CN115448882A - 用于治疗ep2、ep4受体介导的疾病的苯并杂环化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种用于治疗EP2、EP4受体介导的疾病的式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，所述化合物可以用于治疗EP2、EP4受体介导的疾病。
Figure DDA0003684244230000011

Description

用于治疗EP2、EP4受体介导的疾病的苯并杂环化合物
本申请要求2021年6月8日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为202110638805.9，发明名称为“用于治疗EP2、EP4受体介导的疾病的苯并杂环化合物”以及2021年12月9日向中国国家知识产权局提交的，专利申请号为202111499017.2，发明名称为“用于治疗EP2、EP4受体介导的疾病的苯并杂环化合物”的两件在先申请的优先权。所述两件申请的全文通过引用的方式结合于本申请中。
技术领域
本发明属于医药领域，具体地，本发明涉及到一种用于治疗EP2、EP4受体介导的疾病的苯并杂环化合物及制备方法和用途。
背景技术
前列腺素E2(Prostaglandin E2，PGE2)是一种内源性生物活性脂质，PGE2通过激活前列腺素受体引起广泛的上下游依赖性生物应答，参与调控包括炎症、疼痛、肾功能、心血管系统、肺功能以及癌症等诸多生理和病理过程。据报道，PGE2在各种癌症的癌变组织中高度表达，并且已证实PGE2与患者的癌症和疾病状况的发生、成长和发展相关。普遍认为，PGE2与细胞增殖和细胞死亡(凋亡)的激活相关，并且在癌细胞增殖、疾病进展和癌症转移的过程中起重要作用。
PGE2的受体存在EP1、EP2、EP3和EP4共4种亚型，广泛表达于各种组织中。EP1受体激活磷脂酶C和三磷酸肌醇途径，EP2和EP4受体激活腺苷酸环化酶和cAMP-蛋白激酶A，EP3受体的激活既能抑制腺苷酸环化酶，又能激活磷脂酶C。
其中EP2和EP4表达于多种免疫细胞(如巨噬细胞、树突状细胞、NK细胞和CTL)，抑制EP2和EP4可增强免疫活性，抑制肿瘤生长。
PGE2在肿瘤微环境中持续地激活肿瘤微环境中的EP受体(由肿瘤细胞大量产生)，会促进多种免疫抑制细胞的积累并增强其活性，包括2型肿瘤相关巨噬细胞(TAMS)、Treg细胞和髓系来源的抑制细胞(MDSCs)。免疫抑制肿瘤微环境的主要特征之一是存在大量的MDSCs和TAM，它们反过来又与胃癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、肝细胞癌(HCC)、头颈癌和其他类型的癌症患者的总体生存率低密切相关。此外，据报道PGE2通过抑制抗原提呈树突状细胞(DC)在肿瘤中的积聚以及抑制肿瘤浸润性DC的激活来诱导免疫耐受)，从而帮助肿瘤细胞逃避免疫监视。PGE2在促进肿瘤发生发展中发挥十分重要的作用，在包括结肠癌、肺癌、乳腺癌、和头颈癌等各类恶性肿瘤中都发现PGE2及其相关受体EP2、EP4的表达水平升高，并往往和不良预后密切相关。因此，选择性阻断EP2和EP4信号通路可以通过改变肿瘤微环境、调控肿瘤免疫细胞抑制肿瘤发生发展。
EP2和/或EP4的选择性和双重拮抗剂可以用于治疗其他疾病和病症。在类风湿性关节炎和骨关节炎的啮齿动物模型中，已证明EP4拮抗剂可有效缓解关节炎症和疼痛，也已证明EP4拮抗剂在自身免疫疾病的啮齿动物模型中有效。
PGE2是通过EP2受体介导促炎功能的主要前列腺素，因此EP2拮抗剂可显示出作为某些慢性炎性疾病(尤其是炎性神经变性疾病，如癫痫、阿尔茨海默病(AD)、帕金森病(PD)、肌萎缩侧索硬化(ALS)和创伤性脑损伤(TBI))的治疗剂的效用。在阿尔茨海默病鼠模型中，EP4拮抗剂ONO-AE3-208减少了淀粉样蛋白-β并且改善了行为表现。
已有研究证实，子宫内膜异位症(内异症)患者腹腔液中的致痛物质PGE2表达明显增高，而PGE2增高可进一步刺激雌激素合成限速酶(芳香酶)的表达，使雌激素的合成增加，从而促进内异症的发生和发展。抑制EP2和EP4可抑制内异症病变中上皮和间质细胞特异性模式中孕激素(P4)信号转导机制蛋白的表达，抑制PGE2和雌激素(E2)的留存、侵袭、生物合成和信号转导，从而抑制促炎细胞因子的产生，减少腹膜内异症病变组织的生长、存活和扩散，减轻盆腔疼痛，恢复子宫内膜的容受性。
因此开发可用于治疗EP2和/或EP4受体介导的疾病的新型化合物具有重要意义。这类化合物具有可用于治疗炎性疾病、自身免疫疾病、神经变性疾病、心血管疾病和癌症的潜力。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于治疗EP2、EP4受体介导的疾病的苯并杂环化合物及制备方法和用途，所述苯并杂环化合物为本发明所述的式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药。
本发明第一方面，提供了一种式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药：
Figure BDA0003684244210000021
其中，R1、R2分别为氢或-C≡C-R11，且R1、R2不同；
所述R11为氢或选自：C1-C5烷基、3-6元环烷基；
所述R11任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：羟基、卤素、C1-C5烷基；当取代基为多个时，所述取代基相同或不同；
L1为C1-C5亚烷基；
L2不存在或为未取代或被Rb取代的C1-C3亚烷基；
所述L1任选地被Ra1和/或Ra2取代；
所述Ra1、Ra2各自独立地为C1-C5烷基、卤素、羟基、氨基、C1-C5烷氧基、C1-C5卤代烷基、C1-C5卤代烷氧基；
或所述Ra1、Ra2与它们共同连接的C原子一起形成3-6元环烷基或4-6元杂环烷基；
所述Rb为C1-C3烷基或卤素；
环A为苯基或5-6元杂芳基；
环B不存在或为3-8元环烷基、4-8元杂环烷基、苯基、5-6元杂芳基；
R3、R4各自独立地选自：羟基、卤素、氨基、氰基、C1-C5烷基、C1-C5烷氧基、3-6元环烷基、4-6元杂环烷基、3-6元环烷氧基；所述C1-C5烷基、C1-C5烷氧基、3-6元环烷基、4-6元杂环烷基、3-6元环烷氧基任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：羟基、卤素、氨基、氰基、3-6元环烷基；
m为0、1、2或3；
n为0、1、2或3。
在本发明的一些实施方式中，提供了一种式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药：
Figure BDA0003684244210000031
其中，R1、R2分别为氢或-C≡C-R11，且R1、R2不同；
所述R11为氢或选自：C1-C5烷基、3-6元环烷基；
所述R11任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：羟基、卤素、C1-C5烷基；当取代基为多个时，所述取代基相同或不同；
L1为C1-C5亚烷基；
L2不存在或为未取代或被Rb取代的C1-C3亚烷基；
所述L1任选地被Ra1和/或Ra2取代；
所述Ra1、Ra2各自独立地为C1-C5烷基、卤素、羟基、氨基、C1-C5烷氧基、C1-C5卤代烷基、C1-C5卤代烷氧基；
或所述Ra1、Ra2与它们共同连接的C原子一起形成3-6元环烷基或4-6元杂环烷基；
所述Rb为C1-C3烷基或卤素；
环A为苯基或5-6元杂芳基；
环B不存在或为3-6元环烷基、4-6元杂环烷基、苯基、5-6元杂芳基；
R3、R4各自独立地选自：羟基、卤素、氨基、氰基、C1-C5烷基、C1-C5烷氧基、3-6元环烷基、4-6元杂环烷基、3-6元环烷氧基；所述C1-C5烷基、C1-C5烷氧基、3-6元环烷基、4-6元杂环烷基、3-6元环烷氧基任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：羟基、卤素、氨基、氰基、3-6元环烷基；
m为0、1、2或3；
n为0、1、2或3。
在一优选实施方式中，在所述环A中，所述5-6元杂芳基含有一个或多个选自N、O或S的杂原子；当所述杂原子为多个时，所述杂原子相同或不同；较佳地，所述5-6元杂芳基选自：噻吩、呋喃、吡咯、吡唑、咪唑、三氮唑、噻唑、噻二唑、噁唑、吡啶、嘧啶、哒嗪、吡嗪。
在一优选实施方式中，Ra1、Ra2与它们共同连接的C原子一起形成氧杂环丁烷。
在一优选实施方式中，L1为-CH2-、-CH(CH3)-、-CH2 CH2-或-CH2 CH2 CH2-；较佳地，L1为-CH2-、-CH(CH3)-。
在一优选实施方式中，R3、R4各自独立地选自：卤素、氰基、C1-C5烷基、C1-C5烷氧基、3-6元环烷基；所述C1-C5烷基、C1-C5烷氧基、3-6元环烷基任选地被1、2或3个选自下列的取代基取代：羟基、氟、氯。
在一优选实施方式中，环B不存在或为3-6元环烷基、4-6元杂环烷基、苯基、5-6元杂芳基；所述杂环烷基或杂芳基中含有杂原子为O、N或S；所述杂环烷基包括单环、并环、桥环或螺环。
在一优选实施方式中，环B为氧杂环丁烷、
Figure BDA0003684244210000041
或为选自下列杂芳基的饱和或部分饱和的杂环：噻吩、呋喃、吡咯、吡唑、咪唑、三氮唑、噻唑、噻二唑、噁唑、吡啶、嘧啶、哒嗪、吡嗪。例如，可选自二氢噻吩、四氢噻吩、二氢呋喃、四氢呋喃、二氢吡咯、四氢吡咯、二氢吡唑、四氢吡唑、二氢咪唑、四氢咪唑、二氢三氮唑、四氢三氮唑、二氢噻唑、四氢噻唑、二氢噻二唑、四氢噻二唑、二氢噁唑、四氢噁唑、二氢吡啶、四氢吡啶、二氢嘧啶、四氢嘧啶、二氢哒嗪、四氢哒嗪、二氢吡嗪、四氢吡嗪。
在一优选实施方式中，环B选自：氧杂环丁烷、
Figure BDA0003684244210000042
环丙基、环丁基、苯基。
在一优选实施方式中，式I具有结构Ia、Ib、Ic、Id，
Figure BDA0003684244210000043
Figure BDA0003684244210000051
其中，Z1、Z2、Z3、Z4、Z5各自独立地选自CR3或N；
环B、R1、R2、R3、R4、Ra(同式I中Ra1、Ra2)、n、L2的定义如第一方面中所述；
较佳地，在结构Ia中，Z1、Z2、Z3、Z4、Z5中至多含有两个N；
较佳地，在结构Ib中，Z1、Z2、Z3、Z4中至多含有两个N。
在一优选实施方式中，L2不存在或选自-CH2-、-CH2CH2-、-CH2 CH2 CH2-、-CH(CH3)-、-CH(CH3)CH2-；较佳地，L2不存在或为-CH2-或-CH(CH3)-。
在一优选实施方式中，R1、R2分别为氢或-C≡C-R11，且R1、R2不同；R11为氢、C1-C5烷基或3-6元环烷基；较佳地，所述R11为甲基。
在一优选实施方式中，Ra为甲基、乙基、丙基。
在一优选实施方式中，环B不存在或为3-6元环烷基、4-6元杂环烷基、苯基、5-6元杂芳基；所述杂环烷基或杂芳基中含有杂原子为O或N；所述杂环烷基包括单环、并环、桥环或螺环。
在一优选实施方式中，环B为不存在或为环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苯基、噻吩、呋喃、吡咯、吡唑、咪唑、三氮唑、噻唑、噻二唑、噁唑、吡啶、嘧啶、哒嗪、吡嗪。
在一优选实施方式中，环B为氧杂环丁烷、
Figure BDA0003684244210000052
或为选自下列杂芳基的饱和或部分饱和的杂环：噻吩、呋喃、吡咯、吡唑、咪唑、三氮唑、噻唑、噻二唑、噁唑、吡啶、嘧啶、哒嗪、吡嗪。例如，可选自二氢噻吩、四氢噻吩、二氢呋喃、四氢呋喃、二氢吡咯、四氢吡咯、二氢吡唑、四氢吡唑、二氢咪唑、四氢咪唑、二氢三氮唑、四氢三氮唑、二氢噻唑、四氢噻唑、二氢噻二唑、四氢噻二唑、二氢噁唑、四氢噁唑、二氢吡啶、四氢吡啶、二氢嘧啶、四氢嘧啶、二氢哒嗪、四氢哒嗪、二氢吡嗪、四氢吡嗪。
在一优选实施方式中，环B选自：氧杂环丁烷、
Figure BDA0003684244210000053
环丙基、环丁基、苯基。
在一优选实施方式中，式I具有如下结构IIa、IIb、IIc、IId、IIe、IIf、IIg、IIm、IIn
Figure BDA0003684244210000054
Figure BDA0003684244210000061
在一优选实施方式中，所述的式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药中，所述的式I所示苯并杂环化合物包括如下结构：
Figure BDA0003684244210000062
Figure BDA0003684244210000071
Figure BDA0003684244210000081
Figure BDA0003684244210000091
在一优选实施方式中，所述的式I所示苯并杂环化合物包括如下结构：
Figure BDA0003684244210000092
Figure BDA0003684244210000101
Figure BDA0003684244210000111
本发明第二方面，提供了一种中间体B-1：
Figure BDA0003684244210000112
其中，R6为-OH、-Cl、-O-C1-C5烷基、-O-苄基；
环A、环B、L1、R1、R2、R3、R4、m、n的定义如第一方面中所述。
在一优选实施方式中，所述中间体B-1具有结构B-1a或B-1b：
Figure BDA0003684244210000113
其中，Z1、Z2、Z3、Z4、Z5各自独立地选自CR3或N；
环B、R1、R2、R3、R4、Ra(同式I中Ra1、Ra2)、n的定义如第一方面中所述；较佳地，在结构Ia中，Z1、Z2、Z3、Z4、Z5中至多含有两个N；
较佳地，在结构Ib中，Z1、Z2、Z3、Z4中至多含有两个N。
较佳地，所述中间体B-1具有结构B-1c、B-1d、B-1f、B-1g：
Figure BDA0003684244210000121
本发明第三方面，提供了一种制备如第一方面所述的式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药的方法，包括：1)将如第二方面所述的中间体B-1与中间体B-2或中间体B-2的盐反应，得到所述式I所示苯并杂环化合物；
所述中间体B-2具有结构：
Figure BDA0003684244210000122
其中，R5为C1-C6烷基、苄基。
在一优选实施方式中，所述中间体B-2的盐为盐酸盐。
在一优选实施方式中，所述方法还包括：
2)当所述中间体B-1中R6不为-OH或-Cl时，将基团-COR6转化为-COOH或-COCl后，再与中间体B-2反应；和/或
3)在所述中间体B-1与中间体B-2反应后，将基团-COOR5水解为-COOH。
较佳地，所述中间体B-2具有结构B-2a或B-2b：
Figure BDA0003684244210000131
本发明第四方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括：如第一方面所述的式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药；和药学上可接受的载体。
根据本发明的实施方案，所述药物组合物还包括第二种药物。
在一优选实施方式中，所述第二种药物包括抗体；较佳地，所述抗体包括抗PD-L1抗体、抗PD-1抗体。
在一些实施方式中，所述如第一方面所述的式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药与第二种药物的质量比例为1：100至100:1，优选的为10:1至100:1，更优选的为10:1至50:1，例如为10:1，15:1，20:1，25:1，30:1，35:1，40:1，45:1，50:1。
本发明第五方面，提供了一种如第一方面所述的式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药的用途，或如第四方面所述的药物组合物的用途，所述用途包括：
1)对EP2和/或EP4产生拮抗作用；
2)与EP2和/或EP4受体结合；
3)预防、治疗EP2和/或EP4受体介导的疾病疾病、
4)制备EP2和/或EP4拮抗剂、
5)制备预防、治疗与EP2和/或EP4受体介导的疾病的药物、药物组合物或制剂。
较佳地，其中所述EP2和/或EP4受体介导的疾病包括炎性疾病(例如关节炎和子宫内膜异位症)、自身免疫疾病(例如多发性硬化症)、神经变性疾病(例如癫痫、阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化和创伤性脑损伤)、心血管疾病(例如动脉粥样硬化)和癌症(例如结肠癌、肺癌、乳腺癌和头颈癌)。
本发明第六方面，提供了一种用于预防和/或治疗EP2和/或EP4受体介导的疾病的方法，所述方法包括向有此需要的个体给予有效量的所述式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药。
在一优选实施方式中，所述方法还包括与抗体疗法联合使用；较佳地，所述抗体疗法包括PD-L1抗体疗法、PD-1抗体疗法。在一些实施方式中，所述如第一方面所述的式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药与抗体的质量比为1：100至100:1，优选的为10:1至100:1，更优选的为10:1至50:1，例如为10:1，15:1，20:1，25:1，30:1，35:1，40:1，45:1，50:1。
在一优选实施方式中，其中所述EP2和/或EP4受体介导的疾病包括炎性疾病(例如关节炎和子宫内膜异位症)、自身免疫疾病(例如多发性硬化症)、神经变性疾病(例如癫痫、阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化和创伤性脑损伤)、心血管疾病(例如动脉粥样硬化)和癌症(例如结肠癌、肺癌、乳腺癌和头颈癌)。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
术语和定义
除非另有说明，本申请说明书和权利要求书中记载的基团和术语定义，包括其作为实例的定义、示例性的定义、优选的定义、表格中记载的定义、实施例中具体化合物的定义等，可以彼此之间任意组合和结合。这样的组合和结合后的基团定义及化合物结构，应当属于本申请说明书记载的范围内。
除非另有定义，否则本文所有科技术语具有的涵义与权利要求主题所属领域技术人员通常理解的涵义相同。除非另有说明，本文全文引用的所有专利、专利申请、公开材料通过引用方式整体并入本文。如果本文对术语有多个定义，以本章的定义为准。
应理解，上述简述和下文的详述为示例性且仅用于解释，而不对本发明主题作任何限制。在本申请中，除非另有具体说明，否则使用单数时也包括复数。必须注意，除非文中另有清楚的说明，否则在本说明书和权利要求书中所用的单数形式包括所指事物的复数形式。还应注意，除非另有说明，否则所用“或”、“或者”表示“和/或”。此外，所用术语“包括”以及其它形式，例如“包含”、“含”和“含有”并非限制性。
除非另有说明，否则采用本领域技术范围内的常规方法，如质谱、NMR、IR和UV/VIS光谱法和药理学方法。除非提出具体定义，否则本文在分析化学、有机合成化学以及药物和药物化学的有关描述中采用的术语是本领域已知的。可在化学合成、化学分析、药物制备、制剂和递送，以及对患者的治疗中使用标准技术。例如，可利用厂商对试剂盒的使用说明，或者按照本领域公知的方式或本发明的说明来实施反应和进行纯化。通常可根据本说明书中引用和讨论的多个概要性和较具体的文献中的描述，按照本领域熟知的常规方法实施上述技术和方法。在本说明书中，可由本领域技术人员选择基团及其取代基以提供稳定的结构部分和化合物。
当通过从左向右书写的常规化学式描述取代基时，该取代基也同样包括从右向左书写结构式时所得到的在化学上等同的取代基。举例而言，CH2O等同于OCH2。如本文所用，
Figure BDA0003684244210000141
Figure BDA0003684244210000142
表示基团的连接位点。如本文所用，“R1”、“R1”和“R1”的含义相同，可相互替换。对于R2等其它其他符号，类似定义的含义相同。
本文所用的章节标题仅用于组织文章的目的，而不应被解释为对所述主题的限制。本申请中引用的所有文献或文献部分包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍、操作手册和论文，均通过引用方式整体并入本文。
除前述以外，当用于本申请的说明书及权利要求书中时，除非另外特别指明，否则以下术语具有如下所示的含义。
在本申请中，在单独或作为其他取代基一部分时，术语“卤素”是指氟、氯、溴、碘。
如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语“烷基”意指仅由碳原子和氢原子组成、不含不饱和键、具有例如1至6个碳原子且通过单键与分子的其余部分连接的直链或支链的烃链基团。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基，叔丁基，戊基，异戊基，新戊基和己基。烷基可以是未取代的或被一个或多个合适的取代基取代。烷基也可以是富含碳和/或氢的同位素(即氘或氚)的天然丰度烷基的同位素异构体。如本文所用，术语“烯基”表示无支链或支链的单价烃链，其含有一个或多个碳-碳双键。如本文所用，术语“炔基”是指无支链或支链的一价烃链，其含有一个或多个碳-碳三键。“C2-C5炔基”则含有2-5个碳原子。
在单独或作为其他取代基一部分时，术语“C1-C5烷基”应理解为表示具有1、2、3、4或5个碳原子的直链或支链饱和一价烃基。所述烷基是例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1,2-二甲基丙基、新戊基、1,1-二甲基丙基等或它们的异构体。特别地，所述基团具有1、2或3个碳原子(“C1-C3烷基”)，例如甲基、乙基、正丙基或异丙基。
术语“亚烷基”表示从饱和的直链或支链烃基中去掉两个氢原子所得到的饱和的二价烃基基团。“C1-C5亚烷基”指含有1、2、3、4、5个碳原子的亚烷基，其实例包括亚甲基(-CH2-)，亚乙基(包括-CH2CH2-或-CH(CH3)-)，亚异丙基(包括-CH(CH3)CH2-或-C(CH3)2-)等。
在单独或作为其他取代基一部分时，术语“环烷基”或“碳环基”是指一种环状烷基。术语“m-n元环烷基”或者“Cm-Cn环烷基”应理解为表示具有m至n个原子的饱和、不饱和或部分饱和的碳环。例如，“3-15元环烷基”或者“C3-C15环烷基”是指含有3至15，3至9，3至6或3至5个碳原子的环状烷基，它可能包含1至4个环。“3-6元环烷基”则含有3-6个碳原子。包括单环、二环、三环、螺环或桥环。未取代的环烷基的实例包括但不限于环丙基，环丁基，环戊基，环己基。环烷基可以被一个或多个取代基取代。在一些实施方案中，环烷基可以是与芳基或杂芳环基稠合的环烷基。
在单独或作为其他取代基一部分时，术语“卤代”可与术语“卤素取代”互换使用。“卤代烷基”或“卤素取代的烷基”指包括具有特定数目的碳原子、被一或多个卤素取代的支链和直链的饱和脂族烃基。
在单独或作为其他取代基一部分时，术语“杂环烷基”或“杂环基”是指其中一个或多个(在一些实施方案中为1至3个)碳原子被杂原子取代的环烷基，所述杂原子例如但不限于N、O、S和P。术语“m-n元杂环烷基”或者“Cm-Cn杂环烷基”应理解为表示具有m至n个原子的饱和、不饱和或部分饱和的环。例如，术语“4-6元杂环烷基”应理解为表示具有4至6个原子的饱和、不饱和或部分饱和的环。当诸如4-6元的前缀用于表示杂环烷基时，碳的数目也意味着包括杂原子。
在单独或作为其他取代基一部分时，术语“杂芳基”可与术语“杂芳环”或“杂芳族基”互换使用，是指单环或多环芳环系统，在某些实施方案中，环系统中1至3个原子是杂原子，即除碳以外的元素，包括但不限于N，O、S或P。
在单独或作为其他取代基一部分时，术语“5-6元杂芳基”应理解为具有5～6个环原子且包含杂原子的芳族环基团。包括但不限于噻吩、呋喃、吡咯、吡唑、咪唑、三氮唑、噻唑、噻二唑、噁唑、吡啶、嘧啶、哒嗪、吡嗪。
本文提供的化合物，包括可用于制备本文提供的化合物的中间体，其含有反应性官能团(例如但不限于羧基，羟基和氨基部分)，还包括其保护的衍生物。“受保护的衍生物”是其中一个或多个反应性位点被一个或多个保护基团(也称为保护基团)封闭的那些化合物。合适的羧基部分保护基包括苄基，叔丁基等，以及同位素等。合适的氨基和酰氨基保护基包括乙酰基，三氟乙酰基，叔丁氧基羰基，苄氧基羰基等。合适的羟基保护基包括苄基等。其他合适的保护基团是本领域普通技术人员所熟知的。
在本申请中，“任选的”或“任选地”表示随后描述的事件或状况可能发生也可能不发生，且该描述同时包括该事件或状况发生和不发生的情况。例如，“任选地被取代的芳基”表示芳基被取代或未被取代，且该描述同时包括被取代的芳基与未被取代的芳基。进一步的，“任选的”或“任选地”取代情形涵盖了化合物结构/基团无取代，以及化合物结构/基团被选自一个或多个所定义的取代基取代的情形。例如，“任选地被取代的芳基”表示未被取代的芳基与被选自一个或多个所定义的取代基取代的芳基。“多个”意为两个以上，即包含两个、三个以上。
在本申请中，术语“盐”或“药学上可接受的盐”，包括药学上可接受的酸加成盐和药学上可接受的碱加成盐。术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
“药学上可接受的酸加成盐”是指能够保留游离碱的生物有效性而无其它副作用的，与无机酸或有机酸所形成的盐。“药学上可接受的碱加成盐”是指能够保持游离酸的生物有效性而无其它副作用的、与无机碱或有机碱所形成的盐。除了药学可接受的盐外，本发明还考虑其他盐。它们可以在化合物纯化中或在制备其它药学上课接受的盐中充当中间体或可用于本发明化合物的鉴别、表征或纯化。
术语“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括顺反异构体、对映异构体、非对应异构体和构象异构体。
依据原料和方法的选择，本发明化合物可以以可能的异构体中的一个或它们的混合物的形式存在，例如作为纯旋光异构体，或作为异构体混合物，如作为外消旋和非对映异构体混合物，这取决于不对称碳原子的数量。当描述具有光学活性的化合物时，使用前缀D和L或R和S来表示就分子中的手性中心(或多个手性中心)而言分子的绝对构型。前缀D和L或(+)和(–)是用于指定化合物所致平面偏振光旋转的符号，其中(–)或L表示化合物是左旋的。前缀为(+)或D的化合物是右旋的。
当将本发明式中与手性碳的键描写直成线时，应当理解为，手性碳的(R)和(S)两种构型和由此产生的其对映体纯的化合物和混合物两者包括在该通式范围内。本文中消旋体或者对映体纯的化合物的图示法来自Maehr，J.Chem.Ed.1985，62:114-120。用楔形键和虚线键表示一个立体中心的绝对构型。
术语“互变异构体”是指因分子中某一原子在两个位置迅速移动而产生的官能团异构体。本发明化合物可表现出互变异构现象。互变异构的化合物可以存在两种或多种可相互转化的种类。质子移变互变异构体来自两个原子之间共价键合的氢原子的迁移。互变异构体一般以平衡形式存在，尝试分离单一互变异构体时通常产生一种混合物，其理化性质与化合物的混合物是一致的。平衡的位置取决于分子内的化学特性。例如，在很多脂族醛和酮如乙醛中，酮型占优势；而在酚中，烯醇型占优势。本发明包含化合物的所有互变异构形式。
在本申请中，“药物组合物”是指本发明化合物与本领域通常接受的用于将生物活性化合物输送至哺乳动物(例如人)的介质的制剂。该介质包括药学上可接受的载体。药物组合物的目的是促进生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
在本申请中，“药学上可接受的载体”包括但不限于任何被相关的政府管理部门许可为可接受供人类或家畜使用的佐剂、载体、赋形剂、助流剂、增甜剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、矫味剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、助悬剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂。
术语“溶剂化物”指本发明化合物或其盐包括以分子间非共价力结合的化学计量或非化学计量的溶剂，当溶剂为水时，则为水合物。
术语“前药”是指可以在生理条件下或者通过溶剂解转化为具有生物活性的本发明化合物。本发明的前药通过修饰在该化合物中的功能基团来制备，该修饰可以按常规的操作或者在体内被除去，而得到母体化合物。前药包括本发明化合物中的一个羟基或者氨基连接到任何基团上所形成的化合物，当本发明化合物的前药被施予哺乳动物个体时，前药被割裂而分别形成游离的羟基、游离的氨基。
术语“辅料”是指可药用惰性成分。术语“赋形剂”的种类实例非限制性地包括粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、稳定剂、填充剂和稀释剂等。赋形剂能增强药物制剂的操作特性，即通过增加流动性和/或粘着性使制剂更适于直接压缩。
术语“患者”是指包括哺乳动物在内的任何动物，优选小鼠、大鼠、其它啮齿类动物、兔、狗、猫、猪、牛、羊、马或灵长类动物，最优选人。
术语“治疗有效量”是指研究人员、兽医、医师或其它临床医师正在组织、系统、动物、个体或人中寻找的引起生物学或医学反应的活性化合物或药物的量，它包括以下一项或多项：(1)预防疾病：例如在易感染疾病、紊乱或病症但尚未经历或出现疾病病理或症状的个体中预防疾病、紊乱或病症。(2)抑制疾病：例如在正经历或出现疾病、紊乱或病症的病理或症状的个体中抑制疾病、紊乱或病症(即阻止病理和/或症状的进一步发展)。(3)缓解疾病：例如在正经历或出现疾病、紊乱或病症的病理或症状的个体中缓解疾病、紊乱或病症(即逆转病理和/或症状)。
本文所用的术语“治疗”和其它类似的同义词包括以下含义：
(i)预防疾病或病症在哺乳动物中出现，特别是当这类哺乳动物易患有该疾病或病症，但尚未被诊断为已患有该疾病或病症时；
(ii)抑制疾病或病症，即遏制其发展；
(iii)缓解疾病或病症，即，使该疾病或病症的状态消退；或者
(iv)减轻该疾病或病症所造成的症状。
术语“抗体”包括所有类型的免疫球蛋白。抗体可以是单克隆或多克隆的，并且可以属于任何物种的来源，包括如小鼠、大鼠、兔、马或人。尤其当其用于治疗的目的时，抗体可以是嵌合的或人源化的。抗体可以通过所属领域中已知的方法获得或制备。
术语PD-L1抗体”或“抗PD-L1”是指针对程序性死亡配体1(PD-L1)的抗体。
术语“PD-1抗体”或“抗PD-1”是指针对程序性死亡蛋白1(PD-1)的抗体。
术语“抗体疗法”是指医学使用结合靶细胞或靶细胞蛋白的抗体，以治疗癌症和/或刺激受试对象的免疫应答，所述免疫应答导致受试对象中的癌细胞的识别、攻击和/或破坏，并且在本发明的一些实施方案中，以激活或刺激受试对象的记忆免疫应答，所述记忆免疫应答导致受试对象中的癌细胞的随后识别、攻击和/或破坏。
术语“PD-L1抗体疗法”是指使用针对程序性死亡配体1的抗体(抗PD-L1)调节受试对象的免疫应答。在一些实施方案中，PD-L1抗体抑制或阻断PD-L1与程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)的相互作用，其中PD-L1与PD-1之间的相互作用的阻断抑制PD-1对T细胞激活的负向调节，从而攻击和破坏癌细胞。
术语“PD-1抗体疗法”是指使用针对程序性细胞死亡蛋白1 PD-1的抗体(抗PD-1)调节受试对象的免疫应答。在一些实施方案中，PD1抗体抑制或阻断PD-1与PD-L1的相互作用，其中PD-L1与PD-1之间的相互作用的抑制或阻断抑制PD-1对T细胞激活的负向调节，从而攻击和破坏癌细胞。
各步骤的反应，反应温度可因溶剂、起始原料、试剂等适宜选择，反应时间也可因反应温度、溶剂、起始原料、试剂等适宜选择。各步骤反应结束后，目标化合物可按常用方法自反应体系中进行分离、提纯等步骤，如过滤、萃取、重结晶、洗涤、硅胶柱层析等方法。在不影响下一步反应的情况下，目标化合物也可不经过分离、纯化直接进入下一步反应。
有益效果
本发明人经过广泛而深入地研究，意外地开发了用于治疗EP2、EP4受体介导的疾病的苯并杂环化合物，所述苯并杂环化合物为本发明中所述的式I所示苯并杂环化合物。本发明所述的用于治疗EP2、EP4受体介导的疾病的苯并杂环化合物，可以用于治疗炎性疾病(例如关节炎和子宫内膜异位症)、自身免疫疾病(例如多发性硬化症)、神经变性疾病(例如癫痫、阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化和创伤性脑损伤)、心血管疾病(例如动脉粥样硬化)和癌症(例如结肠癌、肺癌、乳腺癌和头颈癌)。
实验证明，本发明所述苯并杂环化合物对EP2具有很好的拮抗作用，对EP4钙流显示较好抑制作用，与EP2受体和/或EP4受体具有很好的亲和力。本发明所述苯并杂环化合物的静脉给药清除率低，口服给药暴露量高，表现出优良的药代动力学性质，在人血浆中有较高的游离分数，具有很好的热力学溶解度，成药性好。另外，与抗体药物(例如抗PD-L1抗体、抗PD-1抗体)联用表现出显著的抑瘤作用。
附图说明
图1为本发明中的化合物对人PBMC细胞分化实验抗原呈递细胞的评价结果；
图2为本发明中的化合物对人PBMC细胞分化实验M2型巨噬细胞的评价结果；
图3为本发明中的化合物对人PBMC细胞分化实验M1型巨噬细胞的评价结果；
图4为本发明中的化合物联合anti-mouse PD-1抗体法在CT-26鼠源结肠癌肿瘤模型中的抗肿瘤作用结果。
具体实施方式
以下结合具体实施例，进一步说明本发明。需理解，以下的描述仅为本发明的最优选实施方式，而不应当被认为是对于本发明保护范围的限制。在充分理解本发明的基础上，下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件，本领域技术人员可以对本发明的技术方案作出非本质的改动，这样的改动应当被视为包括于本发明的保护范围之中的。
本申请具有如下定义：
符号或单位：
IC50：半数抑制浓度，指达到最大抑制效果一半时的浓度
M：mol/L，例如正丁基锂(14.56mL，29.1mmol，2.5M的正己烷溶液)表示摩尔浓度为2.5mol/L的正丁基锂的正己烷溶液
N：当量浓度，例如2N盐酸表示2mol/L盐酸溶液
HATU：O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯
PE：石油醚
EA：乙酸乙酯
试验或检测方法：
酸性制备方法A：Welch，Ultimate C18柱，10μm，21.2mm×250mm。流动相A为1‰的三氟醋酸纯水溶液，流动相B为乙腈溶液。梯度条件：0～3分钟，流动相A保持90％，3～18分钟梯度洗脱，由90％变为5％，18～22分钟保持5％。
实施例1化合物I-1的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000191
第一步：4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-溴-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(1.0g,3.94mmol)加入到1,4-二氧六环(10mL)中，加入二三苯基膦二氯化钯(274mg,0.39mmol)，1-丙炔-三正丁基锡(1.52g,4.61mmol)，氮气保护下加热至90℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(500mg,产率42％)。
