ES2724801T3 - Combinaciones de anticuerpos anti-4-1BB y anticuerpos inductores de ADCC para el tratamiento del cáncer - Google Patents

Abstract

Un anticuerpo anti-4-1BB, o una porción de unión a antígeno del mismo, para uso en el tratamiento de cáncer en combinación con un anticuerpo anti-CD20, o una porción de unión a antígeno del mismo, en donde dicho anticuerpo anti-4-1BB, o la porción de unión a antígeno del mismo, comprende: (a) una H-CDR1 como se expone en la SEQ ID NO: 29; (b) una H-CDR2 como se expone en la SEQ ID NO: 30; (c) una H-CDR3 como se expone en la SEQ ID NO: 31; (d) una L-CDR1 como se expone en la SEQ ID NO: 34; (e) una L-CDR2 como se expone en la SEQ ID NO: 35; y (f) una L-CDR3 como se expone en la SEQ ID NO: 36, y en el que el anticuerpo anti-CD20, o porción de unión a antígeno del mismo, se administra en una dosis de 3-15 mg/kg.

Description

DESCRIPCIÓN

Combinaciones de anticuerpos anti-4-1BB y anticuerpos inductores de ADCC para el tratamiento del cáncer Antecedentes

El cáncer es ahora la principal causa de muerte en los Estados Unidos. En la actualidad, generalmente se trata con una o una combinación de tres tipos de terapias: cirugía, radiación y quimioterapia. La quimioterapia implica la interrupción de la replicación celular o el metabolismo celular. Los efectos adversos de la quimioterapia sistémica utilizada en el tratamiento de la enfermedad neoplásica pueden ser potencialmente mortales y se han vuelto de gran importancia para el tratamiento clínico de los pacientes con cáncer.

La 4-1BB (también denominada CD137, TNFRSF9, etc.) es una proteína transmembrana de la superfamilia de receptores del factor de necrosis tumoral (TNFRS). La comprensión actual de 4-1BB indica que la expresión generalmente depende de la activación y está presente en un amplio subconjunto de células inmunes que incluyen células NK y NKT activadas, células T reguladoras, células dendríticas (DC), mastocitos estimulados, células mieloides diferenciadoras, monocitos, neutrófilos y eosinófilos (Wang, 2009, Immunological Reviews 229: 192-215). La expresión de 4-1BB también se ha demostrado en la vasculatura del tumor (Broil, 2001, Amer. J Clin. Pathol. 115 (4): 543-549; Seaman, 2007, Cancer Cell 11: 539-554) y en sitios de inflamación o endotelio aterosclerótico (Drenkard, 2007 FASEB J. 21: 456-463; Olofsson, 2008, Circulation 117: 1292-1301). El ligando que estimula 4-1BB, es decir, ligando de 4-1BB (4-1BBL), se expresa en células presentadoras de antígeno activadas (APC), células progenitoras mieloides y células madre hematopoyéticas.

La 4-1BB humana es una proteína de 255 aminoácidos (número de acceso NM_001561; NP_001552). La secuencia de aminoácidos de 4-1BB humana completa se proporciona en la SEQ ID NO: 68. La proteína comprende una secuencia señal (residuos de aminoácidos 1-17), seguida de un dominio extracelular (169 aminoácidos), una región transmembrana (27 aminoácidos) y un dominio intracelular (42 aminoácidos) (Cheuk ATC et al. 2004 Cancer Gene Therapy 11: 215-226). El receptor se expresa en la superficie celular en forma de monómero y dímero y probablemente se trimeriza con un ligando de 4-1BB para señalización.

Numerosos estudios de células T murinas y humanas indican que 4-1BB promueve la proliferación celular aumentada, la supervivencia y la producción de citoquinas (Croft, 2009, Nat Rev Immunol 9: 271-285). Los estudios han indicado que algunos mAb agonistas de 4-1BB aumentan la expresión de la molécula coestimuladora y mejoran notablemente las respuestas de los linfocitos T citolíticos, lo que resulta en una eficacia antitumoral en varios modelos. Los mAb agonistas de 4-1BB han demostrado eficacia en entornos profilácticos y terapéuticos. Además, los modelos de tumores de monoterapia con 4-1BB y terapia de combinación han establecido respuestas de memoria de células T protectoras antitumorales duraderas (Lynch, 2008, Immunol Rev. 22: 277-286). También se ha demostrado que los agonistas de 4-1BB inhiben las reacciones autoinmunes en una variedad de modelos de autoinmunidad reconocidos en la técnica (Vinay, 2006, J Mol Med 84: 726-736). Esta actividad dual de 4-1BB ofrece el potencial de proporcionar actividad antitumoral al tiempo que reduce los efectos secundarios autoinmunes que pueden asociarse con los enfoques de inmunoterapia que rompen la tolerancia inmunológica.

El desarrollo de terapias dirigidas se centra en la orientación específica de las células neoplásicas a la vez que preserva los tejidos normales para disminuir los efectos secundarios. Un enfoque alternativo y/o adicional a la terapia contra el cáncer es dirigirse al sistema inmunitario en lugar de y/o además de dirigirse al tumor en sí. Se ha planteado la hipótesis de que la ADCC es un mecanismo de destrucción del tumor que resulta en la presentación directa del antígeno y en la inducción de respuestas de células T específicas del antígeno tumoral ("cebado cruzado") (Weiner et al., 2009).

Existe una necesidad no satisfecha durante mucho tiempo de anticuerpos que se unan a 4-1BB humano, aumentando la respuesta mediada por 4-1BB y, por lo tanto, proporcionan un potencial terapéutico para el tratamiento de diversas enfermedades y afecciones, incluido el cáncer.

Kohrt et al., Blood, 2001 117: 2423-2432 describe el uso de un anticuerpo anti-CD137 (anti-4-1BB) en combinación con un anticuerpo anti-CD20 que indica actividad anti-linfoma in vivo.

Sumario

La presente invención proporciona un anticuerpo anti-4-1BB, o una porción de unión a antígeno del mismo, para uso en el tratamiento del cáncer en combinación con un anticuerpo anti-CD20, o una porción de unión a antígeno del mismo, en el que dicho anticuerpo anti-4-1BB, o porción de unión a antígeno del mismo, comprende:

(a) una H-CDR1 como se expone en la SEQ ID NO: 29;

(b) una H-CDR2 como se expone en la SEQ ID NO: 30;

(c) una H-CDR3 como se expone en la SEQ ID NO: 31;

(d) una L-CDR1 como se expone en la SEQ ID NO: 34;

(e) una L-CDR2 como se expone en la SEQ ID NO: 35; y

(f) una L-CDR3 como se expone en la SEQ ID NO: 36;

y en el que el anticuerpo anti-CD20, o su porción de unión a antígeno, se administra en una dosis de aproximadamente 3-15 mg/kg.

En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CD20, o su porción de unión a antígeno, comprende las 6 CDR de rituximab. En otras realizaciones, el anticuerpo anti-4-1BB, o la porción de unión a antígeno del mismo, comprende una región Vh que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO: 43 y una región Vl que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO: 45. En realizaciones adicionales, el anticuerpo anti-CD20, o su porción de unión a antígeno, comprende la región V^h de rituximab y la región V^l de rituximab. En realizaciones adicionales, el anticuerpo anti-4-1BB, o la porción de unión a antígeno del mismo, comprende una secuencia de aminoácidos de cadena pesada como se expone en la SEQ ID NO: 44 y además comprende una secuencia de aminoácidos de cadena ligera como se expone en la SEQ ID NO: 46, con la condición de que el residuo de lisina extremo terminal C de la SEQ ID NO: 44 esté opcionalmente ausente. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-CD20, o su porción de unión a antígeno, comprende la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de rituximab y la secuencia de aminoácidos de cadena ligera de rituximab. En más realizaciones, el procedimiento comprende administrar a dicho paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de MOR-7480.1, o una porción de unión a antígeno del mismo, en combinación con una cantidad terapéuticamente efectiva de rituximab, o una porción de unión a antígeno del mismo.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 muestra la eficacia combinatoria de los anticuerpos monoclonales 4-1BB y CD20 en un modelo de linfoma.

La Figura 2 muestra la eficacia combinatoria de un anticuerpo monoclonal 4-1BB y un anticuerpo monoclonal P-cadherina (g-194-g09 o anti-P-cadherina1) en un modelo de carcinoma de colon.

La Figura 3 muestra la eficacia combinatoria de un anticuerpo monoclonal 4-1BB y un anticuerpo monoclonal P-cadherina (anti-P-cadherina2) en un modelo de carcinoma de colon.

Las Figuras 4A y 4B ilustran que el tratamiento de combinación con anticuerpos monoclonales 4-1BB y CD20 reduce la carga tumoral circulante en un modelo murino espontáneo de linfoma.

La Figura 5 muestra el beneficio de supervivencia del tratamiento combinatorio de ratones con linfoma E jmyc con anticuerpos monoclonales 4-1BB y CD20.

Descripción detallada

Las realizaciones descritas en el presente documento se refieren al tratamiento del cáncer en un paciente que necesita dicho tratamiento usando anticuerpos anti-4-1BB (por ejemplo, MOR-7480.1) en combinación con uno o más anticuerpos que inducen la citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo (ADCC) (por ejemplo, un anticuerpo anti-CD20 como el rituximab). Los expertos en la técnica reconocerán que ciertas subclases de anticuerpos, tales como IgG1 e IgG3, inducen actividad de ADCC. La actividad de ADCc también puede ser el resultado de la introducción de modificaciones de carbohidratos, tales como patrones de glicosilación alterados, en la región Fc en comparación con el patrón de carbohidratos nativos. Los expertos en la técnica también reconocen que ciertas mutaciones en la región Fc de un anticuerpo, en comparación con la región Fc de tipo silvestre, aumentan la actividad de ADCC. La presente divulgación demuestra la eficacia combinatoria de los anticuerpos anti-4-1BB y los anticuerpos inductores de ADCC en modelos de tumores.

A menos que se defina de otro modo en el presente documento, los términos científicos y técnicos utilizados en relación con las presentes realizaciones tendrán los significados que entienden comúnmente los expertos en la técnica. Además, a menos que el contexto requiera lo contrario, los términos en singular incluirán los plurales y los términos en plural incluirán el singular. En general, las nomenclaturas utilizadas en relación con, y las técnicas de cultivo de células y tejidos, biología molecular, inmunología, microbiología, genética y química de ácidos nucleicos y proteínas e hibridación descritas en este documento son aquellas bien conocidas y comúnmente utilizadas en la técnica.

Los procedimientos y técnicas de las presentes realizaciones se realizan generalmente de acuerdo con procedimientos bien conocidos en la técnica y como se describe en varias referencias generales y más específicas que se citan y discuten a lo largo de la presente memoria descriptiva, a menos que se indique lo contrario. Estas referencias incluyen, por ejemplo, Sambrook y Russell, Molecular Cloning, A Laboratory Approach, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY (2001), Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (2002 ), y Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1990). Las reacciones enzimáticas y las técnicas de purificación se realizan de acuerdo con las especificaciones del fabricante, como se realiza comúnmente en la técnica o como se describe en el presente documento. Las nomenclaturas utilizadas en relación con los procedimientos y técnicas de laboratorio de química analítica, química orgánica sintética y química farmacéutica y medicinal descritas en este documento son aquellas bien conocidas y comúnmente utilizadas en la técnica. Las técnicas estándar se utilizan para síntesis químicas, análisis químicos, preparación farmacéutica, formulación y administración, y tratamiento de pacientes.

Definiciones

Como se usa en el presente documento, cada uno de los siguientes términos tiene el significado asociado en esta sección.

Los artículos "un" y "uno, una" se usan en el presente documento para referirse a uno o más de uno (es decir, a al menos uno) del objeto gramatical del artículo. A modo de ejemplo, "un elemento" significa un elemento o más de un elemento.

Como se usa en este documento, los veinte aminoácidos convencionales y sus abreviaturas siguen el uso convencional. Véase Immunology - A Synthesis (2a edición, E. S. Golub y D. R. Gren, Eds., Sinauer Associates, Sunderland, Mass. (1991)).

Una "sustitución conservadora de aminoácidos" es una en la que un residuo de aminoácido está sustituido por otro residuo de aminoácido que tiene un grupo R de cadena lateral con propiedades químicas similares (por ejemplo, carga o hidrofobicidad). En general, una sustitución de aminoácidos conservadora no cambiará sustancialmente las propiedades funcionales de una proteína. En los casos en que dos o más secuencias de aminoácidos difieren entre sí por sustituciones conservadoras, el porcentaje de identidad de secuencia o el grado de similitud se puede ajustar hacia arriba para corregir la naturaleza conservadora de la sustitución. Los medios para realizar este ajuste son bien conocidos por los expertos en la técnica. Véase, por ejemplo, Pearson, Methods Mol. Biol. 243: 307-31 (1994). Los ejemplos de grupos de aminoácidos que tienen cadenas laterales con propiedades químicas similares incluyen 1) cadenas laterales alifáticas: glicina, alanina, valina, leucina e isoleucina; 2) cadenas laterales de hidroxilo alifático: serina y treonina; 3) cadenas laterales que contienen amida: asparagina y glutamina; 4) cadenas laterales aromáticas: fenilalanina, tirosina y triptófano; 5) cadenas laterales básicas: lisina, arginina e histidina; 6) cadenas laterales ácidas: ácido aspártico y ácido glutámico; y 7) cadenas laterales que contienen azufre: cisteína y metionina. Los grupos de sustitución de aminoácidos conservadores preferidos son: valina-leucina-isoleucina, fenilalaninatirosina, lisina-arginina, alanina-valina, glutamato-aspartato y asparagina-glutamina.

Alternativamente, una sustitución conservadora es cualquier cambio que tenga un valor positivo en la matriz de probabilidad logarítmica PAM250 divulgada en Gonnet et al., Science 256: 1443-45 (1992). Un reemplazo "moderadamente conservador" es cualquier cambio que tenga un valor no negativo en la matriz de probabilidad logarítmica PAM250.

Las sustituciones de aminoácidos preferidas son aquellas que: (1) reducen la susceptibilidad a la proteólisis, (2) reducen la susceptibilidad a la oxidación, (3) alteran la afinidad de unión para formar complejos de proteínas, y (4) confieren o modifican otras propiedades fisicoquímicas o funcionales de tales análogos. Los análogos que comprenden sustituciones, eliminaciones y/o inserciones pueden incluir varias muteínas de una secuencia distinta de la secuencia peptídica natural. Por ejemplo, pueden hacerse sustituciones de aminoácidos simples o múltiples (preferiblemente sustituciones de aminoácidos conservadoras) en la secuencia que se produce de forma natural (preferiblemente en la porción del polipéptido fuera del dominio o los dominios que forman contactos intermoleculares). Una sustitución conservadora de aminoácidos no debe cambiar sustancialmente las características estructurales de la secuencia principal (por ejemplo, un aminoácido de reemplazo no debe tender a romper una hélice que se produce en la secuencia principal, o interrumpir otros tipos de estructura secundaria que caracterizan la secuencia principal). Ejemplos de estructuras secundarias y terciarias de polipéptidos reconocidos en la técnica se describen en Proteins, Structures and Molecular Principles (Creighton, Ed., W. H. Freeman and Company, New York (1984)); Introduction to Protein Structure (C. Branden and J. Tooze, eds., Garland Publishing, New York, N.Y. (1991)); y Thornton et al., Nature 354:105 (1991).

La similitud de secuencia para polipéptidos, que también se denomina identidad de secuencia, se mide típicamente usando un software de análisis de secuencia. El software de análisis de proteínas empareja secuencias similares utilizando medidas de similitud asignadas a varias sustituciones, eliminaciones y otras modificaciones, incluidas las sustituciones conservadoras de aminoácidos. Por ejemplo, GCG contiene programas como "Gap" y "Bestfit" que se pueden usar con parámetros predeterminados para determinar la homología de secuencia o la identidad de secuencia entre polipéptidos estrechamente relacionados, tales como polipéptidos homólogos de diferentes especies de organismos o entre una proteína de tipo silvestre y una muteína de los mismos. Véase, por ejemplo, GCG versión 6.1. Las secuencias de polipéptidos también se pueden compararse utilizando FASTA usando parámetros predeterminados o recomendados, un programa en GCG versión 6.1. FASTA (por ejemplo, FASTA2 y FASTA3) proporciona alineaciones y porcentajes de identidad de secuencia de las regiones de la mejor superposición entre las secuencias de pregunta y búsqueda (Pearson, Methods Enzymol. 183: 63-98 (1990); Pearson, Methods Mol. Biol. 132: 185-219 (2000)). Otro algoritmo preferido cuando se compara una secuencia de la invención con una base de datos que contiene un gran número de secuencias de diferentes organismos es el programa informático BLAST, especialmente blastp o tblastn, utilizando parámetros predeterminados. Véase, por ejemplo, Altschul et al., J. Mol. Biol. 215: 403-410 (1990); Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25: 3389-402 (1997).

Un "anticuerpo" intacto comprende al menos dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas ligeras (L) interconectadas por enlaces disulfuro. Véase en general, Inmunología Fundamental, capítulo 7 (Paul, W., ed., 2a ed. Raven Press, N.Y. (1989)). Cada cadena pesada está compuesta por una región variable de cadena pesada (HCVR o Vh) y una región constante de cadena pesada (Ch). La región constante de la cadena pesada se compone de tres dominios, CH1, CH2 y CH3. Cada cadena ligera está compuesta por una región variable de cadena ligera (LCVR o V^l) y una región constante de cadena ligera. La región constante de la cadena ligera se compone de un dominio, C^l. Las regiones V^h y Vl se pueden subdividir en regiones de hipervariabilidad, denominadas regiones determinantes de complementariedad (CDR), intercaladas con regiones que están más conservadas, denominadas regiones marco (FR). Cada V^h y V^l están compuestas por tres CDR y cuatro FR, dispuestas desde el extremo terminal amino hasta el extremo terminal carboxilo en el siguiente orden: FR1, CDR1, ^f R2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. La asignación de aminoácidos a cada dominio está de acuerdo con las definiciones de Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (Institutos Nacionales de Salud, Bethesda, MD (1987 y 1991)), o Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); Chothia et al., Nature 342:878-883 (1989).

Las regiones variables de las cadenas pesada y ligera contienen un dominio de unión que interactúa con un antígeno. Las regiones constantes de los anticuerpos pueden mediar la unión de la inmunoglobulina a los tejidos o factores del huésped, incluidas varias células del sistema inmunitario (por ejemplo, células efectoras) y el primer componente (Clq) del sistema del complemento clásico.

El término "anticuerpo" puede incluir porciones de unión a antígeno de un anticuerpo intacto que retienen capacidad para unirse específicamente al antígeno del anticuerpo intacto (por ejemplo, 4-1BB, CD20 o P-cadherina). Las porciones de unión a antígeno pueden producirse mediante técnicas de ADN recombinante o mediante escisión enzimática o química de anticuerpos intactos.

Los ejemplos de porciones de unión a antígeno incluyen (i) un fragmento Fab, un fragmento monovalente que consiste en los dominios VL, VH, CL y CH1; (ii) un fragmento F(ab')2, un fragmento bivalente que comprende dos fragmentos Fab enlazados por un puente disulfuro en la región bisagra; (iii) un fragmento Fd que consiste en los dominios VH y CH1; (iv) un fragmento Fv que consiste en los dominios VL y VH de un solo brazo de un anticuerpo, (v) un anticuerpo de un solo dominio ("dAb"), que consiste en un dominio VH como se describe en Ward et al., Nature 341: 544-546 (1989); y (vi) una región determinante de complementariedad aislada (CDR). Además, aunque los dos dominios del fragmento Fv, V^h y V^l, están codificados por genes separados, se pueden unir, mediante procedimientos recombinantes, mediante un enlazador sintético que les permite fabricarse como una cadena de proteína única en la que las regiones V^h y V^l se aparean para formar moléculas monovalentes (conocidas como Fv de cadena sencilla (scFv); véase, por ejemplo, Bird et al., Science 242: 423-426 (1988); y Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879 -5883 (1988)). Dichos anticuerpos de cadena sencilla se incluyen por referencia al término "anticuerpo".

Un "anticuerpo biespecífico" tiene dos especificidades de unión diferentes, véase, por ejemplo, la patente de Estados Unidos N° 5.922.845 y la patente de Estados Unidos N° 5.837.243; Zeilder J. Immunol. 163: 1246-1252 (1999); Somasundaram Hum. Antibodies 9: 47-54 (1999); Keler Cancer Res. 57: 4008-4014 (1997). Por ejemplo, la invención proporciona anticuerpos biespecíficos que tienen un sitio de unión para un antígeno de superficie celular (tal como el 4-1BB, CD20 o P-cadherina humanos), y un segundo sitio de unión para un receptor Fc en la superficie de una célula efectora. La invención también proporciona anticuerpos multiespecíficos, que tienen al menos tres sitios de unión.

