JPS6178731A - 加熱処理免疫グロブリン製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、ウィルス不活化のために加熱処理された免疫
グロブリン製剤に関する。

〔従来の技術〕

従来より、アルブミンなどの血漿蛋白について、そこに
混入してくる懸念のあるウィルスを不活化する最も確実
な方法として、水溶液状■での加熱処理法（以下、液状
加熱法と称す）が、マレイら〔ザ　ニューヨーク　アカ
デミ−オブ　メデイスン、３１（５）、３４１〜３５Ｂ
　　（１９５５）　］の報告に基づいてとられており、
以来今日に至るまで長年；こわたり汎用され、疫学的に
も液状加熱法のウィルス６活化効果が立証されている。

しかしながら、アルブミンのように液状加熱に耐えるも
のは血漿蛋白の中でも掻く限られており、特に生理活性
または生物活性を有する血漿蛋白は情に対し非常に敏感
で、熱変性をおこし易く、活性の低下、消失を招きやす
い。

一方、液状加勢法とは別に、水分を含まないか、または
ｔよとんど含まない乾燥状態で、血漿蛋白の１ｍ　訪処
理（以下、乾熱処理という）を行うと、液状加勢法に比
べ、その活性の低下が著しく抑制されることが血１ｆＬ
凝固第〜Ｉ囚子をモデルとする実験で明らかとなった。

しかし、−Ｓに乾熱処理においても、安定化剤を添加し
なければ血Ｎ”ｌ白の活性低下はまぬがれ得ないし、ま
た、水に対する溶解性および溶状が悪くなるというのが
実情である。

而して、加熱によるウィルス不活化の作用機序は、液状
加熱では主としてウィルスの査白賀成分の変性に基づい
ているのに対し、乾熱処理では主にウィルスの指貫成分
の酸化によって傷害を受け、病原性が失われるといわれ
ており、両方のウィルス不活化機構はお互いに重なり合
う部分があるものの、基本的には異なることが示唆され
ている；ラーン、フィジカル　メソフズ　オブ　ステラ
リゼーンジン　オブ　マクロオーガニズムズ、バクテリ
オロジカル　レビューズ、９．１〜４７（１９４５）：
。

ところで、免疫グロブリン製剤は、これまで広く各種感
染症の予防並びに治療に役立てられてきたが、熱安定性
に欠けること、多種ウィルス、細菌等の抗体を広（含有
している等の理由てａｔ過による除菌方法がとられてい
る。しかし、免疫グロブリンを血漿蛋白の分画から得る
場合には、肝炎ウィルスやエイズウィルス等の極微小サ
イズの夾雑ウィルスはフィルタ一孔を通過することが可
能であり、得た免疫グロブリン中に混在することを１０
０％否定することはできない。

また、免疫グロブリンは、通常その凍結乾燥品を注射用
ｙ留水に溶解させて使用されるが、その際、水に対する
溶解性および溶状が悪くなるというｇ照点を育する。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明の目的は、夾雑が危惧されるウィルスが不活化さ
れ、かつ活性の高い免疫グロブリンを提供することであ
る。

本発明の他の目的は、水に対する溶解性および溶状を良
好に保ちうるウィルス不活化加熱処理免疫グロブリン製
剤を提供することである。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者らは、これらの問題を解決すべく加熱によるウ
ィルス不活化について多年にわたり鋭意研究を重ねてき
た。その結果、免疫グロブリンを乾りλ処理することに
よって免疫グロブリンの活性を失うことなく、ウィルス
を不活化できること、特に安定剤の存在下に免疫グロブ
リンの乾熱処理を行うと、更に免疫グロブリンが顕著に
安定化され、しかも、かかる条件下に乾熱処理を行った
免疫グロブリンは水に対する溶解性および溶状が良いこ
とを見出し、本発明の加熱処理免疫グロブリンを完成し
た。

即ち、本発明は、ウィルス夾雑が危惧される免疫グロブ
リンを、乾燥状態にて、好ましくは特定の安定剤の存在
下にウィルスが不活化されるまで加熱処理してなる免疫
グロブリンに関するものであり、これによって夾雑する
ウィルスが不活化され、かつ安定性および水溶解性が改
善された免疫グロブリンを提供できる。

本発明製剤の主成分である免疫グロブリンは、免疫グロ
ブリンとしての生物活性または生理活性を有するもの、
たとえば血漿蛋白を分画して得られるものである。

かかる免疫グロブリンとしては、たとえばヒト、ウマ及
びマウス由来のものが例示され、それはポリクローナル
抗体、モノクローナル抗体のいずれでもよく、好ましく
はＩｇＧ、１ｇ八又はＩｇＭである。

免疫グロブリン型刻の製造は、通常免疫グロブリン溶液
を凍結乾燥した後、実貢的に乾燥状等で、たとえば含湿
度０．０５〜３％の条件下で油体することによって実施
されるが、その際、特定の安定剤を添加しておくことに
よって、より一層免疫グロブリンの安定が促進され、ま
た免疫グロブリンの溶解性および溶状が改善される。

