ES2742299T3 - Nuevos péptidos entrecruzados que contienen una estructura entrecruzada no peptídica, método para sintetizar péptidos entrecruzados y nuevo compuesto orgánico utilizado en el método - Google Patents

Nuevos péptidos entrecruzados que contienen una estructura entrecruzada no peptídica, método para sintetizar péptidos entrecruzados y nuevo compuesto orgánico utilizado en el método Download PDF

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Abstract

Un peptido entrecruzado representado por la siguiente formula quimica:**Fórmula** (en la que, X se selecciona del grupo que consiste en las siguientes formulas quimicas:**Fórmula** en las que, n representa un numero entero de 1 a 12, m representa un numero entero de 1 a 24 e I representa un numero entero de 1 a 24); Y es cualquiera seleccionado del grupo que consiste en el siguiente compuesto Y1 y el compuesto Y4:**Fórmula** (en el que, o representa un numero entero de 1 a 12, p representa un numero entero de 1 a 27, 5 q representa un numero entero de 1 a 24), Z representa hidrogeno, un grupo alquilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 30 atomos de carbono, un grupo acilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 36 atomos de carbono, polietilenglicol, un grupo t-Boc, un grupo Fmoc, un grupo Cbz o un grupo Nosilo, [E] representa un atomo de hidrogeno, un grupo acilo opcionalmente sustituido que tiene 1 a 6 atomos de carbono o un peptido que tiene de 1 a 20 residuos compuestos de aminoacidos y/o aminoacidos no naturales como elementos constituyentes, [G] representa OH, un grupo amino o un peptido que tiene de 1 a 20 residuos compuestos de aminoacidos y/o aminoacidos no naturales como elementos constituyentes, [F] representa un peptido que tiene de 1 a 20 residuos compuestos de aminoacidos y/o aminoacidos no naturales como elementos constituyentes (aqui, la suma de los numeros de aminoacidos de [E], [F] y [G] es al menos 3), y (A) y (B) representan cada uno independientemente una estructura representada por cualquiera de la siguiente formula:**Fórmula** (en la que, R1, R3 y R4 representan cada uno independientemente un atomo de hidrogeno o un grupo metilo, y R2 representa un atomo de hidrogeno o una cadena lateral de un aminoacido o aminoacido no natural).

Description

DESCRIPCIÓN
Nuevos péptidos entrecruzados que contienen una estructura entrecruzada no peptídica, método para sintetizar péptidos entrecruzados y nuevo compuesto orgánico utilizado en el método
Campo técnico de la invención
La presente invención se refiere a un péptido entrecruzado que contiene una nueva estructura entrecruzada no peptídica. Por lo tanto, la presente invención se refiere a un método para sintetizar dicho péptido entrecruzado. Además, la presente invención se refiere a un nuevo compuesto orgánico utilizado para la síntesis de dicho péptido entrecruzado.
Estado de la técnica
Casi todos los procesos fisiológicos se basan en el reconocimiento molecular de péptidos o proteínas y otros componentes biológicamente activos y similares. Hasta la fecha, se han encontrado muchos péptidos que tienen funciones biológicas importantes tales como hormonas, enzimas, inhibidores, sustratos enzimáticos, neurotransmisores, inmunomoduladores y similares. Como resultado, se realizan muchos estudios para desarrollar medios terapéuticos con un péptido, con la comprensión de los efectos fisiológicos de las sustancias activas compuestas de estos péptidos.
En el desarrollo de un péptido como medicamento, existen nuevos métodos establecidos para tratamientos y terapias de enfermedades correlacionadas con péptidos, sin embargo, al usar un péptido como medicamento, se generan los problemas que se describen a continuación. Es decir, a) en condiciones fisiológicas, la mayoría de los péptidos se descomponen por peptidasas específicas e inespecíficas, para producir una baja estabilidad metabólica, b) debido a su peso molecular relativamente grande, la absorción después de la ingestión es pobre, c) la excreción a través del hígado y el riñón es rápida y d) dado que un péptido es estructuralmente flexible y los receptores para un péptido pueden distribuirse ampliamente en un organismo, se producen efectos secundarios no deseados en tejidos y órganos no seleccionados.
Excepto por algunos ejemplos, los péptidos naturales relativamente pequeños (péptido compuesto de 30 a menos de 50 aminoácidos) están presentes en condiciones desordenadas debido a una gran cantidad de conformaciones en equilibrio dinámico en una solución acuosa diluida, como resultado, los péptidos carecen de selectividad por un receptor y pueden sufrir metabolismo, por lo tanto, la determinación de una conformación biológicamente activa es difícil. Cuando un péptido en sí tiene una conformación biológicamente activa, es decir, cuando tiene la misma conformación que aquella bajo la condición unida a un receptor, la reducción de la entropía en la unión a un receptor es menor en comparación con un péptido flexible, por lo tanto, se espera un aumento de la afinidad por un receptor. Por lo tanto, existe la necesidad de un péptido biológicamente activo que tenga una conformación uniformemente controlada, y su desarrollo es importante.
Recientemente se han realizado muchos esfuerzos para desarrollar una imitación de péptido o un análogo de péptido (en adelante denominado ambos "imitación de péptido") que muestra una propiedad farmacológica más preferible que la de un péptido natural como la forma original del mismo. "Imitación de péptido" usado en la presente memoria descriptiva es un compuesto que es capaz de imitar (sustancia agonista) o bloquear (sustancia antagonista), a nivel del receptor, el efecto biológico de un péptido, como un ligando de un receptor. Para obtener una imitación de péptido como la sustancia agonista más posible, se deben tener en cuenta factores tales como a) estabilidad metabólica, b) excelente biodisponibilidad, c) alta afinidad y selectividad por el receptor, d) efectos secundarios mínimos y similares. Desde el punto de vista farmacológico y médico, a menudo es deseable no solo imitar el efecto de un péptido a nivel del receptor (acción agonista) sino también, si es necesario, bloquear un receptor (acción antagonista). Los mismos elementos que los elementos farmacológicos que deben considerarse para diseñar una imitación de péptido como la sustancia agonista descrita anteriormente se pueden aplicar también al diseño de una sustancia antagonista de péptido.
Un ejemplo de imitadores de péptidos es el desarrollo de un péptido que tiene una conformación controlada. Esto imita, lo más correctamente posible, una conformación unida a un receptor de un ligando peptídico endógeno. Cuando se investigan análogos de estos tipos, aumenta la resistencia a una proteasa y, como resultado, aumenta la estabilidad metabólica y aumenta la selectividad, disminuyendo así los efectos secundarios.
El control global en la conformación de un péptido es posible restringiendo la flexibilidad de una cadena peptídica por ciclación. La ciclación de un péptido biológicamente activo no solo mejora su estabilidad y selectividad metabólica por un receptor, sino que también proporciona una conformación uniforme, lo que permite el análisis de la conformación de un péptido. La forma de ciclación es la misma que la observada en los péptidos cíclicos naturales. Ejemplos de los mismos incluyen la ciclación de cadena lateral - la cadena lateral o la ciclación del grupo del extremo de la cadena lateral. Para la ciclación, las cadenas laterales de aminoácidos no correlacionadas con el reconocimiento del receptor pueden estar unidas entre sí o pueden estar unidas a la cadena principal del péptido. Como otra realización, hay una ciclación de la cabeza a la cola, y en este caso, se obtiene un péptido completamente cíclico.
Para estas operaciones de ciclación, es imprescindible una tecnología de entrecruzamiento. Los ejemplos típicos de ciclación incluyen entrecruzamiento a través de un enlace disulfuro (enlace SS), un enlace amida, un enlace tioéter y un enlace olefina. Ejemplos más específicos de los mismos incluyen la ciclación conectando dos residuos de penicilamina a través de un entrecruzamiento de disulfuro (Mosberg et al., PNAS USA, 80: 5871, 1983), la ciclación mediante la formación de un enlace amida entre lisina y ácido aspártico (Flora et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 15 (2005) 1065-1068), un procedimiento en el que un derivado de aminoácido que contiene una porción entrecruzada que tiene un enlace tioéter introducido previamente se introduce en un enlace peptídico y la ciclación del mismo se realiza en la última reacción de condensación (Melin et al., patente de los Estados Unidos Núm. 6.143.722), y ciclación por entrecruzamiento (S)-a-2'-pentenilalaninas introducidas en la cadena principal usando una reacción de metátesis de olefina (Schafmeister et al., J Am. Chem. Soc., 122, 5891-5892, 2000).
Un entrecruzamiento a través de un enlace disulfuro, sin embargo, será escindido por una reductasa generalmente presente en un organismo. Además, un entrecruzamiento a través de un enlace amida se escindirá por una enzima que corta una estructura amida presente en un organismo. Un enlace de tioéter y un enlace de olefina necesitan la sustitución de cadenas laterales de un aminoácido en un proceso de alargamiento de péptido, para lograr la ciclación del mismo.
También se conoce una estructura entrecruzada que se origina a partir del nitrógeno que constituye una amida en el esqueleto de la cadena principal del péptido, como un método que no necesita modificación de una cadena lateral de un péptido (Gilon et al., Bioplymers 31: 745, 1991) . Sin embargo, este péptido será escindido por una enzima que corta una estructura de amida, debido a la inclusión de un enlace amida en este péptido.
Además, conocido como péptido entrecruzado que tiene una estructura molecular capaz de unirse a otro sustituyente es un péptido entrecruzado que utiliza 2,4,6-tricloro[1,3,5]-triazina (Scharn et al. , J. Org. Chem. 2001, 66, 507-513). Sin embargo, en este método, la reacción al formar una porción entrecruzada es una reacción de sustitución nucleofílica aromática, lo que limita los péptidos aplicables.
Como péptido análogo, se conoce un péptido entrecruzado en el que se unen una cadena lateral y un terminal carboxilo (Goodman et al., J. Org. Chem. 2002, 67, 8820-8826). Este péptido, sin embargo, será escindido por una enzima que corta una estructura amida, debido a la inclusión de un enlace amida en este péptido.
Se espera que un péptido que tiene una conformación controlada proporcione muchas aplicaciones de uso farmacológico. Por ejemplo, la somatostatina es un tetradecapéptido cíclico presente tanto en el sistema nervioso central como en los tejidos circundantes y se ha identificado como un inhibidor importante contra la secreción de una hormona de crecimiento de la glándula pituitaria y, además, tiene funciones como la supresión de la secreción de glucagón e insulina del bazo, la regulación de la mayoría de las hormonas gastrointestinales, la regulación de la liberación de otros neurotransmisores correlacionada con la actividad motora y un proceso de reconocimiento en todo el sistema nervioso central, y similares. Un péptido entrecruzado compuesto por nueve aminoácidos llamado péptido WP9QY (W9) que imita la estructura estérica de un sitio de contacto entre TNF y un receptor de TNF suprime la actividad inflamatoria de TNFa y, además, se sabe que suprime la resorción ósea (Aoki et al., J. Clin. Invest. 2006; 116 (6): 1525-1534).
Se realizó un estudio para obtener una imitación de péptido que mejora la estabilidad metabólica mediante la adición al péptido de una estructura que no está presente en los péptidos naturales, ya que la imitación de péptido muestra una propiedad farmacológica más preferible que la de un péptido natural como forma original del mismo, además de un péptido entrecruzado que tiene una conformación controlada como se describió anteriormente. Por ejemplo, la resistencia a una enzima se mejora mediante el uso de enlaces entrecruzados (un entrecruzamiento a través de un enlace tioéter, un entrecruzamiento a través de una olefina y similares) distinto del entrecruzamiento natural descrito anteriormente (entrecruzamiento de disulfuro). Además, la resistencia al metabolismo en un organismo se mejora mediante la adición, por ejemplo, de PEG y similares, al terminal o la cadena lateral de un péptido.
En el documento JP-A No. 2004-59509, los compuestos descritos en la publicación internacional PCT WO2007/ 034812, los compuestos descritos en la publicación internacional PCT WO2007/122847, los compuestos descritos en la publicación internacional PCT WO2010/104169 y los compuestos del documento WO 2011/008260 se refieren a péptidos bifuncionales, unidos o enlazados que comprenden un dominio de direccionamiento, una fracción enlazadora y un dominio efector que puede usarse para atar o acercar, al menos dos entidades celulares (por ejemplo, proteínas).
Patrick D. Bailey, et al. describieron en Tetrahedron Letters, Volumen 33, no.22, páginas 3215 a 3218, 1992, la síntesis de hexapéptidos policíclicos que contienen entrecruzamientos intramoleculares múltiples.
Sumario de la invención
Problema técnico
Sin embargo, la introducción de una molécula funcional a menudo ha dañado la función farmacológica intrínsecamente propia de un péptido. Se ha deseado un método de entrecruzamiento capaz de producir un péptido entrecruzado mientras se lleva a cabo simplemente la reacción de alargamiento de un péptido y la formación de un enlace de entrecruzamiento en cualquier sitio. Además, se ha deseado un método de entrecruzamiento que opcionalmente pueda realizar la sustitución y otras alteraciones también en la estructura entrecruzada.
Un objetivo de la presente invención es proporcionar un péptido entrecruzado que contenga una nueva estructura entrecruzada o una imitación de péptido que tenga la nueva estructura entrecruzada.
Otro objetivo de la presente invención es proporcionar un método de entrecruzamiento capaz de producir un péptido entrecruzado o un imitación de péptido, que puede realizar además una reacción de alargamiento del péptido en fase líquida y puede formar un enlace entrecruzado en cualquier sitio
Aún otro objetivo de la presente invención es proporcionar una estructura entrecruzada en la que la sustitución y otras alteraciones pueden realizarse opcionalmente también en la estructura entrecruzada, y un péptido entrecruzado o una imitación de péptido que contiene dicha estructura .
Incluso otro objetivo de la presente invención es proporcionar un método de entrecruzamiento capaz de producir un péptido entrecruzado o una imitación de péptido que contenga una estructura entrecruzada en la que la sustitución y otras alteraciones pueden realizarse opcionalmente también en el estructura entrecruzada.
El otro objetivo de la presente invención es proporcionar un nuevo péptido entrecruzado en el que se mejora la resistencia a una peptidasa y similares, o un imitación de péptido que tenga la nueva estructura entrecruzada. Solución del problema
Los presentes inventores han estudiado intensamente para resolver los problemas descritos anteriormente y han logrado sintetizar un péptido entrecruzado que contiene una nueva estructura entrecruzada no peptídica utilizando un nuevo compuesto orgánico que tiene una estructura entrecruzada en la molécula, conduciendo a la finalización de la presente invención.
Es decir, la presente invención proporciona nuevos péptidos entrecruzados, nuevos compuestos y métodos para sintetizar estos péptidos entrecruzados, que se describen a continuación.
La presente invención proporciona:
1. Un péptido entrecruzado representado por la siguiente fórmula química:
[fórmula química 1]
Figure imgf000004_0001
(en la que, X se selecciona del grupo que consiste en las siguientes fórmulas químicas:
lado del centro de lado del
entrecruzamiento
Figure imgf000005_0001
péptido
lado del centro de lado del
entrecruzamiento
Figure imgf000005_0002
péptido
lado del centro de lado del
entrecruzamiento
Figure imgf000005_0003
péptido
lado del centro de
entrecruzamiento
Figure imgf000005_0004
lado del
lado del centro de
Figure imgf000005_0005
péptido
entrecruzamlento
lado del
lado del centro de péptido
entrecruzamiento
Figure imgf000005_0006
y
lado del centro de lado del
entrecruzamiento
Figure imgf000005_0007
péptido
en las que, n representa un número entero de 1 a 12, m representa un número entero de 1 a 24 e I representa un número entero de 1 a 24); Y es cualquiera seleccionado del grupo que consiste en el siguiente compuesto Y1 y el compuesto Y4:
(Compuesto Y1)
lado del centro de lado del
entrecruzamiento
Figure imgf000005_0008
péptido
lado del centro de lado del
entrecruzamiento
Figure imgf000005_0009
péptido
(Compuesto Y4)
[fórmula química 11]
lado del centro de
entrecruzamlento
Figure imgf000006_0001
lado del centro de lado del
entrecruzamlento
Figure imgf000006_0002
péptldo
lado del centro
entrecruzamlen
Figure imgf000006_0003
lado del centro de
entrecruzamlento
Figure imgf000006_0004
¡SE
lado del centro de lado del
entrecruzamlento
Figure imgf000006_0005
péptldo
(en el que, o representa un número entero de 1 a 12, p representa un número entero de 1 a 27, q representa un número entero de 1 a 24), Z representa hidrógeno, un grupo alquilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 30 átomos de carbono, un grupo acilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 36 átomos de carbono, polietilenglicol, un grupo t-Boc, un grupo Fmoc, un grupo Cbz o un grupo Nosilo, [E] representa un átomo de hidrógeno, un grupo acilo opcionalmente sustituido que tiene 1 a 6 átomos de carbono o un péptido que tiene de 1 a 20 residuos compuestos de aminoácidos y/o aminoácidos no naturales como elementos constituyentes, [G] representa OH, un grupo amino o un péptido que tiene de 1 a 20 residuos compuestos de aminoácidos y/o aminoácidos no naturales como elementos constituyentes, [F] representa un péptido que tiene de 1 a 20 residuos compuestos de aminoácidos y/o aminoácidos no naturales como elementos constituyentes (aquí, la suma de los números de aminoácidos de [E], [F] y [G] es al menos 3), y (A) y (B) representan cada uno independientemente una estructura representada por cualquiera de la siguiente fórmula:
[fórmula química 2]
Figure imgf000006_0006
(en la que, R1, R3 y R4 representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo metilo, y R2 representa un átomo de hidrógeno o una cadena lateral de un aminoácido o aminoácido no natural).
2. El péptido entrecruzado de acuerdo con [1] representado por la siguiente fórmula:
[fórmula química 3]
Figure imgf000006_0007
(en la que X, Y, Z, [E], [F], [G], R1, R2 , R3 y R4 son como se describieron anteriormente).
3. El péptido entrecruzado de acuerdo con [1] representado por la siguiente fórmula:
[fórmula química 4]
Figure imgf000007_0001
(en la que, X, Z, [E], [F], [G], Ri, R2, R3 y R4 son como se describieron anteriormente).
4. El péptido entrecruzado según [1] representado por la siguiente fórmula:
[fórmula química 5]
Figure imgf000007_0002
(en la que, X, Z, [E], [F], [G], R1 y R4 son como se describieron anteriormente. Aquí, Xs, R1s o R4s en la fórmula química pueden ser iguales o diferentes).
5. El péptido entrecruzado de acuerdo con [1] representado por la siguiente fórmula:
[fórmula química 6]
Figure imgf000007_0003
(en la que, Y, Z, [E], [F], [G], R2 y R3 son como se describieron anteriormente. Aquí, Ys, R2s o R3s en la fórmula química pueden ser iguales o diferentes).
6. El péptido entrecruzado de acuerdo con uno cualquiera de [1] a [5], en el que X es cualquiera seleccionado del grupo que consiste en las siguientes fórmulas químicas:
[fórmula química 17]
Figure imgf000008_0001
(en las que, n' representa un número entero de 1 a 7, m' representa un número entero de 1 a 11 y l' representa un número entero de 1 a 12) e Y es cualquiera seleccionado del grupo que consiste en las siguientes fórmulas químicas:
[fórmula química 18]
lado dol contro
ontrocruzamlon
Figure imgf000009_0001
lado dol contro do lado dol contro do
ontrocruzamlonto lado dol ontrocruzamlonto lado dol
Figure imgf000009_0002
póptldo ,
Figure imgf000009_0003
póptldo
lado dol contro do ontrocruzamlonto lado dol
Figure imgf000009_0004
póptldo _
Figure imgf000009_0005
póptldo
i lIaddUoU dUtoill
lado del contro do
Figure imgf000009_0006
j póptldo lado del contro do' do dol
ontrocruzamlonto ontrocruzamlonto la
Figure imgf000009_0007
*1 póptldo
. . lado dol
lado del contro do
ontrocruzamlonto v w M ^
Figure imgf000009_0008
o s r
lado del contro do lado del
ontrocruzamlonto y ' V ' H r ^ V póptldo
(en las que, o1 representa un número entero de 1 a 8, p1 representa un número entero de 1 a 11 y q1 representa un número entero de 1 a 12).
7. El péptido entrecruzado de acuerdo con uno cualquiera de [1] a [6], en el que Z es un grupo acilo que tiene de 1 a 8 átomos de carbono, un grupo alquilo no sustituido o sustituido que tiene de 1 a 8 átomos de carbono, el polietilenglicol que tiene un peso molecular de 100 a 10.000 Da representado por -C(=O)-CH2CH2(OCH2CH2)nOC^CH2OCH3 o cualquiera seleccionado del grupo que consiste en las siguientes fórmulas:
[fórmula química 19]
Figure imgf000009_0009
(en las que, n representa un número entero de 1 a 12, q' representa un número entero de 1 a 12, v representa 1 o 2 y w representa un número entero de 1 a 12 (aquí, R5 está representado por la siguiente fórmula:
[fórmula química 20]
Figure imgf000009_0010
y R6 está representado por la siguiente fórmula:
[fórmula química 21]
Figure imgf000010_0001
8. El péptido entrecruzado de acuerdo con uno cualquiera de [1] a [7], en el que cada uno de [E] y [G] representa al menos un aminoácido y/o aminoácido no natural y [F] representa al menos dos aminoácidos y/o aminoácidos no naturales.
9. Un compuesto representado por la siguiente fórmula química:
[fórmula química 22]
Figure imgf000010_0002
(en la que, X se selecciona del grupo que consiste en las siguientes fórmulas:
n2
lado del centro de \_^>{''c>(sv / la d o del
entrecruzamlento ' n l péptido
lado del centro de
Figure imgf000011_0001
lado del
entrecruzamlento péptido
lado del centro de
Figure imgf000011_0002
lado del
entrecruzamlento péptido
lado del centro de lado del
entrecruzamiento
Figure imgf000011_0003
péptido
lado del
lado del centro de
Figure imgf000011_0004
péptido
entrecruzamlento
lado del
lado del centro de péptido
entrecruzamlento
Figure imgf000011_0005
y
lado del centro de lado del
entrecruzamlento
Figure imgf000011_0006
péptido
(en las que, n representa un número entero de 1 a 12, m representa un número entero de 1 a 24 y I representa un número entero de 1 a 24), Y es cualquier compuesto seleccionado del grupo que consiste en el siguiente compuesto Y1, y el compuesto Y4:
(Compuesto Y1)
Figure imgf000011_0007
(Compuesto Y4)
lado del centro de lado del
entrecruzamlento
Figure imgf000012_0001
péptido
lado del centro de
entrecruzamlento lado del
V ls d ^ r : péptido
lado del centro de lado del
entrecruzamiento
Figure imgf000012_0002
péptido
lado del
lado del centro de péptido
entrecruzamlento
Figure imgf000012_0003
lado del centro de
entrecruzamlento
Figure imgf000012_0004
(en las que, o representa un número entero de 1 a 12, p representa un número entero de 1 a 27, q representa un número entero de 1 a 24,
Z representa hidrógeno, un grupo alquilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 30 átomos de carbono, un grupo acilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 36 átomos de carbono, polietilenglicol, un grupo t-Boc, un grupo Fmoc, un grupo Cbz o un grupo Nosilo, [A], [B], [C] y [D] representan cada uno independientemente un péptido que tiene de 1 a 20 residuos compuestos de aminoácidos y/o aminoácidos no naturales como elementos constituyentes o un enlace sencillo, (a) y (c) representan cada uno independientemente -NH- o un enlace sencillo, (b) y (d) representan cada uno independientemente -(C=O)- o un enlace sencillo (aquí, la suma de los números de aminoácidos de [A], [B], [C] y [D] es al menos 1, y cada uno de ellos puede tener un grupo protector de cadena lateral), R1, R3 y R4 representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo metilo, R2 representa un átomo de hidrógeno o una cadena lateral de un aminoácido o aminoácido no natural, P1 y P3 representa cada uno independientemente un grupo protector de amino o un átomo de hidrógeno, P2 y P4 representan cada uno independientemente un grupo protector de -O-éster, un grupo protector de -NH-bencilo, un grupo amino o un grupo hidroxilo).
10. Un compuesto representado por la siguiente fórmula química:
[fórmula química 23]
Figure imgf000012_0005
(en la que, X se selecciona del grupo que consiste de las siguientes fórmulas:
n 2
lado del centro d e / lado del
entrecruzamiento ’ n > péptido
lado del centro de lado del
entrecruzamiento
Figure imgf000013_0001
péptido
lado del centro de
Figure imgf000013_0002
lado del
entrecruzamiento péptido
lado del centro de lado del
entrecruzamiento
Figure imgf000013_0003
péptido
lado del
lado del centro de V j-c 4 n .
Figure imgf000013_0004
péptido
entrecruzamiento 1 °
Figure imgf000013_0005
(en las que, n representa un número entero de 1 a 12, m representa un número entero de 1 a 24 y I representa un número entero de 1 a 24),
Z representa hidrógeno, un grupo alquilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 30 átomos de carbono, un grupo acilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 36 átomos de carbono, polietilenglicol, un grupo t-Boc, un grupo Fmoc, un grupo Cbz o un grupo Nosilo, [A], [B], [C] y [D] representan cada uno independientemente un péptido que tiene de 1 a 20 residuos compuestos de aminoácidos y/o aminoácidos no naturales como elementos constituyentes o un enlace sencillo, (a) y (c) representa cada uno independientemente -NH- o un enlace sencillo, (b) y (d) representa cada uno independientemente -(C =O)- o un enlace sencillo (aquí, la suma de los números o aminoácidos de [A], [B], [C] y [D] es al menos 1, y cada uno de ellos puede tener un grupo protector de cadena lateral), R1, R3 y R4 representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo metilo, R2 representa un átomo de hidrógeno o una cadena lateral de un aminoácido o un aminoácido no natural, P1 y P3 representan cada uno independientemente un grupo protector de aminoácidos o un átomo de hidrógeno, P2 y P4 representan cada uno independientemente un grupo protector de -O-éster, un grupo protector de -NH-bencilo, un grupo amino o un grupo hidroxilo). Aquí, Xs, [A]s, [B]s, (a)s, (b)s, R1s, R4s, P1s y P2s en la fórmula química pueden ser iguales o diferentes. La suma de los números de aminoácidos de [A] y [B] es al menos 1, y cada uno de ellos puede tener un grupo protector de cadena lateral).
11. Un compuesto representado por la siguiente fórmula química:
[fórmula química 24]
Figure imgf000013_0006
(en la que, Y es cualquier compuesto seleccionado del grupo que consiste en el siguiente compuesto Y1, y el compuesto Y4:
(Compuesto Y1)
Figure imgf000014_0001
(Compuesto Y4)
[fórmula química 29]
lado del centro de lado del
entrec airamiento
Figure imgf000014_0002
péptldo
lado del centro de lado del
entrec ruzamlento v - fe i+ ^ W péptldo
lado del
lado del centro de péptldo
entrec alzamiento
Figure imgf000014_0003
lado del
lado del centro de péptldo
entrec alzamiento
Figure imgf000014_0004
lado del centro de lado del
entrecruzamlento
Figure imgf000014_0005
péptido
(en las que, o representa un número entero de 1 a 12, p representa un número entero de 1 a 27, q representa un número entero de 1 a 24,
Z representa hidrógeno, un grupo alquilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 30 átomos de carbono, un grupo acilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 36 átomos de carbono, polietilenglicol, un grupo t-Boc, un grupo Fmoc, un grupo Cbz o un grupo Nosilo, [A], [B], [C] y [D] representan cada uno independientemente un péptido que tiene de 1 a 20 residuos compuestos de aminoácidos y/o aminoácidos no naturales como elementos constituyentes o un enlace sencillo, (a) y (c) representa cada uno independientemente -NH- o un enlace sencillo, (b) y (d) representa cada uno independientemente -(C=O)- o un enlace sencillo (aquí, la suma de los números o aminoácidos de [A], [B], [C] y [D] es al menos 1, y cada uno de ellos puede tener un grupo protector de cadena lateral), R1, R3 y R4 representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo metilo, R2 representa un átomo de hidrógeno o una cadena lateral de un aminoácido o un aminoácido no natural, P1 y P3 representan cada uno independientemente un grupo protector de aminoácidos o un átomo de hidrógeno, P2 y P4 representan cada uno independientemente un grupo protector de -O-éster, un grupo protector de -NH-bencilo, un grupo amino o un grupo hidroxilo). Aquí, Ys, [C]s, [D]s, (c)s, (d)s, R2s, R3s, P3s y P4s en la fórmula química pueden ser iguales o diferentes. La suma de los números de aminoácidos de [C] y [D] es al menos 1, y cada uno de ellos puede tener un grupo protector de cadena lateral).
