ES2873449T3

ES2873449T3 - Composición rica en hidroxitirosol a partir de agua de vegetación de aceitunas y método de uso del mismo

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Publication number: ES2873449T3
Application number: ES03763237T
Authority: ES
Inventors: Roberto Crea
Original assignee: Oliphenol LLC
Current assignee: Oliphenol LLC
Priority date: 2002-07-05
Filing date: 2003-07-03
Publication date: 2021-11-03
Anticipated expiration: 2023-07-03
Also published as: US7713569B2; WO2004005228A1; EP1523465B1; AU2003249719B2; AU2003249719A1; CN1665764B; US20100216874A1; US20030108651A1; JP2005532398A; CA2491613A1; HK1084935A1; EP1523465A1; CA2491613C; CN1665764A; KR20050025588A

Abstract

Una composición rica en hidroxitirosol para el uso en la protección de la piel contra los efectos adversos de la exposición a la radiación ultravioleta, en la que la composición tiene una relación de peso del hidroxitirosol con respecto a la oleuropeína de entre 1:1 y 4:1.

Description

DESCRIPCIÓN

Composición rica en hidroxitirosol a partir de agua de vegetación de aceitunas y método de uso del mismo

Ámbito de la invención

(0001) Esta invención hace referencia a una composición rica en hidroxitirosol para el uso como protección de la piel contra efectos adversos de la exposición a la radiación ultravioleta, una fórmula inyectable que comprende la composición y el uso de un agente de tratamiento para la preparación de una composición farmacéutica para proteger la piel contra los efectos adversos de la exposición a la radiación ultravioleta.

Referencias

(0002)

Armstrong, B. K. y Doll, R. Revista Internacional del Cáncer No.15, 617-631 (1975);

Bartsch, H. y otros, Revista Carcinogénesis No. 20, 2209-2218 (1999);

Braga, C. y otros, Revista Cáncer No. 82, 448-453 (1998);

Chan, J. M. y otros, Seminarios de Biología del Cáncer No. 8, 263-273 (1998); d'Amicis, A. y Farchi, S. en Avances en Nutrición y Cáncer No. 2 (Zappia V. y otros Eds.) 67-72 Academia Kluwer/Editorial Plenum, Nueva York (1999); Deiana, M. y otros, Revista Medicina Biología de Radicales Libres No. 26, 762-769 (1999); de la Puerta, R. y otros, Revista Bioquímica Farmacológica No. 57, 445-449 (1999);

Ficarra, P. y otros, Revista Fármacos No. 46, 803-815 (1991);

Gerber, M. Epidemiología de Dieta y Cáncer, Editorial M. J. Hill, 263-275 (1994);

Kohyama, N. y otros, Revista Ciencias Biológicas, Biotecnología, Bioquímica No. 61, 347-350 (1997);

Kuller, L. H., Revista de Asociación Dietética Americana No. 97, 9-15 (1997);

La Vecchia, C. y otros, Revista Europea de Prevención de Cáncer No. 7, 461-464 (1998);

Manna C. y otros, Cartas F.E.B.S. No. 470,341-344 (2000);

Martín-Moreno, J. M. y otros, Revista Internacional del Cáncer No. 58, 774-780 (1994);

Mattson, F. H. y Grundy, S. M. Revista Investigación sobre Lípido (J. Lipid Res.) No. 26, 194-202 (1985);

Owen, R. W. y otros, Revista Canadiense Investigación Clínica Oncológica No. 125, 31 (2000a);

Owen, R. W. y otros, Revista Europea del Cáncer No. 36, 1235-1247 (2000b);

Owen, R. W. y otros, Revista Alimentación, Química, Toxicología No.38, 647-659 (2000c);

Parthasarathy, S. y otros, Publicación Academia Nacional de Ciencias USA No. 87, 3894-3898 (1990);

Petroni A. y otros, Revista Investigación sobre Trombosis No. 78, 151-160 (1995);

Risch, H. y otros, Revista del Instituto Nacional del Cáncer No. 86, 1409-1415 (1994);

Romani A. y otros, Revista Agricultura, Alimentación, Química No. 47, 964-967 (1999);

Tsimidou, M. y otros, Revista Química de Alimentación No. 44, 53-60 (1992);

Visioli, F. y otros, Cartas F.E.B.S. No. 468, 159-160 (2000);

Visioli, F. y Galli, C., Revista Nutrición No. 56, 142-147 (1998).

Antecedentes de la invención

(0003) Se ha descubierto que una elevada cantidad de grasa alimenticia está implicada en el desarrollo de varias enfermedades (Owen y otros, 2000c). La arteriosclerosis (Kuller, 1997), las enfermedades coronarias (Gerber, 1994), el cáncer de mama (La Vecchia y otros, 1998), el cáncer de próstata (Chan y otros, 1999), el cáncer de ovarios (Risch y otros, 1994) y el cáncer de colon (Armstrong y Doll, 1975) han sido relacionados todos con una elevada cantidad en grasas dietéticas. La evidencia pone de manifiesto, sin embargo, que no es solamente la cantidad, sino también el tipo de la grasa alimenticia que es importante en la etiología de algunos cánceres (Bartsch y otros, 1999).

(0004) El aceite de oliva, principal componente de grasa en la dieta mediterránea, ha sido relacionado con una menor incidencia en las enfermedades coronarias (Owen y otros, 2000b; Parthasarathy y otros, 1990; Mattson y Grundy, 1985) y en ciertos tipos de cáncer (d'Amicis y Farchi, 1999; Braga y otros, 1998; Martín-Moreno y otros, 1994). Varios laboratorios han informado que la hidrólisis de la oleuropeína fenólica del aceite de oliva, y de otros elementos de esta familia, conduce a unos pequeños componentes fenólicos con una acusada actividad protectora química (Owen y otros, 2000a; Manna y otros, 2000). Especialmente el hidroxitirosol fenólico del aceite de oliva previene una oxidación de lipoproteína de baja densidad (LDL) (Visioli y Galli, 1998), la agregación de plaquetas (Petroni y otros, 1995) e inhibe 5- y 12-lipoxigénesis (de la Puerta y otros, 1999; Kohyama y otros, 1997). También ha sido descubierto que el hidroxitirosol ejerce un efecto inhibidor sobre la nitración de la tirosina y sobre la modificación básica del ADN dependiente del peroxinitrito (Deiana y otros, 1999) así como actúa contra la citotoxicidad, inducida por especies de oxígeno reactivo en distintos sistemas celulares humanos (Manna y otros, 2000). Finalmente, unos estudios han demostrado que el hidroxitirosol es absorbido - en función de la dosificación - en las personas después de su ingestión, indicando así su disponibilidad biológica (Visioli y otros, 2000).

