CN104619717B - β-转角模拟肽环状化合物的合成 - Google Patents

β-转角模拟肽环状化合物的合成 Download PDF

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Abstract

本发明涉及制备β‑转角环状模拟肽化合物及其中间体的方法。具体而言，本发明涉及一种用于合成式I的β‑转角环状模拟肽化合物的工艺：其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、L2、X、Y和n如说明书中所定义。本发明提供了一种制备β‑转角环状模拟肽化合物及其中间体的较有效的途径。

Description

β-转角模拟肽环状化合物的合成
相关申请的信息
本发明要求于2012年6月22日提交的申请序列号61/663387的优先权，通过引用将该申请的全部内容明确地并入本发明。
技术领域
本发明涉及制备β-转角环状模拟肽化合物及其中间体的方法。
引言
尽管某些β-转角环状模拟肽化合物的合成是已知的，但是当这些方法应用于大规模生产在体内和临床研究中所需要的数克和数千克数量的化合物时，困难就出现了，有关二聚体副产物的形成尤其如此。
考虑到在β-转角环状模拟肽化合物类中的几种化合物的有希望的药理学活性，对于研发能实现更具成本效益的生产的新的合成方法存在需求。
因此，本发明的一个方面提供克服所公开的局限的用于制备β-转角环模拟肽化合物的新的合成方法。本发明的另一个方面是提供在商业上可行的生产这些化合物的方法。
附图简要描述
图1示出了根据本发明实施方式的总的反应方案1，描绘了产生式(I)的β-转角环状模拟肽化合物的反应。
图2示出了根据本发明实施方式的示范性的反应方案2，描绘了使用2-氯三苯甲基氯(2-CTC)树脂制备结构D3的β-转角模拟肽环状化合物的途径。
发明内容
在各种实施方式中，本发明提供了β-转角环模拟肽化合物的合成方法。在其他实施方式中，本发明提供了可用于该方法中的中间体化合物。合成方法和新的中间体在由图1(方案1)所表示的实施方式中图解。
本发明的某些实施方式提供了一种制备式(I)β-转角模拟肽环状化合物的方法，
该方法包括以下步骤：
(a)提供下式(III)的受保护的线性模拟肽化合物
(b)通过分子内的芳族亲核取代反应使式(III)的受保护的线性模拟肽化合物环化以形成式(IV)的受保护的β-转角模拟肽环状化合物，
以及
(c)使在式(IV)的受保护的β-转角模拟肽环状化合物中的氨基酸侧链保护基脱保护；
其中：
R1和R3可以独立地为氢、C1-C6烷基、芳基、或天然或非天然氨基酸的氨基酸侧链取代基；
R2和R4可以独立地为氢或C1-C6烷基、或R1和R2与它们所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基或环己基，或者R3和R4与它们所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基或环己基；
R5、R6和R7可以独立地为氢或C1-C6烷基；
Y可以为氢、-NO2、-COOR8、-OC(R8)3、-SO3R8、或-SO2R8；
每个R8可以为烷基或芳基；
X可以为O、N、S、P、Se、C、C1-C6亚烷基、SO、SO2或NH；
Z可以为F、Cl、Br或I；
R11和R13可以独立地为氢或保护基；
W1和W3可以独立地为天然或非天然氨基酸的氨基酸侧链取代基，相应地减去在与R11和R13的连接位点处的氢原子；
n可以为0、1、2、3、4或5；以及
L2可以为H、NH2、OH、SH、COOH、NH-CH2-COOH、C1-C6烷基、或C1-C6芳基。
在一些实施方式中，提供了一种式(II)的连接到树脂固相载体的受保护的线性模拟肽化合物，其具有以下结构：
其中，R2和R4可以独立地为氢或C1-C6烷基、或W1和R2与它们所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基或环己基，或者W3和R4与它们所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基或环己基；
R5、R6和R7独立地为氢或C1-C6烷基；
Y可以为氢、-NO2、-COOR8、-OC(R8)3、-SO3R8、或-SO2NR8；
其中每个R8独立地为烷基或芳基；
X可以为O、N、S、P、Se、C、C1-C6亚烷基、SO、SO2或NH；
Z可以为F、Cl、Br或I；
R11、R12和R13可以独立地为氢或保护基；
W1和W3可以独立地为天然或非天然氨基酸的氨基酸侧链取代基，减去氢原子；
n可以为0、1、2、3、4或5；以及
L1可以是空位、NH、O、S、COO-、NH-CH2-COO-、C1-C6亚烷基、或C1-C6亚芳基；
其中，所述固相载体是包含官能团的树脂，其选自2-氯三苯甲基氯(2-CTC)、4-羟甲基-3-甲氧基苯氧基丁酸MBHA(HMPB-MBHA)、9-Fmoc-氨基-呫吨-3-基氧基-Merrifeield树脂(西伯尔酰胺(Sieber Amide))、三苯甲基醇、4-甲基三苯甲基氯、4-甲氧基三苯甲基氯、4-(2',4'-二甲氧基苯基-羟甲基)-苯氧基树脂(Rink酸树脂)、2-甲氧基-4-烷氧基苄基醇树脂(Sasrin树脂)、3-(N-Fmoc-N-甲氧基)丙基-酰氨基甲基树脂(Weinreb酰胺树脂)。
在一些实施方式中，提供了一种式(III)的受保护的线性模拟肽化合物
其中，R2和R4可以独立地为氢或C1-C6烷基、或W1和R2与它们所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基或环己基，或者W3和R4与它们所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基或环己基；
R5、R6和R7可以独立地为氢或C1-C6烷基；
Y可以为氢、-NO2、-COOR8、-OC(R8)3、-SO3R8、或-SO2NR8；
每个R8可以独立地为烷基或芳基；
X可以为O、N、S、P、Se、C、C1-C6亚烷基、SO、SO2或NH；
Z可以为F、Cl、Br或I；
R11和R13可以独立地为氢或保护基；
W1和W3可以独立地为天然或非天然氨基酸的氨基酸侧链取代基，相应地减去在R11和R13的连接位点处的氢原子；