第二步：1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(100mg,0.47mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入4-苯基苄溴(174mg,0.71mmol)，碳酸铯(460mg,1.40mmol)，室温搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝10:1)得化合物1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(80mg,产率45％)。
第三步：1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
室温下将原料1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(80mg,0.21mmol)加入到四氢呋喃(3mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(15mg,0.63mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得化合物粗品1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(50mg,产率65％)。
第四步：6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(50mg,0.14mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加入2-(6-氨基螺环[3.3]庚烷-2-基)甲酸甲酯盐酸盐(43mg,0.21mmol)，二异丙基乙胺(36mg,0.28mmol)，HATU(160mg,0.42mmol)，搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得化合物6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(12mg,产率17％)。
第五步：6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-1)的制备
Figure BDA0003684244210000201
室温下将化合物6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(12mg,0.02mmol)加入到四氢呋喃(3mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(2.0mg,0.08mmol)，室温搅拌6h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-1)(10mg,产率86％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.0(s,1H),8.77(d,1H),8.25(s,1H),7.58(d,2H),7.52(d,2H),7.45(t,2H),7.36(d,2H),7.22(d,1H),7.05(d,2H),5.81(s,2H),4.31-4.25(m,1H),2.94(t,1H),2.43-2.37(m,1H),2.32-2.21(m,3H),2.18(s,3H),2.10-1.99(m,2H),1.93-1.83(m,2H)。
LC-MS,M/Z(ESI):504.7[M+H]+。
实施例2化合物I-2的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000211
第一步：5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物5-溴-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(1.0g,3.92mmol)加入到1,4-二氧六环(10mL)中，加入二三苯基膦二氯化钯(274mg,0.39mmol)，1-丙炔-三正丁基锡(1.55g,4.70mmol)，氮气保护下加热至90℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得化合物5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(300mg，产率36％)。
第二步：1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(100mg,0.47mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入4-苯基苄溴(150mg,0.61mmol)，碳酸铯(460mg,1.40mmol)，室温搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝10:1)得化合物1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(50mg,产率28％)。
第三步：1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
室温下将原料1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(50mg,0.13mmol)加入到四氢呋喃(3mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(10mg,0.40mmol)，室温搅拌4h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得化合物粗品1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(40mg,产率83％).
第四步：6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(40mg,0.11mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加入2-(6-氨基螺环[3.3]庚烷-2-基)甲酸甲酯盐酸盐(34mg,0.16mmol)，二异丙基乙胺(43mg,0.33mmol)，HATU(63mg,0.16mmol)，搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得化合物6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(50mg,产率88％)。
第五步：6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-2)的制备
Figure BDA0003684244210000221
室温下将化合物6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(50mg,0.10mmol)加入到四氢呋喃(3mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(8.0mg,0.33mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物白色固体6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-2)(12mg,产率25％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ11.9(s,1H),8.79(d,1H),8.26(s,1H),7.93(s,1H),7.58(d,2H),7.52(d,2H),7.45(t,2H),7.37(t,2H),7.05(d,2H),5.79(s,2H),4.29-4.23(m,1H),2.96(t,1H),2.43-2.37(m,1H),2.32-2.21(m,3H),2.18(s,3H),2.11-1.98(m,2H),1.99-1.84(m,2H)。
LC-MS,M/Z(ESI):504.6[M+H]+。
实施例3化合物I-3的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000231
第一步：4-(丁烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-溴-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(600mg,2.35mmol)加入到N,N-二甲基乙酰胺(6mL)中，加入醋酸钯(70mg,0.31mmol)，(丁-1-炔-1-基)三甲基硅烷(595mg,4.71mmol)，碘化亚铜(138mg,0.72mmol)，碳酸铯(1.53g,4.71mmol)，氮气保护下加热至80℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得化合物4-(丁烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(200mg,产率37％)。
第二步：1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丁烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-(丁烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(150mg,0.66mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入4-苯基苄溴(245mg,0.99mmol)，碳酸铯(645mg,1.98mmol)，室温搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得化合物1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丁烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(130mg,产率50％)。
第三步：1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丁烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
室温下将原料1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丁烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(130mg,0.33mmol)加入到四氢呋喃(3mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(24mg,1.0mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得化合物粗品1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丁烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(120mg,产率96％).
第四步：6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丁烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丁烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(120mg,0.32mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入2-(6-氨基螺环[3.3]庚烷-2-基)甲酸甲酯盐酸盐(78mg,0.38mmol)，二异丙基乙胺(123mg,0.95mmol)，HATU(180mg,0.47mmol)，搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(DCM:甲醇(V/V)＝1:1)得化合物白色固体2-(6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丁烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-基)甲酸甲酯(125mg,产率75％)。
第五步：6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丁烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-3)的制备
Figure BDA0003684244210000241
室温下将化合物2-(6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丁烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-基)甲酸甲酯(125mg,0.24mmol)加入到四氢呋喃(3mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(17.2mg,0.72mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得化合物白色固体6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丁烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-3)(52mg,产率43％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.0(s,1H),8.78(d,1H),8.25(s,1H),7.58(d,2H),7.52(d,2H),7.45(t,2H),7.37(d,2H),7.21(d,1H),7.05(d,2H),5.81(s,2H),4.31-4.25(m,1H),2.94(t,1H),2.58-2.53(m,2H),2.42-2.30(m,1H),2.27-2.19(m,3H),2.11-2.01(m,2H),1.94-1.83(m,2H),1.26(t,3H)。
LC-MS,M/Z(ESI):518.5[M+H]+。
实施例4化合物I-4的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000251
第一步：1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-溴-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-溴-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(600mg,2.36mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入4-苯基苄溴(875mg,3.54mmol)，碳酸铯(2.3g,7.09mmol)，室温搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得化合物白色固体1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-溴-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(420mg,产率42％)。
第二步：1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(环丙烷乙炔基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-溴-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(550mg,1.31mmol)加入到氮，氮-二甲基乙酰胺(10mL)中，加入醋酸钯(38mg,0.17mmol)，环丙基乙炔(432mg,6.55mmol)，碘化亚铜(25mg,0.13mmol)，碳酸铯(635mg,1.97mmol)，氮气保护下加热至80℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝10:1)得化合物白色固体1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(环丙烷乙炔基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(80mg,产率15％)。
第三步：1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(环丙烷乙炔基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
室温下将原料1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(环丙烷乙炔基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(80mg,0.20mmol)加入到四氢呋喃(5mL)和水(2mL)中，加入氢氧化锂(15mg,0.60mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得化合物白色固体1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(环丙烷乙炔基)-1H-吲唑-7-甲酸(60mg,产率78％)。
第四步：6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(环丙烷乙炔基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(环丙烷乙炔基)-1H-吲唑-7-甲酸(60mg,0.15mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入2-(6-氨基螺环[3.3]庚烷-2-基)甲酸甲酯盐酸盐(47mg,0.23mmol)，二异丙基乙胺(59mg,0.46mmol)，HATU(87mg,0.23mmol)，搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(PE:EA(V/V)＝1:1)得化合物2-(6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(环丙烷乙炔基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-基)甲酸甲酯(40mg,产率48％)。
第五步：6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(环丙烷乙炔基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-4)的制备
Figure BDA0003684244210000261
室温下将化合物2-(6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(环丙烷乙炔基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-基)甲酸甲酯(40mg,0.073mmol)加入到四氢呋喃(3mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(5.3mg,0.22mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，过滤，干燥得化合物6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(环丙烷乙炔基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-4)(32mg,产率82％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ11.9(s,1H),8.76(d,1H),8.24(s,1H),7.58(d,2H),7.52(d,2H),7.43(t,2H),7.33(d,2H),7.18(d,1H),7.03(d,2H),5.80(s,2H),4.30-4.24(m,1H),2.94(t,1H),2.45-2.35(m,1H),2.27-2.18(m,3H),2.11-1.99(m,2H),1.92-1.82(m,2H),1.66(t,1H),0.97-0.88(m,2H),0.88-0.86(m,2H)。
LC-MS,M/Z(ESI):530.5[M+H]+。
实施例5化合物I-5的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000262
第一步：1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-溴-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-溴-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(600mg,2.36mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入4-苯基苄溴(875mg,3.54mmol)，碳酸铯(2.3g,7.09mmol)，室温搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得化合物1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-溴-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(420mg,产率42％)。
第二步：1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(3-羟基-3-甲基丁烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-溴-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(120mg,0.29mmol)加入到氮，氮-二甲基乙酰胺(5mL)中，加入醋酸钯(9mg,0.04mmol)，2-甲基丁烷-3-炔-2-醇(122mg,1.45mmol)，碘化亚铜(6mg,0.03mmol)，碳酸铯(141mg,0.43mmol)，氮气保护下加热至80℃，搅拌18h。冷却至室温，加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝10:1)得化合物1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(3-羟基-3-甲基丁烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(70mg,产率58％)。
第三步：1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(3-羟基-3-甲基丁烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
室温下将原料1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(3-羟基-3-甲基丁烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(70mg,0.16mmol)加入到四氢呋喃(3mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(12mg,0.50mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，过滤，干燥，得化合物粗品1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(3-羟基-3-甲基丁烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(40mg,产率59％).
第四步：6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(3-羟基-3-甲基丁烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(3-羟基-3-甲基丁烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(40mg,0.10mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加入2-(6-氨基螺环[3.3]庚烷-2-基)甲酸甲酯盐酸盐(31mg,0.15mmol)，二异丙基乙胺(39mg,0.30mmol)，HATU(57mg,0.15mmol)，搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(PE:EA(V/V)＝1:1)得化合物2-(6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(3-羟基-3-甲基丁烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-基)甲酸甲酯(25mg,产率46％)。
第五步：6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(3-羟基-3-甲基丁烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-5)的制备
Figure BDA0003684244210000281
室温下将化合物2-(6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(3-羟基-3-甲基丁烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-基)甲酸甲酯(25mg,0.04mmol)加入到四氢呋喃(3mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(4mg,0.13mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，经酸性制备方法A制备得化合物6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(3-羟基-3-甲基丁烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-5)(12mg,产率49％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.0(s,1H),8.80(d,1H),8.27(s,1H),7.58(d,2H),7.52(d,2H),7.44(t,2H),7.37(d,2H),7.21(d,1H),7.04(d,2H),5.83(s,2H),5.62(s,1H),4.31-4.26(m,1H),2.95(t,1H),2.43-2.31(m,1H),2.27-2.20(m,3H),2.10-2.02(m,2H),1.92-1.84(m,2H),1.55(s,6H)。
LC-MS,M/Z(ESI):548.5[M+H]+。
实施例6化合物I-6的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000282
第一步：4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-乙酸甲酯的制备
室温下将化合物4-溴-1H-吲唑-7-乙酸甲酯(1.0g,3.94mmol)加入到1,4-二氧六环(10mL)中，加入二三苯基膦二氯化钯(274mg,0.39mmol)，1-丙炔-三正丁基锡(1.52g,4.61mmol)，氮气保护下加热至90℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-乙酸甲酯(500mg,产率42％)。
第二步：1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-乙酸甲酯的制备
室温下将化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-乙酸甲酯(100mg,0.47mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入4-苯基苄溴(174mg,0.71mmol)，碳酸铯(460mg,1.40mmol)，室温搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝10:1)得化合物1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-乙酸甲酯(80mg,产率45％)。
第三步：1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-乙酸的制备
室温下将原料1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-乙酸甲酯(80mg,0.21mmol)加入到四氢呋喃(3mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(15mg,0.63mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得化合物粗品1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-乙酸(50mg,产率65％).
第四步：2-(6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-基)乙酸甲酯的制备
室温下将化合物1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-乙酸(45mg,0.12mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入2-(6-氨基螺环[3.3]庚烷-2-基)乙酸甲酯盐酸盐(39mg,0.18mmol)，二异丙基乙胺(46mg,0.36mmol)，HATU(68mg,0.18mmol)，搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物2-(6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-基)乙酸甲酯(40mg,产率63％)。
第五步：2-(6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-基)乙酸(I-6)的制备
Figure BDA0003684244210000291
室温下将化合物2-(6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-基)乙酸甲酯(40mg,0.07mmol)加入到四氢呋喃(3mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(6.0mg,0.24mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得化合物6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-乙酸(I-6)(35mg,产率92％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ11.9(s,1H),8.75(d,1H),8.25(s,1H),7.58(d,2H),7.52(d,2H),7.45(t,2H),7.36(d,2H),7.22(d,1H),7.05(d,2H),5.81(s,2H),4.30-4.24(m,1H),2.44-2.35(m,2H),2.27-2.19(m,4H),2.18(s,3H),1.98-1.81(m,3H),1.76-1.71(m,1H),1.61-1.57(m,1H)。
LC-MS,M/Z(ESI):518.5[M+H]+。
实施例7化合物I-7的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000301
第一步：5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-乙酸甲酯的制备
室温下将化合物5-溴-1H-吲唑-7-乙酸甲酯(1.0g,3.92mmol)加入到1,4-二氧六环(10mL)中，加入二三苯基膦二氯化钯(274mg,0.39mmol)，1-丙炔-三正丁基锡(1.55g,4.70mmol)，氮气保护下加热至90℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得化合物5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-乙酸甲酯(300mg,产率36％)。
第二步：1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-乙酸甲酯的制备
室温下将化合物5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-乙酸甲酯(100mg,0.47mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入4-苯基苄溴(150mg,0.61mmol)，碳酸铯(460mg,1.40mmol)，室温搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝10:1)得化合物1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-乙酸甲酯(50mg,产率28％)。
第三步：1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-乙酸的制备
室温下将1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-乙酸甲酯(50mg,0.13mmol)加入到四氢呋喃(3mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(10mg,0.40mmol)，室温搅拌4h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得化合物粗品1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-乙酸(40mg,产率83％).
