ES2937291T3 - Composiciones de agentes que se unen al transportador PD-L1 y métodos de uso de las mismas para tratar cánceres - Google Patents

Abstract

En el presente documento se describen composiciones de agentes de unión y proteínas transportadoras y, opcionalmente, al menos un agente terapéutico, y métodos para prepararlos y usarlos, en particular, como agentes terapéuticos contra el cáncer. También se describen composiciones liofilizadas de agentes aglutinantes y proteínas portadoras y, opcionalmente, al menos un agente terapéutico, y métodos para prepararlos y usarlos, en particular, como agentes terapéuticos contra el cáncer. Todavía también se describen métodos para tratar y/o aumentar la eficacia terapéutica de una inmunoterapia de un paciente que padece un cáncer que expresa PD-L1 o PD-L2 mediante la administración al paciente de una composición de nanopartículas y una inmunoterapia con PD-1. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Composiciones de agentes que se unen al transportador PD-L1 y métodos de uso de las mismas para tratar cánceres

Campo de la invención

Esta solicitud se refiere a composiciones novedosas y métodos de uso de las mismas, en particular, como agente terapéutico contra el cáncer como se establece en las reivindicaciones.

Antecedentes

La quimioterapia sigue siendo un pilar de la terapia sistémica para muchos tipos de cáncer, incluido el melanoma. La mayoría de los agentes quimioterapéuticos son sólo ligeramente selectivos para las células tumorales, y la toxicidad para las células sanas en proliferación puede ser alta (Allen TM. (2002) Cáncer 2:750-763), lo que a menudo requiere una reducción de la dosis e incluso la interrupción del tratamiento. En teoría, una forma de superar los problemas de toxicidad de la quimioterapia, así como de mejorar la eficacia del fármaco, es dirigir el fármaco quimioterapéutico al tumor empleando anticuerpos que son específicos para las proteínas expresadas (o sobreexpresadas) selectivamente por las células tumorales para atraer fármacos dirigidos al tumor, de ese modo se altera la biodistribución de la quimioterapia y da como resultado que más fármaco llegue al tumor y afecte menos al tejido sano. Sin embargo, a pesar de 30 años de investigación, el direccionamiento específico rara vez tiene éxito en el contexto terapéutico.

La quimioterapia dependiente de anticuerpos convencional (ADC, por sus siglas en inglés) está diseñada con un agente tóxico unido a un anticuerpo que se direcciona a través de un enlazador sintético escindible por proteasa. La eficacia de dicha terapia ADC depende de la capacidad de la célula diana para unirse al anticuerpo, el enlazador que se va a escindir, y la absorción del agente tóxico en la célula diana. Schrama, D. et al. (2006) Nature reviews. Drug discovery 5:147-159.

La quimioterapia dirigida a anticuerpos promete ventajas sobre la terapia convencional porque proporciona combinaciones de capacidad de direccionamiento, múltiples agentes citotóxicos, y capacidad terapéutica mejorada con una toxicidad potencialmente menor. A pesar de la extensa investigación, la quimioterapia dirigida a anticuerpos eficaz clínicamente sigue siendo difícil de alcanzar: los principales obstáculos incluyen la inestabilidad de los enlaces entre el anticuerpo y el fármaco quimioterapéutico, la toxicidad tumoral reducida del agente quimioterapéutico cuando se une al anticuerpo, y la incapacidad del conjugado para unirse y entrar en las células tumorales. Además, estas terapias no permitían controlar el tamaño de los conjugados anticuerpo-fármaco.

Persiste la necesidad en la técnica de terapias contra el cáncer basadas en anticuerpos que conserven el efecto citotóxico para la administración dirigida de fármacos para proporcionar una eficacia antitumoral fiable y mejorada con respecto a las terapias anteriores.

El receptor de la proteína 1 de muerte celular programada (PD-1, también conocido como CD279, aquí en lo sucesivo "PD-1") se expresa en la superficie de las células T activadas, las células B, así como en las células mieloides. Los ligandos de PD-1 incluyen el ligando 1 de muerte programada (PD-L1, también conocido como B7-H1, CD274, aquí en lo sucesivo "PD-L1") y el ligando 2 de muerte programada (PD-L2, también conocido como B7-DC y CD273, aquí en lo sucesivo "PD-L2"), y se expresan normalmente en la superficie de células dendríticas o macrófagos. PD-L1 se expresa en muchos tumores, incluidos los cánceres que se desarrollan en varios órganos, tales como cabeza y cuello, pulmón, estómago, colon, páncreas, mama, riñón, vejiga, ovario, cuello uterino, así como melanoma, glioblastoma, mieloma múltiple, linfoma, y diversas leucemias. PD-L1 se sobreexpresa normalmente en la superficie de las células tumorales, por ejemplo, carcinomas de pulmón de células no pequeñas metastásico (NSLC).

Cuando se unen a los receptores PD-1 de las células T activadas, las células tumorales que expresan PD-L1 pueden aprovechar la señalización inhibitoria de la vía PD-1, limitando o incluso deteniendo así las propias respuestas inmunitarias antitumorales de las células T del huésped. Por otro lado, de esta señalización inhibidora, el bloqueo o la interferencia de la interacción de PD-1 con PD-L1/PD-L2 interrumpiría la inhibición señalada por la vía. Como tales, las inmunoterapias basadas en anticuerpos contra PD-1, PD-L1 o PD-L2 pretenden superar dicha capacidad de resistencia de los tumores a la respuesta inmunitaria y restaurar o reestimular el propio mecanismo inmunitario del huésped contra los tumores. Silas Inman OneLive, 10 de diciembre de 2015, describe que una combinación de Atezolizumab/Nab-Paclitaxel muestra altas tasas de respuesta en el cáncer de mama triple negativo.

Por consiguiente, existe la necesidad de aumentar la eficacia terapéutica de un tratamiento de inmunoterapia de un paciente que padece un cáncer que expresa PD-L1 o PD-L2. La referencia en la presente de memoria a métodos de tratamiento médico se debe entender como que se refiere a un producto para usar en el tratamiento médico.

Compendio

Los aspectos y realizaciones de la presente invención se establecen en las reivindicaciones.

Se ha descubierto inesperada y sorprendentemente que la eficacia terapéutica de un tratamiento de inmunoterapia de un paciente que padece un cáncer que expresa PD-L1 se puede incrementar mediante la administración de (a) una cantidad eficaz terapéuticamente de nanopartículas o una composición de nanopartículas como se describe en la presente memoria, en donde las nanopartículas son capaces de unirse a PD-L1, y (b) mediante una inmunoterapia de PD-1.

El anticuerpo anti PD-L1 según la invención es atezolizumab (TECENTRIQ®), desarrollado por Roche, Suiza (Genentech EE. UU.) y aprobado para el tratamiento del tipo más común de cáncer de vejiga, es decir, el carcinoma urotelial. Véase, por ejemplo, Philips y Atkins "Therapeutic uses of anti-PD-1 and anti-PD-L1 antibodies" International Immunology Vol. 27(1) págs. 39-46.

Atezolizumab es un anticuerpo monoclonal humanizado que se dirige a la vía PD-1 para bloquear la inhibición del punto de control inmunitario señalado de esta manera. La ruta de PD-1 se refiere en la presente memoria a la señalización de la inhibición de las respuestas inmunitarias de las células T tras la interacción de PD-1 y PD-L1/PD-L2. También se están investigando y desarrollando terapias que emplean otros anticuerpos anti-PD-L1 (por ejemplo, avelumab, durvalumab, BMS 936559), para tratar otros tipos distintos de cánceres, que incluyen, por ejemplo, NSCLC no escamoso, carcinoma de células renales y cáncer de vejiga..

Al igual que PD-L1, PD-L2 se une a PD-1. Se informa que PD-L1 y PD-L2 humanos comparten aproximadamente el 41 por ciento de la identidad de la secuencia de aminoácidos entre sí y tienen una funcionalidad similar. La unión de PD-L2 con PD-1 también inhibe la proliferación de células T, así como la producción de citoquinas, lo que demuestra una regulación inhibidora similar de las respuestas inmunitarias de las células T. También se están investigando y desarrollando terapias que emplean anticuerpos anti-PD-L2 para tratar varios de otros tipos de cánceres, que incluyen, por ejemplo, NSCLC no escamoso, carcinoma de células renales y cáncer de vejiga.

Según la presente descripción, las nanopartículas comprenden (a) una proteína transportadora (b) un primer aglutinante, y (c) opcionalmente un agente terapéutico, en donde las nanopartículas son capaces de unirse a PD-L1 o PD-L2. En una realización preferida, las nanopartículas se mantienen unidas mediante enlaces no covalentes entre uno o más de los componentes de las nanopartículas (proteína transportadora, aglutinantes, y/o agente terapéutico).

En un aspecto, se proporciona un método para tratar a un paciente que padece un cáncer que expresa PD-L1 o PD-L2, donde el método comprende administrar al paciente (a) nanopartículas (o una composición de nanopartículas que comprende nanopartículas), en donde cada una de las nanopartículas comprende una proteína transportadora, primeros aglutinantes que tienen una parte de unión a antígeno, en donde dicho antígeno es PD-L1 o PD-L2, y opcionalmente al menos un agente terapéutico, en donde las nanopartículas son capaces de unirse a PD-L1 o PD-L2, y (b) una inmunoterapia con PD-1. En una realización, la inmunoterapia con PD-1 comprende un segundo aglutinante capaz de unirse a PD-1.

En otro aspecto, la presente descripción se refiere a un método para aumentar la eficacia terapéutica de un tratamiento de inmunoterapia de un paciente que padece un cáncer que expresa PD-L1 o PD-L2, el método comprende administrar al paciente (a) una cantidad eficaz terapéuticamente de una composición de nanopartículas como se describe en la presente memoria, y (b) una inmunoterapia con PD-1. En un ejemplo, la inmunoterapia con PD-1 comprende administrar un segundo aglutinante capaz de unirse a PD-1.

En un aspecto, la presente descripción se refiere a un método para tratar a un paciente que padece un cáncer que expresa PD-L1 o PD-L2, donde el método comprende administrar al paciente (a) nanopartículas (o una composición de nanopartículas que comprende nanopartículas), en donde cada una de las nanopartículas comprende albúmina, anticuerpos que tienen una parte de unión a antígeno, en donde dicho antígeno es PD-L1 o PD-L2, y paclitaxel; de manera que las nanopartículas son capaces de unirse a PD-L1 o PD-L2, y (b) una inmunoterapia con PD-1. En un ejemplo, la inmunoterapia de PD-1 comprende un segundo anticuerpo capaz de unirse a PD-1 (un anticuerpo anti-PD-1). En un ejemplo, el anticuerpo es un anticuerpo anti-PD-L1. En un ejemplo, el anticuerpo es un anticuerpo anti-PD-L2.

En algunas realizaciones, se administra al paciente una inmunoterapia con CTLA-4 en combinación con las nanopartículas que son capaces de unirse a PD-L1. En una realización, la inmunoterapia con CTLA-4 se administra además de la inmunoterapia con PD-1. En una realización, la inmunoterapia con CTLA-4 es un anticuerpo anti-CTLA-4.

En un aspecto, cada una de las nanopartículas de la composición de nanopartículas comprende entre aproximadamente 400 hasta aproximadamente 1000 de dichos primeros aglutinantes.

En algunos aspectos, los primeros aglutinantes son aptámeros. En algunos aspectos, el segundo aglutinante de la inmunoterapia con PD-1 es un aptámero.

El anticuerpo anti-PD-LI es atezolizumab. En algunos aspectos, el aglutinante de la inmunoterapia con CTLA-4 es un anticuerpo anti-CTLA-4. En una realización, el anticuerpo anti-CTLA-4 es ipilimumab.

En algunos aspectos, el primer aglutinante y/o el segundo aglutinante es una proteína de fusión. En una realización, la proteína de fusión es AMP-224 (proteína de fusión PD-L2 IgG2a; Amplimmune/GlaxoSmith Klein); AMP-514 (MEDI0680) (proteína de fusión PD-L2; Amplimmune/GlaxoSmith Klein), o un biosimilar de las mismas.

En algunos aspectos, las nanopartículas o la composición de nanopartículas se liofilizan.

En algunos aspectos, el segundo aglutinante de la inmunoterapia con PD-1 es un aglutinante libre, en donde el aglutinante libre no forma complejos ni se integra de otro modo sobre y/o en una composición de nanopartículas. En algunos aspectos, la inmunoterapia con PD-1 es una composición de nanopartículas de inmunoterapia que comprende el segundo aglutinante complejado o integrado sobre y/o en una composición de nanopartículas, en donde la composición de nanopartículas de inmunoterapia comprende una proteína transportadora y dicho segundo aglutinante.

En algunos aspectos, el segundo aglutinante de la composición de nanopartículas de inmunoterapia es un anticuerpo. En algunos aspectos, el segundo aglutinante de la composición de nanopartículas de inmunoterapia es un anticuerpo anti-PD-1. En algunos aspectos, el anticuerpo de la composición de nanopartículas de inmunoterapia comprende atezolizumab, nivolumab, pembrolizumab, avelumab o durvalumab, pidilizumab, BMS 936559, PDR001, o un biosimilar de los mismos.

En algunos aspectos, el segundo aglutinante de la composición de nanopartículas de inmunoterapia es una proteína de fusión. En una realización, la proteína de fusión es AMP-224 (proteína de fusión PD-L2 IgG2a; Amplimmune/GlaxoSmith Klein); AMP-514 (MEDI0680) (proteína de fusión pD-L2; Amplimmune/GlaxoSmith Klein), o un biosimilar de las mismas.

En algunos aspectos, el segundo aglutinante de la composición de nanopartículas de inmunoterapia es un aptámero. En algunos aspectos, el segundo aglutinante de la composición de nanopartículas de inmunoterapia es un aptámero de PD-1.

En algunos aspectos, la composición de nanopartículas y/o nanopartículas de inmunoterapia se liofilizan.

En algunos aspectos, la composición de nanopartículas y la inmunoterapia con PD-1 se administran secuencialmente. En algunos aspectos, la composición de nanopartículas se administra antes de la administración de la inmunoterapia con PD-1. En algunos aspectos, la inmunoterapia con PD-1 se administra antes de la administración de la composición de nanopartículas. En algunos aspectos, la composición de nanopartículas y la inmunoterapia con PD-1 se administran simultáneamente.

En algunos ejemplos, la presente descripción se refiere a un método para aumentar la eficacia terapéutica de un tratamiento de inmunoterapia de un paciente que padece un cáncer que expresa PD-L1 o PD-L2. En un ejemplo, el método comprende administrar al paciente una cantidad eficaz terapéuticamente de las nanopartículas o la composición de nanopartículas como se describe en la presente memoria, y una inmunoterapia con PD-1 o CTLA-4 que comprende un segundo aglutinante. En un ejemplo, el segundo aglutinante es capaz de unirse a PD-1 o CTLA-4. En un ejemplo, la inmunoterapia con PD-1 o CTLA-4 comprende nanopartículas que comprenden una proteína transportadora (por ejemplo, albúmina) y el segundo aglutinante, y opcionalmente, un agente terapéutico (por ejemplo, paclitaxel).

En algunos ejemplos, la presente descripción se refiere a un método para tratar a un paciente que padece un cáncer que expresa PD-L1 o PD-L2. En algunos ejemplos, el método comprende administrar al paciente una cantidad eficaz terapéuticamente de una composición de nanopartículas como se describe en la presente memoria, y administrar al paciente una inmunoterapia que comprende un segundo aglutinante, en donde los aglutinantes de la composición de nanopartículas son capaces de unirse a la PD-L1, PD-L2, o PD-1, y el segundo aglutinante de la inmunoterapia es capaz de unirse a PD-L1, PD-L2, o PD-1.

Sin pretender vincularse a ninguna teoría, se cree que el aglutinante se une a la proteína transportadora a través de interacciones hidrofóbicas, que, por su naturaleza, son débiles. Sin embargo, la actividad de los componentes individuales, así como su relación relativa en la nanopartícula, se conservan a pesar de la liofilización y la reconstitución de la composición. Todavía se contempla además que la unión a la proteína transportadora, por ejemplo, la formación de complejos del aglutinante a la proteína transportadora, se produce a través de un motivo de unión a albúmina en el aglutinante, y/o un motivo de unión a anticuerpo en la proteína transportadora. Los motivos de unión a albúmina y los motivos de unión a anticuerpos se describen en la Solicitud PCT N° PCT/US17/45643, archivada el 4 de Agosto, 2017. En algunas realizaciones, el aglutinante es un anticuerpo humano no terapéutico y no endógeno, una proteína de fusión, o un aptámero.

Se imponen más desafíos debido a que las nanopartículas se emplean en terapia.

