ES2791524T3 - Fenilacetato de L-ornitina y métodos de elaboración del mismo - Google Patents

Abstract

Una composición que comprende una forma cristalina de fenilacetato de L-ornitina, en donde dicha forma cristalina muestra un patrón de difracción de rayos X de polvo que comprende al menos tres picos característicos, en donde dichos picos característicos se seleccionan del grupo que consiste en 4,9° ± 0,2° 2θ, 13,2° ± 0,2° 2θ, 17,4° ± 0,2° 2θ, 20,8° ± 0,2° 2θ y 24,4° ± 0,2° 2θ.

Description

DESCRIPCIÓN

Fenilacetato de L-ornitina y métodos de elaboración del mismo

Antecedentes

Campo

La presente solicitud se refiere a los campos de la química farmacéutica, bioquímica y medicina. En particular, se refiere a sales de fenilacetato de L-ornitina y a métodos para fabricar y usar las mismas.

Descripción

La hiperamonemia es un sello distintivo de la enfermedad hepática y se caracteriza por un exceso de amoníaco en el torrente sanguíneo. La encefalopatía hepática es una consecuencia clínica primaria de la hiperamonemia progresiva y es un síndrome neuropsiquiátrico complejo, que puede complicar la insuficiencia hepática aguda o crónica. Se caracteriza por cambios en el estado mental que incluyen una amplia gama de síntomas neuropsiquiátricos que van desde signos menores de alteración de la función cerebral hasta síntomas psiquiátricos y/o neurológicos, o incluso coma profundo. La acumulación de amoníaco no metabolizado se ha considerado como el principal factor involucrado en la patogénesis de la encefalopatía hepática, pero pueden estar asociados mecanismos adicionales.

El monohidrocloruro de L-ornitina y otras sales de L-ornitina están disponibles para su uso en el tratamiento de la hiperamonemia y la encefalopatía hepática. Por ejemplo, la Publicación de Estados Unidos Núm. 2008/0119554 describe composiciones de L-ornitina y fenilacetato para el tratamiento de la encefalopatía hepática. La L-ornitina se ha preparado por métodos de conversión enzimática. Por ejemplo, las Patentes de Estados Unidos Núm. 5.405.761 y 5.591.613 describen la conversión enzimática de arginina para formar sales de L-ornitina. El fenilacetato de sodio está disponible comercialmente y también está disponible como una solución inyectable para el tratamiento de la hiperamonemia aguda. La solución inyectable se comercializa como AMMONUL.

Aunque las formas salinas pueden mostrar mejores propiedades de degradación, ciertas sales, particularmente sales de sodio o cloruro, pueden no ser deseables cuando se tratan pacientes que tienen enfermedades asociadas con la enfermedad hepática, tales como la encefalopatía hepática. Por ejemplo, una alta ingesta de sodio puede ser peligrosa para pacientes cirróticos propensos a la ascitis, la sobrecarga de líquidos y los desequilibrios electrolíticos. Del mismo modo, ciertas sales son difíciles de administrar por vía intravenosa debido a un aumento de la presión osmótica, es decir, la solución es hipertónica. Las altas concentraciones de exceso de sal pueden requerir la dilución de grandes volúmenes de solución para la administración intravenosa que, a su vez, conduce a una sobrecarga excesiva de líquido. En consecuencia, existe la necesidad de una preparación de sales de L-ornitina y fenilacetato que sea favorable para el tratamiento de la encefalopatía hepática u otras afecciones en las que prevalecen la sobrecarga de líquidos y el desequilibrio electrolítico.

MX PA03009902 describe la obtención de fenilacetato de L-ornitina haciendo reaccionar L-ornitina con ácido fenilacético en etanol, enfriando y precipitando a continuación el fenilacetato de L-ornitina formado. El fenilacetato de L-ornitina en MX PA03009902 tiene un punto de fusión de 183-184°C.

Compendio

En la presente memoria se describe una composición que comprende una forma cristalina de fenilacetato de L-ornitina.

La presente invención proporciona una composición que comprende una forma cristalina de fenilacetato de L-ornitina, en donde dicha forma cristalina muestra un patrón de difracción de rayos X de polvo que comprende al menos tres picos característicos, en donde dicho pico característico se selecciona del grupo que consiste en aproximadamente 4,9° ± 0,2°, 13,2° ± 0,2°, 17,4° ± 0,2°, 20,8° ± 0,2° y 24,4° ± 0,2° 20. En algunas realizaciones, la forma cristalina muestra un patrón de difracción de rayos X de polvo que comprende picos característicos a aproximadamente 4,9° ± 0,2°, 13,2° ± 0,2°, 17,4° ± 0,2°, 20,8° ± 0,2° y 24,4° ± 0,2° 20 .

Algunas realizaciones tienen la forma cristalina que comprende moléculas de agua y/o etanol. En algunas realizaciones, la forma cristalina comprende aproximadamente 11% en peso de dichas moléculas como se determina por análisis termogravimétrico. En algunas realizaciones, la forma cristalina se caracteriza por calorimetría diferencial de barrido que comprende una endoterma a aproximadamente 35°C. En algunas realizaciones, la forma cristalina tiene un punto de fusión a aproximadamente 203°C.

Algunas realizaciones tienen la forma cristalina que muestra un análisis cristalográfico de rayos X de cristal único con parámetros de cristal aproximadamente iguales a los siguientes: dimensiones de la celda unitaria: a = 5,3652(4) A, b = 7,7136(6) A, c = 20,9602(18) A, a = 90°, p = 94,986(6)°, ^y = 90°; Sistema de cristal: Monoclínico; y Grupo Espacial: P2i. En algunas realizaciones, la forma cristalina está representada por la fórmula [C5H13NO2HC8H7O2POH.H2O.

Algunas realizaciones descritas en la presente memoria tienen una composición que comprende: al menos aproximadamente 50% en peso de una forma cristalina de sal de fenilacetato de L-ornitina y al menos aproximadamente 0,01% en peso de ácido benzoico o una sal del mismo.

En algunas realizaciones, la composición comprende al menos aproximadamente 0,10% en peso de ácido benzoico o una sal del mismo. En algunas realizaciones, la composición comprende no más de 5% en peso de ácido benzoico o una sal del mismo. En algunas realizaciones, la composición comprende no más de 1% en peso de ácido benzoico o una sal del mismo.

En algunas realizaciones, la composición comprende adicionalmente al menos 10 ppm de plata. En algunas realizaciones, comprende al menos 20 ppm de plata. En algunas realizaciones, la composición comprende adicionalmente al menos 25 ppm de plata. En algunas realizaciones, comprende no más de 600 ppm de plata. En algunas realizaciones, la composición comprende no más de 100 ppm de plata. En algunas realizaciones, la composición comprende no más de 65 ppm de plata.

En algunas realizaciones, aproximadamente 50 mg/mL de la composición en agua resultan isotónicos con los fluidos corporales. En algunas realizaciones, la solución isotónica tiene una osmolalidad en el intervalo de aproximadamente 280 a aproximadamente 330 mOsm/kg.

En algunas realizaciones, la composición tiene una densidad en el intervalo de aproximadamente 1,1 a aproximadamente 1,3 kg/m3.

También se describe en la presente memoria un procedimiento para preparar sal fenilacetato de L-ornitina que comprende: entremezclar una sal de L-ornitina, una sal benzoato y un disolvente para formar una solución intermedia; entremezclar fenilacetato con dicha solución intermedia; y aislar una composición que comprende al menos 70% en peso de fenilacetato de L-ornitina cristalino.

El procedimiento puede comprender eliminar al menos una porción de una sal de dicha solución intermedia antes de mezclar el acetato de fenilo, en donde dicha sal no es una sal de L-ornitina. El procedimiento puede comprender la adición de ácido clorhídrico antes de eliminar al menos una porción de la sal.

La mezcla de la L-ornitina, la sal benzoato y el disolvente puede, por ejemplo, comprender: dispersar la sal de L-ornitina en agua para formar una primera solución; dispersar la sal benzoato en ^d M^s O para formar una segunda solución; y mezclar dicha primera solución y dicha segunda solución para formar dicha solución.

En algunas realizaciones, la composición comprende al menos aproximadamente 0,10% en peso de sal benzoato. En algunas realizaciones, la composición comprende no más de 5% en peso de sal benzoato. En algunas realizaciones, la composición comprende no más de 1% en peso de sal benzoato.

En algunas realizaciones, la sal de L-ornitina es hidrocloruro de L-ornitina. En algunas realizaciones, la sal benzoato es benzoato de plata.

En algunas realizaciones, la composición comprende al menos 10 ppm de plata. En algunas realizaciones, la composición comprende al menos 20 ppm de plata. En algunas realizaciones, la composición comprende al menos 25 ppm de plata. En algunas realizaciones, la composición comprende no más de 600 ppm de plata. En algunas realizaciones, la composición comprende no más de 100 ppm de plata. En algunas realizaciones, la composición comprende no más de 65 ppm de plata.

En algunas realizaciones, el acetato de fenilo está en una sal de metal alcalino. En algunas realizaciones, la sal de metal alcalino es fenilacetato de sodio.

En algunas realizaciones, la composición comprende no más de 100 ppm de sodio. En algunas realizaciones, la composición comprende no más de 20 ppm de sodio.

En algunas realizaciones, la L-ornitina está en una sal haluro. En algunas realizaciones, la sal haluro es hidrocloruro de L-ornitina.

En algunas realizaciones, la composición comprende no más de 0,1% en peso de cloruro. En algunas realizaciones, la composición comprende no más de 0,01% en peso de cloruro.

También se describe en la presente memoria una composición obtenida por cualquiera de los procedimientos descritos en la presente memoria.

También se describe en la presente memoria un procedimiento para preparar sal fenilacetato de L-ornitina que comprende: aumentar el valor de pH de una solución que comprende una sal de L-ornitina al menos hasta que precipita una sal intermedia, en donde dicha sal intermedia no es una sal de L-ornitina; aislar la sal intermedia de dicha solución; mezclar ácido fenilacético con dicha solución; y aislar la sal fenilacetato de L-ornitina de dicha solución.

El valor de pH puede aumentar, por ejemplo, a al menos 8,0, p. ej., el valor de pH aumenta a al menos 9,0. El aumento del valor de pH puede comprender la adición de un modificador de pH seleccionado del grupo que consiste en hidróxido de sodio, hidróxido de potasio, metóxido de sodio, t-butóxido de potasio, carbonato de sodio, carbonato de calcio, dibutilamina, triptamina, hidruro de sodio, hidruro de calcio, butil litio, bromuro de etilmagnesio o combinaciones de los mismos.

La presente invención proporciona una forma cristalina de fenilacetato de L-ornitina de la invención como se define en la presente memoria, para su uso en el tratamiento o mejora de la hiperamonemia en un sujeto.

En algunas realizaciones, la forma cristalina es para administración oral.

Las formas cristalinas de fenilacetato de L-ornitina incluyen Forma I, Forma II, Forma III, Forma V, en donde: la Forma I muestra un patrón de difracción de rayos X de polvo que tiene picos característicos a aproximadamente 4,9° ± 0,2°, 13,2° ± 0,2°, 17,4° ± 0,2°, 20,8° ± 0,2° y 24,4° ± 0,2° 20; La Forma II muestra un patrón de difracción de rayos X de polvo que tiene picos característicos a aproximadamente 6,0°, 13,9°, 14,8°, 17,1°, 17,8° y 24,1° 20; La Forma III muestra un patrón de difracción de rayos X de polvo que tiene picos característicos a aproximadamente 5,8°, 14,1°, 18,6°, 19,4°, 22,3° y 24,8° 20; y la Forma V muestra un patrón de difracción de rayos X de polvo que tiene picos característicos a aproximadamente 13,7°, 17,4°, 19,8°, 20,6° y 23,7° 20.

En la presente invención, la forma cristalina es la Forma I.

En algunas realizaciones, la forma cristalina se administra de 1 a 3 veces al día. En algunas realizaciones, la cantidad terapéuticamente eficaz está en el intervalo de aproximadamente 500 mg a aproximadamente 50 g.

En algunas realizaciones, se identifica que el sujeto tiene encefalopatía hepática. En algunas realizaciones, se identifica que el sujeto tiene hiperamonemia.

También se describe en la presente memoria un procedimiento para preparar sal fenilacetato de L-ornitina que comprende: mezclar una sal de L-ornitina, fenilacetato de plata y un disolvente para formar una solución, en donde la sal de L-ornitina es una sal de metal alcalino; y aislar el fenilacetato de L-ornitina de dicha solución.

Algunas realizaciones descritas en la presente memoria incluyen una forma cristalina de fenilacetato de L-ornitina de la invención como se define en la presente memoria, para su uso en el tratamiento o mejora de la hiperamonemia en un sujeto, en donde dicho tratamiento o mejora de la hiperamonemia comprende administrar intravenosamente una cantidad terapéuticamente eficaz de una solución que comprende fenilacetato de L-ornitina, en donde dicha cantidad terapéuticamente eficaz comprende no más de 500 mL de dicha solución.

En algunas realizaciones, la solución comprende al menos aproximadamente 25 mg/mL de fenilacetato de L-ornitina. En algunas realizaciones, la solución comprende al menos aproximadamente 40 mg/mL de fenilacetato de L-ornitina. En algunas realizaciones, la solución comprende no más de 300 mg/mL. En algunas realizaciones, la solución es isotónica con el fluido corporal.

La invención también proporciona un método para comprimir fenilacetato de L-ornitina, comprendiendo el método aplicar una presión de al menos 3,45 x 106 Pa (500 psi) (en donde 1 psi es equivalente a 6894,76 Pa) a una forma metaestable de fenilacetato de L-ornitina para inducir un cambio de fase, en donde la forma metaestable de fenilacetato de L-ornitina muestra un patrón de difracción de rayos X de polvo que comprende al menos tres picos característicos seleccionados del grupo que consiste en 4,9° ± 0,2° 20, 13,2° ± 0,2° 20, 17,4° ± 0,2° 20, 20,8° ± 0,2° 20 y 24,4° ± 0,2° 20, y en donde el cambio de fase produce una composición que muestra un patrón de difracción de rayos X de polvo que comprende al menos tres picos característicos seleccionados del grupo que consiste en 6,0° ± 0,2° 20, 13,9° ± 0,2° 20, 14,8° ± 0,2° 20, 17,1° ± 0,2° 20, 17,8° ± 0,2° 20 y 24,1° ± 0,2° 20.