n可以为0、1、2、3、4或5；以及
L2可以为H、NH2、OH、SH、COOH、NH-CH2-COOH、C1-C6烷基、或C1-C6芳基。
在一些实施方式中，提供了一种式(IV)的受保护的β-转角模拟肽环状化合物
其中，R2和R4可以独立地为氢或C1-C6烷基、或W1和R2与它们所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基或环己基，或者W3和R4与它们所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基或环己基；
R5、R6和R7可以独立地为氢或C1-C6烷基；
Y可以为氢、-NO2、-COOR8、-OC(R8)3、-SO3R8、或-SO2NR8；
每个R8独立地为烷基或芳基；
X可以为O、N、S、P、Se、C、C1-C6亚烷基、SO、SO2或NH；
Z可以为F、Cl、Br和I；
R11和R13可以独立地为氢或保护基；
W1和W3可以独立地为天然或非天然氨基酸的氨基酸侧链取代基，减去氢原子；
n可以为0、1、2、3、4或5；以及
L2可以为H、NH2、OH、SH、COOH、NH-CH2-COOH、C1-C6烷基、或C1-C6芳基。
附图说明
附图总体上以举例的方式，而不是以限制的方式，图解了本文件中所讨论的不同的实施方式。
图1根据本发明的实施方式示出了总的反应方案，其是制备式(I)的β-转角环状模拟肽化合物的合成方法。
图2根据本发明的实施方式示出了示范性的反应方案，其是通过使用2-氯三苯甲基氯(2-CTC)树脂制备结构D3的β-转角模拟肽环状化合物。
具体实施方式
定义：
本文所使用的术语“一”(“a”)或“一个”(“an”)如同在专利文件中所通常使用的一样包括一个或一个以上，独立于“至少一个”或“一或多个”的任何其他实例或使用。
本文所使用的术语“约”是指某数量与所描述的数量逼近、接近、几乎或差不多相等或相等。
本文所使用的术语“非天然氨基酸”指的是如上所述的不是天然氨基酸的所有的氨基酸。这样的氨基酸包括如上所述的19种光学活性的天然存在的氨基酸中的任何氨基酸的D-异构体和天然存在的甘氨酸氨基酸。非天然氨基酸还包括高丝氨酸、高半胱氨酸、瓜氨酸、2,3-二氨基丙酸、羟脯氨酸、鸟氨酸、正亮氨酸和甲状腺素。另外的非天然氨基酸对于本领域的普通技术人员而言是公知的。非天然氨基酸可以是D-异构体或L-异构体。非天然氨基酸也可以是α-氨基酸，β-氨基酸或γ-氨基酸。非天然氨基酸也可以是翻译后修饰的氨基酸，如磷酸化的丝氨酸、磷酸化的苏氨酸或磷酸化的酪氨酸、酰化赖氨酸、或烷基化赖氨酸或烷基化精氨酸。许多形式的翻译后修饰的氨基酸是公知的。
本文所使用的术语“保护基”意指特定的功能部分(例如，O、S或N)暂时被封闭使得反应可在多官能化合物的另一反应位点选择性进行。
如本文所使用，术语“质子溶剂”指的是携带连接到氧的氢(如在羟基中的氢)或连接到氮的氢(如在氨基中的氢)的溶剂。这些溶剂可以提供H+(质子)。质子溶剂的实例包括水、乙醇、叔丁醇和二乙胺。
本文所使用的术语“非质子溶剂”指的是很少或者没有携带连接到氧的氢(如在羟基中的氢)而且很少或者没有携带连接到氮的氢(如在氨基中的氢)的溶剂。
本文所使用的术语“环”是指其原子以环状形式的在式中排列的化合物。
如本文所使用的，术语“烷基”指的是碳原子数指定(即，C1-C6指的是一至六个碳原子)的烃基，该烃基可以是直链的、环状的、支链的、或它们的组合。烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、戊基、异戊基、己基、辛基、壬基等。如本文所定义的，烷基可以任选地被取代。如本文所使用的术语“亚烷基”指的是从直链或支链饱和烃衍生而来的连接在两个或多个位点的饱和脂肪族基团，例如亚甲基(-CH2-)。
如本文所使用的术语“烯丙基”是指含有烯丙基基团(即CH2═CH-CH2-)的化合物。
如本文所使用的术语“芳基”是指含有一个、两个或三个环的碳环芳香体系，其中这种环可以以悬垂方式连接在一起或可以是稠合的。术语“芳基”包括芳族基团，如苄基、苯基、萘基、蒽基、菲基、茚满基、茚基、轮烯基(annulenyl)、薁基(azulenyl)、四氢萘基、和联苯基。如本文所定义，芳基可以任选地被取代。术语“亚芳基”表示从芳基(如上述定义)失去氢原子而衍生得到的任何二价基团。
当基团被定义为“空位”时，这意味着该基团不存在。
当基团被取代时，取代基可以单独或组合地包括但不限于独立地选自下列群组或特别指定的群组中的一个或多个取代基：低级烷基、低级烯基、低级炔基、低级烷酰基、低级杂烷基(heteroalkyl)、低级杂环烷基、低级卤代烷基、低级卤代链烯基、低级卤代炔基、低级全卤代烷基、低级全卤代烷氧基、低级环烷基、苯基、芳基、芳氧基、低级烷氧基、低级卤代烷氧基、氧代、低级酰氧基、羰基、羧基、低级烷基羰基、氰基、氢、卤素、羟基、氨基、低级烷基氨基、芳基氨基、酰氨基、硝基、巯基、低级烷硫基、芳硫基、低级烷基亚磺酰基、低级烷基磺酰基、芳基亚磺酰基、芳基磺酰基、芳硫基、磺酸酯、磺酸、三取代甲硅烷基、N3、SH、SCH3、C(O)CH3、吡啶基、噻吩基、呋喃基、低级氨基甲酸酯和低级脲。
为了清楚起见，并辅助理解如本文所公开和要求保护的本发明，下列术语和缩写定义如下：
Boc—叔丁氧羰基
Cbz—苄氧羰基
CTC—氯三苯甲基氯
DBU—1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯
DCM—二氯甲烷
DIC—1,3-二异丙基碳二亚胺
DIEA—N,N-二异丙基乙胺
DIPEA—N,N-二异丙基乙胺
DMF—二甲基甲酰胺
Fmoc—9-芴甲氧羰基
HBTU—O-苯并三唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐
HMPB-MBHA—4-羟甲基-3-甲氧基苯氧基丁酸MBHA，或4-(4-羟甲基-3-甲氧基苯氧基)-丁酰基-对-甲基-二苯甲基胺
HOBt—N-羟基苯并三唑
Mtt—甲基三苯甲基
Pbf—五甲基二氢苯并呋喃磺酰基
SPPS—固相肽合成
TBAF—四丁基氟化铵
TBDMS—叔丁基二甲基硅烷
tBU—叔丁基酯
TFA—三氟乙酸
THF—四氢呋喃
TIS—三异丙基硅烷
TMG—四甲基胍
TRT—三苯甲基
