CN112608271A - 酰胺衍生物及其在制备ep4受体拮抗剂中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种式I所示的化合物，其可作为PGE2的EP4受体拮抗剂、抑制酶和细胞增殖，用于治疗与EP4受体相关的疾病包括癌症、炎性疾病和疼痛等适应症。

Description

酰胺衍生物及其在制备EP4受体拮抗剂中的应用
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种酰胺衍生物及其在制备EP4受体拮抗剂中的应用。
背景技术
前列腺素是一组具有生物活性的脂类化合物，是疼痛、发热和其他炎症或细胞膜损伤相关症状的介质。
前列腺素E2(PGE2)是炎症中主要的二十烷类衍生物，它参与多种生物学过程，包括炎症、疼痛、发热、肾功能、粘膜完整性、痛觉过敏、子宫收缩、骨代谢、血小板功能，血管生成与肿瘤生长和癌症(Trends in Molecular Medicine 2012；18:233–43)。环氧化酶(COX)是花生四烯酸合成前列腺素PGD2、PGE2，PGF2a、前列腺素PGl2和血栓素TXA2的重要酶。前列腺素通过激活7个G蛋白偶联受体(GPCRs)发挥作用，EP1、EP2、EP3和EP4是PGE2介导的激活受体。EP4受体是七个细胞膜膜受体之一，其激活通常与细胞内环磷酸腺苷(cAMP)水平的增加有关，从而引发多个下游事件。PGE2有助于促炎性免疫反应；然而，PGE2被认为是许多实体瘤形成的免疫抑制环境中的重要成分(Whiteside,Expert Opinion in BiologicalTherapy,2010.10,1019-1035)，肿瘤微环境中持续的水平促进肿瘤的积聚增强多种免疫抑制细胞的活性，包括与肿瘤相关的巨噬细胞(TAM)、Treg细胞和骨髓源性抑制细胞(MDSCs)，从而促进肿瘤免疫逃逸。越来越多的证据表明，通过EP4升高cAMP水平是导致免疫细胞免疫抑制的主要信号通路。
前列腺素E受体亚型EP2和EP4通过不同的信号模块促进Thl和Thl 7淋巴细胞的分化和扩张(Nature Medicine,2009,15,633-640；Eur.J.Immunol 2009,39,1301-1312)。如有文献报道了前列腺素E2与白细胞介素23协同作用有利于人类Thl7的扩张(Blood，2008，112，3696-3703)、前列腺素E2通过环腺苷酸和EP2/EP4受体信号调节Thl7细胞的分化和功能(J.Exp.Med.2009,206,535-548)、前列腺素E2(PGE2)通过活化的EP4受体发挥细胞因子放大系统的作用，例如白介素-6(IL-6)，并诱导促炎性T-辅助淋巴细胞(Th1)的分化和扩张(Yokoyama et al.,Pharmacol.Rev.2013,65:1 0 10-52)。
COX2和PGE2的高水平表达与肿瘤转化、细胞生长、血管生成、侵袭、转移和免疫逃避有关。很明显，COX2主要通过PGE2促进肿瘤生长，并且在结直肠癌、胃癌、食管癌、胰腺癌、乳腺癌和卵巢癌中上调。与野生型动物相比，EP4基因敲除的小鼠肿瘤发展迟缓，表明宿主免疫细胞中PGE2-EP4信号有促进肿瘤生长的活性(Mutoh M et al.,Cancer Res.,2002,62:28-32)。一直以来，选择性的EP4受体拮抗剂已被证明在各种临床前肿瘤模型中能够减缓肿瘤进展和肿瘤转移，而不影响体外癌细胞的增殖(Yang et al.Cancer Res.,2006,66:9665-9672；Mao Y et al.Clin.Cancer Res.,2014,20:4096-4106)。EP4受体参与多种抗炎、骨髓形成和止血作用。
EP4受体激动剂对溃疡性结肠炎(UC)有良好的治疗效果。EP4激动剂增加骨沉积并促进骨吸收。EP4拮抗剂可以抑制PGE2在肿瘤中的免疫抑制和致瘤作用。越来越多的证据表明EP4的拮抗作用，特别是在与化疗、内分泌治疗或免疫治疗联合中的应用，已经作为肿瘤治疗最有有前途的方法之一，值得进一步研究。EP4受体是治疗乳腺癌的一个新的治疗靶点。几种EP4拮抗剂目前已进入癌症治疗的早期临床试验阶段。EP4受体的多样性生物学功能被解释为由于EP4的激活和多种信号通路的转换。E7046拮抗EP4降低髓系免疫抑制，与Treg协同降低IL-2-白喉毒素融合蛋白恢复抗肿瘤免疫(OncoImmunology 2017；6:e1338239)。以COX-2和EP4为靶点的报告已知能控制乳腺癌模型中的肿瘤生长、血管生成、淋巴管生成和肺及淋巴结转移(Laboratory Investigation 2012；92:1115–28)。EP4拮抗剂CR6086被报道为抗风湿药物(Arthritis Research&Therapy(2018)20:39.)。
已发表的专利WO2020012305、WO20190255013、WO2019149286、WO2019152982、WO2019038156、WO2018216640、WO2018162562、WO2017085198、WO2013004290、WO201207063、WO2012039972、WO2010019796、WO2009139373、EP-3632898、EP 2649061公开了作为EP4拮抗剂并用于治疗前列腺素介导疾病的一些化合物。
据报道，抑制PGE2/EP4信号可能对炎症性自身免疫性疾病具有治疗价值。PGE受体的EP4亚型的拮抗剂可有益并应用于治疗由EP4受体介导的疾病或状况，例如癌症和炎症性疾病或诸如急慢性疼痛、骨关节炎、类风湿性关节炎和多发性硬化症。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种酰胺衍生物及其在制备EP4受体拮抗剂中的应用。
本发明的第一个目的是要求保护一种化合物，以及药学上可接受的盐、溶剂及其组合物，其为酰胺衍生物，其结构式如式I所示：
Figure BDA0002801637360000021
其中：
R1选自取代或未取代的C1-10直链或支链烷基、取代或未取代的C3-10环烷基、取代或未取代的C1-3氘代烷基、取代或未取代的C7-12烷基芳基或取代或未取代的C6-10烷基杂芳基；
当X选自NH、O、S或CH2时，则R2选自氢、取代或未取代的C6-14芳基、取代或未取代的C5-10杂芳基、取代或未取代的C3-7饱和碳环或取代或未取代的C1-10直链或支链烷基；
当X选自卤素、CN、CONH2、取代或未取代的C1-3烷基、乙烯基、乙炔基时，则R2不存在；
R3和R4独立地选自氢、卤素、CN、取代或未取代的C1-3烷基、或取代或未取代的C1-3烷氧基；
R5和R6独立地选自氢、C1-3直链或支链烷基；或R5和R6组成C3-4环烷基或C3-4杂环烷基；
G选自氢、烃基醇基、四氮唑基、-CONHSO2R7、-CO2R7、-CONHR7、-SO2NHR7或NHSO2R7；
其中R7选自氢、取代或未取代的C1-5烷基、芳基或杂芳基；
W1，W2独立地选自满足价态的C或N。
进一步地，式I中的-XR2选自一种如下结构式的基团：
Figure BDA0002801637360000031
进一步地，式I中的G选自一种如下结构式的基团：
Figure BDA0002801637360000032
进一步地，烃基醇基包括亚甲基醇基(-CH2OH)或亚乙基醇基(-CH2CH2OH)。
进一步地，卤素选自氟、氯或溴原子；取代或未取代的C1-10烷基、取代或未取代的C1-3烷基或取代或未取代的C1-5烷基中包括C1-3氟代烷基；所述氟代烷基选自三氟甲基、二氟甲基、二氟氘代甲基或一氟甲基；取代或未取代的C1-3氘代烷基选自三氘代甲基、二氟氘代甲基或五氘代乙基。
进一步地，化合物的结构式如式Ia-If之一所示：
Figure BDA0002801637360000041
其中，R1、X、R2、R3、R4、R5和R6如上文中所述。
优选地，R1选自甲基、乙基、丙基、氟甲基、三氟甲基或氘代甲基。
优选地，R3和R4独立地选自氢、甲基、三氟甲基、卤素(氯、溴、氟)、腈(-CN)或甲氧基(-OMe)。
进一步地，化合物的结构式如下之一所示：
Figure BDA0002801637360000042
Figure BDA0002801637360000051
Figure BDA0002801637360000061
Figure BDA0002801637360000071
以G为羧基为例，本发明还进一步提供了上述式I所示的化合物的制备方法，反应路线如下：
Figure BDA0002801637360000072
将式1化合物的含酯官能团发生卤化反应得到在3位取代的式2的含酯卤代物；式2的化合物发生烷基化反应得到式3的化合物；式3的化合物在SNAr、Suzuki或Buchwald反应条件下转化为式4的化合物；式4的甲酯衍生物在碱性条件下水解得到式5的酸衍生物；在合适的偶联反应条件和试剂存在下，将式5的酸衍生物与式6的化合物偶联得到式I的衍生物(其中G＝酯类、醇类、磺胺类、酰胺类，四唑)；在碱性反应条件下，将式I的酯基水解，得到式I的酸结构(其中G＝-CO2H)。