El término "anticuerpos biespecíficos" incluye además "diacuerpos". Los diacuerpos son anticuerpos bivalentes, biespecíficos, en los que los dominios V^h y V^l se expresan en una sola cadena polipeptídica, pero usan un conector demasiado corto para permitir el emparejamiento entre los dos dominios en la misma cadena, lo que obliga a los dominios a emparejarse con dominios complementarios de otra cadena y crear dos sitios de unión a antígeno (véase, por ejemplo, Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993); Poljak et al., Structure 2: 1121­ 1123 (1994) ).

Los términos "anticuerpo humano" o "anticuerpo de secuencia humana", como se usan indistintamente en el presente documento, incluyen anticuerpos que tienen regiones variables y constantes (si están presentes) derivadas de secuencias de inmunoglobulina de la línea germinal humana. Los anticuerpos de secuencia humana de la invención pueden incluir residuos de aminoácidos no codificados por secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana (por ejemplo, mutaciones introducidas por mutagénesis aleatoria o específica de sitio in vitro o por mutación somática in vivo). Sin embargo, el término "anticuerpo humano", como se usa en el presente documento, no pretende incluir anticuerpos "quiméricos" en los cuales las secuencias de CDR derivadas de la línea germinal de otra especie de mamífero, tal como ratón, se hayan injertado en secuencias marco humanas (es decir, anticuerpos "humanizados" o PRIMATIZEDmr).

El término "anticuerpo quimérico" como se usa en este documento significa un anticuerpo que comprende regiones de dos o más anticuerpos diferentes. En una realización, una o más de las CDR se derivan de un anticuerpo humano. En otra realización, todas las CDR se derivan de un anticuerpo humano. En otra realización, las CDR de más de un anticuerpo humano se combinan en un anticuerpo humano quimérico. Por ejemplo, un anticuerpo quimérico puede comprender una CDR1 de la cadena ligera de un primer anticuerpo humano anti-4-1BB, una CDR2 de la cadena ligera de un segundo anticuerpo humano anti-4-1BB y una CDR3 y CDR3 de la cadena ligera de un tercer anticuerpo humano anti-4-1BB, y las CDR de la cadena pesada pueden derivarse de uno o más de otros anticuerpos anti-4-1BB. Además, las regiones marco pueden derivarse de uno de los mismos anticuerpos anti-4-1BB o de uno o más humano o humanos diferentes.

Además, como se discutió anteriormente en el presente documento, el anticuerpo quimérico incluye un anticuerpo que comprende una porción derivada de las secuencias de la línea germinal de más de una especie.

Por el término "cantidad efectiva", o "cantidad terapéuticamente efectiva", como se usa en este documento, se entiende una cantidad que cuando se administra a un mamífero, preferiblemente un ser humano, media una respuesta terapéutica detectable en comparación con la respuesta detectada en ausencia del compuesto. Una respuesta terapéutica, tal como, pero sin limitarse a, la inhibición y/o la disminución del crecimiento del tumor, el tamaño del tumor, la metástasis y similares, puede evaluarse fácilmente mediante una gran cantidad de procedimientos reconocidos en la técnica, que incluyen, por ejemplo, procedimientos tales como los divulgados en el presente documento.

El experto en la materia entendería que la cantidad eficaz del compuesto o composición administrada en el presente documento varía y puede determinarse fácilmente en función de una serie de factores tales como la enfermedad o afección que se trata, la etapa de la enfermedad, la edad y la salud y la condición física del mamífero que se está tratando, la gravedad de la enfermedad, el compuesto particular que se está administrando y similares.

Una "cantidad terapéuticamente efectiva", o "cantidad efectiva" está destinada a calificar la cantidad de un agente requerido para reducir de manera detectable hasta cierto punto uno o más de los síntomas de un trastorno de neoplasia, incluidos, pero sin limitarse a: 1) reducción en el número de células cancerosas; 2) reducción del tamaño del tumor; 3) inhibición (es decir, desaceleración hasta cierto punto, preferiblemente detención) de la infiltración de células cancerosas en órganos periféricos; 3) inhibición (es decir, desaceleración hasta cierto punto, preferiblemente detención) de la metástasis tumoral; 4) inhibición, hasta cierto punto, del crecimiento tumoral; 5) aliviar o reducir en cierta medida uno o más de los síntomas asociados con el trastorno; y/o 6) aliviar o reducir los efectos secundarios asociados con la administración de agentes anticancerosos.

Por el término "competir", como se usa en este documento con respecto a un anticuerpo, se entiende que un primer anticuerpo, o una porción de unión a antígeno del mismo, compite por la unión con un segundo anticuerpo, o una porción de unión a antígeno del mismo, en el que la unión del primer anticuerpo con su epítopo afín se reduce de forma detectable en presencia del segundo anticuerpo en comparación con la unión del primer anticuerpo en ausencia del segundo anticuerpo. La alternativa, en la que la unión del segundo anticuerpo a su epítopo también se reduce de forma detectable en presencia del primer anticuerpo, puede, pero no necesariamente, ser el caso. Es decir, un primer anticuerpo puede inhibir la unión de un segundo anticuerpo a su epítopo sin que ese segundo anticuerpo inhiba la unión del primer anticuerpo a su epítopo respectivo. Sin embargo, cuando cada anticuerpo inhibe de forma detectable la unión del otro anticuerpo con su epítopo o ligando afines, ya sea en la misma, mayor o menor extensión, se dice que los anticuerpos "compiten en forma cruzada" entre sí para la unión de su epítopo o epítopos respectivos. Por ejemplo, los anticuerpos que compiten en forma cruzada pueden unirse al epítopo, o porción del epítopo, al que se unen los anticuerpos de las realizaciones. Tanto los anticuerpos que compiten y que compiten en forma cruzada están abarcados por las presentes realizaciones. Independientemente del mecanismo por el cual se produce dicha competencia o competencia cruzada (por ejemplo, impedimento estérico, cambio conformacional o unión a un epítopo común, o porción del mismo, y similares), el experto en la técnica apreciaría, basándose en las enseñanzas proporcionadas en el presente documento, que tales anticuerpos que compiten y/o compiten en forma cruzada están incluidos y pueden ser útiles para los procedimientos descritos en el presente documento.

El término "epítopo" incluye cualquier proteína determinante capaz de unirse específicamente a una inmunoglobulina o receptor de células T. Los determinantes epitópicos generalmente consisten en grupos de moléculas químicamente activas en la superficie, tales como aminoácidos o cadenas laterales de azúcar, y por lo general tienen características estructurales tridimensionales específicas, así como características de carga específicas. Los epítopos conformacionales y no conformacionales se distinguen porque la unión a los primeros, pero no los últimos, se pierde en presencia de disolventes desnaturalizantes.

El "material de instrucción", como se usa dicho término en el presente documento, incluye una publicación, un registro, un diagrama, o cualquier otro medio de expresión que pueda usarse para comunicar la utilidad del compuesto, combinación y/o composición de la invención en el kit para afectar, aliviar o tratar las diversas enfermedades o trastornos mencionados en este documento. Opcionalmente, o alternativamente, el material de instrucción puede describir uno o más procedimientos para aliviar las enfermedades o trastornos en una célula, un tejido o un mamífero, incluidos los que se describen en otro lugar del presente documento.

El material de instrucción del kit puede, por ejemplo, fijarse a un recipiente que contiene el compuesto y/o composición de la invención o puede enviarse junto con un recipiente que contiene el compuesto y/o composición.

Alternativamente, el material de instrucción puede enviarse por separado del contenedor con la intención de que el destinatario utilice el material de instrucción y el compuesto de forma cooperativa.

Excepto cuando se indica, los términos "paciente" o "sujeto" se usan indistintamente y se refieren a mamíferos tales como pacientes humanos y primates no humanos, así como a sujetos veterinarios tales como conejos, ratas, ratones y otros animales. Preferiblemente, paciente se refiere a un ser humano.

La frase "sal o sales farmacéuticamente aceptables", como se usa en este documento, incluye sales de grupos ácidos o básicos que pueden estar presentes en un compuesto. Los compuestos que son de naturaleza básica son capaces de formar una amplia variedad de sales con diversos ácidos inorgánicos y orgánicos. Los ácidos que pueden usarse para preparar sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables de tales compuestos básicos son aquellos que forman sales de adición de ácido no tóxicas, es decir, sales que contienen aniones farmacológicamente aceptables, tales como las sales de acetato, bencenosulfonato, benzoato, bicarbonato, bisulfato, bistosilato, bitartrato, borato, bromuro, edetato de calcio, camsilato, carbonato, cloruro, clavulanato, citrato, diclorhidrato, edetato, edisilato, estolato, esilato, etilsuccinato, fumarato, gluceptato, gluconato, glutamato, glicolilarcenilato, hexilresorcinato, hidrabamina, bromhidrato, clorhidrato, yoduro, isotionato, lactato, lactobionato, laurato, malato, maleato, mandelato, mesilato, metilsulfato, mucato, napsilato, nitrato, oleato, oxalato, pamoato, (embonato), palmitato, pantotenato, fosfato/difosfato, poligalacturonato, salicilato, estearato, subacetato, succinato, tanato, tartrato, teoclato, tosilato, tietiododo y valerato. Las sales preferidas de los compuestos 1-3 se divulgan en la publicación PCT No. 2003/016305, la solicitud de patente de Estados Unidos No. 10/956,420, presentada el 30 de septiembre de 2004, y la solicitud PCT No. PCT/IB2004/003070, presentada el 20 de septiembre de 2004. Las sales particularmente preferidas del compuesto 1 incluyen sales de malato, lo más preferiblemente una sal de L-malato. Una sal particularmente preferida del compuesto 3 es una sal de maleato.

La notación convencional se usa en el presente documento para representar secuencias de polipéptidos: el extremo izquierdo de una secuencia de polipéptidos es el extremo terminal amino; el extremo derecho de una secuencia polipeptídica es el extremo terminal carboxilo.

Por la frase "se une específicamente", como se usa en el presente documento, se entiende un compuesto, por ejemplo, una proteína, un ácido nucleico, un anticuerpo y similares, que reconoce y se une a una molécula específica, pero no reconoce sustancialmente o se une a otras moléculas en una muestra. Por ejemplo, un anticuerpo o un inhibidor de péptidos que reconoce y se une a un ligando relacionado 4-1BB en una muestra, pero no reconoce o se une sustancialmente a otras moléculas en la muestra. Por lo tanto, bajo las condiciones de ensayo designadas, la fracción de unión especificada (por ejemplo, un anticuerpo o una porción de unión a antígeno del mismo) se une preferentemente a una molécula objetivo particular y no se une en una cantidad significativa a otros componentes presentes en una muestra de prueba. Se puede usar una variedad de formatos de ensayo para seleccionar un anticuerpo que se una específicamente a una molécula de interés. Por ejemplo, el inmunoensayo ELISA en fase sólida, la inmunoprecipitación, el análisis BIAcore y transferencia Western se utilizan para identificar un anticuerpo que reacciona específicamente con 4-1BB. Típicamente, una reacción específica o selectiva será al menos dos veces la señal o el ruido de fondo y más típicamente más de 10 veces el fondo, incluso más específicamente, se dice que un anticuerpo "se une específicamente" a un antígeno cuando la constante de disociación de equilibrio (KD) es < 1 pM, preferiblemente < 100 nM y lo más preferiblemente < 10 nM.

El término "KD" se refiere a la constante de disociación en equilibrio de una interacción particular anticuerpoantígeno.

El término "citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos" o "ADCC" se refiere a una reacción mediada por células en la que las células citotóxicas no específicas (por ejemplo, Células NK, neutrófilos, macrófagos, etc.) reconocen el anticuerpo unido a una célula objetivo y, posteriormente, causan lisis de la célula objetivo. Dichas células citotóxicas que median la ADCC generalmente expresan los receptores Fc (FcR). Las células primarias para mediar ADCC (células NK) expresan F^cyRIII, mientras que los monocitos expresan F^cyRI, F^cyRII, F^cyRIII y/o F^cyRIV. Para evaluar la actividad ADCC de una molécula, se puede realizar un ensayo in vitro de CCAD, como el que se describe en las patente de Estados Unidos números 5.500.362 o 5.821.337. Las células efectoras útiles para tales ensayos incluyen células mononucleares de sangre periférica (PBMC) y células asesinas naturales (NK). Alternativamente, o adicionalmente, la actividad de ADCC de las moléculas de interés puede evaluarse in vivo, por ejemplo, en un modelo animal.

El término "anticuerpo inductor de ADCC" se refiere a un anticuerpo que demuestra ADCC según se mide mediante ensayos conocidos por los expertos en la técnica. Dicha actividad se caracteriza típicamente por la unión de la región Fc con varios FcR. Sin estar limitados por ningún mecanismo particular, los expertos en la técnica reconocerán que la capacidad de un anticuerpo para demostrar ADCC puede ser, por ejemplo, en virtud de su subclase (como IgG1 o IgG3), por mutaciones introducidas en la región Fc, o en virtud de modificaciones a los patrones de carbohidratos en la región Fc del anticuerpo. Dichas modificaciones se describen, por ejemplo, en la publicación de la patente de Estados Unidos N° 2007-0092521.

El anticuerpo al que se hace referencia en este documento como "rituximab" será reconocido fácilmente por los expertos en la técnica, y se vende con los nombres comerciales Rituxan® y MabThera®. El rituximab es un anticuerpo monoclonal quimérico modificado genéticamente dirigido contra el antígeno humano CD20. Este anticuerpo quimérico contiene un dominio constante de IgG1 humana y se identifica con el nombre "C2B8" en la patente de Estados Unidos No. 5.736.137 (Andersen, K. C., et al.) publicada el 17 de abril de 1998. Rituximab está aprobado para el tratamiento de pacientes con linfoma no Hodgkin de células B, positivo para CD20, recidivantes o refractarios de grado bajo o folicular. Los estudios de mecanismos de acción in vitro han demostrado que el rituximab muestra citotoxicidad dependiente del complemento humano (CDC), así como una actividad significativa en ensayos que miden la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC).

Como se usa en este documento, "sustancialmente pura" significa que una especie objetivo es la especie predominante presente (es decir, en base molar es más abundante que cualquier otra especie individual en la composición), y preferiblemente una fracción sustancialmente purificada es una composición en donde la especie objetivo (por ejemplo, un anticuerpo anti-4-1BB) comprende al menos aproximadamente el 50 por ciento (en una base molar) de todas las especies macromoleculares presentes. En general, una composición sustancialmente pura comprenderá más de aproximadamente el 80 por ciento de todas las especies macromoleculares presentes en la composición, más preferiblemente más de aproximadamente el 85%, 90%, 95% y 99%. Más preferiblemente, la especie objetivo se purifica hasta homogeneidad esencial (las especies contaminantes no pueden detectarse en la composición mediante procedimientos de detección convencionales), en la que la composición consiste esencialmente en una sola especie macromolecular.

Como se usa en este documento, "tratar" significa reducir la frecuencia con la que los síntomas de una enfermedad (es decir, el crecimiento del tumor y/o la metástasis, u otro efecto mediado por los números y/o la actividad de las células inmunes, y similares) son experimentados por un paciente. El término incluye la administración de los compuestos o agentes de la presente invención para prevenir o retrasar la aparición de los síntomas, las complicaciones o los indicios bioquímicos de una enfermedad (por ejemplo, la elevación del nivel de PSA), aliviar los síntomas o detener o inhibir el desarrollo adicional de la enfermedad, afección o trastorno. El tratamiento puede ser profiláctico (para prevenir o retrasar la aparición de la enfermedad, o para prevenir la manifestación de los síntomas clínicos o subclínicos de la misma) o supresión terapéutica o alivio de los síntomas después de la manifestación de la enfermedad.

La "terapia de combinación" abarca la administración de un anticuerpo inductor de ADCC y un anticuerpo 4-1BB como parte de un régimen de tratamiento específico destinado a proporcionar un efecto beneficioso de la acción conjunta de estos agentes terapéuticos. El efecto beneficioso de la combinación incluye, entre otros, la acción conjunta farmacocinética o farmacodinámica resultante de la combinación de agentes terapéuticos. La administración de estos agentes terapéuticos en combinación normalmente se lleva a cabo durante un período de tiempo definido (generalmente minutos, horas, días o semanas, dependiendo de la combinación seleccionada). La "terapia de combinación" generalmente no pretende abarcar la administración de dos o más de estos agentes terapéuticos como parte de regímenes de monoterapia separados que resulten de manera incidental y arbitraria en las combinaciones de la presente invención. La "terapia de combinación" abarca la administración de estos agentes terapéuticos de una manera secuencial, es decir, en la que cada agente terapéutico se administra en un momento diferente, así como la administración de estos agentes terapéuticos, o al menos dos de los agentes terapéuticos, de manera sustancialmente simultanea. La administración sustancialmente simultánea se puede lograr, por ejemplo, administrando al sujeto una cápsula única que tiene una proporción fija de cada agente terapéutico o en múltiples cápsulas individuales para cada uno de los agentes terapéuticos. La administración secuencial o sustancialmente simultánea de cada agente terapéutico puede efectuarse por cualquier vía apropiada que incluya, entre otras, las vías orales, las vías intravenosas, las vías intramusculares y la absorción directa a través de los tejidos de la membrana mucosa. Los agentes terapéuticos pueden administrarse por la misma ruta o por rutas diferentes. Por ejemplo, un primer agente terapéutico de la combinación seleccionada puede administrarse por inyección intravenosa, mientras que los otros agentes terapéuticos de la combinación pueden administrarse por vía oral. Alternativamente, por ejemplo, ambos agentes terapéuticos pueden administrarse por vía oral o ambos agentes terapéuticos pueden administrarse por inyección intravenosa. La secuencia en la que se administran los agentes terapéuticos no es estrictamente crítica. La "terapia de combinación" también puede abarcar la administración de los agentes terapéuticos como se describió anteriormente en combinación adicional con otros ingredientes biológicamente activos (tales como, entre otros, un segundo y diferente agente antineoplásico) y terapias no farmacológicas (tales como, pero no limitado a, cirugía o radioterapia). Cuando la terapia de combinación comprende además radioterapia, la radioterapia puede llevarse a cabo en cualquier momento adecuado siempre que se logre un efecto beneficioso de la acción conjunta de la combinación de los agentes terapéuticos y la radioterapia. Por ejemplo, en casos apropiados, el efecto beneficioso todavía se logra cuando la radioterapia se elimina temporalmente de la administración de los agentes terapéuticos, quizás por días o incluso semanas.

Descripción

Las realizaciones descritas en el presente documento se refieren a nuevos usos terapéuticos y procedimientos médicos que comprenden la administración conjunta de una combinación de un anticuerpo anti-4-1BB y un anticuerpo inductor de ADCC (por ejemplo, un anticuerpo anti-CD20 tal como rituximab) para el tratamiento de cáncer en un paciente que necesita dicho tratamiento. En una realización, el procedimiento comprende administrar un anticuerpo anti-4-1BB (por ejemplo, MOR-7480.1) en combinación con un anticuerpo anti-CD20 (por ejemplo, rituximab).

I. Anticuerpos Anti-4-1BB

El anticuerpo anti-4-1BB preferido es un anticuerpo (por ejemplo, MOR-7480.1, MOR-7480, MOR-7480.2) que se une específicamente al 4-1BB humano y comprende:

(a) una H-CDR1 como se expone en la SEQ ID NO: 29;

(b) una H-CDR2 como se expone en la SEQ ID NO: 30;

(c) una H-CDR3 como se expone en la SEQ ID NO: 31;

(d) una L-CDR1 como se expone en la SEQ ID NO: 34;

(e) una L-CDR2 como se expone en la SEQ ID NO: 35; y

(f) una L-CDR3 como se expone en la SEQ ID NO: 36.

Otros anticuerpos de la divulgación incluyen, pero no se limitan a, MOR-6032, MOR-7361, MOR-7483, MOR-7483.1 y MOR-7483.2 . Estos anticuerpos anti-4-1BB se describen en la Tabla 1 y la Tabla 2 a continuación.