En algunas realizaciones, la presión se aplica durante un tiempo predeterminado. En algunas realizaciones, el tiempo predeterminado es de aproximadamente 1 segundo o menos.

En algunas realizaciones, el cambio de fase produce una composición que tiene una densidad en el intervalo de aproximadamente 1,1a aproximadamente 1,3 kg/m3 después de aplicar la presión.

También se describe en la presente memoria una composición obtenida aplicando presión a una forma metaestable de fenilacetato de L-ornitina para inducir un cambio de fase.

Breve descripción de los dibujos

La FIGURA 1 es un patrón de difracción de rayos X de polvo de la Forma I.

La FIGURA 2 muestra los resultados de calorimetría diferencial de barrido para la Forma I.

La FIGURA 3 muestra el análisis termogravimétrico gravimétrico/térmico diferencial de la Forma I.

La FIGURA 4 muestra el espectro de resonancia magnética nuclear H1 obtenido de una muestra de la Forma I.

La FIGURA 5 muestra resultados de sorción dinámica de vapores para la Forma I.

La FIGURA 6 es un patrón de difracción de rayos X de polvo de la Forma II.

La FIGURA 7 muestra resultados de calorimetría diferencial de barrido para la Forma II.

La FIGURA 8 muestra el análisis termogravimétrico gravimétrico/térmico diferencial de la Forma II.

La FIGURA 9 muestra el espectro de resonancia magnética nuclear H1 obtenido de una muestra de la Forma II.

La FIGURA 10 muestra resultados de sorción dinámica de vapores para la Forma II.

La FIGURA 11 es un patrón de difracción de rayos X de polvo de la Forma III.

La FIGURA 12 muestra resultados de calorimetría diferencial de barrido para la Forma III.

La FIGURA 13 muestra el análisis termogravimétrico gravimétrico/térmico diferencial de la Forma III.

La FIGURA 14 muestra el espectro de resonancia magnética nuclear H1 obtenido de una muestra de la Forma III.

La FIGURA 15 muestra resultados de sorción dinámica de vapores para la Forma III.

La FIGURA 16 es un patrón de difracción de rayos X de polvo de la Forma V.

La FIGURA 17 muestra resultados de calorimetría diferencial de barrido para la Forma V.

La FIGURA 18 muestra el análisis termogravimétrico gravimétrico/térmico diferencial de la Forma V.

La FIGURA 19 muestra el espectro de resonancia magnética nuclear H1 obtenido de una muestra de la Forma V.

La FIGURA 20 muestra resultados de sorción dinámica de vapores para la Forma V.

La FIGURA 21 muestra el espectro de resonancia magnética nuclear H1 obtenido de una muestra de benzoato de L-ornitina.

La FIGURA 22 muestra el espectro de resonancia magnética nuclear H1 obtenido de una muestra de fenilacetato de L-ornitina.

Descripción detallada

En la presente memoria se describen métodos para preparar sales fenilacetato de L-ornitina y, en particular, formas cristalinas de dicha sal. Estos métodos permiten la producción a gran escala de formas farmacéuticamente aceptables de fenilacetato de L-ornitina utilizando procedimientos económicos. Por otra parte, también se describen formas cristalinas de fenilacetato de L-ornitina, que incluyen las formas I, II, III y V. Las sales fenilacetato de L-ornitina permiten la administración intravenosa con una carga de sodio concomitante insignificante y, por lo tanto, minimizan la cantidad de fluido i.v. que se requiere

La presente solicitud se refiere a nuevas formas cristalinas de sales fenilacetato de L-ornitina, así como a métodos para utilizar sales fenilacetato de L-ornitina. La sal muestra ventajosamente estabilidad a largo plazo sin cantidades significativas de sodio o cloruro. Como resultado, se espera que el fenilacetato de L-ornitina proporcione un mejor perfil de seguridad en comparación con otras sales de L-ornitina y fenilacetato. Asimismo, el fenilacetato de L-ornitina muestra una menor tonicidad en comparación con otras sales y, por lo tanto, se puede administrar por vía intravenosa a concentraciones más altas. En consecuencia, se espera que el fenilacetato de L-ornitina proporcione mejoras clínicas significativas para el tratamiento de la encefalopatía hepática.

La presente solicitud se refiere a la Forma cristalina I de fenilacetato de L-ornitina. También se comentan en la presente memoria otras formas cristalinas (p. ej., las Formas II, III y V). La aparición de diferentes formas cristalinas (polimorfismo) es una propiedad de algunas moléculas y complejos moleculares. Los complejos salinos, tales como el fenilacetato de L-ornitina, pueden dar lugar a una variedad de sólidos que tienen propiedades físicas distintas como el punto de fusión, el patrón de difracción de rayos X, la huella dactilar de absorción infrarroja y el espectro de RMN. Las diferencias en las propiedades físicas de las formas polimórficas resultan de la orientación y las interacciones intermoleculares de moléculas adyacentes (complejos) en el sólido en masa. Por consiguiente, las formas polimórficas pueden ser sólidos distintos que comparten el mismo ingrediente farmacéutico activo pero que tienen propiedades fisicoquímicas ventajosas y/o desventajosas distintas en comparación con otras formas de la familia de formas polimórficas.

Método de elaboración de la sal fenilacetato de L-ornitina

También se describe en la presente memoria un método para preparar sal fenilacetato de L-ornitina. El fenilacetato de L-ornitina se puede producir, por ejemplo, a través de una sal intermedia, tal como el benzoato de L-ornitina. Como se muestra en el Esquema 1, una sal de L-ornitina de Fórmula I se puede hacer reaccionar con una sal benzoato de Fórmula II para obtener el benzoato de L-ornitina intermedio.

Esquema 1

Se pueden utilizar varias sales de L-ornitina en el compuesto de Fórmula I y, por lo tanto, X en la Fórmula I puede ser cualquier ion capaz de formar una sal con L-ornitina que no sea ácido benzoico o ácido fenilacético. X puede ser un anión monoatómico, tal como, pero no limitado a, un haluro (p. ej., fluoruro, cloruro, bromuro y yoduro). X también puede ser un anión poliatómico, tal como, pero no limitado a, acetato, aspartato, formiato, oxalato, bicarbonato, carbonato, bitrato, sulfato, nitrato, isonicotinato, salicilato, citrato, tartrato, pantotenato, bitartrato, ascorbato, succinato, maleato, gentisinato, fumarato, gluconato, glucaronato, sacarato, formiato, glutamato, metanosulfonato, etanosulfonato, bencensulfonato, p-toluenosulfonato, pamoato (es decir, 1,1'-metilén-bis-(2-hidroxi-3-naftoato), fosfato y similares. En algunas realizaciones, X es un ion monovalente. En algunas realizaciones, X es cloruro. De manera similar, la sal benzoato de Fórmula II no está particularmente limitada y, por lo tanto, Y en la Fórmula II puede ser cualquier ion apropiado capaz de formar una sal con ácido benzoico. En algunas realizaciones, Y puede ser un catión monoatómico, tal como un ion de metal alcalino (p. ej., Li+, N/A+ y K+) y otros iones monovalentes (p. ej., Ag+). Y también puede ser un catión poliatómico, tal como amonio, L-arginina, dietilamina, colina, etanolamina, 1H-imidazol, trolamina y similares. En algunas realizaciones, Y es un ion inorgánico. En algunas realizaciones, Y es plata.

Se pueden utilizar muchas otras sales posibles de L-ornitina y ácido benzoico para los compuestos de Fórmulas I y II, respectivamente, y los expertos en la técnica pueden prepararlas fácilmente. Véase, por ejemplo, Bighley L.D., et al., "Salt forms of drugs and absorption," En: Swarbrick J., Horlan J.C., eds. Encyclopedia of pharmaceutical technology, Vol. 12. Nueva York: Marcel Dekker, Inc. pág. 452-499.

El intermedio benzoato de L-ornitina (es decir, la Fórmula III) se puede preparar mezclando soluciones que incluyen compuestos de Fórmulas I y II. Como ejemplo, los compuestos de las Fórmulas I y II se pueden disolver por separado en agua y dimetilsulfóxido (DMSO), respectivamente. Las dos soluciones se pueden mezclar para que la L-ornitina y el ácido benzoico reaccionen para formar la sal de Fórmula III. Alternativamente, los dos compuestos de la sal se pueden disolver directamente en una única solución. En algunas realizaciones, la L-ornitina y el ácido benzoico se disuelven en disolventes separados y posteriormente se mezclan. En algunas realizaciones, la L-ornitina se disuelve en una solución acuosa, el ácido benzoico se disuelve en un disolvente orgánico, y las soluciones de L-ornitina y ácido benzoico se mezclan posteriormente.

Los ejemplos no limitantes de disolventes que se pueden utilizar al mezclar sales de L-ornitina y benzoato incluyen acetonitrilo, dimetilsulfóxido (DMSO), ciclohexano, etanol, acetona, ácido acético, 1-propanol, carbonato de dimetilo, N-metil-2-pirrolidona (NMP ), acetato de etilo (EtOAc), tolueno, alcohol isopropílico (IPA), diisopropiléter, nitrometano, agua, 1,4 dioxano, dietiléter, etilenglicol, acetato de metilo (MeOAc), metanol, 2-butanol, cumeno, formiato de etilo, acetato de isobutilo, 3-metiM-butanol, anisol y combinaciones de los mismos. En algunas realizaciones, la solución de benzoato de L-ornitina incluye agua. En algunas realizaciones, la solución de benzoato de L-ornitina incluye DMSO.

Al mezclar sales de L-ornitina y benzoato, los contraiones X e Y pueden formar un producto precipitado que se puede eliminar de la solución mezclada utilizando métodos conocidos, tales como filtración, centrifugación y similares. En algunas realizaciones, X es cloruro, Y es plata y la reacción produce un producto precipitado que tiene AgCl. Aunque el Esquema 1 muestra los compuestos de Fórmulas I y II como sales, también está dentro del alcance de la presente solicitud mezclar la base libre de L-ornitina y ácido benzoico para formar el intermedio benzoato de L-ornitina. En consecuencia, formar y aislar el producto precipitado es opcional.

La cantidad relativa de sales de L-ornitina y benzoato que se mezclan no está limitada; sin embargo, la razón molar de L-ornitina con respecto a ácido benzoico puede estar opcionalmente en el intervalo de aproximadamente 10:90 y 90:10. En algunas realizaciones, la razón molar de benzoato de L-ornitina puede estar en el intervalo de aproximadamente 30:70 y 30:70. En algunas realizaciones, la razón molar de L-ornitina con respecto a benzoato puede estar en el intervalo de aproximadamente 40:60 y 60:40. En algunas realizaciones, la razón molar de L-ornitina con respecto a benzoato es de aproximadamente 1:1.

En realizaciones donde X e Y son ambos iones inorgánicos (p. ej., X e Y son cloruro y plata, respectivamente), se pueden añadir cantidades adicionales de sal que contiene X para alentar una mayor precipitación del contraión Y. Por ejemplo, si X es cloruro e Y es plata, la razón molar de hidrocloruro de L-ornitina con respecto a benzoato de plata puede ser mayor que 1:1, por lo que hay un exceso de cloruro en relación con la plata. Por consiguiente, en algunas realizaciones, la razón molar de L-ornitina con respecto a ácido benzoico es mayor que aproximadamente 1:1. Sin embargo, no se requiere que la sal cloruro adicional derive de una sal de L-ornitina (p. ej., hidrocloruro de L-ornitina). Por ejemplo, se pueden añadir soluciones diluidas de ácido clorhídrico a la solución para eliminar aún más plata. Aunque no está particularmente limitado, cuando se añade la sal que contiene X adicional, se añade preferiblemente antes de que el AgCl se aísle inicialmente.

Como se muestra en el Esquema 2, el benzoato de L-ornitina se puede hacer reaccionar con una sal fenilacetato de Fórmula IV para formar fenilacetato de L-ornitina. Por ejemplo, el fenilacetato de sodio se puede mezclar con una solución de benzoato de L-ornitina para formar fenilacetato de L-ornitina. Se pueden utilizar varias sales de acetato de fenilo y, por lo tanto, Z en la Fórmula IV puede ser cualquier catión capaz de formar una sal con fenilacetato que no sea ácido benzoico o L-ornitina. En algunas realizaciones, Z puede ser un catión monoatómico, tal como un ion de metal alcalino (p. ej., Li+, N/A+ y K+) y otros iones monovalentes (p. ej., Ag+). Z también puede ser un catión poliatómico, tal como amonio, L-arginina, dietilamina, colina, etanolamina, 1H-imidazol, trolamina y similares. En algunas realizaciones, Z es un ion inorgánico. En algunas realizaciones, Z es sodio.

La cantidad relativa de sales de L-ornitina y fenilacetato que se mezclan tampoco está limitada; sin embargo, la razón molar de L-ornitina con respecto a acetato de fenilo puede estar opcionalmente en el intervalo de aproximadamente 10:90 y 90:10. En algunas realizaciones, la razón molar de L-ornitina con respecto a acetato de fenilo puede estar en el intervalo de aproximadamente 30:70 y 30:70. En algunas realizaciones, la razón molar de L-ornitina con respecto a acetato de fenilo puede estar en el intervalo de aproximadamente 40:60 y 60:40. En algunas realizaciones, la razón molar de L-ornitina con respecto a ácido benzoico es de aproximadamente 1:1.