本发明还要求保护上述式I所示的化合物，或其药学上可接受的盐、立体异构体、氘取代衍生物、其水合物或溶剂化物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗被EP4受体拮抗作用减轻的病症，即该药物作为EP4受体拮抗剂。
进一步地，EP4受体为前列腺素E2(PGE2)的受体。
上述式I所示的化合物可制备用于抑制细胞和酶增殖的制剂，使用上述制剂时，使细胞接触有效量的式I化合物或其氘代衍生物、其立体异构衍生物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，或其定义的药物组合物。
进一步地，病症选自癌症、炎性疾病和疼痛中的一种或几种。
进一步地，病症选自淋巴瘤、肾癌、皮肤癌、结肠癌、前列腺癌、乳腺癌、尿路上皮癌、肺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、三阴性乳腺癌(TNBC)、卵巢癌(例如，卵巢上皮性癌)、宫颈癌、肝癌、COX相关疼痛、神经病理性疼痛、多发性硬化症、子宫内膜异位症、炎症、炎症性疼痛和偏头痛中的一种或几种。
进一步地，炎症为类风湿关节炎。
将本发明活性化合物投与患者或受试者以治疗各种不同的状况，尤其是在“患者”或“受试者”指动物受试者，优选大鼠、小鼠、狗、猫、马、牛、绵羊、山羊、猴子等，尤其是人类受试者。受试者的任何或部分情况可从以下列表中进行治疗：
进一步地，药物经口、经肠外、静脉注射或经皮肤施用。
活性化合物可通过任何合适的途径给受试者，包括经口、非肠道、吸入喷雾、局部、直肠、鼻、口、阴道或通过植入的蓄水池。本文所用术语“非肠道注射”包括皮下注射、静脉注射、肌肉注射、关节内注射、滑膜内注射、胸骨内注射、鞘内注射、肝内注射、损伤内注射或灌注技术。
本发明中，如无特殊说明，术语解释如下：
“R”和“S”作为描述异构体的术语，是不对称取代碳原子立体化学构型的描述符。将不对称取代碳原子指定为“R”或“S”是通过应用本领域技术人员熟知的Cahn-IngoldPrelog优先规则完成的，并在国际纯粹与应用化学联合会(lUPAC)有机化学命名规则中进行了描述。
本文使用的术语Ci-j意味着该部分具有i-j碳原子。例如，C1-10烷基意味着烷基单元具有1到10之间的任意数量的碳原子。”如本文所用“烷基”系指完全饱和的直链、支链或环状烃链。
“Ar”或“芳基”指具有一个或多个闭环的芳香碳环部分。包括但不限于苯基、萘基、蒽基、苯蒽基、联苯和芘基。
“杂芳基”是指具有一个或多个闭环的环状部分，其中至少一个环具有一个或多个杂原子(例如，氧、氮或硫)，其中至少一个环是芳香族的，并且其中一个或多个环可以独立地熔融和/或桥接。包括但不限于吡啶基、吡咯基、吡唑啉基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、呋喃基、噻吩基、喹恶啉基、吲唑啉基、噻吩并[2,3-c]吡唑啉基、苯并呋喃基、噻吩基、苯并噻唑基。
“药学上可接受的盐”系指本发明化合物的酸或碱盐，其盐具有期望的药理活性，并且在生物上或其它方面并无不良影响。包括但不限于醋酸盐、己二酸酯、苯甲酸盐、柠檬酸盐、樟脑酯、樟脑磺酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸酯、乙磺酸乙酯、富马酸盐、庚酸葡萄糖酯、甘油磷酸、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙烷磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、草酸盐。
借由上述方案，本发明至少具有以下优点：
本发明公开了一种式I所示的化合物，其可用于制备PGE2的EP4受体拮抗剂或制备用于抑制细胞和酶增殖的制剂，为治疗与EP4受体相关的疾病提供了新方向。
上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合详细说明如后。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
以下实施例中，如无特殊说明，柱层析法使用Biotage SP4；溶剂去除采用Buchii旋转蒸发器或Genevac离心蒸发器；在酸性流动相条件下，用Waters自动净化仪和19x100mmXTERRA 5微米MS CI8柱进行制备LC/MS；用瓦里安400MHz谱仪记录核磁共振谱。当“惰性”一词用于描述反应器(例如，反应容器、烧瓶、玻璃反应器等)时，意味着反应器中的空气已被基本上不含水或干燥的惰性气体(例如氮气、氩气等)所取代。
以下缩略语具有所示含义：
HATU:2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯；DPCI:N,N'-二异丙基碳二亚胺；DIEA:N,N-二异丙基乙胺；TEA:三乙胺；DMAP:4-二甲氨基吡啶；DMF:N,N-二甲基甲酰胺；NMP:N-甲基吡咯烷酮；THF:四氢呋喃；DCM：二氯甲烷；TFA:三氟乙酸；TLC:薄层色谱法；Structure:结构式。
表1中所示化合物可在市场上买到或按照已知文献方法制备：
化合物A-1，A-2，A-3，A-5可在商业上获得；化合物A-4制备方法参考文献:Journalof Medicinal Chemistry，57(7),3040-3052；2014，Tetrahedron Letters,55(13),2056-2060；2014；化合物A-6制备方法参考文献:European Journal of Medicinal Chemistry，49,379-396；2012，WO2014073627；化合物A-7制备方法参考文献:Journal of theAmerican Chemical Society,140(27),8429-8433；2018，Synthesis,(16),2751-2757；2005；化合物A-8制备方法参考文献:WO 2012080450，WO2011078984；化合物A-9制备方法参考文献:WO2017100594；化合物A-10制备方法参考文献:ChemSusChem，12(13),3144-3151；2019。
表1不同化合物结构式
Figure BDA0002801637360000101
除化合物B-24外，起始物B-1至B-36(表2)可在商业上获得；B-24按照WO2013092979和RSC Advances,3(24),9391-9401；2013的方法制备。
表2不同化合物结构式
Figure BDA0002801637360000102
化合物C-1至C-10(表3)可通过商业获得或按照文献制备。具体，化合物C-1、C-2、C-3和C-5可从商业上获得；
C-4制备方法参考文献:WO2017156179，WO2006057845；
C-6制备方法参考文献:ACS Catalysis,10(1),405-411；2020，WO2011123678；
C-7制备方法参考文献:Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters,29(17),2503-2510；2019，WO2017156165；
C-8制备方法参考文献:WO2018214980，WO2009012375；
C-9制备方法参考文献:WO2018189340，US20080103182；
C-10制备方法参考文献:EP3101009，WO2016193461。
表3不同化合物结构式
Figure BDA0002801637360000111
实施例1：甲基(S)-4-(1-(3-氯-1-(3-(三氟甲基)苄基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸甲酯(I-1)
Figure BDA0002801637360000112
第一步：3-氯-1H-吲哚-2-羧酸甲酯(7)的制备
室温下，向1H-吲哚-2-羧酸甲酯(A-1，3.0g，17.1mmol)的无水DMF(30mL)溶液中加入NCS(3.4g，25.7mmol)。搅拌2小时后，将反应混合物倒入碎冰上，过滤掉沉淀物并干燥以获得粗产品。粗产物经硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯(10:1)纯化，得到中间体7(2.6g，75％产率)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.70(d,J＝8.1Hz,1H),7.42–7.31(m,2H),7.20(ddd,J＝7.9,6.5,1.2Hz,1H),3.97(s,3H),LCMS:m/z 210.1[M+H]+。
第二步：3-氯-1-(3-(三氟甲基)苄基)-1H-吲哚-2-羧酸甲酯(8)的制备
