ES2702577T3

ES2702577T3 - Nanopartícula polimérica de finasterida, composición acuosa que la contiene, composición para el tratamiento de la alopecia, métodos para preparar dicha composición, y uso de la misma

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Publication number: ES2702577T3
Application number: ES13832319T
Authority: ES
Inventors: Adrian Raffin Pohlmann; Denise Duarte Jornada; Silva Stanisçuaski Guterres
Original assignee: Universidade Federal do Rio Grande do Sul UFRGS; Biolab Sanus Farmaceutica Ltda
Current assignee: Universidade Federal do Rio Grande do Sul UFRGS; Biolab Sanus Farmaceutica Ltda
Priority date: 2012-08-31
Filing date: 2013-08-30
Publication date: 2019-03-04
Anticipated expiration: 2033-08-30
Also published as: US9895302B2; PE20191713A1; KR102128478B1; CA2883996C; UA116993C2; EP2891487A1; PE20150731A1; US20150238406A1; SA515360083B1; AU2013308355B2; TR201818992T4; WO2014032151A1; CN104768539B; CA2883996A1; BR102012022034B1; CL2015000502A1; IN2015DN01727A; EP2891487A4; MX2015002299A; MX357601B

Abstract

Nanopartícula en forma de una nanocápsula que comprende el ingrediente activo finasterida, donde dicha nanopartícula se forma preparando una fase orgánica y una fase acuosa, donde: (i) la fase orgánica comprende: (a) un polímero hidrófobo que es una poli(e-caprolactona) con un punto de fusióin menor que 120°C; (b) una mezcla de aceites que consiste en triglicéridos de ácido caprílico y cáprico, y la mezcla de linalool y farnesol; (c) un tensioactivo lipófilo con HLB que es monoestearato de sorbitano; (d) un disolvente orgánico que es acetona; y (e) finasterida; y (ii) la fase acuosa comprende: (f) un tensioactivo hidrófilo que es polisorbato 80; y (g) agua.

Description

DESCRIPCIÓN

Nanopartícula polimérica de finasterida, composición acuosa que la contiene, composición para el tratamiento de la alopecia, métodos para preparar dicha composición, y uso de la misma

Campo de la invención

La presente invención está relacionada con nanopartículas poliméricas, en forma de nanocápsulas, que comprenden finasterida y con una composición farmacéutica para aplicación tópica para el tratamiento de la alopecia, dicha composición comprende dichas nanopartículas poliméricas, en forma de nanocápsulas, que contienen finasterida, aditivos y un vehículo farmacéuticamente aceptable. La invención incluye además un proceso para la preparación de dichas nanocápsulas de finasterida que son apropiadas para una composición para aplicación tópica adecuada para tratar la alopecia. La invención además está relacionada con las nanopartículas anteriores, en forma de nanocápsulas, para usar en el tratamiento de la alopecia.

Fundamentos de la invención

La pérdida del cabello, también denominada alopecia, se puede manifestar de muchas maneras. Esta puede ser irreversible en casos clasificados como alopecia cicatricial donde existe la destrucción de los folículos pilosos; o reversible en casos no cicatriciales que tienen diversas causas y pueden originarse por tratamientos farmacológicos, dietas, estrés fisiológico o psicológico, infecciones fúngicas, quimioterapia o herencia genética. Debido a esto, en un intento por revertir esta situación, se emplean diversos tratamientos farmacológicos y no farmacológicos (implantes y aplicaciones láser).

En la terapia capilar, para que un fármaco tenga la acción deseada, es necesario que este alcance el folículo piloso (en la epidermis), donde está ubicada la enzima responsable de desencadenar la enfermedad, sin filtrarse a los capilares sanguíneos que abastecen al folículo piloso (evitando una acción sistémica). Por lo tanto, para que una formulación sea eficaz, es necesario que sea capaz de promover la penetración y la retención del fármaco en su sitio de acción (DRAKE, L., et al.; "The effects of finasteride on scalp skin and serum androgen levels in men with androgenetic alopecia." Journal ofthe American Academy of Dermatology, 1999, vol. 41, nro. 4, p. 550-554).

La alopecia androgénica es la transformación de folículos pilosos maduros (terminales) en folículos inmaduros (vello) a través de ciclos capilares sucesivos con un acortamiento de la duración de la fase anágena. Por lo tanto, debido a la reducción del tiempo de crecimiento y el desarrollo del tallo, este se torna progresivamente más corto, más delgado y a menudo sin color (INUI, S.; ITAMI, S.; "Molecular basis of androgenetic alopecia: From androgen to paracrine mediators through dermal papilla." Journal of Dermatological Science, 2011, vol. 61, p.1-6). Este es el tipo más común de alopecia y afecta principalmente a los hombres, estando relacionado, entre otros factores, con la regulación de las hormonas sexuales. Una mayor comprensión de la alopecia androgénica provino de los estudios de Hamilton (1942) quien describió el patrón de la pérdida del cabello y la fisiología como un proceso ligado a una predisposición genética del folículo piloso que se produce bajo la influencia de los andrógenos (Trueb, RM; "Molecular mechanisms of androgenetic alopecia.” Experimental Gerontology, 2002 v. 37, nro. 8-9, p. 981-990). No obstante, no existe correlación entre la alopecia androgénica y los niveles de testosterona, la testosterona libre y la testosterona biodisponible. Es probable que las bases patogénicas de la calvicie estén mediadas a través de la señalización intracelular en el folículo piloso (INUI, S.; ITAMI, S.; "Molecular basis of androgenetic alopecia: From androgen to paracrine mediators through dermal papilla." Journal of Dermatological Science, 2011, vol. 61, p.1-6).

A través de la acción de la enzima 5 ^a -reductasa, la testosterona se convierte en la hormona más potente dihidrotestosterona (DHT). Se cree que su acción es mayor que la de la testosterona por dos razones principales: (i) La DHT no se puede convertir en estrógeno mediante aromatasas, manteniendo solo su actividad puramente androgénica, (ii) estudios in vitro demuestran que la DHT se une con más afinidad a un receptor andrógeno que a la testosterona (LIU, S.; YAMAUCHI, H.; "Different patterns of 5a-reductase expression, cellular distribution, and testosterone metabolism in human follicular dermal papilla cells." Biochemical and Biophysical Research Communications, 2008, 368 p.858-864). La acción de estas hormonas andrógenas se produce mediante su diseminación a través de la membrana celular con el propósito de unirse con el receptor andrógeno intracelular. Como resultado de esta unión, el complejo hormona-receptor sufre cambios de conformación, uniendo así el complejo con el sitio promotor en el ADN, desencadenando la producción de ARN mensajeros que transcribirán la respuesta genética (INUI, S.; ITAMI, S.; "Molecular basis of androgenetic alopecia: From androgen to paracrine mediators through dermal papilla." Journal of Dermatological Science, 2011, vol. 61, p.1-6). Luego de la unión de la DHT con el receptor andrógeno presente en el folículo piloso, la respuesta es una disminución en la fase anágena del ciclo de crecimiento del cabello llevando así el cabello a la fase telógena temprana (Ellis, JA; Harrap, SB; "The genetics of androgenetic alopecia." Clinics in Dermatology, 2001, vol. 19, p. 149-154).

La alopecia androgénica presenta un patrón en la pérdida del cabello, que facilita el diagnóstico y la diferencia fácilmente de otros tipos de alopecia. Por definición, la pérdida inicial del tallo del cabello se produce en la parte frontal, o solamente en la coronilla, y se puede expandir a otras regiones. El grado de alopecia se puede determinar mediante la escala de Norwood-Hamilton. Esta escala identifica tres tipos de patrones de pérdida del cabello: patrón de la coronilla (donde la pérdida del tallo se inicia en la parte trasera), patrón frontal (donde la pérdida del tallo se inicia en la parte delantera) y el patrón normal (que comienza con pérdidas en ambas partes, trasera y delantera), estando todos los patrones divididos en siete etapas de pérdida del cabello (Sinclair, RD; "Male androgenetic alopecia." The Journal of Men’s Health & Gender, 2004 v. 1, nro. 4, p. 319-327).

Actualmente, el tratamiento de la alopecia puede ser tópico y sistémico. Entre los fármacos aprobados por ANVISA (Brasil), se pueden citar los siguientes: (i) como sistémico, la medicina elaborada con finasterida (1 mg) para uso oral, comercializada con el nombre comercial Propecia®, que actúa como un bloqueador de la hormona DHT; y (ii) como tópicos: (a) un fármaco con una base de minoxidil, comercializado con el nombre comercial mousse Regain®/Rogain con 2% (para mujeres) y 5% (para hombres) y (b) el fármaco basado en alfaestradiol, comercializado con el nombre comercial Avicis® en forma de solución al 0,025%.

