【発明の詳細な説明】
免疫グロブリン溶液の低温殺菌 発明の分野
本発明は、熱処理、さらに詳しくは免疫グロブリン溶液の低温殺菌（pasteuri
zation）に関し、特に本発明は、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）溶液の低温殺菌に
関する。
低温殺菌は、治療用のＩｇＧ溶液の製造においてウイルスを不活性化するため
の方法として使用することができる。しかし、この方法は免疫グロブリンの生理
的機能を維持する条件下で行われ、かつ追加の精製をすることなく安定な生成物
を製造できることが好ましい。発明の背景
製造工程中の免疫グロブリンの変性は、免疫グロブリン分子の凝集や機能の喪
失につながる。免疫グロブリンの凝集物は、患者の静脈内に注入されると、補体
カスケードの活性化によって有害反応を引き起こすことがある。これまで、製造
業者は、免疫グロブリン分子のＦｃ領域の修飾により凝集を防ぎ補体結合を低下
させるか、または最終生成物中の免疫グロブリン凝集物含量が低くなるような製
造工程を使用することにより、この問題に対処してきた。
免疫グロブリンは機能が多様なため、化学的に修飾されていない免疫グロブリ
ンを生成し、Ｆｃ媒介機能（補体活性化を含む）を維持することが好ましい。す
なわち、静脈内使用のための未修飾ＩｇＧの製造において、凝集物含量を最小に
維持し、製剤の有効期間中はこれを３％未満に維持することが重要である（英国
薬局方（ＢＰ），１９９４）。
血漿タンパク質製剤の製造のための大きな課題は、ウイルスを不活性化するが
免疫グロブリンや他のタンパク質を変性させないウイルス不活性化工程の設計で
ある。未修飾免疫グロブリン製剤の製造に使用されている主要な方法は、低ｐＨ
でのインキュベーションおよび溶媒／界面活性剤処理である。これらの方法は両
方とも、脂質エンベロープに包まれたウイルスに対して有効であるが、エンベロ
ープのないウイルスにはあまり有効ではない。アルブミンの製造において低温殺
菌（６０℃で１０時間）が広く適用されており、エンベロープのあるウイルスと
エンベロープのないウイルスの両方に対して有効であるが、免疫グロブリンへの
低温殺菌アプローチの適用は、より課題が多くなってきている。免疫グロブリン
はアルブミンより熱変性に感受性であり、凝集を防止することが困難である。
しかし免疫グロブリン溶液の低温殺菌法は記載されている。Magninら（１９８
９）は、低タンパク質濃度、低イオン強度および酸性ｐＨ条件下でのＩｇＧの低
温殺菌法を記載している。熱処理時にＩｇＧが凝集する傾向は、イオン強度、タ
ンパク質濃度、温度、および、高温への接触時間の増加とともに増加することが
証明された。Magninらが記載したように安定剤の非存在下での低温殺菌は、溶液
中で保存すると急速に凝集物を形成する製剤をもたらす。
Hiraoら（１９８９）は、低温殺菌中にＩｇＧを安定化させるためにソルビト
ールを加えて、Magninらと同様の条件下でＩｇＧを低温殺菌する方法を記載して
いる。その好適な方法では、低イオン強度（０．００１またはそれ以下）、４．
５〜６．５のｐＨ範囲、および１０％〜７０％w/vのソルビトール濃度の条件下
で低温殺菌（好ましくは６０℃で１０時間）を行う。この方法のタンパク質濃度
は制限されておらず、この方法は０．１〜３０％w/vの濃度範囲で作用すると考
えられる。
Nowakら（１９９２）は、高濃度のショ糖とグリシンを使用して低温殺菌（６
０℃で１０時間）中のＩｇＧを安定化する方法を記載している。静注用製剤のた