El fenilacetato de L-ornitina de Fórmula V se puede aislar a continuación de la solución utilizando técnicas conocidas. Por ejemplo, evaporando cualquier disolvente hasta que cristalice el fenilacetato de L-ornitina, o alternativamente añadiendo un antidisolvente miscible en la solución de fenilacetato de L-ornitina hasta que el fenilacetato de L-ornitina precipite de la solución. Otro posible medio para aislar el fenilacetato de L-ornitina consiste en ajustar la temperatura de la solución (p. ej., disminuir la temperatura) hasta que precipite el fenilacetato de L-ornitina. Como se comentará con más detalle en una sección posterior, el método para aislar el fenilacetato de L-ornitina afecta a la forma cristalina que se obtiene.

El fenilacetato de L-ornitina aislado puede someterse a diversos procedimientos adicionales, tales como secado y similares. En algunas realizaciones, el fenilacetato de L-ornitina se puede mezclar posteriormente con una solución diluida de HCl para precipitar la plata residual. El fenilacetato de L-ornitina se puede aislar nuevamente de la solución utilizando métodos similares descritos anteriormente.

Como apreciaría un experto normal en la técnica, guiado por las enseñanzas de la presente solicitud, el fenilacetato de L-ornitina se puede preparar de manera similar utilizando una sal intermedia distinta del benzoato de L-ornitina. Así, por ejemplo, la L-ornitina, o una sal de la misma (p. ej., hidrocloruro de L-ornitina), se puede mezclar con una solución que tiene ácido acético. El acetato de L-ornitina se puede mezclar a continuación con ácido fenilacético o una sal del mismo (p. ej., fenilacetato de sodio), para obtener fenilacetato de L-ornitina. El Esquema 4 ilustra un procedimiento ilustrativo de formación de fenilacetato de L-ornitina utilizando acetato de L-ornitina como una sal intermedia. En algunas realizaciones, la sal intermedia puede ser una sal farmacéuticamente aceptable de L-ornitina. Por ejemplo, la sal de L-ornitina intermedia puede ser un acetato, aspartato, formiato, oxalato, bicarbonato, carbonato, bitrato, sulfato, nitrato, isonicotinato, salicilato, citrato, tartrato, pantotenato, bitartrato, ascorbato, succinato, maleato, gentisinato, fumarato, gluconato, glucaronato, sacarato, formiato, benzoato, glutamato, metanosulfonato, etanosulfonato, bencensulfonato, p-toluenosulfonato, pamoato (es decir, 1,1'-metilén-bis-(2-hidroxi-3-naftoato) o fosfato. El ácido libre del intermedio es preferiblemente un ácido más débil en relación con el ácido fenilacético. En algunas realizaciones, el intermedio es una sal de L-ornitina con un componente aniónico que muestra un valor pKa que es mayor que el valor pKa del ácido fenilacético. Como ejemplo, para el acetato de L-ornitina, el ácido acético y el ácido fenilacético muestran valores pKa de aproximadamente 4,76 y 4,28, respectivamente.

Esquema 3

El fenilacetato de L-ornitina también se puede preparar, en algunas realizaciones, sin formar una sal intermedia, tal como benzoato de L-ornitina. El Esquema 4 ilustra un procedimiento ilustrativo para preparar fenilacetato de L-ornitina sin una sal intermedia. Se puede añadir un modificador de pH a una solución de sal de L-ornitina (p. ej., como se ilustra en el Esquema 4 por el compuesto de Fórmula I) hasta que una sal precipita de la solución, donde la sal no es una sal de L-ornitina. Como ejemplo, se puede añadir metóxido de sodio (NaOMe) a una solución de hidrocloruro de L-ornitina hasta que el cloruro de sodio precipite de la solución para dejar una base libre de L-ornitina. El producto precipitado se puede aislar opcionalmente de la solución utilizando técnicas conocidas, tales como filtración, centrifugación y similares. La base libre de L-ornitina (p. ej., como se ilustra en el Esquema 4 por el compuesto de Fórmula I-a) se puede mezclar con ácido fenilacético o una sal del mismo (p. ej., como se ilustra en el Esquema 4 por el compuesto de Fórmula IV), para obtener fenilacetato de L-ornitina. El fenilacetato de L-ornitina de Fórmula V se puede aislar como se describió previamente.

Esquema 4

Un modificador de pH puede incluir un compuesto básico, o un precursor anhidro del mismo, y/o una base químicamente protegida. Los ejemplos no limitantes de modificadores de pH incluyen hidróxido de sodio, hidróxido de potasio, metóxido de sodio, t-butóxido de potasio, carbonato de sodio, carbonato de calcio, dibutilamina, triptamina, hidruro de sodio, hidruro de calcio, butil litio, bromuro de etilmagnesio y combinaciones de los mismos. Asimismo, la cantidad de modificador de pH que se va a añadir no está particularmente limitada; sin embargo, la razón molar de L-ornitina con respecto a un modificador de pH puede estar opcionalmente en el intervalo de aproximadamente 10:90 y 90:10. En algunas realizaciones, la razón molar de L-ornitina con respecto a un modificador de pH puede estar en el intervalo de aproximadamente 30:70 y 30:70. En algunas realizaciones, la razón molar de L-ornitina con respecto a un modificador de pH puede estar en el intervalo de aproximadamente 40:60 y 60:40. En algunas realizaciones, la razón molar de L-ornitina con respecto a un modificador de pH es de aproximadamente 1:1. El modificador de pH se puede añadir, en algunas realizaciones, para ajustar el valor de pH a al menos aproximadamente 8,0; a al menos aproximadamente 9,0; o a al menos aproximadamente 9,5.

Otro procedimiento para formar fenilacetato de L-ornitina, en algunas realizaciones, incluye hacer reaccionar una sal de metal alcalino de L-ornitina con una sal fenilacetato. Como ejemplo, el hidrocloruro de L-ornitina se puede mezclar con fenilacetato de plata y un disolvente. El AgCl puede precipitar y, opcionalmente, se aísla de la solución. El fenilacetato de L-ornitina restante también se puede aislar utilizando métodos conocidos. Este procedimiento se puede completar utilizando generalmente los mismos procedimientos y condiciones descritos anteriormente. Por ejemplo, las cantidades molares relativas de L-ornitina con respecto a acetato de fenilo pueden ser de 10:90 a 90:10; 30:70 a 70:30; 40:60 a 60:40; o aproximadamente 1:1. Asimismo, el fenilacetato de L-ornitina se puede aislar evaporando el disolvente, añadiendo un antidisolvente y/o reduciendo la temperatura.

Composiciones de Fenilacetato de L-Ornitina

También se describen en la presente memoria composiciones de fenilacetato de L-ornitina. Las composiciones de la presente solicitud tienen ventajosamente bajas cantidades de sales inorgánicas, particularmente sales de metales alcalinos y/o sales haluro, y por lo tanto son particularmente adecuadas para la administración oral y/o intravenosa a pacientes con encefalopatía hepática. Mientras tanto, estas composiciones pueden mostrar perfiles de estabilidad similares en comparación con otras sales (p. ej., mezclas de hidrocloruro de L-ornitina y acetato de fenilo sódico). Las composiciones se pueden obtener, en algunas realizaciones, mediante uno de los procedimientos descritos en la presente solicitud. Por ejemplo, cualquiera de los procedimientos descritos que utilizan benzoato de L-ornitina como intermedio puede producir las composiciones de la presente solicitud.

Las composiciones descritas en la presente memoria pueden incluir una forma cristalina de fenilacetato de L-ornitina (p. ej., Formas I, II, III y/o V descritas en la presente memoria). En algunas realizaciones, la composición puede incluir al menos aproximadamente 20% en peso de una forma cristalina de fenilacetato de L-ornitina (preferiblemente al menos aproximadamente 50% en peso, y más preferiblemente al menos aproximadamente 80% en peso). En algunas realizaciones, la composición consiste esencialmente en una forma cristalina de fenilacetato de L-ornitina. En algunas realizaciones, la composición incluye una mezcla de al menos dos (p. ej., dos, tres o cuatro formas) de las formas I, II, III y V.

Las composiciones descritas en la presente memoria incluyen la Forma II. Por ejemplo, las composiciones pueden incluir al menos aproximadamente 20%; al menos aproximadamente 50%; al menos aproximadamente 90%; al menos aproximadamente 95%; o al menos aproximadamente 99% de la Forma II. De manera similar, las composiciones también pueden incluir, por ejemplo, las Formas I, III o V. Las composiciones pueden incluir opcionalmente al menos aproximadamente 20%; al menos aproximadamente 50%; al menos aproximadamente 90%; al menos aproximadamente 95%; o al menos aproximadamente 99% de las formas I, II, III y/o V.

También se describen en la presente memoria formas amorfas de fenilacetato de L-ornitina. Se conocen varios métodos en la técnica para preparar formas amorfas. Por ejemplo, se puede secar al vacio una solución de fenilacetato de L-ornitina por liofilización para obtener una composición amorfa. Véase la Solicitud P.C.T. WO 2007/058634, que describe métodos de liofilización.

Se prefiere que la composición tenga bajas cantidades (si las hay) de iones o sales de álcali y halógeno, particularmente sodio y cloruro. En algunas realizaciones, la composición comprende no más de aproximadamente 100 ppm de metales alcalinos (preferiblemente no más de aproximadamente 20 ppm, y lo más preferiblemente no más de aproximadamente 10 ppm). En algunas realizaciones, la composición comprende no más de aproximadamente 100 ppm de sodio (preferiblemente no más de aproximadamente 20 ppm, y lo más preferiblemente no más de aproximadamente 10 ppm). En algunas realizaciones, la composición comprende no más de aproximadamente 0,1% en peso de haluros (preferiblemente no más de aproximadamente 0,01% en peso). En algunas realizaciones, la composición comprende no más de aproximadamente 0,1% en peso de cloruro (preferiblemente no más de aproximadamente 0,01% en peso).

El contenido reducido de metales alcalinos y haluros proporciona una composición adecuada para preparar soluciones isotónicas concentradas. Como tales, estas composiciones se pueden administrar más fácilmente por vía intravenosa en comparación, por ejemplo, con la administración de mezclas de hidrocloruro de L-ornitina y fenilacetato de sodio. En algunas realizaciones, una solución de aproximadamente 45 a aproximadamente 55 mg/mL de fenilacetato de L-ornitina en agua (preferiblemente aproximadamente 50 mg/mL) es isotónica con los fluidos corporales (p. ej., la solución muestra una osmolalidad en el intervalo de aproximadamente 280 a aproximadamente 330 mOsm/kg).

Las composiciones también pueden incluir cantidades residuales del anión a partir de una sal intermedia formada durante el procedimiento de elaboración de la composición de fenilacetato de L-ornitina. Por ejemplo, algunos de los procedimientos descritos en la presente memoria producen composiciones que tienen ácido benzoico o una sal del mismo. En algunas realizaciones, la composición comprende al menos aproximadamente 0,01% en peso de ácido benzoico o una sal del mismo (preferiblemente al menos aproximadamente 0,05% en peso, y más preferiblemente aproximadamente 0,1% en peso). En algunas realizaciones, la composición comprende no más de aproximadamente 3% en peso de ácido benzoico o una sal del mismo (preferiblemente no más de aproximadamente 1% en peso, y más preferiblemente no más de aproximadamente 0,5% en peso). En algunas realizaciones, la composición incluye una sal, o un ácido de la misma, en el intervalo de aproximadamente 0,01% a aproximadamente 3% en peso (preferiblemente de aproximadamente 0,1% a aproximadamente 1%), en donde la sal se selecciona entre acetato, aspartato, formiato, oxalato, bicarbonato, carbonato, bitrato, sulfato, nitrato, isonicotinato, salicilato, citrato, tartrato, pantotenato, bitartrato, ascorbato, succinato, maleato, gentisinato, fumarato, gluconato, glucaronato, sacarato, formiato, benzoato, glutamato, metanosulfonato, etanosulfonato, bencensulfonato, p-toluenosulfonato, pamoato (es decir, 1,1'-metilén-bis-(2-hidroxi-3-naftoato) o fosfato.

De manera similar, una composición preparada utilizando un acetato intermedio puede tener cantidades residuales de ácido acético o acetato. En algunas realizaciones, la composición incluye al menos aproximadamente 0,01% en peso de ácido acético o acetato (preferiblemente al menos aproximadamente 0,05% en peso, y más preferiblemente aproximadamente 0,1% en peso). En algunas realizaciones, la composición incluye no más de aproximadamente 3% en peso de ácido acético o acetato (preferiblemente no más de aproximadamente 1% en peso, y más preferiblemente no más de aproximadamente 0,5% en peso).

Las composiciones también pueden incluir bajas cantidades de plata. Los procedimientos ilustrativos descritos en la presente memoria utilizan, por ejemplo, benzoato de plata, pero aún producen composiciones con cantidades sorprendentemente bajas de plata. Por lo tanto, en algunas realizaciones, la composición incluye no más de aproximadamente 600 ppm de plata (preferiblemente no más de aproximadamente 100 ppm, y más preferiblemente no más de aproximadamente 65 ppm). En algunas realizaciones, la composición incluye al menos aproximadamente 10 ppm de plata (alternativamente al menos aproximadamente 20 o 25 ppm de plata).

Composiciones Farmacéuticas

Las composiciones de fenilacetato de L-ornitina de la presente solicitud también se pueden formular para la administración a un sujeto (p. ej., un ser humano). El fenilacetato de L-ornitina, y en consecuencia las composiciones descritas en la presente memoria, se pueden formular para su administración con un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. De este modo, el fenilacetato de L-ornitina se puede formular como un medicamento con uno o varios portadores y/o excipientes farmacéuticamente aceptables como es habitual en la técnica farmacéutica. La naturaleza exacta de la formulación dependerá de varios factores, incluyendo la vía de administración deseada. Típicamente, el fenilacetato de L-ornitina está formulado para administración oral, intravenosa, intragástrica, subcutánea, intravascular o intraperitoneal.