(0005) La producción de aceite de oliva implica, por regla general, la trituración de las aceitunas, incluidos los huesos, para producir una pasta viscosa. Durante este proceso, las aceitunas trituradas son continuamente lavadas con agua, un proceso que es conocido como “malaxación”. A continuación, la pasta es prensada mecánicamente para exprimir el contenido en aceite. Aparte de proporcionar el aceite de oliva, este prensado también exprime el contenido de la pasta en agua. Estas fases del lavado y prensado producen una considerable cantidad de agua que es conocida como “agua de vegetación”.

(0006) Tanto el hueso como la pulpa de las aceitunas son ricos en combinaciones fenólicas, que son solubles en agua. Estas combinaciones son extraídas de las aceitunas durante la malaxación, en función de sus coeficientes de sus partes proporcionales, y las mismas terminan dentro del agua de vegetación. Esto explica porque distintas combinaciones fenólicas - como, por ejemplo, la oleuropeína y sus derivados, producidos en la pulpa de la aceituna - pueden ser encontradas de forma abundante en las aguas de vegetación. De manera similar, también se encuentran con abundancia en las aguas de vegetación unas combinaciones monofenólicas como, por ejemplo, el tirosol y sus derivados, producidos por los huecos de las aceitunas.

(0007) Debido a la acusada actividad protectora química del hidroxitirosol, es deseable desarrollar un procedimiento que produzca de la aceituna un extracto acuoso con un elevado porcentaje de hidroxitirosol.

(0008) El documento WO 02/18310 A1 describe un método para obtener una composición rica en hidroxitirosol a partir de agua de vegetación que comprende los pasos de producir agua de vegetación a partir de aceitunas, añadiendo ácido al agua de vegetación, incubando el agua de vegetación acidificada, particularmente, hasta que el agua de vegetación tiene la relación de peso de hidroxitirosol con respecto a la oleuropeína de entre 5:1 y 200:1. El hidroxitirosol obtenido por el método puede ser usado: (i) como producto natural antibacteriano, producto antiviral y/o producto fungicida para empleos en la agricultura y/o de control de plagas, y (ii) como producto terapéutico y/o antioxidante para una multitud de finalidades para la salud.

Resumen de la invención

(0009) La invención incluye una composición rica en hidroxitirosol para usarse en la protección de la piel contra los efectos adversos de la exposición a la radiación ultravioleta, en la cual la composición tiene una relación de peso del hidroxitirosol con respecto a la oleuropeína de entre 1:1 y 4:1. En una ejecución, la composición ha de ser administrada oralmente y/o tópicamente.

(0010) En otro aspecto, la invención incluye una fórmula inyectable que comprende la composición rica en hidroxitirosol.

(0011) En otro aspecto, la invención incluye el uso de un agente de tratamiento que tiene una relación de peso del hidroxitirosol con respecto a la oleuropeína de entre 1:1 y 4:1 para la preparación de una composición farmacéutica para proteger la piel frente a los efectos adversos de la exposición de la radiación ultravioleta. En una ejecución, la composición se ha de administrar oralmente y/o tópicamente a un sujeto que necesite semejante protección. El sujeto puede ser un humano.

(0012) En una configuración, el agente del tratamiento comprende además un protector solar para las aplicaciones tópicas.

(0013) Un método adecuado para producir una composición rica en hidroxitirosol tiene los pasos de

(a) producir agua de vegetación de las aceitunas, preferiblemente, a partir de la carne (o pulpa) de las aceitunas deshuesadas,

(b) añadir ácido al agua de vegetación, preferiblemente, en una cantidad que produzca un pH entre 1 y 5, y más preferiblemente, entre 2 y 4, y (c) incubar el agua de vegetación acidificada hasta, al menos, el 50%, preferiblemente, al menos, el 75%, y más preferiblemente a, al menos, el 90% de la oleuropeína originalmente presente en el agua de vegetación ha sido convertida en hidroxitirosol. El agua de vegetación acidificada es incubada por un periodo de, al menos, dos meses, e incluso más preferiblemente, el agua de vegetación acidificada es incubada hasta un periodo de aproximadamente entre 6-12 meses.

(0014) La incubación se lleva a cabo hasta que el agua de vegetación tiene una relación de peso del hidroxitirosol con respecto a la oleuropeína de entre 1:1 y 4:1.

(0015) La incubación puede ser llevada a cabo hasta que el agua de vegetación tiene una relación de peso del hidroxitirosol y el tirosol de entre 3:1.

(0016) El método puede comprender además el fraccionamiento del agua de vegetación incubada para separar el hidroxitirosol de otros componentes, y/o el secado del agua de vegetación rica en hidroxitirosol para producir un extracto seco.

(0017) El agua de vegetación incubada puede ser extraída con un disolvente orgánico para producir un 20%, o preferiblemente, un 95% o más de fracción rica en hidroxitirosol.

(0018) La composición inyectable que incluye una composición rica en hidroxitirosol puede ser preparada por uno o más de los métodos descritos arriba.

(0019) Otro método adecuado para producir una composición rica en hidroxitirosol incluye los pasos de (a) producir agua de vegetación a partir de aceitunas; (b) hidrolizar la oleuropeína y otras moléculas fenólicas grandes mediante la adición de ácido (c) opcionalmente, secando el agua de vegetación; (d) contactar el agua de vegetación seca opcionalmente con un fluido supercrítico; y (e) recuperar la composición rica en hidroxitirosol de la vegetación contactada.

(0020) La composición rica en hidroxitirosol puede incluir, al menos, aproximadamente un 95 por ciento por peso de hidroxitirosol. La composición rica en hidroxitirosol puede incluir, al menos, aproximadamente un 99 por ciento por peso de hidroxitirosol.

(0021) Otro método adecuado de producir una composición rica en hidroxitirosol incluye los pasos de (a) producir agua de vegetación a partir de aceitunas; (b) hidrolizar la oleuropeína y otras moléculas fenólicas grandes mediante la adición de ácido (c) opcionalmente, secando el agua de vegetación; (d) extraer el agua de vegetación con un disolvente orgánico adecuado, como el etilo-acetato (EtAc); y (e) recuperar una fracción que contiene hidroxitirosol en una pureza igual o mayor al 95% del total de la fracción fenólica. La composición rica en hidroxitiriosol puede incluir, al menos, un 20% de la fracción fenólica que contiene aproximadamente un 95% por peso de hidroxitirosol.

(0022) El paso de recuperación descrito arriba puede incluir los pasos de (a) recuperar el fluido supercrítico, de manera que el fluido supercrítico contiene el hidroxitirosol; y (b) vaporizar el fluido supercrítico para para extraer la composición rica en hidroxitirosol. El paso de contactar descrito arriba puede comprender los pasos de (a) proveer una membrana porosa que tiene lados opuestos en un módulo bajo presión con la membrana que sirve como una interfaz de barrera entre un fluido y un gas denso, siendo la membrana no selectiva para dicho hidroxitirosol; (b) provisión del fluido supercrítico dentro del módulo en un lado de la membrana y el agua de vegetación en el lado opuesto de la ventana; (c) y extraer el hidroxitirosol a través de la membrana como fue conducido por un gradiente de concentración del hidroxitirosol entre el agua de vegetación y el fluido supercrítico. La membrana porosa puede ser una membrana de fibra hueca. El fluido supercrítico puede ser dióxido de carbono.

