ES2834125T3

ES2834125T3 - Síntesis de compuestos cíclicos peptidomiméticos de giro beta

Info

Publication number: ES2834125T3
Application number: ES13807585T
Authority: ES
Inventors: Teresa Lama; Jeanick Pascal
Original assignee: Mimetogen Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Mimetogen Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2012-06-22
Filing date: 2013-06-07
Publication date: 2021-06-16
Anticipated expiration: 2033-06-07
Also published as: CN104619717A; EP2864347A1; KR20150040272A; CA2909584C; US9115179B2; JP2015524791A; EP2864347A4; AU2013277637A1; CA2909584A1; KR102061382B1; US20130345395A1; WO2013191926A1; JP6248103B2; AU2013277637C1; EP2864347B1; AU2013277637B2; CN104619717B

Abstract

Un método de preparación de un compuesto cíclico peptidomimético de giro β de fórmula (I) **(Ver fórmula)** comprendiendo el método etapas de: (a) proporcionar un compuesto peptidomimético lineal protegido de fórmula (III) **(Ver fórmula)** (b) ciclar en una fase de disolución el compuesto peptidomimético lineal protegido de fórmula (III) para formar un compuesto cíclico peptidomimético de giro β protegido de fórmula (IV) mediante una sustitución nucleófila aromática intramolecular **(Ver fórmula)** (c) desproteger un grupo protector de la cadena lateral del aminoácido en el compuesto cíclico peptidomimético de giro β protegido de fórmula (IV) en donde: R1 y R3 son independientemente hidrógeno, alquilo C1 a C6, arilo, o un sustituyente de cadena lateral de aminoácido de un aminoácido natural o no natural; R2 y R4 son independientemente hidrógeno o alquilo C1 a C6, o R1 y R2 junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un grupo ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo, o R3 y R4 junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un grupo ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo; R5, R6 y R7 son independientemente hidrógeno o alquilo C1 a C6; Y se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, -NO2, -COOR8, -OC(R8)3, -SO3R8 o -SO2R8; cada R8 es alquilo o arilo; X se selecciona del grupo que consiste en O, N, S, P, Se, C, alquileno C1 a C6, SO, SO2 y NH; Z se selecciona del grupo que consiste en F, Cl, Br o I; R11 y R13 son independientemente hidrógeno o un grupo protector; W1 y W3 son independientemente un sustituyente de cadena lateral de aminoácido de un aminoácido natural o no natural, menos un átomo de hidrógeno en el punto de unión a R11 y R13 respectivamente; 30 n es 0, 1, 2, 3, 4 o 5; y L2 es H, NH2, OH, SH, COOH, NH-CH2-COOH, alquilo C1 a C6 o arilo C1 a C6.

Description

DESCRIPCIÓN

Síntesis de compuestos cíclicos peptidomiméticos de giro p

Campo de la invención

La presente invención se refiere a métodos de preparación de compuestos peptidomiméticos cíclicos de giro p y de sus productos intermedios.

Introducción

Aunque la síntesis de ciertos compuestos peptidomiméticos de giro p es conocida, cuando estas metodologías se aplican a la producción a gran escala de compuestos en cantidades de gramos y kilogramos, que se requieren para estudios in vivo y clínicos, surgen dificultades, especialmente con respecto a la formación de producto secundario dimérico.

Considerando la prometedora actividad farmacológica de varios compuestos en la clase de los compuestos peptidomiméticos cíclicos de giro p, existe la necesidad de desarrollar una nueva metodología sintética que permita una producción más rentable.

La publicación de patente de EE. UU. N° 2003/211982A1 de Saragovi et al. divulga la síntesis de compuestos peptidomiméticos cíclicos de giro p, pero no describe métodos de síntesis que impliquen una reacción de ciclación que se lleve a cabo en fase de disolución, tal como la presente invención.

Feng, Y., et al. describen la síntesis de compuestos peptidomiméticos cíclicos de giro p mediante la ciclación SNAr sobre un soporte sólido, y tampoco divulga métodos de síntesis que impliquen una reacción de ciclación que se lleve a cabo en fase de disolución, tal como la presente invención.

Es, por tanto, un aspecto de la presente invención proporcionar nuevos métodos de síntesis para la preparación de compuestos peptidomiméticos cíclicos de giro p, que venzan las limitaciones desveladas. Es un aspecto adicional de la presente invención proporcionar métodos comercialmente viables para producir estos compuestos.

Breve descripción de los dibujos

La FIG. 1 muestra un Esquema 1 de reacción general, representa una reacción que conduce a compuestos peptidomiméticos cíclicos de giro p de fórmula (I), de acuerdo con realizaciones de la presente invención.

La FIG. 2 muestra un Esquema 2 de reacción a modo de ejemplo, representa una vía para preparar el compuesto cíclico peptidomimético de giro p de estructura D3 usando resina de cloruro de 2-clorotritilo (2-CTC), de acuerdo con una realización de la presente invención,

Resumen de la invención

El alcance de la invención se define en el conjunto adjunto de reivindicaciones. En varias realizaciones, la invención proporciona métodos de síntesis para compuestos peptidomiméticos cíclicos de giro p. En otras realizaciones, la invención proporciona compuestos intermedios útiles en dicho método. Los métodos de síntesis y nuevos productos intermedios se encuentran ilustrados en las realizaciones indicadas en la FIG. 1 (Esquema 1).

Ciertas realizaciones de la presente invención proporcionan un método de preparación de un compuesto cíclico peptidomimético de giro p de fórmula (I)

comprendiendo el método etapas de:

(a) proporcionar un compuesto peptidomimético lineal protegido de fórmula (III)

(b) ciclar, en una fase de disolución, el compuesto peptidomimético lineal protegido de fórmula (III) para formar un compuesto cíclico peptidomimético de giro p protegido de fórmula (IV) mediante una sustitución nucleófila aromática intramolecular

(c) desproteger un grupo protector de la cadena lateral del aminoácido en el compuesto cíclico peptidomimético de giro p protegido de fórmula (IV);

en donde:

R¹y R³pueden ser independientemente hidrógeno, C¹a C ⁶ alquilo, arilo, o un sustituyente de cadena lateral de aminoácido de un aminoácido natural o no natural;

R²y R⁴pueden ser independientemente hidrógeno o C¹a C ⁶ alquilo, o R¹y R²junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un grupo ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo, o R³y R⁴junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un grupo ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo;

R⁵, R ⁶ y R⁷pueden ser independientemente hidrógeno o C¹a C ⁶ alquilo;

Y puede ser hidrógeno, -NO², -COOR ⁸ , -OC(R⁸)³, -SO³R⁸o -SO²R⁸;

cada R ⁸ puede ser alquilo o arilo;

X puede ser O, N, S, P, Se, C, alquileno C¹a C^e, SO, SO²o NH;

Z puede ser F, Cl, Br o I;

R¹¹y R¹³pueden ser independientemente hidrógeno o un grupo protector;

W¹y W³pueden ser independientemente un sustituyente de cadena lateral de aminoácido de un aminoácido natural o no natural, menos un átomo de hidrógeno en el punto de unión a R¹¹y R¹³respectivamente; n puede ser 0, 1, 2, 3, 4 o 5; y

L²puede ser H, NH², OH, SH, COOH, NH-CH²-COOH, C¹a C ⁶ alquilo o C¹a C ⁶ arilo.