El portador o diluyente farmacéutico puede ser, por ejemplo, agua o una solución isotónica, tal como dextrosa en agua al 5% o solución salina normal. Las formas orales sólidas pueden contener, junto con el compuesto activo, diluyentes, p. ej. lactosa, dextrosa, sacarosa, celulosa, almidón de maíz o almidón de patata; lubricantes, p. ej. sílice, talco, ácido esteárico, estearato de magnesio o calcio, y/o polietilenglicoles; agentes aglutinantes, p. ej. almidones, goma arábiga, gelatina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa o polivinilpirrolidona; agentes disgregantes, p. ej. almidón, ácido algínico, alginatos o sal de sodio de glicolato de almidón; mezclas efervescentes; colorantes; edulcorantes agentes humectantes, tales como lecitina, polisorbatos, laurilsulfatos; y, en general, sustancias no tóxicas y farmacológicamente inactivas utilizadas en formulaciones farmacéuticas. Tales preparaciones farmacéuticas se pueden fabricar de maneras conocidas, por ejemplo, mediante procedimientos de mezcla, granulación, formación de comprimidos, recubrimiento con azúcar o recubrimiento con película.

Las dispersiones líquidas para administración oral pueden ser jarabes, emulsiones o suspensiones. Los jarabes pueden contener como portadores, por ejemplo, sacarosa o sacarosa con glicerina y/o manitol y/o sorbitol.

Las suspensiones y emulsiones pueden contener un portador, por ejemplo, una goma natural, agar, alginato de sodio, pectina, metilcelulosa, carboximetilcelulosa o poli(alcohol vinílico). Las suspensiones o soluciones para inyecciones intramusculares pueden contener, junto con el fenilacetato de L-ornitina, un portador farmacéuticamente aceptable, p. ej. agua estéril, aceite de oliva, oleato de etilo, glicoles, p. ej. propilenglicol y, si se desea, una cantidad adecuada de hidrocloruro de lidocaína.

El medicamento puede consistir esencialmente en fenilacetato de L-ornitina y un portador farmacéuticamente aceptable. Tal medicamento, por lo tanto, no contiene sustancialmente otros aminoácidos además de L-ornitina y fenilacetato. Además, tal medicamento contiene cantidades insustanciales de otras sales además del fenilacetato de L-ornitina.

Las formulaciones orales generalmente pueden incluir dosis de fenilacetato de L-ornitina en el intervalo de aproximadamente 500 mg a aproximadamente 100 g. Por consiguiente, en algunas realizaciones, la formulación oral incluye las composiciones de fenilacetato de L-ornitina descritas en la presente memoria en el intervalo de aproximadamente 500 mg a aproximadamente 50 g. En algunas realizaciones, la formulación oral está sustancialmente libre de sales y haluros de metales alcalinos (p. ej., no contiene más que trazas de sales y haluros de metales alcalinos).

Las formulaciones intravenosas también pueden incluir generalmente dosificaciones de fenilacetato de L-ornitina en el intervalo de aproximadamente 500 mg a aproximadamente 100 g (preferiblemente de aproximadamente 1 g a aproximadamente 50 g). En algunas realizaciones, la formulación intravenosa está sustancialmente libre de sales y haluros de metales alcalinos (p. ej., no contiene más que trazas de sales y haluros de metales alcalinos). En algunas realizaciones, la formulación intravenosa tiene una concentración de aproximadamente 5 a aproximadamente 300 mg/mL de fenilacetato de L-ornitina (preferiblemente de aproximadamente 25 a aproximadamente 200 mg/mL, y más preferiblemente de aproximadamente 40 a aproximadamente 60 mg/mL).

La composición, o medicamento que contiene dicha composición, se pueden colocar opcionalmente en un envase sellado. El envase sellado puede reducir o evitar que la humedad y/o el aire ambiental entren en contacto con la composición o el medicamento. En algunas realizaciones, el envase incluye un sello hermético. En algunas realizaciones, el envase se sella al vacío o con un gas inerte (p. ej., argón) dentro del envase sellado. En consecuencia, el envase puede inhibir o reducir la velocidad de degradación de la composición o medicamento almacenados dentro del envase. Se conocen varios tipos de envases sellados en la técnica. Por ejemplo, la Patente de Estados Unidos Número 5.560.490 describe un envase sellado ilustrativo para medicamentos.

Composiciones con densidad mejorada

Los autores de la presente solicitud han encontrado sorprendentemente que se pueden obtener composiciones con mayor densidad aplicando suficiente presión a las composiciones que tienen la Forma I (descrita a continuación) para inducir una transición a la Forma II (descrita a continuación). Por ejemplo, aplicando 3 toneladas de fuerza durante 90 minutos a las Formas I y II se producen densidades de 1,197 kg/m3 y 1,001 kg/m3, respectivamente. Sorprendentemente, la Forma I se convirtió en la Forma II en estas condiciones; por lo tanto, la mayor densidad parece explicarse por las diferentes formas cristalinas como material de partida.

De acuerdo con esto, se describen en la presente memoria métodos para aumentar la densidad de una composición de fenilacetato de L-ornitina que tiene la Forma I aplicando presión a la composición suficiente para inducir una transición a la Forma II. La cantidad apropiada de fuerza o presión para inducir el cambio de fase puede variar con la cantidad de tiempo que se aplica la fuerza o presión. Por lo tanto, un experto en la técnica, guiado por las enseñanzas de la presente solicitud, puede determinar las cantidades apropiadas de presión y tiempo para inducir el cambio de fase. Por ejemplo, se puede aplicar al menos aproximadamente 1 tonelada de fuerza (preferiblemente al menos aproximadamente 2 toneladas, y más preferiblemente aproximadamente 3 toneladas). En el método de la invención, se aplican al menos 3,45 x 106 Pa (500 psi) de presión (preferiblemente al menos aproximadamente 6,89 x 106 Pa (1000 psi), y más preferiblemente al menos aproximadamente 1,38 x 107 Pa (2000 psi)), en donde 6894,76 Pa equivalen a 1 psi.

La cantidad de tiempo para aplicar presión no está particularmente limitada, y como se discutió anteriormente, variará dependiendo de la cantidad de tiempo. Por ejemplo, al aplicar fuerzas grandes (p. ej., 10 toneladas) a un troquel típico del tamaño de un comprimido, el tiempo puede ser de aproximadamente 1 segundo o menos. En algunas realizaciones, el tiempo para aplicar presión es un tiempo predeterminado. El tiempo puede ser, por ejemplo, aproximadamente 0,1 segundos; aproximadamente 1 segundo; al menos aproximadamente 1 minuto; al menos aproximadamente 5 minutos; o al menos aproximadamente 20 minutos.

En algunas realizaciones, la composición incluye al menos aproximadamente 10% en peso de la Forma I. En algunas realizaciones, la composición incluye al menos aproximadamente 30% en peso de la Forma I.

Sin estar limitados por ninguna teoría en particular, los autores de la presente solicitud creen que la mayor densidad puede ser resultado, al menos en parte, del componente de solvato de etanol presente en la Forma I. La aplicación de presión al solvato puede facilitar la formación de una estructura más densa con menos defectos (p. ej., los límites de grano). En consecuencia, en algunas realizaciones, los métodos para aumentar la densidad de una composición de fenilacetato de L-ornitina que tiene componentes de solvato incluyen aplicar presión a la composición suficiente para inducir una transición a la Forma II. En el método de la invención, la presión es de al menos 3,45 x 106 Pa (500 psi) (preferiblemente al menos aproximadamente 6,89 x 106 Pa (1000 psi), y más preferiblemente al menos aproximadamente 1,38 x 107 Pa (2000 psi), en donde 6894,76 Pa equivalen a 1 psi. En algunas realizaciones, el tiempo para aplicar presión es un tiempo predeterminado. En algunas realizaciones, la composición incluye al menos aproximadamente 10% de la forma de solvato (preferiblemente al menos aproximadamente 30%, y más preferiblemente al menos aproximadamente 50%).

Por lo tanto, las composiciones de fenilacetato de L-ornitina descritas en la presente memoria pueden tener densidades más altas en comparación con las composiciones obtenidas, por ejemplo, precipitando una forma cristalina. En algunas realizaciones, la composición tiene una densidad de al menos aproximadamente 1,1 kg/m3 (preferiblemente al menos aproximadamente 1,15 kg/m3, y más preferiblemente al menos aproximadamente 1,18 kg/m3). En algunas realizaciones, la composición tiene una densidad de no más de aproximadamente 1,3 kg/m3 (preferiblemente no más de aproximadamente 1,25 kg/m3, y más preferiblemente no más de aproximadamente 1,22 kg/m3). En algunas realizaciones, la composición tiene una densidad de aproximadamente 1,2 kg/m3.

Formas Cristalinas de Fenilacetato de L-Ornitina

También se describen en la presente memoria formas cristalinas de fenilacetato de L-ornitina, y en particular, la Forma cristalina I, la Forma II, la Forma III y la Forma V. El fenilacetato de L-ornitina, en algunas realizaciones, se puede obtener utilizando los procedimientos descritos anteriormente y luego cristalizar utilizando cualquiera de los métodos descritos en la presente memoria.

Forma I

Las condiciones precisas para formar la Forma cristalina I se pueden determinar empíricamente y solo es posible proporcionar una serie de métodos que se han encontrado adecuados en la práctica.

Así, por ejemplo, la Forma cristalina I generalmente se puede obtener cristalizando fenilacetato de L-ornitina en condiciones controladas. Como ejemplo, precipitando fenilacetato de L-ornitina de una solución saturada mediante la adición de etanol a temperaturas reducidas (p. ej., 4°C o -21°C). Los disolventes ilustrativos para la solución que produce la Forma I cristalina al añadir etanol incluyen, pero no se limitan a, ciclohexanona, 1-propanol, carbonato de dimetilo, N-metilpirrolidina (NMP), dietiléter, 2-butanol, cumeno, formiato de etilo, acetato de isobutilo, 3-metil-1-butanol y anisol.

En consecuencia, en el contexto de los procedimientos para preparar fenilacetato de L-ornitina descritos anteriormente, el procedimiento puede producir la Forma I utilizando métodos de aislamiento particulares. Por ejemplo, el fenilacetato de L-ornitina se puede aislar añadiendo etanol a temperatura reducida para producir la Forma I.

La Forma cristalina I se caracterizó utilizando diversas técnicas que se describen con más detalle en la sección de métodos experimentales. La FIGURA 1 muestra la estructura cristalina de la Forma I determinada por difracción de rayos X de polvo (XRPD). La Forma I, que se puede obtener mediante los métodos descritos anteriormente, presenta picos característicos a aproximadamente 4,9°, 13,2°, 17,4°, 20,8° y 24,4° 20. La Forma cristalina I del fenilacetato de L-ornitina tiene al menos tres picos característicos (p. ej., uno, dos, tres, cuatro o cinco picos característicos) seleccionados entre 4,9°, 13,2°, 17,4°, 20,8° y 24,4° 20.

Como se entiende bien en la técnica, debido a la variabilidad experimental cuando los patrones de difracción de rayos X se miden en diferentes instrumentos, se supone que las posiciones de los picos son iguales si los dos valores theta (20) coinciden dentro de 0,2° (es decir, ± 0,2°). Por ejemplo, la Farmacopea de los Estados Unidos establece que si el ajuste angular de los 10 picos de difracción más fuertes concuerda con ± 0,2° con el de un material de referencia, y las intensidades relativas de los picos no varían en más de 20%, la identidad está confirmada. En consecuencia, se supone que las posiciones máximas dentro de 0,2° de las posiciones mencionadas en la presente memoria son idénticas.

La FIGURA 2 muestra los resultados obtenidos por calorimetría diferencial de barrido (DSC) para la Forma I. Estos resultados indican una endoterma a 35°C, que posiblemente se asocia con una desolvatación y/o deshidratación a la Forma II. Una segunda transición a aproximadamente 203°C indica el punto de fusión del cristal. Para explorar la posible existencia de una transición de desolvatación y/o deshidratación, se analizó la Forma I mediante análisis termogravimétrico gravimétrico/térmico diferencial (TG/DTA), que se muestra en la FIGURA 3. La Forma I muestra una pérdida de peso de 11,28% a aproximadamente 35°C, y por lo tanto, estos resultados sugieren además que la Forma I muestra una transición de desolvatación y/o deshidratación a aproximadamente 35°C. El punto de fusión de aproximadamente 203°C también se pudo observar mediante pruebas de TGA. Por consiguiente, en algunas realizaciones, la forma cristalina de fenilacetato de L-ornitina se caracteriza por calorimetría diferencial de barrido que tiene una endoterma a aproximadamente 35°C. En algunas realizaciones, una forma cristalina de fenilacetato de L-ornitina muestra una pérdida de peso de aproximadamente 11% a aproximadamente 35°C, según lo determinado por TGA. En algunas realizaciones, una forma cristalina de fenilacetato de L-ornitina muestra un punto de fusión de aproximadamente 203°C.

La FIGURA 4 muestra integrales de resonancia magnética nuclear (RMN) y desplazamientos químicos para la Forma I. Las integrales confirman la presencia de fenilacetato de L-ornitina: 7,5 (CH aromático), 3,8 (CH adyacente a NH2), 3,6 (unidad CH2 de acetato de fenilo), 3,15 (CH2 adyacente a NH2) y 1,9 (unidades C^h2 alifáticas) ppm (integrales: 5:1:2:2:4 protones; 1,2, 0,25, 0,5, 0,5, 1,0). Los protones de amina y los protones de hidroxilo no se observaron debido al intercambio de protones tanto en el zwitterión como en el sitio de formación de la sal. Mientras tanto, la FIGURA 5 muestra resultados de sorción dinámica de vapores (DVS) para la Forma I, y muestra una absorción de agua de aproximadamente 0,2% en peso. Los resultados de XRPD después del análisis DVA (no mostrado) confirman que la Forma I no hizo la transición a una forma polimórfica diferente. Por lo tanto, la Forma I se puede caracterizar como no higroscópica y estable en un amplio intervalo de humedad.

