ES2831764T3 - Arimoclomol para el tratamiento de trastornos asociados a glucocerebrosidasa - Google Patents

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Abstract

Un ingrediente farmacéutico activo seleccionado de cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido- 3-carboximidoílo, sus estereoisómeros y las sales de adición de ácido del mismo, para su uso en un método de tratamiento de la enfermedad de Parkinson (EP) asociada a glucocerebrosidasa (GBA) o parkinsonismo asociado a GBA.

Description

DESCRIPCIÓN
Arimoclomol para el tratamiento de trastornos asociados a glucocerebrosidasa
Campo técnico
La presente descripción se refiere a un ingrediente farmacéutico activo seleccionado de cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo, sus estereoisómeros y las sales de adición de ácido del mismo (arimoclomol), para su uso en un método de tratamiento de un trastorno asociado a glucocerebrosidasa (GBA) distinto de la enfermedad de Gaucher (GD), incluyendo las alfa-sinucleinopatías asociadas a GBA tales como la enfermedad de Parkinson (EP) asociada a GBA, demencia con cuerpos de Lewi (DLB) asociada a GBA y atrofia multisistémica (MSA) asociada a GBA.
Antecedentes
La enfermedad de Gaucher (GD) es la más común de las enfermedades de almacenamiento lisosomal caracterizadas por una acumulación de glucocerebrósidos. Es una forma de esfingolipidosis, ya que implica un metabolismo disfuncional de los esfingolípidos. Hasta la fecha, se conocen hasta 300 mutaciones en el gen de GBA y se relacionan con la enfermedad de Gaucher. Las mutaciones de GBA pueden clasificarse como leves (que causan Gd de tipo I, no neuronopáticas) o graves (que causan GD de tipos II y III). Las mutaciones homocigotas de GBA, así como las mutaciones heterocigotas compuestas causan GD. Predominan algunas mutaciones comunes, siendo la más prevalente para GD de Tipo I una mutación sin sentido que da como resultado la sustitución de una serina por asparagina en el residuo de aminoácido 370 (N370S), y siendo la más prevalente para el Tipo II y III L444P (los codones están numerados desde el primer codón de la proteína madura, es decir, sin el péptido señal).
Muchas de estas mutaciones también se encuentran en pacientes con la enfermedad de Parkinson (EP). Se ha descubierto que las mutaciones heterocigotas que se encuentran en los portadores de mutaciones de GBA (que tienen un gen de GBA mutado) predisponen al desarrollo de la enfermedad de Parkinson (Gan-Or et al., Neurology, 2015). Las mutaciones en GBA ahora se consideran uno de los principales factores de riesgo genéticos de la enfermedad de Parkinson. Se ha estimado que al menos el 8 % de los pacientes con la enfermedad de Parkinson tienen mutaciones en el gen de GBA, tanto mutaciones leves como graves en GBA, incluyendo los heterocigotos L444P. Además, las deficiencias secundarias de la actividad de GBA pueden estar relacionadas con la enfermedad de Parkinson.
La patología primaria que conduce desde la deficiencia de GBA a la enfermedad de Parkinson no está aclarada, pero los experimentos preclínicos sugieren una relación inversa con la a-sinucleína. Los portadores de mutaciones del gen de GBA también parecen tener un mayor riesgo de desarrollar demencia con cuerpos de Lewy (DLB) y posiblemente atrofia multisistémica (MSA), lo que proporciona un vínculo entre la deficiencia de GBA y al menos algunas de las alfasinucleinopatías.
WO 2014/071282 (US 2015/0284472) describe un vector viral adenoasociado autocomplementario recombinante que codifica glucocerebrosidasa humana (AAV-GBAI) en modelos para soportar terapias de aumento de glucocerebrosidasa para la EP y sinucleinopatías y tauopatías relacionadas.
WO 2013/148333 (US 2015/0065469) describe derivados del ácido salicílico como activadores de la glucocerebrosidasa para tratar la enfermedad de Gaucher e inhibir el inicio de los síntomas de la enfermedad de Gaucher en un paciente que tiene una mutación del gen de GBA y para tratar la enfermedad de Parkinson.
WO 2009/155936 (US 2011/0286993) describe la proteína de choque térmico 70 e inductores de la misma para tratar enfermedades de almacenamiento lisosomal, incluyendo la enfermedad de Gaucher.
WO 2005/041965 (US 2015/0126551) describe el uso del inductor del choque térmico arimoclomol para proteger a las neuronas en enfermedades neurodegenerativas, incluyendo la enfermedad de Parkinson.
US 2015/0284472 se refiere al tratamiento de sinucleinopatías, incluyendo la enfermedad de Parkinson y la demencia con cuerpos de Lewy, mediante la administración de un agente que aumenta la actividad de GBA.
Resumen
El arimoclomol es un amplificador de proteínas de choque térmico que se encuentra actualmente en evaluación para el tratamiento de trastornos de almacenamiento lisosomal pediátricos y esclerosis lateral amiotrófica (ELA).
Los presentes inventores han descubierto ahora que el arimoclomol aumenta los niveles de GBA y aumenta la actividad de GBA, no solo en homocigotos de GBA (que presentan enfermedad de Gaucher y actividad de GBA marcadamente reducida), sino también en heterocigotos de GBA mutantes (portadores). Específicamente, el arimoclomol aumenta la actividad de GBA en homocigotos de GBA (paciente de Gaucher) hasta el nivel de actividad clínicamente no afectado. Además, el arimoclomol aumenta la actividad de GBA en heterocigotos de GBA (clínicamente no afectados) y aumenta la cantidad de enzima GBA (nivel total y GBA madura/pos-RE).
Los presentes inventores también muestran en la presente memoria que el arimoclomol aumenta la actividad de GBA en pacientes con la enfermedad de Parkinson con alelos de GBA mutados (heterocigotos u homocigotos, clínicamente no afectados por la enfermedad de Gaucher).
Es un aspecto de la presente descripción proporcionar un ingrediente farmacéutico activo seleccionado de cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo (arimoclomol), sus estereoisómeros y las sales de adición de ácido del mismo, para su uso en un método de tratamiento de un trastorno asociado a glucocerebrosidasa (GBA).
En una realización de la presente descripción, dicho trastorno asociado a GBA está asociado con niveles reducidos de la enzima GBA y/o actividad reducida de la enzima GBA. En una realización de la presente descripción, dicho trastorno asociado a GBA está asociado con una o más mutaciones del gen de GBA, incluyendo mutaciones del gen de GBA heterocigotas y homocigotas.
En una realización de la presente descripción, dicho trastorno asociado a GBA es una alfa-sinucleinopatía asociada a GBA, tal como seleccionada del grupo que consiste en enfermedad de Parkinson (EP) asociada a GBA, demencia con cuerpos de Lewi (DLB) asociada a GbA y atrofia multisistémica (MSA) asociada a GBA.
En una realización de la presente descripción, dicha enfermedad de Parkinson asociada a GBA está asociada con un genotipo de GBA de alto riesgo genético para la enfermedad de Parkinson.
También se proporciona con la presente descripción un ingrediente farmacéutico activo seleccionado de cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo, sus estereoisómeros y las sales de adición de ácido del mismo, para su uso en un método para aumentar los niveles de GBA y/o la actividad de GBA.
Descripción de los dibujos
Figura 1: aumento dependiente de la dosis inducido por arimoclomol en RE Hsp70 (BiP) en células primarias (fibroblastos humanos) de un individuo con un alelo de GBA heterocigoto que contiene las mutaciones L444P,A456P,V460V en cis (portador, clínicamente no afectado por la enfermedad de Gaucher). Véase el Ejemplo 1.
Figura 2: aumento dependiente de la dosis inducido por arimoclomol en la cantidad de enzima GBA en células primarias (fibroblastos humanos) de un individuo con un alelo de GBA heterocigoto que contiene las mutaciones L444P,A456P,V460V en cis (portador, no afectado por la enfermedad de Gaucher). Véase el Ejemplo 1.
Figura 3: aumento dependiente de la dosis inducido por arimoclomol en la actividad de GBA en un paciente con Gaucher Tipo II L444P/L444P,A456P,V460V. Nivel aumentado hasta el nivel de actividad clínicamente no afectado (línea discontinua). Véase el Ejemplo 2.
Figura 4: aumento dependiente de la dosis inducido por arimoclomol en la actividad de GBA en heterocigoto L444P,A456P,V460V (portador; progenitor clínicamente no afectado del paciente con enfermedad de Gaucher, genotipo de alto riesgo genético para la enfermedad de Parkinson). Nivel aumentado más de 2 veces. Véase el Ejemplo 2.
Figura 5: aumento dependiente de la dosis inducido por arimoclomol en la actividad de GBA en células primarias de pacientes con enfermedad de Gaucher de tipo I (N370S/V394L y N370S/1-BP ins 84G), tipo II (E326K,L444P/E326K,L444P y G325R/C342G y P415R/L444P) o tipo III (L444P/L444P). Véase el Ejemplo 3.
Figura 6: aumento dependiente de la dosis inducido por arimoclomol en la actividad de GBA en células primarias de un paciente con enfermedad de Parkinson con un alelo de GBA heterocigoto que contiene la mutación N370S (N370S/+). Véase el Ejemplo 4.
Figura 7. Aumento dependiente de la dosis inducido por arimoclomol en la actividad de GBA en fibroblastos humanos de individuos sanos no sintomáticos sin mutación de GBA (+/+). Véase el Ejemplo 5.
Figura 8: aumento inducido por arimoclomol en el marcaje de GBA activa por ME569 en células primarias de pacientes con enfermedad de Gaucher de tipo I (N370S/V394L), tipo II (G325R/C342G) y tipo III (L444P/L444P). Véase el Ejemplo 6.
Figura 9: aumento dependiente de la dosis inducido por arimoclomol en RE Hsp70 (BiP) en células primarias de un paciente con enfermedad de Gaucher de tipo I (N370S/V394L). Se usó vinculina como control de carga. Véase el Ejemplo 7.
Figura 10: aumento dependiente de la dosis inducido por arimoclomol en RE Hsp70 (BiP) en células primarias de un paciente con enfermedad de Gaucher de tipo I (N370S/1-BP ins 84G). Se usó RPA como control de carga. Véase el Ejemplo 7.
Figura 11: aumento dependiente de la dosis inducido por arimoclomol en el nivel de proteína GBA en células primarias de un paciente con enfermedad de Gaucher de tipo I (N370S/1-BP ins 84G). Se usó RPA como control de carga. Véase el Ejemplo 7.
Figura 12: aumento dependiente de la dosis inducido por arimoclomol en RE Hsp70 (BiP) en células primarias de un paciente con enfermedad de Gaucher de tipo II (L444P/P415R). Se usó RPA como control de carga. Véase el Ejemplo 8.
Figura 13: aumento inducido por arimoclomol en RE Hsp70 (BiP) en células primarias de un paciente con enfermedad de Gaucher de tipo II (G325R/C342G). Se usó vinculina como control de carga. Véase el Ejemplo 8.
Figura 14: aumento dependiente de la dosis inducido por arimoclomol en el nivel de proteína GBA en células primarias de un paciente con enfermedad de Gaucher de tipo II (L444P/P415R). Se usó vinculina como control de carga. Véase el Ejemplo 8.
Figura 15: aumento dependiente de la dosis inducido por arimoclomol en el nivel de proteína GBA en células primarias de un paciente con enfermedad de Gaucher de tipo II (G325R/C342G). Se usó RPA como control de carga. Véase el Ejemplo 8.
Figura 16: aumento dependiente de la dosis inducido por arimoclomol en RE Hsp70 (BiP) en células primarias de un paciente con enfermedad de Gaucher de tipo III (L444P/L444P). Se usó vinculina como control de carga. Véase el Ejemplo 9.
Figura 17: aumento dependiente de la dosis inducido por arimoclomol en el nivel de proteína GBA en células primarias de un paciente con enfermedad de Gaucher de tipo III (L444P/L444P). Se usó RPA como control de carga. Véase el Ejemplo 9.