El ingrediente activo (finasterida) presenta diversas dificultades relacionadas con la estabilidad, la biodisponibilidad y la formulación que resultan de sus propiedades fisioquímicas y biológicas/fisiológicas. Para eliminar o reducir las características negativas del ingrediente activo, se investigaron alternativas para "protegerlo de la degradación" o para "aumentar su solubilidad".

El desarrollo de nuevos sistemas de aporte del fármaco ha sido el objetivo de mejoras dirigidas hacia el aumento de su eficacia terapéutica y seguridad de uso, mediante el cambio de aspectos farmacocinéticos y farmacodinámicos. Entre los sistemas coloidales de aporte del fármaco, existen las nanopartículas poliméricas y los liposomas (Avnesh Kumari, Sudesh Kumar Yadav, Subhash C. Yadav, Biodegradable polymeric nanoparticle based drug delivery systems, Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, Volumen 75, Edición 1, 1° de enero de 2010, Páginas 1-18; Vladimir P. Torchilin, RECENT ADVANCES WITH LIPOSOMES AS PHARMACEUTICAL CARRIERS, NATURE REVIEWS, VOLUMEN 4, FEBRERO DE 2005, p 145). Debido a su potencial terapéutico y su estabilidad mejorada durante el almacenamiento y luego del contacto con fluidos corporales, las nanopartículas poliméricas formadas por polímeros biodegradables han atraído la creciente atención de los investigadores cuando se las compara con los liposomas (SCHAFFAZICK, SH, et al.; "Characterization and physicochemical stability of nanoparticle polymeric systems for drug delivery." New Chemistry, 2003, Vol. 26, nro. 5, p. 726-737).

Las nanopartículas poliméricas son sistemas coloidales vehículos de fármacos que tienen diámetros entre 10 y 1000 nm y están divididos, de acuerdo con sus arquitecturas supramoleculares, en vesículas o matrices. Las nanocápsulas (vesiculares) tienen un núcleo oleoso rodeado por una matriz polimérica, permitiendo que el fármaco se disperse en el núcleo y/o sea absorbido en la pared polimérica. Las nanoesferas (matrices) no tienen un núcleo oleoso, solo una estructura polimérica, de modo que el fármaco puede ser absorbido o retenido en la matriz polimérica. Se han preferido las nanopartículas hechas de polímeros biodegradables dado que son potencialmente más terapéuticas, y tienen alta estabilidad en fluidos biológicos y durante el almacenamiento (SCHAFFAZICK, SH, et al.; "Characterization and physicochemical stability of nanoparticle polymeric systems for drug delivery." New Chemistry, 2003, Vol. 26, nro. 5, p. 726-737).

Se pueden emplear diferentes procesos físico-químicos para la preparación de estos sistemas de nanopartículas, tales como: (i) deposición interfacial de polímeros preformados, (b) precipitación por adición de sal, y (c) emulsificación-difusión. Entre las principales técnicas para la preparación de nanocápsulas, se destaca la deposición interfacial de polímeros preformados propuesta por Fessi et al. en 1989. (FESSI, H.; et al; "Nanocapsule formation by interfacial polymer deposition following solvent displacement." International Journal of Pharmaceutics, 1989, vol.

55, nro. 1, p. R1-R4), donde el polímero es disuelto en el disolvente orgánico junto con el componente oleoso, el tensioactivo lipófilo y el fármaco o el ingrediente activo que se ha de encapsular. Esta fase orgánica/oleosa se inyecta con agitación moderada, sobre una fase acuosa, que está compuesta por agua y un tensioactivo hidrófilo. Esta mezcla espontáneamente produce nanocápsulas, con diámetros promedio entre 200 y 500 nm. Finalmente, se extraen el disolvente orgánico y el exceso de agua.

La mayoría de los productos tópicos disponibles para el tratamiento de la alopecia están formulados con los ingredientes activos disueltos en una solución de agua-alcohol. No obstante, debido a la baja permeabilidad de algunos fármacos a través de la capa de queratina, solo una fracción de la dosis aplicada alcanza el sitio de acción, penetrando los poros y los folículos pilosos (TSUJIMOTO, H. et al.; "Evaluation o fthe permeability of hair growing ingredient encapsulated PLGA nanospheres to hair follicles and their hair growing effects." Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2007, vol. 17, p. 4771-4777). Como resultado, el crecimiento del cabello usando estos productos no excede las expectativas del consumidor, lo que lleva a la falta de adherencia al tratamiento. Estudios recientes han confirmado la hipótesis de que las nanopartículas pueden penetrar eficazmente en los folículos pilosos (Lademann, J., et al.; "Nano- particles - An efficient carrier for drug delivery into the hair follicles." European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics, 2007, vol. 66, nro. 2, p. 159-164) alcanzando estructuras funcionales profundas donde permanecen almacenados durante unos pocos días. En el caso de sustancias que no son material corpuscular, no se han observado tales efectos a largo plazo en folículos pilosos ni en el estrato córneo. En principio, el estrato córneo carece de la característica de depósito para sustancias aplicadas de manera tópica dado que estas sustancias permanecen localizadas en la superficie de la piel o en las capas celulares superiores (que se remueven constantemente por descamado). Por lo tanto, los folículos pilosos se convierten, en el largo plazo, en los únicos depósitos para las sustancias que no son material corpuscular de uso tópico. Estas observaciones muestran que los folículos pilosos son dianas importantes para el aporte de fármacos, dado que están rodeados por una densa red de capilares sanguíneos y células dendríticas (células de Langerhans).

Por ejemplo, se evaluó in vivo el efecto sobre el crecimiento del pelo de nanoesferas de poli(láctido-co-glicólido) (PLGA, por sus siglas en inglés) que contienen tres ingredientes activos diferentes (Hinokitiol, ácido glicirretínico y 6-bencilaminopurina) (TSUJIMOTO, H., et al.; "Evaluation of the permeability of hair growing ingredient encapsulated PLGA nanospheres to hair follicles and their hair growing effects." Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2007, vol. 17, p. 4771-4777). Mediante el análisis de la intensidad fluorescente de estos ingredientes activos en biopsias de cuero cabelludo humano, los autores hallaron que las nanoesferas tenían un efecto de permeabilidad en los poros 2 a 2,5 veces mayor en comparación con el grupo de control de los mismos ingredientes activos en una solución tamponada (PBS). También fue posible observar un aumento en la actividad capilar, cuyo ciclo pasó de la fase de reposo a la fase de crecimiento, lo que sugiere que las nanoesferas de PLGA pueden ser vehículos promisorios para fármacos en los folículos pilosos.

Hasta el momento, existen pocos artículos en la bibliografía que informan sobre la colocación de finasterida en sistemas de nanopartículas. El documento US20060204588, propiedad de Elan Pharma International Limited, divulga una composición farmacéutica que contiene finasterida en nanopartículas (con un tamaño promedio menor que 2000nm) y al menos un estabilizador superficial que puede ser adsorbido por la superficie del ingrediente activo o se puede asociar con esta. En cuanto al método de preparación de la formulación de finasterida en nanopartículas, este método consiste en dispersar finasterida en un medio de dispersión líquido, y reducir mecánicamente el tamaño de sus partículas.

La solicitud de patente US20110117045, propiedad de Fujifilm Corporation, es un producto basado en nanopartículas proteicas que contienen un ingrediente activo para el tratamiento del cabello; el producto consiste en nanopartículas producidas a partir de proteína (tal como caseína, colágeno, gelatina, albúmina, entre otras) que también contiene un ingrediente activo que promueve el crecimiento del cabello, e incluye finasterida y minoxidil como uno de esos ingredientes activos.

El documento WO2005000258, propiedad de Amorepacific Corporation, describe nanopartículas poliméricas autoensambladas que comprenden un polímero anfifílico y un ingrediente fisiológicamente activo; con lo cual el polímero anfifílico comprende policaprolactona y polietilén glicol como un bloque hidrófobo e hidrófilo, y el ingrediente fisiológicamente activo está comprendido por dicho polímero anfifílico. El ingrediente fisiológicamente activo puede ser finasterida (como se especifica en la reivindicación 10; ver también los ejemplos 45-47) o minoxidil (ver página 8, renglones 8-18). La motivación de las mejoras reivindicadas, es decir, el uso de un polímero anfifílico en la formación de nanopartículas que contienen un ingrediente activo, es reducir la inestabilidad coloidal que provoca la precipitación o la floculación que se produce cuando se usa un polímero hidrófobo en la preparación de nanopartículas.