Descripción de los dibujos

Los dibujos ilustran, en general, a modo de ejemplo, pero no a modo de limitación, diversas realizaciones tratadas en el presente documento.

La FIG. 1 es una ilustración esquemática general de los métodos de síntesis para preparar el compuesto cíclico peptidomimético de giro p de la fórmula (1) de acuerdo con realizaciones de la presente invención.

La FIG. 2 es un esquema de reacción a modo de ejemplo para preparar el compuesto cíclico peptidomimético de giro p de la estructura D3 usando resina de cloruro de 2-clorotritilo (2-CTC) de acuerdo con una realización de la presente invención.

Descripción detallada de la invención

Definiciones:

Como se usa en el presente documento, los términos "un" o "una" se usan, como es común en los documentos de patente, para incluir uno o más de uno, independiente de cualquier otro caso o uso de "al menos un" o "uno o más". Como se usa en el presente documento, el término "aproximadamente" se refiere a una cantidad que es aproximadamente, por poco, casi o en la proximidad de ser igual a, o es igual a, una cantidad establecida.

Como se usa en el presente documento, el término "aminoácido no natural" se refiere a todos los aminoácidos que no son aminoácidos naturales como se ha descrito anteriormente. Dichos aminoácidos incluyen los D-isómeros de cualquiera de los 19 aminoácidos ópticamente activos y de glicina, que existen de forma natural descritos anteriormente. Los aminoácidos no naturales también incluyen homoserina, homocisteína, citrulina, ácido 2,3-diaminopropiónico, hidroxiprolina, ornitina, norleucina y tiroxina. Los aminoácidos no naturales adicionales son bien conocidos por un experto habitual en la técnica. Un aminoácido no natural puede ser un D- o L-isómero. Un aminoácido no natural también puede ser un alfa-aminoácido, un beta-aminoácido o un gamma-aminoácido. Un aminoácido no natural también puede ser un aminoácido modificado post-traduccionalmente, tal como una serina, treonina o tirosina fosforilada, una lisina acilada, o una lisina o arginina alquilada. Se conocen muchas formas de los aminoácidos modificados post-traduccionalmente.

Como se usa en el presente documento, el término "grupo protector" significa que un grupo funcional particular, por ejemplo, O, S o N, está temporalmente bloqueado de manera que se pueda llevar a cabo selectivamente una reacción en otro sitio reactivo en un compuesto multifuncional.

Como se usa en el presente documento, el término "disolvente prótico" se refiere a un disolvente que lleva hidrógeno unido al oxígeno como en un grupo hidroxilo o unido al nitrógeno como en un grupo amina. Dichos disolventes pueden donar un H+ (protón). Los ejemplos de disolventes próticos incluyen agua, etanol, terc-butanol y dietilamina. Como se usa en el presente documento, el término "disolvente aprótico" se refiere a un disolvente que lleva pocos o ningún hidrógeno unido al oxígeno como en un grupo hidroxilo o unido al nitrógeno como en un grupo amina.

Como se usa en el presente documento, el término "anillo" significa un compuesto cuyos átomos están dispuestos en las fórmulas en una forma cíclica.

Como se usa en el presente documento, el término "alquilo" significa un grupo hidrocarburo que puede ser lineal, cíclico, ramificado, o una combinación de los mismos, que tiene el número de átomos de carbono designado (es decir, C¹-C⁶significa uno a seis átomos de carbono). Los ejemplos de grupos alquilo incluyen metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, isobutilo, sec-butilo, pentilo, iso-amilo, hexilo, octilo, nonilo y similares. Los grupos alquilo pueden estar opcionalmente sustituidos como se define en el presente documento. El término "alquileno", como se usa en el presente documento, se refiere a un grupo alifático saturado derivado de un hidrocarburo saturado de cadena lineal o ramificada unido en dos o más posiciones, tales como metileno (—CH²—).

Como se usa en el presente documento, el término "alilo" se refiere a un compuesto que contiene el grupo alilo (es decir, CH²=CH—CH²—).

Como se usa en el presente documento, el término "arilo" significa un sistema aromático carbocíclico que contiene uno, dos o tres anillos, en donde dichos anillos pueden estar unidos juntos de manera lateral o pueden estar condensados. El término "arilo" engloba radicales aromáticos tales como bencilo, fenilo, naftilo, antracenilo, fenantrilo, indanilo, indenilo, anulenilo, azulenilo, tetrahidronaftilo y bifenilo. Los grupos arilo pueden estar opcionalmente sustituidos como se define en el presente documento. El término "arileno" designa cualquier grupo divalente derivado de arilo (tal como se define anteriormente) restando un átomo de hidrógeno.

Cuando se define que un grupo es "nulo", significa que dicho grupo está ausente.

Cuando un grupo está sustituido, los sustituyentes pueden incluir, sin limitación, uno o más sustituyentes independientemente seleccionados de los siguientes grupos o un conjunto designado particular de grupos, solos o en combinación: alquilo inferior, alquenilo inferior, alquinilo inferior, alcanoílo inferior, heteroalquilo inferior, heterocicloalquilo inferior, haloalquilo inferior, haloalquenilo inferior, haloalquinilo inferior, perhaloalquilo inferior, perhaloalcoxi inferior, cicloalquilo inferior, fenilo, arilo, ariloxi, alcoxi inferior, haloalcoxi inferior, oxo, aciloxi inferior, carbonilo, carboxilo, alquil inferior-carbonilo, ciano, hidrógeno, halógeno, hidroxi, amino, alquil inferior-amino, arilamino, amido, nitro, tiol, alquiltio inferior, ariltio, alquil inferior-sulfinilo, alquil inferior-sulfonilo, arilsulfinilo, arilsulfonilo, ariltio, sulfonato, ácido sulfónico, sililo trisustituido, N³, SH, SCH³, C(O)CH³, piridinilo, tiofeno, furanilo, carbamato inferior y urea inferior.

Para los fines de claridad y como ayuda en el entendimiento de la invención, como se desvela y se reivindica en el presente documento, se definen a continuación los siguientes términos y abreviaturas:

Boc—t-butiloxicarbonilo

Cbz—benciloxicarbonilo

CTC—cloruro de clorotritilo

DBU—1,8-Diazobiciclo[5.4.0]undec-7-eno

DCM—diclorometano

DIC—1,3-Diisopropilcarbodiimida

DIEA—N,N-diisopropiletliilamina

DIPEA—N,N-diisopropiletilamina

DMF—dimetilformamida

Fmoc—9-fluorenilmetoxicarbonilo

HBTU—hexafluorofosfato de O-benzotriazol-N,N,N',N'-tetrametil-uronio

HMPB-MBHA—ácido 4-hidroximetil-3-metoxifenoxibutírico MBHA, o 4-(4-hidroximetil-3-metoxifenoxi)-butiril-p-metilbenzhidrilamina

HOBt—N-hidroxibenzotriazol

Mtt—metiltritilo

Pbf—pentametildihidrobenzofuranosulfonilo

SPPS—síntesis de péptidos en fase sólida

TBAF—fluoruro de tetrabutilamonio

TBDMS—terc-butildimetilsilano

tBu—éster terc-butílico

TFA—ácido trifluoroacético

THF—tetrahidrofurano

TIS—triisopropilsilano

TMG—tetrametilguanidina

Trt—tritilo

La FIG. 1 muestra el Esquema 1, que representa vías generales que fueron exploradas para preparar el compuesto cíclico peptidomimético de giro p de fórmula (I), que incluye las etapas de: (a) proporcionar un compuesto peptidomimético lineal protegido de fórmula (III); (b) ciclar el compuesto peptidomimético lineal protegido de fórmula (III) para formar un compuesto cíclico peptidomimético de giro p protegido de fórmula (IV) mediante sustitución nucleófila aromática intramolecular; y (c) desproteger un grupo protector de la cadena lateral del aminoácido en el compuesto cíclico peptidomimético de giro p protegido de fórmula (IV).

