JPH0283332A - 蛋白質製剤中のウイルス不活化法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野］ 本発明は蛋白質製剤中に夾雑するウィルスを不活化する
方法に関する。

〔従来技術〕

蛋白質製剤、特に血漿蛋白質製剤にはエイズウィルス、
Ｂ型肝炎ウィルス、非Ａ非Ｂ型肝炎ウィルス、サイトメ
ガロウィルス（ＣＭＶ）　、デルタ型肝炎ウィルス（Ｈ
ＤＶ）等が夾雑が懸念されており、これらウィルスを不
活化させる目的で、たとえば加熱処理等が行われている
。

ところで、加熱処理を含めて、−船釣にウィルスの不活
化処理においては、同時に蛋白質自体が不活化されてし
まうという問題点がある。

従って、蛋白質製剤中のウィルスの不活化にあたっては
、蛋白質自体には影響が少なく、ウィルスを特異的に不
活化させることが重要である。

「ウィルス実験学総論」４３６頁（国立予防衛生研究所
学友会編、１９７３年）にはウィルス不活化要因として
多数の処理剤の中の一つとしてエタノールが開示されて
いるが、その際、たとえばアルコール濃度等の処理時の
条件は全く記載されていない。

その他の文献にもエタノールを利用したウィルスの不活
化方法が開示されている（ＴＲＡＮＳＦＩＩＳ　ｌ０Ｎ
２６（２）、　２１０−２１３　（１９８６）、Ｃｈｅ
ｍｉｃａｌ　Ａｂｓｔｒａｃｔ　９５１８８７９ｑ　（
１９８１）、回器、　　１０７９４２ｆ　（１９８０）
、同好。

２１２５７５ｕ　（１９８２）、同７３．４２５９９ｑ
　（１９７０））が、これら報告にしてもいずれも、エ
タノールの濃度の記載はないか、または記載があっても
いずれも低濃度であって、高濃度であっても高々４　Ｑ
　ｗ　／　ｗ％までである。

本発明の目的は、蛋白質の不活化が可及的に少なく、か
つ効果的に夾雑ウィルスの不活化することのできる、エ
タノールを利用した蛋白質製剤中のウィルスの不活化方
法を提供することである。

（発明が解決しようとする課題］ 木発明者らは、ウィルスを夾雑する蛋白質を特定の高４
１度のエタノールにて処理することによって、夾雑する
ウィルスが不活化されるが、目的とする蛋白質に対して
は不活化の程度が極めて少ないことを見出した。

〔課題を解決するだめの手段］ 本発明は、ウィルスを夾雑する蛋白質を５０〜８０ｗ／
ｗ％のエタノールに接触させることからなる蛋白質製剤
中に夾雑するウィルスを不活化する方法を提供するもの
である。

本発明で使用される蛋白質は特に限定されず、ウィルス
の夾雑が危惧される蛋白質であり、たとえば血漿、尿ま
たは胎盤等の生物由来の蛋白質、細胞培養由来の蛋白質
等が例示される。

このような蛋白質としては、たとえば血液凝固因子（た
とえば、第■囚子、第■因子、第Ｘ■因子など）、プラ
スミノゲン、フィブリノゲン、トロンビン、免疫グロブ
リン、アルブミン、ウロキナーゼ、プロウロキナーゼ、
組繊プラスミノゲンアクチベータ、コロニー形成刺激因
子、カリクレイン、エリスロボエチン、インターフェロ
ン、フィブロネクチン、アンチトロンビン−ＩＩＩ、Ｈ
ＢｓＡｇなどが挙げられる。

夾雑が懸念されるウィルスとしてはエイズウィルス、Ｂ
型肝炎ウィルス、非Ａ非Ｂ型肝炎ウィルス、サイトメガ
ロウィルス（ＣＭＶ）　、ニブスティンパルウィルス（
ＥＢＶ）、デルタ型肝炎ウィルス（ＨＤＶ）等が例示さ
れる。

蛋白質をエタノールに接触させるときのエタノールの濃
度は５０〜８０ｗ／ｗ％、好ましくは７０〜８０　ｗ　
／　ｗ％である。

蛋白質をエタノールに接触させる方法は、５０〜８０％
濃度のエタノールを加える方法、溶液状ないしは懸濁状
の蛍白質の場合には高濃度のエタノールを加え、エタノ
ール最終濃度が５０〜８０％となるように調製する方法
が例示される。