图1示出了方案1，描绘了被研发用来制备式(I)的β-转角模拟肽环状化合物的一般途径，包括步骤：(a)提供式(III)的受保护的线性模拟肽化合物；(b)通过分子内的芳族亲核取代反应使式(III)的受保护的线性模拟肽化合物环化，以形成式(IV)的受保护的β-转角模拟肽环状化合物；和(c)使在式(IV)的受保护的β-转角模拟肽环状化合物内的氨基酸侧链保护基脱保护。
在某些实施方式中，本发明提供了制备式(I)的具有14至16个环原子的大环形环的β-转角模拟肽环状化合物。
在某些实施方式中，该方法提供了其中R1和R3是氨基酸侧链取代基的化合物。典型地，R1和R3独立地衍生自天然或非天然氨基酸。例如，R1和R3可以独立地衍生自20种天然存在的蛋白质氨基酸(天然的)或修饰的氨基酸(非天然)，为任一对映体构型。20种天然氨基酸是α-氨基酸，包括甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、缬氨酸(VAL)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、赖氨酸(Lys)、精氨酸(Arg)、组氨酸(His)、脯氨酸(Pro)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、苯丙氨酸(Phe)、酪氨酸(Tyr)、色氨酸(trp)、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、天冬酰胺(Asn)、谷氨酰胺(Gln)、半胱氨酸(Cys)和甲硫氨酸(Met)。α-氨基酸的一般结构由式A：H2NCH(R*)COOH表示。R*代表氨基酸的侧链取代基，在本发明中是指R1或R3。
一种非天然氨基酸通常是具有式A的任何结构，其中R*基团是与在20种天然氨基酸使用的取代基不同的其它任何取代基。参见例如，Biochemistry by L.Stryer,31(1ed.1988),Freeman and Company,New York,for structures of the twenty naturalamino acids(20种天然氨基酸的结构)。非天然氨基酸也可以是与上述20种α-氨基酸不同的天然存在的化合物。
这样的非氨基酸包括如上所述的19种光学活性的天然存在的氨基酸中的任何一种的D-异构体和天然存在的甘氨酸氨基酸。非天然氨基酸还包括高丝氨酸、高半胱氨酸、2,3-二氨基丙酸、瓜氨酸、羟脯氨酸、鸟氨酸、正亮氨酸和甲状腺素。另外的非天然氨基酸对于本领域的普通技术人员而言是公知的。非天然氨基酸可以是D-异构体或L-异构体。非天然氨基酸也可以是具有式B：H2N(CH)n(R*)COOH的β氨基酸或γ氨基酸，其中n等于2或3，R*表示20种蛋白原氨基酸中的任意一种的侧链取代基或与在20种天然氨基酸使用的取代基不同的其它任何取代基。非天然氨基酸也可以是翻译后修饰的氨基酸，如磷酸化丝氨酸、磷酸化苏氨酸或磷酸化酪氨酸、酰化赖氨酸、或者烷基化赖氨酸或烷基化精氨酸。许多形式的翻译后修饰的氨基酸是公知的。
在某些实施方式中，该方法提供了其中R1和R3独立地为两种不同的氨基酸的侧链取代基的化合物。在某些这样的实施方式中，R1和R3独立地为赖氨酸、谷氨酸、酪氨酸、异亮氨酸、天冬酰胺、精氨酸或苏氨酸的侧链取代基。在某些实施方式中，R1和R3独立地为谷氨酸、赖氨酸、异亮氨酸或精氨酸的侧链取代基。在一实施方式中，R1和R3独立地为谷氨酸或赖氨酸的侧链取代基。在另一个实施方式中，R1和R3独立地为异亮氨酸或精氨酸的侧链取代基。
一般地，氨基酸侧链取代基(R1和R3)在制备本发明的β转角环状模拟肽化合物的方法中的环化步骤之前受到合适的保护基(分别为R11和R13)的保护。当氨基酸侧链取代基，R1和R3，受保护时，它们被分别表示为W1R11和W3R33，其中W1和W3独立地为天然或非天然氨基酸的氨基酸侧链取代基，相应地减去在与R11和R13的连接位点处的一个氢原子。该一个氢原子通常存在于氨基酸侧链取代基的官能团中，该官能团如羧酸、胺、硫醇、酰胺、羟基和胍。
通过本领域中已知的常规的保护基可以实现在本发明中所描述的方法的任何步骤的合成所涉及的任何分子的任何其它敏感反应基团的氨基酸侧链保护，该常规的保护基例如由T.W.Greene&P.G.M.Wuts(Protective Groups In Organic Synthesis 1991,JohnWiley and Sons,New-York)所描述的和由Sewald and Jakubke(Peptides:chemistry andBiology,2002,Wiley-VCH,Wheinheim p.142)所描述的。例如，α-氨基保护基包括，但不限于，酰基型保护基(例如，三氟乙酰基、甲酰基、乙酰基)、脂族尿烷保护基(例如，叔丁氧羰基(BOC)、环己基氧羰基)、芳族尿烷型保护基(例如，芴基-9-甲氧基-羰基(Fmoc)、苄氧基羰基(Cbz)、Cbz衍生物)和烷基型保护基(例如，三苯甲基、苄基)。
氨基酸侧链保护基可包括用于丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的叔丁基醚；用于赖氨酸、色氨酸和组氨酸的BOC；用于丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸和组氨酸的三苯甲基；用于天门冬氨酸和谷氨酸的叔丁基或烯丙基酯，用于精氨酸的Pbf；用于苏氨酸和丝氨酸的苄基；用于酪氨酸、苏氨酸、丝氨酸、精氨酸和赖氨酸的Cbz；用于丝氨酸和苏氨酸的烷基硅烷；以及所有其他的本领域所公知的保护基。
在某些实施方式中，该方法提供了化合物，该化合物中R11和R13独立地选自：三氟乙酰基、甲酰基、乙酰基、叔丁氧羰基(BOC)、环己基氧羰基、芴基-9-甲氧基-羰基(Fmoc)、苄氧基羰基(Cbz)、Cbz衍生物、三苯基、甲基、苄基、烯丙氧基羰基、叔丁基、烷基硅烷和烯丙基。
在某些实施方式中，该方法提供了化合物，该化合物中R1是谷氨酸的侧链取代基，而R11是烯丙基或叔丁基。在某些这样的实施方式中，R1为谷氨酸的侧链取代基，而R11是叔丁基。
在某些实施方式中，该方法提供了化合物，该化合物中R3是赖氨酸的侧链取代基，而R13是苄氧基羰基、烯丙氧羰基或叔丁氧羰基(BOC)。在某些这样的实施方式中，R3是赖氨酸的侧链取代基，而R13是叔丁氧羰基(BOC)。
