JPS62228024A

JPS62228024A - 免疫グロブリンの加熱処理方法

Info

Publication number: JPS62228024A
Application number: JP61008703A
Authority: JP
Inventors: Yutaka Hirao; 平尾　豊; Katsuhiro Uryu; 瓜生　勝寛; Yatsuhiro Kamimura; 上村　八尋; Kazuo Takechi; 武智　和男
Original assignee: Green Cross Corp Japan
Current assignee: Mitsubishi Tanabe Pharma Corp
Priority date: 1985-11-30
Filing date: 1986-01-17
Publication date: 1987-10-06
Also published as: KR870004709A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕本発明は、免疫グロブリンのウィルス不活化のための加
熱処理方法に関するものである。

〔従来技術〕

従来より、アルブミンなどの血駿蛋白について、そこに
混入してくる悲念のあるウィルスを不活化する最も確実
な方法として、水溶液状態での加熱処理法（以下、液状
加熱法と称す）が、マレイ（Ｍｕｒｒａｙ）ら〔ザ　ニ
ューヨーク　アカデミ−オブ　メディスン（Ｔｈｅ　Ｎ
ｅｗ　ＹＯｒｋ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｍｅｄｉ−ｃ
ｉｎｅ）　、３１　　（５）、３４１〜３５８　　（１
９５５）　）の報告に基づいてとられており、以来今日
に至るまで長年にわたり汎用され、疫学的にも液状加熱
法のウィルス不活化効果が立証されている。

しかしながら、アルブミンのように液状加熱に耐えるも
のは血漿蛋白の中でも極く限られており、特に生理活性
または生物活性を有する血＋！【蛋白は熱に対し非常に
敏感で、熱変性をおこし易く、活性の低下、消失を招き
やすい。

一方、液状加熱法とは別に、水分を含まないか、または
ほとんど含まない乾燥状態で、血漿蛋白の加熱処理（以
下、乾熱処理という）を行うと、液状加熱法に比べ、そ
の活性の低下が著しく抑制されることが血液凝固筒■因
子をモデルとする実験で明らかとなった。しかし、一般
に乾熱処理においても、安定化剤を添加しなければ血漿
蛋白の活性低下はまぬがれ得ないし、また、水に対する
溶解性および溶状が悪くなるというのが実情である。

ところで、加熱によるウィルス不活化の作用機序は、液
状加熱では主としてウィルスの蛋白質成分の変性に基づ
いているのに対し、乾熱処理では主にウィルスの脂質成
分の酸化によって傷害を受け、病原性が失われるといわ
れており、両方のウィルス不活化機構はお互いに重なり
合う部分があるものの、基本的には異なることが示唆さ
れている〔ラーン、フィジカル　メソノズ　オブ　ステ
リライゼーション　オブ　マクロオーガニズムス。

ハタテリオロジー　レビュ、　　　（Ｒａｈｎ、　Ｐｈ
ｙｓｉｃａｌＭｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　５ｔｅｒｉｌｉｚ
ａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍａｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ。

Ｂａｃｔ、　Ｒｅｖ、）　、９．１〜４７、（１９４５
）　）。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明の目的は、免疫グロブリンを不活化させることな
（、夾雑ウィルスを不活化する加熱処理方法を提供する
ことである。

本発明の他の目的は、免疫グロブリンの水に対する溶解
性および溶状を良好に保ちうる免疫グロブリンのウィル
ス不活化加熱処理方法を提供することである。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者らは、免疫グロブリンを乾熱処理することによ
って免疫グロブリンの活性を失うことなく、ウィルスを
不活化できること、特に安定化剤の存在下に免疫グロブ
リンの乾熱処理を行うと、更に免疫グロブリンが顕著に
安定化され、しかも、かかる条件下に乾熱処理を行った
免疫グロブリンは水に対する溶解性および溶状が良いこ
とを見出して本発明を完成した。

即ち、本発明は、ウィルス夾雑免疫グロブリンを、乾燥
状態にて、好ましくは特定の安定化剤の存在下に、ウィ
ルスが不活化されるまで加熱することを特徴とする免疫
グロブリンの加熱処理方法に関するものであり、これに
よって夾雑するウィルスが不活化され、かつ免疫グロブ
リンの安定性および水溶解性が改善される。