Figura 18: aumento dependiente de la dosis inducido por arimoclomol en RE Hsp70 (BiP) en células primarias de un individuo con EP-GBA (N370S/N370S). Se usó vinculina como control de carga. Véase el Ejemplo 10.
Figura 19: el arimoclomol no afecta la diferenciación neuronal de MASC de individuos con GD con las mutaciones de GBA indicadas. Las células se trataron bien con simulacro (PBS) o arimoclomol (Ari) 400 pM durante 9 días. La expresión de los marcadores neuronales Tubulina beta 3 (Fig. 19 A) y NeuN (Fig. 19 B) se evaluó mediante inmunotinción. Véase el Ejemplo 11.
Figura 20: aumento inducido por arimoclomol en la actividad de GBA en células primarias de tipo neuronal de individuos con GD con las mutaciones de GBA indicadas. Como control se incluyeron fibroblastos derivados de la piel de un individuo con GDTIII (L444P/L444P). Las células se trataron bien con simulacro (PBS) o arimoclomol (Ari) 400 pM. Véase el Ejemplo 11.
Descripción detallada
La invención se define mediante las reivindicaciones adjuntas. Cualquier realización que no se encuentre dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas no forma parte de la invención.
La beta-glucocerebrosidasa o glucocerebrosidasa (entrada UniProt P04062, GLCM_HUMAN, también llamada glucosilceramidasa, beta-glucosidasa ácida, D-glucosil-N-acilesfingosina glucohidrolasa, GCasa o GBA) es una enzima con actividad glucosilceramidasa que escinde, por hidrólisis, el enlace beta-glucosídico del glucocerebrósido, un intermedio en el metabolismo de los glucolípidos:
D-glucosil-N-acilesfingosina H2O = D-glucosa N-acilesfingosina.
La GBA requiere saposina C y fosfolípidos aniónicos para su actividad. Está localizada en el lisosoma. Está codificada por el gen de GBA (nombre oficial: glucosidasa, beta, ácido; Gen/Locus número MIM 606463; EC 3.2.1.45). El corte y empalme alternativo da como resultado múltiples variantes de transcritos.
Las mutaciones en el gen de GBA, que codifica la enzima lisosomal que es deficiente en la enfermedad de Gaucher, son factores de riesgo importantes y comunes para la enfermedad de Parkinson y trastornos relacionados. Esta asociación se reconoció por primera vez en la clínica, donde se observó parkinsonismo, aunque raramente, en pacientes con enfermedad de Gaucher y con mayor frecuencia en familiares que eran portadores obligados (un individuo que puede no estar clínicamente afectado pero que debe portar una mutación génica sobre la base del análisis del historial familiar).
Las mutaciones del gen de GBA se actualizan continuamente en la base de datos de mutaciones del laboratorio de genética molecular LOVD CCHMC, enfermedad de Gaucher; glucosidasa, beta, ácido (GBA) en https://research.cchmc.org/LOVD2/home.php?select_db=GBA.
Posteriormente, los hallazgos de estudios grandes mostraron que los pacientes con enfermedad de Parkinson y trastornos de cuerpos de Lewy asociados tenían una mayor frecuencia de mutaciones de GBA en comparación con los individuos control. Los pacientes con parkinsonismo asociado a GBA exhiben diversos fenotipos parkinsonianos, pero tienden a tener una edad de inicio más temprana y más cambios cognitivos asociados que los pacientes con parkinsonismo sin mutaciones de GBA. Las hipótesis propuestas para explicar esta asociación incluyen una ganancia de función debida a mutaciones en la glucocerebrosidasa que promueve la agregación de a-sinucleína; acumulación de sustrato debida a la pérdida de función enzimática, que afecta el procesamiento y el aclaramiento de la a-sinucleína; y un bucle de retroalimentación bidireccional.
La alfa-sinucleína es una proteína sinucleína de función desconocida que se encuentra principalmente en el tejido neural. Puede agregarse para formar fibrillas insolubles en condiciones patológicas caracterizadas por cuerpos de Lewy, como la enfermedad de Parkinson, demencia con cuerpos de Lewy y atrofia multisistémica. La alfa-sinucleína es el componente estructural principal de las fibrillas de los cuerpos de Lewy.
El arimoclomol es un inductor que es una molécula pequeña de las proteínas de choque térmico, incluyendo Hsp70. Actualmente, se está investigando para el tratamiento de la esclerosis lateral amiotrófica (ELA) y de la enfermedad de Niemann-Pick tipo C que es un trastorno de almacenamiento lisosomal. La inducción de las proteínas de choque térmico, incluyendo Hsp70, protege a las membranas lisosomales y aumenta la actividad de las enzimas lisosomales responsables de la degradación del sustrato lisosomal.
Los presentes inventores muestran en la presente memoria que el arimoclomol aumenta la actividad de GBA en las células de un paciente con enfermedad de Gaucher de tipo III (p. ej., L444P/L444P) hasta niveles de actividad clínicamente no afectados (en algunos casos, los mismos niveles que los portadores de la mutación de GBA). También se muestra en la presente memoria que el arimoclomol aumenta sorprendentemente la actividad de GBA en las células de un portador de mutación de GBA (p. ej., heterocigoto L444P) más de 2 veces de los niveles de actividad clínicamente no afectados. Además, el arimoclomol aumenta la actividad de GBA N370S en las células de un paciente con EP. Por tanto, la actividad y los niveles de GBA también pueden aumentarse en células de heterocigotos (portadores) de GBA mutantes y en las células de homocigotos de GBA mutantes que no están clínicamente afectados por la enfermedad de Gaucher.
El aumento de los niveles y/o actividad de GBA inducido por arimoclomol puede resultar por lo tanto útil para tratar una variedad de trastornos proteinopáticos en donde los niveles y/o actividad de GBA están comprometidos.
El arimoclomol se define en la presente memoria como un ingrediente farmacéutico activo seleccionado de cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo, sus estereoisómeros y las sales de adición de ácido del mismo.
Por la presente se describe el arimoclomol para su uso en el tratamiento de las deficiencias de GBA. En una realización de la presente descripción, dicha deficiencia de GBA no incluye la enfermedad de Gaucher (GD) per se/como tal.
Por la presente se describe el arimoclomol para su uso en el tratamiento de un trastorno asociado a glucocerebrosidasa (GBA) distinto de la enfermedad de Gaucher (GD).
En una realización de la presente descripción, dicho tratamiento es profiláctico, curativo o de mejora. En una realización particular de la presente descripción, dicho tratamiento es profiláctico. En otra realización de la presente descripción, dicho tratamiento es curativo. En una realización adicional de la presente descripción, dicho tratamiento es de mejora.
El término "individuo" o "sujeto" se refiere a los vertebrados, en particular a un miembro de una especie de mamíferos, preferentemente primates, incluyendo los seres humanos. En una realización preferida de la presente descripción, un individuo tal y como se usa en la presente memoria es un ser humano, hombre o mujer, de cualquier edad.
Un "individuo que lo necesita" se refiere a un individuo que puede beneficiarse de la presente descripción. En una realización de la presente descripción, dicho individuo que lo necesita es un individuo enfermo, donde dicha enfermedad es un trastorno asociado a GBA.
Trastornos asociados a GBA
En una realización de la presente descripción se proporciona un compuesto seleccionado del grupo que consiste en citrato de cloruro de (+)-R-N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo; citrato de cloruro de (-)-S-W-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo; maleato de cloruro de (+)-R-N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo; y maleato de cloruro de (-)-S-W-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo, para su uso en el tratamiento de un trastorno asociado a GBA.
La referencia a arimoclomol, como se define en la presente memoria, para su uso en el tratamiento de un trastorno asociado a GBA según la presente descripción, abarca una cualquiera de las siguientes afecciones.
Un trastorno asociado a GBA como se define en la presente memoria puede referirse a cualquier trastorno que tenga una asociación con los niveles de GBA y/o la actividad de GBA. Por lo tanto, los niveles reducidos y/o la actividad reducida de GBA están asociados con un trastorno asociado a GBA como se define en la presente memoria. Asociado con, en una realización de la presente descripción, significa predispone a (o aumenta el riesgo de desarrollar; o presentar).
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA no es la enfermedad de Gaucher. En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA no es la enfermedad de Gaucher de tipo I. En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA no es la enfermedad de Gaucher de tipo II. En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA no es la enfermedad de Gaucher de tipo III. En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA no es la enfermedad de Gaucher de tipos II o III.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con niveles reducidos de la enzima GBA.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con una actividad reducida de la enzima GBA.
Los niveles reducidos de la enzima GBA y/o la actividad reducida de GBA también puede definirse como niveles alterados de la enzima GBA y/o actividad alterada de GBA; niveles insuficientes de la enzima GBA y/o actividad insuficiente de GBA; o niveles deficientes de la enzima GBA y/o actividad deficiente de GBA.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA se denomina deficiencia de GBA.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA tiene una actividad de GBA y/o un nivel de la enzima que está reducido pero lo suficiente como para permanecer clínicamente no afectado con respecto a la enfermedad de Gaucher (es decir, no tiene y no está diagnosticado con la enfermedad de Gaucher). En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA tiene una actividad de GBA y/o un nivel de la enzima que está reducido en comparación con los niveles de actividad de tipo salvaje.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con una o más mutaciones individuales del gen de GBA. En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA es un individuo que tiene una o más mutaciones del gen de GBA que permanecen clínicamente no afectados por la enfermedad de Gaucher.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con una o más mutaciones leves del gen de GBA (asociadas con GD de tipo I; TI).
En otra realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con una o más mutaciones graves del gen de GBA (asociadas con Gd de tipo II; TII y GD de tipo III; TIII).
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con una o más mutaciones heterocigotas del gen de GBA, en donde dichas mutaciones heterocigotas del gen de GBA no provocan ni dan como resultado el desarrollo de la enfermedad de Gaucher.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA es un individuo que tiene una o más mutaciones heterocigotas en el gen de GBA que permanecen clínicamente no afectado por la enfermedad de Gaucher.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con una o más mutaciones homocigotas del gen de GBA y/o mutaciones heterocigotas compuestas del gen de GBA, en donde dichas mutaciones del gen de GBA no provocan ni dan lugar como resultado el desarrollo de la enfermedad de Gaucher.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA es un individuo que tiene uno o más mutaciones homocigotas y/o heterocigotas compuestas del gen de GBA que permanece clínicamente no afectado con la enfermedad de Gaucher.
Las mutaciones específicas en el gen de GBA que pueden afectar la actividad de la proteína GBA incluyen L444P, D409H, D409V, E235A, E340A, E326K, N370S, N370S/1-BP ins 84G, V394L, A456P, V460V, C342G, G325R, P415R, Y133*, F213I, N188S e IVS2+1G>A/N188S.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con (o comprende, presenta) una o más mutaciones en el gen de GBA seleccionadas del grupo que consiste en L444P, D409H, D409V, E235A, E340A, E326K, N370S, N370S/1-BP ins 84G, V394L, A456P, V460V, C342G, G325R, P415R Y133*, F213I, N188S e IVS2+1G>A/N188S. En una realización, dicha una o más mutaciones en el gen de GBA pueden ser mutaciones heterocigotas, heterocigóticas compuestas u homocigotas.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA es un individuo que tiene una o más mutaciones del gen de GBA seleccionadas del grupo que consiste en L444P, D409H, D409V, E235A, E340A, E326K, N370S, N370S/1-BP ins 84G, V394L, A456P, V460V, C342G, G325R, P415R Y133*, F213I, N188S e IVS2+1G>A/N188S que permanece clínicamente no afectado por la enfermedad de Gaucher. En una realización, dicha una o más mutaciones en el gen de GBA pueden ser mutaciones heterocigotas, heterocigóticas compuestas u homocigotas.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con la mutación del gen de GBA L444P (L444P/, L444P/+ o L444P/L444P). Un alelo de GBA heterocigoto que contiene la mutación L444P puede denominarse L444P/+.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con la mutación del gen de GBA D409H.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con la mutación del gen de GBA D409V.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con la mutación del gen de GBA E235A.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con la mutación del gen de GBA E340A.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con la mutación del gen de GBA E326K.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con la mutación del gen de GBA N370S. Un alelo de GBA homocigoto que contiene la mutación N370S puede denominarse N370S/N370S. Un alelo de GBA heterocigoto que contiene la mutación N370S puede denominarse N370S/+.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con la mutación del gen de GBA N370S/1-BP ins 84G.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con la mutación del gen de GBA V394L.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con la mutación del gen de GBA A456P.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con la mutación del gen de GBA V460V.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con la mutación del gen de GBA C342G.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con la mutación del gen de GBA G325R.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con la mutación del gen de GBA P415R.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con la mutación del gen de GBA Y133*.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con la mutación del gen de GBA F213I.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con la mutación del gen de GBA N188S y/o IVS2+1G>A/N188S.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con una o más mutaciones del gen de GBA sin la reducción correspondiente de la actividad de la enzima GBA.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con una actividad reducida de la enzima GBA y dicho gen de GBA es de tipo salvaje. En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con una actividad reducida de la enzima GBA idiopática.
