JP2717638B2 - 人血液凝固第ｉｘ因子含有製剤 - Google Patents
人血液凝固第ｉｘ因子含有製剤Info
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Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、夾雑ウイルスが不活化
された人血液凝固第ＩＸ因子（以下、第ＩＸ因子）含有
製剤に関するものである。 【０００２】 【従来の技術】従来より、アルブミンなどの血漿蛋白に
ついて、そこに混入してくる懸念のあるウィルスを不活
化する最も確実な方法として、水溶液状態での加熱処理
法（以下、液状加熱法と称す）が、マレイ（Ｍｕｒｒａ
ｙ）ら〔ザ ニューヨーク アカデミー オブ メディ
スン（Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ａｃａｄｅｍｙ ｏ
ｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ），３１（５），３４１〜３５８
（１９５５）〕の報告に基づいてとられており、以来今
日に至るまで長年にわたり汎用され、疫学的にも液状加
熱法のウィルス不活化効果が立証されている。 【０００３】しかしながら、アルブミンのように液状加
熱に耐えるものは血漿蛋白の中でも極く限られており、
特に生理活性、又は生物活性を有する血漿蛋白は熱に対
し非常に敏感で、熱変性をおこし易く、活性の低下、消
失を招きやすい。 【０００４】一方、液状加熱法とは別に、水分を含まな
いか、またはほとんど含まない乾燥状態で、血漿蛋白の
加熱処理（以下、乾熱処理という）を行うと、液状加熱
法に比べ、その活性の低下が著しく抑制されることが血
液凝固第ＶＩＩＩ因子をモデルとする実験で明らかとな
った。しかし、一般に乾熱処理においても、安定化剤を
添加しなければ血漿蛋白の活性低下はまぬがれ得ない
し、また、水に対する溶解性及び溶状が悪くなるという
のが実情である。 【０００５】ところで、加熱によるウィルス不活化の作
用機序は、液状加熱では主としてウィルスの蛋白質成分
の変性に基づいているのに対し、乾熱処理では主にウィ
ルスの脂質成分の酸化によって傷害を受け病原性が失わ
れるといわれており、両方のウィルス不活化機構はお互
いに重なり合う部分があるものの、基本的には異なるこ
とが示唆されている〔ラーン，フィジカル メソッズ
オブ ステリライゼーション オブ マクロオーガニズ
ムス バクテリオロジー レブ．（Ｒａｈｎ，Ｐｈｙｓ
ｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｓｔｅｒｉｌｉｚａ
ｔｉｏｎ ｏｆＭａｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ Ｂａｃ
ｔ．Ｒｅｖ．） ９，１−４７（１９４５）〕。 【０００６】血漿蛋白の乾熱処理時の安定化剤として
は、これまで次のようなものが提案されている。特表昭
第５８−５００５４８号公報には、乾熱処理に付す血液
凝固因子含有組成物がアルブミン、アミノ酸、非還元性
単糖類、オリゴ糖類、糖アルコールのような安定化剤を
含んでいてもよいことが記載され、代表的な安定化剤と
してアルブミン、グリシン、マンニトール、ソルビトー
ルが例示されている。しかし、当該公報には、組成物は
安定化剤を含まないことが好ましく、乾燥状態では安定
化剤は不必要であると記載されている。 【０００７】一方、特開昭第６０−８９４２８号公報に
は、特表昭第５８−５００５４８号公報で挙げられたア
ルブミン、グリシン、ソルビトール、マンニトールは血
液凝固因子の乾熱処理時の安定化効果が弱い、すなわ
ち、乾熱処理後の活性残存率、水溶解性、澄明性がいず
れも不良であることが記載されている。特開昭第６０−
８９４２８号公報には、血液凝固因子の乾熱処理時の安
定化剤として酸性アミノ酸と塩基性アミノ酸を添加する
ことが開示されている。 【０００８】特公昭第４８−３３６１号公報には、塩化
ナトリウムおよびクエン酸ナトリウムを含有する血液凝
固因子組成物の凍結乾燥物が開示されているが、当該組
成物を乾燥状態で加熱処理を行うことについて何ら記載
されていない。 【０００９】 【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、第Ｉ