No obstante, es deseable usar un homopolímero que sea técnicamente menos complejo y más simple de obtener que un copolímero que es realmente una estructura en bloques poliméricos, donde la proporción de las porciones hidrófilas y lipofílicas es difícil de controlar, causando por lo tanto problemas en la formación subsiguiente de nanopartículas, especialmente nanocápsulas.

Asimismo, el uso de copolímeros en bloque preparados en una proporción 1:1 de porción hidrófila y lipofílica provoca una falta de flexibilidad en el equilibrio hidrófilo-lipófilo (HLB) que puede limitar la calidad de las formulaciones nanotecnológicas. La posibilidad de variar la concentración de estabilizador (emulsionante hidrófilo o tensioactivo) es una ventaja en la preparación de nanopartículas. Los homopolímeros lipófilos se pueden formular como nanopartículas mediante el empleo de estabilizadores en proporciones variadas en la formulación, permitiendo la optimización de la estabilidad física de los nanocoloides.

Compendio de la invención

La presente invención trata de proporcionar nanopartículas poliméricas, en forma de nanocápsulas, que comprenden finasterida y con una composición farmacéutica para el tratamiento tópico de la alopecia, dicha composición comprende dichas nanopartículas poliméricas, en forma de nanocápsulas, que contienen finasterida, aditivos y un vehículo farmacéuticamente aceptable. La invención incluye además un proceso para la preparación de nanocápsulas de finasterida adecuadas para una composición para aplicación tópica para el tratamiento de la alopecia. La invención además está relacionada con las nanopartículas anteriores, en forma de nano-cápsulas, para usar en el tratamiento de la alopecia.

Una primera realización de la invención está relacionada con una nanopartícula polimérica en forma de una nanocápsula que comprende el ingrediente activo finasterida, donde dicha nanopartícula se forma a partir de la preparación de una fase orgánica y una fase acuosa, donde:

(i) la fase orgánica comprende:

(a) un polímero hidrófobo que es una poli( ^g -caprolactona) con un punto de fusión menor que 120°C;

(b) una mezcla de aceites que consiste en triglicéridos de ácido caprílico y cáprico, y la mezcla de linalool y farnesol;

(c) un tensioactivo lipófilo con HLB (equilibrio hidrófilo - lipófilo bajo, por sus siglas en inglés) que es monoestearato de sorbitano;

(d) un disolvente orgánico que es acetona; y

(e) finasterida; y

(ii) la fase acuosa comprende:

(f) un tensioactivo hidrófilo que es polisorbato 80; y

(g) agua.

En una segunda realización, la invención está relacionada con una composición farmacéutica para el tratamiento tópico de la alopecia que comprende:

(A) 0,01 a 1,0% (p/p) de finasterida en forma de las nanopartículas poliméricas anteriores; y

(B) un vehículo farmacéuticamente aceptable;

donde la cantidad de componentes de las nanopartículas poliméricas es un porcentaje de la formulación final y dichas nanopartículas están establemente dispersas en el vehículo farmacéuticamente aceptable.

En una tercera realización, la invención comprende un proceso para preparar las nanopartículas poliméricas anteriores, donde dicho proceso comprende los pasos de:

(i) preparar una fase orgánica mediante la disolución de una poli( ^g -caprolactona) con un punto de fusión menor que 120°C y finasterida, una mezcla de aceites que consiste en triglicéridos de ácido caprílico y cáprico, linalool y farnesol, y un tensioactivo con HLB bajo que es monoestearato de sorbitano, en acetona; (ii) preparar una fase acuosa mediante la mezcla de polisorbato 80, en agua;

(iii) inyectar la fase orgánica en la fase acuosa para permitir la formación de la emulsión primaria de nanopartículas en la interfaz de las dos fases, manteniéndose la mezcla bajo agitación durante un tiempo suficiente para el encapsulado adecuado de la finasterida; y

(iv) retirar el disolvente orgánico para permitir recuperar la fase acuosa contenida en las nanocápsulas. Después de preparar las nanocápsulas, se suspenden en un vehículo adecuado, que opcionalmente contiene aditivos tales como dispersantes, humectantes, emolientes, espesantes, agentes secuestrantes, conservantes, antioxidantes, fragancias, y similares. En una cuarta realización, la invención está relacionada con las nanopartículas anteriores, en forma de nanocápsulas, para usar en el tratamiento de la alopecia.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 muestra la microscopia electrónica de transmisión de las nanocápsulas que contienen finasterida (NF25). La barra negra en el ángulo derecho de la imagen es de 0,2 micrómetros.

La Figura 2 muestra las concentraciones de finasterida durante 30 días de las nanocápsulas determinadas en alícuotas en reposo (en gris) y alícuotas agitadas (en negro) antes de la recolección (ambas del mismo lote).

La Figura 3 muestra fotografías de los animales en el primer día (columna 1), después de 15 días (columna 2) y 23 días (columna 3) para los grupos de tratamiento tratados con: NF25 (A); NEF25 (B); fármaco suspendido en agua (C) y agua (D).

La Figura 4 muestra el análisis histológico de los grupos: NF25 (A) NEF25 (B) C2+ (C) y C- (D).

La Figura 5 muestra el número de folículos maduros por campo histológico analizado (n = 12) para los tratamientos C- (agua), C2 (fármaco libre), NEF25 (nanoemulsión) y NF25 (nanocápsulas).

La Figura 6 muestra la distribución del tamaño de partícula (difracción láser) por volumen para la formulación NPXF05. La Figura 7 muestra el análisis del porcentaje de fármaco remanente en el sobrenadante de las formulaciones (35 lotes triplicados) NF25 (A) y NPXF05 (B), que se dejó reposar durante 30 días.

La Figura 8 muestra una fotografía de los animales en el día 0 (foto 1) y a los 15 días (foto 2) y 23 días (foto 3) de los grupos de tratamiento tratados con NF25 (A) y NPXF05 (B).

La Figura 9 muestra el análisis histopatológico de la piel retirada del lomo de los animales después de 23 días de tratamiento con: NF25 (A) y NPXF05 (B).

La Figura 10 muestra el número promedio de folículos maduros por campo examinado histológicamente para los animales tratados con la formulación NF25 (A) y la formulación NPXF05 (B). Las formulaciones NF25 y NEF25 no son acordes con la invención. La formulación NPXF05 es acorde con la invención.

Descripción detallada de la invención

La presente invención está relacionada con nanopartículas poliméricas, en forma de nanocápsulas, que comprenden finasterida y con una composición farmacéutica eficaz para el tratamiento tópico de la alopecia, dicha composición comprende dichos sistemas de nanopartículas, en forma de nanocápsulas de finasterida, vehículos farmacéuticamente aceptables; y que opcionalmente comprenden aditivos.

La invención también incluye un proceso para la preparación de nanopartículas poliméricas que comprenden finasterida en forma de nanocápsulas, que están comprendidas en dicha composición.

La finasterida es un azoesteroide sintético con potente acción antagonista selectiva frente a las enzimas 5 ^a -reductasa tipo 2. La finasterida actúa mediante la unión irreversible con la enzima, evitando la conversión de testosterona en su metabolito activo, dihidrotestosterona (DHT). El uso de finasterida fue inicialmente aprobado para la reducción del tamaño de la próstata asociado con la obstrucción urinaria (hiperplasia prostática benigna), dado que la DHT en los hombres, aunque es responsable del crecimiento de la próstata, puede verse involucrada en el desarrollo de hiperplasia. No obstante, se ha observado que los pacientes que toman este fármaco también presentaron una reversión de los síntomas de alopecia. Por esta razón, había comenzado el desarrollo de estudios para investigar el potencial de la finasterida para el tratamiento de la calvicie (Sinclair, RD, "Male androgenetic alopecia: Part II." The Journal ofM en’s Health & Gender, 2005, vol. 2, nro. 1, p. 38-44). Un estudio realizado por Kaufmann et al (2008) con 1553 hombres con una edad comprendida entre 18 y 41 años evaluó la acción de la finasterida en dosis de 1 mg diario frente a placebo durante cinco años. El resultado del tratamiento con finasterida llevó a una disminución en la probabilidad de pérdida visible del cabello, en comparación con el aumento de la probabilidad de pérdida visible del cabello en pacientes tratados con placebo. En este estudio, al final de los cinco años, 75% de los pacientes tratados con placebo desarrollaron calvicie y solo 10% de los pacientes tratados con finasterida desarrollaron la enfermedad. Una revisión de la seguridad y la eficiencia de la finasterida para usar en el tratamiento de alopecia androgénica en mujeres mostró en conclusión que este fármaco se puede usar de forma segura y eficaz en casos en los que el tratamiento con minoxidil no es eficaz (Stout, SM ; STUMPF, JL; "Finasteride Treatment ofHair Loss in Women." The Annals of Pharmacotherapy, 2010, vol. 44, nro. 6, p. 1090-1097).