向3-氯-1H-吲哚-2-羧酸甲酯(7,3.3g，15.7mmol)的无水DMF(33mL)中的溶液中添加碳酸钾(2.6g，18.9mol，1.2eq)和1-(溴甲基)-3-(三氟甲基)苯(B-1，4.12g，17.2mmol，1.1eq)添加，在室温下搅拌2小时后，将反应混合物倒入碎冰中，将固体滤除，并将滤液干燥得到油状物。粗品经硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯(10:1)纯化得到中间体8(4.5g，收率77.3％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.63(s,1H),7.69(dd,J＝8.2,5.2Hz,2H),7.60(d,J＝7.8Hz,1H),7.56(s,1H),7.51(t,J＝7.8Hz,1H),7.42(ddd,J＝8.4,7.1,0.9Hz,1H),7.31–7.20(m,2H),5.97(s,2H),3.99(s,3H)，LCMS:m/z368.1[M+H]+。
第三步：3-氯-1-(3-(三氟甲基)苄基)-1H-吲哚-2-羧酸(9)的制备
向3-氯-1-(3-(三氟甲基)苄基)-1H-吲哚-2-羧酸甲酯(8,5.6g，15.2mol，1eq)的THF(112mL)和水(28mL)的混合物中添加NaOH(1.92g，45.7mol，3eq)。将反应混合物加热至50℃-60℃。用薄层色谱法监测，直到起始物质8完全消耗。在减压下浓缩反应混合物，并用稀盐酸调节pH至5-6，然后用乙酸乙酯(20ml×3)萃取。合并有机相并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。产物经硅胶柱层析，二氯甲烷-甲醇(10:1)纯化，得到中间体9(4.0g，收率75％)。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.63(s,1H),7.69(dd,J＝8.2,5.2Hz,2H),7.60(d,J＝7.8Hz,1H),7.56(s,1H),7.51(t,J＝7.8Hz,1H),7.42(ddd,J＝8.4,7.1,0.9Hz,1H),7.31–7.20(m,2H),5.97(s,2H)，LCMS:m/z354.1[M+H]+。
第四步：(S)-4-(1-(3-氯-1-(3-(三氟甲基)苄基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸甲酯(I-1)
在氮气氛围下，向中间体9(0.35g，1mmol，1eq)的混合物，DIPEA(0.4mL，2.0mmol，2eq)的DMF(5mL)中添加HATU(0.45g，1.2mmol，1.2eq)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟后，再将(S)-4-(1-氨基乙基)苯甲酸甲酯(C-1，0.22g，1.2mmol，1.2eq)加入上述溶液中，搅拌至中间体9在TLC上完全消失。将反应混合物倒在碎冰上，过滤掉沉淀物，得到粗混合物。粗产物经硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯(10:1)纯化，得到化合物I-1(0.33g，收率65％)。
1H
NMR(400MHz,DMSO)δ9.26(d,J＝7.8Hz,1H),7.85(d,J＝8.3Hz,2H),7.69–7.57(m,3H),7.55(s,1H),7.46(dd,J＝7.9,4.1Hz,3H),7.39–7.30(m,1H),7.25(t,J＝7.5Hz,2H),5.74-5.53(m,2H),5.18(p,J＝7.0Hz,1H),3.84(s,3H),1.44(d,J＝7.0Hz,3H)，LCMS:m/z515.1[M+H]+。
实施例2：(S)-4-(1-(3-((3-氯苯基)氨基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸酯(I-2)
1、合成中间体11
Figure BDA0002801637360000131
第一步：3-溴-1H-吲哚-2-羧酸甲酯(10)的制备步骤
此反应步骤与实施例1的第一步相似，将NCS替换为NBS，得到中间体10(收率69.2％)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.70(d,J＝8.1Hz,1H),7.42–7.31(m,2H),7.20(ddd,J＝7.9,6.5,1.2Hz,1H),3.97(s,3H),LCMS:m/z253.9[M+H]+。
第二步：3-溴-1-甲基-1H-吲哚-2-羧酸甲酯(11)的制备步骤
向中间体10(5.7g，22.4mmol，1eq)的无水DMF(57mL)溶液中加入碳酸钾(6.0g，44.89mmol，2eq)和碘甲烷(B-2，3.18g，22.4mmol，1eq),在室温下搅拌2小时后，将反应混合物倒入碎冰上，将固体过滤并干燥。中间体11经硅胶柱层析法纯化得到中间体11(4.6g，收率76.8％)。
1HNMR(400MHz,CDCl3)δ7.70(d,J＝8.1Hz,1H),7.42–7.31(m,2H),7.20(ddd,J＝7.9,6.5,1.2Hz,1H),3.99(s,3H),3.92(s,3H),LCMS:m/z267.9[M+H]+。
2、合成中间体13
Figure BDA0002801637360000132
第一步：Buchwald反应条件的一般程序：
在氮气氛围下，向中间体11(1.0mmol)和原料RNH2(1.2mmol)的甲苯(5mL)的混合物溶液中添加Pd(OAc)2(0.1mmol)、BINAP(0.15mmol)和t-BuONa(2eq)。反应混合物在65-80搅拌约2h，用薄层色谱法监测，然后用水稀释反应混合物。分离有机层，盐水洗涤，无水Na2SO4干燥，减压浓缩得到粗混合物，用石油醚-乙酸乙酯(10:1)硅胶柱层析纯化得到中间产物12。
第二步：甲酯水解的一般步骤
向中间体12(1mmol)的THF(10mL)和水(2.5mL)的混合物中加入NaOH(2mmol)，将反应混合物加热至50℃-60℃，直到中间体12在TLC上完全消失。减压浓缩反应混合物，用稀盐酸调节pH至5-6后，用乙酸乙酯(10mlx3)萃取，无水Na2SO4干燥，减压浓缩得到粗品，用石油醚-乙酸乙酯(10:1)硅胶柱层析法纯化得到中间体13。
中间体12a-12u和13a-13u(表4)的合成按照上述方案制备
表4不同化合物的结构及分子量
Figure BDA0002801637360000141
Figure BDA0002801637360000151
2、合成中间体14
Figure BDA0002801637360000152
在氮气氛围下，向中间体13(1mmol)、DIPEA(3mmol)的在DMF(8mL)混合溶液中加入HATU(1.5mmol)，在室温下将反应混合物搅拌30min后，将原料C-1(1.0mmol)添加到上述溶液中。将反应混合物搅拌约2小时，用薄层色谱法监测反应完全后，将反应混合物倒入碎冰上，过滤沉淀物，得到粗品，用石油醚-乙酸乙酯(10:1)进行硅胶柱层析纯化，得到中间体14。
使用中间体13a及(S)-4-(1-氨基乙基)苯甲酸甲酯(C-1)以类似中间体14的制备方法制备化合物I-2。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.64(d,J＝7.6Hz,1H),7.97(s,1H),7.84(d,J＝8.2Hz,2H),7.64(d,J＝8.4Hz,1H),7.40(td,J＝16.3,7.8Hz,4H),7.16(dt,J＝11.8,7.7Hz,2H),6.75(d,J＝7.7Hz,1H),6.67–6.52(m,2H),5.19(p,J＝6.9Hz,1H),3.99(s,3H),3.88(s,3H),1.40(d,J＝7.0Hz,3H)，LCMS:m/z462.1[M+H]+。
实施例3：(S)-4-(1-(1-甲基-3-((3-(三氟甲基)苯基)氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸甲酯(I-3)
使用中间体13b及(S)-4-(1-氨基乙基)苯甲酸甲酯(C-1)以类似中间体14的制备方法制备化合物I-3。
1HNMR(400MHz,DMSO-6)δ8.62(d,J＝7.7Hz,1H),8.09(s,1H),7.77(d,J＝8.3Hz,2H),7.60(d,J＝8.4Hz,1H),7.41(d,J＝8.0Hz,1H),7.37-7.25(m,4H),7.10(t,J＝7.5Hz,1H),6.99(d,J＝7.7Hz,1H),6.90(s,1H),6.82(d,J＝8.2Hz,1H),5.15(t,J＝7.2Hz,1H),3.95(s,3H),3.83(s,3H),1.35(d,J＝7.0Hz,3H)，LCMS:m/z496.1[M+H]+。