Ｘ因子を失活させることなく、夾雑ウイルスが不活化さ
れた第ＩＸ因子含有製剤を提供することである。 【００１０】 【課題を解決するための手段】本発明者らは、後記特定
の安定化剤の存在下に乾熱処理を行った第ＩＸ因子含有
製剤は、第ＩＸ因子の活性を失うことなく、ウィルスが
不活化されていること、更に第ＩＸ因子が顕著に安定化
され、しかもかかる条件下に乾熱処理を行った第ＩＸ因
子含有製剤は水に対する溶解性及び溶状が良いことを見
い出して本発明を完成した。 【００１１】即ち、本発明は、実質的に乾燥状態にあ
り、凍結乾燥および加熱処理時の安定化剤としての有機
酸塩、または有機酸塩および無機塩（好ましくはクエン
酸ナトリウム、またはクエン酸ナトリウムおよび塩化ナ
トリウム）を少なくとも含有し、実質的に乾燥状態で加
熱処理された、ウイルスが実質的に不活化され、しかも
当該乾燥状態での加熱処理に対して安定性の改善された
人血液凝固第ＩＸ因子含有製剤に関するものである。さ
らに本発明は、実質的に乾燥状態にあり、凍結乾燥およ
び加熱処理時の安定化剤としての有機酸塩、または有機
酸塩および無機塩を少なくとも含有し、実質的に乾燥状
態で加熱処理された、ウイルスが実質的に不活化された
人血液凝固第ＩＸ因子含有製剤において、有機酸塩を少
なくとも含有する場合は、人血液凝固第ＩＸ因子３００
〜５００単位に対して有機酸塩２５〜３００ｍｇを、有
機酸塩および無機塩を少なくとも含有する場合は、人血
液凝固第ＩＸ因子３００〜５００単位に対して有機酸塩
２５〜３００ｍｇおよび無機塩５０〜２５０ｍｇを含有
してなる製剤に関する。本発明によれば、夾雑するウィ
ルスが不活化され、かつ、第ＩＸ因子の安定性及び水溶
解性が改善された第ＩＸ因子含有製剤が提供される。 【００１２】本発明における加熱処理対象である第ＩＸ
因子含有製剤は、第ＩＸ因子としての生物活性または生
理活性を有するもの、たとえば血漿蛋白を分画して得ら
れるものである。 【００１３】かかる第ＩＸ因子含有製剤としては、例え
ばヒト血液凝固第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、及び第Ｘ因
子をも含んでおり、生物学的製剤基準が規定する規格に
適合したものが挙げられる。その組成比は、例えば１バ
イアル当たり、第ＩＸ因子、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因
子、第Ｘ因子が各々４００〜５００単位、１００〜５０
０単位、５〜１５０単位、１００〜５００単位である。 【００１４】本発明の製剤は、通常第ＩＸ因子含有製剤
溶液を凍結乾燥した後、通常、含湿度０．０５〜３％の
条件下で加熱することによって製造されるが、その際、
前記特定の安定化剤を添加しておくことによって、第Ｉ
Ｘ因子の安定性が促進され、また第ＩＸ因子の溶解性お
よび溶状が改善される。 【００１５】本発明にて使用される安定化剤は、有機酸
塩、または有機酸塩および無機塩である。有機酸塩とし
てはクエン酸ナトリウムが好ましく、無機塩としては塩
化ナトリウムが好ましい。これらの安定化剤は単独で使
用してもよいが、併用の場合により安定化効果が上昇す
る。 【００１６】安定化剤の含有量は、例えば次の通りであ
る。即ち、正常人血漿１ｍｌ中に含まれる第ＩＸ因子量
の３００倍以上、好ましくは４００倍以上（即ち、活性
値３００〜５００単位）の第ＩＸ因子量（蛋白量１ｇ程
度）に対して、安定化剤として無機塩、特に塩化ナトリ
ウムは１００〜２００ｍｇ、好ましくは１４０〜１６０
ｍｇ、有機酸塩、特にクエン酸ナトリウムは５０〜１５
０ｍｇ、好ましくは９０〜１１０ｍｇの割合で含有され
る。この程度の含有量において、安定化効果、水溶解
性、溶状と製剤化のバランスが最も良好である。 【００１７】第ＩＸ因子含有製剤は、通常凍結乾燥品と
して使用に供するが、安定化剤は、血漿蛋白の凍結乾燥
処理の前に添加しておく。また、安定化剤は、乾燥処理
後、当該第ＩＸ因子含有製剤中にそのまま配合してお
く。 【００１８】加熱処理は夾雑ウイルスが実質的に不活化
されるまで行う。加熱処理における加熱温度は、通常３
０〜１００℃、好ましくは６０℃程度であり、加熱時間
は、通常１０分〜２００時間、好ましくは１０〜１００