Si bien la reorganización de los componentes hidrofóbicos en la nanopartícula se puede mitigar mediante enlaces covalentes entre los componentes, dichos enlaces covalentes plantean desafíos para el uso terapéutico de nanopartículas en el tratamiento del cáncer. El aglutinante, la proteína transportadora, y el agente terapéutico adicional normalmente actúan en diferentes lugares de un tumor y a través de diferentes mecanismos. Los enlaces no covalentes permiten que los componentes de la nanopartícula se disocien en el tumor. Así, mientras que un enlace covalente puede ser ventajoso para la liofilización, puede ser desventajoso para el uso terapéutico.

El tamaño de las nanopartículas, y la distribución del tamaño, también son importantes. Las nanopartículas se pueden comportar de manera diferente según su tamaño. En tamaños grandes, las nanopartículas o la aglomeración de las partículas pueden bloquear los vasos sanguíneos, lo que puede afectar el rendimiento y la seguridad de la composición.

Cuando se administra por vía intravenosa, las partículas grandes (por ejemplo, mayores de 1 pm) son normalmente desfavorables porque se pueden alojar en la microvasculatura de los pulmones. Al mismo tiempo, se pueden acumular partículas más grandes en el tumor o en órganos específicos. Por ejemplo, partículas de vidrio de 20-60 micras TheraSphere® que se inyectan en la arteria hepática que alimenta un tumor del hígado para la administración de un elemento radiactivo, también conocido como radioembolización, se emplean clínicamente para el cáncer de hígado.

Por lo tanto, para la administración intravenosa, se emplean partículas de menos de 1 pm. Las partículas de más de 1 pm se administran, más habitualmente, directamente en un tumor ("inyección directa") o en una arteria que alimenta el sitio del tumor.

Finalmente, los crioprotectores y agentes que ayudan en el proceso de liofilización deben ser seguros y tolerados para uso terapéutico.

Sin pretender imponer ninguna teoría, se cree que el aglutinante se une a la proteína transportadora a través de interacciones hidrofóbicas que, por su naturaleza, son débiles. Sin embargo, la actividad de los componentes individuales, y su relación relativa en la nanopartícula aún se consiguen a pesar de la liofilización y reconstitución de la composición.

En un aspecto, en la presente memoria se proporcionan composiciones de nanopartículas que comprenden nanopartículas en donde cada una de las nanopartículas comprende una proteína transportadora, aglutinantes y, opcionalmente, al menos un agente terapéutico, en donde los aglutinantes se disponen hacia afuera de la superficie de las nanopartículas y en donde las nanopartículas son capaces de unirse a PD-L1, PD-L2, o PD-1 in vivo.

En otro aspecto, en la presente memoria se proporcionan composiciones de nanopartículas que comprenden nanopartículas en donde cada una de las nanopartículas comprende una proteína transportadora que no es albúmina, aglutinantes, y opcionalmente, al menos un agente terapéutico, en donde los aglutinantes se disponen en una superficie exterior de las nanopartículas y en donde las nanopartículas son capaces de unirse a PD-L1, PD-L2, o PD-1 in vivo. En una realización, las nanopartículas comprenden entre aproximadamente 100 a aproximadamente 1000 aglutinantes, preferiblemente entre aproximadamente 400 a aproximadamente 800 aglutinantes. Cuando las nanopartículas se multimerizan, el número de aglutinantes aumenta proporcionalmente. Por ejemplo, si una nanopartícula de 160 nm contiene 400 aglutinantes, un dímero de 320 nm contiene aproximadamente 800 aglutinantes.

En otro aspecto, en la presente memoria se proporcionan composiciones de nanopartículas que comprenden nanopartículas, en donde cada una de las nanopartículas comprende proteínas transportadoras, aglutinantes y, opcionalmente, al menos un agente terapéutico que no es paclitaxel, en donde las nanopartículas son capaces de unirse a PD-L1, PD-L2, o PD-1 in vivo. Las nanopartículas comprenden paclitaxel. En una realización, los aglutinantes se disponen sobre una superficie de las nanopartículas de manera que una parte de unión del aglutinante (por ejemplo, la región variable de un anticuerpo) se dirige hacia el exterior desde esa superficie.

En otras realizaciones, las nanopartículas se multimerizan, por ejemplo, dimerizan La multimerización se puede observar, como múltiplos del peso o tamaño de la molécula unitaria, por ejemplo, las partículas de 160 nm se multimerizan a aproximadamente 320 nm, 480 nm, 640 nm, etc. En algunas realizaciones, menos del 20 % de las nanopartículas en una población son multímeros. En algunas realizaciones, más del 80 % de las nanopartículas en una población son multímeros.

En una realización, la proporción en peso del fármaco unido al transportador respecto al aglutinante (por ejemplo, paclitaxel unido a albúmina y anticuerpo anti-PD-L1 o anti-PD-L2) está entre aproximadamente 5:1 a aproximadamente 1:1. En una realización, la proporción en peso del fármaco unido al transportador respecto al aglutinante es de aproximadamente 10:4. En una realización, los aglutinantes son una capa sustancialmente única en toda o en parte de la superficie de la nanopartícula. En una realización, menos del 0,01 % de las nanopartículas en la composición tienen un tamaño seleccionado de más de 200 nm, más de 300 nm, más de 400 nm, más de 500 nm, más de 600 nm, más de 700 nm y más de 800 nm. Se cree que los tamaños más grandes son el resultado de la multimerización de varias nanopartículas, cada una de las cuales comprende un núcleo y un recubrimiento de aglutinante en toda o en parte de la superficie de cada nanopartícula.

La invención incluye además composiciones liofilizadas, y composiciones liofilizadas que no difieren materialmente de las propiedades de las nanopartículas recién preparadas, o son las mismas que ellas. En particular, la composición liofilizada, al resuspenderla en una disolución acuosa, es similar o idéntica a la composición fresca en términos de tamaño de partícula, distribución de tamaño de partícula, toxicidad para células cancerosas, afinidad del aglutinante, y especificidad aglutinante. Sorprendentemente, las nanopartículas liofilizadas después de la resuspensión mantienen las propiedades de las nanopartículas recién preparadas, a pesar de la presencia de dos componentes proteicos diferentes en estas partículas.

En un aspecto, esta descripción se refiere a nanopartículas liofilizadas o una composición de nanopartículas liofilizadas que comprende nanopartículas, en donde cada una de las nanopartículas comprende un núcleo de fármaco unido a un transportador y una cantidad de aglutinante que se une a PD-L1, PD-L2 o PD-1. En una realización, el aglutinante se dispone sobre una superficie del núcleo de modo que una parte de la unión del aglutinante se dirige hacia afuera desde esa superficie, en donde los aglutinantes conservan su asociación con la superficie exterior de la nanopartícula tras la reconstitución con una disolución acuosa. En una realización, la composición liofilizada es estable a temperatura ambiente durante al menos aproximadamente 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses, 7 meses, 8 meses, 9 meses, 10 meses, 11 meses, 12 meses, o más. En una realización, la composición liofilizada es estable a temperatura ambiente durante al menos 3 meses. En una realización, las nanopartículas reconstituidas mantienen la actividad del agente terapéutico y son capaces de unirse a la diana in vivo. En otra realización, la composición es estable entre aproximadamente 20°C a aproximadamente 25°C durante aproximadamente 12 meses o más.

En una realización, el tamaño medio de la nanopartícula reconstituida es de aproximadamente 90 nm a aproximadamente 1 pm. En una realización preferida, el tamaño medio de la nanopartícula reconstituida es de aproximadamente 100 nm a aproximadamente 200 nm, y más preferiblemente de aproximadamente 100 nm a aproximadamente 160 nm. En una realización, el tamaño medio de la nanopartícula reconstituida es de más de 800 nm a aproximadamente 3,5 pm, que comprende multímeros de nanopartículas más pequeñas, por ejemplo, multímeros de nanopartículas de 90-200 nm. En una realización, la relación en peso del núcleo respecto al aglutinante es de más de 1:1 a aproximadamente 1:3. En una realización, el tamaño medio de la nanopartícula reconstituida es de aproximadamente 90 nm a aproximadamente 225 nm.

En un aspecto, esta descripción se refiere a nanopartículas liofilizadas o una composición de nanopartículas liofilizadas que comprende nanopartículas, en donde cada una de las nanopartículas comprende: (a) un núcleo de paclitaxel unido a albúmina y (b) un aglutinante que se une a PD-L1, PD-L2 o PD-1 dispuesto en una superficie del núcleo de paclitaxel unido a albúmina de manera que la parte de unión del aglutinante se dirige hacia el exterior de esa superficie, en donde los aglutinantes mantienen su asociación con la superficie de la nanopartícula tras la reconstitución con una disolución acuosa, y dicha composición liofilizada es estable de aproximadamente 20°C a aproximadamente 25°C durante al menos 3 meses y las nanopartículas reconstituidas son capaces de unirse a PD-L1, PD-L2 o PD-1 in vivo.

En una realización, el tamaño medio de la nanopartícula reconstituida no es sustancialmente diferente del tamaño de partícula de las nanopartículas recién preparadas. En algunas realizaciones, los tamaños medios de partícula están entre 90 nm y 800 nm, incluidos 90, 100, 110, 130, 150, 160, 200, 300, 400, 500, 600, 700 o 800 nm. En otras realizaciones, las partículas medias son más grandes, por ejemplo, desde más de 800 nm hasta aproximadamente 3,5 pm. En algunas realizaciones, las partículas son multímeros de nanopartículas. En algunas realizaciones, las nanopartículas tienen tamaños medios de partícula de aproximadamente 90 nm a aproximadamente 225 nm, recién preparadas o después de la liofilización y resuspensión en una disolución acuosa adecuada para inyección.

En algunas realizaciones, la proporción en peso de paclitaxel unido a albúmina respecto a los aglutinantes está entre aproximadamente 5:1 a aproximadamente 1:1. En otras realizaciones, la proporción en peso de paclitaxel unido a albúmina respecto al aglutinante es de aproximadamente 10:4. En otras realizaciones, la proporción en peso de paclitaxel unido a albúmina respecto al aglutinante es de más de 1:1 a aproximadamente 1:3.

En algunos ejemplos, el núcleo es paclitaxel unido a albúmina (por ejemplo, ABRAXANE®), y los aglutinantes se seleccionan de aglutinantes que reconocen selectivamente PD-L1 o PD-L2. En algunos ejemplos, el núcleo es paclitaxel unido a albúmina (por ejemplo, ABRAXANE®), y los aglutinantes reconocen selectivamente a PD-1. En algunos ejemplos, el núcleo es paclitaxel unido a albúmina (por ejemplo, ABRAXANE®), y los aglutinantes reconocen CTLA-4 de forma selectiva.

En algunas realizaciones, el al menos único agente terapéutico se localiza dentro de la nanopartícula. En otras realizaciones, el al menos único agente terapéutico se localiza en la superficie exterior de la nanopartícula. En aún otras realizaciones, el al menos único agente terapéutico se localiza dentro de la nanopartícula y en la superficie exterior de la nanopartícula.

En algunas realizaciones, la nanopartícula contiene más de un tipo de agente terapéutico. Por ejemplo, un taxano y un fármaco de platino, por ejemplo, paclitaxel y cisplatino.

En algunos ejemplos, los aglutinantes comprenden atezolizumab, nivolumab, pembrolizumab, avelumab o durvalumab, pidilizumab, BMS 936559, o biosimilares de los mismos. En algunas realizaciones, los agentes aglutinantes son sustancialmente una única capa de aglutinantes en toda o en parte de la superficie de la nanopartícula.

En otras realizaciones, los anticuerpos están menos glicosilados que los que se encuentran normalmente en los anticuerpos humanos naturales. Tal glicosilación puede estar influenciada, por ejemplo, por el sistema de expresión, o la presencia de inhibidores de la glicosilación durante la expresión. En algunas realizaciones, el estado de glicosilación de un anticuerpo u otro aglutinante se altera mediante acción enzimática o química.

En algunas realizaciones, el al menos único agente terapéutico se selecciona de abiraterona, bendamustina, bortezomib, carboplatino, cabazitaxel, cisplatino, clorambucilo, dasatinib, docetaxel, doxorrubicina, epirrubicina, erlotinib, etopósido, everolimus, gefitinib, idarrubicina, imatinib, hidroxiurea, imatinib, lapatinib, leuprorelina, melfalán, metotrexato, mitoxantrona, nedaplatino, nilotinib, oxaliplatino, paclitaxel, pazopanib, pemetrexed, picoplatino, romidepsina, satraplatino, sorafenib, vemurafenib, sunitinib, tenipósido, triplatino, vinblastina, vinorelbina, vincristina, y ciclofosfamida.

En algunas realizaciones, los aglutinantes, la proteína transportadora y, cuando está presente, el agente terapéutico, se unen a través de enlaces no covalentes.

En algunos ejemplos, la proteína transportadora se selecciona de gelatina, elastina, gliadina, legumbre, zeína, una proteína de soja, una proteína de leche, y una proteína de suero. En realizaciones, la proteína transportadora es albúmina, por ejemplo, albúmina de suero humano. En algunas realizaciones, la proteína transportadora es una proteína recombinante, por ejemplo, albúmina de suero humano recombinante.

En algunas realizaciones, la composición de nanopartículas se formula para administración intravenosa. En otras realizaciones, la composición de nanopartículas se formula para inyección o perfusión directa en un tumor.

En algunas realizaciones, el segundo aglutinante de la inmunoterapia se formula para administración intravenosa. En otras realizaciones, el segundo aglutinante de la inmunoterapia se formula para inyección o perfusión directa en un tumor.

En algunas realizaciones, el tamaño medio de nanopartícula en la composición de nanopartículas es de más de 800 nm hasta aproximadamente 3,5 gm.

En algunas realizaciones, las nanopartículas tienen una constante de disociación entre aproximadamente 1 x 10' 11 M y aproximadamente 1 x 10-9 M.

En otro aspecto, en la presente memoria se proporcionan métodos para preparar composiciones de nanopartículas, en donde dichos métodos comprenden poner en contacto la proteína transportadora y, opcionalmente, al menos un agente terapéutico, con los anticuerpos en una disolución que tiene un pH de entre 5,0 y 7,5 y una temperatura entre aproximadamente 5°C y aproximadamente 60°C, entre aproximadamente 23°C y aproximadamente 60°C, o entre aproximadamente 55°C y aproximadamente 60°C en condiciones y proporciones de componentes que permitirán la formación de las nanopartículas deseadas. En una realización, la nanopartícula se prepara a 55-60°C y pH 7,0. En otro aspecto, en la presente memoria se proporcionan métodos para preparar las composiciones de nanopartículas, en donde dicho método comprende (a) poner en contacto la proteína transportadora y, opcionalmente, al menos un agente terapéutico para formar un núcleo y (b) poner en contacto el núcleo con los anticuerpos en una disolución que tiene un pH de aproximadamente 5,0 a aproximadamente 7,5 a una temperatura entre aproximadamente 5°C y aproximadamente 60°C, entre aproximadamente 23°C y aproximadamente 60°C, o entre aproximadamente 55°C y aproximadamente 60°C en condiciones y proporciones de componentes que permitirán la formación de las nanopartículas deseadas.

La cantidad de componentes (por ejemplo, proteína transportadora, anticuerpos, agentes terapéuticos, combinaciones de los mismos) se controla para proporcionar la formación de las nanopartículas deseadas. Una composición en donde la cantidad de componentes es demasiado diluida no formará las nanopartículas como se describe en la presente memoria. En una realización preferida, la proporción en peso de proteína transportadora respecto al aglutinante es 10:4. En algunas realizaciones, la cantidad de proteína transportadora está entre aproximadamente 1 mg/mL y aproximadamente 100 mg/mL. En algunas realizaciones, la cantidad de aglutinante está entre aproximadamente 1 mg/mL y aproximadamente 30 mg/mL. Por ejemplo, en algunas realizaciones, la proporción de proteína transportadora:aglutinante:disolución es de aproximadamente 9 mg de proteína transportadora (por ejemplo, albúmina) a 4 mg de aglutinante en 1 mL de disolución (por ejemplo, disolución salina). También se puede añadir una cantidad de agente terapéutico (por ejemplo, paclitaxel) a la proteína transportadora. Las nanopartículas, como se describen en la presente memoria, están preformadas, lo que significa que la proteína transportadora (por ejemplo, albúmina), el agente terapéutico (por ejemplo, paclitaxel) y los aglutinantes (por ejemplo, anticuerpos) se mezclan in vitro en condiciones que permitan la formación de las nanopartículas, antes de la administración al paciente (y/o antes de la liofilización de las nanopartículas). En algunas realizaciones, las nanopartículas preformadas se diluyen en una disolución acuosa antes de la administración al paciente. A modo de ejemplo no limitante, las nanopartículas preformadas se pueden diluir para su administración no más de 5, 10, 20, 30, 45 minutos, o 60 minutos, o 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, o 24 horas antes de la administración al paciente. En otras realizaciones, las nanopartículas se preparan como se indica anteriormente, y después se liofilizan.