12. El compuesto de acuerdo con uno cualquiera de [9] a [11], en el que cualquier extremo compuesto de P1 o P3 representa un átomo de hidrógeno y cualquier extremo compuesto de P2 o P4 representa un grupo hidroxilo.
13. El compuesto de acuerdo con uno cualquiera de [9] a [11], en el que cualquier extremo compuesto de P2 o P4 representa un bencilo sustituido con 2,4-alcoxi.
14. El compuesto de acuerdo con [13], en el que el número de átomos de carbono del grupo sustituido con alcoxi es de 1 a 60.
15. El compuesto de acuerdo con uno cualquiera de [9] a [14], en el que cada uno de [A], [B], [C] y [D] representa al menos un aminoácido y/o aminoácido no natural.
16. Un método para sintetizar un péptido entrecruzado representado por la siguiente fórmula:
[fórmula química 35]
Figure imgf000015_0001
(en la que, X se selecciona del grupo que consiste en las siguientes fórmulas químicas:
lado del centro de
Figure imgf000015_0002
/lado del
entrecruzamiento I péptido
lado del centro de V 4 c '-U J rC 'lc / lado del
entrecruzamiento I ° ¡ péptido
lado del centro de lado del
entrecruzamiento
Figure imgf000015_0003
péptido
lado del centro de lado del
entrecruzamiento
Figure imgf000015_0004
péptido
lado del
lado del centro de
Figure imgf000015_0005
péptido
entrecruzamlento
lado del centro de
entrecruzamiento
Figure imgf000015_0006
y
lado del centro de lado del
entrecruzamlento
Figure imgf000015_0007
péptdo
en las que, n representa un número entero de 1 a 12, m representa un número entero de 1 a 24 y I representa un número entero de 1 a 24); Y es cualquiera seleccionado del grupo que consiste en el siguiente compuesto Y1 y el compuesto Y4:
Y4:
(Compuesto Y1)
Figure imgf000016_0001
(Compuesto Y4)
lado del centro de lado del
entrecruzamlento
Figure imgf000016_0002
péptido
lado del centro de lado del
entrecruzamlento
Figure imgf000016_0003
péptido
lado del centro de lado del
entrecruzamlento > i s ± M r < péptido '
lado del centro de:
entrecruzamlento
Figure imgf000016_0004
, 4 ^ ^ s r
lado del centro de lado del
entrecruzamlento
Figure imgf000016_0005
péptido
(en las que, o representa un número entero de 1 a 12, p representa un número entero de 1 a 27, q representa un número entero de 1 a 24),
Z representa hidrógeno, un grupo alquilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 30 átomos de carbono, un grupo acilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 36 átomos de carbono, polietilenglicol, un grupo t-Boc, un grupo Fmoc, un grupo Cbz o un grupo Nosilo, [E] representa hidrógeno, un grupo acetilo o un péptido que tiene de 1 a 20 residuos compuestos de aminoácidos y/o aminoácidos no naturales como elementos constituyentes, [G] representa OH, un grupo amino o un péptido que tiene de 1 a 20 residuos compuestos de aminoácidos y/o aminoácidos no naturales como elementos constituyentes, [F] representa un péptido que tiene de 1 a 20 residuos compuestos de aminoácidos y/o aminoácidos no naturales como elementos constituyentes (aquí, la suma de los números de aminoácidos de [E], [F] y [G] es al menos 3), R1, R3 y R4 representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo metilo, y R2 representa un átomo de hidrógeno o una cadena lateral de un aminoácido o aminoácido no natural), que comprende las siguientes etapas:
(a) una etapa para preparar un primer componente, que comprende las siguientes etapas,
(a-1) una etapa de hacer reaccionar el lado del terminal N del péptido o aminoácido sintetizado o el grupo protector de carboxilo con un derivado de aminoácido que contiene en la cadena lateral un enlazador que forma parte de un entrecruzamiento del péptido entrecruzado, para sintetizar el péptido que tiene el enlazador en la cadena lateral o el derivado de aminoácido que tiene protegido el grupo carboxilo,
(a-2) cuando el extremo del enlazador no es reactivo en la siguiente etapa c de la reacción de formación de entrecruzamiento, una etapa para convertir el extremo del enlazador en un grupo funcional reactivo,
(b) una etapa de preparación de un segundo componente, que comprende las siguientes etapas,
(b-1) una etapa de condensación de un grupo protector de carboxilo con aminoácidos o un péptido que constituye una secuencia peptídica parcial del péptido entrecruzado,
(b-2) una etapa para hacer reaccionar el terminal N del péptido o el derivado de aminoácido sintetizado con un compuesto que contiene un enlazador que forma parte de un entrecruzamiento del péptido entrecruzado, para sintetizar un péptido o un derivado de aminoácido que tiene una amina secundaria en el terminal N que contiene el enlazador,
(b-3) cuando el extremo del enlazador no es reactivo en la siguiente etapa c de la reacción de formación de entrecruzamiento, una etapa para convertir el extremo del enlazador en un grupo funcional reactivo,
(c) una etapa de enlazamiento (entrecruzamiento) del primer componente y el segundo componente mediante la reacción de Mitsunobu, una reacción de aminación reductora o la reacción de Aza-Wittig y la reacción de reducción subsiguiente, para preparar un compuesto intermedio que tenga una estructura en la que los dos componentes se enlazan a través de una amina secundaria o una amina terciaria,
(d) una etapa de condensación del terminal N o C del péptido de un componente con el terminal C o N del péptido de otro componente.
17. Un método para sintetizar el siguiente péptido entrecruzado:
[fórmula química 36]
Figure imgf000017_0001
(en la que, X se selecciona del grupo que consiste en las siguientes fórmulas:
n2
lado del centro de / lado del
entrecruzamiento ■ n * péptido
lado del centro de lado del
entrecmzamiento
Figure imgf000017_0002
péptido
lado del centro de
Figure imgf000017_0003
lado del
entrecmzamiento péptido
lado del centro de lado del
entrecruzamiento
Figure imgf000017_0004
péptido
lado del
lado del centro de péptido
entrecmzamiento
Figure imgf000017_0005
Figure imgf000017_0006
(en las que, n representa un número entero de 1 a 12, m representa un número entero de 1 a 24 y I representa un número entero de 1 a 24),
Z representa hidrógeno, un grupo alquilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 30 átomos de carbono, un grupo acilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 36 átomos de carbono, polietilenglicol, un grupo t-Boc, un grupo Fmoc, un grupo Cbz o un grupo Nosilo, [A], [B, [C] y [D] representan cada uno independientemente un péptido que tiene de 1 a 20 residuos compuestos de aminoácidos y/o aminoácidos no naturales como elementos constituyentes o un enlace sencillo, (a) y (c) representa cada uno independientemente -NH- o un enlace sencillo, (b) y (d) representa cada uno independientemente -(C=O)- o un enlace sencillo (aquí, la suma de los números o aminoácidos de [A], [B], [C ] y [D] es al menos 1, y cada uno de ellos puede tener un grupo protector de cadena lateral), Ri , R3 y R4 representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo metilo, R2 representa un átomo de hidrógeno o una cadena lateral de un aminoácido o un aminoácido no natural, P1 y P3 representan cada uno independientemente un grupo protector de amino o un átomo de hidrógeno, P2 y P4 representan cada uno independientemente un grupo protector de -O-éster, un grupo protector de -NH-bencilo, un grupo amino o un grupo hidroxilo), que comprende las siguientes etapas (a) a (g):
(a) una etapa para preparar un primer componente, que comprende las siguientes etapas,
(a-1) una etapa de hacer reaccionar el lado del terminal N del péptido o aminoácido sintetizado o el grupo protector de carboxilo con un derivado de aminoácido que contiene en la cadena lateral un enlazador que forma parte de un entrecruzamiento del péptido entrecruzado, para sintetizar el péptido que tiene el enlazador en la cadena lateral o el derivado de aminoácido que tiene el grupo carboxilo protegido,
(a-2) cuando el extremo del enlazador no es reactivo en la siguiente etapa c de la reacción de formación de entrecruzamiento, una etapa para convertir el extremo del enlazador en un grupo funcional reactivo,
(b) una etapa para preparar un segundo componente,
(b-1) una etapa para hacer reaccionar el lado del terminal N del péptido o aminoácido sintetizado o el grupo protector de carboxilo con un derivado de aminoácido que contiene en la cadena lateral un enlazador que forma parte de un entrecruzamiento del péptido entrecruzado, para sintetizar el péptido que tiene el enlazador en la cadena lateral o el derivado de aminoácido que tiene el grupo carboxilo protegido,
(b-2) cuando el extremo del enlazador no es reactivo en la siguiente etapa c de la reacción de formación de entrecruzamiento, una etapa para convertir el extremo del enlazador en un grupo funcional reactivo,
(c) una etapa de enlazamiento (entrecruzamiento) del primer componente y el segundo componente mediante la reacción de Mitsunobu, una reacción de aminación reductora o la reacción de Aza-Wittig y la reacción de reducción subsiguiente, para preparar un compuesto intermedio que tenga una estructura en la que los dos componentes se enlazan a través de una amina secundaria o una amina terciaria,
(d) una etapa de condensación del terminal N o C del péptido de un componente con el terminal C o N del péptido de otro componente.
18. Un método para sintetizar el siguiente péptido entrecruzado:
[fórmula química 37]
Figure imgf000018_0001
Y es cualquier compuesto seleccionado del grupo que consiste en el siguiente compuesto Y1, y el compuesto Y4:
(Compuesto Y1)
lado del centro de \ / ^ * C>^ s / la d o del
entrecruzamlento I i péptido
lado del centro de lado del
entrecruzamlento
Figure imgf000018_0002
péptido
lado del centro de lado del
entrec alzamiento
Figure imgf000019_0001
péptido
lado del centro de lado del
entrecruzamlento
Figure imgf000019_0002
péptido
Figure imgf000019_0003
lado del
lado del centro de
Figure imgf000019_0004
péptido
entrecruzamlento H í M '
lado del
lado del centro de
Figure imgf000019_0005
péptido
entrecruzamlento
lado del centro de lado del
entrecruzamlento
Figure imgf000019_0006
péptido
(en las que, o representa un número entero de 1 a 12, p representa un número entero de 1 a 27, q representa un número entero de 1 a 24,
Z representa hidrógeno, un grupo alquilo opcionalmente sustituido que tiene 1 a 30 átomos de carbono, un grupo acilo opcionalmente sustituido grupo que tiene de 1 a 36 átomos de carbono, polietilenglicol, un grupo t-Boc, un grupo Fmoc, un grupo Cbz o un grupo Nosilo, [A], [B], [C] y [D] representa cada uno independientemente un péptido que tiene de 1 a 20 residuos compuestos de aminoácidos y/o aminoácidos no naturales como elementos constituyentes o un enlace sencillo, (a) y (c) representa cada uno independientemente -NH- o un enlace sencillo, (b) y (d) representa cada uno independientemente -(C=O)- o un enlace sencillo (aquí, la suma de los números o aminoácidos de [A], [B], [C] y [D] es al menos 1, y cada uno de ellos puede tener un grupo protector de cadena lateral), R1, R3 y R4 representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo metilo, R2 representa un átomo de hidrógeno o una cadena lateral de un aminoácido o aminoácido no natural, P1 y P3 representa cada uno independientemente un grupo protector de amino o un átomo de hidrógeno, P2 y P4 representan cada uno independientemente un grupo protector de -O-éster, un grupo protector de -NH-bencilo, un grupo amino o un grupo hidroxilo), que comprende los siguientes etapas:
(a) una etapa para preparar un primer componente, que comprende los siguientes etapas,
(a-1) una etapa de condensación de un grupo protector de carboxilo con aminoácidos o un péptido que constituye una secuencia peptídica parcial del péptido entrecruzado,
(a-2) una etapa para hacer reaccionar el terminal N del péptido o el derivado de aminoácido sintetizado con un compuesto que contiene un enlazador que forma parte de un entrecruzamiento del péptido entrecruzado, para sintetizar un péptido o un derivado de aminoácido que tiene una amina secundaria en el terminal N que contiene el enlazador,
(a-3) cuando el extremo del enlazador no es reactivo en la siguiente etapa c de la reacción de formación de entrecruzamiento, una etapa para convertir el extremo del enlazador en un grupo funcional reactivo,
(b) una etapa de preparación de un segundo componente, que comprende los siguientes etapas,
(b-1) una etapa de condensación de un grupo protector de carboxilo con aminoácidos o un péptido que constituye una secuencia peptídica parcial del péptido entrecruzado, y el alargamiento del grupo condensado,
(b-2) una etapa para hacer reaccionar el terminal N del péptido o el derivado de aminoácido sintetizado con un compuesto que contiene un enlazador que forma parte de un entrecruzamiento del péptido entrecruzado, para sintetizar un péptido o un derivado de aminoácido que tiene una amina secundaria en el terminal N que contiene el enlazador,
(b-3) cuando el extremo del enlazador no es reactivo en la siguiente etapa c de la reacción de formación de entrecruzamiento, una etapa para convertir el extremo del enlazador en un grupo funcional reactivo,
(c) una etapa de enlazamiento (entrecruzamiento) del primer componente y el segundo componente mediante la reacción de Mitsunobu, una reacción de aminación reductora o la reacción de Aza-Wittig y la reacción de reducción subsiguiente, para preparar un compuesto intermedio que tenga una estructura en la que los dos componentes se enlazan a través de una amina secundaria o una amina terciaria,
(d) una etapa de condensación del terminal N o C del péptido de un componente con el terminal N o C del péptido del otro componente para formar un entrecruzamiento.
19. Un método para sintetizar el péptido entrecruzado de acuerdo con uno cualquiera de [16] a [18], en el que la etapa (c) se lleva a cabo bajo una condición en la que al menos uno del primer componente y el segundo componente se enlaza al grupo protector de carboxilo como un soporte del péptido, en el que el soporte del péptido es un bencilo sustituido con alcoxi seleccionado del grupo que consiste en un alcohol bencílico sustituido en 2,4, un alcohol bencílico sustituido en 3,5, un alcohol bencílico sustituido en 3,4,5 y un alcohol bencílico sustituido en 2,4,5.
20. El método para sintetizar el péptido entrecruzado de acuerdo con [19], en el que el número de átomos de carbono del sustituyente alcoxi del alcohol bencílico sustituido en 2,4 utilizado como soporte del péptido es de 1 a 60.
21. Un péptido entrecruzado representado por la siguiente fórmula química:
[fórmula química 38]
Figure imgf000020_0001
(en la que, Z1 y Z3 representan cada uno independientemente un grupo acilo no sustituido o sustituido que tiene de 1 a 36 átomos de carbono, un grupo alquilo no sustituido o sustituido que tiene de 1 a 30 átomos de carbono o un polietilenglicol que tiene un peso molecular de 100 a 20.000 Da representado por -C(=O)-CH2CH2(OCH2CH2)n OCH2CH2OCH3 , y Z2 representa un grupo hidroxilo, un grupo amino, un grupo monoalquilamino no sustituido o sustituido que tiene de 1 a 30 átomos de carbono o un polietilenglicol que tiene un peso molecular de 100 a 20.000 Da representado por -NH-CH2CH2(OCH2CH2)nOCH2CH2OCH3).
22. Un péptido entrecruzado representado por la siguiente fórmula:
[fórmula química 39]
Figure imgf000020_0002
[fórmula química 41]
Figure imgf000020_0003
[fórmula química 43]
Figure imgf000021_0001
[fórmula química 45]
Figure imgf000021_0002
[fórmula química 47]
Figure imgf000021_0003
(en las que, Ac representa un grupo acetilo, y el polietilenglicol tiene un peso molecular promedio en número de 500 a 2.000 Da).
Efectos ventajosos de la invención
En un objetivo de la presente invención, los aminoácidos en cualquier posición en una cadena peptídica pueden entrecruzarse a través de un enlazador para sintetizar un péptido entrecruzado que tiene un entrecruzamiento en cualquier posición.
En otro objetivo de la presente invención, se puede proporcionar un nuevo péptido entrecruzado en el que la porción entrecruzada del péptido entrecruzado tiene una nueva estructura representada por -X-NZ-Y- (aquí, X, Y y Z son como se definieron anteriormente).
En aún otro objetivo de la presente invención, se puede proporcionar una imitación de péptido, y la imitación de péptido proporcionada por la presente invención puede manifestar características biológicas diferentes de aquellas de los péptidos que tienen una estructura entrecruzada natural, por ejemplo, resistencia a una peptidasa, y similares.
Breve explicación de los dibujos
La Figura 1 muestra una vista esquemática de un ejemplo de síntesis de un componente usado en un compuesto intermedio de la presente invención.
La Figura 2 muestra una vista esquemática de un ejemplo de síntesis de una imitación de péptido entrecruzado W9 como un péptido entrecruzado de la presente invención a partir de un compuesto intermedio de la presente invención. La Figura 3 muestra una vista esquemática de un ejemplo de síntesis de otra imitación de péptido entrecruzado W9 (Bdev-14) de la presente invención.
La Figura 4 muestra una vista esquemática parcial de una ruta de síntesis de un ejemplo de síntesis de aún otras imitaciones de péptidos entrecruzados W9 (Bdev-19, Bdev-20) de la presente invención.
La Figura 5 muestra una vista esquemática de un ejemplo de síntesis de aún otras imitaciones de péptidos entrecruzados W9 (Bdev-19, Bdev-20) de la presente invención.
La Figura 6 muestra una vista esquemática de un ejemplo de síntesis de otra imitación de péptido entrecruzado W9 (Bdev-21) de la presente invención.
La Figura 7 muestra una vista esquemática de un ejemplo de síntesis de otra imitación de péptido entrecruzado W9 (Bdev-25) de la presente invención.
La Figura 8 muestra una vista esquemática de un ejemplo de síntesis de otras imitaciones de péptidos entrecruzados W9 (Bdev-27 a 30) de la presente invención.
La Figura 9 muestra una vista esquemática de un ejemplo de síntesis de otra imitación de péptido entrecruzado (Bdev-31) de la presente invención.
La Figura 10 muestra una vista esquemática parcial de una ruta de síntesis de un ejemplo de síntesis de otra imitación de péptido entrecruzado (Bdev-32) de la presente invención.
La Figura 11 muestra una vista esquemática parcial de una ruta de síntesis de un ejemplo de síntesis de otra imitación de péptido entrecruzado (Bdev-32) de la presente invención.
La Fig. 12 muestra una vista esquemática parcial de una ruta de síntesis de un ejemplo de síntesis de otra imitación de péptido entrecruzado (Bdev-32) de la presente invención.
La Figura 13 muestra una vista esquemática parcial de una ruta de síntesis de un ejemplo de síntesis de otra imitación de péptido entrecruzado (Bdev-32) de la presente invención.
La Figura 14 muestra una vista esquemática parcial de una ruta de síntesis de un ejemplo de síntesis de otra imitación de péptido entrecruzado (Bdev-32) de la presente invención.
La Figura 15 muestra una vista esquemática parcial de una ruta de síntesis de un ejemplo de síntesis de otra imitación de péptido entrecruzado (Bdev-32) de la presente invención.
La Figura 16 muestra una vista esquemática parcial de una ruta de síntesis de un ejemplo de síntesis de otra imitación de péptido entrecruzado (Bdev-32) de la presente invención.
La Figura 17 muestra una vista esquemática parcial de una ruta de síntesis de un ejemplo de síntesis de otra imitación de péptido entrecruzado (Bdev-33) de la presente invención.
La Figura 18 muestra una vista esquemática parcial de una ruta de síntesis de un ejemplo de síntesis de otra imitación de péptido entrecruzado (Bdev-33) de la presente invención.
La Figura 19 muestra una vista esquemática parcial de una ruta de síntesis de un ejemplo de síntesis de otra imitación de péptido entrecruzado (Bdev-33) de la presente invención.
La Figura 20 muestra una vista esquemática parcial de una ruta de síntesis de un ejemplo de síntesis de otra imitación de péptido entrecruzado (Bdev-33) de la presente invención.
La Figura 21 muestra un ejemplo de síntesis de un imitador de péptido W9 que tiene un entrecruzamiento de tioéter como ejemplo de referencia.
La Figura 22 muestra un ejemplo de síntesis de una imitación de péptido W9 que tiene un entrecruzamiento de olefina como ejemplo de referencia.
Descripción de las realizaciones
En la presente memoria descriptiva, "péptido entrecruzado" significa una cadena peptídica en la que las cadenas laterales de aminoácidos en la cadena principal o grupos terminales de la cadena peptídica constituyen una forma circular, y la circularización es causada por la ciclación de cadena lateral - cadena lateral, ciclación de cadena lateral - grupo terminal o ciclación de grupo terminal - grupo terminal , y como la ciclación, las cadenas laterales y/o los grupos terminales pueden estar enlazados directamente o pueden enlazarse a través de una estructura entrecruzada que tiene cualquier longitud entre ellas, y el péptido entrecruzado de la presente invención se caracteriza por tener un enlace -NR- en la estructura entrecruzada. R se ilustrará en detalle en la presente memoria descriptiva, junto con otras características de la presente invención.
En la presente memoria descriptiva, "aminoácido" se usa en un significado que incluye aminoácidos con configuración natural L, y ejemplos de los mismos incluyen glicina, alanina, leucina, prolina, fenilalanina, tirosina, metionina, serina, treonina, cistina, cisteína, ácido aspártico, ácido glutámico, asparagina, glutamina, lisina, arginina, hidroxilisina, histidina, triptófano, valina, p-alanina y similares, y los a aminoácidos en ellos están configurados en L. En la presente memoria descriptiva, "aminoácido no natural" incluye, pero no se limita a, cuerpos configurados en D y cuerpos racémicos de los aminoácidos naturales descritos anteriormente, cuerpos configurados en L, cuerpos configurados en D y cuerpos racémicos de hidroxiprolina, norleucina, ornitina, naftilalanina, nitrofenilalanina, clorofenilalanina, fluorofenilalanina, tienilalanina, furilalanina, ciclohexilalanina, homoarginina, homoserina, ácido 3-amino-2-bencilpropiónico, aminoácidos de tipo N-Me y similares, y derivados de los mismos. Una gran cantidad de aminoácidos no naturales o derivados de aminoácidos son bien conocidos en la técnica, y se incluyen en "aminoácidos no naturales" a los que se hace referencia en la presente memoria descriptiva.
En la presente memoria descriptiva, cuando se hace referencia a "la cantidad de aminoácidos", se entiende el número de aminoácidos de aminoácidos y/o aminoácidos no naturales, y en un péptido que contiene tanto aminoácidos y aminoácidos no naturales, se entiende el número total de los mismos.
1. Péptido entrecruzado de la presente invención
El péptido entrecruzado (o imitación de péptido) que tiene una estructura entrecruzada no peptídica de la presente invención tiene una estructura que se describe a continuación.
[fórmula química 49]
Figure imgf000023_0002
Las realizaciones más específicas del péptido entrecruzado (o imitación de péptido) que tiene una estructura entrecruzada no peptídica de la presente invención tiene las siguientes estructuras.
[fórmula química 50]
Figure imgf000023_0001
Las definiciones de marcas en las fórmulas químicas descritas anteriormente (P), (P-1), (P-2), (P-3) y (P-4) son las que se describen a continuación.
Se selecciona X de las siguientes fórmulas.
[fórmula química 51]
Figure imgf000024_0001
(en las que, n representa un número entero de 1 a 12, preferiblemente un número entero de 1 a 7, más preferiblemente un número entero de 1 a 4. m representa un número entero de 1 a 24, preferiblemente un número entero de 1 a 11, más preferiblemente un número entero de 1 a 7. I representa un número entero de 1 a 24, preferiblemente un número entero de 1 a 12, más preferiblemente un número entero de 1 a 8). X se selecciona, más preferiblemente, de las fórmulas químicas descritas anteriormente (X-1), (X-2), (X-3) y (X-5), y lo más preferiblemente, X es (X-1).
Y se selecciona de las siguientes fórmulas.
(Compuesto Y1) En lo sucesivo, se denominan Y1-1 e Y1-2 en orden descendente.
[fórmula química 52]
Figure imgf000024_0002
[Compuesto Y4] En lo sucesivo, se denominan Y4-1 a Y4-5 en orden descendente.
[fórmula química 55]
lado del centro de lado del
entrecruzamlento
Figure imgf000025_0001
péptido
lado del centro de
entrecruzamlento lado del V t o M r í péptido
lado del centro de lado del
entrecruzamlento
Figure imgf000025_0002
péptido
lado del centro de
entrecruzamlento
Figure imgf000025_0003
lado del centro de lado del
entrecruzamiento
Figure imgf000025_0004
péptido
lado del centro de
Figure imgf000025_0005
l ado dol
Figure imgf000025_0006
entrecruzamlento centro de V i o - S - —
entrecruzamiento
lado del centro de
entrecruzamlento
Figure imgf000025_0007
(en las que, o representa un número entero de 1 a 12, preferiblemente un número entero de 1 a 8, más preferiblemente un número entero de 1 a 6. p representa un número entero de 1 a 27, preferiblemente un número entero de 1 a 11, preferiblemente un número entero de 1 a 7. q representa un número entero de 1 a 24, preferiblemente un número entero de 1 a 12, más preferiblemente un número entero de 1 a 8. r representa un número entero de 1 a 8, preferiblemente un número entero de 1 a 4. s representa un número entero número entero de 1 a 16, preferiblemente un número entero de 1 a 11, más preferiblemente un número entero de 1 a 6. t representa un número entero de 1 a 15, preferiblemente un número entero de 1 a 10, más preferiblemente un número entero de 1 a 4. u representa un número entero de 1 a 11, preferiblemente un número entero de 1 a 7, más preferiblemente un número entero de 1 a 3. W representa O o S).
Más preferiblemente, Y se selecciona de (Y1-1), (Y1-2), (Y4-1), (Y4-2) y (Y4-4), lo más preferiblemente, Y se selecciona de (Y1- 1)
Z representa hidrógeno, un grupo alquilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 30 átomos de carbono, un grupo acilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 36 átomos de carbono, polietilenglicol, un grupo t-Boc, un grupo Fmoc, un grupo Cbz o un grupo Nosilo.
Aquí, el sustituyente no está particularmente restringido siempre que se pueda enlazar mediante una reacción orgánica, y se pueda seleccionar opcionalmente dependiendo del objeto del péptido entrecruzado a sintetizar. Los ejemplos de los mismos incluyen, pero no se limitan a, un grupo carboxilo, un grupo aldehído, un grupo amino, un grupo tiol, un grupo maleimida, un grupo éster de N-hidroxisuccinimida, un grupo éster de pentafluorofenilo, un grupo isocianato, un grupo tioisocianato, un grupo acilo, un grupo alquilo, un grupo alquinilo, un grupo alquenilo o un grupo alcoxi, o polietilenglicol y similares.
Preferiblemente, Z es un grupo acilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 36 átomos de carbono (por ejemplo, un grupo acetilo), un grupo alquilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 30 átomos de carbono, un polietilenglicol que tiene un peso molecular de 100 a 20.000 Da, un grupo t-Boc, un grupo Fmoc, un grupo Cbz o un grupo Nosilo, o cualquiera seleccionado del grupo que consiste en grupos representados por la siguiente fórmula.
[fórmula química 61]
Figure imgf000026_0001
(en la que, n representa un número entero de 1 a 12, preferiblemente de 1 a 8, más preferiblemente de 1 a 6, q' representa un número entero de 1 a 12, preferiblemente de 1 a 8, más preferiblemente de 1 a 4, v representa 1 o 2, w representa un número entero de 1 a 12, preferiblemente de 1 a 8, más preferiblemente de 1 a 4 (aquí, R5 está representado por la siguiente fórmula:
[fórmula química 62]
Figure imgf000026_0002
R6 está representado por la siguiente fórmula:
[fórmula química 63]
Figure imgf000026_0003
Más preferiblemente, Z es hidrógeno, un grupo acilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 16 átomos de carbono, un polietilenglicol que tiene un peso molecular de 1.000 a 20.000 Da, un grupo t-Boc, un grupo Fmoc, un grupo Cbz o un grupo Nosilo .
En el péptido entrecruzado de la presente invención, es posible introducir un grupo funcional o una sustancia capaz de contribuir a la estabilidad y la actividad fisiológica de un péptido y similares en Z, mejorando así la actividad fisiológica de un péptido y permitir que un péptido tenga una nueva función, y dicho péptido también se incluye en el alcance de la presente invención.