時間程度である。 【００１９】加熱処理による不活化対象とされるウィル
スは、ヒト血漿蛋白に夾雑が危惧されるウィルスであ
り、特に肝炎ウィルスなどである。 【００２０】また、加熱処理は不活性ガス雰囲気下で行
うことにより、加熱時の安定性をより高めることが出来
る。不活性ガスとしては、たとえば窒素ガス、アルゴ
ン、ヘリウムなどが挙げられる。 【００２１】さらに、第ＩＸ因子含有製剤の精製度と耐
熱性とは相関性が乏しく、どのような精製度の第ＩＸ因
子含有製剤を用いても、安定化剤による安定化効果は変
わらない。従って、加熱処理は第ＩＸ因子含有製剤の精
製工程のどの段階で行ってもよい。 【００２２】乾燥処理における乾燥状態は実質的に無水
の状態であり、可及的に水分の少ない状態であることが
好ましい。水分の含量は、通常３％以下、好ましくは１
％以下であり、通常は０．０５〜３％程度である。 【００２３】本発明によれば、貴重な血液製剤である第
ＩＸ因子の活性を大きく損失することなく、製剤中に混
入が危惧されるウィルスが不活化された第ＩＸ因子含有
製剤が提供される。 【００２４】なお本発明において、各因子の力価は以下
の方法によって測定した。 第ＩＸ因子：一段法による凝血測定法〔ラパポート，
エス．アイ．ら，ニューイングランド，メディカル（Ｒ
ａｐａｐｏｒｔ，Ｓ．Ｉ．，ｅｔ ａｌ．．Ｎｅｗ Ｅ
ｎｇｌ．Ｍｅｄ．），２６７ １２５〜１３０（１９６
２）〕 第ＩＩ因子：プロトロンビン単独測定法〔オーレン，
ピー．エー．ら、スカンジナビア ジャーナル オブ
クリニカル ラボラトリー インベスティゲーション
（Ｏｗｒｅｎ，Ｐ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃａｎｄ．
Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．）， ３ ２０
１〜２０８（１９５１）〕 第ＶＩＩ因子：一段測定法〔シリッジ，エム．エ
ス．，ラボラトリー エバリュエイション オブ ヘマ
トロジー，フィラデルフィア：リー アンド フェビガ
ー（Ｓｉｒｒｉｄｇｅ，Ｍ．Ｓ．，Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈａｅｍａｔｏｌｏ
ｇｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｅｅ ａｎｄ Ｆ
ｅｂｉｇｅｒ），１９７４，Ｐ．１４５〜１４８〕 第Ｘ因子：一段測定法〔シリッジ，エム．エス．，ラ
ボラトリー エバリュエイション オブ ヘマトロジ
ー，フィラデルフィア：リー アンド フェビガー（Ｓ
ｉｒｒｉｄｇｅ，Ｍ．Ｓ．，Ｌａｂｏｒｏｔｏｒｙ Ｅ
ｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆ Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｐ
ｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｅｅ ａｎｄＦｅｂｉｇｅ
ｒ），１９７４，Ｐ．１４５〜１４８〕 【００２５】 【実施例】以下、本発明を実験例及び実施例により説明
するが、本発明はこれらによって何ら限定されるもので
はない。 【００２６】実施例１ 正常人血漿から、ＤＥＡＥセルロース カラムクロマト
グラフィー法〔ダイク，ジー．ダブル．アールら、ブリ
ティッシュ ジャーナル オブ ヘマトロジー（Ｄｉｋ
ｅ，Ｇ．Ｗ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊ
ｏｕｒｎａｌｏｆ Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ），２２
４６９（１９７２）〕により第ＩＸ因子含有粉末品（１
ｍｇ蛋白当たりの第ＩＸ因子活性１５単位）を得た。こ
の第ＩＸ因子含有製剤１００ｇを６．５リットルの水で
溶解した後、塩化ナトリウム４９ｇ、クエン酸ナトリウ
ム３３ｇを添加した。 【００２７】この第ＩＸ因子含有製剤溶液のｐＨを６．
４〜７．４に調整後、５０ｍｌ容バイアル瓶に２０ｍｌ
ずつ小分け分注し、凍結乾燥を行った。凍結乾燥後の第
ＩＸ因子活性は４４０ｕ／Ｖ、含湿度は０．８％であっ
た。この凍結乾燥された第ＩＸ因子含有製剤を６０℃で
７２時間加熱処理し、加熱処理前の第ＩＸ因子含有製剤