En ciertas realizaciones, la invención proporciona un método de preparación de un compuesto cíclico peptidomimético de giro p de la fórmula (I) que tiene un anillo macrocíclico de desde 14 hasta 16 átomos de anillo. En ciertas realizaciones, el método proporciona compuestos donde Ri y R3 son sustituyentes de la cadena lateral del aminoácido. Normalmente, R1 y R3 derivan independientemente de aminoácidos naturales o no naturales. Por ejemplo, R1 y R3 pueden derivar independientemente de los veinte aminoácidos de proteína que existen de forma natural (natural), o de aminoácidos modificados (no naturales), en cualquier configuración enantiomérica. Los veinte aminoácidos naturales son alfa-aminoácidos que incluyen glicina (Gly), alanina (Ala), valina (Val), leucina (Leu), isoleucina (He), lisina (Lys), arginina (Arg), histidina (His), prolina (Pro), serina (Ser), treonina (Thr), fenilalanina (Phe), tirosina (Tyr), triptófano (Trp), ácido aspártico (Asp), ácido glutámico (Glu), asparagina (Asn), glutamina (Gin), cisteína (Cys) y metionina (Met). La estructura genérica de un alfa-aminoácido se ilustra por la fórmula A: H2NCH(R*)Co OH. R* representa el sustituyente de la cadena lateral del aminoácido, que se refiere como R1 o R3 en la presente divulgación.

Un aminoácido no natural es normalmente cualquier estructura que tiene la fórmula A en donde el grupo R* es cualquier sustituyente distinto del usado en los veinte aminoácidos naturales. Véase, por ejemplo, Biochemistry por L. Stryer, 31 (1 ed. 1988), Freeman and Company, New York, para estructuras de los veinte aminoácidos naturales. Los aminoácidos no naturales también pueden ser compuestos que existen de forma natural distintos de los veinte alfa-aminoácidos anteriores.

Dichos aminoácidos no naturales incluyen los D-isómeros de cualquiera de los 19 aminoácidos ópticamente activos que existen de forma natural y de glicina descritos anteriormente. Los aminoácidos no naturales también incluyen homoserina, homocisteína, ácido 2,3-diaminopropiónico, citrulina, hidroxiprolina, ornitina, norleucina y tiroxina. Los aminoácidos no naturales adicionales son bien conocidos por un experto habitual en la técnica. Un aminoácido no natural puede ser un D- o L-isómero. Un aminoácido no natural también puede ser un beta-aminoácido o un gammaaminoácido que tiene la fórmula B: H2N(CH)n(R*)COOH en donde n es igual a 2 o 3 y R* representa el sustituyente de la cadena lateral de cualquiera de los veinte aminoácidos proteinogénicos o cualquier sustituyente distinto del usado en los veinte aminoácidos naturales. Un aminoácido no natural también puede ser un aminoácido modificado post-traduccionalmente, tal como una serina, treonina o tirosina fosforilada, una lisina acilada, o una lisina o arginina alquilada. Se conocen muchas formas de aminoácidos modificados post-traduccionalmente.

En ciertas realizaciones, el método proporciona compuestos donde Rⁱy R³son independientemente un sustituyente de la cadena lateral de dos aminoácidos diferentes. En ciertas de dichas realizaciones, R¹y R³son independientemente un sustituyente de la cadena lateral de lisina, ácido glutámico, tirosina, isoleucina, asparagina, arginina o treonina. En ciertas realizaciones, R¹y R³son independientemente un sustituyente de la cadena lateral de ácido glutámico, lisina, isoleucina o arginina. En una realización, R¹y R³son independientemente un sustituyente de la cadena lateral de ácido glutámico o lisina. En otra realización, R¹y R³son independientemente un sustituyente de la cadena lateral de isoleucina o arginina.

En general, los sustituyentes de la cadena lateral del aminoácido (R¹y R³) son protegidos por grupos protectores adecuados (R¹¹y R¹³, respectivamente) antes de la etapa de ciclación en el método de preparación de compuestos peptidomiméticos cíclicos de giro p de la presente invención. Cuando los sustituyentes de la cadena lateral del aminoácido, Rⁱy R³, están protegidos, son representados como W¹R¹¹y W³R³³respectivamente, donde W ⁱy W³son independientemente un sustituyente de la cadena lateral del aminoácido de un aminoácido natural o no natural, menos un átomo de hidrógeno en el punto de unión a R¹¹y R¹³, respectivamente. El átomo de hidrógeno se encuentra normalmente en un grupo funcional tal como ácido carboxílico, amina, tiol, amida, hidroxilo y guanidina de los sustituyentes de la cadena lateral del aminoácido.

La protección de la cadena lateral del aminoácido de cualquier otro grupo reactivo sensible de cualquier molécula implicada en la síntesis en cualquier etapa del método descrito en la presente invención puede ser lograda por medio de grupos protectores convencionales conocidos en la técnica, tales como los descritos por T. W. Greene & P. G. M. Wuts (Protective Groups In Organic Synthesis 1991, John Wiley and Sons, New-York); y por Sewald y Jakubke (Peptides: Chemistry and Biology, 2002, Wiley-VCH, Weinheim pág. 142). Por ejemplo, grupos protectores de alfa-amino incluyen, pero no se limitan a, grupos protectores de tipo acilo (por ejemplo, trifluoroacetilo, formilo, acetilo), grupos protectores de uretano alifático (por ejemplo, t-butiloxicarbonilo (Boc), ciclohexiloxicarbonilo), grupos protectores de tipo uretano aromático (por ejemplo, fluorenil-9- metoxi-carbonilo (Fmoc), benciloxicarbonilo (Cbz), derivados de Cbz) y grupos protectores de tipo alquilo (por ejemplo, trifenilmetilo, bencilo).

Grupos protectores de la cadena lateral de los aminoácidos pueden incluir terc-butil éter para serina, treonina, y tirosina; Boc para lisina, triptófano y histidina; tritilo para serina, treonina asparagina, glutamina, cisteína e histidina; terc-butilo o éster alílico para aspartato y glutamato, Pbf para arginina; bencilo para treonina y serina; Cbz para tirosina, treonina, serina, arginina y lisina; alquilsilano para serina y treonina; y todos los otros grupos protectores bien conocidos en la técnica.

En ciertas realizaciones, el método proporciona compuestos donde R¹¹y R¹³se seleccionan independientemente de entre el grupo que consiste en trifluoroacetilo, formilo, acetilo, t- butiloxicarbonilo (BOC), ciclohexiloxicarbonilo, fluorenil-9-metoxi-carbonilo (Fmoc), benciloxicarbonilo (Cbz), derivados de Cbz, trifenilo, metilo, bencilo, aliloxicarbonilo, terc- butilo, alquilsilano y alilo.

En ciertas realizaciones, el método proporciona compuestos donde Rⁱes un sustituyente de la cadena lateral de ácido glutámico, y R¹¹es alilo o terc-butilo. En ciertas de dichas realizaciones, Rⁱes un sustituyente de la cadena lateral de ácido glutámico y R^{i i}es terc-butilo.