めには、安定剤を除去し、次にＩｇＧをペプシンの存在下で低ｐＨインキュベー
ションするか、またはＳスルホン化して修飾免疫グロブリンとする。免疫グロブ
リン分子の修飾は、補体を活性化するＩｇＧ凝集物を低下させ、抗補体活性につ
いての薬局方基準の遵守を可能にする。
本発明の目的は、低凝集物レベル、低抗補体活性、および静注用製剤の薬局方
基準を満足する機能活性が保持された免疫グロブリン調製物の製造を可能にする
、免疫グロブリン溶液（特にＩｇＧ溶液）の低温殺菌法を提供することである。
従って、低温殺菌工程後にＩｇＧをさらに精製または修飾する必要はない。発明の概要
本発明に従って、免疫グロブリン溶液（特に、ＩｇＧ溶液）の低温殺菌法が提
供され、該方法は、５０℃〜７０℃の温度で１〜２０時間、ｐＨ４．０〜６．０
で、２０〜４０％w/vのソルビトールまたは２５〜４５％w/vのショ糖の存在下で
前記溶液を加熱することを特徴とし、かつ前記溶液のタンパク質濃度は約３％w/
vまたはそれ以下であることを特徴とする。
好ましくは、低温殺菌工程は、低イオン強度（電導度、１．０mS/cm以下；さ
らに好ましくは、２５℃で電導度０．３mS/cm以下）で行われる。
本発明はまた、一般的に上記した方法により調製される低温殺菌した免疫グロ
ブリン調製物も包含する。
本明細書を通して、特に明記しない場合は、「含む」または「含んでいる」と
いう用語は、記載された整数または整数の群を含むが、他の整数または整数の群
を除外するものではない。発明の詳細な説明
本発明は、治療的有効性を保持する低温殺菌免疫グロブリン調製物（特に凝集
のレベルおよび抗補体活性が治療的に許容される範囲内にある調製物）の製造法
を提供する。本発明において、精製された免疫グロブリン調製物は、例えば６０
℃で１０時間低温殺菌され、次に、凝集物を除去するためにさらに精製する必要
なく、または抗補体活性を低下させるために修飾する必要なく製剤化され分配さ
れる。
低温殺菌の間に安定剤としてソルビトールを使用する本発明の方法は、Hirao
ら（１９８９）が一般的に記載したものと類似の条件を使用するが、本方法では
タンパク質濃度は決定的に重要なパラメータとして認識される。本発明の好適な
実施態様において、免疫グロブリン溶液は、５０℃〜７０℃（好ましくは６０℃
）で、１〜２０時間（好ましくは１０時間）の間、ｐＨ４．０〜６．０（好まし
くは４．０〜５．０）で、２０〜４０％w/v（好ましくは２０〜３３％w/v）のソ
ルビトールの存在下で、および約３％w/vまたはそれ以下のタンパク質濃度で低
温殺菌される。ショ糖が安定剤として使用される本発明の好適な実施態様におい
て、免疫グロブリン溶液は、５０℃〜７０℃（好ましくは６０℃）で、１〜２０
時間（好ましくは１０時間）の間、ｐＨ４．０〜６．０（好ましくは４．４〜５
．４）で、２５〜４５％w/v（好ましくは３０〜４０％w/v）のショ糖の存在下で
、および約３％w/vまたはそれ以下のタンパク質濃度で低温殺菌される。本発明
の確立に至った研究は、比較的高いタンパク質濃度（例えば、５％w/v）が許容
できない凝集物を生成し、さらに液体製剤として製剤化した場合は保存中にさら
に凝集する傾向があることを示した。従ってこのような条件下で低温殺菌を行う
と、許容される凝集物含量と安定性を有する製剤を生成するためには、さらなる
精製工程が必要である（Uemuraら（１９８９）を参照）。これは、バッチがウイ
ルスで再汚染される可能性を上昇させ、一部の製剤の損失をもたらし、かつ製造
法を複雑化させる。
本発明の１つの特に好適な実施態様において、免疫グロブリン溶液がクロマト