保护基可在使用本领域已知的方法的方便的后续阶段除去。在某些实施方式中，在与用于从固相载体裂解模拟肽化合物的条件相同的条件下，氨基酸侧链R1和R3的保护基没有除去。在某些这样的实施方式中，在与用于从固相载体裂解模拟肽化合物的酸性条件相同的酸性条件下，氨基酸侧链R1和R3的保护基没有被除去。
在某些实施方式中，该方法提供了其中R2和R4独立地为氢或C1-C6烷基的化合物。
在某些实施方式中，该方法提供了其中R5、R6和R7是氢的化合物。
在某些实施方式中，该方法提供了其中X是O、S或NH的化合物。
在某些实施方式中，该方法提供了化合物，该化合物中L1/L2是能通过与同源双功能化合物反应以有效形成式(I)的β-转角模拟肽环状化合物的二聚体的连接基团。合适的L1包括空位、NH、O、S、COO、NH-CH2-COO-、C1-C6亚烷基、或C1-C6亚芳基。在某些实施方式中，L1是NH-CH2-COO-。合适的L2包括H、NH2、OH、SH、COOH、NH-CH2-COOH、C1-C6烷基、或C1-C6芳基。在某些实施方式中，L2为NH-CH2-COOH。
在某些实施方式中，该方法提供了其中n为1的化合物。
在某些实施方式中，该方法提供了其中Y在相对于所述酰胺基的连接位点的间位处连接于所述式的苯环的化合物。在某些实施方式中，Y为-NO2。
在某些实施方式中，该方法提供了其中Z在相对于所述酰胺基的连接位点的邻位处连接到所述式的苯环的化合物。在某些实施方式中，Z是F。
从固相载体上裂解
参照图1(方案1)，式(III)的受保护的线性模拟肽化合物可以通过裂解式(II)的受保护的线性模拟肽化合物来获得，其中所述式(II)的受保护的线性模拟肽化合物具有以下结构：
从固相载体上裂解可以在酸、碱或亲核试剂的存在下进行。
在用裂解溶液处理时，式(II)的受保护的线性模拟肽化合物从其经由连接基团L1所连接的固相载体裂解，以得到线性模拟肽中间体(III)。
所述固相载体可以是包含官能团的树脂，例如：2-氯三苯甲基氯(2-CTC)、4-羟甲基-3-甲氧基苯氧基丁酸MBHA(HMPB-MBHA)、9-Fmoc-氨基-呫吨-3-基氧基-Merrifeield树脂(西伯尔酰胺)、三苯甲基醇、4-甲基三苯甲基氯、4-甲氧基三苯甲基氯、4-(2',4'-二甲氧基苯基-羟甲基)-苯氧基树脂(Rink酸树脂)、2-甲氧基-4-烷氧基苄基醇树脂(Sasrin树脂)、3-(N-Fmoc-N-甲氧基)丙基-酰氨基甲基树脂(Weinreb酰胺树脂)。在某些实施方式中，树脂包含官能团2-氯三苯甲基氯(2-CTC)或2-甲氧基-4-烷氧基苄基醇树脂(Sasrin树脂)。
在本发明中用作固相载体的树脂可以具有至少0.75毫摩尔/克的官能团加载，例如，从1.0毫摩尔/克至2.0毫摩尔/克，或从1.2毫摩尔/克至1.6毫摩尔/克的官能团加载。
典型地，该树脂是不溶性聚合物，诸如交联的聚苯乙烯/1％二乙烯基苯共聚物。然而，与基于聚苯乙烯的聚合物不同的聚合物也可以被用作固相载体，如纯的或混合的PEG树脂(例如，TentaGel、NovaPEG和NovaSyn树脂)。这些基于非聚苯乙烯的聚合物可以在各种不同的溶剂提供较好溶胀性。
式(II)的受保护的线性模拟肽化合物经由不稳定键连接于树脂，该不稳定键如酸性不稳定酯键，而功能性氨基酸侧链使用较稳定的保护基保护，该较稳定的保护基在肽从树脂上裂解所需的条件下不裂解，也不脱保护。这样的功能性氨基酸侧链可以通过官能团上的强酸性不稳定保护基保护。本文描述了功能性氨基酸侧链上所使用的保护基。因此，式(II)的受保护的线性模拟肽化合物的裂解不会导致式(II)中存在的任何受保护的官能团R11和R13的显著的脱保护。
在某些实施方式中，在温和的酸性条件下进行式(II)的受保护的线性模拟肽化合物的裂解。裂解溶液可包含约0.01％至约50％(体积/体积)、0.1％至10％(体积/体积)，或0.5％至5％(体积/体积)的酸，如，三氟乙酸(TFA)或乙酸。
式(II)的受保护的线性模拟肽化合物的裂解可在不同的溶剂体系中进行。溶剂系统是有机溶剂或有机溶剂的混合物。溶剂体系可以包括极性、非质子溶剂，如，二氯甲烷、乙腈或四氢呋喃及其混合物。
可以将清除剂加入到裂解溶液，以通过在反应过程中生成的烷基碳宾离子防止X基团的烷基化。合适的清除剂包括，但不限于，三异丙基硅烷(TIS)、苯硫基甲烷、三烷基硅烷(例如，三甲基硅烷、三乙基硅烷)、或它们的混合物。在一个实施方式中，清除剂是三异丙基硅烷(TIS)。
在某些实施方式中，温和的酸性溶液包含不到10％、不到5％、或不到3％的酸和清除剂的混合物。在式(II)的受保护的线性模拟肽化合物从固相载体裂解中使用的温和的酸性溶液中的酸性物质与清除剂的相对体积比可以为约1:1至约1:5、约1:1至约1:3、或约1:2。在一实施方式中，式(II)的受保护的线性模拟肽化合物的裂解在包含不到10％的TFA和TIS的混合物的溶液中进行，该混合物中TFA和TIS的体积比为约1:1至约1:5。
在某些实施方式中，末端官能团X可受保护(即，当R12是保护基时)。在某些实施方式中，X为O，而R12是三苯甲基(Trt)、叔丁基二甲基硅烷基(TBDMS)、或者在不引起存在于式中的其它保护基脱保护的条件(如温和的酸性条件)下可除去的任何保护基。在某些这样的实施方式中，X为O，而R12是三苯甲基(Trt)、或叔丁基二甲基硅烷基(TBDMS)。在某些实施方式中，X是S，而R12是三苯甲基。在某些实施方式中，X为NH，而R12是4-甲基三苯甲基(Mtt)。
在某些实施方式中，末端官能团X在用将肽从固相载体裂解所使用的裂解溶液处理时会被脱保护，由此得到式(III)的受保护的线性模拟肽化合物。
环化
在本发明的一个方面，环化反应是在溶液相中进行。因为环化反应是在线性模拟肽中间体(III)已从固相载体裂解之后进行，树脂的加载在控制二聚体副产物的形成方面不是至关重要的。出于这个原因，可以选择带有具有高达2毫摩尔/克的官能团加载的取代级别的树脂作为固相载体。使用较高加载树脂提高了合成收率(即，增加了每克树脂制备的化合物的比例)，从而降低了生产成本。环化反应可通过亲核试剂X经由芳香族亲核取代反应进行。
