ES2660428T3 - Conjugados de análogos de CC-1065 y conectores bifuncionales - Google Patents

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Rudy Gerardus Elisabeth Coumans
Ronald Christiaan Elgersma
Wiro Michael Petrus Bernardus Menge
Johannes Albertus Frederikus Joosten
Henri Johannes Spijker
Franciscus Marinus Hendrikus GROOT de
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Abstract

Un compuesto, que es**Fórmula** o un isómero, o una mezcla de isómeros, en donde R5a se selecciona de entre H, metilo y metoxi, AZ es**Fórmula** V1 se selecciona de entre valilcitrulina, valillisina, fenilalanillisina, alanilfenilalanillisina y D-alanilfenilalanillisina, CL es**Fórmula** L se selecciona de entre**Fórmula** y**Fórmula** q varía de 1 a 4, y Ab es un anticuerpo o un fragmento o un derivado del mismo.

Description

imagen1
Conjugados de análogos de CC-1065 y conectores bifuncionales
5 Campo de la invención
La presente invención se refiere a nuevos conjugados del agente de alquilación de ADN CC-1065. Los conjugados se diseñan para liberar su carga (múltiple) después de una o más etapas de activación y / o a una tasa y periodo de tiempo controlados por el conjugado para suministrar de forma selectiva y / o liberar de forma controlable uno o más
10 de dichos agentes de alquilación de ADN. Los conjugados se pueden usar para tratar una enfermedad que se caracteriza por una proliferación (celular) no deseada. Como un ejemplo, los conjugados de la presente invención se pueden usar para tratar un tumor.
Antecedentes de la invención
15 Las duocarmicinas, aisladas en primer lugar a partir de un caldo de cultivo de la especie Streptomyces, son miembros de una familia de antibióticos antitumorales que también incluye a CC-1065. Estos agentes extremadamente potentes supuestamente obtienen su actividad biológica a partir de una capacidad para alquilar ADN selectivo de secuencia en el N3 de la adenina del surco menor, que inicia una cascada de sucesos que termina
20 en un mecanismo de muerte celular apoptótica.i A pesar de que CC-1065 ha mostrado una citotoxicidad y potente, este no se podría usar en el entorno clínico debido a una grave hepatotoxicidad retardada. ii Esta observación conduce al desarrollo de análogos sintéticos de CC-1065 (para derivados de CC-1065 véanse por ejemplo Aristoff et al., J. Org. Chem. 1992, 57, 6234; Boger et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 1996, 6, 2207; Boger et al., Chem. Rev. 1997, 97, 787; Milbank et al., J. Med. Chem. 1999,
25 42, 649; Atwell et al., J. Med. Chem. 1999, 42, 3400; Wang et al., J. Med. Chem. 2000, 43, 1541; Boger et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2001, 11, 2021; Parrish et al., Bioorg. Med. Chem. 2003, 11, 3815; Daniell et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2005, 15, 177; Tichenor et al., J. Am. Chem. Soc. 2006, 128, 15683; Purnell et al., Bioorg. Med. Chem. 2006, 16, 5677; Bando y Sugiyama, Acc. Chem. Res. 2006, 39, 935; Tichenor et al., Nat. Prod. Rep. 2008, 25, 220; MacMillan et al., J. Am. Chem. Soc. 2009, 131, 1187; Tietze et al., Anti-Cancer Agents Med. Chem. 2009, 9,
30 304; Gauss et al., Tetrahedron 2009, 65, 6591; Robertson et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2010, 20, 2722; Boyle et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2010, 20, 1854; Chavda et al., Bioorg. Med. Chem. 2010, 18, 5016; EP 0154445; WO 88/04659; WO 90/02746; WO 97/12862; WO 97/32850; WO 97/45411; WO 98/52925; WO 99/19298; WO 01/83482; WO 02/067937; WO 02/067930; WO 02/068412; WO 02/096910; WO 03/022806; WO 2004/101767; WO 2006/043839; WO 2007/051081; y WO 2010/062171), que por lo general muestran que tienen una citotoxicidad
35 similar, pero una hepatotoxicidad reducida. Amishiro et al., Bioorg. Med. Chem. 2000, 8, 1637 desvela una serie de derivados de pirrol de anillo A de duocarmicina, que presentaban una toxicidad en sangre periférica más débil que los derivados que tienen el Seg-B del tipo natural, mientras que la mayoría de estos derivados presentaban una potente actividad antitumoral frente a modelos de tumor murino in vivo. Aún así, no obstante, estos derivados carecen de la suficiente selectividad para las células tumorales, ya que la
40 selectividad que estos agentes -y agentes citotóxicos en general -se basa en una cierta parte en la diferencia en la tasa de proliferación de células tumorales y células normales, y por lo tanto también afectan a las células sanas que muestran una tasa de proliferación relativamente elevada. Por lo general, esto conduce a graves efectos secundarios. Las concentraciones del fármaco que podrían erradicar completamente el tumor no se pueden alcanzar debido a los efectos secundarios de dosis limitante tales como toxicidad en el tracto gastrointestinal y médula ósea.
45 Además, algunos tumores pueden desarrollar resistencia frente a agentes anticáncer después de un tratamiento prolongado. En el desarrollo de fármacos moderno, la dirección de fármacos citotóxicos al sitio del tumor se puede considerar por lo tanto uno de los objetivos principales.
Un enfoque prometedor para obtener un aumento de la selectividad para células tumorales o tejido tumoral es
50 aprovecharse de la existencia de antígenos, receptores y otros restos asociados a tumor, que pueden servir como una diana. Una diana de este tipo se puede regular de forma positiva o puede estar presente hasta cierto grado de forma específica en el tejido tumoral o en un tejido muy asociado, tal como tejido neovascular, con respecto a otros tejidos para conseguir una dirección eficaz. Muchas dianas se han identificado y validado y se han desarrollado varios métodos para identificar y validar dianas. iii Mediante el acoplamiento de un ligando, por ejemplo un anticuerpo
55 o fragmento de anticuerpo, para tal antígeno, receptor, u otro resto de nivel funcional asociado a tumor con respecto a un agente terapéutico, este agente se puede dirigir de forma selectiva al tejido tumoral.
Otro enfoque prometedor para obtener selectividad para células tumorales o tejido tumoral es aprovecharse de la existencia de enzimas asociadas a tumor. Una enzima que se localiza principalmente en el sitio del tumor puede
60 convertir un profármaco farmacológicamente inactivo, que consiste en un sustrato enzimático unido de forma directa
o indirecta al fármaco tóxico, en el fármaco correspondiente en la cercanía o dentro del tumor. A través de este concepto, una concentración elevada de agente anticáncer tóxico se puede generar de forma selectiva en el sitio del tumor. Todas las células tumorales se pueden eliminar si la dosis es lo suficientemente elevada, lo que puede disminuir el desarrollo de células tumorales resistentes a fármacos.
65 Las enzimas también se pueden transportar a las cercanías o dentro de las células diana o tejido diana a través de, por ejemplo, terapia enzimática con profármacos dirigidos por anticuerpos (ADEPT) iv , terapia enzimática con profármacos dirigidos por polímeros (PDEPT) o terapia enzimática con profármacos dirigidos por macromoléculas (MDEPT) v, terapia enzimática con profármacos dirigidos por virus (VDEPT) vi, o terapia enzimática con profármacos
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5 dirigidos por genes (GDEPT) vii. Con ADEPT, por ejemplo, un profármaco no tóxico se convierte de forma selectiva en un compuesto citotóxico en la superficie de las células diana mediante un conjugado de anticuerpo -enzima que se ha dirigido previamente a la superficie de esas células.
Otro enfoque prometedor más para obtener selectividad para células tumorales o tejido tumoral es aprovecharse del
10 aumento del efecto de permeabilidad y retención (EPR). A pesar de que este efecto de EPR, las macromoléculas se acumulan de forma pasiva en tumores sólidos como consecuencia de la patología desorganizada de la vasculatura tumoral angiogénica con su endotelio discontinuo, lo que conduce a hiperpermeabilidad con respecto a macromoléculas grandes, y la falta de drenaje linfático tumoral eficaz. viii Mediante acoplamiento de un agente terapéutico de forma directa o indirecta a una macromolécula, dicho agente se puede dirigir de forma selectiva al
15 tejido tumoral.
Además de la dirección eficaz, otros criterios importantes para la aplicación satisfactoria de conjugados dirigidos de agentes citotóxicos en terapia tumoral son que el uno o más agentes se liberan de forma eficaz desde el conjugado al sitio del tumor y que el conjugado no excito tóxico o solamente muy poco citotóxico, mientras que el agente 20 citotóxico por sí mismo presenta una citotoxicidad altamente potente. De forma ideal, esto conduce a la generación de moléculas citotóxicas solamente en el sitio del tumor, lo que da como resultado un índice terapéutico y aumentado con respecto al agente citotóxicos y dirigir. Otro criterio importante para un conjugado dirigido satisfactorio es que el conjugado debe tener propiedades farmacológicas adecuadas, tales como estabilidad suficiente en la circulación, baja tendencia a la agregación, y buena solubilidad en agua. Una solubilidad en agua e
25 hidrofobia apropiadas del fármaco y / o el conector puede contribuir a una mejora de las propiedades farmacológicas.
Se han descrito varios conjugados de CC-1065 y derivados (para conjugados de derivados de CC-1065 véase por ejemplo Suzawa et al., Bioorg. Med. Chem. 2000, 8, 2175; Jeffrey et al., J. Med. Chem. 2005, 48, 1344; Wang et al., 30 Bioorg. Med. Chem. 2006, 14, 7854; Tietze et al., Chem. Eur. J. 2007, 13, 4396; Tietze et al., Chem. Eur. J. 2008, 14, 2811; Tietze et al., Chem Med Chem 2008, 3, 1946; Li et al., Tetrahedron Lett. 2009, 50, 2932; Tietze et al., Angew. Chem. Int. Ed. 2010, 49, 7336; Schuster et al., Org. Biomol. Chem. 2010, 8, 1833; los documentos WO 91/16324; WO 94/04535; WO 95/31971; US 5.475.092; US 5.585,499; US 5.646.298; WO 97/07097; WO 97/44000; US 5.739,350; WO 98/11101; WO 98/25898; US 5.843.937; US 5.846,545; WO 02/059122; WO 02/30894; WO
35 03/086318; WO 2005/103040; WO 2005/112919; WO 2006/002895; WO 2006/110476; WO 2007/038658; WO 2007/059404; WO 2008/083312; WO 2008/103693; WO 2009/026274; WO 2009/064908; WO 2009/073533; WO 2009/073524; WO 2009/073546; WO 2009/134977; US 2009/0162372 y WO 2010/062171). En estos conjugados, una o más de las propiedades favorables discutidas en lo que antecede pueden no ser óptimas.
40 Por consiguiente, sigue existiendo una clara necesidad de conjugados de derivados de CC-1065 que presenten una amplia ventana terapéutica, que contengan derivados de CC-1065 que tengan una citotoxicidad potente y propiedades farmacológicas favorables, y que liberen los derivados de CC-1065 de forma eficaz.
Sumario de la invención
45 La presente invención satisface la necesidad que se ha mencionado anteriormente de un compuesto de fórmula (III-AZ):
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o un isómero, o una mezcla de isómeros, en el que R5a se selecciona de entre H, metilo y metoxi,
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o 5
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10 V1 se selecciona de entre valilcitrulina, valillisina, fenilalanillisina, alanilfenilalanillisina y D-alanilfenilalanillisina, CL es
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L se selecciona de entre
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y
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q varía de1 a4, y Ab es un anticuerpo o un fragmento o derivado del mismo. En una realización más específica, la presente invención se refiere a un compuesto
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en el que R es (CH2CH2O)2H, (CH2)3C(O)NH2, (CH2)4C(NH2)COOH, (CH2)3COOH, (CH2)3NHC(O)NH2, o 10 (CH2CH2O)3H; q varía de 1 a 4; y Ab es trastuzumab.
Breve descripción de los dibujos
Figura 1. Reordenación de un compuesto seco con respecto a un compuesto que contiene ciclopropilo.
15 Figura 2. Ilustración gráfica de tasas de ciclado para una serie de compuestos de espaciador -duocarmicina de ciclado a 25 ºC y pH 7,4 (línea superior) y a 37 ºC y pH 5 (línea inferior). Figura 3. Estabilidad de plasma humano para una serie de conjugados de conector -agente conjugados con HSA. Figura 4. Estudio de la eficacia de dosis individual con conjugados de anticuerpo -fármaco (ADC) basados en
20 Trastuzumab en ratones nu / un hembra portadores de un xenoinjerto de N87. Figura 5. Escisión de conjugados de conector -agente inactivados por N-acetilcisteína mediante catepsina B.
Descripción de la invención
25 La siguiente descripción detallada se proporciona para que la invención se pueda entender más completamente.
Definiciones
A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento 30 tienen el mismo significado que normalmente entiende alguien con experiencia habitual en la materia.
El término “anticuerpo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a una molécula de inmunoglobulina de longitud completa, una parte inmunológicamente activa de una molécula de inmunoglobulina de longitud completa, o un derivado de una molécula de inmunoglobulina de longitud completa o una parte activa de la misma, es decir, una 35 molécula que contiene un sitio de unión a antígeno que se une de forma inmunoespecífica a un antígeno de una diana de interés o parte de la misma, incluyendo tales dianas, pero no limitadas a, células tumorales. Por lo tanto, un fragmento o derivado de una molécula de inmunoglobulina de longitud completa se une de forma inmunoespecífica al mismo antígeno que dicha molécula de inmunoglobulina de longitud completa. La inmunoglobulina puede ser de cualquier tipo (por ejemplo, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA o IgY), clase (por ejemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 o IgA2), 40 o subclase. La inmunoglobulina, o un derivado o una parte activa de la misma, se puede obtener a partir de cualquier especie, por ejemplo, ser humano, roedor (por ejemplo, ratón, rata, o hámster), burro, oveja, conejo, cabra, cobaya, camélido, caballo, vaca o pollo, pero preferentemente, es de origen humano, murino, o de conejo, o se obtiene a partir de más de una especie. Los anticuerpos útiles en la invención incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos monoclonales, policlonales, biespecíficos, multiespecíficos, humanos, humanizados, quiméricos, y
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modificados por ingeniería, anticuerpos de una sola cadena, fragmentos de Fv, fragmentos de Fd, fragmentos de Fab, fragmentos de F(ab’), fragmentos de F(ab’)2, fragmentos de dAb, fragmentos producidos por una biblioteca de expresión de Fab, anticuerpos anti-idiotípicos, CDR aisladas, y fragmentos de unión a epítopo de cualquiera de los mencionados en lo que antecede que se unen de forma inmunoespecífica a un antígeno de interés.
5 La expresión “grupo saliente” se refiere a un grupo que se puede sustituir por otro grupo en una reacción. Tales grupos salientes se conocen bien en la técnica, y algunos ejemplos incluyen, pero no se limitan a, un haluro (fluoruro, cloruro, bromuro, e yoduro), azida, un sulfonato (por ejemplo, un alcanosulfonato C1-6 opcionalmente sustituido, tal como metanosulfonato, trifluorometanosulfonato y trifluoroetanosulfonato, o un bencenosulfonato opcionalmente sustituidos, tal como p-toluenosulfonato y nosilato), imidazol, una imida tiona cíclica, N-óxido de succinimida, N-óxido de ftalimida, p-nitrofenóxido, o-nitrofenóxido, pentafluorofenóxido, tetrafluorofenóxido, 1,3,5triclorofenóxido, 1,3,5-trifluorofenóxido, un carboxilato, un aminocarboxilato (carbamato) y un alcoxicarboxilato (carbonato). Para sustituciones en carbono saturado, los grupos salientes preferentes son haluros y sulfonatos. Para sustituciones en un carbono del carbonilo, como un grupo saliente se puede usar por ejemplo una haluro, N-óxido de
15 succinimida, p-nitrofenóxido, pentafluorofenóxido, tetrafluorofenóxido, un carboxilato, o un alcoxicarboxilato (carbonato). La expresión “grupo saliente” también se refiere a un grupo que se elimina como consecuencia de una reacción de eliminación, por ejemplo, una reacción de cascada electrónica o una reacción de espirociclado. En este caso, como un grupo saliente se puede usar por ejemplo un haluro, un sulfonato, azida, un aminocarboxilato (carbamato) o un alcoxicarboxilato (carbonato). Por lo tanto, un agente o un derivado del mismo liberado de un conjugado a través de una autoeliminación (múltiple) se definen como un grupo saliente de acuerdo con la presente definición.
La expresión “éster activo” se refiere a un grupo funcional en el que el grupo alcoxi del resto éster es un buen grupo saliente. Los ejemplos de tales grupos alcoxi incluyen, pero no se limitan a, N-óxido de succinimida, p-nitrofenóxido,
25 pentafluorofenóxido, tetrafluorofenóxido, 1-hidroxibenzotriazol y 1-hidroxi-7-azabenzotriazol, y grupos con una capacidad de salida comparable. Los grupos alcoxi basados en alquilo sin sustituir tales como metoxi, etoxi, isopropoxi y t-butoxi no cumplen los requisitos de buenos grupos salientes y por lo tanto, no se considera que los ésteres de metilo, etilo, isopropilo, y t-butilo sean ésteres activos.
La expresión “resto reactivo” en el presente documento se refiere a un grupo funcional que puede reaccionar con un segundo grupo funcional en condiciones relativamente suaves y sin la necesidad de funcionalización previa del resto reactivo. La reacción entre el resto reactivo y dicho segundo grupo funciona solamente necesitará la aplicación de una cierta cantidad de calor, presión, un catalizador, ácido, y / o base. Los ejemplos de restos reactivos incluyen, pero no se limitan a, haluro de carbamoílo, haluro de acilo, éster activo, anhídrido, α-haloacetilo, α-haloacetamida,
35 maleimida, isocianato, isotiocianato, disulfuro, tiol, hidrazina, hidrazida, cloruro de sulfonilo, aldehído, metil cetona, vinil sulfona, halometilo y sulfonato de metilo.
El término “prorresto” se refiere a un resto que se acopla a un compuesto de fórmula (I) para modificar sus propiedades y que se va a retirar (parcialmente) in vivo de dicho compuesto de fórmula (I).
La expresión “grupo soluble en agua” se refiere a un grupo funcional que está bien solvatado en entornos acuosos y que transmite un aumento de la solubilidad en agua al compuesto al que se une.
Los ejemplos de grupos solubles en agua incluyen, pero no se limitan a, polialcoholes, sacáridos de cadena lineal o
45 cíclicos, aminas primarias, secundarias, terciarias o cuaternarias y poliaminas, grupos sulfato, grupos sulfonato, grupos sulfinato, grupos carboxilato, grupos fosfato, grupos fosfonato, grupos fosfinato, grupos ascorbato, glicoles, incluyendo polietilenglicoles y poliéteres. Los grupos solubles en agua preferentes son aminas primarias, secundarias terciarias y cuaternarias, carboxilatos, fosfonatos, fosfatos, sulfonatos, sulfatos, (CH2CH2O)yyCH2CH2X17Ryy, -(CH2CH2O)yyCH2CH2X17-, -X17(CH2CH2O)yyCH2CH2-, glicol, oligoetilenglicol y polietilenglicol, en los que yy se selecciona de 1 a 1000, X17 se selecciona de entre O, S y NRzz, y Rzz y Ryy se seleccionan independientemente de entre H y alquilo C1-3.
El término “sustituido”, cuando se usa como un adjetivo para “alquilo”, “heteroalquilo”, “cicloalquilo”, “heterocicloalquilo”, “arilo”, “heteroarilo”, o similares, indica que dicho “alquilo”, “heteroalquilo”, “cicloalquilo”, 55 “heterocicloalquilo”, “arilo”, “heteroarilo”, o grupo similar contiene uno o más sustituyentes (introducidos por sustitución para hidrógeno). Los sustituyentes a modo de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, OH, =O, =S, =NRk, =N-ORk, SH, NH2, NO2, NO, N3, CF3, CN, OCN, SCN, NCO, NCS, C(O)NH2, C(O)H, C(O)OH, halógeno, Rk, SRk, S(O)Rk, S(O)ORk, S(O)2Rk, S(O)2ORk, OS(O)R-, OS(O)ORk-, OS(O)2Rk, OS(O)2ORk, S(O)N(Rk)Rl, OS(O)N(Rk)Rl, S(O)2N(Rk)Rl, OS(O)2N(Rk)Rl, OP(O)(ORk)(ORl), P(O)(ORk)(ORl), ORk, NHRk, N(R k)Rl, +N(Rk)(Rl)Rm, Si(Rk)(Rl)(Rm), C(O)Rk, C(O)ORk-, C(O)N(Rk)Rl, OC(O)Rk, OC(O)ORk, OC(O)N(Rk)Rl, N(Rk)C(O)Rl, N(Rk)C(O)ORl, N(Rk)C(O)N(Rl)Rm, un grupo soluble en agua, y los derivados tio de estos sustituyentes, y formas protonadas, cargadas, y desprotonadas de cualquiera de estos sustituyentes, en los que Rk, Rl, y Rm se seleccionan independientemente de entre H y -(CH2CH2O)yyCH2CH2X17Ryy opcionalmente sustituido, alquilo C1-15, heteroalquilo C1-15, cicloalquilo C3-15, heterocicloalquilo C1-15, arilo C5-15, o heteroarilo C1-15, o una combinación de los mismos, en 65 los que yy se selecciona de 1 a 1000, X17 se selecciona independientemente de entre O, S y NRzz, y Rzz y Ryy se seleccionan independientemente de entre H y alquilo C1-3, dos o más de Rk, Rl, y Rm estando unidos opcionalmente
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mediante uno o más enlaces para formar uno o más carbociclos y / o heterociclos opcionalmente sustituidos. Cuando hay más de un sustituyente, cada sustituyente se selecciona independientemente. Dos o más sustituyentes se pueden conectar entre sí por sustitución de uno o más átomos de hidrógeno en cada uno de los sustituyentes mediante uno o más enlaces de conexión, que pueden ser enlaces sencillos, dobles, o triples, o, si son posibles
5 estructuras de resonancia, el orden de enlace de dichos enlaces de ser diferente en dos o más de estas estructuras de resonancia. Por lo tanto, dos sustituyentes se pueden unir bajo la formación de uno o más anillos.
Cuando los sustituyentes se pueden “unir mediante uno o más enlaces para formar uno o más carbociclos y / o heterociclos opcionalmente sustituidos”, esto se refiere a que los sustituyentes se pueden conectar entre sí a través de la sustitución de uno o más átomos de hidrógeno en cada uno de los sustituyentes mediante uno o más enlaces de conexión.
El término “arilo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un sustituyente aromático carbocíclico que comprende de 5 a 24 átomos de carbono en el anillo, que pueden tener carga por no tener carga y que pueden
15 consistir en un anillo o dos o más anillos condensados en conjunto. Los ejemplos de grupos arilo incluyen, pero no se limitan a, fenilo, naftilo y antracenilo.
El término “heteroarilo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un sustituyente aromático heterocíclico que comprende de 1 a 24 átomos de carbono en el anillo y al menos un heteroátomo en el anillo, por ejemplo, oxígeno, nitrógeno, azufre, silicio o fósforo, en el que el nitrógeno y el azufre se pueden oxidar opcionalmente y el nitrógeno se puede cuaternizar opcionalmente, que puede consistir en un anillo o dos o más anillos condensados en conjunto. Los heteroátomos se pueden conectar directamente entre sí. Los ejemplos de grupos heteroarilo incluyen, pero no se limitan a, piridinilo, pirimidilo, furanilo, pirrolilo, triazolilo, pirazolilo, pirazinilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, tienilo, indolilo, benzofuranilo, benzoimidazolilo, benzotiazolilo, purinilo,
25 indazolilo, benzotriazolilo, benzoisoxazolilo, quinoxalinilo, isoquinolilo y quinolilo. En una realización, un grupo heteroarilo comprende de 1 a 4 heteroátomos. Se debería indicar que “grupo heteroarilo C1” representa que hay solamente un carbono presente en el sistema de anillos del grupo heteroaromático (por lo tanto, los átomos de carbono en sustituyentes opcionales no se cuentan). Un ejemplo de un grupo heteroaromático de este tipo es un grupo tetrazolilo.
Los grupos “arilo” y “heteroarilo” también incluyen sistemas de anillos en los que uno o más anillos aromáticos de fusionan con un anillo o sistema de anillos de arilo o de heteroarilo.
El término “alquilo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un sustituyente de hidrocarbilo saturado
35 o insaturado, de cadena lineal o ramificado. Los ejemplos de grupos alquilo incluyen, pero no se limitan a, metilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, hexilo, octilo, decilo, isopropilo, sec-butilo, isobutilo, terc-butilo, isopentilo, 2-metilbutilo, vinilo, alilo, 1-butenilo, 2-butenilo, isobutilenilo, 1-pentenilo, 2-pentenilo y 1-butinilo.
