesto 6. El volumen del tumor y el peso corporal se registraron de 2 a 3 veces a la semana. Los resultados se muestran en la Figura 5 y la Figura 6.
Puede observarse a partir de la Figura 5 que, cuando el compuesto 6 se administró solo o en combinación con el anticuerpo anti-PD-1, tuvo un buen efecto inhibidor sobre el tumor de mama EMT-6 en ratón. La Figura 6 muestra que, cuando el compuesto 6 se administró solo o en combinación con el anticuerpo anti-PD-1, no tuvo un efecto significativo sobre el peso corporal del ratón.

Claims (15)

  1. REIVINDICACIONES 1. Un compuesto de fórmula (I):
    o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero del mismo, o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: M1, M2, M3, M5, M6, y M7 son cada uno independientemente un átomo de N o C-R4; M4 se selecciona del grupo que consiste en átomo de N y átomo de C; el anillo A se selecciona del grupo que consiste en arilo C<6-10>y heteroarilo de 5 a 10 miembros;
    Y se selecciona del grupo que consiste en un enlace, alquileno C<1-4>, -CR5R6-, -O-, -Oalquileno C<1-4>-, -NR9alquileno C<1-4>-, y -NR9-, en donde el alquileno C<1-4>está sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en átomo de H, átomo de D, halógeno, hidroxi, ciano, amino, nitro, alquilo C<1-4>, alcoxi C<1-4>, haloalquilo C<1-4>, haloalcoxi C<1-4>, hidroxialquilo C<1-4>, cicloalquilo C<3-6>, heterociclilo de 3 a 6 miembros, arilo C<6-10>y heteroarilo de 5 a 10 miembros; R1 es alquilo C<1-4>, en donde el alquilo C<1-4>está sustituido opcionalmente con uno o más átomos de D; R2 se selecciona del grupo que consiste en átomo de H, átomo de D y alquilo C<1-4>; o R1 y R2 junto con el átomo al que están unidos forman un cicloalquilo C<3-6>, en donde el cicloalquilo C<3-6>está sustituido opcionalmente con uno o más átomos de D; cada R3 es idéntico o diferente y cada uno se selecciona independientemente del grupo que consiste en átomo de H, átomo de D, halógeno, hidroxi, ciano, amino, nitro, alquilo C<1-4>, alcoxi C<1-4>, cicloalquilo C<3-6>, heterociclilo de 3 a 6 miembros, arilo C<6-10>, heteroarilo de 5 a 10 miembros, -C(O)R4, -C(O)OR4, -OC(O)NR7R8, -NR7C(O)OR4, -S(O)mR4, -NR7R8, y -C(O)NR7R8, en donde el alquilo C<1-4>, alcoxi C<1-4>, cicloalquilo C<3-6>, heterociclilo de 3 a 6 miembros, arilo C<6-10>y heteroarilo de 5 a 10 miembros están cada uno independientemente sustituidos opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo C<1-4>, hidroxialquilo C<1-4>, alcoxi C<1-4>, haloalquilo C<1-4>, haloalcoxi C<1-4>, halógeno, hidroxi, ciano, amino y nitro; R4 se selecciona del grupo que consiste en átomo de H, átomo de D, halógeno, hidroxi, amino, alquilo C<1-4>, alcoxi C<1-4>, cicloalquilo C<3-6>, heterociclilo de 3 a 6 miembros, arilo C<6-10>y heteroarilo de 5 a 10 miembros, en donde el alquilo C<1-4>, alcoxi C<1-4>, cicloalquilo C<3-6>, heterociclilo de 3 a 6 miembros, arilo C<6-10>y heteroarilo de 5 a 10 miembros están cada uno independientemente sustituidos opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo C<1-4>, hidroxialquilo C<1-4>, alcoxi C<1-4>, haloalquilo C<1-4>, haloalcoxi C<1-4>, halógeno, hidroxi, ciano, amino y nitro; R5 y R6 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en átomo de H, átomo de D, alquilo C<1-4>, cicloalquilo C<3-6>, heterociclilo de 3 a 6 miembros, arilo C<6-10>y heteroarilo de 5 a 10 miembros, en donde el alquilo C<1-4>, cicloalquilo C<3-6>, heterociclilo de 3 a 6 miembros, arilo C<6-10>y heteroarilo de 5 a 10 miembros están cada uno independientemente sustituidos opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo C<1-4>, hidroxialquilo C<1-4>, alcoxi C<1-4>, haloalquilo C<1-4>, haloalcoxi C<1-4>, halógeno, hidroxi, ciano, amino y nitro; o, R5 y R6 junto con el átomo al que están unidos forman un cicloalquilo C<3-6>o heterociclilo de 3 a 6 miembros, en donde el cicloalquilo C<3-6>y heterociclilo de 3 a 6 miembros están cada uno independientemente sustituidos opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en halógeno, hidroxi, ciano, amino, nitro, alquilo C<1-4>, alcoxi C<1-4>, haloalquilo C<1-4>, haloalcoxi C<1-4>, hidroxialquilo C<1-4>, cicloalquilo C<3-6>, heterociclilo de 3 a 6 miembros, arilo C<6-10>y heteroarilo de 5 a 10 miembros; R7 y R8 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en átomo de H, átomo de D, alquilo C<1-4>, haloalquilo C<1-4>, cicloalquilo C<3-6>, heterociclilo de 3 a 6 miembros, arilo C<6-10>y heteroarilo de 5 a 10 miembros, en donde el alquilo C<1-4>, haloalquilo C<1-4>, cicloalquilo C<3-6>, heterociclilo de 3 a 6 miembros, arilo C<6-10>y heteroarilo de 5 a 10 miembros están cada uno independientemente sustituidos opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en alquilo C<1-4>, hidroxialquilo C<1-4>, alcoxi C<1-4>, haloalquilo C<1-4>, haloalcoxi C<1-4>, halógeno, hidroxi, ciano, amino y nitro; R9 se selecciona del grupo que consiste en átomo de H, átomo de D y alquilo C<1-4>, en donde el alquilo C<1-4>está sustituido opcionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste en hidroxialquilo C<1>-4, alcoxi C<1-4>, haloalquilo C<1-4>, haloalcoxi C<1-4>, halógeno, hidroxi, ciano, amino y nitro; m es 0, 1 ó 2; y n es 0, 1,2, 3 ó 4.