Un estudio de estabilidad de 7 días de la Forma I a 40°C/75% HR indicó que se produjo una transformación a la Forma II en estas condiciones. La Forma I también se convierte en Forma II a temperaturas elevadas (p. ej., 80° o 120°C), con o sin aplicación de vacío, después de 7 o 14 días. En consecuencia, la Forma I es metaestable.

La difracción de rayos X de cristal único (SXRD) también se utilizó para determinar la estructura de la Forma I a -20 ° y -123°C, y los resultados se resumen en las TABLAS 1 y 2. Los resultados confirman que la Forma I es un solvato que tiene etanol y moléculas de agua dentro de la celda unitaria. En algunas realizaciones, la fórmula C puede representar una forma cristalina de fenilacetato de L-ornitina.15H2sN2O6. En algunas realizaciones, una forma cristalina de fenilacetato de L-ornitina se puede representar mediante la fórmula [C5H13N2O2KC8H7O2] EtOH.H2O. En algunas realizaciones, una forma cristalina de fenilacetato de L-ornitina muestra un análisis cristalográfico de rayos X de cristal único con parámetros cristalinos aproximadamente iguales a los siguientes: dimensiones de células unitarias de a = 5,3652, (4) A, b = 7,7136(6) A, c = 20,9602(18) A, a = 90°, p = 94,986(6)°, y = 90°; un sistema de cristal monoclínico y un grupo espacial P2-i.

TABLA 1 - Datos Cristalo ráficos de la Forma I Reco ilados a -20°C

TABLA 2 - Datos Cristalo ráficos de la Forma I Reco ilados a -123°C

Forma II

Las condiciones precisas para formar la Forma cristalina II se pueden determinar empíricamente y solo es posible proporcionar una serie de métodos que se han encontrado adecuados en la práctica.

Así, por ejemplo, la Forma cristalina II se puede preparar por cristalización en condiciones controladas. La Forma cristalina II se puede preparar, por ejemplo, evaporando una solución orgánica saturada de fenilacetato de L-ornitina. Los ejemplos no limitantes de soluciones orgánicas que se pueden utilizar para obtener la Forma II incluyen etanol, acetona, benzonitrilo, diclorometano (DCM), dimetilsulfóxido (DMSO), acetato de etilo (EtOAc), acetonitrilo (MeCN), acetato de metilo (MeOAc), nitrometano, terc-butil metil éter (TBME), tetrahidrofurano y tolueno. Otros disolventes pueden producir una mezcla de las Formas I y II, tales como, pero no limitados a, 1,4 dioxano, 1-butanol, ciclohexano, IPA, THF, MEK, MeOAc y agua.

La Forma II también se puede obtener precipitando el fenilacetato de L-ornitina a partir de una solución orgánica saturada añadiendo un antidisolvente para el fenilacetato de L-ornitina, tal como IPA. La Forma II se puede precipitar en un amplio intervalo de temperaturas (p. ej., temperatura ambiente, 4°C y -21°C). Los ejemplos no limitantes de disolventes adecuados para la solución orgánica saturada incluyen ciclohexanona, 1-propanol, carbonato de dimetilo, N-metilpirrolidona (NMP), diisopropiléter, dietiléter, etilenglicol, dimetilformamida (DMF), 2-butanol, cumeno, acetato de isobutilo, 3-metil-1-butanol y anisol. Alternativamente, los mismos disolventes enumerados (p. ej., ciclohexanona) se pueden utilizar para formar una solución de fenilacetato de L-ornitina, y la Forma II se puede precipitar añadiendo etanol en condiciones ambientales. Como otro ejemplo, la Forma II también se puede obtener formando una suspensión de fenilacetato de L-ornitina con los disolventes orgánicos enumerados y ciclando la temperatura entre 25° y 40°C cada 4 horas durante aproximadamente 18 ciclos (o 72 horas).

Por consiguiente, en el contexto de los procedimientos para preparar el fenilacetato de L-ornitina descrito anteriormente, el procedimiento puede producir la Forma II utilizando métodos de aislamiento particulares. Por ejemplo, el fenilacetato de L-ornitina se puede aislar añadiendo IPA o evaporando el disolvente orgánico, para producir la Forma II.

La FIGURA 6 muestra la estructura cristalina de la Forma II determinada por XRPD. La Forma II, que se puede obtener mediante los métodos descritos anteriormente, presenta picos característicos a aproximadamente 6,0°, 13,9°, 14,8°, 17,1°, 17,8° y 24,1° 20. Por lo tanto, la Forma cristalina II de fenilacetato de L-ornitina puede tener uno o más picos característicos (p. ej., uno, dos, tres, cuatro, cinco o seis picos característicos) seleccionados entre aproximadamente 6,0°, 13,9°, 14,8°, 17,1°, 17,8° y 24,12° 0.

La FIGURA 7 muestra los resultados obtenidos por calorimetría diferencial de barrido (DSC) para la Forma II. Estos resultados indican un punto de fusión de aproximadamente 202°C, que es aproximadamente el mismo que el punto de fusión para la Forma I. Esto sugiere que la Forma I pasa a la Forma II al calentar por encima de aproximadamente 35°C. La Forma II también se analizó utilizando TG/DTA, como se muestra en la FIGURA 8, y presenta una pérdida de peso de aproximadamente 9,7% asociada con el disolvente residual. El punto de fusión de aproximadamente 202°C también se pudo observar mediante pruebas de TGA. En consecuencia, la Forma cristalina II del fenilacetato de L-ornitina puede mostrar un punto de fusión de aproximadamente 202°C.

Un estudio de estabilidad de 7 días de la Forma II a 40°C/75% HR no logró producir un cambio de fase observable. De hecho, la Forma II fue estable durante 14 días cuando se expuso a temperaturas elevadas, pH variables, luz ultravioleta u oxígeno. En consecuencia, la Forma II se considera estable.

La FIGURA 9 muestra integrales de resonancia magnética nuclear (RMN) y desplazamientos químicos para la Forma II. Las integrales confirman la presencia de fenilacetato de L-ornitina: 7,5 (CH aromático), 3,8 (CH adyacente a NH2), 3,6 (unidad CH2 de fenilacetato), 3,15 (CH2 adyacente a NH2) y 1,9 (unidades CH2 alifáticas) ppm (integrales: 5:1:2:2:4 protones; 7,0, 1,4, 2,9, 3,0, 5,9). Los protones de amina y los protones de hidroxilo no se observaron debido al intercambio de protones tanto en el zwitterión como en el sitio de formación de la sal. Mientras tanto, la FIGURA 10 muestra resultados de sorción dinámica de vapores (DVS) para la Forma II, y muestra una absorción de agua de aproximadamente 0,3% en peso. Los resultados de XRPD después del análisis DVA (no mostrado) confirman que la Forma II no realizó la transición a una forma polimórfica diferente. Por lo tanto, la Forma II se puede caracterizar como no higroscópica y estable en un amplio intervalo de humedad.

La difracción de rayos X de cristal único (SXRD) también se utilizó para determinar la estructura de la Forma II a 23° y -123°C, y los resultados se resumen en las TABLAS 3 y 4. Los resultados demuestran que la Forma II es anhidra y, por lo tanto, estructuralmente diferente de la Forma I. La Forma cristalina II del fenilacetato de L-ornitina se puede representar por medio de la fórmula C13H20N2O4. La forma cristalina del fenilacetato de L-ornitina puede, por ejemplo, estar representada por la fórmula [C5H13N2O2KC8H7O2]. Típicamente, la forma cristalina II de fenilacetato de L-ornitina muestra un análisis cristalográfico de rayos X de cristal único con parámetros cristalinos aproximadamente iguales a los siguientes: dimensiones de la celda unitaria de a = 6,594(2) A, a = 90°, b = 6,5448(18) A, p = 91,12(3)°, c = 31,632(8) A, ^y = 90°; un sistema de cristal monoclínico; y un grupo espacial P21.

TABLA 3 - Datos Cristalo ráficos de la Forma II Recolectados a 23°C

TABLA 4 - Datos Cristalo ráficos de la Forma II Reco ilados a -123°C

Forma III

Las condiciones precisas para formar la Forma III cristalina se pueden determinar empíricamente y solo es posible proporcionar una serie de métodos que se han encontrado adecuados en la práctica.

Así, por ejemplo, la Forma III se puede obtener colocando una solución saturada de fenilacetato de L-ornitina en un entorno de temperatura enfriada de aproximadamente -21°C, donde la solución es una mezcla de acetona y agua (p. ej., partes iguales en volumen de acetona y agua). Como otro ejemplo, la adición de IPA a una solución saturada de fenilacetato de L-ornitina en 2-butanol puede producir la Forma III cuando se completa en condiciones ambientales. Además, se puede obtener la Forma III, por ejemplo, mediante la adición de IPA a una solución saturada de fenilacetato de L-ornitina en acetato de isobutilo cuando se completa a temperaturas reducidas de aproximadamente -21°C.

Por consiguiente, en el contexto de los procedimientos para preparar fenilacetato de L-ornitina descritos anteriormente, el procedimiento puede producir la Forma III utilizando disolventes y métodos de aislamiento particulares. Por ejemplo, el fenilacetato de L-ornitina se puede formar dentro de una mezcla de acetona y agua, y posteriormente se puede colocar en un entorno frío de aproximadamente -21°C para producir la Forma III.

La FIGURA 11 muestra la estructura cristalina de la Forma III determinada por XRPD. La Forma III, que se puede obtener mediante los métodos descritos anteriormente, presenta picos característicos a aproximadamente 5,8°, 14,1°, 18,6°, 19,4°, 22,3° y 24,8° 20. Por lo tanto, la forma cristalina III del fenilacetato de L-ornitina puede tener uno o más picos característicos (p. ej., uno, dos, tres, cuatro, cinco o seis picos característicos) seleccionados entre aproximadamente 5,8°, 14,1°, 18,6°, 19,4°, 22,3° y 24,8° 20.

La FIGURA 12 muestra los resultados obtenidos por calorimetría diferencial de barrido (DSC) para la Forma III. Estos resultados indican un punto de fusión de aproximadamente 203°C, que es aproximadamente el mismo que los puntos de fusión para la Forma I y la Forma II. Adicionalmente, la Forma III muestra una endoterma a aproximadamente 40°C. La Forma III también se analizó utilizando TG/DTA, como se muestra en la FIGURA 13, y no muestra una pérdida de peso significativa antes del punto de fusión. Por lo tanto, la forma III se puede caracterizar como anhidra. El punto de fusión de aproximadamente 203°C también se pudo observar mediante pruebas de TGA. Típicamente, la forma cristalina III de fenilacetato de L-ornitina muestra un punto de fusión de aproximadamente 203°C. La forma cristalina III de fenilacetato de L-ornitina se puede caracterizar por calorimetría diferencial de barrido que tiene una endoterma a aproximadamente 40°C. Típicamente, la forma cristalina III de fenilacetato de L-ornitina es anhidra.

Un estudio de estabilidad de 7 días de la Forma III a 40°C/75% HR indicó que se produjo una transformación a la Forma II en estas condiciones. En contraste, la Forma II es estable a temperaturas elevadas, con o sin vacío, durante períodos de 7 o 10 días. En consecuencia, la Forma III es probablemente metaestable, pero más estable que la Forma I.

La FIGURA 14 muestra integrales de resonancia magnética nuclear (RMN) y desplazamientos químicos para la Forma III. Las integrales confirman la presencia de fenilacetato de L-ornitina: 7,5 (CH aromático), 3,8 (CH adyacente a NH2), 3,6 (unidad CH2 de acetato de fenilo), 3,15 (CH2 adyacente a NH2) y 1,9 (unidades de CH2 alifáticas) ppm (integrales: 5:1:2:2:4 protones; 4,2, 0,8, 1,7, 1,7, 3,0). Los protones de amina y los protones de hidroxilo no se observaron debido al intercambio de protones tanto en el zwitterión como en el sitio de formación de la sal. Mientras tanto, la FIGURA 15 muestra resultados de sorción dinámica de vapores (DVS) para la Forma III, y muestra una absorción de agua de aproximadamente 2,0% en peso. Los resultados de XRPD después del análisis DVS (no mostrado) confirman que la Forma III no realizó la transición a una forma polimórfica diferente. Por lo tanto, la Forma III muestra una mayor absorción de agua en comparación con las Formas I y II; sin embargo, la Forma III todavía se caracteriza como no higroscópica y estable en un amplio intervalo de humedad a temperatura ambiente.

Forma V

Las condiciones precisas para formar la Forma cristalina V se pueden determinar empíricamente y solo es posible proporcionar una serie de métodos que se han encontrado adecuados en la práctica.

Así, por ejemplo, la Forma V se puede obtener colocando una solución saturada de fenilacetato de L-ornitina en un entorno de temperatura enfriada de aproximadamente -21°C, donde la solución es ciclohexanona. Como otro ejemplo, la misma solución saturada puede producir la Forma V cuando se evapora el disolvente.

La forma V también se forma a partir de soluciones saturadas de fenilacetato de L-ornitina que tienen diisopropil éter como disolvente. Por ejemplo, una solución saturada que tiene una razón de disolvente de aproximadamente 1 con respecto a 2 de diisopropil éter e IPA producirá la Forma V cuando se coloca en un entorno de temperatura enfriada de aproximadamente 4°C. De manera similar, una solución que tiene solo el disolvente diisopropil éter puede producir la Forma V cuando se coloca en un entorno de temperatura enfriada de aproximadamente -21°C.

La FIGURA 16 muestra la estructura cristalina de la Forma V determinada por XRPD. La Forma V, que se puede obtener mediante los métodos descritos anteriormente, presenta picos característicos a aproximadamente 13,7°, 17,4°, 19,8°, 20,6° y 23,7° 20. La forma cristalina V del fenilacetato de L-ornitina puede tener uno o más picos característicos (p. ej., uno, dos, tres, cuatro o cinco picos característicos) seleccionados entre aproximadamente 13,7°, 17,4°, 19,8°, 20,6° y 23,7° 20.