环化反应可在极性质子溶剂中进行，极性质子溶剂如，乙腈、四氢呋喃、DMF、DCM/DMF的混合物、或它们的混合物。混合物DCM/DMF可以按约5:95至约95:5、约70:30至约95:5、约80:20至约90:10的比例使用。要避免使用诸如水和甲醇之类的大量的溶剂，因为它们可以作为亲核试剂并干扰环化。在一个实施方式中，环化反应是在无水的情况下进行的。在一个实施方式中，环化反应在不存在甲醇的情况下进行。在一个实施方式中，环化反应是在没有水和甲醇的情况下进行的。
在某些实施方式中，环化反应是碱催化环化反应。碱在环化反应中的作用是增强官能团X的亲核性质。可使用的碱的例子是K2CO3、CsCO3、CsF、四丁基氟化铵(TBAF)、四甲基胍(TMG)。
环化步骤的一个重要方面是在反应过程中控制线性模拟肽中间体(III)的浓度，以避免二聚体副产物的形成。当以较高浓度(例如大于0.05M)的线性模拟肽中间体(III)进行环化反应时，分子间的反应速率增大，并因此使二聚体副产物形成的速率加速。因而，为了避免二聚体的形成，环化反应可以在低于0.05M的浓度，特别是，在低于0.03M的浓度，或者在低于0.02M的浓度下进行。这样的低浓度(即高稀释度)可以通过使用大量的溶剂来实现。可替代地，环化反应可以通过缓慢将线性肽模拟中间体(III)加入到反应介质中来进行，从而可避免使用大量的溶剂。
环化反应可以在室温下进行。在室温下的反应时间可根据环的大小、反应中涉及的亲核试剂、碱和溶剂的不同而在24小时至48小时之间变化。将反应加热到较高的温度，例如40℃至60℃，可将反应时间缩短到1-5小时。特别是，当在环化反应溶液被加热至大约45℃至55℃时，反应时间可以减少到2-4小时。典型地，环化反应在20℃至65℃、25℃至60℃、或45℃至55℃的温度下进行。
该反应可以用分析型HPLC、LC-MS或UV监控，因为线性模拟肽中间体(III)和式(I)的β-转角模拟肽环状化合物具有不同的保留时间、质量和UV曲线。一旦环化完成，可将溶液通过例如硅藻土垫过滤，以去除碱。可以用溶剂(例如THF)洗涤过滤器，并且接着可以收集有机层并在真空下蒸发有机层。
脱保护
对于氨基酸侧链保护基的最终脱保护，式(IV)的受保护的β-转角模拟肽环状化合物根据该式中存在的保护基的类型用适当的试剂处理。在一个实施方式中，使用强酸性溶液。典型地，强酸性溶液包含大于50％的TFA。TFA可以溶解在水或有机溶剂(例如DCM，THF等)中。在某些实施方式中，强酸性溶液具有其中TFA:H2O的体积比为90:10至99:1、90:10至95:5或约95:5的TFA和H2O的组合物。
在某些实施方式中，强酸性溶液可以进一步包括清除剂，如三异丙基硅烷(TIS)、苯硫基甲烷、三烷基硅烷(例如，三甲基硅烷、三乙基硅烷)、或它们的混合物。在一实施方式中，清除剂是三异丙基硅烷(TIS)。在脱保护后，粗产物可以使用醚或甲基叔丁基醚在低于0℃(例如，在约-20℃)的温度下沉淀，然后过滤并通过反相HPLC(RP-HPLC)纯化。
在一个具体的方面，本发明提供了一种制备β-转角模拟肽环状化合物D3的方法
该方法包括以下步骤：
(a)提供式(IIIa)的受保护的线性模拟肽化合物；
(b)通过分子内的芳族亲核取代反应使式(IIIa)的受保护的线性模拟肽化合物环化以形成(IVa)的受保护的β-转角模拟肽环状化合物
以及
(c)使在式(IVa)的受保护的β-转角模拟肽环状化合物中的氨基酸侧链保护基脱保护。
在某些实施方式中，提供了与式(IIa)的固相载体连接的受保护的线性模拟肽化合物：
本发明还涉及用于制备式(I)的β-转角模拟肽环状化合物的中间体。本文公开了可用于制备式(I)的β-转角模拟肽环状化合物的中间体，并且在具体的实施方式中，公开了可用于制备β-转角模拟肽环状化合物D3的中间体。
式(II)的受保护的线性模拟肽化合物
其中，R2和R4独立地为氢或C1-C6烷基、或W1和R2与它们所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基或环己基，或者W3和R4与它们所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基或环己基；
R5、R6和R7独立地为氢或C1-C6烷基；
Y选自氢、-NO2、-COOR8、-OC(R8)3、-SO3R8、和-SO2NR8；
每个R8独立地为烷基或芳基；
X选自O、N、S、P、Se、C、C1-C6亚烷基、SO、SO2以及NH；
Z选自F、Cl、Br和I；
R11、R12和R13独立地为氢或保护基；
W1和W3独立地为天然或非天然氨基酸的氨基酸侧链取代基，相应地减去在与R11和R13的连接位点处的氢原子；
n为0、1、2、3、4或5；以及
L1选自空位、NH、O、S、COO、NH-CH2-COO、C1-C6亚烷基、和C1-C6亚芳基；
其中，所述固相载体是包含官能团的树脂，其选自：2-氯三苯甲基氯(2-CTC)、4-羟甲基-3-甲氧基苯氧基丁酸MBHA(HMPB-MBHA)、9-Fmoc-氨基-呫吨-3-基氧基-Merrifeield树脂(西伯尔酰胺)、三苯甲基醇、4-甲基三苯甲基氯、4-甲氧基三苯甲基氯、4-(2',4'-二甲氧基苯基-羟甲基)-苯氧基树脂(Rink酸树脂)、2-甲氧基-4-烷氧基苄基醇树脂(Sasrin树脂)、3-(N-Fmoc-N-甲氧基)丙基-酰氨基甲基树脂(Weinreb酰胺树脂)。
在本发明的一个具体的方面中，式(II)的受保护的线性模拟肽化合物具有式(IIa)的结构：
式(III)的受保护的线性模拟肽化合物
其中，R2和R4独立地为氢或C1-C6烷基、或W1和R2与它们所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基或环己基，或者W3和R4与它们所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基或环己基；
R5、R6和R7独立地为氢或C1-C6烷基；
Y选自氢、-NO2、-COOR8、-OC(R8)3、-SO3R8、和-SO2NR8；
每个R8独立地为烷基或芳基；
X选自O、N、S、P、Se、C、C1-C6亚烷基、SO、SO2以及NH；
Z选自F、Cl、Br和I；
R11和R13独立地为氢或保护基；
W1和W3独立地为天然或非天然氨基酸的氨基酸侧链取代基，相应地减去在与R11和R13的连接位点处的氢原子；
n为0、1、2、3、4或5；以及
L2选自H、NH2、OH、SH、COOH、NH-CH2-COOH、C1-C6烷基、和C1-C6芳基。