El término “heteroalquilo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un sustituyente de hidrocarbilo saturado o insaturado, de cadena lineal o ramificado en el que al menos un átomo de carbono está sustituido con un heteroátomo, por ejemplo, con oxígeno, nitrógeno, azufre, silicio o fósforo, en el que el nitrógeno y el azufre se pueden oxidar opcionalmente y el nitrógeno se puede cuaternizar opcionalmente. Los heteroátomos se pueden conectar directamente entre sí. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, nbutiloxi, terc-butiloxi, metiloximetilo, etiloximetilo, metiloxietilo, etiloxietilo, metilaminometilo, dimetilaminometilo,
45 metilaminoetilo, dimetilaminoetilo, metiltiometilo, etiltiometilo, etiltioetilo y metiltioetilo.
El término “cicloalquilo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un sustituyente de hidrocarbilo cíclico no aromático saturado o insaturado, que puede consistir en un anillo o dos o más anillos condensados en conjunto. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclopentenilo, ciclopentadienilo, ciclohexilo, ciclohexenilo, 1,3-ciclohexadienilo, decalinilo y 1,4-ciclohexadienilo.
El término “heterocicloalquilo”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un sustituyente de hidrocarbilo cíclico no aromático saturado o insaturado, que puede consistir en un anillo o dos o más anillos condensados en conjunto, en el que al menos un carbono en uno de los anillos está sustituido con un heteroátomo,
55 por ejemplo, con oxígeno, nitrógeno, azufre, silicio o fósforo, en el que el nitrógeno y el azufre se pueden oxidar opcionalmente y el nitrógeno se puede cuaternizar opcionalmente. Los heteroátomos pueden estar directamente conectados entre sí. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, tetrahidrofuranilo, pirrolidinilo, piperidinilo, 1,4dioxanilo, decahidroquinolinilo, piperazinilo, oxazolidinilo y morfolinilo. Se debería indicar que “grupo heterocicloalquilo C1” indica que solamente hay un carbono presente en el sistema de anillos del heterocicloalcano (por lo tanto, los átomos de carbono en sustituyentes opcionales no se cuentan). Un ejemplo de dicho grupo es un grupo dioxiranilo.
El número de átomos de carbono que puede contener un “alquilo”, “heteroalquilo”, “cicloalquilo”, “heterocicloalquilo”, “arilo”, “heteroarilo”, y similares, se indican mediante una denominación que precede a dichos términos, es decir,
65 alquilo C1-10 se refiera que dicho alquilo puede contener de uno a diez carbonos (los átomos de carbono en sustituyentes opcionales unidos a este alquilo no se cuentan).
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5 El término “heterociclo” en el presente documento se refiere a un resto heterocicloalcano o heteroareno saturado o insaturado, en el que los términos “heterocicloalcano” y “heteroareno” se definen como restos precursores de los sustituyentes “heterocicloalquilo” y “heteroarilo”, de forma respectiva, tal como se ha definido en lo que antecede en el presente documento.
La extensión “-ileno” en oposición a “-ilo” en por ejemplo “alquileno” en oposición a “alquilo” indica que dicho, por ejemplo, “alquileno” es un resto divalente (o multivalente) conectado a otros uno o más restos a través de al menos uno o más dobles enlaces o dos o más enlaces sencillos, en oposición a ser un grupo monovalente conectado a un resto a través de un enlace sencillo en dicho por ejemplo “alquilo”. El término “alquileno” por lo tanto se refiere a un resto de hidrocarbileno saturado o insaturado, de cadena lineal o ramificada; el término “heteroalquileno”, tal como 15 se usa en el presente documento, se refiere a un resto de hidrocarbileno saturado o insaturado, de cadena lineal o ramificada en el que al menos un carbono está sustituido con un heteroátomo; el término “arileno”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un resto aromático carbocíclico, que puede consistir en un anillo o dos o más anillos condensados en conjunto; el término “heteroarileno”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un resto aromático carbocíclico, que puede consistir en un anillo o dos o más anillos condensados en conjunto, en el que al menos un carbono en uno de los anillos está sustituido con un heteroátomo; el término “cicloalquileno”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un resto de hidrocarbileno cíclico no aromático saturado o insaturado, que puede consistir en un anillo o dos o más anillos condensados en conjunto; el término “heterocicloalquileno”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un resto de hidrocarbileno cíclico no aromático saturado o insaturado, que puede consistir en un anillo o dos o más anillos condensados en conjunto, en
25 el que al menos un carbono en uno de los anillos está sustituido con un heteroátomo. Algunos restos divalentes a modo de ejemplo incluyen los ejemplos dados en lo que antecede en el presente documento para los grupos monovalentes en los que se retira un átomo de hidrógeno.
El prefijo “poli” en “polialquileno”, “poliheteroalquileno”, “poliarileno”, “poliheteroarileno”, policicloalquileno”, “poliheterocicloalquileno”, y similares, indica que dos o más de tales restos de “-ileno”, por ejemplo, restos de alquileno, se unen en conjunto para formar un resto multivalente ramificado o no ramificado que contiene dos o más sitios de unión para restos adyacentes. De forma análoga, el prefijo “oligo” por ejemplo en oligoetilenglicol indica que dos o más restos de etilenglicol se unen en conjunto para formar un resto multivalente ramificado o no ramificado. La diferencia entre los prefijos “oligo” y “poli” es que el prefijo “oligo” es el que se usa más frecuentemente para indicar
35 un número relativamente pequeño de unidades de repetición, mientras que el prefijo “poli” se refiere normalmente a un número relativamente grande de unidades de repetición.
Ciertos compuestos de la invención poseen centros quirales y / o dobles enlaces, y / o pueden tener tautómeros o atropisómeros; las mezclas tautoméricas, enantioméricas, diastereoméricas, atropisoméricas, y geométricas de dos
o más isómeros, en cualquier composición, así como los isómeros individuales (incluyendo tautómeros y atropisómeros) están incluidos dentro del alcance de la presente invención.
Siempre que se usa el término “isómero”, este se refiere a un isómero atropisomérico, tautomérico, enantiomérico, diastereomérico, y / o geométrico o a una mezcla de dos o más de estos isómeros, a menos que el contexto le
45 indique de otro modo.
El término “peptidomimético” se refiere a un grupo o resto que tiene una estructura que es diferente de la estructura química general de un aminoácido ofrecido, pero que funciona de una manera similar a un aminoácido o péptido de origen natural. Por lo tanto, un peptidomimético es un mimético de aminoácido o mimético de péptido.
La expresión “aminoácido no natural” pretende representar el estereoisómero D de un aminoácido de origen natural.
El término “enlace” en el presente documento se refiere a una conexión covalente entre los átomos y puede hacer referencia a un enlace sencillo, un doble enlace, o un triple enlace, o, si son posibles estructuras de resonancia, el
55 orden de enlace de dicho enlace puede ser diferente en dos o más de estas estructuras de resonancia. Por ejemplo, si el enlace es parte de un anillo aromático, el enlace puede ser un enlace sencillo en una estructura de resonancia y un doble enlace en otra estructura de resonancia. Si se indica que un “doble enlace” o “triple enlace” está presente entre dos átomos, este doble, o triple enlace puede estar localizado, pero también puede suceder que este doble o triple enlace de esté deslocalizado, lo que significa que un doble o triple enlace solamente está presente ciertamente en una o algunas estructuras de resonancia entre los dos átomos, mientras que el orden de enlace puede ser diferente en otras una o más estructuras de resonancia. Al mismo tiempo, los enlaces marcados como enlace sencillo en una estructura de resonancia pueden ser dobles enlaces en otra estructura de resonancia.
Los compuestos de la invención también pueden contener proporciones no naturales de isótopos atómicos en uno o
65 más átomos que constituyen tales compuestos. Todas las variaciones isotópicas de los compuestos de la presente invención, ya sean radiactivos o no, pretenden estar incluidas dentro del alcance de la presente invención.
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La expresión “sal farmacéuticamente activa”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a una sal orgánica o inorgánica farmacéuticamente aceptable de un compuesto de la invención. Para los compuestos que contienen uno o más grupos básicos, por ejemplo, un grupo amino, se pueden formar sales de adición de ácido. Para los compuestos que contienen uno o más grupos ácidos, por ejemplo, un grupo ácido carboxílico, se puede es
5 formar sales de adición de base. Para los compuestos que contienen grupos tanto ácidos como básicos, además se pueden obtener zwitteriones como sales. Cuando el compuesto de la invención comprende más de un átomo o grupo cargado, puede haber múltiples contraiones (distintos).
La expresión “solvato farmacéuticamente aceptable” se refiere a una asociación de una o más moléculas de
10 disolvente con un compuesto de la invención. Los ejemplos de disolventes que forman solvatos farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, agua, alcohol isopropílico, etanol, metanol, DMSO, acetato de etilo, y ácido acético. Cuando se hace referencia al agua como un solvato, se puede usar el término “hidrato”.
El término “conjugado” en lo sucesivo en el presente documento se refiere a un compuesto de fórmula (III) o a un
15 conjugado de un compuesto de fórmula (I) o un derivado del mismo, amenas del contexto lo indique de otro modo. La expresión “conjugado de conector -agente” en lo sucesivo en el presente documento se refiere a un compuesto de fórmula (IV), a menos que el contexto lo indique de otro modo. El término “agente” en lo sucesivo en el presente documento se refiere a un compuesto de fórmula (I) o (I’), a menos que el contexto lo indique de otro modo.
20 El término “conector bifuncional” en lo sucesivo en el presente documento se refiere a un compuesto de fórmula (VIII), a menos que el contexto lo indique de otro modo. El término “conector” por lo general se refiere al resto que une V2 a Z en un compuesto de fórmula (III) o el prorresto conectado a Z en un compuesto de fórmula (IV).
La expresión “resto de dirección” se refiere a cualquier resto que se une de forma específica o que de forma reactiva
25 se asocia o forma complejo con un resto de forma específica o en un exceso relativo presente en o cerca del sitio diana, sobre, en, o cerca de la célula diana, o en (la proximidad de) el tejido u órganos diana, por ejemplo, un receptor, un complejo receptor, sustrato, determinante antigénico, u otro resto receptor, o que puede dirigir el conjugado al sitio diana a través de otros mecanismos en virtud de su naturaleza, por ejemplo, a través del efecto EPR.
30 Los ejemplos de un resto de dirección incluyen, pero no se limitan a, un aptámero, un anticuerpo o fragmento o derivado de anticuerpo, un polímero, un dendrímero, una lectina, un modificador de la respuesta biológica, una enzima, una vitamina, un factor de crecimiento, un esteroide, un resto de azúcar, un resto de oligosacárido, una proteína vehículo, y una hormona, o cualquier combinación de los mismos.
35 La expresión “resto que mejora las propiedades farmacológicas del compuesto” se refiere a un resto que cambia las propiedades farmacológicas (por ejemplo, propiedades farmacodinámicas, farmacocinéticas, fisicoquímicas y biofarmacéuticas) de un compuesto de la presente invención de un modo tal que se puede obtener un efecto terapéutico mejor. Por ejemplo, el resto puede aumentar la solubilidad en agua, aumentar el tiempo de circulación,
40 aumentar el índice terapéutico, o reducir la inmunogenicidad.
La expresión “grupo de unión” se refiere a un elemento estructural de un compuesto que une un elemento estructural de dicho compuesto a otros uno o más elementos estructurales de dicho mismo compuesto.
45 La expresión “un número que representa el grado de ramificación” se usa para indicar que el número del subíndice a continuación de un paréntesis de cierre representa cuántas unidades del resto dentro de los paréntesis está cada una directamente unida al resto inmediatamente a la izquierda del correspondiente paréntesis de apertura. Por ejemplo, A-(B)b con b siendo un número que representa un grado de ramificación se refiere a que todas las b unidades B se unen directamente a A. Esto significa que cuando b es 2, la fórmula se reduce a B-A-B.
50 La expresión “un número que representa el grado de polimerización” se usa para indicar que el número del subíndice a continuación de un paréntesis de cierre representa cuántas unidades del resto dentro de los paréntesis están conectadas entre sí. Por ejemplo, A-(B)b con b siendo un número que representa un grado de polimerización se refiere a que cuando b es 2, la fórmula se reduce a A-B-B.
55 La expresión “espaciador de liberación individual” se refiere a un espaciador de autoeliminación que puede liberar un resto después autoinmolación.
La expresión “espaciador de liberación múltiple” se refiere a un espaciador de autoeliminación que puede liberar dos 60 o más restos después de autoinmolación (repetitiva).
La expresión “espaciador de cascada electrónica” se refiere a un espaciador de autoeliminación, ya se ha ramificado
o no ramificado, que se puede autoeliminar a través de una o más eliminaciones de cascada electrónica 1,2 + 2n (n
≥ 1). 65
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
La expresión “espaciador de ciclado de ω-amino aminocarbonilo” se refiere a un espaciador de autoeliminación que se puede eliminar a través de un proceso de ciclado bajo la formación de un derivado de urea cíclica.
La expresión “sistema espaciador” se refiere a un resto espaciador de autoeliminación individual o a dos o más de los mismos o diferentes restos espaciadores de autoeliminación acoplados en conjunto. Un sistema espaciador puede está ramificado o sin ramificar y puede contener uno o más sitios de unión para Z así como V1 y opcionalmente L.
En el presente documento y en sus reivindicaciones, los verbos “comprender”, “tener”, “contener” y conjugar acciones se usan en su sentido no limitante para hacer referencia a que los artículos que están “comprendidos”, “tenían”, o “contenían” están incluidos, pero los artículos que no se mencionan de forma específica no están excluidos. Además, la referencia a un elemento mediante el artículo indefinido “un” o “uno” no excluye la posibilidad de que esté presente más de uno de los elementos, a menos que el contexto claramente requiera que haya uno y solamente uno de los elementos. Por lo tanto, el artículo indefinido “un” o “uno” normalmente se refiere a “al menos uno”.
La presente memoria descriptiva incluye muchas realizaciones. Se indica que las realizaciones que no se mencionan de forma específica y que resultan de la combinación de dos o más de dichas realizaciones mencionadas también están incluidas en la presente invención.
En las estructuras genéricas por la totalidad de la presente descripción y en las reivindicaciones, se usan para letras definir elementos estructurales. Algunas de estas letras también se pueden confundir pareciendo que representan un átomo, tal como C, N, O, P, K, B, F, S, U, V, W, I, e Y. Para evitar la confusión, cuando estas letras no representan un átomo, estas se proporcionan en fuente negrita.
Cuando hay uno o más adjetivos y / o expresiones adjetivales con respecto a un nombre que es a) el primero en una lista de nombres o b) cuando en la parte media de una lista de nombres y dicho nombres y adjetivos en conjunto van precedidos por el término “y” u “o”, los adjetivos no solamente se llevan en ese nombre, sino que también se llevan en todos los nombres por separado, a menos que el contexto lo indique de otro modo. por ejemplo, esto se refiere a que la expresión “ alquilo C1-4, heteroalquilo C1-4, cicloalquilo C3-7, o heterocicloalquilo C1-7 opcionalmente sustituidos” se debería leer como “ alquilo C1-4 opcionalmente sustituido, heteroalquilo C1-4 opcionalmente sustituido, cicloalquilo C3-7 opcionalmente sustituido, o heterocicloalquilo C1-7 opcionalmente sustituido “ y que la expresión “alquilo C1-4, heteroalquilo C1-4, y cicloalquilo C3-7 opcionalmente sustituido, arilo C5-8, o heterocicloalquilo C1-7” se debería leer como “alquilo C1-4, heteroalquilo C1-4, y cicloalquilo C3-7 opcionalmente sustituido, arilo C5-8 opcionalmente sustituido,
o heterocicloalquilo C1-7 opcionalmente sustituido”.
Por la totalidad de la presente descripción y en las reivindicaciones, se dibujan las estructuras moleculares o partes de las mismas. Como siempre, en tales dibujos, los enlaces entre átomos se representan con líneas, en algunos casos, para indicar la estereoquímica, con líneas onduladas, en negrita, o rotas o con cuñas. Un enlace representado con una línea ondulada indica la estereoquímica no específica en el centro quiral al que está conectado; una estructura o subestructura con uno o más detalles enlaces ondulados de hecho representa un conjunto de (sub)estructuras en las que cada centro quiral puede tener cualquiera de las configuraciones Ro S. Normalmente, una línea que termina en espacio (un extremo “suelto”), es decir, en un extremo que no tiene otra línea ni átomo específico conectado al mismo, representa un grupo CH3. Esto es correcto para los dibujos que representan los compuestos de la presente invención. Para esas estructuras que representan un elemento estructural de los compuestos de la presente invención, una línea que termina en el espacio puede indicar la posición de unión de otro elemento estructural del compuesto. Esto se ha indicado con una línea ondulada perpendicular y que cruzar la línea “suelta”.
Además, las estructuras o partes de las mismas se han dibujado, bajo la suposición de que las estructuras se leen de izquierda a derecha, lo que significa que por ejemplo en los dibujos de los compuestos de fórmula (III) V2 (si estuviera presente) se sitúa en el lado izquierdo y Z se sitúa en el lado derecho de tales estructuras o partes de las mismas, a menos que el contexto suponga otra cosa.
En el presente documento se usan las siguientes abreviaturas y estas tienen las definiciones indicadas: Ac: acetilo; Bn: bencilo; Boc: terc-butiloxicarbonilo; CBI: 1,2,9,9a-tetrahidrociclopropa[c]benz[e]indol-4-ona; Cbz: carbobenciloxi; Cit: citrulina; DCC: N,N’-diciclohexilcarbodiimida; DCE: 1,2-dicloroetano; DCM: diclorometano; DMAP: 4dimetilaminopiridina; DMF: N,N-dimetilformamida; DMSO: dimetilsulfóxido; DiPEA: N,N-diisopropiletilamina; EEDQ: 2-etoxi-1-etoxicarbonil-1,2-dihidroquinolina; ESI: ionización por electronebulización; Fmoc: fluorenilmetiloxicarbonilo; HOBt: 1-hidroxibenzotriazol; HOSu: hidroxisuccinimida; HSA: albúmina de suero humano; LC / EM: cromatografía líquida-espectrometría de masas; MOMCl: metil clorometil éter; PABA: alcohol p-aminobencílico; PNPCl: cloroformiato de p-nitrofenilo; TA: temperatura ambiente; SEC: cromatografía de exclusión por tamaño; TCEP: tris(2carboxietil)fosfina; TFA: ácido trifluoroacético; THF: tetrahidrofurano; Val: valina.
imagen16
La presente invención se refiere a conjugados de anticuerpo de fórmula (III) de nuevos análogos del agente de alquilación de ADN CC-1065.
5 Se considera que los agentes de fórmula (I) son para su uso para tratar una enfermedad que se caracteriza por una proliferación (celular) no deseada. Por ejemplo, tal agente se puede usar para tratar un tumor, cáncer, una enfermedad autoinmune, o una enfermedad infecciosa. En un aspecto, se considera que los conjugados de la presente invención se pueden aplicar a agentes diana de fórmula (I) a un sitio diana específico en el que el conjugado se puede convertir en una o más agentes o se puede inducir para que se convierta en uno o más de
10 dichos agentes. La presente invención también puede encontrará aplicación en la liberación controlada (no específica) de uno o más de dichos agentes a partir de un conjugado, con el objetivo de, por ejemplo, mejorar las propiedades fisicoquímicas, biofarmacéuticas, farmacodinámicas, y / o farmacocinéticas. Los compuestos de fórmula (I) representan derivados de duocarmicina que tienen preferentemente heteroátomos o
15 grupos polares en posiciones seleccionadas en el resto que se une a ADN o en sustituyentes en el resto de unión a ADN o de alquilación de ADN. De forma inesperada se encontró que los compuestos de fórmula (III), que son conjugados de los compuestos de fórmula (I), eran más eficaces in vivo y que tenían mejores propiedades, tales como aumento de la polaridad y optimización de la liberación de fármaco, en comparación con compuestos similares de la técnica anterior.
20 En una realización, la presente invención se refiere a un conjugado de un compuesto de fórmula (I) de acuerdo con una de las realizaciones mencionadas en lo que antecede y a derivados de los mismos. Un conjugado de este tipo contiene uno o más prorrestos. En una realización más específica, un conjugado de este tipo tiene una estabilidad suficiente en la circulación, pero se activa de forma eficaz y selectiva para liberar el compuesto de fórmula (I) en el
25 sitio diana, lo que conduce a una ventana terapéutica adecuada. Se demostró que la longitud y la naturaleza del conector entre el resto funcional y el compuesto de fórmula (I) eran una contribución importante. En un aspecto de la presente invención, el conector tiene una longitud del conector reducida con respecto a las longitudes del conector en conjugados similares de la técnica anterior, lo que conduce a un aumento de la eficacia. En otro aspecto, el conector contiene un sistema espaciador de autoeliminación con mejores propiedades, lo que
30 conduce, por ejemplo, a una tasa de autoeliminación optimizada, liberación de fármaco optimizada y / o aumento de la polaridad. En otro aspecto más, el conector entre el resto funcional y el compuesto de fórmula (I) contiene uno o más grupos diseñados para mejorar las propiedades farmacocinéticas del conjugado. Estos grupos pueden estar presentes en L y/o Y y / o en cualquiera de los otros restos que forman un compuesto de fórmula (III). Las propiedades farmacocinéticas afectadas pueden incluir, por ejemplo, solubilidad en agua, resistencia a múltiples
35 fármacos, estabilidad en plasma, labilidad proteolítica, absorción, distribución, metabolismo, excreción, e internalización. Algunas de estas propiedades pueden no solamente influir en el comportamiento in vivo, sino también en el comportamiento in vitro y en el comportamiento durante la preparación de un compuesto de fórmula (III). Por ejemplo, el aumento de la solubilidad en agua de un compuesto de fórmula (IV) puede influir de forma favorable en la conjugación de un compuesto de este tipo con un resto funcional en medio acuoso.
40 La liberación prematura del agente precursor, es decir, el compuesto de fórmula (I), en la circulación puede no ser deseable, pero una desactivación relativamente rápida del compuesto liberado podría reducir los efectos secundarios tóxicos en este caso. La desactivación se puede mejorar eligiendo el resto de alquilación de ADN y de unión de ADN apropiados. La desactivación se puede producir mediante varios mecanismos, incluyendo escisión enzimática o hidrolítica de la unidad de alquilación de ADN a partir de la unidad de unión a ADN.
45 Los compuestos de fórmula (I) son adecuados para su aplicación en fines de administración de fármacos, incluyendo dirección del fármaco y aplicaciones de liberación controlada, usando los compuestos de fórmulas (III)y(IV).