高濃度エタノール中に蛋白質を懸濁させた場合、蛋白質
は容器の底部に沈澱している。

蛋白質の当８亥エタノール？容液へのＹ捏合量は、通常
当該高濃度エタノール溶液１Ｎに対して１０〜５００ｇ
、好ましくは同５０〜２００ｇ程度である。

接触時の温度は通常５°Ｃ〜−２０°Ｃ１好ましくは２
°Ｃ〜−１０°Ｃであり、接触時間は通常０．４〜１５
時間、好ましくは０．５〜１０時間である。

接触時のエタノール溶液のイオン強度は、通常０、１以
下、好ましくは０．００１〜０．０５である。

これらの接触させるときの条件を外れる場合、蛋白質の
部分変性のような不都合が発生する。

ウィルスが不活化された蛋白質はたとえば凍結乾燥後に
注射剤として製剤化することができる。

〔作用・効果］ 本発明のウィルスの不活化方法によれば、高濃度のアル
コールを蛋白質と接触させているにもかかわらず、蛋白
質の変性は極めて少なく、逆に夾雑するウィルスは効果
的に不活化される。

従って、本発明のウィルスの不活化方法を経た蛋白質製
剤は、ヒト等に安全に投与することができるものである
。

〔実施例］ 実施例１ コーン氏のエタノール分画法で得られた画分■（フィブ
リノゲン画分）１００ｇを、冷蕉留水で７０ｗ／ｗ％濃
度に希釈したエタノール水？８液の１０１００Ｏにｇく
しウィルスが不活化されたフィブリノゲン画分を回収し
た。この両分を凍結乾燥しフィブリノゲン粉末を得た。

エタノール処理前後でのフィブリノゲンの収量を、トロ
ンビンを添加したときの凝固性蛋白質量の変化から求め
たとき、処理前の８６％であった。

この粉末を生理食塩水にＩ　ｗ　／　ｖ％濃度に熔解し
清澄濾過および除菌濾過を行い、約２０ｇのマウスに０
．５ｍｌずつ投与し７日間観察したが、異常はみられな
かった。

実施例　２ 正常人血漿を凍結融解して生した沈澱（クリオプレシピ
テー日よりイオン交換クロマトグラフィー法およびグリ
ンン分画法等を経て精製された血液凝固第８因子（Ｆ−
■）画分１００ｍ１に、２０゛Ｃに冷却された９５ｗ／
ｗ％エタノール水溶液を徐々に添加しエタノールの終濃
度を６０％とした。−１０°Ｃで１０時間静置した後、
Ｆ−■の沈澱を回収した。エタノールで処理した前後で
のＦ−■の日収量は処理前の８０％であった。この沈澱
１０ｇを５００ｍ１の０．０１モルクエン酸ナトリウム
加生理食塩液（ｐ）１７．２）に溶解し同し溶媒に対し
４°Ｃで１夜透析した。このウィルス不活化処理のなさ
れたＦ−■蛋白？８’ｅを除菌ｉ１！過し、モルモット
に５０単位／ｋｇ投与した。、７日間観察したが異常は
認められなかった。

比較例１ コーンのエタノール画分Ｉ　（フィブリノゲン画分）の
水溶液にシンドビスウイルス（ＳＶ）を混合し、エタノ
ールを４０％、５０．６０．７０％添加、−５°ｃＴ：
を時間攪拌後フィブリノゲン画分を遠心分離により回収
した。回収したフィブリノゲンを元の容量になるように
生理食塩液に再溶解し、残存ウィルス量を測定し、その
結果を下表に示す。表中の怒染価（ｐｆｕ／ｒｎ１）は
プラーク法により測定した。

手続補正書（自制 昭和６３年１１月１６日 特許庁長官　殿　　　　　　　　　　　　　域１、事件
の表示 昭和６３年特許願第２３４３４５号 ２、発明の名称 蛋白質製剤中のウィルス不活化法 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 氏名（名称）　株式会社　ミドリ十字 ４、代理人　■５４１ 住所　大阪市東区平野町４丁目５６番地（場末ビル） 高島国際特許事務所 明細書の「発明の詳細な説明」の（資）６、補正の内容 （１）明細書第１頁第１６行の「等が夾雑」を「等の夾
雑」に訂正する。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ウィルスを夾雑する蛋白質を５０〜８０ｗ／ｗ％のエタ
   ノールに接触させることからなる蛋白質製剤中に夾雑す
   るウィルスを不活化する方法。