本発明における加熱処理対象である免疫グロブリンは、
免疫グロブリンとしての生物活性または生理活性を有す
るもの、たとえば血漿蛋白を分画して得られるものであ
る。

かかる免疫グロブリンとしては、たとえばヒト、ウマ及
びマウス由来のものが例示され、それはポリクローナル
抗体、モノクローナル抗体のいずれでもよく、好ましく
はＩｇＧ、、ＩｇＡ又はＩｇＭである。

本発明は、通常免疫グロブリン溶液を凍結乾燥した後、
含湿度０．０５〜３％の条件下で加熱することによって
実施されるが、その際、特定の安定化剤を添加しておく
ことによって、より一層免疫グロブリンの安定化が促進
され、また免疫グロブリンの溶解性および溶状が改善さ
れる。

本発明にて使用される安定化剤としては、糖アルコール
および三糖類から選ばれる少なくとも一種が使用される
。糖アルコールとしては、ソルビトール、マンニトール
等が、三糖類としては、サッカロース、マルトース等が
好適に例示される。

安定化剤の使用量は、たとえば次の通りである。

即ち、モノクローナル免疫グロブリンの場合には、その
０．０１〜２Ｗ／■％溶液に対して、また、ポリクロー
ナル免疫グロブリンの場合には、その２〜ｌ（ｗ　／　
ｖ％溶液に対して、１〜５　ｗ　／　ｖ％、より好まし
くは２〜３　ｗ　／　ｖ％程度の濃度となるに相当する
量である。この程度の添加量において、安定化効果、水
溶解性、溶状と製剤化のバランスが最も良好である。

免疫グロブリンは、通常凍結乾燥品として使用に供する
が、安定化剤は、血漿蛋白の凍結乾燥処理の前に添加し
ておくことが好ましい。

また、安定化剤は、本発明の乾熱処理後に除去してもよ
いが、当該血漿蛋白製剤中にそのまま配合しておくこと
が好ましい。

かくして、凍結乾燥時および当該製剤の保存安定性が改
善される。

加熱処理におりる加熱温度は、通常３０〜１００゛Ｃ１
好ましくは６０°Ｃ程度であり、加熱時間は、通常１０
分〜２００時間、好ましくは１０〜１００時間程度であ
る。

本発明の加熱処理による不活化対象とされるウィルスは
、ヒト血漿蛋白に夾雑が危惧されるウィルスであり、特
に肝炎ウィルスなどである。

また、本発明の加熱処理は不活性ガス雰囲気下で行うこ
とにより、加熱時の安定性をより高めることが出来る。

不活性ガスとしては、たとえば窒素ガス、アルゴン、ヘ
リウムなどが挙げられる。

さらに、免疫グロブリンの精製度と耐熱性とは相関性が
乏しく、どのような精製度の免疫グロブリンを用いても
、安定化剤による安定化効果は変わらない。従って、本
発明の加熱処理は免疫グロブリンの精製工程のどの段階
で行ってもよい。

゛本発明乾燥処理における乾燥状態は実質的に無水の状
態であり、可及的に水分の少ない状態であることが好ま
しい。水分の含量は、通常３％以下、好ましくは１％以
下であり、通常は０．０５〜３％程度である。

〔作用・効果〕

本発明によれば、貴重な血液製剤である血漿蛋白の活性
を大きく損失することなく、製剤中に混入が危惧されて
いるウィルスを不活化できるから、血漿蛋白製剤の工業
的製法として有益である。

〔実施例・実験例〕

以下、本発明を実験例および実施例により説明するが、
本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。

実施例］正常ヒト血漿よりコーン氏の冷アルコール分画法に従い
、Ｆｒ−Ｕ（ＩｇＧ画分）を得た。このＦｒ−Ｕベース
Ｉ・１　ｋｇを冷水１．５１で溶解した５％溶液に、ソ
ルビトールを２Ｗ／■％に添加した。

このＩｇＧ溶液のｐＨを６．３〜６．５に修正後、凍結
乾燥を行った。凍結乾燥後の含湿度は、０．８％であっ
た。この凍結乾燥されたＩｇＧ粉末を６０℃で７２時間
加熱処理し、加熱処理前のＩｇＧと比較しながら、溶解
性、ｌｌＢｓＡｇ抗体価、麻疹抗体価、ジフテリア抗毒
素価、セルロースアセテート膜電気泳動、ゲル濾過の項
目につき試験した結果、加熱処理後でも著明な変化はみ
られず、本加熱条件下ではヒトＴｇＧは安定であること
がわかった。