La presente invención evita las desventajas y los efectos secundarios asociados con la administración sistémica de finasterida al proponer una composición farmacéutica para aplicación tópica de finasterida para el tratamiento de la alopecia.

La invención se basa en la preparación de nanocápsulas de finasterida, por medio del método de deposición interfacial de polímero preformado, donde primero se realiza la disolución de finasterida, de un polímero hidrófobo, de al menos una combinación oleosa y al menos un tensioactivo con bajo HLB (equilibrio hidrófilo-lipófilo) en un disolvente orgánico para formar la fase orgánica; y la mezcla de al menos un tensioactivo hidrófilo, preferiblemente neutro, en agua para formar la fase acuosa.

La invención está particularmente dirigida a la preparación de nanopartículas, preferiblemente realizadas por el método de auto-organización de nanocápsulas de soluciones con la consecuente deposición polimérica interfacial, debido a su insolubilidad en las fases interna y externa de las dispersiones coloidales. No obstante, deberá quedar claro que se pueden emplear otros métodos para producir las nanocápsulas de la invención.

Dichas nanopartículas poliméricas, en forma de nanocápsulas, se forman a partir de la fase orgánica y acuosa, como sigue:

- La fase orgánica comprende: (a) un polímero hidrófobo, (b) una mezcla de aceites, (c) al menos un tensioactivo lipófilo con bajo HLB, (d) un disolvente y (e) finasterida; y

- La fase acuosa comprende: (a) al menos un tensioactivo hidrófilo, y (b) agua.

Los polímeros divulgados en la presente para encapsular finasterida son polímeros hidrófobos seleccionados del grupo que consiste en polímeros vinílicos, poliésteres, poliamidas, poliuretanos, polímeros acrílicos y policarbonatos. Preferiblemente, el polímero hidrófobo empleado es un polímero biodegradable del grupo de poliésteres con un punto de fusión menor que 120 °C. Más preferiblemente, el polímero hidrófobo biodegradable del grupo de poliésteres, con un punto de fusión menor que 120 °C se selecciona del grupo que consiste en un poli(láctido), un poli(glicólido), copolímeros de poli(láctido-co-glicólido), una policaprolactona, un copolímero de policaprolactona con poliéster, con poliamida, con poliuretano o con un polímero vinílico. El polímero de acuerdo con la invención es poli( ^g -caprolactona). Los aceites o las mezclas de aceites divulgados en la presente para la preparación de la fase orgánica de las nanocápsulas se seleccionan del grupo que consiste en triglicéridos de cadena media, aceite de canola, aceite de soja, aceite de oliva, aceite de salvado de arroz, aceite de semilla de uva, aceite de pescado, aceite de linaza, aceites esenciales y mezclas de estos.

Los triglicéridos de cadena media son aquellos seleccionados del grupo de triglicéridos de ácido caprílico y cáprico, dicaprilocaprato de propilenglicol, macrogolglicéridos de oleoílo, lauroílo, linoleoílo, y mezclas de estos. Entre los aceites esenciales están aquellos seleccionados del grupo de linalool, farnesol, y mezclas de estos.

Entre los triglicéridos, se divulgan en la presente triglicéridos de ácido caprílico y cáprico.

En la presente invención, preferiblemente se usa una mezcla de triglicéridos de ácido caprílico y cáprico y Unistab® S-69. Unistab® S-69 es una mezcla de linalool y farnesol, una mezcla de aceites esenciales disponible en el mercado.

La invención se relaciona con el aumento del encapsulamiento de finasterida mediante la adición de un aceite nuevo en la composición del núcleo lipídico de la formulación en la cual la solubilidad es mayor que en los triglicéridos caprílico y cáprico. A tal fin, se empleó Unistab® S-69, una mezcla comercial, que consiste en farnesol y linalool, en la cual la solubilidad de finasterida es aproximadamente 90 mg/mL (dosificación realizada mediante HPLC (cromatografía líquida de alta resolución, por sus siglas en inglés)). Farnesol es un alcohol sesquiterpenoide y linalool es un alcohol terpenoide, ambos hallados en varios aceites esenciales e insolubles en agua pero miscibles con aceites y otros disolventes orgánicos tales como acetona y etanol. Porque es volátil, Unistab® S-69 se mezcló con triglicéridos en una proporción de 2,3: 1 (v/v) (Unistab® S-69: triglicéridos). No obstante, esta proporción, considerando la saturación de finasterida en Unistab® S-69, se podría emplear en la preparación de una formulación con una concentración de fármaco de 2,0 mg/ml, debido a la volatilidad de Unistab® S-69 y a la consiguiente pérdida de aceite debido a la extracción provocada por el vapor de agua durante el proceso de evaporación del disolvente bajo presión reducida, se preparó una formulación con una concentración de finasterida de 0,5 mg/ml, para asegurar las características nanométricas del sistema.

El tensioactivo lipófilo divulgado en la presente para usar en la fase orgánica para la preparación de nanopartículas poliméricas es un tensioactivo con bajo HLB, preferiblemente con un valor dentro del rango de 3 a 6, que es sólido o líquido, preferiblemente sólido, seleccionado del grupo que consiste en monoestearato de sorbitano, diestearato de sorbitano, triestearato de sorbitano, glicéridos de caprilocaproíl macrogol, lauratos de propilenglicol, caprilatos de propilenglicol, monoestearato de glicerilo, oleatos de poliglicerol, o mezclas de estos. El tensioactivo lipófilo usado en la fase orgánica de la invención es monoestearato de sorbitano.

Los disolventes divulgados en la presente para usar en la fase orgánica para la preparación de estas nanopartículas poliméricas, en forma de nanocápsulas, se seleccionan del grupo que consiste en acetona, dimetilsulfóxido, dimetilformamida, N-metilpirrolidona, dioxano, carbonato de propileno, éter dietílico, tetrahidrofurano, organohalógenos, acetato etílico, acetonitrilo, metil etil cetona, mezclas de estos o cualquier otro disolvente que presente propiedades físico-químicas de interacción intermolecular con agua. En la invención, el disolvente orgánico es acetona.

Los tensioactivos hidrófilos divulgados en la presente para usar en la fase acuosa se seleccionan del grupo que consiste en polímeros polioxigenados, tensioactivos iónicos y tensioactivos neutros, preferiblemente emulsionantes tales como polímeros polioxigenados, o tensioactivos iónicos, tales como lecitina o un tensioactivo neutro seleccionado del grupo que consiste en polisorbato 20, polisorbato 60, polisorbato 80, estearato de macrogol, éter cetoestearílico de macrogol, éter laurilo de macrogol, éter oleílo de macrogol, oleato de macrogol, aceite de ricino polioxilo, aceite de ricino polioxilo hidrogenado, y mezclas de estos. Se prefiere el polisorbato. Se elige polisorbato 80 para la fase acuosa de la preparación de nanopartículas de la invención.

Las que siguen a continuación son realizaciones específicas de la invención, proporcionadas con fines ilustrativos únicamente.

La suspensión acuosa a partir de la cual se forman las nanocápsulas poliméricas comprende:

- En la fase orgánica (a) de 0,001% a 80,0% (p/p) de finasterida, (b) de 0,01% a 30,0% (p/p) de un polímero hidrófobo que es una poli( ^g -caprolactona) con un punto de fusión menor que 120°C, (c) de 0,01% a 50,0% (p/p) de una mezcla de aceites que consiste en triglicéridos de ácido caprílico y cáprico, y la mezcla de linalool y farnesol, (d) de 0,01% a 50,0% (p/p) de al menos un tensioactivo lipofílico con bajo h Lb que es monoestearato de sorbitano, y (e) de 10% a 80% (p/p) de un disolvente orgánico que es acetona; y

- En la fase acuosa (a) de 0,05% a 20,0% (p/p) de al menos un tensioactivo hidrófilo que es polisorbato 80, y (b) de 10% a 90% (p/p) de agua.

En una realización preferida, la suspensión acuosa a partir de la cual se forman las nanocápsulas poliméricas comprende:

(i) En la fase orgánica (a) de 0,05% a 20,0% (p/p) de un polímero hidrófobo que es una poli( ^g -caprolactona) con un punto de fusión menor que 120°C; (b) de 0,05% a 20,0% (p/p) de una mezcla de triglicéridos de ácido caprílico y cáprico con linalool y farnesol (Unistab® S-69); (c) de 0,05% a 20,0% (p/p) de al menos un tensioactivo lipofílico con bajo HLB que es monoestearato de sorbitano; (d) de 10% a 80% (p/p) de un disolvente orgánico que es acetona; y (e) de 0,005% a 50,0% (p/p) de finasterida; y

(ii) En la fase acuosa (f) de 0,05% a 20,0% (p/p) de al menos un tensioactivo hidrófilo que es polisorbato 80; y (g) de 10% a 90% (p/p) de agua.