En ciertas realizaciones, el método proporciona compuestos donde R³es un sustituyente de la cadena lateral de lisina y Rⁱ³es benciloxicarbonilo, aliloxicarbonilo o terc-butiloxicarbonilo (BOC). En ciertas de dichas realizaciones, R³es un sustituyente de la cadena lateral de lisina y Rⁱ³es terc-butiloxicarbonilo (BOC).

Los grupos protectores pueden ser eliminados en una etapa posterior conveniente usando métodos conocidos en la técnica. En ciertas realizaciones, los grupos protectores de las cadenas laterales del aminoácido Rⁱy R³no son eliminados bajo las mismas condiciones usadas para escindir el compuesto peptidomimético del soporte sólido. En ciertas de dichas realizaciones, los grupos protectores de las cadenas laterales del aminoácido Rⁱy R³no son eliminados bajo las mismas condiciones acídicas usada para escindir el compuesto peptidomimético del soporte sólido.

En ciertas realizaciones, el método proporciona compuestos donde R²y R⁴son independientemente hidrógeno o alquilo Cⁱa C ⁶ .

En ciertas realizaciones, el método proporciona compuestos donde R⁵, R ⁶ y R⁷son hidrógeno.

En ciertas realizaciones, el método proporciona compuestos donde X es O, S o NH.

En ciertas realizaciones, el método proporciona compuestos donde Lⁱ/L²es un grupo conector eficaz para formar dímeros del compuesto cíclico peptidomimético de giro p de la fórmula (I) por reacción con un compuesto homo bifuncional. Lⁱadecuados incluyen nulo, NH, O, S, COO, NH-CH²-COO-, alquileno Cⁱa C ⁶ o arileno Cⁱa C ⁶ . En ciertas realizaciones, Lⁱes NH-CH²-COO-. L²adecuados incluyen H, NH², OH, SH, COOH, NH-CH²-COOH, alquilo Cⁱa C ⁶ o arilo Cⁱa C ⁶ . En ciertas realizaciones, L²es NH-CH²-COOH.

En ciertas realizaciones, el método proporciona compuestos donde n es 1.

En ciertas realizaciones, el método proporciona compuestos donde Y está unido al anillo de benceno de las fórmulas en la posición meta con respecto al punto de unión del grupo amida. En ciertas realizaciones, Y es -NO2.

En ciertas realizaciones, el método proporciona compuestos donde Z está unido al anillo de benceno de las fórmulas en la posición orto con respecto al punto de unión del grupo amida. En ciertas realizaciones, Z es F.

Escisión del soporte sólido

Con referencia a la FIG. 1 (Esquema 1), el compuesto peptidomimético lineal protegido de la fórmula (III) puede ser obtenido con la escisión de un compuesto peptidomimético lineal protegido de la fórmula (II), en donde el compuesto peptidomimético lineal protegido de la fórmula (II) tiene la siguiente estructura:

La escisión del soporte sólido se puede llevar a cabo en presencia de un ácido, una base o un nucleófilo.

Tras el tratamiento con una disolución de escisión, el compuesto peptidomimético lineal protegido de la fórmula (II) se escinde del soporte sólido al que está unido por el grupo conector, L1, para proporcionar el producto intermedio peptidomimético lineal (III).

El soporte sólido puede ser una resina que incluye un grupo funcional tal como cloruro de 2-clorotritilo (2-CTC), ácido 4-hidroximetil-3-metoxifenoxibutírico MBHA (HMPB-MBHA), resina de 9-Fmoc-amino-xanten-3-iloxi-Merrifield (amida de Sieber), alcohol tritílico, cloruro de 4-metiltritilo, cloruro de 4-metoxitritilo, resina de 4-(2',4'-dimetoxifenilhidroximetil)-fenoxi (resina de ácido de Rink), resina de alcohol 2-metoxi-4-alcoxibencílico (resina de Sasrin), resina de 3-(N-Fmoc-N-metoxi)propil-amidometilo (resina de amida Weinreb). En ciertas realizaciones, la resina comprende un grupo funcional de cloruro de 2-clorotritilo (2-CTC) o resina de alcohol 2-metoxi-4-alcoxibencílico (resina de Sasrin).

La resina usada como soporte sólido en la presente invención puede tener una carga de grupo funcional de al menos 0,75 mmol/g, por ejemplo, desde 1,0 mmol/g hasta 2,0 mmol/g, o desde 1,2 mmol/g hasta 1,6 mmol/g.

Normalmente, la resina es un polímero insoluble, tal como un copolímero reticulado de poliestireno/1 % de divinilbenceno. Sin embargo, también se pueden usar polímeros distintos de los basados en poliestireno como soporte sólido, tales como resinas de PEG puras o mixtas (por ejemplo, resinas Tentagel, NovaPEG y NovaSyn). Estos polímeros no basados en poliestireno pueden proporcionar mejores propiedades de hinchazón en una variedad de disolventes diferentes.

El compuesto peptidomimético lineal protegido de la fórmula (II) está unido a la resina por un enlace lábil, tal como un enlace de éster lábil a los ácidos, mientras que las cadenas laterales del aminoácido funcional están protegidas usando grupos protectores más estables que no se escinden o desprotegen en las condiciones requeridas para la escisión del péptido de la resina. Dichas cadenas laterales de aminoácido funcional pueden estar protegdas en sus grupos funcionales con un grupo protector lábil frente a ácidos fuertes. Los grupos protectores usados en las cadenas laterales de aminoácidos funcionales se describen en el presente documento. Así, la escisión del compuesto peptidomimético lineal protegido de la fórmula (II) no provoca una desprotección significativa de ningún grupo funcional protegido R11 y R13 presente en la fórmula (II).

En ciertas realizaciones, la escisión del compuesto peptidomimético lineal protegido de la fórmula (II) se realiza en condiciones ácidas suaves. La disolución de escisión puede contener desde aproximadamente 0,01 % hasta aproximadamente 50 % (v/v), desde 0,1 % hasta 10 % (v/v), o desde 0,5 % hasta 5 % (v/v) de un ácido, tal como, ácido trifluoroacético (TFA), o ácido acético.

La escisión del compuesto peptidomimético lineal protegido de la fórmula (II) se puede llevar a cabo en diferentes sistemas de disolventes. El sistema de disolventes es un disolvente orgánico o una mezcla de disolventes orgánicos. El sistema de disolventes puede comprender un disolvente aprótico polar, tal como diclorometano, acetonitrilo o tetrahidrofurano y mezcla de los mismos.

Se puede añadir un secuestrante a la disolución de escisión para prevenir la alquilación del grupo X por el ion alquilcarbenio formado durante la reacción. Secuestrantes adecuados incluyen, pero no se limitan a, triisopropilsilano (TIS), tioanisol, trialquilsilano (por ejemplo, trimetilsilano, trietilsilano), o mezcla de los mismos. En una realización, el secuestrante es triisopropilsilano (TIS).

En ciertas realizaciones, la disolución ácida suave contiene menos de 10 %, 5 % o 3 % de una mezcla de ácido y secuestrante. La proporción relativa en volumen entre material ácido y secuestrante en la disolución ácida suave usada en la escisión del compuesto peptidomimético lineal protegido de la fórmula (II) del soporte sólido puede ser desde aproximadamente 1:1 hasta aproximadamente 1:5, desde aproximadamente 1:1 hasta aproximadamente 1:3, o aproximadamente 1:2. En una realización, la escisión del compuesto peptidomimético lineal protegido de la fórmula (II) se realiza en una disolución que comprende menos de 10% de una mezcla de TFA y TIS en una proporción en volumen de desde aproximadamente 1:1 hasta aproximadamente 1:5.