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Las secuencias de aminoácidos y ácidos nucleicos de MOR-6032, MOR-7361, MOR-7480, MOR-7480.1, MOR-7480.2, MOR-7483, MOR-7483.1 y MOR-7483.2 se presentan en el presente documento. Brevemente, los anticuerpos anti-4-1BB incluyen anticuerpos que tienen secuencias de aminoácidos de las cadenas pesada y ligera de un anticuerpo tal como, por ejemplo, MOR-6032, MOR-7361, MOR-7480, MOR-7480.1, MOR- 7480.2, MOR-7483, MOR-7483.1 y MOR-7483.2. Las realizaciones descritas en el presente documento también se refieren a anticuerpos que tienen las secuencias de aminoácidos de las CDR de las cadenas pesada y ligera de estos anticuerpos. Otras realizaciones se refieren a anticuerpos anti-4-1BB que tienen las regiones variables de las cadenas pesada y ligera de esos anticuerpos. En otra realización de la invención, el anticuerpo se selecciona de un anticuerpo que tiene la región variable de longitud completa, CDR, secuencias de aminoácidos de las cadenas pesada y ligera del anticuerpo MOR-7480.1, MOR-7480 o MOR-7480.2. Otros anticuerpos de la divulgación tienen la región variable de longitud completa, o CDR las cadenas pesada y ligera de los anticuerpos MOR-6032, MOR-7361, MOR-7483, MOR-7483.1 y MOR-7483.2. En algunas realizaciones, el anticuerpo anti-4-1BB puede comprender una o más de las secuencias descritas anteriormente con una o más sustituciones conservadoras. En otra descripción, el anticuerpo anti-4-1BB puede ser un anticuerpo que compite de forma cruzada con MOR-6032, MOR-7361, MOR-7480, MOR-7480.1, MOR-7480.2, MOR-7483, MOR-7483.1, o MOR-7483.2.

En otra realización, los procedimientos descritos en el presente documento se practican usando un anticuerpo anti-4-1BB que comprende una cadena pesada que comprende las secuencias de aminoácidos de H-CDR1, H-CDR2 y H-CDR3, y una cadena ligera que comprende las secuencias de aminoácidos de L-CDR1, L-CDR2 y L-CDR3, del anticuerpo MOR-7480.1, MOR-7480 o MOR-7480.2, o, como parte de la descripción, un anticuerpo seleccionado del grupo que consiste en MOR-6032, MOR-7361, MOR-7483, MOR-7483.1 o MOR-7483.2, o secuencias que tienen cambios de dichas secuencias CDR seleccionadas del grupo que consiste en cambios conservadores, en los que los cambios conservadores se seleccionan del grupo que consiste en el reemplazo de residuos no polares por otros residuos no polares, reemplazo de residuos cargados polares por otros residuos no cargados polares, reemplazo de residuos cargados polares por otros residuos cargados polares, y la sustitución de residuos estructuralmente similares; las sustituciones no conservadoras, en las que las sustituciones no conservadoras se seleccionan del grupo que consiste en la sustitución del residuo cargado polar por los residuos polares no cargados y la sustitución de los residuos no polares por los residuos polares, adiciones y eliminaciones.

En una realización adicional, el anticuerpo anti-4-1BB contiene menos de 10, 7, 5 o 3 cambios de aminoácidos de la secuencia de la línea germinal en las regiones marco o CDR. En otra realización, el anticuerpo contiene menos de 5 cambios de aminoácidos en las regiones marco y menos de 10 cambios en las regiones CDR. En una realización preferida, el anticuerpo contiene menos de 3 cambios de aminoácidos en las regiones marco y menos de 7 cambios en las regiones CDR. En una realización preferida, los cambios en las regiones marco son conservadoras y los de las regiones CDR son mutaciones somáticas.

En otra realización, el anticuerpo anti-4-1BB tiene al menos 80%, más preferiblemente, al menos 85%, aún más preferiblemente, al menos el 90%, aún más preferiblemente, al menos el 95%, más preferiblemente, en al menos el 99%, de identidad de secuencia sobre las secuencias CDR-1, CDR-2 y CDR-3 de cadenas pesada y ligera con las secuencias de CDR de MOR-7480.1, MOR-7480 o MOR-7480.2, o como parte de la descripción, MOR- 6032, MOR-7361, MOR-7483, MOR-7483.1 o MOR-7483.2. Aún más preferiblemente, el anticuerpo comparte una identidad de secuencia del 100% sobre las secuencias CDR-1, CDR-2 y CDR-3 de cadena ligera y pesada con las secuencias de CDR de MOR-7480.1, MOR-7480 o MOR-7480.2, o como parte de la descripción M^o R-6032, MOR-7361, MOR-7483, MOR-7483.1 o MOR-7483.2.

En otra realización más, el anticuerpo anti-4-1BB tiene al menos el 80%, más preferiblemente, al menos el 85%, incluso más preferiblemente, al menos el 90%, aún más preferiblemente, al menos el 95%, más preferiblemente, al menos el 99%, de identidad de secuencia sobre las secuencias de la región variable de la cadena pesada y ligera con las secuencias de la región variable de MOR-7480.1, MOR-7480, MOR-7480.2, o como parte de la divulgación MOR-6032, MOR-7361, MOR-7483, MOR-7483.1, o MOR-7483.2. Aún más preferiblemente, el anticuerpo comparte una identidad de secuencia del 100% sobre las secuencias de la región variable de cadena pesada y ligera con las secuencias de la región variable de MOR-7480.1, o como parte de la divulgación MOR-6032, MOR-7361, MOR-7480, MOR-7480.2, MOR-7483, MOR-7483.1 o MOR-7483.2.

II. Anticuerpos que inducen ADCC

Las realizaciones descritas en el presente documento abarcan el uso de cualquier anticuerpo que induce ADCC. Los anticuerpos preferidos que inducen ADCC incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos anti-CD20 (tales como rituximab). Sin embargo, el experto en la materia apreciaría que en la descripción de este documento se podrían usar una variedad de anticuerpos que inducen ADCC. Por ejemplo, los anticuerpos adecuados se pueden modificar para tener una mayor actividad inductora de ADCC (véase, por ejemplo, Lazar et al., PNAS 2006; 103; 4005-4010; Bowles et al., Blood 2006; 108: 2648-2654; Shields et al., JBC 2002; 277: 26733-26740; Suzuki et al., Clin Cancer Res 2007; 13 (6); y Satoh et al., Expert Opin. Biol. Ther. 2006; 6 (11): 1161- 1173). Por lo tanto, por ejemplo, los anticuerpos anti-CD20, como el rituximab, se podrían modificar de acuerdo con procedimientos conocidos en la técnica para producir anticuerpos de ADCC adecuados para uso en las realizaciones descritas en el presente documento. De manera similar, los anticuerpos anti-P-cadherina, tales como g-194-g09 (descrito en este documento), podrían modificarse de acuerdo con procedimientos conocidos en la técnica para producir anticuerpos de ADCC adecuados para su uso en la divulgación en este documento.

La descripción en el presente documento también se refiere a anticuerpos que tienen las secuencias de aminoácidos de las CDR de las cadenas pesada y ligera de rituximab y g-194-g09. En otras realizaciones, el anticuerpo inductor de ADCC se selecciona de un anticuerpo que tiene la longitud completa, región variable, o CDR, secuencias de aminoácidos de las cadenas pesada y ligera de rituximab.

Aunque los anticuerpos anti-4-1BB y los anticuerpos inductores de ADCC discutidos en el presente documento se pueden preferir, el experto en la materia, basándose en la descripción proporcionada en el presente documento, apreciaría que las realizaciones abarcan una amplia variedad de anticuerpos anti-4-1BB y anticuerpos inductores de ADCC y no se limita a los anticuerpos particulares descritos en este documento. Más particularmente, aunque típicamente se prefieren los anticuerpos humanos, las realizaciones no se limitan de ninguna manera a los anticuerpos humanos; más bien, las realizaciones abarcan anticuerpos útiles independientemente del origen de la especie e incluyen, entre otros, anticuerpos quiméricos humanizados y/o primatizados. Las realizaciones incluyen anticuerpos anti-4-1BB y anticuerpos inductores de ADCC producidos por cualquier procedimiento, incluyendo, pero no limitado a, un procedimiento conocido en la técnica (por ejemplo, cribado de bibliotecas de presentación en fagos, y similares) o que se desarrollarán en el futuro para producir un anticuerpo anti-4-1BB de la invención.

Las presentes realizaciones abarcan anticuerpos humanos producidos usando un mamífero transgénico no humano, es decir, XenoMouseMR (Abgenix, Inc., Fremont, CA) como se describe en el documento U.S. 6.682.736, de Hanson et al.

Otro sistema de ratón transgénico para la producción de anticuerpos "humanos" se conoce como "HuMAb-MouseMR" (Medarex, Princeton, NJ), que contiene miniloci del gen de inmunoglobulina humana que codifica secuencias de inmunoglobulina humana de cadena pesada no reorganizada (mu y gamma) y de cadena ligera kappa, junto con mutaciones dirigidas que inactivan los loci endógenas de cadena mu y kappa (Lonberg et al. Nature 368: 856-859 (1994), y la patente de Estados Unidos N° 5.770.429).

Sin embargo, las realizaciones abarcan anticuerpos producidos usando cualquier mamífero transgénico tal como, pero no limitado a, el Kirin TC MouseMR (Kirin Beer Kabushiki Kaisha, Tokio, Japón) como se describe en, por ejemplo, Tomizuka et al., Proc Natl. Acad Sci USA 97: 722 (2000); Kuroiwa et al., Nature Biotechnol 18: 1086 (2000); Publicación de la solicitud de patente de Estados Unidos N° 2004/0120948, de Mikayama et al. ; y e1HuMAb-MouseMR (Medarex, Princeton, NJ) y XenoMouseMR (Abgenix, Inc., Fremont, CA), citados más arriba. Por lo tanto, la invención abarca el uso de un anticuerpo producido utilizando cualquier animal transgénico u otro animal no humano.

En otra realización, los anticuerpos empleados en los procedimientos descritos en el presente documento no son completamente humanos, sino "humanizados". En particular, los anticuerpos murinos o anticuerpos de otras especies pueden ser "humanizados" o "primatizados" usando técnicas bien conocidas en el arte. Véase, por ejemplo, Winter y Harris Immunol. Today 14: 43-46 (1993), Wright et al. Crit. Reviews in Immunol. 12: 125-168 (1992), y la patente de Estados Unidos No. 4.816.567, de Cabilly et al., y Mage y Lamoyi en Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications páginas 79-97, Marcel Dekker, Inc., New York, NY (1987).

Como se apreciará con base en la descripción proporcionada en este documento, los anticuerpos para su uso en este documento se pueden obtener de un mamífero transgénico no humano, y de hibridomas derivados de los mismos, pero también pueden expresarse en líneas celulares distintas de los hibridomas.

Las líneas celulares de mamífero disponibles como huéspedes para la expresión son bien conocidas en la técnica e incluyen muchas líneas celulares inmortalizadas disponibles a través de la American Type Culture Collection (ATCC), que incluyen, entre otras, células de ovario de hámster chino (CHO), NSO (también denominadas NS0), células HeLa, células de riñón de hámster bebé (BHK), células de riñón de mono (COS) y células de carcinoma hepatocelular humano (por ejemplo, Hep G2). También pueden emplearse células procariotas y eucariotas no mamíferas, que incluyen células bacterianas, de levadura, de insectos y de plantas.

Se pueden usar diversos sistemas de expresión bien conocidos en la técnica, tales como, pero no limitados a, los descritos en, por ejemplo, Sambrook and Russell, Molecular Cloning, A Laboratory Approach, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY (2001), y Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (2002). Estos sistemas de expresión incluyen sistemas basados en la dihidrofolato reductasa (DHFr ), entre muchos otros. El sistema de expresión de la glutamina sintetasa se discute en su totalidad o en parte en relación con las patentes europeas números EP 216846, EP 256055 y EP 323997 y la solicitud de patente europea 89303964. En una realización, el anticuerpo usado se fabrica en células NS0 utilizando un sistema de glutamina sintetasa (GS-NS0). En otra realización, el anticuerpo se fabrica en células CHO usando un sistema DHFR. Ambos sistemas son bien conocidos en la técnica y se describen, entre otros, en Barnes et al. Biotech & Bioengineering 73: 261-270 (2001), y las referencias citadas en el mismo.

La mutagénesis dirigida al sitio del dominio CH2 del anticuerpo para eliminar la glicosilación puede ser preferida para prevenir cambios en la inmunogenicidad, farmacocinética y/o funciones efectoras resultantes de la glicosilación no humana. Además, el anticuerpo puede desglicosilarse mediante procedimientos enzimáticos (véase, por ejemplo, Thotakura et al. Meth. Enzymol. 138: 350 (1987)) y/o químicos (véase, por ejemplo, Hakimuddin et al., Arch. Biochem. Biophys. 259: 52 (1987)).

Además, las realizaciones abarcan el uso de un anticuerpo que comprende un patrón de glicosilación alterado. El experto en la materia apreciaría, basándose en la descripción proporcionada en el presente documento, que un anticuerpo puede modificarse para comprender sitios de glicosilación adicionales, menos, o diferentes en comparación con el anticuerpo que se produce de forma natural. Tales modificaciones se describen, por ejemplo, en las publicaciones de las solicitudes de patente de Estados Unidos Números 2003/0207336 y 2003/0157108, y en las publicaciones internacionales de patente números WO 01/81405 y 00/24893.

Además, algunas realizaciones comprenden el uso de uno o más anticuerpos independientemente de la glicoforma, si existe, presente en el anticuerpo. Además, los procedimientos para remodelar ampliamente la glicoforma presente en una glicoproteína son bien conocidos en la técnica e incluyen, por ejemplo, los descritos en las publicaciones internacionales de patente números WO 03/031464, WO 98/58964 y W^o 99/22764, y las publicaciones de las solicitudes de patente de Estados Unidos Nos. 2004/0063911, 2004/0132640, 2004/0142856, 2004/0072290, y la patente de Estados Unidos N° 6.602.684 de Umaña et al.

Además, las realizaciones abarcan el uso de un anticuerpo con cualquier modificación covalente y no covalente conocida en la técnica, que incluye, pero no se limita a, unir el polipéptido a uno de una variedad de polímeros no proteicos, por ejemplo, polietilenglicol, polipropilenglicol o polioxialquilenos en la forma expuesta en, por ejemplo, las publicaciones de solicitud de patente de e E. Uu . números 2003/0207346 y 2004/0132640, y las patentes de Estados Unidos Números 4.640.835; 4.496.689; 4.301.144; 4.670.417; 4.791.192; 4.179.337.

Adicionalmente, las realizaciones abarcan el uso de un anticuerpo, o una porción de unión a antígeno del mismo, una proteína quimérica que comprende, por ejemplo, un polipéptido de albúmina de suero humano, o un fragmento del mismo. Si la proteína quimérica se produce utilizando procedimientos recombinantes, por ejemplo, mediante la clonación de un ácido nucleico quimérico que codifica la proteína quimérica, o mediante un enlace químico de las dos porciones de péptidos, el experto en la materia entenderá una vez armado con las enseñanzas proporcionadas en el presente documento que tales proteínas quiméricas son bien conocidas en la técnica y pueden conferir propiedades biológicas deseables tales como, pero no limitadas a, mayor estabilidad y semivida en suero para el anticuerpo de la invención y, por lo tanto, tales moléculas se incluyen en el presente documento.

Los anticuerpos que se generan para uso en la invención no necesitan poseer inicialmente un isotipo particular deseado. Más bien, el anticuerpo que se genera puede poseer cualquier isotipo y se puede cambiar de isotipo posteriormente utilizando técnicas convencionales. Estas incluyen técnicas de recombinación directa (véase, por ejemplo, la patente de Estados Unidos No. 4.816.397) y técnicas de fusión célula-célula (véase, por ejemplo, la Patente de los Estados Unidos No. 5.916.771).

La función efectora de los anticuerpos de la invención se puede cambiar mediante el cambio de isotipo a un IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgD, IgA, IgE o IgM para diversos usos terapéuticos. Además, la dependencia del complemento para la destrucción celular se puede evitar mediante el uso de biespecíficos, inmunotoxinas o radiomarcadores, por ejemplo.

Preferiblemente, el anticuerpo anti-4-1BB es MOR-7480.1 y el anticuerpo inductor de ADCC es rituximab.

III. Terapia de combinación con anticuerpos anti-4-1BB y anticuerpos capaces de inducir ADCC

Las realizaciones descritas en el presente documento se refieren a una terapia de combinación que comprende la administración conjunta de un anticuerpo anti-4-1BB (por ejemplo, MOR-7480.1, MOR-7480 o Mo R-7480.2, o como parte de la divulgación MOR-6032, MOR-7361, MOR-7483, m Or-7483.1, o MOR-7483.2) y al menos un anticuerpo inductor de ADCC (por ejemplo, un anti-CD20 tal como rituximab).

En una realización, una combinación de un anticuerpo anti-4-1BB (por ejemplo, MOR-7480.1) y un anticuerpo inductor de ADCC se administra conjuntamente a un paciente para tratar el cáncer. La combinación puede ser útil para el tratamiento de, entre otras cosas, el crecimiento celular anormal, por ejemplo, neoplasias malignas hematológicas, neoplasias malignas de células B, linfoma no Hodgkin, linfoma no Hodgkin positivo para CD20, mesotelioma, hepatobiliar (conducto hepático y biliar), un tumor primario o secundario del CNS, un tumor cerebral primario o secundario, cáncer de pulmón (NSCLC y SCLC), cáncer de huesos, cáncer de páncreas, cáncer de piel, cáncer de cabeza o cuello, melanoma cutáneo o intraocular, cáncer de ovario, cáncer de colon, cáncer rectal, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, gastrointestinal (gástrico, colorrectal y duodenal), cáncer de mama (por ejemplo, cáncer de mama triple negativo), cáncer de útero, carcinoma de las trompas de Falopio, carcinoma de endometrio, carcinoma de cuello uterino, carcinoma de la vagina, carcinoma de la vulva, enfermedad de Hodgkin, cáncer de esófago, cáncer del intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de la glándula tiroides, cáncer de la glándula paratiroides, cáncer de la glándula adrenal, sarcoma de tejidos blandos, cáncer de la uretra, cáncer de pene, cáncer de próstata, cáncer testicular, leucemia crónica o aguda, leucemia mieloide crónica, linfomas linfocíticos, cáncer de vejiga, cáncer de riñón o uréter, carcinoma de células renales, carcinoma de la pelvis renal, neoplasias del sistema nervioso central (CNS), linfoma primario del CNS, linfoma no Hodgkin, tumores del eje espinal, glioma del tronco encefálico, adenoma hipofisario, cáncer adrenocortical, cáncer de vesícula biliar, mieloma múltiple, colangiocarcinoma, fibrosarcoma, neuroblastoma, retinoblastoma o una combinación de uno o más de los cánceres anteriores.

En algunas realizaciones, una combinación de un anticuerpo anti-4-1BB (por ejemplo, MOR-7480.1) y rituximab se administra conjuntamente a un paciente para tratar tumores malignos hematológicos, tumores malignos de células B, linfoma no Hodgkin o linfoma no Hodgkin positivo para CD20.

En alguna descripción, una combinación de un anticuerpo anti-4-1BB (por ejemplo, MOR-7480.1) y un anticuerpo anti-P-cadherina se administra conjuntamente a un paciente para tratar el cáncer de mama (por ejemplo, cáncer de mama triple negativo) .

Además, la invención abarca el uso de un anticuerpo anti-4-1BB en combinación con un anticuerpo anti-CD20 tal como rituximab como un neoadyuvante, adyuvante, tratamiento de primera línea, terapia de segunda línea y/o tercera línea para el cáncer. (por ejemplo, terapia adyuvante para el cáncer de mama, terapia de primera línea para el cáncer de pulmón metastásico, terapia de tercera línea para los tumores de células germinales y similares).

En una realización, la combinación de la invención se administra en combinación adicional con una terapia de cuidado estándar para uno de los cánceres descritos anteriormente. En otra realización, la combinación se administra a un paciente que ha fallado la terapia estándar de cuidado.

El experto en la materia apreciaría, una vez proporcionadas las enseñanzas descritas en el presente documento, que los procedimientos descritos en el presente documento se pueden usar con, o secuencialmente (antes o después) con cirugía, radioterapia, o ambos, para tratar el cáncer. Es decir, varios tratamientos pueden combinarse con la terapia de combinación de anticuerpos, como entendería un experto en la técnica una vez armado con las enseñanzas proporcionadas en este documento.

En otra realización, un anticuerpo anti-4-1BB en combinación con al menos un anticuerpo inductor de ADCC (por ejemplo, un anticuerpo anti-CD20 como el rituximab) se administra conjuntamente para mejorar, prolongar, o ambos, una respuesta inmune a un tumor. Esto se debe a que puede haber una interacción entre el efecto antitumoral del anticuerpo anti-4-1BB y el anticuerpo inductor de ADCC que conduce a un efecto antitumoral más efectivo que cualquiera de los anticuerpos solos. Por lo tanto, sin desear estar ligado a ninguna teoría particular, la combinación del anticuerpo anti-4-1BB y el anticuerpo inductor de ADCC puede inducir una respuesta inmunológica más robusta dentro del tumor de lo esperado. Por lo tanto, la combinación del anticuerpo anti-4-1BB y el anticuerpo inductor de ADCC puede proporcionar un posible efecto aditivo o sinérgico, proporcionando así un importante tratamiento terapéutico novedoso para el cáncer.