と比較しながら、溶解性、第ＩＸ因子活性、セルロース
アセテート膜電気泳動、ゲル濾過の項目につき試験した
結果、加熱処理後でも著明な変化はみられず、本加熱条
件下では第ＩＸ因子含有製剤は安定であることがわかっ
た。 【００２８】実験例１ 実施例１に準じて調製した第ＩＸ因子含有製剤溶液に、
表１及び表２記載の安定化剤量を第ＩＸ因子含有製剤
（第ＩＸ因子活性４００単位／瓶）にそれぞれ添加し、
ｐＨを６．４〜７．４に調整後、凍結乾燥した。その第
ＩＸ因子含有製剤を６０℃で７２時間加熱処理した後、
各因子活性について試験した。その結果を表１及び表２
に示す。 【００２９】この結果、安定化剤の使用により、無添加
の場合（第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ
因子は各々活性残存率３８、３０、３１、３０％）に比
べて安定性が極めて改善されることが判った。また、安
定化剤は単独使用より併用の場合に、より効果が上昇し
た。 【００３０】 【表１】 【００３１】 【表２】【００３２】実験例２ 実施例１で調製した第ＩＸ因子製剤（４００単位／瓶）
に、クエン酸ナトリウムを１００ｍｇ／瓶、塩化ナトリ
ウムを１５０ｍｇ／瓶加え、これに０．０５Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ７．１）のウィルス懸濁液を加え、均一に混
和した後、ガラス瓶中にて凍結乾燥を行った。凍結乾燥
終了後、窒素ガスにて平圧に戻して密栓し、６０℃の温
浴中に浸漬、加熱した。尚、瓶内の温度が６０℃に達す
るまで１０〜１５分要するので、実際は３０分間それぞ
れ加熱時間を延長して行った。各ウィルスの感染性はプ
ラーク フオーミング（ｐｌａｑｕｅ ｆｏｒｍｉｎ
ｇ）法にて測定した。結果は表３に示す通りである。 【００３３】 【表３】【００３４】比較実験例 実施例１に準じて調製した第ＩＸ因子含有製剤溶液に、
下記の表４記載の安定 化剤量を添加し、ｐＨを６．４か
ら７．４に調整後、凍結乾燥した（第ＩＸ因子活性４０
０単位／瓶）。この第ＩＸ因子含有製剤を６０℃で７２
時間加熱処理した後に、注射用水を用いて、２０単位／
ｍｌとなるように当該製剤を溶解し、その溶解性および
溶状を肉眼で観察した。結果を表４に示す。 【００３５】 【表４】
された人血液凝固第ＩＸ因子（以下、第ＩＸ因子）含有
製剤に関するものである。 【０００２】 【従来の技術】従来より、アルブミンなどの血漿蛋白に
ついて、そこに混入してくる懸念のあるウィルスを不活
化する最も確実な方法として、水溶液状態での加熱処理
法（以下、液状加熱法と称す）が、マレイ（Ｍｕｒｒａ
ｙ）ら〔ザ ニューヨーク アカデミー オブ メディ
スン（Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ａｃａｄｅｍｙ ｏ
ｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ），３１（５），３４１〜３５８
（１９５５）〕の報告に基づいてとられており、以来今
日に至るまで長年にわたり汎用され、疫学的にも液状加
熱法のウィルス不活化効果が立証されている。 【０００３】しかしながら、アルブミンのように液状加
熱に耐えるものは血漿蛋白の中でも極く限られており、
特に生理活性、又は生物活性を有する血漿蛋白は熱に対
し非常に敏感で、熱変性をおこし易く、活性の低下、消
失を招きやすい。 【０００４】一方、液状加熱法とは別に、水分を含まな
いか、またはほとんど含まない乾燥状態で、血漿蛋白の
加熱処理（以下、乾熱処理という）を行うと、液状加熱
法に比べ、その活性の低下が著しく抑制されることが血
液凝固第ＶＩＩＩ因子をモデルとする実験で明らかとな
った。しかし、一般に乾熱処理においても、安定化剤を
添加しなければ血漿蛋白の活性低下はまぬがれ得ない
し、また、水に対する溶解性及び溶状が悪くなるという
のが実情である。 【０００５】ところで、加熱によるウィルス不活化の作
用機序は、液状加熱では主としてウィルスの蛋白質成分
の変性に基づいているのに対し、乾熱処理では主にウィ
ルスの脂質成分の酸化によって傷害を受け病原性が失わ
れるといわれており、両方のウィルス不活化機構はお互
いに重なり合う部分があるものの、基本的には異なるこ