(0023) Otro método adecuado para producir una composición rica en hidroxitirosol incluye los pasos de (a) producir agua de vegetación a partir de aceitunas; (b) hidrolizar la oleuropeína y otras moléculas fenólicas grandes mediante la adición de ácido; y (c) secado por atomización, es decir, evaporación del agua de vegetación acidificada resultando un polvo que contiene hidroxitirosol. El paso de evaporación descrito arriba puede ser desarrollado mediante la adición de maltodextrina al agua de vegetación acidificada para resultar, preferiblemente, en un polvo que contiene aproximadamente de 1 hasta 5% de hidroxitirosol, y más preferiblemente, un polvo que contiene aproximadamente un 2% de hidroxitirosol.

(0024) El uso para proteger la piel frente a efectos adversos de la exposición a la radiación ultravioleta (UVR) puede comprender la administración a un sujeto que necesite semejante protección una cantidad efectiva farmacéuticamente de un agente de tratamiento que tenga una relación de peso de hidroxitirosol con respecto a la oleuropeína de entre 1:1 y 4:1.

(0025) El agente puede incluir también un protector solar para aplicaciones tópicas. En una configuración, el agente se administra tópicamente. Preferiblemente, el agente se administra oralmente.

(0026) Estos y otros aspectos y características de la invención serán apreciadas más en detalle cuando se lea la siguiente descripción detallada de la invención en combinación con las figuras y tablas adjuntas.

Breve descripción de las Figuras

(0027)

La Figura 1 muestra las estructuras de las combinaciones fenólicas y de sus precursores, detectados en el aceite de oliva: Ligstrósidos (I); glucósidos de oleuropeína (II); agliconas de ligstrósidos (III); agliconas de glucósidos de oleuropeína (IV); una forma dialdehídica de agliconas de ligstrósidos a falta de un grupo carboximetilo (V); una forma dialdehídica de agliconas de glucósidos de oleuropeína a falta de un grupo carboximetilo (VI); tirosol (VII); hidroxitirosol (VIII).

La Figura 2 indica el análisis HPLC (High Pressure Liquid Chromatography ó cromatografía líquida a alta presión) de una composición, rica en hidroxitirosol, según la invención después de extraerse del agua de vegetación, obtenida de la carne de las aceitunas deshuesadas, el supercrítico dióxido de carbono.

La Figura 3 muestra el análisis HPLC de una composición, rica en hidroxitirosol, de la invención después de la extracción del supercrítico dióxido de carbono con hidroxitirosol sintético.

La Figura 4 indica el análisis HPLC de una composición rica en hidroxitirosol de la invención después de la hidrólisis ácida del agua de vegetación obtenida de la carne de las aceitunas deshuesadas.

La Figura 5 muestra el análisis HPLC de una composición rica en hidroxitirosol de la invención después de la extracción del acetato etílico del hidroxitirosol del agua de vegetación obtenida de las aceitunas deshuesadas e hidrolizadas mediante la adición de ácido.

La Figura 6 indica el análisis HPLC del hidroxitirosol puro (95% o más) obtendio después de la purificación mediante la cromatografía en gel en el gel de sílice.

La Figura 7 indica el espectro de masa de una composición, rica en hidroxitirosol, según la invención. La Figura 8 muestra la trayectoria de fragmentación del hidroxitirosol.

Descripción detallada de la invención

I. Definiciones

(0028) Si no se indica nada en contra, todos los términos aquí empleados tienen el mismo significado para una persona familiarizada con el campo técnico de la presente invención. Ha de tenerse en cuenta que esta invención no se encuentra limitada a la metodología, a los protocolos ni a los reactivos particulares aquí descritos, habida cuenta de que los mismos pueden variar.

(0029) Por “oleuropeína” ha de ser entendida una oleuropeína de glucósidos secoiridoides (estructura II en la Figura 1).

(0030) Por “tirosol” ha de ser entendido un 4-hidroxifenetilalcohol (estructura VII en la Figura 1).

(0031) Por “hidroxitirosol” ha de ser entendido un 3,4-dihidroxifenetilalcohol (estructura VIII en la Figura 1).

II. Métodos adecuados para producir una composición rica en hidroxitirosol

(0032) La invención proporciona, por un lado, una composición, rica en hidroxitirosol. Se ha descubierto que, bajo unas condiciones específicas, como las descritas a continuación, el hidroxitirosol puede ser obtenido del agua de vegetación de aceitunas.

A. Producir el agua de vegetación

(0033) Un procedimiento adecuado (i) emplea las aceitunas que pueden ser obtenidas de unas fuentes convencionales y comercialmente disponibles como, por ejemplo, de los oleicultores. El agua de vegetación es obtenida, preferentemente, de aceitunas deshuesadas. Las aceitunas, procesadas según el procedimiento aquí descrito, pueden ser deshuesadas con cualquier medio apropiado. Los huesos dentro de las aceitunas contienen el tirosol que representa un indeseable componente para el agua de vegetación, y los mismos no pueden ser apreciadamente destruidos por el tratamiento con ácido, descrito a continuación. Los huesos pueden ser separados de la pulpa de forma manual ó de una manera automática, como la descrita más abajo. De forma preferente, estos medios deben ser capaces de sacar los huesos sin romperlos; de no ser así, se producirían unas más elevadas concentraciones de tirosol dentro del agua de vegetación. Además, el hidroxitirosol es extraído de un agua de vegetación que es obtenida de unas aceitunas que no han sido deshuesadas.

(0034) Para producir el agua de vegetación, la pulpa procedente de las aceitunas es prensada, en primer lugar, para conseguir una mezcla de fase líquida que comprende aceite de oliva, agua de vegetación y unos subproductos sólidos. A continuación, el agua de vegetación es separada del resto de la mezcla de la fase líquida para ser recogida. Ejemplos de procedimientos para la obtención de agua de vegetación están descritos en las Patentes Núms. 6,165,475 y 6,197,308 de los Estados Unidos, ambas del mismo Titular, R. Crea.

(0035) Para los fines de una producción a escala comercial, puede ser conveniente automatizar distintos aspectos de la presente invención. En relación con ello, los métodos de los ejemplos contemplan el empleo de un aparato, tal como el que está revelado en las Patentes Núms. 4,452,744, 4,522,119 y 4,370,27,4 de los Estados Unidos, todas concedidas a Finch y otros.