En ciertas realizaciones, el anticuerpo inductor de ADCC (por ejemplo, un anticuerpo anti-CD20 tal como rituximab) puede potenciar los efectos del anticuerpo anti-4-1BB de una manera aditiva. En una realización preferida, el anticuerpo inductor de ADCC (por ejemplo, un anticuerpo anti-CD20 tal como rituximab) potencia los efectos del anticuerpo anti-4-1BB de una manera sinérgica. En otra realización, el anticuerpo anti-4-1BB potencia el efecto de un anticuerpo inductor de ADCC de una manera aditiva. Preferiblemente, los efectos se potencian de manera sinérgica. Por lo tanto, en ciertas realizaciones, la invención abarca procedimientos de tratamiento o prevención de enfermedades que proporcionan mejores perfiles terapéuticos que la administración del anticuerpo inductor de ADCC (por ejemplo, un anticuerpo anti-CD20 como rituximab) solo y/o anticuerpo anti-4-1BB solo.

Las presentes realizaciones abarcan terapias de combinación que tienen potencia aditiva o un efecto terapéutico aditivo, al tiempo que reducen o evitan los efectos adversos o no deseados. La invención también abarca combinaciones sinérgicas en las que la eficacia terapéutica es mayor que la aditiva, mientras que se reducen o evitan los efectos adversos o no deseados. En ciertas realizaciones, los procedimientos de la invención permiten el tratamiento o la prevención de enfermedades y trastornos en los que el tratamiento se mejora mediante una respuesta antitumoral mejorada utilizando dosis más bajas y/o menos frecuentes de anticuerpo anti-4-1BB y/o anticuerpo inductor de ADCC para reducir la incidencia de efectos no deseados o adversos causados por la administración de anticuerpo anti-4-1BB y/o anticuerpo inductor de ADCC solo, mientras se mantiene o mejora la eficacia del tratamiento, preferiblemente aumenta el cumplimiento del paciente, mejora la terapia y/o reduce los efectos no deseados o adversos.

Los procedimientos y composiciones de la invención son útiles no solo en pacientes no tratados sino que también son útiles en el tratamiento de pacientes que no responden parcial o completamente al anticuerpo inductor de ADCC administrado solo o al anticuerpo anti-4-1BB administrado solo. Diversas realizaciones proporcionan procedimientos y composiciones útiles para el tratamiento de enfermedades o trastornos en pacientes que han demostrado ser o pueden ser refractarios o que no responden a terapias que comprenden la administración de uno o ambos anticuerpos anti-4-1BB y/o que inducen ADCC, y en el que el tratamiento se mejora por una respuesta inmune mejorada. En una realización, el procedimiento comprende combinar un anticuerpo anti-CD20 (preferiblemente, rituximab) y un anticuerpo anti-4-1BB (preferiblemente, anticuerpo MOR-7480.1).

Los anticuerpos pueden administrarse en dosis, composiciones, mediante regímenes de dosificación y mediante las vías de administración descritas en el presente documento. El experto en la materia apreciaría, basándose en la descripción proporcionada en el presente documento, que la dosis y el régimen de dosificación se ajustan de acuerdo con procedimientos bien conocidos en las técnicas terapéuticas. Es decir, la dosis máxima tolerable se puede establecer fácilmente, y la cantidad efectiva que proporciona un beneficio terapéutico detectable a un paciente también se puede determinar, al igual que los requisitos temporales para administrar cada agente para proporcionar un beneficio terapéutico detectable al paciente. Por consiguiente, aunque ciertos regímenes de dosis y administración se ejemplifican en el presente documento, estos ejemplos no limitan de ninguna manera la dosis y el régimen de administración que se pueden proporcionar a un paciente al poner en práctica la presente invención. Además, un experto en la materia entendería, una vez armado con las enseñanzas proporcionadas en el presente documento, que un beneficio terapéutico, tal como, entre otros, una disminución detectable en el tamaño del tumor y/o metástasis, un nivel reducido de PSA en el cáncer de próstata, y el tiempo de recurrencia, entre muchos otros parámetros, puede evaluarse mediante una amplia variedad de procedimientos conocidos en la técnica para evaluar la eficacia del tratamiento del cáncer, y estos procedimientos se incluyen en el presente documento, así como los procedimientos que se desarrollarán en el futuro.

Algunas realizaciones descritas en el presente documento se refieren a la terapia neoadyuvante, adyuvante, de primera línea y/o de segunda línea que comprende administrar una combinación de anticuerpos. Otras realizaciones abarcan el uso de la combinación a lo largo de toda la enfermedad y el tratamiento continuo. Más específicamente, los nuevos procedimientos descritos en el presente documento pueden proporcionar un beneficio terapéutico antes y después de la metástasis, así como a pacientes que se han vuelto refractarios a un agente quimioterapéutico, ya que la combinación de anticuerpos puede mejorar una respuesta inmune, incluida cualquier respuesta mediada por la terapia. Los datos divulgados en el presente documento sugieren que la inmunoterapia que comprende un anticuerpo anti-4-1BB en combinación con al menos un anticuerpo inductor de ADCC (por ejemplo, un anticuerpo anti-CD20 como rituximab o un anticuerpo anti-P-cadherina) puede proporcionar un beneficio terapéutico solo o combinado con al menos un agente adicional, en cualquier momento durante el tratamiento. De hecho, los datos divulgados en el presente documento sugieren además que un efecto sinérgico está mediado por la administración combinada de un anticuerpo anti-4-1BB y al menos un anticuerpo inductor de ADCC (por ejemplo, un anticuerpo anti-CD20 tal como el rituximab o un anticuerpo anti-P-cadherina) para el tratamiento del cáncer. Por lo tanto, las presentes realizaciones proporcionan importantes terapias novedosas para el tratamiento del cáncer, por lo que el sistema inmunitario del paciente se mejora para proporcionar un efecto antitumoral.

IV. Terapia adicional de combinación

Con base en la descripción proporcionada en el presente documento, que incluye el efecto aditivo o sinérgico combinado de la administración conjunta de un anticuerpo anti-4-1BB en combinación con un anticuerpo inductor de ADCC (por ejemplo, un anticuerpo anti-CD20 tal como rituximab), el experto en la materia apreciaría que la invención abarca numerosas terapias de combinación en las que los anticuerpos se administran al paciente en combinación con al menos otro agente terapéutico que proporciona un beneficio terapéutico. Aunque muchas de estas combinaciones serán fácilmente evidentes para un experto en la materia una vez armadas con las enseñanzas proporcionadas en este documento, varias combinaciones se discuten en este documento. Sin embargo, las realizaciones descritas en el presente documento no están limitadas de ninguna manera a estas combinaciones, que se exponen en el presente documento meramente con fines ilustrativos.

La administración conjunta de los anticuerpos con un agente terapéutico adicional abarca la administración conjunta del anticuerpo anti-4-1BB, un anticuerpo inductor de ADCC (por ejemplo, un anticuerpo anti-CD20 como rituximab) y uno o más tratamientos terapéuticos adicionales, y también abarca la administración conjunta de dos o más composiciones farmacéuticas separadas, una que comprende el anticuerpo anti-4-1BB y la otra u otras que comprenden el anticuerpo inductor de ADCC, y otra u otras que comprenden al menos un agente terapéutico adicional. Además, aunque la terapia de administración conjunta o combinada (conjunta) generalmente significa que los anticuerpos y los agentes terapéuticos adicionales se administran al mismo tiempo, también abarca la dosificación simultánea, secuencial o separada de los componentes individuales del tratamiento. Además, cuando un anticuerpo se administra por vía intravenosa y el o los agentes terapéuticos adicionales se administran por vía oral, o por inyección subcutánea o intramuscular, se entiende que la combinación se administra preferiblemente como dos, tres o más composiciones farmacéuticas separadas.

Cuando un mamífero se somete a quimioterapia adicional, los agentes quimioterapéuticos bien conocidos en la técnica se pueden usar en combinación con los procedimientos descritos en el presente documento. Además, los inhibidores del factor de crecimiento, los modificadores de la respuesta biológica, los agentes alquilantes, los antibióticos intercalantes, los alcaloides de la vinca, los inmunomoduladores, los taxanos, los moduladores selectivos de los receptores de estrógenos (SERM), tales como, los inhibidores de la angiogénesis, lasofoxifeno, entre muchos agentes terapéuticos, algunos de los cuales se describen a continuación, pueden ser utilizados.

Inhibidores de la angiogénesis

Se puede usar un inhibidor de la angiogénesis en los procedimientos descritos en el presente documento. Un inhibidor de la angiogénesis incluye, pero no se limita a, bevacizumab (AVASTIN; Genentech), un anticuerpo humanizado contra VEGF. Puede usarse en combinación con 5FU y está indicado como tratamiento de primera línea para pacientes con carcinoma metastásico de colon o recto. Los agentes que atacan directamente los factores angiogénicos o sus receptores ofrecen la posibilidad de una mayor actividad en las neoplasias hematológicas competentes del receptor al interrumpir la señalización del receptor autocrino. Bevacizumab produce una neutralización sostenida del VEGF circulante y puede ser útil para el tratamiento del síndrome mielodisplásico (MDS), el linfoma, la leucemia mieloide aguda (^a M^l) y los tumores sólidos. Los inhibidores de la molécula pequeña RTKI de la señalización del receptor angiogénico (por ejemplo, indolinona) están incluidos en las realizaciones descritas en este documento. El primer antagonista del receptor que ingresa a las pruebas clínicas en tumores malignos hematológicos es SU5416 (Sugen), que afecta la autofosforilación inducida por ligando de los receptores VEGFR-1 y VEGFR-2 y c-Kit. SU5416 inhibe la respuesta clonogénica inducida por VEGF en líneas celulares de leucemia y promueve la apoptosis en mieloblastos de pacientes con AML. Se están evaluando otros RTKI, incluidos PTK787/ZK222584 (Novartis) y AG-13736 (Agouron/Pfizer) para tratar la AML y otras neoplasias malignas hematológicas competentes para el receptor. Las realizaciones descritas en el presente documento también incluyen el tratamiento del cáncer, por ejemplo, linfomas, carcinomas de colon, carcinoma renal, tumores del estroma gastrointestinal y similares, utilizando una combinación de un anticuerpo anti-4-1BB, al menos un anticuerpo inductor de ADCC (por ejemplo, un anticuerpo anti-CD20 como rituximab), y al menos un inhibidor de la angiogénesis adicional, por ejemplo, AG-13736, ^a G-26.798, y similares, así como otros inhibidores de la angiogénesis que son bien conocidos en la técnica o desarrollados a futuro.

Así, los agentes antiangiogénicos, como los inhibidores de la MMP-2 (metaloproteinasa 2 de matriz), los inhibidores de la MMP-9 (metaloproteinasa 9 de matriz) y los inhibidores de la COX-II (ciclooxigenasa II), se pueden usar en los procedimientos descritos en este documento. Los ejemplos de inhibidores de COX-II útiles incluyen CELEBREXMR (celecoxib), valdecoxib, rofecoxib, parecoxib, deracoxib, SD-8381, ABT-963, etoricoxib, lumiracoxib, BMS-347070, NS-398, RS 57067, meloxicam. Los ejemplos de inhibidores de la metaloproteinasa de matriz útiles se describen en las publicaciones internacionales de patente números WO 96/33172; ^w O 96/27583; WO 98/07697, WO 98/03516, WO 98/34918, WO 98/34915, WO 98/33768, WO 98/30566, WO 90/05719, WO 99/52910, WO 99/52889, WO 99/29667, las solicitudes de patente europea Nos. 780386 (publicada el 25 de junio de 1997), 97304971.1 (presentada el 8 de julio de 1997), 99308617.2 (presentada el 29 de octubre de 1999), 606046 (publicada el 13 de julio de 1994), 931788 (publicada el 28 de julio de 1999), 99302232.1 (presentada el 25 de marzo de 1999), solicitud internacional PCT/IB98/01113 (presentada el 21 de julio de 1998), la solicitud de patente de Gran Bretaña No.

9912961.1 (presentada el 3 de junio de 1999), solicitud provisional de patente de los Estados Unidos No. 60/148,464 (presentada 12 de agosto de 1999), y las patentes de Estados Unidos Nos. 5.863.949 y 5.861.510.

Los inhibidores de MMP-2 y MMP-9 preferidos son aquellos que tienen poca o ninguna actividad inhibidora de MMP-I. Más preferidos son aquellos que inhiben selectivamente MMP-2 y/o MMP-9 en relación con las otras metaloproteinasas de matriz (es decir, MMP-1, MMP-3, MMP-4, MMP-5, M^m P-6, MMP-7, MMP-8, MMP-10, MMP-I I , MMP-12 y MMP-13).

Inhibidores de la transducción de señal.

Los tratamientos descritos en el presente documento también se pueden usar con otros inhibidores de la transducción de señal, tales como los agentes que pueden inhibir las respuestas de EGFR (receptor del factor de crecimiento epidérmico), tal como los anticuerpos de EGFR, los anticuerpos de EGF y las moléculas que son inhibidoras de EGFR; Inhibidores de VEGF (factor de crecimiento endotelial vascular), tal como los receptores de VEGF y las moléculas que pueden inhibir VEGF; e inhibidores del receptor erbB2, tal como moléculas orgánicas o anticuerpos que se unen al receptor erbB2, por ejemplo, HERCEPTIN (Genentech, Inc., San Francisco, CA).

Los inhibidores de EGFR se describen, por ejemplo, en las publicaciones internacionales de patente Nos WO 95/19970, WO 98/14451, WO 98/02434 y en la patente de Estados Unidos No. 5.747.498, y tales sustancias pueden usarse en la presente invención como se describe en el presente documento. Los agentes inhibidores de EGFR incluyen, pero no se limitan a, los anticuerpos monoclonales C225 (ERBITUX), 22Mab anti-EGFR (ImClone Systems Inc., Nueva York, NY) y ABX-EGF (panitumumab, Abgenix Inc., Fremont, CA), los compuestos ^z D-1839 (AstraZeneca), BIBX-1382 (Boehringer Ingelheim), MDX-447 (Medarex, lnc., Annandale, NJ) y OlX-103 (Merck & Co., Whitehouse Station, NJ), VRCTC-310 (Ventech Research) y toxina de fusión EGF (Seragen Inc., Hopkinton, MA). Estos y otros agentes inhibidores de EGFR pueden usarse en las presentes realizaciones.

Los compuestos dirigidos a la inhibición de la tirosina quinasa (TK) del receptor del factor de crecimiento epidérmico (EGFR) representan una clase relativamente nueva de fármacos antineoplásicos que son útiles en el procedimiento de la presente invención. Muchos cánceres humanos expresan miembros de la familia EGFR en la superficie celular. Cuando un ligando se une al EGFR, desencadena una cascada de reacciones celulares que resultan en un aumento de la división celular e influyen en otros aspectos del desarrollo y la progresión del cáncer, incluida la angiogénesis, la diseminación metastásica y la inhibición de la apoptosis. Los inhibidores de EGFR-TK pueden dirigirse selectivamente a uno de los miembros de la familia EGFR (EGFR (también conocido como HER1 o ErbB-1), HER2/neu (también conocido como ErbB-2), HER3 (también conocido como ErbB-3), o HER4 (también conocido como ErbB-4)), o puede apuntar a dos o más de ellos. Los inhibidores de EGFR-TK adecuados para uso en la presente invención incluyen gefitinib (IRESSA), erlotinib (TARCEVA), CI-1033 (Pfizer), GW2016 (GlaxoSmithKline), EKB-569 (Wyeth), PKI-166 (Novartis), CP-724,714 (Pfizer), y BIBX-1382 (Boehringer-Ingelheim). Se describen inhibidores adicionales de EGFR-TK en la solicitud de patente de Estados Unidos número 09/883.752, presentada el 18 de junio de 2001. Los inhibidores de VEGF, por ejemplo SU-5416 y SU-6668 (Sugen Inc., San Francisco, CA), también pueden emplearse en combinación con los procedimientos descritos en el presente documento. Los inhibidores de VEGF se describen, por ejemplo, en la solicitud internacional de patente No PCT/IB99/00797 (presentada el 3 de mayo de 1999), las publicaciones internacionales de patente Nos. Wo 99/24440; WO 95/21613; WO 99/61422; WO 98/50356; WO 99/10349; WO 97/32856; WO 97/22596; WO 98/54093; WO 98/02438; WO 99/16755; WO 98/02437; las patentes de Estados Unidos Nos. 5.834.504; 5.883.113; 5.886.020; y 5.792.783. Otros ejemplos de algunos inhibidores específicos de VEGF útiles en la presente invención son IM862 (Cytran Inc., Kirkland, WA); anticuerpo Imclone IMC-1C11, anticuerpo monoclonal anti-VEGF de Genentech, Inc., San Francisco, CA; y angiozima, una ribozima sintética de Ribozyme (Boulder, CO) y Chiron (Emeryville, CA).

Los inhibidores del receptor ErbB2, como GW-282974 (Glaxo Wellcome plc) y los anticuerpos monoclonales AR-209 (Aronex Pharmaceuticals Inc., Woodlands, TX) y 2B-1 (Chiron), pueden combinarse además con los procedimientos aquí descritos, por ejemplo, los indicados en las publicaciones internacionales de patentes Nos. WO 98/02434; WO 99/35146; WO 99/35132; WO 98/02437; WO 97/13760; WO 95/19970; las patentes de Estados Unidos Nos.

5.587.458 y 5.877.305. Los inhibidores del receptor ErbB2 útiles en las presentes realizaciones también se describen en el documento EP1029853 (publicado el 23 de agosto de 2000) y en la publicación internacional de patente No. WO 00/44728 (publicada el 3 de agosto de 2000). Los compuestos y la sustancia inhibidores del receptor erbB2 descritos en las solicitudes PCT mencionadas anteriormente, las patentes de Estados Unidos, y las solicitudes provisionales de los Estados Unidos, Así como otros compuestos y sustancias que inhiben el receptor erbB2, se pueden usar con los anticuerpos de acuerdo con las presentes realizaciones.

Los tratamientos descritos en el presente documento también se pueden usar con otros agentes útiles para tratar el crecimiento celular anormal o el cáncer, que incluyen, entre otros, otros agentes capaces de mejorar las respuestas inmunitarias antitumorales; y agentes antiproliferativos tales como inhibidores de la proteína farnesil transferasa (por ejemplo, BMS 214662), e inhibidores de avp3, tales como el anticuerpo VITAXlN de avp3, inhibidores de avp5, inhibidores de p53 y similares.

Cuando los anticuerpos de los procedimientos descritos en el presente documento se administran en combinación con otro agente inmunomodulador, el agente inmunomodulador puede seleccionarse, por ejemplo, del grupo que consiste en un activador de células dendríticas como el ligando CD40 y los anticuerpos agonistas anti-CD40, así como potenciadores de la presentación de antígenos, potenciadores del tropismo de células T, inhibidores de factores inmunosupresores relacionados con tumores, tales como TGF-p (factor beta de crecimiento transformante) e IL-10. Los anticuerpos agonistas anti-CD40 preferidos abarcan los anticuerpos descritos en la solicitud internacional de patente No. PCT/US02/36107, presentada el 8 de noviembre de 2002 (publicada como WO 03/040170 el 15 de mayo de 2003), y la solicitud de patente de Estados Unidos No. 10/292,088, presentada el 8 de noviembre de 2002 (publicada como la publicación de patente de Estados Unidos No. US2003/0211100 el 13 de noviembre de 2003), que incluye, entre otros, un anticuerpo que tiene la secuencia de aminoácidos de las cadenas pesada y ligera del anticuerpo 3.1.1, 3.1.1.H-A78T, 3.1.1H-A78T-V88A-V97A, 3.1.1L-L4M-L83V, 3.1.1H-A78T-V88A-V97A/3.1.1L-L4M-L83V, 7.1.2, 10.8.3, 15.1.1, 21.2.1, 21.4.1, 22.1.1, 22.1.1H-C109A, 23.5.1, 23.25.1, 23.28.1, 23.28.1H-D16E, 23.29.1 y 24.2.1.

Inhibidores de IGF-1R

Los regímenes de tratamiento presentes también pueden combinarse con anticuerpos u otros ligandos que inhiben el crecimiento tumoral mediante la unión a IGF-1R (receptor del factor 1 de crecimiento tipo insulina). Los ejemplos de anticuerpos anti-IGF-1R que se pueden usar incluyen los descritos en la solicitud internacional de patente No. PCT/US01/51113, presentada el 20/12/01 (publicada como WO 02/053596 el 11 de julio de 2002), y la solicitud internacional de patente No. PCT/IB2004/002555, presentada el 3 de agosto de 2004 (publicada como WO 2005/016967 el 24 de febrero de 2005). Los anticuerpos anti-IGFR-1R preferidos abarcan un anticuerpo que tiene la secuencia de aminoácidos de las cadenas pesada y ligera, por ejemplo, del anticuerpo 2.12.1, 2.13.2, 2.14.3, 3.1.1, 4.9.2 y 4.17.3.