グラフィー法により得られる場合、これは、タンパク質濃度３％w/v未満で、２
０〜３３％w/vのソルビトールの存在下で、ｐＨ４．８で、かつ電導度０．３mS/
cm未満で低温殺菌される。
別の特に好適な実施態様において、免疫グロブリン溶液がCohn分画法により得
られる場合、これは、濃度２％w/w未満で、２０〜３０％w/vのソルビトールの存
在下で、ｐＨ４．８で、かつ電導度０．３mS/cm未満で低温殺菌される。
さらに別の好適な実施態様において、クロマトグラフィー法で精製された免疫
グロブリンは、タンパク質濃度２％w/v未満で、３０〜４５％のショ糖の存在下
で、ｐＨ４．４〜５．２で低温殺菌される。
好ましくは治療的用途のために、ソルビトールまたはショ糖は、低温殺菌され
た免疫グロブリンからダイアフィルトレーション(diafiltration)により除去さ
れ、免疫グロブリンは、１０％w/vマルトース中の６％w/vタンパク質濃度でｐＨ
４．０〜６．０（好ましくはｐＨ４．２５〜５．５）で製剤化され分配される。
本発明のさらなる特徴は、以下の実施例によりさらに詳細に記載される。しか
しこの詳細な説明は本発明を例示する目的のためであり、決して本発明の一般的
な記載を限定するものと解釈してはならない。
添付図面において、
図１は、（ａ）６０℃で１０時間低温殺菌中の免疫グロブリンのｐＨへの凝集
物生成の依存。
（ｂ）６０℃で１０時間低温殺菌中の凝集物生成および調製物の安定性に及ぼ
すタンパク質濃度の影響を示す。
図２は、６０℃で１０時間低温殺菌中の凝集物生成に及ぼすタンパク質濃度と
ソルビトール濃度の影響を示す。
以下の一般的な方法が、本実施例において使用される。
免疫グロブリン精製：免疫グロブリンは、Cohn分画法またはクロマトグラフィ
ー法を使用して、正常血漿プールから精製した。Cohn分画産物（上清III）は、C
ohn-Oncley法６に基づく方法により精製した。クロマトグラフィー精製した免疫
グロブリンは、Cohn分画法を使用して精製してフィブリノゲン（画分Ｉ）を除去
し、次にイオン交換クロマトグラフィーを行なった。
免疫グロブリンバルク濃縮物：いずれかの方法で精製した後、調製物を約１０
％w/vに濃縮し、ｐＨ４．８でダイアフィルトレーションにかけ、次に希釈して
、電導度＜０．３mS/cm（実施例において特に明記しない場合）を達成した。
製剤化：低温殺菌溶液をダイアフィルトレーションにかけてソルビトールを除
去し、その間ｐＨを４．２５〜４．８に維持し、次にｐＨ４．２５〜ｐＨ５．５
で１０％w/vマルトース中の６％w/v溶液として製剤化した。
凝集物含量：凝集物含量は、ＴＳＫ３０００カラム（６０cm×０．５cm）を使
用して０．１Ｍリン酸（ｐＨ７．０）をランニング緩衝液として、試料を０．１
％リン酸（ＢＰ１９８８）または０．５％ＮａＣｌ（ＢＰ１９９４）で希釈し、
流速０．５ml／分でサイズ排除クロマトグラフィーにより測定した。
抗補体活性（ＡＣＡ）測定： ＢＰ（１９９４）法に従って、測定すべき免疫
グロブリン調製物をモルモット補体と混合してＡＣＡ活性を測定した。凝集した
ＩｇＧは補体に結合し、補体活性が中和される。ヒツジ赤血球の溶解をモニター
することで残存活性を測定する。活性は、免疫グロブリンに接触させなかった補
体対照溶液に対して、消費された補体のパーセントとして表示される。本実施例
において、類似のしかし改変した方法を使用した。免疫グロブリン調製物の連続
希釈物を、ヒト補体と混合し、残存補体量を、ヒツジ赤血球の溶解をモニターし
て測定した。結果は、ＣＨ50／mgとして表し、ここでＣＨ50は補体の５０％溶血