实施例4:(S)-4-(1-(1-甲基-3-((3-硝基苯基)氨基)-1H-吲哚2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸甲酯(I-4)
使用中间体13c及(S)-4-(1-氨基乙基)苯甲酸甲酯(C-1)以类似中间体14的制备方法制备化合物I-4。
1HNMR(400MHz,DMSO)δ8.71(d,J＝7.8Hz,1H),8.33(s,1H),7.84(d,J＝8.2Hz,2H),7.71(d,J＝8.4Hz,1H),7.58(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),7.45(ddd,J＝15.3,13.2,5.1Hz,6H),7.20(t,J＝7.5Hz,1H),7.08(dd,J＝8.0,1.2Hz,1H),5.25(p,J＝6.9Hz,1H),4.03(s,3H),3.93(s,3H),1.46(d,J＝7.0Hz,3H)，LCMS:m/z 473.2[M+H]+。
类似地，按照中间体14的制备方法制备中间体14d-14u(表5)，原料分别选择中间体13d-13u。
表5不同化合物的结构及分子量
Figure BDA0002801637360000161
Figure BDA0002801637360000171
实施例5:(S)-4-(1-(3-氯-1-(3-(三氟甲基)苄基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-5)
Figure BDA0002801637360000172
室温下，向化合物I-1(0.47gm，1mol)的THF(10mL)和水(2.5mL)中混合物中添加NaOH(0.11g，3.1mmol)。将反应混合物加热至50℃-60℃，直到化合物I-1在TLC上完全消失。然后，减压浓缩反应混合物，用稀HCl调节pH至5-6，然后用乙酸乙酯萃取，无水Na2SO4干燥，减压浓缩得到粗产物。产物经硅胶柱层析(二氯甲烷-甲醇10:1)纯化，得到化合物I-5(0.32g，65％)。
1HNMR(400MHz,DMSO)δ9.25(d,J＝7.9Hz,1H),7.85(d,J＝8.3Hz,2H),7.69–7.57(m,3H),7.55(s,1H),7.47(dd,J＝11.1,8.1Hz,3H),7.39–7.30(m,1H),7.30–7.19(m,2H),5.72–5.56(m,2H),5.18(p,J＝7.0H z,1H),1.44(d,J＝7.0Hz,3H)，LCMS:m/z501.1[M+H]+。
实施例6:(S)-4-(1-(1-甲基-3-((3-(三氟甲基)苯基)氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-6)
Figure BDA0002801637360000181
室温下，向化合物I-3(0.49g，1mmol)的THF(10mL)和水(2.5mL)中混合物中添加NaOH(0.11g，3.1mmol)。将反应混合物加热至50℃-60℃，直到化合物I-3在TLC上完全消失。然后，在减压下浓缩反应混合物，用稀HCl调节pH至5-6，然后用乙酸乙酯(10mLx3)萃取，在无水Na2SO4上干燥并减压浓缩得到粗产物。粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷-甲醇10:1)纯化得到化合物I-6(0.65g，70％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.82(s,1H),8.58(d,J＝7.7Hz,1H),8.07(s,1H),7.73(d,J＝8.2Hz,2H),7.60(d,J＝8.4Hz,1H),7.38(d,J＝8.0Hz,1H),7.31(dd,J＝13.7,8.4Hz,4H),7.09(t,J＝7.5Hz,1H),6.98(d,J＝7.6Hz,1H),6.86(s,1H),6.81(d,J＝8.2Hz,1H),5.18–5.04(m,1H),3.94(s,3H),1.32(d,J＝6.9Hz,3H)，LCMS:m/z482.2[M+H]+，[α]20＝+159.6(C＝1,CH3OH)。
实施例7:(S)-4-(1-(3-((3,5-二甲基苯基)氨基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-7)
使用中间体14d和氢氧化钠以类似于实施例6中制备化合物I-6的方法制备化合物I-7。
LCMS:m/z442.2[M+H]+。
实施例8:(S)-4-(1-(3-((3-氟苯基)氨基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-8)
使用中间体14e和氢氧化钠以类似于实施例6中制备化合物I-6的方法制备化合物I-8。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.84(s,1H),8.58(d,J＝7.6Hz,1H),7.93(s,1H),7.75(d,J＝8.3Hz,2H),7.59(d,J＝8.4Hz,1H),7.38(d,J＝8.0Hz,1H),7.35–7.27(m,3H),7.11(dt,J＝23.7,7.8Hz,2H),6.46(ddd,J＝10.1,6.4,2.0Hz,2H),6.27(dt,J＝11.8,2.2Hz,1H),5.19–5.05(m,1H),3.93(s,3H),1.34(d,J＝7.0Hz,3H)，LCMS:m/z432.2[M+H]+，[α]20＝+105.3(C＝1,CH3OH)。
实施例9:(S)-4-(1-(3-((3-氯苯基)氨基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-9)
使用化合物I-2和氢氧化钠以类似于实施例6中制备化合物I-6的方法制备化合物I-9。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.85(s,1H),8.59(d,J＝7.6Hz,1H),7.93(s,1H),7.77(d,J＝8.2Hz,2H),7.59(d,J＝8.4Hz,1H),7.39(d,J＝8.0Hz,1H),7.32(d,J＝8.2Hz,3H),7.18–7.05(m,2H),6.71(dd,J＝7.8,1.1Hz,1H),6.62–6.55(m,1H),6.53(d,J＝1.8Hz,1H),5.14(p,J＝6.9Hz,1H),3.94(s,3H),1.35(d,J＝7.0Hz,3H),LCMS:m/z448.1[M+H]+，[α]20＝+182.3(C＝1,CH3OH)。
实施例10:(S)-4-(1-(3-((3-溴苯基)氨基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-10)
使用中间体14f和氢氧化钠以类似于实施例6中制备化合物I-6的方法制备化合物I-10。
LCMS:m/z492.1[M+H]+。
实施例11:(S)-4-(1-(1-甲基-3-(间甲苯胺基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-11)
使用中间体14g和氢氧化钠以类似于实施例6中制备化合物I-6的方法制备化合物I-11。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.84(s,1H),8.78(d,J＝7.6Hz,1H),7.81(d,J＝8.2Hz,2H),7.69(s,1H),7.63(d,J＝8.4Hz,1H),7.43(d,J＝7.9Hz,1H),7.35(dd,J＝13.5,7.9Hz,3H),7.09(dt,J＝21.6,7.6Hz,2H),6.60(d,J＝7.4Hz,1H),6.48(d,J＝7.7Hz,2H),5.17(p,J＝6.9Hz,1H),4.03(s,3H),2.21(s,3H),1.38(d,J＝6.9Hz,3H)，LCMS:m/z428.2[M+H]+，[α]20＝+373.9(C＝1,CH3OH)。
实施例12:(S)-4-(1-(3-((3-甲氧基苯基)氨基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-12)
使用中间体14h和氢氧化钠以类似于实施例6中制备化合物I-6的方法制备化合物I-12。
LCMS:m/z444.2[M+H]+。
实施例13:(S)-4-(1-(1-甲基-3-((4-(三氟甲基)苯基)氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-13)