Los (A) y (B) descritos anteriormente representan cada uno independientemente cualquier estructura representada por la siguiente fórmula:
Figure imgf000026_0004
Los Ri , R3 y R4 descritos anteriormente representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo metilo, y R2 representa un átomo de hidrógeno, o una cadena lateral de un aminoácido o aminoácido no natural. Cuando R2 es una cadena lateral de un aminoácido o un aminoácido no natural, su tipo no está particularmente restringido, y en el caso de, por ejemplo, serina, R2 es CH2OH.
El [E] descrito anteriormente representa un péptido compuesto por cualquier aminoácido y/o aminoácidos no naturales, o un átomo de hidrógeno o un grupo acilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 6 átomos de carbono, representa preferiblemente al menos un aminoácido y/o aminoácido no natural, o un átomo de hidrógeno o un grupo acetilo. El [G] descrito anteriormente representa un péptido compuesto de cualquiera de los aminoácidos y/o aminoácidos no naturales, o un grupo hidroxilo o un grupo amino. La longitud de un péptido puede seleccionarse arbitrariamente en la presente invención, y para el propósito de síntesis de una imitación de péptido y un péptido que tiene actividad fisiológica y, desde el punto de vista de una tecnología de síntesis de péptidos, el número de aminoácidos y/o aminoácidos no naturales de [E] o [G] es de 1 a 20, preferiblemente de 1 a 10. Sin embargo, el número de aminoácidos no está limitado a esto.
Se pueden unir varios grupos de modificación adicionales al terminal de [E] y/o [G], y también estas realizaciones están incluidas en el alcance del péptido entrecruzado de la presente invención. Dicho péptido entrecruzado puede obtenerse uniendo un grupo de modificación al terminal de [E] y/o [G] utilizando un método conocido después de la síntesis del péptido entrecruzado descrito anteriormente, o utilizando un aminoácido que constituye el terminal de [E] y/o [G] que porta un grupo de modificación en un proceso de síntesis de un péptido entrecruzado de la presente invención.
Por el contrario, el [F] descrito anteriormente es un péptido compuesto de cualquiera de los aminoácidos y/o aminoácidos no naturales, y su longitud puede seleccionarse arbitrariamente dependiendo de el péptido fisiológicamente activo que se va a imitar, y el número de aminoácidos ácidos y/o aminoácidos no naturales es de 1 a 20, preferiblemente de 2 a 20, más preferiblemente de 2 a 15, más preferiblemente de 3 a 10. Sin embargo, el número de aminoácidos no está limitado a esto.
La suma de los números de aminoácidos o aminoácidos no naturales de [E], [F] y [G] es al menos 3, preferiblemente al menos 4, más preferiblemente al menos 5.
Cuando el número de aminoácidos de [F] es 10 o menos, el X descrita anteriormente es una cadena de alquileno que tiene de 1 a 8 átomos de carbono, preferiblemente una cadena de metileno, o una cadena de polioxialquileno que tiene de 1 a 16, preferiblemente que tiene 1 a 8 átomos de carbono, preferiblemente una cadena de polioxietilenglicol, y Y es una cadena de alquileno que tiene 1 a 8 átomos de carbono, preferiblemente una cadena de metileno, o una cadena de polioxialquileno que tiene 1 a 16, preferiblemente que tiene 1 a 8 átomos de carbono, preferiblemente una cadena de polietilenglicol.
En el péptido entrecruzado de la presente invención, también es posible unir adicionalmente cualquier sustancia, por ejemplo, un compuesto de bajo peso molecular o alto peso molecular, un péptido, un cuerpo de soporte u otras sustancias al terminal N de el péptido [E] o al terminal C de un péptido [G] o ambos terminales, y también los péptidos entrecruzados que portan estas sustancias unidas se incluyen en el alcance de la presente invención. Los ejemplos de los mismos incluyen, pero no se limitan a, un compuesto o péptido de bajo peso molecular que muestra una capacidad de unión específica para un tejido, célula o proteína particular, un pigmento fluorescente, un compuesto que contiene un isótopo radiactivo, un péptido migratorio intracelular, un compuesto o péptido de bajo peso molecular que tiene actividad citocida tal como doxorrubicina y similares, polietilenglicol, un grupo acilo que tiene de 1 a 18 átomos de carbono, un grupo alquilo que tiene de 1 a 18 átomos de carbono, una placa de fase sólida y similares.
El terminal N de [E] descrito anteriormente puede estar protegido por un grupo protector de amino. Los ejemplos del grupo protector de amino incluyen, pero no se limitan a, Fmoc, Boc, CbZ, Tritilo o un grupo acetilo.
El terminal C de [G] descrito anteriormente puede estar protegido por un grupo protector de O-éster o un grupo protector de -NH-bencilo. El grupo protector de O-éster incluye, pero no se limita a, un grupo -O-bencilo, un grupo -O-t-butilo, y adicionalmente, grupos bencilo sustituidos en -O-alcoxi- descritos a continuación.
2. Síntesis del compuesto intermedio
Como el compuesto intermedio para sintetizar un péptido entrecruzado de la presente invención, los siguientes compuestos son útiles.
[fórmula química 65]
Figure imgf000028_0001
Además, como el compuesto intermedio para sintetizar un péptido entrecruzado de la presente invención, los siguientes compuestos son útiles.
[fórmula química 66]
Figure imgf000028_0002
X, Y, R1 , R2 , R3 y R4 son como se describieron anteriormente.
[A], [B], [C] y [D] son como se describieron anteriormente. Cuando [A], [B], [C] o [D] es un péptido, la suma de los números de aminoácidos es al menos 3, preferiblemente al menos 4, y el número de aminoácidos de cada fracción puede ser opcionalmente seleccionado dependiendo del péptido entrecruzado deseado. Específicamente, el tipo de aminoácido y/o aminoácido no natural y el número de aminoácidos pueden seleccionarse opcionalmente dependiendo de cuál de [A], [B], [C] y [D] del compuesto descrito anteriormente corresponde a un péptido en el anillo después de la circularización o un péptido en el terminal N o terminal C fuera del anillo después de la circularización.
Los (a) y (c) descritos anteriormente representan cada uno independientemente -NH- o un enlace sencillo, y (b) y (d) representan cada uno independientemente -(C=O)- o un enlace sencillo. Cuando dos o más (a)s, (b)s, (c)s o (d)s están contenidos en las fórmulas descritas anteriormente, cada uno de ellos puede ser igual o diferente.
P1 y P3 representan cada uno independientemente un grupo protector de amino o un átomo de hidrógeno, y P2 y P4 representan cada uno independientemente un grupo protector de -O-éster, un grupo protector de -NH-bencilo, un grupo amino o un grupo hidroxilo. En la fórmula descrita anteriormente, P1, P2 , P3 o P4 pueden ser iguales o diferentes, y cuando dos o más P1s, P2s, P3s o P4s están contenidos en la misma fórmula, cada uno de ellos puede ser igual o diferente, y diferente es preferible.
Z representa hidrógeno, un grupo alquilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 30 átomos de carbono, un grupo acilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 36 átomos de carbono, polietilenglicol, un grupo t-Boc, un grupo Fmoc, un grupo Cbz o un grupo Nosilo.
Aquí, el sustituyente no está particularmente restringido siempre que pueda unirse mediante una reacción orgánica, y puede seleccionarse opcionalmente dependiendo del objetivo del péptido entrecruzado a sintetizar. Los ejemplos de los mismos incluyen, pero no se limitan a, un grupo carboxilo protegido, un grupo amino protegido, un grupo tiol protegido, un grupo acilo, un grupo alquilo, un grupo alquinilo, un grupo alquenilo o un grupo alcoxi, o polietilenglicol y similares.
Los ejemplos del grupo protector de amino descrito anteriormente representado por Pi o P3 incluyen, pero no se limitan a, Fmoc, Boc, CbZ, Tritilo, un grupo acetilo y, adicionalmente, compuestos que funcionan como un cuerpo de soporte de péptidos en síntesis en fase líquida de un péptido.
Cuando los P1 y P3 descritos anteriormente son ambos un grupo protector de amino, es preferible una combinación de grupos protectores capaces de realizar la desprotección en diferentes condiciones. Cuando, por ejemplo, un componente es un grupo Boc, es preferible que el otro grupo protector sea un grupo Z o un grupo Fmoc.
El grupo protector de -O-éster descrito anteriormente representado por P2 o P4 incluye, pero no se limita a, un grupo -O-bencilo, un grupo -O-t-butilo, un grupo bencilo sustituido en -O-alcoxi, un grupo metilo sustituido en -O-, un derivado de -O-difenilmetano y, adicionalmente, compuestos que funcionan como un cuerpo de soporte para el péptido en la síntesis de un péptido en fase líquida.
Cuando los P2 y P4 descritos anteriormente son ambos un grupo protector de -O-éster, es preferible una combinación de grupos protectores capaces de realizar la desprotección en diferentes condiciones. Cuando, por ejemplo, un componente es un grupo -O-t-butilo, es preferible que el otro grupo protector sea un grupo -O-tetrahidropiranilo.
Los ejemplos del compuesto que funciona como un cuerpo de soporte de péptidos en la síntesis de un péptido en fase líquida (en la presente memoria descriptiva, a veces denominada "Entramador") incluyen compuestos descritos en el documento JP-A No. 2004-59509, compuestos descritos en publicación internacional Pc T WO2007/034812, compuestos descritos en la publicación internacional PCT WO2007/122847, compuestos descritos en la publicación internacional PCT WO2010/ 104169 y compuestos descritos en la publicación internacional PCT WO2010/113939. Los contenidos descritos en estas publicaciones constituyen parte de la presente memoria descriptiva al incorporarse por referencia.
El grupo bencilo sustituido con alcoxi preferible incluye,
compuestos que tienen una estructura que se describe a continuación (denominada "Ka" en algunos casos en la presente memoria descriptiva):
[fórmula química 67]
Figure imgf000029_0001
(en la que, R1 y R5 representan un átomo de hidrógeno, y R2 , R3 y R4 representan un grupo alcoxilo que tiene de 18 a 30, preferiblemente de 18 a 22 átomos de carbono. En la fórmula, RX tiene un sitio activo reactivo representado por la siguiente fórmula.
[fórmula química 68]
H, H H,
— CHO — C — OH — C— NHR7 --c — SH
«6 , O
(en la que, R7 representa un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo que tiene de 1 a 6 átomos de carbono, un grupo bencilo o un grupo bencilo sustituido con alcoxi, y R6 representa un átomo de hidrógeno, un grupo fenilo o un grupo fenilo sustituido con alcoxi)
compuestos que tienen una estructura que se describe a continuación (denominada "Kb" en algunos casos en la presente memoria descriptiva):
[fórmula química 69]
Figure imgf000029_0002
(en la que, R2, R4 y R5 representan un átomo de hidrógeno, y R1 y R3 representan un grupo alcoxilo que tiene de 18 a 30, preferiblemente de 18 a 22 átomos de carbono. En la fórmula, RY tiene un sitio activo reactivo representado por la siguiente fórmula.
[fórmula química 70]
H, H H,
---- CHO — C — OH ---- y — NHR7 -----c — SH
Re , O
(en la que, R7 representa un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo que tiene de 1 a 6 átomos de carbono, un grupo bencilo o un grupo bencilo sustituido con alcoxi, y R6 representa un átomo de hidrógeno, un grupo fenilo o un grupo fenilo sustituido con alcoxi), y
compuestos que tienen una estructura que se describe a continuación (denominada "Kc" en algunos casos en la presente memoria descriptiva):
[fórmula química 71]
Figure imgf000030_0001
(en la que, R1, R3 y R5 representan un átomo de hidrógeno, y R2 y R4 representan un grupo alcoxilo que tiene de 18 a 30, preferiblemente de 18 a 22 átomos de carbono. En la fórmula, RZ tiene un sitio activo reactivo representado por la siguiente fórmula.
[fórmula química 72]
H , H H,
---- CHO — C — OH — C— NHR7 ------c — SH
Re , O
(en la que, R7 representa un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo que tiene de 1 a 6 átomos de carbono, un grupo bencilo o un grupo bencilo sustituido con alcoxi, y R6 representa un átomo de hidrógeno, un grupo fenilo o un grupo fenilo sustituido con alcoxi).
Mediante el uso de los grupos bencilo sustituidos con alcoxi Ka a Kc descritos anteriormente en combinación con otros grupos protectores de amino y grupos protectores de -O-éster, toda la reacción para sintetizar un péptido entrecruzado de la presente invención, incluida la síntesis de péptidos, puede llevarse a cabo en una fase líquida. Ka se usa preferiblemente para diseñar la desprotección con 50 a 100% de ácido trifluoroacético, Kb se usa preferiblemente para diseñar la desprotección con 1 a 100% de ácido trifluoroacético y Kc se usa preferiblemente para diseñar la desprotección con 95 a 100% de trifluoroacético ácido.
Es particularmente preferible usar Ka y Kb en combinación o Kc y Kb en combinación, debido a una diferencia en la propiedad de los mismos, por ejemplo, porque solo Kb puede desprotegerse selectivamente en condiciones de 1 a 5% de ácido trifluoroacético.
En otra realización preferible, es preferible usar Kb como P2 o P4 de un componente y usar un grupo protector de -O-éster que puede ser desprotegido en condiciones ácidas ultra débiles, condiciones básicas y condiciones reductoras como P2 o P4 del otro componente. El grupo protector escindible en condiciones ácidas ultra débiles incluye un grupo -O-tetrahidropiranilo, el grupo protector escindible en condiciones básicas incluye un grupo -O-fluorenilmetilo, y el grupo protector escindible en condiciones reductoras incluye un grupo -O-bencilo.
Los péptidos entrecruzados (P-1) y (P-2) de la presente invención pueden sintetizarse, por ejemplo, mediante reacciones mostradas a continuación usando los compuestos intermedios descritos anteriormente.
[fórmula química 73]
Figure imgf000031_0001
- ,n
(en la que, las definiciones de las marcas son las mismas que las descritas para los compuestos intermedios descritos anteriormente y los péptidos entrecruzados descritos anteriormente).
Es decir, el péptido entrecruzado final (P-1) puede fabricarse a través de un compuesto intermedio (M-1) y un compuesto intermedio (M-2) en este orden. En este caso, una secuencia de péptidos endocíclicos [F] se fabrica a partir de secuencias de péptidos [B] y [C] del compuesto intermedio, y una secuencia de péptidos [A] constituye el terminal N y una secuencia de péptidos [D] constituye el terminal C.
En contraste, el péptido entrecruzado final (P-2) puede fabricarse a través de un compuesto intermedio (M-1) y un compuesto intermedio (M-3) en este orden. En este caso, una secuencia de péptido endocíclico [F] se fabrica a partir de secuencias de péptidos [A] y [D] del compuesto intermedio, y un aminoácido de un péptido [C] constituye el terminal N y un péptido [B] constituye el terminal C.
Por lo tanto, un péptido entrecruzado que tiene una estructura entrecruzada en cualquier sitio en una secuencia peptídica puede sintetizarse fácilmente. Además, dado que la secuencia de un péptido [A], [B], [C] o [D] puede seleccionarse opcionalmente, una secuencia de aminoácidos endocíclica y una secuencia de aminoácidos exocíclica del péptido entrecruzado pueden operarse fácilmente a voluntad en la presente invención. Cuando uno o dos o más de [A], [B], [C] y [D] son un enlace sencillo, también puede fabricarse un péptido cíclico que no tiene péptido exocíclico presente o un péptido cíclico en el que un péptido se extiende en una sola dirección del anillo, y estos también están incluidos en el alcance de la presente invención.
En el compuesto intermedio (M-1), todos los terminales están protegidos, y el compuesto intermedio (M-2) o el compuesto intermedio (M-3) pueden fabricarse desprotegiendo cualquier terminal N y cualquier terminal C del compuesto intermedio (M-1), y dependiendo del método de síntesis del compuesto intermedio, el compuesto intermedio (M-2) o el compuesto intermedio (M-3) pueden sintetizarse directamente no a través del compuesto intermedio (M-1).
La reacción de desprotección puede llevarse a cabo mediante un método bien conocido por los expertos en la materia. Ejemplos de los mismos incluyen, pero no se limitan a, desprotección con un ácido tal como ácido trifluoroacético, HCl 4 N/dioxano y similares, desprotección mediante una reacción de hidrogenación catalítica usando paladio como catalizador, desprotección con una base tal como DBU y similares.
Se puede sintetizar un péptido entrecruzado (P-1) o (P-2) de la presente invención realizando una reacción de condensación en el compuesto intermedio (M-2) o (M-3). La reacción de condensación se puede llevar a cabo mediante un método conocido por los expertos en la técnica, y sus ejemplos incluyen, pero no se limitan a, un método que usa un agente de condensación de carbodiimida tal como diisopropilcarbodiimida y similares, un método que usa un agente de condensación de uronio tal como HBTU y similares; etc.
La síntesis de un péptido entrecruzado a partir de un compuesto intermedio de otra realización de la presente invención se describirá a continuación.
Un péptido entrecruzado (P-3) de la presente invención puede sintetizarse por el mismo método que el utilizado para (M-1), como se describe a continuación, usando el otro compuesto intermedio descrito anteriormente.
[fórmula química 74]
Figure imgf000032_0001
(en la que, las definiciones de las marcas son como se describieron anteriormente).
Un péptido entrecruzado (P-4) de la presente invención puede sintetizarse por el mismo método que el utilizado para (M-1), como se describe a continuación, usando el otro compuesto intermedio descrito anteriormente.
[fórmula química 75]
Figure imgf000032_0002
(en la que, las definiciones de las marcas son como se describieron anteriormente).
3. Síntesis de compuestos intermedios
El compuesto intermedio (M-1) de la presente invención se puede sintetizar sintetizando un compuesto que contiene X que forma parte de un entrecruzamiento (aquí, denominado "componente lateral X") y un compuesto que contiene Y que forma parte de un entrecruzamiento (aquí denominado "componente lateral Y"), separadamente, luego, enlazando ambos compuestos.
(3-1. Síntesis del componente lateral X)
Se puede sintetizar un componente lateral X a través de los siguientes etapas.
(a) una etapa de preparación un primer componente, que comprende los siguientes etapas,
(a-1) una etapa de, si es necesario, condensar un grupo protector carboxilo con aminoácidos o un péptido que constituye una secuencia peptídica parcial del péptido entrecruzado, y además, si es necesario, alargar el grupo condensado,
(a-2) una etapa de hacer reaccionar el lado terminal N del péptido o aminoácido sintetizado o el grupo protector carboxilo con un derivado de aminoácido que contiene en la cadena lateral un enlazador que forma parte del entrecruzamiento del péptido entrecruzado, para sintetizar el péptido que tiene el enlazador en la cadena lateral o el derivado de aminoácido que tiene protegido el grupo carboxilo, y
(a-3) una etapa de, si es necesario, realizar además una reacción de alargamiento del péptido para alargar el péptido. La reacción de alargamiento de péptidos puede llevarse a cabo con base en un método de síntesis de péptidos conocido, y puede llevarse a cabo mediante un método de fase sólida o un método de fase líquida, y desde el punto de vista de una mayor eficacia de la reacción, y similares se prefiere un método de síntesis en fase líquida. En el caso de la síntesis en una fase líquida, es preferible proteger el terminal C de un péptido con un grupo bencilo sustituido con alcoxi.
El enlazamiento de un compuesto que contiene un enlazador al terminal N de un péptido se puede llevar a cabo mediante una reacción de condensación conocida por los expertos en la materia, por ejemplo, usando la reacción de Mitsunobu, sin embargo, el método no se limita a esto.
Los ejemplos de síntesis de un componente lateral X incluyen, pero no se limitan a, las reacciones ejemplificadas a continuación, y los expertos en la materia pueden realizar diversos cambios usando tecnologías conocidas.
[fórmula química 76]
Figure imgf000033_0003
(aquí, las definiciones de las marcas son como se describieron anteriormente, y T representa -OH, -OP5, -NH2, -NHP6 o -NHNs. P5 y P6 representan un grupo protector de hidroxilo y un grupo protector de amino, respectivamente, conocidos por los expertos en la técnica).
Los ejemplos del compuesto que proporciona X en síntesis de un componente lateral X incluyen preferiblemente, pero sin limitación, los siguientes compuestos.
Figure imgf000033_0001
(en la que, n representa un número entero de 1 a 10, preferiblemente un número entero de 1 a 7, más preferiblemente un número entero de 1 a 4, y las definiciones de R1 y R4 son como se describieron anteriormente. T representa -OH, -OP2, -NH2, -NHP3 o -NHNs).
Aquí, [L] se selecciona de los siguientes compuestos.
[fórmula química 78]
Figure imgf000033_0002
(en la que, n representa un número entero de 1 a 10, preferiblemente un número entero de 1 a 7, más preferiblemente un número entero de 1 a 4, m representa un número entero de 1 a 27, preferiblemente un número entero de 1 a 11, más preferiblemente un número entero de 1 a 7, y L representa un número entero de 1 a 24, preferiblemente un número entero de 1 a 12, más preferiblemente un número entero de 1 a 8.)).
A continuación, se ilustrará uno de los ejemplos de compuestos sintetizadores que proporcionan diversas X, utilizados en la síntesis de un componente lateral X.
Figure imgf000034_0001
(3-2. Síntesis del componente lateral Y)
Un componente lateral Y se puede sintetizar a través de las siguientes etapas.
(b-1) una etapa de condensación de un grupo protector carboxilo con aminoácidos o un péptido que constituye una secuencia peptídica parcial del péptido entrecruzado y, si es necesario, alargar el grupo condensado,
(b-2) una etapa de hacer reaccionar el terminal N del péptido (en este caso, es preferible que el terminal N sea, por ejemplo, modificado con Ns o modificado con bromoacetilo) o el derivado de aminoácido sintetizado con un compuesto que contiene un enlazador que forma parte de un entrecruzamiento del péptido entrecruzado, para sintetizar un péptido o un derivado de aminoácido que tiene una amina secundaria en el terminal N que contiene el enlazador, y (b-3) una etapa de, si es necesario, realizar además una reacción de alargamiento del péptido para alargar el péptido. Los ejemplos de síntesis de un componente lateral Y incluyen, pero no se limitan a, las reacciones ejemplificadas a continuación, y los expertos en la materia pueden realizar diversos cambios usando tecnologías conocidas.
[fórmula química 80]
Figure imgf000034_0002
(Las definiciones son como se describieron anteriormente).
(3-2-1) Una realización en la que Y es el compuesto Y1-1 descrito anteriormente:
[fórmula química 81]
Figure imgf000035_0001
(Las definiciones son como se describieron anteriormente. Aquí, se omite un grupo protector (-(d)-P4) unido al lado del terminal C de [D]).
Otra realización en la que Y es el compuesto Y1-1 descrito anteriormente:
[fórmula química 82]
Figure imgf000035_0002
(Las definiciones son como se describieron anteriormente).
(3-2-2) Un caso en el que Y es el compuesto Y1-2 descrito anteriormente:
[fórmula química 83]
Figure imgf000035_0003
(Las definiciones son como se describieron anteriormente. Aquí, se omite un grupo protector (-(d)-P4) unido al lado del terminal C de [D]).
(3-3. Etapa de conversión de un grupo funcional)
Si es necesario, también es posible, en la preparación de un primer componente o un segundo componente, convertir el grupo funcional de un enlazador contenido en él en una forma con la que el enlazador pueda ser sometido a la reacción de formación de entrecruzamiento posterior. Como método para convertir un grupo funcional, se pueden usar métodos conocidos y, por ejemplo, al desproteger un grupo TBDPS, se puede llevar a cabo con fluoruro de tetrabutilamonio y al convertir un grupo hidroxilo en un aldehído, se puede llevar a cabo por la reacción de oxidación de Dess-Martin.
(3-4. Síntesis del compuesto intermedio)
A continuación, el compuesto intermedio (M-1) de la presente invención se puede sintetizar uniendo un componente lateral X y un componente lateral Y. La reacción de condensación se puede llevar a cabo mediante un método conocido por los expertos en la técnica, y sus ejemplos incluyen, pero no se limitan a, la reacción de Mitsunobu, una reacción de aminación reductora o la reacción de Aza-Wittig y la reacción de reducción posterior. Particularmente, la reacción de Mitsunobu es preferible. Mediante esto, se puede sintetizar un compuesto intermedio que tiene una estructura en la que un primer componente y un segundo componente se enlazan a través de una amina secundaria o una amina terciaria. Los ejemplos de síntesis de un compuesto intermedio incluyen, pero no se limitan a, las reacciones que se describen a continuación, y los expertos en la materia pueden hacer varios cambios utilizando tecnologías conocidas.
[fórmula química 87]
Figure imgf000036_0001
(en la que, las definiciones de las marcas son como se describieron anteriormente).
En la reacción descrita anteriormente, es necesario para el componente lateral X y el componente lateral Y que uno de sus extremos que apunta al centro de entrecruzamiento del péptido entrecruzado a sintetizar sea -NHNs y el otro es -OH
Un ejemplo de síntesis de un compuesto intermedio usando una reacción de aminación reductora o la reacción de Aza-Wittig y la reacción de reducción posterior se ilustrarán a continuación, como otra realización de la reacción de condensación.
[fórmula química 88]
Figure imgf000037_0001
(en la que, las definiciones de las marcas son como se describieron anteriormente. Aquí, Rg representa un grupo NH2 o un grupo N3).
En la reacción descrita anteriormente, es necesario para el componente lateral X y el componente lateral Y que uno de sus extremos que apunta al centro de entrecruzamiento del péptido entrecruzado a sintetizar sea -NH2 o -N3 y el otro es -CHO.
El compuesto intermedio (M-4) de la presente invención se puede sintetizar haciendo reaccionar mutuamente los componentes lateral X, por ejemplo, usando la reacción de Mitsunobu, pero el método de síntesis no se limita a esto. Por ejemplo, el compuesto intermedio puede sintetizarse mediante la siguiente reacción, pero el método de síntesis no se limita a la siguiente reacción, y los expertos en la materia pueden realizar diversos cambios utilizando tecnologías conocidas.
[fórmula química 89]
Figure imgf000037_0002
(en la que, las definiciones de las marcas son como se describió anteriormente, sin embargo, las representadas por la misma marca en la fórmula pueden ser iguales o diferentes).
El compuesto intermedio (M-5) de la presente invención se puede sintetizar haciendo reaccionar mutuamente los componentes laterales Y, por ejemplo, usando la reacción de Mitsunobu, pero el método de síntesis no se limita a esto. Por ejemplo, el compuesto intermedio puede sintetizarse mediante la siguiente reacción, pero el método de síntesis no se limita a la siguiente reacción, y los expertos en la materia pueden realizar diversos cambios utilizando tecnologías conocidas.
[fórmula química 90]
Figure imgf000038_0001
(en la que, las definiciones de las marcas son como se describió anteriormente, sin embargo, las representadas por la misma marca en la fórmula pueden ser iguales o diferentes).
4. Método de síntesis del péptido entrecruzado de la presente invención.
La síntesis de un péptido entrecruzado como una realización de la presente invención se puede llevar a cabo a través de los siguientes etapas:
(a) una etapa de sintetizar un primer componente que tiene una estructura que se describe a continuación (componente lateral X):
[fórmula química 91]
Figure imgf000038_0002
(Las definiciones son las descritas anteriormente).