Los ligandos que inhiben la señalización a través del IGF-1R también abarcan moléculas pequeñas y otros ligandos que incluyen, entre otros, somavert (PEGVISOMANT), que es un análogo de la hormona del crecimiento que inhibe la señalización de IGF-1. PEGVISOMANT está conjugado con polietilenglicol y puede utilizarse, entre otras cosas, para tratar la acromegalia. PEGVISOMANT puede coadministrarse con anticuerpos de los procedimientos descritos en el presente documento para tratar el cáncer, ya que la combinación puede inhibir el crecimiento del tumor. Por lo tanto, PEGVISOMANT, de manera similar con los anticuerpos anti-IGF-1R, puede usarse para tratar el cáncer como se describe en el presente documento.

Las presentes realizaciones abarcan terapias que pueden combinarse además con una gran cantidad de terapias terapéuticas, quirúrgicas, de radiación y otras terapéuticas para tratar a un paciente. Los agentes terapéuticos son numerosos y se han descrito, por ejemplo, en las publicaciones de solicitudes de patente de Estados Unidos Nos.

2004/0005318, 2003/0086930, 2002/0086014, y la publicación internacional No. WO 03/086459, entre muchas otras. Dichos agentes terapéuticos incluyen, pero no se limitan a, inhibidores de topoisomerasa I; otros anticuerpos (trastuzumab, anti-IGF-1R y similares); agentes quimioterapéuticos como, por ejemplo, imatinib (GLEEVEC, GLIVEC o STI571; Novartis), sorafenib (BAY 43-9006; Bayer Pharmaceuticals Corp./Onyx Pharmaceuticals), moduladores selectivos del receptor de estrógeno (SERM), taxanos, alcaloides de la vinca, temozolomida, inhibidores de la angiogénesis, inhibidores de EGFR, inhibidores de VEGF, inhibidores del receptor ErbB2, agentes antiproliferativos (por ejemplo, inhibidores de la proteína farnesil transferasa e inhibidores de avp3, inhibidores de avp5, inhibidores de p53 y similares), inmunomoduladores, citoquinas, vacunas tumorales; antígenos específicos de tumores; terapias de células madre y dendríticas; agentes alquilantes, antagonistas de folato; antagonistas de pirimidina; antibióticos de antraciclina; compuestos de platino; moléculas coestimuladoras (por ejemplo, CD4, CD25, PD-1, B7-H3, 4-1BB, OX40, ICOS, CD30, HLA-DR, MHCII y LFA).

Radioterapia

La terapia de radiación se puede coadministrar con las terapias de combinación de anticuerpos descritas en este documento. La radioterapia se administra de acuerdo con procedimientos de radioterapia bien conocidos para el tratamiento del cáncer, tal como el cáncer de mama. La dosis y el régimen para la radioterapia pueden ser determinados fácilmente por un experto en la materia y se basan en la etapa de la enfermedad y otros factores bien conocidos en la técnica.

Agentes paliativos

Las presentes realizaciones también abarcan la administración de otros agentes terapéuticos. Dichos agentes terapéuticos incluyen analgésicos, vacunas contra el cáncer, agentes antivasculares, agentes antiproliferativos, agentes antieméticos y agentes antidiarreicos. Los agentes antieméticos preferidos incluyen clorhidrato de ondansetrón, clorhidrato de granisetrón y metoclopramida. Los agentes antidiarreicos preferidos incluyen difenoxilato y atropina (LOMOTIL), loperamida (IMMODIUM) y octreotida (SANDOSTATINA).

En otra realización, los procedimientos descritos en el presente documento incluyen administrar un agente con efecto antidiarreico en el que el agente está indicado en el tratamiento de afecciones inflamatorias crónicas del tracto gastrointestinal. Dichos agentes incluyen, entre otros, esteroides con actividad tópica (por ejemplo, budesonida [ENTOCORT]), y medicamentos contra el factor de necrosis tumoral (TNF) (por ejemplo, infliximab [REMICADE], etanercept [^e N^b REL] y adalimumab [HUMIRA]).

Terapia basada en células madre

La terapia de combinación de anticuerpos descrita en el presente documento se puede combinar con el trasplante de células madre para proporcionar un beneficio terapéutico a un paciente con cáncer. El trasplante de células madre se puede realizar de acuerdo con los procedimientos conocidos en la técnica. Algunos de estos procedimientos se describen en Appelbaum en los Harrison's Principles of Internal Medicine, Capítulo 14, Braunwald et al., Eds., 15a ed., McGraw-Hill Professional (2001). Por lo tanto, los procedimientos de la presente divulgación se refieren al tratamiento del cáncer en un mamífero que se ha sometido a un trasplante de células madre, procedimientos que comprenden administrar al mamífero una cantidad de un anticuerpo anti-4-1BB en combinación con al menos un anticuerpo inductor de ADCC (por ejemplo, un anticuerpo anti-CD20 como rituximab o un anticuerpo anti-P-cadherina), que es eficaz en el tratamiento del cáncer en combinación adicional con el trasplante de células madre.

Cuando el procedimiento comprende trasplante de células madre, la primera dosis de la terapia de combinación de anticuerpos puede administrarse después de que el sistema inmunitario del mamífero se haya recuperado del trasplante, por ejemplo, en el período de uno a l2 meses después del trasplante. En ciertas realizaciones, la primera dosis se administra en el período de uno a tres, o de uno a cuatro meses después del trasplante. El paciente puede someterse a trasplante de células madre y al tratamiento o tratamientos preparatorios.

Los procedimientos descritos en el presente documento también se refieren a procedimientos para el tratamiento del cáncer en un mamífero que comprenden las etapas de (i) realizar un trasplante de células madre en el mamífero y (ii) administrar una cantidad eficaz de un anticuerpo anti-4-1BB en combinación con una cantidad efectiva de al menos un anticuerpo inductor de ADCC. Preferiblemente, el mamífero es un humano. El trasplante de células madre puede ser alogénico o autólogo de células madre. Además, el trasplante de células abarca la transferencia adoptiva de linfocitos, ya sea del mismo paciente y/o de un donante compatible con HLA.

Además, los procedimientos de la divulgación pueden combinarse con radioterapia y trasplante de células madre, y cualquier combinación de cualquiera de los tratamientos descritos en el presente documento, conocidos en la técnica, o que se desarrollarán en el futuro.

Cuando el tratamiento de combinación de anticuerpos se combina con un tratamiento estándar contra el cáncer, tal como, entre otros, regímenes quimioterapéuticos, puede ser posible reducir la dosis de reactivo quimioterapéutico administrado (Mokyr, M. et al. Cancer Research 58: 5301 -5304 (1998)). Las terapias de combinación descritas en el presente documento pueden proporcionar una fuente incrementada de antígenos específicos del tumor, proporcionando así una respuesta inmune incrementada al tumor que, a su vez, proporciona un beneficio terapéutico al paciente.

V. Regímenes de dosificación

Para la administración de uno o más anticuerpos descritos en el presente documento, los regímenes de dosificación pueden ajustarse para proporcionar la respuesta óptima deseada. Por ejemplo, se puede administrar un solo bolo, se pueden administrar varias dosis divididas a lo largo del tiempo o la dosis se puede reducir o aumentar proporcionalmente según lo indiquen las exigencias de la situación terapéutica. Puede ser especialmente ventajoso formular composiciones parenterales en forma de unidad de dosificación para facilitar la administración y la uniformidad de la dosificación. La forma de unidad de dosificación como se usa en este documento se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para los sujetos mamíferos a tratar; cada unidad contiene una cantidad predeterminada de compuesto activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el vehículo farmacéutico requerido. La especificación para las formas unitarias de dosificación de la invención viene dictada típicamente y depende directamente de (a) las características únicas del anticuerpo y el efecto terapéutico o profiláctico particular que debe lograrse, y (b) las limitaciones inherentes a la técnica de composición tal como un compuesto activo para el tratamiento de la sensibilidad en los individuos.

Para la administración de anticuerpos o combinaciones de anticuerpos, la dosis puede oscilar entre aproximadamente 0,0001 y 100 mg/kg, y más generalmente entre 0,01 y 20 mg/kg, del peso corporal del huésped. Un intervalo no limitativo, a modo de ejemplo, para una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo o combinación de anticuerpos administrados de acuerdo con los procedimientos descritos en este documento es al menos de aproximadamente 0,01 mg/kg, al menos aproximadamente 0,1 mg/kg, al menos aproximadamente 0,3 mg/kg , al menos aproximadamente 1 mg/kg, al menos aproximadamente 5 mg/kg, al menos aproximadamente 6 mg/kg, al menos aproximadamente 10 mg/kg, al menos aproximadamente 15 mg/kg, o al menos aproximadamente 20 mg/kg. Por ejemplo, una cantidad terapéuticamente eficaz de anticuerpo o combinación de anticuerpos puede variar de aproximadamente 0,01-15 mg/kg, o por ejemplo aproximadamente 0,03-3 mg/kg, o por ejemplo aproximadamente 0,1-1 mg/kg. Además, una cantidad terapéuticamente eficaz de anticuerpo puede oscilar entre aproximadamente 0,1-30 mg/kg, o por ejemplo aproximadamente 0,3-25 mg/kg, o por ejemplo aproximadamente 1­ 20 mg/kg, o por ejemplo aproximadamente 3-20 mg/kg, o por ejemplo aproximadamente 5-20 mg/kg, o por ejemplo aproximadamente 10-20 mg/kg, o aproximadamente 3-15 mg/kg, o aproximadamente 5-15 mg/kg, o aproximadamente 10-15 mg/kg.

Además, se puede usar un ejemplo de protocolo de escalado de dosis para determinar la dosis máxima tolerada (MTD), para evaluar la toxicidad limitante de la dosis (DLT), si existe, asociada con la administración de la terapia de combinación descrita en este documento, y similares, comprende administrar dosis crecientes, tales como, pero sin limitarse a, aproximadamente 0,01 mg/kg, 0,03 mg/kg, 0,06 mg/kg, 0,1 mg/kg, 0,12 mg/kg, 0,18 mg/kg, 0,24 mg/kg, 0,3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 6 mg/kg, 7 mg/kg, 10 mg/kg, 12 mg/kg, 15 mg/kg, o más de 15 mg/kg, o cualquier combinación de los mismos. En algunas realizaciones, se administran dosis sucesivas de 0,1 mg/kg, 0,3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 6 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg o 20 mg/kg y se evalúa la toxicidad para el paciente, si la hay, y la eficacia del tratamiento, entre otros parámetros. En algunas realizaciones, se administran dosis sucesivas de 0,03 mg/kg, 0,06 mg/kg, 0,12 mg/kg, 0,18 mg/kg, 0,24 mg/kg y 0,3 mg/kg y se evalúa la toxicidad para el paciente, si la hay, así como para la eficacia del tratamiento, entre otros parámetros. Tales estudios para determinar la toxicidad y la eficacia de los regímenes de dosis son bien conocidos en la técnica.

Se debe tener en cuenta que los valores de dosificación pueden variar con el tipo y la gravedad de la afección a aliviar, y pueden incluir dosis únicas o múltiples. Debe entenderse además que para cualquier sujeto en particular, los regímenes de dosificación específicos deben ajustarse a lo largo del tiempo de acuerdo con la necesidad individual y el criterio profesional de la persona que administra o supervisa la administración de las composiciones, y que los intervalos de dosificación establecidos en el presente documento son sólo ejemplos y no están destinados a limitar el alcance o la práctica de la composición reivindicada. La determinación de las dosis y los regímenes apropiados para la administración del anticuerpo son bien conocidos en la técnica relevante y se entenderá que son comprendidos por el experto en la materia una vez que se proporcionan las enseñanzas descritas en el presente documento.

En una realización, los anticuerpos se administran en una formulación intravenosa como una solución acuosa estéril que contiene aproximadamente 5 a 20 mg/mL de anticuerpos, en un sistema tampón apropiado.

En una realización, parte de la dosis se administra mediante un bolo intravenoso y el resto por infusión de la formulación del anticuerpo. Por ejemplo, una inyección intravenosa de anticuerpo puede administrarse como un bolo, y el resto de una dosis predeterminada de anticuerpo puede administrarse mediante inyección intravenosa. Se puede administrar una dosis predeterminada de los anticuerpos, por ejemplo, durante un período de aproximadamente una hora y media a aproximadamente cinco horas.

Algunas realizaciones descritas en el presente documento se refieren a la administración de una combinación de un anticuerpo anti-4-1BB y al menos un anticuerpo inductor de ADCC (por ejemplo, un anticuerpo anti-CD20 tal como rituximab). El experto en la materia apreciaría que la combinación puede administrarse simultáneamente o que los anticuerpos y diversos agentes pueden administrarse en diferentes momentos. Sin embargo, las presentes realizaciones no se limitan a estos o cualquier régimen particular de dosificación o administración para administrar un anticuerpo anti-4-1BB en combinación con al menos un anticuerpo inductor de ADCC (por ejemplo, un anticuerpo anti-CD20 tal como rituximab). Más bien, la dosis óptima, la ruta y el régimen para la administración de los anticuerpos pueden determinarse fácilmente por un experto en la técnica relevante usando procedimientos bien conocidos.

Por ejemplo, se puede administrar una dosis única o dosis múltiples de cada anticuerpo (o combinación de anticuerpos). Alternativamente, se pueden administrar al menos una dosis, o al menos tres, seis o 12 dosis. Las dosis se pueden administrar, por ejemplo, diariamente, semanalmente, cada dos semanas, mensualmente, cada veinte días, cada 25 días, cada 28 días, cada 30 días, cada 40 días, cada 50 días, cada dos meses, cada 70 días, cada 80 días, cada tres meses, cada seis meses o cada año, o cualquier otro período que proporcione un beneficio terapéutico para el paciente según lo determine el profesional experto.

En una realización, se administra una inyección de bolo único que comprende el anticuerpo anti-4-1BB a un paciente por vía intravenosa a una dosis que oscila entre aproximadamente 0,1 mg/kg y 20 mg/kg aproximadamente cada veintiocho días. Una dosis de un anticuerpo inductor de ADCC se administra ese primer día. En algunas realizaciones, los anticuerpos se coadministran en el mismo día de inicio de cada ciclo de dosis. En otras realizaciones, el anticuerpo inductor de ADCC se administra en cualquier punto durante la administración del anticuerpo anti-4-1BB, o viceversa, y la invención no está limitada de ninguna manera con respecto a la administración relativa de los anticuerpos. Por lo tanto, el anticuerpo inductor de ADCC se puede administrar antes, durante y/o después de la administración del anticuerpo anti-4-1BB.

La combinación de anticuerpos puede administrarse como una terapia neoadyuvante antes de la cirugía, la radioterapia o cualquier otro tratamiento, para sensibilizar las células tumorales o para conferir un beneficio terapéutico al paciente. Además, la combinación se puede administrar de forma conjunta como terapia neoadyuvante después del tratamiento localizado (por ejemplo, cirugía, radiación, o ambos).

Además, la combinación puede administrarse como una terapia de segunda línea, tal como, pero sin limitarse a, una vez que la terapia de primera línea ha fallado. Alternativamente, la combinación puede administrarse simultáneamente con la terapia de primera línea o en cualquier momento durante la terapia de primera línea, que puede administrarse después del tratamiento inicial.

Los procedimientos descritos en este documento abarcan la administración de una combinación de anticuerpos, con o sin terapia adicional, que incluye, entre otros, un agente hormonal, radioterapia y cualquier agente terapéutico adicional (quimioterapia, terapia de inhibición de señales, entre otros), y similares, como apreciaría un experto en la materia basándose en la descripción proporcionada en este documento.

La divulgación también se refiere a un artículo de fabricación (por ejemplo, una forma de dosificación adaptada para administración iv) que comprende un anticuerpo anti-4-1BB en la cantidad efectiva para tratar el cáncer (por ejemplo, al menos 0,01 mg/kg, al menos 0,03 mg/kg, al menos 0,06 mg/kg, al menos 0,1 mg/kg, al menos 0,12 mg/kg, al menos 0,18 mg/kg, al menos 0,24 mg/kg, al menos 0,3 mg/kg, al menos 0,5 mg/kg, al menos 0,7 mg/kg, al menos 1 mg/kg, al menos 3 mg/kg, al menos 5 mg/kg, al menos 10 mg/kg, al menos 15 mg/kg o al menos 20 mg/kg) y una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un anticuerpo inductor de ADCC. En ciertas realizaciones, el artículo de fabricación comprende un contenedor o contenedores que comprenden un anticuerpo anti-4-1BB, al menos un anticuerpo inductor de ADCC (por ejemplo, un anticuerpo anti-CD20 como rituximab), y una etiqueta y/o instrucciones de uso para tratar el cáncer.

VI. Composiciones farmacéuticas

Las realizaciones descritas en este documento abarcan la preparación y el uso de composiciones farmacéuticas que comprenden un anticuerpo anti-4-1BB humano de la invención como un ingrediente activo en combinación con al menos un anticuerpo inductor de ADCC (por ejemplo, un anticuerpo anti-CD20 tal como rituximab o un anticuerpo anti-P-cadherina). Dicha composición farmacéutica puede consistir en cada ingrediente activo solo, como una combinación de al menos un ingrediente activo (por ejemplo, una dosis efectiva de un anticuerpo anti-4-1BB, una dosis efectiva de al menos un anticuerpo inductor de ADCC, como rituximab) en una forma adecuada para la administración a un sujeto, o la composición farmacéutica puede comprender el ingrediente activo y uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, uno o más ingredientes adicionales (activos y/o inactivos), o alguna combinación de estos.

En algunas realizaciones, uno o más anticuerpos se administran por vía parenteral (por ejemplo, por vía intravenosa) en una solución acuosa. En otras realizaciones, uno o más anticuerpos se administran por vía oral en forma de píldora/cápsula. Sin embargo, el experto en la materia entendería, basándose en la descripción proporcionada en el presente documento, que la invención no se limita a estas, o a cualquier otra formulaciones, dosis, vías de administración y similares. Más bien, la invención abarca cualquier formulación o procedimiento de administrar un anticuerpo anti-4-1BB en combinación con un anticuerpo inductor de ADCC, que incluye, entre otros, administrar cada agente por separado en una formulación diferente a través de una ruta de administración diferente (por ejemplo, administrar un anticuerpo iv, al mismo tiempo que se coadministra el otro anticuerpo por vía oral), entre muchos otros. Por lo tanto, la siguiente discusión describe varias formulaciones para practicar los procedimientos descritos en el presente documento que comprenden la administración de cualquier anticuerpo anti-4-1BB en combinación con un anticuerpo inductor de ADCC, pero las presentes realizaciones no se limitan a estas formulaciones, sino que comprenden cualquier formulación que pueda ser determinada fácilmente por un experto en la técnica una vez armado con las enseñanzas proporcionadas en este documento para su uso en los procedimientos descritos.

Los anticuerpos empleados en las realizaciones descritas en el presente documento pueden incorporarse en composiciones farmacéuticas adecuadas para la administración a un sujeto. Típicamente, la composición farmacéutica comprende el anticuerpo y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Como se usa en este documento, "portador farmacéuticamente aceptable" incluye cualquiera y todos los disolventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes isotónicos y de retardo de la absorción, y similares que sean fisiológicamente compatibles. Los ejemplos de vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen uno o más de agua, solución salina, solución salina tamponada con fosfato, dextrosa, trehalosa, glicerol, etanol y similares, así como combinaciones de los mismos. En muchos casos, será preferible incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, polialcoholes tales como manitol, sorbitol o cloruro de sodio en la composición. Sustancias farmacéuticamente aceptables tales como humectantes o cantidades menores de sustancias auxiliares tales como humectantes o agentes emulsionantes, conservantes o tampones, que mejoran la vida útil o la efectividad del anticuerpo o la porción de anticuerpo.

Los anticuerpos pueden estar en una variedad de formas. Estas incluyen, por ejemplo, formas de dosificación líquidas, semisólidas y sólidas, tales como soluciones líquidas (por ejemplo, soluciones inyectables e infusibles), dispersiones o suspensiones, comprimidos, píldoras, polvos, liposomas y supositorios. La forma preferida depende del modo de administración previsto y la aplicación terapéutica. Las composiciones preferidas típicas están en forma de soluciones inyectables o infusibles, tales como composiciones similares a las usadas para la inmunización pasiva de seres humanos con otros anticuerpos. El modo preferido de administración es parenteral (por ejemplo, intravenoso, subcutáneo, intraperitoneal, intramuscular). En una realización preferida, el anticuerpo se administra por infusión o inyección intravenosa. En otra realización preferida, el anticuerpo se administra mediante inyección intramuscular o subcutánea.