En otro aspecto, en la presente memoria se proporcionan métodos para tratar una célula cancerosa, el método comprende poner en contacto la célula con una cantidad eficaz de una composición de nanopartículas y una inmunoterapia descrita en la presente memoria para tratar la célula cancerosa.

En otro aspecto, en la presente memoria se proporcionan métodos para tratar un tumor en un paciente que lo necesita, el método comprende poner en contacto el tumor con una cantidad eficaz de una composición de nanopartículas y una inmunoterapia descrita en la presente memoria para tratar el tumor. En algunas realizaciones, se reduce el tamaño del tumor.

Generalmente, la inmunoterapia (inmunoterapia con PD-1 y/o inmunoterapia con CTLA-4) se administra de manera compatible con los protocolos clínicos estándar, por ejemplo, conforme a una etiqueta aprobada por la FDA (u otro organismo regulador).

En algunas realizaciones, los métodos proporcionados en la presente memoria incluyen las etapas de: a) administrar la composición de nanopartículas y la inmunoterapia una vez a la semana durante tres semanas; b) suspender la administración de la composición de nanopartículas y la inmunoterapia durante una semana; y c) repetir las etapas a) y b) según sea necesario para tratar el cáncer o tumor.

En realizaciones relacionadas, el tratamiento comprende la administración de la composición de nanopartículas antes de la administración de la inmunoterapia. En una realización, la composición de nanopartículas se administra entre aproximadamente 6 y 48, o 12 y 48 horas antes de la administración de la inmunoterapia. En otra realización, la composición de nanopartículas se administra entre 6 y 12 horas antes de la administración de la inmunoterapia. En otra realización más, la composición de nanopartículas se administra entre 2 y 8 horas antes de la administración de la inmunoterapia. En aún otras realizaciones, la composición de nanopartículas se administra una semana antes de la administración de la inmunoterapia.

En realizaciones relacionadas, el tratamiento comprende la administración de la inmunoterapia antes de la administración de la composición de nanopartículas. En una realización, la inmunoterapia se administra entre aproximadamente 6 y 48, o 12 y 48 horas antes de la administración de la composición de nanopartículas. En otra realización, la inmunoterapia se administra entre 6 y 12 horas antes de la administración de la composición de nanopartículas. En otra realización más, la inmunoterapia se administra entre 2 y 8 horas antes de la administración de la composición de nanopartículas. En aún otras realizaciones, la inmunoterapia se administra una semana antes de la administración de la composición de nanopartículas.

En algunas realizaciones, la cantidad eficaz terapéuticamente de la composición de nanopartículas comprende de aproximadamente 75 mg/m2 a aproximadamente 175 mg/m2 de la proteína transportadora (es decir, miligramos de proteína transportadora por m2 del paciente). En otras realizaciones, la cantidad eficaz terapéuticamente comprende de aproximadamente 75 mg/m2 a aproximadamente 175 mg/m2 de agente terapéutico (por ejemplo, paclitaxel). En otras realizaciones, la cantidad eficaz terapéuticamente comprende de aproximadamente 30 mg/m2 a aproximadamente 70 mg/m2 del aglutinante. En aún otras realizaciones, la cantidad eficaz terapéuticamente comprende de aproximadamente 30 mg/m2 a aproximadamente 70 mg/m2 de bevacizumab.

En una realización, la composición liofilizada comprende de aproximadamente 75 mg/m2 a aproximadamente 175 mg/m2 de la proteína transportadora que es preferiblemente albúmina; de aproximadamente 30 mg/m2 a aproximadamente 70 mg/m2 del aglutinante; y de aproximadamente 75 mg/m2 a aproximadamente 175 mg/m2 de paclitaxel.

En algunos ejemplos, la presente descripción se refiere a un kit que comprende: (a) una cantidad de la composición de nanopartículas como se describe en la presente memoria, (b) una cantidad de un agente de inmunoterapia capaz de unirse a PD-1 y, opcionalmente (c) instrucciones de uso.

Breve descripción de los dibujos

Las siguientes figuras son representativas únicamente de la invención y no pretenden ser una limitación. En aras de la coherencia, las nanopartículas que emplean ABRAXANE® y rituximab emplean el acrónimo "AR" y el número de después de AR, tal como AR160, indica el tamaño medio de partícula de estas nanopartículas (en nanómetros, basado en el análisis de Mastersizer 2000). Asimismo, cuando el aglutinante es atezolizumab, el acrónimo es "AA" y el número que sigue es el tamaño medio de partícula de las nanopartículas (en nanómetros, basado en el análisis de Malvern Nanosight).

La Figura. 1 representa los resultados de un experimento en el que se marcaron células de linfoma Daudi positivas para CD20 con anti-CD20 humano marcado con fluorescencia o control de isotipo coincidente en los paneles F y A, respectivamente, y se analizaron mediante citometría de flujo. En los otros paneles, las células de Daudi se trataron previamente con ABRAXANE® (ABX), nanopartículas de ABX/rituximab (AR160), AR160 liofilizado y resuspendido (AR160L), o Rituxan antes del mareaje con CD20. La unión de CD20 se bloqueó específicamente mediante las nanopartículas AR160 y Rituxan, pero no por ABX en solitario, lo que indica que AR160 y AR160L se unen a CD20 en estas células y bloquean la unión del anticuerpo anti-CD20 fluorescente.

La Figura 2 es una superposición de histograma de los diagramas de dispersión de la Figura 1.

Las Figuras 3A-B representan comparaciones del tamaño de partícula de ABX en solitario con respecto a las nanopartículas de ABX/rituximab (AR; Figura 3A) y nanopartículas de ABX/trastuzumab (AT; Figura 3B), tanto recién preparadas como liofilizadas/resuspendidas.

La Figura 4 compara la toxicidad de las partículas ABX y AR en un ensayo de proliferación de células de Daudi. Las Figuras 5A-5C representan los resultados obtenidos en ratones tratados bien con ABRAXANE® marcado, con ABRAXANE® marcado recubierto con anticuerpos no específicos (bevacizumab) (AB IgG). o bien con ABRAXANE® marcado recubierto con Rituximab (AR160). La Figura 5A representa la acumulación de fluorescencia en regiones de interés (ROI, de sus siglas en inglés) en cada tumor (ROI 2, 3, y 4) y en áreas de origen (ROI 1, 5, y 6). ROI 1, 5 y 6 sirven como referencias de fondo. La Figura 5B es un gráfico de barras de la fluorescencia media por unidad de área tumoral de ratones en los tres grupos de tratamiento y muestra la liberación total del tumor. La Figura 5C es un gráfico de barras de la fluorescencia media por unidad de área tumoral, normalizada por las ROI de fondo, para proporcionar la proporción de fármaco administrado al tumor frente al cuerpo. Los datos demuestran que la administración de nanopartículas AR160 da como resultado una mayor fluorescencia en comparación con ABRAXANE® en solitario o ABRAXANE® recubierto de anticuerpos no específicos.

La Figura 6 representa la supervivencia de los ratones tratados con una dosis única de disolución salina, BEV24 (bevacizumab a 24 mg/kg), ABX30 (ABX a 30 mg/kg), AB160 (12 mg/kg BEV y 30 mg/kg ABX) y AB225 (24 mg/kg BEV y 30 mg/kg ABX). A los 30 días posteriores a la administración, la supervivencia de los ratones tratados con AB225 y con AB160 supera con creces la supervivencia de los ratones tratados con BEV en solitario o ABRAXANE® en solitario.

La Figura 7 muestra la afinidad de unión entre atezolizumab y ABX. Se determinó que la Kd era 1,462x10-9. La interferometría de biocapa (BLitz) (Forte Bioscience) se realizó empleando sondas de estreptavidina.

La Figura 8A muestra la distribución del tamaño de partícula para ABX en solitario (tamaño medio de 90 nm) y nanopartículas de ABX-atezolizumab (AA; tamaño medio de 129 nm), según lo determinado mediante Mastersizer NS300. La Figura 8B es una fotografía de las nanopartículas de ABX-atezolizumab de la Figura 8A.

Las Figuras 9A-9E muestran la citometría de flujo de nanopartículas de ABX-atezolizumab (AA130) que compiten con el anticuerpo anti-PD-L1 marcado para unirse a una línea celular de melanoma humano positiva para PD-L1, C8161. Las células C8161 se trataron previamente con anticuerpo de control de isotipo (Figura 9A), no se trataron (Figura 9B), o se trataron con ABRAXANE® (Figura 9C), atezolizumab (Figura 9D), o AA130 (FIG. 9E), después del marcado con anticuerpo anti-PD-L1 marcado con fluorescencia.

La Figura 10 muestra la toxicidad dependiente de la dosis de ABX (línea continua) y AA130 (línea discontinua) en células C8161.

Las Figuras 11A-11D muestran el cambio en el volumen del tumor a lo largo del tiempo en ratones a los que se les inyectó 2x106 células tumorales de melanoma C8161 positivas para PD-L1, después se trataron con 100 ul de inyección IV en la vena de la cola con disolución salina (Figura 11A), atezolizumab en solitario (18 mg/kg; Figura 11B), ABX en solitario (45 mg/kg; Figura 11C) y AA130 (18 mg/kg de atezolizumab y 45 mg/kg de ABX; Figura 11D) una vez. El crecimiento tumoral se controló 3 veces por semana. El tamaño del tumor se calculó con la ecuación: (largo x ancho2)/2.

La Figura 12 representa la supervivencia de los ratones del experimento que se muestra en las Figuras 11A-11D. Las curvas de Kaplan Meier se generaron empleando el programa informático Graph Pad. La supervivencia media para cada grupo era de 14, 13, 16, y 21,5 días para disolución salina, atezolizumab, Abraxane y AA130, respectivamente. Las diferencias de supervivencia entre AA130 y todos los demás grupos eran significativas, con valores de p de 0,0008 para la disolución salina, 0,0015 para atezolizumab, y 0,0113 para ABX.

Descripción detallada

Después de leer esta descripción, será evidente para un experto en la técnica cómo implementar la invención en varias realizaciones alternativas y aplicaciones alternativas. Sin embargo, en la presente memoria no se describirán todas las diversas realizaciones de la presente invención. Se entenderá que las realizaciones presentadas aquí se presentan únicamente a modo de ejemplo, y no como limitación. Como tal, esta descripción detallada de varias realizaciones alternativas no se debe interpretar como una limitación del alcance o amplitud de la presente invención como se establece a continuación.

Antes de divulgar y describir la presente invención, se debe entender que los aspectos descritos a continuación no se limitan a composiciones específicas, métodos de preparación de dichas composiciones, o usos de las mismas como tales pueden, por supuesto, variar. También se debe entender que la terminología empleada en la presente memoria tiene el propósito de describir aspectos particulares únicamente y no pretende ser limitante.

La descripción detallada de la invención se divide en varias secciones únicamente por comodidad del lector y la descripción que se encuentra en cualquier sección se puede combinar con la de otra sección. Se pueden usar títulos o subtítulos en la memoria descriptiva para comodidad del lector, que no pretenden influir en el alcance de la presente invención.

Definiciones

A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos empleados en la presente memoria tienen el mismo significado que el que comúnmente entiende un experto en la técnica a la que pertenece esta invención. En esta memoria y en las reivindicaciones que siguen, se hará referencia a una serie de términos que se definirán para tener los siguientes significados:

La terminología empleada en la presente memoria tiene el propósito de describir únicamente realizaciones particulares y no pretende ser limitante de la invención. Como se emplea en la presente memoria, las formas singulares "un", "una" y "el", “la” también incluyen las formas plurales, a menos que el contexto indique claramente lo contrario.

"Opcional" u "opcionalmente" significa que el evento o circunstancia descrito posteriormente puede ocurrir o no, y que la descripción incluye instancias en las que ocurre el evento o circunstancia e instancias en las que no ocurre. El término "aproximadamente" cuando se emplea antes de una designación numérica, por ejemplo, temperatura, tiempo, cantidad, concentración, y otros, incluido un intervalo, indica aproximaciones que pueden variar en (+) o (-) 10 %, 5 %, 1 %, o cualquier subintervalo o subvalor entre ellos. Preferiblemente, el término "aproximadamente" cuando se emplea con respecto a una cantidad de dosis significa que la dosis puede variar en /- 10 %. Por ejemplo, "de aproximadamente 400 a aproximadamente 800 aglutinantes" indica que una superficie exterior de una nanopartícula contiene una cantidad de aglutinante entre 360 y 880 partículas.

"Que comprende" o "comprende" pretende significar que las composiciones y los métodos incluyen los elementos enumerados, pero sin excluir otros. Cuando se emplea para definir composiciones y métodos, "que consiste esencialmente en" significará la exclusión de otros elementos de importancia esencial para la combinación para el propósito establecido. Por lo tanto, una composición que consiste esencialmente en los elementos como se define en la presente memoria no excluiría otros materiales o etapas que no afecten materialmente la característica o características básicas y novedosas de la invención reivindicada. "Consiste en" significará que excluye más que elementos traza de otros ingredientes y etapas sustanciales del método. Las realizaciones definidas por cada uno de estos términos de transición están dentro del alcance de esta invención.

El término "nanopartícula" o "complejo de nanopartícula", como se emplea en la presente memoria, se refiere a partículas que tienen al menos una dimensión inferior a 5 micras. En realizaciones preferidas, tal como para la administración intravenosa, la nanopartícula tiene al menos una dimensión que es inferior a 1 micra. Para la administración directa, la nanopartícula es más grande. La invención contempla expresamente partículas incluso más grandes.

En una población de partículas, los tamaños de las partículas individuales se distribuyen aproximadamente en una media. Por lo tanto, los tamaños de partículas de la población se pueden representar mediante una media y también mediante percentiles. D50 es el tamaño de partícula por debajo del cual cae el 50 % de las partículas. El 10 % de las partículas son más pequeñas que el valor D IO y el 90 % de las partículas son más pequeñas que D90. Cuando no está claro, el tamaño "medio" es equivalente a D50. Entonces, por ejemplo, AB160 y AR160 se refieren a nanopartículas que tienen un tamaño medio de 160 nanómetros.

El término "nanopartícula" también puede abarcar multímeros discretos de nanopartículas unitarias más pequeñas. Por ejemplo, una partícula de 320 nm comprende un dímero de una nanopartícula unitaria de 160 nm. Para las nanopartículas de 160 nm, los multímeros serían, por lo tanto, de aproximadamente 320 nm, 480 nm, 640 nm, 800 nm, 960 nm, 1120 nm, etc.

El término "proteína transportadora", como se emplea en la presente memoria, se refiere a proteínas que funcionan para transportar aglutinantes y/o agentes terapéuticos. Los aglutinantes de la presente descripción se pueden unir de forma reversible a las proteínas transportadoras. Ejemplos de proteínas transportadoras se discuten con más detalle a continuación.

El término "núcleo", como se emplea en la presente memoria, se refiere a la parte central o interna de la nanopartícula que puede estar compuesta por una proteína transportadora, una proteína transportadora y un agente terapéutico, u otros agentes o combinación de agentes. En algunas realizaciones, una parte del aglutinante se puede asociar con el núcleo (por ejemplo, unirse de forma no covalente).

El término "agente terapéutico", como se emplea en la presente memoria, significa un agente que es útil terapéuticamente, por ejemplo, un agente para el tratamiento, remisión o atenuación de un estado de enfermedad, condición fisiológica, síntomas, o factores etiológicos, o para la evaluación o diagnóstico de los mismos. Un agente terapéutico puede ser un agente quimioterapéutico, por ejemplo, inhibidores mitóticos, inhibidores de topoisomerasa, esteroides, antibióticos antitumorales, antimetabolitos, agentes alquilantes, enzimas, inhibidores de proteasoma, o cualquier combinación de los mismos.

Como se emplea en la presente memoria, el término "aglutinante", "aglutinante específico para" o "aglutinante que se une específicamente" se refiere a un agente que se une a un antígeno diana y no se une significativamente a compuestos no relacionados. Ejemplos de aglutinantes que se pueden usar eficazmente en los métodos descritos incluyen, pero no se limitan a, lectinas, proteínas, y anticuerpos, tal como anticuerpos monoclonales, por ejemplo, anticuerpos monoclonales humanizados, anticuerpos quiméricos, o anticuerpos policlonales, o fragmentos de unión a antígeno de los mismos, así como aptámeros, proteínas de fusión, y aptámeros. En una realización, el aglutinante es un anticuerpo exógeno. Un anticuerpo exógeno es un anticuerpo que no se produce de forma natural en un mamífero en particular, por ejemplo, en un ser humano, por el sistema inmunitario de los mamíferos.