Agentes
50 En un aspecto, la presente invención proporciona un conjugado de anticuerpo de fórmula (III) de un compuesto de fórmula (I):
imagen17
55 o una sal, hidrato, o solvato del mismo farmacéuticamente aceptable, en las que
imagen18
imagen19
R1 es un grupo saliente; R2, R2, R3, R3, R4, R4, R12, y R19 se seleccionan independientemente de entre H, OH, SH, NH2, N3, NO2, NO, CF3,
15 CN, C(O)NH2, C(O)H, C(O)OH, halógeno, Ra, SRa, S(O)Ra, S(O)2Ra, S(O)ORa, S(O)2ORa, OS(O)Ra, OS(O)2Ra, OS(O)ORa, OS(O)2ORa, ORa, NHRa, N(Ra)Rb, +N(Ra)(Rb)Rc, P(O)(ORa)(ORb), OP(O)(ORa)(ORb), SiRaRbRc, C(O)Ra, C(O)ORa, C(O)N(Ra)Rb, OC(O)Ra, OC(O)ORa, OC(O)N(Ra)Rb, N(Ra)C(O)Rb, N(Ra)C(O)ORb, y N(Ra)C(O)N(Rb)Rc, en los que
20 Ra, Rb, y Rc se seleccionan independientemente de entre H y alquilo C1-3 o heteroalquilo C1-3 opcionalmente sustituidos,
o R3 + R3’ y / o R4 + R4’ se seleccionan independientemente de entre =O, =S, =NOR18 , =C(R18)R18’ y =NR18 , siendo R18 y R18’ seleccionados independientemente de entre H y alquilo C1-3 opcionalmente sustituido, dos o
25 más de R2, R2’, R3, R3’, R4, R4’, y R12 estando unidos opcionalmente mediante uno o más enlaces para formar uno o más carbociclos y / o heterociclos opcionalmente sustituidos; X2 se selecciona de entre O, C(R14)(R4’), y NR14’, en los que R14 y R14’ tienen el mismo significado que el que se ha definido para R7 y se seleccionan independientemente, o R14’ y R7’ están ausentes dando como resultado un doble enlace entre los átomos designados para que porten R7’y R14’;
30 R5, R5’, R6, R6’, R7, y R7’ se seleccionan independientemente de entre H, OH, SH, NH2, N3, NO2, NO, CF3, CN, C(O)NH2, C(O)H, C(O)OH, halógeno, Re, SRe, S(O)Re, S(O)2Re, S(O)ORe, S(O)2ORe, OS(O)Re, OS(O)2Re, OS(O)ORe, OS(O)2ORe, ORe, NHRe, N(Re)Rf, +N(Re)(Rf)Rg, P(O)(ORe)(ORf), OP(O)(ORe)(ORf), SiReRfRg, C(O)Re, C(O)ORe, C(O)N(Re)Rf, OC(O)Re, OC(O)ORe, OC(O)N(Re)Rf, N(Re)C(O)Rf, N(Re)C(O)ORf, N(Re)C(O)N(Rf)Rg, y un grupo soluble en agua, en los que
35 Re, Rf, y Rg se seleccionan independientemente de entre H y (CH2CH2O)eeCH2CH2X13Re1, alquilo C1-15, heteroalquilo C1-15, cicloalquilo C3-15, heterocicloalquilo C1-15, arilo C5-15, o heteroarilo C1-15 opcionalmente sustituidos en el que ee se selecciona de 1 a 1000, X13 se selecciona de entre O, S y NRf1 y Rf1 y Re1 se seleccionan independientemente de entre H y alquilo C1-3, uno o más de los sustituyentes opcionales en Re,
40 Rf, y / o Rg siendo opcionalmente un grupo soluble en agua, dos o más de Re, Rf, y Rg estando unidos opcionalmente mediante uno o más enlaces para formar uno o más carbociclos y / o heterociclos opcionalmente sustituidos,
o R5 + R5 y / o R6 + R6 y / o R7 + R7 se seleccionan independientemente de entre =O, =S, =NORe3, =C(Re3)Re4 y
45 =NRe3, Re3 y Re4 siendo seleccionados independientemente de entre H y alquilo C1-3 opcionalmente sustituido, o R5 + R6 y / o R6’ + R7’ y / o R7’ + R14’ están ausentes, dando como resultado un doble enlace entre los átomos designados para que porten R5’ y R6’, y / o R6’ y R7’, y / o R7’ y R14’, de forma respectiva, dos o más de R5, R5’, R6, R6’, R7, R7’, R14, y R14’ estando unidos opcionalmente mediante uno o más enlaces para formar uno o más carbociclos y / o heterociclos opcionalmente sustituidos;
X1
50 es O; X3 se selecciona de entre O, S, C(R15)R15’, -C(R15)(R15’)-C(R15”)(R15’)-, -N(R15)-N(R15’)-, -C(R15)(R15’)-N(R15”)-, N(R15”)-C(R15)(R15’)-, -C(R15)(R15’)-O-, -O-C(R15)(R15’)-, -C(R15)(R15’)-S-, -S-C(R15)(R15’)-, -C(R15)=C(R15’)-, =C(R15)-C(R15’)=, -N=C(R15’)-, =N-C(R15’)=, -C(R15)=N-, =C(R15)-N=, -N=N-, =N-N=, CR15, N, y NR15, o en DB1 y
y X3b
DB2-X3-representa -X3a -, en el que X3a está conectado a X34, un doble enlace está presente entre X34 y X4 ,
imagen20
y están conectados a , en el que se selecciona independientemente de entre H y (CH2CH2O)eeCH2CH2X13Re1 opcionalmente sustituido, alquilo C1-8, o heteroalquilo C1-8 y no está unido a ningún otro sustituyente; X4 se selecciona de entre O, S, C(R16)R16, NR16, N, y CR16;
X5 NR17 R17 R17
5 se selecciona de entre O, S, C(R17)R17’, NOR17 , y , en los que y se seleccionan independientemente de entre H y alquilo C1-8 o heteroalquilo C1-8 opcionalmente sustituidos y no está unido a ningún otro sustituyente; X6 se selecciona de entre CR11, CR11(R11’), N, NR11, O, y S; X7 se selecciona de entre CR8, CR8(R8’), N, NR8, O, y S;
10 X8 se selecciona de entre CR9, CR9(R9), N, NR9, O, y S; X9 se selecciona de entre CR10, CR10(R10’), N, NR10, O, y S; X10 se selecciona de entre CR20, CR20(R20’), N, NR20, O, y S; X11 se selecciona de entre C, CR 21, y N, o X11-X 3b se selecciona de entre CR21, CR21(R21’), N, NR21, O, y S; X12 se selecciona de entre C, CR22, y N;
, X10
15 X6*, X7*, X8*, X9*, X10*,y X11* tienen el mismo significado que el que se ha definido para X6 , X7 , X8 , X9 ,y X11 , de forma respectiva, y se seleccionan independientemente; X34 se selecciona de entre C, CR23, y N; el átomo del anillo B de X11* en DB6 y DB7 está conectado a un átomo del anillo del anillo A imagen21de modo que el anillo A y el anillo B en DB6 y DB7 se conectan directamente a través de un enlace sencillo;
se refiere a
20 que el enlace indicado puede ser un enlace sencillo o un doble enlace no acumulado, opcionalmente deslocalizado; R8, R8’, R9, R9’, R10, R10’, R11, R11’, R15, R15’, R15”, R15”’, R16, R16’, R20, R20’, R21, R21’, R22 y R23 cada uno se selecciona independientemente de entre H, OH, SH, NH2, N3, NO2, NO, CF3, CN, C(O)NH2, C(O)H, C(O)OH, halógeno, Rh, SRh, S(O)Rh, S(O)2Rh, S(O)ORh, S(O)2ORh, OS(O)Rh, OS(O)2Rh, OS(O)ORh, OS(O)2ORh, ORh,
25 NHRh, N(Rh)Ri, +N(Rh)(Ri)Rj, P(O)(ORh)(ORi), OP(O)(ORh)(ORi), SiRhRiRj, C(O)Rh, C(O)ORh, C(O)N(Rh)Ri, OC(O)Rh, OC(O)ORh, OC(O)N(Rh)Ri, N(Rh)C(O)Ri, N(Rh)C(O)ORi, N(Rh)C(O)N(Ri)Rj, y un grupo soluble en agua, en los que
Rh, Ri, y Rj se seleccionan independientemente de entre H y (CH2CH2O)eeCH2CH2X13Re1, alquilo C1-15,
30 heteroalquilo C1-15, cicloalquilo C3-15, heterocicloalquilo C1-15, arilo C5-15, o heteroarilo C1-15 opcionalmente sustituidos uno o más de los sustituyentes opcionales en Rh, Ri, y / o Rj siendo opcionalmente un grupo soluble en agua, dos o más de Rh, Ri, y Rj estando unidos opcionalmente mediante uno o más enlaces para formar uno o más carbociclos y / o heterociclos opcionalmente sustituidos,
35 o R8+R8’ y/o R9+R9’ y/o R10 +R10’ y/o R11 +R11’y/o R15 +R15’ y/o R15”+R15” y/o R16 +R16 y/o R20 + R20 y / o R21 + R21’ se seleccionan independientemente de entre =O, =S, =NORh1 = C(Rh1)Rh2 y =NRh1, Rh1 y Rh2 siendo seleccionados independientemente de entre H y alquilo C1-3 opcionalmente sustituido, dos o más de R8, R8’, R9, R9’, R10, R10’, R11, R11’, R15, R15’, R15”, R15”, R16, R16, R20, R20’, R21, R21’, R22, y R23 estando unidos opcionalmente mediante una o más enlaces para formar uno o más carbociclos y / o heterociclos opcionalmente
40 sustituidos; R8b y R9b se seleccionan independientemente y tienen el mismo significado que R8, excepto porque pueden no estar unidos con cualquier otro sustituyente; uno de R4 y R4’ y uno de R16 y R16’ pueden estar unidos opcionalmente mediante uno o más enlaces para formar uno o más carbociclos y / o heterociclos opcionalmente sustituidos;
45 uno de R2, R2’, R3, y R3’ y uno de R5 y R5’ pueden estar unidos opcionalmente mediante uno o más enlaces para formar uno o más carbociclos y / o heterociclos opcionalmente sustituidos; y a y b se seleccionan independientemente de entre 0 y 1.
En un aspecto adicional, la presente solicitud se refiere a un compuesto de fórmula (I’): 50
imagen22
o una sal, hidrato, o solvato del mismo farmacéuticamente aceptable, en el que todos los sustituyentes tienen el mismo significado que el descrito para los compuestos de fórmula (I). Se supone que los compuestos de fórmula (I)
55 se convierten en (I’) in vivo con la eliminación simultánea de H-R1. Por lo tanto, la presente solicitud se refiere a un compuesto de fórmula (I’), comprendiendo dicho compuesto un grupo ciclopropilo, que se puede formar a través de reordenamiento de y eliminación simultánea de H-R1 de un compuesto de fórmula (I). Todas las realizaciones para un compuesto de fórmula (I) o un resto del mismo también se mantienen para un compuesto de fórmula (I’) o un resto del mismo, a menos que el contexto lo indique de otro modo.
imagen23
5 En una realización más específica, la presente solicitud se refiere a un compuesto de fórmula (I), incorporado en un compuesto de fórmula (III), se ha descrito en lo que antecede en el presente documento, en las que
a) el resto DB no comprende un resto DA1 o DA1’;y 10 b) el anillo B en DB1 es un heterociclo; y
y X3b
c) si X3 en DB1 representa -X3a -y el anillo B es aromático, entonces dos sustituyentes en las cercanías en dicho anillo B se unen para formar un carbociclo o un heterociclo opcionalmente sustituidos condensado a dicho anillo B; y d) si X3 en DB2 representa -X3a y X3b-y el anillo B es aromático, entonces dos sustituyentes en las cercanías en
15 dicho anillo B se unen para formar un heterociclo opcionalmente sustituido condensado a dicho anillo B, un carbociclo no aromático opcionalmente sustituido condensado a dicho anillo B, o un carbociclo aromático sustituido que está condensado a dicho anillo B y al que se une al menos un sustituyente que contiene un grupo hidroxi, un grupo amino primario, o un grupo amino secundario, con la amina primaria o secundaria no siendo un átomo del anillo en un sistema de anillos aromático ni formando parte de una amida; y
20 e) si el anillo A en DB2 es un anillo aromático de 6 miembros, entonces los sustituyentes en el anillo B no se unen para formar un anillo condensado al anillo B; y f) dos sustituyentes en las cercanías en el anillo A en DB8 se unen para formar un carbociclo o un heterociclo opcionalmente sustituidos condensado a dicho anillo A para formar un resto bicíclico al que no se fusionan anillos adicionales; y
25 g) el anillo A en DB9 junto con cualquier anillo condensado a dicho anillo A contiene al menos dos heteroátomos en el anillo.
En una realización más específica, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I) tal como se ha descrito en lo que antecede en el presente documento, en el que al menos uno de los sustituyentes R1, R5, R5’, R6,
30 R6’, R7, R7’, R14, R14’, R8, R8’, R9, R9’, R10, R10’, R11, R11’, R15, R15’, R15”, R15”’, R16, R16’, R20, R20’, R21, R21’, R22, y R23 contiene un resto X14CH2CH2O)ffCH2CH2X14, en el que ff se selecciona de 1 a 1000 y cada X14 se selecciona independientemente de entre
imagen24
35 que está conectado al sitio de unión de dicho sustituyente ya sea a través de un enlace directo o a través de un resto, que forma parte de dicho mismo sustituyente, que no comprende un disulfuro, una hidrazona, una hidrazida, un éster, un aminoácido natural, o un péptido que contiene al menos un aminoácido natural.
40 Un conjugado de un compuesto de fórmula (I) en el que ff es superior a 1000 está incluido en la presente invención.
En una realización más específica adicional, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I), incorporado en un compuesto de fórmula (III) tal como se ha descrito en lo que antecede en el presente documento, en el que al menos uno de los sustituyentes R1, R5, R5’, R6, R6’, R7, R7’, R14, R14’, R8, R8’, R9, R9’, R10, R10’, R11, R11’ ,
45 R15, R15’, R15”, R15”’, R16, R16’, R20, R20’, R21, R21’, R22, y R23 contiene un resto de triazol.
Se debería entender que en todo el presente documento, cuando se hace referencia a un compuesto de fórmula (I), este incluye la referencia a un compuesto de fórmula (I’) a menos que las partes estructurales de (I) no presentes en (I’) estén implicadas o el contexto lo indique de otro modo. De forma análoga, cuando se hace referencia a una parte
50 estructural (fragmento), conjugado de conector -agente, o conjugado derivado de un compuesto de fórmula (I), esto incluye referencia a una parte estructural similar (fragmento), conjugado de conector -agente, o conjugado derivado de un compuesto de fórmula (I’) a menos que las partes estructurales de (I) no presentes en (I’) estén implicadas o el contexto lo indique de otro modo. Además, se debería entender que la presente invención se refiere a compuestos enantioméricamente puros y / o
55 diastereoméricamente puros de fórmula (I) así como a mezclas enantioméricas y / o diastereoméricas de compuestos de fórmula (I).
Algunas consideraciones con respecto a los efectos del sustituyente y los efectos de conectores, unidades de alquilación de ADN y unidades de unión a ADN en compuestos de fórmula (I), sus análogos que contienen
60 ciclopropilo, y sus conjugados y conjugados de conector -agente dados en el presente documento se presentan sin acceder a un mecanismo de acción específico para los compuestos de fórmula (I), sus análogos que contienen ciclopropilo, y sus conjugados de conector -agente y conjugados.
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Se puede considerar que los compuestos de fórmula (I) están formados por una unidad de unión a ADN (DB1 -DB9) y una unidad de alquilación de ADN (DA1 o DA1’), tal como se ha indicado en las figuras en lo que antecede en el presente documento. Se considera que la unidad de alquilación de ADN de los compuestos de fórmula (I) contiene el sitio de alquilación.
5 La alquilación de ADN se puede producir a través del ataque de ADN en el carbono que porta R1 en un compuesto de fórmula (I) o en el mismo carbono en el análogo que contiene ciclopropilo de dicho compuesto. Se considera que la unidad de unión a ADN de los compuestos de fórmula (I) ayuda en la unión eficaz de estos compuestos a ADN. Se puede acoplar al resto de alquilación de ADN a través de, por ejemplo, un enlace de amida. por lo tanto, en una realización, X5 es O. En una realización, la presente invención se refiere a un compuesto de
10 fórmula (I), incorporado en un compuesto de fórmula (III).
R1 en un compuesto de fórmula (I) es un grupo saliente. Además, el grupo R1 se eliminará cuando el compuesto de fórmula (I) se reordene a un compuesto de fórmula (I’). De acuerdo con la presente invención, R1 es cloro (Cl).
15 Al variar el grupo saliente R1, se puede modificar la actividad de alquilación de los agentes seco e influir en la tasa de transformación de un agente seco en un agente que contiene ciclopropilo de fórmula (I’). Si la capacidad de salida de R1 es demasiado buena, esto puede hacer que el agente seco se convierta en un agente de alquilación específico, que puede disminuir el cociente de citotoxicidad y el índice terapéutico de los conjugados de los compuestos de fórmula (I) al igual que el agente puede ser, por ejemplo, capaz de alquilarse aun cuando todavía
20 está unido en el conjugado. Por otro lado, si R1 es un grupo saliente demasiado malo, el agente seco puede no cerrarse para formar un agente que contiene ciclopropilo, que se cree que es la especie activa, lo que puede reducir su citotoxicidad y el cociente de citotoxicidad. Por lo tanto, en una realización, el parámetro de Swain-Scott del sitio de alquilación es superior a 0,3. En otras realizaciones, el parámetro de Swain-Scott es superior a 0,5 o 0,7 o 1,0. El tamaño de R1 puede influir en la tasa de alquilación de no ADN de un compuesto de fórmula (I) o un conjugado
25 del mismo. Si R1 es un grupo relativamente voluminoso, la alquilación específica se puede reducir ya que el carbono que porta R1 está protegido en cierto modo.
Otro medio para modificar la actividad de alquilación de los agentes seco y sus derivados que contienen ciclopropilo puede ser en cierto modo proteger el carbono al que se une el grupo saliente R1 o en el que se puede producir al 30 ataque nucleófilo mediante la elección de al menos uno de R2, R2’, R3, R3, R4, R4’, R5, R5’, R6, R6, R12, R16, y R16 presentes para que sean distintos de hidrógeno. La protección de dicho carbono puede reducir la alquilación específica mediante los compuestos de fórmula (I), sus análogos que contienen ciclopropilo, y sus conjugados. A pesar de que la introducción de impedimento estérico también puede influir en la tasa de alquilación de ADN, puede ser razonable suponer que la alquilación específica se pueda ver afectada relativamente más que la alquilación de
35 ADN ya que lo último se produce supuestamente después de que el agente se coloque de forma ideal para ataque nucleófilo que se está uniendo al surco menor del ADN.
La actividad de alquilación de un compuesto de fórmula (I) o su análogo que contiene ciclopropilo también se puede ver influida por la naturaleza de X1. La naturaleza de X1 puede influir en la tasa a la que y a las condiciones en las
40 que el anillo de los agentes seco se cierra con respecto a los análogos de ciclopropilo y / o la tasa a la que se abre el anillo de ciclopropilo mediante ataque nucleófilo (con ADN), y por lo tanto influye en el comportamiento de alquilación. De acuerdo con la presente invención, X1 es O.
Los sustituyentes R5, R5’, R6, R6’, R7, R7’, y X2 así como el tamaño del anillo conectado con el lado de la parte
45 izquierda del anillo que porta X1 pueden por ejemplo, cada uno independientemente o dos o más tomados en conjunto, influir en las propiedades farmacológicas del agente, por ejemplo, pueden influir en la solubilidad del agua, influir en el comportamiento de agregación, influir en el proceso de alquilación de ADN, y / o influir en la fuerza de unión a ADN. Además, especialmente R5 y R5’ y en cierta medida también R6 y R6’, pueden influir en el grado de protección del carbono en el que debería tener lugar el ataque nucleófilo.
50 Los sustituyentes R16 y R16’ pueden influir en el grado de protección del carbono en el que también se puede producir el ataque nucleófilo. R14 y R14’ pueden influir en el grado de protección de X1, o cuando un compuesto de fórmula (I) forma parte de un conjugado o conjugado de conector -agente en el que el compuesto de fórmula (I) se conecta a través de X1, estos
55 pueden influir en el grado de protección de la unión entre el compuesto de fórmula (I) y el prorresto. Para aumentar la estabilidad de esta unión, R14 se puede seleccionar para que sea distinto de hidrógeno.
A pesar de que la tasa de alquilación y la eficacia de los compuestos de fórmula (I) se puede modificar opcionalmente de varias maneras, en un aspecto de la presente invención, esto se puede conseguir mediante la
60 introducción de protección estérica eligiendo para un compuesto de fórmula (I) uno o más de R2, R2’, R3, R3’, R4, R4’ , R5, R5’, R6, R6’, R12, R16, y R16’ presentes para que sean distintos de hidrógeno. Los sustituyentes no deberían causar demasiado impedimento estérico, no obstante, especialmente cuando más de uno de estos sustituyentes es distinto del hidrógeno, ya que esto podría influir de forma adversa en la alquilación de ADN. Además, esto puede proporcionar una unión menos eficaz en el surco menor del ADN y puede plantear dificultades de síntesis.
65 Los compuestos de fórmula (I) pueden contener uno o más restos de oligoetilenglicol o polietilenglicol o derivados de los mismos. Un resto de este tipo puede mejorar la solubilidad en agua y el comportamiento de agregación de un compuesto de fórmula (I) y puede causar un aumento de la actividad frente a dianas resistentes a múltiples fármacos debido a un aumento de la polaridad. Si un compuesto de fórmula (I) con un resto de este tipo se incorpora en un
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5 conjugado, puede suceder que el resto de oligoetilenglicol o polietilenglicol se sitúe entre el prorresto y el resto del compuesto de fórmula (I) o que se sitúe en una posición en cierto modo opuesta al sitio de unión del prorresto, colocando de este modo el resto del compuesto de fórmula (I) entre el prorresto y el resto de oligoetilenglicol o polietilenglicol. Lo último puede ser más beneficioso para la solubilidad en agua de los conjugados. El aumento de la solubilidad en agua de los compuestos de fórmula (I) y sus conjugados de conducir a mejores rendimientos y pureza de los conjugados durante la síntesis, por ejemplo, debido a una reducción de la formación de agregados. Además, una tendencia reducida hacia la agregación y la pureza más elevada del conjugado puede conducir, por ejemplo, a menos efectos secundarios después de la administración del conjugado. Además, la presencia de uno o más restos de oligoetilenglicol y / o polietilenglicol en un conjugado puede reducir la excreción del conjugado a través de los riñones o hígado, que aumenta el tiempo de circulación en el organismo.
15 En otro aspecto de la presente invención, los compuestos de fórmula (I) pueden contener uno o más anillos de triazol. La incorporación de un anillo de 1,2,3-triazol puede proporcionar una ventaja de síntesis ya que los dos restos que opcionalmente se pueden unir al anillo de 1,2,3-triazol se pueden unir a cada uno de los otros a través de dicho anillo de triazol usando una reacción de cicloadición suave y eficaz entre un resto de alquino y azida. Dado que las condiciones para esta reacción de cicloadición son muy suaves y son compatibles con casi todos los grupos funcionales, la reacción se puede realizar en una de las últimas etapas de la ruta de síntesis hacia un compuesto de fórmula (I), su conjugado de conector -agente, o conjugado, permitiendo de este modo una fácil generación de series de compuestos de fórmula (I) y sus conjugados para estudios de SAR (relación de estructura-actividad). Preferentemente, el resto de triazol se sitúa de un cierto modo dentro de la unidad de alquilación de ADN o unidad
25 de unión a ADN mediante el que puede contribuir a la unión del compuesto al ADN. Los restos de unión a ADN adicionales tales como restos de indol o benzofurano, que se conectan a la unidad de unión ADN o de alquilación de ADN pueden aumentar la potencia del compuesto, supuestamente a través de un aumento de la unión a ADN. No obstante, estos restos aromáticos adicionales pueden tener un efecto perjudicial en las propiedades farmacológicas, tales como solubilidad en agua. Un triazol, al ser un grupo aromático, también para aumentar la unión a ADN y por lo tanto aumentar la potencia citotóxica del compuesto, pero como es más polar y otros restos aromáticos tales como un anillo de fenilo, algunos efectos negativos en las propiedades farmacológicas pueden ser menos pronunciados.
En otras realizaciones, un compuesto de fórmula (I) es
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o un isómero de uno de estos, o una mezcla de isómeros.
El aumento de la solubilidad en agua de un compuesto de fórmula (I) puede no solamente conseguirse a través de la introducción de grupos solubles en agua o polares, tales como un grupo triazol o un resto de oligoetilenglicol o polietilenglicol o una combinación de los mismos, sino que también se puede conseguir a través de sustitución de átomos de carbono de anillo por heteroátomos, por ejemplo en la unidad de unión a ADN. el aumento de la solubilidad en agua de los compuestos de fórmula (I) y sus conjugados de conducir a una mejora de los rendimientos y pureza de los conjugados durante la síntesis, por ejemplo debido una reducción de la formación de
45 agregados. Además, una reducción de la tendencia hacia la agregación y una pureza más elevada del conjugado puede conducir por ejemplo a menos efectos secundarios después de la administración del conjugado. El aumento de la degradación metabólica, por ejemplo, en el hígado, se puede conseguir por ejemplo a través de la introducción de grupos en las unidades de unión a ADN que se pueden oxidar con relativa facilidad, por ejemplo restos de acetileno y alqueno. La oxidación de compuestos tóxicos es uno de los mecanismos mediante los que un mamífero puede purificar tales compuestos. Si los compuestos de la presente invención son captados en el hígado, la purificación ética puede por ejemplo evadir la toxicidad hepática como un efecto secundario. La estabilidad de la unión entre la unidad de unión a ADN y unidad de alquilación de ADN, por ejemplo en la circulación, se puede modelar mediante modificaciones en la unidad de unión a ADN. Puede ser favorable tener la unidad de alquilación de ADN y unidad de unión a ADN unida a través de un enlace esencialmente no escindible.
55 Especialmente cuando el compuesto de fórmula (I) se administra como el principio activo, se puede desear la estabilidad en la circulación. No obstante, cuando un compuesto de fórmula (I) se administra como parte de un conjugado, puede ser favorable tener un enlace entre la unidad de alquilación de ADN y la unidad de unión a ADN quería ser menos están en la circulación en cuanto el compuesto de fórmula (I) se libere de forma prematura desde el conjugado. Esto puede reducir los efectos secundarios tóxicos como una consecuencia de la liberación prematura del agente. Las unidades de unión a ADN de la presente invención pueden hacer que un compuesto de fórmula (I) o su conjugado o conjugado de conector -agente tengan una unión más estable entre unidad de unión a ADN y de alquilación de ADN en la circulación que un compuesto de fórmula (I’), que se pueden formar a partir de un compuesto de fórmula (I) tan pronto como X1 esté sin proteger. La extensión del sistema conjugado con π en el resto que se une a ADN puede aumentar la afinidad de unión del aglutinante de ADN para el ADN. El sistema π se puede extender mediante la introducción de anillos aromáticos adicionales y / o dobles y / o triples enlaces conjugados.
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La unidad DB de unión a ADN en un compuesto de fórmula (I) se selecciona de entre las estructuras DB1 -DB9:
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20 En un aspecto de la presente invención, un compuesto de fórmula (I) tiene una unidad de unión a ADN de fórmula DB1. Este resto comprende estructuras que contienen al menos un anillo B de 6 miembros que está conectado a la unidad de alquilación de ADN a través de un anillo A de 5 con 6 miembros condensado o grupo vinilo. El heteroátomo en dicho anillo B puede proporcionar un aumento de la solubilidad en agua con respecto a análogos de aglutinante de ADN que tienen un anillo en el que todos sus átomos son carbono.