Una composición farmacéutica para el tratamiento tópico de la alopecia contiene: (A) las nanopartículas poliméricas, en forma de nanocápsulas, de la presente invención, que comprenden: (a) de 0,01% a 2,5% (p/p) de finasterida; (b) de 0,1% a 10,0% (p/p) de un polímero hidrófobo que es poli( ^g -caprolactona) con un punto de fusión menor que 120°C; (c) de 0,1% a 5,0% (p/p) de una mezcla de aceites que consiste en triglicéridos de ácido caprílico y cáprico, y la mezcla de linalool y farnesol (Unistab® S-69); (d) de 0,1% a 5,0% (p/p) de al menos un tensioactivo lipofílico con bajo HLB que es monoestearato de sorbitano; (e) de 0,001% a 10% (p/p) de un tensioactivo hidrofílico que es polisorbato 80; y (B) un vehículo farmacéuticamente aceptable, donde la cantidad de los componentes de las nanocápsulas están en un porcentaje de la formulación final y dichas nanocápsulas están dispersas de forma estable en dicho vehículo farmacéuticamente aceptable.

Una composición farmacéutica preferida para el tratamiento de la alopecia de la presente invención comprende de 0,01 a 1,0% (p/p) de finasterida en forma de nanocápsulas poliméricas, dispersas de forma estable en un vehículo farmacéuticamente aceptable.

La composición farmacéutica para el tratamiento de la alopecia opcionalmente contiene aditivos tales como dispersantes, tensioactivos, agentes humectantes, emolientes, espesantes, agentes secuestrantes, conservantes, antioxidantes, fragancias y similares.

Las siguientes son realizaciones específicas de la invención. No obstante, se deberá entender que tales ejemplos se proporcionan solamente con fines ilustrativos.

EJEMPLO 1: Nanocápsulas que no son acordes con la invención que contienen 0,25% de finasterida

Ejemplo 1.1: Preparación de nanocápsulas de finasterida que no son acordes con la invención (NF25)

Se prepararon las suspensiones de nanocápsulas de finasterida a partir de una fase orgánica y una fase acuosa, usando la composición descripta en la Tabla 1.

Tabla 1. Composición de las suspensiones de nanocápsulas de poli( ^g -caprolactona) que contienen 0,25% de finasterida, que no son acordes con la invención [NF25]

Se solubilizó el polímero (poli( ^g -caprolactona)) en la fase orgánica junto con finasterida, triglicéridos de ácidocaprílico y cáprico y tensioactivo con bajo HLB (monoestearato de sorbitano) bajo calor moderado entre 20 °C y 40 °C preferiblemente a 40 °C, empleando acetona como disolvente. Se disolvió el tensioactivo neutro (polisorbato 80) en agua para formar la fase acuosa. Después de la disolución de todos los componentes de la fase orgánica y la fase acuosa, se inyectó la fase orgánica, usando un embudo, sobre la fase acuosa.

Después de la formación de la emulsión primaria de nanocápsulas de la invención, la emulsión se mantuvo bajo agitación moderada durante 10 minutos y luego se concentró hasta un volumen final de 100 ml en un evaporador rotatorio bajo presión reducida en un baño termostático en el matraz de evaporación entre 10 °C y 80 °C, preferiblemente entre 30 °C y 45 °C para eliminar el disolvente y el exceso de agua para ajustar la concentración final de finasterida. Esta formulación se denominó NF25.

Ejemplo 1.2: Preparación de nanoemulsión de finasterida (NEF25) (que no es acorde con la invención)

Con fines comparativos, también se preparó una formulación de nanoemulsión de finasterida con una concentración de 0,25%. El método de preparación fue idéntico al de las nanocápsulas de finasterida (NF25) con la exclusión, sin embargo, del polímero de (poli( ^g -caprolactona)). La Tabla 2 muestra la composición de esta formulación, que se designó NEF25.

Tabla 2. Composición de nanoemulsión que contiene 0,25% de finasterida (NEF25)

Ejemplo 1.3: Caracterización física y química de nanocápsulas de finasterida 0,25% (no acorde con la invención) A. Determinación del pH

La determinación del pH se realizó mediante un potenciómetro, calibrado con soluciones tampón de pH 4,0 y 7,0, directamente en las suspensiones.

B. Determinación del diámetro de partícula y el índice de polidispersión mediante dispersión de luz múltiple Se usó el equipo nano-Zetasizer® modelo ZEN 3600 ZS, Malvern, EE.UU. para determinar el diámetro y la polidispersión de la suspensión de nanopartículas mediante dispersión de luz dinámica. A tal fin, se diluyeron las muestras en agua milliQ® (filtrada a través de un filtro de 0,45 micrones, Millipore Millex-HP) 500 veces a temperatura ambiente y los resultados se determinaron por el promedio de tres repeticiones.

C. Determinación de la distribución del tamaño de partícula mediante difractometría láser

Para evaluar si existe una población micrométrica concomitante en la formulación de nanopartículas, se realizaron análisis mediante difracción láser (Mastersizer 2000, Malvern, R.U.) una técnica capaz de medir partículas en un amplio rango de diámetros (de 0,02 a 2000 micrones). Se realizaron análisis mediante el agregado de una muestra de la formulación accesoria de la dispersión que contenía aproximadamente 100 ml de agua destilada. La cantidad añadida fue suficiente para alcanzar un oscurecimiento entre 0,02 y 0,10. Para evitar interferencias, antes del análisis se midió la señal de fondo.

D. Potencial Zeta

Se determinó el potencial zeta de las suspensiones de nanocápsulas con metodología de electroforesis empleando el equipo nano-Zetasizer® modelo ZEN 3600 ZS (Malvern, EE.UU.). La determinación se realizó comenzando con diluciones de 500 veces en una solución de 10 mM NaCl (filtrada a través de un filtro de 0,45 micrones, Millipore Millex-HP) y los resultados obtenidos fueron los promedios de tres determinaciones.

E. Viscosidad

La viscosidad de las suspensiones se midió usando un viscosímetro vibratorio (SV-10, A & D Company, Japón). Para lograrlo, se midió la viscosidad directamente en las suspensiones durante 30 segundos con recolección de datos cada 5 segundos a una temperatura de 25 ± 1,0 °C.

Resultados:

La tabla a continuación (Tabla 3) presenta los valores de pH, diámetro, índice de polidispersión, potencial zeta y viscosidad obtenidos por la formulación de nanocápsulas de finasterida (NF25) no acorde con la invención. Las formulaciones (en lotes triplicados) fueron macroscópicamente homogéneas, con una apariencia lechosa y, cuando se diluyeron, tuvieron un tinte azul (efecto Tyndall), que sugirió la presencia de al menos una población de nanopartículas.

Tabla 3. pH, diámetro promedio, índice de polidispersión, potencial zeta y viscosidad de las formulaciones de nanocápsulas de finasterida (NF25).

El pH de la suspensión de nanocápsulas que contienen finasterida (NF25) se mantuvo alrededor de 4,5. Además, este rango de pH es adecuado para administración tópica de acuerdo con la bibliografía (SZNITOWSKA et al., 2001).

Las suspensiones tienen un diámetro de aproximadamente 220 nm con una polidispersión de 0,14. Hasta la fecha, uno de los pocos informes en la bibliografía de sistemas de partículas para aplicación tópica folicular que contienen finasterida se refiere a formulaciones de micropartículas de liposomas y lisosomas que presentan un tamaño de partícula de 1,9 y 4,4 pm, respectivamente (TABBAKHIAN et al., 2006). Por lo tanto, las formulaciones que contienen finasterida (NF25) tienen un diámetro reducido (en escala nanométrica) y una distribución de partículas estrecha como lo demuestra el bajo índice de polidispersión (<0,2).

El potencial zeta promedio (para formulaciones en triplicado) fue de aproximadamente -14 mV. Estos valores se derivan recubriendo las partículas con el tensioactivo de polisorbato 80 usado en la fase acuosa de la formulación, lo que evita la coalescencia del sistema a través del impedimento estérico.

Ejemplo 1.4: Microscopia electrónica de transmisión

Para una mejor evaluación de las características morfológicas de las suspensiones de nanocápsulas de finasterida, se realizó un análisis por microscopia electrónica de transmisión.