Las composiciones terapéuticas típicamente deben ser estériles y estables en las condiciones de fabricación y almacenamiento. La composición puede formularse como una solución, microemulsión, dispersión, liposoma u otra estructura ordenada adecuada para una alta concentración de fármaco. Las soluciones inyectables estériles se pueden preparar incorporando el anticuerpo en la cantidad requerida en un disolvente apropiado con uno o una combinación de los ingredientes enumerados anteriormente, según se requiera, seguido de una esterilización mediante filtración. En general, las dispersiones se preparan incorporando el compuesto activo en un vehículo estéril que contiene un medio de dispersión básico y los otros ingredientes requeridos de los enumerados anteriormente. En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los procedimientos preferidos de preparación son el secado al vacío y el secado por congelación que produce un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente deseado adicional de una solución previamente filtrada en forma estéril del mismo. La fluidez adecuada de una solución puede mantenerse, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento como la lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de la dispersión y mediante el uso de surfactantes. La absorción prolongada de composiciones inyectables se puede lograr incluyendo en la composición un agente que retrasa la absorción, por ejemplo, sales de monoestearato y gelatina.

Los anticuerpos pueden administrarse mediante una variedad de procedimientos conocidos en la técnica, que incluyen, sin limitación, oral, parenteral, mucosal, por inhalación, tópica, bucal, nasal y rectal. Para muchas aplicaciones terapéuticas, la ruta/modo de administración preferido es subcutánea, intramuscular, intravenosa o de infusión. Se puede emplear una inyección sin aguja, si se desea. Como apreciarán los expertos en la materia, la ruta y/o el modo de administración variarán dependiendo de los resultados deseados.

Los regímenes de dosificación pueden ajustarse para proporcionar la respuesta óptima deseada. Por ejemplo, se puede administrar un solo bolo, se pueden administrar varias dosis divididas a lo largo del tiempo o la dosis se puede reducir o aumentar proporcionalmente según lo indiquen las exigencias de la situación terapéutica. Es especialmente ventajoso formular composiciones parenterales en forma de unidad de dosificación para facilitar la administración y uniformidad de la dosificación. La forma de unidad de dosificación como se usa en este documento se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para los sujetos mamíferos a tratar; cada unidad contiene una cantidad predeterminada de compuesto activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el vehículo farmacéutico requerido. La especificación para las formas unitarias de dosificación de la invención está dictada por (a) las características únicas del anticuerpo y el efecto terapéutico o profiláctico particular que debe lograrse, y (b) las limitaciones inherentes en la técnica de la composición, tal como un compuesto activo para el tratamiento de la sensibilidad en los individuos.

Se debe tener en cuenta que los valores de dosificación pueden variar con el tipo y la gravedad de la afección a aliviar, y pueden incluir dosis únicas o múltiples. Debe entenderse además que para cualquier sujeto en particular, los regímenes de dosificación específicos deben ajustarse a lo largo del tiempo de acuerdo con la necesidad individual y el criterio profesional de la persona que administra o supervisa la administración de las composiciones, y que los intervalos de dosificación establecidos en el presente documento son ejemplos únicamente y no están destinados a limitar el alcance o la práctica de la composición reivindicada.

En una realización, uno o más anticuerpos se administran en una formulación intravenosa como una solución acuosa estéril que contiene 5 o 10 mg/mL de anticuerpo, con acetato de sodio, polisorbato 80 y cloruro de sodio a un pH que varía de aproximadamente 5 a 6. Preferiblemente, la formulación intravenosa es una solución acuosa estéril que contiene 5 o 10 mg/mL de anticuerpo, con acetato de sodio 20 mM, 0,2 mg/mL de polisorbato 80 y cloruro de sodio 140 mM a pH 5,5.

En otra realización de la invención, uno o más anticuerpos se administran en una solución estéril que comprende 20 mM de tampón de histidina, pH 5,5, 84 mg/mL de dihidrato de trehalosa, 0,2 mg/mL de polisorbato 80 y 0,1 mg/mL de dihidrato de ácido etilendiaminotetraacético. En un aspecto, la formulación se envasa en viales de vidrio transparente con un tapón de goma y un sello de aluminio. En otro aspecto, el vial contiene aproximadamente 20 mg/mL de anticuerpo con un llenado nominal de aproximadamente 400 mg por vial.

En una realización, parte de la dosis se administra mediante un bolo intravenoso y el resto por infusión de la formulación de anticuerpo. Por ejemplo, se puede administrar una inyección intravenosa de 0,01 mg/kg del anticuerpo en forma de bolo, y el resto de una dosis predeterminada de anticuerpo se puede administrar mediante inyección intravenosa. Se puede administrar una dosis predeterminada del anticuerpo, por ejemplo, durante un período de una hora y media hasta dos horas a cinco horas.

Las formulaciones de las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento pueden prepararse mediante cualquier procedimiento conocido o desarrollado a continuación en la técnica de la farmacología. En general, tales procedimientos de preparación incluyen la etapa de asociar el ingrediente activo con un portador o uno o más ingredientes accesorios adicionales, y luego, si es necesario o deseable, conformar o empaquetar el producto en una unidad deseada de una sola dosis o multidosis.

Una composición farmacéutica de la invención puede prepararse, envasarse o venderse a granel, como una dosis unitaria única, o como una pluralidad de dosis unitarias individuales. Como se usa en el presente documento, una "dosis unitaria" es una cantidad discreta de la composición farmacéutica que comprende una cantidad predeterminada del ingrediente activo. La cantidad del ingrediente activo es generalmente igual a la dosis del ingrediente activo que se administraría a un sujeto o una fracción conveniente de dicha dosis tal como, por ejemplo, la mitad o un tercio de dicha dosis.

Las cantidades relativas del ingrediente activo, el vehículo farmacéuticamente aceptable y cualquier ingrediente adicional en una composición farmacéutica variarán, dependiendo de la identidad, el tamaño y el estado del sujeto tratado y, además, dependiendo de la ruta por la cual la composición va a ser administrada. A modo de ejemplo, la composición puede comprender entre el 0,1% y el 100% (p/p) de ingrediente activo.

Además del ingrediente activo, una composición farmacéutica de la invención puede comprender además uno o más agentes farmacéuticamente activos adicionales. Los agentes adicionales particularmente contemplados incluyen antieméticos, antidiarreicos, agentes quimioterapéuticos, citoquinas y similares.

Las formulaciones de liberación controlada o sostenida de una composición farmacéutica de la invención pueden prepararse usando tecnología convencional.

Como se usa en el presente documento, la "administración parenteral" de una composición farmacéutica incluye cualquier vía de administración caracterizada por la ruptura física de un tejido de un sujeto y la administración de la composición farmacéutica a través de la ruptura en el tejido. La administración parenteral incluye así, pero no se limita a, la administración de una composición farmacéutica mediante inyección de la composición, mediante la aplicación de la composición a través de una incisión quirúrgica, mediante la aplicación de la composición a través de una herida no quirúrgica que penetra en el tejido, y similares. En particular, se contempla que la administración parenteral incluya, entre otras, las técnicas de infusión subcutánea, intraperitoneal, intramuscular, intraesternal e infusión dialítica renal.

Las formulaciones de una composición farmacéutica adecuada para administración parenteral comprenden el ingrediente activo combinado con un vehículo farmacéuticamente aceptable, tal como agua estéril o solución salina isotónica estéril. Dichas formulaciones pueden prepararse, envasarse o venderse en una forma adecuada para la administración en bolo o para la administración continua. Las formulaciones inyectables se pueden preparar, envasar o vender en forma de dosis unitaria, tal como en ampollas o en recipientes de dosis múltiples que contienen un conservante. Las formulaciones para administración parenteral incluyen, pero no se limitan a, suspensiones, soluciones, emulsiones en vehículos aceitosos o acuosos, pastas y formulaciones implantables de liberación sostenida o biodegradables como se describe a continuación. Dichas formulaciones pueden comprender además uno o más ingredientes adicionales que incluyen, pero no se limitan a, agentes de suspensión, estabilización o dispersión. En una realización de una formulación para administración parenteral, el ingrediente activo se proporciona en forma seca (es decir, en polvo o granulada) para la reconstitución con un vehículo adecuado (por ejemplo, agua estéril sin pirógenos) antes de la administración parenteral de la composición reconstituida.

Una composición de la presente invención se puede administrar mediante una variedad de procedimientos conocidos en la técnica. La ruta y/o el modo de administración varían según los resultados deseados. Los ingredientes activos se pueden preparar con vehículos que protegen el ingrediente activo contra la liberación rápida, tal como una formulación de liberación controlada, que incluye implantes, parches transdérmicos y sistemas de administración microencapsulados. Se pueden usar polímeros biodegradables y biocompatibles, como acetato de vinil etileno, polianhídridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres y ácido poliláctico. Muchos procedimientos para la preparación de tales formulaciones se describen, por ejemplo, en Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, (1978). Las composiciones farmacéuticas se fabrican preferiblemente bajo condiciones GMP.

Las composiciones farmacéuticas pueden prepararse, envasarse o venderse en forma de una suspensión o solución acuosa u oleosa inyectable estéril. Esta suspensión o solución puede formularse de acuerdo con la técnica conocida, y puede comprender, además del ingrediente activo, ingredientes adicionales tales como los agentes dispersantes, agentes humectantes o agentes de suspensión descritos en el presente documento. Dichas formulaciones inyectables estériles pueden prepararse utilizando un diluyente o disolvente no tóxico parenteralmente aceptable, como agua o 1,3-butanodiol, por ejemplo. Otros diluyentes y disolventes aceptables incluyen, pero no se limitan a, solución de Ringer, solución de cloruro de sodio isotónica y aceites fijos como mono o di-glicéridos sintéticos. Otras formulaciones administrables por vía parenteral que son útiles incluyen aquellas que comprenden el ingrediente activo en forma microcristalina, en una preparación liposomal, o como un componente de un sistema de polímeros biodegradables. Las composiciones para liberación o implantación sostenida pueden comprender materiales poliméricos o hidrófobos farmacéuticamente aceptables, tales como una emulsión, una resina de intercambio iónico, un polímero poco soluble o una sal poco soluble.

La combinación del ingrediente activo del anticuerpo anti-4-1BB/anticuerpo inductor de ADCC se puede administrar a un animal, preferiblemente un ser humano. La dosis precisa administrada de cada ingrediente activo variará dependiendo de cualquier cantidad de factores, incluidos, entre otros, el tipo de animal y el estado de la enfermedad que se está tratando, la edad del animal y la ruta o rutas de administración.

El anticuerpo anti-4-1BB puede administrarse a un animal tan frecuentemente como varias veces al día, o puede administrarse con menos frecuencia, como una vez al día, una vez a la semana, una vez cada dos semanas, una vez al mes, o incluso con menos frecuencia, como una vez cada varios meses o incluso una vez al año o menos. La frecuencia de la dosis será fácilmente evidente para el experto en la materia y dependerá de cualquier cantidad de factores, tales como, entre otros, el tipo y la gravedad de la enfermedad que se trata, el tipo y la edad del animal, etc.

El anticuerpo inductor de ADCC (por ejemplo, un anticuerpo anti-CD20 como el rituximab) se puede administrar a un animal con la frecuencia de varias veces al día, o se puede administrar con menos frecuencia, tal como una vez al día, una vez a la semana, una vez cada dos semanas, una vez al mes, o incluso con menos frecuencia, como una vez cada varios meses o incluso una vez al año o menos. La frecuencia de la dosis será fácilmente evidente para el experto en la materia y dependerá de cualquier cantidad de factores, tales como, entre otros, el propio anticuerpo inductor de ADCC, así como el tipo y la gravedad de la enfermedad que se está tratando, el tipo y edad del animal, etc.

El anticuerpo anti-4-1BB y el anticuerpo inductor de ADCC (por ejemplo, un anticuerpo anti-CD20 como el rituximab) pueden administrarse conjuntamente, ya que pueden administrarse por separado, en diferentes fechas o en diferentes momentos del día, así como simultáneamente o en la misma fecha. Por lo tanto, la administración conjunta abarca cualquier combinación temporal de la administración de los anticuerpos, de modo que la administración de los dos media un beneficio terapéutico para el paciente que es notablemente mayor que la administración de cualquier agente en ausencia del otro.

Una combinación de anticuerpo anti-4-1BB y anticuerpo inductor de ADCC puede coadministrarse con numerosos otros compuestos (agentes de terapia antihormonal, citoquinas, fármacos quimioterapéuticos y/o antivirales, entre muchos otros). Alternativamente, el compuesto o compuestos pueden administrarse una hora, un día, una semana, un mes o incluso más, antes de la combinación del anticuerpo anti-4-1BB y el anticuerpo inductor de ADCC, o cualquier permutación de los mismos. Además, el compuesto o compuestos pueden administrarse una hora, un día, una semana o incluso más, después de la administración de radiación, trasplante de células madre o la administración de cualquier agente terapéutico (por ejemplo, citoquinas, compuestos quimioterapéuticos y similares), o cualquier permutación de los mismos. La frecuencia y el régimen de administración serán fácilmente evidentes para el experto en la materia y dependerán de cualquier cantidad de factores como, entre otros, el tipo y la gravedad de la enfermedad a tratar, la edad y el estado de salud del animal, la identidad del compuesto o compuestos que se administran, la ruta de administración de los diversos compuestos, y similares. Se proporcionan varios ejemplos instructivos que demuestran los procedimientos de administración conjunta de un anticuerpo anti-4-1BB y un anticuerpo inductor de ADCC para tratar el cáncer, pero la invención no está limitada de ninguna manera a estos ejemplos, que simplemente sirven para ilustrar los procedimientos abarcados por la invención.

VII. Kits

Las realizaciones adicionales descritas en el presente documento incluyen diversos kits para el tratamiento del cáncer. Los kits típicamente incluyen una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo anti-4-1BB humano de la invención y una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos un anticuerpo inductor de ADCC (por ejemplo, un anticuerpo anti-CD20 como rituximab o un anticuerpo anti-P-cadherina). El kit puede incluir además un aplicador, que incluye, entre otros, una jeringa, para la administración de los componentes del kit a un paciente. Además, el kit puede incluir materiales de instrucción que establecen la información pertinente para el uso del kit para tratar el cáncer en el paciente. Además, el kit puede incluir una gran cantidad de agentes adicionales para el tratamiento del cáncer. Dichos agentes se exponen en el presente documento e incluyen compuestos quimioterapéuticos, vacunas contra el cáncer, inhibidores de la transducción de señales, agentes útiles para tratar el crecimiento celular anormal o cáncer, anticuerpos u otros ligandos que inhiben el crecimiento tumoral, un agente quimioterapéutico (taxano, alcaloide de la vinca, compuesto de platino, intercalado de antibióticos, entre muchos otros), y citoquinas, entre muchos otros, así como agentes paliativos para tratar, por ejemplo, cualquier toxicidad que surja durante el tratamiento, tal como, entre otros, un antidiarreico, un antiemético y similares. Aunque se describen ejemplos de kits en el presente documento, el contenido de otros kits útiles será evidente para el experto en la técnica a la luz de la presente divulgación.

En algunas realizaciones, el kit comprende al menos un anticuerpo anti-4-1BB seleccionado de MOR-6032, MOR-7361, MOR-7480, MOR-7480.1, MOR-7480.2, MOR-7483, MOR-7483.1, MOR -7483.2. En alguna realización, el kit comprende MOR-7480.1 y rituximab. En realizaciones adicionales, el kit comprende MOR-7480.1 y anti-P-cadherina1. En realizaciones adicionales, el kit comprende MOR-7480.1 y anti-P-cadherina2. Aunque se prefieren los kits descritos anteriormente, la invención no se limita a estas combinaciones particulares.

La invención se describe adicionalmente en detalle mediante referencia a los siguientes ejemplos experimentales. Estos ejemplos se proporcionan solo con fines ilustrativos y no pretenden ser limitativos a menos que se especifique lo contrario. Por lo tanto, la invención no debe interpretarse de ninguna manera como limitada a los siguientes ejemplos, sino que debe interpretarse para abarcar cualquiera y todas las variaciones que se hagan evidentes como resultado de las enseñanzas proporcionadas en este documento.

Ejemplos

Ejemplo 1: Efectos combinatorios de mAb inductor de ADCC (mAb anti-CD20) con mAb agonista 4-1BB (MAB9371) en un modelo de tumor trasplantable en ratones

Se probó la eficacia combinatoria de mAb sustitutos de 4-1BB y CD20 en un modelo de linfoma. Se realizaron experimentos de inhibición del crecimiento tumoral en el modelo de linfoma de células B A20, que expresa la proteína CD20 de células B, probando la eficacia del mAb (MAB9371 (R&D Systems (Minneapolis MN)) agonista 4-1BB antirratón de rata en combinación con un anticuerpo anti-CD20 de ratón de ratón que sirvió como un sustituto de rituximab.

Se inyectaron subcutáneamente un millón de células A20 en el flanco derecho de ratones Balb/c. Los tumores se dejaron crecer durante 7 días y los animales se asignaron al azar en función del volumen del tumor. Una dosis única de MAB9371, anti-CD20 de ratón o MAB9371 en combinación con anti-CD20 de ratón se administró i.p. en el día de la aleatorización. MAB9371 se administró en una cantidad inferior a la óptima a razón de 0,1 mg/kg o en combinación con anti-CD20 de ratón a razón de 5 mg/kg diluido en PBS. Se obtuvo una mejor inhibición del crecimiento tumoral cuando se usaron ambos MAB9371 y CD20 juntos. El tamaño del tumor ([longitud x {ancho x ancho}] x 0,5 = volumen en mm3) se evaluó cada 2-3 días usando un calibrador digital. La media ± SEM se muestra en la Figura 1.

El tratamiento con la combinación aumentó la eficacia de la inhibición del crecimiento tumoral en comparación con CD20 o anti 4-1BB solo. Además, la dosis requerida de 4-1BB en el grupo de combinación se redujo y logró una mejor inhibición del crecimiento tumoral que la dosis con anti 4-1BB solo (Figura 1).

Ejemplo de referencia 2: Efectos combinatorios de mAb inductor de ADCC (mAb anti-P-cadherina1 (g-194-g09)) con mAb agonista 4-1BB (MAB9371) en un modelo de carcinoma de colon en ratones

Se probó la eficacia combinatoria de los mAb 4-1BB y P-cadherina en un modelo de carcinoma de colon. Se realizaron experimentos de inhibición del crecimiento tumoral, probando la eficacia del mAb agonista anti-4-1BB de ratón de rata (MAB9371; R&D Systems (Minneapolis MN)) en combinación con un anticuerpo anti-P-cadherina (anti-P-cadherina1 o g-194-g09).

Se inyectaron por vía subcutánea un millón de células CT-26 en el flanco derecho de ratones Balb/c. Los tumores se dejaron crecer durante 7 días y los animales se asignaron al azar en función del volumen del tumor. Una dosis única de anti-4-1BB murino (MAB9371), y anti P-cadherina1 o MAB9371 en combinación con anti-P-cadherina1 MAB9371 se administró de forma inferior a la óptima a razón de 0,1 mg/kg o en combinación con anti-P-cadherina1 a razón de 10 mg/kg diluidos en PBS. Los animales se dosificaron i.p. en el día de la aleatorización. La inhibición del crecimiento tumoral se mejoró en aproximadamente un 35% cuando se usaron juntos MAB9371 y anti P-cadherinal (g-194-g09).

Los resultados demuestran que el mAb 4-1BB (MAB9371), cuando se usa en combinación con el mAb anticadherinas (g-194-g09), mejoró la inhibición del crecimiento tumoral (Figura 2).

Ejemplo de referencia 3: efectos combinatorios de mAb inductor de ADCC (mAb anti-P-cadherina2) con mAb agonista 4-1BB (MAB9371) en un modelo de carcinoma de colon en ratones

Se probó la eficacia combinatoria de los mAb 4-1BB y P-cadherina en un modelo de carcinoma de colon. Se realizaron experimentos de inhibición del crecimiento tumoral, probando la eficacia del mAb agonista anti-4-1BB de ratón de rata (MAB9371; R&D Systems (Minneapolis MN)) en combinación con un anticuerpo anti-P-cadherina (anti-P-cadherina2). Anti-P-cadherina2 se modificó a partir de anti-P-cadherina1 (g-194-g09) para tener una mayor actividad inductora de ADCC.