(0036) Brevemente, Finch y otros presentan un aparato para recuperar el aceite de oliva de las aceitunas. Inicialmente, las aceitunas son aportadas a un triturador que separa los huecos de las aceitunas para obtener una carne de aceituna sin hueso. Esta carne de aceituna es recogida después por un tornillo de extracción que somete la carne a una presión de extracción, lo suficientemente elevada para poder retirar una fase líquida que comprende aceite, agua y una menor parte proporcional de pulpa de aceituna. La fase líquida es recogida dentro de una tolva para luego ser enviada hacia una centrífuga de clarificación que separa la pulpa de la fase líquida para obtener una mezcla que comprende aceite de oliva y agua de vegetación. A continuación, una centrífuga de purificación separa de la mezcla el agua de vegetación y una pequeña parte proporcional de sustancias sólidas para conseguir un aceite de oliva que está principalmente exento del agua de vegetación y el cual es recogido dentro de un depósito. Según Finch y otros, el agua es llevada hacia un medio para abandonarla como, por ejemplo, hacia una alcantarilla. En un claro contraste, la presente invención tiene prevista la recogida del agua de vegetación para reservarla y usarla a los efectos de extraer el hidroxitirosol.

(0037) Otros dispositivos adicionales, que pueden ser empleados para la realización del método mencionado, están revelados en las Patentes Italianas Núms. 1276576 y 1278025.

(0038) Tal como se mencionó anteriormente, también estos dispositivos pueden ser empleados para separar la pulpa de los huesos, antes de procesarse la triturada pulpa de aceituna para conseguir el aceite, el agua y los residuos sólidos.

B. Conversión de la oleuropeína en el hidroxitirosol

(0039) La oleuropeína contenida en el agua de vegetación es convertida en el hidroxitirosol. El valor pH del agua de vegetación puede ser reducido mediante la adición de ácido, lo cual permite que el agua de vegetación sea incubada a unas condiciones que, conforme al descubrimiento de la presente invención, fomentan la hidrólisis del ácido de la oleuropeína al hidroxitirosol. A continuación, la muestra puede ser fraccionada o extraída con el fin de separar el hidroxitirosol de otras combinaciones.

(0040) Preferiblemente, el ácido añadido es el ácido cítrico. Este ácido es añadido al agua de vegetación para ajustar el valor pH a 1 hasta 5, y de forma más preferible, ajustar el valor pH a 2 hasta 4. Un ácido cítrico sólido puede ser añadido durante una agitación continua y con una cantidad de, preferentemente, 11.34 hasta 22.68 kg (25 hasta 50 libras) del ácido cítrico para aproximadamente 3.785 litros (1.000 galones) de agua de vegetación. El valor pH de la solución resultante puede ser controlado, y otra adición de ácido puede, en su caso, ser necesaria para conseguir el deseado valor pH. Unos ejemplos de procedimientos, los cuales se refieren a la conversión de la oleuropeína en hidroxitirosol después de la adición del ácido cítrico, están representados en los Ejemplos Núms. 1 y 2.

(0041) En lugar del ácido cítrico, como ácido también puede ser empleado otro ácido orgánico ó inorgánico. Los ácidos, que a título de ejemplo pueden ser empleados para la presente invención, comprenden unas sustancias inorgánicas, conocidas como ácidos minerales - ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido clorhídrico y ácido fosfórico -así como las combinaciones orgánicas, pertenecientes al ácido carboxílico, al ácido sulfónico y a los grupos fenólicos (benzilo). La adición del ácido al agua de vegetación sirve para varias finalidades, es decir para: (i) estabilizar el agua de vegetación de la polimerización del aire (oxígeno) de las moléculas fenólicas; (ii) prevenir la fermentación del agua de vegetación mediante bacterias y fermentos endógenos y/o exógenos, y (iii) proporcionar la hidrólisis de la oleuropeína y de otras moléculas fenólicas grandes que contienen hidroxitirosol, convirtiéndolas en el hidroxitirosol, tal como indicado en los Ejemplos Núms. 1 y 2. Las Tablas 1 y 2 en estos Ejemplos Núms. 1 y 2, respectivamente, contienen los datos de dos muestras de agua de vegetación y del respectivo porcentaje de la composición de distintos componentes, formados en las muestras durante cierto tiempo después de la adición del ácido cítrico.

(0042) La mezcla puede ser incubada hasta que el hidroxitirosol sea del 75 hasta el 90% de la combinación total de oleuropeína y de hidroxitirosol. Además, sustancialmente, en la mezcla de partida no debe permanecer nada de la oleuropeína.

C. Purificación del hidroxitirosol

(0043) Después de la conversión de la oleuropeína al hidroxitirosol, preferiblemente mediante la adición de ácido, el agua de vegetación incubada puede ser fraccionada por una serie de procedimientos, ya conocidos en este ramo técnico. A título de ejemplo, algunos procedimientos de fraccionamiento comprenden la separación mediante un disolvente orgánico, como el acetato etílico, métodos cromatográficos, que incluyen la cromatografía en gel y la cromatografía líquida a alta presión (HPLC) ó fluidos supercríticos.

(0044) Alternativamente, el agua de vegetación, obtenida en la manera anteriormente descrita después de la acidificación, proporciona una solución que es rica en polifenoles de un reducido peso molecular, particularmente, en el hidroxitirosol, así como en una pequeña cantidad de tirosol y oleuropeína. La concentración del hidroxitirosol dentro del agua procesada puede variar entre 4 - 5 gramos por litro hasta 10 -15 gramos por litro, en función del grado de dilución mediante la adición de agua durante la extracción del aceite de oliva. Un método adecuado de extracción ó purificación, puede enriquecer de forma selectiva el contenido en hidroxitirosol y sin la adición de contaminantes. De este modo, el mayor componente polifenólico, ó sea, el hidroxitirosol, queda aislado de otras sustancias de la familia de los polifenoles, de impurezas, de materias sólidas en suspensión, de taninos, así como aislado de otras moléculas, contenidas en el agua de vegetación. Por consiguiente, el hidroxitirosol puede ser producido en una pureza y con una cantidad que no pueden ser conseguidas fácilmente por los actuales procedimientos de extracción, sean éstos sintéticos ó naturales.

(0045) Un fluido supercrítico es un gas que se hace muy denso a partir de su temperatura y presión críticas. Las propiedades del mismo están entre las propiedades de un gas y de un líquido, por lo cual se presenta una incrementada capacidad para disolver las combinaciones. Este fluido es de una densidad relativamente elevada; la alta difusividad y la reducida viscosidad le permiten extraer las combinaciones con mayor rapidez que los disolventes líquidos convencionales. El dióxido de carbono es el gas más ampliamente empleado para un procesamiento de alimentos y de ingredientes para alimentos con el fluido supercrítico, habida cuenta de que el mismo es natural, no es tóxico ni inflamable, aparte de ser relativamente inerte y no dejar ningún residuo en el producto extraído. Por regla general, la extracción líquida con el supercrítico dióxido de carbono es llevada a efecto por dispersarse una fase dentro de otra fase dentro de grandes columnas ó torres de contacto; en este caso, el fluido con contenido en sustancias disueltas - como, por ejemplo, con jugos - fluye por gravedad hacia abajo, mientras que el supercrítico dióxido de carbono fluye hacia arriba. En la intersección de las dos fases, concretamente, tiene lugar una transferencia de masas.