使用中间体14i和氢氧化钠以类似于实施例6中制备化合物I-6的方法制备化合物I-13。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.76(s,1H),8.52(d,J＝7.7Hz,1H),8.19(s,1H),7.73(d,J＝8.3Hz,2H),7.59(d,J＝8.4Hz,1H),7.42(d,J＝8.6Hz,2H),7.37(d,J＝8.0Hz,1H),7.30(dd,J＝16.2,7.8Hz,3H),7.09(t,J＝7.5Hz,1H),6.68(d,J＝8.5Hz,2H),5.12(p,J＝6.9Hz,1H),3.92(s,3H),1.34(d,J＝7.0Hz,3H)，LCMS:m/z482.2[M+H]+。
实施例14:(S)-4-(1-(3-((3,5-双(三氟甲基)苯基)氨基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-14)
使用中间体14j和氢氧化钠以类似于实施例6中制备化合物I-6的方法制备化合物I-14。
LCMS:m/z550.1[M+H]+。
实施例15:(S)-4-(1-(3-((4-氯-3-(三氟甲基)苯基)氨基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-15)
使用中间体14k和氢氧化钠以类似于实施例6中制备化合物I-6的方法制备化合物I-15。
LCMS:m/z516.1[M+H]+。
实施例16:(S)-4-(1-(1-甲基-3-((3-(吡咯烷-1-基)苯基)氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-16)
使用中间体14l和氢氧化钠以类似于实施例6中制备化合物I-6的方法制备化合物I-16。
LCMS:m/z483.2[M+H]+。
实施例17:(S)-4-(1-(1-甲基-3-((3-吗啉苯基)氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-17)
使用中间体14m和氢氧化钠以类似于实施例6中制备化合物I-6的方法制备化合物I-17。
LCMS:m/z499.2[M+H]+。
实施例18:(S)-4-(1-(5-氟-1-甲基-3-((3-(三氟甲基)苯基)氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-18)
1、中间体19和中间体20的制备
Figure BDA0002801637360000201
中间体19a-19e和20a-20e(表6)按照以上路线的方法制备：
步骤1：分别以A-2、A-3、A-4、A-5、A-6和NBS为起始原料，以类似于中间体10的制备方法制备中间体19a-19e。
步骤2：分别以中间体19a-19d和碘甲烷(B-2)为起始原料，以类似于制备中间体11的方法制备中间体20a-20e。
表6不同化合物的结构及分子量
Figure BDA0002801637360000202
2、中间体21和中间体22的制备
Figure BDA0002801637360000203
中间体21a-21e和22a-22e以上路线制备：
步骤1：分别使用中间体20a-20e和3-(三氟甲基)苯胺(B-4)为原料，以类似于制备中间体12的方法制备中间体21a-21e。
步骤2：分别使用中间体21a-21e和氢氧化钠为原料，以类似于制备中间体13的方法制备中间体22a-22e。
表7不同化合物的结构及分子量
Figure BDA0002801637360000211
3、中间体23的制备
Figure BDA0002801637360000212
使用中间体22及(S)-4-(1-氨基乙基)苯甲酸甲酯(C-1)为原料，以类似于制备中间体14的方法制备中间体23。中间体23a-23e(表8)按照上述路线制备。
表8不同化合物的结构及分子量
Figure BDA0002801637360000213
使用中间体23a和氢氧化钠为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备I-18。
LCMS:m/z500.1[M+H]+。
实施例19:(S)-4-(1-(5-氯-1-甲基-3-((3-(三氟甲基)苯基)氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-19)
使用中间体23b和氢氧化钠为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-19。
LCMS:m/z516.1[M+H]+。
实施例20:(S)-4-(1-(6-氯-1-甲基-3-((3-(三氟甲基)苯基)氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-20)
使用中间体23c和氢氧化钠为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-20。
LCMS:m/z516.1[M+H]+。
实施例21:(S)-4-(1-(1,5-二甲基-3-((3-(三氟甲基)苯基)氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-21)
使用中间体23d和氢氧化钠为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-21。
LCMS:m/z496.2[M+H]+。
实施例22:(S)-4-(1-(1-(甲基-d3)-3-((3-(三氟甲基)苯基)氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-22)
1、合成中间体24
Figure BDA0002801637360000221
分别使用中间体10和B-1、B-15、B-16、B-17、B-18和B-19为原料，以类似于制备中间体11的方法制备中间体24a-24f(表9)。
表9不同化合物的结构及分子量
Figure BDA0002801637360000222
2、合成中间体26
Figure BDA0002801637360000231
中间体25a-25f和26a-26f(表10)按照以上路线制备：
步骤1：使用中间体24和3-(三氟甲基)苯胺(B-4)为原料，以类似于制备中间体12的方法制备中间体25。
步骤2：使用中间体25和NaOH为原料，以类似于制备中间体13的方法制备中间体26。
表10不同化合物的结构及分子量
Figure BDA0002801637360000232
3、合成中间体27
Figure BDA0002801637360000233
中间体27a-27f(表11)是按照以上路线制备的：使用中间体26和(S)-4-(1-氨基乙基)苯甲酸甲酯(C-1)为原料，以类似于制备中间体14的方法制备中间体27。
表11不同化合物的结构及分子量
Figure BDA0002801637360000241
使用中间体27a和NaOH为原料，以类似于方案7中制备化合物I-6的方法制备化合物I-22。LCMS:m/z485.2[M+H]+。
实施例23:(S)-4-(1-(1-乙基-3-((3-(三氟甲基)苯基)氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-23)
使用中间体27b和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-23。LCMS:m/z496.2[M+H]+。
实施例24:(S)-4-(1-(1-(2-羟乙基)-3-((3-(三氟甲基)苯基)氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-24)
使用中间体27c和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-24。
LCMS:m/z512.2[M+H]+。
实施例25:(S)-4-(1-(1-异丁基-3-((3-(三氟甲基)苯基)氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-25)
使用中间体27d和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-25。
LCMS:m/z524.2[M+H]+。
实施例26:(S)-4-(1-(1-苄基-3-((3-(三氟甲基)苯基)氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-26)
使用中间体27e和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-26。
LCMS:m/z558.2[M+H]+。
实施例27:(R)-4-(1-(1-甲基-3-((3-(三氟甲基)苯基)氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-27)
Figure BDA0002801637360000251
步骤1：利用中间体13b和甲基(R)-4-(1-氨基乙基)苯甲酸盐(C-2)为原料，以类似于制备中间体14的方法制备中间体28。