25 Preferentemente, el anillo B es aromático. Este puede ser por ejemplo un resto de piridina, pirimidina, piridazina, pirazina, 1,3,5-triazina, 1,2,3,5-tetrazina, 1,2,3,4-tetrazina, pentazina, fosfinina, 1,3-difosfinina, o 1,3-azafosfinina. Como alternativa, este anillo puede no ser aromático y puede ser cualquiera de insaturado o completamente saturado.
30 Un compuesto de fórmula (I) en el que el anillo B está conectado a la unidad de alquilación de ADN a través de un grupo vinilo puede contener un asa que permita la purificación por medio de, por ejemplo, oxidación o hidratación del doble enlace. En una realización, el resto DB1 se puede seleccionar de entre
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En otra realización, el resto DB1 es
En otra realización más, el resto DB1 es
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45 En una realización adicional más, el resto DB1 es
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En una realización, el resto DB1 se puede seleccionar de entre
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En una realización adicional, el resto DB1 se puede seleccionar de entre
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15 Los sustituyentes R1 a R23 pueden ayudar a mejorar las propiedades farmacológicas de un compuesto de fórmula (I)
o su conjugado, por ejemplo, su solubilidad en agua. Esto se puede conseguir, por ejemplo, mediante la selección de uno o más de los sustituyentes R1, R5, R5’, R6, R6’, R7, R7’, R14, R14’, R8, R8’, R9, R9’, R10, R10’, R11, R11’, R15, R15’ ,
R15” R15”’ R16 R20 R20’ R21 R21’ R22
, , , , , , , , y R23 para que comprendan o sean un resto de oligoetilenglicol o polietilenglicol o un resto de triazol. Como alternativa o de forma simultánea, uno o más de los sustituyentes puede 20 comprender o ser un grupo soluble en agua. La presencia de un grupo soluble en agua puede no solamente dar como resultado un aumento de la solubilidad en agua, sino también evitar que un compuesto de fórmula (I) cruce una barrera biológica, especialmente cuando es una barrera apolar, tal como una membrana celular. Esto puede ser ventajoso, especialmente cuando un compuesto de fórmula (I) se suministra en una célula dirigida a través de conjugación con un resto de dirección antes de su liberación desde el conjugado ya que el compuesto de fórmula (I) 25 será incapaz de dejar la célula. Incluso el transporte activo a través de, por ejemplo, la bomba de glicoproteína P se puede ver (parcialmente) alterado. Cuando un compuesto de fórmula (I) se libera de forma prematura desde el
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conjugado, por ejemplo, en la circulación, este puede ser incapaz o solamente moderadamente capaz de entrar en células (no dirigidas) de forma específica ya que sus capacidades de translocación de membrana se pueden ver alteradas por el grupo soluble en agua. Esto puede conducir a un aumento de la selectividad y por lo tanto a efectos secundarios menores. Además, al menos en algunos casos, por ejemplo cuando el grupo soluble en agua tiene
5 carga positiva en condiciones fisiológicas, el grupo soluble en agua también puede aumentar la afinidad de unión hacia el ADN por medio de interacciones electrostática es favorable es con los grupos fosfato con carga negativa. Un grupo soluble en agua es un grupo que imparte un aumento de la solubilidad en un compuesto de fórmula (I) y/o un conjugado del mismo. En una realización, la solubilidad en agua de un compuesto de la presente invención que porta un grupo soluble en agua aumenta en más de un 100 % en comparación con el compuesto que carece de
10 dicho grupo soluble en agua. En otras realizaciones, la solubilidad en agua de un compuesto de la presente invención que porta un grupo soluble en agua aumenta en más de un 75 % o 50 % o 25 % o un 10 % en comparación con el compuesto que carece de dicho grupo soluble en agua. El grupo soluble en agua también puede contribuir a evitar o reducir la agregación de los compuestos de la presente invención o a reducir los efectos secundarios. Los ejemplos de grupos solubles en agua incluyen, pero no se limitan a, -NH2, -NH-, -NHRs, -NRs-, 15 N(Rs)(Rt), -+N(Rs)(Rt)-, -+N(Rs)(Rt)(Ru), -COOH, -OP(O)(OH)2, -OP(O)(OH)O-, -OP(O)(ORs)O-, -OP(O)(OH)ORs, -OP(O)(ORs)ORt, -P(O)(OH)2, -P(O)(OH)O-, -P(O)(ORs)OH, -P(O)(ORs)O-, -P(O)(ORs)(ORt), -OS(O)2OH, -OS(O)2O-, -OS(O)2ORs, -S(O)2OH, -S(O)2O-, -S(O)2ORs, -OS(O)OH, -OS(O)O-, -OS(O)ORs, -S(O)OH, -S(O)O-, -OS(O)-, S(O)ORs, -OS(O)2-, -OS(O)2Rs, -S(O)2-, -S(O)2Rs, -OS(O)Rs, -S(O)-, -S(O)Rs, -(OCH2CH2)v’OH, -(OCH2CH2)v’O-, (OCH2CH2)v’ORs, un resto de azúcar, un resto de mono, di, u oligosacárido, y un resto de oligopéptido, o una forma 20 protonada o desprotonada del mismo y cualquier combinación adicional de los mismos, en los que Rs, Rt, y Ru se seleccionan independientemente de entre H y alquilo C1-3 opcionalmente sustituido, dos o más de Rs, Rt, y Ru estando unidos opcionalmente mediante uno o más enlaces para formar uno o más carbociclos y / o heterociclos, y v’ es un número entero seleccionado de 2 a 1000. El grupo soluble en agua puede estar en cualquier posición dentro de un sustituyente o puede constituir todo el sustituyente. El grupo soluble en agua puede estar localizado, por
25 ejemplo, en cualquier posición interior, puede ser parte de la cadena principal, puede ser parte de una estructura de anillo, puede ser un grupo funcional que cuelga con respecto a la cadena principal o un anillo, o se puede colocar en la posición en la que el sustituyente se une al resto del agente.
Un compuesto de fórmula (I) puede no tener un resto reactivo incorporado en su estructura. Por otro lado, como
30 llega a ser evidente a partir de lo mencionado en lo que antecede, en su estructura un resto reactivo puede estar presente que permite la reacción de un compuesto de fórmula (I) con otro resto. Por ejemplo, un compuesto de fórmula (I) se puede hacer reaccionar con un resto de dirección o una construcción de conector-resto de dirección, por ejemplo, un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo, o una construcción de anticuerpo -conector o un fragmento de construcción de anticuerpo -conector, para preparar un resto de conjugado de dirección - agente en
35 una o más etapas, que puede ser o no un conjugado de fórmula (III). Tal conjugado de resto de dirección -agente puede ser escindible o no escindible. La formación de un conjugado de resto de dirección -agente puede no solamente realizarse a través de síntesis química, sino que también se puede producir in situ, es decir, después de la administración de un compuesto de fórmula (I) in vivo. El compuesto de fórmula (I) se puede unir, por ejemplo, a proteínas endógenas, por ejemplo, albúmina, después de su administración.
40 En una realización, un compuesto de fórmula (I) es
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45 o un isómero del mismo, o una mezcla de isómeros. En una realización más, un compuesto de fórmula (I) es
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o un isómero de uno de estos, o una mezcla de isómeros. En una realización más, un compuesto de fórmula (I) es
o un isómero de uno de estos, o una mezcla de isómeros. En otra realización más, un compuesto de fórmula (I) es
o un isómero de uno de estos, o una mezcla de isómeros. En otra realización más, un compuesto de fórmula (I) es
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o un isómero de uno de estos, o una mezcla de isómeros. En otra realización más, un compuesto de fórmula (I) es
o un isómero de uno de estos, o una mezcla de isómeros. En otra realización más, un compuesto de fórmula (I) es
o un isómero de uno de estos, o una mezcla de isómeros. En otra realización más, un compuesto de fórmula (I) es
o un isómero de uno de estos, o una mezcla de isómeros.
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Conjugados, conjugados de conector -agentes y conectores bifuncionales
La presente invención se refiere a un conjugado de un compuesto de fórmula (I) que se puede convertir  en una o más etapas en un compuesto de fórmula (I), de forma respectiva. El conjugado también se puede convertir en un derivado de un compuesto de fórmula (I) en el que una parte del prorresto unida a un compuesto de fórmula (I) en el conjugado sigue unida al compuesto de fórmula (I) después de conversión in vivo. Un modo alternativo de ver esto es que el resto restante del conector forma parte del compuesto de fórmula (I). Estos conjugados pueden influir de forma favorable en las propiedades farmacológicas y otras características de un compuesto de fórmula (I). En una realización, la presente invención se refiere a un conjugado que comprende un compuesto de fórmula (I) conjugado con un prorresto. En otra realización, la presente invención se refiere a un conjugado que comprende un compuesto de fórmula (I) conjugado con prorresto.
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En una realización más, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (III):
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o una sal, hidrato, o solvato del mismo farmacéuticamente aceptable, en la que
V2 es un resto funcional;
15 cada L2 está independientemente ausente o es un grupo de unión que une V2 a L; cada L está independientemente ausente o es un grupo de unión que une L2 a uno o más V1 y/o Y; cada V1 está independientemente ausente o es un resto escindible de forma condicional o transformable de forma condicional, que se puede escindir o transformar mediante un proceso químico, fotoquímico, físico, biológico, o enzimático;
20 cada Y es un sistema espaciador de autoeliminación que se compone de 1 o más espaciadores de autoeliminación y está unido a V1, opcionalmente L, y uno o más Z, en la que Y está conectado a X1 a través de un espaciador de ciclado de ω-amino aminocarbonilo que forma parte de Y; cada p y q son números que representan un grado de ramificación y son cada uno independientemente un número entero positivo;
25 z es un número entero positivo igual o inferior al número total de sitios de unión para Z; cada Z es independientemente un compuesto de fórmula (I) tal como se ha definido en lo que antecede en el presente documento; cada Z está conectado a Y a través de X1 .
30 A partir de la fórmula (III) se debería entender que L se puede conectar a V1 y/oa Y. Si L está conectado a Y, esto significa que tanto V1 como L, así como uno o más Z, están conectados a Y. Si L está conectado a V1, testo significa que V1 y uno o más Z están conectados a Y. L también puede estar conectado tanto a V1 como a Y al mismo tiempo. Los restos V2(-L2-L(-(V1-Y))p)q(Z)z-1, en los que L(-(V1-Y))p indica que L puede estar conectado a V1 y/o a Y, conectado a Z, se denominan prorrestos en el presente documento.
35 La presente invención también se refiere a un compuesto de fórmula (IV):
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40 o una sal, hidrato, o solvato del mismo farmacéuticamente aceptable, en el que RM es un resto reactivo y L, V1 , Y, Z, p, y z son tal como se han definido en lo que antecede en el presente documento, excepto porque L ahora está uniendo RM a uno o más V1 y/o Y,y V1 , Y,y Z pueden contener grupos protectores, y en los que, si hay más de 1 resto reactivo en (IV), algunos o todos los restos reactivos son iguales o diferentes. Estos conjugados de conector -agente de fórmula (IV) se pueden considerar o no compuestos
45 intermedios para los compuestos de fórmula (III). En un compuesto de fórmula (IV), RM debe estar presente en mientras que V1 puede estar presente o ausente.
En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (IV), en el que RM es un resto reactivo seleccionado de entre haluro de carbamoílo [-N(R)C(O)X], haluro de acilo [-C(O)X], éster activo [-C(O)OR], 50 anhídrido [-C(O)OC(O)OR], α-haloacetilo [-C(O)CH2X], α-haloacetamida [-N(R)C(O)CH2X], maleimida, isocianato [-N=C=O], isotiocianato [-N=C=S], disulfuro [-S-SR], tiol [-SH], hidrazina [-NH2NH2], hidrazida [-C(O)NH2NH2], cloruro de sulfonilo [-S(O)2Cl], aldehído [-C(O)H], metil cetona [-C(O)CH3], vinil sulfona [-S(O)2-CH=CH2], halometilo [-CH2Cl], y sulfonato de metilo [-CH2OS(O)2R]. Estos conjugados de conector -agente de fórmula (IV) se pueden considerar o no compuestos intermedios para los compuestos de fórmula (III). En un compuesto de fórmula (IV) de
55 este tipo, RM debe estar presente.
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En un aspecto adicional más, la presente invención se refiere nuevos conectores bifuncionales que contienen un sitio de escisión, un sistema espaciador de autoeliminación y dos restos reactivos, uno de los cuales se puede hacer reaccionar con un resto terapéutico o de diagnóstico, por ejemplo un compuesto de fórmula (I), y el otro de los cuales se puede hacer reaccionar con un resto funcional, tal como un resto de dirección. Estos conectores bifuncionales se pueden usar para preparar conjugados de fórmulas (III) y(IV) de la presente invención o similar compuestos con diferentes restos terapéuticos o de diagnóstico. Más específicamente, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (VIII):
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o una sal, hidrato, o solvato del mismo farmacéuticamente aceptable, en la que
15 L, V1 , Y, RM, p, y z son tal como se han definido para un compuesto de fórmula (IV),y RM2 es un resto reactivo o un grupo saliente. RM y cada RM2 se seleccionan independientemente. Estos conectores bifuncionales de fórmula
(VIII) se pueden considerar o no compuestos intermedios para los compuestos de fórmula (III) y(IV). Además, se puede considerar que estos compuestos son compuestos intermedios para conjugados y conjugados de conector agente similares a los compuestos de fórmula (III) y(IV) en las que el resto Z es un resto terapéutico o de diagnóstico diferente de un compuesto de fórmula (I) o (I’), o un derivado del mismo que contiene prorresto. Por lo tanto, en otro aspecto, la presente invención se refiere a un conjugado de fórmula (III) en la que el uno o más restos Z son independientemente un resto terapéutico o de diagnóstico. En otro aspecto más, la presente invención se refiere a un conjugado de conector -agente de fórmula (IV) en la que el uno o más restos Z son independientemente un resto terapéutico o de diagnóstico.
25 Se indica que los restos X14 separados en los restos -CH2CH2X14 que pueden estar presentes en un compuesto de fórmula (III), (IV),o(VIII) se seleccionan independientemente. También se indica que z no representa un grado de polimerización, por lo tanto z no indica que un número de restos Z o RM2 estén conectados entre sí. Se indica adicionalmente que si Y está conectado a un átomo de Z o RM2 que porta un sustituyente R específico en lugar de a este sustituyente R en sí mismo, esto de hecho se refiere a que este sustituyente R está ausente si esto es necesario para satisfacer las reglas de valencia. Se indica adicionalmente que si X14, por ejemplo en -CH2CH2X14 representa
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entonces -CH2CH2X14 se debería leer como -CH2CHX14 . Se indica que si un compuesto de la presente invención contiene un resto de oligoetilenglicol o polietilenglicol el número real de unidades de etilenglicol puede variar de molécula a molécula y la variable que designa número de unidades realmente representa el número medio de unidades. A pesar de que el número medio de unidades de etilenglicol por lo general se limita a 1000 en las definiciones de los compuestos de la presente invención, los compuestos con un número medio mayor de unidades de etilenglicol también están incluidos en la presente invención.
45 Se debería entender que la presente invención se refiere a compuestos enantioméricamente puros y / o diastereoméricamente puros de fórmulas (III), (IV),y(VIII) así como a mezclas enantioméricas y / o diastereoméricas de compuestos de fórmulas (III), (IV), y (VIII).
Cuando un compuesto de fórmula (III) o (IV) contiene sitios de unión en Y para Z que no están acoplados a Z, por ejemplo como consecuencia de una reacción de acoplamiento incompleta con Z durante la síntesis, se considera que estos sitios de unión están unidos a H, OH, un resto reactivo (por ejemplo, RM2), o un grupo saliente (por ejemplo, RM2) en su lugar. Si todos los sitios de unión mencionados están conectados a Z, entonces z es igual al número de dichos sitios de unión; de otro modo, z es menor. Los compuestos de la presente invención pueden existir como una mezcla, en la que cada componente de la mezcla tiene un valor de z diferente. Por ejemplo, el
55 compuesto puede existir como una mezcla de dos compuestos separados, un compuesto en el que z es 4 y otro compuesto en el que z es 3. mayo se iniciará además, para un z dado, el compuesto puede existir como una mezcla de isómeros (constitucionales) ya que Z se puede conectar a distintos sitios (conjuntos de) de unión. Por razones de claridad, cuando se hace referencia a las conexiones de un primer resto a otros restos de fórmula (III), (IV),o(VIII), en general se mencionan solamente esos otros restos mencionados a pesar de que están unidos directamente a dicho primer resto en la fórmula (III), (IV),o (VIII). Se debería entender que si uno de los otros restos mencionados no está presente, dicho primer resto realmente está conectado al primer resto en línea que está
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5 El resto V1
En un compuesto de fórmula (III), (IV),o (VIII), el resto V1 es un grupo que se puede escindir o transformar de forma condicional. En otras palabras, se diseña para que se transforme y / o escinda de Y mediante un proceso químico, fotoquímico, físico, biológico, o enzimático después de iniciarse o en ciertas condiciones. Estas condiciones pueden ser, por ejemplo poner un compuesto de la invención en un entorno acuoso, que conduce a hidrólisis de V1, o poner un compuesto de la invención en un entorno que contiene una enzima que reconoce y escinde V1, o poner un compuesto de la invención en condiciones reductoras, que conduce a reducción y / o retirada de V1, o poner un compuesto de la invención en condiciones de oxidación, que conduce a oxidación y / o retirada de V1, o poner un compuesto de la invención en contacto con radiación, por ejemplo, luz UV, que conduce transformación y / o
15 escisión, o poner un compuesto de la invención en contacto con calor, que conduce transformación y / o escisión, o poner un compuesto de la invención a presión reducida, que conduce transformación, por ejemplo, una retrocicloadición y / o escisión, o poner un compuesto de la invención bajo presión elevada o alta, que conduce transformación y / o escisión. Esta condición se puede satisfacer después de la administración de un compuesto de la presente invención a un animal, por ejemplo, un mamífero, por ejemplo un ser humano: la condición se puede satisfacer cuando el compuesto se localiza en, por ejemplo, un órgano, tejido, célula, diana subcelular, o diana bacteriana, vírica, o microbiana específicos, por ejemplo mediante la presencia de factores internos (por ejemplo, enzimas específicas de diana o hipoxia) o aplicación de factores externos (por ejemplo, radiación, campos magnéticos) o la condición ya se puede satisfacer directamente después de su administración (por ejemplo, enzimas ubicuas en la circulación).
25 Escisión de V1 significa que el enlace entre V1 e Y está roto. Transformación de V1 significa que V1 se convierte en un resto diferente y este suceso puede conducir de forma directa o indirecta a la autoescisión de V1 de Y. Como alternativa, la transformación de V1 puede conducir a la formación de un resto V-Y que es un conector autoinmolativo. En este caso, Y solamente llega a ser autoinmolativo después de la transformación de V1. El resto V1 transformado realmente se convierte en parte (parcialmente) de Y. Por ejemplo, la oxidación de V1 que es un átomo de hidrógeno a un grupo hidroxilo puede conducir a la formación de un resto a para u orto-hidroxibenciloxicarbonilo V1-Y que se autoelimina. Como otro ejemplo, la reducción de V1 que es un grupo nitro puede conducir a la formación de un resto para u orto-aminobenciloxicarbonilo V1-Y que se autoelimina. Como alternativa de nuevo, V1 puede estar ausente. En este caso, se pretende que el prorresto no se pueda retirar de Z y todo el prorresto o una parte del mismo (en caso de degradación de un compuesto de fórmula (III) o(IV) a
35 otros uno o más sitios en la molécula) permanecerá conectado al uno o más restos Z. Un modo alternativo para ver esto es que la parte del prorresto que permanece unida al resto Z es de hecho una parte del resto Z. Un compuesto de la presente invención puede contener más de un resto V1 por prorresto (p y / o q > 1). Estos restos V1 pueden ser o no los mismos y pueden necesitar o no las mismas condiciones para transformación y / o escisión. La tasa a la que se transforma y / o escinde V1 puede depender de los otros restos en un compuesto de fórmula (III). Por ejemplo, el uso de un resto L y/o Y más corto puede llevar al resto funcional y / o Z más cerca del sitio de escisión, lo que puede conducir a una reducción de la tasa de transformación y / o escisión. Los sustituyentes (voluminosos) en el resto L y/o Y también pueden conducir a una reducción de la tasa de transformación y / o escisión de V1, especialmente cuando están situados cerca del sitio de transformación / escisión. Otros efectos, tales
45 como enlace de hidrógeno, grupo vecinal, y efectos electrónicos, también pueden desempeñar un papel. En un aspecto de la presente invención, un conjugado se usa para dirigir uno o más restos Z a células diana. En este caso, un resto V1 puede contener por ejemplo una molécula de sustrato que se escinde mediante una enzima presente en la proximidad de las células diana o dentro de las células diana, por ejemplo células tumorales. Por ejemplo, V1 puede contener un sustrato que se escinde con una enzima presente a niveles elevados en la proximidad de o dentro de las células diana en comparación con otras partes del organismo, o mediante una enzima que está presente solamente en la proximidad de o dentro de las células diana. Es importante reconocer que si la especificidad del sitio diana se consigue solamente basándose en la transformación y / o escisión selectiva de dicho V1 en el sitio diana, la condición que causa la escisión debería ser específica preferentemente, al menos hasta un cierto grado, del sitio diana, mientras que la presencia de otro resto
55 específico de diana en el compuesto de la invención, por ejemplo en un resto V2, debilita o elimina este requisito. Por ejemplo, cuando V2 causa una internalización selectiva en una célula diana, una enzima también presente en otras células puede transformar y / o escindir V1. No obstante, preferentemente, la escisión no se debería producir en un sitio alejado del sitio diana. Por lo tanto, el conjugado no se debería exponer a enzimas o condiciones que puedan causar la escisión de V1 en sitios distintos del sitio diana. En una realización, la transformación y / o escisión de V1 se produce por vía intracelular. En otra realización, la transformación y / o escisión de V1 se produce por vía extracelular. En otra realización, la transformación y / o escisión de V1 se produce mediante una enzima intracelular ubicua. En otra realización, la transformación y / o escisión de V1 se produce mediante una enzima extracelular ubicua. En una realización, V1 contiene un aminoácido individual, un di, tri, tetra, u oligopéptido, o un peptidomimético, que
65 consiste en un aminoácido o secuencia de aminoácidos o mimético de los mismos reconocido y que se puede prescindir con una enzima proteolítica, por ejemplo plasmina, una catepsina, catepsina B, antígeno específico de
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5 Cuando V1 se escinde por vía extracelular, el uno o más restos Z se puede liberar por vía extracelular. Esto puede proporcionar la ventaja de que estos restos Z no son solamente capaces de influir en la célula o células que rodean directamente el sitio de activación (por ejemplo, células positivas para diana), sino también a las células que en cierto modo están más alejadas del sitio de activación (por ejemplo, células negativas para diana) debido a difusión (efecto espectador), con la condición de que los restos Z sean capaces de penetrar la membrana celular. Una enzima para escindir V1 también se fue de transportar a la cercanía de o dentro de las células diana o tejido diana a través de, por ejemplo, terapia enzimática con profármacos dirigidos por anticuerpo (ADEPT), terapia enzimática con profármacos dirigidos por polímeros (PDEPT), terapia enzimática con profármacos dirigida por macromoléculas (MDEPT), terapia enzimática con profármacos dirigida por virus (VDEPT), o terapia enzimática con profármacos dirigida por genes (GDEPT). En estos enfoques, la enzima que necesita escindirse de V1 se transporta
15 o se induce para que se produzca en el sitio diana antes de la administración del profármaco, por ejemplo, un compuesto de fórmula (III) o(IV). En una realización, la transformación y / o escisión de V1 se produce a través de una enzima unida a un anticuerpo usando el enfoque de ADEPT. En una realización, cuando el grupo α-amino del aminoácido N-terminal de V1 no se acopla a L, este aminoácido se puede funcionalizar con un grupo de bloqueo adecuado acoplado al grupo α-amino o puede ser un aminoácido no natural de modo que se evita la degradación prematura no deseada de V1 por ejemplo mediante enzimas ubicuas, por ejemplo, exopeptidasas. Un grupo de bloqueo de este tipo puede ser cualquier grupo que evite o que retrase de forma considerable la degradación prematura de V1 . Los ejemplos de tal grupo de bloqueo incluyen un Daminoácido, un grupo acetilo, un grupo terc-butiloxicarbonilo, y un oligoetileno o polietilenglicol. En una realización más, V1 se selecciona de entre D-alanilfenilalanillisina, D-valilleucillisina, D-alanilleucillisina, D
25 valilfenilalanillisina, D-valiltriptofanillisina, D-alaniltriptofanillisina, alanilfenilalanillisina, valilleucillisina, alanilleucillisina, valilfenilalanillisina, valiltriptofanillisina, alaniltriptofanillisina, D-alanilfenilalanilcitrulina, D valilleucilcitrulina, D-alanilleucilcitrulina, D-valilfenilalanilcitrulina, D-valiltriptofanilcitrulina, D-alaniltriptofanilcitrulina, alanilfenilalanilcitrulina, valilleucilcitrulina, alanilleucilcitrulina, valilfenilalanilcitrulina, valiltriptofanilcitrulina, y alaniltriptofanilcitrulina. En otra realización más, V1 se selecciona de entre fenilalanillisina, valillisina, valilalanina, D-fenilalanilfenilalanillisina, fenilalanilfenilalanillisina, glicilfenilalanillisina, alanillisina, valilcitrulina, N-metilvalilcitrulina, fenilalanilcitrulina, isoleucilcitrulina, triptofanillisina, triptofanilcitrulina, fenilalanilarginina, fenilalanilalanina, glicilfenilalanilleucilglicina, alanilleucilalanilleucina, alanilarginilarginina, fenilalanil-N9-tosilarginina, fenilalanil-N9-nitroarginina, leucillisina, leucilcitrulina y fenilalanil-O-benzoiltreonina.