Se inyectaron subcutáneamente un millón de células CT-26 en el flanco derecho de ratones Balb/c. Los tumores se dejaron crecer durante 7 días y los animales se asignaron al azar en función del volumen del tumor. Una dosis única de anti-4-1BB murino (MAB9371) y anti-P-cadherina de ADCC mejorada (anti-P-cadherina2) o MAB9371 en combinación con anti P-cadherina de ADCC mejorada se dosificó de forma inferior a la óptima a razón de 0,1 mg/kg o en combinación con anti-P-cadherin2 a razón de 10 mg/kg diluido en PBS. Los animales se dosificaron i.p. en el día de la aleatorización. La inhibición del crecimiento tumoral mejoró en aproximadamente un 35% cuando se usaron tanto MAB9371 como anti P-cadherina2 juntos.

Los resultados demuestran que mAb 4-1BB (MAB9371) cuando se usa en combinación con el mAb anti-P-cadherina2, mejoró significativamente la inhibición del crecimiento tumoral (Figura 3).

Ejemplo 4: Tratamiento de animales positivos para linfoma primario con anticuerpo agonista 4-1BB y/o anticuerpo inductor de ADCC CD20

La eficacia combinatoria de los mAb 4-1BB y CD20 se probó en ratones Ep-myc.

Se obtuvieron ratones Ep-myc (C57BL/6J-Tg(IghMyc)22Bri/J) (Jackson Laboratories) y las muestras de sangre se controlaron semanalmente mediante FACS. Usando los criterios de inscripción establecidos, los animales se asignaron al azar a 6 grupos de tratamiento; 1 mg/kg rata IgG2a control qwx2 (Grupo 1), 1 mg/kg MAB9371 qwx2 (Grupo 2), 10 mg/kg anti-CD20 de ratón qwx4 (Grupo 3), 1 mg/kg MAB9371 qwx2 10 mg/kg anti-CD20 de ratón qwx4 (grupo 4), 0,1 mg/kg MAB9371 qwx2 10 mg/kg anti-CD20 de ratón qwx4 (grupo 5), y 1 mg/kg MAB9371 qwx1 10 mg/kg anti- CD20 de ratón qwx4 (grupo 6 ). Los animales continuaron siendo monitoreados a través de las muestras de sangre semanales de la vena safena y el posterior análisis de FACS junto con la observación general y el control del peso corporal. Los animales que mostraban signos evidentes de enfermedad se sacrificaron de acuerdo con las prácticas humanas, se recogieron tejidos de los grupos 1-4 para histopatología y se registró la supervivencia después de la dosificación.

En la Tabla 3 se representa un resumen de los grupos.

-

(continuación)

La edad media al momento de la inscripción fue de 13,6 ± 6,7 semanas para todo el estudio, sin diferencias significativas en las edades entre los 6 grupos. Se observó un beneficio significativo en la supervivencia para el Grupo 4 (1 mg/kg MAB9371 qwx2 10 mg/kg anti-CD20 de ratón qwx4) frente al Grupo 1 (1 mg/kg rata IgG2a control qwx2, Tabla 1) y el Grupo 3 (10 mg/kg anti-CD20 de ratón qwx4, (Figura 4, Tabla 1).

Las muestras de sangre periférica se tiñeron con Ab marcados con fluorocromo para B220, CD20, CD3, IgM e IgD. Las muestras se analizaron mediante citometría de flujo utilizando un software FACSCanto y FACSDiva seguido de un análisis de datos utilizando el software FlowJo. Los animales que demostraron un aumento en la población de B220lo+ por encima del 25% del total de linfocitos combinados con un aumento en la dispersión hacia adelante y una variación de semana a semana en B220lo de > 5% se asignaron al azar a los grupos de tratamiento. El día en que los animales fueron asignados al grupo se considera el día 0 del estudio (n = 10 animales/grupo). La dosificación se basó en un peso corporal promedio de 22,5 gramos/animal. Los animales continuaron siendo monitoreados mediante citometría de flujo, peso corporal y observación general. Los animales que mostraban signos evidentes de linfoma avanzado fueron sacrificados de acuerdo con las prácticas humanas. La supervivencia de los grupos de prueba se comparó con el Grupo 1 o el Grupo 3 y la importancia de las gráficas de supervivencia se determinó utilizando una prueba de intervalo logarítmico (Mantel-Cox) utilizando el software Prism Graph.

Los animales se trataron el día 0 (Figura 4A) o el día 0 y el día 7 (Figura 4B) con el anticuerpo indicado o la combinación de anticuerpos en la concentración indicada y se evaluaron mediante citometría de flujo el día 6 (Figura 4A) o el día 13 (Figura 4B). La excepción fue que los animales en el grupo del panel B "10 mpk CD20 1 mpk 4-1BB s.d." recibieron el anticuerpo CD20 en los días 0 y 7, pero 4-1BB solo en el día 0. Los datos se representan como un cambio entre animales en el porcentaje de células bajas de B220 en relación con el día anterior a la inscripción (día -1) y se calculan utilizando el siguiente fórmula ((% de células bajas en B220 en el día de estudio indicado - % de células bajas en B220 el día antes de la inscripción) / % de células bajas en B220 en el día anterior a la inscripción) * 100). La significancia estadística de los grupos de tratamiento en comparación con el grupo 10 mpk CD20 se determinó utilizando el análisis ANOVA de 1 vía y la prueba de comparación múltiple de Dunnet usando el software Graph Pad Prism; n > 5/grupo * p < 0,05, *** p < 0,005.

Los animales se trataron con 10 mg/kg de CD20 semanalmente durante 4 semanas, 1 mg/kg de 4-1BB semanalmente durante 2 semanas o una combinación de CD20 y la concentración indicada de 4-1BB de acuerdo con el programa indicado. Los días de supervivencia posteriores al tratamiento de los dos grupos se muestran en la Figura 5. La supervivencia media se calculó utilizando Graph Pad Prism CD20 = 15 días, 1 mpk 4-1BB = 23,5 días, CD20 0,1 mpk 4-1BB = 25,5 días, CD20 1 mpk 4-1 BB = 34 días. La importancia estadística del tratamiento con 4-1BB o el tratamiento combinado con CD20 se determinó mediante una prueba de intervalo logarítmico (Mantel-Cox) utilizando el software Graph Pad Prism, CD20 vs. 4-1BB * p < 0,025, CD20 vs. CD20 0,1 mpk 4-1^b B p = no significativo, CD20 vs. CD20 1 mpk4-1BB *** □□□ p < 0,0001.

Los resultados indican que el tratamiento de animales con MAB9371 solo demostró una estabilización de la enfermedad mediante análisis de FACS. Sin embargo, se observó una reducción significativa del tumor circulante para todos los grupos de dosis combinadas después del tratamiento (Figura 4).

Listado de secuencias en bruto

(En secuencias de aminoácidos, las CDR están subrayadas, las regiones variables en mayúsculas y las regiones constantes en minúsculas)

A. ANTICUERPO MOR-6032

Secuencia de aminoácidos de V^h (SEQ ID NO.: 4):

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFNSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIP

GFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARKNEEDGGFDHWG

QGTLVTVSS

Secuencia de aminoácidos de cadena pesada de longitud completa (IgG2) (SEQ ID NO.: 5):

QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFNSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIP

GFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARKNEEDGGFDHWG

QGTLVTVSSastkgpsvfplapcsrstsestaalgcIvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavIqssglysIssvvtvp ssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqf nwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsree mtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytq kslslspgk

Secuencia de aminoácidos de V^l (SEQ ID NO.: 9):

DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNLGDYYASWYQQKPGQAPVLVIYDDSNRP

SGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQTWDGTLHFVFGGGTKLTVL

Secuencia de aminoácidos de cadena ligera de longitud completa (SEQ ID NO.: 10):

DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNLGDYYASWYQQKPGQAPVLVIYDDSNRPSGIPE

RFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQTWDGTLHFVFGGGTKLTVLqqpkaapsvtlfpp sseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvetttpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvthegstv ektvaptecs

Secuencia de ácidos nucleicos de V^h (SEQ ID NO.: 11):

caggtgcaattggttcagtctggcgcggaagtgaaaaaaccgggcagcagcgtgaaagtgagctgcaaagcct ccggaggcacttttaattcttatgctatttcttgggtgcgccaagcccctgggcagggtctcgagtggatgggcggtatcattcc gggttttggcactgcgaattacgcgcagaagtttcagggccgggtgaccattaccgcggatgaaagcaccagcaccgcgt atatggaactgagcagcctgcgtagcgaagatacggccgtgtattattgcgcgcgtaagaatgaggaggatggtggttttga tcattggggccaaggcaccctggtgacggttagctca

Secuencia de ácidos nucleicos de cadena pesada de longitud completa (SEQ ID NO.: 13): caggtgcaattggttcagtctggcgcggaagtgaaaaaaccgggcagcagcgtgaaagtgagctgcaaagcct ccggaggcacttttaattcttatgctatttcttgggtgcgccaagcccctgggcagggtctcgagtggatgggcggtatcattcc gggttttggcactgcgaattacgcgcagaagtttcagggccgggtgaccattaccgcggatgaaagcaccagcaccgcgt atatggaactgagcagcctgcgtagcgaagatacggccgtgtattattgcgcgcgtaagaatgaggaggatggtggttttga tcattggggccaaggcaccctggtgacggttagctcagcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctcc aggagcacctccgagagcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtgga actcaggcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtagt gaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtgga caagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttcc ccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaaga ccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttc aacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggt ctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgt acaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccag cgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccga cggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatg catgaggctctgcacaaccactacacacagaagagcctctccctgtctccgggtaaa

Secuencia de ácidos nucleicos de V^l (SEQ ID NO.: 12):

Gatatcgaactgacccagccgccttcagtgagcgttgcaccaggtcagaccgcgcgtatctcgtgtagcggcgat aatcttggtgattattatgcttcttggtaccagcagaaacccgggcaggcgccagttcttgtgatttatgatgattctaatcgtccct caggcatcccggaacgctttagcggatccaacagcggcaacaccgcgaccctgaccattagcggcactcaggcggaag acgaagcggattattattgccagacttgggatggtactcttcattttgtgtttggcggcggcacgaagttaaccgttctt

Secuencia de ácidos nucleicos de cadena ligera de longitud completa (SEQ ID NO.: 14):

Gatatcgaactgacccagccgccttcagtgagcgttgcaccaggtcagaccgcgcgtatctcgtgtagcggcgataatcttg gtgattattatgcttcttggtaccagcagaaacccgggcaggcgccagttcttgtgatttatgatgattctaatcgtccctcaggc atcccggaacgctttagcggatccaacagcggcaacaccgcgaccctgaccattagcggcactcaggcggaagacgaa gcggattattattgccagacttgggatggtactcttcattttgtgtttggcggcggcacgaagttaaccgttcttggtcagcccaag gctgccccctcggtcactctgttcccaccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacactggtgtgtctcataagtga cttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcgggagtggagaccaccacacc ctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctacctgagcctgacgcctgagcagtggaagtcccacagaa gctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacagaatgttca

B. Anticuerpo MOR 7361

Secuencia de aminoácidos de V^h (SEQ ID NO.: 18)

QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMHWVRQAPGKGLEWVSVIS

GSGSNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLYAQFEGDFWG

QGTLVTVSS

Secuencia de aminoácidos de cadena pesada de longitud completa (IgG2) (SEQ ID NO.: 19):

QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMHWVRQAPGKGLEWVSVIS

GSGSNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLYAQFEGDFWG

QGTLVTVSSastkgpsvfplapcsrstsestaalgcIvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavIqssglysIssvvtvp ssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqf nwyvdgvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsree mtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytq kslslspgk

Secuencia de aminoácidos de V^l (SEQ ID NO.: 23):

DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNIGSKYVSWYQQKPGQAPVLVIYSDSERP

SGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQSWDGS-ISRVFGGGTKLTVL

Secuencia de aminoácidos de cadena ligera de longitud completa (SEQ ID NO: 24):

DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNIGSKYVSWYQQKPGQAPVLVIYSDSERP

SGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCQSWDGSISRVFGGGTKLTVLqqpkaap svtlfppsseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvetttpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvt hegstvektvaptecs

Secuencia de ácidos nucleicos de V^h (SEQ ID NO.: 25):

Caggtgcaattggtggaaagcggcggcggcctggtgcaaccgggcggcagcctgcgtctgagctgcgcggcc tccggatttaccttttctgattattatatgcattgggtgcgccaagcccctgggaagggtctcgagtgggtgagcgttatctctggtt ctggtagcaatacctattatgcggatagcgtgaaaggccgttttaccatttcacgtgataattcgaaaaacaccctgtatctgca aatgaacagcctgcgtgcggaagatacggccgtgtattattgcgcgcgtctttatgctcagtttgagggtgatttttggggccaa ggcaccctggtgacggttagctca

Secuencia de ácidos nucleicos de cadena pesada de longitud completa (SEQ ID NO.: 27):

caggtgcaattggtggaaagcggcggcggcctggtgcaaccgggcggcagcctgcgtctgagctgcgcggcctccggatt taccttttctgattattatatgcattgggtgcgccaagcccctgggaagggtctcgagtgggtgagcgttatctctggttctggtag caatacctattatgcggatagcgtgaaaggccgttttaccatttcacgtgataattcgaaaaacaccctgtatctgcaaatgaa cagcctgcgtgcggaagatacggccgtgtattattgcgcgcgtctttatgctcagtttgagggtgatttttggggccaaggcacc ctggtgacggttagctcagcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagc acagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccag cggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtagtgaccgtgccctccagcaact tcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaat gttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacac cctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactg gtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtc agcgtcctcaccgtcgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccag cccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccggg aggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtggga gagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacagca agctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccact acacaca

gaagagcctctccctgtctccgggtaaa

Secuencia de ácidos nucleicos de V ^l (SEQ ID NO.: 26) gatatcgaactgacccagccgccttcagtgagcgttgcaccaggtcagaccgcgcgtatctcgtgtagcggcgat aatattggttctaagtatgtttcttggtaccagcagaaacccgggcaggcgccagttcttgtgatttattctgattctgagcgtccct caggcatcccggaacgctttagcggatccaacagcggcaacaccgcgaccctgaccattagcggcactcaggcggaag acgaagcggattattattgccagtcttgggatggttctatttctcgtgtgtttggcggcggcacgaagttaaccgtcctaggtcag

Secuencia de ácidos nucleicos de cadena ligera de longitud completa (SEQ ID NO.: 28)

gatatcgaactgacccagccgccttcagtgagcgttgcaccaggtcagaccgcgcgtatctcgtgtagcggcgat aatattggttctaagtatgtttcttggtaccagcagaaacccgggcaggcgccagttcttgtgatttattctgattctgagcgtccct caggcatcccggaacgctttagcggatccaacagcggcaacaccgcgaccctgaccattagcggcactcaggcggaag acgaagcggattattattgccagtcttgggatggttctatttctcgtgtgtttggcggcggcacgaagttaaccgtcctaggtcag

C. Anticuerpo MOR 7480

Secuencia de aminoácidos de V^h (SEQ ID NO.: 32)

QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFSTYWISWVRQMPGKGLEWMGKIYP

GDSYTNYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARGYGIFDYWGQGTL

VTVSS

Secuencia de aminoácidos de cadena pesada de longitud completa (IgG2) (SEQ ID NO.:33)

QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFSTYWISWVRQMPGKGLEWMGKIYP

GDSYTNYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARGYGIFDYWGQGTL

VTVSSastkgpsvfplapcsrstsestaalgcIvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavIqssglysIssvvtvpssnfgt qtytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvcl gvevhnaktkpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknq vsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslsls pgk

Secuencia de aminoácidos de V^l (SEQ ID NO.:37)

DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNIGDQYAHWYQQKPGQAPVWIYQDKNRP

SGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCATYTGFGSLAVFGGGTKLTVL

Secuencia de aminoácidos de cadena ligera de longitud completa (SEQ ID NO 38):

DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNIGDQYAHWYQQKPGQAPVWIYQDKNRPSGIPE

RFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCATYTGFGSLAVFGGGTKLTVLqgpkaapsvtlfpp sseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvetttpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvthegstv ektvaptecs

Secuencia de ácidos nucleicos de V^h (SEQ ID NO.:39)

caggtgcaattggttcagagcggcgcggaagtgaaaaaaccgggcgaaagcctgaaaattagctgcaaaggtt ccggatattccttttctacttattggatttcttgggtgcgccagatgcctgggaagggtctcgagtggatgggcaagatctatccg ggtgatagctataccaattattctccgagctttcagggccaggtgactattagcgcggataaaagcattagcaccgcgtatctt caatggagcagcctgaaagcgagcgatacggccatgtattattgtgcgcgtggttatggtatttttgattattggggccaaggc accctggtcaccgtctcctca

Secuencia de ácidos nucleicos de cadena pesada de longitud completa (IgG2) (SEQ ID NO.: 41) caggtgcaattggttcagagcggcgcggaagtgaaaaaaccgggcgaaagcctgaaaattagctgcaaaggttccggat attccttttctacttattggatttcttgggtgcgccagatgcctgggaagggtctcgagtggatgggcaagatctatccgggtgat agctataccaattattctccgagctttcagggccaggtgactattagcgcggataaaagcattagcaccgcgtatcttcaatgg agcagcctgaaagcgagcgatacggccatgtattattgtgcgcgtggttatggtatttttgattattggggccaaggcaccctg gtcaccgtctcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcaca gcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcgg cgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtagtgaccgtgccctccagcaacttcg gcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaatgtt gtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccc tcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggt acgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcag cgtcctcaccgtcgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcc cccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccggga ggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggag agcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaa gctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccacta cacacagaagagcctctccctgtctccgggtaaa

Secuencia de ácidos nucleicos de V^l (SEQ ID NO.: 40)

Gatatcgaactgacccagccgccttcagtgagcgttgcaccaggtcagaccgcgcgtatctcgtgtagcggcgat aatattggtgatcagtatgctcattggtaccagcagaaacccgggcaggcgccagttgttgtgatttatcaggataagaatcgt ccctcaggcatcccggaacgctttagcggatccaacagcggcaacaccgcgaccctgaccattagcggcactcaggcgg aagacgaagcggattattattgcgctacttatactggttttggttctcttgctgtgtttggcggcggcacgaagttaaccgtccta

Secuencia de ácidos nucleicos de cadena ligera de longitud completa (SEQ ID NO.: 42)

gatatcgaactgacccagccgccttcagtgagcgttgcaccaggtcagaccgcgcgtatctcgtgtagcggcgat aatattggtgatcagtatgctcattggtaccagcagaaacccgggcaggcgccagttgttgtgatttatcaggataagaatcgt ccctcaggcatcccggaacgctttagcggatccaacagcggcaacaccgcgaccctgaccattagcggcactcaggcgg aagacgaagcggattattattgcgctacttatactggttttggttctcttgctgtgtttggcggcggcacgaagttaaccgtccta

D. Anticuerpo MOR 7480.1

Secuencia de aminoácidos de V^h (SEQ ID NO.: 43):

EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYSFSTYWISWVRQMPGKGLEWMGKIYP

GDSYTNYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARGYGIFDYWGQGTL

VTVSS

Secuencia de aminoácidos de cadena pesada de longitud completa (IgG2) (SEQ ID NO.: 44):

EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYSFSTYWISWVRQMPGKGLEWMGKIYPGDSY

TNYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARGYGIFDYWGQGTLVTVS

Sastkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcn vdhkpsntkvdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevh naktkpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvsltclv kgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk

Secuencia de aminoácidos de V^l (SEQ ID NO.: 45):

SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDNIGDQYAHWYQQKPGQSPVLVIYQDKNR

PSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCATYTGFGSLAVFGGGTKLTVL

Secuencia de aminoácidos de cadena ligera de longitud completa (SEQ ID NO.: 46):

SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDNIGDQYAHWYQQKPGQSPVLVIYQDKNR

PSGlPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCATYTGFGSLAVFGGGTKLTVLqgDka apsvtlfppsseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvetttpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsysc qvthegstvektvaptecs

Secuencia de ácidos nucleicos de V^h (SEQ ID NO.:47):

gaggtgcaattggttcagagcggcgcggaagtgaaaaaaccgggcgaaagcctgaggattagctgcaaaggt tccggatattccttttctacttattggatttcttgggtgcgccagatgcctgggaagggtctcgagtggatgggcaagatctatccg ggtgatagctataccaattattctccgagctttcagggccaggtgactattagcgcggataaaagcattagcaccgcgtatctt caatggagcagcctgaaagcgagcgatacggccatgtattattgtgcgcgtggttatggtatttttgattattggggccaaggc accctggtcaccgtctcctca