步骤2：使用中间体28和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备I-27。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.82(s,1H),8.62(d,J＝7.7Hz,1H),8.11(s,1H),7.78(d,J＝8.3Hz,2H),7.64(d,J＝8.4Hz,1H),7.43(d,J＝8.0Hz,1H),7.40–7.29(m,4H),7.13(t,J＝7.4Hz,1H),7.03(d,J＝7.6Hz,1H),6.92(s,1H),6.86(d,J＝8.2Hz,1H),5.17(p,J＝7.0Hz,1H),3.98(s,3H),1.37(d,J＝7.0Hz,3H)，LCMS:m/z 496.2[M+H]+，[α]20＝-177.2(C＝1,CH3OH)。
实施例28:(S)-4-(1-(1-甲基-3-(吡啶-2-基氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-28)
使用中间体14n和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-28。
LCMS:m/z415.2[M+H]+。
实施例29:(S)-4-(1-(1-甲基-3-((6-甲基吡啶-2-基)氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-29)
使用中间体14o和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-29。
LCMS:m/z429.2[M+H]+。
实施例30:(S)-4-(1-(1-甲基-3-(3-(三氟甲基)苯氧基)-1H-吲哚2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-30)
1、合成中间体31
Figure BDA0002801637360000252
中间体29a、29b可由中间体11与中间体3制备-(三氟甲基)苯酚(B-22)和3-(三氟甲基)苯硫醇(B-23)遵循WO2019199979中的类似方法分别制备。使用中间体11和4,4,5,5-四甲基-2-(3-(三氟甲基)苄基)-1,3,2-二氧杂环戊烷(B-24)按照WO2007068621的类似方法制备中间体29c。以中间体29a-c甲酯为原料以类似于合成中间体12的方法得到中间体30a-c，该中间体与(S)-4-(1-氨基乙基)苯甲酸甲酯(C-1)的偶联(步骤2)以类似于合成中间体14的方法分别制备中间体31a-c。
2、合成I-30
使用中间体31a和NaOH为原料，以类似制备化合物I-6的方法制备化合物I-30。
LCMS:m/z483.2[M+H]+。
实施例31:(S)-4-(1-(1-甲基-3-((3-(三氟甲基)苯基)硫基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-31)
使用中间体31b和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-31。
LCMS:m/z499.1[M+H]+。
实施例32:(S)-4-(1-(1-甲基-3-(3-(三氟甲基)苄基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-32)
使用中间体31c和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-32。
LCMS:m/z481.2[M+H]+。
实施例33:(S)-4-(1-(3-(环己基氨基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-33)
使用中间体14p和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-33。
LCMS:m/z420.2[M+H]+。
实施例34:(S)-4-(1-(3-(叔丁胺基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-34)
使用中间体14q和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-34。
LCMS:m/z394.2[M+H]+。
实施例35:(S)-4-(1-(1-甲基-3-(萘-1-基氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-35)
使用中间体14r和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-35。
LCMS:m/z464.2[M+H]+。
实施例36:(S)-4-(1-(1-甲基-3-(吡啶-4-氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-36)
使用中间体14s和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-36。
LCMS:m/z415.2[M+H]+。
实施例37:(S)-4-(1-(1-(3-(三氟甲基)苄基)-3-((3-(三氟甲基)苯基)氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-37)
使用中间体27f和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-37。
LCMS:m/z626.2[M+H]+。
实施例38:(S)-4-(1-(1-甲基-5-(三氟甲基)-3-((3-(三氟-甲基)苯基)氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-38)
使用中间体23e和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-38。
LCMS:m/z550.2[M+H]+。
实施例39:(S)-4-(1-(1-甲基-3-((3-(三氟甲基)苯基)氨基)-1H-吡咯[2,3-b]吡啶-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-39)
1、合成中间体36a-c
Figure BDA0002801637360000271
采用A-7，A-8和A-9为起始材料，按照以上路线制备中间体36a-c(表12)。具体地，溴化步骤(步骤1)与以类似于制备中间体10的方法使用NBS制备。烷基化步骤(步骤2)采用碘甲烷(B-2)以类似于制备中间体11的方法制备。Buchwald反应步骤(步骤3)采用3-(三氟甲基)苯胺(B-4)以类似于制备中间体12的方法制备。水解步骤(步骤4)采用NaOH以类似于制备中间体13的方法制备，从而获得中间体35a-c。以中间体35a-c与甲基(S)-4-(1-氨基乙基)苯甲酸甲酯(c-1)为原料，以类似于制备中间体14的方法发生偶联反应制备中间体36a-c。
2、合成化合物I-39
使用中间体36a和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-39。
LCMS:m/z483.2[M+H]+。
表12不同化合物的结构及分子量
Figure BDA0002801637360000272
实施例40:(S)-4-(1-(1-甲基-3-((3-(三氟甲基)苯基)氨基)-1H-吡咯[3,2-c]吡啶-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-40)
使用中间体36b和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-40。
LCMS:m/z483.2[M+H]+。
实施例41:(S)-4-(1-(7-甲基-5-((3-(三氟甲基)苯基)氨基)-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-41)
使用中间体42c和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-41。
LCMS:m/z484.2[M+H]+。
实施例42:(S)-4-(1-(5-氯-7-((3-((二氟-l3-甲基)-l2-氟酰基)苯基)甲基)-7H吡咯[2,3-d]嘧啶-6-羧肟)乙基)苯甲酸(I-42)
Figure BDA0002801637360000281
以化合物A9为起始原料，按照合成I-1的方法制备中间体37。采用中间体37和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-42。LCMS:m/z503.1[M+H]+.