とが示唆されている〔ラーン，フィジカル メソッズ
オブ ステリライゼーション オブ マクロオーガニズ
ムス バクテリオロジー レブ．（Ｒａｈｎ，Ｐｈｙｓ
ｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｓｔｅｒｉｌｉｚａ
ｔｉｏｎ ｏｆＭａｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ Ｂａｃ
ｔ．Ｒｅｖ．） ９，１−４７（１９４５）〕。 【０００６】血漿蛋白の乾熱処理時の安定化剤として
は、これまで次のようなものが提案されている。特表昭
第５８−５００５４８号公報には、乾熱処理に付す血液
凝固因子含有組成物がアルブミン、アミノ酸、非還元性
単糖類、オリゴ糖類、糖アルコールのような安定化剤を
含んでいてもよいことが記載され、代表的な安定化剤と
してアルブミン、グリシン、マンニトール、ソルビトー
ルが例示されている。しかし、当該公報には、組成物は
安定化剤を含まないことが好ましく、乾燥状態では安定
化剤は不必要であると記載されている。 【０００７】一方、特開昭第６０−８９４２８号公報に
は、特表昭第５８−５００５４８号公報で挙げられたア
ルブミン、グリシン、ソルビトール、マンニトールは血
液凝固因子の乾熱処理時の安定化効果が弱い、すなわ
ち、乾熱処理後の活性残存率、水溶解性、澄明性がいず
れも不良であることが記載されている。特開昭第６０−
８９４２８号公報には、血液凝固因子の乾熱処理時の安
定化剤として酸性アミノ酸と塩基性アミノ酸を添加する
ことが開示されている。 【０００８】特公昭第４８−３３６１号公報には、塩化
ナトリウムおよびクエン酸ナトリウムを含有する血液凝
固因子組成物の凍結乾燥物が開示されているが、当該組
成物を乾燥状態で加熱処理を行うことについて何ら記載
されていない。 【０００９】 【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、第Ｉ
Ｘ因子を失活させることなく、夾雑ウイルスが不活化さ
れた第ＩＸ因子含有製剤を提供することである。 【００１０】 【課題を解決するための手段】本発明者らは、後記特定
の安定化剤の存在下に乾熱処理を行った第ＩＸ因子含有
製剤は、第ＩＸ因子の活性を失うことなく、ウィルスが
不活化されていること、更に第ＩＸ因子が顕著に安定化
され、しかもかかる条件下に乾熱処理を行った第ＩＸ因
子含有製剤は水に対する溶解性及び溶状が良いことを見
い出して本発明を完成した。 【００１１】即ち、本発明は、実質的に乾燥状態にあ
り、凍結乾燥および加熱処理時の安定化剤としての有機
酸塩、または有機酸塩および無機塩（好ましくはクエン
酸ナトリウム、またはクエン酸ナトリウムおよび塩化ナ
トリウム）を少なくとも含有し、実質的に乾燥状態で加
熱処理された、ウイルスが実質的に不活化され、しかも
当該乾燥状態での加熱処理に対して安定性の改善された
人血液凝固第ＩＸ因子含有製剤に関するものである。さ
らに本発明は、実質的に乾燥状態にあり、凍結乾燥およ
び加熱処理時の安定化剤としての有機酸塩、または有機
酸塩および無機塩を少なくとも含有し、実質的に乾燥状
態で加熱処理された、ウイルスが実質的に不活化された
人血液凝固第ＩＸ因子含有製剤において、有機酸塩を少
なくとも含有する場合は、人血液凝固第ＩＸ因子３００
〜５００単位に対して有機酸塩２５〜３００ｍｇを、有
機酸塩および無機塩を少なくとも含有する場合は、人血
液凝固第ＩＸ因子３００〜５００単位に対して有機酸塩
２５〜３００ｍｇおよび無機塩５０〜２５０ｍｇを含有
してなる製剤に関する。本発明によれば、夾雑するウィ
ルスが不活化され、かつ、第ＩＸ因子の安定性及び水溶
解性が改善された第ＩＸ因子含有製剤が提供される。 【００１２】本発明における加熱処理対象である第ＩＸ
因子含有製剤は、第ＩＸ因子としての生物活性または生
理活性を有するもの、たとえば血漿蛋白を分画して得ら
れるものである。 【００１３】かかる第ＩＸ因子含有製剤としては、例え
ばヒト血液凝固第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、及び第Ｘ因
子をも含んでおり、生物学的製剤基準が規定する規格に
適合したものが挙げられる。その組成比は、例えば１バ