在本发明的一个具体的方面，式(III)的受保护的线性模拟肽化合物具有式(Ⅲa)的结构：
式(IV)的受保护的β-转角模拟肽环状化合物
其中，R2和R4独立地为氢或C1-C6烷基、或W1和R2与它们所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基或环己基，或者W3和R4与它们所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基或环己基；
R5、R6和R7独立地为氢或C1-C6烷基；
Y选自氢、-NO2、-COOR8、-OC(R8)3、-SO3R8、和-SO2NR8；
每个R8独立地为烷基或芳基；
X选自O、N、S、P、Se、C、C1-C6亚烷基、SO、SO2以及NH；
R11和R13独立地为氢或保护基；
W1和W3独立地为天然或非天然氨基酸的氨基酸侧链取代基，相应地减去在与R11和R13的连接位点处的氢原子；
n为0、1、2、3、4或5；以及
L2选自H、NH2、OH、SH、COOH、NH-CH2-COOH、C1-C6烷基、和C1-C6芳基。
在本发明的一个具体方面，式(IV)的受保护的β-转角模拟肽环状化合物具有式(IVa)的结构：
在某些实施方式中，本发明提供了一种制备结构D3的β-转角模拟肽环状化合物的方法。图2示出了示例性反应方案2，该反应方案2描绘了用2-氯三苯甲基氯(2-CTC)树脂制备结构D3的β-转角模拟肽环状化合物的制备路线。
实施例
下面的实施例仅是说明本发明，而不应被视为以任何方式限制本发明的范围，因为对于本领域技术人员而言，根据本公开内容和所附的权利要求，这些实施例和其等同方案将变得显而易见。除非另有说明，否则在本申请中使用的所有百分比均为重量百分比(w/w)。
实施例1
图2(方案2)示出了化合物D3的合成，化合物D3是式(I)的β-转角模拟肽环状化合物的一种实施方式。该合成可以使用2-Cl-Trt-Cl(2-CTC)树脂作为固相载体进行。
化合物2b的合成可以通过在本领域中已知的标准逐步Fmoc SPPS(固相肽合成)法来进行。Merrifield,(J.Am.Chem.Soc.1964,85,2149)；Vale et al.,(Science,1981,213,1394-1397),在美国专利No.4,305,872和No.4,316,891中,Bodanszky et al.(Principlesof Peptide Synthesis,2nd ed.,Springer Verlag Berlin Heidelberg 1989)and Pietaand Marshall,(Chem.Comm.1970,650)；(Houver-Weyl,Methods of OrganicChemistry.Vol E22a.Synthesis of Peptides and Peptidomimetics,Murray Goodman,Editor-in-Chief,Thieme.Stuttgart.New York 2002)。
2-CTC树脂2的加载通常通过二苯基-2'-氯苯基氯甲烷衍生物的亲核取代反应发生。
将1克的2-CTC树脂(1.2毫摩尔/克)放在30毫升的无水二氯甲烷(DCM)中溶胀30分钟。将溶剂过滤，并向树脂中加入Fmoc-Gly-OH(2当量)和N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)(4当量)在无水DCM(10毫升)中的溶液。还加入少量的N,N'-二甲基甲酰胺(DMF)，以促进酸溶解。将溶液于室温下在氮气氛下搅拌30分钟。在反应时间结束时，将树脂过滤并使用DCM/DIPEA溶液(3×5分钟)、DCM溶液(3×5分钟)和DMF溶液(3×5分钟)洗涤。通过用1,8-二氮杂双环十一碳-7-烯(DBU)使N-末端Fmoc基团脱保护，并通过Gude等(Lett.Pept.Sci.2003,9,203)阐述的UV光谱法测量释放出的二苯并富烯(dibenzofluvene)的溶液浓度，根据精确地干燥和称重的少量的树脂，确定氨基酸的加载。
将树脂洗涤后，通过用10毫升的20％(体积/体积)哌啶在DMF中的溶液处理30分钟，从而将Fmoc保护基除去。将树脂过滤，并用DMF(3×5分钟)和DCM(3×5分钟)洗涤以除去过量碱。通过阳性水合茚三酮试验(E.Kaiser et al,Analytical Biochemistry 1970,34,595)根据少量树脂监测脱保护反应。
随后的氨基酸、Fmoc-hSer(Trt)-OH、Fmoc-赖氨酸(BOC)-OH和Fmoc-谷氨酸(OtBu)-OH的偶联反应以逐步的方式进行，从而使偶联反应与Fmoc脱保护循环交替。特别地，对于偶联反应，将Fmoc保护的氨基酸(2当量)、HOBt(2当量)、DIC(2当量)和DIPEA(4当量)在DMF中的溶液添加到树脂中并在室温下混合1小时。在每个偶联循环后，将树脂使用DMF(3×5分钟)和DCM(3×5分钟)洗涤，以除去过量的试剂。每个偶联反应的进程通过阴性水合茚三酮试验监测。使用在DMF中的2当量HBTU和DIEA(4当量)进行2-氟-5-硝基苯甲酸(2当量)的偶联反应。树脂最后使用DMF(3×5分钟)和DCM(3×5分钟)洗涤，过滤并用氮流干燥，得到化合物2c。
通过用其中DCM:TFA:TIS的比率为97:1:2(v/v)的溶液处理化合物2c，实施从树脂裂解化合物2d。使溶液与所述树脂保持接触2分钟，然后过滤。重复该步骤5次。收集滤液并在减压下除去溶剂。将残余TIS倾析，在氮气下干燥剩余产物2d。
将剩余产品2d溶解于其中DCM:DMF的比例为9:1、浓度为20毫克/毫升的溶液中，随后加入K2CO3(2当量)，并在50℃下将混合物搅拌3小时。通过分析型RP-HPLC监测反应以确保完全形成环状产物。以下使用分析型反相HPLC方法进行过程控制：
然后该反应混合物通过硅藻土垫过滤以消除碱，并用THF洗涤过滤器。收集滤液，并在减压下于60℃下蒸发滤液以消除DMF，从而得到产物2e。
将产物2e溶于95％的TFA水溶液中持续1小时。实现氨基酸侧链的完全脱保护。将溶剂减压浓缩，用冷甲基叔丁基醚沉淀出产物。用梯度的乙腈水溶液通过C18柱上的RP-HPLC纯化粗产物D3，收集含所需产物的馏分，将馏分冷冻干燥，得到化合物D3，其为TFA盐，总收率为40％。