(b) una etapa de sintetizar un segundo componente que tiene una estructura descrita a continuación (componente lateral Y):
[fórmula química 92]
Figure imgf000039_0001
(Las definiciones son las descritas anteriormente),
(c) una etapa de hacer reaccionar el primer componente descrito anteriormente (componente lateral X) y el segundo componente descrito anteriormente (componente lateral Y) para sintetizar un compuesto intermedio descrito a continuación:
[fórmula química 93]
Figure imgf000039_0002
(Las definiciones son las descritas anteriormente), y
(d) una etapa de sintetizar un péptido entrecruzado descrito a continuación a partir del compuesto intermedio descrito anteriormente, mediante una reacción de condensación:
[fórmula química 94]
Figure imgf000039_0003
Es decir, el método de sintetizar un péptido entrecruzado como una realización de la presente invención puede llevarse a cabo mediante una etapa que contiene los siguientes etapas (a) a (g):
(a) una etapa de preparación de un primer componente (componente A), que comprende los siguientes etapas,
(a-1) una etapa de, si es necesario, condensar un grupo protector de carboxilo con aminoácidos o un péptido que constituye una secuencia peptídica parcial del péptido entrecruzado, y además, si es necesario, alargar el grupo condensado,
(a-2) una etapa para hacer reaccionar el lado del terminal N del péptido o aminoácido sintetizado o el grupo protector de carboxilo con un derivado de aminoácido que contiene en la cadena lateral un enlazador que forma parte de un entrecruzamiento del péptido entrecruzado, para sintetizar el péptido que tiene el enlazador en la cadena lateral o el derivado de aminoácido que tiene protegido el grupo carboxilo,
(a-3) una etapa de, si es necesario, realizar además una reacción de alargamiento del péptido para alargar el péptido, y
(a-4) una etapa de, si es necesario (es decir, cuando el extremo del enlazador no es reactivo), convertir el grupo funcional del enlazador en una forma con la que el enlazador se pueda someter a la reacción posterior de formación del entrecruzamiento, (b)
(b) una etapa de preparación de un segundo componente (componente B), que comprende los siguientes etapas, (b-1) una etapa de condensar un grupo protector de carboxilo con aminoácidos o un péptido que constituye una secuencia peptídica parcial del péptido entrecruzado y, si es necesario, alargar el grupo condensado,
(b-2) una etapa para hacer reaccionar el terminal N del péptido o un sitio de reacción (por ejemplo, el terminal N) del derivado de aminoácido sintetizado con un compuesto que contiene un enlazador que forma parte de un entrecruzamiento del péptido entrecruzado, para sintetizar un péptido o un derivado de aminoácido que tiene una amina secundaria en el terminal N que contiene el enlazador,
(b-3) una etapa de, si es necesario, realizar además una reacción de alargamiento del péptido para alargar el péptido, y
(b-4) una etapa de, si es necesario (es decir, cuando el extremo del enlazador no es reactivo), convertir el grupo funcional del enlazador en una forma con la que el enlazador se pueda someter a la reacción posterior de formación del entrecruzamiento,
(c) una etapa de enlazamiento del primer componente (A) y el segundo componente (B) mediante la reacción de Mitsunobu, una reacción de aminación reductora o la reacción de Aza-Wittig y la posterior reacción de reducción, para preparar un compuesto intermedio que tenga una estructura en la que el primer componente y el segundo componente se enlazan a través de una amina secundaria o una amina terciaria,
(d-1) una etapa de, si es necesario, desproteger un grupo protector en el terminal N del péptido del primer componente (A) o el segundo componente (B),
(d-2) una etapa de, si es necesario, desproteger un grupo protector en el terminal C del péptido del primer componente (A) o el segundo componente (B),
(e) una etapa de condensación del terminal N o C del péptido del primer componente (A) con el terminal C o N del péptido del segundo componente (B) para formar un entrecruzamiento,
(f) una etapa de, si es necesario, procesar posteriormente el péptido entrecruzado por cualquier método conocido por los expertos en la materia, y
(g) una etapa de, si es necesario, desproteger el grupo protector.
La síntesis de un péptido entrecruzado descrito a continuación como otra realización de la presente invención se puede llevar a cabo mediante una etapa que comprende los siguientes etapas (a) a (g):
[fórmula química 95]
Figure imgf000040_0001
(a) una etapa de preparación de un primer componente (componente A1), que comprende los siguientes etapas,
(a-1) una etapa de, si es necesario, condensar un grupo protector de carboxilo con aminoácidos o un péptido que constituye una secuencia peptídica parcial del péptido entrecruzado, y además, si es necesario, alargar el grupo condensado,
(a-2) una etapa para hacer reaccionar el lado del terminal N del péptido o aminoácido sintetizado o el grupo protector de carboxilo con un derivado de aminoácido que contiene en la cadena lateral un enlazador que forma parte de un entrecruzamiento del péptido entrecruzado, para sintetizar el péptido que tiene el enlazador en la cadena lateral o el derivado de aminoácido que tiene el grupo carboxilo protegido,
(a-3) una etapa de, si es necesario, realizar además una reacción de alargamiento del péptido para alargar el péptido, y
(a-4) una etapa de, si es necesario (es decir, cuando el extremo del enlazador no es reactivo), convertir el grupo funcional del enlazador en una forma con la que el enlazador pueda someterse a la reacción posterior de formación del entrecruzamiento,
(b) una etapa de preparación de un segundo componente (componente A2), que comprende los siguientes etapas,
(b-1) una etapa de, si es necesario, condensar un grupo protector de carboxilo con aminoácidos o un péptido que constituye una secuencia peptídica parcial del péptido entrecruzado, y además, si es necesario, alargar el grupo condensado,
(b-2) una etapa de hacer reaccionar el lado del terminal N del péptido o aminoácido sintetizado o el grupo protector de carboxilo con un derivado de aminoácido que contiene en la cadena lateral un enlazador que forma parte de un entrecruzamiento del péptido entrecruzado, para sintetizar el péptido que contiene el enlazador en la cadena lateral o el derivado de aminoácido que tiene el grupo carboxilo protegido,
(b-3) una etapa de, si es necesario, realizar además una reacción de alargamiento del péptido para alargar el péptido, y
(b-4) una etapa de, si es necesario (es decir, cuando el extremo del enlazador no es reactivo), convertir el grupo funcional del enlazador en una forma con la que el enlazador pueda ser sometido a la reacción posterior de formación del entrecruzamiento,
(c) una etapa de enlazamiento del primer componente (A1) y el segundo componente (A2) mediante la reacción de Mitsunobu, una reacción de aminación reductora o la reacción de Aza-Wittig y la reacción de reducción subsiguiente, para preparar un compuesto intermedio que tenga una estructura en la que el primer componente (A1) y el segundo componente (A2) se enlazan a través de una amina secundaria o una amina terciaria,
(d-1) una etapa de, si es necesario, desproteger un grupo protector en el terminal N del péptido del primer componente (A1) o el segundo componente (A2),
(d-2) una etapa de, si es necesario, desproteger un grupo protector en el terminal C del péptido del primer componente (A1) o el segundo componente (A2),
(e) una etapa de condensación del terminal N o C del péptido del primer componente (A1) con el terminal C o N del péptido del segundo componente (A2) para formar un entrecruzamiento,
(f) una etapa de, si es necesario, procesar posteriormente el péptido entrecruzado por cualquier método conocido por los expertos en la materia, y
(g) una etapa de, si es necesario, desproteger el grupo protector.
La síntesis de un péptido entrecruzado descrita a continuación como otra realización más de la presente invención se puede llevar a cabo mediante una etapa que comprende las siguientes etapas (a) a (g):
[Fórmula química 96]
Figure imgf000041_0001
(a) una etapa para preparar un primer componente (componente B1), que comprende las siguientes etapas,
(a-1) una etapa de condensar un grupo protector de carboxilo con aminoácidos o un péptido que constituye una secuencia peptídica parcial del péptido entrecruzado y, si es necesario, alargar el grupo condensado,
(a-2) una etapa de hacer reaccionar el terminal N del péptido o un sitio de reacción (por ejemplo, el terminal N) del derivado de aminoácido sintetizado con un compuesto que contiene un enlazador que forma parte de un entrecruzamiento del péptido entrecruzado, para sintetizar un péptido o un derivado de aminoácido que tiene una amina secundaria en el terminal N que contiene el enlazador,
(a-3) una etapa de, si es necesario, realizar además una reacción de alargamiento del péptido para alargar el péptido, y
(a-4) una etapa de, si es necesario (es decir, cuando el extremo del enlazador no es reactivo), convertir el grupo funcional del enlazador en una forma con la que el enlazador pueda someterse a la reacción posterior de formación del entrecruzamiento,
(b) una etapa de preparación de un segundo componente (componente B2), que comprende los siguientes etapas,
(b-1) una etapa de condensar un grupo protector de carboxilo con aminoácidos o un péptido que constituye una secuencia peptídica parcial del péptido entrecruzado y, si es necesario, alargar el grupo condensado,
(b-2) una etapa para hacer reaccionar el terminal N del péptido o el derivado de aminoácido sintetizado con un compuesto que contiene un enlazador que forma parte de un entrecruzamiento del péptido entrecruzado, para sintetizar un péptido o un derivado de aminoácido que tiene una amina secundaria en el terminal N que contiene el enlazador,
(b-3) una etapa de, si es necesario, realizar además una reacción de alargamiento del péptido para alargar el péptido, y
(b-4) una etapa de, si es necesario (es decir, cuando el extremo del enlazador no es reactivo), convertir el grupo funcional del enlazador en una forma con la que el enlazador pueda ser sometido a la reacción posterior de formación de entrecruzamiento,
(c) una etapa de enlazar el primer componente (B1) y el segundo componente (B2) mediante la reacción de Mitsunobu, una reacción de aminación reductora o la reacción de Aza-Wittig y la reacción de reducción posterior, para preparar un compuesto intermedio que tenga una estructura en la que el primer componente y el segundo componente se enlazan a través de una amina secundaria o una amina terciaria,
(d-1) una etapa de, si es necesario, desproteger un grupo protector en el terminal N del péptido del primer componente (B1) o el segundo componente (B2),
(d-2) una etapa de, si es necesario, desproteger un grupo protector en el terminal C del péptido del primer componente (B1) o el segundo componente (B2),
(e) una etapa de condensar el terminal N o C del péptido del primer componente con el terminal C o N del péptido N o terminal C del segundo componente para formar un entrecruzamiento,
(f) una etapa de, si es necesario, procesar posteriormente el péptido entrecruzado por cualquier método conocido por los expertos en la materia, y
(g) una etapa de, si es necesario, desproteger el grupo protector.
Un péptido entrecruzado representado por (P-1) como una realización de la presente invención se usa a modo de ejemplo y las etapas del mismo se ilustrarán más específicamente a continuación.
4-1. La síntesis de un primer componente (componente lateral X) comprende la siguiente etapa:
es decir, una etapa de fabricar un primer componente que contiene un enlazador introducido, mediante un método que comprende
(1-1) una etapa de preparación de cualquier aminoácido en el que el terminal C está protegido con un vehículo hidrófobo,
(1-2) una etapa de alargar un péptido usando una reacción de condensación y un método de desprotección generalmente conocido,
(1-3) una etapa para introducir un enlazador, protegiendo un grupo amino de una cadena lateral de aminoácidos que actúa como un enlazador con un grupo Nosilo o condensando un aminoácido que tiene un grupo amino protegido con Nosilo en la cadena lateral o un aminoácido que tiene un grupo hidroxilo protegido en la cadena lateral,
(1-4) una etapa de, si es necesario, introducir una cadena de alquileno que actúa como una porción de entrecruzamiento en un grupo hidroxilo,
(1-5) una etapa de, si es necesario, continuar aún más una reacción de condensación para alargar el péptido, (1-6) una etapa de, si es necesario, convertir el grupo funcional del enlazador en una forma con la cual el enlazador puede ser sometido a la reacción de formación de entrecruzamiento posterior, y
(1-7) una etapa de, si es necesario, introducir un grupo -NHNs al enlazador.
Mediante el método descrito anteriormente, se puede sintetizar un primer componente (componente lateral X) en el que el enlazador es un grupo OH o un grupo OH protegido o el extremo es un grupo NH protegido con Ns.
Como el vehículo hidrófobo descrito anteriormente usado para la síntesis de péptidos de un primer componente, se puede usar cualquiera de los vehículos para la síntesis en fase sólida y los vehículos para la síntesis en fase líquida, y son preferibles los vehículos hidrófobos que se pueden usar para la síntesis en fase líquida. Los grupos bencilo sustituidos con alcoxi descritos anteriormente Ka, Kb y Kc se usan particularmente preferiblemente, aunque no hay restricción específica.
4-2. La síntesis de un segundo componente (componente lateral Y) comprende la siguiente etapa:
es decir, una etapa de fabricar un segundo componente que contiene un enlazador introducido, mediante un método que comprende
(2-1) una etapa de preparación de cualquier aminoácido en el que el terminal C está protegido con un vehículo hidrófobo,
(2-2) una etapa para alargar un péptido usando una reacción de condensación y un método de desprotección generalmente conocido,
(2-3) una etapa para proteger un grupo a-amino de un aminoácido como un sitio en el que se introduce un enlazador con un grupo Nosilo, o condensar un aminoácido que tiene un grupo a-amino protegido con Nosilo,
(2-4) una etapa para introducir un grupo OH protegido utilizando la reacción de Mitsunobu u otros métodos, (2-5) una etapa de, si es necesario, continuar aún más una reacción de condensación para alargar el péptido, (2-6) una etapa de, si es necesario, convertir el grupo funcional del enlazador en una forma con la cual el enlazador puede ser sometido a la reacción de formación de entrecruzamiento posterior, y
(2-7) una etapa de, si es necesario, introducir un grupo -NHNs al final de la porción de entrecruzamiento.
Mediante el método descrito anteriormente, se puede sintetizar un segundo componente (componente lateral Y) en el que el enlazador es un grupo OH o un grupo OH protegido o el extremo es un grupo NH protegido con Ns.
Como el vehículo hidrófobo descrito anteriormente se usa para la síntesis de péptidos de un segundo componente, se puede usar cualquiera de los vehículos para la síntesis en fase sólida y los vehículos para la síntesis en fase líquida, y son preferibles los vehículos hidrófobos que se pueden usar para la síntesis en fase líquida. Los grupos bencilo sustituidos con alcoxi descritos anteriormente Ka, Kb y Kc se usan particularmente preferiblemente, aunque no hay restricción específica.
A continuación, un primer componente y un segundo componente se hacen reaccionar para sintetizar un compuesto intermedio. Luego, el compuesto intermedio resultante se condensa para fabricar un péptido entrecruzado de la presente invención. En tal caso, Ka, Kb y Kc se usan preferiblemente para controlar cuál del terminal N y el terminal C del primer y segundo componentes deben ciclarse. Particularmente, es preferible que Ka o Kc se enlacen como un grupo protector a un extremo y Kb se enlace como un grupo protector al otro extremo, ya que la desprotección selectiva puede realizarse fácilmente en este caso.
4-3. El enlace de un primer componente y un segundo componente se puede lograr, por ejemplo, combinando un reactivo de fosfina tal como trifenilfosfina y similares con un reactivo de Mitsunobu como azodicarboxilato de dietilo y similares y realizando la reacción de Mitsunobu para unir una porción de entrecruzamiento del primer componente y una parte de entrecruzamiento del segundo componente. También se pueden enlazar (entrecruzar) mediante una reacción de aminación reductora o la reacción de Aza-Wittig y la reacción de reducción posterior.
4-4. La etapa de formar un enlace peptídico (cadena peptídica) mediante una reacción de condensación se puede lograr sometiendo cualquier terminal C y cualquier terminal N de un compuesto intermedio a una reacción de condensación conocida por los expertos en la técnica usando un agente de condensación tal como HATU, HBTU o TBTU y similares.
El método de síntesis de la presente invención puede incluir una etapa de desnosilación de cortar un grupo Nosilo de un péptido entrecruzado sintetizado, usando tiofenol y DBU.
El método de síntesis de la presente invención puede incluir, si es necesario, una etapa de realizar una modificación química adecuada antes de la desprotección global.
El método de síntesis de la presente invención puede incluir una etapa de desprotección de un grupo protector de la cadena lateral de un aminoácido de un péptido entrecruzado mediante un tratamiento ácido o de reducción, fabricando así un péptido entrecruzado desnudo.
El método de síntesis de la presente invención puede incluir, si es necesario, una etapa de realizar una modificación química adecuada después de la desprotección global.
El método de sintetizar por separado dos componentes, por ejemplo, un componente lateral X y un componente lateral Y tiene el mérito de que un péptido más largo puede sintetizarse fácilmente, o los tipos y longitudes de péptidos endocíclicos y exocíclicos pueden diseñarse y sintetizarse libremente, además, una parte del enlazador puede determinarse libremente. Además, dicho método tiene los méritos de que una porción de entrecruzamiento (porción correspondiente a X o Y) puede seleccionarse opcionalmente y la longitud y el tipo de la misma pueden ajustarse fácilmente.
Como la reacción de condensación usada en la presente invención, se puede usar cualquier método siempre que sea un método generalmente conocido en el campo de la síntesis de aminoácidos en una fase sólida o una fase líquida.
Como la reacción de desprotección usada en la presente invención, se puede usar cualquier método siempre que sea un método usualmente conocido o usado en el campo de la síntesis de aminoácidos, y sus ejemplos incluyen un método con Fmoc, un método con Boc y un Método con Z.
El método de protección de un aminoácido con Nosilo usado en la presente invención puede llevarse a cabo, por ejemplo, mediante un método de introducción de nosilamida a un grupo hidroxilo mediante la reacción de Mitsunobu o un método de reacción de un grupo amino con cloruro de Nosilo. Sin embargo, el método de protección no se limita a ellos, y puede llevarse a cabo utilizando un método generalmente conocido en el campo de la síntesis de aminoácidos.
El aminoácido protegido con Nosilo usado en la presente invención puede prepararse, por ejemplo, mediante Fmoc-Lys-OH, sin embargo, el método no se limita a esto, y puede prepararse usando un método usualmente conocido.
Como el método para proteger un grupo funcional OH de un compuesto capaz de constituir parte de un entrecruzamiento utilizado en la presente invención, se puede usar cualquier método siempre que sea un método generalmente conocido en el campo de la síntesis de aminoácidos, y se puede llevar a cabo usando, por ejemplo, TMS (trimetilsililo), TIPS (triisopropilsililo) o TBDPS (terc-butildifenilsililo), y se usa TBDPS preferiblemente. La reacción puede llevarse a cabo de acuerdo con un método ordinario.
Un compuesto que constituye parte de un entrecruzamiento en el que se protege un grupo funcional OH se introduce en un péptido. Los ejemplos del método de introducción incluyen, pero no se limitan específicamente a, la reacción de Mitsunobu, una reacción de aminación reductora y una reacción de condensación, y la reacción de Mitsunobu se usa preferiblemente.
Aquí, el tipo y la longitud de la estructura química que constituye parte de un entrecruzamiento pueden seleccionarse opcionalmente y no particularmente restringirse como se describe previamente en la presente memoria descriptiva, y los ejemplos de los mismos pueden incluir una cadena de alquileno, una cadena de alquilo, una cadena de éter, una cadena de tioéter, una cadena de amida, una cadena de uretano, una cadena de tiouretano y una cadena de polietilenglicol, y son preferibles una cadena de alquileno, una cadena de alquilo, una cadena de éter y una cadena de polietilenglicol. En el caso de la selección de un entrecruzamiento que no contiene un enlace disulfuro y un enlace amida en la estructura entrecruzada, existe el mérito de una buena resistencia a la degradación enzimática, por ejemplo, una excelente estabilidad contra una peptidasa y similares, en comparación con los péptidos entrecruzados convencionales que tienen un enlace disulfuro y un enlace amida.
Ejemplos
Los métodos para sintetizar un péptido entrecruzado de la presente invención se ilustrarán usando a modo de ejemplo un péptido WP9QY (W9) que tiene una estructura de secuencia peptídica que contiene un entrecruzamiento que se muestra a continuación, pero la presente invención no se limita a ellos.
[fórmula química 97]
Figure imgf000044_0001
En la presente memoria descriptiva y en los siguientes ejemplos, se usaron las abreviaturas que se muestran a continuación.
_________________________________ [Tabla 1]_________________________
Ac2O: anhídrido acético_____________________________________________
Boc: terc-butoxicarbonilo____________________________________________
CH2Cl2 (DCM): diclorometano________________________________________
CH3CN: acetonitrilo_________________________________________________
CHCb: cloroformo__________________________________________________
DBU: 1,8-diazab¡c¡clo[5.4.01 undec-7-eno______________________________
DEAD: Azodicarboxilato de dietilo_____________________________________
DIPCI: N.N'-Diisopropilcarbodiimida___________________________________
DIPEA: N.N'-Diisopropiletilamina______________________________________
DMAP: 4-dimetilaminopiridina________________________________________
DMF: N.N-Dimetilformamida_________________________________________
DMSO: dimetilsulfóxido_____________________________________________
DMT-MM: cloruro de 4-(4,6-d¡metox¡-1,3,5-tr¡az¡n-2-¡l)-4-met¡lmorfol¡n¡o_____
EDT: etanoditiol____________________________________________________
Et3N: tri etilamina___________________________________________________
EtOAc: acetato de etilo______________________________________________
EtOH: etanol_______________________________________________________
Fmoc: 9-fluorenilmetoxicarbonilo______________________________________
HATU: hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)1,1,3,3-tetrametiluronio
HBTU: hexafluorofosfato de 2-(1H-benzotr¡azol-1-¡l)1,1,3,3-tetramet¡luron¡o
HOAt: 1 -hidroxi-7-azabenzotriazol_____________________________________
HOBt: 1-hidroxibenzotriazol__________________________________________
IPE: éter diisopropílico______________________________________________
Ka: 3,4,5-Tri-octadesilbencilo_________________________________________
Kb: 2,4-di-docosiloxibencilo__________________________________________
MCA: cloroacetilo__________________________________________________
MeOH: metanol____________________________________________________
Mmt: p-metoxitritilo_________________________________________________
Mtt: p-metiltritilo____________________________________________________
Myr: miristilo_______________________________________________________
Ns-: 2-nitrobencenosulfonilo__________________________________________
NsCl: cloruro de 2-nitrobencenosulfonilo_______________________________
Pbf: 2,2,4,6,7-pentamet¡ld¡h¡drobenzofuran-5-sulfon¡lo____________________
PEG: polietilenglicol________________________________________________
PhSH: tiofenol_____________________________________________________
PhSMe: tioanisol___________________________________________________
PPh3: trifenilfosfi na_________________________________________________
TBDPS-: terc-butildifenilsililo_________________________________________
tBu: terc-butilo_____________________________________________________
TFA: ácido trifluoroacético___________________________________________
TFE: 2,2,2-trifluoroetanol____________________________________________
THF: tetrahidrofurano
TIS: triisopropulsilano
Trt: Tritilo
Síntesis del péptido entrecruzado
De acuerdo con el esquema de síntesis mostrado en la Figura 1 y la Figura 2, se sintetizó un péptido entrecruzado (Bdev-7) como una imitación de péptido del péptido W9, que tiene -(CH2)4-NH-(CH2)4- en lugar de un enlace disulfuro como la estructura entrecruzada.
La Figura 1 es una vista esquemática de una ruta de síntesis de un componente lateral Y. La Figura 2 es una vista esquemática de una ruta de síntesis en la que un componente lateral X sintetizado por separado se enlaza a un componente lateral Y mediante la reacción de Mitsunobu para sintetizar un compuesto intermedio (compuesto 14 en la figura), luego, un péptido entrecruzado (Bdev-7) de la presente invención se sintetiza mediante una reacción de condensación. La Figura 1 y la Figura 2 solo ilustran una ruta de síntesis de Bdev-7, y es posible realizar diversas alteraciones y rutas de síntesis de intercambio dentro del alcance de la presente invención.
Cada etapa se ilustrará en detalle a continuación.
(Ejemplo 1) Síntesis del compuesto intermedio (compuesto 13) Síntesis del compuesto 1
[fórmula química 98]
Figure imgf000045_0001
El alcohol 2,4-didocosoxi bencílico (denominado "KbOH") (7,69 g, 10,1 mmol) se disolvió en CH2Cl2 (200 mL) y se añadieron Fmoc-Gly-OH (4,52 g, 15,2 mmol, 1,5 equivalentes), DIPCI (3147 ^L, 20,2 mmol, 2,0 equivalentes) y DMa P (12,3 mg, 0,101 mmol, 0,01 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. El material precipitado se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. Al residuo se le añadió MeOH hasta la deposición de un material precipitado, que luego se filtró, se suspendió y se lavó con MeOH dos veces y se suspendió y se lavó con CH3CN, para obtener un compuesto 1 (10,1 g, 96,7%).
Síntesis del compuesto 2
[fórmula química 99]
Figure imgf000045_0002
El compuesto 1 (10,1 g, 9,74 mmol) se disolvió en THF (200 mL) y se añadieron piperidina (1.863 ^L, 17,5 mmol, 1,8 equivalentes) y Db U (1.863 ^L, 17,5 mmol, 1,8 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se añadió ácido clorhídrico concentrado hasta que el pH de la solución de reacción alcanzó alrededor de 6, y el disolvente se evaporó a presión reducida. Al residuo se le añadió CH3CN hasta la deposición de un material precipitado, que luego se filtró, se suspendió y se lavó con CH3CN dos veces, para obtener un compuesto 2 (8,21 g, 98,70).
Síntesis del compuesto 3
[fórmula química 100]
DIPEA, NsCI H
HCI ■ H-Gly-OKb N ^ .C 02Kb
CH2CI2 Ns^
2 3
El compuesto 2 (7,60 g, 8,96 mmol) se disolvió en CH2Cl2 (180 mL) y se añadieron DIPEA (3.589 ^L, 20,6 mmol, 2,3 equivalentes) y NsCl (2,59 g, 11,7 mmol, 1,3 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente. Una hora después, se añadió adicionalmente DIPEA (359 ^L, 2,06 mmol, 0,2 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 19 minutos. A la solución de reacción se le añadió MeOH (30 mL), luego, el disolvente se evaporó a presión reducida. Al residuo se le añadió CH3CN hasta la deposición de un material precipitado, que luego se filtró, se suspendió y se lavó con CH3CN dos veces, para obtener un compuesto 3 (8,95 g, 99,9%).
Síntesis del compuesto 4
[fórmula química 101]
Figure imgf000046_0001
El compuesto 3 (4,70 g, 4,71 mmol) y el compuesto A [1] (3,11 g, 9,46 mmol, 2,0 equivalentes) se disolvieron en THF (94 mL), PPh3 (2,49 g, 9,50 mmol, 2,0 equivalentes) y se agregó DEAD (4.272 qL, 9,42 mmol, 2.0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadieron PPh3 (248 mg, 0,946 mmol, 0,2 equivalentes) y DEAD (427 qL, 0,942 mmol, 0,2 equivalentes) y la mezcla se agitó durante 1 hora. Se añadieron PPh3 (245 mg, 0,934 mmol, 0,2 equivalentes) y DEAD (427 qL, 0,942 mmol, 0,2 equivalentes) y la mezcla se agitó durante 1 hora y 15 minutos, luego, el disolvente se evaporó a presión reducida. Al residuo se le añadió CH3CN hasta la deposición de un material precipitado, que luego se filtró, se suspendió y se lavó con CH3CN dos veces, para obtener un compuesto 4 (6,12 g, 99,2%).
Síntesis del compuesto 5
[fórmula química 102]
Figure imgf000046_0002
El compuesto 4 (5,65 g, 4,31 mmol) se disolvió en THF (40 mL), se añadieron PhSH (1.328 qL, 12,9 mmol, 3,0 equivalentes) y DBU (1934 qL, 12,9 mmol, 3,0 equivalentes) y la mezcla se añadió se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y 30 minutos. A la solución de reacción se le añadió CH3CN (200 mL) hasta la deposición de un material precipitado, que luego se filtró, se suspendió y se lavó con CH3CN dos veces, para obtener un compuesto 5 (4,77 g, 98,4%).
Síntesis del compuesto 6
[fórmula química 103]
Figure imgf000046_0003
El compuesto 5 (7,49 g, 6,65 mmol) se disolvió en THF (70 mL) y se añadieron Fmoc-Leu-OH (3,53 g, 9,98 mmol, 1,5 equivalentes), HOAt (2,27 g, 16,7 mmol, 2,5 equivalentes), HATU (6,32 g, 16,6 mmol, 2,5 equivalentes) y DIPEA (5.800 qL, 33,3 mmol, 5,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 6 minutos. Se añadió DIPEA (580 qL, 3,33 mmol, 0,5 equivalentes) y la mezcla se agitó durante 8 minutos. Se añadió DIPEA (580 qL, 3,33 mmol, 0,5 equivalentes) y la mezcla se agitó durante 1 hora. El material precipitado se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4 para obtener un residuo, que luego se sometió a cromatografía en columna de gel de sílice (n-hexano/EtOAc = 100 : 0 - 85 : 15), para obtener un compuesto 6 (9,10 g, 93,7%).
Síntesis del compuesto 7
[fórmula química 104]
Figure imgf000046_0004
El compuesto 6 (1,05 g, 0,721 mmol) se disolvió en CH2Cl2 (36 mL) y se añadieron TFE (3,6 mL) y TFA (360 qL) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 40 minutos. El material precipitado se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. Al residuo se le añadió CH2Cl2 y la mezcla se lavó con agua tres veces, la capa orgánica se lavó con solución salina saturada, se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía en columna de gel de sílice (CH2Cl2/MeOH, 100 : 0 - 90 : 10), para obtener un compuesto 7 (478 mg, 92,2%).