En ciertas realizaciones, el grupo funcional terminal X puede estar protegido (es decir, cuando R12 es un grupo protector). En ciertas realizaciones, cuando X es O y R12 es tritilo (Trt), terc-butildimetilsilano (TBDMS), o cualquier grupo protector que se puede eliminar en condiciones que no provocan la desprotección de los otros grupos protectores presentes en la fórmula, tal como condiciones ácidas suaves. En ciertas de dichas realizaciones, cuando X es O y R12 es tritilo (Trt), o terc-butildimetilsilano (TBDMS). En ciertas realizaciones, X es S y R12 es tritilo. En ciertas realizaciones, X es NH y R12 es 4-metiltritilo (Mtt).

En ciertas realizaciones, el grupo funcional terminal X puede ser desprotegido tras el tratamiento con la disolución de escisión usada para escindir el péptido del soporte sólido, proporcionando así el compuesto peptidomimético lineal protegido de la fórmula (III).

Ciclación

En un aspecto de la invención, la reacción de ciclación se realiza en fase de disolución. Debido a que la reacción de ciclación se realiza después de que se haya escindido el producto intermedio peptidomimético lineal (III) del soporte sólido, la carga de la resina no es crítica en el control de la formación del producto secundario dimérico. Por este motivo, se pueden elegir como soporte sólido resinas con un grado de sustitución que tienen una carga de grupo funcional de hasta 2 mmol/g. El uso de resina de carga más alta mejora el rendimiento sintético (es decir, aumenta la proporción de compuesto producido por gramo de resina), reduciendo así los costes de producción. La reacción de ciclación puede llevarse a cabo mediante una reacción de sustitución nucleófila aromática con el nucleófilo X.

La reacción de ciclación se puede realizar en disolventes próticos polares, tales como, acetonitrilo, tetrahidrofurano, DMF, mezclas de DCM/DMF, o mezclas de los mismos. La mezcla de DCM/DMF se puede usar en la proporción de desde aproximadamente 5:95 hasta aproximadamente 95:5, desde aproximadamente 70:30 hasta aproximadamente 95:5, desde aproximadamente 80:20 hasta aproximadamente 90:10. Se deben evitar cantidades significativas de disolventes como agua y metanol, ya que pueden actuar como nucleófilos e interferir con la ciclación. En una realización, la reacción de ciclación se realiza en ausencia de agua. En una realización, la reacción de ciclación se realiza en ausencia de metanol. En una realización, la reacción de ciclación se realiza en ausencia de agua y metanol.

En ciertas realizaciones, la reacción de ciclación es una reacción de ciclación catalizada por base. La función de la base en la reacción de ciclación es aumentar el carácter nucleófilo del grupo funcional X. Ejemplos de bases que pueden ser usados son K²CO³, CsCO³, CsF, fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF), tetrametilguanidina (TMG).

Un aspecto importante de la etapa de ciclación es controlar la concentración del producto intermedio peptidomimético lineal (III) durante la reacción para evitar la formación del producto secundario dimérico. Cuando la reacción de ciclación se realiza con mayores concentraciones del producto intermedio peptidomimético lineal (III), por ejemplo, superiores a 0,05 M, aumenta la tasa de reacción intermolecular, y así acelera la tasa de formación de producto secundario dimérico. Por consiguiente, para evitar la formación de dímeros, la reacción de ciclación puede ser llevada a cabo a concentraciones inferiores a 0,05 M, particularmente, a concentraciones inferiores a 0,03 M, o a concentraciones inferiores a 0,02 M. Dichas bajas concentraciones (es decir, altas diluciones) pueden ser logradas usando grandes volúmenes de disolventes. Alternativamente, la reacción de ciclación puede ser llevada a cabo mediante la adición lenta del producto intermedio peptidomimético lineal (III) a los medios de reacción, que permite evitar el uso de grandes volúmenes de disolvente.

La reacción de ciclación se puede llevar a cabo a temperatura ambiente. El tiempo de reacción a temperatura ambiente puede variar desde 24 horas hasta 48 horas según el tamaño del anillo, nucleófilo implicado en la reacción, base y disolvente. Calentar la reacción hasta temperaturas más altas, por ejemplo, 40 °C a 60 °C, puede reducir el tiempo de reacción hasta 1-5 horas. Particularmente, cuando la disolución de la reacción de ciclación se lleva a cabo a aproximadamente desde 45 °C hasta 55 °C, el tiempo de reacción se pueden reducir hasta 2-4 horas. Normalmente, la reacción de ciclación se lleva a cabo a una temperatura desde 2o °C hasta 65 °C, desde 25 °C hasta 60 °C, o desde 45 °C hasta 55 °C.

La reacción puede ser monitorizada por HPLC analítica, CL-EM o UV, ya que el producto intermedio peptidomimético lineal (III) y el compuesto cíclico peptidomimético de giro p de la fórmula (I) tienen tiempo de retención, masa y perfil UV diferente. Una vez se completa la ciclación, la disolución puede ser filtrada a través de, por ejemplo, una almohadilla de Celite, para eliminar la base. El filtro puede ser lavado con un disolvente, por ejemplo, THF, y a continuación la fase orgánica puede ser recogida y evaporada a vacío.

Desprotección

Para la desprotección final de los grupos protectores de la cadena lateral de aminoácidos, el compuesto cíclico peptidomimético de giro p protegido de la fórmula (IV) es tratadp con reactivos apropiados según el tipo de grupos protectores presentes en la fórmula. En una realización se usa una disolución ácida fuerte. Normalmente, la disolución ácida fuerte incluye más de 50 % de TFA. El TFA puede estar disuelto en agua o en disolventes orgánicos, tales como DCM, THF, etc. En ciertas realizaciones, la disolución ácida fuerte tiene una composición de TFA:H2O en una proporción en volumen de desde 90:10 hasta 99:1, desde 90:10 hasta 95:5, o a aproximadamente 95:5.

En ciertas realizaciones, la disolución ácida fuerte puede incluir, además, un secuestrante, tal como triisopropilsilano (TIS), tioanisol, trialquilsilano (por ejemplo, trimetilsilano, trietilsilano), o mezcla de los mismos. En una realización, el secuestrante es triisopropilsilano (TIS). Después de la desprotección, el producto en bruto puede ser precipitado usando éter o metil terc-butil éter a una temperatura inferior a 0 °C, por ejemplo, a aproximadamente -20 °C, y luego ser filtrado y purificado mediante HPLC de fase inversa (RP-HPLC).

En un aspecto específico, la presente invención proporciona un método de preparación de un compuesto cíclico peptidomimético de giro p D3

comprendiendo el método las etapas de:

(a) proporcionar un compuesto peptidomimético lineal protegido de fórmula (IIIa)

(b) ciclar en una fase de disolución el compuesto peptidomimético lineal protegido de fórmula (Illa) para formar un compuesto cíclico peptidomimético de giro p protegido de fórmula (IVa) mediante una sustitución nucleófila aromática intramolecular

(c) desproteger un grupo protector de la cadena lateral del aminoácido en el compuesto cíclico peptidomimético de giro p protegido de fórmula (IVa).