将化合物D3的纯化TFA盐与化合物D3的HCl盐通过在Dowex树脂上的离子交换色谱法进行交换。将在色谱纯化过程中获得的冷冻干燥的合并的小批量(sub-lots)的在乙腈水溶液中的溶液传送通过用过量的Dowex1×2-100(氯化物形式)填充的柱，随后将其用另外的乙腈水溶液洗涤以回收产物。
将经洗脱的肽收集、壳式冷冻(shell frozen)并冻干以得到收率为95％的灰白色无定形固体。
尽管本发明已经参照本发明的操作实施方式进行了详细描述和说明，但本领域技术人员应当理解，可以在不脱离本发明主旨的情况下，进行各种变化、修改、替换和省略。因此其意指本发明涵盖落入附随权利要求书的范围内的那些等同方案。

Claims (70)

1.一种制备式(I)的β-转角模拟肽环状化合物的方法，
该方法包括以下步骤：
(a)提供式(III)的受保护的线性模拟肽化合物；
(b)在溶液相中通过分子内的芳族亲核取代反应使所述式(III)的受保护的线性模拟肽化合物环化以形成(IV)的受保护的β-转角模拟肽环状化合物
(c)使在所述式(IV)的受保护的β-转角模拟肽环状化合物中的氨基酸侧链保护基脱保护；
其中：
R1和R3独立地为氢、C1-C6烷基、芳基、或天然或非天然氨基酸的氨基酸侧链取代基；
R2和R4独立地为氢或C1-C6烷基，或R1和R2与它们所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基或环己基，或者R3和R4与它们所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基或环己基；
R5、R6和R7独立地为氢或C1-C6烷基；
Y选自氢、-NO2、-COOR8、-OC(R8)3、-SO3R8、和-SO2R8；
每个R8为烷基或芳基；
X选自O、N、S、P、Se、C、C1-C6亚烷基、SO、SO2以及NH；
Z选自F、Cl、Br和I；
R11和R13独立地为氢或保护基；
W1和W3独立地为天然或非天然氨基酸的氨基酸侧链取代基，相应地减去在与R11和R13的连接位点处的氢原子；
n为0、1、2、3、4或5；以及
L2为H、NH2、OH、SH、COOH、NH-CH2-COOH、C1-C6烷基、或C1-C6芳基。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述式(I)的β-转角模拟肽环状化合物具有14至16个环原子的大环形环。
3.根据权利要求1所述的方法，其中R1和R3独立地为两种不同的氨基酸的侧链取代基。
4.根据权利要求3所述的方法，其中R1和R3独立地为赖氨酸、谷氨酸、酪氨酸、异亮氨酸、天冬酰胺、精氨酸或苏氨酸的侧链取代基。
5.根据权利要求1所述的方法，其中R1和R3独立地为谷氨酸或赖氨酸的侧链取代基。
6.根据权利要求1所述的方法，其中R1和R3独立地为异亮氨酸或精氨酸的侧链取代基。
7.根据权利要求1所述的方法，其中R11和R13独立地选自三氟乙酰基、甲酰基、乙酰基、叔-丁氧羰基(BOC)、环己基氧羰基、芴基-9-甲氧基-羰基(Fmoc)、苄氧基羰基(Cbz)、Cbz衍生物、三苯基、甲基、苄基、烯丙氧基羰基、叔丁基、烷基硅烷和烯丙基。
8.根据权利要求1所述的方法，其中R1为谷氨酸的侧链取代基，而R11为烯丙基或叔丁基。
9.根据权利要求8所述的方法，其中R11为叔丁基。
10.根据权利要求1所述的方法，其中R3为赖氨酸的侧链取代基，而R13为苄氧基羰基、烯丙氧羰基或叔丁氧羰基(BOC)。
11.根据权利要求10所述的方法，其中R13为叔丁氧羰基(BOC)。
12.根据权利要求1所述的方法，其中R2和R4独立地为氢或C1-C6烷基。
13.根据权利要求1所述的方法，其中R5、R6和R7为氢。
14.根据权利要求1所述的方法，其中X为O、S或NH。
15.根据权利要求1所述的方法，其中L2为NH-CH2-COOH。
16.根据权利要求1所述的方法，其中n为1。
17.根据权利要求1所述的方法，其中Y在相对于所述酰胺基的连接位点的间位处连接于所述式的苯环。
18.根据权利要求1所述的方法，其中Y为-NO2。
19.根据权利要求1所述的方法，其中Z在相对于所述酰胺基的连接位点的邻位处连接到所述式的苯环。
20.根据权利要求1所述的方法，其中Z为F。
21.根据权利要求1所述的方法，其中所述式(III)的受保护的线性模拟肽化合物是在酸、碱或亲核试剂的存在下从固相载体裂解式(II)的受保护的线性模拟肽化合物得到的，其中所述式(II)的受保护的线性模拟肽化合物具有以下结构：
其中L1是空位、NH、O、S、COO-、NH-CH2-COO-、C1-C6亚烷基、或C1-C6亚芳基；以及
R12为氢或保护基。
22.根据权利要求21所述的方法，其中R12是保护基。
23.根据权利要求21的所述的方法，其中X为O，而R12为三苯甲基或叔丁基二甲基硅烷(TBDMS)。
24.根据权利要求21所述的方法，其中X为S，而R12为三苯甲基。
25.根据权利要求21所述的方法，其中X为NH，而R12为4-甲基三苯甲基(Mtt)。
26.根据权利要求21所述的方法，其中所述式(II)的受保护的线性模拟肽化合物的所述裂解不会导致存在于式(II)中的任何受保护的官能团R11和R13的脱保护。
27.根据权利要求21所述的方法，其中所述式(II)的受保护的线性模拟肽化合物的所述裂解在温和的酸性条件下进行。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述温和的酸性条件包括0.01％至50％(体积/体积)的三氟乙酸(TFA)。
29.根据权利要求21所述的方法，其中所述式(II)的受保护的线性模拟肽化合物的所述裂解在极性非质子溶剂中进行。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述极性非质子溶剂包括二氯甲烷、乙腈或四氢呋喃及其混合物。
31.根据权利要求21所述的方法，其中所述式(II)的受保护的线性模拟肽化合物的所述裂解进一步包括清除剂。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述清除剂包括三异丙基硅烷(TIS)、苯硫基甲烷、三烷基硅烷、或它们的混合物。