El análisis se realizó con un microscopio electrónico de transmisión (JEOL, JEM 1200 Exll, Electron Microscopy Center - UFRGS) operando a 80 kV. Las suspensiones diluidas se depositaron sobre la película de carbono de soporte en grillas, negativamente teñidas con solución de acetato de uranilo (2% p/v) y observadas con una magnitud de 250.000 veces (Figura 1).

Ejemplo 1.5: Estudio de estabilidad de nanocápsulas de finasterida no acordes con la invención

Para determinar la estabilidad de las nanocápsulas de finasterida (NF25), se evaluó lo siguiente:

A. Dosis de finasterida en las nanocápsulas

Las suspensiones de nanocápulas se trataron con ultrasonido en acetonitrilo (durante 30 minutos) provocando la disolución de los componentes de la formulación. La dosificación de finasterida se realizó usando cromatografía líquida de alta resolución (HPLC).

Los análisis se realizaron en un cromatógrafo Perkin Elmer Serie 200, usando detector UV visible 210 nm, columna LiChrospher 100 RP-18 (5 pm, 250 x 4 mm), pre-columna del mismo material (5 pm) y fase móvil isocrática de acetonitrilo:agua (75:25), flujo de 1 mL/min y volumen de inyección de 100 pL.

B. Verificación de la presencia de cristales

Cuando la concentración de un fármaco excede su solubilidad en aceite, usado en el núcleo de las nanocápsulas, se puede producir la formación simultánea de nanocristales, que pueden tener el mismo radio hidrodinámico de las nanocápsulas formadas, con lo cual se genera una distribución de tamaño estrecha, que no es distinta con respecto a las nanocápsulas. Además, con el tiempo, estos cristales pueden sufrir un aumento en su tamaño por precipitación.

Por lo tanto, se realizó el control de la estabilidad de la formulación y la identificación de la posible presencia simultánea de nanocristales mediante la cuantificación de finasterida en las suspensiones usando dos técnicas. Cada lote se dividió en dos muestras: una se dejó asentar y la otra se dejó libre hasta el análisis, momento en el cual se sometió a agitación. Para el análisis, se tomó una muestra alícuota (en los días 0 y 30) del sobrenadante de la mezcla en resposo y una alícuota de la muestra libre (luego de agitar con vórtice durante 15 segundos) de modo que fue posible diferenciar la presencia de cristales precipitados, mediante la reducción del contenido del fármaco en la muestra en reposo, y una posible degradación del fármaco, mediante la alícuota de la muestra agitada (medida por HPLC).

Resultados:

Para verificar la estabilidad de la formulación de nanocápsulas, se evaluaron tres lotes en el día 0 y después de 30 días de almacenamiento (40 °C y humedad relativa de 75%) con respecto al diámetro, la polidispersión, el potencial zeta y la determinación de finasterida para caracterizar el comportamiento de estos sistemas. Los resultados se muestran en la Tabla 4.

Tabla 4. Resultados de la estabilidad de la formulación de nanocápsulas de finasterida (NF25) no acorde con la invención en los días 0 y 30 (almacenamiento a 40 °C y humedad relativa de 75%)

Durante los 30 días de almacenamiento no existieron cambios significativos en los valores de diámetro, índice de polidispersión ni potencial Zeta. En cuanto a la dosificación, la concentración del fármaco mostrada en el día 30 fue igual a la concentración usada inicialmente. Es decir, las nanocápsulas tuvieron una concentración de finasterida similar a la usada en la preparación (0,25%) sin cambios en el tamaño y sin la aparición de picos adicionales en el cromatograma de degradación del análisis HPLC. Nótese que, en este experimento, las determinaciones de las concentraciones de finasterida como función del tiempo de almacenamiento, se realizaron en alícuotas de suspensiones posteriormente a la agitación. La Figura 2 muestra los resultados de esta verificación.

En el caso de la muestra que se agitó antes de la dosificación, se puede observar que no existió una disminución en el contenido de finasterida durante los 30 días de almacenamiento, lo que indica que no hubo degradación en estas condiciones de almacenamiento.

Ejemplo 1.6: Estudio in vivo para determinarla capacidad de recuperación capilar

Para los experimentos se usaron ratones hembra híbridos B6CBAF1 del vivario de la University of Vale do Itajaí (UNIVALI). La cepa de ratones B6CBAF1 proviene de la cruza entre la hembra de cepa C57BL y el macho de cepa CBA. El híbrido B6CBAF1 presenta una mutación que provoca que el animal desarrolle una afección patológica de alopecia androgénica cuando este recibe suplementos diarios de testosterona o dihidrotestosterona. La alopecia androgénica se produce espontáneamente, percibiéndose por el adelgazamiento del pelo dorsal. La reducción difusa del pelo se puede lograr rutinariamente al administrar 0,1 mL de una suspensión con una concentración mínima de 1% de testosterona o dihidrotestosterona subcutáneamente (MATIAS et al., 1989. Sundberg et al, 1999). Por lo tanto, los animales de la cepa B6CBAF1 se seleccionaron para el estudio empleando esta dosificación para inducir alopecia.

Los animales estuvieron bajo condiciones estándar de temperatura y humedad relativa a lo largo del experimento, con ciclos de luz y oscuridad de 12 horas cada uno. Todos los animales recibieron una inyección subcutánea de 1% de testosterona dispersa en una mezcla de polisorbato 80 en agua (100 mg/ml) con una dosis de 1 mg/día.

Durante la primera semana, los animales recibieron solo inyecciones subcutáneas de testosterona (1). En el primer día de la segunda semana del experimento, a todos los animales se les eliminó el pelo de sus lomos con crema depilatoria Veet®, para la total eliminación del pelo. Luego de la depilación, se mantuvieron las inyecciones diarias de testosterona, y se agregó una aplicación diaria de la formulación, según el grupo de tratamiento (placebo, tratamiento, control). Los grupos fueron tratados con las siguientes formulaciones: agua (control negativo), suspensión de finasterida en agua y polisorbato 80 (control positivo 1), nanoemulsión de finasterida (NEF25 - control positivo 2) y nanocápsulas de finasterida (NF25).

Para este ensayo, se eligió el uso de dos controles positivos. Uno compuesto por el fármaco en una dispersión gruesa (en agua con polisorbato 800,77%), con aglomerados con un diámetro promedio (D [4,3]) de 3,2 micrones e intervalo de 1,481 y el otro compuesto por la formulación de nanoemulsión (NEF25) con un diámetro de la población nanométrica de 276 nm e intervalo de 1,523 (con la presencia de una pequeña población micrométrica con diámetro promedio de 12,8 pm). La comparación con la formulación de nanoemulsión estuvo destinada a verificar si las nanocápsulas surten efecto debido a su constitución (envolvente polimérica) o si la acción tiene lugar solo por el nanoencapsulamiento (de parte) del fármaco. Para controlar el crecimiento del pelo, se tomaron fotografías en los días 1, 15 y 23.

Resultados:

Como se puede observar en la Figura 3, el tratamiento con nanocápsulas de finasterida (NF25) mostró un crecimiento acelerado del pelo, que cubrió casi por completo el lomo de los animales después de 23 días. Los tratamientos restantes recuperaron solo pequeñas áreas de la piel, y el tratamiento con agua mostró solo el inicio del crecimiento. Los resultados también demostraron la superioridad de la formulación de nanocápsulas de finasterida (NF25), frente a la formulación de nanoemulsión (NEF25).

Ejemplo 1.7: Análisis histopatológico

En el día 24 luego del estudio in vivo para determinar la capacidad de recuperación del pelo, los animales fueron sacrificados mediante dislocación cervical para realizar el examen histopatológico. Se retiró una pequeña porción de piel del lomo de los animales (representando a cada grupo) y se sometió a análisis histológico a fin de visualizar la etapa de crecimiento del pelo de cada grupo.

A tal fin, se prepararon portaobjetos y se tiñeron con hematoxilina y eosina. Luego, se procedió con el análisis (microscopio de iluminación - Zeiss Primo Star acoplado con cámara Power Shot Canon, PC1250) para determinar en qué fase de crecimiento se encontraba el pelo.

Para cuantificar la información obtenida mediante histología, se procedió al recuento de folículos maduros (con pigmentación e insertos en el tejido adiposo) de cada uno de los portaobjetos histológicos de cada grupo. A tal fin, se analizaron 4 portaobjetos por grupo, y el recuento se basó en 3 focos diferentes del mismo portaobjetos, totalizando 12 campos analizados por grupo. Para la comparación entre grupos, se procedió mediante el análisis estadístico por ANOVA ( ^a = 0,05). La Figura 4 muestra los resultados del examen histopatológico de los grupos.