第四步：2-(6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-基)乙酸甲酯的制备
室温下将化合物1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-乙酸(50mg,0.14mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入2-(6-氨基螺环[3.3]庚烷-2-基)乙酸甲酯盐酸盐(46mg,0.21mmol)，二异丙基乙胺(54mg,0.42mmol)，HATU(80mg,0.21mmol)，搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得化合物2-(6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-基)乙酸甲酯(50mg,产率69％)。
第五步：2-(6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-基)乙酸(I-7)的制备
Figure BDA0003684244210000311
室温下将化合物2-(6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-基)乙酸甲酯(50mg,0.09mmol)加入到四氢呋喃(3mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(7.0mg,0.29mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物2-(6-(1-((1,1’-二苯基)-4-基甲基)-5-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-基)乙酸(I-7)(45mg,产率92％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ11.9(s,1H),8.75(d,1H),8.25(s,1H),7.58(d,2H),7.52(d,2H),7.45(t,2H),7.35(t,2H),7.21(d,1H),7.05(d,2H),5.81(s,2H),4.30-4.24(m,1H),2.45-2.35(m,2H),2.27-2.19(m,4H),2.17(s,3H),1.98-1.81(m,3H),1.76-1.71(m,1H),1.61-1.57(m,1H)。
LC-MS,M/Z(ESI):518.6[M+H]+。
实施例8化合物I-8的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000321
第一步：4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-溴-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(1.0g,3.94mmol)加入到1,4-二氧六环(10mL)中，加入二三苯基膦二氯化钯(274mg,0.39mmol)，1-丙炔-三正丁基锡(1.52g,4.61mmol)，氮气保护下加热至90℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(500mg,产率42％)。
第二步：4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(100mg,0.47mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入4-(三氟甲氧基)苄溴(179mg,0.70mmol)，碳酸铯(456mg,1.40mmol)，室温搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝10:1)得化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(90mg,产率50％)。
第三步：4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
室温下将原料4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(90mg,0.23mmol)加入到四氢呋喃(3mL),水(1mL)中，加入氢氧化锂(17mg,0.70mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得化合物白色固体粗品4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酸(80mg,产率65％).
第四步：6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酸(80mg,0.21mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入2-(6-氨基螺环[3.3]庚烷-2-基)甲酸甲酯盐酸盐(66mg,0.32mmol)，二异丙基乙胺(83mg,0.64mmol)，HATU(122mg,0.32mmol)，搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得化合物6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(80mg,产率71％)。
第五步：6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-8)的制备
Figure BDA0003684244210000331
室温下将化合物6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(80mg,0.15mmol)加入到四氢呋喃(3mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(11mg,0.46mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-8)(47mg,产率60％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.0(s,1H),8.73(d,1H),8.26(s,1H),7.36(d,1H),7.25(t,3H),7.04(d,2H),5.80(s,2H),4.24-4.18(m,1H),2.94(t,1H),2.40-2.22(m,4H),2.18(s,3H),2.08-2.02(m,2H),1.85-1.79(m,2H)。
LC-MS,M/Z(ESI):512.4[M+H]+。
实施例9化合物I-9的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000332
第一步：(4-((7-(甲氧羰基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-1-基)甲基)苄基)硼酸的制备
室温下将化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(190mg,0.89mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中，加入(4-(溴甲基)苄基)硼酸(286mg,1.33mmol)，碳酸铯(867mg,2.66mmol)，室温搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(DCM:甲醇(V/V)＝10:1)得化合物(4-((7-(甲氧羰基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-1-基)甲基)苄基)硼酸(210mg,产率68％)。
第二步：1-(4-(2-甲氧基嘧啶-4-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将原料(4-((7-(甲氧羰基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-1-基)甲基)苄基)硼酸(80mg,0.23mmol)加入到1,4-二氧六环(5mL)和水(1mL)中，加入氯(2-二环己基膦基-2,6-二甲氧基-1,1-联苯基)(2-氨基-1,1-联苯-2-基)钯(II)(17mg,0.02mmol)和磷酸钾(196mg,0.92mmol)，1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(19mg,0.02mmol)，4-溴-2-甲氧基嘧啶(53mg,0.28mmol)，90℃搅拌1h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(DCM:甲醇(V/V)＝10:1)得化合物1-(4-(2-甲氧基嘧啶-4-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(70mg,产率74％).
第三步：1-(4-(2-甲氧基嘧啶-4-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
室温下将原料1-(4-(2-甲氧基嘧啶-4-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(70mg,0.17mmol)加入到四氢呋喃(3mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(13mg,0.51mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得化合物粗品1-(4-(2-甲氧基嘧啶-4-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(65mg,产率96％).
第四步：6-(1-(4-(2-甲氧基嘧啶-4-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物1-(4-(2-甲氧基嘧啶-4-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(65mg,0.16mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入2-(6-氨基螺环[3.3]庚烷-2-基)甲酸甲酯盐酸盐(40.3mg,0.19mmol)，二异丙基乙胺(63mg,0.49mmol)，HATU(93mg,0.24mmol)，搅拌16h。加入水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(DCM:甲醇(V/V)＝10:1)得化合物6-(1-(4-(2-甲氧基嘧啶-4-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(120mg,产率100％)。
第五步：6-(1-(4-(2-甲氧基嘧啶-4-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-9)的制备
Figure BDA0003684244210000341
室温下将化合物6-(1-(4-(2-甲氧基嘧啶-4-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(120mg,0.24mmol)加入到甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(17mg,0.71mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物6-(1-(4-(2-甲氧基嘧啶-4-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-9)(50mg,产率43％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ11.99(s,1H),8.73(d,1H),8.64(d,1H),8.27(s,1H),8.06(d,2H),7.64(d,1H),7.36(d,1H),7.22(d,1H),7.08(d,2H),5.86(s,2H),4.26-4.20(m,1H),3.96(s,3H),2.91-2.87(m,1H),2.38-2.22(m,4H),2.17(s,3H),2.18-1.97(m,2H),1.88-1.79(m,2H).
LC-MS,M/Z(ESI):536.5[M+H]+。
实施例10化合物I-10的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000351
第一步：(4-((7-(甲氧羰基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-1-基)甲基)苄基)硼酸的制备
室温下将化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(190mg,0.89mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中，加入(4-(溴甲基)苄基)硼酸(286mg,1.33mmol)，碳酸铯(867mg,2.66mmol)，室温搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(DCM:甲醇(V/V)＝10:1)得化合物(4-((7-(甲氧羰基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-1-基)甲基)苄基)硼酸(210mg,产率68％)。
第二步：4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(噻唑-2-基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将(4-((7-(甲氧羰基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-1-基)甲基)苄基)硼酸(80mg,0.23mmol)加入到1,4-二氧六环(10mL)和水(1mL)中，加入氯(2-二环己基膦基-2,6-二甲氧基-1,1-联苯基)(2-氨基-1,1-联苯-2-基)钯(II)(17mg,0.02mmol)和磷酸钾(196mg,0.92mmol)，1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(19mg,0.02mmol)，2-溴噻唑(46mg,0.28mmol)，90℃搅拌1h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(二氯甲烷:甲醇(V/V)＝10:1)得化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(噻唑-2-基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(70mg,产率79％).
第三步：4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(噻唑-2-基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
室温下将4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(噻唑-2-基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(70mg,0.17mmol)加入到四氢呋喃(3mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(13mg,0.51mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(噻唑-2-基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酸(65mg,产率94％)。
第四步：6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(噻唑-2-基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(噻唑-2-基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酸(65mg,0.17mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入2-(6-氨基螺环[3.3]庚烷-2-基)甲酸甲酯盐酸盐(43mg,0.21mmol)，二异丙基乙胺(67mg,0.52mmol)，HATU(100mg,0.27mmol)，搅拌16h。加入水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(DCM:甲醇(V/V)＝20:1)得化合物6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(噻唑-2-基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(85mg,产率93％)。
第五步：6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(噻唑-2-基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-10)的制备
Figure BDA0003684244210000361
室温下将化合物6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(噻唑-2-基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(85mg,0.16mmol)加入到四氢呋喃(3mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(13mg,0.54mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(噻唑-2-基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-10)(55mg,产率66％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.0(s,1H),8.72(d,1H),7.89(d,1H),7.82(d,2H),7.76(d,1H),7.36(d,1H),7.22(d,2H),7.05(d,2H),5.82(s,2H),4.26-4.21(m,1H),2.91-2.87(m,1H),2.40-2.22(m,4H),2.18(s,3H),2.18-1.96(m,2H),1.89-1.79(m,2H)。
LC-MS,M/Z(ESI):511.4[M+H]+。
实施例11化合物I-11的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000371
第一步：1-(4-碘苯基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(400mg,1.87mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入1-(溴甲基)-4-碘苯(832mg,2.81mmol)，碳酸铯(1.82g,5.61mmol)，室温搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A得化合物1-(4-碘苯基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(300mg,产率37％)。
第二步：1-(4-(1H-吡唑-1-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将1-(4-碘苯基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(300mg,0.70mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入1H-吡唑(95mg,1.40mmol)、碘化亚铜(27mg，0.14mmol)和碳酸铯(454mg，1.40mmol)，120℃搅拌72h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得化合物1-(4-(1H-吡唑-1-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(40mg,产率14％).
第四步：1-(4-(1H-吡唑-1-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
室温下将1-(4-(1H-吡唑-1-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(40mg,0.11mmol)加入到四氢呋喃(3mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(8mg,0.33mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得化合物粗品1-(4-(1H-吡唑-1-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(35mg,产率90％)。
第四步：6-(1-(4-(1H-吡唑-1-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物1-(4-(1H-吡唑-1-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(35mg,0.10mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入2-(6-氨基螺环[3.3]庚烷-2-基)甲酸甲酯盐酸盐(31mg,0.15mmol)，二异丙基乙胺(39mg,0.30mmol)，HATU(57mg,0.15mmol)，搅拌16h。加入水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得化合物6-(1-(4-(1H-吡唑-1-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(35mg,产率70％)。
第五步：6-(1-(4-(1H-吡唑-1-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-11)的制备
Figure BDA0003684244210000381
室温下将化合物6-(1-(4-(1H-吡唑-1-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(35mg,0.07mmol)加入到四氢呋喃(3mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(5mg,0.21mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物6-(1-(4-(1H-吡唑-1-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-11)(22mg,产率64％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.00(s,1H),8.76(d,1H),8.41(d,1H),8.25(s,1H),7.70(s，1H),7.68(d,2H),7.40(d,1H),7.07(d,1H),7.04(d,2H),6.51(t,1H),5.79(s,2H),4.30-4.24(m,1H),2.94-2.90(m,1H),2.32-2.30(m,1H),2.27-2.20(m,3H),2.17(s,3H),2.08-2.01(m,2H),1.93-1.83(m,2H)。
LC-MS,M/Z(ESI):494.4[M+H]+。
实施例12化合物I-12的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000391
第一步：2-氨基-4-溴-3-甲基苯甲酸甲酯的制备
室温下将化合物2-氨基-4-溴-3-甲基苯甲酸(5.5g,23.9mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(70mL)中，加入碘甲烷(3.4g,24.0mmol)，碳酸铯(11.7g,35.8mmol)，搅拌20h。加入水(200mL)稀释，用乙酸乙酯(200mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝4:1)得化合物2-氨基-4-溴-3-甲基苯甲酸甲酯(5.0g,产率85％)。
第二步：(3-溴-6-(甲氧羰基)-2-甲基苯基)-1-四氟硼酸重氮盐的制备
室温下将化合物2-氨基-4-溴-3-甲基苯甲酸甲酯(5.0g,20.5mmol)加入到50％HBF4水溶液(5mL)中，冷却至0℃，滴加亚硝酸钠(1.42g,20.6mmol)的5mL水溶液，0℃下搅拌1h。过滤，干燥，得化合物粗品(3-溴-6-(甲氧羰基)-2-甲基苯基)-1-四氟硼酸重氮盐(6.6g,产率94％)。
第三步：4-溴-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物(3-溴-6-(甲氧羰基)-2-甲基苯基)-1-四氟硼酸重氮盐(6.6g,19.3mmol)加入到氯仿(70mL)中，加入醋酸钾(3.8g,38.7mmol)，18-冠-6(100mg)，室温搅拌1h。浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝4:1)得化合物4-溴-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(4.2g,产率94％)。
第四步：4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-溴-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(1.0g,3.94mmol)加入到1,4-二氧六环(10mL)中，加入二三苯基膦二氯化钯(274mg,0.39mmol)，1-丙炔-三正丁基锡(1.52g,4.61mmol)，氮气保护下加热至90℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(500mg,产率42％)。
第五步：1-(4-环丙基苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(150mg,0.70mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入4-环丙基苄溴(200mg,0.95mmol)，碳酸铯(460mg,1.40mmol)，室温搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝10:1)得化合物1-(4-环丙基苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(120mg,产率49％)。
第六步：1-(4-环丙基苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
室温下将1-(4-环丙基苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(120mg,0.35mmol)加入到四氢呋喃(4mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(25mg,1.0mmol)，室温搅拌4h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得化合物粗品1-(4-环丙基苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(130mg,产率100％)。
第七步：6-(1-(4-环丙基苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物1-(4-环丙基苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(130mg,0.39mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加入2-(6-氨基螺环[3.3]庚烷-2-基)甲酸甲酯盐酸盐(97mg,0.47mmol)，二异丙基乙胺(152mg,1.18mmol)，HATU(225mg,0.59mmol)，搅拌3h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝10:1)得化合物6-(1-(4-环丙基苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(156mg,产率82％)。
第八步：6-(1-(4-环丙基苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-12)的制备
Figure BDA0003684244210000401
室温下将化合物6-(1-(4-环丙基苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(156mg,0.33mmol)加入到四氢呋喃(3mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(24mg,1.0mmol)，室温搅拌4h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物6-(1-(4-环丙基苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-12)(55mg,产率36％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ11.93(s,1H),8.74(d,1H),8.21(s,1H),7.34(d,1H),7.20(d,1H),6.92(d,2H),6.85(d,2H),5.70(s,2H),4.29-4.23(m,1H),2.96(t,1H),2.46-2.40(m,1H),2.28-2.22(m,3H),2.17(s,3H),2.15-2.09(m,2H),1.87-1.82(m,3H),0.89-0.87(m,2H)0.57-0.56(m,2H)。
LC-MS,M/Z(ESI):468.4[M+H]+。
实施例13化合物I-13的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000411
第一步：1-(4-碘苯基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(400mg,1.87mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入1-(溴甲基)-4-碘苯(832mg,2.81mmol)，碳酸铯(1.82g,5.61mmol)，室温搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A得化合物1-(4-碘苯基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(300mg,产率37％)。
第二步：1-(4-(2-甲氧基吡啶-4-基)苯基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将1-(4-碘苯基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(300mg,0.70mmol)和(2-甲氧基吡啶-4-基)硼酸(161mg，1.05mmol)加入到1,4-二氧六环(10mL)和水(3mL)中，加入氯(2-二环己基膦基2'，6'-二甲氧基-1,1'-联苯)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)(50mg,0.07mmol)和磷酸钾(594mg，2.80mmol)，50℃搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得化合物1-(4-(2-甲氧基吡啶-4-基)苯基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(100mg,产率35％).
第三步：1-(4-(2-甲氧基吡啶-4-基)苯基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
室温下将1-(4-(2-甲氧基吡啶-4-基)苯基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(100mg,0.24mmol)加入到四氢呋喃(3mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(18mg,0.73mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得化合物粗品1-(4-(2-甲氧基吡啶-4-基)苯基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(70mg,产率72％).
第四步：6-(1-(4-(2-甲氧基吡啶-4-基)苯基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物1-(4-(2-甲氧基吡啶-4-基)苯基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(70mg,0.18mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入2-(6-氨基螺环[3.3]庚烷-2-基)甲酸甲酯盐酸盐(55mg,0.26mmol)，二异丙基乙胺(67mg,0.52mmol)，HATU(99mg,0.26mmol)，搅拌16h。加入水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得化合物6-(1-(4-(2-甲氧基吡啶-4-基)苯基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(60mg,产率62％)。
第五步：6-(1-(4-(2-甲氧基吡啶-4-基)苯基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-13)的制备
Figure BDA0003684244210000421
室温下将化合物6-(1-(4-(2-甲氧基吡啶-4-基)苯基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(60mg,0.11mmol)加入到四氢呋喃(3mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(8mg,0.33mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物6-(1-(4-(2-甲氧基吡啶-4-基)苯基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-13)(50mg,产率85％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ11.97(s,1H),8.75(d,1H),8.26(s,1H),7.64(d,1H),7.36(d，2H),7.34(d,1H),7.22(t,2H),7.06(t,3H),5.82(s,2H),4.27-4.21(m,1H),3.80(s,3H),2.93-2.89(m,1H),2.38-2.22(m,4H),2.13(s,3H),2.18-1.99(m,2H),1.90-1.80(m,2H)。
LC-MS,M/Z(ESI):535.4[M+H]+。
实施例14化合物I-14的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000431
第一步：2-(4-(溴甲基)苄基)丙烷-2-醇的制备
室温下将化合物2-(4-甲基苯基)丙烷-2-醇(500mg,3.3mmol)加入到CCl4(10mL)中，加入氧化二苯甲酰(BPO，16mg,0.06mmol)，N-溴代琥珀酰亚胺(NBS，600mg,3.4mmol)，加热回流搅拌4h。将反应液浓缩，残留物用薄层柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝4:1)得化合物2-(4-(溴甲基)苄基)丙烷-2-醇(460mg,产率60％)。
第二步：1-(4-(2-羟基丙烷-2-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(150mg,0.70mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入2-(4-(溴甲基)苄基)丙烷-2-醇(200mg,0.87mmol)，碳酸铯(460mg,1.42mmol)，室温搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝4:1)得化合物1-(4-(2-羟基丙烷-2-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(120mg,产率47％)。
第三步：1-(4-(2-羟基丙烷-2-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
室温下将1-(4-(2-羟基丙烷-2-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(120mg,0.33mmol)加入到四氢呋喃(4mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(24mg,1.0mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得化合物粗品1-(4-(2-羟基丙烷-2-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(130mg,产率100％).
第四步：6-(1-(4-(2-羟基丙烷-2-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物1-(4-(2-羟基丙烷-2-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(110mg,0.32mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加入2-(6-氨基螺环[3.3]庚烷-2-基)甲酸甲酯盐酸盐(78mg,0.38mmol)，二异丙基乙胺(122.5mg,0.95mmol)，HATU(180mg,0.47mmol)，搅拌16h。加入水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(DCM:甲醇(V/V)＝10:1)得化合物6-(1-(4-(2-羟基丙烷-2-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(150mg,产率95％)。
第五步：6-(1-(4-(2-羟基丙烷-2-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-14)的制备
Figure BDA0003684244210000441
室温下将化合物6-(1-(4-(2-羟基丙烷-2-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(150mg,0.30mmol)加入到四氢呋喃(3mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(22mg,0.90mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物6-(1-(4-(2-羟基丙烷-2-基)苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-14)(50mg,产率34％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.0(s,1H),8.78(d,1H),8.21(s,1H),7.35(d，1H),7.31(d,2H),7.21(d,1H),6.92(d,2H),5.72(s,2H),4.92(s,1H),4.30-4.24(m,1H),2.95-2.91(m,1H),2.42-2.17(m,4H),2.17(s,3H),2.10-2.02(m,2H),1.93-1.82(m,2H),1.35(s,6H)。
LC-MS,M/Z(ESI):486.4[M+H]+。
实施例15化合物I-15的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000442
第一步：4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-溴-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(1.0g,3.94mmol)加入到1,4-二氧六环(10mL)中，加入二三苯基膦二氯化钯(274mg,0.39mmol)，1-丙炔-三正丁基锡(1.52g,4.61mmol)，氮气保护下加热至90℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(500mg,产率42％)。
第二步：4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(100mg,0.47mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入1-(溴甲基)-4-(三氟甲基)苯(168mg,0.70mmol)和碳酸铯(456mg,1.40mmol)，室温搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A得化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(120mg,产率69％)。
第三步：4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
室温下将原料4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(120mg,0.32mmol)加入到四氢呋喃(5mL)和水(2mL)中，加入氢氧化锂(23mg,0.97mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得化合物粗品4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苄基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酸(110mg,产率95％)。
第四步：6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苄基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酸(110mg,0.31mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入2-(6-氨基螺环[3.3]庚烷-2-基)甲酸甲酯盐酸盐(98mg,0.47mmol)，二异丙基乙胺(122mg,0.93mmol)，HATU(180mg,0.47mmol)，搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得化合物6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(100mg,产率64％)。
第五步：6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-15)的制备
Figure BDA0003684244210000451
室温下将化合物6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(100mg,0.20mmol)加入到四氢呋喃(5mL)和水(2mL)中，加入氢氧化锂(15mg,0.60mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-15)(70mg,产率72％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.04(s,1H),8.69(d,1H),8.29(s,1H),7.62(d,2H),7.37(d,1H),7.24(d,1H),7.10(d,2H),5.88(s,2H),4.20-4.15(m,1H),2.94-2.90(d,1H),2.33-2.25(m,4H),2.22(s,3H),2.19-2.00(m,2H)，1.83-1.75(m,2H)。
LC-MS,M/Z(ESI):496.4[M+H]+。
实施例16化合物I-16的制备
合成路线如下所示
Figure BDA0003684244210000461
第一步：1-(溴甲基)-3-环丙基苯的制备
室温下将化合物3-(环丙基苯基)甲醇(300mg,2.0mmol)加入到乙醚(10mL)中，冷却至0℃，加入三溴化膦(550mg,2.2mmol)，室温搅拌2h。加入水(20mL)稀释，用乙醚(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩将反应液浓缩，得化合物粗品1-(溴甲基)-3-环丙基苯(320mg,产率75％)。
第二步：1-(3-环丙基苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(150mg,0.70mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入1-(溴甲基)-3-环丙基苯(300mg,1.42mmol)，碳酸铯(460mg,1.42mmol)，室温搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝4:1)得化合物1-(3-环丙基苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(130mg,产率54％)。
第三步：1-(3-环丙基苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
室温下将1-(3-环丙基苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(130mg,0.38mmol)加入到四氢呋喃(5mL)和水(2mL)中，加入氢氧化锂(27mg,1.1mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得化合物粗品1-(3-环丙基苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(112mg,产率90％).
第四步：6-(1-(3-环丙基苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物1-(3-环丙基苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(112mg,0.34mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，加入2-(6-氨基螺环[3.3]庚烷-2-基)甲酸甲酯盐酸盐(84mg,0.41mmol)，二异丙基乙胺(135mg,1.05mmol)，HATU(200mg,0.53mmol)，搅拌16h。加入水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(PE:EA(V/V)＝1:1)得化合物6-(1-(3-环丙基苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(150mg,产率92％)。
第五步：6-(1-(3-环丙基苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-16)的制备
Figure BDA0003684244210000471
室温下将化合物6-(1-(3-环丙基苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(150mg,0.31mmol)加入到四氢呋喃(5mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(22mg,0.92mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物6-(1-(3-环丙基苄基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-16)(55mg,产率38％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ11.97(s,1H),8.77(d,1H),8.23(s,1H),7.36(d,1H),7.21(d,1H),7.07(t,1H),6.86(d,1H),6.77(s,1H),6.64(d,1H),5.72(s,2H),4.25-4.20(m,1H),2.95-2.91(m,1H),2.42-2.17(m,4H),2.17(s,3H),2.10-2.02(m,2H),1.90-1.84(m,3H),0.90(d,2H),0.55(d,2H).