(0046) Como alternativa, la extracción continua de líquidos y de suspensiones también puede ser conseguida por el empleo de unos fluidos supercríticos - como, por ejemplo, el dióxido de carbono - y de unas membranas porosas, en lugar de las columnas ó torres de contacto; En lugar de dispersar las fases, el líquido se hace pasar continuamente a través de unas porosas membranas de polipropileno que están configuradas como unas haces de fibras huecas ó como unas láminas dobladas en espiral. El líquido pasa por las membranas porosas, dispuestas dentro de un módulo, mientras que el supercrítico dióxido de carbono fluye en contracorriente por el otro lado de la membrana. La presión dentro del módulo es principalmente la misma, de tal manera que la extracción está siendo impulsada por el gradiente de concentración entre el fluido y el supercrítico dióxido de carbono. El extracto puede ser recuperado por la evaporización del dióxido de carbono a efectos de un reciclaje. Un ejemplo de procedimiento para la extracción, empleando el supercrítico dióxido de carbono y unas membranas porosas, está descrito, por ejemplo, en la Patente Núm. 5,490,884 de los Estados Unidos.

(0047) Otros fluidos supercríticos, en lugar del dióxido de carbono ó bien en combinación con el mismo. Estos fluidos comprenden el metano, el etano, el propano, el butano, el isobutano, el eteno, el propeno, los hidroflúorcarbonos, el tetraflúormetano, el clorodiflúormetano, el dióxido de carbono, el monóxido dinitrogenado, los hexafluoruros sulfurosos, el amoníaco y el cloruro metílico.

(0048) El Ejemplo Núm. 3 describe, a una escala más reducida, un experimento como soporte de la presente invención; en este caso, el hidroxitirosol ha sido aislado del agua de vegetación, empleando para ello el supercrítico dióxido de carbono y las membranas porosas. El análisis HPLC y la espectrometría de masa del hidroxitirosol extraído indican que la muestra puede contener un 97 hasta un 99% de hidroxitirosol puro. Por consiguiente, la presente invención proporciona una composición rica en hidroxitirosol, la cual contiene por lo menos un 80%, aproximadamente, del hidroxitirosol, de forma preferente por lo menos un 90%, aproximadamente, de hidroxitirosol y, de forma especialmente preferente, por lo menos un 95%, aproximadamente, de hidroxitirosol así como, con mayor preferencia aún, la misma contiene por lo menos un 99%, aproximadamente, de hidroxitirosol.

(0049) Previamente a la extracción con un fluido supercrítico, el agua de vegetación puede contener unos agentes portadores, que son conocidos a las personas familiarizadas con este ramo técnico y como pueden ser, por ejemplo, la maltodextrina ó unas gotas de polipropileno, añadidos a la solución, y/ó la solución puede ser secada. La fase del secado elimina del agua de vegetación preferentemente por lo menos un 90%, aproximadamente, de agua; con mayor preferencia por lo menos un 95%, aproximadamente de agua; y, con mayor preferencia aún, la misma elimina por lo menos un 98%, aproximadamente, de agua de vegetación.

(0050) Un aspecto importante de estos reactores de membrana consiste en el hecho de que la zona de la superficie de contacto entre las caras puede ser añadida con independencia de la velocidad de los flujos. Por consiguiente, un método adecuado contempla una unidad a gran escala en la que la zona de la superficie de la membrana, empleada para la extracción, es por lo menos de aproximadamente 100 yardas cuadradas; de forma preferente es por lo menos de aproximadamente 300 yardas cuadradas; y de forma especialmente preferente es por lo menos de aproximadamente 600 yardas cuadradas, con el fin de permitir la separación del hidroxitirosol de grandes volúmenes de agua de vegetación. De este modo, el sistema de membranas, en un aspecto, podría ser capaz de acomodar una velocidad de flujo de entre 1 y 20 litros por minuto, preferentemente entre 5 y 10 litros por minuto.

(0051) De conformidad con la presente invención, y tal como anteriormente se indicó, también pueden ser empleados unos adicionales procedimientos de purificación. El aislamiento de la hidroxitirosina mediante la cromatografía HPLC está descrito en las publicaciones de Ficarra y otros, 1991; de Romani y otros, 1999; y de Tsimidou, 1992.

III. Suplemento dietario rico en hidroxitirosol

(0052) La composición rica en hidroxitirosol reivindicada puede ser empleado para toda una serie de aplicaciones. A título de ejemplo, el hidroxitirosol puede ser empleado: (i) como un producto natural anti-bacteriano, anti-viral y/ó fungicida para las aplicaciones en la agricultura y/ó en el control de plagas (no según la invención), y (ii) como un producto terapéutico y/ó como un anti-oxidante para una gran variedad de finalidades relacionadas con la salud. El hidroxitirosol puede ser administrado a un sujeto de mamífero como, por ejemplo, a una persona deseosa de experimentar uno ó varios de los efectos beneficiosos relacionados con el hidroxitirosol.

(0053) Según ello, aquí se proporcionan composiciones para la protección del daño de la piel resultantes de la exposición a la radiación ultravioleta (UVR). El hidroxitirosol puede ser administrado oralmente o parenteralmente. Estas formas de dosificación pueden ser formuladas a partir de un hidroxitirosol purificado ó las mismas pueden ser establecidas en base a unos extractos acuosos ó acuosos/alcohólicos. Con respecto a estos últimos, los extractos acuosos ó acuosos/alcohólicos (como, por ejemplo, de agua/metanol ó de agua/etanol) pueden ser secados por una atomización con el fin de proporcionar un polvo seco que puede ser formulado en las formas de dosificación oral juntamente con otras sustancias portadoras farmacológicamente aceptables. Los extractos acuosos ó acuosos/alcohólicos pueden ser formulados para composiciones que contienen distintas relaciones entre el peso del hidroxitirosol y el peso de la oleuropeína, es decir, entre 10:1 y 100:1. Estos extractos también pueden ser formulados para contener varias relaciones entre el peso del hidroxitirosol y el peso de la oleuropeína de 4:1.

(0054) Los extractos pueden estar formulados también para contener varias relaciones de pesos del hidroxitirosol y el tirosol de entre aproximadamente 2:1 y aproximadamente 50:1, preferiblemente, entre aproximadamente 5:1 y aproximadamente 30:1.