Un alelo de GBA de tipo salvaje puede denominarse (+/+) (sin mutación de GBA).
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con una actividad reducida de GBA debido a la supresión de la actividad de la proteína.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con una actividad reducida de GBA debido a la represión de la transcripción o traducción del gen/proteína.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA está asociado con una actividad reducida de GBA y dicho gen de GBA es de tipo salvaje, y la reducción en la actividad de GBA se debe a la supresión de la actividad de la proteína y/o la represión de la transcripción o traducción del gen/proteína.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA es un individuo con un alelo de GBA heterocigoto que contiene una o más mutaciones seleccionadas del grupo que consiste en L444P, D409H, D409V, E235A, E340A, E326K, N370S, N370S/1-BP ins 84G, V394L, A456P, V460V, C342G, G325R, P415R, Y133*, F213I, N188S e IVS2+1G>A/N188S.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA es un individuo con un alelo de GBA heterocigoto que contiene las mutaciones L444P,A456P,V460V en cis.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA es un heterocigoto L444P,A456P,V460V.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA es heterocigoto para el alelo complejo de GBA L444P,A456P,V460V.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA es un portador de la mutación de GBA. En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA es un portador obligado. En una realización de la presente descripción, el portador de la mutación de GBA no está clínicamente afectado por la enfermedad de Gaucher.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA es un abuelo, progenitor, hermano o hijo clínicamente no afectado de un paciente con la enfermedad de Gaucher.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA es un progenitor o hermano clínicamente no afectado de un paciente con la enfermedad de Gaucher.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA es un individuo con un alelo de GBA homocigoto o heterocigoto compuesto que contiene una o más mutaciones seleccionadas del grupo que consiste en L444P, D409H, D409V, E235A, E340A, E326K, N370S, N370S/1-BP ins 84G, V394L, A456P, V460V, C342G, G325R, P415R, Y133*, F213I, N188S e IVS2+1G>A/N188S, en donde dicho individuo permanece clínicamente no afectado por la enfermedad de Gaucher.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA es un individuo con un alelo de GBA homocigoto que contiene la mutación N370S/N370S.
En una realización de la presente descripción se proporciona un ingrediente farmacéutico activo seleccionado de cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo, sus estereoisómeros y las sales de adición de ácido del mismo, para uso en un método de tratamiento de un trastorno asociado a glucocerebrosidasa (GBA), tal como un trastorno asociado a glucocerebrosidasa (GBA) distinto de la enfermedad de Gaucher (GD).
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a glucocerebrosidasa (GBA) es parkinsonismo asociado a GBA.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA es un trastorno con cuerpos de Lewy asociado a GBA, tal como un trastorno con cuerpos de Lewy asociado a GBA seleccionado del grupo que consiste en enfermedad de Parkinson asociada a GBA, demencia con cuerpos de Lewy asociada a GBA, y atrofia multisistémica asociada a GBA.
En una realización de la presente descripción se proporciona un ingrediente farmacéutico activo seleccionado de cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo, sus estereoisómeros y las sales de adición de ácido del mismo, para su uso en un método de tratamiento de una alfa-sinucleinopatía asociada a GBA.
Una alfa-sinucleinopatía asociada a GBA puede definirse en la presente memoria como una alfa-sinucleinopatía que tiene una asociación con el nivel y/o actividad de la enzima g Ba . En una realización de la presente descripción, la alfa-sinucleinopatía se presenta con niveles y/o actividad reducida de GBA, que está asociado con un aumento de alfa-sinucleína. En una realización de la presente descripción, el tratamiento con arimoclomol reduce la agregación de alfa-sinucleína. En una realización de la presente descripción, el tratamiento con arimoclomol aumenta la actividad y/o niveles de GBA.
En una realización de la presente descripción se proporciona un ingrediente farmacéutico activo seleccionado de cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo, sus estereoisómeros y las sales de adición de ácido del mismo, para su uso en un método de tratamiento de una alfa-sinucleinopatía asociada a GBA seleccionada del grupo que consiste en enfermedad de Parkinson (EP) asociada a GBA, demencia con cuerpos de Lewi (DLB) asociada a GBA y atrofia multisistémica (MSA) asociada a GBA.
En una realización de la presente descripción se proporciona un ingrediente farmacéutico activo seleccionado de cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo, sus estereoisómeros y las sales de adición de ácido del mismo, para su uso en un método de tratamiento de la enfermedad de Parkinson, en particular de la enfermedad de Parkinson asociada a GBA.
En una realización de la presente descripción, la enfermedad de Parkinson asociada a GBA es la enfermedad de Parkinson asociada con niveles y/o actividad reducida de la enzima GBA.
En una realización de la presente descripción, la enfermedad de Parkinson asociada a GBA es la enfermedad de Parkinson asociada con una o más mutaciones del gen de GBA. En una realización de la presente descripción, el individuo con enfermedad de Parkinson asociada a GBA permanece clínicamente no afectado por la enfermedad de Gaucher.
En una realización de la presente descripción, la enfermedad de Parkinson asociada a GBA es la enfermedad de Parkinson asociada a una mutación heterocigota del gen de GBA. En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA es un individuo que tiene una o más mutaciones heterocigotas del gen de GBA que permanece clínicamente no afectado por la enfermedad de Gaucher.
En una realización de la presente descripción, la enfermedad de Parkinson asociada a GBA es la enfermedad de Parkinson asociada a una mutación homocigota del gen de GBA. En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA es un individuo que tiene una o más mutaciones homocigotas y/o heterocigotas compuestas del gen de GBA que permanece clínicamente no afectado por la enfermedad de Gaucher.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA es un genotipo de GBA de alto riesgo genético para la enfermedad de Parkinson. En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA es la enfermedad de Parkinson deficiente en GBA (EP-GBA). En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA son pacientes con enfermedad de Parkinson con alelos heterocigotos de GBA). En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA son pacientes con enfermedad de Parkinson con alelos homocigotos de GBA, clínicamente no afectados por la enfermedad de Gaucher.
En una realización de la presente descripción, la enfermedad de Parkinson asociada a GBA es la enfermedad de Parkinson asociada a una mutación del gen de GBA seleccionada del grupo que consiste en L444P, D409H, D409V, E235A, E340A, E326K, N370S, V394L, A456P, V460V, C342G, G325R, P415R, Y133*, F213I, N188S e IVS2+1G>A/N188S. Dicha una o más mutaciones en el gen de GBA pueden ser mutaciones heterocigotas, heterocigotas compuestas u homocigotas. En una realización de la presente descripción, el individuo que presenta la mutación del gen de GBA no está clínicamente afectado por la enfermedad de Gaucher.
En una realización de la presente descripción, el individuo que tiene la enfermedad de Parkinson asociada a GBA tiene una mutación del gen de GBA seleccionada del grupo que consiste en L444P, D409H, D409V, E235A, E340A, E326K, N370S, V394L, A456P, V460V, C342G, G325R , P415R,Y133*, F213I, N188S e IVS2+1G>A/N188S.
En una realización de la presente descripción, la enfermedad de Parkinson asociada a GBA es la enfermedad de Parkinson asociada a una mutación del gen de GBA N370S.
En una realización de la presente descripción, la enfermedad de Parkinson asociada a GBA es la enfermedad de Parkinson asociada a una mutación heterocigota del gen de GBA N370S (N370S/+).
En una realización de la presente descripción, la enfermedad de Parkinson asociada a GBA es la enfermedad de Parkinson asociada a una mutación homocigota del gen de GBA N370S (N370S/N370S).
En una realización de la presente descripción, la enfermedad de Parkinson asociada a GBA es la enfermedad de Parkinson asociada a una mutación heterocigota del gen de GBA L444P.
En una realización de la presente descripción, la enfermedad de Parkinson asociada a GBA es la enfermedad de Parkinson asociada a una mutación heterocigota del gen de GBA A456P.
En una realización de la presente descripción, la enfermedad de Parkinson asociada a GBA es la enfermedad de Parkinson asociada a una mutación heterocigota del gen de GBA V460V.
En una realización de la presente descripción, la enfermedad de Parkinson asociada a GBA es la enfermedad de Parkinson asociada a una mutación heterocigota del gen de GBA E326K.
En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA es la enfermedad de Parkinson asociada con una actividad y/o niveles reducidos de GBA idiopáticos. En una realización de la presente descripción, el trastorno asociado a GBA es la enfermedad de Parkinson con actividad y/o niveles reducidos de GBA idiopáticos, en donde no se identifican mutaciones del gen de GBA.
También se describe por la presente un ingrediente farmacéutico activo seleccionado de cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo, sus estereoisómeros y las sales de adición de ácido del mismo, para su uso en un método de uno o más de
- aumentar la actividad de GBA,
- aumentar los niveles (o cantidad) de GBA,
- aumentar la cantidad de GBA mutante activa,
- aumentar la cantidad de GBA de tipo salvaje activa,
- mejorar el plegamiento de GBA mutante retenida en el RE,
- aumentar la cantidad de GBA procesada/madura,
- aumentar la cantidad de GBA madura (pos-RE), y/o
- aumentar la cantidad de GBA madura que llega a los lisosomas.
En una realización de la presente descripción, el arimoclomol es para su uso en un método para aumentar los niveles y/o actividad de GBA en un individuo que tiene un trastorno asociado a GBA, tal como una alfa-sinucleinopatía asociada a GBA, tal como la enfermedad de Parkinson asociada a GBA.
En una realización de la presente descripción, dicha actividad de GBA aumenta hasta el 50 % o más de los niveles hipotéticos de actividad de tipo salvaje, tal como el 50-60 %, tal como el 60-70 %, tal como el 70-80 %, tal como el 80­ 90 %, tal como el 90-100 %, tal como el 100-110 %, tal como el 110-120 %, tal como el 120-130 %, tal como el 130­ 140 %, tal como el 140-150 % de los niveles hipotéticos de actividad de tipo salvaje.
En una realización de la presente descripción, dicha actividad de GBA aumenta hasta los niveles hipotéticos de actividad de tipo salvaje o más.
En una realización de la presente descripción, dicha actividad de GBA aumenta al menos un 10 %, tal como al menos un 20 %, por ejemplo al menos un 30 %, tal como al menos un 40 %, por ejemplo al menos un 50 %, tal como al menos un 60 %, por ejemplo al menos un 70 %, tal como al menos un 80 %, por ejemplo al menos un 90 %, tal como al menos un 100 %, por ejemplo al menos un 110 %, tal como al menos un 120 %, por ejemplo al menos un 130 %, tal como al menos un 140 %, por ejemplo al menos un 150 %, tal como al menos un 160 %, por ejemplo al menos un 170 %, tal como al menos un 180 %, por ejemplo al menos un 190 %, tal como al menos un 200 %, por ejemplo al menos un 210 %, tal como al menos un 220 %, por ejemplo al menos un 230 %, tal como al menos un 240 %, por ejemplo al menos un 250 %, tal como al menos un 260 %, por ejemplo al menos un 200 %, tal como al menos un 270 %, por ejemplo al menos un 280 %, tal como al menos un 290 %, por ejemplo al menos un 300 %.