LC-MS,M/Z(ESI):468.5[M+H]+。
实施例17化合物I-17的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000481
第一步：4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-溴-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(1.0g,3.94mmol)加入到1,4-二氧六环(10mL)中，加入二三苯基膦二氯化钯(274mg,0.39mmol)，1-丙炔-三正丁基锡(1.52g,4.61mmol)，氮气保护下加热至90℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(500mg,产率42％)。
第二步：4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(3-(三氟甲氧基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(150mg,0.70mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入1-(溴甲基)-4-(三氟甲氧基)苯(268mg,1.05mmol)和碳酸铯(683mg,2.10mmol)，室温搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A得化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(3-(三氟甲氧基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(140mg,产率52％)。
第三步：4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(3-(三氟甲氧基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
室温下将4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(3-(三氟甲氧基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(140mg,0.36mmol)加入到四氢呋喃(5mL)和水(2mL)中，加入氢氧化锂(26mg,1.08mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得化合物粗品4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苄基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酸(130mg,产率96％)。
第四步：6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(3-(三氟甲氧基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苄基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酸(130mg,0.35mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入2-(6-氨基螺环[3.3]庚烷-2-基)甲酸甲酯盐酸盐(108mg,0.53mmol)，二异丙基乙胺(136mg,1.05mmol)，HATU(200mg,0.53mmol)，搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得化合物6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(3-(三氟甲氧基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(120mg,产率66％)。
第五步：6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(3-(三氟甲氧基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-17)的制备
Figure BDA0003684244210000491
室温下将化合物6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(3-(三氟甲氧基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(120mg,0.23mmol)加入到四氢呋喃(5mL)和水(2mL)中，加入氢氧化锂(17mg,0.69mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(3-(三氟甲氧基)苄基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-17)(90mg,产率77％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ11.99(s,1H),8.78(d,1H),8.27(s,1H),7.39(d,2H),7.24(d,2H),6.92(s,2H),5.83(s,2H),4.20-4.19(m,1H),2.94-2.90(m,1H),2.50-2.36(m,4H),2.27(s,3H),2.25-2.03(m,2H)，1.91-1.81(m,2H).
LC-MS,M/Z(ESI):512.4[M+H]+。
实施例18化合物I-18的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000492
第一步：4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-溴-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(1.0g,3.94mmol)加入到1,4-二氧六环(10mL)中，加入二三苯基膦二氯化钯(274mg,0.39mmol)，1-丙炔-三正丁基锡(1.52g,4.61mmol)，氮气保护下加热至90℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(500mg,产率42％)。
第二步：1-(1-(4-环丙基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(500mg,2.34mmol)加入到四氢呋喃(15mL)中，加入1-(1-(4-环丙基苯基)乙基)-1-醇(568mg,3.60mmol)，三苯基膦(1.23g,4.68mmol)，偶氮二甲酸二异丙酯(945mg,4.68mmol)，室温搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A得化合物1-(1-(4-环丙基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(360mg,产率43％)。
第三步：1-(1-(4-环丙基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
室温下将原料1-(1-(4-环丙基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(360mg,1.00mmol)加入到四氢呋喃(5mL)和水(2mL)中，加入氢氧化锂(72mg,3.00mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得化合物粗品4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酸(330mg,产率95％)。
第四步：6-(1-(1-(4-环丙基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酸(330mg,0.96mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入2-(6-氨基螺环[3.3]庚烷-2-基)甲酸甲酯盐酸盐(297mg,1.44mmol)，二异丙基乙胺(372mg,2.88mmol)，HATU(547mg,1.44mmol)，搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得化合物6-(1-(1-(4-环丙基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(200mg，产率42％)。
第五步：6-(1-(1-(4-环丙基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-18)的制备
Figure BDA0003684244210000501
室温下将化合物6-(1-(1-(4-环丙基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(200mg,0.40mmol)加入到四氢呋喃(5mL)和水(2mL)中，加入氢氧化锂(29mg,1.21mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物6-(1-(1-(4-环丙基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-18)(178mg，产率92％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.0(s,1H),8.81(dd,1H),8.22(s,1H),7.28(d,1H),7.18(d,1H),6.90(d,4H),6.22(d,1H),4.36-4.30(m,1H),2.98-2.90(m,1H),2.30-2.29(d,1H),2.27-2.25(m,3H),2.13(s,3H),2.10-1.85(m,4H),1.84(d,3H),1.83-1.82(m,1H),0.88(dd,2H),0.56(dd,2H).
LC-MS,M/Z(ESI):482.2[M+H]+。
化合物I-18a的合成
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000511
第一步：4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-溴-1H-吲唑-7-乙酸甲酯(1.0g,3.92mmol)加入到1,4-二氧六环(10mL)中，加入二三苯基膦二氯化钯(274mg,0.39mmol)，1-丙炔-三正丁基锡(1.55g,4.70mmol)，氮气保护下加热至90℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-乙酸甲酯(300mg,产率36％)。
第二步：(R)-1-(1-(4-溴苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(500mg,2.33mmol)和(S)-1-(4-溴苯基)乙-1-醇(845mg,4.2mmol)，三苯基膦(1.22g,4.67mmol)加入到无水四氢呋喃中(10mL)，冷却到0℃,滴加偶氮二甲酸二异丙酯(0.95g,4.67mmol)，室温搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物薄层硅胶板分离纯化得化合物(R)-1-(1-(4-环丙基苯基)乙基)-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(500mg,产率53.9％).
第三步：(R)-1-(1-(4-环丙基苯基)乙基)-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将(R)-1-(1-(4-溴苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(500mg,1.26mmol)和环丙基硼酸(432mg,5.03mmol)加入到1,4-二氧六环(10mL)中，加入磷酸钾溶液(2M,3.2ml)，鼓泡换气后加入1,1'-二(二苯膦基)二茂铁二氯化钯(II)(103mg,0.13mmol)，微波120℃反应1h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化得化合物(R)-1-(1-(4-环丙基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(200mg,产率44％).
第四步：(R)-1-(1-(4-环丙基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
室温下将化合物(R)-1-(1-(4-环丙基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(200mg,0.56mmol)加入到四氢呋喃(5mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂溶液(2M,0.84ml)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物(R)-1-(1-(4-环丙基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(150mg，产率78％)。
第五步：(Sa,R)-6-(1-(1-(4-环丙基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
将(R)-1-(1-(4-环丙基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(150mg，0.44mmol)、(Sa)-6-氨基螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯盐酸盐(110mg，0.52mmol)、二异丙基乙胺(170mg，1.31mmol)和HATU(331mg，0.87mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，然后室温搅拌16h。向反应液中加入水(15mL)，然后用乙酸乙酯(5mL*3)萃取。有机相合并，用饱和食盐水(5mL*3)洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩得到粗品。粗品用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)纯化得到产物(Sa,R)-6-(1-(1-(4-环丙基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(150mg，产率69.5％)。LC-MS,M/Z(ESI):496.2[M+H]+。
第六步：(Sa,R)-6-(1-(1-(4-环丙基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-18a)
Figure BDA0003684244210000521
室温下将化合物(Sa,R)-6-(1-(1-(4-环丙基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(150mg,0.30mmol)加入到四氢呋喃(3mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂溶液(2M,0.45ml)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物(Sa,R)-6-(1-(1-(4-环丙基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-18a，65.1mg,产率44.7％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.0(s,1H),8.22(s,1H),7.22(d,1H),7.09(d,1H),6.88–6.81(m,3H),6.23(q,1H),5.73(d,1H),4.42(dt,1H),3.09(dd,1H),2.62(dd,1H),2.47–2.39(m,3H),2.32(dd,1H),2.18(d,4H),1.95(dd,4H),1.78(ddd,3H),0.89(ddd,2H),0.58(dt,2H).
LC-MS,M/Z(ESI):482.5[M+H]+
化合物I-18b合成
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000531
化合物I-18b的制备方法参考I-18a的制备方法。在第二步将(Sa,S)-1-(4-溴苯基)乙醇换成(R)-1-(4-溴苯基)乙醇,经过同样的六步反应得到化合物(Sa,S)-6-(1-(1-(4-环丙基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-18b，43.7mg,产率64％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.0(s,1H),8.22(s,1H),7.22(d,1H),7.09(d,1H),6.89–6.82(m,3H),6.24(q,1H),5.77(d,1H),4.43(dq,1H),3.14–3.05(m,1H),2.51(dt,2H),2.42(d,2H),2.34–2.28(m,1H),2.21–2.14(m,4H),1.97(d,3H),1.90–1.70(m,4H),0.93–0.86(m,2H),0.59(dt,2H)。
LC-MS,M/Z(ESI):482.5[M+H]+
实施例19化合物I-19的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000532
第一步：4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-溴-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(1.0g,3.94mmol)加入到1,4-二氧六环(10mL)中，加入二三苯基膦二氯化钯(274mg,0.39mmol)，1-丙炔-三正丁基锡(1.52g,4.61mmol)，氮气保护下加热至90℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝5:1)得化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(500mg,产率42％)。
第二步：4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(300mg,1.40mmol)加入到四氢呋喃(10mL)中，加入1-(4-(三氟甲氧基)苯基)乙基)-1-醇(433mg,2.10mmol)，三苯基膦(736mg,2.80mmol)，偶氮二甲酸二异丙酯(283mg,2.80mmol)，室温搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A得化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(120mg,产率21％)。
第三步：4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
室温下将原料4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(120mg,0.30mmol)加入到四氢呋喃(5mL)和水(2mL)中，加入氢氧化锂(22mg,0.92mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得化合物粗品4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酸(100mg,产率86％).
LC-MS,M/Z(ESI):389.4[M+H]+。
第四步：6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酸(100mg,0.26mmol)加入到二异丙基乙胺(5mL)中，加入2-(6-氨基螺环[3.3]庚烷-2-基)甲酸甲酯盐酸盐(80mg,0.39mmol)，二异丙基乙胺(67mg,0.52mmol)，HATU(148mg,0.39mmol)，搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得化合物6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(80mg,产率58％)。
第五步：6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-(4-(三氟甲氧基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-19)的制备
Figure BDA0003684244210000541
室温下将化合物6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(4-(三氟甲氧基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(80mg,0.15mmol)加入到四氢呋喃(5mL)和水(2mL)中，加入氢氧化锂(11mg,0.46mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-(4-(三氟甲氧基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-19)(70mg,产率60％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.0(s,1H),8.79(d,1H),8.27(s,1H),7.29(d,1H),7.21(t,3H),7.12(d,2H),6.34(q,1H),4.32-4.26(m,1H),2.96(t,1H),2.33-2.19(m,4H),2.17(s,3H),2.10-1.87(m,4H),1.88(d,3H)。
LC-MS,M/Z(ESI):526.6[M+H]+。
化合物I-19a、I-19b、I-19c、I-19d经化合物I-19手性拆分获得，拆分方法：使用大赛璐AD型号手性拆分柱(规格为：25*250mm,10um)进行手性拆分，流动相A为超临界流体CO2,流动相B为甲醇(含0.05％二乙醇胺)；梯度条件:流动相B从5％至80％，流动速率为30mL/min；20％的梯度保持10min，40％的梯度保持10min，50％-80％梯度洗脱，保持20min，柱温保持在35℃，柱压保持在100bar。
化合物I-19a、I-19b、I-19c、I-19d的结构如下所示：
Figure BDA0003684244210000551
化合物I-19a保留时间：0.731min，
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.0(s,1H),8.80(d,1H),8.27(s,1H),7.32(d,1H),7.25(t,3H),7.12(d,2H),6.35(q,1H),4.33-4.27(m,1H),2.96(t,1H),2.45-2.40(m,1H),2.32-2.19(m,3H),2.17(s,3H),2.14-2.01(m,2H),1.97-1.92(m,1H),1.89(d,3H),1.87-1.83(m,1H).
LC-MS,M/Z(ESI):526.6[M+H]+。
化合物I-19b，保留时间：0.968min，
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.05(s,1H),8.80(d,1H),8.27(s,1H),7.32(d,1H),7.24(t,3H),7.12(d,2H),6.34(q,1H),4.33-4.27(m,1H),2.97(t,1H),2.46-2.41(m,1H),2.32-2.19(m,3H),2.17(s,3H),2.14-2.01(m,2H),1.97-1.92(m,1H),1.89(d,3H),1.81-1.76(m,1H).
LC-MS,M/Z(ESI):526.6[M+H]+。
化合物I-19c，保留时间：1.585min，
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.05(s,1H),8.80(d,1H),8.28(s,1H),7.32(d,1H),7.24(t,3H),7.12(d,2H),6.35(q,1H),4.33-4.27(m,1H),2.98(t,1H),2.49-2.42(m,1H),2.33-2.21(m,3H),2.17(s,3H),2.14-1.99(m,3H),1.89(d,3H),1.82-1.77(m,1H).
LC-MS,M/Z(ESI):526.6[M+H]+。
化合物I-19d，保留时间：3.323min，
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ11.90(s,1H),8.80(d,1H),8.27(s,1H),7.32(d,1H),7.25(t,3H),7.12(d,2H),6.35(q,1H),4.33-4.27(m,1H),2.95(t,1H),2.45-2.39(m,1H),2.34-2.21(m,3H),2.17(s,3H),2.14-1.92(m,3H),1.89(d,3H),1.87-1.83(m,1H).
LC-MS,M/Z(ESI):526.6[M+H]+。
实施例20化合物I-20a的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000561
第一步：(R)-1-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)苯基)乙醇的制备
室温下将(R)-1-(4-溴苯基)乙醇(500mg,2.49mmol)和联硼酸频那醇酯(1.26g,4.97mmol)加入到1,4-二氧六环(10mL)中，加入1,1'-二(二苯膦基)二茂铁二氯化钯(II)(180mg,0.25mmol)和醋酸钾(732mg,7.46mmol)，90℃搅拌7h。加入水(30mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化得到(R)-1-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)苯基)乙醇(450mg,产率73％)。
第二步：(R)-1-(4-(2-甲氧基嘧啶-4-基)苯基)乙醇的制备
室温下将原料(R)-1-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)苯基)乙醇(400mg,1.6mmol)和4-溴-2-甲氧基嘧啶(366mg,1.94mmol)加入到1,4-二氧六环(10mL)和水(1mL)中，加入1,1'-二(二苯膦基)二茂铁二氯化钯(II)(118mg,0.16mmol)和碳酸钠(1.05g,3.22mmol)，80℃搅拌1h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化得化合物(R)-1-(4-(2-甲氧基嘧啶-4-基)苯基)乙醇(260mg,产率70％)。
第三步：(S)-1-(1-(4-(2-甲氧基嘧啶-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将(R)-1-(4-(2-甲氧基嘧啶-4-基)苯基)乙醇(260mg,0.93mmol)和4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(322mg,1.4mmol)，三苯基膦(860mg,3.27mmol)加入到无水四氢呋喃中(5mL)，冷却到0℃,滴加偶氮二甲酸二异丙酯(660mg,3.27mmol)，室温搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物薄层硅胶板分离纯化得化合物(S)-1-(1-(4-(2-甲氧基嘧啶-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(120mg,产率30％)。
第四步：(S)-1-(1-(4-(2-甲氧基嘧啶-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
室温下将化合物(S)-1-(1-(4-(2-甲氧基嘧啶-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(120mg,0.28mmol)加入到四氢呋喃(3mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(20mg,0.84mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物(S)-1-(1-(4-(2-甲氧基嘧啶-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(60mg,产率52％)。
第五步：(Sa,S)-6-(1-(1-(4-(2-甲氧基嘧啶-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰氨基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯
室温下将化合物(S)-1-(1-(4-(2-甲氧基嘧啶-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(60mg,0.145mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入(Sa)-2-(6-氨基螺环[3.3]庚烷-2-基)甲酸甲酯盐酸盐(36mg,0.16mmol)，二异丙基乙胺(56mg,0.44mmol)，HATU(83mg,0.22mmol)，搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物(Sa,S)-6-(1-(1-(4-(2-甲氧基嘧啶-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰氨基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(60mg,产率73％)。
第六步：(Sa,S)-6-(1-(1-(4-(2-甲氧基嘧啶-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-20a)
Figure BDA0003684244210000571
室温下将化合物(Sa,S)-甲基6-(1-(1-(4-(2-甲氧基嘧啶-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰氨基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(60mg,0.11mmol)加入到四氢呋喃(3mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(8mg,0.32mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物(Sa,S)-6-(1-(1-(4-(2-甲氧基嘧啶-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-20a)(17.5mg，产率30％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.79(d,1H),8.62(d,1H),8.29(d,1H),8.03(d,2H),7.61(d,1H),7.30(d,1H),7.16(dd,3H),6.36(q,1H),4.33(dd,1H),3.95(s,3H),2.93–2.84(m,1H),2.48–2.40(m,1H),2.31–2.20(m,3H),2.18(s,2H),2.09(dd,1H),2.05–1.97(m,2H),1.93(d,3H),1.87–1.77(m,2H)。
LC-MS,M/Z(ESI):550.1[M+H]+
化合物I-20b的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000581
化合物I-20b的合成方法参考其异构体I-20a的合成方法，将(R)-1-(4-溴苯基)乙醇换成(s)-1-(4-溴苯基)乙醇，经过同样的六步反应得到化合物(Sa,R)-6-(1-(1-(4-(2-甲氧基嘧啶-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(34.5mg,产率59％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.79(d,1H),8.60(d,1H),8.26(d,1H),8.03(d,2H),7.60(d,1H),7.32(d,1H),7.14(dd,3H),6.35(q,1H),4.43(dd,1H),3.95(s,3H),2.92–2.84(m,1H),2.45–2.40(m,1H),2.26–2.20(m,3H),2.18(s,2H),2.09(dd,1H),2.03–1.97(m,2H),1.91(d,3H),1.86–1.77(m,2H).
LC-MS,M/Z(ESI):550.1[M+H]+。
实施例21化合物I-21的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000591
第一步：4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-溴-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(2.5g,9.8mmol)，四丁基氟化铵(19.6ml,19.6mmol)，碘化亚铜(0.28g,1.47mmol)，二(三苯基膦)二氯化钯(0.688g,0.980mmol)，乙炔基三甲基硅烷(2.2g,19.60mmol)加入到四氢呋喃(20ml)中，氮气保护下室温搅拌12h。待反应完全，加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝2:3)得化合物4-(丙-1-烯-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(1.8g,产率85％)。
第二步：1-(3-(4-溴苯基)噁丁环-3-基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
将化合物4-(丙-1-烯-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(0.5g,2.33mmol)，3-(4-溴苯基)噁丁环-3-醇(1.6g,7.0mmol)，三苯基膦(1.84g,7.0mmol)加入到四氢呋喃(8ml)中，0℃下滴加偶氮二甲酸二异丙酯(1.4g,7.0mmol)，室温搅拌10h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得化合物1-(3-(4-溴苯基)噁丁环-3-基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(0.7g,黄色固体，产率70％)。
第三步：1-(3-(4-环丙基苯基)噁丁环-3-基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
将甲基1-(3-(4-溴苯基)噁丁环-3-基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(300mg,0.71mmol)，环丙基硼酸(300mg,3.53mmol)和四(三苯基膦)钯(80mg，0.071mmol)，氟化钾(123mg,2.12mmol)加入到甲苯(3ml)和水(0.5ml)中,升温至100℃搅拌12h。加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝3:1)得化合物固体1-(3-(4-环丙基苯基)噁丁环-3-基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(180mg,产率66％)。
第四步：甲基-1-(3-(4-环丙基苯基)噁丁环-3-基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
室温下将化合物1-(3-(4-环丙基苯基)噁丁环-3-基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(180mg,0.47mmol)加入到四氢呋喃(3mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(59mg,1.4mmol)，搅拌16h。加入水(10mL)稀释，用1N的盐酸水溶液调节pH为4，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得化合物甲基-1-(3-(4-环丙基苯基)噁丁环-3-基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(120mg,产率70％)。
第五步：6-(1-(3-(4-环丙基苯基)噁丁环-3-基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物甲基-1-(3-(4-环丙基苯基)噁丁环-3-基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(100mg,0.27mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入2-(6-氨基螺[3.3]庚-2-基)乙酸乙酯盐酸盐(66mg,0.32mmol)，二异丙基乙胺(173mg,1.34mmol)和HATU(155mg,0.40mmol)，室温搅拌16h。加入水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得化合物6-(1-(3-(4-环丙基苯基)噁丁环-3-基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(100mg,产率70％)。
第六步：6-(1-(3-(4-环丙基苯基)噁丁环-3-基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-21)的制备
Figure BDA0003684244210000601
室温下将化合物6-(1-(3-(4-环丙基苯基)噁丁环-3-基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(25mg,0.048mmol)加入到四氢呋喃(3mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(6mg,0.143mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物(Sa)-6-(1-(3-(4-环丙基苯基)噁丁环-3-基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-21)(10mg,产率40％)。
1H NMR(400MHz,dmso)δ8.36–8.31(m,2H),7.27–7.20(m,2H),6.94(d,2H),6.72(d,2H),5.30(s,2H),4.83(s,2H),3.91–3.86(m,1H),2.18(s,3H),2.15–2.01(m,5H),1.85–1.66(m,5H),0.91–0.86(m,2H),0.62–0.56(m,2H).