La FIGURA 17 muestra los resultados obtenidos por calorimetría diferencial de barrido (DSC) para la Forma V. Estos resultados indican un punto de fusión de aproximadamente 196°C, que está por debajo del punto de fusión de otras formas. La Forma V también muestra una endoterma a aproximadamente 174°C. La Forma V también se analizó utilizando análisis gravimétrico térmico (TGA), como se muestra en la FIGURA 18, y no muestra una pérdida de peso significativa antes del punto de fusión. Por lo tanto, la forma V se puede caracterizar como anhidra. El punto de fusión de aproximadamente 196°C también se pudo observar mediante pruebas de TGA. Típicamente, la forma cristalina V del fenilacetato de L-ornitina muestra un punto de fusión de aproximadamente 196°C. Típicamente, la forma cristalina V del fenilacetato de L-ornitina se caracteriza por una calorimetría diferencial de barrido que tiene una endoterma a aproximadamente 174°C. La forma cristalina V del fenilacetato de L-ornitina es típicamente anhidra.

La FIGURA 19 muestra integrales de resonancia magnética nuclear (RMN) y desplazamientos químicos para la Forma V. Las integrales confirman la presencia de fenilacetato de L-ornitina: 7,5 (CH aromático), 3,8 (CH adyacente a NH2), 3,6 (unidad CH2 de acetato de fenilo), 3,15 (CH2 adyacente a NH2) y 1,9 (unidades de CH2 alifáticas) ppm (integrales: protones 5:1:2:2:4 protones; 4,2, 0,8, 1,7, 1,7, 3,0). Los protones de amina y los protones de hidroxilo no se observaron debido al intercambio de protones tanto en el zwitterión como en el sitio de formación de la sal. Mientras tanto, la FIGURA 19 muestra resultados de sorción dinámica de vapores (DVS) para la Forma V, y muestra una absorción de agua de aproximadamente 0,75% en peso. Los resultados de XRPD después del análisis DVS (no mostrado) sugieren que la Forma V realizó una transición a la Forma II, pero la composición química no cambió. Por lo tanto, la Forma V se caracteriza como no higroscópica, pero no estable en un amplio intervalo de humedad.

Un estudio de estabilidad de 7 días de la Forma V a 40°C/75% HR indicó que se produjo una transformación a la Forma II en estas condiciones; sin embargo, la composición química no cambió. En consecuencia, es muy probable que la Forma V sea metaestable.

Métodos para Tratar la Descompensación Hepática o la Encefalopatía Hepática

El fenilacetato de L-ornitina, y en consecuencia cualquiera de las composiciones de fenilacetato de L-ornitina descritas en la presente memoria, se pueden administrar a un sujeto para tratar o mejorar la aparición de descompensación hepática o encefalopatía hepática. El fenilacetato de L-ornitina se puede administrar para mejorar la afección de un sujeto, por ejemplo, un sujeto que padece una enfermedad hepática crónica después de un evento precipitante. Como otro ejemplo, el fenilacetato de L-ornitina se puede administrar para combatir o retrasar la aparición de descompensación hepática o encefalopatía hepática.

El fenilacetato de L-ornitina se puede administrar combinado a un sujeto para el tratamiento de la encefalopatía hepática. El fenilacetato de L-ornitina se puede administrar para mejorar la afección de un paciente que padece encefalopatía hepática. El fenilacetato de L-ornitina se puede administrar para aliviar los síntomas asociados con la encefalopatía hepática. El fenilacetato de L-ornitina se puede administrar para combatir la encefalopatía hepática. El fenilacetato de L-ornitina se puede administrar para prevenir o reducir la probabilidad de un episodio de encefalopatía hepática inicial en una persona en riesgo de episodios de encefalopatía hepática. El fenilacetato de L-ornitina se puede administrar para disminuir la gravedad de un episodio de encefalopatía hepática inicial en una persona en riesgo de episodios de encefalopatía hepática. El fenilacetato de L-ornitina se puede administrar para retrasar un episodio de encefalopatía hepática inicial en una persona en riesgo de episodios de encefalopatía hepática.

El desarrollo de descompensación hepática y encefalopatía hepática comúnmente implica "eventos precipitantes" (o "ataques agudos"). Tales eventos precipitantes incluyen sangrado gastrointestinal, infección (sepsis), trombosis de la vena porta y deshidratación. Es probable que el inicio de un ataque tan agudo conduzca a la hospitalización. El paciente puede sufrir uno de estos ataques agudos o una combinación de estos ataques agudos.

Un sujeto que ha tenido o se sospecha que ha tenido un ataque agudo es tratado de acuerdo con la invención con fenilacetato de L-ornitina para prevenir o reducir la probabilidad de progresión del hígado al estado descompensado. En consecuencia, el fenilacetato de L-ornitina puede prevenir o reducir la probabilidad de las consecuencias médicas de la descompensación hepática, tales como la encefalopatía hepática. El fenilacetato de L-ornitina se puede utilizar para preservar la función hepática. El uso de fenilacetato de L-ornitina puede prolongar la vida de un paciente con enfermedad hepática. En una realización, se evitan las consecuencias metabólicas de un sangrado gastrointestinal tal como hiperamonemia, hipoisoleucemia y reducción de la síntesis de proteínas en el período posterior al sangrado.

Por lo general, el tratamiento de los sujetos puede comenzar lo antes posible después del inicio o la sospecha de un evento precipitante (ataque agudo). Preferiblemente, el tratamiento del sujeto comienza antes de los ataques agudos repetidos. Más preferiblemente, el tratamiento del sujeto comienza después del primer ataque agudo. Por lo tanto, en algunas realizaciones, el sujeto tratado con fenilacetato de L-ornitina se identifica como el inicio o la sospecha de un evento precipitante (ataque agudo).

El tratamiento generalmente se administra inmediatamente después del inicio de un ataque agudo. El tratamiento puede comenzar después de que se hayan detectado los síntomas de un ataque agudo o sospecha de ataque agudo, p. ej. por un médico tal como un facultativo, un paramédico o una enfermera. El tratamiento puede comenzar con la hospitalización del sujeto. Por lo tanto, el tratamiento puede comenzar en el plazo de 6 horas, en el plazo de 3 horas, en el plazo de 2 horas o en el plazo de 1 hora después de que se hayan detectado los síntomas de un ataque agudo o sospecha de ataque agudo. Por lo tanto, el tratamiento del sujeto puede comenzar de 1 a 48 horas, por ejemplo, de 1 a 36 horas o de 1 a 24 horas después de que se hayan detectado los síntomas de un ataque agudo o sospecha de ataque agudo.

El tratamiento puede producirse hasta durante 8 semanas, por ejemplo hasta 6 semanas, hasta 4 semanas o hasta 2 semanas después de que se hayan detectado los síntomas de un ataque agudo o sospecha de ataque agudo. Por lo tanto, el tratamiento puede producirse hasta 48 horas, por ejemplo, hasta 36 horas o hasta 24 horas después de que se hayan detectado los síntomas de un ataque agudo o sospecha de ataque agudo. Típicamente, el tratamiento se produce cuando la recuperación del evento precipitante agudo es evidente.

El fenilacetato de L-ornitina también se puede utilizar para tratar o mejorar la hiperamonemia. Por lo tanto, el fenilacetato de L-ornitina se puede administrar a pacientes identificados con niveles excesivos de amoníaco en la sangre, o pacientes que muestran síntomas de exceso de amoníaco en la sangre. El fenilacetato de L-ornitina también se puede administrar para reducir el riesgo de hiperamonemia. En algunas realizaciones, el fenilacetato de L-ornitina se puede administrar diariamente, durante un período de tiempo indefinido. Por ejemplo, las dosis diarias se pueden administrar durante la vida del paciente, o hasta que un facultativo determine que el paciente ya no presenta un riesgo de hiperamonemia. En algunas realizaciones, se administra una cantidad terapéuticamente eficaz de fenilacetato de L-ornitina para reducir el riesgo de hiperamonemia. En algunas realizaciones, se administra una cantidad terapéuticamente eficaz de fenilacetato de L-ornitina por vía oral para la profilaxis de la hiperamonemia. Una cantidad terapéuticamente eficaz de fenilacetato de L-ornitina se administra al sujeto. Como será fácilmente evidente para un experto en la técnica, la dosificación in vivo útil que se va a administrar y el modo particular de administración variarán dependiendo de la edad, el peso, la gravedad de la afección y las especies de mamíferos tratadas, los compuestos particulares empleados y el uso específico para el que se emplean estos compuestos. (Véase p. ej., Fingl et al. 1975, en "The Pharmacological Basis of Therapeutics", con particular referencia al cap. 1, pág. 1). La determinación de los niveles de dosificación eficaces, es decir, los niveles de dosificación necesarios para lograr el resultado deseado, puede ser realizada por un experto en la técnica utilizando métodos farmacológicos de rutina. Típicamente, las aplicaciones clínicas de los productos a los seres humanos se inician a niveles de dosificación más bajos, aumentando el nivel de dosificación hasta que se logra el efecto deseado. Alternativamente, se pueden utilizar estudios in vitro aceptables para establecer dosis y vías de administración útiles de las composiciones identificadas por los presentes métodos utilizando métodos farmacológicos establecidos. Una dosis típica de fenilacetato de L-ornitina puede ser de aproximadamente 0,02 a aproximadamente 1,25 g/kg de peso corporal (preferiblemente de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 0,6 g/kg de peso corporal). Por lo tanto, una dosificación puede ser de aproximadamente 500 mg a aproximadamente 50 g (preferiblemente de aproximadamente 5 g a aproximadamente 40 g, y más preferiblemente de aproximadamente 10 g a aproximadamente 30 g).

Se puede administrar una dosis diaria única. Alternativamente, se pueden administrar dosis múltiples, por ejemplo, dos, tres, cuatro o cinco dosis. Tales dosis múltiples se pueden administrar durante un período de un mes o dos semanas o una semana. En algunas realizaciones, se pueden administrar diariamente una dosis única o dosis múltiples tales como dos, tres, cuatro o cinco dosis.

Ejemplos y Métodos Experimentales

Se describen realizaciones adicionales con más detalle en los siguientes ejemplos. Las realizaciones que quedan fuera del alcance de las reivindicaciones se incluyen con fines de referencia.

Difracción de Rayos X de Polvo (XRPD)

El análisis XRPD se realizó en un Bruker D8 Advance o Seimens D5000, barriendo las muestras entre 4° y 50° 20. En realizaciones que utilizan el dispositivo Bruker D8, se comprimieron suavemente aproximadamente 5 mg de una muestra en el soporte de muestra de placa de 96 pocillos para XRPD con fondo cero. La muestra se cargó a continuación en un difractómetro Bruker D8-Discover en modo de transmisión y se analizó utilizando las siguientes condiciones experimentales.

En realizaciones que utilizan el dispositivo Seimens D5000, se comprimieron suavemente aproximadamente 5 mg de muestra sobre un portaobjetos de vidrio que contenía una capa delgada de grasa de retención. La muestra se cargó a continuación en un difractómetro Seimens D5000 que funcionaba en modo de reflexión y se analizó, mientras giraba, utilizando las siguientes condiciones experimentales.

Difracción de Rayos X de Cristal Único (SXRD)

Todas las mediciones se llevaron a cabo utilizando un difractómetro Bruker Smart Apex que funciona con radiación Mo-Ka. A menos que se especifique lo contrario, los datos se obtuvieron en 60 imágenes de 10 s con un barrido u>-60- recogidas en tres configuraciones separadas de 20 y $.

Calorimetría Diferencial de Barrido (DSC)

Se pesaron aproximadamente 5 mg de muestra en una bandeja para DSC de aluminio y se sellaron con una tapa de aluminio perforada (no herméticamente). La bandeja de muestra se cargó a continuación en un DSC6200 Seiko (equipado con un enfriador), se enfrió y se mantuvo a 25°C. Una vez que se obtuvo una respuesta de flujo de calor estable, la muestra y la referencia se calentaron a aproximadamente 250°C a una velocidad de barrido de 10°C/min y se controló la respuesta de flujo de calor resultante. Antes del análisis, se calibraron la temperatura y el flujo de calor del aparato utilizando un patrón de referencia de indio. El soporte lógico de medición Muse realizó el análisis de la muestra donde las temperaturas de los eventos térmicos se citaron como la temperatura de inicio, medida de acuerdo con las especificaciones del fabricante.

Análisis Termogravimétrico Gravimétrico/Térmico Diferencial (TG/DTA)

Se pesaron aproximadamente 5 mg de muestra en una bandeja de aluminio y se cargaron en un analizador termogravimétrico/térmico diferencial simultáneo (DTA) y se mantuvieron a temperatura ambiente. La muestra se calentó a continuación a una velocidad de 10°C/min de 25°C a 300°C, tiempo durante el cual se controló el cambio en el peso de la muestra junto con cualquier evento térmico (DTA). Se utilizó nitrógeno como gas de purga, a una velocidad de flujo de 20 cm3/ min. Antes del análisis, se calibraron el peso y la temperatura en el aparato utilizando un peso de referencia de 100 mg y un patrón de referencia de indio, respectivamente.

Sorción Dinámica de Vapor (DVS)

Se colocaron aproximadamente 10 mg de muestra en un plato de balanza de sorción de vapor de malla de alambre y se cargaron en una balanza de sorción dinámica de vapores DVS-1 suministrada por Scientific and Medical Systems (SMS). La muestra se secó a continuación manteniendo un entorno de 0% de humedad hasta que no se registraron más cambios de peso. Después, la muestra se sometió a un perfil ascendente de 0 - 90% de humedad relativa (HR) en incrementos de 10%, manteniendo la muestra en cada etapa hasta que se había logrado un peso estable (99,5% de finalización de la etapa). Después de completar el ciclo de sorción, la muestra se secó utilizando el mismo procedimiento. Después se trazó el cambio de peso durante los ciclos de sorción/desorción, lo que permitió determinar la naturaleza higroscópica de la muestra.