イアル当たり、第ＩＸ因子、第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因
子、第Ｘ因子が各々４００〜５００単位、１００〜５０
０単位、５〜１５０単位、１００〜５００単位である。 【００１４】本発明の製剤は、通常第ＩＸ因子含有製剤
溶液を凍結乾燥した後、通常、含湿度０．０５〜３％の
条件下で加熱することによって製造されるが、その際、
前記特定の安定化剤を添加しておくことによって、第Ｉ
Ｘ因子の安定性が促進され、また第ＩＸ因子の溶解性お
よび溶状が改善される。 【００１５】本発明にて使用される安定化剤は、有機酸
塩、または有機酸塩および無機塩である。有機酸塩とし
てはクエン酸ナトリウムが好ましく、無機塩としては塩
化ナトリウムが好ましい。これらの安定化剤は単独で使
用してもよいが、併用の場合により安定化効果が上昇す
る。 【００１６】安定化剤の含有量は、例えば次の通りであ
る。即ち、正常人血漿１ｍｌ中に含まれる第ＩＸ因子量
の３００倍以上、好ましくは４００倍以上（即ち、活性
値３００〜５００単位）の第ＩＸ因子量（蛋白量１ｇ程
度）に対して、安定化剤として無機塩、特に塩化ナトリ
ウムは１００〜２００ｍｇ、好ましくは１４０〜１６０
ｍｇ、有機酸塩、特にクエン酸ナトリウムは５０〜１５
０ｍｇ、好ましくは９０〜１１０ｍｇの割合で含有され
る。この程度の含有量において、安定化効果、水溶解
性、溶状と製剤化のバランスが最も良好である。 【００１７】第ＩＸ因子含有製剤は、通常凍結乾燥品と
して使用に供するが、安定化剤は、血漿蛋白の凍結乾燥
処理の前に添加しておく。また、安定化剤は、乾燥処理
後、当該第ＩＸ因子含有製剤中にそのまま配合してお
く。 【００１８】加熱処理は夾雑ウイルスが実質的に不活化
されるまで行う。加熱処理における加熱温度は、通常３
０〜１００℃、好ましくは６０℃程度であり、加熱時間
は、通常１０分〜２００時間、好ましくは１０〜１００
時間程度である。 【００１９】加熱処理による不活化対象とされるウィル
スは、ヒト血漿蛋白に夾雑が危惧されるウィルスであ
り、特に肝炎ウィルスなどである。 【００２０】また、加熱処理は不活性ガス雰囲気下で行
うことにより、加熱時の安定性をより高めることが出来
る。不活性ガスとしては、たとえば窒素ガス、アルゴ
ン、ヘリウムなどが挙げられる。 【００２１】さらに、第ＩＸ因子含有製剤の精製度と耐
熱性とは相関性が乏しく、どのような精製度の第ＩＸ因
子含有製剤を用いても、安定化剤による安定化効果は変
わらない。従って、加熱処理は第ＩＸ因子含有製剤の精
製工程のどの段階で行ってもよい。 【００２２】乾燥処理における乾燥状態は実質的に無水
の状態であり、可及的に水分の少ない状態であることが
好ましい。水分の含量は、通常３％以下、好ましくは１
％以下であり、通常は０．０５〜３％程度である。 【００２３】本発明によれば、貴重な血液製剤である第
ＩＸ因子の活性を大きく損失することなく、製剤中に混
入が危惧されるウィルスが不活化された第ＩＸ因子含有
製剤が提供される。 【００２４】なお本発明において、各因子の力価は以下
の方法によって測定した。 第ＩＸ因子：一段法による凝血測定法〔ラパポート，
エス．アイ．ら，ニューイングランド，メディカル（Ｒ
ａｐａｐｏｒｔ，Ｓ．Ｉ．，ｅｔ ａｌ．．Ｎｅｗ Ｅ
ｎｇｌ．Ｍｅｄ．），２６７ １２５〜１３０（１９６
２）〕 第ＩＩ因子：プロトロンビン単独測定法〔オーレン，
ピー．エー．ら、スカンジナビア ジャーナル オブ
クリニカル ラボラトリー インベスティゲーション
（Ｏｗｒｅｎ，Ｐ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃａｎｄ．
Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．）， ３ ２０
１〜２０８（１９５１）〕 第ＶＩＩ因子：一段測定法〔シリッジ，エム．エ
ス．，ラボラトリー エバリュエイション オブ ヘマ
トロジー，フィラデルフィア：リー アンド フェビガ
ー（Ｓｉｒｒｉｄｇｅ，Ｍ．Ｓ．，Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈａｅｍａｔｏｌｏ
ｇｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｅｅ ａｎｄ Ｆ