En una realización de la presente descripción, dicho nivel (o cantidad) de GBA aumenta un 50 % o más de los niveles hipotéticos de tipo salvaje, tal como un 50-60 %, tal como un 60-70 %, tal como un 70-80 %, tal como un 80-90 %, tal como un 90-100 %, tal como un 100-110 %, tal como un 110-120 %, tal como un 120-130 %, tal como un 130-140 %, tal como un 140-150 % de los niveles hipotéticos de tipo salvaje.
En una realización de la presente descripción, dicho nivel de GBA aumenta hasta los niveles hipotéticos de tipo salvaje o más.
En una realización de la presente descripción, dicho nivel y/o actividad de GBA aumenta al menos 1,5 veces, tal como al menos 2 veces, por ejemplo, al menos 2,5 veces, tal como al menos 3 veces.
En una realización de la presente descripción, dicho nivel (o cantidad) de GBA aumenta al menos un 10 %, tal como al menos un 20 %, por ejemplo al menos un 30 %, tal como al menos un 40 %, por ejemplo al menos un 50 %, tal como al menos un 60 %, por ejemplo al menos un 70 %, tal como al menos un 80 %, por ejemplo al menos un 90 %, tal como al menos un 100 %, por ejemplo al menos un 110%, tal como al menos un 120 %, por ejemplo al menos un 130 %, tal como al menos un 140 %, por ejemplo al menos un 150 %, tal como al menos un 160 %, por ejemplo al menos un 170 %, tal como al menos un 180 %, por ejemplo al menos un 190 %, tal como al menos un 200 %, por ejemplo al menos un 210 %, tal como al menos un 220 %, por ejemplo al menos un 230 %, tal como al menos un 240 %, por ejemplo al menos un 250 %, tal como al menos un 260 %, por ejemplo al menos un 200 %, tal como al menos un 270 %, por ejemplo al menos un 280 %, tal como al menos un 290 %, por ejemplo al menos un 300 %.
También se describe por la presente un ingrediente farmacéutico activo seleccionado de cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo, sus estereoisómeros y las sales de adición de ácido del mismo, para su uso en un método de reducción de la agregación de alfa-sinucleína.
Uso preventivo
En otro aspecto de la presente descripción se proporciona un ingrediente farmacéutico activo seleccionado de cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo, sus estereoisómeros y las sales de adición de ácido del mismo, para su uso en un método de reducción del riesgo en un individuo de desarrollar un trastorno asociado a glucocerebrosidasa (GBA) distinto de la enfermedad de Gaucher, en donde dicho individuo tiene un nivel y/o actividad reducida de la enzima GBA.
En una realización de la presente descripción, dicho individuo tiene niveles y/o actividad de GBA menores que los niveles hipotéticos de tipo salvaje.
En una realización de la presente descripción, dicho individuo tiene niveles (o cantidad) de GBA menores que los niveles hipotéticos de tipo salvaje.
En una realización de la presente descripción, dicho individuo tiene una actividad de GBA menor que los niveles hipotéticos de actividad de tipo salvaje.
En una realización de la presente descripción, dicho individuo tiene niveles y/o actividad de GBA superiores que los niveles y/o actividad clínicamente afectados en un paciente con enfermedad de Gaucher.
En una realización de la presente descripción, dicho individuo tiene niveles y/o actividad de GBA menores que los niveles y/o actividad hipotéticos de tipo salvaje, pero mayores que los niveles y/o actividad clínicamente afectados en un paciente con enfermedad de Gaucher.
En una realización de la presente descripción, dicho individuo tiene una actividad reducida de GBA en el mismo grado que un portador de mutación del gen de GBA (mutación heterocigota de GBA), tal como un portador clínicamente no afectado, tal como un portador obligado.
En una realización de la presente descripción, dicho individuo tiene niveles reducidos de GBA en el mismo grado que un portador de mutación del gen de GBA (mutación heterocigota de GBA), tal como un portador clínicamente no afectado, tal como un portador obligado.
En una realización de la presente descripción, dicho individuo con niveles y/o actividad reducidos de GBA tiene una o más mutaciones heterocigotas del gen de GBA.
En una realización de la presente descripción, dicho individuo con niveles y/o actividad reducidos de GBA tiene una o más mutaciones homocigotas o heterocigotas compuestas en el gen de GBA.
En una realización de la presente descripción, dicho individuo tiene una actividad y/o nivel de GBA reducido hasta un cierto grado de los niveles hipotéticos de tipo salvaje.
En una realización de la presente descripción, dicho individuo tiene actividad y/o niveles de GBA de aproximadamente el 5 al 95 % o 10 al 90 % de los niveles hipotéticos de tipo salvaje, tal como el 5 al 10 %, tal como el 10 al 20 %, tal como el 20 al 30 %, tal como el 30 al 40 %, tal como el 40 al 50 %, tal como el 50 al 60 %, tal como el 60 al 70 %, tal como el 70 al 80 %, tal como el 80 al 90 %, tal como el 90 al 95 % de la actividad y/o niveles hipotéticos de tipo salvaje.
En una realización de la presente descripción, dicho individuo tiene actividad y/o niveles de GBA de aproximadamente el 25 al 75 % de los niveles hipotéticos de tipo salvaje. En una realización de la presente descripción, dicho individuo tiene actividad y/o niveles de GBA de aproximadamente el 50 % de los niveles hipotéticos de tipo salvaje.
En una realización de la presente descripción, dicho individuo tiene actividad y/o niveles de GBA de aproximadamente 10 de los niveles y/o actividad hipotéticos de tipo salvaje, tal como el 20 %, tal como el 30 %, tal como el 40 %, tal como el 50 %, tal como el 60 %, tal como el 70 %, tal como el 80 %, tal como el 90 % de los niveles y/o actividad hipotéticos de tipo salvaje.
En una realización de la presente descripción, dicho trastorno asociado a GBA es una alfa-sinucleinopatía asociada a GBA, tal como una alfa-sinucleinopatía asociada a GBA seleccionada del grupo que consiste en el trastorno de Parkinson (EP) asociado a GBA, demencia con cuerpos de Lewi (DLB) asociada a GBA y atrofia multisistémica (MSA) asociada a GBA.
En una realización de la presente descripción se proporciona un ingrediente farmacéutico activo seleccionado de cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo, sus estereoisómeros y las sales de adición de ácido del mismo, para su uso en un método de reducción del riesgo en un individuo de desarrollar la enfermedad de Parkinson, en particular la enfermedad de Parkinson asociada a GBA, en donde dicho individuo tiene niveles y/o actividad reducidos de la enzima GBA.
En una realización de la presente descripción, dicho individuo tiene una o más mutaciones heterocigotas en el gen de GBA. En una realización de la presente descripción, dicho individuo tiene una o más mutaciones heterocigotas en el gen de GBA seleccionadas del grupo que consiste en L444P, D409H, D409V, E235A, E340A, E326K, N370S, N370S/1-BP ins 84G, V394L, A456P, V460V, C342G, G325R, P415R, Y133*, F213I, N188S e IVS2+1G>A/N188S. En una realización de la presente descripción, dicho individuo tiene una mutación heterocigota en el gen de GBA L444P. En una realización de la presente descripción, dicho individuo tiene una mutación heterocigota en el gen de GBA E326K. En una realización de la presente descripción, dicho individuo tiene una mutación heterocigota en el gen de GBA N370S.
En una realización de la presente descripción, dicho individuo tiene una o más mutaciones homocigotas en el gen de GBA. En una realización de la presente descripción, dicho individuo tiene una o más mutaciones homocigotas en el gen de GBA seleccionadas del grupo que consiste en L444P, D409H, D409V, E235A, E340A, E326K, N370S, N370S/1-BP ins 84G, V394L, A456P, V460V, C342G, G325R, P415R, Y133*, F213I, N188S e IVS2+1G>A/N188S. En una realización de la presente descripción, dicho individuo tiene una mutación homocigota en el gen de GBA N370S.
En una realización de la presente descripción se proporciona un ingrediente farmacéutico activo seleccionado de cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo, sus estereoisómeros y las sales de adición de ácido del mismo, para su uso en un método de reducción del riesgo en un individuo de desarrollar la enfermedad de Parkinson asociada a GBA, en donde dicho individuo es un paciente con enfermedad de Gaucher, tal como enfermedad de Gaucher de tipo I, tipo II o tipo III.
Actividad de GBA
La actividad glucocerebrosidasa se puede evaluar mediante métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, la actividad glucocerebrosidasa puede medirse en el líquido cefalorraquídeo de mamíferos. En algunas realizaciones de la presente descripción, el mamífero es de tipo salvaje para el gen de GBA. El término "de tipo salvaje" se refiere a un gen o proteína sin mutaciones detectables que se sabe que afectan el nivel y/o actividad enzimática de la proteína.
Cuando se encuentra que el gen es de tipo salvaje, pero se observa una reducción en la actividad de la glucocerebrosidasa, la reducción en la actividad puede deberse a la supresión de la actividad de la proteína o a la represión de la transcripción o traducción del gen/proteína. Estos mecanismos son bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, la producción de la proteína puede estar reprimida por un mecanismo celular aberrante. Alternativamente, la proteína puede modificarse en la célula, lo que provoca una reducción o pérdida de la actividad enzimática.
Arimoclomol
La referencia a arimoclomol en la presente memoria abarca un ingrediente farmacéutico activo (API) seleccionado de cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo (arimoclomol), sus estereoisómeros y las sales de adición de ácido del mismo. El arimoclomol se describe adicionalmente, p. ej., en WO 00/50403.
El arimoclomol se refiere al compuesto base cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo, su enantiómero ópticamente activo (+) o (-), una mezcla de los enantiómeros en cualquier proporción y el compuesto racémico, además, las sales de adición de ácido formadas a partir de cualquiera de los compuestos anteriores con ácidos minerales u orgánicos constituyen objetos de la presente descripción. Todas las posibles formas de isómeros geométricos del cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo pertenecen al alcance de la descripción. El término "los estereoisómeros del cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo" se refiere a todos los posibles isómeros ópticos y geométricos del compuesto.
Si se desea, el cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo o uno de sus enantiómeros ópticamente activos se puede transformar en una sal de adición de ácido con un ácido mineral u orgánico, mediante métodos conocidos.
En una realización de la presente descripción, el ingrediente farmacéutico activo es el racemato del cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo.
En una realización de la presente descripción, el ingrediente farmacéutico activo es un estereoisómero ópticamente activo del cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo.
En una realización de la presente descripción, el ingrediente farmacéutico activo es un enantiómero del cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo.
En una realización de la presente descripción, el ingrediente farmacéutico activo se selecciona del grupo que consiste en cloruro de (+)-R-N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo y cloruro de (-)-(S)-N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo.
En una realización de la presente descripción, el ingrediente farmacéutico activo es una sal de adición de ácido del cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo.
En una realización de la presente descripción, el ingrediente farmacéutico activo se selecciona del grupo que consiste en citrato del cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo (también conocido como BRX-345), y maleato del cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo (también conocido como BRX-220).
En una realización de la presente descripción, el ingrediente farmacéutico activo se selecciona del grupo que consiste en citrato del cloruro de (+)-R-N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo; citrato del cloruro de (-)-S-W-[2-hidroxi-3-(l-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo; maleato del cloruro de (+)-R-N-[2 hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo; y maleato del cloruro de (-)-S-W-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo.
Composición
Si bien es posible que el ingrediente farmacéutico activo se administre como producto químico bruto, en algunas realizaciones de la presente descripción se prefiere presentarlo en forma de una formulación farmacéutica. Por consiguiente, también se describe por la presente una composición, tal como una composición farmacéutica, es decir, una composición farmacéuticamente segura, que comprende un ingrediente farmacéutico activo como se define en la presente memoria. La composición en una realización de la presente descripción comprende vehículos o excipientes farmacéuticamente y/o fisiológicamente aceptables.