Resonancia Magnética Nuclear H1 (RMN)

Se realizó la RMN H1 en un Bruker AC200. Se realizó una RMN de cada muestra en d-H2O y cada muestra se preparó a una concentración de aproximadamente 5 mg. Los espectros de RMN para el benzoato de L-ornitina y el fenilacetato de L-ornitina se proporcionan en las Figuras 21 y 22, respectivamente.

Aproximaciones de Solubilidad

Aproximadamente, se colocaron porciones de 25 mg de la muestra en viales. Se añadieron incrementos de 5 volúmenes del sistema disolvente apropiado. Entre cada adición, se verificó la disolución de la mezcla y, si no era evidente la disolución, la mezcla se calentaba a 50°C y se volvía a verificar. El procedimiento continuó hasta que se observó la disolución o cuando se añadieron 100 volúmenes de disolvente.

Determinaciones de Solubilidad por HPLC

Se prepararon suspensiones de cada disolvente y las muestras se agitaron durante aproximadamente 48 horas a 25°C. Después se extrajo cada muestra a través de un filtro, y el producto filtrado se transfirió a un vial de HPLC para su análisis. A partir de los datos se determinó la solubilidad del fenilacetato de L-ornitina para cada disolvente.

Experimentos de Ciclo de Temperatura

Utilizando la información obtenida de las aproximaciones de solubilidad, se prepararon suspensiones de la muestra en 24 sistemas de disolventes seleccionados. Las suspensiones se sometieron a ciclos de temperatura a 40°C o 25°C en ciclos de 4 horas durante un período de 72 horas. Los sólidos se verificaron visualmente para detectar signos obvios de degradación (es decir, cambios de color) y después, si no se habían degradado, se aislaron por filtración. Los sólidos se dejaron secar en condiciones ambientales durante aproximadamente 24 horas antes del análisis.

Experimentos de Enfriamiento Acelerado

Los experimentos de enfriamiento acelerado se realizaron colocando soluciones saturadas de la muestra, en los 24 sistemas de disolventes seleccionados, en entornos de 4°C y -21°C durante aproximadamente 48 horas. Se recuperó cualquier material sólido y los sólidos se dejaron secar en condiciones ambientales durante aproximadamente 24 horas antes del análisis.

Experimentos de Evaporación

Los experimentos de evaporación se realizaron permitiendo que las soluciones saturadas de la muestra se evaporaran libremente en condiciones ambientales. El material sólido se recuperó después de que el material se hubiera evaporado hasta sequedad y se analizó.

Experimentos de Adición de Anti-disolvente

Los experimentos de adición de anti-disolvente se realizaron mediante la adición de anti-disolvente a soluciones saturadas de la muestra. La adición continuó hasta que no hubo más precipitación y las muestras se ajustaron a varias temperaturas durante 24 horas: elevada, ambiente, 4°C o -21°. El sólido se aisló a continuación y se secó en condiciones ambientales durante aproximadamente 24 horas antes del análisis.

Microscopía de Luz Polarizada (PLM)

La presencia de cristalinidad (birrefringencia) se determinó utilizando un microscopio óptico polarizado DMRB Leica Leitz equipado con una cámara Leica de alta resolución y un soporte lógico de captura de imágenes (Firecam V.1.0). Todas las imágenes se grabaron con un objetivo de 10x, a menos que se indique lo contrario.

Análisis de Plata

Todos los análisis de plata se llevaron a cabo en un Agilent 7500ce ICP-MS.

Tasas de Disolución Intrínseca

Se comprimieron aproximadamente 100 mg de cada forma en discos colocando el material en un troquel (diámetro 12 mm) y comprimiendo la matriz bajo 5 toneladas de presión en una prensa hidráulica durante aproximadamente 2 minutos. En el aparato de disolución, Sotax AT7 se ajusta a EP2 y USP2, se utilizaron paletas para agitar los medios. Cada forma se sometió a prueba en las siguientes condiciones de pH; 1,0, 4,5 y 6,7, en el modo de disco estacionario (es decir, se añadieron discos en el tiempo = 0 segundos y se dejó que se hundieran en la parte inferior del medio). Se extrajeron alícuotas de 1 cm3 de los medios de los recipientes de disolución en tiempos de 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 y 120 segundos y se sometieron a prueba para determinar la concentración de API por medio de HPLC. Se trazaron curvas de disolución y a partir de los primeros 6 o 7 puntos en las curvas se calcularon las curvas de velocidad de disolución intrínseca. Todas las pruebas se llevaron a cabo a 37°C y a una velocidad de paleta de 150 rpm.

Detalles del Aparato HPLC-UV

Cromatografía en Capa Fina (TLC)

Se aplicó un pequeño punto de solución que contenía la muestra a una placa, aproximadamente a un centímetro de la base. Después se sumergió la placa en el tanque de TLC (recipiente sellado) que contenía la mezcla de solventes metanol:acetato de etilo (95:5). El disolvente se movió hacia la parte superior de la placa por acción capilar y se encontró con la mezcla de muestra, que se disolvió y fue llevada hacia arriba por la mezcla de disolventes. Se anotó el número de puntos y se calcularon los valores de Rf para cada punto.

Infrarrojo (IR)

La espectroscopía de infrarrojos se realizó en un espectrómetro ALPHA P de Bruker. Se colocó suficiente material en el centro de la placa del espectrómetro se obtuvieron los es ectros utilizando los siguientes parámetros:

Estudios de Estabilidad: Entornos a pH 1, 4, 7,10 y 14

Se prepararon suspensiones (solución sobresaturada: se añadieron aproximadamente 250 pl de solución de pH y sólido hasta que ya no se observó la disolución y había aproximadamente 100 mg de sólido en la suspensión) para cada forma en una variedad de entornos de pH; 1, 4, 7, 10 y 13,2. Las suspensiones se agitaron constantemente durante un período de 14 días y se tomaron medidas en puntos temporales de 7 y 14 días. Se prepararon tampones apropiados para cada pH y se detallan más adelante.

Se preparó un tampón que tenía un valor de pH de 1 disolviendo 372,75 mg de cloruro de potasio en 25 ml de agua desionizada para proporcionar una solución 0,2 M. Posteriormente, se añadieron 67 ml de ácido clorhídrico 0,2 M (este se preparó a partir de una solución 5 M; se añadieron 10 ml a 40 ml de agua desionizada proporcionando una solución 1 M que se diluyó más; se añadieron 20 ml a 80 ml de agua desionizada proporcionando la solución requerida 0,2 M) para lograr el pH deseado.

Se preparó un tampón con un valor de pH de 4 disolviendo 1,02 g de hidrogenoftalato de potasio en 50 ml de agua desionizada para proporcionar una solución 0,1 M.

Se preparó un tampón con un valor de pH de 7 disolviendo 680,00 mg de fosfato de potasio monobásico en 50 ml de agua desionizada para proporcionar una solución 0,1 M. Posteriormente, se añadieron 29,1 ml de hidróxido de sodio 0,1 M (este se preparó a partir de una solución 1 M; se añadieron 5 ml a 45 ml de agua desionizada proporcionando la solución 0,1 M requerida) para lograr el pH deseado.

Se preparó un tampón con un valor de pH de 10 disolviendo 210,00 mg de bicarbonato de sodio en 50 ml de agua desionizada para proporcionar una solución 0,05 M. Posteriormente, se añadieron 10,7 ml de hidróxido de sodio 0.1 M (este se preparó a partir de una solución 1 M; se añadieron 5 ml a 45 ml de agua desionizada proporcionando la solución 0,1 M requerida) para lograr el pH deseado.

Se preparó un tampón con un valor de pH de 13,2 disolviendo 372,75 mg de cloruro de potasio en 25 ml de agua desionizada para proporcionar una solución 0,2 M. Posteriormente, se añadieron 66 ml de hidróxido de sodio 0,2 M (este se preparó a partir de una solución 1 M; se añadieron 20 ml a 80 ml de agua desionizada proporcionando la solución 0,2 M requerida) llevando el pH a 13. Después se añadió gota a gota hidróxido de sodio 1 M para lograr el pH deseado.

Ejemplo 1: Precipitación de Formas Cristalinas

Se sometieron soluciones saturadas de fenilacetato de L-ornitina a ciclos de temperatura, enfriamiento acelerado, evaporación o adición de anti-disolvente como se describió anteriormente. El producto precipitado se analizó mediante PLM y XRPD para determinar la forma cristalina (si la hubiera). Los resultados se resumen en la TABLA 5. Se identificaron seis formas cristalinas únicas a partir de los estudios de precipitación, las Formas I-VI. Sin embargo, las Formas IV y VI se obtuvieron de soluciones de ácido acético, y los resultados de RMN confirmaron que estas formas eran acetato de L-ornitina. Mientras tanto, las Pruebas 540-611 utilizaron muestras de fenilacetato de L-ornitina originalmente aisladas mediante la adición del anti-disolvente etanol. Muchos de estos ejemplos produjeron la Forma I, que es un solvato de etanol, y por lo tanto se cree que estas muestras originalmente incluían etanol residual. En consecuencia, La Forma I no se puede reproducir para ciertas condiciones si la muestra original no incluye etanol residual.

TABLA 5 - Eem los de re aración de formas cristalinas

Ejemplo 2: Estudios de disolución intrínseca

Las tasas de disolución intrínseca para las Formas I, II y III se midieron en condiciones de pH de 1,0, 4,5 y 6,7. Los resultados se reproducen a continuación en la TABLA 6. En cada caso, se logró la disolución completa en menos de 3 minutos. Sorprendentemente, se observó una dependencia del pH para la Forma II; aumentando la velocidad de disolución intrínseca con el pH. En contraste, las Formas I y III parecen disolverse a velocidades independientes del pH.

TABLA 6 - Tasas calculadas de disolución intrínseca (mg/cm2/ s)

Ejemplo 3: Estudios de Solubilidad

Se realizó una aproximación a la solubilidad del fenilacetato de L-ornitina de acuerdo con los métodos descritos anteriormente. Se sometieron a prueba 24 sistemas de disolventes: 1,4 dioxano, 1-butanol, etanol, acetona, benzonitrilo, ciclohexano, DCM, DMSO, EtOAc, heptano, IPA, IPA (H2O 1%), MeCN, MeCn (H2O 1%), MEK, MeOAc, metanol, MIBK, nitrometano, THF, THF (H2O 1%), tolueno y agua. El fenilacetato de L-ornitina mostró una solubilidad en agua, mientras que el fenilacetato de L-ornitina fue sustancialmente insoluble en los sistemas disolventes restantes.

También se prepararon suspensiones de fenilacetato de L-ornitina en agua y se filtró la suspensión. La concentración del producto filtrado se analizó por medio de HPLC, y los resultados muestran que la solubilidad del fenilacetato de L-ornitina es de aproximadamente 1,072 mg/mL.

Las determinaciones de solubilidad por medio de HPLC también se completaron para cinco disolventes: etanol, acetona, metanol, DMSO e IPA. Estos resultados se resumen en la TABLA 7.

TABLA 7 - Determinaciones de solubilidad or HPLC

Estos resultados indican que tanto la acetona como el IPA son adecuados como anti-disolventes para precipitar el fenilacetato de L-ornitina. Por el contrario, los disolventes con solubilidad medible son menos favorables para precipitar formas cristalinas de fenilacetato de L-ornitina.

Finalmente, la solubilidad del fenilacetato de L-ornitina se determinó en varias mezclas de IPA y agua utilizando HPLC. Los resultados se muestran en la TABLA 8.

TABLA 8 - Determinaciones de solubilidad or HPLC IPA/Agua)

Ejemplo 4: Procedimiento por Lotes a Pequeña Escala para Producir Fenilacetato de L-Ornitina

Se disolvieron aproximadamente 8,4 g (0,049 moles) de HCl de L-ornitina en 42 mL de H2O y, por separado, se disolvieron aproximadamente 11,4 g de benzoato de plata en 57 mL de DMSO. Posteriormente, la solución de benzoato de plata se añadió a la solución de HCl de L-ornitina. La combinación de las dos mezclas dio como resultado una precipitación exotérmica inmediata de un sólido de color blanco cremoso (AgCl). El sólido se eliminó por filtración a vacío y reteniendo el producto filtrado (benzoato de L-ornitina en solución). Se añadieron 200 mL de IPA al producto filtrado y la mezcla se enfrió a 4°C. Aproximadamente después de 3 horas) precipitó un sólido cristalino (benzoato de L-ornitina) que se aisló por filtración a vacío. Rendimiento: 60%

Se disolvieron 7,6 g (0,03 moles) del benzoato de L-ornitina en 38 mL de H2O y se disolvieron aproximadamente 4,4 g de fenilacetato de sodio en 22 mL de H2O. Posteriormente, la solución de fenilacetato de sodio se añadió a la solución de benzoato de L-ornitina y se dejó agitando durante aproximadamente 10 minutos. Se añadieron aproximadamente 240 mL de IPA (IPA:H2O 8:2) y la solución se agitó durante 30 minutos antes de enfriar a 4°C. Un sólido cristalino precipitó después de aproximadamente 3 horas a 4°C (fenilacetato de L-ornitina). El producto precipitado se aisló por filtración a vacío y se lavó con 48-144 mL de IPA. Rendimiento: 57%

Ejemplo 5: Procedimiento por Lotes a Gran Escala para Producir Fenilacetato de L-Ornitina

Se prepararon dos lotes separados de fenilacetato de L-ornitina como sigue:

Se disolvieron aproximadamente 75 kg de monohidrocloruro de L-ornitina en 227 kg de agua. A la solución resultante se le añadieron 102 kg de benzoato de plata disuelto en 266 kg de DMSO a temperatura ambiente en 2 horas. Inicialmente, se observó una fuerte exotermia y el cloruro de plata precipitó. El receptor que contenía la solución se lavó a continuación con 14 kg de DMSO que se añadió a la masa de reacción. Para eliminar el cloruro de plata formado, la masa de reacción se filtró sobre un filtro de lente preparado con 10 kg de Celite y un filtro GAF de 1 mm. Después de la filtración, el filtro se lavó con 75 kg adicionales de agua. La masa de reacción se calentó luego a 35 ± 2°C y se añadieron 80 kg de fenilacetato de sodio. En este punto, la masa de reacción se agitó a 35 ± 2°C durante al menos 30 minutos.