LC-MS,M/Z(ESI):510[M+H]+。
实施例22化合物I-22的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000611
第一步：1-(4-溴苯基)-3,3-二甲氧基环丁烷-1-甲腈
反应瓶中依次加入氢化钠(4.5g,112mmol)和无水N,N-二甲基甲酰胺(100mL)，冰浴下缓慢滴加对溴苯乙腈(10g,51mmol)，搅拌30分钟后往里加入1,3-二溴-2,2-二甲氧基丙烷(13.4g,51mmol)，反应液逐渐升温至60℃搅拌16小时。反应液冷至室温，缓慢加水(150mL)，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。上述有机相合并，用饱和食盐水(50mL×2)洗涤，浓缩后得到粗品1-(4-溴苯基)-3,3-二甲氧基环丁烷-1-甲腈(15g，产率100％)，直接用于下一步反应。
第二步：1-(4-溴苯基)-3-氧杂环丁基-1-甲腈
将粗品1-(4-溴苯基)-3,3-二甲氧基环丁烷-1-甲腈(15g,51mmol)溶于丙酮中，加入50％硫酸水溶液(10mL)，回流反应12小时。反应液冷至室温，加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)，旋蒸除去丙酮，水相用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。有机相合并后用饱和食盐水(50mL×1)洗涤和无水硫酸钠干燥，浓缩后残留物用柱层析硅胶纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝10:1)得1-(4-溴苯基)-3-氧杂环丁基-1-甲腈(4.6g，浅棕色油状液体，产率47％)。
第三步：1-(4-溴苯基)-3-甲基烯环丁烷-1-甲腈
甲基三苯基溴化膦(9.86g,27.6mmol)溶于四氢呋喃(100mL)中，冰浴下缓慢滴加叔丁醇钾(1mol/L四氢呋喃溶液,27.6mL)，搅拌1小时。将1-(4-溴苯基)-3-氧杂环丁基-1-甲腈(6.9g,27.6mmol)溶于四氢呋喃(10mL)后缓慢加入上述溶液中，逐渐升至室温搅拌过夜16小时。往反应液中加入氯化铵水溶液(20mL)，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，有机相合并后用无水硫酸钠干燥，浓缩后的残留物用柱层析硅胶纯化，得到1-(4-溴苯基)-3-甲基烯环丁烷-1-甲腈(4.6g，产率67％)。
第四步：1-(4-溴苯基)-3-甲基烯环丁烷-1-甲醛
1-(4-溴苯基)-3-甲基烯环丁烷-1-甲腈(4.3g,16.2mmol)溶于四氢呋喃(30mL)中，冰浴下缓慢加入二异丙基铝氢(1mol/L四氢呋喃溶液，26mL),慢慢升至室温搅拌过夜。反应液冰浴下缓慢滴加水(5mL)，随后加入稀盐酸(1mol/L水溶液，20mL)，搅拌4小时，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。有机相合并后用无水硫酸钠干燥，浓缩即得粗品1-(4-溴苯基)-3-甲基烯环丁烷-1-甲醛(4.5g，产率95％)。
第五步：1-(4-溴苯基)-3-甲基烯环丁烷-1-甲醇的制备
粗品1-(4-溴苯基)-3-甲基烯环丁烷-1-甲醛(4.5g,18mmol)溶于甲醇(30mL)中，冰浴下分批加入硼氢化钠(1.35g,36mmol)，搅拌1小时。往反应液中加入水(30mL)，搅拌10分钟后旋蒸除去甲醇，水相用乙酸乙酯(40mL×3)萃取。有机相合并，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到残留物用柱层析纯化，即得1-(4-溴苯基)-3-甲基烯环丁烷-1-甲醇(2.6g，产率57％)。
第六步：4-(溴苯基)-1-(碘甲基)-2-氧杂双环[2.2.1]己烷的制备
1-(4-溴苯基)-3-甲基烯环丁烷-1-甲醇(2.8g,10.8mmol)溶于水(10mL)和甲基叔丁基醚(20mL)中，依次加入碳酸氢钠(1.3g,16.6mol)和碘单质(3.9g,16.6mmol)，室温搅拌过夜。反应液中加入饱和硫代硫酸钠水溶液(10mL)，反应液用二氯甲烷(30mL×3)萃取。有机相合并后依次用饱和食盐水(50mL)洗涤和无水硫酸钠干燥，浓缩后残留物用柱层析纯化，得4-(溴苯基)-1-(碘甲基)-2-氧杂双环[2.2.1]己烷(3.6g，产率86％)。
第七步：4-(溴苯基)-1-甲基-2-氧杂双环[2.2.1]己烷的制备
4-(溴苯基)-1-(碘甲基)-2-氧杂双环[2.2.1]己烷(3.4g,8.97mmol)溶于四氢呋喃(30mL)中，冰浴下缓慢滴加三乙基硼氢化锂(1mol/L四氢呋喃溶液,18mL)，缓慢升至室温搅拌3小时。反应液置于冰浴下依次缓慢滴加水(10mL)和2mol/L氢氧化钠水溶液(10mL)，乙酸乙酯(30mL×3)萃取。有机相合并，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析纯化得到4-(溴苯基)-1-甲基-2-氧杂双环[2.2.1]己烷(1.9g,84％收率)。
LC-MS,M/Z(ESI):252.9[M+H]+。
第八步：1-(4-(1-甲基-2-氧杂双环[2.2.1]己烷-4-基)苯基)乙烷-1-酮的制备
4-(溴苯基)-1-甲基-2-氧杂双环[2.2.1]己烷(1g,4mmol)，三丁基(1-乙氧基乙烯)锡(1.9g,5.14mmol)和双三苯基磷二氯化钯(0.14g,0.2mmol)于二氧六环(10mL)中，氮气保护下100℃搅拌12小时。反应液冷至室温，加入KF水溶液(20mL)，搅拌2小时，乙酸乙酯(30mL×3)萃取。有机相合并，加入1N盐酸水溶液(20mL)，搅拌1小时，分液，取有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，得到粗品1-(4-(1-甲基-2-氧杂双环[2.2.1]己烷-4-基)苯基)乙烷-1-酮(1.2g，产率100％)，直接用于下一步反应。
第九步：1-(4-(1-甲基-2-氧杂双环[2.2.1]己烷-4-基)苯基)乙烷-1-醇的制备
粗品1-(4-(1-甲基-2-氧杂双环[2.2.1]己烷-4-基)苯基)乙烷-1-酮(1.2g,4.62mmol)溶于甲醇(10mL)中，冰浴下分批加入硼氢化钠(264mg,4.62mmol)，搅拌1小时。反应液中加水(10mL)，搅拌10分钟，旋蒸出去甲醇，水相用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。有机相合并，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到残留物用柱层析纯化，即得1-(4-(1-甲基-2-氧杂双环[2.2.1]己烷-4-基)苯基)乙烷-1-醇(0.67g，产率66％)。
第十步：1-(4-(1-甲基-2-氧杂双环[2.2.1]己烷-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
1-(4-(1-甲基-2-氧杂双环[2.2.1]己烷-4-基)苯基)乙烷-1-醇(336mg,1.54mmol)、甲基4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸酯(300mg,1.4mmol)和三苯基膦(478mg,1.82mmol)溶于四氢呋喃(5mL)中，冰浴下缓慢滴加偶氮二异丙酯(368mg，1.82mmol)，随后升至室温搅拌16小时。反应液浓缩，柱层析纯化得1-(4-(1-甲基-2-氧杂双环[2.2.1]己烷-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(500mg，产率86％)。
LC-MS,M/Z(ESI):415.3[M+H]+。
第十一步：1-(4-(1-甲基-2-氧杂双环[2.2.1]己烷-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸锂盐的制备
甲基1-(4-(1-甲基-2-氧杂双环[2.2.1]己烷-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(500mg，1.21mmol)溶于四氢呋喃/甲醇/水(5mL/1mL/1mL)中，加入一水合氢氧化锂(150mg，3.62mmol)，室温搅拌过夜，反应完浓缩得到1-(4-(1-甲基-2-氧杂双环[2.2.1]己烷-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸锂盐(610mg，含LiOH，收率100％)。
第十二步：(Sa)-6-(1-(1-(4-(1-1-2-氧杂双环[2.2.1]己烷-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3,3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
1-(4-(1-甲基-2-氧杂双环[2.2.1]己烷-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸锂盐(500mg，1.25mmol)和HATU(760mg，2.00mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺中，冰浴下加入二异丙基乙胺(516mg，4.00mmol)，搅拌15分钟后加入(Sa)-6-氨基螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯盐酸盐(411mg，2.00mmol)，室温搅拌过夜。反应液中加入水，乙酸乙酯萃取，有机相依次用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析纯化，得(Sa)-6-(1-(1-(4-(1-1-2-氧杂双环[2.2.1]己烷-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3,3]庚烷-2-甲酸甲酯(400mg，产率59％)。
LC-MS,M/Z(ESI):552.30[M+H]+。
第十三步：(Sa)-6-(1-(1-(4-(1-1-2-氧杂双环[2.2.1]己烷-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3,3]庚烷-2-甲酸(I-22)
Figure BDA0003684244210000641
室温下将化合物(Sa)-6-(1-(1-(4-(1-1-2-氧杂双环[2.2.1]己烷-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3,3]庚烷-2-甲酸甲酯(50mg,0.09mmol)加入到四氢呋喃(3mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(12mg,0.50mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物(Sa)-6-(1-(1-(4-(1-1-2-氧杂双环[2.2.1]己烷-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3,3]庚烷-2-甲酸(I-22)(35mg，产率72％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)12.02(s,1H),δ8.81(m,1H),8.24(s,1H),7.28(m,1H),7.19-7.10(m,3H),7.00-6.97(m,2H),6.27(m,1H),4.34(m,1H),3.70(s,2H),2.95(m,1H),2.50(m,1H),2.17-1.87(m,9H),1.86-1.73(m,8H),1.37(s,3H).
LC-MS,M/Z(ESI):538.20[M+H]+。
实施例23化合物I-23的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000642
第一步：(R)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-(4-(吡咯烷-1-基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
向(R)-1-(1-(4-溴苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(400mg,1.007mmol)和吡咯烷(358mg,5.03mmol)的1，4-二氧六环(5mL)溶液中加入(1,1’-联苯)-2-基二-叔丁基膦(45.1mg,0.151mmol)、碳酸铯(1968mg,6.04mmol)和醋酸钯(22.61mg，0.101mmol)。反应液置换三次氮气，然后在80℃下搅拌16小时。将反应液倒入水(30mL)中并乙酸乙酯(20mL*3)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(10mL*2)洗涤，并用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。粗产物通过柱层析(石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝1:0-1:3)纯化粗产物以得到(R)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-(4-(吡咯烷-1-基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(280mg,产率71.8％)。
LC-MS,M/Z(ESI):388.2[M+H]+。
第二步：(R)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-(4-(吡咯烷-1-基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
向(R)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-(4-(吡咯烷-1-基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(280mg,0.723mmol)的四氢呋喃(6mL)、甲醇(2mL)和水(2mL)溶液中加入氢氧化锂(87mg,3.61mmol)，然后在25℃搅拌3小时。向反应液中加入水(50mL)并用1N盐酸水溶液调节pH至5～6，然后用乙酸乙酯(20mL*3)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(10mL*2)洗涤，并用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到产物(R)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-(4-(吡咯烷-1-基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酸(250mg，产率93％)。
LC-MS,M/Z(ESI):374.5[M+H]+。
第三步：(Sa,R)-6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-(4-(吡咯烷-1-基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
向(R)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-(4-(吡咯烷-1-基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酸(250mg,0.669mmol)的DMF(2mL)溶液中加入HATU(764mg,2.008mmol)和二异丙基乙胺(260mg,2.008mmol)，并在25℃下搅拌0.5h。然后向反应液中加入(Sa)-6-氨基螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(283mg，1.674mmol)，在25℃下继续搅拌2.5小时。反应液浓缩得到粗产物。粗产物通过柱层析(石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝1/0-1/3)纯化得到产物(Sa,R)-6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-(4-(吡咯烷-1-基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(200mg，产率56.9％)。
LC-MS,M/Z(ESI):525.3[M+H]+。
第四步：(Sa,R)-6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-(4-(吡咯烷-1-基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-23)
Figure BDA0003684244210000651
向(Sa,R)-6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-(4-(吡咯烷-1-基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(200mg，0.381mmol)的四氢呋喃(6mL)、甲醇(2mL)和水(2mL)的溶液中加入氢氧化锂(45.6mg，1.906mmol)，然后在25℃搅拌3小时。向反应液中加入水(50mL)并用1N盐酸水溶液调节pH至5～6，然后用乙酸乙酯(20mL*3)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(10mL*2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到产物(Sa,R)-6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-(4-(吡咯烷-1-基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-23)(118.1mg，产率58.4％)。
1H NMR(400MHz,dmso)δ12.02(s,1H),8.84(d,1H),8.19(s,1H),7.28(d,1H),7.15(d,1H),6.89(d,1H),6.34(d,1H),6.12(q,1H),4.37(dd,1H),3.21-2.99(m,2H),3.01-2.84(m,1H),2.49-2.40(m,1H),2.37-2.21(m,2H),2.19-2.03(m,3H),1.96(dd,1H),1.92-1.85(m,2H),1.83(d,1H)..
LC-MS,M/Z(ESI):511.60[M+H]+。
实施例24化合物I-24的制备
Figure BDA0003684244210000661
化合物6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-(5-(三氟甲氧基)吡啶-2-基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3,3]庚烷-2-甲酸(I-24)的制备参考化合物I-25制备得到，LC-MS,M/Z(ESI):527.50[M+H]+。
实施例25化合物I-25的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000662
第一步：N-甲氧基-N-甲基-6-(三氟甲氧基)吡啶酰胺的制备
将6-(三氟甲氧基)烟酸(1.5g，7.24mmol)，1-羟基苯并三氮唑(1.96g，14.5mmol)，1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亚胺(2.78g，14.5mmol)溶解在干燥的二氯甲烷中，置换氮气，在0℃下滴加二异丙基乙胺(5.0mL，29.0mmol)，搅拌10min后，将N,O-二甲基羟胺盐酸盐固体(1.41g，14.5mmol)一次性加入到反应液中，搅拌过夜。用二氯甲烷和冰水，食盐水稀释，萃取，干燥有机层，旋干得到粗品。过柱(PE/EA＝5/1)得到N-甲氧基-N-甲基-6-(三氟甲氧基)吡啶酰胺(1.2g,收率66％)。
第二步：1-(6-(三氟甲氧基)吡啶-3-基)乙烷-1-酮的制备
将氮-甲氧基-氮-甲基-6-(三氟甲氧基)吡啶酰胺(1.2g,4.8mmol)溶解在四氢呋喃(30mL)中，然后置换氮气，降温到0℃，甲基酮(2.08mL，6.24mmol)慢慢滴加进去，过程持续10分钟。然后在0℃下继续搅拌3h。饱和氯化铵溶液淬灭反应，乙酸乙酯(30mL*2)萃取，有机相合并，干燥，旋干过柱(PE/EA＝10/1)得到1-(6-(三氟甲氧基)吡啶-3-基)乙烷-1-酮(800mg，收率81％)。
第三步：1-(6-(三氟甲氧基)吡啶-3-基)乙烷-1-醇的制备
1-(6-(三氟甲氧基)吡啶-3-基)乙烷-1-酮(800mg，3.90mmol)溶解在甲醇(20mL)和四氢呋喃(4mL)中，在0℃下分批加入硼氢化钠(295mg，7.8mmol)，0℃下搅拌0.5h，用水淬灭，然后反应液旋干得到粗品，拌样过柱(PE/EA＝1/1)得到1-(6-(三氟甲氧基)吡啶-3-基)乙烷-1-醇(800mg，收率99％)。
第四步：4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-(6-(三氟甲氧基)吡啶-3-基)乙烷)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
1-(6-(三氟甲氧基)吡啶-3-基)乙烷-1-醇(800mg，3.86mmol)、甲基4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸酯(500mg，2.33mmol)和三苯基膦(1.84g，7mmol)溶于四氢呋喃(8mL)中，冰浴下缓慢滴加偶氮二异丙酯(1.42g，7mmol)，随后升至室温搅拌16小时。反应液浓缩，柱层析纯化得4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-(6-(三氟甲氧基)吡啶-3-基)乙烷)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(600mg，产率64％)。
第五步：4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-(6-(三氟甲氧基)吡啶-3-基)乙烷)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
室温下将化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-(6-(三氟甲氧基)吡啶-3-基)乙烷)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(600mg,1.50mmol)加入到四氢呋喃(5mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(83mg,3.48mmol)，搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用1mol/L的盐酸调节pH为4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-(6-(三氟甲氧基)吡啶-3-基)乙烷)-1H-吲唑-7-甲酸(500mg,产率86％)。
第六步：(S)-6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-(6-(三氟甲氧基)吡啶-3-基)乙基)1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3,3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-(6-(三氟甲氧基)吡啶-3-基)乙烷)-1H-吲唑-7-甲酸(100mg,0.26mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入(S)-6-氨基螺环[3.3]庚-2-甲酸甲酯盐酸盐(87mg,0.51mmol)，二异丙基乙胺(133mg,1.03mmol)和HATU(244mg,0.64mmol)，室温搅拌16h。加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL0用乙萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得化合物(S)-6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-(6-(三氟甲氧基)吡啶-3-基)乙基)1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3,3]庚烷-2-甲酸甲酯(100mg,产率72％)。
第七步：(S)-6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-(6-(三氟甲氧基)吡啶-3-基)乙基)1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3,3]庚烷-2-甲酸(I-25)的制备
Figure BDA0003684244210000681
室温下将化合物(S)-6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-(6-(三氟甲氧基)吡啶-3-基)乙基)1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3,3]庚烷-2-甲酸甲酯(100mg,0.19mmol)加入到四氢呋喃(3mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(12mg,0.50mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物(S)-6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-(6-(三氟甲氧基)吡啶-3-基)乙基)1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3,3]庚烷-2-甲酸(I-25)(90mg,产率92％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.00(s,1H),8.83(m,1H),8.27(s,1H),7.99(m,1H),7.51(m,1H),7.33(m,1H),7.21-7.16(m,2H),6.34(m,1H),4.31(m,1H),2.94(m,1H),2.28-1.88(m,12H),1.22(m,1H),0.85(m,1H).
LC-MS,M/Z(ESI):527.50[M+H]+。
实施例26化合物I-26的制备
Figure BDA0003684244210000682
化合物6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-(5-(三氟甲氧基)吡嗪-2-基)乙基)1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3,3]庚烷-2-甲酸(I-26)的制备参考化合物I-19的合成方法。LC-MS,M/Z(ESI):528.2[M+H]+。
实施例27化合物I-27的制备
Figure BDA0003684244210000683
化合物6-(4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-(2-(三氟甲氧基)嘧啶-5-基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3,3]庚烷-2-甲酸(I-26)的制备参考化合物I-19的合成方法。LC-MS,M/Z(ESI):528.2[M+H]+。
实施例28化合物I-28的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000691
第一步：1-(1-(5-溴吡啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
1-(5溴吡啶-2-基)乙醇(943mg，4.67mmol)、4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(500mg，2.33mmol)和三苯基膦(1.84g，7mmol)溶于四氢呋喃(8mL)中，冰浴下缓慢滴加偶氮二异丙酯(1.42g，7mmol)，随后升至室温搅拌16小时。反应液浓缩，柱层析纯化得1-(1-(5-溴吡啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(400mg，产率43％)。
第二步：1-(1-(5-环丙基吡啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
室温下将1-(1-(5-溴吡啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(400mg，1.00mmol)，四三苯基磷钯(116mg，0.1mmol)，环丙基硼酸(431mg，5.02mmol)，氟化钾(321mg，5.52mmol)加入到20mL甲苯和4mL水中，置换氮气，100℃下反应过夜。反应液浓缩，柱层析纯化得到1-(1-(5-环丙基吡啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(250mg，产率69％)。
第三步：1-(1-(5-环丙基吡啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
室温下将化合物1-(1-(5-环丙基吡啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(250mg,0.70mmol)加入到四氢呋喃(5mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(83mg,3.48mmol)，搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用1mol/L的盐酸调节pH为4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得到1-(1-(5-环丙基吡啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(240mg,产率100％)。
第四步：(Sa)-6-(1-(1-(5-环丙基吡啶-2-基)乙基)-4-(丙基-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物1-(1-(5-环丙基吡啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(50mg,0.15mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，加入(Sa)-6-氨基螺环[3.3]庚-2-甲酸甲酯盐酸盐(37mg,0.22mmol)，二异丙基乙胺(75mg,0.58mmol)和HATU(110mg,0.29mmol)，室温搅拌16h。加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得化合物(Sa)-6-(1-(1-(5-环丙基吡啶-2-基)乙基)-4-(丙基-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(50mg,产率70％)。
第五步：(Sa)-6-(1-(1-(5-环丙基吡啶-2-基)乙基)-4-(丙基-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-28)
Figure BDA0003684244210000701
室温下将化合物(Sa)-6-(1-(1-(5-环丙基吡啶-2-基)乙基)-4-(丙基-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(50mg,0.10mmol)加入到四氢呋喃(3mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(12mg,0.50mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物(Sa)-6-(1-(1-(5-环丙基吡啶-2-基)乙基)-4-(丙基-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-28)(45mg,产率93％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ8.71(m,1H),8.32(m,1H),8.23(s,1H),7.35(m,1H),7.30(m,1H),7.20(m,1H),6.61(m,1H),6.29(m,1H),4.18(m,1H),2.95(m,1H),2.15-1.87(m,14H),0.97(m,1H),0.96-0.94(m,2H),0.68-0.66(m,2H).
LC-MS,M/Z(ESI):483.54[M+H]+。
实施例29化合物I-29a的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000711
第一步：1-(5-氯吡嗪-2-基)-乙烷-1-醇的制备
0℃下把1-(5-氯吡嗪-2-基)乙烷-1-酮(3g，19.2mmol)溶解到乙醇(30mL)中，然后慢慢分批加入硼氢化钠(1.45g,38.3mmol)，恢复室温搅拌1h。滴加冰水淬灭反应，反应液旋干得到粗品，柱层析(PE/EA＝2/1)得到1-(5-氯吡嗪-2-基)-乙烷-1-醇(2.2g,产率72％)。
第二步：1-(5-环丙基吡嗪-2-基)-乙烷-1-醇的制备
室温下将1-(2-氯吡嗪-5-基)-乙烷-1-醇(1.2g，7.57mmol)加入到1,4-二氧六环(30mL)和水(6mL)中，加入环丙基硼酸(3.25g,37.8mmol)，碳酸钠(2.41g，22.7mmol)，1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(1.11g,1.51mmol)，氮气保护下加热至100℃，搅拌14h。反应液浓缩，柱层析纯化得到1-(5-环丙基吡嗪-2-基)-乙烷-1-醇(1.3g，产率84％)。
第三步：1-(1-(5-环丙基吡嗪-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
1-(5-环丙基吡嗪-2-基)-乙烷-1-醇(613mg，3.73mmol)、甲基4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸酯(400mg，1.87mmol)和三苯基膦(1.47g，5.60mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，冰浴下缓慢滴加偶氮二异丙酯(1.13g，5.60mmol)，随后升至室温搅拌16小时。反应液浓缩，柱层析纯化得1-(1-(5-环丙基吡嗪-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(400mg，产率30％)。
第四步：1-(1-(5-环丙基吡嗪-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
室温下将化合物1-(1-(5-环丙基吡嗪-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(200mg,0.56mmol)加入到四氢呋喃(5mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(66mg,2.80mmol)，搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用1mol/L的盐酸调节pH为4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得化合物1-(1-(5-环丙基吡嗪-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(190mg,产率99％)。
第五步：(Sa)-6-(1-(1-(5-环丙基吡嗪-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-基甲酸甲酯的制备
室温下将化合物1-(1-(5-环丙基吡嗪-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(190mg,0.55mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入(Sa)-6-氨基螺环[3.3]庚-2-基-甲酸甲酯盐酸盐(280mg,1.65mmol)，二异丙基乙胺(354mg,2.74mmol)和HATU(417mg,1.10mmol)，室温搅拌16h。加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得化合物(Sa)-6-(1-(1-(5-环丙基吡嗪-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-基甲酸甲酯(150mg,产率55％)。
第六步：(Sa,R)-6-(1-(1-(5-环丙基吡嗪-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-基甲酸甲酯的制备
将化合物(Sa)-6-(1-(1-(5-环丙基吡嗪-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2(S)-基甲酸甲酯(150mg,0.30mmol)进行手性拆分方法(IC-3-IPA(DEA)-40-3ML-35T，r.t.＝0.949min)制备得化合物(Sa,R)-6-(1-(1-(5-环丙基吡嗪-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-基甲酸甲酯(50mg,产率33％)。
第七步：(Sa,R)-6-(1-(1-(5-环丙基吡嗪-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-基甲酸(I-29a)
Figure BDA0003684244210000721
室温下将化合物(Sa,R)-6-(1-(1-(5-环丙基吡嗪-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-基甲酸甲酯(50mg,0.10mmol)加入到四氢呋喃(3mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(12mg,0.50mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物(Sa,R)-6-(1-(1-(5-环丙基吡嗪-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-基甲酸(I-29a)(45mg，产率93％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ8.75(d,1H),8.43(s,1H),8.24(s,1H),7.88(s,1H),7.32(m,1H),7.22(m,1H),6.33(m,1H),4.20(m,1H),2.95(m,1H),2.19(m,1H),2.17-1.90(m,13H),1.75(m,1H),1.01-0.96(m,2H),0.88-0.84(m,2H).