本発明にて使用される安定剤としては、グリシン、塩化
ナトリウム、酢酸ナトリウム、ポリエチレングリコール
、アルブミンおよびマンニトールから選ばれる少なくと
も一種が挙げられる。

安定剤の使用量はたとえば次の通りである。即ち、モノ
クローナル免疫グロブリンの場合には、その０．ＯＩ〜
２　Ｗ　／　Ｖ％溶液に対して、また、ポリクローナル
免疫グロブリンの場合には、その２〜８ｗ／ｖ％７容ｌ
＆に対して、０．０１〜２Ｗ／Ｖ％程度の濃度となるに
相当する量である。この程度の添加量において、安定化
効果、水溶解性、溶状と製剤化のバランスが最も良好で
ある。

免疫グロブリンは、通常凍結乾燥品として使用に供する
が、安定剤は、血漿蛋白の凍結乾燥処理の前に添加して
お（ことが好ましい。

免疫グロブリン製剤には、本発明製剤製造工程中に用い
た安定剤は乾燥処理後に除去し、当該安定剤を含まない
製剤としてもよいが、そのまま配合してお（ことが好ま
しい。

加熱処理は、夾雑ウィルスを不活化するに十分な温度及
び時間行えばよく、例えば３０−１００℃、好ましくは
約６０℃にて１０分〜２００時間、好ましくは１０〜ｌ
ＯＯ時間行われる。

本発明の加熱処理による不活化対象とされるウィルスは
、ヒト血漿蛋白に夾雑が危惧されるウィルスであり、特
に肝炎ウィルスである。

また、本発明の加熱処理は不活化ガス雰囲気下で行うこ
とにより、加熱時の安定性をより高めることが出来る。

不活化ガスとしては、たとえば窒素ガス、アルゴン、ヘ
リウムなどが挙げられる。

さらに、免疫グロブリンの精製度と耐熱性とは相関性が
乏しく、どのような精製度の免疫グロブリンを用いても
、安定剤による安定化効果は変わらない、従って、本発
明の加熱処理は免疫グロブリンの精製工程のどの段階で
行ってもよい。

本発明乾燥処理における乾燥状態は実質的に無水の状態
であり、可及的に水分の少ない状態であることが好まし
い、水分の含量は、通常３％以下、好ましくは１％以下
であり、通常は３〜０１０５％程度である。

〔作用・効果〕

かくして得られた本発明製剤は、血漿蛋白の活性を大き
く損失することな（、製剤中に混入が危惧されているウ
ィルスを不活化した免疫グロブリン製剤であり、本発明
製剤の使用によってヒト血醤蛋白に夾雑が危惧されるウ
ィルス、特に肝炎ウィルス等による感染の可能性を少な
くしている。

また、本発明の製剤は、水に対する溶解性に優れており
、水溶解物の溶状が良好に保たれるもの、である。

以下、本発明を実験例および実施例により説明するが、
本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。

実施例ｉ 正常ヒト血禁よりコーン氏の冷アルコール分画法に従い
、Ｆｒ−［１（ＩｇＧ画分）を得た。このＦｒ−■ペー
スト１ｋｇを冷水１．５１！で溶解した後、グリシン１
５ｇを添加した。このＩｇＧ溶液のｐＨを６．３〜６．
５に修正後、凍結乾燥を行った。凍結乾燥後の含温度は
、０．８％であった。この凍結乾燥さ株たＩｇＧ粉末を
６０℃で７２時間加熱処理し、加熱処理前のＩｇＧと比
較しながら、溶解性、ＨＢｓＡｇ抗体価、麻疹抗体価、
ジフテリア抗毒素価、セルロースアセテート膜電気泳動
、ゲル濾過の項目につき試験した結果、加熱処理後でも
著明な変化はみられず、本加熱条件下ではヒ）ＩｇＧは
安定であることがわかった。

実施例２ コーン氏の冷アルコール分画法で得られたＦｒ−ｍ画分
より、塩析法、アクリノール分画法等で精製されたヒト
ＩｇＡの５　ｗ　／　ｖ％液にグリシンをｌ　ｗ　／　
ｖ％および塩化ナトリウムを０．５Ｗ／Ｖ％添加し、凍
結乾燥した。凍結乾燥粉末の含、・８度は２％以下であ
った０本粉末を６０°Ｃで７２時間加熱した後、溶解性
、ＩｇＡ７ｉ度、麻疹抗体価、セルロースアセテート膜
電気泳動につき試験した６加熱前の粉末の試験成績と比
較し、加熱後でも安定であることがわかった。

実施例３ ＩＢＭクラスに匡する抗巳トリンバ芽球に対するマウス
モノクローナル抗体０．ｌＷ／Ｖ％にヒトアルブミンを
ＩＷ／ｖ９４、塩化ナトリウムを０，４５ｗ　／　ｖ％
、マンニトールを’ｌ　ｗ　／　ｖ％およびボリエ千し
／グリコール４０００を０．１ｗ／Ｖ％ｆＡ加した後、
凍結乾燥し、さらに６０℃で７２時間加熱を行った。加
熱前後での本島につき、ヒトリンパ芽球に対する抗体価
および溶解性を試験した結果、加熱処理された本製剤の
抗体価は７５％残存し、溶解性は変化しないことがわか
った。