35 En una realización más, V1 se selecciona de entre fenilalanillisina, valillisina, y valilcitrulina. Además como en otras realizaciones, V1 es fenilalanillisina o valillisina o valilcitrulina. Por lo tanto, en una realización, la presente invención se refiere a un compuesto en el que V1 contiene un sustrato que se puede escindir con una enzima proteolítica, plasmina, una catepsina, catepsina B, β-glucuronidasa, una galactosidasa, antígeno específico de próstata (PSA), activador de plasminógeno de tipo uroquinasa (u-PA), un miembro de la familia de metaloproteinasas de matriz, o una enzima localizada por medio de terapia enzimática con profármacos dirigida, tal como ADEPT, VDEPT, MDEPT, GDEPT, o PDEPT, o en el que V1 contiene un resto que se puede escindir o transformar a través de reducción en condiciones de hipoxia, a través de reducción mediante una nitrorreductasa, o a través de oxidación.
45 Si un conjugado de la presente invención contiene más de 1 prorresto, uno de estos prorrestos se puede usar para dirigir el conjugado a un sitio diana (prorresto de dirección), mientras que otro prorresto se usa para mejorar las propiedades farmacológicas. En este caso, el resto V1 en el de prorresto dirección se escinde preferentemente en el sitio habían, por ejemplo a través de un proceso específico de sitio diana tal como una escisión enzimática mediante una enzima presente predominantemente en el sitio diana o a través de un proceso intracelular más genérico que solamente se puede producir después de la internalización selectiva de célula diana del conjugado, mientras que el prorresto que ayuda a mejorar las propias farmacológicas se puede escindir ya sea en el sitio diana o por vía sistémica, por ejemplo mediante enzimas ubicuas.
Los compuestos de fórmulas (III) y(IV) se pueden diseñar para que opcionalmente liberen un compuesto de fórmula
55 (I), o un compuesto de fórmula (I’), después de la transformación y / o escisión del uno o más restos V1. La liberación de un compuesto de fórmula (I), un compuesto de fórmula (I’), o un derivado de los mismos (por ejemplo debido solamente a la degradación parcial del prorresto) a partir de un conjugado de la presente invención a través de otro mecanismo no obstante no está excluida de la presente invención.
El sistema espaciador de autoeliminación Y
El sistema espaciador de autoeliminación Y une a V1 y opcionalmente a L a uno o más restos Z,o RM2 en el caso de un compuesto de fórmula (VIII).
65 Un sistema espaciador de autoeliminación Y se puede incorporar en un conjugado de la presente invención por ejemplo para mejorar las propiedades de Z o del conjugado en general, para proporcionar químicas de acoplamiento Un compuesto de la presente invención puede contener más de un sistema espaciador Y por prorresto. Estos restos Y pueden ser o no los mismos.
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5 Después de la escisión o transformación de V1, helado en la parte izquierda de Y puede llegar a no está bloqueado o se puede formar un resto de autoeliminación V1-Y, que da como resultado una liberación opcional de uno o más restos Z.
Los sistemas espaciadores de autoeliminación pueden ser, por ejemplo los que se describen en los documentos WO 02/083180 y WO 2004/043493, los que se describen en esta sección, así como otros espaciadores de autoeliminación conocidos por un experto en la materia.
El resto Y puede, además de proporcionar químicas de acoplamiento adecuadas y creación de espacio entre el sitio
15 de escisión y Z, ayudar a mejorar las propiedades farmacológicas del conjugado. Por ejemplo, la presencia de un resto o sustituyente soluble en agua, tal como un resto de polietilenglicol o un sustituyente que está cargado, al menos parcialmente, a pH fisiológico puede contribuir a la solubilidad en agua y / o a aumentar la estabilidad en el almacenamiento y / o estabilidad en plasma del conjugado.
En un aspecto la invención se refiere a compuestos en los que Y es
(W-)w(X-)x(A-)s,
en el que
25 W y X son cada uno un espaciador de cascada electrónica 1,2 + 2n (n ≥ 1) de liberación individual, que son iguales o diferentes; A es un espaciador de ciclado de ω-amino aminocarbonilo que forma un derivado de urea cíclica después del ciclado; s es 1; w y x son números que representan el grado de polimerización y son independientemente un número entero de 0 (incluido) a 5 (incluido).
En una realización, w + x es 0, 1 o 2. En otra realización más, s es 1. En otra realización más, w + x es 1 o 2 y s es
35 1. En otra realización más, w + x es 1 y s es 1. En otra realización más, w es 1, x es 0, y s es 1.
En otra realización, el espaciador de cascada electrónica 1,2 + 2n W o X es
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De acuerdo con una realización adicional de la presente invención, el espaciador A de eliminación de ciclado de ωamino aminocarbonilo es un resto que tiene la fórmula:
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45
en la que
u es un número entero de 0 o 1; R115, R116, R117, R118, R119, R120, R121, y R122 se seleccionan independientemente de entre H, OH, SH, NH2, N3, NO2, NO, CF3, CN, C(O)NH2, C(O)H, C(O)OH, halógeno, Rz, SRz, S(O)Rz, S(O)2Rz, S(O)ORz, S(O)2ORz, OS(O)Rz, OS(O)2Rz, OS(O)ORz, OS(O)2ORz, ORz, NHRZ, N(Rz)Rz1, +N(Rz)(Rz1)Rz2, P(O)(ORz)(ORz1), OP(O)(ORz)(ORz1), C(O)Rz, C(O)ORz, C(O)N(RZ1)RZ, OC(O)Rz, OC(O)ORz, OC(O)N(Rz)Rz1, N(Rz1)C(O)Rz, N(Rz1)C(O)ORz, y N(Rz1)C(O)N(Rz2)Rz, en los que Rz, Rz1, y Rz2 se seleccionan independientemente de entre H y (CH2CH2O)eeCH2CH2X13Re1, alquilo C1-20, heteroalquilo C1-20, cicloalquilo C3-20, heterocicloalquilo C1-20, arilo C5-20,
55 o heteroarilo C1-20 opcionalmente sustituidos, en el que ee se selecciona de 1 a 1000, X13 se selecciona de entre O, S y NRf1, y Rf1 y Re1 se seleccionan independientemente de entre H y alquilo C1-3, dos o más de Rz, Rz1, y Rz2
estando unidos opcionalmente mediante uno o más enlaces para formar uno o más carbociclos y / o heterociclos opcionalmente sustituidos, dos o más de los sustituyentes R115, R116, R117, R118, R119, R120, R121, y R122 estando
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R115 y R116 son grupos sustituyentes que se sitúan en los átomos de nitrógeno que forman parte de las uniones a los
5 restos adyacentes al espaciador de eliminación de ciclado de ω-amino aminocarbonilo en un compuesto de fórmula (III), (IV),o(VIII). El R116 que porta nitrógeno está conectado a Z o RM2 a través de un resto carbonilo. El R115 que porta el átomo de nitrógeno está conectado a W, X, V1,o L. El tamaño y la naturaleza de los sustituyentes R115 y R116 pueden, además de influir en las propiedades farmacológicas de un compuesto de fórmula (III), (IV),o(VIII) en general, influir especialmente en la estabilidad de dichas uniones de conexión. Por ejemplo, la elección de R116 para
10 que sea un sustituyente pequeño puede hacer por lo general que la unión a Z sea menos estable a la hidrólisis o degradación enzimática y cuando R116 es un sustituyente más voluminoso (por ejemplo, un sustituyente que está ramificado en el carbono α o β con respecto al átomo de nitrógeno). La naturaleza del sustituyente R116, por ejemplo, ya sea polar o apolar o no cargado a pH fisiológico, puede influir también en la estabilidad de la unión a Z, porque el sustituyente puede influir en las propiedades del sustrato de la unión de conexión para enzimas específicas o
15 retrasar o aumentar la tasa de hidrólisis. Si la unión de conexión es susceptible a enzimas que están presentes de forma ubicua, por ejemplo enzimas presentes en la circulación, esto puede causar una degradación prematura del conjugado. Lo mismo se mantiene para el sustituyente R115 con respecto a la unión de conexión a W, X, V1,o L. De forma análoga, los sustituyentes en los carbonos unidos directamente a los átomos de nitrógeno (R117, R118, R119 , R121, y R122) pueden contribuir a la estabilidad de las uniones de conexión.
20 Los sustituyentes R115 y R116 también pueden influir en la tasa de ciclado del espaciador A de eliminación de ciclado de ω-amino aminocarbonilo. Los sustituyentes voluminosos pueden impedir el ciclado y de este modo reducir por lo general la tasa de ciclado. Por lo tanto, los sustituyentes pequeños pueden en general ser favorables para tasas de ciclado rápidas. No obstante, otras propiedades del sustituyente, tales como electronegatividad, polaridad, y
25 disponibilidad de grupos donantes y / o aceptores de enlace de hidrógeno, también pueden influir en la tasa de ciclado. Además, si solamente uno de R115 y R116 es un sustituyente voluminoso, la tasa de ciclado puede aumentar con respecto a los espaciadores de ciclado que contienen dos sustituyentes no voluminosos, posiblemente debido a la cepa B. La tasa de ciclado también se puede ver afectada por los otros sustituyentes en el espaciador de eliminación de ciclado de ω-amino aminocarbonilo. Las propiedades de estos sustituyentes tales como polaridad,
30 electronegatividad, y capacidades de formación de enlaces de hidrógeno, pueden tener un efecto en la tasa de ciclado. Además, la presencia de sustituyentes geminales en uno de los carbonos entre los dos átomos de nitrógeno también puede aumentar la tasa de ciclado (efecto de Thorpe-Ingold). La reunión de sustituyentes para formar uno o más anillos también puede tener un efecto en la tasa de ciclado. En este sentido, cada modificación de puede poner los dos átomos de nitrógeno juntos de la forma más próxima o que reduce la entropía puede tener un efecto de
35 aceleración en la tasa de ciclado.
Los efectos en la tasa de ciclado pueden depender del pH y el orden de la tasa de ciclado de dos espaciadores de eliminación de ciclado de ω-amino aminocarbonilo se puede invertir desplazándose de, por ejemplo, pH 7 a pH 5.
40 A pesar de que en ciertos casos para un conjugado de la presente invención puede ser beneficioso tener un espaciador de eliminación de ciclado de ω-amino aminocarbonilo con una tasa de ciclado rápida, liberando de este modo el fármaco activo poco después de la escisión de V1, en otros casos, puede ser más beneficioso tener un espaciador de eliminación de ciclado de ω-amino aminocarbonilo que tenga una tasa de ciclado lenta o una tasa de ciclado que permanezca entre dos límites determinados previamente o que se cicle preferentemente a una tasa
45 rápida solamente dentro de ciertos límites de pH. Esto puede hacer que el compuesto intermedio de espaciador de ciclado -fármaco permanezca durante cierto periodo de tiempo como un profármaco que liberará el fármaco lentamente o después de haber satisfecho una cierta condición.
En otras realizaciones, el conector de ciclado A es 50
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En otra realización, la presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (III) o(IV) en la que X1 es O e Y está conectado a X1 a través de un espaciador de ciclado de ω-amino aminocarbonilo que forma parte de Y.
En otra realización, el sistema espaciador Y es en el que A se selecciona de entre
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En un conjugado de la presente invención, un sistema espaciador Y se puede conectar a más de un resto V1. En este caso, la transformación y / o escisión de uno de estos restos V1 puede desencadenar la liberación de uno o más restos Z. Cuando los restos V1 que se transforman o escinden en diferentes condiciones están conectados al mismo
10 Y, la liberación de un resto Z se puede producir cuando un conjugado de la presente invención se lleva a una de varias condiciones distintas si Y puede experimentar autoeliminación de múltiples maneras.
El grupo de unión L
15 El grupo de unión L une uno o más restos V1 y/o Y a L2 o RM. La síntesis puede ser más sencilla cuando L está conectado a V1 en lugar de Y, y el compuesto puede ser menos propenso a una degradación prematura ya que V1 puede estar más protegido. La conexión de L a Y puede tener la ventaja de que V1 se pueda transformar y / o escindir con más facilidad. Otras razones para conectar L a Y pueden ser, por ejemplo, que (parte de) Y permanezca unido a L después de la escisión de V1, lo que evita la liberación de moléculas pequeñas reactivas, y
20 que el compuesto puede presentar un aumento de las propiedades farmacológicas, solubilidad, o comportamiento de agregación. L puede estar ausente, lo que significa que V1 o Y está conectado directamente a cualquiera de L2 o RM. En otro aspecto, no obstante, L es un grupo de unión que de forma funcional une o genera espacios en uno o más restos V1 y/o Y, y el resto L2 o RM. En un compuesto de fórmula (IV), el espaciado puede hacer que el resto reactivo RM sea más accesible a un compañero de reacción, por ejemplo cuando el resto funcional V2 se está
25 acoplando. En un compuesto de fórmula (III), el espaciador puede proporcionar una mejor accesibilidad de V1 , porque V2 está bastante alejado, lo que, especialmente en el caso de escisión o transformación enzimática de V1 , puede mejorar la tasa a la que se transforma y / o escinde V1. No obstante, se encontró que un resto L relativamente corto puede mejorar la eficacia in vivo de un compuesto de fórmula (III) en comparación con compuestos similares con un resto L relativamente largo, con la condición de que V1 aún se pueda transformar y / o escindir en el sitio
30 diana.
El grupo de unión L debe contener grupos funcionales adecuados en ambos de sus extremos para proporcionar un acoplamiento selectivo con el uno o más restos V1 y/o Y y L2 o RM.
35 El grupo de unión L puede ser un resto soluble en agua o puede contener uno o más restos solubles en agua o grupos funcionales solubles en agua, de modo que L contribuye a la solubilidad en agua de un compuesto de fórmula (III) o(IV). L también puede ser un resto o puede contener uno o más restos que reduce(n) la agregación de un compuesto de fórmula (III) o(IV), pueden ser o no un resto / restos que también aumenta(n) la solubilidad en agua de un compuesto de fórmula (III) o(IV). Además, L también puede contener o puede ser un resto que hace que
40 un compuesto de fórmula (III) o(IV) sea menos susceptible a una respuesta inmunológica o aumente el eflujo de células mediante proteínas transportadoras asociadas a resistencia a múltiples fármacos. El resto L puede contener un resto de oligoetilenglicol o polietilenglicol o un derivado del mismo. Este resto puede aumentar, por ejemplo, la solubilidad en agua, reducir la agregación, reducir la respuesta inmunológica, y / o reducir el eflujo de células de un compuesto de fórmula (III) o(IV). L puede contener, por ejemplo, un resto -(CH2CH2O)ffCH2CH2X13-o
45 (CH2CH2O)eeCH2CH2X13Rel, en el que ff se selecciona de 1 a 1000, X13 se selecciona de entre O, S y NRf1, y Rf1 y Re1 se seleccionan independientemente de entre H y alquilo C1-3. En una realización, un resto de este tipo es parte de un sustituyente unido a la cadena principal de L que conecta RM o L2 a V1 y que no está presente en la cadena principal de L por sí mismo para mantener una longitud de la cadena principal relativamente corta. El resto L también debe contener grupos polares y / o grupos que están cargados, al menos parcialmente, a pH fisiológico para
50 mejorar las propiedades farmacológicas de un compuesto de fórmula (III) o(IV).
En una realización, L se selecciona de entre
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5 El resto reactivo RM y el grupo de unión L2
El resto reactivo RM en un compuesto de fórmula (IV) está conectado al grupo de unión L y es capaz de reaccionar con un grupo funcional adecuado en un compañero de reacción.
10 En una realización de la presente invención, el resto reactivo RM se diseña para que reaccione con un grupo funcional en el resto V2, que da como resultado la formación de un compuesto de fórmula (III). En esta reacción, el resto RM se transforma en el resto L2. En otra realización, el resto reactivo RM se diseña para que reaccione con un resto complementario in situ, por ejemplo, in vivo, por ejemplo con albúmina de suero, para dar un compuesto que puede ser o no un compuesto de fórmula (III).
15 En un aspecto de la presente invención, el resto reactivo RM contiene un grupo electrófilo que reacciona con un grupo neutrófilo en el compañero de reacción, por ejemplo V2, por ejemplo, un grupo tiol, un grupo amino, o un grupo hidroxi. En otra realización, el resto RM es
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lo que lo hace capaz de reaccionar con un grupo tiol en el compañero de reacción, por ejemplo el resto V2 .
El grupo de unión L2 en un compuesto de fórmula (III) representa el resto de RM cuando el resto reactivo RM ha
25 reaccionado con V2. A continuación con este grupo une el resto V2 con L. El grupo que permanece puede ser un enlace, lo que significa que L2 está ausente. No obstante, por lo general, L2 es un grupo de unión. Cuando se forma un compuesto de fórmula (III) de una manera distinta que a través de un compuesto de fórmula (IV), L2 no representa el resto de RM, pero puede representar un resto similar a un mismo puesto y además se puede seleccionar de entre, por ejemplo, alquileno C1-10, heteroalquileno C1-10, cicloalquileno C3-10, heterocicloalquileno
30 C1-10, arileno C5-10, y heteroarileno C1-10 opcionalmente sustituidos. El resto L2 puede comprender opcionalmente un resto X14CH2CH2O)ggCH2CH2X14 . En una realización, el resto L2 es
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35
El resto RM2
RM2 puede ser un resto reactivo o un grupo saliente. Si RM2 es un resto reactivo, este es preferentemente diferente al resto reactivo RM. De este modo, las reacciones
40 con el conector bifuncional se pueden realizar de forma selectiva y de forma individual con cada uno de los restos reactivos. Cuando RM2 es un resto reactivo, esto significa que después de la reacción con un resto terapéutico o de diagnóstico o un derivado del mismo que contiene prorresto, el resto RM2 (o lo que queda del mismo después de la reacción) puede llegar a formar parte de dicho resto terapéutico o de diagnóstico o un derivado del mismo que contiene prorresto opcionalmente junto con cualquier parte de Y que puede no autoeliminarse debido a una
45 capacidad de salida limitada o ausente de RM2 conjugado con resto terapéutico o de diagnóstico. En una realización, el resto RM2 se puede conectar a Y, y puede ser
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en los que
10 X35 se selecciona de entre haluro, hidroxi, OC(O)Rdd, y OC(O)ORdd, o C(O)-X35 es un éster activo, X36 se selecciona de entre haluro, mesiloxi, trifliloxi, y tosiloxi, X95 es cualquier área ausente o se selecciona de entre O, S, NR95 , alquilo C1-3, y heteroalquilo C1-3, Rdd se selecciona de entre alquilo C1-10, heteroalquilo C1-10, cicloalquilo C3-10, heterocicloalquilo C1-10, arilo C5-10, y heteroarilo C1-10 opcionalmente sustituidos, y R95 se selecciona de entre H y alquilo C1-3.
15 RM2 también puede ser un grupo saliente. En este caso, RM2 se sustituye con el resto terapéutico o de diagnóstico
o un derivado del mismo que contiene prorresto en una reacción de un compuesto de fórmula (VIII) con un resto terapéutico o de diagnóstico o un derivado del mismo de este tipo y este resto terapéutico o de diagnóstico o un derivado del mismo se llega a unir directamente a Y.
20 En una realización, RM2 se selecciona de entre un haluro (fluoruro, cloruro, bromuro, e yoduro), azida, un sulfonato (por ejemplo, un alcanosulfonato C1-6 opcionalmente sustituido, tal como metanosulfonato, trifluorometanosulfonato, y trifluoroetanosulfonato, o un bencenosulfonato opcionalmente sustituido, tal como p-toluenosulfonato y nosilato), imidazol, una tiona de imida cíclica, N-óxido de succinimida, N-óxido de ftalimida, p-nitrofenóxido, o-nitrofenóxido, pentafluorofenóxido, tetrafluorofenóxido, 1,3,5-triclorofenóxido, 1,3,5-trifluorofenóxido, un carboxilato, un
25 aminocarboxilato (carbamato), un alcoxicarboxilato (carbonato), y un grupo alcoxi que junto con el grupo carbonilo de Y se puede denominar un grupo éster activo. Tales grupos alcoxi incluyen, pero no se limitan a, N-óxido de succinimida, p-nitrofenóxido, pentafluorofenóxido, tetrafluorofenóxido, 1-hidroxibenzotriazol, y 1-hidroxi-7azabenzotriazol, y grupos con capacidad de salida comparable.
30 El resto V2
El resto V2 es un resto funcional, lo que significa que añade una funcionalidad tradicional a un compuesto de la invención. En una realización, V2 es un resto de dirección. En otra realización, el resto V2 es un resto que mejora las
35 propiedades farmacológicas de un compuesto de la invención. En otra realización más, el resto V2 es un resto que causa la acumulación de un compuesto de la invención en el sitio diana. En otra realización más, el resto V2 es un resto que mejora la solubilidad acuosa de un compuesto de la invención. En otra realización más, el resto V2 es un resto que aumenta la hidrofobia de un compuesto de la invención. En otra realización más, el resto V2 es un resto que reduce la extravasación de un compuesto de la invención. En otra realización más, el resto V2 es un resto que
40 reduce la excreción de un compuesto de la invención. En otra realización más, el resto V2 es un resto que reduce la inmunogenicidad de un compuesto de la invención. En otra realización más, el resto V2 es un resto que aumenta el tiempo de circulación de un compuesto de la invención. En otra realización más, el resto V2 es un resto que aumenta la capacidad de un compuesto de la invención para cruzar una barrera biológica, por ejemplo, una membrana, pared celular, o la barrera hematoencefálica. En otra realización más, el resto V2 es un resto que aumenta la capacidad de
45 un compuesto de la invención para internalizarse. En otra realización más, el resto V2 es un resto que permite que un compuesto de la invención se internalice. En otra realización más, el resto V2 es un resto que hace que los compuestos de la invención se agreguen. En otra realización más, el resto V2 es un resto que reduce la agregación de un compuesto de la invención. En otra realización más, el resto V2 es un resto que hace que un compuesto de la invención forme micelas o liposomas. En otra realización más, el resto V2 es un resto que causó la formación de
50 complejos de un compuesto de la invención con otra molécula, por ejemplo, una biomolécula. En otra realización más, el resto V2 es un resto de polinucleótido que forma complejos con una secuencia de nucleótidos complementaria, por ejemplo ARNm o ADN. En otra realización más, el resto V2 es un resto que hace que un compuesto de la invención se una, asocie, interactúe, o forma complejos con otro resto, por ejemplo una superficie (funcionalizada) o soporte sólido.
55 En otra realización, V2 presenta dos o more funciones diferentes. El resto V2 puede ser, por ejemplo un resto de dirección y al mismo tiempo mejorar las propiedades farmacológicas, incluyendo la solubilidad en agua.
En un aspecto de la invención, el resto V2 incluye dentro de su alcance cualquier unidad que se una o se asocie de forma reactiva o forma complejos con un receptor, un complejo receptor, antígeno, u otro resto asociado con una de 60 población de células diana dada. V2 puede ser cualquier molécula que se una a, forme complejos con, o reaccione con un resto de una población de células que se desea que modificar de forma terapéutica o de otro modo de forma biológica. El resto V2 actúa para suministrar el uno o más restos Z a la población de células diana en particular con la
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que reacciona V2 o a la que se une V2. Tales restos V2 incluyen, pero no se limitan a, aptámeros, anticuerpos de longitud completa y fragmentos de anticuerpo y derivados de los mismos, lectinas, modificadores de la respuesta biológica, enzimas, vitaminas, factores de crecimiento, esteroides como nutrientes, restos de azúcar, restos de oligosacárido, hormonas, y cualquier derivado de los mismos, o cualquier combinación de cualquiera de estos.
5 Después de la unión, asociación de forma reactiva, o formación de complejos, los compuestos de la invención pueden o no internalizarse. Si se produce internalización, transformación y / o escisión de V1 se produce preferentemente dentro de la célula diana.