LC-MS,M/Z(ESI):484.30[M+H]+。
化合物I-29b的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000731
第一步：(Sa,S)-6-(1-(1-(5-环丙基吡嗪-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
将化合物(Sa)-6-(1-(1-(5-环丙基吡嗪-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(150mg,0.30mmol)进行手性拆分方法(IC-3-IPA(DEA)-40-3ML-35T，r.t.＝1.676min)制备得化合物(Sa,S)-6-(1-(1-(5-环丙基吡嗪-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(50mg，产率33％)。
第二步：(Sa,S)-6-(1-(1-(5-环丙基吡嗪-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-29b)的制备
Figure BDA0003684244210000732
室温下将化合物(Sa,S)-6-(1-(1-(5-环丙基吡嗪-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(50mg,0.10mmol)加入到四氢呋喃(3mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(12mg,0.50mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物(Sa,S)-6-(1-(1-(5-环丙基吡嗪-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-29b)(45mg,产率93％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.03(s,1H),8.76(d,1H),8.45(s,1H),8.24(s,1H),7.88(s,1H),7.33(m,1H),7.23(m,1H),6.33(m,1H),4.20(m,1H),2.95(m,1H),2.51-1.90(m,15H),1.01-0.97(m,2H),0.88-0.86(m,2H).
LC-MS,M/Z(ESI):484.30[M+H]+。
实施例30化合物I-30a、I-30b的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000741
第一步：1-(1-(6-溴吡啶-3-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
将4-丙炔基-1H-7-吲唑甲酯(500mg，2.334mmol)，1-(6-溴吡啶-3-基)乙醇(943mg，4.67mmol)和三苯基膦(1837mg，7.00mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，在0℃下缓慢滴入偶氮二甲酸二异丙酯(1416mg，7.00mmol)，然后在25℃下反应16h。将反应液浓缩得到粗品。粗品经过柱层析(石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝10:1-1:1)得到产物1-(1-(6-溴吡啶-3-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(450mg，产率48.4％)。
LC-MS,M/Z(ESI):399.3[M+H]+。
第二步：1-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
将1-(1-(6-溴吡啶-3-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(450mg，1.130mmol)、环丙基硼酸(485mg，5.65mmol)、碳酸钾(625mg，4.52mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(83mg，0.113mmol)溶于1,4-二氧六环(6mL)和水(2mL)中，然后在氮气保护下升至100℃反应16h。将反应液倒入水(50mL)中，用乙酸乙酯(20mL*3)萃取。有机相合并，用饱和食盐水(20mL*2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到棕色粗品。粗品经过柱层析(乙酸乙酯：石油醚(V/V)＝10:1-1:1)得到产物1-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(180mg，产率44.3％)。
LC-MS,M/Z(ESI):360.4[M+H]+。
第三步：1-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
将1-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(160mg，0.445mmol)溶于四氢呋喃(3mL)、甲醇(1mL)和水(1mL)中，然后加入氢氧化锂(53.3mg，2.226mmol)，室温反应16h。向反应液中加入水(50mL),用1N的盐酸水溶液将pH调至5～6，并用乙酸乙酯(20mL*3)萃取。有机相合并后用饱和食盐水(10mL*2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到产物1-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(150mg，产率98％)。
LC-MS,M/Z(ESI):346.3[M+H]+。
第四步：6-(1-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
将1-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(150mg，0.434mmol)、6-氨基螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(184mg，1.086mmol)、二异丙基乙胺(168mg，1.303mmol)和HATU(495mg，1.303mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，然后室温搅拌3h。将反应液加入水(50mL)中，用乙酸乙酯(10mL*3)萃取。有机相合并后用饱和食盐水(10mL*3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品经过薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得到6-(1-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(120mg，产率55.6％)。
LC-MS,M/Z(ESI):497.4[M+H]+。
第五步：(R)-6-(1-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯和(S)-6-(1-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
将6-(1-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(120mg，0.242mmol)经过拆分得到(Sa,R)-6-(1-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(50mg，0.101mmol)和(Sa,S)-6-(1-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(50mg，0.101mmol)。
拆分方法:使用Column:Chiralpak AD-3型号手性拆分柱(规格为：50×4.6mm,3um)进行手性拆分，流动相A为超临界流体CO2,流动相B为异丙醇(含0.05％二乙醇胺)；梯度条件:流动相B为40％，流动速率为3mL/min；柱温保持在35℃，柱压保持在100bar。其中，(R)-6-(1-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯保留时间为0.754min。(S)-6-(1-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯保留时间为1.448min。
第六步：(Sa,R)-6-(1-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-30a)的制备
Figure BDA0003684244210000761
将(Sa,R)-6-(1-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(50mg，0.101mmol)溶于四氢呋喃(3mL)、甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(12.06mg，0.503mmol)，反应液在25℃搅拌16h。向反应液中加入水(50mL),然后用1N盐酸水溶液调pH至5～6，乙酸乙酯(20mL*3)萃取。有机相合并，用饱和食盐水(20mL*2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到产物(Sa,R)-6-(1-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-30a)(46.5mg，产率96％)。
1H NMR(400MHz,dmso)δ11.98(s,1H),8.83(d,1H),8.25(s,1H),8.05(d,1H),7.31(d,1H),7.26–7.21(m,1H),7.20(d,1H),7.13(d,1H),6.23(q,1H),4.30(dq,1H),3.00–2.89(m,1H),2.47–2.40(m,1H),2.34–2.20(m,3H),2.18–2.12(m,3H),2.11–1.94(m,4H),1.90–1.79(m,4H),0.87(dt,2H),0.83–0.79(m,2H).
LC-MS,M/Z(ESI):483.3[M+H]+。
第七步：(Sa,S)-6-(1-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-30b)的制备
Figure BDA0003684244210000762
将(Sa,S)-6-(1-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(50mg，0.101mmol)溶于四氢呋喃(3mL)、甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(12.06mg，0.503mmol)，反应液在25℃搅拌16h。向反应液中加入水(50mL),然后用1N盐酸水溶液调pH至5～6，乙酸乙酯(20mL*3)萃取。有机相合并，用饱和食盐水(20mL*2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到产物(Sa,S)-6-(1-(1-(6-环丙基吡啶-3-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-30b)(47.3mg，产率97％)。
1H NMR(400MHz,dmso)δ11.99(s,1H),8.82(d,1H),8.23(s,1H),8.03(d,1H),7.28(d,1H),7.23(dd,1H),7.17(d,1H),7.12(d,1H),6.22(q,1H),4.27(dq,1H),2.98–2.87(m,1H),2.46–2.36(m,1H),2.25(dd,3H),2.18–2.11(m,3H),2.09–1.82(m,8H),0.86(dt,2H),0.80(dt,2H).
LC-MS,M/Z(ESI):483.3[M+H]+。
实施例31化合物I-31a的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000771
第一步：1-(2-环丙基嘧啶-5-基)-乙烷-1-醇的制备
室温下将1-(2-氯嘧啶-5-基)-乙烷-1-醇(2g，12.6mmol)，四三苯基磷钯(1.46g，1.26mmol)，环丙基硼酸(10.8g，126mmol)，氟化钾(7.3g，126mmol)加入到20mL甲苯和4mL水中，置换氮气，100℃下反应过夜。反应液浓缩，柱层析纯化得到1-(2-环丙基嘧啶-5-基)-乙烷-1-醇(800mg，产率39％)。
第二步：1-(1-(2-环丙基嘧啶-5-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
1-(2-环丙基嘧啶-5-基)-乙烷-1-醇(537mg，3.27mmol)、甲基4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸酯(280mg，1.31mmol)和三苯基膦(1.37g，5.23mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，冰浴下缓慢滴加偶氮二异丙酯(1.06g，5.23mmol)，随后升至室温搅拌16小时。反应液浓缩，柱层析纯化得1-(1-(2-环丙基嘧啶-5-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(200mg，产率43％)。
第三步：1-(1-(2-环丙基嘧啶-5-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
室温下将化合物1-(1-(2-环丙基嘧啶-5-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(200mg,0.56mmol)加入到四氢呋喃(5mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(66mg,2.80mmol)，搅拌16h。加入水(20mL)稀释，用1mol/L的盐酸调节pH为4，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得化合物1-(1-(2-环丙基嘧啶-5-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(190mg,产率99％)。
第四步：(Sa)-6-(1-(1-(2-环丙基嘧啶-5-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
室温下将化合物1-(1-(2-环丙基嘧啶-5-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(190mg,0.55mmol)加入到N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入(Sa)-6-氨基螺环[3.3]庚-2-基-甲酸甲酯盐酸盐(280mg,1.65mmol)，二异丙基乙胺(354mg,2.74mmol)和HATU(417mg,1.10mmol)，室温搅拌16h。加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得化合物(Sa)-6-(1-(1-(2-环丙基嘧啶-5-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(150mg,产率55％)。
第五步：(Sa,R)-6-(1-(1-(2-环丙基嘧啶-5-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
将化合物(Sa)-6-(1-(1-(2-环丙基嘧啶-5-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(150mg,0.30mmol)进行手性拆分方法(IC-3-IPA(DEA)-5-40-3ML-35T，r.t.＝1.969min)制备得化合物(Sa,R)-6-(1-(1-(2-环丙基嘧啶-5-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(50mg,产率33％)。
第六步：(Sa,R)-6-(1-(1-(2-环丙基嘧啶-5-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-31a)
Figure BDA0003684244210000781
室温下将化合物(Sa,R)-6-(1-(1-(2-环丙基嘧啶-5-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(50mg,0.10mmol)加入到四氢呋喃(3mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(12mg,0.50mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物(Sa,R)-6-(1-(1-(2-环丙基嘧啶-5-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-31a)(45mg,产率93％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.01(s,1H),8.65(d,1H),8.26-8.24(m,3H),7.33(m,1H),7.21(m,1H),6.21(m,1H),4.29(m,1H),2.94(m,1H),2.49(m,1H),2.48-2.18(m,14H),0.97-0.95(m,2H),0.91-0.88(m,2H)。
LC-MS,M/Z(ESI):484.30[M+H]+。
化合物I-31b的制备
合成路线如下所示
Figure BDA0003684244210000782
第一步：(Sa)-6-(1-(1-(2-环丙基嘧啶-5-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
将化合物(Sa)-6-(1-(1-(2-环丙基嘧啶-5-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(150mg,0.30mmol)进行手性拆分方法(IC-3-IPA(DEA)-5-40-3ML-35T，r.t.＝2.552min)制备得化合物(Sa,S)-6-(1-(1-(2-环丙基嘧啶-5-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(50mg，产率33％)。
第二步：(Sa,S)-6-(1-(1-(2-环丙基嘧啶-5-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-31b)
Figure BDA0003684244210000791
室温下将化合物(Sa,S)-6-(1-(1-(2-环丙基嘧啶-5-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(50mg,0.10mmol)加入到四氢呋喃(3mL)，甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(12mg,0.50mmol)，室温搅拌16h。用1N盐酸调节pH＝4，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物经酸性制备方法A制备得化合物(Sa,S)-6-(1-(1-(2-环丙基嘧啶-5-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-31b)(45mg，产率93％)。
1H NMR(400mHz,DMSO-d6)δ12.03(s,1H),8.88(d,1H),8.28-8.27(m,3H),7.34(m,1H),7.23(m,1H),6.25(m,1H),4.31(m,1H),2.99(m,1H),2.28-1.88(m,15H),1.01-0.96(m,2H),0.93-0.90(m,2H)。
LC-MS,M/Z(ESI):484.30[M+H]+。
实施例32化合物I-32a、I-32b的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000792
Figure BDA0003684244210000801
第一步：1-(1-(5-溴嘧啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-7-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
将4-丙炔基-1H-7-吲唑甲酯(563mg，2.63mmol)，1-(5-溴嘧啶-2-基)乙醇(800mg，3.94mmol)和三苯基膦(2067mg，7.88mmol)溶于四氢呋喃(15mL)中，在0℃下缓慢滴入偶氮二甲酸二异丙酯(1593mg，7.88mmol)，然后在25℃下反应16h。将反应液浓缩得到粗品。粗品经过柱层析(石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝10:1-1:1)得到产物1-(1-(5-溴嘧啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-7-吲唑-7-甲酸甲酯(600mg，产率57.2％)。
LC-MS,M/Z(ESI):400.3[M+H]+。
第二步：1-(1-(5-环丙基嘧啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
将1-(1-(5-溴嘧啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-7-吲唑-7-甲酸甲酯(600mg，1.503mmol)、环丙基硼酸(645mg，7.51mmol)、氟化钾(262mg，4.51mmol)和四(三苯基膦)钯(174mg，0.150mmol)溶于甲苯(10mL)和水(2mL)中，然后在氮气保护下升至100℃反应16h。将反应液倒入水(50mL)中，用乙酸乙酯(20mL*3)萃取。有机相合并，用饱和食盐水(20mL*2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得到粗品。粗品经过柱层析(乙酸乙酯：石油醚(V/V)＝10:1-1:1)得到产物1-(1-(5-环丙基嘧啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(400mg，产率73.8％)。
LC-MS,M/Z(ESI):360.2[M+H]+。
第三步：1-(1-(5-环丙基嘧啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
将1-(1-(5-环丙基嘧啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(400mg，1.11mmol)溶于四氢呋喃(6mL)、甲醇(2mL)和水(2mL)中，然后加入氢氧化锂(133mg，5.55mmol)，室温反应16h。向反应液中加入水(50mL),用1N的盐酸水溶液将pH调至5～6并用乙酸乙酯(20mL*3)萃取。有机相合并后用饱和食盐水(10mL*2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到产物1-(1-(5-环丙基嘧啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(320mg，产率83％)。
LC-MS,M/Z(ESI):347.3[M+H]+。
第四步：(Sa)-6-(1-(1-(5-环丙基嘧啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
将1-(1-(5-环丙基嘧啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(320mg，0.924mmol)、6-氨基螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(391mg，2.310mmol)、二异丙基乙胺(358mg，2.77mmol)和HATU(1054mg，2.77mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，然后室温搅拌3h。将反应液加入水(50mL)中，用乙酸乙酯(10mL*3)萃取。有机相合并后用饱和食盐水(10mL*3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品经过薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得到(Sa)-6-(1-(1-(5-环丙基嘧啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(350mg，产率76％)。
LC-MS,M/Z(ESI):498.4[M+H]+。
第五步：(Sa,R)-6-(1-(1-(5-环丙基嘧啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯和(Sa,S)-6-(1-(1-(5-环丙基嘧啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
Figure BDA0003684244210000811
将6-(1-(1-(5-环丙基嘧啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(350mg，0.703mmol)经过SFC拆分得到(R)-6-(1-(1-(5-环丙基嘧啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(80mg，0.161mmol)和(S)-6-(1-(1-(5-环丙基嘧啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(80mg，0.161mmol)。SFC拆分方法：使用Kromasil(S,S)Whelk-O1型号手性拆分柱(规格为：50×4.6mm,3.5um)进行手性拆分，流动相A为超临界流体CO2,流动相B为乙醇(含0.05％二乙醇胺)；梯度条件:流动相B从5％to80％，流动速率为10mL/min；40％的梯度保持10min，50％的梯度保持10min，柱温保持在35℃，柱压保持在100bar。
(Sa,R)-6-(1-(1-(5-环丙基嘧啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的保留时间：1.045min。
(Sa,S)-6-(1-(1-(5-环丙基嘧啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的保留时间：1.796min。
第六步：(Sa,R)-6-(1-(1-(5-环丙基嘧啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-32a)
Figure BDA0003684244210000812
将(Sa,R)-6-(1-(1-(5-环丙基嘧啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(80mg，0.161mmol)溶于四氢呋喃(3mL)、甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(19.25mg，0.804mmol)，反应液在25℃搅拌16h。向反应液中加入水(50mL),然后用1N盐酸水溶液调pH至5～6，乙酸乙酯(20mL*3)萃取。有机相合并，用饱和食盐水(20mL*2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到产物(Sa,R)-6-(1-(1-(5-环丙基嘧啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-32a)(33.9mg，产率43％)。
1H NMR(400MHz,dmso)δ12.00(s,1H),8.85(d,1H),8.25(d,3H),7.32(d,1H),7.20(d,1H),6.20(dd,1H),4.26(dd,1H),2.94-2.90(m,1H),2.49-1.86(m,15H),1.03-0.90(m,2H),0.82-0.66(m,2H).
LC-MS,M/Z(ESI):484.5[M+H]+。
第七步：(Sa,S)-6-(1-(1-(5-环丙基嘧啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-32b)的制备
Figure BDA0003684244210000821
将(Sa,S)-6-(1-(1-(5-环丙基嘧啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(80mg，0.161mmol)溶于四氢呋喃(3mL)、甲醇(1mL)和水(1mL)中，加入氢氧化锂(19.25mg，0.804mmol)，反应液在25℃搅拌16h。向反应液中加入水(50mL),然后用1N盐酸水溶液调pH至5～6，乙酸乙酯(20mL*3)萃取。有机相合并，用饱和食盐水(20mL*2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到产物(Sa,S)-6-(1-(1-(5-环丙基嘧啶-2-基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-32b)(35.9mg，产率45.6％)。
1H NMR(400MHz,dmso)δ12.00(s,1H),8.84(d,1H),8.25(d,3H),7.33(d,1H),7.20(d,1H),6.22(dd,1H),4.27(dd,1H),2.93-2.90(m,1H),2.51-1.86(m,15H),1.02-0.90(m,2H),0.82-0.65(m,2H).
LC-MS,M/Z(ESI):484.5[M+H]+。
实施例33化合物I-33的制备
Figure BDA0003684244210000822
参考化合物I-19的合成方法。LC-MS,M/Z(ESI):528.2[M+H]+。
实施例34化合物I-34a的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000831
第一步：1-(4-(二氟甲基)苯基)乙烷-1-酮的制备
1-溴-4-(二氟甲基)苯(1g,4.83mmol)，三丁基(1-乙氧基乙烯)锡(2.27g,6.28mmol)和双(三苯基磷)二氯化钯(0.17g,0.242mmol)于二氧六环(20mL)中，氮气保护下100℃搅拌12小时。反应液冷至室温，加入KF水溶液(20mL)，搅拌2小时，乙酸乙酯(30mL×3)萃取。有机相合并，加入1N盐酸水溶液(20mL)，搅拌1小时，分液，取有机相用无水硫酸钠干燥后浓缩，得到粗品1-(4-(二氟甲基)苯基)乙烷-1-酮(1g，产率122％)，直接用于下一步反应。
第二步：1-(4-(二氟甲基)苯基)乙烷-1-醇的制备
粗品1-(4-(二氟甲基)苯基)乙烷-1-酮(1g,5.88mmol)溶于甲醇(10mL)中，冰浴下分批加入硼氢化钠(445mg,11.75mmol)，搅拌1小时。反应液中加水(10mL)，搅拌10分钟，旋蒸出去甲醇，水相用乙酸乙酯(20mL×3)萃取。有机相合并，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到残留物用柱层析纯化，即得1-(4-(二氟甲基)苯基)乙烷-1-醇(0.65g，产率64％)。
第三步：1-(1-(4-(二氟甲基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
1-(4-(二氟甲基)苯基)乙烷-1-醇(600mg,3.48mmol)、4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(439mg,2.05mmol)和三苯基膦(1.6g,6.15mmol)溶于四氢呋喃(5mL)中，冰浴下缓慢滴加偶氮二甲酸二异丙酯(1.2g,6.15mmol)，随后升至室温搅拌16小时。反应液浓缩，柱层析纯化得1-(1-(4-(二氟甲基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(450mg，产率60％)。
LC-MS,M/Z(ESI):368.2[M+H]+。
第四步：1-(1-(4-(二氟甲基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
1-(1-(4-(二氟甲基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(450mg,1.22mmol)溶于四氢呋喃/甲醇/水(5mL/1mL/1mL)中，加入一水合氢氧化锂(154mg,3.66mmol)，室温搅拌16小时。反应液浓缩，加入水(5mL)，再加稀盐酸(1mol/L水溶液)调节溶液pH值约2，有大量白色固体产生，过滤收集白色固体，干燥后得到1-(1-(4-(二氟甲基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(433mg，收率100％)。
第五步：(Sa)-6-(1-(1-(4-(二氟甲基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
1-(1-(4-(二氟甲基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(420mg,1.185mmol)和HATU(901mg,2.37mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，冰浴下加入N,N-二异丙基乙胺(766mg,5.93mmol)，搅拌15分钟后加入6-氨基螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯盐酸盐(731mg,3.56mmol)，室温搅拌16小时。反应液中加入水(30mL)，乙酸乙酯(30mL×3)萃取，有机相依次用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析纯化，得(Sa)-6-(1-(1-(4-(二氟甲基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(480mg，产率80％)。
LC-MS,M/Z(ESI):506.2[M+H]+。
第六步：(Sa,R)-6-(1-(1-(4-(二氟甲基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
(Sa)-6-(1-(1-(4-(二氟甲基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(130F)(180mg,0.356mmol)用SFC拆分，得到(Sa,R)-6-(1-(1-(4-(二氟甲基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(80mg,产率44％)。SFC拆分方法：使用Chiralpak AD-3型号手性拆分柱(规格为：50×4.6mm,3um)进行手性拆分，流动相A为超临界流体CO2,流动相B为异丙醇(含0.05％二乙醇胺)；梯度条件:流动相B为40％的梯度保持10min，柱温保持在35℃，柱压保持在100bar，出峰时间：0.581min。
第七步：(Sa,R)-6-(1-(1-(4-(二氟甲基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-34a)
Figure BDA0003684244210000841
(Sa,R)-6-(1-(1-(4-(二氟甲基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(80mg,0.158mmol)溶于四氢呋喃/甲醇/水(4mL/0.8mL/0.8mL)中，加入一水合氢氧化锂(33mg,0.79mmol)，室温搅拌3小时。反应液浓缩，加入水(3mL)，再加稀盐酸(1mol/L水溶液)调节溶液pH值约2，有大量白色固体产生，过滤收集白色固体，干燥后得到(Sa,R)-6-(1-(1-(4-(二氟甲基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-34a)(73.3mg，收率94％)。
LC-MS,M/Z(ESI):492.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.25(s,1H),7.31(d,2H),7.24(d,1H),7.12(d,1H),7.04(d,2H),6.71–6.34(m,2H),5.75(d,1H),4.48–4.34(m,1H),3.15–3.02(m,1H),2.66–2.57(m,1H),2.47–2.36(m,3H),2.30(dd,1H),2.24–2.13(m,4H),2.01(d,3H),1.95–1.89(m,1H),1.65(dd,1H).
化合物I-34b的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000851
第一步：(Sa,S)-6-(1-(1-(4-(二氟甲基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
(Sa)-6-(1-(1-(4-(二氟甲基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(180mg,0.356mmol)用SFC拆分，得到(Sa,S)-6-(1-(1-(4-(二氟甲基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(80mg,产率44％)。SFC拆分方法：使用Chiralpak AD-3型号手性拆分柱(规格为：50×4.6mm,3um)进行手性拆分，流动相A为超临界流体CO2,流动相B为异丙醇(含0.05％二乙醇胺)；梯度条件:流动相B为40％的梯度保持10min，柱温保持在35℃，柱压保持在100bar，出峰时间：2.245min。
LC-MS,M/Z(ESI):506.3[M+H]+。
第七步：(Sa,S)-6-(1-(1-(4-(二氟甲基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-34b)
(Sa,S)-6-(1-(1-(4-(二氟甲基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(80mg,0.158mmol)溶于四氢呋喃/甲醇/水(4mL/0.8mL/0.8mL)中，加入一水合氢氧化锂(33mg,0.791mmol)，室温搅拌3小时。反应液浓缩，加入水(3mL)，再加稀盐酸(1mol/L水溶液)调节溶液pH值约2，干燥后得到(Sa,S)-6-(1-(1-(4-(二氟甲基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺环[3.3]庚烷-2-甲酸(I-34b)(62.5mg，收率80％)。
LC-MS,M/Z(ESI):492.5[M+H]+。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.25(s,1H),7.32(d,2H),7.24(d,1H),7.12(d,1H),7.04(d,J＝8.0Hz,2H),6.73–6.35(m,2H),5.75(d,1H),4.47–4.33(m,1H),3.09(p,1H),2.55–2.45(m,2H),2.41(d,2H),2.30(dd,1H),2.21–2.11(m,4H),2.01(d,3H),1.91–1.83(m,1H),1.73–1.64(dd,1H).