実施例２コーン氏の冷アルコール分画法で得られたＦｒ−ｍ画分
より、塩析法、アクリノール分画法等で精製されたヒト
ＩｇＡの５　ｗ　／　ｖ％液にサッカロースを２　ｗ　
／　ｖ％添加し、凍結乾燥した。凍結乾燥粉末の含湿度
は２％以下であった。本粉末を６０°Ｃで７２時間加熱
した後、溶解性、ＩｇＡｔａ度、麻疹抗体価、セルロー
スアセテート膜電気泳動につき試験した。当該加熱後の
ものを加熱前の粉末の試験成績と比較した結果、加熱後
でも安定であることがわかった。

実験例１　（安定化剤の種類）・正常人血漿よりコーン氏の冷アルコール分画法に従い
、得たＦｒ−Ｈ（ＩｇＧ画分）溶液に、第１表記載の安
定化剤をＩｇＧ画分の５　ｗ　／　ｖ％温溶液それぞれ
２　ｗ　／　ｖ％ずつ添加し、ｐｎを６．３〜６．５に
調整後、凍結乾燥した。そのＩｇＧ粉末を６５°Ｃで９
６時間加熱処理した後、溶解性、ジフテリア抗毒素価、
麻疹抗体価、抗補体価について試験した。その結果を第
１表に示す。試験方法は、「生物学的製剤基準」に従っ
た。この結果、安定化剤の使用の乾熱処理により、無添
加（コントロール）の場合に比べて安定性が改善される
ことが判った。

実験例２（安定化剤の添加量）実施例１に準じて調製したＦｒ−ＩＩ　（ＩｇＧ画分）
の５　ｗ　／　ｖ％水溶液に、第２表記載の添加量で各
安定化剤を添加し、ｐｌ＋を６．３〜６．５に調整後、
凍結乾燥した。その後の処理は実験例１に準じて行った
。その結果を第２表に示す。

この結果、本発明の乾熱処理による安定化剤の有効な添
加量は、１〜５　ｗ　／　ｖ％が好適であることが判っ
た。

実験例３実施例１に準じて調製したＦｒ−Ｕ（ＩｇＧ画分）の５
　ｗ　／　ｖ％水溶液に、サッカロースを２ｗ／ｖ％加
え、これに０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，１）のウ
ィルス懸濁液を加え、均一に混和した後に、凍結乾燥を
行った。

凍結乾燥終了後、窒素ガスにて平圧に戻して密栓し、６
０℃の温浴中に浸漬し、加熱した。なお、瓶中の温度が
６０°Ｃに達するまで１０〜１５分要するので、実際は
３０分間それぞれ加熱時間を延長して行った。

各ウィルスの感染性はプラーク　フォーミング（ｐｌａ
ｑｕｅ　ｆｏｒｍｉｎｇ）法にて測定した。

結果は第３表に示す通りである。

手続補正書（自制昭和６１年４月１９日

Claims

【特許請求の範囲】

（１）ウィルス夾雑免疫グロブリンを乾燥状態にて、糖
アルコールおよび二糖類から選ばれる少なくとも一種の
安定化剤の存在下に、ウィルスが不活化されるまで加熱
することを特徴とする免疫グロブリンの加熱処理方法。
（２）含湿度３％以下の条件下で加熱することからなる
特許請求の範囲第（１）項記載の方法。
（３）免疫グロブリンがヒト、ウマまたはマウス由来で
あることを特徴とする特許請求の範囲第（１）項記載の
方法。
（４）ヒトまたはマウス由来の免疫グロブリンがポリク
ローナルまたはモノクローナル抗体であることを特徴と
する特許請求の範囲第（３）項記載の方法。
（５）免疫グロブリンが、ＩｇＧ、ＩｇＡまたはＩｇＭ
であることを特徴とする特許請求の範囲第（１）項記載
の方法。
（６）免疫グロブリンに加える安定化剤の濃度がモノク
ローナル免疫グロブリンの０．０１〜２ｗ／ｖ％溶液ま
たはポリクローナル免疫グロブリンの２〜８ｗ／ｖ％溶
液に対して、１〜５ｗ／ｖ％の濃度となるに相当するこ
とを特徴とする特許請求の範囲第（１）項記載の方法。