El término "anticuerpo" o "anticuerpos" como se emplea en la presente memoria se refiere a moléculas de inmunoglobulina y partes de moléculas de inmunoglobulina activas inmunológicamente (es decir, moléculas que contienen un sitio de unión a antígeno que se une inmunoespecíficamente a un antígeno). El término también se refiere a anticuerpos compuestos por dos cadenas pesadas de inmunoglobulina y dos cadenas ligeras de inmunoglobulina, así como a una variedad de formas que incluyen anticuerpos de longitud completa y partes de los mismos; que incluyen, por ejemplo, una molécula de inmunoglobulina, un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo quimérico, un anticuerpo injertado con CDR, un anticuerpo humanizado, un Fab, un Fab', un F(ab')2, un Fv, un Fv enlazado por disulfuro, un scFv, un anticuerpo de un único dominio (dAb), un diacuerpo, un anticuerpo multiespecífico, un anticuerpo dual específico, un anticuerpo anti-idiotipo, un anticuerpo biespecífico, un fragmento del mismo que se une al epítopo activo funcionalmente, anticuerpos híbridos bifuncionales (por ejemplo, Lanzavecchia et al., Eur. J Immunol. 17, 105 (1987)) y cadenas simples (por ejemplo, Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EE. UU., 85, 5879-5883 (1988) y Bird et al., Science 242, 423-426 (1988). (Véase, en general, Hood et al., Immunology, Benjamin, N.Y., 2ND ed. (1984); Harlow y Lane, Antibodies. A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory (1988)); Hunkapiller y Hood, Nature, 323, 15-16 (1986)). El anticuerpo puede ser de cualquier tipo (por ejemplo, IgG, IgA, IgM, IgE o IgD). Preferiblemente, el anticuerpo es IgG. Un anticuerpo puede ser no humano (por ejemplo, de ratón, cabra, o cualquier otro animal), completamente humano, humanizado, o quimérico. El anticuerpo o anticuerpos incluyen cualquier biosimilar o biosimilares de los anticuerpos descritos en la presente memoria. Los biosimilares, tal como se emplean en la presente memoria, se refieren a un producto biofarmacéutico que se considera comparable en calidad, seguridad, y eficacia a un producto de referencia comercializado por una empresa innovadora (Sección 351 (i) de la Ley de Servicios de Salud Pública (42 U.S.C. 262(i))).

El término "constante de disociación", también conocido como "K^d," se refiere a una cantidad que expresa el grado en que una sustancia en particular se separa en componentes individuales (por ejemplo, la proteína transportadora, el anticuerpo, y el agente terapéutico opcional).

Los términos "liofilizado", "liofilización" y similares, como se emplean en la presente memoria, se refieren a un proceso mediante el cual el material (por ejemplo, nanopartículas) que se va a secar, primero se congela y después el hielo o el disolvente congelado se elimina por sublimación en un ambiente a vacío. Se incluye opcionalmente un excipiente en las formulaciones preliofilizadas para mejorar la estabilidad del producto liofilizado durante el almacenamiento. En algunas realizaciones, las nanopartículas se pueden formar a partir de componentes liofilizados (proteína transportadora, anticuerpo y agente terapéutico opcional) antes de su uso como agente terapéutico. En otras realizaciones, la proteína transportadora, el aglutinante, por ejemplo, el anticuerpo, y el agente terapéutico opcional se combinan primero en nanopartículas y después se liofilizan. La muestra liofilizada puede contener además excipientes adicionales.

El término "agentes de carga" comprende agentes que proporcionan la estructura del producto liofilizado. Ejemplos comunes empleados para los agentes de carga incluyen manitol, glicina, lactosa y sacarosa. Además de proporcionar una torta elegante farmacéuticamente, los agentes de carga también pueden impartir cualidades útiles con respecto a la modificación de la temperatura de colapso, proporcionar protección contra la congelación y la descongelación, y mejorar la estabilidad de la proteína durante el almacenamiento a largo plazo. Estos agentes también pueden servir como modificadores de la tonicidad. En algunas realizaciones, las composiciones liofilizadas descritas en la presente memoria comprenden agentes de carga. En algunas realizaciones, las composiciones liofilizadas descritas en la presente memoria no comprenden agentes de carga.

El término "tampón" abarca aquellos agentes que mantienen el pH de la disolución en un intervalo aceptable antes de la liofilización y puede incluir succinato (sódico o potásico), histidina, fosfato (sódico o potásico), Tris(tris(hidroximetil)aminometano), dietanolamina, citrato (sodio), y similares. El tampón tiene un pH en el intervalo de aproximadamente 5,5 a aproximadamente 6,5; y preferiblemente tiene un pH de aproximadamente 6,0. Ejemplos de tampones que controlarán el pH en este intervalo incluyen succinato (tal como succinato de sodio), gluconato, histidina, citrato y otros tampones de ácidos orgánicos.

El término "crioprotectores" incluye generalmente agentes que proporcionan estabilidad a la proteína contra el estrés inducido por la congelación, presumiblemente al ser preferentemente excluidos de la superficie de la proteína. También pueden ofrecer protección durante el secado primario y secundario, y el almacenamiento de productos a largo plazo. Ejemplos son polímeros, tales como dextrano y polietilenglicol; azúcares, tales como sacarosa, glucosa, trehalosa, y lactosa; tensioactivos, tales como polisorbatos; y aminoácidos, tales como glicina, arginina, y serina. El término "lioprotector" incluye agentes que proporcionan estabilidad a la proteína durante el proceso de secado o 'deshidratación' (ciclos de secado primario y secundario), presumiblemente proporcionando una matriz vítrea amorfa y uniéndose a la proteína a través de enlaces de hidrógeno, reemplazando las moléculas de agua que se eliminan durante el proceso de secado. Esto ayuda a mantener la conformación de la proteína, minimizar la degradación de la proteína durante el ciclo de liofilización y mejorar los productos a largo plazo. Ejemplos incluyen polioles o azúcares, tales como sacarosa y trehalosa.

El término "formulación farmacéutica" se refiere a preparaciones que están en una forma que permite que los ingredientes activos sean eficaces, y que no contienen componentes adicionales que sean tóxicos para los sujetos a los que se administraría la formulación.

Excipientes (transportadores, aditivos) "aceptables farmacéuticamente" son aquellos que se pueden administrar razonablemente a un sujeto mamífero para proporcionar una dosis eficaz del ingrediente activo empleado.

“Tiempo de reconstitución” es el tiempo que se requiere para rehidratar una formulación liofilizada en una disolución. Una formulación "estable" es aquella en la que la proteína en ella conserva esencialmente su estabilidad física y/o estabilidad química y/o actividad biológica durante el almacenamiento. Por ejemplo, varias técnicas analíticas para medir la estabilidad de proteínas están disponibles en la técnica y se revisan en Peptide and Protein Drug Delivery , 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., Nueva York, N.Y., Pubs. (1991) y Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev.

10:29-90 (1993). La estabilidad se puede medir a una temperatura seleccionada durante un período de tiempo seleccionado.

El término "epítopo", como se emplea en la presente memoria, se refiere a la parte de un antígeno que es reconocida por un aglutinante, por ejemplo, un anticuerpo. Los epítopos incluyen, pero no se limitan a, una secuencia de aminoácidos corta o un péptido (opcionalmente glicosilado o modificado de otro modo) que permite una interacción específica con una proteína (por ejemplo, un anticuerpo) o ligando. Por ejemplo, un epítopo puede ser una parte de una molécula a la que se une el sitio de unión al antígeno de un aglutinante.

El término "tratar" o "tratamiento" abarca el tratamiento de una enfermedad o trastorno (por ejemplo, cáncer), en un sujeto, tal como un ser humano, e incluye: (i) inhibir una enfermedad o trastorno, es decir, detener su desarrollo; (ii) aliviar una enfermedad o trastorno, es decir, causar la regresión de la enfermedad o trastorno; (iii) retardar la progresión de la enfermedad o trastorno; y/o (iv) inhibir, aliviar, o retardar la progresión de uno o más síntomas de la enfermedad o trastorno. En algunas realizaciones "tratar" o "tratamiento" se refiere a la muerte de células cancerosas.

El término "matar" con respecto a un tratamiento del cáncer se dirige a incluir cualquier tipo de manipulación que conduzca a la muerte de esa célula cancerosa o al menos de una parte de una población de células cancerosas. El término "aptámero" se refiere a una molécula de ácido nucleico que es capaz de unirse a una molécula diana, tal como un polipéptido. Por ejemplo, un aptámero se puede unir específicamente a PD-L1, PD-L2, PD-1, o CTLA-4. La generación de anticuerpos con una especificidad de unión particular y el uso terapéutico de aptámeros están bien establecidos en la técnica. Véase, por ejemplo, la Patente U.S. N° 5.475.096, las Patentes U.S. Nos 5.270.163, 5.582.981,5.840.867, 6.011.020, 6.051.698, 6.147.204, 6.180.348 y 6.699.843, y la eficacia terapéutica de Macugen® (Eyetech, Nueva York) para el tratamiento de la degeneración macular relacionada con la edad.

El término "oligómero" u "oligomérico" u "oligomerizado", como se emplea en la presente memoria, se refiere a oligómeros compuestos por dos o más monómeros.

Las proteínas de fusión son polipéptidos modificados genéticamente que unen un péptido (por ejemplo, el dominio del fragmento cristalizable (Fc) de un anticuerpo) con otro agente activo biológicamente, por ejemplo, un dominio de proteína, péptido, o ácido nucleico o aptámero peptídico, para generar una molécula con la propiedades estructurafunción deseadas y potencial terapéutico significativo. El isotipo de inmunoglobulina gamma (IgG) se emplea a menudo como base para generar proteínas de fusión Fc debido a sus características favorables, tal como el reclutamiento de la función efectora y el aumento de la vida media plasmática. Dada la variedad de aptámeros, tanto péptidos como ácidos nucleicos, que se pueden usar como compañeros de fusión, las proteínas de fusión tienen numerosas aplicaciones biológicas y farmacéuticas.

El término "secuencialmente", como se emplea en la presente memoria, se refiere a la administración de dos o más tratamientos uno después de otro en cualquier orden. En algunas realizaciones, los tratamientos se administran con más de 48 horas de diferencia entre sí. En algunas realizaciones, los tratamientos se administran con una diferencia de aproximadamente 48 horas entre sí, con una diferencia de aproximadamente 36 horas entre sí, con una diferencia de aproximadamente 24 horas entre sí, con una diferencia de aproximadamente 12 horas entre sí, con una diferencia de aproximadamente 10 horas entre sí, con una diferencia de aproximadamente 8 horas entre sí, con una diferencia de aproximadamente 6 horas entre sí, con una diferencia de aproximadamente 4 horas entre sí, con una diferencia de aproximadamente dos horas entre sí, o con una diferencia de aproximadamente 1 hora entre sí. El término "concurrentemente", como se emplea en la presente memoria, se refiere a dos o más tratamientos administrados sustancialmente aproximadamente al mismo tiempo en cualquier orden.

El término "PD-1", como se emplea en la presente memoria, se refiere a la proteína 1 de muerte celular programada, también conocida como CD279, que se expresa en la superficie de las células T, las células B activadas, así como en las células mieloides.

El término "PD-L1", como se emplea en la presente memoria, se refiere al ligando 1 de muerte programada, también conocido como B7-H1 o CD274, es un ligando de PD-1 que se expresa normalmente en la superficie de células dendríticas o macrófagos.

El término "PD-L2", como se emplea en la presente memoria, se refiere al ligando 2 de muerte programada, también conocido como B7-DC o CD273, es un ligando de PD-1 que se expresa normalmente en la superficie de células dendríticas o macrófagos.

Los términos "biosimilar" o "biosimilar", también conocidos como "biológico de seguimiento" o "biológico de entrada posterior", tal como se emplean en la presente memoria, se refieren a un producto biológico que es sustancialmente una copia idéntica de un producto aprobado por una agencia reguladora.

Los términos "sinérgico" o "efecto sinérgico" o "cantidad eficaz sinérgicamente" o "eficacia sinérgica", tal como se emplean en la presente memoria, se refieren a un efecto terapéutico mayor que el aditivo que se produce mediante la administración de al menos dos agentes, y que excede lo que de otro modo resultaría de la administración de uno de los agentes sin la administración del otro agente Por ejemplo, el efecto terapéutico de la composición de nanopartículas aumenta cuando se administra secuencial o simultáneamente con un aglutinante para proporcionar un efecto sinérgico, siempre y cuando el aumento sea mayor que la eficacia aditiva del aglutinante y la composición de nanopartículas cuando se administran en solitario. El término "cantidad terapéutica sinérgica" se refiere generalmente a una cantidad terapéutica inferior a la estándar de uno o ambos agentes terapéuticos, lo que significa que la cantidad requerida para la eficacia terapéutica deseada es menor que cuando el agente terapéutico se emplea en solitario. Una cantidad terapéutica sinérgica también incluye cuando un agente terapéutico se administra a una dosis terapéutica estándar y otro agente terapéutico se administra a una dosis terapéutica inferior a la dosis terapéutica estándar.

El término "cantidad eficaz terapéuticamente" o "eficacia terapéutica", como se emplea en la presente memoria, de una composición de nanopartículas o aglutinante se refiere a la composición de nanopartículas o a los niveles de aglutinante en los que los efectos fisiológicos de una enfermedad o trastorno se mejoran, como mínimo. Se puede proporcionar una cantidad eficaz terapéuticamente en una o más administraciones empleando uno o más comprimidos, cápsulas u otras unidades farmacéuticas. La cantidad de una composición de nanopartículas o aglutinante que constituye una cantidad eficaz terapéuticamente variará dependiendo de la composición de nanopartículas o aglutinante, el trastorno y su gravedad, y la salud general, la edad, el sexo, el peso corporal y la tolerancia a los fármacos del sujeto a tratar, pero se puede determinar de forma rutinaria por un experto en la técnica. En algunas realizaciones, el término "cantidad eficaz terapéuticamente" se refiere a una cantidad eficaz de forma sinérgica o una cantidad terapéutica sinérgicamente.

Además, algunos términos empleados en esta memoria se definen más específicamente a continuación.

Visión general

La presente invención se basa, en parte, en el sorprendente descubrimiento de nanopartículas liofilizadas opcionalmente que comprenden una proteína transportadora, un aglutinante, por ejemplo, un anticuerpo, un aptámero, o una proteína de fusión, que tiene un dominio de unión a PD-L1, y un agente terapéutico, proporcionan una terapia dirigida a un tumor mientras minimiza la toxicidad para el paciente. Las nanopartículas que se describen en la presente memoria son, por lo tanto, una mejora significativa frente a los ADCs convencionales.

La invención se basa además, en parte, en la sinergia de la inmunoterapia con inhibidores de puntos de control inmunitarios (por ejemplo, inmunoterapia con PD-1 y/o inmunoterapia con CTLA-4) con las nanopartículas. Sin estar ligado a la teoría, se contempla que la unión de PD-L1 por los agentes de unión (por ejemplo, anticuerpos) como se describe en la presente memoria agotará o disminuirá la cantidad de PD-L1 disponible para unirse a PD-1 en las células T, aumentando así la eficacia terapéutica de la inmunoterapia basada en PD-1. La administración de las nanopartículas, en solitario o en combinación con la inmunoterapia con PD-1, puede aumentar la cantidad de células T que están libres de la inhibición mediada por la ruta de PD-1, y restaurar la respuesta inmunitaria del paciente contra un cáncer que expresa PD-L1.

Para que los ADCs convencionales sean eficaces, es fundamental que el enlazador sea lo suficientemente estable como para no disociarse en la circulación sistémica, pero que permita una liberación suficiente del fármaco en el sitio del tumor. Alley, SC, et al. (2008) Bioconjug Chem 19:759-765. Esto ha demostrado ser un obstáculo importante en el desarrollo de conjugados de fármacos eficaces (Julien, DC, et al. (2011) MAbs 3:467-478; Alley, SC, et al. (2008) Bioconjug Chem 19:759-765); por lo tanto, una característica atractiva de las nanopartículas descritas en la presente memoria es que no se requiere un enlazador bioquímico.

Otra deficiencia de los ADCs actuales es que no se ha probado sustancialmente en tumores humanos una mayor penetración del fármaco en el tumor. Las primeras pruebas de ADCs en modelos de ratón sugieren que el direccionamiento al tumor con anticuerpos daría como resultado una mayor concentración del agente activo en el tumor (Deguchi, T. et al. (1986) Cáncer Res 46:3751-3755); sin embargo, esto no se ha correlacionado en el tratamiento de enfermedades humanas, probablemente porque los tumores humanos tienen una permeabilidad mucho más heterogénea que los tumores de ratón. Jain, R. K. et al. (2010) Nat. Rev. Clin Oncol 7:653-664. Además, el tamaño de la nanopartícula es fundamental para la extravasación desde la vasculatura hacia el tumor. En un estudio con ratones que utilizó un modelo de xenotrasplante de adenocarcinoma de colon humano, los poros vasculares eran permeables a los liposomas hasta 400 nm. Yuan, F., et al. (1995) Cancer Res 55:3752-3756. Otro estudio del tamaño de poro del tumor y de la permeabilidad demuestra que ambas características dependían de la localización del tumor y del estado de crecimiento, con tumores en regresión y tumores craneales permeables a partículas de menos de 200 nm. Hobbs, SK, et al. (1998) Proc Natl Acad Sci e E. UU. 95:4607-4612. El conjugado nanoinmune (nanopartículas) descrito en la presente memoria supera este problema por el hecho de que el gran complejo, que tiene menos de 200 nm intacto, se disocia parcialmente en la circulación sistémica en unidades funcionales más pequeñas que pueden atravesar fácilmente el tejido tumoral. Además, una vez que el conjugado llega al sitio del tumor, se puede liberar la carga útil tóxica más pequeña y las células tumorales sólo necesitan absorber la parte tóxica, no todo el conjugado.