实施例43:(S)-4-(1-(1-甲基-3-((3-硝基苯基)氨基)-1H吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-43)
使用产物I-4和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-43。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.78(s,1H),8.59(d,J＝7.8Hz,1H),8.24(s,1H),7.73(d,J＝8.3Hz,2H),7.61(d,J＝8.4Hz,1H),7.49(dd,J＝8.0,1.5Hz,1H),7.39(d,J＝8.2Hz,2H),7.33(dd,J＝12.0,4.6Hz,4H),7.10(t,J＝7.4Hz,1H),7.01(dd,J＝8.1,1.7Hz,1H),5.23-5.05(m,1H),3.94(s,3H),1.35(d,J＝7.0Hz,4H)，LCMS:m/z 459.2[M+H]+，[α]20＝+104.4(C＝1,CH3OH)。
实施例44:(S)-4-(1-(3-((3-氰基苯基)氨基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-44)
使用中间体14t和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-44。
LCMS:m/z439.2[M+H]+。
实施例45:(S)-4-(1-(3-([1,1'-联苯基]-3-氨基)-1-甲基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-45)
使用中间体14u和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-45。
LCMS:m/z490.2[M+H]+。
实施例46:(S)-4-(1-(3-(三氟甲基)-1-(3-(三氟甲基)苄基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-46)
Figure BDA0002801637360000282
以化合物A-11为起始原料，按照制备I-1的方法制备中间体38；以中间体38和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-5的方法制备化合物I-46。LCMS:m/z535.1[M+H]+。
实施例47:(S)-4-(1-(3-氰基-1-(3-(三氟甲基)苄基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-47)
Figure BDA0002801637360000291
以化合物A-12为起始原料，按照制备I-1的方法制备中间体39；以中间体39和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-5的方法制备化合物I-47。LCMS:m/z492.2[M+H]+。
实施例48:(S)-4-(1-(3-氨甲酰基)-1-(3-(三氟甲基)苄基)-1H吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-48)
Figure BDA0002801637360000292
向稀硫酸(100mg，84％)中加入50mg产物I-47，在20℃-30℃搅拌反应混合物，通过TLC监测反应，反应完全后，经过一系列后处理并在真空中干燥得到粗产物，粗产物经硅胶柱层析用乙酸乙酯纯化，得到化合物I-48(15mg，32％)。LCMS:m/z510.2[M+H]+。
实施例49:(S)-4-(1-(3-氯-1-新戊基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-49)
Figure BDA0002801637360000293
以化合物B-32为起始原料，按照制备I-1的方法制备中间体40；以中间体40和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-5的方法制备化合物I-47。LCMS:m/z413.2[M+H]+。
实施例50:4-((1-甲基-3-((3-(三氟甲基)苯基)氨基)-1H-吲哚2-甲酰胺基)甲基)苯甲酸(I-50)
1、合成中间体41a-41f
Figure BDA0002801637360000294
使用中间体13b和胺(C-3、C-4、C-5、C-6、C-7和C-8)为原料，以类似于中间体14的制备方法制备中间体41a-41f(表13)。
表13不同化合物的结构及分子量
Figure BDA0002801637360000301
2、合成I-50
使用中间体41a和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-50。
LCMS:m/z468.2[M+H]+。
实施例51:4-(2-(1-甲基-3-((3-(三氟甲基)苯基)氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)丙-2-基)苯甲酸(I-51)
使用中间体41b和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-51。
LCMS:m/z468.2[M+H]+。
实施例52:4-(1-(1-甲基-3-((3-(三氟甲基)苯基)氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)环丙基)苯甲酸(I-52)
使用中间体41c和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-52。
LCMS:m/z494.2[M+H]+。
实施例53:4-(1-(1-甲基-3-((3-(三氟甲基)苯基)氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)环丁基)苯甲酸(I-53)
使用中间体41d和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-53。
LCMS:m/z508.2[M+H]+。
实施例54:4-(3-(1-甲基-3-((3-(三氟甲基)苯基)氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)氧杂环丁烷-3-基)苯甲酸(I-54)
使用中间体41e和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-54。
LCMS:m/z510.2[M+H]+。
实施例55:3-(1-(1-甲基-3-((3-(三氟甲基)苯基)氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-55)
使用中间体41f和NaOH为原料，以类似于制备化合物I-6的方法制备化合物I-55。
LCMS:m/z482.2[M+H]+。
实施例56:N-(4-(1H-四唑-5-基)苄基)-1-甲基-3-((3-(三氟甲基)苯基)氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(I-56)
Figure BDA0002801637360000311
使用中间体13b和(4-(1H-四唑-5-基)苯基)甲烷胺(C-9)为原料，以类似于制备中间体14的方法制备化合物I-56，反应路线如上。产物LCMS：m/z492.2[M+H]+。
实施例57:N-(4-(N-环丙基氨磺酰基)苄基)-1-甲基-3-((3-(三氟甲基)苯基)氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(I-57)
使用中间体13b和4-(氨甲基)-N-环丙基苯磺酰胺(C-10)为原料，以类似于制备化合物I-56的方法制备化合物I-57。产物LCMS：m/z543.2[M+H]+。
实施例58:(S)-N-(1-(4-(羟甲基)苯基)乙基)-1-甲基-3-((3-(三氟甲基)苯基)氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(I-58)
Figure BDA0002801637360000312
向产品I-3(50mg，0.1mmol)的THF(5ml)溶液中，分批加入硼氢化钠(11.4mg，0.3mmol)。将上述混合物冷却至0℃，并在约10分钟内逐滴加入三氟化硼乙醚溶液(0.5mL，133mmol)。将反应加热至20℃-30℃，通过TLC监测反应完成后，将反应冷却至0℃并用氢氧化钠水小心地淬火。将所述内容物搅拌3h，在真空下去除THF，将所得水悬浮液冷却至0℃，并过滤产物，在硅胶上使用正己烷-乙酸乙酯(1:1)对粗产物进行柱色谱纯化，得到化合物I-58(20mg，43％)。产物LCMS:m/z468.2[M+H]+。
实施例59:(S)-N-(1-(4-氨甲酰苯基)乙基)-1-甲基-3-((3-(三氟甲基)苯基)氨基)-1H-吲哚-2-甲酰胺(I-59)
Figure BDA0002801637360000321
氮气氛围下，向烧瓶中加入产品I-6(300mg，0.62mmol)、二氧化硅负载氯化铵(50mg，0.93mmol，1.5equiv)和TsCl(178mg，0.93mmol，1.5eq)、TEA(93mg，0.93mmol，1.5eq)并充分混合。TLC检测反应完成后，加入乙酸乙酯(50mL)，然后过滤，用0.02NHCl溶液洗涤滤液。有机层在无水硫酸镁上干燥并蒸发。粗品经硅胶柱层析，正己烷-乙酸乙酯(1:1)纯化，得到化合物I-59(149mg，50％)。
1HNMR(400MHz,DMSO)δ8.54(d,J＝7.7Hz,1H),8.07(s,1H),7.86(s,1H),7.69(d,J＝8.3Hz,2H),7.59(d,J＝8.5Hz,1H),7.37(d,J＝7.9Hz,1H),7.32(ddd,J＝8.3,3.1,1.7Hz,2H),7.26(d,J＝8.2Hz,3H),7.09(t,J＝7.3Hz,1H),6.99(d,J＝7.8Hz,1H),6.90–6.80(m,2H),5.18–4.99(m,1H),3.94(s,3H),1.29(d,J＝7.0Hz,3H)，LCMS:m/z481.2[M+H]+。
实施例60:(S)-4-(1-(-1(-3(三氟甲基)苄基)-3-乙烯基-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-60)1、中间体45a-d的合成
Figure BDA0002801637360000322