Síntesis del compuesto 8
[fórmula química 105]
HCI ■ H-Tyr(tBu)-OKa (29) OTBDPS
HATU, HOAt, DIPEA (¿H 2)£>
THF
Figure imgf000047_0001
F m o c -L e u "N ^ > ^ T y r(tB u )-O K a
8
El compuesto 7 (4,08 g, 5,66 mmol, 1,2 equivalentes) Se disolvió en THF (70 mL) y se añadieron el compuesto 29 (el método de síntesis se describe más adelante) (5,52 g, 4,72 mmol), DIPCI (1.104 gL, 7,09 mmol, 1,5 equivalentes), HOAt (963 mg, 7,08 mmol, 1,5 equivalentes) y DIPEA (4.940 gL, 28,4 mmol, 6,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadieron HOAt (325 mg, 2,39 mmol, 0,5 equivalentes) y DIPCI (368 gL, 2,36 mmol, 0,5 equivalentes) y la mezcla se agitó durante 2 horas. El disolvente se evaporó a presión reducida, luego, se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 1, para obtener un compuesto 8 (8,54 g, 98,5%).
Síntesis del compuesto 9
[fórmula química 106]
Figure imgf000047_0002
El compuesto 8 (8,54 g, 4,65 mmol) se disolvió en THF (93 mL) y se añadieron piperidina (891 gL, 8,37 mmol, 1,8 equivalentes) y DBU (904 gL, 6,04 mmol, 1,3 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 2, para obtener una forma de-Fmoc (8,31 g).
[fórmula química 107]
Figure imgf000047_0003
La forma de-Fmoc (8,31 g) se disolvió en THF (93 mL) y se añadieron Fmoc-Tyr (tBu)-OH (3,21 g, 6,99 mmol, 1,5 equivalentes), HOAt (1,59 g, 11,7 mmol, 2,5 equivalentes), HATU (4,42 g, 11,6 mmol, 2,5 equivalentes) y DIPEA (4.860 gL, 27,9 mmol, 6,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 40 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 6, para obtener un compuesto 9 (9,05 g, 94,7%).
Síntesis del compuesto 10
[fórmula química 108]
Figure imgf000047_0004
El compuesto 9 (4,17 g, 2,03 mmol) se disolvió en THF (41 mL) y se añadieron piperidina (389 gL, 3,65 mmol, 1,8 equivalentes) y DBU (395 gL, 2,63 mmol, 1,3 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 2, para obtener una forma de-Fmoc (3,92 g).
[fórmula química 109]
Figure imgf000048_0001
La forma de-Fmoc (3,92 g) se disolvió en THF (41 mL) y se añadieron Fmoc-Gln (Trt)-OH (1,86 g, 3,04 mmol, 1,5 equivalentes), HATU (1,93 g, 5,07 mmol, 2,5 equivalentes), HOAt (691 mg, 5.07 mmol, 2.5 equivalentes) y DIPEA (2.120 pL, 12,2 mmol, 6,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 10 (4,83 g, 98,0%). Síntesis del compuesto 11
[fórmula química 110]
Figure imgf000048_0002
OTBDPS
(CH2),p
HCI • H-Glrt(Trt)Tyr(tBu)Leu _-_,N j l *
'^ ^ Tyr{tBu) OKa
El compuesto 10 (4,83 g, 1,99 mmol) se disolvió en THF (40 mL) y se añadieron piperidina (382 pL, 3,59 mmol, 1,8 equivalentes) y DBU (388 pL, 2,59 mmol, 1,3 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 2, para obtener una forma de-Fmoc (4,63 g).
[fórmula química 111]
Figure imgf000048_0003
La forma de-Fmoc (4,63 g) se disolvió en THF (40 mL) y se añadieron Fmoc-Ser (tBu)-OH (1,15 g, 2,99 mmol, 1,5 equivalentes), HAt U (1,89 g, 4,98 mmol, 2,5 equivalentes), HOAt (676 mg, 4,98 mmol, 2,5 equivalentes) y DIPEA (2.082 pL, 11,9 mmol, 6,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 11 (5,49 g).
Síntesis del compuesto 12
[fórmula química 112]
Figure imgf000048_0004
El compuesto 11 (5,49 g) se disolvió en THF (40 mL) y se añadieron piperidina (382 pL, 3,59 mmol, 1,8 equivalentes) y DBU (388 pL, 2,59 mmol, 1,3 equivalentes) y la mezcla se agitó. a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 2, para obtener una forma de-Fmoc (4,65 g, 98,0% del compuesto 10).
[fórmula química 113]
Figure imgf000049_0001
La forma de-Fmoc (4,65 g, 1,95 mmol) se disolvió en THF (39 mL) y se añadieron Fmoc-Trp (Boc)-OH (1,54 g, 2,92 mmol, 1,5 equivalentes), HOAt (398 mg, 2,92 mmol, 1,5 equivalentes), HATU (1,11 g, 2,92 mmol, 1,5 equivalentes) y DIPEA (1.698 qL, 9,75 mmol, 5,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 70 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 12 (5,32 g, 95,4%).
Síntesis del compuesto 13
[fórmula química 114]
Figure imgf000049_0002
El compuesto 12 (5,32 g, 1,86 mmol) se disolvió en THF (37,2 mL) y se añadieron piperidina (372 qL, 3,50 mmol, 1,9 equivalentes) y DBU (372 qL, 2,49 mmol, 1,3 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 2, para obtener una forma de-Fmoc (4,96 g).
[fórmula química 115]
Figure imgf000049_0003
La forma de-Fmoc (4,96 g) se disolvió en THF (12,6 mL) y se añadió TBAF (solución 1,0 M en THF, 6,0 mL, 6,00 mmol, 3,2 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 19 horas. El disolvente se evaporó a presión reducida, luego, al residuo se le añadió CH2G2 y la mezcla se lavó con HCl 1 N, agua y solución salina saturada, la capa orgánica se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró, luego, el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía en columna de gel de sílice (CH2G2/THF, 100 : 0 - 75 : 25), para obtener un compuesto 13 (2,02 g, 45,3%).
El compuesto 13 es un componente en el que [C] es Trp-Ser-Gln-Tyr-Leu y [D] es Tyr.
(Ejemplo 2) Síntesis del compuesto intermedio (compuesto 38) Síntesis del compuesto 29
[fórmula química 116]
.DIPCI, DMAP
Fmoc—Tyr(tBu)—OH KaOH --------------------------- - Fmoc—Tyr(tBu)-OKa CH2Ci2
28
Se disolvió alcohol 3,4,5-trioctadeciloxibencílico (20,1 g, 22,0 mmol) en CH2CI2 (220 mL) y se añadieron Fmoc-Tyr (tBu) -OH (15,2 g, 33,0 mmol, 1,5 equivalentes), DIPCI (6.856 Se agregaron pL, 44,0 mmol, 2,0 equivalentes y DMAP (26,9 mg, 0,220 mmol, 0,01 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 35 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 1, para obtener un compuesto 28 (29,9 g, q. y.).
[fórmula química 117]
piperidina, D8U
Fmoc—TyrftBu)—OKa HCI ■ H-Tyr(tBu)-OKa
THF
28 29
El compuesto 28 (9,58 g, 7,07 mmol) se disolvió en THF (141 mL) y se añadieron piperidina (1.260 pL, 12,7 mmol, 1,8 equivalentes) y DBU (1.374 pL, 9,19 mmol, 1,3 equivalentes) y la mezcla se agitó. a temperatura ambiente durante 5 minutos. Después de la confirmación de la desaparición de las materias primas por TLC, se realizó el mismo tratamiento posterior que el descrito anteriormente (síntesis del compuesto 2), para obtener un compuesto 29 (8,28 g, q. y.).
Síntesis del primer componente
El compuesto 38 como primer componente (componente lateral X) se sintetizó mediante la siguiente etapa.
Síntesis del compuesto 30
[fórmula química 118]
Figure imgf000050_0001
El alcohol 3,4,5-trioctadeciloxibencílico (en adelante abreviado como "Ka") (3,00 g, 3,28 mmol) se disolvió en CH2Cl2 (32,8 mL) y se añadieron Fmoc-Lys (Mtt)-OH (3,08 g, 4,93 mmol, 1,5 equivalente), DIPCI (1.023 pL, 6,57 mmol, 2,0 equivalentes) y DMAP (4,0 mg, 0,0328 mmol, 0,01 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 42 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 1, para obtener un compuesto 30 (5,32 g).
Síntesis del compuesto 31
[fórmula química 119]
TFA, TIS
Fmoc—Lys(Mtt)—OKa -------------------------- Fmoc-Ly
■ CH2OI2
30
Figure imgf000050_0002
El compuesto 30 (5,32 g) se disolvió en CH2Cl2 (32,8 mL), y se añadieron TIS (3.284 pL) y TFA (985,2 pL) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 12 minutos. Se añadió adicionalmente TIS (3284 pL) y la mezcla se agitó adicionalmente durante 53 minutos. Se añadió adicionalmente TFA (985,2 pL) y la mezcla se agitó adicionalmente durante 16 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 31 (4,48 g).
Síntesis del compuesto 32
[fórmula química 120]
DIPEA, NsCI
Fmoc—Lys—OKa • TFA Fmoc—Lys(Ns)—OKa
CH2CI2
31 32
El compuesto 31 (4,48 g) se disolvió en CH2Cl2 (65,7 mL), y se añadieron DIPEA (1.258 pL, 7,22 mmol, 2,2 equivalentes) y NsCl (873 mg, 3,94 mmol, 1,2 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 37 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 3, para obtener un compuesto 32 (4,75 g, q. y.).
Síntesis del com puesto 33
[fórmula química 121]
TFA, TIS
Fm oc— Lys(N s)—OKa --------------------------------»- Fm oc—Lys(Ns)- OH
CH2CI2
32 33
El compuesto 32 (4,38 g, 3,02 mmol) se disolvió en CH2CI2 (27 mL) y se añadieron TIS (6,0 mL) y TFA (27 mL) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. El disolvente se evaporó a presión reducida, al residuo se le añadió CH2G2 para dar una solución diluida, que luego se lavó con agua tres veces y solución salina saturada, y la capa orgánica se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía en columna de gel de sílice (CH2Ch/MeOH, 100 : 0 - 85 : 15), para obtener un compuesto 33 (1,42 g, 84,8%).
Síntesis del compuesto 34
[fórmula química 122]
DIPCI, DMAP
Fmoc—Lys(Ns)—OH KbOH ------------------------------CH2CI2 - Fmoc—Lys(Ns)—OKb
33 34
Se disolvió alcohol 2,4-didocosoxi bencílico (2,09 g, 2,76 mmol) en CH2Q2 (27,6 mL) y se añadieron el compuesto 33 (2,29 g, 4,14 mmol, 1,5 equivalentes), DIPCI (859 pL, 5,51 mmol, 2,0 equivalentes) y DMAP (3,4 mg, 0,0278 mmol, 0,01 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que para el compuesto 1, para obtener un compuesto 34 (4,13 g, q. y.).
Síntesis del compuesto 35
[fórmula química 123]
piperidina. DBU
Fmoc—Lys(Ns)—OKb HCI ■ H—Lys(Ns)—OKb
THF
34 35
El compuesto 34 (4.13) se disolvió en THF (55,1 mL) y se añadieron piperidina (491 pL) y DBU (536 pL) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. Después de la confirmación de la desaparición de los materiales de partida por TLC, se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 2, para obtener un compuesto 35 (3,00 g, 98,2%).
Síntesis del compuesto 36
[fórmula química 124]
Fmoc-T yr(tBu)-OH
HATU, HOAt, DI PEA
HCI ■ H—Lys(Ns)—OKb Fmoc—Tyr(tBu)Lys(Ns)—OKb
THF
35 36
El compuesto 35 (332 mg, 0,300 mmol) se disolvió en THF (6 mL) y se añadieron Fmoc-Tyr (tBu)-OH (207 mg, 0,450 mmol, 1,5 equivalentes), HOAt (61,3 mg, 0,450 mmol, 1,5 equivalentes), HATU (171 mg, 0,450 mmol, 1,5 equivalentes) Y DIPEA (261 pL, 1,50 mmol, 5,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 53 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 36 (441 mg, 97,3%).
Síntesis del compuesto 37
[fórmula química 125]
piperidina, DBU
Fmoc—Tyr(tBu)Lys(Ns)—OKb HCI • H—Tyr(tBu)Lys{Ns)—OKb
THF
36 37
El compuesto 36 (2,73 g, 1,81 mmol) se disolvió en THF (36,1 mL), y se añadieron piperidina (322 pL) y DBU (351 pL) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. Después de la confirmación de la desaparición de los materiales de partida por TLC, se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 2, para obtener un compuesto 37 (2,25 g, 94,1%).
Síntesis del com puesto 38
[fórmula química 126]
ácido mirlstico
HATU, HOAt. DI PEA
HCI ■ H-Tyr(tBu)Lys(Ns)-OKb Myr —T yr(tBu)Lys( Ns)—OKb
THF
37 38
El compuesto 37 (266 mg, 0,201 mmol) se disolvió en THF (4 mL) y se añadieron ácido mirístico (68,9 mg, 0,302 mmol, 1,5 equivalentes), HOAt (41,4 mg, 0,304 mmol, 1,5 equivalentes), HATU (114 mg, 0,301 mmol, 1,5 equivalentes) DIPEA (174 pL, 0,999 mmol, 5,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y 50 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 38 (289 mg, 95,5%).
El compuesto 38 es un componente en el que [A] es Tyr y [B] es un enlace sencillo.
Síntesis de un compuesto intermedio
Síntesis del compuesto 14
[fórmula química 127]
Figure imgf000052_0001
El compuesto 13 (265 mg, 0,111 mmol), el compuesto 38 (289 mg, 0,192 mmol, 1,7 equivalentes) y PPh3 (118 mg, 0,450 mmol, 4,1 equivalentes) se disolvieron en THF (11 mL) y se añadieron DEAD (201 pL, 0,443 mmol, 4,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 61 minutos. Se añadieron PPh3 (121 mg, 0,461 mmol, 4,2 equivalentes) y DEAD (201 pL, 0,443 mmol, 4,0 equivalentes) y la mezcla se agitó durante 59 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4 para obtener un residuo, que luego se sometió a cromatografía en columna de gel de sílice (CH2CH2/THF, 100 : 0 - 88 : 12), para obtener un producto de reacción de Mitsunobu (132 mg , 30,6%).
[fórmula química 128]
Figure imgf000052_0002
El producto de reacción de Mitsunobu (132 mg, 0,0340 mmol) se disolvió en CH2Q2 (3,4 mL), y se agregaron TFE (340 pL) y TFA (34,0 pL) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 70 minutos. El material precipitado se filtró a través de Celite, y el disolvente se evaporó a presión reducida. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4 para obtener un residuo, que luego se sometió a cromatografía en columna de gel de sílice (CHCl3/MeOH, 100 : 0 - 95 : 5), para obtener un compuesto 14 (75,1 mg, 70,3%) como intermedio de la presente invención.
(Ejemplo 3) Síntesis del péptido entrecruzado (Bdev-7) Síntesis del compuesto 15
[fórmula química 129]
Figure imgf000053_0001
El compuesto 14 (75,1 mg, 0,0239 mmol), HOAt (4,2 mg, 0,0309 mmol, 1,3 equivalentes) y HATU (11,2 mg, 0,0295 mmol, 1,2 equivalentes) se disolvieron en THF (4780 j L) y DIPEA (20,8 j L, 0,119 mmol, 5,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 17 horas y 40 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 15 (64,5 mg, 86,6%).
Síntesis del compuesto 16
[fórmula química 130]
Figure imgf000053_0002
El compuesto 15 (64,5 mg, 0,0207 mmol) se disolvió en THF (414 j L) y se añadieron PhSH (6,38 j L, 0,0621 mmol, 3,0 equivalentes) y DBU (9,29 |jL, 0,0621 mmol, 3,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y 38 minutos. Se añadieron PhSH (6,38 j L, 0,0621 mmol, 3,0 equivalentes) y DBU (9,29 j L, 0,0621 mmol, 3,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas y 29 minutos. A la solución de reacción se le añadió ácido clorhídrico concentrado (10 j L) y el disolvente se evaporó a presión reducida. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 16 (55,6 mg, 91,3%).
Síntesis de péptido entrecruzado (Bdev-7)
[fórmula química 131]
Al compuesto 16 (21,8 mg, 0,0743 mmol) se le añadió una solución (743 |jL) de TFA/TIS/H2O = 95 : 5 : 5 y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. El material precipitado se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. Al residuo se le añadió IPE hasta la deposición de un material precipitado, que se separó por centrifugación para obtener un residuo, y el residuo se purificó por HPLC, para obtener un péptido entrecruzado de la presente invención (Bdev-7) (2,8 mg, 2,6%). HRMS m/z [M H]+: calculado para C78H111N12O16: 1471.8241, encontrado 1472.1734.
Se sintetizaron péptidos entrecruzados como otras imitaciones de péptidos W9 que tienen las siguientes estructuras de secuencia de péptidos. Los patrones de estructura y los patrones de sustitución de Z1 a Z3 de los compuestos sintetizados son como se describe en la Tabla 2 a continuación.
[fórmula química 132]
Figure imgf000054_0001
T l 2
Figure imgf000054_0002
Figure imgf000055_0004
(Ejemplo 4) Síntesis del compuesto intermedio (compuesto 19) para la síntesis de Bdev-3, Bdev-5, Bdev-6, Bdev-12 y Bdev-13
La síntesis de un compuesto intermedio para la síntesis de Bdev-3, Bdev-5, Bdev-6, Bdev-12 y Bdev-13 se realizó como se describe a continuación.
Síntesis del compuesto 39
[fórmula química 136]
Figure imgf000055_0003
El compuesto 37 (746 mg, 0,562 mmol) se disolvió en CH2Cl2 (11 mL), y se añadieron Et3N (160 ^L, 1,14 mmol, 2,0 equivalentes) y Ac2O (100 ^L, 1,06 mmol, 1,9 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 52 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que el descrito anteriormente (síntesis del compuesto 3), para obtener un compuesto 39 (698 mg, 0,524 mmol, 93,2%).
Síntesis del compuesto 40
[fórmula química 137]
Figure imgf000055_0002
El compuesto 35 (775 mg, 0,700 mmol) se disolvió en THF (14 mL) y se añadieron Boc-Tyr (tBu)-OH (354 mg, 1,05 mmol, 1,5 equivalentes), HOAt (143 mg, 1,05 mmol, 1,5 equivalentes), se agregaron HATU (399 mg, 1,05 mmol, 1,5 equivalentes) y DIPEA (610 ^L, 3,50 mmol, 5,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 42 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 40 (935 mg, 96,1%).
Síntesis del compuesto 17
[fórmula química 138]
Figure imgf000055_0001
El compuesto 13 (944 mg, 0,394 mmol), el compuesto 39 (635 mg, 0,477 mmol, 1,2 equivalentes) y PPh3 (211 mg, 0,804 mmol, 2,0 equivalentes) se disolvieron en THF (40 mL) y se añadió DEAD (357 |j L, 0,787 mmol, 2,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas y 7 minutos. Se añadió PPh3 (208 mg, 0,793 mmol, 2,0 equivalentes) y la mezcla se agitó durante 33 minutos. Se añadió DEAD (357 ^L, 0,787 mmol, 2,0 equivalentes) y la mezcla se agitó por 1 hora y 50 minutos. El mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4 se realizó para obtener un residuo (1,573 g), que se usó en la reacción posterior.
[fórmula química 139]
Figure imgf000056_0001
El residuo (1,573 g) se disolvió en CH2Cl2 (47,7 mL), y se añadieron TFE (4770 ^L) y TFA (477 ^L) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. El material precipitado se filtró a través de Celite, y al filtrado se le añadió DIPEA (1.050 |jL), luego, el disolvente se evaporó a presión reducida. El mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4 se realizó para obtener un residuo, que luego se sometió a cromatografía en columna de gel de sílice (CHCb/MeOH, 100 : 0 - 90 : 10 y CHCb/EtOH, 100 : 0 - 93 : 7), para obtener un compuesto 17 (651 mg, 55,7%) como un compuesto intermedio de la presente invención.
Síntesis del compuesto 18
[fórmula química 140]
Figure imgf000056_0002
El compuesto 17 (485 mg, 0,163 mmol), HOAt (26,8 mg, 0,197 mmol, 1,2 equivalentes) y HATU (74,8 mg, 0,197 mmol, 1,2 equivalentes) se disolvieron en t Hf (32,6 mL) y se añadió DIPEA (142 ^L, 0,815 mmol, 5,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas y 30 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 18 (462 mg, 96,3%).
Síntesis del compuesto 19
[fórmula química 141]
Figure imgf000057_0001
El compuesto 40 (462 mg, 0,157 mmol) se disolvió en THF (1.560 ^L), y se añadieron PhSH (16,0 ^L, 0,156 mmol, 1,0 equivalente) y DBU (70,0 ^L, 0,468 mmol, 3,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 50 minutos. Se añadió PhSH (32,0 |jL, 0,312 mmol, 2,0 equivalentes) y la mezcla se agitó durante 1 hora y 11 minutos. Se añadieron PhSH (48,0 |jL, 0,467 mmol, 3,0 equivalentes) y DBU (70,0 |jL, 0,468 mmol, 3,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 50 minutos. A la solución de reacción se le añadió ácido clorhídrico concentrado (78,0 ^L) y el disolvente se evaporó a presión reducida. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 16, para obtener un compuesto 19 (416 mg, 96,2%).
(Ejemplo 5) Síntesis de Bdev-3, Bdev-5, Bdev-6, Bdev-12 y Bdev-13 (1) Síntesis de Bdev-6
Se sintetizó Bdev-6 como se describe a continuación.
[fórmula química 142]
Figure imgf000057_0002
Al compuesto 19 (48,2 mg, 0,0174 mmol) se le añadió una solución (1.740 ^L) de TFA/TIS/H2O = 95 : 5 : 5 y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se realizó el mismo tratamiento posterior y purificación por HPLC que en la síntesis de Bdev-7, para obtener Bdev-6 (5,3 mg, 23,4%). HRMS m/z [M H]+: calculado para C66H87N12O16: 1303.6363, encontrado 1303.9331.
(2) Síntesis de Bdev-12
Bdev-12 se sintetizó como se describe a continuación. Síntesis del compuesto 20
[fórmula química 143]
Figure imgf000057_0003
El compuesto 19 (149 mg, 0,0540 mmol), ácido mirístico (18,7 mg, 0,0819 mmol, 1,5 equivalentes), HOAt (11,1 mg, 0,0816 mmol, 1,5 equivalentes) y HATU (31,0 mg, 0,0815 mmol, 1,5 equivalentes) se disolvieron en THF (1.080 ^L) y se añadió DIPEA (47,0 ^L, 0,270 mmol, 5,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 20 (147 mg, 91,5%).
Síntesis de Bdev-12
[fórmula química 144]
Figure imgf000058_0001
Al compuesto 20 (147 mg, 0,0494 mmol) se le añadió una solución (5 mL) de TFA/TIS/H2O = 95 : 5 : 5 y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se realizó el mismo tratamiento posterior y purificación por HPLC que en la síntesis de Bdev-7, para obtener Bdev-12 (28,0 mg, 37,4%). HRMS m/z [m H] : calculado para C80H113N12O17: 1513.8347, encontrado 1514.2531.
(3) Síntesis de Bdev-3
Se sintetizó Bdev-3 como se describe a continuación.
Síntesis del compuesto 21
[fórmula química 145]
Figure imgf000058_0002
El compuesto 19 (111 mg, 0.0400 mmol), MeO-PEG-CO2H (121 mg, 0,0600 mmol, 1,5 equivalentes), HOAt (6,5 mg, 0,0480 mmol, 1,2 equivalentes) y HATU (18,3 mg, 0,0480 mmol, 1,2 equivalentes) se disolvieron en THF (2 mL) y se añadió DIPEA (34,8 ^L, 0,200 mmol, 5,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 53 minutos. Se añadió DIPEA (34,8 ^L, 0,200 mmol, 5,0 equivalentes) y la mezcla se agitó durante 56 minutos. Se agregaron MeO-PEG-CO2H (121 mg, 0,0600 mmol, 1,5 equivalentes), HATU (22,8 mg, 0,0600 mmol, 1,5 equivalentes) y DIPEA (17,4 mL, 0,0999 mmol, 2,5 equivalentes) y la mezcla se agitó durante 2 horas y 9 minutos El disolvente se evaporó a presión reducida, y el residuo se sometió a cromatografía en columna de gel de sílice (CH2Ch/MeOH, 100 : 0 - 90 : 10), para obtener un compuesto 21 (313 mg) como producto crudo.
Síntesis de Bdev-3
[fórmula química 146]
Figure imgf000059_0001
Al compuesto 21 (147 mg, 0,0494 mmol) se le añadió una solución (5 mL) de TFA/TIS/H2O = 95 : 5 : 5 y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se realizó el mismo tratamiento posterior y purificación por HPLC que en la síntesis de Bdev-7, para obtener Bdev-3 (28,0 mg, 37,4%). La estructura de la sustancia objetivo se identificó con base en la detección de iones monovalente a un intervalo de 44 amu alrededor de m/z 3140 e iones divalentes a un intervalo de 22 amu alrededor de m/z 1640 por medición de MS.
(4) Síntesis de Bdev-5
Se sintetizó Bdev-5 como se describe a continuación.
Síntesis del compuesto 22
[fórmula química 147]
Figure imgf000059_0002
El compuesto 19 (161 mg, 0,0580 mmol) se disolvió en CH2Cl2 (1160 ^L), y se añadieron Et3N (15,8 ^L, 0,112 mmol, 1,9 equivalentes) y Ac2O (11,0 ^L, 0,116 mmol, 2,0 equivalentes) y el La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 40 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 22 (143 mg, 87,6%).
Síntesis de Bdev-5
[fórmula química 148]
Al compuesto 22 (143 mg, 0,0508 mmol) se añadió una solución (5 mL) de TFA/TIS/H2O = 95 : 5 : 5 y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se realizó el mismo tratamiento posterior y purificación por HPLC que en la síntesis de Bdev-7, para obtener Bdev-5 (25,6 mg, 37,4%). HRMS m/z [M H]+: calculado para C68H88N12O17: 1345.6499, encontrado 1345.5516.
(5) Síntesis de Bdev-13
Bdev-13 se sintetizó como se describe a continuación.
Figure imgf000060_0001
Una mezcla de Bdev-5 (10,1 mg, 0,00750 mmol, 1,5 equivalentes), MeO-PEG-NH2 (PM: 2.000 Da, fabricado por Iris Biotech) (10,4 mg, 0,00516 mmol) y DMT-MM (1,4 mg, 0,00506 mmol, 1,0 equivalente) en THF (1.100 ^L) y MeOH (900 ^L) se agitó a temperatura ambiente durante 7 horas y 35 minutos. El disolvente se evaporó a presión reducida, luego, al residuo se le añadieron PEG-NH2 (10,4 mg, 0,00516 mmol), DMT-MM (5,7 mg, 0,0206 mmol) y DMF (1 mL) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas y 38 minutos. Se añadió DMT-MM (14,2 mg, 0,0513 mmol) y la mezcla se agitó durante 1 hora y 20 minutos. La purificación se realizó por HPLC, para obtener Bdev-13 (3,6 mg, 14,5%). La estructura de la sustancia objetivo se identificó con base en la detección de un grupo de iones divalentes a un intervalo de 22 amu alrededor de m/z 1700, un grupo de iones trivalentes a un intervalo de 15 amu alrededor de m/z 1150 y un grupo de iones tetravalentes a un intervalo de 11 amu alrededor de m/z 900 por medición de MS.
(Ejemplo 6) Síntesis del compuesto intermedio para la síntesis de Bdev-2, Bdev-4, Bdev-8 y Bdev-10
La síntesis de un compuesto intermedio para la síntesis de Bdev-2, Bdev-4, Bdev-8 y Bdev-10 se realizó como se describe a continuación. Síntesis del compuesto 23
[fórmula química 150]
Figure imgf000060_0002
El compuesto 13 (890 mg, 0,372 mmol), el compuesto 40 (776 mg, 0,559 mmol, 1,5 equivalentes) y PPh3 (147 mg, 0,559 mmol, 1,5 equivalentes) se disolvieron en THF (8 mL) y se añadió DEAD (253 |jL, 0,558 mmol, 1,5 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 54 minutos. Se añadió PPh3 (148 mg, 0,564 mmol, 1,5 equivalentes) y la mezcla se agitó durante 20 minutos. Se añadió DEAD (84,4 ^L, 0,186 mmol, 0,5 equivalentes) y la mezcla se agitó durante 2 horas y 20 minutos. Se añadió PPh3 (147 mg, 0,560 mmol, 1,5 equivalentes) y la mezcla se agitó durante 14 minutos. Se añadió DEAD (33,7 ^L, 0,0743 mmol, 0,2 equivalentes) y la mezcla se agitó durante 34 minutos. Se añadió PPh3 (44,8 mg, 0,171 mmol, 0,5 equivalentes) y la mezcla se agitó durante 2 minutos. Se añadió DEAD (33,7 ^L, 0,0743 mmol, 0,2 equivalentes) y la mezcla se agitó durante 3 horas y 15 minutos. Se añadió DEAD (33,7 ^L, 0,0743 mmol, 0,2 equivalentes) y la mezcla se agitó durante 21 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4 para obtener un residuo, que luego se sometió a cromatografía en columna de gel de sílice (CH2CH2/THF, 100 : 0 - 90 : 10), para obtener un producto de reacción de Mitsunobu (1,05 g, 75,0%).