(0055) Preferiblemente, la composición es administrada oralmente a un paciente con la necesidad de protección contra el daño de la piel resultante de la exposición al UVR. Las composiciones sólidas, en forma de dosificaciones orales de acuerdo con la presente invención, son preparadas de una manera bien conocida en las técnicas farmacéuticas, y las mismas comprenden el hidroxitirosol en combinación con por lo menos una sustancia portadora que sea farmacológicamente aceptable. Al fabricarse estas dosificaciones, una composición rica en hidroxitirosol - en una forma principalmente pura ó como el componente de un destilado ó de un extracto en bruto -es normalmente mezclada, diluida ó bien es envuelta en una sustancia portadora. Esta sustancia portadora puede ser de forma sólida ó puede ser de tipo semi-sólido ó líquido que actúa como un vehículo, como un portador ó como un medio auxiliar para el ingrediente activo. Como alternativa, la sustancia portadora también puede tener la forma de una cápsula ó de un receptáculo para facilitar la administración oral. De esta manera, las formas de dosificación sólida de administración oral según la presente invención pueden tener la configuración de tabletas, de píldoras, de polvo ó de cápsulas de gelatina, blandas ó duras.

(0056) Como alternativa, el hidroxitirosol previsto para una administración oral puede ser de forma líquida, en cuyo caso, la sustancia portadora, farmacológicamente aceptable, es el agua ó un medio acuoso/alcohólico.

(0057) Las composiciones para una administración oral según la presente invención también pueden ser formuladas con otros excipientes comunes y farmacológicamente aceptables, incluyendo la lactosa, la dextrosa, la sucrosa, el sorbitol, el manitol, el almidón, los cauchos, el silicato de calcio, una celulosa micro-cristalina, las pirrolidonas de polivinilo, la celulosa metílica, el agua, el alcohol y otras sustancias similares. Las fórmulas pueden incluir, adicionalmente, unos agentes de lubricación como, por ejemplo, el talco, el estearato de magnesio y un aceite mineral; agentes humectantes; agentes para la emulsión y suspensión; unos agentes preservantes como, por ejemplo, los hidroxi- benzoatos de metilo y propilo; así como unos agentes edulcorantes y gustativos. Además, las composiciones de la presente invención pueden ser formuladas con el fin de proporcionar una liberación rápida, sostenida ó retrasada del ingrediente activo, después de su administración a un sujeto.

(0058) Las fórmulas parenterales para su aplicación, de acuerdo con la presente invención, son preparadas aplicando para ello las técnicas normales del ámbito. El término parenteral, tal y como se usa aquí, incluye inyecciones subcutáneas, inyección intravenosa, intramuscular, intraesternal o técnicas de infusión. Semejantes fórmulas son preparadas comúnmente como soluciones inyectables estériles, usando un portador aceptable parenteralmente, tal como una solución salina isotónica o como polvo empaquetados de forma estéril para la reconstitución con un tampón estéril o una salina isotónica antes de la administración a un sujeto. En una ejecución preferible, la fórmula parenteral es una fórmula inyectable que comprende entre 1 y 500 mg/ml de la composición rica en hidroxitirosol de la presente invención. Más preferiblemente, la fórmula inyectable comprende entre 1 y 100 mg/ml de la composición rica en hidroxitirosol, de forma aún más preferible, entre10 y 100 mg/ml de la composición rica en hidroxitirosol, y de la forma más preferible, aproximadamente 10 mg/ml de la composición rica en hidroxitirosol.

(0059) De lo anteriormente expuesto, se pueden observar cómo se obtienen varios objetos y características de la invención. Aquellos expertos en la técnica pueden apreciar ahora de la descripción precedente que las amplias enseñanzas de la presente invención pueden ser implementadas en una variedad de formas. Por consiguiente, mientras esta invención ha sido descrita en relación con configuraciones y ejemplos particulares de la misma, el alcance verdadero de la invención no debería estar tan limitado. Varios cambios y modificaciones pueden ser llevadas a cabo sin separarse del ámbito de la invención, como se definió en las reivindicaciones adjuntas.

(0060) Los ejemplos, relacionados a continuación, describen los procedimientos para producir unas composiciones ricas en hidroxitirosol conforme a la presente invención. Los ejemplos están previstos para describir el alcance de la presente invención, pero de ninguna manera para limitarlo.

Ejemplos

Ejemplo 1

Conversión de oleuropeína a hidroxitirosol después de la adición de aproximadamente 11.34 ka (25 libras) de ácido cítrico a 3.785 litros (1.000 galones)

(0061) La Tabla 1 representa la conversión de oleuropeína en hidroxitirosol durante cierto tiempo después de la adición de aproximadamente 11.34 kg (25 libras) de ácido cítrico a 3.785 litros (1.000 galones) de agua de vegetación. Los porcentajes de la Tabla 1 están indicados como porcentajes del peso de la totalidad de combinaciones fenólicas dentro de la solución. Según pone de manifiesto la Tabla 1, el hidroxitirosol comprende, después de 12 meses, más del 80% de las combinaciones fenólicas dentro de la solución.

Tabla 1

Ejemplo 2

Conversión de oleuropeína a hidroxitirosol después de la adición de aproximadamente 22.68 kas (50 libras) de ácido cítrico a 3.785 litros (1.000 galones)

(0062) La Tabla 2 representa la conversión de oleuropeína en hidroxitirosol durante cierto tiempo después de la adición de aproximadamente 22.68 kgs (50 libras) de ácido cítrico a 3.785 litros (1.000 galones) de agua de vegetación. Los porcentajes de la Tabla 2 están indicados como porcentajes del peso de la totalidad de combinaciones fenólicas dentro de la solución. De una manera significativa, y tal como puesto de manifiesto en la Tabla 2, el hidroxitirosol comprende, después de dos meses, más del 45% de las combinaciones fenólicas dentro de la solución.

Tabla 2

Ejemplo 3

Extracción de hidroxitirosol del agua de vegetación

(0063) Una parte alícuota (0.5 mililitro) de agua de vegetación, que contiene aproximadamente 40 mgrs. de una sustancia sólida seca (maltodextrina), ha sido mezclada con unas gotas de polipropileno poroso y la misma es secada. La mezcla seca ha sido empleada para la extracción con un dióxido de carbono supercrítico (Empresa PoroCrit, LLC, Berkeley, California). La muestra recogida (aproximadamente 2.0 mgrs.) ha sido analizada mediante HPLC. El perfil de la muestra está indicado en la Figura 2, mientras que la Tabla 3 indica la zona por debajo la mayor cresta, la cual es del 97%. Al ser añadido un hidroxitirosol sintético a la muestra, que es analizada por HPLC, aparecía una mayor cresta que indica, tal como representado en la Figura 3, que la mayor parte del producto es el hidroxitirosol (Tabla 4).