実施例４ ＩｇＧクラスに属するヒト株化癌細胞（ＭＫＮ−４５）
に対するマウスモノクローナル抗体２Ｗ／Ｖ％の水？８
液に、塩化ナトリウムを０．６Ｗ／Ｖ％およびマンニト
ールを１ｗ／ｖ％添加し、凍結乾燥した。さらに６０℃
で７２時間加熱を行い、加り人前後の溶解性および抗体
価を試験した結果、加熱処理を経た本製剤は何ら変化し
ないことがわかった。

実施例５ ＩｇＧクラスに属するヒトリンパ芽４によ・ツするウマ
ポリクローナル抗体５Ｗ／ν％の水溶液に、塩化ナトリ
ウムを０．７Ｗ／Ｖ％およびグリシンをｌ　ｗ　／　ｖ
％添加し、凍結乾燥した。さらに６０℃で７２時間加熱
を行い、実施例４に率し、試験した結果、加熱処理を経
た本製剤はＣイらの変化を受けていないことがわかった
。

実施例６ 特開昭５８−７２５２６の方法に準して、ＥＢウィルス
で形質転換されたヒトＢ−リ／バ＃Ｂ１１２！によって
１ｇＧクラスに属するＨＢｓＡＨに対するヒトモノクロ
ーナル抗体を産生させた。この抗体の１ｗ／ｖ％水溶液
に塩化ナトリウムを１ｗ／ｖ％添加し、凍結乾燥した。

その後、７０℃で３０時間加熱を行い、ＨＢｓＡｇｆｊ
ｔ体価を試験した結果、加熱処理を経た本製剤は何らの
変化を受けていないことがわかった。

実験例１　（安定剤の種類） 実施例１に準じて調製したＦｒ−［１（ＩｇＧｉｉ！分
）溶液に、第１表記載の安定剤をＩｇＧｇ分の５　ｗ　
／　ｖう６ン宿液にそれぞれｏ、ｓｗ／ｖ９４ずつ添加
し、ｐＨを６．３〜６．５に調整後、凍結乾燥した。そ
のＩｇＧ粉末を６０℃で７２時間加さ処理した後、！８
Ｍ性、ジフテリア抗毒素価、麻疹抗体価について試験し
た。その結果を第１表に示す、試験方法は、「生物学的
製剤基準」に従った。

この結果、安定剤の使用により、無添加（コン−トロー
ル）の場合に比べて安定性が改善されることが判った。

また、安定剤は単独使用でも併用の場合でもその効果は
同様であった。併用時の組成比の違いによる効果の差も
特に見られなかった。

実験例２（安定剤の添加？ｉ１） 実施例１に準して！ｇＩ！ｌ！シたＦｒ−［１（ＩｇＧ
ＷＭ分）の５　ｗ　／　ｖ％水溶液に、第２表記載の添
加量で各安定剤を添加し、ρ１１を６．３〜６．５に調
整後、凍結乾燥した。その後は実験例１に準じて行った
。

その結果を第２表に示す。

この結果、を効な添加量は、＋ｇＧ画分水溶液０．０１
〜’ｌ　ｗ　／　ｖ％であることが判った。この有効量
は安定剤の単独使用、併用を問わず１６１様であった。

（風下余白）

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. （１）ウィルス夾雑が危惧される免疫グロブリンにおい
   て、乾燥状態にてウィルスが不活化されるまで加熱処理
   されてなることを特徴とする免疫グロブリン製剤。
2. （２）安定剤の存在下に、含湿度３％以下の条件下で加
   熱処理されてなることを特徴とする特許請求の範囲第（
   １）項記載の製剤。
3. （３）免疫グロブリンがヒト、ウマまたはマウス由来で
   あることを特徴とする特許請求の範囲第（１）項記載の
   製剤。
4. （４）ヒトまたはマウス由来の免疫グロブリンがポリク
   ローナルまたはモノクローナル抗体であることを特徴と
   する特許請求の範囲第（１）項記載の製剤。
5. （５）安定剤がグリシン、塩化ナトリウム、酢酸ナトリ
   ウム、ポリエチレングリコール、アルブミンおよびマン
   ニトールから選ばれる少なくとも一種である特許請求の
   範囲第（２）項記載の製剤。
6. （６）免疫グロブリンに加える安定剤の濃度がモノクロ
   ーナル免疫グロブリンの０．０１〜２ｗ／ｖ％溶液また
   はポリクローナル免疫グロブリンの２〜８ｗ／ｖ％溶液
   に対して、０．０１〜２ｗ／ｖ％の濃度となるに相当す
   ることを特徴とする特許請求の範囲第（２）項記載の製
   剤。