  2. 2. El compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1, que es un compuesto de fórmula (II):
    en donde M1, M3, M5, y M6 son cada uno independientemente un CH o C-halógeno, M2 es un C-R4 o átomo de N, M7 es un átomo de N, M4 es un átomo de C, y el anillo A, R1, R2, R3, R4, X, Y y n son como se definen en la reivindicación 1.
  3. 3. El compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1 ó 2, en donde Y es un alquileno C<1-4>, y preferiblemente metileno.
  4. 4. El compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde R1 y R2 junto con el átomo al que están unidos forman ciclopropilo.
  5. 5. El compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que es un compuesto de fórmula (III):
    o un tautómero, mesómero, racemato, enantiómero, diastereómero del mismo, o mezcla de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: M2 es un átomo de N o C-R4; R4 se selecciona del grupo que consiste en átomo de H, átomo de D y halógeno; y X, anillo A, R1, R2, R3 y n son como se definen en la reivindicación 1.
  6. 6. El compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el anillo A se selecciona del grupo que consiste en fenilo, piridilo, quinolinilo, benzofuranilo, pirazol, isoxazol, benzoxazol y benzotiazol.
  7. 7. El compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde cada R3 es idéntico o diferente y cada uno se selecciona independientemente del grupo que consiste en átomo de H, átomo de D, halógeno, alquilo C<1-4>, fluoroalquilo C<1-4>, fenilo, fenilo sustituido con hidroxialquilo C<1-4>, morfolinilo, piridilo, pirazolilo, pirazolilo sustituido con alquilo C<1-4>, pirazolilo sustituido con hidroxialquilo C<1-4>, ciclopropilo, isoxazolilo, piperidinilo y piperidinilo sustituido con hidroxi.
  8. 8. El compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, seleccionado del grupo que consiste en:
  9. 9. Un método para preparar el compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, que comprende las siguientes etapas de:
    hidrolizar un compuesto de fórmula (I-A) para obtener un compuesto de fórmula (I-B), someter el compuesto de fórmula (I-B) y un compuesto de fórmula (I-C) a una reacción de condensación para obtener un compuesto de fórmula (I-D), e hidrolizar el compuesto de fórmula (I-D) para eliminar el grupo R y obtener así el compuesto de fórmula (I); en donde: R es un alquilo C<1-4>; y M1 a M7, anillo A, X, Y, R1, R2, R3 y n son como se definen en la reivindicación 1.
  10. 10. Una composición farmacéutica, que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, y vehículo(s), diluyente(s) o excipiente(s) farmacéuticamente aceptable(s).
  11. 11. La composición farmacéutica según la reivindicación 10, que comprende además un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en anticuerpo anti-CTLA4, anticuerpo anti-PDL1 y anticuerpo anti-PD1.
  12. 12. La composición farmacéutica según la reivindicación 11, en donde el anticuerpo se selecciona del grupo que consiste en Ipilimumab, Tremelimumab, Pembrolizumab, Nivolumab, Atezolizumab, Avelumab, Durvlumabb, Pidilizumab, Am P-224, AMP-514, PDR001, Cemiplimab, BMS-936559, CK-301, Toripalimab, Sintilimab, Camrelizumab, Tislelizumab, KN035, GLS-010, GB226, CS1001, CS1003, BAT-1306, HX008, AK105, LZM009, HLX10, HLX20, KL-A167, F520, GR1405 y MSB2311.
  13. 13. El compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o la composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12 para su uso en el tratamiento de una enfermedad mediante la inhibición de la transducción de la señalización de PGE2/EP4.
  14. 14. El compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o la composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12 para su uso en el tratamiento del cáncer, en donde el cáncer se selecciona preferiblemente del grupo que consiste en cáncer de mama, cáncer de cuello uterino, cáncer colorrectal, cáncer endometrial, glioblastoma, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de riñón, cáncer de hígado, cáncer de pulmón, meduloblastoma, cáncer de ovario, cáncer pancreático, cáncer de próstata, cáncer de piel y cáncer uretral.
  15. 15. El compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o la composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12 para su uso en el tratamiento del dolor agudo o crónico, migraña, osteoartritis, artritis reumatoide, gota, bursitis, espondilitis anquilosante, dismenorrea primaria, cáncer o arteriosclerosis.
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