[fórmula química 151]
Figure imgf000061_0001
El producto de reacción de Mitsunobu (637 mg, 0,169 mmol) se disolvió en CH2G2 (16,9 mL), y se añadieron TFE (1690 ^L) y TFA (169 ^L) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 40 minutos. El material precipitado se filtró a través de Celite, y el disolvente se evaporó a presión reducida. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4 para obtener un residuo, que luego se sometió a cromatografía en columna de gel de sílice (CHCb/EtOH, 100: 0 - 95: 5), para obtener un compuesto 23 (294 mg, 58,1%).
Síntesis del compuesto 24
[fórmula química 152]
Figure imgf000061_0002
Ns
24
El compuesto 23 (294 mg, 0,0970 mmol), HOAt (15,8 mg, 0,116 mmol, 1,2 equivalentes) y HATU (44,7 mg, 0,118 mmol, 1,2 equivalentes) se disolvieron en THF (19,4 mL) y DIPEA (84,5 ^L, 0,485 mmol, 5,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas y 10 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 24 (284 mg, 97,2%).
Síntesis del compuesto 25
[fórmula química 153]
Figure imgf000062_0001
24
H 0
Boc - Tyr(tBu)''^ '"^ '^ Trp(Boc)Ser(tBu)Gln(Trt)Tyr(tBu)Leu-N/ . -^Tyr(tBu) OKa (CH2)4---------------------N---------------------------(CH2)4D
H
25
El compuesto 24 (284 mg, 0,0943 mmol) se disolvió en THF (943 ^L), y se añadieron PhSH (29,0 ^L, 0,282 mmol, 3,0 equivalentes) y DBU (42,3 ^L, 0,283 mmol, 3,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y 30 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 16, para obtener un compuesto 25 (255 mg, 95,8%) como un compuesto intermedio para la síntesis de Bdev-2, Bdev-4, Bdev-8 y Bdev-10.
(Ejemplo 7) Síntesis de Bdev-2, Bdev-4, Bdev-8 y Bdev-10
(1) Síntesis de Bdev-8
La síntesis de Bdev-8 se realizó como se describe a continuación.
[fórmula química 154]
Figure imgf000062_0002
Al compuesto 25 (55,1 mg, 0,0181 mmol) se le añadió una solución (1.810 ^L) de TFA/TIS/H2O = 95 : 5 : 5 y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se realizó el mismo tratamiento posterior y purificación por HPLC que en la síntesis de Bdev-7, para obtener Bdev-8 (12,0 mg, 52,6%). HRMS m/z [M H]+: calculado para C64H85N12O15: 1261.6257, encontrado 1261.4668.
(2) Síntesis de Bdev-4
Síntesis del compuesto 26
[fórmula química 155]
Figure imgf000063_0001
El compuesto 25 (62,6 mg, 0,0222 mmol), ácido mirístico (7,7 mg, 0,0337 mmol, 1,5 equivalentes), HOAt (4,5 mg, 0,0331 mmol, 1,5 equivalentes) y HATU (12,8 mg, 0,0337 mmol, 1,5 equivalentes) se disolvieron en THF (444 ^L) y se añadió DIPEA (19,3 ^L, 0,111 mmol, 5,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 26 (56,9 mg, 84,7%).
Síntesis de Bdev-4
[fórmula química 156]
Figure imgf000063_0002
Al compuesto 26 (56,9 mg, 0,0188 mmol) se añadió una solución (1.514 ^L) de TFA/TIS/H2O = 95: 5: 5 y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se añadió TIS (46,9 mL) y la mezcla se agitó durante 3 horas y 55 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis de Bdev-7, para obtener Bdev-4 (4,0 mg, 14,5%). HRMS m/z [M H]+: calculado para C78H111N12O16: 1471.8241, encontrado 1471.8190.
(3) Síntesis de Bdev-2
Síntesis del compuesto 27
[fórmula química 157]
El compuesto 24 (204 mg, 0,0724 mmol) se disolvió en CH2CI2 (1.448 ^L), y se añadieron Et3N (20,4 ^L, 0,145 mmol, 2.0 equivalentes) y Ac2O (13,7 ^L, 0,145 mmol, 2,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 50 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 27 (200 mg, 96,3%).
Síntesis de Bdev-2
[fórmula química 158]
Figure imgf000064_0001
Al compuesto 27 (200 mg, 0,0697 mmol) se le añadió una solución (6970 ^L) de TFA/TIS/H2O = 95: 5: 5 y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis de Bdev-7, para obtener Bdev-2 (54,4 mg, 59,8%). HRMS m/z [M H]+: calculado para C66H87N12O16: 1303.6363, encontrado 1303.5524.
(4) Síntesis de Bdev-10
[fórmula química 159]
Figure imgf000064_0002
A Bdev-2 (13,1 mg, 0,0101 mmol) y SUNBRIGHT (marca registrada) ME-020AS (fabricado por NOF Corporation) (40,4 mg, 0,0202 mmol, 2,0 equivalentes) en DMF (404 ^L) se añadió Et3N (2,84 ^L, 0,0202 mmol, 2,0 equivalentes), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante o 22 horas y 40 minutos. La purificación por HPLC se realizó para obtener Bdev-10 (16,8 mg, 48,9%).
La estructura de la sustancia objetivo se identificó con base en la detección de iones divalentes a un intervalo de 22 amu alrededor de m/z 1700 por medición de MS.
(Ejemplo 8) Síntesis de Bdev-14
La ruta de síntesis de Bdev-14 se muestra esquemáticamente en la Fig. 3.
Bdev-14 se sintetizó como se describe a continuación. Síntesis del compuesto 88
Una mezcla del compuesto 25 (209 mg, 0,0739 mmol), MeO-PEG-CO2H [fabricado por Iris Biotech, PM 2.000 Da] (299 mg, 0,149 mmol, 2,0 equivalentes), HOAt (58,5 mg, 0,430 mmol, 5,8 equivalentes), DIPCI (57,6 ^L, 0,370 mmol, 5,0 equivalentes) y DIPEA (64,4 ^L, 0,370 mmol, 5,0 equivalentes) en THF (1478 ^L) se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas y 50 minutos. Se agregaron MeO-PEG-CO2H (297 mg, 0,148 mmol, 2,0 equivalentes), HOAt (60,9 mg, 0,447 mmol, 6,0 equivalentes) y DIPCI (57,6 ^L, 0,370 mmol, 5,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 40 minutos. El disolvente se evaporó a presión reducida, y el residuo se sometió a cromatografía en columna de gel de sílice (CHCb/MeOH, 100 : 0 - 90 : 10), para obtener un compuesto 88 (673 mg) como un producto crudo.
Síntesis de Bdev-14
Al compuesto 88 (673 mg) se le añadió una solución (7.390 |jL) de TFA/TIS/H2O = 95 : 5 : 5 y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. El material precipitado se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó por GPC, para obtener Bdev-14 (5,6 mg, 2,3%; 2 etapas a partir del compuesto 25). La estructura de la sustancia objetivo se identificó ya que un grupo de picos a intervalos de 22 amu observados que variaban de m/z 1400 a 1800 alrededor de m/z 1600 correspondía a un grupo de iones divalentes derivados del compuesto PEG y un grupo de picos a un intervalo de 14 amu observado que variaba de m/z 1000 a 1200 alrededor de m/z 1100 correspondió a un grupo de iones trivalentes derivados del compuesto PEG, respectivamente, por medición de MS.
(Ejemplo 9) Síntesis de Bdev-19
La ruta de síntesis de Bdev-19 se muestra esquemáticamente en las Figura 4 y Figura 5.
Se sintetizó Bdev-19 como se describe a continuación.
Síntesis del compuesto 41
Se obtuvo un compuesto 41 (q. y.) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 1, excepto que el aminoácido a condensar se cambió por Fmoc-Gln(Trt)-OH.
Síntesis del compuesto 42
El compuesto 41 (13,50 g, 10,0 mmol) se disolvió en THF (180 mL) y se añadieron DMF (20 mL), y piperidina (2.000 j L) y DBU (2.000 j L) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se añadió ácido clorhídrico concentrado hasta que el pH de la solución de reacción alcanzó alrededor de 6, y el disolvente se evaporó a presión reducida. Al residuo se le añadió acetonitrilo (540 mL) hasta la deposición de un material precipitado, que luego se filtró, se suspendió y se lavó con acetonitrilo dos veces, para obtener una forma de-Fmoc.
La forma de-Fmoc se disolvió en THF (140 mL) y DMF (60 mL), y se añadieron Fmoc-Ser (tBu)-OH (4,60 g, 12,0 mmol), HOBtH2O (1,84 g, 12,0 mmol), HBTU (4,55 g, 12,0 mmol) y DIPEA (8709 j L, 60,0 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. El disolvente se evaporó a presión reducida, luego, al residuo se le añadió acetonitrilo (700 mL) hasta la deposición de un material precipitado, que luego se filtró, se suspendió y se lavó con acetonitrilo dos veces, para obtener un compuesto 42 (14,60 g, 97,8%).
Síntesis del compuesto 43
Un producto crudo obtenido mediante tratamiento de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 42 se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice en fase normal (tolueno/THF = 100 : 0 ^ 90 : 10), para obtener un compuesto 43 (12,6 g, 72,6%), con la excepción de que el aminoácido a condensar se cambió por Fmoc-Trp(Boc)-OH.
Síntesis del compuesto 91
El compuesto 43 (2,60 g, 14,6 mmol) se disolvió en DCM (40 mL) y TFE (4 mL), y se añadió TFA (39 j L) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos. El material precipitado se filtró, luego, al filtrado se le añadió agua (8 mL) y la mezcla se evaporó a presión reducida. El precipitado generado se separó por centrifugación (3.500 rpm, 6 min), y el material precipitado se disolvió en THF y EtOH, luego se evaporó a presión reducida. El residuo se suspendió y se lavó con iPe dos veces, y se secó al vacío, para obtener un compuesto 91 (98,6%).
Síntesis del compuesto 79
Una mezcla del compuesto 29 (1,35 g, 1,15 mmol), el compuesto 33 (963 mg, 1,74 mmol), HATU (656 mg, 1,73 mmol, 1.5 equivalentes), HOAt (235 mg, 1,73 mmol, 1,5 equivalentes ) y DIPEA (1002 j L, 5,75 mmol, 5,0 equivalentes) en THF (23 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y 30 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 79 (2,05 g).
Síntesis del compuesto 80
El compuesto 79 (2,05 g) se disolvió en THF (23 mL) y se añadieron piperidina (230 j L, 2,16 mmol, 1,9 equivalentes) Y DBU (230 j L, 1,54 mmol, 1,3 equivalentes) Y la mezcla se agitó. a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 2, para obtener una forma de-Fmoc (1,68 g, 98,3% del compuesto 29).
La forma de-Fmoc (1,68 g, 1,13 mmol) se disolvió en THF (23 mL) y Fmoc-Leu-OH (598 mg, 1,69 mmol, 1,5 equivalentes), HATU (646 mg, 1,70 mmol, 1,5 equivalentes), HOAt (233 mg, 1,71 mmol, 1,5 equivalentes) y DIPEA (984 |jL, 5,65 mmol, 5,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 40 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 80 (1,92 g, 95,6%). Síntesis del compuesto 81
Se sintetizó un compuesto 81 (95,5% del compuesto 80) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 80, excepto que el aminoácido a condensar se cambió por Fmoc-Tyr(tBu)- OH.
Síntesis del compuesto 82
Se obtuvo una forma de-Fmoc (99,2%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 80, excepto que el material de partida se cambió por el compuesto 81.
La forma de-Fmoc (1,75 g, 0,966 mmol) se disolvió en THF (20 mL), y se añadieron el compuesto 91 (1,51 g, 1,45 mmol, 1,5 equivalentes), HATU (551 mg, 1,45 mmol, 1,5 equivalentes), HOAt (197 mg, 1,45 mmol, 1,5 equivalentes) y DIPEA (841 j L, 4,83 mmol, 5,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se añadieron DIPCI (150 j L, 0,963 mmol, 1,0 equivalente) y HOAt (197 mg, 1,45 mmol, 1,5 equivalentes) y la mezcla se agitó durante 30 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 82 (2,60 g, 98,2%).
Síntesis del compuesto 83
Se obtuvo una forma de-Fmoc (97,8%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 80, con la excepción de que el material de partida se cambió por el compuesto 82.
La forma de-Fmoc (2,34 g, 0,909 mmol), el compuesto 90 (2,17 g, 1,80 mmol, 2,0 equivalentes) y PPh3 (944 mg, 3,60 mmol, 4,0 equivalentes) se disolvieron en THF (18 mL), y se añadió DEAD (1628 j L, 3,59 mmol, 3,9 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4 para obtener un residuo, que luego se sometió a cromatografía en columna de gel de sílice (tolueno/THF, 100 : 0 - 85 : 15), para obtener un compuesto 83 (1,88 g, 54,9%).
Síntesis del compuesto 84
Se obtuvo un compuesto 84 (78,8%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 15, excepto que el material de partida se cambió por el compuesto 83.
Síntesis del compuesto 85
El compuesto 84 (403 mg, 0,134 mmol) se disolvió en THF (1.340 j L), y se añadieron PhSH (138 j L, 1,34 mmol, 10 equivalentes) y DBU (200 j L, 1,34 mmol, 10 equivalentes) y el La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 50 minutos. A la solución de reacción se le añadió ácido clorhídrico concentrado (112 j L), luego, se realizó el mismo tratamiento posterior que para la síntesis del compuesto 5, para obtener un compuesto 85 (343 mg, 90,3%).
Síntesis del compuesto 86
Se obtuvo un compuesto 86 (144 mg, 82,8%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 22, con la excepción de que el material de partida se cambió por el compuesto 85.
Síntesis de Bdev-19
Se obtuvo Bdev-19 de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente de Bdev-5, con la excepción de que el material de partida se cambió por el compuesto 86. HRMS m/z [M H]+: Calculado para C66H87N12O16: 1303.64, encontrado 1303.87.
(Ejemplo 10) Síntesis de Bdev-20
La ruta de síntesis de Bdev-20 se muestra esquemáticamente en la Figura 5.
Se sintetizó Bdev-20 como se describe a continuación.
Síntesis del compuesto 87
Se obtuvo un com puesto 87 (340 mg) como un producto crudo de la misma m anera que en el ejem plo de síntesis descrito anteriorm ente del com puesto 21, excepto que el material de partida se cambió por el com puesto 85 (172 mg).
Síntesis de Bdev-20
Se obtuvo Bdev-20 (7,8%; 2 etapas forman el compuesto 85) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis de Bdev-3 descrito anteriormente, excepto que el material de partida se cambió por el compuesto 87. La estructura de la sustancia objetivo se identificó ya que se observó un grupo de picos a un intervalo de 22 amu que oscilaba entre m/z 1400 y 1800 alrededor de m/z 1600 correspondía a un grupo de iones divalentes derivados del compuesto PEG y un grupo de picos en el intervalo de 14 amu observado en el intervalo de m/z 1000 a 1200 alrededor de m/z 1060 correspondió a un grupo de iones trivalentes derivados del compuesto PEG, respectivamente, por medición de MS.
(Ejemplo 11) Síntesis de Bdev-21
La ruta de síntesis de Bdev-21 se muestra esquemáticamente en la Figura 6.
Se sintetizó Bdev-21 como se describe a continuación.
Síntesis del compuesto 89
El compuesto 5 (10,9 g, 9,69 mmol) se disolvió en THF (200 mL) y se añadieron Boc-Tyr(tBu)-OH (4,90 g, 14,5 mmol, 1,5 equivalentes), HATU (5,53 g, 14,5 mmol, 1,5 equivalentes), HOAt (1,98 g, 14,6 mmol, 1,5 equivalentes) y DIPEA (8439 |jL, 48,5 mmol, 5,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y 30 minutos. Se añadieron Boc-Tyr(tBu)-OH (1,63 g, 4,83 mmol, 0,5 equivalentes) y HOAt (664 mg, 4,88 mmol, 0,5 equivalentes) y la mezcla se agitó durante 1 hora y 10 minutos. El disolvente se evaporó a presión reducida, y al residuo se le añadió CH3CN hasta la deposición de un material precipitado, que luego se filtró, y se suspendió y se lavó con CH3CN dos veces para obtener un residuo, que luego se sometió a cromatografía en columna de gel de sílice ( n-hexano/EtOAc = 100 : 0-85 : 15), para obtener un compuesto 89 (11,0 g, 78,6%).
Síntesis del compuesto 90
El compuesto 89 (11,0 g, 7,62 mmol) se disolvió en THF (70 mL) y se añadió TBAF (solución 1,0 M en THF, 30,0 mL, 30,0 mmol, 3,9 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente por 13 horas. A la solución de reacción se le añadió CH2O2 y la mezcla se lavó con una solución acuosa saturada de NH4Cl, agua y solución salina saturada, y la capa orgánica se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró, luego, el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se sometió a cromatografía en columna de gel de sílice (tolueno/THF, 100 : 0 - 85 : 15), para obtener un compuesto 90 (3,89 g, 51,0%).
Síntesis del compuesto 92
El compuesto 90 (259 mg, 0,215 mmol), NsNH2 (104 mg, 0,514 mmol, 2,4 equivalentes) y PPh3 (105 mg, 0,400 mmol, 1,9 equivalentes) se disolvieron en THF (2 mL) y se añadió DEAD (181 j L, 0,399 mmol, 1,9 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas y 55 minutos. Se añadieron PPh3 (13,3 mg, 0,0507 mmol, 0,24 equivalentes) y DEAD (22,7 j L, 0,0501 mmol, 0,24 equivalentes) y la mezcla se agitó durante 45 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 92 (293 mg, 98,1%). Síntesis del compuesto 93
El compuesto 13 (884 mg, 0,369 mmol), el compuesto 92 (536 mg, 0,385 mmol, 1,04 equivalentes) y PPh3 (197 mg) se disolvieron en THF (7,4 mL), y se añadió DEAD (168 j L) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Además, se añadieron PPh3 (97,7 mg, 0,372 mmol, 1,0 equivalente) y DEAD (84,0 j L, 0,185 mmol, 0,5 equivalentes) y la mezcla se agitó durante 30 minutos. Además, se añadieron PPh3 (97,6 mg, 0,372 mmol, 1,0 equivalente) y DEAD (84,0 j L, 0,185 mmol, 0,5 equivalentes) y la mezcla se agitó durante 1 hora y 50 minutos. Además, se añadieron PPh3 (97,9 mg, 0,373 mmol, 1,0 equivalente) y DEAD (84,0 j L, 0,185 mmol, 0,5 equivalentes) y la mezcla se agitó durante 40 minutos. Además, se añadieron PPh3 (98,3 mg, 0,375 mmol, 1,0 equivalente) y DEAD (84,0 j L, 0,185 mmol, 0,5 equivalentes) y la mezcla se agitó durante 30 minutos. El mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4 se realizó para obtener un residuo, que luego se sometió a cromatografía en columna de gel de sílice (CH2O2/THF, 100 : 0 - 90 : 10), para obtener un compuesto 93 (886 mg, 63,7%).
Síntesis del compuesto 94
Se obtuvo un compuesto 94 (68,0% del compuesto 93) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 84, con la excepción de que el material de partida se cambió por el compuesto 93. Síntesis del compuesto 95
Se obtuvo un com puesto 95 (110 mg, 82 ,6% ) de la m ism a m anera que en el ejem plo de síntesis descrito anteriorm ente del com puesto 85, excepto que el material de partida se cam bió por el com puesto 94.
Síntesis del com puesto 96
Se obtuvo un compuesto 96 (76,4%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 86, excepto que el material de partida se cambió por el compuesto 95.
Síntesis de Bdev-21
Se obtuvo Bdev-21 (27,0%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente de Bdev-19, con la excepción de que el material de partida se cambió por el compuesto 95. HRMS m/z [M H]+: calculado para C66H87N12O16: 1303.6363, encontrado 1303.5704.
(Ejemplo 12) Síntesis de Bdev-25
La ruta de síntesis de Bdev-25 se muestra esquemáticamente en la Figura 7.
Se sintetizó Bdev-25 como se describe a continuación.
Síntesis del compuesto 97
Una mezcla del compuesto 29 (2,35 g, 2,02 mmol), Fmoc-Nle(6-OH)-OH (890 mg, 2,41 mmol, 1,2 equivalentes), DMT-MM (860 mg, 3,11 mmol, 1,5 equivalentes) y DIPEA (697 |jL, 4,00 mmol, 2,0 equivalentes) en THF (40 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 40 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 97 (2,97 g, 99,0%).
Síntesis del compuesto 98
Se obtuvo un compuesto 98 (89,6%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 42, excepto que el compuesto 97 se usó como material de partida y el aminoácido a condensar se cambió por Fmoc-Leu-OH.
Síntesis del compuesto 99
Se obtuvo un compuesto 99 (2,65 g, 96,6%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 98, con la excepción de que el compuesto 98 se usó como material de partida y el aminoácido a condensar se cambió por Fmoc-Tyr(tBu)-OH.
Síntesis del compuesto 100
Se obtuvo un compuesto 100 (97,1%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 82, con la excepción de que el compuesto 99 se usó como material de partida.
Síntesis del compuesto 101
El compuesto 100 (3,60 g, 1,37 mmol) se disolvió en THF (30 mL) y se añadieron piperidina (300 j L) y DBU (300 j L) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 2, para obtener un compuesto 101 (3,20 g, 97,8%).
Síntesis del compuesto 102
El compuesto 101 (3,20 g, 1,34 mmol), el compuesto 40 (4,67 g, 3,36 mmol, 2,5 equivalentes) y PPh3 (1,41 g, 5,36 mmol, 4,0 equivalentes) se disolvieron en THF (27 mL) y se añadió DEAD (2.430 j L, 5,36 mmol, 4,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4 para obtener un residuo, que luego se sometió a cromatografía en columna de gel de sílice (tolueno/THF, 100 : 0 - 80 : 20), para obtener un compuesto 102 (2,51 g, 49,7%).
Síntesis del compuesto 103
Se obtuvo un compuesto 103 (93,5%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 14, excepto que el compuesto 102 se usó como material de partida.
Síntesis del compuesto 104
Se obtuvo un com puesto 104 (93 ,7 % ) de la m ism a m anera que en el ejem plo de síntesis descrito anteriorm ente del com puesto 15, con la excepción de que el com puesto 103 se usó como material de partida.
Síntesis del com puesto 105
Se obtuvo un compuesto 105 (92,8%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 16, con la excepción de que el compuesto 104 se usó como material de partida.
Síntesis del compuesto 106
Se obtuvo un compuesto 106 (86,6%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 22, con la excepción de que el compuesto 105 se usó como material de partida.
Síntesis de Bdev-25
Se obtuvo Bdev-25 (27,1%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis de Bdev-5 descrito anteriormente, con la excepción de que el compuesto 106 se usó como material de partida. HRMS m/z [M H]+: calculado para C66H87N12O16: 1.303,64, encontrado 1.303,72.
(Ejemplo 13) Síntesis de Bdev-27, Bdev-28, Bdev-29 y Bdev-30
La ruta de síntesis de Bdev-27, Bdev-28, Bdev-29 y Bdev-30 se muestra esquemáticamente en la Figura 8.
Se sintetizaron Bdev-27, Bdev-28, Bdev-29 y Bdev-30 como se describe a continuación.
Síntesis del compuesto 108
El compuesto 25 (319 mg, 0,113 mmol) se disolvió en CH2Q2 (2 mL), y se añadieron Et3N (31,8 |jL, 0,226 mmol, 2,0 equivalentes) y anhídrido propiónico (29,1 j L, 0,226 mmol, 2,0 equivalentes) y La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 108 (301 mg, 92,9%).
Síntesis del compuesto 109
Se obtuvo un compuesto 109 (90,7%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 108, con la excepción de que se usó anhídrido n-valérico en lugar de anhídrido propiónico.
Síntesis del compuesto 110
El compuesto 25 (315 mg, 0,111 mmol), MeO-[(CH2)2O]3CH2CH2CO2H (fabricado por Chempep: 31,3 mg, 0,132 mmol, 1,2 equivalentes), HOAt (18,3 mg, 0,134 mmol, 1,2 equivalentes) y HATU (55,2 mg, 0,145 mmol, 1,3 equivalentes) se disolvieron en THF (2220 j L), y se añadió DIPEA (96,7 j L, 0,555 mmol, 5,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y 10 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 110 (176 mg, 52,2%).
Síntesis del compuesto 111
Se obtuvo un compuesto 111 (40,9%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 110, excepto que se usó MeO-[(CH2)2O]7CH2CH2Co2H en lugar de MeO-[(CH2)2O]CH2CH2CO2H.
Síntesis de Bdev-27
Al compuesto 108 (301 mg, 0,105 mmol) se le añadieron una solución (10 mL) de TFA/TIS/H2O = 95 : 5 : 5 y TIS (1 mL) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas y 30 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis de Bdev-7, para obtener Bdev-27 (28,6 mg, 20,7%). HRMS m/z [M H]+: calculado para C67H89N12O16: 1.317,65, encontrado 1.317,52.
Síntesis de Bdev-28
Se obtuvo Bdev-28 (33,7%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente de Bdev-27, con la excepción de que el compuesto 109 se usó como material de partida. HRMS m/z [M H]+: calculado para C69H93N12O16: 1.345,68, encontrado 1.345,58.
Síntesis de Bdev-29
Se obtuvo Bdev-29 (18,1%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente de Bdev-27, con la excepción de que el compuesto 110 se usó como material de partida. HRMS m/z [M H]+: calculado para C74H103N12O20: 1.479,74, encontrado 1.479,57.
Síntesis de Bdev-30
Se obtuvo Bdev-30 (4,9%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente de Bdev-27, con la excepción de que el compuesto 111 se usó como material de partida. HRMS m/z [M H]+: calculado para C82H119N12O24: 1.655,85, encontrado 1.655,67.
(Ejemplo 14) Síntesis de Bdev-31
La ruta de síntesis de Bdev-31 se muestra esquemáticamente en la Figura 9.
Bdev-31 se sintetizó como se describe a continuación.
Síntesis del compuesto 112
Se obtuvo un compuesto 112 (q. y.) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 1, excepto que el aminoácido a condensar se cambió por Fmoc-Asp(OtBu)-OH.
Síntesis del compuesto 113
Se obtuvo un compuesto 113 (q. y.) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 42, excepto que el compuesto 112 se usó como material de partida y el aminoácido a condensar se cambió por Fmoc-Gly-OH.
Síntesis del compuesto 114
Se obtuvo un compuesto 114 (15,9 g, 98,1%, 5 etapas de Kb-OH) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 42, excepto que el compuesto 113 se usó como material de partida y el aminoácido a condensar se cambió por Fmoc-Arg(Pbf)-OH.
Síntesis del compuesto 115
Se obtuvo un compuesto 115 (87,0%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 91, excepto que el compuesto 114 se usó como material de partida.
Síntesis del compuesto 116
El compuesto 32 (2,32 g, 1,60 mmol) se disolvió en THF (32 mL), y se añadieron piperidina (238 |jL, 2,24 mmol, 1,4 equivalentes) y DBU (321 j L, 2,15 mmol, 1,3 equivalentes) y el La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 2, para obtener una forma de-Fmoc (2,01 g, 99,0%).
La forma de-Fmoc (2,01 g, 1,59 mmol) se disolvió en THF (29 mL) y DMF (3,2 mL) y se añadieron Fmoc-D-Phe-OH (924 mg, 2,38 mmol, 1,5 equivalentes), DMT-MM (904 mg, 3,27 mmol, 2,1 equivalentes) y DIPEA (277 j L, 1,59 mmol, 1,0 equivalente) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, luego se evaporó a presión reducida. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 116 (2,50 g, 98,4%).
Síntesis del compuesto 117
El compuesto 116 (2,50 g, 1,56 mmol) se disolvió en THF (31 mL) y se añadieron piperidina (232 j L, 2,18 mmol, 1,4 equivalentes) y DBU (313 j L, 2,09 mmol, 1,3 equivalentes) y el La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 2, para obtener un compuesto 117 (2,26 g, q. y.).