El surgimiento de los anticuerpos (es decir, AVASTIN®) recubiertos de nanopartículas de albúmina que contienen un agente terapéutico (es decir, ABRAXANE®) ha conducido a un nuevo paradigma de administración direccional de dos o más agentes terapéuticos para un sitio predeterminado in vivo. Véase la Publicación de Patentes PCT Nos WO 2012/154861 y WO 2014/055415.

Cuando las composiciones de albúmina y un aglutinante, por ejemplo, un anticuerpo, se mezclan juntos en una disolución acuosa en concentraciones y proporciones específicas, los aglutinantes útiles en esta invención se autoensamblan espontáneamente en y sobre la albúmina para formar nanopartículas que tienen múltiples copias del aglutinante (hasta 500 o más). Sin limitarse a ninguna teoría, se contempla que los aglutinantes (por ejemplo, anticuerpos) se unen de forma no covalente a la proteína transportadora (por ejemplo, albúmina) a través de uno o más motivos de unión a albúmina del aglutinante, y uno o más motivos de unión a anticuerpos en la proteína transportadora. Se pueden encontrar ejemplos de dichos motivos en la Solicitud PCT N° PCT/US17/45643.

Aunque las composiciones proteicas que comprenden una fuente única de proteína se almacenan normalmente en forma liofilizada donde muestran una vida media significativa, tales composiciones liofilizadas no contienen generalmente una nanopartícula autoensamblada de dos proteínas diferentes integradas juntas mediante interacciones hidrofóbicas-hidrofóbicas. Además, la configuración de nanopartículas en donde la mayoría de las partes de unión del aglutinante están expuestas en la superficie de las nanopartículas se presta a ser susceptible de desalojo o reconfiguración por condiciones que de otro modo se considerarían benignas. Por ejemplo, durante la liofilización, las cargas iónicas de las proteínas se deshidratan, exponiendo así las cargas subyacentes. Las cargas expuestas permiten interacciones de carga-carga entre las dos proteínas que pueden alterar la afinidad de unión de cada proteína con la otra. Además, la concentración de nanopartículas aumenta significativamente a medida que se elimina el disolvente (por ejemplo, agua). Este aumento de las concentraciones de nanopartículas podría conducir a una oligomerización irreversible. La oligomerización es una propiedad conocida de las proteínas que reduce las propiedades biológicas del oligómero en comparación con la forma monomérica y aumenta el tamaño de la partícula, a veces por encima de 1 micra.

Por otro lado, se requiere una forma estable de una composición de nanopartículas para uso clínico y/o comercial, donde se requiere una vida media de al menos 3 meses y se prefieren vidas medias de más de 6 meses o 9 meses. Una composición estable de este tipo debe estar disponible fácilmente para la inyección intravenosa, debe conservar su forma autoensamblada tras la inyección intravenosa para dirigir la nanopartícula al sitio predeterminado in vivo, debe tener un tamaño máximo de menos de 1 micrómetro para evitar cualquier evento isquémico cuando se administra en el torrente sanguíneo, y finalmente debe ser compatible con la composición acuosa empleada para la inyección.

Compuestos

Como será evidente para el experto en la técnica al leer esta descripción, la presente descripción se refiere a composiciones de nanopartículas que contienen una proteína transportadora, aglutinantes, y opcionalmente, al menos un agente terapéutico, en donde dichas composiciones están liofilizadas opcionalmente.

La proteína transportadora es la albúmina. En realizaciones preferidas, la albúmina es clara de huevo (ovoalbúmina), albúmina de suero bovino (BSA), o similares. En realizaciones aún más preferidas, la proteína transportadora es albúmina de suero humano (HSA). En algunas realizaciones, la proteína transportadora es una proteína recombinante, por ejemplo, albúmina de suero humano recombinante. En algunas realizaciones, la proteína transportadora es un excipiente generalmente considerado como seguro (GRAS, de sus siglas en inglés) aprobado por la Administración de Drogas y Alimentos de los Estados Unidos (FDA, de sus siglas en inglés).

En algunas realizaciones, los aglutinantes son anticuerpos.

En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-PD-1 comprende nivolumab, pembrolizumab, pidilizumab, PDR001, o biosimilares de los mismos. El anticuerpo anti-PD-L1 es atezolizumab. En algunos aspectos, el aglutinante de la inmunoterapia con CTLA-4 es un anticuerpo anti-CTLA-4. En una realización, el anticuerpo anti-CTLA-4 es ipilimumab.

En algunos aspectos, el primer aglutinante y/o el segundo aglutinante es una proteína de fusión. En una realización, la proteína de fusión es AMP-224 (proteína de fusión PD-L2 IgG2a; Amplimmune/GlaxoSmith Klein); AMP-514 (MEDI0680) (proteína de fusión PD-L2; Amplimmune/GlaxoSmith Klein), o un biosimilar del mismo. AMP-224 y AMP-514 se dirigen a PD-1.

En algunas realizaciones, los anticuerpos son sustancialmente una única capa de anticuerpos en toda o parte de la superficie de la nanopartícula.

La Tabla 1 muestra una lista no limitante de anticuerpos.

Tabla 1: Ejemplos de anticuerpos

En algunas realizaciones, el al menos único agente terapéutico se selecciona de abiraterona, bendamustina, bortezomib, carboplatino, cabazitaxel, cisplatino, clorambucilo, dasatinib, docetaxel, doxorrubicina, epirrubicina, erlotinib, etopósido, everolimus, gefitinib, idarrubicina, imatinib, hidroxiurea, imatinib, lapatinib, leuprorelina, melfalán, metotrexato, mitoxantrona, nedaplatino, nilotinib, oxaliplatino, paclitaxel, pazopanib, pemetrexed, picoplatino, romidepsina, satraplatino, sorafenib, vemurafenib, sunitinib, tenipósido, triplatino, vinblastina, vinorelbina, vincristina, y ciclofosfamida. Preferiblemente, el agente terapéutico es paclitaxel. Se conocen agentes terapéuticos adicionales, por ejemplo, los enumerados en la Publicación PCT N° WO2017/031368.

Se debe entender que el agente terapéutico se puede localizar dentro de la nanopartícula, en la superficie exterior de la nanopartícula, o en ambos. La nanopartícula puede contener más de un agente terapéutico, por ejemplo, dos agentes terapéuticos, tres agentes terapéuticos, cuatro agentes terapéuticos, cinco agentes terapéuticos, o más. Además, una nanopartícula puede contener los mismos o diferentes agentes terapéuticos dentro y fuera de la nanopartícula.

En un aspecto, la nanopartícula comprende al menos 100 aglutinantes unidos de forma no covalente a la superficie de la nanopartícula. En un aspecto, la nanopartícula comprende al menos 200 aglutinantes unidos de forma no covalente a la superficie de la nanopartícula. En un aspecto, la nanopartícula comprende al menos 300 aglutinantes unidos de forma no covalente a la superficie de la nanopartícula. En un aspecto, la nanopartícula comprende al menos 400 aglutinantes unidos de forma no covalente a la superficie de la nanopartícula. En un aspecto, la nanopartícula comprende al menos 500 aglutinantes unidos de forma no covalente a la superficie de la nanopartícula. En un aspecto, la nanopartícula comprende al menos 600 aglutinantes unidos de forma no covalente a la superficie de la nanopartícula.

En un aspecto, la nanopartícula comprende entre aproximadamente 100 y aproximadamente 1000 aglutinantes unidos de forma no covalente a la superficie de la nanopartícula. En un aspecto, la nanopartícula comprende entre aproximadamente 200 y aproximadamente 1000 aglutinantes unidos de forma no covalente a la superficie de la nanopartícula. En un aspecto, la nanopartícula comprende entre aproximadamente 300 y aproximadamente 1000 aglutinantes unidos de forma no covalente a la superficie de la nanopartícula. En un aspecto, la nanopartícula comprende entre aproximadamente 400 y aproximadamente 1000 aglutinantes unidos de forma no covalente a la superficie de la nanopartícula. En un aspecto, la nanopartícula comprende entre aproximadamente 500 y aproximadamente 1000 aglutinantes unidos de forma no covalente a la superficie de la nanopartícula. En un aspecto, la nanopartícula comprende entre aproximadamente 600 y aproximadamente 1000 aglutinantes unidos de forma no covalente a la superficie de la nanopartícula. En un aspecto, la nanopartícula comprende entre aproximadamente 200 y aproximadamente 800 aglutinantes unidos de forma no covalente a la superficie de la nanopartícula. En un aspecto, la nanopartícula comprende entre aproximadamente 300 y aproximadamente 800 aglutinantes unidos de forma no covalente a la superficie de la nanopartícula. En realizaciones preferidas, la nanopartícula comprende entre aproximadamente 400 y aproximadamente 800 aglutinantes unidos de forma no covalente a la superficie de la nanopartícula. Los valores contemplados incluyen cualquier valor o subintervalo dentro de cualquiera de los intervalos indicados, incluidos los puntos finales.

En un aspecto, el tamaño de partícula medio en la composición de nanopartículas es inferior a aproximadamente 1 pm. En un aspecto, el tamaño de partícula medio en la composición de nanopartículas está entre aproximadamente 90 nm y aproximadamente 1 pm. En un aspecto, el tamaño medio de partícula en la composición de nanopartículas está entre aproximadamente 90 nm y aproximadamente 900 nm. En un aspecto, el tamaño medio de partícula en la composición de nanopartículas está entre aproximadamente 90 nm y aproximadamente 800 nm. En un aspecto, el tamaño medio de partícula en la composición de nanopartículas está entre aproximadamente 90 nm y aproximadamente 700 nm. En un aspecto, el tamaño medio de partícula en la composición de nanopartículas está entre aproximadamente 90 nm y aproximadamente 600 nm. En un aspecto, el tamaño medio de partícula en la composición de nanopartículas está entre aproximadamente 90 nm y aproximadamente 500 nm. En un aspecto, el tamaño medio de partícula en la composición de nanopartículas está entre aproximadamente 90 nm y aproximadamente 400 nm. En un aspecto, el tamaño medio de partícula en la composición de nanopartículas está entre aproximadamente 90 nm y aproximadamente 300 nm. En un aspecto, el tamaño medio de partícula en la composición de nanopartículas está entre aproximadamente 90 nm y aproximadamente 200 nm. En una realización preferida, el tamaño medio de partícula en la composición de nanopartículas está entre aproximadamente 100 nm y aproximadamente 180 nm. En una realización especialmente preferida, el tamaño medio de partícula en la composición de nanopartículas es de aproximadamente 130 nm o aproximadamente 160 nm. Los valores contemplados incluyen cualquier valor, subintervalo o intervalo dentro de cualquiera de los intervalos enumerados, incluidos los puntos finales. En una realización, el tamaño de las nanopartículas se determina empleando un Mastersizer 2000. En una realización, el tamaño de las nanopartículas se determina empleando un Malvern Nanosight.

En un aspecto, la composición de nanopartículas se formula para inyección intravenosa. Para evitar un evento isquémico, la composición de nanopartículas formulada para inyección intravenosa debe comprender nanopartículas con un tamaño medio de partícula de menos de aproximadamente 1 pm.

En un aspecto, el tamaño medio de partícula en la composición de nanopartículas es superior a aproximadamente 1 pm. En un aspecto, el tamaño medio de partícula en la composición de nanopartículas está entre aproximadamente 1 pm y aproximadamente 5 pm. En un aspecto, el tamaño medio de partícula en la composición de nanopartículas está entre aproximadamente 1 pm y aproximadamente 4 pm. En un aspecto, el tamaño medio de partícula en la composición de nanopartículas está entre aproximadamente 1 pm y aproximadamente 3 pm. En un aspecto, el tamaño medio de partícula en la composición de nanopartículas está entre aproximadamente 1 pm y aproximadamente 2 pm. En un aspecto, el tamaño medio de partícula en la composición de nanopartículas está entre aproximadamente 1 pm y aproximadamente 1,5 pm. Los valores contemplados incluyen cualquier valor, subintervalo o intervalo dentro de cualquiera de los intervalos enumerados, incluidos los puntos finales.

En un aspecto, la composición de nanopartículas se formula para inyección directa en un tumor. La inyección directa incluye la inyección en el sitio del tumor o próximo al mismo, la perfusión en el interior del tumor, y similares. Cuando se formula para inyección directa en un tumor, la nanopartícula puede comprender cualquier tamaño medio de partícula. Sin pretender imponer ninguna teoría, se cree que es más probable que las partículas más grandes (por ejemplo, mayores de 500 nm, mayores de 1 pm, y similares) se inmovilicen dentro del tumor, proporcionando así un efecto beneficioso. Las partículas más grandes se pueden acumular en el tumor o en órganos específicos. Véase, por ejemplo, la partícula de vidrio de 20-60 micras que se emplea para inyectar en la arteria hepática que alimenta un tumor del hígado, llamada "TheraSphere®"(en uso clínico para el cáncer de hígado). Por lo tanto, para la administración intravenosa, normalmente se emplean partículas de menos de 1 pm. Las partículas de más de 1 pm, más habitualmente, se administran directamente en un tumor ("inyección directa") o en una arteria que alimenta al sitio del tumor.

En un aspecto, menos de aproximadamente 0,01 % de las nanopartículas dentro de la composición tiene un tamaño de partícula superior a 200 nm, superior a 300 nm, superior a 400 nm, superior a 500 nm, superior a 600 nm, superior a 700 nm, o superior a 800 nm. En un aspecto, menos de aproximadamente 0,001 % de las nanopartículas dentro de la composición tiene un tamaño de partícula superior a 200 nm, superior a 300 nm, superior a 400 nm, superior a 500 nm, superior a 600 nm, superior a 700 nm, o superior a 800 nm. En una realización preferida, menos de aproximadamente 0,01 % de las nanopartículas dentro de la composición tiene un tamaño de partícula superior a 800 nm. En una realización más preferida, menos de aproximadamente 0,001 % de las nanopartículas dentro de la composición tienen un tamaño de partícula superior a 800 nm.

En un aspecto preferido, los tamaños y los intervalos de tamaño indicados en la presente memoria se relacionan con los tamaños de partícula de la composición de nanopartículas liofilizadas reconstituidas. Es decir, después de que las nanopartículas liofilizadas se resuspenden en una disolución acuosa (por ejemplo, agua, otro excipiente aceptable farmacéuticamente, tampón, etc.), el tamaño de partícula o el tamaño medio de partícula está dentro del intervalo mencionado en la presente memoria.

En un aspecto, al menos aproximadamente 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, 99,5 %, o 99,9 % de las nanopartículas están presentes en la composición reconstituida como nanopartículas individuales. Es decir, menos de aproximadamente 50 %, 40 %, 30 %, etc., de las nanopartículas están dimerizadas u oligomerizadas.

En algunas realizaciones, las nanopartículas en la composición tienen menos del 20 % en número de dimerización, menos del 10 % en número de dimerización y preferiblemente menos del 5 % en número de dimerización.

En algunas realizaciones, el tamaño de la nanopartícula se puede controlar ajustando la cantidad (por ejemplo, la proporción) de proteína transportadora respecto al aglutinante. El tamaño de las nanopartículas, y la distribución del tamaño, también son importantes. Las nanopartículas de la invención se pueden comportar de forma diferente según su tamaño. En tamaños grandes, una aglomeración puede bloquear los vasos sanguíneos. Por lo tanto, la aglomeración de nanopartículas puede afectar el rendimiento y la seguridad de la composición. Por otro lado, las partículas más grandes pueden ser más terapéuticas bajo determinadas condiciones (por ejemplo, cuando no se administran por vía intravenosa).