Para precipitar el API final, se añadieron 353 kg de alcohol isopropílico a la masa de reacción. La masa de reacción se enfrió después a 0 ± 3°C en 6 horas, se agitó durante 1 hora y a continuación el producto se aisló en una centrífuga.

Se obtuvieron aproximadamente 86 kg de producto húmedo terminado. Después, el producto se secó a 40 ± 5°C durante aproximadamente 6,5 a 8 horas para proporcionar aproximadamente 75 kg de fenilacetato de L-ornitina. Rendimiento: 63,25. La TABLA 9 resume las mediciones relacionadas con el producto final.

TABLA 9 - Resultados analíticos ara el rocedimiento or lotes a gran escala

Ejemplo 6: Reducción del Contenido de Plata en el Fenilacetato de L-Ornitina

El Lote 2 del Ejemplo 5 mostró altas cantidades de plata (157 ppm) y, por lo tanto, se sometieron a prueba los procedimientos para reducir el contenido de plata. Se completaron nueve ensayos; cada uno generalmente incluía la disolución de aproximadamente 20 g de fenilacetato de L-ornitina del Lote 2 en 1,9 partes de agua, y después añadiendo 10,8 partes de IPA. Se aisló una forma cristalina a 0°C por filtración.

Para cuatro ensayos, se añadieron 8,0 mg u 80 mg de captadores de metales pesados SMOPEX 102 o SMOPEX 112 a la solución acuosa y se agitaron durante 2 horas. Los captadores no lograron reducir el contenido de plata por debajo de 126 ppm. Mientras tanto, otro ensayo aplicó las condiciones generales descritas anteriormente y redujo el contenido de plata a 179 ppm. En otro ensayo más, el fenilacetato de L-ornitina se suspendió en una solución de IPA, en lugar de cristalizarse; sin embargo, este ensayo tampoco logró reducir el contenido de plata por debajo de 144 ppm.

Los últimos tres ensayos incluyeron la adición de HCl diluido a la solución para precipitar la cantidad restante de plata en forma de AgCl. A continuación el producto precipitado se eliminó por filtración. Los tres ensayos incluyeron la adición de: (1) 1,0 g de HCl al 0,33% a 20°C; (2) 1,0 g de HCl al 0,33% a 30°C; y (3) 0,1 g de HCl al 3,3% a 20°C. Los tres ensayos redujeron el contenido de plata a 30 ppm, 42 ppm y 33 ppm, respectivamente, y cada ensayo produjo más de 90% de fenilacetato de L-ornitina. En consecuencia, la adición de HCl fue eficaz para reducir la cantidad de plata residual.

Ejemplo 6: Procedimiento para la Preparación de Fenilacetato de L-Ornitina sin una Sal Intermedia Como procedimiento general, el hidrocloruro de L-ornitina se suspendió en un disolvente. Después de eso, la masa de reacción se calentó y se añadió una base, metóxido de sodio. Se formó NaCl y se eliminó del sistema por filtración. La masa de reacción se enfrió y se añadió un equivalente molar de ácido fenilacético a la masa de reacción para formar fenilacetato de L-ornitina. El producto final se aisló, se lavó y se secó. En la TABLA 10 se proporciona un resumen del ensayo para este procedimiento.

TABLA 10 - Ensa os del Procedimiento

Se encontró que el fenilacetato de L-ornitina resultante mostraba altas cantidades de cloruro (al menos aproximadamente 1% en peso), y presumiblemente incluía cantidades similares de sodio. Los rendimientos fueron aproximadamente de 50% para los ensayos 2, 4 y 5.

Ejemplo 7: Estudios de Estabilidad Térmica de las Formas I, II y III

Las muestras de las Formas I, II y III se almacenaron a mayores temperaturas y en las condiciones designadas como se describe en la TABLA 11. Se aplicó un vacío de 4,137 x 106 Pa (600 psi) (en donde 6894,76 Pa equivalen a 1 psi) para lograr una presión reducida. Las composiciones finales se sometieron a prueba por medio XRP^d , NMR, IR y HPLC para determinar cualquier cambio en el material.

En particular, la Forma III no hace la transición a la Forma II a vacío a 120°C, sino que presenta una mayor degradación química en comparación con las Formas I y II en estas condiciones. Mientras tanto, la Forma III se convierte en la Forma II y muestra una degradación química sustancial a 120°C sin vacío.

La Forma I se convirtió en la Forma II en todos los ensayos, pero lo más interesante es que la Forma I muestra una degradación química sustancial a 120°C sin vacío. Por lo tanto, la conversión de la Forma I no muestra la misma estabilidad química que la Forma II, lo cual es sorprendente considerando que el material se convierte fácilmente en la Forma II.

La Forma II fue estable y no se degradó químicamente en todos los ensayos. Por lo tanto, la Forma II es la más estable. Mientras tanto, la Forma III es más estable que la Forma I, pero ambas formas muestran una degradación química sustancial a 120°C sin vacío.

TABLA 11 - Ensa os de Estabilidad Térmica

Los resultados de la HPLC para los ensayos que muestran degradación química (p. ej., el Ensayo 10 de la TABLA 11) se resumen en la TABLA 12. Cada material degradado muestra picos comunes en los tiempos de retención relativa (RRT) de 1,9, 2,2, 2,4 y 2,7, lo que sugiere una vía de degradación común para las diferentes formas.

TABLA 12 - Resultados de HPLC ara Muestras De radadas

Ejemplo 8: Estudios de Estabilidad de Oxígeno de las Formas I, II, y III

Las muestras de las Formas I, II y III se almacenaron en entornos de oxígeno al 100% durante 7 o 14 días y se analizaron por medio de RMN e IR. Los resultados establecen que las Formas I y II no muestran signos de degradación después de 14 días. Solo se completaron los resultados de IR para la Forma III a los 7 días, y estos resultados confirman que no hubo degradación significativa. Los resultados de la TLC para todas las muestras indicaron un punto único con valores de Rf similares.

Ejemplo 9: Estudios de Estabilidad de UV de las Formas I, II, y III

Las muestras de las Formas I, II y III fueron expuestas a la radiación ultravioleta (UV) durante 7 o 14 días. Un CAMAG universal UV Lampe aplicó radiación a las muestras con un ajuste de 254 mp. Los resultados de RMN e IR no muestran degradación de las Formas I y II después de 14 días. De forma similar, la Forma III no presenta degradación después de 7 días según lo determinado por RMN e IR. Los resultados de TLC para todas las muestras indicaron un punto único con valores de Rf similares.

Ejemplo 10: Estudios de Estabilidad del pH de las Formas I, II, y III

Se formó una suspensión de las Formas I, II y III con agua y el valor del pH se ajustó a 1,0, 4,0, 7,0, 10,0 y 13,2. Las suspensiones se almacenaron durante 7 o 14 días, y posteriormente los sólidos se eliminaron por filtración. La Forma I se convirtió en la Forma II en todas las muestras. Los resultados de RMN e IR muestran que las Formas I y II no se degradaron después de 14 días a diferentes pH, y de manera similar los resultados de la HPLC muestran aproximadamente 98% de pureza o más para estas muestras. La Forma III tampoco mostró degradación después de 7 días de acuerdo con los resultados de RMN e IR. Las pruebas de HPLC muestran aproximadamente 95% de pureza o más; sin embargo, los resultados de IR muestran que la Forma III se convertía en la Forma II durante la prueba de 7 días. Los resultados de TLC para todas las muestras indicaron un punto único con valores de Rf similares.

Ejemplo 11: Estudios de Compresión de las Formas I, II, y III

Las muestras de las Formas I, II y III se sometieron a 3 toneladas de fuerza utilizando una prensa hidráulica Moore durante aproximadamente 90 minutos. La masa, el diámetro y el grosor del comprimido resultante se midieron para determinar la densidad. Los comprimidos también se analizaron por RMN e IR. La Forma I pasó a una composición de la Forma II con una densidad de 1,197 kg/m3. La Forma II no mostró una transición y tuvo una densidad final de 1,001 kg/m3. Finalmente, la Forma III no mostró una transición y tuvo una densidad final de 1,078 kg/m3.

Ejemplo 12: Procedimiento para Producir Fenilacetato de L-Ornitina a través de un Acetato Intermedio Disolver 25 mg de HCl de L-ornitina 5 vols de H2O, y a continuación añadir un exceso de ácido acético (aproximadamente 5 vols) para formar una suspensión. Someter la suspensión a ciclos de temperatura entre 25° y 40°C cada 4 horas durante aproximadamente 3 días. Añadir 1 equivalente de ácido fenilacético (con respecto a la L-ornitina) y agitar durante aproximadamente 4-6 horas (posiblemente caliente). Utilizar IPA como anti-disolvente, añadir suficiente para obtener una razón de 70:30 (IPA:H2O) Aislar por filtración a vacío y secar durante aproximadamente 4-8 horas a 80°C para eliminar cualquier ácido acético residual.

Claims (15)

REIVINDICACIONES

1. Una composición que comprende una forma cristalina de fenilacetato de L-ornitina, en donde dicha forma cristalina muestra un patrón de difracción de rayos X de polvo que comprende al menos tres picos característicos, en donde dichos picos característicos se seleccionan del grupo que consiste en 4,9° ± 0,2° 20, 13,2° ± 0,2° 20, 17,4° ± 0,2° 20, 20,8° ± 0,2° 20 y 24,4° ± 0,2° 20.

2. La composición de la Reivindicación 1, en donde dicha forma cristalina muestra un patrón de difracción de rayos X de polvo que comprende picos característicos a 4,9° ± 0,2° 20, 13,2° ± 0,2° 20, 17,4° ± 0,2° 20, 20,8° ± 0,2° 20 y 24,4° ± 0,2° 20.

3. La composición de las Reivindicaciones 1 o 2, en donde dicha forma cristalina comprende moléculas de agua y/o etanol.

4. La composición de la Reivindicación 3, en donde dicha forma cristalina comprende aproximadamente 11% en peso de dichas moléculas de agua y/o etanol según se determina mediante análisis termogravimétrico.

5. La composición de una cualquiera de las Reivindicaciones 1-4, en donde dicha forma cristalina se caracteriza por calorimetría diferencial de barrido que comprende una endoterma a aproximadamente 35°C.

6. La composición de una cualquiera de las Reivindicaciones 1-5, en donde dicha forma cristalina tiene un punto de fusión de aproximadamente 203°C.

7. La composición de una cualquiera de las Reivindicaciones 1-6, en donde dicha forma cristalina muestra un análisis cristalográfico de rayos X de cristal único con parámetros de cristal aproximadamente iguales a los siguientes:

dimensiones de la celda unitaria: a = 5,3652(4) A, b = 7,7136(6) A, c = 20,9602(18) A, a = 90°, p = 94,986(6)°, Y = 90°;

Sistema de Cristal: Monoclínico; y

Grupo Espacial: P2-i.

8. La composición de cualquiera de las Reivindicaciones 1-7, en donde dicha forma cristalina está representada por la fórmula [C5H13N2O2][C8HyO2]EtOH.H2O.

9. La composición de una cualquiera de las Reivindicaciones 1-8, que comprende al menos aproximadamente 50% en peso de una forma cristalina de fenilacetato de L-ornitina.

10. La composición de la Reivindicación 9, en donde la composición comprende:

al menos aproximadamente 0,01% en peso de ácido benzoico o una sal del mismo, preferiblemente al menos aproximadamente 0,10% en peso de ácido benzoico o una sal del mismo; y/o

no más de aproximadamente 5% en peso de ácido benzoico o una sal del mismo, preferiblemente no más de aproximadamente 1% en peso de ácido benzoico o una sal del mismo.

11. La composición de la Reivindicación 9 o 10, en donde la composición comprende adicionalmente:

al menos aproximadamente 10 ppm de plata, preferiblemente al menos aproximadamente 20 ppm de plata, más preferiblemente al menos aproximadamente 25 ppm de plata; y/o

no más de aproximadamente 600 ppm de plata, preferiblemente no más de aproximadamente 100 ppm de plata, más preferiblemente no más de aproximadamente 65 ppm de plata.

12. La composición de una cualquiera de las Reivindicaciones 9-11, en donde 50 mg/mL de dicha composición en agua resultan isotónicos con los fluidos corporales.

13. La composición de una cualquiera de las Reivindicaciones 1-12, para su uso en el tratamiento o la mejora de la hiperamonemia en un sujeto.

14. La composición de la Reivindicación 13, en donde el sujeto tiene encefalopatía hepática o hiperamonemia.

15. Un método para comprimir fenilacetato de L-ornitina, que comprende aplicar una presión de al menos 3,45 x 106 Pa (500 psi) (en donde 6894,76 Pa equivalen a 1 psi) a una forma metaestable de fenilacetato de L-ornitina para inducir un cambio de fase, en donde la forma metaestable del fenilacetato de L-ornitina muestra un patrón de difracción de rayos X de polvo que comprende al menos tres picos característicos seleccionados del grupo que consiste en 4,9° ± 0,2° 20, 13,2° ± 0,2° 20, 17,4° ± 0,2° 20, 20,8° ± 0,2° 20 y 24,4° ± 0,2° 20, y en donde el cambio de fase produce una composición que muestra un patrón de difracción de rayos X de polvo que comprende al menos tres picos característicos seleccionados del grupo que consiste en 6,0° ± 0,2° 20, 13,9° ± 0,2° 20, 14,8° ± 0,2° 20, 17,1° ± 0,2° 20, 17,8° ± 0,2° 20 y 24,1° ± 0,2° 20.

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