Los restos V2 de anticuerpo policlonal útiles son poblaciones heterogéneas de moléculas de anticuerpo. Diversos procedimientos bien conocidos en la técnica se pueden usar para la producción de anticuerpos policlonal para un antígeno de interés. Los restos V2 de anticuerpo monoclonal útiles son poblaciones homogéneas de anticuerpos de un anticuerpo en particular (por ejemplo, un antígeno de célula cancerosa). Un anticuerpo monoclonal (mAb) para un antígeno de interés se puede preparar usando cualquier técnica conocida en la técnica que proporcione la producción de
15 moléculas de anticuerpo monoclonal. Los restos de anticuerpo monoclonal V2 útiles incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos monoclonales humanos, anticuerpos monoclonales humanizados, o anticuerpos monoclonales humano-ratón quiméricos (u otras especies). Los anticuerpos monoclonales se pueden preparar mediante cualquiera de numerosas técnicas conocidas en la técnica. El resto V2 también puede ser un resto biespecífico. En la técnica se conocen algunos métodos para preparar anticuerpos biespecíficos. El resto V2 puede ser un fragmento, derivado o análogo funcionalmente activo de un anticuerpo que se une de forma inmunoespecífica a un antígeno en una célula diana, por ejemplo, un antígeno de célula cancerosa. En este sentido, “funcionalmente activo” significa que el fragmento, derivado o análogo es capaz de provocar anticuerpos anti-anti
25 idiotipo que reconocen el mismo antígeno que reconoce el anticuerpo a partir del que se obtiene el fragmento, derivado o análogo. Otros restos V2 útiles comprenden fragmentos de anticuerpos que incluyen, pero no se limitan a, fragmentos de F(ab’)2, que contienen la región variable, la región constante de cadena ligera, y el dominio CH1 de la cadena pesada, que se puede producir mediante digestión con pepsina de la molécula de anticuerpo, y fragmentos de Fab, que se pueden generar mediante la reducción de los puentes disulfuro de los fragmentos de F(ab’)2. Otros restos V2 útiles son dímeros de anticuerpos de cadena pesada y de cadena ligera, o cualquier fragmento mínimo de los mismos tal como Fvs o anticuerpos de una sola cadena (SCA), anticuerpos de dominio, anticalinas, aficuerpos, nanocuerpos, y cualquier otra molécula con una especificidad igual, similar, o comparable a la del anticuerpo precursor.
35 Además, los anticuerpos recombinantes, tales como anticuerpos monoclonales quiméricos y humanizados, que comprenden partes tanto humanas como no humanas, que se pueden preparar usando técnicas convencionales de ADN recombinante, son restos V2 útiles. Un anticuerpo quimérico es una molécula en la que diferentes partes se obtienen a partir de diferentes especies animales, tales como las que tienen una región variable obtenida de una región constante monoclonal murina y una región constante de inmunoglobulina humana. Los anticuerpos humanizados son moléculas de anticuerpo de especies no humanas que tienen una o más regiones determinantes de la complementariedad (CDR) de la especie no humana y una región marco conservada de una molécula de inmunoglobulina humana. Los anticuerpos completamente humanos son particularmente deseables como restos V2 . Tales anticuerpos se
45 pueden producir por ejemplo usando ratones transgénicos que son incapaces de expresar genes de cadenas pesada y ligera de inmunoglobulina endógenos, pero que pueden expresar genes de cadena pesada y ligera humanos. En otras realizaciones, el resto V2 es una proteína de fusión de un anticuerpo, o un fragmento funcionalmente activo
o derivado del mismo, por ejemplo uno en el que el anticuerpo se fusiona a través de un enlace covalente (por ejemplo, es un enlace peptídico) en cualquiera del extremo N-terminal o del extremo C-terminal con respecto a una secuencia de aminoácidos de otra proteína (o parte de la misma, preferentemente una parte de la proteína de al menos a 10, 20, o 50 aminoácidos) que no es el anticuerpo. Preferentemente, el anticuerpo o fragmentos del mismo se une covalente mentía la otra proteína en el extremo N-terminal del dominio constante. Los anticuerpos del resto V2 incluyen análogos y derivados que están modificados, es decir, mediante la unión
55 covalente de cualquier tipo de molécula siempre y cuando tal unión covalente permita que el anticuerpo retenga su inmunoespecificidad de unión a antígeno. Por ejemplo, pero no a modo de limitación, los derivados y análogos de anticuerpos incluyen los que se han modificado adicionalmente, por ejemplo, mediante glicosilación, acetilación, pegilación, reducción de disulfuro, fosfilación, amidación, derivatización con grupos de o de bloqueo conocidos, escisión proteolítica, unión a otra proteína, etc. Además, el análogo derivado puede contener uno o más aminoácidos no naturales. Los anticuerpos del resto V2 incluyen anticuerpos que tienen modificaciones (por ejemplo, sustituciones (por ejemplo cisteína a serina o serina a cisteína), deleciones o adiciones). En particular, estos incluyen anticuerpos que tienen modificaciones en resto de aminoácidos identificados como implicados en la interacción entre el dominio Fc y el receptor FcRn. También se pueden introducir modificaciones para poder acoplar el anticuerpo a conjugados de
65 conector -agente en posiciones específicas en el anticuerpo. En una realización específica, un anticuerpo inmunoespecífico para un antígeno de cáncer o tumor se usa como un
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5 antígeno de célula cancerosa se pueden obtener, por ejemplo, a partir de la base de datos de GenBank o una base de datos similar a la misma, una fuente comercial u otra fuente, publicaciones de bibliografía, o mediante clonación y secuenciación de rutina. Los ejemplos de anticuerpos disponibles para el tratamiento del cáncer que pueden ser útiles para su incorporación en conjugados de la presente invención como un resto V2 incluyen, pero no se limitan a, HERCEPTIN (trastuzumab), que es un anticuerpo monoclonal anti-HER2 humanizado para el tratamiento de pacientes con cáncer de mama metastásico; RITUXAN (rituximab), que es un anticuerpo monoclonal anti-CD20 quimérico para el tratamiento de pacientes con linfoma no Hodgkin; OvaRex (oregovomab), que es un anticuerpo murino para el tratamiento de cáncer de ovario; Panorex (edrecolomab), que es un anticuerpo IgG2a murino para el tratamiento de cáncer colorrectal; IMC-BEC2 (mitumomab), que es un anticuerpo IgG murino para el tratamiento de cáncer de pulmón;
15 IMC-C225 (erbitux), que es un anticuerpo IgG quimérico para el tratamiento de cáncer de cabeza y cuello; Vitaxin, que es un anticuerpo humanizado para el tratamiento del sarcoma; Campath I/H (alemtuzumab), que es un anticuerpo IgG1 humanizado para el tratamiento de leucemia linfocítica crónica (CLL); SGN-70, que es un anticuerpo anti-CD70 humanizado para el tratamiento de neoplasias hematológicas; Smart MI95, que es un anticuerpo IgG humanizado para el tratamiento de leucemia mieloide aguda (AML); J591, que es un anticuerpo humanizado frente a antígeno de membrana específica de próstata; LymphoCide (epratuzumab), que es un anticuerpo IgG humanizado para el tratamiento de linfoma no Hodgkin; SGN-33, que es un anticuerpo anti-CD33 humanizado para el tratamiento de leucemia mieloide aguda; Smart ID 10, que es un anticuerpo humanizado para el tratamiento de linfoma no Hodgkin; Oncolym, que es un anticuerpo murino para el tratamiento de linfoma no Hodgkin; Allomune, que es un mAb anti-CD2 humanizado para el tratamiento de enfermedad de Hodgkin o linfoma no Hodgkin; Avastin
25 (bevacizumab), que es un anticuerpo anti-VEGF humanizado para el tratamiento de cánceres de pulmón y colorrectal; SGN-40, que es un anticuerpo anti-CD40 humanizado para el tratamiento de mieloma múltiple; SGN-30, que es un anticuerpo anti-CD30 quimérico para el tratamiento de la enfermedad de Hodgkin; CEAcide, que es un anticuerpo anti-CEA humanizado para el tratamiento de cáncer colorrectal; IMC-1C11, que es un anticuerpo quimérico anti-KDR para el tratamiento de cáncer colorrectal, cánceres de pulmón, y melanoma; y Cetuximab, que es un anticuerpo quimérico anti-EGFR para el tratamiento de cánceres positivos para factor de crecimiento epidérmico. Otros anticuerpos que pueden ser útiles para su incorporación en conjugados de la presente invención como un resto V2 incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos frente a los siguientes antígenos: CA125, CA9, CA6, CA15-3, CA19-9, L6, Lewis Y, Lewis X, Lewis A, alfa fetoproteína, CA 242, fosfatasa alcalina de placenta, antígeno específico
35 de próstata (PSA), antígeno de membrana específico de próstata (PSMA), fosfatasa ácida prostática, receptores del factor de crecimiento epidérmico, receptores de interleuquina, integrinas, receptores del factor de crecimiento de tipo insulínico, CanAg, DAF, PEM, IRTA-2, IRTA-4, AFP, HER2, EGFR, VEGFR1, VEGFR2, MAGE-1, LUCA1, LUCA2, MAGE-2, MAGE-3, MAGE-4, ED-B, MADCAM, CEACAM5, MCP-1, Cripto, TAT226, VLA-4, C3B, receptor de anti transferrina, endosialina, E-selectina, GCC, GP-75, Sindecano-1, GPNMB, ROBO4, STEAP-1, CMET, EGP-1, Kim-1, Tim-1, tirosina quinasas receptoras de Eph, HMW-MAA, TMEFF2, PSCA, CLL-1, TNF-α, FAP-α, IFN-α, EphA2, EphB2, EphB3, EphB4, EGFL-7, DLL-4, RS7, 4-1BB, TENB2, FLT3, p97, FGF19, FGFR2, glipicano-3, P53, L53, RON, MN, GFR-α3, FDF03, TSLPR, MUC1-KLH, Tag 72, MUC18, B7H4, PTK7, RG-1, MUC16, CSAP, PDGF, PSMA, 5T4, EpCAM, SGA-1M, SGA-56M, SGA-72M, IGF1R, CCR2, CCR5, CTLA4, CLCA-1, ELAM1, DR5, CEA, CXCR-4, GD2, gp100, GD3 gangliósido, L243, HMGB1, GPC-3, MART1, receptor de IL-2, CD2, CD3, CD303, CD4,
45 CD20, CD43, CD44, CD30, CD55, CD151, CD154, CD19, CD21, CD23, CD79, CD52, CD25, CD45, CD46, CD56, CD59, CD7, CD137, CD138, CD74, CD133, CD80, CD63, CD64, CD66, CD140b, CD32, CD33, CD37, CD22, CD27, Apo-2, ERBB4, HLA-DR, HLA-DR10, gonadotropina coriónica humana, CD38, CD40, CD70, mucina, P21, un receptor específico de células madre cancerosas, MPG, y producto oncogénico de Neu. En la presente invención como un resto V2 se pueden usar otros muchos anticuerpos de internalización o no internalización que se unen a antígenos asociados a tumor, algunos de los cuales se han revisado ix . En una realización, el anticuerpo anti-Her2, trastuzumab, se selecciona como el resto V2. En otra realización, un fragmento funcional de unión a epítopo o derivado de trastuzumab se selecciona como el resto V2 . En otra realización más, un anticuerpo anti-Her2 o un fragmento o derivado funcional del mismo se selecciona como el resto V2. En otra realización más, un anticuerpo anti-Her2 o fragmento o derivado funcional del mismo que tiene mejores
55 propiedades con respecto al trastuzumab se selecciona como el resto V2; mejores propiedades pueden ser, por ejemplo aumento de la unión, semivida en circulación más larga, aumento de la tasa de internalización, especificidad de unión más elevada hacia tejido tumoral en comparación con tejido no tumoral, y / o reducción de la inmunogenicidad. En otra realización más, el anticuerpo anti-PSMA J591 se selecciona como el resto V2 . En otra realización, un fragmento funcional de unión a epítopo o derivado de J591 se selecciona como el resto V2. En otra realización más, un anticuerpo anti-PSMA o un fragmento o derivado funcional del mismo se selecciona como el resto V2. En otra realización más, un anticuerpo anti-PSMA o fragmento o derivado funcional del mismo que tiene mejores propiedades con respecto a J591 se selecciona como el resto V2; mejores propiedades pueden ser, por ejemplo aumento de la unión, semivida en circulación más larga, aumento de la tasa de internalización, especificidad de
65 unión más elevada hacia tejido tumoral en comparación con tejido no tumoral, y / o reducción de la inmunogenicidad. En otras realizaciones más, un anticuerpo anti-CD19 o un anticuerpo anti-CD22 o un anticuerpo anti-CD30 o un
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anticuerpo anti-CD33 o un anticuerpo anti-CD56 o un anticuerpo anti-CD70 o un anticuerpo anti-CD74 o un anticuerpo anti-CD138 o un anticuerpo anti-CLL-1 o un anticuerpo anti-5T4 o un anticuerpo anti-CD303 o un anticuerpo anti-Tag 72 o un anticuerpo de carbohidrato similar a anti-Lewis A o un anticuerpo anti-EphB3 o un anticuerpo anti-HMW-MAA o un anticuerpo anti-CD38 o un anticuerpo anti-Cripto o un anticuerpo anti-EphA2 o un 5 anticuerpo anti-GPNMB o un anticuerpo anti-integrina o un anticuerpo anti-MN se selecciona como el resto V2. En otras realizaciones más, un fragmento funcional de unión a epítopo o derivado de un anticuerpo anti-CD19 o un anticuerpo anti-CD22 o un anticuerpo anti-CD30 o un anticuerpo anti-CD33 o un anticuerpo anti-CD56 o un anticuerpo anti-CD70 o un anticuerpo anti-CD74 o un anticuerpo anti-CD138 o un anticuerpo anti-CLL-1 o un anticuerpo anti-5T4 o un anticuerpo anti-CD303 o un anticuerpo anti-Tag 72 o un anticuerpo de carbohidrato similar a anti-Lewis A o un anticuerpo anti-EphB3 o un anticuerpo anti-HMW-MAA o un anticuerpo anti-CD38 o un anticuerpo anti-Cripto o un anticuerpo anti-EphA2 o un anticuerpo anti-GPNMB o un anticuerpo anti-integrina o un anticuerpo anti-MN se selecciona como el resto V2 . Por lo tanto, en una realización, el resto V2 puede ser seleccionado de entre un anticuerpo anti-CD19, un anticuerpo anti-CD22, un anticuerpo anti-CD30, un anticuerpo anti-CD33, un anticuerpo anti-CD56, un anticuerpo anti-CD70, un anticuerpo anti-CD74, un anticuerpo anti-CD138,
15 un anticuerpo anti-CLL-1, un anticuerpo anti-5T4, un anticuerpo anti-CD303, un anticuerpo anti-Tag 72, un anticuerpo de carbohidrato similar a anti-Lewis A, un anticuerpo anti-EphB3, un anticuerpo anti-HMW-MAA, un anticuerpo anti CD38, un anticuerpo anti-Cripto, un anticuerpo anti-EphA2, un anticuerpo anti-GPNMB, un anticuerpo anti-integrina, un anticuerpo anti-MN, un anticuerpo anti-Her2, y un anticuerpo anti-PSMA, o de entre un fragmento funcional que se une a epítopo o derivado de cualquiera de estos. En algunas realizaciones, el anticuerpo es un anticuerpo anti-nuclear o un anticuerpo que se puede unir a un receptor o complejo receptor expresado en una célula diana. El receptor o complejo receptor puede comprender un miembro de la súper familia de genes de inmunoglobulina, una integrina, un receptor de quimioquina, un miembro de la superfamilia de receptores de TNF, un receptor de citoquina, una proteína de histocompatibilidad principal, una proteína de control de complemento, o una lectina.
25 En otra realización específica, un anticuerpo inmunoespecífico para un antígeno asociado con una enfermedad autoinmune se usa como un resto V2 de acuerdo con los compuestos, composiciones, y métodos de la invención. En otra realización específica, un anticuerpo inmunoespecífico para un antígeno viral o microbiano se usa como un resto V2 de acuerdo con los compuestos, composiciones, y métodos de la invención. Tal como se usa en el presente documento, la expresión “antígeno viral” incluye, pero no se limita a, cualquier péptido, polipéptido, proteína, sacárido, polisacárido, o lípido viral que es capaz de provocar una respuesta inmunológica. Tal como se usa en el presente documento, la expresión “antígeno microbiano” incluye, pero no se limita a, cualquier péptido, polipéptido, proteína, sacárido, polisacárido, o lípido microbiano que es capaz de provocar una respuesta inmunológica. Continuamente se están descubriendo y desarrollando nuevos anticuerpos, y la presente invención estipula que
35 estos nuevos anticuerpos también se pueden incorporar en un compuesto de la presente invención.
V2 puede reaccionar con el resto reactivo RM a través de, por ejemplo, un heteroátomo en V2. Los heteroátomos que pueden estar presentes en V2 incluyen, pero no se limitan a, azufre (en una realización, de un grupo sulfhidrilo), oxígeno (en una realización, de un grupo carboxilo o hidroxilo), y nitrógeno (en una realización, de un grupo amino primario o secundario). V2 también puede reaccionar a través de, por ejemplo, un átomo de carbono (en una realización, de un grupo carbonilo). Estos átomos pueden estar presentes en el estado natural de V2 en V2, por ejemplo, un anticuerpo de origen natural, o se pueden introducir en V2 a través de modificación (química). Los grupos sulfhidrilo libre se pueden generar en un anticuerpo o fragmento de anticuerpo por reducción del anticuerpo (fragmento) con un agente reductor tal como ditiotreitol (DTT) o tris(2-carboxietil)fosfina (TCEP). De este modo, se
45 pueden obtener anticuerpos modificados que pueden tener de 1 a aproximadamente 20 grupos sulfhidrilo, pero por lo general entre aproximadamente 1 y aproximadamente 9 grupos sulfhidrilo. Como alternativa, V2 puede tener uno o más grupos carbohidrato que se pueden modificar químicamente para que contengan uno o más grupos sulfhidrilo. Como otra alternativa, se pueden generar grupos sulfhidrilo por reacción de grupos amino, por ejemplo a partir de restos de lisina, en V2 con 2-iminotiolano (reactivo de Traut), N-succinimidilo Sacetiltioacetato (SATA), u otro reactivo que genera sulfhidrilo. Un reactivo de este tipo también se puede usar para introducir una funcionalidad adicional. Por ejemplo, se puede usar un reactivo que genera sulfhidrilo que no solamente introduzca un grupo sulfhidrilo en V2, sino que al mismo tiempo introduzca un resto soluble en agua tal como un oligoetilenglicol o polietilenglicol. Un grupo de este tipo puede estar presente como un sustituyente en el reactivo (en lugar de formar parte de la cadena principal) para mantener el grupo sulfhidrilo cercano al resto V2. la
55 presencia de un resto soluble en agua de este tipo en ocasiones puede mejorar las propiedades farmacológicas de un compuesto de fórmula (III).
En una realización, el resto V2 es un resto de unión a receptor. En otra realización, el resto V2 es un anticuerpo o un fragmento de anticuerpo o un derivado del mismo. En otra realización, el resto V2 es un anticuerpo monoclonal o un fragmento o derivado del mismo. En una realización, V2 tiene uno o más grupos sulfhidrilo y V2 reacciona con uno o más restos RM de unoo más compuestos de fórmula (IV) a través de uno o más de estos átomos de azufre de los grupos sulfhidrilo para formar un compuesto de fórmula (III) en el que uno o más compuestos de fórmula (IV) se han incorporado de este modo. En otra realización más, V2 contiene uno o más enlaces disulfuro que se pueden reducir químicamente a grupos
65 sulfhidrilo (dos para cada enlace disulfuro), que a continuación se pueden hacer reaccionar con uno o más restos reactivos RM para formar un compuesto de fórmula (III).
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En otra realización, V2 contiene aproximadamente 1 a aproximadamente 3 grupos sulfhidrilo, que pueden reaccionar con uno o más restos reactivos RM para formar un compuesto de fórmula (III). En otra realización, V2 contiene aproximadamente 2 grupos sulfhidrilo, que pueden reaccionar con uno o más restos reactivos RM para formar un compuesto de fórmula (III).
5 En otra realización, V2 contiene aproximadamente 3 a aproximadamente 5 grupos sulfhidrilo, que pueden reaccionar con uno o más restos reactivos RM para formar un compuesto de fórmula (III). En otra realización, V2 contiene aproximadamente 4 grupos sulfhidrilo, que pueden reaccionar con uno o más restos reactivos RM para formar un compuesto de fórmula (III). En otra realización, V2 contiene aproximadamente 7 a aproximadamente 9 grupos sulfhidrilo, que pueden reaccionar con uno o más restos reactivos RM para formar un compuesto de fórmula (III). En otra realización, V2 contiene aproximadamente 8 grupos sulfhidrilo, que pueden reaccionar con uno o más restos reactivos RM para formar un compuesto de fórmula (III). En otra realización, V2 puede tener uno o más grupos carbohidrato que se pueden modificar químicamente para que tengan uno o más grupos sulfhidrilo. V2 reacciona con restos RM a través de estos uno o más átomos de azufre de
15 los grupos sulfhidrilo para formar un compuesto de fórmula (III). En otra realización, V2 puede tener uno o más grupos lisina que se pueden modificar químicamente para que tengan uno o más grupos sulfhidrilo, que pueden reaccionar con uno o más restos reactivos RM para formar un compuesto de fórmula (III). Los restos reactivos que pueden reaccionar con un grupo sulfhidrilo incluyen, pero no se limitan a, haluro de carbamoílo, haluro de acilo, α-haloacetamida, halometil cetona, vinil sulfona, maleimida y 2-disulfanilpiridina.
Un conjugado de fórmula (III) puede existir como una mezcla, en la que cada componente de la mezcla tiene un valor de q diferente. Por ejemplo, el compuesto puede existir como una mezcla de dos compuestos separados, un compuesto en el que q es 2 y otro compuesto en el que q es 3. Como otro ejemplo, un compuesto puede existir
25 como una mezcla de 5 compuestos separados, en la que q es 1, 2, 3, 4, y 5, de forma respectiva. Además, como otro ejemplo, un compuesto puede existir como una mezcla de más de 5 compuestos separados. Tales mezclas se podrían “contaminar” adicionalmente con V2 sin conjugar. Cuando se analiza el compuesto de fórmula (III), se entiende que q puede ser el número medio (redondeado) de unidades de L2-L(-(V1-Y))p(Z)z/q por resto V2. Además, para un valor q dado, el compuesto puede existir como una mezcla de isómeros (constitucionales) ya que los q restos L2-L(-(V1-Y))p(Z)z/q se pueden conectar a distintos grupos (puntos de) funcionales en V2. Se debería indicar que el número de restos Z en cada unidad solamente es igual a z / q si todas las unidades son las mismas y / o contienen el mismo número de restos Z. En una realización, el resto V2 está conectado a L2 a través de un átomo de azufre de V2 .
35 En otra realización, el resto V2 está conectado a L2 a través de un átomo de azufre y q varía de aproximadamente 1 a aproximadamente 20. En otra realización, el resto V2 está conectado a L2 a través de un átomo de azufre y q varía de aproximadamente 1 a aproximadamente 9. En otra realización, el resto V2 está conectado a L2 a través de un átomo de azufre y q varía de aproximadamente 1 a aproximadamente 3. En otra realización, el resto V2 está conectado a L2 a través de un átomo de azufre y q es aproximadamente 1. En otra realización, el resto V2 está conectado a L2 a través de un átomo de azufre y q es aproximadamente 2. En otra realización, el resto V2 está conectado a L2 a través de un átomo de azufre y q varía de aproximadamente 3 a aproximadamente 5.
45 En otra realización, el resto V2 está conectado a L2 a través de un átomo de azufre y q es aproximadamente 4. En otra realización, el resto V2 está conectado a L2 a través de un átomo de azufre y q varía de aproximadamente 7 a aproximadamente 9. En otra realización, el resto V2 está conectado a L2 a través de un átomo de azufre y q es aproximadamente 8. En una realización, un compuesto de fórmula (III) existe como una mezcla de compuestos separados. En una realización, un compuesto de fórmula (III) existe como una mezcla de compuestos separados en la que q para tres compuestos es 1, 2, y 3, de forma respectiva. En una realización, un compuesto de fórmula (III) existe como una mezcla de compuestos separados en la que q para tres compuestos es 3, 4, y 5, de forma respectiva. En una realización, un compuesto de fórmula (III) existe como una mezcla de compuestos separados en la que q
55 para tres compuestos es 5, 6, y 7, de forma respectiva. En una realización, un compuesto de fórmula (III) existe como una mezcla de compuestos separados en la que q para tres compuestos es 7, 8 y 9, de forma respectiva.
En otra realización, el resto V2 es un resto que es capaz de transportar el conjugado a través de una barrera biológica, por ejemplo, una membrana celular, ya sea con o sin una unión, asociación o formación de complejos anterior con un receptor o complejo receptor.
En otro aspecto de la invención, el resto V2 es un resto que mejora las propiedades farmacológicas de un conjugado de la invención. Por ejemplo, el resto V2 se puede elegir de modo que la solubilidad en agua del conjugado mejora 65 (adicionalmente). Esto se puede conseguir eligiendo a V2 para que sea un resto hidrófilo. Como alternativa, el resto V2 se puede usar por ejemplo para aumentar el tiempo de permanencia del compuesto en la circulación, para reducir
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la extravasación y / o excreción, para reducir la agregación, y / o para reducir la inmunogenicidad del compuesto. Esto se puede conseguir por ejemplo eligiendo a V2 para que sea para que contenga un polietilenglicol u oligoetilenglicol o derivado de los mismos. Cuando el resto V2 es un resto que mejora las propiedades farmacológicas de un compuesto de la invención y V1 es un resto que se puede escindir o transformar de forma
5 específica y no hay restos V1’ y V2’, el compuesto solamente sirve para mejorar las propiedades (farmacológicas) del uno o más restos Z. En una realización, V2 es un resto que mejora las propiedades farmacológicas y V1 es un resto que se puede escindir o transformar de forma específica.