中间体42可由化合物A-1及N-碘代丁二酰亚胺(NIS)以类似于中间体8的制备方法制备，中间体43a、43c可以分别由中间体42和乙烯基硼酸频哪醇酯(B-32)、环丙基硼酸(B-34)参照WO2020016453的类似方法制备，中间体43b可以由中间体42和三甲基乙炔基硅(B-33)参照WO2016154434的类似方法制备，中间体43d可以有中间体42和(二氟甲基)三甲基硅烷(B-35)参照J.Am.Chem.Soc.134:5524–5527的类似方法制备。以中间体43a-d甲酯为原料，以类似于合成中间体12的方法得到中间体44a-d，该中间体与(S)-4-(1-氨基乙基)苯甲酸甲酯(C-1)的偶联(步骤2)以类似于合成中间体14的方法分别制备中间体45a-d。
表14不同化合物的结构及分子量
Figure BDA0002801637360000331
2、化合物I-60的合成
使用中间体45a和NaOH为原料，以类似制备化合物I-6的方法制备化合物I-60。
产物LCMS：m/z493.2[M+H]+。
实施例61:(S)-4-(1-(3-乙炔基-1-(3-(三氟甲基)苄基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-61)
使用中间体45b和NaOH为原料，以类似制备化合物I-6的方法制备化合物I-61。
产物LCMS：m/z491.1[M+H]+。
实施例62:(S)-4-(1-(3-环丙基-1-(3-(三氟甲基)苄基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-62)
使用中间体45c和NaOH为原料，以类似制备化合物I-6的方法制备化合物I-62。
产物LCMS：m/z507.2[M+H]+。
实施例63:(S)-4-(1-(3-(二氟甲基)-1-(3(三氟甲基)苄基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-63)
使用中间体45d和NaOH为原料，以类似制备化合物I-6的方法制备化合物I-63。
产物LCMS：m/z517.2[M+H]+。
实施例64:(S)-4-(1-(3-氯-1-(环丙基甲基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(I-64)
使用中间体7和化合物B-36为原料，以类似制备化合物8的方法制备化合物3-氯-1-(环丙基亚甲基)-1H-吲哚-2-甲酸甲酯，后续步骤中的甲酯水解以类似于合成中间体9的方法制备，产物与(S)-4-(1-氨基乙基)苯甲酸甲酯(C-1)的偶联以类似于合成I-1的方法制备(S)-4-(1-(3-氯-1-(环丙基甲基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸甲酯。
使用中间体(S)-4-(1-(3-氯-1-(环丙基甲基)-1H-吲哚-2-甲酰胺基)乙基)苯甲酸甲酯和氢氧化钠为原料，以类似制备化合物I-5的方法制备化合物I-64。
产物LCMS：m/z397.1[M+H]+。
实施例65:生物活性测试
一、不同化合物对EP1及EP3受体抑制活性的测定-IP1实验：
1.按照试剂盒说明书配制1倍工作液浓度的激活缓冲液待用；
2.利用DMSO将阳性化合物及待测化合物进行梯度稀释10个浓度，然后用1倍工作液浓度激活缓冲液将10个浓度的化合物分别稀释至10倍对应浓度，振荡混匀备用；EP1阳性化合物为AH6809，EP3阳性化合物为L-798106；其中，EP1及EP3受体待测化合物的10个对应浓度均分别为200000、6666.67、2222.22、740.74、246.91、82.30、27.43、9.14、3.05、1.02nM；
3.EP1-HEK和EP3-HEK细胞经胰酶消化处理，离心后去除培养基，将细胞重悬于1倍工作液浓度的激活缓冲液中，经细胞计数后接种于384孔板中。接种密度分别为EP1约4500细胞/孔/9.1μL，EP3约5000细胞/孔/9.1μL；
4.取1.4μL步骤2中稀释好的10倍对应浓度分别加入到相应实验孔中(2个重复)，其中Max孔加入1.4μL浓度最大的10倍对应浓度的阳性化合物溶液，Min孔加入1.4μL浓度最小的10倍对应浓度的DMSO缓冲液(2v％)，离心后放置于37℃孵育10min；
5.用1倍工作液浓度的激活缓冲液配制120nM PGE2缓冲液，取3.5μL加入到EP1受体各实验孔中；配制60nM PGE2缓冲液，取3.5μL加入到EP3受体各实验孔中；离心后放置于37℃孵育1h；
6.用测试缓冲液将IP1和Anti-IP1稀释至工作浓度；
7.孵育完成后，加入3μL IP1至所有实验孔中；
8.然后加入3μL Anti-IP1至所有实验孔中，离心后于室温静置1h；
9.孵育完成后，检测665nm和620nm读值。
二、化合物对EP2及EP4受体抑制活性的测定-cAMP实验：
1.按照试剂盒说明书配制1倍工作液浓度的激活缓冲液待用；
2.利用DMSO将阳性化合物及待测化合物进行梯度稀释10个或11个浓度，然后用1倍工作液浓度的激活缓冲液将阳性化合物和DMSO分别稀释至10倍对应浓度；EP2及EP4受体待测化合物的初始浓度均为20μM，EP2受体的10个对应浓度分别为20000、6666.67、2222.22、740.74、246.91、82.30、27.43、9.14、3.05、1.02nM；EP4受体的11个对应浓度分别为20000、6666.67、2222.22、740.74、246.91、82.30、27.43、9.14、3.05、1.02、0.34nM；
3.EP2-HEK和EP4-HEK细胞胰酶消化处理，离心后去除培养基，将细胞重悬于1倍工作液浓度的激活缓冲液中，经细胞计数后接种于384孔板中。接种密度均为1500细胞/孔/5μL；
4.取1μL步骤2中稀释好的10倍对应浓度化合物分别加入至相应实验孔中,其中Max孔加入1μL浓度最大的10倍对应浓度的阳性化合物，Min孔加入1μL浓度最小的10倍对应浓度DMSO缓冲液(2v％)，离心后放置于37℃孵育15min；
5.用1倍工作液浓度的激活缓冲液配制0.125nM PGE2缓冲液，取4μL加入到EP2受体各实验孔中；配制100nM PGE2缓冲液，取4μL加入到EP4受体各实验孔中；离心后放置于37℃孵育30min；
6.用测试缓冲液将Eu-cAMP稀释至工作浓度，取5μL/孔加入相应实验孔中；
7.将ULightTM-anti-cAMP用测试缓冲液稀释至工作浓度，然后取5μL/孔加入相应实验孔中；离心后放置于室温孵育1h；
8.孵育完成后，检测665nm和620nm读值。
cAMP试验中一些实施例对EP4酶的体外抑制活性如表14所示，表格中，各字母代表的含义如下：A＝0-100nM；B＝100nM-1μM；C>＝1μM。
表14 cAMP酶抑制浓度IC50
Figure BDA0002801637360000351
以上所述仅是本发明的优选实施方式，并不用于限制本发明，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种化合物，其特征在于，其结构式如式I所示：
Figure FDA0002801637350000011
其中：
R1选自取代或未取代的C1-10直链或支链烷基、取代或未取代的C3-10环烷基、取代或未取代的C1-3氘代烷基、取代或未取代的C7-12烷基芳基或取代或未取代的C6-10烷基杂芳基；
当X选自NH、O、S或CH2时，则R2选自氢、取代或未取代的C6-14芳基、取代或未取代的C5-10杂芳基、取代或未取代的C3-7饱和碳环或取代或未取代的C1-10直链或支链烷基；
当X选自卤素、CN、CONH2、取代或未取代的C1-3链状或环状烷基、乙烯基、乙炔基时，则R2不存在；
R3和R4独立地选自氢、卤素、CN、取代或未取代的C1-3烷基、或取代或未取代的C1-3烷氧基；
R5和R6独立地选自氢、C1-3直链或支链烷基；或R5和R6组成C3-4环烷基或C3-4杂环烷基；
G选自氢、烃基醇基、四氮唑基、-CONHSO2R7、-CO2R7、-CONHR7、-SO2NHR7或NHSO2R7；
其中R7选自氢、取代或未取代的C1-5烷基、芳基或杂芳基；
W1，W2独立地选自满足价态的C或N。
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，式I中的-XR2选自一种如下结构式的基团：
Figure FDA0002801637350000012
3.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，式I中的G选自一种如下结构式的基团：
Figure FDA0002801637350000021
4.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述卤素选自氟、氯或溴原子；所述取代或未取代的C1-10烷基、取代或未取代的C1-3烷基或取代或未取代的C1-5烷基中包括C1-3氟代烷基；所述氟代烷基选自三氟甲基、二氟甲基、二氟氘代甲基或一氟甲基；取代或未取代的C1-3氘代烷基选自三氘代甲基、二氟氘代甲基或五氘代乙基。
5.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，其结构式如式Ia-If之一所示：
Figure FDA0002801637350000022
6.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，其结构式如下之一所示：
Figure FDA0002801637350000031
Figure FDA0002801637350000041
Figure FDA0002801637350000051
Figure FDA0002801637350000061
7.权利要求1-6中任一项所述的化合物，或其药学上可接受的盐、立体异构体、氘取代衍生物、其水合物或溶剂化物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗被EP4受体拮抗作用减轻的病症或抑制细胞或酶的增殖。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述病症选自癌症、炎性疾病和疼痛中的一种或几种。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述病症选自结肠癌、前列腺癌、乳腺癌、尿路上皮癌、肺癌、非小细胞肺癌、三阴性乳腺癌、宫颈癌、肝癌、COX相关疼痛、炎症、炎症性疼痛和偏头痛中的一种或几种。
10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述药物经口、经肠外、静脉注射或经皮肤施用。
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