Tabla 3

Tabla 4

Ejemplo 4

Extracción de hidroxitirosol del agua de vegetación acidificada

(0064) Una parte alícuota (1 litro) de agua de vegetación, después de una hidrólisis acídica, fue agitada intensamente con acetato etílico en un matraz de agitación. El disolvente orgánico fue separado de la solución acuosa y evaporado mediante un evaporador rotatorio. El aceite espeso resultante (aprox. 20 g.) fue recogido y analizado mediante HPLC. El perfil de esta muestra está mostrado en la Figura 5, y la Tabla 5 muestra el área de mayor cresta siendo de 97.457% que indica que el hidroxitirosol representa aproximadamente el 95% o más del total de la parte polifenólica en el agua. La determinación fenólica total mediante el ensayo colorimétrico estándar muestra que el hidroxitirosol se contiene en el aceite en aproximadamente el 20% en peso.

Tabla 5

(0065) Esta parte fue usada para la purificación posterior del hidroxitirosol mediante cromatografía en gel. La sílice seca (150 g) fue suspendido en el acetato etílico (300 ml) para obtener una suspensión espesa. La suspensión fue vertida dentro de una columna de vidrio y se dejó que la sílice permaneciera 15 minutos para sedimentar. El aceite espeso que contenía aprox. el 20% (4 g) de hidroxitirosol fue disuelto en 25 ml de acetato etílico y lentamente se vertió sobre el gel de sílice. La purificación del hidroxitirosol fue obtenida mediante la elución por gravedad del producto y mediante la adición de acetato etílico como el disolvente. Las partes que contenían el hidroxitirosol puro fueron recogidas y vertidas juntas. El disolvente fue evaporado hasta que un aceite amarillo fue producido. Como se muestra en la Figura 6 y en la Tabla 6, este aceite es esencialmente hidroxitirosol puro (97-99%) como se verificó mediante HPLC y espectroscopia de masas. El rendimiento de esta purificación es de aproximadamente 2.8-3.0 g. de hidroxitirosol o aprox. el 65%.

Tabla 6

(0066) El análisis de espectroscopia de masas de las muestras obtenidas como se describe por los dos procedimientos en los ejemplos 3 y 4, como se muestra en la Figura 7, confirmaron que la mayor parte del producto es hidroxitirosol. La muestra fue diluida en una concentración final de 26 microgramos por milímetro con metanol y analizado en modo de ionización negativa en un LCQ Finnigan incorporado con una sonda ECI. La infusión fue a 3 microlitros por minuto usando una bomba de jeringa integrada. La temperatura fue de 270C, el voltaje de la aguja de 4.2 V, el gas envolvente de 45 unidades y el gas auxiliar de 10 unidades. La trayectoria de la fragmentación del hidroxitirosol está mostrado en la Figura 8. Como se puede observar en la Figura 7, el hidroxitirosol (masa / carga 153.1) y sus productos de fragmentación (123.1 y 105.1 masa / carga) explican la mayoría de la abundancia del producto en el espectro multifásico.

Ejemplo 5

Protección contra el daño en la piel por la radiación ultravioleta

Composiciones del aceite de oliva

(0067) El artículo de prueba fue el aceite de oliva (Lot#A-1B). El aceite de oliva es la preparación de agua no procesada obtenida mediante la hidrólisis acídica del agua de vegetación (500 ml) evaporada hasta el secado mediante el evaporador rotatorio y la subsiguiente liofilización. Los vehículos del artículo de prueba eran acuosos 0.5% w/v metilo-celulosa (administración oral) y metilo-alcohol, 99.9% A.C.S. grado espectrofotométrico (administración tópica). Las fórmulas fueron preparadas una vez durante el estudio y el artículo de la prueba fue considerado 75% activo para la finalidad de los cálculos de dosificación.

Ratones

(0068) Cien ratones machos sin pelo Crl:SKH1-frrBR (Fuente: Laboratorios Charles River, Inc., Portage, Michigan E.E.U.U.) fueron asignados aleatoriamente a diez grupos de dosificación (Grupos 1 hasta 10), diez ratones por grupo, como se indica en la Tabla 1. Los pesos de los cuerpos de los ratones machos eran de entre 17 y 28 gramos.

Tabla 5: Diseño experimental

Administración de las composiciones de aceite de oliva y exposición a UVR

(0069) Las fórmulas fueron administradas oralmente (a través de alimentación forzada) a ratones apropiados diariamente durante 31 días consecutivos (grupos 1 hasta 4) o durante 10 días consecutivos (grupo 5). Las fórmulas fueron administradas tópicamente (100 mcL/ratón) a ratones apropiados una vez al día durante 31 días consecutivos (grupos 6 hasta 9) o durante 10 días consecutivos (grupo 10).

(0070) En el día 28° (grupos 1 hasta 4 y 6 hasta 9) o en el 7° día (grupos 5 y 10) de la administración de la fórmula, los ratones en los grupos 1 hasta 10 fueron expuestos a UVR (es decir, a longitudes de onda en las partes de UVB y UVA del espectro electromagnético). La fuente de irradiación fue un simulador solar de alta intensidad “Berger Compact Art” (Compañía de Luz Solar, Filadelfia, PA) con un filtro de vidrio Schott WG320 acoplado a un tubo de luz “Oriel”. La intensidad radiante de la fuente fue monitorizada continuamente con un metro PMA 2100 (Compañía de Luz Solar, Filadelfia, PA) o con un dispositivo comparable. En el día 28° ó 7°, el intervalo entre la administración de la fórmula y el inicio de la exposición a los UVR fue menor a 15 minutos para la mayoría de los ratones y un poco más de 15 minutos para un número pequeño de ratones.

(0071) Se hicieron pruebas de viabilidad dos veces al día. Se registraron observaciones clínicas, al menos, semanalmente, incluyendo una vez antes de la primera administración de la fórmula y una vez inmediatamente antes de la exposición a los UVR. Observaciones clínicas fueron grabadas a aproximadamente las 24, 48 y 72 horas después de la irradiación. Los pesos de los cuerpos fueron registrados una vez semanalmente durante el periodo de administración y al terminar el sacrificio.

Sacrificio de los ratones

(0072) Todos los ratones sobrevivieron al sacrificio programado. El sacrificio programado ocurrió después del examen final, aproximadamente 72 horas después de completar las exposiciones a los UVR (CO²asfixia). La piel dorsal, incluyendo los lugares de exposición a los UVR fueron retirados y retenidos en formol neutro al 10% para un posible examen histopatológico.

(0073) El promedio calculado de los valores de la dosis UVR del (MED) y las desviaciones estándar fueron determinadas para grupos apropiados como sigue. La dosis UVR instrumental más baja que causa cualquier respuesta cutánea en un lugar de exposición fue determinada para cada ratón. El promedio calculado de UVR para cada grupo para cada punto en el tiempo de observación fue determinado. Si la administración del artículo de prueba no tiene influencia en la dosis UVR requerida para provocar respuestas cutáneas, basadas en este método de cálculo, un promedio calculado del valor de la dosis UVR equivalente a 1.0 MED podría ser esperado a las 48 horas después de la irradiación. El promedio calculado del valor de la dosis UVR mayor que 1.0 podría indicar un efecto protector del artículo testado. Por cada ratón que no tubo reacciones en la piel en cualquiera de los 6 lugares de exposición a los UVR, un valor imputado de 2.8 fue asignado con la finalidad del cálculo y el símbolo > fue incluido como un prefijo al grupo del promedio calculado del valor de dosis UVR. Adicionalmente, las relaciones (observaciones clínicas) y los promedios con desviaciones estándar (pesos del cuerpo) fueron calculados.