El análisis histológico confirma la eficacia del tratamiento con nanocápsulas de finasterida (NF25). En la Figura 4, en A (tratamiento con NF25), se puede observar la presencia de abundantes folículos terminales (maduros/desarrollados) debido a la fuerte presencia de melanina (representada por el centro oscuro del folículo) como así también su base desarrollada por el tejido adiposo (inserción profunda en la piel), que representa un folículo terminal en desarrollo. Esta interpretación encuentra respaldo en la bibliografía científica (Meidan et al, 2005; VOGT et al., 2006; OTBERG et al., 2007).

A su vez, para NEF25 y C2+, se observa la presencia disminuida de folículos con pigmentación escasa (o nula), ubicados en mayor cantidad cerca de la dermis, lo que caracteriza una involución de folículos terminales en folículos vellosos (sin pigmentación y desarrollados en las capas superiores de la dermis). Esta interpretación encuentra respaldo en la bibliografía científica (Sinclair et al. 2003; Meidan et al, 2005; Vo Gt et al., 2006; OTBERG et al., 2007).

Además, sobre la base de la observación de portaobjetos, se analizó el recuento de folículos maduros por campo. La Figura 5 muestra los resultados basados en el número promedio de folículos por campo (n = 12 campos) por grupo evaluado.

Como se puede observar en la Figura 5, no existieron diferencias significativas entre los grupos agua, libre, y nanoemulsión de finasterida (NEF25) que mostraron 11 ± 15, 4 ± 8 y 18 ± 13 células por campo, respectivamente. A su vez, la formulación de nanocápsulas de finasterida (NF25) mostró 82 ± 14 células por campo y fue significativamente más elevada (ANOVA, a 0,05) que las otras. Estos resultados demuestran que la formulación tópica de nanocápsulas de finasterida (NF25) acelera el crecimiento del pelo y el desarrollo de los folículos con propensión a alopecia androgenética, mientras que la formulación de nanoemulsión de finasterida (NEF25) no mostró resultados satisfactorios.

Ejemplo 2: Nanocápsulas de la invención que contienen 0,05% de finasterida

Ejemplo 2.1: Preparación de nanocápsulas de finasterida de acuerdo con f de la invención (NPXF05)

Se prepararon las suspensiones de nanocápsulas de finasterida a partir de una fase orgánica y una fase acuosa, usando la composición descripta en la Tabla 5.

Tabla 5. Composición de suspensiones de nanocápsulas de poli( ^g -caprolactona) que contienen 0,05% de finasterida, preparadas de acuerdo con la invención (NPXF05)

Se solubilizó el polímero (poli ( ^g -caprolactona)) en la fase orgánica junto con la finasterida, los triglicéridos de cadena media Unistab® S-69 y el tensioactivo con bajo HLB (monoestearato de sorbitano) con agitación moderada entre 20 °C y 40 °C, preferiblemente a 40 °C, empleando acetona como disolvente. El tensioactivo neutro (polisorbato 80) se disolvió en agua para formar la fase acuosa. Después de disolver todos los componentes de la fase orgánica y la fase acuosa, la fase orgánica se inyectó sobre la fase acuosa, usando un embudo.

Después de la formación de la emulsión primaria de nanocápsulas de la invención, la emulsión se mantuvo bajo agitación moderada durante 10 minutos y luego se concentró hasta un volumen final de 100 ml en un evaporador rotatorio bajo presión reducida en un baño termostático en el matraz de evaporación entre 10 °C y 80 °C, preferiblemente entre 30 °C y 45 °C para eliminar el disolvente y el exceso de agua para ajustar la concentración final de finasterida. Esta formulación se denominó NPXF05.

Ejemplo 2.2: Caracterización físico-química de nanocápsulas de finasterida 0,05% de acuerdo con la invención (NPXF05)

A. Determinación del pH

Para evaluar si existe una población micrométrica concomitante en la formulación de nanopartículas, se realizaron análisis mediante difracción láser (Mastersizer 2000, Malvern, R.U.) que es una técnica capaz de medir partículas en un amplio rango de diámetros (de 0,02 a 2000 micrones). Se realizaron análisis mediante el agregado de una muestra de la formulación accesoria de la dispersión que contenía aproximadamente 100 ml de agua destilada. La cantidad añadida fue suficiente para alcanzar un oscurecimiento entre 0,02 y 0,10. Para evitar interferencias, antes del análisis se midió la señal de fondo.

D. Potencial Zeta

E. Viscosidad

La viscosidad de las suspensiones se midió usando un viscosímetro vibratorio (SV-10, A & D Company, Japón). Para esto, se midió la viscosidad directamente en las suspensiones durante 30 segundos con recolección de datos cada 5 segundos a una temperatura de 25 ± 1,0 °C.

Resultados:

Se comprobó que la formulación de nanocápsulas preparada de acuerdo con la invención era macroscópicamente homogénea, con el olor característico de Unistab® S-69. La tabla a continuación (Tabla 6) muestra los valores de pH, diámetro, índice de polidispersión, potencial zeta y viscosidad de la formulación de nanocápsulas de finasterida (NPXF05) de la invención. Con fines comparativos, los resultados de la formulación NPXF05 se muestran junto a los de la formulación NF25.

Tabla 6. Comparación de los resultados de la caracterización físico-química de formulaciones acordes a la invención y no acordes a la invención.

Del análisis físico-químico se puede apreciar que, aunque modificadas, las formulaciones mostraron características similares. No obstante, el análisis de diámetro por difracción láser mostró que las formulaciones preparadas con una mezcla de Unistab® S-69 y triglicéridos de ácido caprílico y cáprico (NPXF05), que contenían 0,05% de finasterida, mostraron poblaciones de tamaño nanométrico (Figura 6). Ejemplo 2.3: Un estudio de estabilidad de nanocápsulas de finasterida de la invención. Para determinar la estabilidad de las nanocápsulas de finasterida (NPXF05), se evaluó lo siguiente:

A. Dosis de finasterida en las nanocápsulas

Las suspensiones de nanocápsulas se trataron con acetonitrilo en ultrasonido (durante 30 minutos) provocando la disolución de los componentes de la formulación. La dosificación de finasterida se realizó mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC).

Los análisis se realizaron en un cromatógrafo Perkin Elmer Serie 200, usando detector UV visible 210 nm, LiChrospher 100 RP-18 (5 pm, 250 x 4 mm), una pre-columna del mismo material (5 micrones) y fase móvil isocrática de acetonitrilo:agua (75:25), flujo de 1 ml/min y volumen de inyección de 100 pL.

B. Verificación de la presencia de cristales

Para verificar la presencia de fármaco disperso en la fase externa, se realizó la cuantificación de finasterida mediante HPLC a partir de una formulación de preparación reciente. La formulación se dividió en dos muestras, la primera se dejó asentar, y la segunda se agitó antes de llevar a cabo el ensayo 30 días después de su preparación. De la muestra mantenida en reposo, solo se recolectó una alícuota de sobrenadante (evitando cualquier movimiento). De la otra muestra, se recolectó una alícuota (correspondiente a 20% de sobrenadante) después de agitar con vórtice durante 15 segundos.

Resultados:

Además, se realizó la evaluación de la sedimentación de cristales (mediante ensayo HPLC del sobrenadante) de formulaciones triplicadas NPXF05 mantenidas en reposo durante un período de 30 días. Los resultados se compararon con los de la formulación NF25 y se muestran en la Figura 7.

Como se señaló, la adición de Unistab® S-69 a los triglicéridos de ácido caprílico y cáprico permitieron un mayor encapsulamiento de finasterida sin perder las características nanotecnológicas del sistema. Como se señaló, no existió un deterioro significativo en la concentración del ingrediente activo en la formulación NPXF05, que fue solo 4,1 ± 0,4% en comparación con el original.

Ejemplo 2.4: Ensayo in vivo para determinar la capacidad de recuperación capilar

Para los experimentos se usaron ratones hembra híbridos B6CBAF1 del vivario de la University of Vale do Itajaí (UNIVALI). Los animales se encontraban en condiciones convencionales de temperatura y humedad relativa durante el experimento, con ciclos de luz y oscuridad de 12 horas cada uno. Todos los animales recibieron una inyección subcutánea de 1% de testosterona dispersa en una mezcla de polisorbato 80 en agua (100 mg.mL-1), con una dosis de 1 mg/día. Se realizaron cinco inyecciones por semana durante 4 semanas.