33.根据权利要求31所述的方法，其中所述清除剂包括三异丙基硅烷(TIS)。
34.根据权利要求31所述的方法，其中所述式(II)的受保护的线性模拟肽化合物的所述裂解在包含小于10％的体积比为介于1:1至1:5之间的TFA和TIS的混合物的溶液中进行。
35.根据权利要求21所述的方法，其中所述固相载体是包含官能团的树脂，其选自2-氯三苯甲基氯(2-CTC)、4-羟甲基-3-甲氧基苯氧基丁酸MBHA(HMPB-MBHA)、9-Fmoc-氨基-呫吨-3-基氧基-Merrifield树脂(西伯尔酰胺)、三苯甲基醇、4-甲基三苯甲基氯、4-甲氧基三苯甲基氯、4-(2',4'-二甲氧基苯基-羟甲基)-苯氧基树脂(Rink酸树脂)、2-甲氧基-4-烷氧基苄基醇树脂、及3-(N-Fmoc-N-甲氧基)丙基-酰氨基甲基树脂(Weinreb酰胺树脂)。
36.根据权利要求35所述的方法，其中所述树脂具有至少0.75毫摩尔/克的官能团加载。
37.根据权利要求35所述的方法，其中所述树脂具有1.0至2.0毫摩尔/克的官能团加载。
38.根据权利要求35所述的方法，其中所述树脂是不溶性聚合物。
39.根据权利要求35所述的方法，其中所述树脂是交联的聚苯乙烯二乙烯基苯共聚物。
40.根据权利要求1所述的方法，其中，在碱的存在下进行所述环化。
41.根据权利要求40所述的方法，其中所述碱包括K2CO3、CsCO3、CsF、四丁基氟化铵(TBAF)、四甲基胍(TMG)、或它们的混合物。
42.根据权利要求1所述的方法，其中，在极性质子溶剂中进行所述环化。
43.根据权利要求42所述的方法，其中所述极性质子溶剂包括乙腈、四氢呋喃、DMF、DCM/DMF的混合物、或它们的混合物。
44.如根据权利要求43所述的方法，其中所述DCM/DMF的混合物以介于5:95至95:5之间的比例使用。
45.根据权利要求1所述的方法，其中，在不存在水和甲醇的条件下进行所述环化。
46.如根据权利要求1所述的方法，其中，在式(III)的受保护的线性模拟肽化合物的浓度低于0.1M的条件下进行所述环化。
47.根据权利要求1所述的方法，其中，在介于25℃至60℃之间的温度下进行所述环化。
48.如根据权利要求1所述的方法，其中，在强酸性条件下进行所述脱保护。
49.根据权利要求1所述的方法，其中，所述的强酸性条件包括大于50％的TFA。
50.根据权利要求1所述的方法，其中，所述脱保护还包括清除剂。
51.一种式(III)的受保护的线性模拟肽化合物
其中，R2和R4独立地为氢或C1-C6烷基、或W1和R2与它们所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基或环己基，或者W3和R4与它们所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基或环己基；
R5、R6和R7独立地为氢或C1-C6烷基；
Y选自氢、-NO2、-COOR8、-OC(R8)3、-SO3R8、和-SO2NR8；
每个R8独立地为烷基或芳基；
X选自O、N、S、P、Se、C、C1-C6亚烷基、SO、SO2以及NH；
Z选自F、Cl、Br和I；
R11和R13独立地为氢或保护基；
W1和W3独立地为天然或非天然氨基酸的氨基酸侧链取代基，相应地减去在与R11和R13的连接位点处的氢原子；
n为0、1、2、3、4或5；以及
L2为H、OH、SH、COOH、NH-CH2-COOH、C1-C6烷基、或C1-C6芳基。
52.根据权利要求51所述的受保护的β-转角模拟肽环状化合物，其中所述式(I)的β-转角模拟肽环状化合物具有14至16个环原子的大环形环。
53.根据权利要求51所述的受保护的β-转角模拟肽环状化合物，其中W1和W3独立地为两种不同氨基酸的侧链取代基，减去在所述官能团上的氢原子。
54.根据权利要求51所述的受保护的β-转角模拟肽环状化合物，其中W1和W3独立地为赖氨酸、谷氨酸、酪氨酸、异亮氨酸、天冬酰胺、精氨酸或苏氨酸的侧链取代基，减去在所述官能团上的氢原子。
55.根据权利要求51所述的受保护的β-转角模拟肽环状化合物，其中W1和W3独立地为谷氨酸或赖氨酸的侧链取代基。
56.根据权利要求51所述的受保护的β-转角模拟肽环状化合物，其中W1和W3独立地为异亮氨酸或精氨酸的侧链取代基。
57.根据权利要求51所述的受保护的β-转角模拟肽环状化合物，其中R11和R13独立地选自三氟乙酰基、甲酰基、乙酰基、叔-丁氧羰基(BOC)、环己基氧羰基、芴基-9-甲氧基-羰基(Fmoc)、苄氧基羰基(Cbz)、Cbz衍生物、三苯基、甲基、苄基、烯丙氧基羰基、叔丁基、烷基硅烷和烯丙基。
58.根据权利要求51所述的受保护的β-转角模拟肽环状化合物，其中W1为谷氨酸的侧链取代基，减去在所述官能团上的氢原子，而R11为烯丙基或叔丁基。
59.根据权利要求58所述的受保护的β-转角模拟肽环状化合物，其中R11为叔丁基。
60.根据权利要求51所述的受保护的β-转角模拟肽环状化合物，其中，W3为赖氨酸的侧链取代基，而R13为苄氧基羰基、烯丙氧羰基或叔丁氧羰基(BOC)。
61.根据权利要求60所述的受保护的β-转角模拟肽环状化合物，其中，R13为叔丁氧羰基(BOC)。
62.根据权利要求51所述的受保护的β-转角模拟肽环状化合物，其中，R2和R4独立地为氢或C1-C6烷基。
63.根据权利要求51所述的受保护的β-转角模拟肽环状化合物，其中，R5、R6和R7为氢。
64.根据权利要求51所述的受保护的β-转角模拟肽环状化合物，其中，X为O、S或NH。
65.根据权利要求51所述的受保护的β-转角模拟肽环状化合物，其中，L2为NH-CH2-COOH。
66.根据权利要求51所述的受保护的β-转角模拟肽环状化合物，其中，n为1。
67.根据权利要求51所述的受保护的β-转角模拟肽环状化合物，其中，Y在相对于所述酰胺基的连接位点的间位处连接于所述式的苯环。
68.根据权利要求51所述的受保护的β-转角模拟肽环状化合物，其中，Y为-NO2。
69.根据权利要求51所述的受保护的β-转角模拟肽环状化合物，其中，Z在相对于所述酰胺基的连接位点的邻位处连接到所述式的苯环。
70.根据权利要求51所述的受保护的β-转角模拟肽环状化合物，其中，Z为F。
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