10 Se debería entender que el resto funcional V2 puede tener varias propiedades funcionales combinadas. Por ejemplo, V2 puede ser un resto que mejora las propiedades farmacológicas de un compuesto de la presente invención y al mismo tiempo puede ser o puede contener un resto de dirección.
Los conjugados de la presente invención pueden contener uno o más prorrestos. Estos prorrestos pueden ser los
15 mismos o diferentes. La presencia de dos o más prorrestos puede influir de forma favorable en las propiedades del conjugado. Por ejemplo, puede mejorar la solubilidad en agua y / o aumentar la eficacia de dirección del conjugado. Además, si en un conjugado dirigido existen dos prorrestos y el prorresto requerido para la dirección se escinde prematuramente de Z, por ejemplo en la circulación, el segundo prorresto atenúa la citotoxicidad de Z.
20 En una realización, p es un número entero de 1 (incluido) a 128 (incluido). En otra realización, q es un número entero de 1 (incluido) a 1000 (incluido). En otras realizaciones, p es un número entero de 1 (incluido) a 64 (incluido)
o 32 (incluido) o 16 (incluido) u 8 (incluido) o 4 (incluido) o 2 (incluido), o p es 1. En otras realizaciones, q es un número entero de 1 (incluido) a 500 (incluido) o 400 (incluido) o 300 (incluido) o 200 (incluido) o 100 (incluido) o 16 (incluido) u 8 (incluido) o 6 (incluido) o 4 (incluido) o 2 (incluido), o q es 1. En otra realización, q se selecciona de 1 a
25 4.
En una realización, un compuesto de fórmula (III) se representa con
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En una realización, p en un compuesto de fórmula (IIIa) es 1. En otra realización, en un compuesto de fórmula (IIIa) p es 1 y z es igual a q, lo que reduce la fórmula (IIIa) a:
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En otra realización más, un compuesto de fórmula (IIIa) se representa con
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o con un isómero, o con una mezcla de isómeros, en la que R5 se selecciona de entre H, metilo y metoxi, R6, R7, y R14 son H, DB es DB1, V1 se selecciona de entre valilcitrulina, valillisina, fenilalanillisina, alanilfenilalanillisina y Dalanilfenilalanillisina, f es 1 o 2, CL se selecciona de entre
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L se selecciona de entre
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15 q varía de 1 a 4, y Ab es un anticuerpo o un fragmento o derivado del mismo.
Se pueden imaginar realizaciones similares para los compuestos de fórmula (IV) mediante sustitución de V2-L2 por RM, y retirando los paréntesis con el subíndice q, o mediante la eliminación de Ab-SH de las estructuras. Por lo tanto, los compuestos de fórmulas (IVa) se representan mediante las estructuras de los compuestos de fórmulas
20 (IIIa), de forma respectiva, en las que V2-L2 se sustituye por RM, y los paréntesis con el subíndice q se retiran.
En otra realización, un compuesto de fórmula (IV) se representa con
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o con un isómero, o con una mezcla de isómeros, en la que R5a se selecciona de entre H, metilo y metoxi, AZ es
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o V1 se selecciona de entre valilcitrulina, valillisina, fenilalanillisina, alanilfenilalanillisina y D-alanilfenilalanillisina, CL es
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y L se selecciona de entre
y
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En otra realización más, un compuesto de fórmula (III) se representa con
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o con un isómero o con una mezcla de isómeros, en la que R5a se selecciona de entre H, metilo y metoxi, AZ es
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o
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V1 se selecciona de entre valilcitrulina, valillisina, fenilalanillisina, alanilfenilalanillisina y D-alanilfenilalanillisina, CL es
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L se selecciona de entre
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q varía de 1 a 4, y Ab es un anticuerpo o un fragmento o derivado del mismo. Una serie de compuestos (III-AZ) en los que R5a es metilo, AZ es
L es
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Ab es Trastuzumab, V1 es valilcitrulina, y CL es
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se prepararon de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 15 y se evaluaron frente al compuesto de referencia correspondiente en el que CL es
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para una cantidad de agregado presente después de la etapa de conjugación. Los compuestos evaluados tenían cantidades de agregado relativas de un 33 %, 15 %, 8 %, 58 %, y un 12 %, de forma respectiva, en comparación con las del compuesto de referencia (100 %), lo que muestra claramente la ventaja de los presentes espaciadores de ciclado.
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En otra realización, un compuesto de fórmula (IV) se selecciona de entre
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En otra realización, un compuesto de fórmula (IV) se selecciona de entre
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En otra realización, un compuesto de fórmula (IV) se selecciona de entre
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En otra realización, un compuesto de fórmula (IV) se selecciona de entre
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En otra realización, un compuesto de fórmula (IV) se selecciona de entre
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En otra realización, un compuesto de fórmula (IV) se selecciona de entre
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En otra realización, un compuesto de fórmula (IV) se selecciona de entre
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En otra realización, un compuesto de fórmula (IV) se selecciona de entre
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En otra realización, un compuesto de fórmula (IV) se selecciona de entre
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En otra realización, un compuesto de fórmula (IV) se selecciona de entre
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En otra realización, un compuesto de fórmula (IV) se selecciona de entre
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En otra realización, un compuesto de fórmula (IV) se selecciona de entre
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En otra realización, un compuesto de fórmula (IV) se selecciona de entre
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Los compuestos de fórmulas (I), (III), (IV)y(VIII) se pueden preparar de forma conveniente de una manera para alguna parte análoga a los compuestos informados en los documentos WO 01/83448, WO 02/083180, WO 5 2004/043493, WO 2007/018431, WO 2007/089149, WO 2009/017394 y WO2010/062171. Algunos protocolos de síntesis representativos adicionales se pueden encontrar en los Ejemplos.
En una realización, un compuesto de fórmula (I) se usa para preparar un compuesto de fórmula (III). En otra realización, un compuesto de fórmula (I) se usa para preparar un compuesto de fórmula (IV IV) se usa para preparar un compuesto de fórmula (III). En otra realización, un compuesto de fórmula (III) en la que V1 es un grupo protector se usa para preparar otro compuesto de fórmula (III) en la que V1 es un resto escindible / transformable in vivo. En otra realización más, un compuesto de fórmula (VIII) se usa para preparar un compuesto de fórmula (IV). En otra realización más, un compuesto de fórmula (VIII) se usa para preparar un compuesto de fórmula (III), opcionalmente a través de un compuesto de fórmula (IV).
15 Usos, métodos y composiciones
En un aspecto, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) para la preparación de un compuesto de fórmula (III).
En otro aspecto, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (IV) para la preparación de un compuesto de fórmula (III).
En otro aspecto más, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (I) para la preparación de 25 un compuesto de fórmula (IV).
En otro aspecto más, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (VIII) para la preparación de un compuesto de fórmula (IV).
En otro aspecto más, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (VIII) para la preparación de un compuesto de fórmula (III), opcionalmente a través de un compuesto de fórmula (III).
En otro aspecto más, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (VIII) para la preparación de conjugados y conjugados de conector -agente similares a los compuestos de fórmulas (III)y(IV) en las que el
35 resto Z es un resto terapéutico o de diagnóstico diferente de un compuesto de fórmula (I) o (I’), o un derivado del mismo que contiene prorresto.
En otro aspecto más, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de fórmula (III) en la que V1 es un grupo protector para la preparación de otro compuesto de fórmula (III) en la que V1 es un resto escindible / transformable in vivo.
En un aspecto, la invención se refiere al uso de cualquiera de los compuestos definidos en lo que antecede en el presente documento para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de un mamífero con necesidad de la misma.
45 En una realización, la invención se refiere al uso de cualquiera de los compuestos definidos en lo que antecede en el presente documento para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de un tumor en un mamífero. En otra realización, la invención se refiere al uso de cualquiera de los compuestos definidos en lo que antecede en el presente documento para la preparación de una composición farmacéutica para la prevención de un tumor en un mamífero.
La invención también se puede formular como cualquiera de los compuestos definidos en lo que antecede en el presente documento para su uso en el tratamiento de un mamífero con necesidad del mismo, o para su uso en el tratamiento de un tumor en un mamífero o para su uso en la prevención de un tumor en un mamífero.
55 La invención también se refiere a cualquiera de los compuestos definidos en lo que antecede en el presente documento como un medicamento o un componente activo o sustancia activa en un medicamento.
En un aspecto adicional, la invención se refiere a un proceso para preparar una composición farmacéutica que contiene un compuesto tal como se ha definido en lo que antecede en el presente documento, para proporcionar un sólido o una formulación líquida para su administración por vía oral, por vía tópica, o mediante inyección. Un método
o proceso de este tipo comprende al menos la etapa de mezclar el compuesto con un vehículo farmacéuticamente aceptable.
65 En una realización, un compuesto de la invención se usa para el tratamiento o la prevención de una enfermedad caracterizada por una proliferación no deseada. En otra realización, un compuesto de la invención se usa para el
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5 En otra realización más, un compuesto de la invención se usa para el tratamiento o la prevención de una enfermedad inflamatoria. En otra realización más, un compuesto de la invención se usa para el tratamiento o la prevención de una enfermedad autoinmune. En otra realización más, un compuesto de la invención se usa para el tratamiento o la prevención de una infección bacteriana, vírica o microbiana.
10 La invención también se refiere unas composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos de la invención tal como se ha definido en lo que antecede en el presente documento. Un compuesto de la invención se puede administrar en forma purificada junto con un vehículo farmacéutico como una composición farmacéutica. La forma preferente depende del modo pretendido de administración y la aplicación terapéutica. El vehículo farmacéutico puede ser cualquier sustancia no tóxica, compatible adecuada para suministrar los compuestos de la invención al
15 paciente. Los vehículos farmacéuticamente aceptables se conocen bien en la técnica e incluyen, por ejemplo, soluciones acuosas tales como agua (estéril) o solución salina tamponada fisiológicamente u otros disolventes o vehículos tales como glicoles, glicerol, aceites tales como aceite de oliva o ésteres orgánicos inyectables, alcohol, grasas, ceras, y sólidos inertes. Un vehículo farmacéuticamente aceptable puede contener adicionalmente compuestos fisiológicamente aceptables que actúan por ejemplo para estabilizar para aumentar la absorción de los
20 compuestos de la invención. Tales compuestos fisiológicamente aceptables incluyen, por ejemplo, carbohidratos, tales como glucosa, sacarosa, o dextranos, antioxidantes, tales como ácido ascórbico o glutatión, agentes de quelación, proteínas de bajo peso molecular, otros estabilizantes o excipientes. Un experto en la materia podría conocer que la elección de un vehículo farmacéuticamente aceptable, incluyendo un compuesto fisiológicamente aceptable, depende, por ejemplo, de la vía de administración de la composición. En las composiciones
25 farmacéuticas también se pueden incorporar adyuvantes, agentes de tamponamiento, agentes dispersantes farmacéuticamente aceptables, y similares.
Para la administración oral, el principio activo se puede administrar en formas de dosificación sólidas, tales como cápsulas, comprimidos, y polvos, o en formas de dosificación líquidas, tales como elixires, jarabes y suspensiones.
30 El componente o componentes activos se pueden encapsular en cápsulas de gelatina junto con principios inactivos y vehículos en polvo, tales como glucosa, lactosa, sacarosa, manitol, almidón, celulosa o derivados de celulosa, estearato de magnesio, ácido esteárico, sacarina sódica, talco, carbonato de magnesio, y similares. Los ejemplos de principios inactivos adicionales que se pueden añadir para proporcionar un color, sabor, estabilidad, capacidad de
35 tamponamiento, dispersión deseables, u otras características deseables conocidas son óxido de hierro rojo, gel de sílice, lauril sulfato sódico, dióxido de titanio, tinta blanca comestible, y similares. Algunos diluyentes similares se pueden usar para preparar comprimidos formados por compresión. Tanto los comprimidos como las cápsulas se pueden preparar como productos de liberación sostenida para proporcionar una liberación continua de la medicación durante un periodo de horas.
40 Los comprimidos pueden estar revestidos con de azúcar o revestidos con película para enmascarar cualquier sabor desagradable y para proteger el comprimido de la atmósfera, o con revestimiento entérico para la desintegración selectiva en el tracto gastrointestinal. Las formas de dosificación líquidas para su administración oral pueden contener colorantes y saborizantes para aumentar la aceptación del paciente.
45 No obstante, los compuestos de la invención se administran preferentemente por vía parenteral. Las preparaciones de los compuestos de la invención para su administración parenteral deben ser estériles. La esterilización se consigue fácilmente por filtración a través de membranas de filtración estériles, opcionalmente antes o después de liofilización y reconstitución. La vía parenteral para la administración de compuestos de la invención está de acuerdo
50 con los métodos conocidos, por ejemplo, inyección o infusión mediante las vías intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, intraarterial o intralesional. Los compuestos de la invención se pueden administrar de forma continua mediante infusión o mediante inyección en bolo. Una composición habitual para infusión intravenosa se podría preparar para que contuviera de 100 a 500 ml de NaCl estéril al 0,9 % o glucosa al 5 % suplementada opcionalmente con un 20 % de solución de albúmina y de 1 mg a 10 g del compuesto de la invención, dependiendo
55 del tipo de compuesto de la invención en particular y su régimen de dosificación requeridos. En la técnica se conocen bien algunos métodos para preparar composiciones que se pueden administrar por vía parenteral y se describen con más detalle en diversas fuentes, incluyendo, por ejemplo, Remington’s Pharmaceutical Science x.
Un compuesto de la invención también se puede usar en terapia de combinación, en la que un compuesto de la
60 presente invención se usa en combinación con otros uno o más agentes terapéuticos. La combinación de dos o más agentes terapéuticos puede influir de forma favorable en el resultado del tratamiento. los agentes se pueden administrar ya sea de forma secuencial o de forma simultánea. Por lo tanto, en una realización, la presente invención se refiere al uso de un compuesto de la presente invención o una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la presente invención en terapia de combinación.
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Ejemplos
Ejemplo 1: Síntesis de espaciadores de ciclado protegidos con Boc Ruta A: Aminación reductora
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Ruta B: Alquilación
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15
Ruta A
Síntesis del compuesto 1: 7,5 ml (85 mmol) de cloruro de oxalilo se disolvieron en 200 ml de DCM y se enfrió a T < -60 ºC y se añadieron gota a gota 12,1 ml (171 mmol) de DMSO en 10 ml de DCM (T < -60 ºC) y se agitó durante un 20 periodo adicional de 10 min. Se añadieron 10,0 g (57 mmol) de N-Boc-N-metilaminoetanol en 40 ml de DCM gota a gota (T < -60 ºC) y se agitó durante un periodo adicional de 10 min. Se añadieron 40 ml (285 mmol) de Et3N gota a gota seguido de 50 ml de DCM (T < -60 ºC) y se agitó durante 30 min. La mezcla de reacción se calentó a 0 ºC y se lavó con 3 x 100 ml de agua, 100 ml de KHSO4 0,5 M, 75 ml de solución salina saturada, se secó con MgSO4 y se concentró al vacío. El producto se purificó por cromatografía en columna (SiO2, DCM / acetato de etilo, de 1 : 0 a
25 9 : 1) para dar 7,36 g (74 %) del compuesto 1. RMN de 1H (300 MHz, CDCl3): δ = 1,42 / 1,46 (s, 9H, Boc), 2,93 / 2,96 (s, 3H, Me), 3,90 / 4,01 (s, 2H, CH2), 9,60 (s, 1H, CHO). Isómeros Z / E.
Procedimiento general de aminación reductora: 1 mmol de R-amina y 1 mmol del compuesto 1 se agitaron en 10 ml de MeOH durante 4 h. La mezcla de reacción se enfrió en hielo y se añadieron 2 mmol de borohidruro sódico en 30 porciones y la mezcla se agitó a TA durante una noche. La mezcla se concentró y se purificó por cromatografía en columna (SiO2, DCM / Me-OH, de 1 : 0 a 1 : 1) para dar N-Boc-N-Metil-N’-R-diaminoetano.
Compuesto 4a, R= (CH2CH2O)2H: rendimiento de un 40 %, RMN de 1H (300 MHz, CDCl3): δ = 1,46 (9 H, s, Boc), 2,75-2,87 (4 H, m, 2 x CH2), 2,88 (3 H, s, NMe), 3,35 (2 H, t, J = 6,6 Hz, CH2), 3,56 -3,63 (4H, m, 2 x CH2,
35 CH), 3,70 -3,75 (2H, m, CH2, CH); EM (ESI) m / z = 263,5 (M + H+). Compuesto 4b, R= (CH2)3COOMe: rendimiento de un 61 %, RMN de 1H (300 MHz, CDCl3): δ = 1,46 (9 H, s, Boc), 1,83 (2H, m, CH2), 2,39 (2H, t, J = 7,4 Hz, CH2) 2,64 -2,86 (3 H, m, CH / CH2), 2,88 (3 H, s, NMe), 2,99 (1H, m, CH), 3,30 -3,49 (2H, m, CH2), 3,67 (3H, s, CH3); EM (ESI) m / z = 275,5 (M + H+).
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40
Compuesto 4c: RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1,15 (3H, d, J = 6,9 Hz, CH3 Ala), 1,38 (9H, s, Boc), 2,57 2,67 (1H, m, α-H), 2,76 (3H, s, NCH3), 3,08 -3,36 (4H, m, CH2-CH2), 3,63 (3H, s, OCH3); EM (ESI): m / z = 261,3
(M + H+).
45
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Compuesto 4d: RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1,12 (3H, d, J = 6,9 Hz, CH3 Ala), 1,39 (9H, s, Boc), 2,54 2,61 (1H, m, α-H), 2,77 (3H, s, NCH3), 3,10 -3,51 (13H, m, 6 x CH2 + OH), 7,90 (1H, s, NH amida); EM (ESI):
m / z = 334,4 (M + H+).
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Compuesto 4e: rendimiento de un 27 %, RMN de 1H (300 MHz, CDCl3): δ = 1,44 (9H, s, Boc), 2,72 -2,85 (4H, m, 2 x CH2), 2,81 (3H, s, MeN), 3,31 (2H, m, NCH2), 3,5 -3,7 (32H, m, 15 x CH2 + OH + NH); EM (ESI): m / z = 527,4 (M + H+).
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Compuesto 4f: rendimiento de un 30 %, RMN de 1H (300 MHz, CDCl3): δ = 1,44 (9H, s, Boc), 2,65 -2,79 (4H, m, 2 x CH2), 2,80 (3H, s, MeN), 3,26 (2H, m, NCH2), 3,5 -3,7 (48H, m, 23 x CH2 + OH + NH); EM (ESI): m / z 703,5 (M + H+).
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Compuesto 4g: RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1,14 (5H, m, 2 CH y CH3), 1,35 (9H, s, Boc), 1,47 (4H, m, 4 CH), 1,74 -2,38 (4H, m, 4 CH), 2,59 (2H, m, CH2), 2,75 (3H, s, NCH3), 3,16 (2H, m, CH2), 3,99 (2H, m, CH2); EM (ESI): m / z = 329,4 (M + H+).
25
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Compuesto 4h: rendimiento de un 63 %, RMN de 1H (300 MHz, CDCl3): δ = 1,46 (9H, s, Boc), 1,69 (2H, m, CH2), 2,24 (6H, s, Me2), 2,36 (2H, t, CH2), 2,52 (1H, m, NH), 2,72 (2H, t, CH2), 2,80 (2H, t, CH2), 2,88 (3H, s, MeN), 3,37 (2H, m, CH2); EM (ESI) m / z = 260,2 (M + H+).
30
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Compuesto 4i: RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1,30 -1,36 (4H, m, 2 CH2 Lis), 1,35 (18H, 2 s, 2 Boc), 1,53 (2H, m, CH2 Lis), 2,46 (2H, m, CH2 Lis), 2,56 (2H, m, CH2), 2,75 (3H, s, NCH3), 3,13 (3H, m, CH2 y α-H Lis), 3,58 (3H, s, OCH3); EM (ESI): m / z = 481,4 (M + H+).
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Compuesto 4j: RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1,36 (31H, m, 1 tBu, 2 Boc y 2 CH2 Lis), 1,53 (2H, m, CH2 Lis), 2,46 (2H, m, CH2 Lis), 2,56 (2H, t, CH2), 2,75 (3H, s, NCH3), 3,14 (2H, t, CH2) 3,64 (1H, m, α-H Lis), 7,01 (d, 1H, NH); EM (ESI): m / z = 460,3 (M + H+).
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Compuesto 4k:  1H (300 MHz, CDCl3): δ = 1,15 (2H, m), 1,30 (2H, m), 1,94 (4H, m), 2,46 (1H, m), 2,76 (2H, t, J = 6,8 Hz), 2,87 (3H, s), 3,30 (2H, t, J = 6,8 Hz), 3,60 (1H, m); EM (ESI): m / z = 273,3 (M + H+). 5
Ruta B
Procedimiento general de reacción de alquilación: A una solución de 1 mmol de R-amina y 1 mmol de mesilato en THF seco 1,5 ml) se añadió K2CO3 (1,5 mmol) y la mezcla se agitó a 60 ºC durante una noche. La mezcla se 10 enfrió a TA, se concentró y se purificó por cromatografía en columna (SiO2, DCM / MeOH, de 1 : 0 a 1 : 1) para dar el N-Boc-N-Metil-N’-R-diaminoetano.
Compuesto 5a, R= iso-propilo: RMN de 1H (300 MHz, CDCl3), δ (ppm): 1,05 (6 H, d, 2 x CH3), 1,46 (9 H, s, Boc), 2,75 (2 H, t, J = 6,6 Hz, CH2), 2,82 (1 H, t, J = 6,6 Hz, CH), 2,87 (3 H, s, NMe), 3,31 (2 H, t, J = 6,6 Hz, 15 CH2); EM (ESI) m / z = 217,2 (M + H+).
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Compuesto 5b: Comenzando a partir de N-Boc-prolinol xviii, el compuesto 5b se preparó de acuerdo con la ruta
B. EM (ESI) m / z = 215,2 (M + H+).
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Compuesto 5c: RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1,39 (9H, s, Boc), 2,73 -2,85 (7H, m, NCH3 + 2 x CH2), 3,24 -3,30 (2H, m, CH2), 3,39 -3,55 (11H, m, 5 x CH2 + OH).
Ejemplo 2: Síntesis del compuesto 2
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30 2,28 g (10 mmol) de fenilcarbonato de bencilo se disolvieron en 20 ml de etanol y 1,03 ml (10 mmol) 1,2-diamino-1metilpropano se añadió gota a gota y se agitó a TA durante una noche. La mezcla se diluyó con 25 ml de agua y se acidificó con HCl 1 M hasta pH < 3 y se extrajo con DCM. La fase acuosa se basificó con NaOH 4 M y se extrajo con DCM. El extracto se secó con MgSO4 y se concentró al vacío. Esto proporcionó 1,93 g (87 %) de diamina
35 monoprotegida. Este material se disolvió en 25 ml de dioxano, se añadieron 2,028 g (10,5 mmol) de Boc2O y 0,12 g (1 mmol) de DMAP y la reacción se agitó a TA durante una noche. La mezcla se concentró al vacío y se purificó por cromatografía en columna (SiO2, éter / heptano, de 1 : 0 a 7 : 3) para dar 1,13 g (40 %) de diamina diprotegida. La diamina diprotegida se disolvió en 10 ml de DMF seca, se añadió 1,1 ml (17,5 mmol) de yodometano y la mezcla de reacción se enfrió en hielo. Se añadieron 0,50 g (10,5 mmol) de hidruro sódico (al 60 % en aceite) en porciones y se
40 agitó en hielo durante 2 h. La mezcla se calentó a TA, se inactivo con 10 ml de NH4Cl saturado y 50 ml de agua, se extrajo con acetato de etilo, se secó con MgSO4 y se concentró al vacío. El producto se purificó por cromatografía en columna (SiO2, DCM / acetato de etilo, de 1 : 0 a 50 : 1) para dar 0,358 g (29 %) del compuesto 2 protegido con Cbz. RMN de 1H (300 MHz, CDCl3): δ = 1,29 (s, 3H, Me), 1,35 (s, 3H, Me), 1,46 (s, 9H, Boc), 2,82 / 2,86 (s, 3H, Me, Z / E), 2,93 (s, 3H, Me), 3,72 (s, 2H, CH2N), 5,12 (s, 2H, bencilo), 7,35 (m, 5H, Fe). Este material se disolvió en 20 ml de
45 metanol, se añadieron 0,04 g de Pd / C, la mezcla se agitó en atmósfera de hidrógeno durante 3 horas, se filtró, y el filtrado se concentró. Esto dio 0,21 g (100 %) del compuesto 2. EM (ESI): m / z = 217,2 (M + H+).