Síntesis del compuesto 118
El compuesto 117 (2,16 g, 1,53 mmol) se disolvió en THF (28 mL) y DMF (3 mL), y se añadieron el compuesto 115 (2,02 g, 2,30 mmol, 1,5 equivalentes), DMT-MM (918 g, 3,32 mmol, 2,2 equivalentes) y DIPEA (1334 j L, 7,66 mmol, 5,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, luego se evaporó a presión reducida. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 118 (3,41 g, 99,7%).
Síntesis del compuesto 119
El compuesto 118 (3,41 g, 1,53 mmol) se disolvió en THF (31 mL) y se añadieron piperidina (227 j L, 2,13 mmol, 1,4 equivalentes) y DBU (305 j L, 2,04 mmol, 1,3 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 2, para obtener una forma de-Fmoc (3,25 g, q. y.).
La forma de-Fmoc (2,05 g, 1,00 mmol) se disolvió en THF (18 mL) y DMF (2 mL), y se añadieron Fmoc-Nle (6-OH)-OH (443 mg, 1,20 mmol, 1,2 equivalentes ), DMT-MM (381 mg, 1,20 mmol, 1,2 equivalentes) y DIPEA (348 |jL, 2,00 mmol, 2,0 equivalentes) Y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, luego se evaporó a presión reducida. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 119 (2,43 g, q. y.).
Síntesis del compuesto 120
El compuesto 119 (1,18 g, 0,500 mmol) se disolvió en THF (9 mL) y DMF (1 mL) y se añadieron piperidina (59,0 j L, 0,554 mmol, 1,1 equivalentes) y DBU (70,0 j L, 0,468 mmol, 0,94 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 2, para obtener una forma de-Fmoc (1,05 g, 96,0%).
La forma de-Fmoc (435 mg, 0,200 mmol) se disolvió en CH2O2 (4 mL), y se añadieron Boc2O (65,0 mg, 0,298 mmol, 1.5 equivalentes) y Et3N (84,0 j L, 0,598 mmol, 3,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadió Boc2O (22,5 mg, 0,103 mmol, 0,52 equivalentes) y se confirmó la desaparición de los materiales de partida, luego, se evaporó a presión reducida. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 120 (481 mg, q. y.%).
Síntesis del compuesto 121
El compuesto 120 (218 mg, 0,0973 mmol) y PPh3 (51,1 mg, 0,195 mmol, 2,0 equivalentes) se disolvieron en tolueno (28,5 mL), y se diluyó DEAD (88,0 j L, 0,194 mmol, 2,0 equivalentes) con tolueno (20 mL) y se dejó gotear durante un período de 1 hora y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4 para obtener un residuo, que luego se sometió a cromatografía en columna de gel de sílice (CHCb/EtOH, 100 : 0 - 90 : 10), para obtener un compuesto 121 (198 mg, 91,6%).
Síntesis del compuesto 122
Se obtuvo un compuesto 122 (q. y.) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 16, con la excepción de que el compuesto 121 se usó como material de partida.
Síntesis de Bdev-31
Se obtuvo Bdev-31 (77,1%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente de Bdev-7, con la excepción de que el compuesto 122 se usó como material de partida. MS m/z [M H]+: calculado para C33H53N10O9: 733,40, encontrado 733,39.
(Ejemplo 15) Síntesis de Bdev-32
La ruta de síntesis de Bdev-32 se muestra esquemáticamente en las Figuras 10 a 16.
Bdev-32 se sintetizó como se describe a continuación.
Síntesis del compuesto 123
El compuesto 2 (2,55 g, 3,00 mmol) se disolvió en THF (54 mL) y DMF (6 mL), y se añadieron Fmoc-Lys(Boc)-OH (1,69 g, 3,60 mmol, 1,2 equivalentes), HBTU (1,37 g, 3,60 mmol, 1,2 equivalentes), HOBtH2O (482 mg, 3,15 mmol, 1.05 equivalentes) y DIPEA (1568 j L, 9,00 mmol, 3,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, luego, evaporado bajo presión reducida. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4 sobre el residuo, para obtener un compuesto 123 (3,80 g, q. y.).
Síntesis del compuesto 124
Se obtuvo un compuesto 124 (97,7%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 42, excepto que el compuesto 123 se usó como material de partida y el aminoácido a condensar se cambió por Fmoc-Ser(tBu)-OH.
Síntesis del compuesto 125
Se obtuvo un compuesto 125 de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 42, con la excepción de que el compuesto 124 se usó como material de partida y el aminoácido a condensar se cambió por Fmoc-Leu-OH.
Síntesis del com puesto 126
Se obtuvo un com puesto 126 (83 ,7% , 7 etapas a partir del com puesto 2) de la m ism a m anera que en el ejem plo de síntesis descrito anteriorm ente del com puesto 42, excepto que el com puesto 125 se usó como material de partida y el am inoácido para condensarse se cam bió por Boc-G ly-OH.
Síntesis del compuesto 127
El compuesto 126 (3,66 g, 2,51 mmol) se disolvió en CH2Q2 (126 mL) y se añadieron TFE (13 mL) y TFA (1300 |jL) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. El material precipitado se filtró, al filtrado se le añadió DIPEA (2.940 j L, 16,7 mmol), luego, la mezcla se evaporó a presión reducida. Al residuo se le añadió agua hasta la deposición de un material precipitado, que luego se filtró, se suspendió y se lavó con agua dos veces, para obtener un compuesto 127 (1,53 g, 84,9%).
Síntesis del compuesto 128
Se obtuvo un compuesto 128 (96,5%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 123, con la excepción de que el aminoácido a condensar se cambió por Fmoc-Phe-OH.
Síntesis del compuesto 129
Se obtuvo un compuesto 129 (99,3%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 42, excepto que el compuesto 128 se usó como material de partida y el aminoácido a condensar se cambió por Fmoc-Nle (6-OH)-OH.
Síntesis del compuesto 130
Se obtuvo un compuesto 130 (84,6%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 2, con la excepción de que el compuesto 129 se usó como material de partida.
Síntesis del compuesto 131
El compuesto 130 (564 mg, 0,500 mmol) se disolvió en THF (9 mL) y DMF (1 mL), y se añadieron el compuesto 127 (430 mg, 0,600 mmol, 1,2 equivalentes), DMT-MM (166 mg, 0,600 mmol, 1,2 equivalentes) y DIPEA (261 j L, 1,50 mmol, 3,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, luego se evaporó a presión reducida. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 131 (817 mg, 91,3%).
Síntesis de los compuestos 132 a 137
Reacción de desprotección de Fmoc: se disolvió un péptido protegido con Fmoc (1,0 equivalente) en THF (40 mL) y se añadieron piperidina (1,3 equivalentes) y DBU (1,2 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 2, para obtener una forma de-Fmoc.
Reacción de condensación de aminoácidos: la forma de-Fmoc (1,0 equivalente) se disolvió en THF (36 mL) y DMF (4 mL), y se añadieron Fmoc-aminoácido (1,2 equivalentes), HBTU (1,2 equivalentes), HOBtH2O (1,2 equivalentes) Y DIPEA (3,6 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, luego se evaporó a presión reducida. Se realizó el mismo tratamiento posterior que para la síntesis del compuesto 4. El alargamiento de aminoácidos se realizó mediante el método descrito anteriormente, para obtener un compuesto 137 (11,4 g, 86,4%, 14 etapas a partir del compuesto 131).
Síntesis del compuesto 138
Se obtuvo un compuesto 138 (98,4%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 127, excepto que el compuesto 137 se usó como material de partida.
Síntesis del compuesto 139
Se obtuvo un compuesto 139 (q. y.) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 123, excepto que el aminoácido a condensar se cambió por Fmoc-Ser(tBu)-OH.
Síntesis del compuesto 140
Se obtuvo un com puesto 140 (99 ,6% , 3 etapas a partir del com puesto 2) de la m ism a m anera que en el ejem plo de síntesis descrito anteriorm ente del com puesto 42, excepto que el com puesto 139 se usó como material de partida y el am inoácido a condensar se cambió por Fm oc-M et-O H .
Síntesis del compuesto 141
[0332] Se obtuvo un compuesto 141 (99,9%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 42, excepto que el compuesto 140 se usó como material de partida.
Síntesis del compuesto 142
Se obtuvo un compuesto 142 (88,4%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 91, excepto que el compuesto 141 se usó como material de partida.
Síntesis del compuesto 143
Se obtuvo un compuesto 143 (q. y.) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 123, excepto que el aminoácido a condensar se cambió por Fmoc-Leu-OH.
Síntesis del compuesto 144
Se obtuvo un compuesto 144 de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 2, con la excepción de que el compuesto 129 se usó como material de partida.
Síntesis del compuesto 145
El compuesto 144 (1,35 g) se disolvió en THF (25 mL) y DMF (3 mL), y se añadieron el compuesto 142 (1,27 g, 1,77 mmol), HATU (639 mg, 1,68 mmol), HOAt (200 mg, 1,47 mmol) y DIPEA (732 |jL, 4,20 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se añadió DIPEA (732 j L, 4,20 mmol) y se confirmó la desaparición de los materiales de partida, luego, se evaporó a presión reducida. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4 sobre el residuo, para obtener un compuesto 145 (1,98 g, q. y., 2 etapas a partir del compuesto 143). Síntesis del compuesto 146
Se obtuvo un compuesto 146 (820 mg, q. y.) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 91, excepto que el compuesto 145 se usó como material de partida.
Síntesis del compuesto 147
El compuesto 32 (701 mg, 0,484 mmol), el compuesto 131 (1,73 g, 0,968 mmol, 2,0 equivalentes) y PPh3 (254 mg, 0,968 mmol, 2,0 equivalentes) se disolvieron en THF (36 mL) y DEAD (1097 j L, 2,42 mmol, 5,0 equivalentes) se disolvió en THF (12 mL) y se añadió durante un período de 1 hora y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se realizó l mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4 para obtener un residuo, que luego se sometió a cromatografía en columna de gel de sílice (CHCb/THF, 100 : 0 - 75 : 25 y CHCb/THF, 100 : 0 - 80 : 20), para obtener un compuesto 147 (224 mg, 14,4%).
Síntesis del compuesto 148
Se obtuvo un compuesto 148 (57,1%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 2, excepto que el compuesto 145 se usó como material de partida.
Síntesis del compuesto 149
El compuesto 148 (120 mg, 0,0430 mmol) se disolvió en THF (776 j L) y DMF (86,0 j L), y se añadieron el compuesto 146 (65,6 mg, 0,0741 mmol, 1,7 equivalentes), DMT-MM (17,1 mg, 0,0618 mmol, 1,4 equivalentes) y DIPEA (15,0 j L, 0,0861 mmol, 2,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 45 minutos. La mezcla se agitó a 40 °C y se confirmó la desaparición de los materiales de partida, luego, se evaporó a presión reducida. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 149 (138 mg, 84,2%). Síntesis del compuesto 150
Se obtuvo un com puesto 150 (96 ,1 % ) de la m ism a m anera que en el ejem plo de síntesis descrito anteriorm ente del com puesto 2, excepto que el com puesto 149 se usó como material de partida.
Síntesis del compuesto 151
El compuesto 150 (126 mg, 0,0350 mmol) se disolvió en THF (1,25 mL) y DMF (139 | j L), y se añadieron el compuesto 138 (75,6 mg, 0,0523 mmol, 1,5 equivalentes), DMT-MM (13,2 g, 0,0477 mmol, 1,4 equivalentes) y DIPEA (24,2 j L, 0,139 mmol, 4,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 35 minutos, luego, se evaporó a presión reducida. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 151 (164 mg, 94,3%).
Síntesis del compuesto 152
El compuesto 151 (164 mg, 0,0326 mmol) se disolvió en THF (1.8 mL) y DMF (196 j L) y se añadieron piperidina (3,90 j L, 0,0366 mmol, 1,1 equivalentes) y DBU (9,20 j L, 0,0615 mmol, 1,9 equivalentes) se añadieron y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se añadió DBU (3,00 j L, 0,0201 mmol) y se confirmó la desaparición de las materias primas, luego, se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 2, para obtener una forma de-Fmoc (191 mg).
La forma de-Fmoc se disolvió en CH2O2 (3,3 mL) y se añadieron TFE (326 j L) y TFA (32,6 j L) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos. El material precipitado se filtró, al filtrado se le añadió DIPEA (76,5 j L, 0,439 mmol), luego, se evaporó a presión reducida. Al residuo se le añadió agua hasta la deposición de un material precipitado, que luego se filtró, se suspendió y se lavó con agua dos veces, para obtener una forma de-Kb (114 mg). La forma de-Kb se disolvió en THF (5,0 mL) y DMF (560 j L), y se añadieron DMT-MM (11,1 mg, 0,0401 mmol) y DIPEA (9,80 j L, 0,0563 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, luego, esto se evaporó a presión reducida. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 152 (110 mg, 83,7%, 3 etapas a partir del compuesto 151).
Síntesis del compuesto 153
Se obtuvo un compuesto 153 (98,2%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 16, con la excepción de que el compuesto 152 se usó como material de partida.
Síntesis de Bdev-32
Al compuesto 16 (103 mg, 0,0268 mmol) se le añadió una solución (3 mL) de TFA/H2O/PhOH/PhSMe/EDT = 82,5/5/5/5/2,5 y la mezcla se agitó a temperatura ambiente por 6 horas. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis de Bdev-7, para obtener Bdev-32 (43,0 mg, 76,4%) como producto crudo. MS m/z [M H]+: calculado para C99H171N28O28S: 2.232,25, encontrado 2.232,23.
(Ejemplo 16) Síntesis de Bdev-33
La ruta de síntesis de Bdev-33 se muestra esquemáticamente en las Figuras 17 a 20.
Se sintetizó Bdev-33 como se describe a continuación.
Síntesis del compuesto 154
Se obtuvo un compuesto 154 (q. y.) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 1, excepto que el aminoácido a condensar era Fmoc-Leu-OH.
Síntesis del compuesto 155
Se obtuvo un compuesto 155 (99,8%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 42, excepto que el compuesto 154 se usó como material de partida y el aminoácido a condensar se cambió por Fmoc-Met-OH.
Síntesis del compuesto 156
El compuesto 155 (1,67 g, 1,36 mmol) se disolvió en CH2O2 (136 mL) y se añadieron TFE (13,6 mL) y TFA (1361 j L) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. El material precipitado se filtró, al filtrado se le añadió DIPEA (3.191 j L, 18,3 mmol), luego, se evaporó a presión reducida. Al residuo se le añadió agua para dilución, se añadió HCl acuoso 1 N para alcanzar pH 4, y se añadió CH2O2 y se realizó la extracción del mismo. La capa orgánica se lavó con agua tres veces, se lavó con NaCl acuoso saturado, se secó sobre MgSO4, se filtró y el filtrado se evaporó a presión reducida. El residuo se suspendió y se lavó con n-hexano dos veces, para obtener un compuesto 156 (664 mg, q. y.).
Síntesis del compuesto 157
Se obtuvo un compuesto 157 (93,1%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 40, con la excepción de que el aminoácido a condensar era Fmoc-Thr(tBu)-OH.
Síntesis del com puesto 158
Se obtuvo un com puesto 158 (92 ,2 % ) de la m ism a m anera que en el ejem plo de síntesis descrito anteriorm ente del com puesto 42, excepto que el com puesto 157 se usó como material de partida y el am inoácido a condensar se cambió por Fm oc-Ser(tB u)-O H .
Síntesis del compuesto 159
Se obtuvo un compuesto 159 (94,9%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 42, excepto que el compuesto 158 se usó como material de partida y el aminoácido a condensar se cambió por Fmoc-Leu-OH.
Síntesis del compuesto 160
Se obtuvo un compuesto 160 (97,9%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 42, excepto que el compuesto 159 se usó como material de partida y el aminoácido a condensar se cambió por Fmoc-Asn(Trt)-OH.
Síntesis del compuesto 161
Se obtuvo un compuesto 161 (99,7%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 42, excepto que el compuesto 160 se usó como material de partida y el aminoácido a condensar se cambió por Fmoc-Gly-OH.
Síntesis del compuesto 162
Se obtuvo una forma de-Fmoc de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 42, excepto que se usó el compuesto 161 (2,11 g, 0,997 mmol) como material de partida.
La forma de-Fmoc se disolvió en THF (18 mL) y DMF (2 mL), y se añadieron Fmoc-Nle(6-OH)-OH (443 mg, 1,20 mmol), DMT-MM (381 mg, 1,38 mmol) y DIPEA (348 |jL, 2,00 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 40 minutos, luego se evaporó a presión reducida. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 162 (2,29 g, q. y.).
Síntesis del compuesto 163
Se obtuvo una forma de-Fmoc (1,07 g) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 42, excepto que se usó el compuesto 162 (1,13 g, 0500 mmol) como material de partida.
La forma de-Fmoc se disolvió en CH2Cl2 (10 mL), y se añadieron Boc2O (218 mg, 0,999 mmol) y Et3N (209 j L, 1,49 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadió Boc2O (55,0 mg, 0,252 mmol) y se confirmó la desaparición de los materiales de partida, luego, se evaporó a presión reducida. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 163 (1,16 g, q. y.).
Síntesis del compuesto 164
Se sintetizó un compuesto 164 de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 121, excepto que el compuesto 163 se usó como material de partida. El mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4 se realizó para obtener un residuo, que luego se sometió a cromatografía en columna de gel de sílice (CH2O2/THF, 100 : 0 - 65 : 35 y CH2Ch/EtOH, 92 : 8), para obtener un compuesto 164 (26,9%). Síntesis del compuesto 165
El compuesto 164 (210 g, 0,0920 mmol) se disolvió en CH2O2 (10 mL), se añadieron TFE (1 mL) y TFA (92,0 j L) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos. El material precipitado se filtró, al filtrado se le añadió DIPEA (220 jl, 1,26 mmol), luego, se evaporó a presión reducida. Al residuo se le añadió agua hasta la deposición de un material precipitado, que luego se filtró, se suspendió y se lavó con agua dos veces, se suspendió y se lavó con IPE tres veces, para obtener un compuesto 165 (144 mg, q. y.).
Síntesis del compuesto 166
Se obtuvo un compuesto 166 (q. y.) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 1, excepto que el aminoácido a condensar era Fmoc-Lys(Boc)-OH.
Síntesis de los compuestos 167 a 175
Reacción de desprotección de Fmoc: se disolvió un péptido protegido con Fmoc (1,0 equivalente) en THF (40 mL) y se añadieron piperidina (1,3 equivalentes) y DBU (1,2 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 2, para obtener una forma de-Fmoc.
Reacción de condensación de aminoácidos: la forma de-Fmoc (1,0 equivalente) se disolvió en THF (36 mL) y DMF (4 mL) y se añadieron Fmoc-aminoácido (1,2 equivalentes), HBTU (1,2 equivalentes), HOBtH2O (1,2 equivalentes) y DIPEA (3,6 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, luego se evaporó a presión reducida. Se realizó el mismo tratamiento posterior que para la síntesis del compuesto 4. El alargamiento de aminoácidos se realizó mediante el método descrito anteriormente, para obtener un compuesto 175 (5,03 g, 38,0%, 17 etapas a partir del compuesto 166).
Síntesis del compuesto 176
El compuesto 175 (959 mg, 0,361 mmol) se disolvió en THF (6,8 mL), y se añadieron el compuesto 156 (247 mg, 0,510 mmol, 1,4 equivalentes), DMT-MM (138 mg, 0,510 mmol, 1,4 equivalentes) y DIPEA (178 |jL, 1,02 mmol, 2,8 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos, luego se evaporó a presión reducida. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 176 (1,13 g, q. y.).
Síntesis del compuesto 177
Se obtuvo un compuesto 177 (91,2%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrita anteriormente del compuesto 2, excepto que el compuesto 176 se usó como material de partida.
Síntesis del compuesto 178
El compuesto 177 (243 mg, 0,0830 mmol) se disolvió en THF (1,5 mL) y DMF (170 j L), y se añadieron el compuesto 165 (136 mg, 0,0993 mmol, 1,2 equivalentes), DMT-MM (28,0 mg, 0,101 mmol, 1,2 equivalentes) y DIPEA (28,9 j L, 0,166 mmol, 2,0 equivalentes) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 35 minutos, luego se evaporó a presión reducida. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis del compuesto 4, para obtener un compuesto 178 (298,2 mg, 85,2%).
Síntesis del compuesto 179
Se obtuvo un compuesto 179 (253 mg, 91,1%) de la misma manera que en el ejemplo de síntesis descrito anteriormente del compuesto 16, con la excepción de que el compuesto 178 se usó como material de partida.
Síntesis de Bdev-33
Al compuesto 179 (127 mg, 0,0316 mmol) se le añadió una solución (3 mL) de TFAZ-hO/PhOH/PhSMe/EDT = 82,5/5/5/5/2,5 y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se realizó el mismo tratamiento posterior que en la síntesis de Bdev-7, para obtener Bdev-33 (55,6 mg, 86,7%). MS m/z [M H]+: calculado para C89H142N23O29S: 2.029,01, encontrado 2.028,99.
Como se muestra por estos resultados, es posible introducir un entrecruzamiento de la presente invención en lugar del enlace disulfuro original en un péptido cíclico que muestra actividad farmacológica, y como resultado, puede sintetizarse un péptido que tiene una nueva estructura de entrecruzamiento.
(Ejemplo comparativo) Síntesis del compuesto comparativo
Como compuesto comparativo, se usó un péptido W9 (entrecruzamiento de disulfuro: número de compuesto: STD). El péptido W9 se preparó condensando alcohol 2,4-docosiloxibencílico con un aminoácido sucesivamente, para sintetizar una secuencia lineal, luego, formando un enlace disulfuro por oxidación con yodo, y escindiendo alcohol 2,4-docosiloxibencílico mediante ácido trifluoroacético.
(Ejemplo de referencia) Síntesis del compuesto de referencia
Como ejemplo de referencia, se usó un cuerpo modificado en el que la porción de entrecruzamiento se había convertido en un entrecruzamiento de tioéter (número de compuesto: Comp. 1) o un entrecruzamiento de olefina (número de compuesto: Comp. 3). El péptido W9 entrecruzado con tioéter se sintetizó de acuerdo con un esquema de síntesis descrito en la Figura 21. El péptido W9 entrecruzado con olefina se sintetizó de acuerdo con un esquema de síntesis descrito en la Figura 22.
(Ejemplo 17) Resistencia a la peptidasa
La resistencia a una peptidasa de un péptido de la presente invención se investigó usando una carboxipeptidasa y quimotripsina. La resistencia a una peptidasa se midió como se describe a continuación.
(Descomposición por carboxipeptidasa)
Una carboxipeptidasa adquirida a través de SIGMA se trató con PBS para preparar una solución enzimática de 1 U/mL, que luego se mantuvo caliente a 37 °C en un baño de agua. Luego, se trató una solución peptídica que tenía una concentración ajustada a 5 mg/mL con DMSO : agua pura = disolvente mixto 1:1 con PBS (-) para obtener una concentración de 1 mg/mL, y la solución enzimática y la solución peptídica se mezclaron 4 : 1 para producir una concentración final de péptido de 0,2 mg/mL. Posteriormente, estos reaccionaron rápidamente a 37 °C. Con el tiempo, la solución de reacción se muestreó cada una en una cantidad de 0,1 mL, y se añadió una solución de detención de la reacción (TFA al 25% en acetonitrilo, 20 | j L) para detener la reacción. Las muestras se analizaron por HPLC y se midió la descomposición de un péptido por la peptidasa. El muestreo se realizó a los 0, 0,5 minutos, 1 minuto y 2 minutos, y cuando no se obtuvo una descomposición del 50% o más a los 2 minutos, el muestreo se realizó adicionalmente a las 0,5 horas, 1 hora, 3 horas, adicionalmente, a veces a las 6 horas, y para péptidos estables durante un largo período, el muestreo se realizó en un rango de 24 horas a 168 horas de acuerdo con las demandas. Se midió el tiempo en el que se descompuso la mitad del péptido añadido. Los resultados se muestran en la Tabla 3.
(Descomposición por quimotripsina)
La quimotripsina adquirida a través de SIGMA se trató con Tris-HCl 0,1 M (pH 8,0) para preparar una solución enzimática de 4U/mL, que luego se mantuvo caliente a 37 °C en un baño de agua. Luego, se trató una se trató solución peptídica con DMSO: agua pura = 1 : 1 para obtener una concentración de 5 mg/mL con Tris-HCl 0,1 M (pH 8,0) para obtener una concentración de 1 mg/mL, y la solución enzimática y la solución de péptido se mezcló a 4 : 1 para obtener una concentración final de péptido de 0,2 mg/mL. Posteriormente, estos reaccionaron rápidamente a 37 °C. Con el tiempo, la solución de reacción se muestreó cada una en una cantidad de 0,1 mL, y se añadió una solución de detención de la reacción (TFA al 25% en acetonitrilo, 20 j L) para detener la reacción. Las muestras se analizaron por HPLC y se midió la descomposición de un péptido por quimotripsina. El muestreo se realizó a los 0, 0,5 minutos, 1 minuto y 2 minutos, y cuando no se obtuvo una descomposición del 50% o más a los 2 minutos, el muestreo se realizó adicionalmente a las 0,5 horas, 1 hora, 3 horas y se midió el tiempo al cual se descompuso la mitad del péptido agregado. Los resultados se muestran en la Tabla 3.
T l 1
Figure imgf000077_0001
Los resultados descritos anteriormente enseñan que una imitación de péptido W9 de la presente invención fabricada de acuerdo con el método de entrecruzamiento de la presente invención muestra una resistencia mejorada a la descomposición con una peptidasa, en comparación con un péptido W9 que contiene un entrecruzamiento de disulfuro o un entrecruzamiento de tioéter.
Las descripciones detalladas anteriores se proporcionan solo para explicar el objeto y el sujeto de la presente invención, y no limitan el alcance de las reivindicaciones adjuntas. Varios cambios y sustituciones para las realizaciones descritas son evidentes para los expertos en la técnica basados en las enseñanzas descritas en la presente memoria descriptiva, sin desviarse del alcance de las reivindicaciones adjuntas.
Aplicabilidad industrial
La presente invención proporciona un péptido entrecruzado que contiene una nueva estructura entrecruzada no peptídica, y un método para sintetizar el mismo. Tal péptido entrecruzado es útil ya que puede manifestar diversas naturalezas mejoradas.

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un péptido entrecruzado representado por la siguiente fórmula química:
    [fórmula química 1]
    Figure imgf000079_0001
    (en la que, X se selecciona del grupo que consiste en las siguientes fórmulas químicas:
    lado del centro de lado del
    entrecruzamlento v**V péptido
    lado del centro de lado del
    entrecruzamiento
    Figure imgf000079_0002
    péptido
    lado del centro de lado del
    entrecruzamiento
    Figure imgf000079_0003
    péptido
    lado del centro
    entrecruzamien
    Figure imgf000079_0004
    Figure imgf000079_0005
    en las que, n representa un número entero de 1 a 12, m representa un número entero de 1 a 24 e I representa un número entero de 1 a 24);
    Y es cualquiera seleccionado del grupo que consiste en el siguiente compuesto Y1 y el compuesto Y4:
    (Compuesto Y1)
    Figure imgf000079_0006
    (Compuesto Y4)
    [fórmula química 11]
    lado del centro de lado del
    entrecruzamlento
    Figure imgf000080_0001
    péptldo
    lado del centro de lado del
    entrecruzamiento
    Figure imgf000080_0002
    péptido
    lado del centro de
    entrecmzamiento
    Figure imgf000080_0003
    .
    lado del centro de
    entrecruzamiento
    Figure imgf000080_0004
    lado del centro de lado del
    entrecruzamiento
    Figure imgf000080_0005
    péptido
    (en el que, o representa un número entero de 1 a 12, p representa un número entero de 1 a 27, q representa un número entero de 1 a 24),
    Z representa hidrógeno, un grupo alquilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 30 átomos de carbono, un grupo acilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 36 átomos de carbono, polietilenglicol, un grupo t-Boc, un grupo Fmoc, un grupo Cbz o un grupo Nosilo, [E] representa un átomo de hidrógeno, un grupo acilo opcionalmente sustituido que tiene 1 a 6 átomos de carbono o un péptido que tiene de 1 a 20 residuos compuestos de aminoácidos y/o aminoácidos no naturales como elementos constituyentes, [G] representa OH, un grupo amino o un péptido que tiene de 1 a 20 residuos compuestos de aminoácidos y/o aminoácidos no naturales como elementos constituyentes, [F] representa un péptido que tiene de 1 a 20 residuos compuestos de aminoácidos y/o aminoácidos no naturales como elementos constituyentes (aquí, la suma de los números de aminoácidos de [E], [F] y [G] es al menos 3), y (A) y (B) representan cada uno independientemente una estructura representada por cualquiera de la siguiente fórmula:
    [fórmula química 2]
    Figure imgf000080_0006
    (en la que, R1, R3 y R4 representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo metilo, y R2 representa un átomo de hidrógeno o una cadena lateral de un aminoácido o aminoácido no natural).