単位を意味する。この測定法はＢＰ測定法と相関しており、１０ＣＨ50／mgの限
界が抗補体活性についてのＢＰ範囲内にある。
Ｆｃ機能試験：この試験はＢＰ（１９９４）に記載のように行なった。ヒツジ
赤血球をタンニン酸処理し、風疹抗原で被覆した。こうして、ＩｇＧ調製物中に
存在する風疹抗体はこの抗原に結合し、Ｆｃドメインを介して補体系と特異的に
相互作用し、赤血球の溶解を促進する。溶解の程度は、Ｆｃ機能と相関する。結
果は、ヨーロッパ薬局方生化学的標準調製物（European Pharmacopoeia Biologi
cal Reference preparation）バッチ１（ＥＰＢＲＰ、バッチ１）のパーセント
として表す。ＢＰ基準（ＢＰ１９９４）を満足するためには、免疫グロブリンは
、この標準物質の６０％またはそれ以上のＦｃ機能を有することが必要である。
実施例 実施例１ 安定剤の非存在下での免疫グロブリンの低温殺菌
Cohn分画法により調製した免疫グロブリンバルク濃縮物を、１％w/vに希釈し
、ｐＨ４．０、４．２、４．８または５．０に調整し、安定剤の非存在下で６０
℃で１０時間低温殺菌した。
図１（ａ）は、各条件で得られた凝集物含量を示す。これらのデータから、こ
うした条件下でＩｇＧの低温殺菌は、静脈内注入には過度のレベルの凝集を引き
起こし、静注用免疫グロブリン調製物の≦３％凝集物という薬局方の限界を超え
るため、臨床的に許容されない製剤をもたらすことが示される。
図１（ｂ）は、ソルビトール無しで０．５％または１％w/vのＩｇＧで低温殺
菌し、１０％マルトース（ｐＨ５．５）中の６％w/vＩｇＧで製剤化した物質は
、高い初期凝集物含量を示し、８℃および１５℃にて１３日間でさらに増加する
ことを示す。
このデータは、安定剤の非存在下での低温殺菌は、一般に治療的用途には不適
当な免疫グロブリン製剤にする凝集物含量をもたせらし、この方法の再現性の悪
さを示している。実施例２ ソルビトールの存在下での免疫グロブリンの低温殺菌
クロマトグラフィー法により得られた免疫グロブリンバルク濃縮物を、０％〜
３０％w/vの範囲の種々の濃度のソルビトール中で、１％〜４％w/vの種々のタン
パク質濃度で製剤化した。ｐＨを４．８に調整し、溶液を６０℃で１０時間低温
殺菌した。
図２（ａおよびｂ）は、ソルビトール濃度の増加は、低温殺菌中の免疫グロブ
リンを安定化し、こうして凝集物生成が低下することを示す。実際、図２ｂでは
、３０％w/vのソルビトールの存在下での１％w/vのタンパク質濃度では、顕著な
凝集は起きないことがわかる。２０％ソルビトール中で２％であっても、凝集物
含量は２．０％未満であり、これは静注用ＩｇＧの規格（≦３％）内である。
これらの条件下での免疫グロブリンの低温殺菌は、凝集物含量に関して臨床的
に許容される免疫グロブリン調製物を与えることがわかる。これ以上の分画は不
要であり、この方法は再現性がある。実施例３ Cohn 分画およびクロマトグラフィー精製した免疫グロブリン調製物の 低温殺菌後の凝集物生成の比較
Cohnおよびクロマトグラフィーで精製した免疫グロブリン調製物からの免疫グ
ロブリンバルク濃縮物を、１５〜３０％w/vソルビトール（ｐＨ４．８）中で１
〜３０％w/vのＩｇＧ濃度に製剤化し、６０℃で１０時間低温殺菌した。サイズ
排除クロマトグラフィーにより低温殺菌製剤中の凝集物生成をモニターした。
表１に示す結果は、両方の方法から得られた物質は、凝集を最小にする条件下
で低温殺菌できることを示す。クロマトグラフィー精製した免疫グロブリンは、