ｅｂｉｇｅｒ），１９７４，Ｐ．１４５〜１４８〕 第Ｘ因子：一段測定法〔シリッジ，エム．エス．，ラ
ボラトリー エバリュエイション オブ ヘマトロジ
ー，フィラデルフィア：リー アンド フェビガー（Ｓ
ｉｒｒｉｄｇｅ，Ｍ．Ｓ．，Ｌａｂｏｒｏｔｏｒｙ Ｅ
ｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆ Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｐ
ｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｅｅ ａｎｄＦｅｂｉｇｅ
ｒ），１９７４，Ｐ．１４５〜１４８〕 【００２５】 【実施例】以下、本発明を実験例及び実施例により説明
するが、本発明はこれらによって何ら限定されるもので
はない。 【００２６】実施例１ 正常人血漿から、ＤＥＡＥセルロース カラムクロマト
グラフィー法〔ダイク，ジー．ダブル．アールら、ブリ
ティッシュ ジャーナル オブ ヘマトロジー（Ｄｉｋ
ｅ，Ｇ．Ｗ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊ
ｏｕｒｎａｌｏｆ Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ），２２
４６９（１９７２）〕により第ＩＸ因子含有粉末品（１
ｍｇ蛋白当たりの第ＩＸ因子活性１５単位）を得た。こ
の第ＩＸ因子含有製剤１００ｇを６．５リットルの水で
溶解した後、塩化ナトリウム４９ｇ、クエン酸ナトリウ
ム３３ｇを添加した。 【００２７】この第ＩＸ因子含有製剤溶液のｐＨを６．
４〜７．４に調整後、５０ｍｌ容バイアル瓶に２０ｍｌ
ずつ小分け分注し、凍結乾燥を行った。凍結乾燥後の第
ＩＸ因子活性は４４０ｕ／Ｖ、含湿度は０．８％であっ
た。この凍結乾燥された第ＩＸ因子含有製剤を６０℃で
７２時間加熱処理し、加熱処理前の第ＩＸ因子含有製剤
と比較しながら、溶解性、第ＩＸ因子活性、セルロース
アセテート膜電気泳動、ゲル濾過の項目につき試験した
結果、加熱処理後でも著明な変化はみられず、本加熱条
件下では第ＩＸ因子含有製剤は安定であることがわかっ
た。 【００２８】実験例１ 実施例１に準じて調製した第ＩＸ因子含有製剤溶液に、
表１及び表２記載の安定化剤量を第ＩＸ因子含有製剤
（第ＩＸ因子活性４００単位／瓶）にそれぞれ添加し、
ｐＨを６．４〜７．４に調整後、凍結乾燥した。その第
ＩＸ因子含有製剤を６０℃で７２時間加熱処理した後、
各因子活性について試験した。その結果を表１及び表２
に示す。 【００２９】この結果、安定化剤の使用により、無添加
の場合（第ＩＩ因子、第ＶＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ
因子は各々活性残存率３８、３０、３１、３０％）に比
べて安定性が極めて改善されることが判った。また、安
定化剤は単独使用より併用の場合に、より効果が上昇し
た。 【００３０】 【表１】 【００３１】 【表２】【００３２】実験例２ 実施例１で調製した第ＩＸ因子製剤（４００単位／瓶）
に、クエン酸ナトリウムを１００ｍｇ／瓶、塩化ナトリ
ウムを１５０ｍｇ／瓶加え、これに０．０５Ｍリン酸緩
衝液（ｐＨ７．１）のウィルス懸濁液を加え、均一に混
和した後、ガラス瓶中にて凍結乾燥を行った。凍結乾燥
終了後、窒素ガスにて平圧に戻して密栓し、６０℃の温
浴中に浸漬、加熱した。尚、瓶内の温度が６０℃に達す
るまで１０〜１５分要するので、実際は３０分間それぞ
れ加熱時間を延長して行った。各ウィルスの感染性はプ
ラーク フオーミング（ｐｌａｑｕｅ ｆｏｒｍｉｎ
ｇ）法にて測定した。結果は表３に示す通りである。 【００３３】 【表３】【００３４】比較実験例 実施例１に準じて調製した第ＩＸ因子含有製剤溶液に、
下記の表４記載の安定 化剤量を添加し、ｐＨを６．４か
ら７．４に調整後、凍結乾燥した（第ＩＸ因子活性４０
０単位／瓶）。この第ＩＸ因子含有製剤を６０℃で７２
時間加熱処理した後に、注射用水を用いて、２０単位／
ｍｌとなるように当該製剤を溶解し、その溶解性および
溶状を肉眼で観察した。結果を表４に示す。 【００３５】 【表４】
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(56)参考文献 特表 昭58−500548（ＪＰ，Ａ)