    2. El péptido entrecruzado de acuerdo con la reivindicación 1 representado por la siguiente fórmula:
    [fórmula química 3]
    Figure imgf000080_0007
    (en la que X, Y, Z, [E], [F], [G], R1, R2, R3 y R4 son como se describieron anteriormente).
    3. El péptido entrecruzado de acuerdo con la reivindicación 1 representado por la siguiente fórmula:
    [fórmula química 4]
    Figure imgf000081_0001
    (en la que, X, Z, [E], [F], [G], R1, R2, R3 y R4 son como se describieron anteriormente).
    4. El péptido entrecruzado de acuerdo con la reivindicación 1 representado por la siguiente fórmula:
    [fórmula química 5]
    Figure imgf000081_0002
    (en la que, X, Z, [E], [F], [G], R1 y R4 son como se describieron anteriormente. Aquí, Xs, R1s o R4s en la fórmula química pueden ser iguales o diferentes).
    5. El péptido entrecruzado de acuerdo con la reivindicación 1 representado por la siguiente fórmula:
    [fórmula química 6]
    Figure imgf000081_0003
    (en la que, Y, Z, [E], [F], [G], R2 y R3 son como se describieron anteriormente. Aquí, Ys, R2s o R3s en la fórmula química pueden ser iguales o diferentes).
    6. El péptido entrecruzado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que X es cualquiera seleccionado del grupo que consiste en las siguientes fórmulas químicas:
    [fórmula química 17]
    Figure imgf000082_0001
    (en las que, n' representa un número entero de 1 a 7, m' representa un número entero de 1 a 11 y l' representa un número entero de 1 a 12)
    y Y es cualquiera seleccionado del grupo que consiste en las siguientes fórmulas químicas:
    [fórmula química 18]
    lado dol centro do \ dol lado dol contro do
    ontrocruzamlonto V J k lado
    ( lado del
    póptldo ontrocruzamlonto
    Figure imgf000082_0002
    póptldo
    lado dol contro do lado dol centro do
    ontrocruzamlonto lado dol ontrocruzamlonto lado dol
    Figure imgf000082_0003
    póptldo ,
    Figure imgf000082_0004
    póptldo
    lado dol centro do lado dol lado dol
    ontrocruzamlonto
    Figure imgf000082_0005
    lado dol
    póptldo contro do ontrocruz¡aml loon
    Figure imgf000082_0006
    póptldo
    . lado dol
    lado del contro do \
    Figure imgf000082_0007
    j póptldo lado dol contro do'
    ontrocruzamlonto ' ontrocruzamlonto V k ' K H v iad° d<>| wf\ póptldo ,
    . | lado dol
    lado dol contro do
    ontrocruzamlonto V i s - p ° ' ^ V ^ PéP"d0 lado do1 con,ro lad0 do1lM,J- * ontrocruzamlonto 1 V ^ 1 póplldo
    lado del contro do dol
    ontrocruzamlonto
    Figure imgf000082_0008
    póptldo
    (en las que, o' representa un número entero de 1 a 8, p' representa un número entero de 1 a 11 y q' representa un número entero de 1 a 12).
    7. El péptido entrecruzado de acuerdo con uno cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que Z es un grupo acilo que tiene de 1 a 8 átomos de carbono, un grupo alquilo no sustituido o sustituido que tiene de 1 a 8 átomos de carbono, el polietilenglicol que tiene un peso molecular de 100 a 10.000 Da representado por -C(=O)-CH2CH2(OCH2CH2)nOCH2CH2OCH3 o cualquiera seleccionado del grupo que consiste en las siguientes fórmulas:
    [fórmula química 19]
    Figure imgf000083_0001
    (en las que, n representa un número entero de 1 a 12, q' representa un número entero de 1 a 12, v representa 1 o 2 y w representa un número entero de 1 a 12 (aquí, R5 está representado por la siguiente fórmula:
    [fórmula química 20]
    Figure imgf000083_0002
    y R6 está representado por la siguiente fórmula:
    [fórmula química 21]
    Figure imgf000083_0003
    8. El péptido entrecruzado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que cada uno de [E] y [G] representa al menos un aminoácido y/o aminoácido no natural y [F] representa al menos dos aminoácidos y/o aminoácidos no naturales.
    9. Un compuesto representado por la siguiente fórmula química:
    [fórmula química 22]
    Figure imgf000084_0001
    (en la que, X se selecciona del grupo que consiste en las siguientes fórmulas:
    rl2
    lado del centro de 'N ^ ^ f^ ' is ^ / la d o del
    entrecruzamlento • n ' péptldo
    lado del centro de y r a - v f e L y lado del
    entrecruzamlento péptido
    lado del centro de
    Figure imgf000084_0002
    lado del
    entrecruzamlento péptido
    Figure imgf000084_0003
    lado del centro de > " { l laaddo del
    entrecruzamlento T
    Figure imgf000084_0004
    P p^é Fptido
    lado del centro de lad0 del
    Figure imgf000084_0005
    ’ péptldo
    entrecruzamlento
    lado del centro de r i ríí'¡r~ Y l paédp0tl ddeol
    entrecruzamlento
    Figure imgf000084_0006
    lado del centro de lado del
    entrecruzamlento
    Figure imgf000084_0007
    péptido
    (en las que, n representa un número entero de 1 a 12, m representa un número entero de 1 a 24 y I representa un número entero de 1 a 24),
    Y es cualquier compuesto seleccionado del grupo que consiste en el siguiente compuesto Y1, y el compuesto Y4:
    (Compuesto Y1)
    lado del centro de lado del
    entrecruzamlento
    Figure imgf000084_0008
    péptido
    lado del centro de lado del
    entrecruzamiento
    Figure imgf000084_0009
    péptldo
    (Compuesto Y4)
    lado del centro de lado del
    entrecruzamlento
    Figure imgf000085_0001
    péptido
    lado del centro de
    entrecruzamlento lado del
    Figure imgf000085_0002
    péptido
    lado del centro de lado del
    entrecruzamiento
    Figure imgf000085_0003
    péptido
    lado del
    lado del centro de péptido
    entrecruzamlento
    Figure imgf000085_0004
    lado del centro de
    entrecruzamlento
    Figure imgf000085_0005
    (en las que, o representa un número entero de 1 a 12, p representa un número entero de 1 a 27, q representa un número entero de 1 a 24,
    Z representa hidrógeno, un grupo alquilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 30 átomos de carbono, un grupo acilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 36 átomos de carbono, polietilenglicol, un grupo t-Boc, un grupo Fmoc, un grupo Cbz o un grupo Nosilo, [A], [B], [C] y [D] representan cada uno independientemente un péptido que tiene de 1 a 20 residuos compuestos de aminoácidos y/o aminoácidos no naturales como elementos constituyentes o un enlace sencillo, (a) y (c) representan cada uno independientemente -NH- o un enlace sencillo, (b) y (d) representan cada uno independientemente -(C=O)- o un enlace sencillo (aquí, la suma de los números de aminoácidos de [A], [B], [C] y [D] es al menos 1, y cada uno de ellos puede tener un grupo protector de cadena lateral), R1, R3 y R4 representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo metilo, R2 representa un átomo de hidrógeno o una cadena lateral de un aminoácido o aminoácido no natural, P1 y P3 representa cada uno independientemente un grupo protector de amino o un átomo de hidrógeno, P2 y P4 representan cada uno independientemente un grupo protector de -O-éster, un grupo protector de -NH-bencilo, un grupo amino o un grupo hidroxilo).
    10. Un compuesto representado por la siguiente fórmula química:
    [fórmula química 23]
    Figure imgf000085_0006
    (en la que, X se selecciona del grupo que consiste de las siguientes fórmulas:
    n 2
    lado del centro d e / lado del
    entrecruzamiento ’ n > péptido
    lado del centro de lado del
    entrecruzamiento
    Figure imgf000086_0001
    péptido
    lado del centro de
    Figure imgf000086_0002
    lado del
    entrecruzamiento péptido
    lado del centro de lado del
    entrecruzamiento
    Figure imgf000086_0003
    péptido
    lado del
    lado del centro de V j-c 4 n .
    Figure imgf000086_0004
    péptido
    entrecruzamiento 1 °
    Figure imgf000086_0005
    (en las que, n representa un número entero de 1 a 12, m representa un número entero de 1 a 24 y I representa un número entero de 1 a 24),
    Z representa hidrógeno, un grupo alquilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 30 átomos de carbono, un grupo acilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 36 átomos de carbono, polietilenglicol, un grupo t-Boc, un grupo Fmoc, un grupo Cbz o un grupo Nosilo, [A], [B], [C] y [D] representan cada uno independientemente un péptido que tiene de 1 a 20 residuos compuestos de aminoácidos y/o aminoácidos no naturales como elementos constituyentes o un enlace sencillo, (a) y (c) representa cada uno independientemente -NH- o un enlace sencillo, (b) y (d) representa cada uno independientemente -(C =O)- o un enlace sencillo (aquí, la suma de los números o aminoácidos de [A], [B], [C] y [D] es al menos 1, y cada uno de ellos puede tener un grupo protector de cadena lateral), R1, R3 y R4 representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo metilo, R2 representa un átomo de hidrógeno o una cadena lateral de un aminoácido o un aminoácido no natural, P1 y P3 representan cada uno independientemente un grupo protector de aminoácidos o un átomo de hidrógeno, P2 y P4 representan cada uno independientemente un grupo protector de -O-éster, un grupo protector de -NH-bencilo, un grupo amino o un grupo hidroxilo). Aquí, Xs, [A]s, [B]s, (a)s, (b)s, R1s, R4s, P1s y P2s en la fórmula química pueden ser iguales o diferentes. La suma de los números de aminoácidos de [A] y [B] es al menos 1, y cada uno de ellos puede tener un grupo protector de cadena lateral).
    11. Un compuesto representado por la siguiente fórmula química:
    [fórmula química 24]
    Figure imgf000086_0006
    (en la que, Y es cualquier compuesto seleccionado del grupo que consiste en el siguiente compuesto Y1, y el compuesto Y4:
    (Compuesto Y1)
    lado del centro de
    Figure imgf000087_0001
    lado del
    cntrccruzamionto peptido
    lado del centro de lado del
    entrecruzamlento
    Figure imgf000087_0002
    péptldo
    (Compuesto Y4)
    [fórmula química 29]
    lado del centro de lado del
    entrecruzamlento
    Figure imgf000087_0003
    p«ptldo
    lado del centro de lado del
    entrecruzamlento
    Figure imgf000087_0004
    péptldo
    lado del
    lado del centro de péptldo
    entrecruzamlento
    Figure imgf000087_0005
    lado del
    lado del centro de péptldo
    entrecruzamlento
    Figure imgf000087_0006
    lado del centro de
    entrecruzamlento
    Figure imgf000087_0007
    (en las que, o representa un número entero de 1 a 12, p representa un número entero de 1 a 27, q representa un número entero de 1 a 24,
    Z representa hidrógeno, un grupo alquilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 30 átomos de carbono, un grupo acilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 36 átomos de carbono, polietilenglicol, un grupo t-Boc, un grupo Fmoc, un grupo Cbz o un grupo Nosilo, [A], [B], [C] y [D] representan cada uno independientemente un péptido que tiene de 1 a 20 residuos compuestos de aminoácidos y/o aminoácidos no naturales como elementos constituyentes o un enlace sencillo, (a) y (c) representa cada uno independientemente -NH- o un enlace sencillo, (b) y (d) representa cada uno independientemente -(C=O)- o un enlace sencillo (aquí, la suma de los números o aminoácidos de [A], [B], [C] y [D] es al menos 1, y cada uno de ellos puede tener un grupo protector de cadena lateral), R1, R3 y R4 representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo metilo, R2 representa un átomo de hidrógeno o una cadena lateral de un aminoácido o un aminoácido no natural, P1 y P3 representan cada uno independientemente un grupo protector de aminoácidos o un átomo de hidrógeno, P2 y P4 representan cada uno independientemente un grupo protector de -O-éster, un grupo protector de -NH-bencilo, un grupo amino o un grupo hidroxilo). Aquí, Ys, [C]s, [D]s, (c)s, (d)s, R2s, R3s, P3s y P4s en la fórmula química pueden ser iguales o diferentes. La suma de los números de aminoácidos de [C] y [D] es al menos 1, y cada uno de ellos puede tener un grupo protector de cadena lateral).
    12. El compuesto de acuerdo con uno cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, en el que cualquier extremo compuesto de P1 o P3 representa un átomo de hidrógeno y cualquier extremo compuesto de P2 o P4 representa un grupo hidroxilo.
    13. El compuesto de acuerdo con uno cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, en el que cualquier extremo compuesto de P2 o P4 representa un bencilo sustituido con 2,4-alcoxi.
    14. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 13, en el que el número de átomos de carbono del grupo sustituido con alcoxi es de 1 a 60.
    15. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 9 a 14, en el que cada uno de [A], [B], [C] y [D] representa al menos un aminoácido y/o aminoácido no natural.
    16. Un método para sintetizar un péptido entrecruzado representado por la siguiente fórmula:
    [fórmula química 35]
    Figure imgf000088_0001
    (en la que, X se selecciona del grupo que consiste en las siguientes fórmulas químicas:
    2
    lado del centro de N >^ '{''c 'Ís Ss /ledo del
    entrecruzamlento > n ' Péptido
    lado del centro de v J c '- U
    Figure imgf000088_0002
    / lado del
    entrecruzamlento I ° | péptido
    lado del centro de lado del
    entrecruzamlento
    Figure imgf000088_0003
    péptido
    lado del centro de
    Figure imgf000088_0004
    lado del
    entrecruzamlento r - M - ' - t d / ; péptido
    lado del
    lado del centro de
    Figure imgf000088_0005
    péptido
    entrecruzamlento
    lado del centro de
    entrecruzamlento
    Figure imgf000088_0006
    y
    lado del centro de lado del
    entrecruzamlento
    Figure imgf000088_0007
    péptdo
    (en las que, n representa un número entero de 1 a 12, m representa un número entero de 1 a 24 y I representa un número entero de 1 a 24);
    Y es cualquiera seleccionado del grupo que consiste en el siguiente compuesto Y1 y el compuesto Y4:
    (Compuesto Y1)
    lado del centro de lado del
    entrecruzamiento
    Figure imgf000089_0001
    péptido
    lado del centro de lado del
    entrecruzamlento
    Figure imgf000089_0002
    péptido
    (Compuesto Y4)
    lado del centro de lado del
    entrecruzamiento
    Figure imgf000089_0003
    péptido
    lado del centro de lado del
    entrecruzamlento H
    Figure imgf000089_0004
    í ' péptido
    lado del centro de lado del
    entrecruzamiento >is±Mr< péptido '
    lado del centro de:
    Figure imgf000089_0005
    ¡ s r
    entrecruzamiento
    lado del centro de lado del
    entrecruzamlento
    Figure imgf000089_0006
    péptido
    (en las que, o representa un número entero de 1 a 12, p representa un número entero de 1 a 27, q representa un número entero de 1 a 24),
    Z representa hidrógeno, un grupo alquilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 30 átomos de carbono, un grupo acilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 36 átomos de carbono, polietilenglicol, un grupo t-Boc, un grupo Fmoc, un grupo Cbz o un grupo Nosilo, [E] representa hidrógeno, un grupo acetilo o un péptido que tiene de 1 a 20 residuos compuestos de aminoácidos y/o aminoácidos no naturales como elementos constituyentes, [G] representa OH, un grupo amino o un péptido que tiene de 1 a 20 residuos compuestos de aminoácidos y/o aminoácidos no naturales como elementos constituyentes, [F] representa un péptido que tiene de 1 a 20 residuos compuestos de aminoácidos y/o aminoácidos no naturales como elementos constituyentes (aquí, la suma de los números de aminoácidos de [E], [F] y [G] es al menos 3), R1, R3 y R4 representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo metilo, y R2 representa un átomo de hidrógeno o una cadena lateral de un aminoácido o aminoácido no natural), que comprende las siguientes etapas:
    (a) una etapa para preparar un primer componente, que comprende las siguientes etapas,
    (a-1) una etapa de hacer reaccionar el lado del terminal N del péptido o aminoácido sintetizado o el grupo protector de carboxilo con un derivado de aminoácido que contiene en la cadena lateral un enlazador que forma parte de un entrecruzamiento del péptido entrecruzado, para sintetizar el péptido que tiene el enlazador en la cadena lateral o el derivado de aminoácido que tiene protegido el grupo carboxilo,
    (a-2) cuando el extremo del enlazador no es reactivo en la siguiente etapa c de la reacción de formación de entrecruzamiento, una etapa para convertir el extremo del enlazador en un grupo funcional reactivo,
    (b) una etapa de preparación de un segundo componente, que comprende los siguientes etapas,
    (b-1) una etapa de condensación de un grupo protector de carboxilo con aminoácidos o un péptido que constituye una secuencia peptídica parcial del péptido entrecruzado,
    (b-2) una etapa para hacer reaccionar el terminal N del péptido o el derivado de aminoácido sintetizado con un compuesto que contiene un enlazador que forma parte de un entrecruzamiento del péptido entrecruzado, para sintetizar un péptido o un derivado de aminoácido que tiene una amina secundaria en el terminal N que contiene el enlazador,
    (b-3) cuando el extremo del enlazador no es reactivo en la siguiente etapa c de la reacción de formación de entrecruzamiento, una etapa para convertir el extremo del enlazador en un grupo funcional reactivo,
    (c) una etapa de enlazamiento (entrecruzamiento) del primer componente y el segundo componente mediante la reacción de Mitsunobu, una reacción de aminación reductora o la reacción de Aza-Wittig y la reacción de reducción subsiguiente, para preparar un compuesto intermedio que tenga una estructura en la que los dos componentes se enlazan a través de una amina secundaria o una amina terciaria,
    (d) una etapa de condensación del terminal N o C del péptido de un componente con el terminal C o N del péptido de otro componente.
    17. Un método para sintetizar el siguiente péptido entrecruzado:
    [fórmula química 36]
    Figure imgf000090_0001
    (en la que, X se selecciona del grupo que consiste en las siguientes fórmulas:
    n2
    lado del centro de / lado del
    entrecruzamiento ■ n * péptido
    lado del centro de lado del
    entrecmzamiento
    Figure imgf000090_0002
    péptido
    lado del centro de
    Figure imgf000090_0003
    lado del
    entrecmzamiento péptido
    lado del centro de lado del
    entrecruzamiento
    Figure imgf000090_0004
    péptido
    lado del
    lado del centro de péptido
    entrecmzamiento
    Figure imgf000090_0005
    Figure imgf000090_0006
    (en las que, n representa un número entero de 1 a 12, m representa un número entero de 1 a 24 y I representa un número entero de 1 a 24),
    Z representa hidrógeno, un grupo alquilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 30 átomos de carbono, un grupo acilo opcionalmente sustituido que tiene de 1 a 36 átomos de carbono, polietilenglicol, un grupo t-Boc, un grupo Fmoc, un grupo Cbz o un grupo Nosilo, [A], [B, [C] y [D] representan cada uno independientemente un péptido que tiene de 1 a 20 residuos compuestos de aminoácidos y/o aminoácidos no naturales como elementos constituyentes o un enlace sencillo, (a) y (c) representa cada uno independientemente -NH- o un enlace sencillo, (b) y (d) representa cada uno independientemente -(C=O)- o un enlace sencillo (aquí, la suma de los números o aminoácidos de [A], [B], [C ] y [D] es al menos 1, y cada uno de ellos puede tener un grupo protector de cadena lateral), Ri, R3 y R4 representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo metilo, R2 representa un átomo de hidrógeno o una cadena lateral de un aminoácido o un aminoácido no natural, P1 y P3 representan cada uno independientemente un grupo protector de amino o un átomo de hidrógeno, P2 y P4 representan cada uno independientemente un grupo protector de -O-éster, un grupo protector de -NH-bencilo, un grupo amino o un grupo hidroxilo), que comprende las siguientes etapas (a) a (g):
    (a) una etapa para preparar un primer componente, que comprende las siguientes etapas,
    (a-1) una etapa de hacer reaccionar el lado del terminal N del péptido o aminoácido sintetizado o el grupo protector de carboxilo con un derivado de aminoácido que contiene en la cadena lateral un enlazador que forma parte de un entrecruzamiento del péptido entrecruzado, para sintetizar el péptido que tiene el enlazador en la cadena lateral o el derivado de aminoácido que tiene el grupo carboxilo protegido,
    (a-2) cuando el extremo del enlazador no es reactivo en la siguiente etapa c de la reacción de formación de entrecruzamiento, una etapa para convertir el extremo del enlazador en un grupo funcional reactivo,
    (b) una etapa para preparar un segundo componente,
    (b-1) una etapa para hacer reaccionar el lado del terminal N del péptido o aminoácido sintetizado o el grupo protector de carboxilo con un derivado de aminoácido que contiene en la cadena lateral un enlazador que forma parte de un entrecruzamiento del péptido entrecruzado, para sintetizar el péptido que tiene el enlazador en la cadena lateral o el derivado de aminoácido que tiene el grupo carboxilo protegido,
    (b-2) cuando el extremo del enlazador no es reactivo en la siguiente etapa c de la reacción de formación de entrecruzamiento, una etapa para convertir el extremo del enlazador en un grupo funcional reactivo,
    (c) una etapa de enlazamiento (entrecruzamiento) del primer componente y el segundo componente mediante la reacción de Mitsunobu, una reacción de aminación reductora o la reacción de Aza-Wittig y la reacción de reducción subsiguiente, para preparar un compuesto intermedio que tenga una estructura en la que los dos componentes se enlazan a través de una amina secundaria o una amina terciaria,
    (d) una etapa de condensación del terminal N o C del péptido de un componente con el terminal C o N del péptido de otro componente.
    18. Un método para sintetizar el siguiente péptido entrecruzado:
    [fórmula química 37]
    Figure imgf000091_0001
    Y es cualquier compuesto seleccionado del grupo que consiste en el siguiente compuesto Y1, y el compuesto Y4:
    (Compuesto Y1)
    lado del centro de \ / ^ * C>^ s / la d o del
    entrecruzamlento I i péptido
    lado del centro de lado del
    entrecruzamlento
    Figure imgf000091_0002
    péptido
    (Compuesto Y4)
    lado del centro de lado del
    entrec alzamiento
    Figure imgf000092_0001
    péptido
    lado del centro de lado del
    entrecruzamlento
    Figure imgf000092_0002
    péptido
    lado del centro
    entrecruzamlen
    Figure imgf000092_0003
    lado del
    lado del centro de
    Figure imgf000092_0004
    péptido
    entrecruzamlento
    lado del centro de lado del
    entrecruzamlento
    Figure imgf000092_0005
    péptido
    (en las que, o representa un número entero de 1 a 12, p representa un número entero de 1 a 27, q representa un número entero de 1 a 24,
    Z representa hidrógeno, un grupo alquilo opcionalmente sustituido que tiene 1 a 30 átomos de carbono, un grupo acilo opcionalmente sustituido grupo que tiene de 1 a 36 átomos de carbono, polietilenglicol, un grupo t-Boc, un grupo Fmoc, un grupo Cbz o un grupo Nosilo, [A], [B], [C] y [D] representa cada uno independientemente un péptido que tiene de 1 a 20 residuos compuestos de aminoácidos y/o aminoácidos no naturales como elementos constituyentes o un enlace sencillo, (a) y (c) representa cada uno independientemente -NH- o un enlace sencillo, (b) y (d) representa cada uno independientemente -(C=O)- o un enlace sencillo (aquí, la suma de los números o aminoácidos de [A], [B], [C] y [D] es al menos 1, y cada uno de ellos puede tener un grupo protector de cadena lateral), R1, R3 y R4 representan cada uno independientemente un átomo de hidrógeno o un grupo metilo, R2 representa un átomo de hidrógeno o una cadena lateral de un aminoácido o aminoácido no natural, P1 y P3 representa cada uno independientemente un grupo protector de amino o un átomo de hidrógeno, P2 y P4 representan cada uno independientemente un grupo protector de -O-éster, un grupo protector de -NH-bencilo, un grupo amino o un grupo hidroxilo), que comprende los siguientes etapas:
    (a) una etapa para preparar un primer componente, que comprende los siguientes etapas,
    (a-1) una etapa de condensación de un grupo protector de carboxilo con aminoácidos o un péptido que constituye una secuencia peptídica parcial del péptido entrecruzado,
    (a-2) una etapa para hacer reaccionar el terminal N del péptido o el derivado de aminoácido sintetizado con un compuesto que contiene un enlazador que forma parte de un entrecruzamiento del péptido entrecruzado, para sintetizar un péptido o un derivado de aminoácido que tiene una amina secundaria en el terminal N que contiene el enlazador,
    (a-3) cuando el extremo del enlazador no es reactivo en la siguiente etapa c de la reacción de formación de entrecruzamiento, una etapa para convertir el extremo del enlazador en un grupo funcional reactivo,
    (b) una etapa de preparación de un segundo componente, que comprende los siguientes etapas,
    (b-1) una etapa de condensación de un grupo protector de carboxilo con aminoácidos o un péptido que constituye una secuencia peptídica parcial del péptido entrecruzado, y el alargamiento del grupo condensado,
    (b-2) una etapa para hacer reaccionar el terminal N del péptido o el derivado de aminoácido sintetizado con un compuesto que contiene un enlazador que forma parte de un entrecruzamiento del péptido entrecruzado, para sintetizar un péptido o un derivado de aminoácido que tiene una amina secundaria en el terminal N que contiene el enlazador,
    (b-3) cuando el extremo del enlazador no es reactivo en la siguiente etapa c de la reacción de formación de entrecruzamiento, una etapa para convertir el extremo del enlazador en un grupo funcional reactivo,
    (c) una etapa de enlazamiento (entrecruzamiento) del primer componente y el segundo componente mediante la reacción de Mitsunobu, una reacción de aminación reductora o la reacción de Aza-Wittig y la reacción de reducción subsiguiente, para preparar un compuesto intermedio que tenga una estructura en la que los dos componentes se enlazan a través de una amina secundaria o una amina terciaria,
    (d) una etapa de condensación del terminal N o C del péptido de un componente con el terminal N o C del péptido del otro componente para formar un entrecruzamiento.
    19. Un método para sintetizar el péptido entrecruzado de acuerdo con uno cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18, en el que la etapa (c) se lleva a cabo bajo una condición en la que al menos uno del primer componente y el segundo componente se enlaza al grupo protector de carboxilo como un soporte del péptido, en el que el soporte del péptido es un bencilo sustituido con alcoxi seleccionado del grupo que consiste en un alcohol bencílico sustituido en 2,4, un alcohol bencílico sustituido en 3,5, un alcohol bencílico sustituido en 3,4,5 y un alcohol bencílico sustituido en 2,4,5.
    20. El método para sintetizar el péptido entrecruzado de acuerdo con la reivindicación 19, en el que el número de átomos de carbono del sustituyente alcoxi del alcohol bencílico sustituido en 2,4 utilizado como soporte del péptido es de 1 a 60.
    21. Un péptido entrecruzado representado por la siguiente fórmula química:
    [fórmula química 38]
    Figure imgf000093_0001
    (en la que, Z1 y Z3 representan cada uno independientemente un grupo acilo no sustituido o sustituido que tiene de 1 a 36 átomos de carbono, un grupo alquilo no sustituido o sustituido que tiene de 1 a 30 átomos de carbono o un polietilenglicol que tiene un peso molecular de 100 a 20.000 Da representado por -C(=O)-CH2CH2(OCH2CH2)n OCH2CH2OCH3, y Z2 representa un grupo hidroxilo, un grupo amino, un grupo monoalquilamino no sustituido o sustituido que tiene de 1 a 30 átomos de carbono o un polietilenglicol que tiene un peso molecular de 100 a 20.000 Da representado por -NH-CH2CH2(OCH2CH2)nOCH2CH2OCHs).
    22. Un péptido entrecruzado representado por la siguiente fórmula:
    [fórmula química 39]
    Figure imgf000093_0002
    [fórmula química 41]
    Figure imgf000093_0003
    [fórmula química 43]
    Figure imgf000094_0001
    [fórmula química 45]
    Figure imgf000094_0002
    [fórmula química 47]
    Figure imgf000094_0003
    (en las que, Ac representa un grupo acetilo, y el polietilenglicol tiene un peso molecular promedio en número de 500 a 2.000 Da).
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