３０％w/vソルビトールの存在下で最大３％w/vの濃度まで低温殺菌され、タンパ
ク質濃度の増加またはソルビトール濃度の低下とともに凝集が次第に増加するこ
とを示す。Cohn分画した物質は、より不安定であり、凝集物を生成する傾向が強
かった。しかし１％w/vのタンパク質濃度および３０％w/vのソルビトール濃度で
は、凝集が最小に抑えられた。
これらの結果から、免疫グロブリン製剤が凝集する傾向は、この製剤を得るた
めに使用した精製法を反映することが示される。すなわち、Cohn分画法（分画エ
タノール沈殿を含む）により得られた物質は、低温殺菌操作中により不安定であ
り、より低いタンパク質濃度またはより高いソルビトール濃度で低温殺菌する必
要がある。これは、比較的きびしい分画条件による免疫グロブリン分子の摂動(p
erturbation)を反映し、加熱変性に対するこの分子の感受性の増加をもたらす。
クロマトグラフィー精製した物質は、低温殺菌操作中により安定であり、この低
温殺菌操作中に、より高いタンパク質濃度およびより低いソルビトール濃度を使
用できる。表１
タンパク質とソルビトールの種々の濃度でのクロマトグラフィー精製した
（ＰＣ−１０、ＰＣ−１１、ＰＣ−１２）およびCohn分画した（ＩＰ００４、Ｉ
Ｐ００５、ＩＰ００６）免疫グロブリンの低温殺菌中の凝集物生成
実施例４ 低温殺菌免疫グロブリンの機能的性状解析
表２は、低温殺菌した静注用免疫グロブリンの抗体価、Ｆｃ機能、ＡＣＡおよ
び凝集物含量を示す。クロマトグラフィーで精製した静注用免疫グロブリンを、
タンパク質濃度≦３％w/vで、３０％w/vソルビトール（ｐＨ４．８）の存在下で
低温殺菌した。低温殺菌後、ソルビトールをダイアフィルトレーションで除去し
、免疫グロブリンを６％w/vタンパク質、１０％w/vマルトース（ｐＨ４．２５）
で製剤化した。Cohn分画法で精製し前述のように製剤化した、低温殺菌していな
い静注用免疫グロブリン製剤を、比較のために示す。
表２ 低温殺菌したクロマトグラフィー精製免疫グロブリンの性状解析
表３は、同じ条件の低温殺菌とその後の製剤化を使用した、低温殺菌したCohn
分画免疫グロブリンの性状解析データ（抗体価、Ｆｃ機能、凝集物含量）を示す
。
表３ 低温殺菌免疫グロブリンの性状解析
クロマトグラフィー法で得られたものであってもCohn分画法で得られたもので
あっても、低温殺菌免疫グロブリンの性質は、低温殺菌していない製剤の性質に
匹敵することがわかる。凝集物含量は、Cohn分画法で得られた低温殺菌製剤では
上昇しているが、静注用製剤の規格内にある。実施例５ 低温殺菌免疫グロブリンの安定性
液体免疫グロブリン製剤の最大の懸念は、特に凝集物生成に関しての不安定性
の可能性である。クロマトグラフィー法で精製した免疫グロブリン溶液は、実施
例４に記載のように３０％w/vソルビトール（ｐＨ４．８）を含む２％w/vタンパ
ク質溶液として低温殺菌した。低温殺菌した物質を、記載のｐＨ値で１０％マル
トース中の６％w/vタンパク質で製剤化した。４℃で保存した製剤の凝集物生成
を、サイズ排除クロマトグラフィーによりモニターした。
表４は、４℃で１３および５２週間保存後のクロマトグラフィーで精製した免
疫グロブリンの凝集物含量を示す。表４
４℃で保存中の低温殺菌したクロマトグラフィー精製免疫グロブリン中の
凝集物含量
この製剤は、製剤化ｐＨ範囲にわたって凝集物生成に関して安定であることが
わかる。抗体価のような他のパラメータ（データは示していない）もまた安定で
ある。
このデータから、タンパク質濃度が３％未満であり、好ましくは２％w/v未満