Secuencia de ácidos nucleicos de cadena pesada de longitud completa (lgG2) (SEQ ID NO.: 49):

gaggtgcaattggttcagagcggcgcggaagtgaaaaaaccgggcgaaagcctgaggattagctgcaaaggt tccggatattccttttctacttattggatttcttgggtgcgccagatgcctgggaagggtctcgagtggatgggcaagatctatccg

ggtgatagctataccaattattctccgagctttcagggccaggtgactattagcgcggataaaagcattagcaccgcgtatctt caatggagcagcctgaaagcgagcgatacggccatgtattattgtgcgcgtggttatggtatttttgattattggggccaaggc accctggtcaccgtctcctcagcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgaga gcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgacc agcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtagtgaccgtgccctccagca acttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgca aatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaagga caccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttca actggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgt ggtcagcgtcctcaccgtcgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctc ccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcc cgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagt gggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctac agcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaa ccactacacacagaagagcctctccctgtctccgggtaaa

Secuencia de ácidos nucleicos de V ^l (SEQ ID NO.:48):

agctacgagctgacccagccccccagcgtgtccgtgagccctggccagaccgccagcatcacctgcagcggc gacaacatcggcgaccagtacgcccactggtatcagcagaagcccggccagagccccgtgctggtgatctaccaggac aagaaccggcccagcggcatccccgagcggttcagcggcagcaacagcggcaacaccgccaccctgaccatcagcg gcacccaggccatggacgaggccgactactactgcgccacctacaccggcttcggcagcctggccgtgttcggcggagg gaccaagctgaccgtccta

Secuencia de ácidos nucleicos de cadena ligera de longitud completa (SEQ ID NO.: 50):

agctacgagctgacccagccccccagcgtgtccgtgagccctggccagaccgccagcatcacctgcagcggcgacaac atcggcgaccagtacgcccactggtatcagcagaagcccggccagagccccgtgctggtgatctaccaggacaagaac cggcccagcggcatccccgagcggttcagcggcagcaacagcggcaacaccgccaccctgaccatcagcggcaccca ggccatggacgaggccgactactactgcgccacctacaccggcttcggcagcctggccgtgttcggcggagggaccaag ctgaccgtcctaggtcagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccaccctcctctgaggagcttcaagccaacaagg ccacactggtgtgtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaagg c99ga9t99a9accaccacaccctccaaacaaa9caacaacaagtac9c99cca9ca9ctacct9agcct9ac9cct gagcagtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccc tacagaatgttca

E. Anticuerpo MOR 7480.2

Secuencia de aminoácidos de V^h (SEQ ID NO.: 43): (igual que MOR-7480.1)

Secuencia de aminoácidos de cadena pesada de longitud completa (IgG2) (SEQ ID NO.: 44): (igual que IgG2 MOR-7480.1)

Secuencia de aminoácidos de V^l (SEQ ID NO.: 51):

SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDNIGDQYAHWYQQKPGQSPVWIYQDKNR

PSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCATYTGFGSLAVFGGGTKLTVL

Secuencia de aminoácidos de cadena ligera de longitud completa (SEQ ID NO 52):

SYE LTQ P PSVSVSPGQTASIT CSGDNIGDQYAH WY QQ KPGQS PVWIYQDKNRPSGIP

ERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCATYTGFGSLAVFGGGTKLTVLgqpkaapsvtlf ppsseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvetttpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvtheg stvektvaptecs

Secuencia de ácidos nucleicos de V^h (SEQ ID NO.:47): (igual que MOR-7480.1)

Secuencia de ácidos nucleicos de cadena pesada de longitud completa (IgG2) (SEQ ID NO.: 49): (igual que IgG2 MOR-7480.1)

Secuencia de ácidos nucleicos de V^l (SEQ ID NO.: 53):

agctacgagctgacccagccccccagcgtgtccgtgagccctggccagaccgccagcatcacctgcagcggc gacaacatcggcgaccagtacgcccactggtatcagcagaagcccggccagagccccgtggtggtgatctaccaggac aagaaccggcccagcggcatccccgagcggttcagcggcagcaacagcggcaacaccgccaccctgaccatcagcg gcacccaggccatggacgaggccgactactactgcgccacctacaccggcttcggcagcctggccgtgttcggcggagg gaccaagctgaccgtccta

Secuencia de ácidos nucleicos de cadena ligera de longitud completa (SEQ ID NO.: 54):

agctacgagctgacccagccccccagcgtgtccgtgagccctggccagaccgccagcatcacctgcagcggcgacaac atcggcgaccagtacgcccactggtatcagcagaagcccggccagagccccgtggtggtgatctaccaggacaagaac cggcccagcggcatccccgagcggttcagcggcagcaacagcggcaacaccgccaccctgaccatcagcggcaccca ggccatggacgaggccgactactactgcgccacctacaccggcttcggcagcctggccgtgttcggcggagggaccaag ctgaccgtcctaggtcagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccaccctcctctgaggagcttcaagccaacaagg

ccacactggtgtgtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaagg cgggagtggagaccaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctacctgagcctgacgcct gagcagtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccc tacagaatgttca

F. Anticuerpo MOR-7483

Secuencia de aminoácidos de V^h (SEQ ID NO.: 32): (Igual que MOR 7480)

Secuencia de aminoácidos de cadena pesada de longitud completa (IgG2) (SEQ ID NO.: 33): (Igual que IgG2 MOR 7480)

Secuencia de aminoácidos de V^l (SEQ ID NO.: 56):

DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNIGDQYAHWYQQKPGQAPVVVIYQDKNRP

SGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCSTYTFVGFTTVFGGGTKLTVL

Secuencia de aminoácidos de cadena ligera de longitud completa (SEQ ID NO: 57)

DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNIGDQYAHWYQQKPGQAPVWIYQDKNRP

SGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCSTYTFVGFTTVFGGGTKLTVLqgpkaap svtlfppsseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvetttpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvt hegstvektvaptecs

Secuencia de ácidos nucleicos de V^h (SEQ ID NO.: 39): (Igual que MOR 7480)

Secuencia de ácidos nucleicos de cadena pesada de longitud completa (IgG2) (SEQ ID NO.: 41): (Igual que IgG2 MOR 7480)

Secuencia de ácidos nucleicos de V^l (SEQ ID NO.: 58):

Gatatcgaactgacccagccgccttcagtgagcgttgcaccaggtcagaccgcgcgtatctcgtgtagcggcgat aatattggtgatcagtatgctcattggtaccagcagaaacccgggcaggcgccagttgttgtgatttatcaggataagaatcgt ccctcaggcatcccggaacgctttagcggatccaacagcggcaacaccgcgaccctgaccattagcggcactcaggcgg aagacgaagcggattattattgctctacttatacttttgttggttttactactgtgtttggcggcggcacgaagttaaccgtccta

Secuencia de ácidos nucleicos de cadena ligera de longitud completa (SEQ ID NO.: 59):

Gatatcgaactgacccagccgccttcagtgagcgttgcaccaggtcagaccgcgcgtatctcgtgtagcggcgataatattg gtgatcagtatgctcattggtaccagcagaaacccgggcaggcgccagttgttgtgatttatcaggataagaatcgtccctca ggcatcccggaacgctttagcggatccaacagcggcaacaccgcgaccctgaccattagcggcactcaggcggaagac gaagcggattattattgctctacttatacttttgttggttttactactgtgtttggcggcggcacgaagttaaccgtcctaggtcagcc caaggctgccccctcggtcactctgttcccaccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacactggtgtgtctcataa gtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcgggagtggagaccacca caccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctacctgagcctgacgcctgagcagtggaagtcccaca gaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacagaatgttca

G. Anticuerpo MOR-7483.1

Secuencia de aminoácidos de V ^h (SEQ ID NO.: 43): (igual que MOR 7480.1)

Secuencia de aminoácidos de cadena pesada de longitud completa (IgG2) (SEQ ID NO.: 44): (igual que IgG2 MOR-7480.1)

Secuencia de aminoácidos de V^l (SEQ ID NO.: 60):

SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDNIGDQYAHWYQQKPGQSPVLVIYQDKNR

PSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCSTYTFVGFTTVFGGGTKLTVL

Secuencia de aminoácidos de cadena ligera de longitud completa (SEQ ID NO.: 61):

DIELTQPPSVSVAPGQTARISCSGDNIGDQYAHWYQQKPGQAPVWIYQDKNRPSGIPE

RFSGSNSGNTATLTISGTQAEDEADYYCSTYTFVGFTTVFGGGTKLTVLagpkaapsvtlfpp

sseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvetttpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvthegstv

ektvaptecs

Secuencia de ácidos nucleicos de V^h (SEQ ID NO.: 47): (igual que MOR-7480.1)

Secuencia de ácidos nucleicos de cadena pesada de longitud completa (IgG2) (SEQ ID NO.: 49): (igual que IgG2 MOR-7480.1)

Secuencia de ácidos nucleicos de V^l (SEQ ID NO.: 62):

Agctacgagctgacccagccccccagcgtgtccgtgagccctggccagaccgccagcatcacctgcagcggc

gacaacatcggcgaccagtacgcccactggtatcagcagaagcccggccagagccccgtgctggtgatctaccaggac

aagaaccggcccagcggcatccccgagcggttcagcggcagcaacagcggcaacaccgccaccctgaccatcagcg

gcacccaggccatggacgaggccgactactactgctctacttatacttttgttggttttactactgtgttcggcggagggaccaa

gctgaccgtccta

Secuencia de ácidos nucleicos de cadena ligera de longitud completa (SEQ ID NO.: 63):

agctacgagctgacccagccccccagcgtgtccgtgagccctggccagaccgccagcatcacctgcagcggcgacaac

atcggcgaccagtacgcccactggtatcagcagaagcccggccagagccccgtgctggtgatctaccaggacaagaac

cggcccagcggcatccccgagcggttcagcggcagcaacagcggcaacaccgccaccctgaccatcagcggcaccca

ggccatggacgaggccgactactactgctctacttatacttttgttggttttactactgtgttcggcggagggaccaagctgacc

gtcctaggtcagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccaccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacac

tggtgtgtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcggga

gtggagaccaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctacctgagcctgacgcctgagca

gtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacag

aatgttca

H. Anticuerpo MOR-7483.2

Secuencia de aminoácidos de V^h (SEQ ID NO.: 43): (igual que MOR-7480.1)

Secuencia de aminoácidos de cadena pesada de longitud completa (IgG2) (SEQ ID NO.:44): (igual que IgG2 MOR-7480.1)

Secuencia de aminoácidos de V^l (SEQ ID NO.: 64):

SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDNIGDQYAHWYQQKPGQSPVWIYQDKNR

PSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCSTYTFVGFTTVFGGGTKLTVL

Secuencia de aminoácidos de cadena ligera de longitud completa (SEQ ID NO: 65):

SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDNIGDQYAHWYQQKPGQSPVWIYQDKNRPSGIP

ERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCSTYTFVGFTTVFGGGTKLTVLqgDkaaDSvtlfp psseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvetttpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvthegst vektvaptecs

Secuencia de ácidos nucleicos de V^h (SEQ ID NO.: 47): (igual que MOR-7480.1)

Secuencia de ácidos nucleicos de cadena pesada de longitud completa (IgG2) (SEQ ID NO.: 49): (igual que IgG2 MOR-7480.1)

Secuencia de ácidos nucleicos de V^l (SEQ ID NO.: 66):

agctacgagctgacccagccccccagcgtgtccgtgagccctggccagaccgccagcatcacctgcagcggc gacaacatcggcgaccagtacgcccactggtatcagcagaagcccggccagagccccgtggtggtgatctaccaggac aagaaccggcccagcggcatccccgagcggttcagcggcagcaacagcggcaacaccgccaccctgaccatcagcg gcacccaggccatggacgaggccgactactactgctctacttatacttttgttggttttactactgtgttcggcggagggaccaa gctgaccgtccta

Secuencia de ácidos nucleicos de cadena ligera de longitud completa (SEQ ID NO.: 67):

agctacgagctgacccagccccccagcgtgtccgtgagccctggccagaccgccagcatcacctgcagcggcgacaac atcggcgaccagtacgcccactggtatcagcagaagcccggccagagccccgtggtggtgatctaccaggacaagaac cggcccagcggcatccccgagcggttcagcggcagcaacagcggcaacaccgccaccctgaccatcagcggcaccca ggccatggacgaggccgactactactgctctacttatacttttgttggttttactactgtgttcggcggagggaccaagctgacc gtcctaggtcagcccaaggctgccccctcggtcactctgttcccaccctcctctgaggagcttcaagccaacaaggccacac tggtgtgtctcataagtgacttctacccgggagccgtgacagtggcctggaaggcagatagcagccccgtcaaggcggga gtggagaccaccacaccctccaaacaaagcaacaacaagtacgcggccagcagctacctgagcctgacgcctgagca gtggaagtcccacagaagctacagctgccaggtcacgcatgaagggagcaccgtggagaagacagtggcccctacag aatgttca

I. Secuencia de aminoácidos de 4-1BB humano (SEQ ID NO: 68):

mgnscynivatlllvlnfertrslqdpcsncpagtfcdnnrnqicspcppnsfssaggqrtcdicrqckgvfrtrkecs stsnaecdctpgfhclgagcsmceqdckqgqeltkkgckdccfgtfndqkrgicrpwtncsldgksvlvngtkerdvvcgps padlspgassvtppaparepghspqiisfflaltstallfllffltlrfsvvkrgrkkllyifkqpfnnrpvqttqeedgcscrfpeeeegg cel

J. Secuencia de aminoácidos de la región constante de IgG1 humana (SEQ ID NO: 69):

astkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtq tyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwy vdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtk nqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslsl spgk

K. Secuencia de ácidos nucleicos de la región constante de IgG1 humana (SEQ ID NO: 70):

GCCT CCACCAAGGGCCCAT CG GT CTT CCCCCTGGCACCCT CCT CCAAGAGCACCT

CTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGT

GACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCT

GT CCTACAGT CCT CAGGACT CTACT CCCT CAGCAGCGTAGT GACCGT GCCCT CCAG

CAGCTT G GGCACCCAG ACCTACAT CT GCAACGT GAAT CACAAGCCCAGCAACACCA

AGGTGGACAAGAAAGTT GAGCCCAAAT CTT GT GACAAAACT CACACAT GCCCACCG

T GCCCAGCACCT GAACT CCT GGGGGGACCGT CAGT CTT CCT CTT CCCCCCAAAACC

CAAGGACACCCT CAT GAT CT CCCGGACCCCT GAGGT CACAT GCGTGGT G GTGGAC

GT GAGCCACGAAGACCCT GAGGT CAAGTT CAACT GGTACGT GGACGGCGT GGAGG

TGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGT

GGT CAGCGT CCT CACCGT CCT GCACCAGGACTGGCT GAAT GGCAAGGAGTACAAG

T GCAAG GT CT CCAACAAAGCCCT CCCAGCCCCCAT CG AGAAAACCAT CTCCAAAGC

CAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAG

AT GACCAAGAACCAGGT CAGCCT GACCT GCCTGGT CAAAGGCTT CTAT CCCAGCGA

CATCGCCGT G GAGT GG GAG AGCAAT G GGCAGCCG GAG AACAACTACAAGACCACG

CCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGA

CAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCT

CT GCACAACCACTACACGCAG AAGAGCCT CTCCCTGTCT CCG GGTAAA

L. Secuencia de aminoácidos de la región constante de IgG2 humana (SEQ ID NO: 71)

astkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtq tytcnvdhkpsntkvdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdg vevhnaktkpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqvs Itclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg k

M. Secuencia de ácidos nucleicos de la región constante de IgG2 humana (SEQ ID NO: 72):

GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCT

CCGAGAGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGT

GACGGT GT CGT GGAACT CAGGCGCT CT GACCAGCGGCGT GCACACCTT CCCGGCT

GT CCTACAGT CCT CAGGACT CTACT CCCT CAGCAGCGTAGT GACCGTGCCCT CCAG

CAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCA

AGGTGGACAAGACAGTT GAGCGCAAAT GTT GT GTCGAGT GCCCACCGTGCCCAGC

ACCACCT GT G GCAGG ACCGT CAGT CTT CCT CTT CCCCCCAAAACCCAAG GACACCC

T CAT GAT CT CCCGGACCCCT GAGGT CACGT GCGTGGT GGT GGACGT GAGCCACGA

AGACCCCGAGGT CCAGTT CAACTGGTACGT GGACGGCGT GGAGGT GCATAAT GCC

AAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTT CAACAGCACGTT CCGT GT GGT CAGCGT CC

TCACCGTCGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTC

CAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGC

CCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAA

CCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTG

GAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGC

T G GACT CCG ACG GCT CCTT CTT CCT CTACAGCAAGCT CACCGT GG ACAAG AGCAGG

T G GCAGCAGG GG AACGT CTT CT CAT GCTCCGT GAT GCAT GAG GCT CT GCACAACCA

CTACACACAGAAG AGCCT CTCCCTGTCTCCGG GTAAA

N. Secuencia de aminoácidos de la región constante de cadena ligera lambda humana (SEQ ID NO: 73):

gqpkaapsvtlfppsseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvetttpskqsnnkyaassylsltp eqwkshrsyscqvthegstvektvaptecs

O. Secuencia de ácidos nucleicos de la región constante de cadena ligera lambda humana (SEQ ID NO: 74):

GGT CAGCCCAAGGCT GCCCCCTCGGT CACTCT GTT CCCACCCT CCT CT GAGGAGC

TT CAAGCCAACAAG GCCACACT G GTGTGTCT CATAAGT G ACTT CT ACCCGG GAGCC

GTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACC

ACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTACCTGAGCCT

GACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAA

GGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCA

P. ANTICUERPO P-Cadherina (g-194-g09 o anti-P-cadherina1)

Secuencia de aminoácidos de H-CDR1 (SEQ ID NO: 75):

SYAMS

Secuencia de aminoácidos de H-CDR2 (SEQ ID NO: 76):

AISGSGGSTYYADSVKG

Secuencia de aminoácidos de H-CDR3 (SEQ ID NO: 77):

TNSAKFDP

Secuencia de aminoácidos de L-CDR1 (SEQ ID NO: 78):

TGTSNDVGAYNYVS

Secuencia de aminoácidos de L-CDR2 (SEQ ID NO: 79):

EVNKRPS

Secuencia de aminoácidos de L-CDR3 (SEQ ID NO: 80):

SSYTMGSTFM L

Claims (6)

REIVINDICACIONES

1. Un anticuerpo anti-4-1BB, o una porción de unión a antígeno del mismo, para uso en el tratamiento de cáncer en combinación con un anticuerpo anti-CD20, o una porción de unión a antígeno del mismo, en donde dicho anticuerpo anti-4-1BB, o la porción de unión a antígeno del mismo, comprende:

(a) una H-CDR1 como se expone en la SEQ ID NO: 29;

(b) una H-CDR2 como se expone en la SEQ ID NO: 30;

(c) una H-CDR3 como se expone en la SEQ ID NO: 31;

(d) una L-CDR1 como se expone en la SEQ ID NO: 34;

(e) una L-CDR2 como se expone en la SEQ ID NO: 35; y

(f) una L-CDR3 como se expone en la SEQ ID NO: 36, y

en el que el anticuerpo anti-CD20, o porción de unión a antígeno del mismo, se administra en una dosis de 3-15 mg/kg.

2. El anticuerpo anti-4-1BB, o porción de unión a antígeno del mismo, para el uso de la reivindicación 1, en el que dicho anticuerpo anti-CD20, o porción de unión a antígeno del mismo, comprende las 6 CDR de rituximab.

3. El anticuerpo anti-4-1BB, o porción de unión a antígeno del mismo, para el uso de la reivindicación 1 o 2, en el que dicho anticuerpo anti-4-1BB, o porción de unión a antígeno del mismo, comprende una región Vh que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO: 43 y una región Vl que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO: 45.

4. El anticuerpo anti-4-1BB, o porción de unión a antígeno del mismo, para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que dicho anticuerpo anti-CD20, o porción de unión a antígeno del mismo, comprende la región V^h de rituximab y la región V^l de rituximab.

5. El anticuerpo anti-4-1BB, o porción de unión a antígeno del mismo, para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que dicho anticuerpo anti-4-1BB, o porción de unión a antígeno del mismo, comprende una secuencia de aminoácidos de la cadena pesada como la expuesta en la SEQ ID NO: 44 y además comprende una secuencia de aminoácidos de la cadena ligera expuesta en la SEQ ID NO: 46, con la condición de que el residuo de lisina del extremo terminal C de la SEQ ID NO: 44 esté opcionalmente ausente.

6. El anticuerpo anti-4-1BB, o porción de unión a antígeno del mismo, para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que dicho anticuerpo anti-CD20, o porción de unión a antígeno del mismo, comprende la secuencia de aminoácidos de la cadena pesada de rituximab y la secuencia de aminoácidos de la cadena ligera de rituximab.