实施例35化合物I-35a的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000861
第一步：1-((1R)-1-(4-(3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
(R)-1-(1-(4-溴苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(220mg，0.554mmol),3-氮杂双环[3.1.0]己烷盐酸盐(265mg,2.22mmol)，醋酸钯(12.5mg,0.055mmol)，碳酸铯(1.1g,3.32mmol)，2-(二叔丁基膦)联苯(19.8mg,0.066mmol)于二氧六环(3mL)中，氮气保护下80℃搅拌16小时。反应液浓缩，残留物用柱层析纯化，得1-((1R)-1-(4-(3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(175mg，产率79％)。
LC-MS,M/Z(ESI):400.4[M+H]+。
第二步：1-((1R)-1-(4-(3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸锂盐的制备
1-((1R)-1-(4-(3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(170mg,0.426mmol)溶于四氢呋喃/甲醇/水(3mL/0.6mL/0.6mL)中，加入一水合氢氧化锂(54mg,1.28mmol)，室温搅拌4小时。反应液浓缩干燥得到1-((1R)-1-(4-(3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸锂盐(220mg，含LiOH，收率134％)。
LC-MS,M/Z(ESI):400.4[M+H]+。
第三步：(Sa)-6-(1-((1R)-1-(4-(3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
(Sa)-1-((1R)-1-(4-(3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸锂盐(200mg,0.52mmol)和HATU(395mg,1.04mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，冰浴下加入二异丙基乙胺(268mg,2.08mmol)，搅拌15分钟后加入甲基6-氨基螺[3.3]庚烷-2-甲酸酯盐酸盐(213mg,1.04mmol)，室温搅拌12小时。反应液中加入水(20mL)，乙酸乙酯(10mL×3)萃取，有机相依次用饱和食盐水(10mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析纯化，得(Sa)-6-(1-((1R)-1-(4-(3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(150mg，产率54％)。
LC-MS,M/Z(ESI):537.7[M+H]+。
第四步：(Sa)-6-(1-((1R)-1-(4-(3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3.3]庚烷-2-甲酸的制备
(Sa)-6-(1-((1R)-1-(4-(3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(80mg,0.15mmol)溶于四氢呋喃/甲醇/水(3mL/0.6mL/0.6mL)中，加入一水合氢氧化锂(31mg,0.75mmol)，室温搅拌2小时。反应液浓缩，加入水(3mL)，再加稀盐酸(1mol/L水溶液)调节溶液pH值约5，有大量白色固体产生，过滤收集白色固体，干燥后得到(Sa)-6-(1-((1R)-1-(4-(3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-35a)(63.2mg，收率81％)。
LC-MS,M/Z(ESI):523.6[M+H]+。
1H NMR(400MHz,dmso)δ12.02(s,1H),8.83(d,1H),8.18(s,1H),7.27(d,1H),7.15(d,1H),6.86(d,2H),6.34(d,2H),6.11(q,1H),4.35(q,1H),3.40–3.36(m,2H),3.09-3.01(m,2H),2.99-2.85(m,1H),2.48-2.42(m,1H),2.36–2.21(m,3H),2.19–2.01(m,6H),1.94(dd,1H),1.81(d,3H),1.68–1.58(m,2H),0.71–0.61(m,1H),0.15(q,1H).
化合物I-35b的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000871
第一步：1-((1S)-1-(4-(3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
1-((1S)-1-(4-(3-溴-3-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(250mg,0.63mmol),3-氮杂双环[3.1.0]己烷盐酸酸(301mg,2.52mmol)，醋酸钯(14mg,0.063mmol)，碳酸铯(1.23g,3.38mmol)，2-(二叔丁基膦)联苯(22.5mg,0.076mmol)于二氧六环(3mL)中，氮气保护下80℃搅拌16小时。反应液浓缩，残留物用柱层析纯化，得1-((1S)-1-(4-(3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(180mg，产率72％)。
第二步：1-((1S)-1-(4-(3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸锂盐的制备
1-((1S)-1-(4-(3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(175mg,0.44mmol)溶于四氢呋喃/甲醇/水(3mL/0.6mL/0.6mL)中，加入一水合氢氧化锂(55.1mg,1.31mmol)，室温搅拌16小时。反应液浓缩干燥得到1-((1S)-1-(4-(3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸锂盐(210mg，含LiOH，产率124％)。
第三步：6-(1-((1S)-1-(4-(3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
1-((1S)-1-(4-(3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸锂盐(230mg,0.6mmol)和HATU(454mg,1.19mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，冰浴下加入N,N-二异丙基乙胺(308mg,2.39mmol)，搅拌15分钟后加入(Sa)-6-氨基螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯盐酸盐(245mg,1.19mmol)，室温搅拌3小时。反应液中加入水(20mL)，乙酸乙酯(10mL×3)萃取，有机相依次用饱和食盐水(10mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析纯化，得(Sa)-6-(1-((1S)-1-(4-(3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(150mg，产率47％)。
LC-MS,M/Z(ESI):537.7[M+H]+。
第四步：(Sa)-6-(1-((1S)-1-(4-(3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-35b)
Figure BDA0003684244210000881
(Sa)-6-(1-((1S)-1-(4-(3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(75mg,0.14mmol)溶于四氢呋喃/甲醇/水(3mL/0.6mL/0.6mL)中，加入一水合氢氧化锂(29.3mg,0.7mmol)，室温搅拌16小时。反应液浓缩，加入水(3mL)，再加稀盐酸(1mol/L水溶液)调节溶液pH值约5，有大量白色固体产生，过滤收集白色固体，干燥后得到(Sa)-6-(1-((1S)-1-(4-(3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-35b)(66mg，收率90％)。
LC-MS,M/Z(ESI):523.7[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.00(s,1H),8.84(d,1H),8.18(s,1H),7.27(d,1H),7.15(d,1H),6.86(d,2H),6.35(d,2H),6.11(q,1H),4.35(q,J＝8.3Hz,1H),3.40–3.37(m,2H),3.08–3.02(m,2H),3.01–2.91(m,1H),2.49–2.44(m,1H),2.39–2.20(m,3H),2.16(s,3H),2.15–1.95(m,4H),1.81(d,3H),1.67–1.59(m,2H),0.71–0.62(m,1H),0.15(q,1H).
实施例36化合物I-36的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000891
第一步：(R)-1-(1-(4-(6-(二氟甲基)吡啶-2-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
向(R)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(200mg，0.450mmol)的甲苯(2mL)和水(0.4mL)溶液中加入2-溴-6-(二氟甲基)吡啶(62.4mg,0.300mmol)、碳酸钾(124mg,0.900mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(21.96mg,0.030mmol)。反应液置换3次氮气，并在80℃下搅拌18小时。将反应液倒入水(20mL)中并用乙酸乙酯(10mL*3)萃取。合并有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。粗产物通过柱层析(石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝30/1-1/1)纯化得到(R)-1-(1-(4-(6-(二氟甲基)吡啶-2-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(120mg，产率90％)。
LC-MS,M/Z(ESI)：446.1[M+H]+。
第二步：(R)-1-(1-(4-(6-(二氟甲基)吡啶-2-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
向(R)-1-(1-(4-(6-(二氟甲基)吡啶-2-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(120mg,0.269mmol)的四氢呋喃(6mL)、甲醇(2mL)和水(2mL)溶液中加入氢氧化锂(32.3mg,1.347mmol)，然后在室温下搅拌18h。向反应液中加入水(50mL)，并通过1N盐酸水溶液调节pH至5～6，然后用乙酸乙酯(20mL*2)萃取。合并有机层，用饱和食盐水(10mL*2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到(R)-1-(1-(4-(6-(二氟甲基)吡啶-2-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(100mg，产率86％)。
LC-MS,M/Z(ESI)：432.1[M+H]+。
第三步：(Sa,R)-6-(1-(1-(4-(6-(二氟甲基)吡啶-2-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-羧酰胺)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
向(R)-1-(1-(4-(6-(二氟甲基)吡啶-2-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(100mg，0.232mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液中加入HATU(264mg，0.695mmol)和二异丙基乙胺(90mg，0.695mmol)并在室温下搅拌1小时。然后向反应液中加入(Sa)-6-氨基螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(58.8mg，0.348mmol)并在室温下搅拌2小时。将反应液倒水(50mL)中并用乙酸乙酯(10mL*3)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(10mL*2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。粗产物通过薄层硅胶板分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝3/1)纯化得到(Sa,R)-6-(1-(1-(4-(2-(二氟甲基))吡啶-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(100mg，产率74％)。
LC-MS,M/Z(ESI)：583.3[M+H]+。
第四步：(Sa,R)-6-(1-(1-(4-(6-(二氟甲基)吡啶-2-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰氨基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-36)的制备
Figure BDA0003684244210000901
向(R)-6-(1-(1-(4-(2-(二氟甲基))吡啶-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(100mg，0.172mmol)的四氢呋喃(3mL)、甲醇(1mL)和水(1mL)的溶液中加入氢氧化锂(20.55mg，0.858mmol)，然后在25℃下搅拌18小时。向反应液中加入水(50mL)并通过1N盐酸水溶液调节pH至5～6，然后用EA(10mL*3)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(10mL*2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到(Sa,R)-6-(1-(1-(4-(2-(二氟甲基))吡啶-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-36)(95.9mg，产率95％)。
1H NMR(400MHz,dmso)δ12.03(s,1H),8.81(d,1H),8.28(s,1H),8.09-8.02(m,2H),7.94(d,2H),7.66-7.59(m,1H),7.31(d,1H),7.19(d,1H),7.15(d,1H),6.96(t,1H),6.35(q,1H),4.34(dq,1H),2.94(p,1H),2.48-2.42(m,1H),2.37-2.20(m,3H),2.20-1.98(m,6H),1.92(t,3H),1.86(dd,1H)。
LC-MS,M/Z(ESI):569.3[M+H]+。
实施例37化合物I-37的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000911
第一步：(R)-(1-(1-(4-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯
向(R)-1-(1-(4-溴苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(500mg,1.26mmol)和3,3-二氟吡咯烷(900mg,6.29mmol)的1，4-二氧六环(10mL)溶液中加入(1,1’-联苯)-2-基二-叔丁基膦(150mg,0.50mmol)、碳酸铯(2.46g,7.55mmol)和醋酸钯(57mg，0.25mmol)。反应液置换三次氮气，然后在80℃下搅拌16小时。将反应液倒入水(50mL)中并乙酸乙酯(30mL*3)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(20mL*2)洗涤，并用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。粗产物通过柱层析(石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝1:0-1:3)纯化得到(R)-(1-(1-(4-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(150mg,产率22％)。
第二步：(R)-(1-(1-(4-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸
向(R)-(1-(1-(4-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(150mg,0.28mmol)的四氢呋喃(6mL)、甲醇(2mL)和水(2mL)溶液中加入氢氧化锂(34mg,1.42mmol)，然后在25℃搅拌3小时。向反应液中加入水(50mL)并用1N盐酸水溶液调节pH至5～6，然后用乙酸乙酯(20mL*3)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(10mL*2)洗涤，并用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到(R)-(1-(1-(4-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(110mg，产率95％)。
第三步：(Sa,R)-6-(1-(1-(4-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2(S)-甲酸甲酯
向(R)-(1-(1-(4-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(100mg,0.24mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液中加入HATU(139mg,0.37mmol)和二异丙基乙胺(158mg,1.22mmol)，并在25℃下搅拌0.5h。然后向反应液中加入(Sa)-6-氨基螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(100mg，0.49mmol)，在25℃下继续搅拌2.5小时。反应液浓缩得到粗产物。粗产物通过柱层析(石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝1/0-1/3)纯化得到(Sa,R)-6-(1-(1-(4-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2(S)-甲酸甲酯(100mg，产率73％)。
第四步：(Sa,R)-6-(1-(1-(4-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2(S)-甲酸(I-37)
Figure BDA0003684244210000921
向(Sa,R)-6-(1-(1-(4-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2(S)-甲酸甲酯(100mg，0.18mmol)的四氢呋喃(6mL)、甲醇(2mL)和水(2mL)的溶液中加入氢氧化锂(45.6mg，1.906mmol)，然后在25℃搅拌3小时。向反应液中加入水(50mL)并用1N盐酸水溶液调节pH至5～6，然后用乙酸乙酯(20mL*3)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(10mL*2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到(Sa,R)-6-(1-(1-(4-(3,3-二氟吡咯烷-1-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2(S)-甲酸(I-37)(20mg，产率21％)。
1H NMR(400MHz,dmso)δ8.82(d,1H),8.18(s,1H),7.26(d,1H),7.14(d,1H),6.91(d,1H),6.42(d,1H),6.13(q,1H),4.34(dd,1H),3.56(t,4H),2.93(t,1H),2.30–1.81(m,16H).
LC-MS,M/Z(ESI):511.60[M+H]+。
实施例38化合物I-38的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000922
第一步：(1-(4-溴苯基)乙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷的制备
将1-(4-溴苯基)-1-乙醇(3g,14.92mmol)和咪唑(2g,29.8mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中，冰浴条件下加入叔丁基二甲基氯硅烷(3.37g,22.38mmol)，反应液继续搅拌2小时。往反应液中加入水(200mL),用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。有机相合并后用饱和食盐水(50mL×2)洗涤，浓缩后用柱层析纯化，得到(1-(4-溴苯基)乙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(4.3g，产率91％)。
第二步：叔丁基-(1-(4-环丁基苯基)乙氧基)二甲基硅烷的制备
(1-(4-溴苯基)乙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(1g,3.17mmol)、环丁基氟硼酸钾(617mg,3.81mmol)、醋酸钯(36mg,0.16mmol)、正丁基二(1-金刚烷基)膦(91mg,0.254mmol)和碳酸铯(3.1g,9.51mmol)于甲苯(10mL)和水(1mL)中，氮气保护条件下100℃搅拌16小时。往反应液中加入水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL×2)萃取。上述有机相合并，用无水硫酸钠干燥，浓缩后得到粗品叔丁基-(1-(4-环丁基苯基)乙氧基)二甲基硅烷(0.67g，产率73％)。
第三步：1-(4-环丁基苯基)乙氧基-1-醇的制备
粗品叔丁基-(1-(4-环丁基苯基)乙氧基)二甲基硅烷(0.87g,3mmol)溶于四氢呋喃中，加入四丁基氟化铵(9mL,1M/L四氢呋喃溶液)，室温搅拌12小时。反应液浓缩，柱层析纯化得到1-(4-环丁基苯基)乙氧基-1-醇(0.3g，产率57％)。
第四步：(1-(1-(4-环丁基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
1-(4-环丁基苯基)乙氧基-1-醇(240mg,1.362mmol)、甲基4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸酯(146mg,0.681mmol)和三苯基膦(357mg,1.362mmol)溶于四氢呋喃(20mL)中，冰浴下缓慢滴加DIAD(275mg,1.362mmol)，随后升至室温搅拌16小时。反应液浓缩，柱层析纯化得(1-(1-(4-环丁基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(100mg，产率39％)。
第五步：(1-(1-(4-环丁基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
(1-(1-(4-环丁基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(100mg,0.268mmol)溶于四氢呋喃/甲醇/水(2mL/0.4mL/0.4mL)中，加入一水合氢氧化锂(56mg,1.342mmol)，室温搅拌16小时。反应液浓缩，加入水(5mL)，再加稀盐酸(1mol/L水溶液)调节溶液pH值约2，有白色固体产生，过滤收集白色固体，干燥后得到(1-(1-(4-环丁基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(80mg，收率83％)。
第六步：(Sa)-6-(1-(1-(4-环丁基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
(1-(1-(4-环丁基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(80mg,0.223mmol)和N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(255mg,0.67mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，冰浴下加入N,N-二异丙基乙胺(144mg,1.116mmol)，搅拌15分钟后加入(Sa)-6-氨基螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯盐酸盐(138mg,0.67mmol)，室温搅拌16小时。反应液中加入水(10mL)，乙酸乙酯(10mL×3)萃取，有机相依次用饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后柱层析纯化，得(Sa)-6-(1-(1-(4-环丁基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(70mg，产率62％)。
LC-MS,M/Z(ESI):510.5[M+H]+。
第七步：(Sa)-6-(1-(1-(4-环丁基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-38)
(Sa)-6-(1-(1-(4-环丁基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(70mg,0.137mmol)溶于四氢呋喃/甲醇/水(3mL/0.6mL/0.6mL)中，加入一水合氢氧化锂(28.8mg,0.687mmol)，室温搅拌16小时。反应液浓缩，反相制备液相色谱纯化，冻干后得到(Sa)-6-(1-(1-(4-环丁基苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-38)(22mg，收率32％)。
LC-MS,M/Z(ESI):338.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.79(dd,1H),8.23(s,1H),7.28(d,1H),7.17(d,1H),7.07(dd,2H),6.95(dd,2H),6.24(q,1H),4.40–4.25(m,1H),3.00–2.89(m,1H),2.48–2.41(m,1H),2.37–1.82(m,19H),1.79–1.70(m,1H).
实施例39化合物I-39a的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000941
第一步：1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙醇的制备
在0°下向1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙酮(500mg,2.69mmol)的甲醇(5mL)溶液中加入硼氢化钠(203mg,5.37mmol)，然后在0℃下搅拌1h。将反应液缓慢倒入饱和氯化铵水溶液(50mL)中并用二氯甲烷(20mL*2)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(10mL*2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙醇(400mg，产率79％)。
第二步：1-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
向1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙醇(400mg,2.126mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中加入4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(228mg,1.063mmol)，三苯基膦(836mg，3.19mmol)。然后在0℃下将偶氮二甲酸二异丙酯(645mg，3.19mmol)逐滴加入反应液中，并在25℃下搅拌16小时。浓缩反应液得到粗产物。粗产物通过柱层析(石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝1/0-1/1)纯化得到1-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(200mg，产率49.0％)。
LC-MS,M/Z(ESI):385.4[M+H]+。
第三步：1-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
向1-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(200mg,0.520mmol)的四氢呋喃(6mL)、甲醇(2mL)和水(2mL)溶液中加入氢氧化锂(62.3mg，2.60mmol)，然后在25℃下搅拌16小时。向反应液中加入水(50mL)并用1N盐酸水溶液调节pH至5～6，并用EA(20mL*3)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到1-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(180mg，产率93％)。
LC-MS,M/Z(ESI):371.3[M+H]+。
第四步：(Sa)-6-(1-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
将1-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(180mg，0.486mmol)、(Sa)-6-氨基螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(206mg，1.215mmol)、二异丙基乙胺(188mg，1.458mmol)和HATU(554mg，1.458mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，然后室温搅拌3h。将反应液加入水(50mL)中，用乙酸乙酯(10mL*3)萃取。有机相合并后用饱和食盐水(10mL*3)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品。粗品经过薄层硅胶板分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(V/V)＝1:1)得到(Sa)-6-(1-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(170mg，产率67.1％)。
LC-MS,M/Z(ESI):522.4[M+H]+。
第五步：(Sa)-6-(1-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸的制备
将(Sa)-6-(1-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(170mg，0.326mmol)溶于四氢呋喃(6mL)、甲醇(2mL)和水(2mL)中，加入氢氧化锂(39mg，1.630mmol)，反应液在25℃搅拌16h。向反应液中加入水(50mL),然后用1N盐酸水溶液调pH至5～6，乙酸乙酯(20mL*3)萃取。有机相合并，用饱和食盐水(20mL*2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到产物(Sa)-6-(1-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(121.4mg，产率98％)。
LC-MS,M/Z(ESI):508.4[M+H]+
第六步：化合物I-39a和化合物I-39b的制备
Figure BDA0003684244210000961
(Sa)-6-(1-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(121.4mg,0.234mmol)经过SFC拆分得到(Sa,R)-6-(1-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-39a)(25.9mg，白色固体产物)和(Sa,S)-6-(1-(1-(4-(二氟甲氧基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-39b)(26.1mg，白色固体产物)。SFC拆分方法：使用(S,S)Whelk-O1型号手性拆分柱(规格为：50×4.6mm,3.5um)进行手性拆分，流动相A为超临界流体CO2,流动相B为甲醇(含0.05％二乙醇胺)；梯度条件:流动相B为5％-40％的梯度保持10min，柱温保持在35℃，柱压保持在100bar。I-39a保留时间：1.903min；I-39b保留时间：2.231min。
I-39a：1H NMR(400MHz,dmso)δ11.99(s,1H),8.81(d,1H),8.25(s,1H),7.36–7.25(m,1H),7.21–7.12(m,1H),7.14–6.90(m,4H),6.27(q,1H),4.32(dq,1H),3.01–2.90(m,1H),2.48–2.39(m,1H),2.37–1.84(m,14H).
LC-MS,M/Z(ESI):508.2[M+H]+。
I-39b：1H NMR(400MHz,dmso)δ12.04–11.67(m,1H),8.81(d,1H),8.25(s,1H),7.35–7.26(m,1H),7.19(d,1H),7.10–6.84(m,4H),6.26(q,1H),4.32(dq,1H),3.05–2.83(m,1H),2.49–2.39(m,1H),2.34–1.76(m,14H).
LC-MS,M/Z(ESI):508.2[M+H]+。
实施例40化合物I-40的制备
合成路线如下所示：
Figure BDA0003684244210000962
第一步：(R)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
向(R)-1-(1-(4-溴苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(400mg,1.007mmol)的二氧六环(1mL)溶液中加入频哪醇硼酸酯(384mg,1.510mmol)、乙酸钾(296mg,3.02mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(73.7mg,0.101mmol)，然后在80℃下搅拌16小时。将反应液倒入水(50mL)中并用乙酸乙酯(10mL*2)萃取。合并有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。粗产物通过柱层析(石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝30/1-1/1)纯化得到产物(R)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(350mg,产率78％)。
LC-MS,M/Z(ESI)：445.3[M+H]+。
第二步：(R)-1-(1-(4-(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯的制备
向(R)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1-(1-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)乙基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(150mg，0.338mmol)的甲苯(2mL)和水(0.4mL)溶液中加入4-溴-2-(二氟甲基)吡啶(58.5mg,0.281mmol)、碳酸钾(117mg,0.844mmol)和四(三苯基膦)钯(32.5mg,0.028mmol)。反应液置换3次氮气，并在80℃下搅拌18小时。将反应液倒入水(10mL)中并用乙酸乙酯(5mL*2)萃取。合并有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。粗产物通过柱层析(石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝30/1-1/1)纯化得到(R)-1-(1-(4-(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(100mg，80％产率)。
LC-MS,M/Z(ESI)：446.4[M+H]+。
第三步：(R)-1-(1-(4-(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸的制备
向(R)-1-(1-(4-(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸甲酯(100mg,0.224mmol)的四氢呋喃(6mL)、甲醇(2mL)和水(2mL)溶液中加入氢氧化锂(26.9mg,1.122mmol)，然后在室温下搅拌3h。向反应液中加入水(50mL)，并通过1N盐酸水溶液调节pH至5～6，然后用乙酸乙酯(20mL*2)萃取。合并有机层，用饱和食盐水(10mL*2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到(R)-1-(1-(4-(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(90mg，产率93％)。
LC-MS,M/Z(ESI)：432.5[M+H]+。
第四步：(Sa,R)-6-(1-(1-(4-(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-羧酰胺)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯的制备
向(R)-1-(1-(4-(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酸(90mg，0.209mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液中加入HATU(238mg，0.626mmol)和二异丙基乙胺(81mg，0.626mmol)并在室温下搅拌1小时。然后向反应液中加入(Sa)-6-氨基螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(53mg，0.313mmol)并在室温下搅拌17小时。将反应液倒水(20mL)中并用乙酸乙酯(10mL*3)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(10mL*2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产物。粗产物通过薄层硅胶板分离纯化(石油醚/乙酸乙酯(V/V)＝3/1)纯化得到(Sa,R)-6-(1-(1-(4-(2-(二氟甲基))吡啶-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(20mg，产率16.46％)。
LC-MS,M/Z(ESI)：583.3[M+H]+。
第五步：(Sa,R)-6-(1-(1-(4-(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰氨基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-40)
Figure BDA0003684244210000981
向(Sa,R)-6-(1-(1-(4-(2-(二氟甲基))吡啶-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸甲酯(20mg，0.034mmol)的四氢呋喃(3mL)、甲醇(1mL)和水(1mL)的溶液中加入氢氧化锂(4.11mg，0.172mmol)，然后在25℃下搅拌18小时。向反应液中加入水(50mL)并通过1N盐酸水溶液调节pH至5～6，然后用EA(10mL*3)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(10mL*2)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到产物(Sa,R)-6-(1-(1-(4-(2-(二氟甲基))吡啶-4-基)苯基)乙基)-4-(丙烷-1-炔-1-基)-1H-吲唑-7-甲酰胺基)螺[3.3]庚烷-2-甲酸(I-40)(15mg，产率72.9％)。
1H NMR(400MHz,dmso)δ12.02(s,1H),8.80(d,1H),8.71(d,1H),8.29(s,1H),7.88(s,1H),7.81(d,1H),7.72(d,2H),7.31(d,1H),7.24-7.07(m,3H),6.35(q,1H),4.32(dt,1H),3.01-2.84(m,1H),2.45(dd,1H),2.29(ddd,3H),2.16-1.99(m,5H),1.92(d,2H),1.84(dd,1H),1.36-1.07(m,3H).