En ciertas realizaciones, se proporciona un compuesto peptidomimético lineal protegido unido a un soporte sólido de fórmula (Ila):

La invención también se refiere a productos intermedios que son usados para preparar un compuesto cíclico peptidomimético de giro p de fórmula (I). En el presente documento se divulgan productos intermedios útiles para preparar el compuesto cíclico peptidomimético de giro p de fórmula (I), y en realizaciones específicas, productos intermedios útiles para preparar el compuesto cíclico peptidomimético de giro p D3.

Compuesto peptidomimético lineal protegido de fórmula (II)

en donde R²y R⁴son independientemente hidrógeno o alquilo C¹a C^e, o W¹y R²junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un grupo ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo, o W³y R⁴junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un grupo ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo;

R⁵, R ⁶ y R⁷son independientemente hidrógeno o alquilo C¹a C^e;

Y se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, -NO², -COOR ⁸ , -OC(R⁸)³, - SO³R⁸y -SO²NR⁸;

cada R ⁸ es independientemente alquilo o arilo;

X se selecciona del grupo que consiste en O, N, S, P, Se, C, alquileno C¹a C^e, SO, SO²y NH;

Z se selecciona del grupo que consiste en F, Cl, Br y I;

R¹¹, R^{i 2}y R¹³son independientemente hidrógeno o un grupo protector;

W¹y W³son independientemente un sustituyente de la cadena lateral del aminoácido de un aminoácido natural o no natural, menos un átomo de hidrógeno en el punto de unión a R¹¹y R¹³, respectivamente;

n es 0, 1,2, 3, 4 o 5; y

Lⁱse selecciona del grupo que consiste en nulo, NH, O, S, COO, NH-CH²-COO, alquileno Cⁱa C ⁶ y arileno Cⁱa C ⁶ ; en donde el soporte sólido es una resina que comprende un grupo funcional seleccionado de un grupo que consiste en cloruro de 2-clorotritilo (2-CTC), ácido 4-hidroximetil-3-metoxifenoxibutírico MBHA (HMPB-MBhA), 9-Fmocamino-xanten-3-iIoxi-resina de Merrifield (amida de Sieber), alcohol tritílico, cloruro de 4-metiltritilo, cloruro de 4-metoxitritilo, resina de 4-(2',4'-dimetoxifenil-hidroximetil)-fenoxi (resina de ácido de Rink), resina de alcohol 2-metoxi-4-alcoxibencílico (resina de Sasrin), resina de 3-(N-Fmoc-N-metoxi)propil-amidometilo (resina de amida de Weinreb). En un aspecto específico de la invención, el compuesto peptidomimético lineal protegido de fórmula (II) tiene una estructura de fórmula (IIa):

Compuesto peptidomimético lineal protegido de fórmula (III)

R⁵, R ⁶ y R⁷son independientemente hidrógeno o alquilo C¹a C^e;

cada R ⁸ es independientemente alquilo o arilo;

Z se selecciona del grupo que consiste en F, Cl, Br y I;

R¹¹y R¹³son independientemente hidrógeno o un grupo protector;

W ⁱy W³son independientemente un sustituyente de la cadena lateral del aminoácido de un aminoácido natural o no natural, menos un átomo de hidrógeno en el punto de unión a R¹¹y R¹³, respectivamente;

n es 0, 1, 2, 3, 4 o 5; y

L²se selecciona del grupo que consiste en H, NH², OH, SH, COOH, NH-CH²-COOH, alquilo Cⁱa C ⁶ y arilo Cⁱa C ⁶ . En un aspecto específico de la invención, el compuesto peptidomimético lineal protegido de fórmula (III) tiene una estructura de fórmula (Illa):

Compuesto cíclico peptidomimético de giro B protegido de fórmula (IV)

en donde R²y R⁴son independientemente hidrógeno o alquilo Cⁱa C ⁶ , o W ⁱy R²junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un grupo ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo, o W³y R⁴junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un grupo ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo;

R⁵, R ⁶ y R⁷son independientemente hidrógeno o alquilo Cⁱa C ⁶ ;

Y se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, -NO², -COOR ⁸ , -OC(R⁸)³, -SO³R⁸y -SO²NR⁸;

cada R ⁸ es independientemente alquilo o arilo;

X se selecciona del grupo que consiste en O, N, S, P, Se, C, alquileno Cⁱa C ⁶ , SO, SO²y NH;

R^{i i}y Rⁱ³son independientemente hidrógeno o un grupo protector;

W ⁱy W³son independientemente un sustituyente de la cadena lateral del aminoácido de un aminoácido natural o no natural, menos un átomo de hidrógeno en el punto de unión a R^{i i}y R^{i 3}, respectivamente;

i4

n es 0, 1, 2, 3, 4 o 5; y

L²se selecciona del grupo que consiste en H, NH², OH, SH, COOH, NH-CH²-COOH, alquilo C¹a C ⁶ y arilo C¹a C ⁶ . En un aspecto específico de la invención, el compuesto cíclico peptidomimético de giro p protegido de fórmula (IV) tiene una estructura de fórmula (IVa):

En ciertas realizaciones, la presente invención proporciona un método de preparación del compuesto cíclico peptidomimético de giro p de estructura D3. La FIG. 2 muestra el Esquema 2 de reacción, a modo de ejemplo, que representa una vía para preparar el compuesto cíclico peptidomimético de giro p de la estructura D3 usando una resina de cloruro de 2-clorotritilo (2-CTC).

Ejemplos

Los siguientes ejemplos son meramente ilustrativos de la presente invención y no se deben considerar de ningún modo limitantes del alcance de la invención, ya que estos ejemplos y otros equivalentes de los mismos serán evidentes para los expertos en la técnica en vista de la presente divulgación y las reivindicaciones adjuntas. Todos los porcentajes usados en la solicitud son porcentaje peso en peso (p/p), a menos que se indique lo contrario.

Ejemplo 1

La FIG. 2 (Esquema 2) ilustra la síntesis del Compuesto D3, que es una realización del compuesto cíclico peptidomimético de giro p de fórmula (I). La síntesis se llevó a cabo usando la resina 2-CJ-Trt-Cl (2-CTC) como soporte sólido.

La síntesis del Compuesto 2b se puede llevar a cabo por procedimientos de SPPS (síntesis de péptidos en fase sólida) de Fmoc en etapas, habituales, conocidos en la técnica. Merrifield (J. Am. Chem. Soc. 1964, 85, 2149); Vale et al., (Science, 1981, 213,1394-1397), en las patentes de EE. UU. N° 4.305.872 y 4.316.891, Bodanszky et al. (Principles of Peptide Synthesis, 2a ed., Springer Verlag Berlin Heidelberg 1989) y Pieta y Marshall, (Chem. Comm.

1970, 650); (Houben-Weyl, Methods of Organic Chemistry. Vol E22a. Synthesis of Peptides and Peptidomimetics, Murray Goodman, director, Thieme. Stuttgart. New York 2002).

La carga de la resina de 2-CTC 2 comúnmente tiene lugar por sustitución nucleófila del derivado de difenil-2'-clorofenilclorometano.