であり、ソルビトールが約３０％w/vの濃度で存在し、電導度が０．３mS/cm未満
であり、ｐＨが約４．８であるなら、６０℃で１０時間低温殺菌した免疫グロブ
リン調製物が安定であることを確認できる。実施例６ ウイルス不活性化試験
ウイルスを不活性化する低温殺菌工程の可能性を、以下のモデルウイルスを使
用して評価した：
・エンベロープを有するウイルスＨＩＶおよびＨＣＶのモデルとしてのシンビス
ウイルス（sindbis virus）；
・エンベロープを有するウイルスＨＣＶのモデルとしてのウシウイルス性下痢ウ
イルス（bovine viral diarrhoea virus：ＢＶＤＶ）；
・エンベロープを有するウイルスＨＢＶのモデルとしてのダックＢ型肝炎ウイル
ス（ＤＨＢＶ）；
・エンベロープのないウイルス、例えばＡ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）のモデルと
しての脳心筋炎（ＥＭＣ）およびテイラーズウイルス（Theilar's virus）；
・ＨＩＶ。
クロマトグラフィー法またはCohn分画法から得られた免疫グロブリンバルク溶
液を、２％w/vタンパク質に希釈し、ソルビトールで３０％w/vにし、ｐＨ４．８
に調整した。上記のように調製した試料にウイルスをスパイク（spike）し、６
０℃で１０時間低温殺菌した。不活性化試験の結果を表５に示したが、この結果
は、低温殺菌中に達成されたエンベロープを有するウイルスまたはエンベロープ
の無いウイルスの実質的な不活性化を証明している。
表５
実施例７ 低温殺菌免疫グロブリン：筋注用製剤
筋注用免疫グロブリン（IMIG）製剤は、通常はCohn分画IIから得られる。凍結
乾燥後に、この物質を、２２．５mg/mlにグリシンを添加しｐＨを６．５に調整
してタンパク質濃度を１６％w/vになるように再調製する。ウイルスの不活性化
を達成するための低温殺菌は、これらの筋注用免疫グロブリン（IMIG-VI）製剤
に適用することができることが証明された。
IMIG-VIは、Cohn分画法から得られる純粋な免疫グロブリン調製物である、ダ
イアフィルトレーションにかけた上清IIIから製造される。ウイルス不活性化は
、タンパク質濃度０．５〜２．０％w/vのＩｇＧで３０％w/vのソルビトールの存
在下にｐＨ４．８で低温殺菌することにより行われる。低温殺菌したＩｇＧを濃
縮し、ダイアフィルトレーションにかけてソルビトールを除去し、次に２２．５
mg/mlにグリシンを添加しｐＨを６．５に調整してタンパク質濃度を１６％w/vに
なるように製剤化する。
低温殺菌を行った通常のIMIG-VIの３つのバッチおよび別の方法により得られ
るバッチの性状解析を表６および７に示す。IMIG-VIとIMIGは、測定したほとん
どのパラメータで同様であった。抗体価は両方の製剤について同様であった。IM
IG-VIは、IMIGより高い凝集物含量を含むが、IMIG製剤と比較して低いＡＣＡを
示す。ＰＫＡとカリクレインにより証明したプロテアーゼ活性はIMIG-VIで低く
、プラスミノーゲンはいずれにも観察されなかった。Ｆｃ機能活性はIMIG-VIで
より高く、ＩｇＧサブクラス分布は、２つの製剤で同様であった。
これらの結果は、免疫グロブリン製剤の性質に悪影響を与えないため、低温殺
菌が筋注用製剤にも応用可能であることを示している。
表６ IMIG-VIおよびIMIG最終製剤の臨床前バッチ分析かっこ内の値は、範囲を示す。
表７ IMIG-VIおよびIMIG最終製剤の性状解析結果 かっこ内の値は、範囲を示す。