Las composiciones farmacéuticas que contienen un agente bioactivo de la presente descripción pueden prepararse mediante técnicas convencionales, p. ej., como se describe en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20a Edición, Gennaro, Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 2000.
Por tanto, es un aspecto de la presente descripción proporcionar una composición, tal como una composición farmacéutica, que comprende un ingrediente farmacéutico activo seleccionado de cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-pipendim^-propox^-pmdma-l-óxido-B-carboximidoílo, sus estereoisómeros y las sales de adición de ácido del mismo (arimoclomol), para su uso en el tratamiento de un trastorno asociado a glucocerebrosidasa (GBA) distinto de la enfermedad de Gaucher (GD) como se define en la presente memoria.
Administración y dosificación
Un ingrediente farmacéutico activo o una composición que comprende el mismo como se define en la presente memoria en una realización de la presente descripción se administra a individuos que lo necesitan en dosis farmacéuticamente efectivas o una cantidad terapéuticamente efectiva.
Una cantidad terapéuticamente efectiva de un ingrediente farmacéutico activo en una realización de la presente descripción es una cantidad suficiente para curar, prevenir, reducir el riesgo de, aliviar o detener parcialmente las manifestaciones clínicas de una enfermedad o trastorno dado y sus complicaciones. La cantidad que es efectiva para un propósito terapéutico particular dependerá de la severidad y de la clase del trastorno, así como del peso y estado general del sujeto. Una cantidad adecuada para lograr esto se define como una "cantidad terapéuticamente efectiva".
En una realización de la presente descripción, la composición se administra en dosis de 1 pg/día a 100 mg/día; tal como
1 pg/día a 10 pg/día, tal como 10 pg/día a 100 pg/día, tal como 100 pg/día a 250 pg/día, tal como 250 pg/día a 500 pg/día, tal como 500 pg/día a 750 pg/día, tal como 750 pg/día a 1 mg/día, tal como 1 mg/día a 2 mg/día, tal como 2 mg/día a 5 mg/día, o tal como 5 mg/día a 10 mg/día, tal como 10 mg/día a 20 mg/día, tal como 20 mg/día a 30 mg/día, tal como 30 mg/día a 40 mg/día, tal como 40 mg/día a 50 mg/día, tal como 50 mg/día a 75 mg/día, tal como 75 mg/día a 100 mg/día, tal como 100 mg/día a 150 mg/día, tal como 150 mg/día a 200 mg/día, o tal como 200 mg/día a 250 mg/día, tal como 250 mg/día a 300 mg/día, tal como 300 mg/día a 400 mg/día, tal como 400 mg/día a 500 mg/día, tal como 500 mg/día a 600 mg/día, tal como 600 mg/día a 700 mg/día, tal como 700 mg/día a 800 mg/día, tal como 800 mg/día a 900 mg/día, tal como 900 mg/día a 1.000 mg/día.
En una realización de la presente descripción, el ingrediente farmacéutico activo o composición se administra a una dosis de 1 pg/kg de peso corporal a 100 mg/kg de peso corporal; tal como 1 a 10 pg/kg de peso corporal, tal como 10 a 100 pg/día, tal como 100 a 250 pg/kg de peso corporal, tal como 250 a 500 pg/kg de peso corporal, tal como 500 a 750 pg/kg de peso corporal, tal como 750 pg/kg de peso corporal a 1 mg/kg de peso corporal, tal como 1 mg/kg de peso corporal a 2 mg/kg de peso corporal, tal como 2 a 5 mg/kg de peso corporal, tal como 5 a 10 mg/kg de peso corporal, tal como 10 a 20 mg/kg de peso corporal, tal como 20 a 30 mg/kg de peso corporal, tal como 30 a 40 mg/kg de peso corporal, tal como 40 a 50 mg/kg de peso corporal, tal como 50 a 75 mg/kg de peso corporal, o tal como 75 a 100 mg/kg de peso corporal.
En una realización de la presente descripción, una dosis se administra una o varias veces al día, tal como de 1 a 6 veces al día, tal como de 1 a 5 veces al día, tal como de 1 a 4 veces al día, tal como de 1 a 3 veces al día, tal como de 1 a 2 veces al día, tal como de 2 a 4 veces al día, tal como de 2 a 3 veces al día. En una realización de la presente descripción, una dosis se administra menos de una vez al día, tal como una vez cada dos días o una vez a la semana.
Rutas de administración
Se apreciará que la ruta de administración preferida dependerá de la condición general y de la edad del sujeto a tratar, de la naturaleza de la afección a tratar, de la ubicación del tejido a tratar en el cuerpo y del ingrediente activo seleccionado.
Tratamiento sistémico
En una realización de la presente descripción, la ruta de administración permite introducir el agente bioactivo en el torrente sanguíneo para finalmente tomar como diana los sitios de acción deseada.
En una realización de la presente descripción, las rutas de administración son cualquier ruta adecuada, tal como una ruta enteral (que incluye la administración oral, rectal, nasal, pulmonar, bucal, sublingual, transdérmica, intracisternal e intraperitoneal), y/o una ruta parenteral (que incluye la administración subcutánea, intramuscular, intratecal, intravenosa e intradérmica).
Las formas de dosificación apropiadas para dicha administración se pueden preparar mediante técnicas convencionales.
Administración parenteral
La administración parenteral es cualquier ruta de administración que no sea la ruta oral/enteral, mediante lo cual el agente bioactivo evita la degradación de primer paso en el hígado. Por consiguiente, la administración parenteral incluye cualquier inyección e infusión, por ejemplo, inyección en bolo o infusión continua, tal como administración intravenosa, administración intramuscular o administración subcutánea. Además, la administración parenteral incluye inhalaciones y administración tópica.
Por consiguiente, el ingrediente farmacéutico activo o la composición en una realización de la presente descripción se administra por la ruta tópica para atravesar cualquier membrana mucosa de un animal, p. ej., en la nariz, vagina, ojo, boca, tracto genital, pulmones, tracto gastrointestinal o recto, por ejemplo, la mucosa de la nariz o la boca y, por consiguiente, la administración parenteral también puede incluir la administración bucal, sublingual, nasal, rectal, vaginal e intraperitoneal, así como la administración pulmonar y bronquial por inhalación o instalación. En algunas realizaciones de la presente descripción, el agente bioactivo se administra por la ruta tópica para atravesar la piel.
En una realización de la presente descripción, se emplean las formas intravenosa, subcutánea e intramuscular de administración parenteral.
Tratamiento local
En una realización de la presente descripción, el ingrediente farmacéutico activo o la composición se usa como un tratamiento local, es decir, se introduce directamente en el sitio o sitios de acción. Por consiguiente, el ingrediente farmacéutico activo se puede aplicar en una realización directamente en la piel o la mucosa o se puede inyectar en el sitio de acción, por ejemplo, en el tejido enfermo o en una arteria terminal que conduce directamente al tejido enfermo.
Tratamiento de combinación
También es un aspecto de la presente descripción proporcionar un ingrediente farmacéutico activo seleccionado de cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo, sus estereoisómeros y las sales de adición de ácido del mismo (arimoclomol), para su uso en un método de tratamiento de un trastorno asociado a glucocerebrosidasa (GBA) distinto de la enfermedad de Gaucher (GD), en combinación con otras modalidades de tratamiento.
Por tanto, en una realización de la presente descripción, el ingrediente farmacéutico activo se administra a un individuo que lo necesita en combinación con al menos otra modalidad de tratamiento, tal como modalidades de tratamiento convencionales o conocidas para trastornos asociados a (GBA) que incluyen alfa-sinucleinopatías asociadas a GBA tal como la enfermedad de Parkinson (EP) asociada a GBA, la demencia con cuerpos de Lewi (DLB) asociada a GBA y la atrofia multisistémica (MSA) asociada a GBA.
La administración de más de una modalidad de tratamiento en combinación puede ocurrir de manera simultánea o secuencial. La administración simultánea puede ser dos compuestos comprendidos en la misma composición o comprendidos en composiciones separadas, o puede ser una composición y otra modalidad de tratamiento realizada esencialmente al mismo tiempo. La administración secuencial significa que las más de una modalidad de tratamiento se administran en diferentes puntos de tiempo, tal como la administración de una modalidad de tratamiento primero y la administración de la segunda modalidad de tratamiento posteriormente. El período de tiempo para administrar más de una modalidad de tratamiento secuencialmente puede ser determinado por un experto en la técnica para lograr el efecto óptimo y, en una realización de la presente descripción, puede estar entre 30 minutos y 72 horas.
Las modalidades de tratamiento en forma de compuestos químicos pueden administrarse juntas o por separado, cada una en su dosificación más efectiva. La administración de más de un compuesto puede tener un efecto sinérgico, reduciendo así eficazmente la dosificación requerida de cada fármaco.
También es un aspecto de la presente descripción proporcionar una composición que comprende, por separado o conjuntamente, i) un ingrediente farmacéutico activo seleccionado de cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo, sus estereoisómeros y las sales de adición de ácido del mismo (arimoclomol), y ii) otras modalidades de tratamiento, para su uso en el tratamiento de trastornos asociados a (GBA), incluyendo alfa sinucleinopatías asociadas a GBA tales como la enfermedad de Parkinson (EP) asociada a GBA, demencia con cuerpos de Lewi (DLB) asociada a GBA y atrofia multisistémica (MSA) asociada a GBA.
En una realización de la presente descripción, otras modalidades de tratamiento, o modalidades de tratamiento convencionales o conocidas, se denominan ingredientes activos adicionales.
En una realización de la presente descripción, el ingrediente farmacéutico activo seleccionado de cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo, sus estereoisómeros y las sales de adición de ácido del mismo (arimoclomol), se administra en combinación con y/o formulado como un producto de combinación, con uno o más ingredientes activos adicionales.
En una realización de la presente descripción, el ingrediente activo adicional se selecciona de uno o más ingredientes activos conocidos y/o empleados en el tratamiento de trastornos asociados a (GBA), incluyendo las alfasinucleinopatías asociadas a GBA, tales como la enfermedad de Parkinson (EP) asociada a GBA, la demencia con cuerpos de Lewi (DLB) asociada a GBA y la atrofia multisistémica (MSA) asociada a GBA.
En una realización de la presente descripción, el ingrediente activo adicional es un compuesto usado para el tratamiento de la enfermedad de Parkinson. En una realización de la presente descripción, dicho compuesto usado para el tratamiento de la enfermedad de Parkinson se selecciona del grupo que consiste en dopamina, L-DOPA, levodopa, agonistas del receptor de dopamina, inhibidores de carboxilasa tales como carbidopa o benserazida, antagonistas de NMDA tales como, por ejemplo, amatidina. (Symmetrel), inhibidores de la catecol-O-metil transferasa (COMT) tales como, por ejemplo, tolcapona y entacapona, inhibidores de MAO-B tales como, por ejemplo, selegilina y rasagilina, carbidopa-levodopa, anticolinérgicos y amantadina.
En una realización de la presente descripción, el ingrediente activo adicional es un compuesto usado para el tratamiento de la enfermedad de Gaucher. En una realización de la presente descripción, el ingrediente activo adicional se selecciona del grupo que consiste en terapias de reemplazo de enzimas, chaperonas alostéricas, chaperonas farmacológicas y terapias de reducción de sustrato. En una realización de la presente descripción, dicho ingrediente activo adicional se selecciona del grupo que consiste en miglustat (Zavesca), imiglucerasa (Cerezyme), eliglustat (Cerdelga), VPRIV, taliglucerasa alfa (Elelyso) y velaglurasa alfa.