En un aspecto, la composición de nanopartículas comprende al menos un agente terapéutico adicional. En una realización, el al menos único agente terapéutico adicional se une de forma no covalente a la superficie exterior de la nanopartícula. En una realización, el al menos único agente terapéutico adicional se dispone en la superficie exterior de la nanopartícula. En una realización, el al menos único agente terapéutico adicional se selecciona de abiraterona, bendamustina, bortezomib, carboplatino, cabazitaxel, cisplatino, clorambucilo, dasatinib, docetaxel, doxorrubicina, epirrubicina, erlotinib, etopósido, everolimus, gemcitabina, gefitinib, idarrubicina, imatinib, hidroxiurea, imatinib, lapatinib, leuprorelina, melfalán, metotrexato, mitoxantrona, nedaplatino, nilotinib, oxaliplatino, pazopanib, pemetrexed, picoplatino, romidepsina, satraplatino, sorafenib, vemurafenib, sunitinib, tenipósido, triplatino, vinblastina, vinorelbina, vincristina, y ciclofosfamida. En una realización, el al menos único agente terapéutico adicional es un aglutinante contra el cáncer, por ejemplo, un anticuerpo anticancerígeno. Se conocen anticuerpos anticancerígenos adicionales, por ejemplo, los enumerados en la Publicación PCT N° WO2017/031368.

Métodos de preparación de nanopartículas

En algunos aspectos, la presente descripción se refiere a métodos para preparar composiciones de nanopartículas como se describe en la presente memoria.

En un aspecto, las nanopartículas de la composición de nanopartículas se forman poniendo en contacto la proteína transportadora o la partícula de la proteína transportadora-agente terapéutico con el aglutinante en una proporción de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 10:30 de proteína transportadora o de partícula de la proteína transportadora-agente terapéutico respecto al aglutinante. En una realización, la proporción es de aproximadamente 10:2 a aproximadamente 10:25. En una realización, la proporción es de aproximadamente 10:2 a aproximadamente 1:1. En una realización preferida, la proporción es de aproximadamente 10:2 a aproximadamente 10:6. En una realización especialmente preferida, la proporción es de aproximadamente 10:4. Las proporciones contempladas incluyen cualquier valor, subintervalo, o intervalo dentro de cualquiera de los intervalos enumerados, incluidos los puntos finales.

En una realización, la cantidad de disolución u otro medio líquido empleado para formar las nanopartículas es particularmente importante. No se forman nanopartículas en una disolución demasiado diluida de la proteína transportadora (o proteína transportadora-agente terapéutico) y los anticuerpos. Una disolución demasiado concentrada dará como resultado agregados no estructurados. En algunas realizaciones, la cantidad de disolución (por ejemplo, agua estéril, disolución salina, disolución salina tamponada con fosfato) empleada está entre aproximadamente 0,5 mL de disolución a aproximadamente 20 mL de disolución. En algunas realizaciones, la cantidad de proteína transportadora está entre aproximadamente 1 mg/mL y aproximadamente 100 mg/mL. En algunas realizaciones, la cantidad de aglutinante está entre aproximadamente 1 mg/mL y aproximadamente 30 mg/mL. Por ejemplo, en algunas realizaciones, la proporción de proteína transportadora: aglutinante:disolución es de aproximadamente 9 mg de proteína transportadora (por ejemplo, albúmina) respecto a 4 mg de aglutinante, por ejemplo, anticuerpo (por ejemplo, BEV) en 1 mL de disolución (por ejemplo, disolución salina). También se puede añadir una cantidad de agente terapéutico (por ejemplo, taxol) a la proteína transportadora. Por ejemplo, se puede añadir 1 mg de taxol, 9 mg de proteína transportadora (10 mg de proteína transportadora-agente terapéutico) y 4 mg de aglutinante, por ejemplo, anticuerpo, molécula de fusión Fc, o aptámero, en 1 mL de disolución. Cuando se emplea una bolsa típica i.v., por ejemplo, con la disolución de aproximadamente 1 litro, se necesitaría usar 1000 veces la cantidad de proteína transportadora/proteína transportadora-agente terapéutico y anticuerpos en comparación con la que se emplea en 1 mL. Por lo tanto, no se pueden formar las presentes nanopartículas en una bolsa i.v estándar. Además, cuando los componentes se añaden a una bolsa i.v estándar. en cantidades terapéuticas los componentes no se autoensamblan para formar nanopartículas.

En una realización, la proteína transportadora o la partícula de proteína transportadora-agente terapéutico se pone en contacto con el aglutinante en una disolución que tiene un pH entre aproximadamente 4 y aproximadamente 8. En una realización, la proteína transportadora o la proteína transportadora-partícula de agente terapéutico se pone en contacto con el aglutinante en una disolución que tiene un pH de aproximadamente 4. En una realización, la proteína transportadora o la partícula de proteína transportadora-agente terapéutico se pone en contacto con el aglutinante en una disolución que tiene un pH de aproximadamente 5. En una realización, la proteína transportadora o partícula de proteína transportadora-agente terapéutico se pone en contacto con el agente aglutinante en una disolución que tiene un pH de aproximadamente 6. En una realización, la proteína transportadora o la partícula de proteína transportadora-agente terapéutico se pone en contacto con el aglutinante en una disolución que tiene un pH de aproximadamente 7. En una realización, la proteína transportadora o la partícula de proteína transportadoraagente terapéutico se pone en contacto con el aglutinante en una disolución que tiene un pH de aproximadamente 8. En una realización preferida, la proteína transportadora o la partícula de proteína transportadora-agente terapéutico se pone en contacto con el aglutinante en una disolución que tiene un pH entre aproximadamente 5 y aproximadamente 7.

En una realización, la partícula de proteína transportadora o la partícula de proteína transportadora-agente terapéutico se incuba con el aglutinante a una temperatura de aproximadamente 5°C a aproximadamente 60°C, o cualquier intervalo, subintervalo o valor dentro de ese intervalo, incluidos los puntos finales. En una realización preferida, la partícula de proteína transportadora o la partícula de proteína transportadora-agente terapéutico se incuba con el aglutinante a una temperatura de aproximadamente 23°C a aproximadamente 60°C.

Sin pretender vincularse a ninguna teoría, se cree que la estabilidad de las nanopartículas dentro de la composición de nanopartículas es, al menos en parte, dependiente de la temperatura y/o el pH al que se forman las nanopartículas, así como de la concentración de los componentes (es decir, de la proteína transportadora, aglutinante, y opcionalmente, el agente terapéutico) en la disolución. En una realización, la K^d de las nanopartículas está entre aproximadamente 1 x 10^-11 M y aproximadamente 2 x 10^-5 M. En una realización, la K^d de las nanopartículas está entre aproximadamente 1 x 10^-11 M y aproximadamente 2 x 10^-8 M. En una realización, la K^d de las nanopartículas está entre aproximadamente 1 x 10^-11 M y aproximadamente 7 x 10^-9 M. En una realización preferida, la K^d de las nanopartículas está entre aproximadamente 1 x 10^-11 M y aproximadamente 3 x 10^-8 M. Los valores contemplados incluyen cualquier valor, subintervalo o intervalo dentro de cualquiera de los intervalos indicados, incluidos los puntos finales.

Liofilización

La liofilización, o secado por congelación, elimina el agua de una composición. En el proceso, el material a secar se congela primero, y a continuación el hielo o el disolvente congelado se elimina por sublimación en un ambiente a vacío. Se puede incluir un excipiente en formulaciones preliofilizadas para mejorar la estabilidad durante el proceso de liofilización y/o para mejorar la estabilidad del producto liofilizado durante el almacenamiento. Pikal, M. Biopharm.

3(9)26-30 (1990) y Arakawa et al., Pharm. Res. 8(3):285-291 (1991).

Si bien las proteínas se pueden liofilizar, el proceso de liofilización y reconstitución puede afectar a las propiedades de la proteína. Debido a que las proteínas son más grandes y más complejas que los fármacos orgánicos e inorgánicos tradicionales (es decir, poseen múltiples grupos funcionales además de estructuras tridimensionales complejas), la formulación de dichas proteínas plantea problemas especiales. Para que una proteína permanezca activa biológicamente, una formulación debe mantener intacta la integridad conformacional de al menos una secuencia central de los aminoácidos de la proteína y al mismo tiempo proteger de la degradación los múltiples grupos funcionales de la proteína. Las vías de degradación de las proteínas pueden implicar inestabilidad química (es decir, cualquier proceso que implique la modificación de la proteína mediante la formación de enlaces o la escisión que da como resultado una nueva entidad química) o inestabilidad física (es decir, cambios en la estructura de orden superior de la proteína). La inestabilidad química puede dar como resultado la desamidación, racemización, hidrólisis, oxidación, eliminación beta o intercambio de disulfuro. La inestabilidad física puede dar como resultado, por ejemplo, la desnaturalización, agregación, precipitación o adsorción. Las tres vías de degradación de proteínas más comunes son la agregación de proteínas, la desamidación y la oxidación. Cleland, et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 10(4):307-377 (1993).

Las composiciones liofilizadas de esta invención se preparan mediante técnicas de liofilización estándar con o sin la presencia de estabilizadores, tampones, etc. Sorprendentemente, estas condiciones no alteran la estructura relativamente frágil de las nanopartículas. Además, en el mejor de los casos, estas nanopartículas conservan su distribución de tamaño tras la liofilización y, lo que es más importante, se pueden reconstituir para su administración in vivo (por ejemplo, administración intravenosa) sustancialmente en la misma forma y proporciones que si estuviera recién hecha.

Formulaciones

En un aspecto, la composición de nanopartículas se formula para la administración sistémica, por ejemplo, administración intravenosa.

En un aspecto, la composición de nanopartículas se formula para inyección directa en un tumor. La inyección directa incluye la inyección en el sitio del tumor o próximo al mismo, la perfusión en el interior del tumor, y similares. Debido a que la composición de nanopartículas no se administra de forma sistémica, una composición de nanopartículas formulada para inyección directa en un tumor puede comprender cualquier tamaño medio de partícula.. Sin estar ligado a la teoría, se cree que las partículas más grandes (por ejemplo, superiores a 500 nm, superiores a 1 pm, y similares) tienen más probabilidades de inmovilizarse dentro del tumor, proporcionando así lo que se cree que es un mejor efecto beneficioso.

En otro aspecto, en la presente memoria se proporciona una composición que comprende nanopartículas como se proporciona en la presente memoria, y al menos un excipiente aceptable farmacéuticamente.

En general, las composiciones proporcionadas en la presente memoria se pueden formular para la administración a un paciente mediante cualquiera de los modos de administración aceptados. Varias formulaciones y sistemas de administración de fármacos están disponibles en la técnica. Véase, por ejemplo, Gennaro, ^a R, ed. (1995) Remington’s PharmaceuticalSciences,, 18a ed., Mack Publishing Co.

En general, las nanopartículas que se proporcionan en la presente memoria se administrarán como composiciones farmacéuticas por cualquiera de las siguientes vías: administración oral, sistémica (por ejemplo, transdérmica, intranasal o por supositorio), o parenteral (por ejemplo, intramuscular, intravenosa o subcutánea).

Las composiciones se componen, en general, por una nanopartícula de la presente invención en combinación con al menos un excipiente aceptable farmacéuticamente. Los excipientes aceptables no son tóxicos, ayudan a la administración, y no afectan negativamente al beneficio terapéutico de los compuestos reivindicados. Tal excipiente puede ser cualquier excipiente sólido, líquido, semisólido o, en el caso de una composición de aerosol, gaseoso que generalmente está disponible para un experto en la técnica.

Excipientes farmacéuticos sólidos incluyen almidón, celulosa, talco, glucosa, lactosa, sacarosa, gelatina, malta, arroz, harina, tiza, gel de sílice, estearato de magnesio, estearato de sodio, monoestearato de glicerolo, cloruro de sodio, leche descremada en polvo, y similares. Los excipientes líquidos y semisólidos se pueden seleccionar de glicerol, propilenglicol, agua, etanol y diversos aceites, incluidos los de origen petrolífero, animal, vegetal o sintético, por ejemplo, aceite de cacahuete, aceite de soja, aceite mineral, aceite de sésamo, etc. Transportadores líquidos preferidos, particularmente para disoluciones inyectables, incluyen agua, disolución salina, dextrosa acuosa, y glicoles. Otros excipientes farmacéuticos adecuados y sus formulaciones se describen en Remington's Pharmaceutical Sciences, editado por E. W. Martin (Mack Publishing Company, 18a ed., 1990).

Las presentes composiciones se pueden presentar, si se desea, en un paquete o dispositivo dispensador que contiene una o más formas de dosificación unitaria que contienen el ingrediente activo. Dicho paquete o dispositivo puede comprender, por ejemplo, una lámina de metal o plástico, tal como un blíster, o vidrio, y tapones de goma, tales como en viales. El envase o dispositivo dispensador puede ir acompañado de instrucciones de administración. Las composiciones que comprenden una nanopartícula de la invención formulada en un transportador farmacéutico compatible también se pueden preparar, colocar en un recipiente adecuado y etiquetar para el tratamiento de una afección indicada.

Métodos de tratamiento

Las composiciones de nanopartículas que se describen en la presente memoria son útiles para tratar células cancerosas y/o tumores en un mamífero que tiene un cáncer o un tumor que expresa PD-L1. En una realización preferida, el mamífero es un ser humano (es decir, un paciente humano). Preferiblemente, la composición de nanopartículas liofilizadas se reconstituye (suspende en un excipiente acuoso) antes de la administración.

En un aspecto, se proporciona un método para tratar una célula cancerosa, el método comprende poner en contacto la célula con una cantidad eficaz de nanopartículas y una inmunoterapia (por ejemplo, PD-1 o CTLA-4) como se describe en la presente memoria para tratar la célula cancerosa. El tratamiento de una célula cancerosa incluye, sin limitación, la reducción de la proliferación, la muerte de la célula, la prevención de la metástasis de la célula, y similares.

"Terapia inmunológica", "terapias inmunológicas", "inmunoterapia" o "inmunoterapias", como se emplea en la presente memoria, se refieren generalmente a tratamientos de una enfermedad mediante la inducción, potenciación o supresión de una respuesta inmunológica. En algunos casos, las terapias inmunitarias o las inmunoterapias pueden provocar, activar o amplificar las respuestas inmunitarias (también conocidas como "inmunoterapias de activación"), o reducir o suprimir las respuestas inmunitarias (también conocidas como "inmunoterapias de supresión"). Por ejemplo, la terapia inmunológica cancerosa o la inmunoterapia contra el cáncer intentan estimular o activar las respuestas inmunitarias contra tumores o células cancerosas. Como entenderá un experto en la técnica, la terapia inmunológica o inmunoterapia puede usar una variedad de enfoques o mecanismos que incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos, antígenos, uso y/o activación de células de respuesta inmunológica, tal como linfocitos, macrófagos, células dendríticas, otras células presentadoras de antígenos, células asesinas naturales (células NK; por ejemplo, NK-92), células T (por ejemplo, células T auxiliares, linfocitos T citotóxicos (CTL), etc.), terapias que implican a inmunomoduladores (que incluyen, pero no se limitan a: interleuquinas (por ejemplo, IL-2, IL-7, IL-12, etc.), citoquinas (por ejemplo, interferones, G-CSF, imiquimod, etc.), quimioquinas (por ejemplo, CCL3, CCL26, CXCL7, etc.), fármacos de imida inmunomoduladores, etc.) y similares. La terapia inmunológica o inmunoterapia se puede administrar mediante el uso de un tipo de anticuerpo o múltiples tipos de anticuerpos. Los métodos de la terapia inmunológica o inmunoterapia también se pueden administrar en solitario o en combinación con otros agentes o mecanismos terapéuticos, tal como, por ejemplo, agentes de quimioterapia, y similares, para potenciar las respuestas inmunitarias contra, por ejemplo, tumores.

En un aspecto se proporciona un método para tratar un tumor en un paciente que lo necesita, el método comprende administrar al paciente una cantidad eficaz terapéuticamente de una composición de nanopartículas y una inmunoterapia como se describe en la presente memoria para tratar el tumor. En una realización, se reduce el tamaño del tumor. En una realización, el tamaño del tumor no aumenta (es decir, progresa) durante al menos un período de tiempo durante y/o después del tratamiento.

En una realización, la composición de nanopartículas se administra por vía intravenosa. En una realización, la composición de nanopartículas se administra directamente al tumor. En una realización, la composición de nanopartículas se administra mediante inyección directa o perfusión en el tumor.

En una realización, la inmunoterapia se administra por vía intravenosa. En una realización, la inmunoterapia se administra directamente al tumor. En una realización, la inmunoterapia se administra mediante inyección directa o perfusión en el tumor.

En un aspecto, se proporciona un método para tratar a un paciente que padece un cáncer que expresa PD-L1 o PD-L2, donde el método comprende administrar al paciente una composición de nanopartículas que comprende nanopartículas, en donde cada una de las nanopartículas comprende una proteína transportadora, aglutinantes que tienen una parte de unión a PD-L1 o PD-L2 y, opcionalmente, al menos un agente terapéutico, en donde las nanopartículas son capaces de unirse a PD-L1 o PD-L2. En algunas realizaciones, el método comprende además administrar una inmunoterapia de PD-1 al paciente. En una realización, la inmunoterapia con PD-1 comprende administrar un segundo aglutinante capaz de unirse a PD-1.