Una vez más, se llevó a cabo el ensayo de crecimiento acelerado del pelo, y esta vez se ensayó la formulación de nanocápsulas de finasterida (NPXF05). Durante la primera semana, los animales recibieron solo inyecciones de testosterona. En el primer día de la segunda semana del experimento, a todos los animales se les eliminó el pelo de sus lomos con crema depilatoria Veet®, para la total eliminación del pelo. Después de eliminar el pelo, se mantuvieron las inyecciones diarias de testosterona, y se añadió al tratamiento una aplicación tópica diaria de la formulación, según el grupo de tratamiento (placebo, tratamiento, control). Los grupos de ensayo fueron las formulaciones de nanocápsulas con finasterida al 0,05% (NPXF05) preparadas de acuerdo con la invención, que se compararon con los resultados de la formulación de nanocápsulas de finasterida que contenían 0,25% (NF25) no acorde con la invención. Para controlar el crecimiento del pelo, se tomaron fotografías en los días 0, 15 y 23.

Resultados: Como se puede observar en la Figura 8, la formulación de nanocápsulas con finasterida al 0,05% (NPXF05) preparada con una combinación de Unistab® S-69 y triglicéridos de ácido caprílico y cáprico mostró un crecimiento mayor que las formulaciones de nanocápsulas de finasterida al 0,25% (NF25). Al analizar las fotografías del día 15, se observa que los animales tratados con la formulación de nanocápsulas de finasterida al 0,05% (NPXF05) experimentan un crecimiento mayor.

Ejemplo 2.5: Análisis histopatológico

En el día 24, después del ensayo in vivo para determinar la capacidad de recuperación del pelo, los animales fueron sacrificados mediante dislocación cervical, para realizar el examen histopatológico. Se retiró una pequeña porción de piel del lomo de los animales (representando a cada grupo) y se sometió a análisis histológico a fin de visualizar la etapa de crecimiento del pelo de cada grupo.

A tal fin, se prepararon portaobjetos y se tiñeron con hematoxilina y eosina. Luego, se realizó el análisis (microscopio de iluminación Zeiss Primo Star acoplado con una cámara Power Shot Canon, PC1250) para determinar en qué fase de crecimiento se encontraba el pelo.

Para cuantificar la información obtenida mediante histología, se realizó el recuento de folículos maduros (con pigmentación e insertos en el tejido adiposo) de cada uno de los portaobjetos histológicos de cada grupo. Por lo tanto, se analizaron 4 portaobjetos por grupo, y el recuento se basó en 3 focos diferentes del mismo portaobjetos, totalizando 12 campos analizados por grupo. Para la comparación entre grupos, se realizó el análisis estadístico por ANOVA (a = 0,05).

La Figura 9 muestra los resultados del examen histopatológico de los grupos. Como se puede observar en la Figura 9, la formulación de nanocápsulas preparada con la combinación de Unistab® S-69 y triglicéridos de ácido caprílico y cáprico (NPXF05) tuvo un crecimiento mayor que las formulaciones de finasterida (NF25). Al analizar las fotografías del día 15, se observó que los animales tratados con la formulación NPXF05 mostraron un crecimiento mayor que los otros.

La Figura 10 muestra el número promedio de folículos maduros por campo histológico analizado. Estos análisis revelaron que la formulación NPXF05 mostró un crecimiento acelerado y por lo visto crecimiento mayor que la formulación NF25, a pesar de tener un número menor de folículos maduros por campo histológico analizado.

EJEMPLO 3: Composiciones farmacéuticas que comprenden nanocápsulas de finasterida.

Ejemplo 3.A - Formulación en forma de una solución tópica

Las nanocápsulas de finasterida se prepararon según se describe en los ejemplos 1.1 y 2.1. Se prepararon las soluciones tópicas que resultaron en las formulaciones de la Tabla 7.

Tabla 7: Formulaciones en forma de una solución tópica que contiene la suspensión de nanocápsulas que contienen 0,25% de finasterida (NF25 - Z no acorde con la invención), y que contiene 0,05% de finasterida (NPXF05 - acorde con la invención)

Ejemplo 3.B - Formulaciones tópicas en gel

Las nanocápsulas de finasterida se prepararon según se describe en los ejemplos 1.1 y 2.1.

Las suspensiones de nanocápsulas preparadas como se describió en el Ejemplo 3.A, se espesaron con Carbopol® 940 0,2%. Se agregó cantidad suficiente de trietanolamina para obtener una viscosidad adecuada para aplicación tópica. El gel obtenido tiene la formulación que se muestra en la Tabla 8.

Tabla 8: Formulaciones en forma de un gel tópico que contienen suspensiones de nanocápsulas con 0,25% de finasterida (NF25 - no acorde con la invención), y 0,05% de finasterida (NPXF05 - acorde con la invención)

EJEMPLO 3.C: Formulación en forma de una loción tópica

Inicialmente, la fase 1 se preparó como se describe en el Ejemplo 3.A, usando la composición de la fase 1 de la Tabla 9. Separadamente, los componentes de la fase 2 se fundieron en un baño de agua a 50 °C y se retiraron del calentamiento después de la fusión. Se añadió la fase 3 a la fase 1 y se dispersó bajo agitación magnética constante. La mezcla de las fases 1 y 3 se añadió a la fase 2 fundida y se enfrío a 40 °C bajo agitación mecánica moderada para evitar la incorporación de aire.

Tabla 9: Formulación en forma de loción tópica que contiene suspensiones de nanocápsulas con 0,25% de finasterida y 0,1% de finasterida.

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Todas las publicaciones y solicitudes de patente mencionadas en esta memoria descriptiva son indicativas del nivel de los expertos en la técnica con la cual está relacionada la invención.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Nanopartícula en forma de una nanocápsula que comprende el ingrediente activo finasterida, donde dicha nanopartícula se forma preparando una fase orgánica y una fase acuosa, donde:

(i) la fase orgánica comprende:

(a) un polímero hidrófobo que es una poli(g-caprolactona) con un punto de fusióin menor que 120°C;

(b) una mezcla de aceites que consiste en triglicéridos de ácido caprílico y cáprico, y la mezcla de linalool y farnesol; (c) un tensioactivo lipófilo con HLB que es monoestearato de sorbitano;

(d) un disolvente orgánico que es acetona; y (e) finasterida; y

(ii) la fase acuosa comprende:

(f) un tensioactivo hidrófilo que es polisorbato 80; y

(g) agua.

2. La nanopartícula polimérica de acuerdo con la reivindicación 1, donde

(i) dicha fase orgánica comprende:

(a) de 0,05% a 20,0% (p/p) de dicha poli(g-caprolactona) con un punto de fusión menor que 120°C;

(b) de 0,05% a 20,0% (p/p) de dicha mezcla de aceites que consiste en triglicéridos de ácido caprílico y cáprico, y la mezcla de linalool y farnesol;

(c) de 0,05% a 20,0% (p/p) de dicho tensioactivo lipofílico con bajo HLB que es monoestearato de sorbitano;

(d) de 10% a 80% (p/p) de dicha acetona; y

(e) de 0,005% a 50,0% (p/p) de dicha finasterida; y

(ii) dicha fase acuosa comprende:

(f) 0,05% a 20,0% (p/p) de dicho polisorbato 80; y

(g) de 10% a 90% (p/p) de agua.

3. Una composición farmacéutica para el tratamiento tópico de la alopecia que comprende:

(A) 0,01 a 1,0% (p/p) de finasterida en forma de las nanopartículas poliméricas de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2; y

(B) un vehículo farmacéuticamente aceptable;

donde la cantidad de los componentes de las nanopartículas poliméricas está en un porcentaje de la formulación final y dichas nanopartículas están dispersas de forma estable en el vehículo farmacéuticamente aceptable.

4. Un proceso para preparar nanopartículas poliméricas de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, donde dicho proceso comprende los pasos de:

(i) preparar una fase orgánica mediante la disolución de una poli(g--caprolactona) con un punto de fusión menor que 120°C y finasterida, una mezcla de aceites que consiste en triglicéridos de ácido caprílico y cáprico, linalool y farnesol, y un tensioactivo con HLB bajo que es monoestearato de sorbitano, en acetona;

(ii) preparar una fase acuosa mediante la mezcla de polisorbato 80, en agua;

(iii) inyectar la fase orgánica en la fase acuosa para permitir la formación de la emulsión primaria de nanopartículas en la interfaz de las dos fases, manteniéndose la mezcla bajo agitación durante un tiempo suficiente para el encapsulamiento adecuado de la finasterida;

(iv) retirar el disolvente orgánico para permitir recuperar la fase acuosa contenida en las nanocápsulas.

5. La nanopartícula polimérica en forma de nanocápsulas de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2 para usar en el tratamiento de la alopecia.