Ejemplos
Ejemplo 1: respuesta dependiente de la dosis en heterocigotos Gaucher de Tipo II (genotipo de la enfermedad de Parkinson) - inducción de BiP y GBA
Materiales y métodos
Cultivo celular
Se cultivaron líneas celulares de fibroblastos humanos primarios en condiciones estándar de cultivo celular (37 °C y CO2 al 5 %) en DMEM suplementado con aminoácidos no esenciales (NEAA), Pen-Estrep al 1% y FCS al 12%. Se subcultivaron 1-2 veces/semana con una relación de división de 1:2 o 1:3. Las células se usaron para experimentos alrededor del subcultivo 16-26 donde no se observaron signos de senescencia replicativa (inspección visual).
Figure imgf000015_0001
T ransferencia Western
Las células se recogieron en PBS y se centrifugaron a 3.500 rpm durante 5 min a 4 °C. Los sedimentos celulares se lisaron en tampón de extracción 1X (Enzo Life Science) que contenía inhibidores de proteasa, se sonicaron y se aclararon mediante centrifugación a 13.000 rpm durante 10 min a 4 °C. La concentración de proteínas se midió por el ensayo BCA. Las muestras que contenían aprox. 10-20 |jg de proteína se diluyeron en tampón desnaturalizante de glicoproteínas (New England Biolabs) y se desnaturalizaron mediante incubación durante 10 min a 100 °C. Las muestras se incubaron con o sin EndoH (New England Biolabs) durante 1 h a 37 °C, se añadió tampón de muestra Laemmli y las muestras se sometieron a SDS-PAGE usando el sistema de gel TGX (Bio-Rad). Después de la transferencia a una membrana de nitrocelulosa (Trans-Blot Turbo, Bio-Rad), las membranas se tiñeron brevemente con Ponceau S, y posteriormente se bloquearon en leche desnatada al 5 % en PBS tween al 0,1 % (PBS-T). La incubación con anticuerpos primarios (dilución 1:500 a 1:2.000) se realizó en placas de vidrio recubiertas con parafilm toda la noche a 4 °C. Después de lavar en PBS-T, las membranas se incubaron 1 h con anticuerpo secundario diluido 1:10.000 en leche desnatada al 5 % en PBS-T. Las transferencias se revelaron usando el sustrato de duración extendida SuperSignal™ West Dura (Life Technologies) y se visualizaron usando un sistema G-box (Syngene).
Resultados
Aumento dependiente de la dosis inducido por arimoclomol en RE Hsp70 (BiP) en células primarias Se informa que el arimoclomol aumenta los niveles de expresión de proteínas de choque térmico, p. ej., proteína de choque térmico 70 (HSP70) (Kieran et al., Nature Medicine, 2004).
Para evaluar el efecto del arimoclomol en el nivel de expresión de RE Hsp70 (BiP) en células primarias, los fibroblastos humanos de un individuo con un alelo heterocigoto de GBA que contiene las mutaciones L444P,A456P,V460V en cis (portador, clínicamente no afectado con la enfermedad de Gaucher) se trataron con arimoclomol 0, 10, 50 o 200 pM durante 14 días. A continuación, las células se recogieron para el análisis por transferencia Western. Para el control se usó un lisado de fibroblastos humanos normales no tratados.
Nuestros resultados demuestran que el arimoclomol aumenta de manera dependiente de la dosis los niveles de expresión de BiP en una línea celular de fibroblastos humanos heterocigotos para el alelo complejo GBA L444P,A456P,V460V. Esto sugiere que el arimoclomol a través de la regulación al alza de BiP puede conducir a un plegamiento mejorado de GBA mutante retenido en el RE.
Aumento dependiente de la dosis inducido por arimoclomol en la cantidad de enzima GBA en células primarias
El efecto del arimoclomol sobre los niveles de la proteína GBA también se evaluó en la línea celular de fibroblastos humanos heterocigotos para el alelo complejo GBA L444P,A456P,V460V. En consonancia con una regulación al alza de la chaperona BiP del RE, se observa un aumento dependiente de la dosis en el nivel total de GBA en las células tratadas con arimoclomol.
Ejemplo 2: respuesta dependiente de la dosis sobre la actividad de GBA en homocigotos y heterocigotos Gaucher de Tipo II (GTII y genotipo con alto riesgo para la enfermedad de Parkinson).
Materiales y métodos
Cultivo celular
Se cultivaron líneas celulares de fibroblastos humanos primarios en condiciones estándar de cultivo celular (37 °C y CO2 al 5 %) en DMEM suplementado con aminoácidos no esenciales (NEAA), Pen-Estrep al 1 % y FCS al 12 %. Se subcultivaron 1-2 veces/semana con una relación de división de 1:2 o 1:3. Las células se usaron para experimentos alrededor del subcultivo 16-26 donde no se observaron signos de senescencia replicativa (inspección visual).
Ensayo de actividad de GBA
La actividad de GBA se midió usando el ensayo de GBA de "células intactas" usando el sustrato 4-Metilumbeliferil beta-D-glucopiranósido (4-MUG) (Mu et al, Cell, 2008). Brevemente, se sembraron fibroblastos en placas de 12 pocillos y se trataron en triplicado biológico con las concentraciones indicadas de arimoclomol durante 4 semanas. El medio se repuso con compuesto nuevo cada 2-3 días y las células se dividieron dos veces durante el experimento. Después de 4 semanas de tratamiento, las células se transfirieron a placas de 96 pocillos y se midió la actividad de GBA usando 4-MUG como sustrato a pH 4,0. El fluoróforo 4-MU liberado se cuantificó como unidades de fluorescencia (FLU) y se normalizó respecto a la densidad celular usando tinción con cristal de violeta de una placa paralela. Los datos normalizados se muestran como unidades arbitrarias (media ± SD).
Resultados
El efecto del arimoclomol sobre la actividad de GBA en células primarias con mutaciones de GBA se evaluó en fibroblastos de un paciente con Gaucher de Tipo II con el genotipo L444P/L444P,A456P,V460V. Observamos que el tratamiento con arimoclomol aumentó la actividad de GBA de una manera dependiente de la dosis. Notablemente, el aumento en la actividad de GBA inducido por arimoclomol 50 pM corresponde al nivel de actividad de las células heterocigotas para el alelo L444P,A456P,V460V (marcado por una línea gris en la Figura 3) de un individuo no sintomático.
Es importante destacar que el arimoclomol también aumenta la actividad de GBA en fibroblastos primarios que son heterocigotos para el alelo L444P,A456P,V460V. Este resultado demuestra que la actividad de GBA puede aumentar incluso en células de heterocigotos GBA mutantes (portadores).
Ejemplo 3: respuesta dependiente de la dosis sobre la actividad de GBA en homocigotos Gaucher de Tipo I, Tipo II y Tipo II
Materiales y métodos
Cultivo celular
Se cultivaron líneas celulares de fibroblastos humanos primarios en condiciones estándar de cultivo celular (37 °C y CO2 al 5 %) en DMEM suplementado con aminoácidos no esenciales (NEAA), Pen-Estrep al 1 % y FCS al 12 %. Se subcultivaron 1-2 veces/semana con una relación de división de 1:2 o 1:3. Las células se usaron para experimentos alrededor del subcultivo 16-26 donde no se observaron signos de senescencia replicativa (inspección visual).
Figure imgf000017_0001
Ensayo de actividad de GBA
La actividad de GBA se midió usando el ensayo de GBA de "células intactas" usando el sustrato 4-Metilumbeliferil beta-D-glucopiranósido (4-MUG) (Mu et al, Cell, 2008). Brevemente, se sembraron fibroblastos en placas de 96 pocillos y se trataron en triplicado biológico con las concentraciones indicadas de arimoclomol durante 5 días. El medio se repuso con compuesto nuevo cada 2-3 días. La actividad de GBA se midió usando 4-MUG como sustrato a pH 4,0. El fluoróforo 4-MU liberado se cuantificó como unidades de fluorescencia (FLU) y se normalizó respecto a la densidad celular usando tinción con cristal de violeta de una placa paralela. Los datos normalizados se muestran como veces de cambio en relación con las células de control tratadas de forma simulada (media ± SD).
Resultados
El efecto del arimoclomol sobre la actividad de GBA en células primarias con mutaciones adicionales de GBA se evaluó mediante el tratamiento de células del genotipo indicado con arimoclomol. Nuestros datos muestran que el arimoclomol aumenta de manera dependiente de la dosis la actividad de GBA en dos líneas celulares de GD de tipo I: N370S/V394L y N370S/1-BP ins 84G. Es importante destacar que, dado que el 1-BP ins 84G se considera un alelo nulo, estos resultados demuestran que el arimoclomol aumenta la actividad de la mutación N370S.
También se observa un efecto dependiente de la dosis de arimoclomol para la actividad de GBA en células primarias de pacientes con GD de tipo N/III que son homocigotos para L444P (L444P/L444P) o heterocigotos compuestos para las mutaciones de GBA G325R/C342G o P415R/L444P. Se encuentra un aumento menos pronunciado de la actividad de GBA en células GD de tipo II tratadas con arimoclomol homocigotas para el alelo E326K,L444P.
Ejemplo 4: respuesta dependiente de la dosis sobre la actividad de GBA en células primarias de un paciente con enfermedad de Parkinson con un alelo de GBA heterocigoto que contiene la mutación N370S
Materiales y métodos
Cultivo celular
La línea celular de fibroblastos humanos primarios se cultivó en condiciones estándar de cultivo celular (37 °C y CO2 al 5 %) en DMEM suplementado con aminoácidos no esenciales (NEAA), Pen-Estrep al 1 % y FCS al 12 %. Las células se subcultivaron 1 vez/semana con una relación de división de 1:2. Las células se usaron para experimentos alrededor del subcultivo 16-26 donde no se observaron signos de senescencia replicativa (inspección visual).
Figure imgf000017_0002
Ensayo de actividad de GBA
La actividad de GBA se midió usando el ensayo de GBA de "células intactas" usando el sustrato 4-Metilumbeliferil beta-D-glucopiranósido (4-MUG) (Mu et al, Cell, 2008). Brevemente, se sembraron fibroblastos en placas de 96 pocillos y se trataron en triplicado biológico con las concentraciones indicadas de arimoclomol durante 5 días. El medio se repuso con compuesto nuevo cada 2-3 días. La actividad de GBA se midió usando 4-MUG como sustrato a pH 4,0. El fluoróforo 4-MU liberado se cuantificó como unidades de fluorescencia (FLU) y se normalizó respecto a la densidad celular usando tinción con cristal de violeta de una placa paralela. Los datos normalizados se muestran como veces de cambio en relación con las células de control tratadas de forma simulada (media ± SD).
Resultados
Para investigar el efecto del arimoclomol sobre la mutación N370S en la enfermedad de Parkinson, se trataron células primarias de un paciente con EP con mutación N370S con arimoclomol. Nuestros datos muestran que el arimoclomol aumenta de forma dependiente de la dosis la actividad de GBA de N370S en las células de un paciente con EP. Ejemplo 5: respuesta dependiente de la dosis sobre la actividad de GBA en células primarias de individuos sanos sin mutaciones en GBA (+/+)
Materiales y métodos
Cultivo celular
Se cultivaron líneas celulares de fibroblastos humanos primarios en condiciones estándar de cultivo celular (37 °C y CO2 al 5 %) en DMEM suplementado con aminoácidos no esenciales (NEAA), Pen-Estrep al 1 % y FCS al 12 %. Se subcultivaron 1-2 veces/semana con una relación de división de 1:2 o 1:3. Las células se usaron para experimentos alrededor del subcultivo 16-26 donde no se observaron signos de senescencia replicativa (inspección visual).
Figure imgf000018_0001
Ensayo de actividad de GBA
La actividad de GBA se midió usando el ensayo de GBA de "células intactas" usando el sustrato 4-Metilumbeliferil beta-D-glucopiranósido (4-MUG) (Mu et al, Cell, 2008). Brevemente, se sembraron fibroblastos en placas de 96 pocillos y se trataron en triplicado biológico con las concentraciones indicadas de arimoclomol durante 5 días. El medio se repuso con compuesto nuevo cada 2-3 días. La actividad de GBA se midió usando 4-MUG como sustrato a pH 4,0. El fluoróforo 4-MU liberado se cuantificó como unidades de fluorescencia (FLU) y se normalizó respecto a la densidad celular usando tinción con cristal de violeta de una placa paralela. Los datos normalizados se muestran como veces de cambio en relación con las células de control tratadas de forma simulada (media ± SD).