En otro aspecto, la presente descripción se refiere a un método para aumentar la eficacia terapéutica de un tratamiento de inmunoterapia de un paciente que padece un cáncer que expresa PD-L1 o PD-L2, el método comprende administrar al paciente una cantidad eficaz terapéuticamente de la composición de nanopartículas descrita en la presente memoria. En algunas realizaciones, el método comprende además administrar una inmunoterapia de PD-1 al paciente. En una realización, la inmunoterapia con PD-1 comprende administrar un segundo aglutinante capaz de unirse a PD-1.

En una realización, el método comprende:

a) administrar la composición de nanopartículas una vez por semana durante tres semanas;

b) suspender la administración de la composición de nanopartículas durante una semana; y

c) opcionalmente repetir las etapas a) y b) según sea necesario para tratar el tumor.

En un aspecto, la inmunoterapia con PD-1 se administra simultáneamente con la composición de nanopartículas. En un aspecto, la inmunoterapia con PD-1 se administra antes que la composición de nanopartículas. En un aspecto, la inmunoterapia con PD-1 se administra después de la composición de nanopartículas. En un aspecto, la inmunoterapia con PD-1 se administra según la etiqueta aprobada por la entidad reguladora (por ejemplo, FDA). En algunos aspectos, cada una de las nanopartículas de la composición de nanopartículas comprende entre aproximadamente 400 a aproximadamente 800 de dichos aglutinantes.

En algunos aspectos, los primeros aglutinantes (aglutinantes en las nanopartículas) son aptámeros. En algunos aspectos, el segundo aglutinante de la inmunoterapia con PD-1 es un aptámero.

En algunos aspectos, los primeros aglutinantes (aglutinantes en las nanopartículas) son anticuerpos. En algunos aspectos, el segundo aglutinante de la inmunoterapia PD-1 es un anticuerpo.

El anticuerpo anti-PD-L1 es atezolizumab. En algunos aspectos, el aglutinante de la inmunoterapia con CTLA-4 es un anticuerpo anti-CTLA-4. En una realización, el anticuerpo anti-CTLA-4 es ipilimumab, o un biosimilar del mismo. En algunos aspectos, el primer aglutinante y/o el segundo aglutinante es una proteína de fusión. En una realización, la proteína de fusión es AMP-224 (proteína de fusión PD-L2 IgG2a; Amplimmune/GlaxoSmith Klein); AMP-514 (MEDI0680) (proteína de fusión PD-L2; Amplimmune/GlaxoSmith Klein), o un biosimilar del mismo. En algunos aspectos, la composición de nanopartículas está liofilizada.

En algunos aspectos, el segundo aglutinante de la inmunoterapia con PD-1 es un aglutinante libre, en donde el aglutinante libre no forma complejos ni se integra de otro modo sobre y/o en una composición de nanopartículas. En algunos aspectos, la inmunoterapia con PD-1 es una composición de nanopartículas de inmunoterapia que comprende el segundo aglutinante complejado o integrado sobre y/o en una composición de nanopartículas, en donde la composición de nanopartículas de inmunoterapia comprende una proteína transportadora y dicho segundo aglutinante. En algunos aspectos, la composición de nanopartículas de inmunoterapia está liofilizada.

En algunos aspectos, el segundo aglutinante de la composición de nanopartículas de inmunoterapia es un anticuerpo. En algunos aspectos, el segundo aglutinante de la composición de nanopartículas de inmunoterapia es un anticuerpo anti-PD-1. En algunos aspectos, el anticuerpo anti-PD-1 comprende nivolumab, pembrolizumab, pidilizumab, PDR001, o biosimilares de los mismos.

En algunos aspectos, el segundo aglutinante de la composición de nanopartículas de inmunoterapia es un aptámero. En algunos aspectos, el segundo aglutinante de la composición de nanopartículas de inmunoterapia es un aptámero de PD-1.

En algunos aspectos, el segundo aglutinante de la composición de nanopartículas de inmunoterapia es una proteína de fusión. En algunos aspectos, el segundo aglutinante de la composición de nanopartículas de inmunoterapia es una proteína de fusión dirigida a PD-1. En una realización, la proteína de fusión es AMP-224 (proteína de fusión PD-L2 IgG2a; Amplimmune/GlaxoSmith Klein); AMP-514 (MEDI0680) (proteína de fusión PD-L2; Amplimmune/GlaxoSmith Klein), o un biosimilar del mismo.

En algunos aspectos, la composición de nanopartículas y la inmunoterapia con PD-1 se administran secuencialmente. En algunos aspectos, la composición de nanopartículas se administra antes de la administración de la inmunoterapia con PD-1. En algunos aspectos, la inmunoterapia con PD-1 se administra antes de la administración de la composición de nanopartículas. En algunos aspectos, la composición de nanopartículas y la inmunoterapia con PD-1 se administran simultáneamente.

En algunos ejemplos, la presente descripción se refiere a un método para aumentar la eficacia terapéutica de un tratamiento de inmunoterapia de un paciente que padece un cáncer que expresa PD-L1 o PD-L2. El método comprende administrar al paciente una cantidad eficaz terapéuticamente de la composición de nanopartículas como se describe en la presente memoria, y una inmunoterapia de PD-1 que comprende un segundo aglutinante, en donde cuando los aglutinantes de la composición de nanopartículas son capaces de unirse a PD-L1 y/o o PD-L2, el segundo aglutinante de la inmunoterapia es capaz de unirse a PD-1, y en donde cuando los aglutinantes de la composición de nanopartículas son capaces de unirse a PD-1, el segundo aglutinante de la inmunoterapia es capaz de unirse a PD-L1 y/o PD-L2.

En algunos ejemplos, la presente descripción se refiere a un método para tratar a un paciente que padece un cáncer que expresa PD-L1 o PD-L2. El método comprende administrar al paciente una cantidad eficaz terapéuticamente de la composición de nanopartículas como se describe en la presente memoria, y una inmunoterapia que comprende un segundo aglutinante, en donde los aglutinantes de la composición de nanopartículas son capaces de unirse a PD-L1, PD-L2, o PD-1, y el segundo aglutinante de la inmunoterapia es capaz de unirse a PD-L1, PD-L2, o PD-1, respectivamente.

En un ejemplo, un método para tratar a un paciente que padece un cáncer que expresa PD-L1 o PD-L2 comprende administrar al paciente una composición de nanopartículas que comprende nanopartículas y una inmunoterapia de PD-1. Cada una de las nanopartículas de la composición de nanopartículas comprende: (a) una proteína transportadora, (b) aglutinantes que tienen una parte de unión a PD-L1 o PD-L2 y (c) opcionalmente al menos un agente terapéutico. Tras la reconstitución con una disolución acuosa, los aglutinantes de las nanopartículas son capaces de unirse a PD-L1 o PD-L2.

En un ejemplo, un método para aumentar la eficacia terapéutica de un tratamiento de inmunoterapia de un paciente que padece un cáncer que expresa PD-L1 o PD-L2 comprende administrar al paciente (a) una cantidad eficaz terapéuticamente de la composición de nanopartículas descrita en la presente memoria y (b) una inmunoterapia con PD-1. En algunas realizaciones, la composición de nanopartículas se liofiliza y, tras la reconstitución con una disolución acuosa, los aglutinantes de las nanopartículas son capaces de unirse a PD-L1 o PD-L2.

En algunos aspectos, la cantidad de nanopartículas y la cantidad de los segundos aglutinantes se determinan en una proporción relativa entre sí.

En algunos aspectos, una proporción de cantidades eficaces sinérgicamente de la composición de nanopartículas y el segundo aglutinante de la inmunoterapia aumenta la eficacia terapéutica de la inmunoterapia de manera que la eficacia de la inmunoterapia es sustancialmente mayor que la administración de la misma en solitario. En un aspecto, la proporción de la cantidad de la composición de nanopartículas respecto al segundo aglutinante puede oscilar de aproximadamente 1:1, 1:1,5, 1:2, 1:2,5, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9 o 1:10 a aproximadamente 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10, 1:11, 1:12, 1:15 o aproximadamente 1:20.

En otro aspecto, el método para aumentar la eficacia terapéutica de una inmunoterapia reduce la dosis eficaz terapéuticamente del segundo aglutinante requerido o preferido en la inmunoterapia mediante la administración al paciente de las nanopartículas como se describe anteriormente en la presente memoria. La proporción de la cantidad de la composición de nanopartículas y la cantidad del segundo aglutinante está en un intervalo de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 1:10 y/o en donde la eficacia terapéutica sinérgica de la administración de dicha combinación puede conseguir una eficacia terapéutica sinérgica que es al menos aproximadamente 5 %, o aproximadamente 10 %, o aproximadamente 15 %, o aproximadamente 20 %, o aproximadamente 25 %, o aproximadamente 30 %, o aproximadamente 35 %, o aproximadamente 40 %, o aproximadamente 45 %, o aproximadamente 50 %, o aproximadamente el 55 %, o aproximadamente 60 %, o aproximadamente 65 %, o aproximadamente 70 %, o aproximadamente 80 %, o aproximadamente 90 % o aproximadamente 100 % mayor que la eficacia terapéutica de la monoadministración del segundo aglutinante. En otro aspecto, la eficacia terapéutica sinérgica de la administración de tal combinación es al menos aproximadamente 25 %, o aproximadamente 30 %, o aproximadamente 35 %, o aproximadamente 40 %, o aproximadamente 45 %, o aproximadamente 50 %, mayor que la eficacia terapéutica de las monoadministraciones de la composición de nanopartículas o del segundo aglutinante. En una realización, el segundo aglutinante de la inmunoterapia comprende aproximadamente 60 mg/mL para la administración intravenosa durante un período de aproximadamente 30 minutos a aproximadamente 60 minutos (por ejemplo, atezolizumab).

En una realización, el segundo aglutinante de la inmunoterapia comprende de aproximadamente 1,0 mg/kg a aproximadamente 3,0 mg/kg para administración intravenosa durante un período de aproximadamente 60 minutos (por ejemplo, nivolumab).

En una realización, el segundo aglutinante de la inmunoterapia comprende aproximadamente 2 mg/kg para administración intravenosa durante un período de aproximadamente 30 minutos (por ejemplo, pembrolizumab). En algunos ejemplos, la presente descripción se refiere a un método para aumentar la eficacia terapéutica de un tratamiento de inmunoterapia de un paciente que padece un cáncer que expresa PD-L1 o PD-L2. El método comprende administrar al paciente una cantidad eficaz terapéuticamente de la composición de nanopartículas como se describe anteriormente en la presente memoria, y una inmunoterapia que comprende un segundo aglutinante, en donde cuando los aglutinantes de las nanopartículas son capaces de unirse a PD-L1 y/o PD-L2, el segundo aglutinante de la inmunoterapia es capaz de unirse a PD-1, y en donde cuando los aglutinantes de las nanopartículas son capaces de unirse a PD-1, el segundo aglutinante de la inmunoterapia es capaz de unirse a PD-L1 y/o PD-L2.

En algunos ejemplos, la presente descripción se refiere a un método para tratar a un paciente que padece un cáncer que expresa PD-L1 o PD-L2. El método comprende administrar al paciente una cantidad eficaz terapéuticamente de la composición de nanopartículas como se describe anteriormente en la presente memoria, y una inmunoterapia que comprende un segundo aglutinante, en donde los aglutinantes de las nanopartículas son capaces de unirse a PD-L1, PD-L2, PD-1, en donde el segundo aglutinante de la inmunoterapia es capaz de unirse al mismo PD-L1, PD-L2, PD-1 que los aglutinantes de las nanopartículas.

En algunos aspectos, la cantidad de las nanopartículas es una cantidad eficaz de la composición de nanopartículas. En algún aspecto, la cantidad de las nanopartículas es menor que la cantidad eficaz de la composición de nanopartículas cuando se administra en solitario al paciente.

En algunos aspectos, los segundos aglutinantes tienen una cantidad eficaz. En algunos aspectos, los segundos aglutinantes están en una cantidad menor que la cantidad eficaz cuando se administran en solitario al paciente.

En una realización, la cantidad eficaz terapéuticamente de las nanopartículas descritas en la presente memoria comprende de aproximadamente 1 mg/m2 a aproximadamente 200 mg/m2 de anticuerpo, de aproximadamente 2 mg/m2 a aproximadamente 150 mg/m2, de aproximadamente 5 mg/m2 a aproximadamente 100 mg/m2, de aproximadamente 10 mg/m2 a aproximadamente 85 mg/m2, de aproximadamente 15 mg/m2 a aproximadamente 75 mg/m2, de aproximadamente 20 mg/m2 a aproximadamente 65 mg/m2, de aproximadamente 25 mg/m2 a aproximadamente 55 mg/m2, de 30 mg/m2 aproximadamente 45 mg/m2, o de aproximadamente 35 mg/m2 a aproximadamente 40 mg/m2 de anticuerpo. En otras realizaciones, la cantidad eficaz terapéuticamente comprende de aproximadamente 20 mg/m2 a aproximadamente 90 mg/m2 de anticuerpo. En una realización, la cantidad eficaz terapéuticamente comprende de 30 mg/m2 a aproximadamente 70 mg/m2 de anticuerpo. En una realización, la cantidad eficaz terapéuticamente de las nanopartículas descritas en la presente memoria comprende de aproximadamente 50 mg/m2 a aproximadamente 200 mg/m2 de proteína transportadora o proteína transportadora y agente terapéutico. En una realización preferida, la cantidad eficaz terapéuticamente comprende de aproximadamente 75 mg/m2 a aproximadamente 175 mg/m2 de proteína transportadora o proteína transportadora y agente terapéutico. Los valores contemplados incluyen cualquier valor, subintervalo o intervalo dentro de cualquiera de los intervalos enumerados, incluidos los puntos finales.

En una realización, la cantidad eficaz terapéuticamente de la composición de nanopartículas comprende de aproximadamente 20 mg/m2 a aproximadamente 90 mg/m2 de aglutinante, por ejemplo, anticuerpo, aptámero o Fc de fusión. En una realización preferida, la cantidad eficaz terapéuticamente comprende de 30 mg/m2 a aproximadamente 70 mg/m2 de aglutinante, por ejemplo, anticuerpo, aptámero o Fc de fusión. Los valores contemplados incluyen cualquier valor, subintervalo o intervalo dentro de cualquiera de los intervalos enumerados, incluidos los puntos finales.

Los cánceres o tumores que se pueden tratar con las composiciones y los métodos descritos en la presente memoria incluyen, pero no se limitan a: cáncer del tracto biliar; cáncer cerebral, incluidos glioblastomas y meduloblastomas; cáncer de mama; cáncer de cuello uterino; coriocarcinoma; cáncer de colon; cáncer endometrial; cáncer de esófago, cáncer gástrico; neoplasmas hematológicos, incluyendo leucemia linfocítica aguda y mielógena; mieloma múltiple; leucemias asociadas al SIDA y linfoma de leucemia de células T del adulto; neoplasias intraepiteliales, incluidas la enfermedad de Bowen y la enfermedad de Paget; cáncer de hígado (hepatocarcinoma); cáncer de pulmón; linfomas, incluyendo enfermedad de Hodgkin y linfomas linfocíticos; neuroblastomas; cáncer oral, incluido el carcinoma de células escamosas; cáncer de ovario, incluidos los derivados de células epiteliales, células del estroma, células germinales y células mesenquimatosas; cáncer de páncreas; cáncer de próstata; cáncer de recto; sarcomas, incluyendo leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma, liposarcoma, fibrosarcoma y osteosarcoma; cáncer de piel, incluyendo melanoma, sarcoma de Kaposi, cáncer basocelular y cáncer de células escamosas; cáncer testicular, incluyendo tumores germinales (seminoma, no seminoma [teratomas, coriocarcinomas]), tumores estromales y tumores de células germinales; cáncer de tiroides, incluyendo adenocarcinoma de tiroides y carcinoma medular; y cáncer renal incluyendo adenocarcinoma y tumor de Wilms. En realizaciones importantes, los cánceres o tumores incluyen cáncer de mama, linfoma, mieloma múltiple, y melanoma.

En general, los compuestos de esta invención se administrarán en una cantidad eficaz terapéuticamente mediante cualquiera de los modos de administración aceptados para agentes que tienen utilidades similares. La cantidad real del compuesto de esta invención, es decir, las nanopartículas, dependerá de numerosos factores, tales como la gravedad de la enfermedad a tratar, la edad y salud relativa del sujeto, la potencia del compuesto empleado, la vía y forma de administración, y otros factores bien conocidos por el experto en la técnica.

Una cantidad eficaz a de dichos agentes se puede determinar fácilmente mediante experimentación rutinaria, al igual que la vía de administración más eficaz y conveniente, y la formulación más apropiada. Varias formulaciones y sistemas de administración de fármacos están disponibles en la técnica. Véase por ejemplo, Gennaro, AR, ed. (1995) Remington’s Pharmaceutical Sciences, 18a ed., Mack Publishing Co.