LC-MS，M/Z(ESI):569.30[M+H]+。
下列化合物的制备参考化合物I-18或I-18a的制备方法得到。
Figure BDA0003684244210000982
Figure BDA0003684244210000991
测试例1：EP2拮抗作用测定实验
化合物对EP2拮抗作用在高表达人源EP2受体的CHO稳转细胞株上进行。细胞经胰蛋白酶消化后，重悬于缓冲液中(1×HBSS,0.1％BSA,20mM HEPES和500μM IBMX)，每孔接种8000个细胞于384孔板，接种体积为15μL。使用DMSO试剂将待测化合物、EP2完全拮抗剂TG4-155和PGE2分别配制成10mM母液，用实验缓冲液制备8X浓度的待测化合物工作液、EP2完全拮抗剂TG4-155工作液和PGE2工作液，随后分别加入2.5μL 8X化合物工作液、8X的EP2完全拮抗剂TG4-155和DMSO(终浓度0.2％)至上述384孔板中，于37℃孵育10min。每孔加入2.5μL的8X浓度的激动剂PGE2工作液至上述384孔板中(PGE2终浓度为0.3nM)，于37℃孵育30min。反应完成后，使用试剂盒(Perkin Elmer,Cat#TRF0263)中的cAMP检测缓冲液1：50稀释Eu-cAMP，每孔加入10μL的Eu-cAMP，使用cAMP检测缓冲液1：150稀释ULight-anti-cAMP，每孔加入10μL的ULight-anti-cAMP，室温孵育1h。在Envision 2105读板器上读取665nm和615nm波长的数据。计算测试化合物的拮抗作用(IC50值)。
表1测试化合物对EP2的拮抗作用
Figure BDA0003684244210000992
Figure BDA0003684244210001001
结果表明：本发明化合物对EP2具有很好的拮抗作用。测试例2：对EP4受体钙流抑制效果测定
化合物对EP4钙流抑制效果在过表达人EP4受体的293细胞上进行。将生长良好的细胞重悬于细胞培养基中，调整细胞密度为1×106细胞每毫升。将细胞悬浮液以20μL/孔接种于2块多聚赖氨酸包被的384孔板(20,000个细胞/孔)，置于37℃，5％CO2培养箱中过夜。准备2X Fluo-4 DirectTM(Invitrogen,Cat#F10471)上样缓冲液：向1mL FLIPR缓冲液中加入77mg丙磺舒，浓度为250mM。每管Fluo-4 DirectTM crystals(F10471)加入10mL FLIPR缓冲液，和0.2mL的250mM的丙磺舒，涡旋并避光静止5min。
从培养箱中取出一块细胞板并去除培养基，加入20μL分析缓冲液和2X Fluo-4DirectTM免洗上样缓冲液至384孔细胞培养板，最终体积为40μL。在37℃，5％CO2培养箱中孵育50分钟，室温孵育10分钟，放入FLIPR。将10μL缓冲液转移至细胞板，读取荧光信号。将激动剂PGE2在DMSO溶剂中配制成10mM的储备液，使用缓冲液梯度稀释10个浓度点的6X工作液。将10μL激动剂PGE2转移至细胞板，读取荧光信号，计算EC80值。
准备6X EC80浓度的激动剂PGE2，并将待测化合物在DMSO溶剂中配制成10mM的储备液，使用缓冲液梯度稀释10个浓度点6X化合物工作液。
另取一块细胞板去除培养基，加入20μL分析缓冲液和2X Fluo-4 DirectTM免洗上样缓冲液。在37℃，5％CO2培养箱中孵育50分钟，室温孵育10分钟，放入FLIPR。将10μL化合物工作液、DMSO、EP4完全拮抗剂转移至细胞板，读取荧光信号。将10μL 6X EC80浓度的激动剂PGE2转移至细胞板，读取荧光信号，计算化合物对EP4钙流抑制的IC50值。
表2测试化合物对EP4钙流抑制作用
Figure BDA0003684244210001011
Figure BDA0003684244210001021
实验结果表明，本发明化合物对EP4钙流显示较好抑制作用。
测试例3：放射性配体EP2受体结合测定
使用重组人EP2受体膜蛋白(Perkin Elmer#ES-562-M400UA，从过表达人EP2受体的293细胞制备)进行放射性配体EP2结合测定。使用DMSO溶剂将待测化合物配制成10μM的储备液，用结合测定缓冲液(50mM Tris-HCl,pH 7.4,10mM MgCl2,0.5mM EDTA)将待测化合物和放射性配体[3H]-PGE2(Perkin Elmer#NET428025UC)分别配制成10×工作液。将10μL化合物工作液、1％的DMSO、PGE2工作液(终浓度10μM)分别加到测定板中，加入80μL的EP2受体膜蛋白(10μg/孔)和10μL的放射性配体[3H]-PGE2(Perkin Elmer#NET428025UC)(终浓度7.5nM)，25℃孵育1.5小时。使用Cell Harvester通过0.3％PEI包被的GF/C板过滤反应混合物，使用冰的洗涤缓冲液(50mM Tris-HCl,pH 7.4)清洗滤板3次，在37℃下将滤板干燥2小时，干燥后，加入50μL的scintillation cocktail，密封滤板顶部。使用Topcount读取过滤器上捕获的3H计数。
使用GraphPad Prism 5分析数据，按以下公式计算抑制率：
抑制率(％)＝100-(测试组-PGE2组)/(DMSO组-PGE2组)*100
根据化合物不同浓度的抑制率，计算化合物通过放射性配体EP2结合测定的IC50和Ki值。
实验数据表明：本发明化合物与EP2受体具有很好的亲和力。
测试例4：热力学溶解度实验
配制pH 1.6的禁食状态模拟胃液FaSSGF(1L溶液含80μM的牛黄胆酸钠,20μM的卵磷脂,0.1g的胃蛋白酶,34.2mM的氯化钠)、pH 6.5的禁食状态模拟肠液FaSSIF(1L溶液含3mM的牛黄胆酸钠,0.2mM的卵磷脂,38.4mM的氢氧化钠,68.62mM的氯化钠,19.12mM的马来酸)和pH 7.4的磷酸缓冲盐溶液PBS(1L溶液含100mM的磷酸盐缓冲液,11g碳酸氢二钠,3.5g的二水合磷酸二氢钠)作为测定缓冲液。
准确称取化合物，使用不同pH的测定缓冲液将化合物配置成4mg/mL的工作液，1000rpm振荡1小时，室温平衡过夜。样品置于离心机12000rmp离心10min，除去未溶解颗粒。将上清转移至新的离心管，通过LCMSMS检测上清中化合物浓度。
实验结果表明化合物具有很好的热力学溶解度。
测试例5：放射性配体EP4受体结合测定
使用重组人EP4受体膜蛋白(从过表达人EP4受体的293细胞制备)进行放射性配体EP4结合测定。使用DMSO试剂将待测化合物和PGE2配制成10μM储备液，以2μM为起始浓度，4倍梯度稀释至8个浓度点工作液。然后使用缓冲液(50mM HBSS,0.1％BSA,500mM NaCl)将EP4受体膜蛋白和放射性配体[3H]-PGE2(PerkinElmer,Cat:NET428250UC,Lot:2469552)配制成工作液浓度。将1μL化合物工作液、DMSO、PGE2工作液分别加到测定板中，加入100μL的EP4受体膜蛋白(20μg/孔)和100μL放射性配体[3H]-PGE2(PerkinElmer,Cat:NET428250UC,Lot:2469552)(终浓度1.5nM)，密封室温下孵育1小时。在室温下，用0.5％BSA，50μL/每孔浸泡Unifilter-96 GF/C滤板(Perkin Elmer)至少30min。结合完成后，使用Perkin ElmerFiltermate Harvester通过GF/C板过滤反应混合物，然后清洗滤板，在50℃下将滤板干燥1小时。干燥后，使用Perkin Elmer Unifilter-96密封胶带密封滤板孔的底部，加入50μL的MicroScintTM-20 cocktail(Perkin Elmer)，密封滤板顶部。使用Perkin ElmerMicroBeta2 Reader读取过滤器上捕获的3H计数。
使用GraphPad Prism 5分析数据，按以下公式计算抑制率：
抑制率(％)＝100-(测试组-PGE2组)/(DMSO组-PGE2组)*100
根据化合物不同浓度的抑制率，计算化合物通过放射性配体EP4结合测定的IC50和Ki值。
实验结果表明：本发明化合物与EP4受体具有很好的亲和力。
测试例6：人PBMC单核细胞分化
用DMSO制备将化合物配为3000μM、1000μM、300μM和100μM的储备液。再用RPMI1640完全培养基进行250倍稀释，制备的稀释液浓度分别为：12000nM、4000nM、1200nM和400nM。复苏商品化的人源PBMC，DPBS洗涤后测定细胞活率，用EasySepTM Human MonocyteIsolation Kit从PBMC中分离得到单核细胞，并用RPMI 1640完全培养基重悬细胞调整密度为1.5×106/mL。铺1.5×105单核细胞于96孔细胞培养板中(体积为100μL/孔)，将配制好的50μL化合物稀释液加入细胞中，同时加入50μL cytokines mix(10nM PGE2,50ng/mL GM-CSF and 100ng/mL IL-4)。化合物终浓度分别为3000nM、1000nM、300nM和100nM。37℃，5％CO2培养箱中孵育7天，第4天时，半量换液后继续培养。培养7天后，收集细胞，进行流式检测。收获所有细胞，用死活染料(Fixable Viability Stain 780，1：1000在PBS中稀释)常温避光染色15分钟，然后用PBS洗涤两次。每个样本孔中加入细胞染色缓冲液稀释的Anti-human CD1a/CD16/CD206/CD86和CD163抗体(染色体积为100μL)，4℃避光染色40分钟，使用细胞染色缓冲液洗涤一次，400g离心5分钟。染色结束后，使用200μL的细胞染色缓冲液重悬细胞沉淀，在Thermo Attune NxT流式细胞仪上进行上机分析。所有数据使用ThermoAttune分析软件和Graphpad Prism6.0进行处理分析。数据结果显示为平均值加标准误差(SEM)。
实验结果如图1、图2和图3所示，结果表明：本发明中的化合物对PGE2介导的免疫抑制作用都有较好的拮抗作用，可提高DC细胞和M1型细胞的比例，同时可以抑制M2的比例。
测试例7：药代动力学试验
小鼠药代动力学试验，使用雄性ICR小鼠，20-25g，禁食过夜。取3只小鼠，口服灌胃给药5mg/kg。在给药前和在给药后15、30分钟以及1、2、4、8、24小时采血，取另外3只小鼠，静脉注射给药1mg/kg，在给药前和在给药后15、30分钟以及1、2、4、8、24小时采血。血液样品6800g，2-8℃离心6分钟，收集血浆，于-80℃保存。取各时间点血浆，加入3-5倍量含内标的乙腈溶液混合，涡旋混合1分钟，13000转/分钟4℃离心10分钟，取上清液加入3倍量水混合，取适量混合液进行LC-MS/MS分析。主要药代动力学参数用WinNonlin7.0软件非房室模型分析。
大鼠药代动力学试验，使用雄性SD大鼠，180-240g，禁食过夜。取3只大鼠，口服灌胃给药5mg/kg。取另外3只大鼠，静脉注射给药1mg/kg。其余操作同小鼠药代动力学试验。
犬药代动力学试验，使用雄性Beagle犬，8-10kg，禁食过夜。取3只Beagle犬，口服灌胃给药3mg/kg。取另外3只Beagle犬，静脉注射给药1mg/kg。其余操作同小鼠药代动力学试验。
猴药代动力学实验，使用雄性食蟹猴，5-7kg，禁食过夜。取3只食蟹猴，口服灌胃给药5mg/kg。取另外3只食蟹猴，静脉注射给药3mg/kg。其余操作同小鼠药代动力学试验。
表5小鼠口服灌胃给药药代动力学实验结果
Figure BDA0003684244210001051
表6大鼠口服灌胃给药药代动力学实验结果
Figure BDA0003684244210001052
表7犬口服灌胃给药药代动力学实验
Figure BDA0003684244210001053
实验结果表明，本发明化合物的静脉给药清除率低，口服给药暴露量高，表现出优良的药代动力学性质，成药性好。
测试例8：测试化合物联合anti-mouse PD-1抗体法在CT-26鼠源结肠癌肿瘤模型中的抗肿瘤作用
本实验中，在CT-26鼠源结肠癌肿瘤模型中测试化合物I-18a和I-23联合anti-mouse PD-1抗体法的抗肿瘤作用。小鼠适应性饲养一周后，将处于对数期的CT-26细胞重悬于PBS，按100μL/只将3×105CT-26细胞接种于右侧后部处皮下，定期观察肿瘤生长情况，待肿瘤生长至平均体积50-70mm3时，根据肿瘤体积大小采用随机分组法将荷瘤小鼠分为4组，每组8只。试验分为溶媒组、单anti-mouse PD-1抗体组、化合物I-18a(150mg/kg)、化合物I-23(150mg/kg)分别联合anti-mouse PD-1抗体(7.5mg/kg)联合给药组，口服灌胃给药，每天两次，共给药18天；anti-mouse PD-1抗体为一周两次使用。每周测量2次肿瘤体积和小鼠体重，实验结束时称取瘤重。
肿瘤体积和相对肿瘤抑制率计算公式如下：肿瘤体积(tumor volume，TV)＝1/2×a×b2，其中a、b分别为肿瘤测量的长和宽。化合物的抑瘤疗效TGI(％)＝(TWc-TWt/TWc)×100％，其中TWc为溶媒对照组平均瘤重，TWt为治疗组平均瘤重。实验结果如图4所示，结果表明，化合物I-18a(150mg/kg)、化合物I-23(150mg/kg)分别联合anti-mouse PD-1抗体在开始给药后第18天时表现出显著的抑瘤作用，相对肿瘤抑制率TGI(％)分别为78.48％和70.86％，相对溶媒对照组统计学上均有显著性差异(p值均小于0.05)。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (22)

1.式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药：
Figure FDA0003684244200000011
其中，R1、R2分别为氢或-C≡C-R11，且R1、R2不同；
所述R11为氢或选自：C1-C5烷基、3-6元环烷基；
所述R11任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：羟基、卤素、C1-C5烷基；当取代基为多个时，所述取代基相同或不同；
L1为C1-C5亚烷基；
L2不存在或为未取代或被Rb取代的C1-C3亚烷基；
所述L1任选地被Ra1和/或Ra2取代；
所述Ra1、Ra2各自独立地为C1-C5烷基、卤素、羟基、氨基、C1-C5烷氧基、C1-C5卤代烷基、C1-C5卤代烷氧基；
或所述Ra1、Ra2与它们共同连接的C原子一起形成3-6元环烷基或4-6元杂环烷基；
所述Rb为C1-C3烷基或卤素；
环A为苯基或5-6元杂芳基；
环B不存在或为3-8元环烷基、4-8元杂环烷基、苯基、5-6元杂芳基；
R3、R4各自独立地选自：羟基、卤素、氨基、氰基、C1-C5烷基、C1-C5烷氧基、3-6元环烷基、4-6元杂环烷基、3-6元环烷氧基；所述C1-C5烷基、C1-C5烷氧基、3-6元环烷基、4-6元杂环烷基、3-6元环烷氧基任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：羟基、卤素、氨基、氰基、3-6元环烷基；
m为0、1、2或3；
n为0、1、2或3。
2.式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药：
Figure FDA0003684244200000021
其中，R1、R2分别为氢或-C≡C-R11，且R1、R2不同；
所述R11为氢或选自：C1-C5烷基、3-6元环烷基；
所述R11任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：羟基、卤素、C1-C5烷基；当取代基为多个时，所述取代基相同或不同；
L1为C1-C5亚烷基；
L2不存在或为未取代或被Rb取代的C1-C3亚烷基；
所述L1任选地被Ra1和/或Ra2取代；
所述Ra1、Ra2各自独立地为C1-C5烷基、卤素、羟基、氨基、C1-C5烷氧基、C1-C5卤代烷基、C1-C5卤代烷氧基；
或所述Ra1、Ra2与它们共同连接的C原子一起形成3-6元环烷基或4-6元杂环烷基；
所述Rb为C1-C3烷基或卤素；
环A为苯基或5-6元杂芳基；
环B不存在或为3-6元环烷基、4-6元杂环烷基、苯基、5-6元杂芳基；
R3、R4各自独立地选自：羟基、卤素、氨基、氰基、C1-C5烷基、C1-C5烷氧基、3-6元环烷基、4-6元杂环烷基、3-6元环烷氧基；所述C1-C5烷基、C1-C5烷氧基、3-6元环烷基、4-6元杂环烷基、3-6元环烷氧基任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：羟基、卤素、氨基、氰基、3-6元环烷基；
m为0、1、2或3；
n为0、1、2或3。
3.如权利要求1所述的式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，在所述环A中，所述5-6元杂芳基含有一个或多个选自N、O或S的杂原子；当所述杂原子为多个时，所述杂原子相同或不同；
较佳地，所述5-6元杂芳基选自：噻吩、呋喃、吡咯、吡唑、咪唑、三氮唑、噻唑、噻二唑、噁唑、吡啶、嘧啶、哒嗪、吡嗪。
4.如权利要求1所述的式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，L1为-CH2-、-CH(CH3)-、-CH2CH2-或-CH2CH2CH2-；较佳地，L1为-CH2-、-CH(CH3)-。
5.如权利要求1所述的式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，R3、R4各自独立地选自：卤素、氰基、C1-C5烷基、C1-C5烷氧基、3-6元环烷基；所述C1-C5烷基、C1-C5烷氧基、3-6元环烷基任选地被1、2或3个选自下列的取代基取代：羟基、氟、氯。
6.如权利要求1所述的式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，具有结构Ia、Ib、Ic、Id，
Figure FDA0003684244200000031
其中，Z1、Z2、Z3、Z4、Z5各自独立地选自CR3或N；
环B、R1、R2、R3、R4、n、L2的定义如权利要求1中所述；Ra如权利要求1中Ra1或Ra2所定义；
较佳地，在结构Ia中，Z1、Z2、Z3、Z4、Z5中至多含有两个N；
较佳地，在结构Ib中，Z1、Z2、Z3、Z4中至多含有两个N。
7.如权利要求1所述的式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，具有如下结构IIa、IIb、IIc、IId、IIe、IIf、IIg、IIm、IIn：
Figure FDA0003684244200000032
Figure FDA0003684244200000041
8.如权利要求1-6任一项所述的式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，L2不存在或选自-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH(CH3)-、-CH(CH3)CH2-；较佳地，L2不存在或为-CH2-或-CH(CH3)-。
9.如权利要求1-7任一项所述的式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，R1、R2分别为氢或-C≡C-R11，且R1、R2不同；
R11为氢、C1-C5烷基或3-6元环烷基；
较佳地，所述R11为甲基。
10.如权利要求6所述的式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，Ra为甲基、乙基、丙基。
11.如权利要求1-5或7任一项所述的式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，环B为不存在或为环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苯基、噻吩、呋喃、吡咯、吡唑、咪唑、三氮唑、噻唑、噻二唑、噁唑、吡啶、嘧啶、哒嗪、吡嗪。
12.如权利要求1-5或7任一项所述的式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，环B为氧杂环丁烷、
Figure FDA0003684244200000051
或为选自下列杂芳基的饱和或部分饱和的杂环：噻吩、呋喃、吡咯、吡唑、咪唑、三氮唑、噻唑、噻二唑、噁唑、吡啶、嘧啶、哒嗪、吡嗪。
13.如权利要求1所述的式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，包括：
Figure FDA0003684244200000052
Figure FDA0003684244200000061
Figure FDA0003684244200000071
14.如权利要求1所述的式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药，其特征在于，包括：
Figure FDA0003684244200000072
Figure FDA0003684244200000081
Figure FDA0003684244200000091
15.一种中间体B-1：
Figure FDA0003684244200000092
其中，R6为-OH、-Cl、-O-C1-C5烷基、-O-苄基；
环A、环B、L1、R1、R2、R3、R4、m、n的定义如权利要求1中所述。
16.如权利要求15所述的中间体B-1，其特征在于，具有结构B-1a或B-1b：
Figure FDA0003684244200000101
其中，Z1、Z2、Z3、Z4、Z5各自独立地选自CR3或N；
环B、R1、R2、R3、R4、n的定义如权利要求1中所述；Ra如权利要求1中Ra1或Ra2所定义；
较佳地，在结构Ia中，Z1、Z2、Z3、Z4、Z5中至多含有两个N；
较佳地，在结构Ib中，Z1、Z2、Z3、Z4中至多含有两个N；
较佳地，所述中间体B-1具有结构B-1c、B-1d、B-1f、B-1g：
Figure FDA0003684244200000102
17.一种制备如权利要求1-14任一所述的式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药的方法，其特征在于，包括：1)将如权利要求15或16所述的中间体B-1与中间体B-2或中间体B-2的盐反应，得到所述式I所示苯并杂环化合物；
所述中间体B-2具有结构：
Figure FDA0003684244200000111
其中，R5为C1-C6烷基、苄基；
较佳地，所述中间体B-2具有结构B-2a或B-2b
Figure FDA0003684244200000112
18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述方法还包括：
2)当所述中间体B-1中R6不为-OH或-Cl时，将基团-COR6转化为-COOH或-COCl后，再与中间体B-2反应；和/或
3)在所述中间体B-1与中间体B-2反应后，将基团-COOR5水解为-COOH。
19.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括：如权利要求1-14中任一所述的式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药；和药学上可接受的载体。
20.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括：如权利要求1-14中任一所述的式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药；和第二种药物；
较佳地，所述第二种药物包括抗体；
较佳地，所述抗体包括抗PD-L1抗体、抗PD-1抗体。
21.一种如权利要求1-14中任一所述的式I所示苯并杂环化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药的用途，或如权利要求19或20所述的药物组合物的用途，所述用途包括：
1)对EP2和/或EP4产生拮抗作用；
2)与EP2和/或EP4受体结合；
3)预防、治疗EP2和/或EP4受体介导的疾病疾病、
4)制备EP2和/或EP4拮抗剂、
5)制备预防、治疗与EP2和/或EP4受体介导的疾病的药物、药物组合物或制剂。
22.如权利要求21所述的用途，其中所述EP2和/或EP4受体介导的疾病包括炎性疾病、自身免疫疾病、神经变性疾病、心血管疾病和癌症。
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