Resultados
Para investigar el efecto del arimoclomol en la proteína GBA WT, se trataron células primarias de individuos sanos sin mutaciones en GBA (+/+) con arimoclomol. Observamos que el tratamiento con arimoclomol aumentó la actividad de GBA WT de una manera dependiente de la dosis en las tres líneas celulares, aunque con una magnitud diferente. Ejemplo 6: aumento inducido por arimoclomol en el marcaje de sonda basado en actividad de GBA activo en la enfermedad de Gaucher TI/TM/TmI
Materiales y métodos
Cultivo celular
Se cultivaron líneas celulares de fibroblastos humanos primarios en condiciones estándar de cultivo celular (37 ° C y CO2 al 5 %) en DMEM suplementado con aminoácidos no esenciales (NEAA), Pen-Estrep al 1 % y FCS al 12 %. Se subcultivaron 1-2 veces/semana con una relación de división de 1:2 o 1:3. Las células se usaron para experimentos alrededor del subcultivo 16-26 donde no se observaron signos de senescencia replicativa (inspección visual).
Figure imgf000018_0002
Marcaje de GBA con ME569
La GBA activa se puede marcar selectivamente con la sonda basada en actividad fluorescente (ABP) ME569 (Witte et al, 2010). Brevemente, se sembraron fibroblastos en placas y se trataron en duplicados biológicos con las concentraciones indicadas de arimoclomol durante 5 días. El medio se repuso con compuesto nuevo cada 2-3 días. Las células se recogieron en PBS, se extrajeron las proteínas y se determinaron las concentraciones usando el ensayo BCA. Se incubó la misma cantidad de proteína total con ME569 durante 30 minutos a 37 °C. Se añadió tampón de carga, las muestras se incubaron durante 5 min a 98 °C y luego se sometieron a SDS-PAGE usando el sistema de gel TGX (Bio-Rad). Después de la electroforesis en gel, se detectó la fluorescencia usando LED rojas/filtro 705M (G-box, Syngene). La cantidad de GBA marcada se cuantificó usando el software GeneTools v.4.03.01.0 de Syngene. Los datos normalizados se muestran como veces de cambio en relación con las células de control tratadas de forma simulada (media ± SEM, n=3-4).
Resultados
Se evaluó el efecto del arimoclomol sobre la cantidad de GBA marcada con ABP fluorescente en células primarias de pacientes con GD del genotipo indicado. Nuestros datos muestran que el arimoclomol aumenta de manera dependiente de la dosis el marcaje de GBA en la línea celular GD TI (N370S/V394L) y la línea celular GD TII (G325R/C342G). Solo se evaluó la dosis alta de arimoclomol en la línea celular GD TII (homocigotos para L444P) y también en esta línea celular, el arimoclomol aumenta la cantidad de GBA que puede marcarse con ABP fluorescente.
Tomados en conjunto, estos datos muestran que el arimoclomol aumenta la cantidad de GBA mutante activa en las células primarias de los tres tipos de enfermedad de Gaucher (TI tipo 1, TII tipo II y TIII tipo III).
Ejemplo 7: respuesta dependiente de la dosis en Gaucher Tipo I - inducción de BiP y GBA
Materiales y métodos
Cultivo celular
Se cultivaron líneas celulares de fibroblastos humanos primarios en condiciones estándar de cultivo celular (37 °C y CO2 al 5 %) en DMEM suplementado con aminoácidos no esenciales (NEAA), Pen-Estrep al 1 % y FCS al 12 %. Se subcultivaron 1-2 veces/semana con una relación de división de 1:2 o 1:3. Las células se usaron para experimentos alrededor del subcultivo 16-26 donde no se observaron signos de senescencia replicativa (inspección visual).
Figure imgf000019_0001
T ransferencia Western
Las células se recogieron en PBS y se centrifugaron a 3.500 rpm durante 5 min a 4 °C. Los sedimentos celulares se lisaron en tampón de lisis (Enzo Life Science) que contenía inhibidores de proteasa, se sonicaron y se aclararon mediante centrifugación a 13.000 rpm durante 10 min a 4 °C. La concentración de proteínas se midió mediante el ensayo BCA. Las muestras que contenían aprox. 10 - 20 |jg de proteína se diluyeron en tampón desnaturalizante de glicoproteínas (New England Biolabs) y se desnaturalizaron mediante incubación durante 10 min a 100 °C. Las muestras se incubaron con o sin EndoH (New England Biolabs) durante 1 h a 37 °C, se añadió tampón de muestra Laemmli y las muestras se sometieron a SDS-PAGE usando el sistema de gel TGX (Bio-Rad). Después de la transferencia a una membrana de nitrocelulosa (Trans-Blot Turbo, Bio-Rad), las membranas se tiñeron brevemente con Ponceau S, y posteriormente se bloquearon en leche desnatada al 5 % en PBS tween al 0,1 % (PBS-T). La incubación con anticuerpos primarios (dilución 1:500 a 1:2.000) se realizó en placas de vidrio recubiertas con parafilm toda la noche a 4 °C. Después de lavar en PBS-T, las membranas se incubaron 1 h con anticuerpo secundario diluido 1:10.000 en leche desnatada al 5 % en PBS-T. Las transferencias se revelaron usando el sustrato de duración extendida SuperSignal™ West Dura (Life Technologies) y se visualizaron usando un sistema G-box (Syngene).
Resultados
Aumento dependiente de la dosis inducido por arimoclomol en RE Hsp70 (BiP) en células primarias de GD tipo I
Se informa que el arimoclomol aumenta los niveles de expresión de las proteínas de choque térmico, p. ej., la proteína de choque térmico 70 (HSP70) (Kieran et al., Nature Medicine, 2004). Para evaluar el efecto del arimoclomol en el nivel de expresión de RE Hsp70 (BiP) en células primarias, se trataron fibroblastos humanos de pacientes con GD TI con arimoclomol 0, 25, 100, 200 o 400 jM (N370S/V394L) o arimoclomol 0, 100, 200 o 400 jM (N370S/1-BP ins 84G) durante 5 días. A continuación, las células se recogieron para el análisis por transferencia Western.
Nuestros resultados demuestran que el arimoclomol aumenta de manera dependiente de la dosis los niveles de expresión de BiP en líneas celulares de fibroblastos humanos de individuos con Gaucher de tipo I. Esto sugiere que el arimoclomol a través de la regulación al alza de BiP puede conducir a un plegamiento mejorado de GBA mutante retenida en el RE.
Aumento dependiente de la dosis inducido por arimoclomol en la cantidad de enzima GBA en células primarias de GD tipo I
El efecto del arimoclomol sobre los niveles de la proteína GBA también se evaluó en la línea celular de fibroblastos humanos de un paciente con Gaucher tipo I con el genotipo N370S/1-BP ins 84G. En consonancia con una regulación al alza de la chaperona BiP de RE, se observa un aumento dependiente de la dosis en el nivel total de GBA en las células tratadas con arimoclomol de este individuo. Además, un aumento en la fracción resistente a EndoH muestra que el arimoclomol aumenta la cantidad de GBA procesada/madura en la célula.
Ejemplo 8: respuesta dependiente de la dosis en Gaucher Tipo II - inducción de BiP y GBA
Materiales y métodos
Cultivo celular
Se cultivaron líneas celulares de fibroblastos humanos primarios en condiciones estándar de cultivo celular (37 °C y CO2 al 5 %) en DMEM suplementado con aminoácidos no esenciales (NEAA), Pen-Estrep al 1 % y FCS al 12 %. Se subcultivaron 1-2 veces/semana con una relación de división de 1:2 o 1:3. Las células se usaron para experimentos alrededor del subcultivo 16-26 donde no se observaron signos de senescencia replicativa (inspección visual).
Figure imgf000020_0001
T ransferencia Western
Las células se recogieron en PBS y se centrifugaron a 3.500 rpm durante 5 min a 4 °C. Los sedimentos celulares se lisaron en tampón de lisis (Enzo Life Science) que contenía inhibidores de proteasa, se sonicaron y se aclararon mediante centrifugación a 13.000 rpm durante 10 min a 4 °C. La concentración de proteínas se midió mediante el ensayo BCA. Las muestras que contenían aprox. 10-20 |jg de proteína se diluyeron en tampón desnaturalizante de glicoproteínas (New England Biolabs) y se desnaturalizaron mediante incubación durante 10 min a 100 °C. Las muestras se incubaron con o sin EndoH (New England Biolabs) durante 1 h a 37 °C, se añadió tampón de muestra Laemmli y las muestras se sometieron a SDS-PAGE usando el sistema de gel TGX (Bio-Rad). Después de la transferencia a una membrana de nitrocelulosa (Trans-Blot Turbo, Bio-Rad), las membranas se tiñeron brevemente con Ponceau S, y posteriormente se bloquearon en leche desnatada al 5 % en PBS tween al 0,1 % (PBS-T). La incubación con anticuerpos primarios (dilución 1:500 a 1:2.000) se realizó en placas de vidrio recubiertas con parafilm toda la noche a 4 °C. Después de lavar en PBS-T, las membranas se incubaron 1 h con anticuerpo secundario diluido 1:10.000 en leche desnatada al 5 % en PBS-T. Las transferencias se revelaron usando el sustrato de duración extendida SuperSignal™ West Dura (Life Technologies) y se visualizaron usando un sistema G-box (Syngene).
Resultados
Aumento dependiente de la dosis inducido por arimoclomol en RE Hsp70 (BiP) en células primarias de GD de tipo II
Para evaluar el efecto del arimoclomol en el nivel de expresión de RE Hsp70 (BiP) en células primarias, se trataron fibroblastos humanos de pacientes con enfermedad de Gaucher tipo II con las concentraciones indicadas de arimoclomol durante 5 días. A continuación, las células se recogieron para el análisis por transferencia Western.
Nuestros resultados demuestran que el arimoclomol aumenta de manera dependiente de la dosis los niveles de expresión de BiP en líneas celulares de fibroblastos humanos de individuos con Gd TII con los genotipos L444P/P415R o G325R/C342G. Esto sugiere que el arimoclomol a través de la regulación al alza de BiP puede conducir a un plegamiento mejorado de GBA mutante retenida en RE en células de GD TII.
Aumento dependiente de la dosis inducido por arimoclomol en la cantidad de enzima GBA en células primarias de GD TII
El efecto del arimoclomol sobre los niveles de proteína y la maduración de GBA también se evaluó en líneas celulares primarias de GD TII. En consonancia con una regulación al alza de la chaperona BiP del RE, se observa un aumento dependiente de la dosis en el nivel total de GBA en las células tratadas con arimoclomol de estos individuos. Además, un aumento en la fracción resistente a EndoH muestra que el arimoclomol aumenta la cantidad de GBA madura (pos­ RE) en las células de GD tipo II.
Ejemplo 9: respuesta dependiente de la dosis en Gaucher Tipo III - inducción de BiP y GBA
Materiales y métodos
Cultivo celular
Se cultivaron células de fibroblastos humanos primarios en condiciones estándar de cultivo celular (37 °C y CO2 al 5 %) en DMEM suplementado con aminoácidos no esenciales (NEAA), Pen-Estrep al 1 % y FCS al 12 %. Se subcultivaron 1-2 veces/semana con una relación de división de 1:2 o 1:3. Las células se usaron para experimentos alrededor del subcultivo 16-26 donde no se observaron signos de senescencia replicativa (inspección visual).