(0074) Los promedios de grupo y las desviaciones estándar fueron calculados y tabulados para pesos del cuerpo y para los cambios de pesos del cuerpo.

Resultados

(0075) Las reacciones de la piel que se produjeron en los lugares de exposición a los UVR incluían eritema, edema y descamación y la severidad de las reacciones de la piel tendían a depender de la dosis de exposición a los UVR.

(0076) Hubo una indicación de un suave efecto protector dependiente de la dosificación contra la inflamación cutánea inducida por UVR en ratones sin pelo con una administración oral del aceite de oliva durante 31 días y un moderado efecto protector dependiente de la dosificación en ratones con una administración tópica del aceite de oliva durante 31 días. En este tipo de estudio, se anticipaba que el promedio calculado del valor de la dosis UVR sería aproximadamente igual a 1.0 a las 48 horas después de la exposición UVR en ratones ingenuos.

(0077) En ratones a los que se administró oralmente aceite de oliva durante 31 días (grupos 1 hasta 4), el promedio calculado de los valores de dosis UVR a las 48 horas después de la exposición UVR fueron 1.2, 1.3, 1.4 y 1.5 en los grupos de dosificación 0 (medio), 1, 10 y 100 mg/kg/día, respectivamente. En ratones a los que se les administró tópicamente aceite de oliva durante 31 días (grupos 6 hasta 9), el promedio calculado de los valores de la dosis UVR a las 48 horas después de la exposición a los UVR fueron de 1.5, 1.5, >1.9 y >2.2 en los grupos de dosificación 0 (medio), 1, 10 y 100 mg/kg/día, respectivamente. El símbolo > fue incluido como un prefijo del promedio calculado de los valores de dosis UVR en grupos 8 y 9, porque no se produjeron reacciones cutáneas en ninguno de los lugares de exposición a los UVR para dos ratones en cada uno de esos grupos. Para aquellos cuatro ratones, un valor imputado de 2.8 fue asignado para la finalidad del cálculo.

(0078) A las 72 horas después de la exposición a los UVR, el efecto protector del artículo de la prueba fue menos definitivo. Sin embargo, en ratones a los que se les administró tópicamente 100mg/kg/día de aceite de oliva durante 31 días (grupo 9), el promedio calculado de la dosis UVR fue de 1.6 a las 72 horas después de la exposición a los UVR, comparado con un valor de 1.2 para el grupo de control apropiado (grupo 6).

(0079) El promedio calculado 1.5 del valor de la dosis UVR en el grupo 6 [0 (medio), administración tópica] a las 48 horas después de la exposición a los UVR fue inesperado. Habida cuenta que el valor fue sustancialmente mayor que el valor esperado de aproximadamente 1.0, el medio puede haber tenido algún impacto en la susceptibilidad cutánea a la exposición a los UVR. Sin embargo, hubo un aumento claro en el promedio calculado de los valores de la dosis UVR en los ratones a los que se administraron tópicamente 10 y 100 mg/kg/día de dosis de aceite de oliva durante 31 días, comparado con los ratones a los que se administró tópicamente 0 (medio) mg/kg/día de aceite de oliva.

(0080) No hubo ninguna indicación de un efecto protector contra la inflamación cutánea inducida por UVR en ratones sin pelo a los que se les administraron 100 mg/kg/día de dosis de aceite de oliva durante 10 días a través del medio oral (grupo 5) o tópico (grupo 10), comparado con los grupos de control apropiados. En ratones a los que se administraron oralmente o tópicamente los 100 mg/kg/día de la dosis de aceite de oliva durante 10 días, el promedio calculado de los valores de la dosis UVR a las 48 horas después de la exposición a los UVR fueron 1.0 y 1.3, respectivamente. Estos valores fueron comparables con los valores que se dieron en los grupos de dosificación apropiados 0 (medio) mg/kg/día (es decir, grupos 1 y 6, respectivamente).

(0081) Las reacciones de la piel que se produjeron a las 24 horas después de la exposición a los UVR no se consideraron útiles para hacer una determinación sobre el potencial protector del artículo de la prueba, porque estas reacciones tienden a ser menos reproducibles que aquéllas que se producen más tarde.

(0082) Dos ratones en cada uno de los grupos 1 y 3 desarrollaron ulceraciones urogenitales. Un ratón en cada uno de los grupos 6 y 7 desarrollaron uno o más nódulos. Estos son hallazgos comunes en ratones machos sin pelo y no fue considerado que tuvieran relación con el artículo de la prueba. La necropsia reveló que todos los tejidos parecían normales. El peso del cuerpo y los cambios del peso del cuerpo observados a lo largo del protocolo experimental fueron insustanciales.

(0083) Hubo una indicación de un efecto protector leve dependiente de la dosificación contra la inflamación cutánea inducida por los UVR en ratones machos sin pelo a los que se administró aceite de oliva durante 31 días y un efecto protector moderado dependiente de la dosificación en ratones a los que se administró tópicamente aceite de oliva durante 31 días. La alta dosificación de aceite de oliva, 100 mg/kg/día ofreció una protección cutánea a través de vías de administración orales y tópicas.

(0084) No hubo ninguna indicación de un efecto protector contra la inflamación cutánea inducida por los UVR en ratones sin pelo a los que se administraron los 100 mg/kg/día de la dosificación de aceite de oliva durante 10 días a través de vía oral o tópica.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Una composición rica en hidroxitirosol para el uso en la protección de la piel contra los efectos adversos de la exposición a la radiación ultravioleta, en la que la composición tiene una relación de peso del hidroxitirosol con respecto a la oleuropeína de entre 1:1 y 4:1.

2. La composición de la reivindicación 1, en la cual la composición ha de ser administrada oralmente y/o tópicamente.

3. Una fórmula inyectada que comprende la composición rica en hidroxitirosol de la reivindicación 1.

4. Uso de un agente de tratamiento que tiene una relación de peso del hidroxitirosol con respecto a la oleuropeína de entre 1:1 y 4:1 para la preparación de una composición farmacéutica para proteger la piel contra efectos adversos de la exposición a la radiación ultravioleta.

5. El uso de la reivindicación 4, en la que la composición ha de ser administrada oralmente y/o tópicamente a un sujeto que necesita semejante protección.

6. El uso de la reivindicación 5, en la que dicho sujeto es un humano.

7. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 4 hasta 6, en la que dicho agente comprende además una protección solar para aplicaciones tópicas.