Se hinchó 1 g de la resina de 2-CTC (1,2 mmol/g) en 30 ml de diclorometano (DCM) seco durante 30 min. Se filtró el disolvente y se añadió una disolución de Fmoc-Gly-OH (2 eq) y N,N-diisopropiletilamina (DIPEA) (4 eq) en DCM (10 ml) seco a la resina. También se añadió una pequeña cantidad de N,N'-dimetilformamida (DMF) para facilitar la disolución del ácido. La disolución se agitó durante 30 min a temperatura ambiente bajo una atmósfera de nitrógeno. Al final del tiempo de reacción, se filtró la resina y se lavó con una disolución de DCM/DIPEA (3x 5 min), DCM (3x 5 min) y DMF (3x 5 min). Se determinó la carga del aminoácido en una pequeña cantidad de resina secada y pesada con exactitud mediante desprotección del grupo Fmoc del extremo N con 1,8-diazabicicloundec-7-eno (DBU), y midiendo la concentración de disolución del dibenzofluveno liberado por espectroscopía UV como se describe por Gude et al. (Lett. Pept. Sci. 2003, 9, 203).

Después de lavar la resina, se retiró el grupo protector de Fmoc mediante tratamiento con 10 ml de 20 % (v/v) de piperidina en DMF durante 30 min. Se filtró la resina y se lavó con DMF (3x 5 min) y DCM (3x 5 min) para retirar el exceso de base. Se monitorizó la reacción de desprotección en una pequeña cantidad de resina mediante una prueba de ninhidrina positiva (E. Kaiser et al, Analytical Biochemistry 1970, 34, 595)

Se realizó el acoplamiento de los aminoácidos posteriores, Fmoc-hSer(Trt)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH y Fmoc-Glu(OtBu)-OH por etapas, alternando la reacción de acoplamiento con un ciclo de desprotección de Fmoc. En particular, para el acoplamiento se añadió una disolución de aminoácido protegido con Fmoc (2 eq), HOBt (2 eq), DIC (2 eq) y DIPEA (4 eq) en DMF a la resina y se mezcló durante 1 h a temperatura ambiente. Después de cada ciclo de acoplamiento, la resina se lavó con DMF (3x 5 min) y DCM (3x 5 min) para retirar el exceso de reactivos. Se monitorizó el progreso de cada acoplamiento mediante una prueba de ninhidrina negativa. Se realizó el acoplamiento de ácido 2-fluoro-5-nitrobenzoico (2 eq) usando 2 equivalentes de HBTU y DIEA (4 eq) en DMF. La resina se lavó finalmente con DMF (3x 5 min) y DCM (3x 5 min), se filtró y se secó con una corriente de nitrógeno dando lugar al compuesto 2c.

La escisión del compuesto 2d de la resina se realizó tratando el compuesto 2c con una disolución de DCM:TFA:TIS en la proporción de 97:1:2 (v/v). Se dejó que la disolución siguiera en contacto con la resina durante 2 minutos antes del filtrado. Esta etapa se repitió cinco veces. Se recogió el filtrado y se retiró el disolvente a presión reducida. Se decantó el TIS residual y el residuo de producto 2d se secó bajo nitrógeno.

Se disolvió el residuo de producto 2d en una disolución 9:1 de DCM:DMF a una concentración de 20 mg/ml, se añadió posteriormente K2CO3 (2 eq) y la mezcla se agitó a 50 °C durante 3 horas. La reacción se monitorizó por RP-HPLC analítica para garantizar la formación completa del producto cíclico. Se usó el siguiente método analítico de HPLC de fase inversa para el control en el proceso:

Columna YMC C18, 5 |jm, 0,46 x 25 cm, o equivalente

Disolvente A 0,1 % de TFA en agua

Disolvente B 0,1 % de TFA en acetonitrilo

Caudal 1,0 ml/min

Detección 210 nm

Temperatura de la columna Ambiente

Gradiente 5 - 35 % de B, duración 30 minutos

A continuación se filtró la mezcla de reacción sobre una almohadilla de Celite para eliminar la base, y se lavó el filtro con THF. Se recogió el filtrado y se evaporó a presión a 60 °C para eliminar la DMF dando lugar al producto 2e. Se disolvió el producto 2e en una disolución de 95 % de TFA en H2O durante 1 hora. Se logró la desprotección completa de las cadenas laterales de los aminoácidos. Se concentró el disolvente a presión reducida y el producto fue precipitado con metil terc-butil éter frío. Se purificó el producto en bruto D3 por RP-HPLC en una columna C18 usando un gradiente de acetonitrilo en agua, se recogieron las fracciones que contenían el producto deseado y se liofilizaron para proporcionar el compuesto D3 como sal de TFA con un rendimiento global del 40 %.

Se intercambió la sal de TFA purificada del compuesto D3 por la sal de HCl del compuesto D3 por cromatografía de intercambio iónico en resina Dowex. Se pasó una disolución en acetonitrilo acuoso de los sublotes reunidos liofilizados obtenidos durante la purificación cromatográfica a través de una columna llenada con un exceso de Dowex 1 X 2-100 (forma de cloruro), que se lavó posteriormente con acetonitrilo acuoso adicional para recuperar el producto.

Se recogió el péptido eluido, se congeló sobre la pared y se liofilizó proporcionando un sólido amorfo blanquecino con 95 % de rendimiento.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un método de preparación de un compuesto cíclico peptidomimético de giro p de fórmula (I)

comprendiendo el método etapas de:

(b) ciclar en una fase de disolución el compuesto peptidomimético lineal protegido de fórmula (III) para formar un compuesto cíclico peptidomimético de giro p protegido de fórmula (IV) mediante una sustitución nucleófila aromática intramolecular

(c) desproteger un grupo protector de la cadena lateral del aminoácido en el compuesto cíclico peptidomimético de giro p protegido de fórmula (IV)

en donde:

Ri y R3 son independientemente hidrógeno, alquilo C1 a Ce, arilo, o un sustituyente de cadena lateral de aminoácido de un aminoácido natural o no natural;

R2 y R4 son independientemente hidrógeno o alquilo Ci a Ce, o Ri y R2 junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un grupo ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo, o R3 y R4 junto con el átomo de carbono al que están unidos forman un grupo ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo; R5, Re y R7 son independientemente hidrógeno o alquilo Ci a Ce;

Y se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, -NO2, -COOR8, -OC(R8)3, -SO3R8 o -SO2R8; cada R8 es alquilo o arilo;

X se selecciona del grupo que consiste en O, N, S, P, Se, C, alquileno Ci a Ce, SO, SO2 y NH;

Z se selecciona del grupo que consiste en F, Cl, Br o I;

Rii y Ri3 son independientemente hidrógeno o un grupo protector;

Wi y W3 son independientemente un sustituyente de cadena lateral de aminoácido de un aminoácido natural o no natural, menos un átomo de hidrógeno en el punto de unión a Rii y Ri3 respectivamente; n es 0, i, 2, 3, 4 o 5; y

L2 es H, NH2, OH, SH, COOH, NH-CH2-COOH, alquilo Ci a Ce o arilo Ci a Ce.

2. El método de la reivindicación i, en donde el compuesto cíclico peptidomimético de giro p de fórmula (I) tiene un anillo macrocíclico de desde i4 hasta ie átomos de anillo.

3. El método de la reivindicación i, en donde Ri y R3 son independientemente un sustituyente de cadena lateral de dos aminoácidos diferentes, en particular un sustituyente de cadena lateral de lisina, ácido glutámico, tirosina, isoleucina, asparagina, arginina o treonina, preferentemente ácido glutámico o lisina, y preferentemente ácido glutámico, lisina, isoleucina o arginina.