Figure imgf000021_0001
T ransferencia Western
Las células se recogieron en PBS y se centrifugaron a 3.500 rpm durante 5 min a 4 °C. Los sedimentos celulares se lisaron en tampón de lisis (Enzo Life Science) que contenía inhibidores de proteasa, se sonicaron y se aclararon mediante centrifugación a 13.000 rpm durante 10 min a 4 °C. La concentración de proteínas se midió mediante el ensayo BCA. Las muestras que contenían aprox. 10-20 |jg de proteína se diluyeron en tampón desnaturalizante de glicoproteínas (New England Biolabs) y se desnaturalizaron mediante incubación durante 10 min a 100 °C. Las muestras se incubaron con o sin EndoH (New England Biolabs) durante 1 h a 37 °C, se añadió tampón de muestra Laemmli y las muestras se sometieron a SDS-PAGE usando el sistema de gel TGX (Bio-Rad). Después de la transferencia a una membrana de nitrocelulosa (Trans-Blot Turbo, Bio-Rad), las membranas se tiñeron brevemente con Ponceau S, y posteriormente se bloquearon en leche desnatada al 5 % en PBS tween al 0,1 % (PBS-T). La incubación con anticuerpos primarios (dilución 1:500 a 1:2.000) se realizó en placas de vidrio recubiertas con parafilm toda la noche a 4 °C. Después de lavar en PBS-T, las membranas se incubaron 1 h con anticuerpo secundario diluido 1:10.000 en leche desnatada al 5 % en PBS-T. Las transferencias se revelaron usando el sustrato de duración extendida SuperSignal™ West Dura (Life Technologies) y se visualizaron usando un sistema G-box (Syngene).
Resultados
Aumento dependiente de la dosis inducido por arimoclomol en RE Hsp70 (BiP) en células primarias de GD TIII
Para evaluar el efecto del arimoclomol en el nivel de expresión de RR Hsp70 (BiP) en células primarias, se trataron fibroblastos humanos de un individuo con enfermedad de Gaucher tipo III (L444P/L444P) con las concentraciones indicadas de arimoclomol durante 5 días. A continuación, las células se recogieron para el análisis por transferencia Western.
Nuestros resultados demuestran que el arimoclomol aumenta de forma dependiente de la dosis los niveles de expresión de BiP en esta línea celular homocigota para L444P. Esto sugiere que el arimoclomol a través de la regulación al alza de BiP puede conducir a un plegado mejorado de GBA mutante retenida en RE.
Aumento dependiente de la dosis inducido por arimoclomol en la cantidad de la enzima GBA en células primarias de GD TIII
El efecto del arimoclomol sobre los niveles y la maduración de la proteína GBA también se evaluó en la línea celular primaria de GD TIII L444P/L444P. En consonancia con una regulación al alza de la chaperona BiP del RE, se observa un aumento dependiente de la dosis en el nivel total de GBA en las células tratadas con arimoclomol. Además, un aumento en la fracción de GBA resistente a EndoH muestra que el arimoclomol aumenta la cantidad de GBA madura en las células de GD TIII.
Tomados en conjunto, estos resultados muestran que la actividad de GBA aumenta por el arimoclomol probablemente debido a que la GBA más madura alcanza los lisosomas.
Ejemplo 10: respuesta dependiente de la dosis en la expresión de BiP en la enfermedad de Parkinson deficiente en GBA
Materiales y métodos
Cultivo celular
Se cultivaron células de fibroblastos humanos primarios en condiciones estándar de cultivo celular (37 °C y CO2 al 5 %) en DMEM suplementado con aminoácidos no esenciales (NEAA), Pen-Estrep al 1 % y FCS al 12 %. Se subcultivaron 1-2 veces/semana con una relación de división de 1:2 o 1:3. Las células se usaron para experimentos alrededor del subcultivo 16-26 donde no se observaron signos de senescencia replicativa (inspección visual).
Figure imgf000022_0001
T ransferencia Western
Las células se recogieron en PBS y se centrifugaron a 3.500 rpm durante 5 min a 4 °C. Los sedimentos celulares se lisaron en tampón de lisis (Enzo Life Science) que contenía inhibidores de proteasa, se sonicaron y se aclararon mediante centrifugación a 13.000 rpm durante 10 min a 4 °C. La concentración de proteína se midió mediante el ensayo BCA y las muestras se sometieron a SDS-PAGE usando el sistema de gel TGX (Bio-Rad). Después de la transferencia a una membrana de nitrocelulosa (Trans-Blot Turbo, Bio-Rad), las membranas se tiñeron brevemente con Ponceau S, y posteriormente se bloquearon en leche desnatada al 5 % en PBS tween al 0,1 % (PBS-T). La incubación con anticuerpos primarios (dilución 1:500 a 1:2.000) se realizó en placas de vidrio recubiertas con parafilm toda la noche a 4 °C. Después de lavar en PBS-T, las membranas se incubaron 1 h con anticuerpo secundario diluido 1:10.000 en leche desnatada al 5 % en PBS-T. Las transferencias se revelaron usando el sustrato de duración extendida SuperSignal™ West Dura (Life Technologies) y se visualizaron usando un sistema G-box (Syngene).
Resultados
Aumento dependiente de la dosis inducido por arimoclomol en RE Hsp70 (BiP) en células primarias de EP-GBA
Para evaluar el efecto del arimoclomol en el nivel de expresión de RE Hsp70 (BiP) en células primarias de un individuo con enfermedad de Parkinson deficiente en GBA (EP-GBA), se trataron fibroblastos humanos de un individuo con EP-GBA (N370S/N370S) con las concentraciones indicadas de arimoclomol durante 5 días. A continuación, las células se recogieron para el análisis por transferencia Western.
Nuestros resultados demuestran que el arimoclomol aumenta de manera dependiente de la dosis los niveles de expresión de BiP en células primarias de un individuo con EP-GBA (N370S/N370S). Esto sugiere que el arimoclomol a través de la regulación al alza de BiP conduce a un plegamiento mejorado de GBA mutante retenida en RE.
Ejemplo 11: efecto del arimoclomol sobre la actividad de GBA en células primarias de tipo neuronal de individuos con GDTI y GDTIII
Materiales y métodos
Cultivo celular
Se aislaron células madre adultas multipotentes (MASC) humanas de individuos con GD a partir de biopsias de piel. El genotipo de las MASC se muestra a continuación. Las células de indujeron para diferenciarse a lo largo de un destino neuronal como se describe en Bergamin et al. Orphanet Journal of Rare Diseases 2013. El inmunofenotipo de superficie de las células madre se analizó mediante FACS. La expresión de marcadores neuronales y de células madre se evaluó mediante inmunofluorescencia.
Figure imgf000022_0002
El asterisco denota un desplazamiento de marco y un codón de parada consiguiente de novo
Las MASC se indujeron para diferenciarse a lo largo del linaje neuronal en el Día 0. En el Día 1, las células se trataron con simulacro (PBS) o arimoclomol 400 pM. El tratamiento persistió durante la diferenciación durante un total de 9 días. En el Día 9, se evaluó la diferenciación mediante inmunofluorescencia de marcadores neuronales. La actividad de GBA se midió usando el sustrato fluorogénico 4-MUG.
Resultados
El arimoclomol no afecta la diferenciación neuronal de las células madre adultas multipotentes humanas derivadas de la piel de los individuos con GD TI y GDTIII
Para evaluar el efecto del arimoclomol en la diferenciación neuronal, las MASC de los individuos con GD se indujeron para diferenciarse mientras se trataban con simulacro o arimoclomol. Nuestros resultados muestran que la expresión de los marcadores neuronales Tubulina beta 3 y NeuN no se vio afectada por el arimoclomol.
Aumento inducido por arimoclomol en la actividad de GBA en neuronas de individuos con GD TI y GDTIII Encontramos que el arimoclomol aumenta la actividad de GBA mutante en neuronas de un individuo con GD tipo I (N370S/Y133*) y en tres individuos con GD tipo III (F213I/L444P, L444P/L444P o IVS2+1G>A/N188S).
Tomados en conjunto, nuestros resultados demuestran que el arimoclomol aumenta la actividad de GBA mutante en neuronas de individuos con GD TI y GD TIII sin afectar la diferenciación neuronal.
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Claims (15)

REIVINDICACIONES
1. Un ingrediente farmacéutico activo seleccionado de cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo, sus estereoisómeros y las sales de adición de ácido del mismo, para su uso en un método de tratamiento de la enfermedad de Parkinson (EP) asociada a glucocerebrosidasa (GBA) o parkinsonismo asociado a GBA.
2. El ingrediente farmacéutico activo para su uso según la reivindicación 1 en un método de tratamiento de la enfermedad de Parkinson asociada a GBA.
3. El ingrediente farmacéutico activo para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde dicha enfermedad de Parkinson o parkinsonismo asociado a GBA está asociado con niveles reducidos de la enzima GBA y/o actividad reducida de la enzima GBA.
4. El ingrediente farmacéutico activo para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde dicha enfermedad de Parkinson o parkinsonismo asociado a GBA está asociado con una o más mutaciones individuales en el gen de GBA.
5. El ingrediente farmacéutico activo para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde dicha enfermedad de Parkinson o parkinsonismo asociado a GBA está asociado con una o más mutaciones heterocigotas en el gen de GBA.
6. El ingrediente farmacéutico activo para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el individuo con enfermedad de Parkinson o parkinsonismo asociado a GBA permanece clínicamente no afectado por la enfermedad de Gaucher.
7. El ingrediente farmacéutico activo para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde dichas una o más mutaciones individuales en el gen de GBA son a) leves (asociadas con GD tipo I) o b) graves (asociadas con GD tipo II y III).
8. El ingrediente farmacéutico activo para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores en donde dicha mutación en el gen de GBA se selecciona del grupo que consiste en L444P, D409H, D409V, E235A, E340A, E326K, N370S, N370S/1-BP ins 84G, V394L, A456P, V460V, C342G, G325R, P415R, Y133*, F213I, N188S y IVS2+1G>A/N188S.
9. El ingrediente farmacéutico activo para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde dicha enfermedad de Parkinson asociada a GBA está asociada con una o más mutaciones homocigotas o heterocigotas compuestas en el gen de GBA.
10. El ingrediente farmacéutico activo para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde dicho individuo con enfermedad de Parkinson o parkinsonismo asociado a GBA es un heterocigoto L444P,A456P,V460V.
11. El ingrediente farmacéutico activo para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde dicho individuo con enfermedad de Parkinson o parkinsonismo asociado a GBA es:
a) un portador de la mutación en GBA, tal como un portador obligado, tal como un portador que no está clínicamente afectado por la enfermedad de Gaucher; y/o
b) un progenitor o hermano clínicamente no afectado de un paciente con la enfermedad de Gaucher.
12. El ingrediente farmacéutico activo para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde dicha enfermedad de Parkinson o parkinsonismo asociado a GBA está asociado con una actividad y/o niveles reducidos de la enzima GBA y dicho gen de GBA es de tipo salvaje, y la reducción en la actividad de GBA se debe a la supresión de la actividad de la proteína o a la represión de la transcripción o traducción del gen/proteína, o es idiopático.
13. El ingrediente farmacéutico activo para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde dicho ingrediente farmacéutico activo es:
a) el racemato del cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo;
b) un estereoisómero ópticamente activo del cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo;
c) un enantiómero del cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo;
d) seleccionado del grupo que consiste en: cloruro de (+)-R-N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo y cloruro de (-)-(S)-N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo;
e) una sal de adición de ácido del cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo; f) seleccionado del grupo que consiste en: citrato del cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo, y maleato del cloruro de N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo; o g) seleccionado del grupo que consiste en: citrato del cloruro de (+)-R-N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo, citrato del cloruro de (-)-S-W-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo, maleato del cloruro de (+)-R-N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo y maleato del cloruro de (-)-S-W-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo.
14. El ingrediente farmacéutico activo para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde dicho ingrediente farmacéutico activo es citrato del cloruro de (+)-R-N-[2-hidroxi-3-(1-piperidinil)-propoxi]-piridina-1-óxido-3-carboximidoílo.
15. El ingrediente farmacéutico activo para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde dicho tratamiento es profiláctico, curativo o de mejora.
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