特公 昭48−3361（ＪＰ，Ｂ１)
Claims (1)
- (57)【特許請求の範囲】 １．実質的に乾燥状態にあり、凍結乾燥および加熱処理
時の安定化剤としての有機酸塩、または有機酸塩および
無機塩を少なくとも含有し、実質的に乾燥状態で加熱処
理された、ウイルスが実質的に不活化され、しかも当該
乾燥状態での加熱処理に対して安定性の改善された人血
液凝固第ＩＸ因子含有製剤。 ２．含湿度３％以下の条件下で加熱処理された特許請求
の範囲第１項記載の製剤。 ３．安定化剤としてクエン酸ナトリウム、またはクエン
酸ナトリウムおよび塩化ナトリウムを含有してなる特許
請求の範囲第１項記載の製剤。 ４．実質的に乾燥状態にあり、凍結乾燥および加熱処理
時の安定化剤としての有機酸塩、または有機酸塩および
無機塩を少なくとも含有し、実質的に乾燥状態で加熱処
理された、ウイルスが実質的に不活化された人血液凝固
第ＩＸ因子含有製剤において、有機酸塩を少なくとも含
有する場合は、人血液凝固第ＩＸ因子３００〜５００単
位に対して有機酸塩２５〜３００ｍｇを、有機酸塩およ
び無機塩を少なくとも含有する場合は、人血液凝固第Ｉ
Ｘ因子３００〜５００単位に対して有機酸塩２５〜３０
０ｍｇおよび無機塩５０〜２５０ｍｇを含有してなる製
剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7180137A JP2717638B2 (ja) | 1995-07-17 | 1995-07-17 | 人血液凝固第ｉｘ因子含有製剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7180137A JP2717638B2 (ja) | 1995-07-17 | 1995-07-17 | 人血液凝固第ｉｘ因子含有製剤 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60148964A Division JPH0635391B2 (ja) | 1985-07-05 | 1985-07-05 | 人血液凝固第▲ｉｘ▼因子含有製剤の加熱処理方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08169844A JPH08169844A (ja) | 1996-07-02 |
| JP2717638B2 true JP2717638B2 (ja) | 1998-02-18 |
Family
ID=16078062
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7180137A Expired - Fee Related JP2717638B2 (ja) | 1995-07-17 | 1995-07-17 | 人血液凝固第ｉｘ因子含有製剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2717638B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5837519A (en) * | 1996-11-21 | 1998-11-17 | Bayer Corporation | Dry-heat viral inactivation under controlled moisture conditions |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4495278A (en) * | 1981-04-27 | 1985-01-22 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Process for making novel blood clotting enzyme compositions |
-
1995
- 1995-07-17 JP JP7180137A patent/JP2717638B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH08169844A (ja) | 1996-07-02 |
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