* ＣＨ５０は、補体の５０％溶血活性を意味する。
**ヨーロッパ薬局方生化学的標準調製物（European Pharmacopoeia Biologica
l Reference preparation）（バッチ１）実施例８ ショ糖で安定化した低温殺菌免疫グロブリン
クロマトグラフィー法で精製した免疫グロブリンを、ショ糖の存在下で６０℃
で１０時間低温殺菌した。３種類の試験を行なった。試験１と２では、８％溶液
として４℃でｐＨ４．８で５ヶ月保存したクロマトグラフィー精製免疫グロブリ
ンを、起源物質として使用した。試験３では、新たに調製したクロマトグラフィ
ー精製免疫グロブリンを使用した。
試験１
低温殺菌後のＩｇＧの重合に及ぼすｐＨとショ糖濃度の影響を評価する試験を
表８に示す。タンパク質濃度は、１．５％w/vであった。データは、低温殺菌中
の免疫グロブリンの凝集を最小にするための最適ｐＨは４．８であることを示す
。またこのデータは、ショ糖濃度を２０％から３０％に上げると、生成される凝
集物の量が低下することも示す。３０％のショ糖を使用した時ｐＨ４．４〜５．
２で英国薬局方（ＢＰ）基準（凝集物＜３％およびモノマー＋ダイマー≧９０％
）を満たす結果が達成された。表８
純粋な免疫グロブリン溶液（１．５％w/v）の低温殺菌後のＩｇＧ重合に
及ぼすｐＨとショ糖濃度の影響
試験２
免疫グロブリン調製物の低温殺菌後のＩｇＧ重合に及ぼすタンパク質とショ糖
濃度の影響に関する試験を表９に示す。ｐＨはｐＨ４．８で一定に維持した。デ
ータは、タンパク質濃度が上昇するにつれてタンパク質凝集が増加することを示
す。しかし、タンパク質濃度が２％（w/v）を超えず、ショ糖濃度が≧３５％で
あるなら、製剤はＢＰ規格を遵守する。表９
純粋な免疫グロブリン溶液（ｐＨ４．８）の低温殺菌後のＩｇＧ重合に及
ぼすタンパク質とショ糖濃度の影響試験３
この方法の有効性を、新たに調製した純粋な免疫グロブリンの低温殺菌により
さらに試験した（表１０）。新たに調製した免疫グロブリン溶液の低温殺菌後に
起きるＩｇＧの重合は非常に低く、４℃で５ヶ月間保存した調製物で観察された
レベルよりはるかに低いことが、データから明らかである。表１０
新たに調製した免疫グロブリン溶液（ｐＨ４．８）の低温殺菌中のＩｇ
Ｇ重合に及ぼすタンパク質とショ糖濃度の影響 上記実施例は、重合分子または変性分子を除去するためにさらに分画する必要
なく、ＢＰ基準を満たす低温殺菌免疫グロブリン溶液が調製できることを証明す
る。
低温殺菌の許容される条件は以下の通りである：３０％〜４５％(w/v)の濃度
のショ糖、少なくとも２％w/vまでの濃度の純粋な免疫グロブリン溶液、および
少なくともｐＨ４．４〜５．２までのｐＨ範囲。
参考文献
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方法」、米国特許第５８４５１９９号:１−５。
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(81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，
ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ
Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＪＰ，Ｋ
Ｒ，ＮＺ，ＳＧ，ＵＳ
(72)発明者 デイビス，ジェフリー，レイモンド
オーストラリア国 ヴィクトリア州
3079，イヴァンホー，アボッツフォード
グローブ 33