Una cantidad eficaz o una cantidad o dosis eficaz terapéuticamente de un agente, por ejemplo, un compuesto de la invención, se refiere a la cantidad del agente o compuesto que da como resultado una mejora de los síntomas o una prolongación de la supervivencia en un sujeto. La toxicidad y la eficacia terapéutica de dichas moléculas se pueden determinar mediante procedimientos farmacéuticos estándar en cultivos celulares o animales de experimentación, por ejemplo, determinando la DL50 (la dosis letal para el 50 % de la población) y la DE50 (la dosis eficaz terapéuticamente en el 50 % de la población). La relación de dosis de los efectos tóxicos respecto a los terapéuticos es el índice terapéutico, que se puede expresar como la relación DL50/DE50. Se prefieren los agentes que muestran altos índices terapéuticos.

La cantidad eficaz o cantidad eficaz terapéuticamente es la cantidad del compuesto o composición farmacéutica que conseguirá la respuesta biológica o médica de un tejido, sistema, animal o ser humano que busca el investigador, veterinario, médico u otro clínico. Las dosis pueden variar dentro de este intervalo dependiendo de la forma de dosificación empleada y/o de la vía de administración empleada. La formulación exacta, la vía de administración, la dosificación, y el intervalo de dosificación se deben elegir según los métodos conocidos en la técnica, en vista de las especificaciones de la afección de un sujeto.

La cantidad de dosificación y el intervalo se pueden ajustar individualmente para proporcionar niveles plasmáticos de la fracción activa que son suficientes para conseguir los efectos deseados; es decir, la concentración mínima eficaz (CME). La CME variará para cada compuesto, pero se puede estimar a partir de, por ejemplo, datos y experimentos in vitro con animales. Las dosis necesarias para conseguir la CME dependerán de las características individuales y de la vía de administración. En los casos de administración local o absorción selectiva, la concentración local eficaz del fármaco puede no relacionarse con la concentración plasmática.

Ejemplos

La presente descripción se ilustra empleando nanopartículas compuestas de paclitaxel unido a albúmina (es decir, ABRAXANE®) o cisplatino como núcleo, y anticuerpos que reconocen PD-L1 (por ejemplo, atezolizumab). Un experto en la técnica comprenderá que la preparación y el uso de las nanopartículas de los Ejemplos tienen el único propósito de ilustrar, y que la presente descripción no está limitada por esta ilustración.

Cualquier abreviatura empleada en la presente memoria, tiene un significado científico normal. Todas las temperaturas son °C a menos que se indique lo contrario. En la presente memoria, los siguientes términos tienen los significados de a continuación, a menos que se defina lo contrario:

Ejemplo 1: Unión a antígeno de AR160 liofilizado

Las células de linfoma de Daudi positivas para CD20 se marcaron con isotipo compatible con el control o CD20 anti­ humano marcado con fluorescencia en el panel F y A, respectivamente, y se analizaron mediante citometría de flujo. En los otros paneles, las células de Daudi se trataron previamente con ABX, AR160, AR160L (AR160 liofilizado y resuspendido en una disolución adecuada para inyección), o Rituxan antes del marcaje con CD20. La Figura 1 demuestra que la unión de CD20 se bloquea específicamente por las partículas AR y Rituxan, pero no por ABX en solitario. Estos resultados sugieren que el AR se une a su ligando CD20 en estas células bloqueando la unión del anti-CD20 fluorescente.

La Figura 2 es una superposición de histograma de los datos presentados en la Figura 1.

Las Figuras 3A y 3B representan las comparaciones del tamaño de partícula de ABX en solitario en relación con AR (Figura 3A) y AT (Figura 3B) recién preparadas y liofilizadas.

La Figura 4 presenta los resultados de un ensayo de proliferación de Daudi que compara la toxicidad de las partículas de ABX y AR. Los datos demuestran que las nanopartículas liofilizadas y no liofilizadas tienen esencialmente la misma toxicidad en el ensayo Daudi.

Ejemplo 2: Análisis fluorescente de acumulación tumoral de nanopartículas marcadas con AlexaFluor 750.

Los ratones recibieron inyecciones intravenosas (IV) de cantidades iguales de ABRAXANE® marcado, ABRAXANE® marcado recubierto con anticuerpos no específicos (AB IgG), o ABRAXANE® marcado recubierto con Rituximab (AR160). Las regiones de interés (ROI) 2, 3, y 4 (Figura 5A) rastrean la acumulación de tumores en función de un umbral de fluorescencia; ROI 1, 5, y 6 (Figura 5A) sirven como referencias de fondo. La fluorescencia se determinó en los ROIs 24 horas después de la inyección. La Figura 5B es un gráfico de barras de la fluorescencia media por unidad de área tumoral de ratones en los tres grupos de tratamiento que se determinaron para proporcionar la administración de tumor macroscópico. La Figura 5C es una gráfica de barras de la fluorescencia media por unidad de área tumoral normalizada mediante el ROI de fondo para proporcionar la proporción de fármaco administrado al tumor frente al cuerpo. Los datos demuestran que la administración de nanopartículas AR160 da como resultado una mayor fluorescencia en comparación con ABRAXANE® en solitario o ABRAXANE® recubierto de anticuerpos no específicos.

Ejemplo 3: Eficacia in vivo de las nanopartículas de ABX-Rituximab que tienen un tamaño de 225 nm

Para preparar una nanopartícula que tiene un tamaño de 225 nm, las partículas se prepararon como se describe en PCT Pub. N° WO2017/031368, pero la proporción de BEV respecto a ABRAXANE® era 4:5, es decir, 4 partes de BEV y 5 partes de ABRAXANE®. Esta proporción produce nanopartículas que tienen un tamaño de 225 nm (AB225). El efecto de AB225 se ensayó en animales como se describe en PCT Pub. N° WO2017/031368. La Figura 6 representa la supervivencia de los ratones tratados con una dosis única de disolución salina, BEV, ABX, AB160 y AB225 y con AB160 con un tratamiento previo de BEV. A los 30 días posteriores a la administración, la supervivencia de los ratones tratados con AB225, y AB160 con o sin tratamiento previo con BEV supera con creces la supervivencia de los ratones tratados con BEV en solitario o ABRAXANE® en solitario.

Ejemplo 4: Preparación de nanopartículas de Atezolizumab-ABRAXANE®

Atezolizumab y ABRAXANE® (ABX) se coincubaron a temperatura ambiente durante 30 minutos a una concentración de 4 mg/mL y 10 mg/mL, respectivamente, para formar la nanopartícula, AA130.

Para determinar si atezolizumab y ABX son capaces de interaccionar para formar complejos de nanopartículas, se realizó interferometría de biocapa (BLitz) (Forte Bioscience) empleando sondas de estreptavidina. Se unieron 100 ug/ml de atezolizumab biotinilado en 1 x PBS a la sonda de estreptavidina. Después de lavar el atezolizumab no unido de la sonda, la sonda unida al anticuerpo se expuso a ABX en concentraciones de 100, 500, y 1000 pg/mL en 1 X PBS. Se empleó una sonda de anticuerpo expuesta a PBS como fondo y se restó el fondo. Se empleó el programa informático BLItz para calcular las constantes de disociación (Figura 7). Se determinó que la Kd era 1,462 x 10-9.

Ejemplo 5: Determinación del tamaño de las nanopartículas de Atezolizumab-ABRAXANE®

Se empleó Mastersizer NS300 para determinar el tamaño de partícula de ABX unido a atezolizumab en relación con ABX en solitario. Nanosight emplea la dispersión dinámica de la luz y el movimiento browniano para calcular el tamaño de las partículas.

Atezolizumab y ABX se coincubaron para formar la nanopartícula, AA130, como se describe anteriormente. ABX se diluyó 1:200 y ABX unido a atezolizumab se diluyó 1:800; se capturaron y analizaron tres videoclips de 30 segundos para determinar el tamaño de las partículas (Figura 8A). La Figura 8B es una imagen fija de uno de los videoclips de AA130. Se determinó que el tamaño medio de partícula de las nanopartículas de atezolizumab-ABX es de aproximadamente 129 nm; el tamaño medio de ABX en solitario es de aproximadamente 90 nm.

Ejemplo 6: AA130 se une a PD-L1

Se realizó una citometría de flujo para acceder a la unión de atezolizumab y atezolizumab unido a Abraxane al ligando PD-L1. Para este experimento se empleó la línea celular de melanoma positiva para PD-L1, C8161. Se preparó AA130 como se describe anteriormente y se centrifugó una alícuota de las nanopartículas a 6000 rpm durante 10 minutos para eliminar cualquier parte de atezolizumab no unido. Las células C8161 se tiñeron con control de isotipo marcado con FITC y PD-L1 anti-humano como controles negativo y positivo, respectivamente. Las células C8161 se incubaron durante 30 minutos con ABX y atezolizumab en solitario y la nanopartícula AA130. Después de la incubación, las células se marcaron con PD-L1 anti-humano marcado con FITC durante 30 minutos y se lavaron con tampón FACS (1xPBS BSA al 0,5 % y azida Na al 0,05 %). Después del lavado, las células se analizaron mediante citómetro de flujo en el Guava 8HT y el análisis de datos se realizó con el programa informático Gauvasoft (Millipore).

Las células C8161 se trataron previamente con anticuerpo de control de isotipo (Figura 9A), no se trataron (Figura 9B), o se trataron con ABRAXANE® (Figura. 9C), atezolizumab (Figura 9D), o AA130 (Figura 9E), después se marcaron con anticuerpo anti-PD-L1 marcado con fluorescencia. El atezolizumab en el contexto de la partícula de 130 nm mantiene su capacidad para unirse a su ligando, PD-L1.

Ejemplo 7: Toxicidad celular de AA130

Se expusieron células de melanoma C8161 a ABX y AA130 a concentraciones de paclitaxel de 0 a 200 pg/ml durante la noche para determinar la toxicidad celular. Las células también se incubaron con EdU, un análogo de timidina. Al día siguiente se recogieron las células, se fijaron con paraformaldehído al 2 % y se permeabilizaron con saponina al 1 %. Después de la permeabilización, las células se incubaron durante 30 minutos con un anticuerpo anti-EdU marcado con FITC para determinar el porcentaje de células que proliferan. Después del lavado, las células se analizaron mediante citómetro de flujo en el Guava 8HT y el análisis de datos se realizó con el programa informático Gauvasoft (Millipore). El índice de proliferación se calculó mediante normalización para un control positivo sin tratar.

La Figura 10 muestra la toxicidad dependiente de la dosis de ABX (línea continua) y AA130 (línea discontinua) en células C8161. El AA130 tiene una toxicidad celular similar al ABX en solitario.

Ejemplo 8: Eficacia in vivo de las nanopartículas de AA130

A ratones desnudos atímicos (Harlan Sprague Dawley) se les inyectó 2x106 células tumorales de melanoma C8161 positivas para PD-L1. Se permitió que los tumores crecieran hasta aproximadamente 600 mm3 y se trataron mediante una inyección intravenosa de 100 pl en la vena de la cola con disolución salina, atezolizumab en solitario (18 mg/kg), ABX en solitario (45 mg/kg) y AA130 (18 mg/kg de atezolizumab y 45 mg/kg de ABX) una vez (Figuras 11A-11D). El crecimiento tumoral se controló 3 veces por semana. El tamaño del tumor se calculó con la ecuación: (largo x ancho2)/2.

Las curvas de crecimiento tumoral (Figura 12) muestran un crecimiento tumoral lento en los ratones tratados con AA130 en relación con la disolución salina y los fármacos individuales en solitario. Las curvas de Kaplan Meier se generaron empleando el programa informático Graph Pad. La supervivencia media para cada grupo era de 14, 13, 16, y 21,5 días para la disolución salina, atezolizumab, ABX y AA130, respectivamente. Las diferencias de supervivencia entre AA130 y todos los demás grupos eran significativas con valores de p de 0,0008 para la disolución salina, 0,0015 para atezolizumab, y 0,0113 para Abraxane.

Claims (13)

REIVINDICACIONES

1. Una composición de nanopartículas para usar en el tratamiento de un cáncer que expresa PD-L1

en donde cada una de las nanopartículas comprende albúmina, atezolizumab, y paclitaxel, en donde las nanopartículas son capaces de unirse a PD-L1; y

en donde la composición de nanopartículas es para administración con una inmunoterapia de PD-1.

2. Una inmunoterapia de PD-1 para usar en el tratamiento de un cáncer que expresa PD-L1,

en donde la inmunoterapia con PD-1 es para administración con una composición de nanopartículas; y en donde la composición de nanopartículas comprende una o más nanopartículas que comprenden albúmina, atezolizumab, y paclitaxel, en donde las nanopartículas son capaces de unirse a PD-L1.

3. La composición de nanopartículas para el uso de la reivindicación 1 o la inmunoterapia de PD-1 para el uso según la reivindicación 2, en donde la inmunoterapia de PD-1 comprende un aglutinante capaz de unirse a PD-1, en donde el aglutinante es un anticuerpo, un fragmento de unión a antígeno del mismo, un aptámero, una proteína de fusión, o cualquier combinación de los mismos.

4. La composición de nanopartículas o la inmunoterapia de PD-1 para usar según la reivindicación 3, en donde el aglutinante es un aglutinante libre; o

el aglutinante es una proteína de fusión y, opcionalmente, en donde la proteína de fusión es AMP-224 o AMP-514.

5. La composición de nanopartículas o la inmunoterapia de PD-1 para usar según la reivindicación 3, en donde el aglutinante se integra sobre y/o en una nanopartícula que comprende una proteína transportadora y dicho aglutinante, y opcionalmente un segundo agente terapéutico.

6. La composición de nanopartículas o la inmunoterapia de PD-1 para usar según la reivindicación 3, en donde el aglutinante es un anticuerpo anti-PD-1, opcionalmente en donde el anticuerpo anti-PD-1 es nivolumab, pembrolizumab, pidilizumab, PDR001, o un biosimilar de los mismos.

7. La composición de nanopartículas o la inmunoterapia de PD-1 para usar según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde la composición de nanopartículas se liofiliza, el método comprende además reconstituir la composición de nanopartículas en una disolución acuosa antes de la administración.

8. La composición de nanopartículas o la inmunoterapia de PD-1 para usar según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 6, en donde la composición de nanopartículas y el aglutinante son para administración simultánea o secuencial, opcionalmente en donde la composición de nanopartículas es para administración antes de la administración del aglutinante o en donde el aglutinante es para la administración antes de la administración de la composición de nanopartículas.

9. La composición de nanopartículas o la inmunoterapia de PD-1 para usar según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, que comprende además un agente terapéutico adicional seleccionado de abiraterona, bendamustina, bortezomib, carboplatino, cabazitaxel, cisplatino, clorambucilo, dasatinib, docetaxel, doxorrubicina, epirrubicina, erlotinib, etopósido, everolimus, gefitinib, idarrubicina, imatinib, hidroxiurea, imatinib, lapatinib, leuprorelina, melfalán, metotrexato, mitoxantrona, nedaplatino, nilotinib, oxaliplatino, pazopanib, pemetrexed, picoplatino, romidepsina, satraplatino, sorafenib, vemurafenib, sunitinib, tenipósido, triplatino, vinblastina, vinorelbina, vincristina, o ciclofosfamida.

10. Una nanopartícula que comprende:

(a) albúmina,

(b) atezolizumab, y

(c) paclitaxel,

de manera que dicha nanopartícula es capaz de unirse a PD-L1.

11. Una composición de nanopartículas que comprende la nanopartícula de la reivindicación 10, que opcionalmente se liofiliza, en donde tras la reconstitución con una disolución acuosa, la nanopartícula es capaz de unirse a PD-L1.

12. La composición de nanopartículas de la reivindicación 11, que comprende además un agente terapéutico adicional seleccionado de abiraterona, bendamustina, bortezomib, carboplatino, cabazitaxel, cisplatino, clorambucilo, dasatinib, docetaxel, doxorrubicina, epirrubicina, erlotinib, etopósido, everolimus, gefitinib, idarrubicina, imatinib, hidroxiurea, imatinib, lapatinib, leuprorelina, melfalán, metotrexato, mitoxantrona, nedaplatino, nilotinib, oxaliplatino, pazopanib, pemetrexed, picoplatino, romidepsina, satraplatino, sorafenib, vemurafenib, sunitinib, tenipósido, triplatino, vinblastina, vinorelbina, vincristina, o ciclofosfamida.

13. Un kit que comprende la composición de nanopartículas de la reivindicación 12 y un agente de inmunoterapia de PD-1 que es un anticuerpo, un fragmento de unión a antígeno del mismo, un aptámero, una proteína de fusión, o cualquier combinación de los mismos, capaz de unirse a PD-1.