4. El método de la reivindicación i, en donde Rii y Ri3 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en trifluoroacetilo, formilo, acetilo, t-butiloxicarbonilo (BOC), ciclohexiloxicarbonilo, fluorenil-9-metoxi-carbonilo (Fmoc), benciloxicarbonilo (Cbz), derivados de Cbz, trifenilo, metilo, bencilo, aliloxicarbonilo, terc-butilo, alquilsilano y alilo.

5. El método de la reivindicación i, en donde Ri es un sustituyente de cadena lateral de ácido glutámico y Rii es

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alilo o terc-butilo, y en particular R11 es terc-butilo.

6. El método de la reivindicación 1, en donde R3 es una cadena lateral sustituido de lisina y R13 es benciloxicarbonilo, aliloxicarbonilo o terc-butiloxicarbonilo (BOC) y en particular R13 es terc-butiloxicarbonilo (BOC).

7. El método de la reivindicación 1, en donde Y está unido al anillo de benceno de las fórmulas en la posición meta con respecto al punto de fijación del grupo amida.

8. El método de la reivindicación 1, en donde Z está unido al anillo de benceno de las fórmulas en la posición orto con respecto al punto de fijación del grupo amida.

9. El método de la reivindicación 1, en donde el compuesto peptidomimético lineal protegido de la fórmula (III) se obtiene al escindir un compuesto peptidomimético lineal protegido de la fórmula (II) de un soporte sólido en presencia de un ácido, una base o un nucleófilo, en donde el compuesto peptidomimético lineal protegido de fórmula (II) tiene la siguiente estructura:

en donde L1 puede ser nulo, NH, O, S, COO-, NH-CH2-COO-, alquileno C1 a C6 o arileno C1 a C6; y

R12 es hidrógeno o un grupo protector, y preferentemente un grupo protector.

10. El método de la reivindicación 9, en donde X es O y R12 es tritilo o terc-butildimetilsilano (TBDMS) o X es S y R12 es tritilo o X es NH y R12 es 4-metiltritilo (Mtt).

11. El método de la reivindicación 9, en donde la escisión del compuesto peptidomimético lineal protegido de fórmula (II) no provoca la desprotección de ningún grupo funcional protegido R11 y R13 presente en la fórmula (II).

12. El método de la reivindicación 9, en donde la escisión del compuesto peptidomimético lineal protegido de fórmula (II) se realiza en condiciones ácidas suaves, tal como desde 0,01 % hasta 50 % (v/v) de ácido trifluoroacético (TFA).

13. El método de la reivindicación 9, en donde la escisión del compuesto peptidomimético lineal protegido de fórmula (II) se realiza en un disolvente aprótico polar, y en particular el disolvente aprótico comprende diclorometano, acetonitrilo o tetrahidrofurano y mezcla de los mismos.

14. El método de la reivindicación 9, en donde la escisión del compuesto peptidomimético lineal protegido de fórmula (II) comprende, además, un secuestrante, en particular el secuestrante comprende triisopropilsilano (TIS), tioanisol, trialquilsilano, o mezclas de los mismos, y preferentemente triisopropilsilano (TIS) y preferentemente la escisión del compuesto peptidomimético lineal protegido de fórmula (II) se realiza en una disolución que comprende menos de 10 % de una mezcla de TFA y TIS en una proporción en volumen de desde 1:1 hasta 1:5.

15. El método de la reivindicación 9, en donde el soporte sólido es una resina que comprende un grupo funcional seleccionado del grupo que consiste en cloruro de 2-clorotritilo (2-CTC), ácido 4-hidroximetil-3-metoxifenoxibutírico MBHA (HMPB-MBHA), resina de 9-Fmoc-amino-xanten-3-iloxi-Merrifield (amida de Sieber), alcohol tritílico, cloruro de 4-metiltritilo, cloruro de 4-metoxitritilo, resina de 4-(2',4'-dimetoxifenil-hidroximetil)-fenoxi (resina de ácido de Rink), resina de alcohol 2-metoxi-4-alcoxibencílico (resina de Sasrin), resina de 3-(N-Fmoc-N-metoxi)propil-amidometilo (resina de amida Weinreb),

opcionalmente la resina es un polímero insoluble, y

preferentemente la resina es un copolímero reticulado de poliestireno-divinilbenceno.

16. El método de la reivindicación 15, en donde la resina tiene una carga de grupo funcional de al menos 0,75 mmol/g, y preferentemente una carga de grupo funcional de desde 1,0 hasta 2,0 mmol/g.

17. El método de la reivindicación 1, en donde dicho método es para preparar un compuesto cíclico peptidomimético de giro p de fórmula D3

comprendiendo el método las etapas de:

(a) proporcionar un compuesto peptidomimético lineal protegido de fórmula (Illa)

(b) ciclar en fase de disolución el compuesto peptidomimético lineal protegido de fórmula (Illa) para formar un compuesto cíclico peptidomimético de giro p protegido de fórmula (IVa) mediante una sustitución nucleófila aromática intramolecular

(c) desproteger un grupo protector de la cadena lateral del aminoácido en el compuesto cíclico peptidomimético de giro p protegido de fórmula D3.

18. El método de la reivindicación 17, en donde el compuesto peptidomimético lineal protegido de fórmula (IlIa) se obtiene al escindir un compuesto peptidomimético lineal protegido de fórmula (IIa) de un soporte sólido en presencia de un ácido, una base o un nucleófilo, en donde el compuesto peptidomimético lineal protegido de fórmula (II) tiene la siguiente estructura

19. El método de la reivindicación 18, en donde el soporte sólido es una resina que comprende un grupo funcional seleccionado del grupo que consiste en cloruro de 2-clorotritilo (2-CTC), ácido 4-hidroximetil-3-metoxifenoxibutírico MBHA (HMPB-MBHA), resina de 9-Fmoc-amino-xanten-3-iloxi-Merrifield (amida de Sieber), alcohol tritílico, cloruro de 4-metiltritilo, cloruro de 4-metoxitritilo, resina de 4-(2',4'-dimetoxifenil- hidroximetil)-fenoxi (resina de ácido de Rink), resina de alcohol 2-metoxi-4-alcoxibencílico (resina de Sasrin), resina de 3-(N-Fmoc-N-metoxi)propilamidometilo (resina de amida Weinreb).

20. El método de la reivindicación 1, en donde la ciclación se realiza en presencia de una base, y en particular la base comprende K2CO3, CsCO3, CsF, fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF), tetrametilguanidina (TMG), o mezclas de los mismos.

21. El método de la reivindicación 1, en donde la ciclación se realiza en un disolvente prótico polar, en particular el disolvente prótico polar comprende acetonitrilo, tetrahidrofurano, DMF, mezcla de DCM/DMF, o mezclas de los mismos, y preferentemente la mezcla de DCM/DMF se usa en la proporción de desde 5:95 hasta 95:5.

22. El método de la reivindicación 1, en donde la ciclación se realiza en ausencia de agua y metanol.

23. El método de la reivindicación 1, en donde la ciclación se realiza a una concentración inferior a 0,05 M del compuesto peptidomimético lineal protegido de fórmula (III).

24. El método de la reivindicación 1, en donde la ciclación se realiza a una temperatura desde 25 °C hasta 60 °C.

25. El método de la reivindicación 1, en donde la desprotección se realiza bajo unas condicines ácidas fuertes, y en particular las condiciones ácidas fuertes comprenden más de 50 % de TFA.

26. El método de la reivindicación 1, en donde la desprotección comprende un secuestrante.