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5 Se disolvieron 2,15 g (18,8 mmol) de cis-1,2-diaminociclohexano se disolvió en 20 ml de formiato de etilo y se calentó a reflujo durante una noche. La suspensión se enfrió, se filtró y se secó al vacío para dar 2,59 g (80 %) de producto. El sólido se añadió en porciones a una mezcla enfriada de 2,1 g (53 mmol) de hidruro de litio y aluminio en 50 ml de THF y la mezcla se agitó a TA durante 1 h y después se calentó a reflujo durante una noche. La solución transparente se enfrió en hielo y se inactivo mediante adición gota a gota de 2,1 ml de agua seguido de 15 ml de
10 NaOH al 20 %. La suspensión se calentó brevemente hasta que las sales eran de color blanco. La mezcla se enfrió a TA y se filtró. El residuo se lavó con 2 porciones de 50 ml de THF. El filtrado se concentró y se disolvió en 50 ml de DCM y se lavó con 20 ml de NaOH 4 M. La fase acuosa se extrajo con 25 ml de DCM, se secó con MgSO4 y se concentró al vacío para dar 1,94 g (89 %) de producto. El producto en bruto se disolvió en 50 ml de DCM y la mezcla se enfrió a -40 ºC y se añadieron 2,95 g (13,5 mmol) de Boc2O en 10 ml de DCM gota a gota. La mezcla se calentó
15 lentamente a TA y se lavó con 20 ml NaOH 2 M, se secó con MgSO4, se concentró al vacío y el producto en bruto se purificó por cromatografía en columna (SiO2, DCM / MeOH, de 1 : 0 a 9 : 1) para dar 2,09 g (63 %) del compuesto 3. RMN de 1H (300 MHz, CDCl3): δ = 1,38 (m, 6H, ciclohex), 1,46 (s, 9H, Boc), 1,83 (m, 3H, ciclohex + NH), 2,35 (s, 3H, NMe), 2,89 (s, 3H, NMe), 2,95 (m, 1H, CHN), 3,86 (m, 1H, CHN); EM (ESI): m / z = 243,2 (M + H+).
20 Ejemplo 4: Síntesis del compuesto 6
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A una solución de 2,55 mmol de N-Boc-prolinal en THF seco (5 ml) en una atmósfera de argón se añadieron 0,7 ml
25 de ácido acético glacial y 272 mg de 2-(2-aminoetoxi)etanol (2,58 mmol). La mezcla se agitó durante una noche a temperatura ambiente. Se añadieron 2,59 mmol de borohidruro sódico en porciones, y la mezcla se agitó durante otras 4 horas tras lo que se añadió agua. La mezcla se lavó con acetato de etilo, la fase acuosa se clasificó hasta pH 10 usando Na2CO3 y se extrajo con acetato de etilo (9x). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con solución salina saturada, se secaron con MgSO4, y se concentraron al vacío para dar 335 mg (46 %) del compuesto 6 en
30 bruto, que se usó sin purificación adicional. EM (ESI): m / z = 289 (M + H+).
Ejemplo 5: Síntesis de los compuestos 7 y 8
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35 Se hicieron reaccionar 0,17 g (1,5 mmol) de N-metilpiperid-4-ona y 0,178 g (1,0 mmol) de N-Boc-N-metil-1,2diaminoetano con 0,42 g (2,0 mmol) de triacetoxiborohidruro sódico en 5 ml de DCE a TA durante una noche. La reacción se interrumpió con MeOH y la mezcla se extrajo con DCM y solución salina saturada (basificada a pH > 12), se secó con MgSO4 y se concentró al vacío para dar 0,31 g (100 %) de 7 en forma de un aceite. RMN de 1H (300
40 MHz, CDCl3): δ = RMN de 1H (300 MHz, CDCl3): δ = 1,38 (2, m, CH2), 1,45 (9H, s, Boc), 1,76 (1H, s a, NH), 1,85 (2H, m, CH2), 2,00 (2H, m, CH2), 2,27 (3H, s, MeN), 2,46 (1H, m, CH), 2,76 (4H, m, 2 x CH2), 2,86 (3H, s, MeN), 3,30 (2H, t, CH2); EM (ESI) m / z = 272,2 (M + H+).
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45 El compuesto 8 se preparó del mismo modo que el compuesto 7 usando 0,75 g (4,0 mmol) de N-hidroxietoxietil-4piperidina. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna (SiO2, DCM / MeOH, de 1 : 0 a 95 : 5) para dar 0,83 g (66 %) de 8 en forma de un aceite. RMN de 1H (300 MHz, CDCl3): δ = 1,46 (9H, s, Boc), 1,89 (2H, m, CH2), 1,91 (2H, m, CH2), 2,50 (3H, m, CH + OH + NH), 2,57 (2H, t, CH2), 2,77 (2H, t, CH2), 2,87 (3H, s, MeN), 2,94
50 (2H, m, CH2), 3,30 (2H, t, CH2), 3,64 (6H, m, 3 x CH2O); EM (ESI) m / z = 346,3 (M + H+).
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Se hicieron reaccionar 0,18 g (1,0 mmol) de N-Boc-N-metil-1,2-diaminoetano y 0,15 g (1,0 mmol) de ácido 4formilbenzoico de acuerdo con el procedimiento general A del ejemplo 1 para dar 0,34 g (90 %) de 9 (sal de HCl). RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6): δ = 2,89 (3H, s, MeN), 3,11 (2H, m, CH2N), 3,57 (2H, t, CH2N), 4,25 (2H, m, CH2N), 7,33 (2H, d, ArH), 8,02 (2H, d, ArH), 9,03 (2H, s a, NH2+), 13,03 (1H, s, CO2H); EM (ESI) m /  = 309,2 (M + H+).
Ejemplo 7: Síntesis del compuesto 11
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Se disolvieron 1,84 g (7,5 mmol) de clorhidrato de N-Cbz-1,3-diamina y 3 ml de Et3N en 50 ml de DCM, se enfrió en hielo y se añadieron 0,94 ml de cloroformiato de fenilo disueltos en 5 ml de DCM gota a gota. La mezcla se agitó a 0 ºC durante 2 horas y se concentró al vacío. El residuo se disolvió en 50 ml de DCM, se lavó con 25 ml de KHSO4 0,5 M, se secó con MgSO4 y se concentró al vacío. El residuo se disolvió en 25 ml de EtOH, se añadieron 4 ml de amoniaco concentrado y la mezcla se agitó durante 3 h. La mezcla se concentró al vacío y el residuo se disolvió en 25 ml de CHCl3, se lavó con 10 ml de NaOH 4 M y solución salina saturada, se secó con MgSO4 y se concentró al vacío para dar 1,9 g de compuesto intermedio. Este material se disolvió en 50 ml de MeOH, se añadieron 0,1 g de Pd / C y la mezcla de reacción se agitó en atmósfera de hidrógeno durante 5 h. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró al vacío para dar 0,87 g (95 %) del compuesto 10. Se hicieron reacción 0,26 g (1,7 mmol) de esta amina de acuerdo con el procedimiento general A para dar 0,17 g (36 %) de 11 en forma de un aceite. RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6): δ = 1,39 (9H, s, Boc), 1,45 (2H, m, CH2), 2,48 (2H, t, CH2), 2,58 (2H, t, CH2), 2,78 (3H, s, MeN), 2,97 (2H, m, CH2), 3,18 (2H, t, CH2), 5,35 (2H, s, NH2), 5,87 (1H, t, NH); EM (ESI) m / z = 275,2 (M + H+).
Ejemplo 8: Síntesis del compuesto 12
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Se disolvieron 0,98 g (4,0 mmol) de clorhidrato de N-Cbz-1,3-diamina y 3 ml de Et3N en 15 ml de DCM y se añadieron gota a gota a 1,65 ml (12 mmol) de oxalato de dietilo en 15 ml de etanol. La mezcla se agitó a TA durante una noche, se concentró al vacío y el residuo se purificó por cromatografía en columna (SiO2, DCM / MeOH, de 1 : 0 a 95 : 5) para dar la mono-oxalamida. Este material se disolvió en 15 ml de etanol y se añadieron 4 ml de amoniaco concentrado y la mezcla se agitó a TA durante una noche. La mezcla se diluyó con 50 ml de MeOH y se añadieron 100 mg de Pd / C. La mezcla se agitó en atmósfera de hidrógeno durante 3 h. Se añadieron 10 ml de agua, la mezcla se filtró sobre Celite y el filtrado se concentró al vacío para dar 0,57 g (94 %) de un sólido de color blanco. Esto se hizo reaccionar de acuerdo con el procedimiento general A del Ejemplo 1 para dar 0,45 g (38 %) de 12 en forma de un sólido de color blanco. RMN de 1H (300 MHz, CDCl3): δ = 1,45 (9H, s, Boc), 1,80 (2H, m, CH2), 2,80 (4H, m, 2 x CH2), 2,89 (3H, s, MeN), 3,39 (4H, m, 2 x CH2), 6,85 (1H, s, NH), 7,40 (1H, s, NH), 8,39 (1H, t, NH); EM (ESI) m / z = 303,2 (M + H+).
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5 Compuesto 14c: El compuesto 13c (0,51 mmol) se disolvió en THF (12 ml); se añadieron LiOH (1,02 mmol) y agua (1 ml) y la mezcla de reacción se agitó durante 4 h. A continuación, la mezcla se acidificó con HCl acuoso (1 M, 1,5 ml), concentrado, se concentró y el residuo se purificó por cromatografía en columna (SiO2, DCM / MeOH, de 1 : 0 a
9 : 1) para producir el compuesto 14c (0,41 mmol) Compuesto 15a: El compuesto 14a (0,11 mmol) se disolvió en dioxano (2 ml); se añadieron piridina (0,07 mmol) y
10 Boc2O (0,14 mmol) seguido de NH4HCO3 (0,14 mmol). La mezcla resultante se agitó durante 8 h. A partir de ese momento, la mezcla se concentró y se purificó por cromatografía en columna (SiO2, DCM / MeOH, de 1 : 0 a 9 : 1) para producir el compuesto 15a (0,06 mmol).
Ejemplo 10: Síntesis de conjugados de conector -agente 15
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Procedimiento general para el acoplamiento del espaciador de ciclado al fármaco protegido activado (etapa 2): se disolvieron 0,2 mmol de fármaco protegido activado, 0,6 mmol de espaciador mono-protegido, y 0,02 mmol de HOBt en 2 ml de DMF, se añadió 1 mmol de Et3N y la mezcla se calentó a 50 ºC durante 2 h. La mezcla se concentró al vacío y el producto en bruto se purificó por cromatografía en columna (SiO2, DCM / MeOH) para dar el espaciador -fármaco de ciclado.
Procedimiento general para el acoplamiento del conector al compuesto intermedio de espaciador -fármaco de ciclado (etapas 3 y 4): se suspendieron 0,1 mmol de espaciador -fármaco de ciclado en 6 ml de CHCl3, la mezcla de reacción se enfrió en hielo y se añadieron 2 ml de TFA y la mezcla se agitó durante 3 h. A continuación, la mezcla se concentró al vacío. El residuo se disolvió en 4 ml de DMF, la solución se enfrió en hielo y se añadieron 0,13 mmol de conector activado (16 o 17) y 1 mmol de Et3N. La mezcla se agitó durante 2 horas, se concentró al vacío y el residuo se purificó por cromatografía en columna (SiO2, DCM / MeOH, de 1 : 0 a 8 : 2) hasta dar un aceite que se purificó adicionalmente mediante HPLC preparativa en fase inversa (acetonitrilo / agua + TFA al 0,1 %) y se liofilizó para dar la construcción 18 en forma de un sólido de color amarillo pálido.
Compuesto 18b, R = Me: RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ = 0,84 (6H, dd, J = 6,4 Hz, 2 x CH3 Val), 1,32
1,47 (2H, m, CH2 Cit), 1,52 -1,71 (2H, m, CH2 Cit), 1,91 -1,99 (1H, m, β-H Val), 2,81 -3,03 (11H, m, 3 x CH3 + NCH2), 4,36 -4,43 (1H, m, H-2), 4,45 -4,51 (1H, m, α-H), 4,63 -4,41 (1H, m, H-2), 4,97 -5,08 (3H, m, CH2 PABA + H-1), 5,97 (1H, s a, NH), 6,90 (2H, d, J = 8,8 Hz, H-3”), 7,01 (2H, s, CH=CH), 7,14 -7,59 (7H, m, ArH + 2 x NH), 7,67 -7,80 (3H, m, ArH), 7,91 (2H, d, J = 8,8 Hz, H-2”), 8,06 (1H, s a, H-6), 8,33 (H, s a, H-4), 8,81 (1H, s, H-3’), 9,55 (1H, s, H-4’), 9,99 (1H, s, NH), 10,20 (1H, s, NH), 10,28 (1H, s, OH); EM (ESI): m/z = 1257,3 (M + H+). Compuesto 18c, R = Me: RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ = 0,84 (6H, dd, Val), 1,28 -1,73 (4H, m, CH2CH2Cit), 1,95 (1H, m, βHVal), 2,85 (3H, s, MeAr), 2,94 (3H, s, MeN), 2,87 -3,05 (4H, m, 2 x CH2NMe), 4,05 (2H, t, CH2O), 4,40 (1H, m, H-1), 4,48 (1H, s, CH), 4,67 (1H, m, H-2), 5,05 (3H, m, CH2O, H-2), 5,40 (2H, s a, NH2), 5,96 (1H, s a, NH), 6,90 (2H, d, H-3”), 7,01 (2H, s, CH=CH), 7,2 -7,7 (10H, m, ArH + NH), 7,91 (2H, d, H2”), 8,05 (1H, s, H 6), 8,33 (1H, s a, H-4), 8,77 (1H, s, H-3’), 9,52 (1H, s, H-4’), 10,0 (1H, s, NH), 10,19 (1H, s, NH), 10,25 (1H, s, OH); EM (ESI): m/z = 1345,7 (M + H+). Compuesto 18b, R = (CH2CH2O)2H: RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6), δ (ppm): δ = 0,84 (6H, dd, Val), 1,28
1,73 (4H, m, CH2CH2Cit), 1,96 (1H, m, βHVal), 2,85 (3H, s, MeAr), 2,95 (3H, s, MeN), 2,87 -3,05 (4H, m, 2 x CH2NMe), 4,00 (2H, t, CH2O), 4,35 (1H, m, H-1), 4,48 (1H, m, CH), 4,67 (1H, m, H-2), 4,93 -5,11 (4H, m, CH2O, H-2, CH), 5,40 (2H, s a, NH2), 5,97 (1H, s a, NH), 6,91 (2H, d, H-3”), 7,01 (2H, s, CH=CH), 7,2 -7,7 (10H, m, ArH + NH), 7,91 (2H, d, H-2”), 8,06 (1H, d, H-6), 8,33 (1H, s a, H-4), 8,80 (1H, s, H-3’), 9,54 (1H, s, H-4’), 10,01 (1H, s, NH), 10,20 (1H, s, NH), 10,27 (1H, s, OH); EM (ESI): m/z = 1331,7 (M + H+). Compuesto 18c, R= (CH2)4C(NH2)COOH: RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ = 0,84 (6H, dd, J =6,4 Hz, 2 x CH3 Val), 1,29 -1,98 (11H, m, 3 x CH2 Lis + 2 x CH2 Cit + β-H Val), 2,82 -3,04 (8H, m, 2 x CH3 + NCH2), 4,35
4,42 (1H, m, H-1), 4,45 -4,51 (1H, m, α-H), 4,63 -4,70 (1H, m, H-2), 4,95 -5,07 (2H, m, CH2 PABA), 5,09 -5,16 (1H, m, H-2), 5,99 (1H, s a, NH), 6,90 (2H, d, J = 8,4 Hz, H-3”), 7,01 (2H, s, CH=CH), 7,16 -7,77 (11H, m, ArH + 3 x NH), 7,90 (2H, d, J = 8,4 Hz, H-2”), 8,05 -8,09 (1H, m, H-6), 8,19 (3H, s a, NH, Lis + OH), 8,31 -8,37 (1H, m, H-4), 8,75 (1H, s a, H-3’), 9,53 (1H, s a, H-4’), 10,00 (1H, s a, NH), 10,16 -10,26 (2H, m, NH + OH); EM (ESI): m/z = 1460,7 (M + H+). Compuesto 18d, R = (CH2CH2O)2H: RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ = 0,84 (6H, dd, Val, J = 6,8), 1,30
1,46 (2H, m, CH2 Cit), 1,52 -1,70 (2H, m, CH2 Cit), 1,91 -1,99 (1H, m, β-H Val), 2,80 -3,05 (10H, m, ArCH3 + NCH3 + 2 x NCH2), 3,97 -4,06 (5H, m, 2 x CH2O + H-2), 4,20 (2H, d, J = 5,6 Hz, NCH2-triazol), 4,36
4,43 (1H, m, H-1), 4,44 -4,52 (3H, m, CH2-triazol + α-H), 4,63 -4,71 (1H, m, H-2), 4,94 -5,09 (3H, m, CH2 PABA + H-2), 5,98 (1H, s a, NH), 6,90 (2H, d, J = 8,8 Hz, H-3”), 6,99 (2H, s, CH=CH), 7,16 -7,81 (11H, m, ArH + NH), 7,87 (1H, s, triazol-H), 7,91 (2H, d, J = 8,8 Hz, H-2”), 8,05 -8,09 (1H, m, H-6), 8,33 (H, m, H-4), 8,83 (1H, s, H-3’), 9,55 (1H, s, H-4’), 10 -00 (1H, s, NH), 10,20 (1H, s, NH), 10,28 (1H, s, OH); EM (ESI): m/z = 1543,7 (M + H+). Compuesto 18c, R = (CH2CH2O)2H: RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6), δ = 0,84 (6H, dd, Val), 1,28 -1,73 (4H, m, CH2CH2Cit), 1,96 (1H, m, βHVal), 2,85 (3H, s, MeAr), 2,94 (3H, s, MeN), 2,87 -3,05 (4H, m, 2 x CH2NMe), 4,05 (2H, t, CH2O), 4,40 (1H, m, H-1), 4,48 (1H, m, CH), 4,67 (1H, m, H-2), 4,93 -5,16 (4H, m, CH2O, CH, H-2), 5,40 (2H, s a, NH2), 5,96 (1H, s a, NH), 6,90 (2H, d, H-3”), 7,01 (2H, s, CH=CH), 7,2 -7,8 (11H, m, ArH + 3 x NH), 7,90 (2H, d, H-2”), 8,05 (1H, d, H-6), 8,32 (1H, s a, H-4), 8,76 (1H, s, H-3’), 9,51 (1H, s, H-4’), 10,01 (1H, s, NH), 10,19 (1H, s, NH), 10,24 (1H, s, OH); EM (ESI): m/z = 1419,7 (M + H+). Compuesto 18a, R = (CH2CH2O)2H: RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ = 0,81 (6H, dd, J = 6,4 Hz, 2 x CH3), 1,30 -1,47 (2H, m, CH2 Cit), 1,53 -1,71 (2H, m, CH2 Cit), 1,89 -1,99 (1H, m, β-H Val), 2,82 -3,05 (8H, m, 2 x CH3 + NCH2), 3,96 -4,02 (1H, m), 4,15 -4,23 (1H, m), 4,33 - 4,40 (1H, m, H-1), 4,44 -4,52 (1H, m, α-H), 4,63
4,71 (1H, m, H-2), 4,94 -5,12 (3H, m, CH2 + H-2), 5,96 (1H, s a, NH), 6,90 (2H, d, J = 8,4 Hz, H-3”), 7,01 (2H, s, CH=CH), 7,10 -7,54 (7H, m, 5 ArH + 2 x NH), 7,66 -7,81 (3H, m, ArH), 7,91 (2H, d, J = 8,8 Hz, H-2”), 8,00 -8,05 (1H, m, H-6), 8,29 -8,37 (1H, m, H-4), 8,79 (1H, s a, H-3’), 9,54 (1H, s a, H-4’), 9,91 -10,00 (1H, m, NH), 10,20 (1H, s a, OH), 10,27 (1H, s, NH); EM (ESI): m/z = 1287,7 (M + H+). Compuesto 18b, R = (CH2)3C(O)NH2: RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ = 0,83 (6H, dd, J = 6,4 Hz, 2 x CH3 Val), 1,25 -2,15 (9H, m, 2 x CH2 butiramida + 2 x CH2 Cit + β-H Val), 2,82 -3,04 (8H, m, 2 x CH3 + NCH2), 3,18
3,98(15H,m,2xH-10+6 xCH2+ α-H), 4,34 -4,42 (1H, m, H-1), 4,46 -4,54 (1H, m, α-H), 4,63 -4,71 (1H, m, H-2), 4,93 -5,07 (3H, m, CH2 PABA + H-2), 5,98 (1H, s a, NH), 6,76 (1H, s a, NH), 6,91 (2H, d, J = 8,8 Hz, H-3”),
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50
7,00 (2H, s, CH=CH), 7,13 -7,58 (8H, m, ArH + 2 x NH), 7,65 -7,83 (3H, m, ArH), 7,91 (2H, d, J = 8,4 Hz, H-2”), 8,04 -8,09 (1H, m, H-6), 8,28 -8,37 (1H, m, H-4), 8,89 (1H, s a, H-3’), 9,60 (1H, s a, H-4’), 9,93 -10,02 (1H, m, NH), 10,34 (1H, s a, NH); EM (ESI): m/z = 1328,3 (M + H+). Compuesto 18b, R = (CH2)4C(NH2)COOH: RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ = 0,83 (6H, dd, J =6,4 Hz, 2 x CH3 Val), 1,30 -1,98 (11H, m, 3 x CH2 Lis + 2 x CH2 Cit + β-H Val), 2,82 -3,04 (8H, m, 2 x CH3 + NCH2), 4,33
4,42 (1H, m, H-1), 4,45 -4,51 (1H, m, α-H), 4,62 -4,70 (1H, m, H-2), 4,95 -5,07 (2H, m, CH2 PABA), 5,10 -5,16 (1H, m, H-2), 5,98 (1H, s a, NH), 6,90 (2H, d, J = 8,8 Hz, H-3”), 7,01 (2H, s, CH=CH), 7,13 -7,77 (11H, m, ArH + 3 x NH), 7,90 (2H, d, J = 8,8 Hz, H-2”), 8,05 -8,09 (1H, m, H-6), 8,19 (3H, s a, NH2 Lis + OH), 8,31 -8,37 (1H, m, H-4), 8,73 (1H, s a, H-3’), 9,51 (1H, s a, H-4’), 10,00 (1H, s a, NH), 10,17 -10,25 (2H, m, NH + OH); EM (ESI): m/z = 1372,6 (M + H+). Compuesto 18b, R = (CH2)3COOH: RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6), δ = 0,83 (6H, dd, Val), 1,28 -1,73 (4H, m, CH2CH2Cit), 1,74 -2,02 (2H, m, CH2), 1,95 (1H, m, βHVal), 2,19 -2,39 (2H, m, CH2), 2,85 (3H, s, MeAr), 2,94 (3H, s, MeN), 2,87 -3,05 (4H, m, 2 x CH2NMe), 4,00 (2H, m, CH2O), 4,40 (1H, m, H-1), 4,48 (1H, m, CH), 4,67 (1H, m, H-2), 4,93 -5,18 (4H, m, CH2O, CH, H-2), 5,40 (2H, s a, NH2), 5,96 (1H, s a, NH), 6,90 (2H, d, H-3”), 7,01 (2H, s, CH=CH), 7,2 -7,8 (10H, m, ArH + NH), 7,91 (2H, d, H-2”), 8,06 (1H, d, H-6), 8,33 (1H, s a, H-4), 8,76 (1H, s, H-3’), 9,51 (1H, s, H-4’), 10,01 (1H, s, NH), 10,19 (1H, s, NH), 10,24 (1H, s, OH); EM (ESI): m/z = 1329,8 (M + H+). Compuesto 18c, R = (CH2)3COOH: RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6), δ = 0,84 (6H, dd, Val), 1,30 -1,73 (4H, m, CH2CH2Cit), 1,74 -2,02 (2H, m, CH2), 1,95 (1H, m, βHVal), 2,19 -2,39 (2H, m, CH2), 2,85 (3H, s, MeAr), 2,94 (3H, s, MeN), 2,87 -3,05 (4H, m, 2 x CH2NMe), 4,05 (2H, m, CH2O), 4,40 (1H, m, H-1), 4,48 (1H, m, CH), 4,67 (1H, m, H-2), 4,95 -5,16 (4H, m, CH2O, CH, H-2), 5,40 (2H, s a, NH2), 5,96 (1H, s a, NH), 6,90 (2H, d, H-3”), 7,01 (2H, s, CH=CH), 7,2 -7,8 (9H, m, ArH + NH), 7,91 (2H, d, H-2”), 8,05 (1H, d, H-6), 8,34 (1H, s a, H-4), 8,77 (1H, s, H-3’), 9,52 (1H, s, H-4’), 10,01 (1H, s, NH), 10,19 (1H, s, NH), 10,24 (1H, s, OH); EM (ESI): m/z 1417,9 (M + H+). Compuesto 18b, R = (CH2)3NHC(O)NH2: RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ = 0,79 (6H, dd, Val), 1,25 -1,8 (6H, m, 3 x CH2), 1,91 (1H, m, βHVal), 2,80 (3H, s, MeAr), 2,90 (3H, s, MeN), 2,95 (4H, m, 2 x CH2N), 4,34 (1H, m, H-1), 4,61 (1H, m, H-2), 4,94 (1H, m, H-2), 4,99 (2H, s, CH2O), 5,32 (4H, s a, 2 x NH2), 5,91 (1H, s a, NH), 5,98 (1H, s a, NH), 6,86 (2H, d, H-3”), 6,95 (2H, s, CH=CH), 7,2 -7,7 (10H, m, ArH + 2 x NH), 7,86 (2H, d, H-2”), 8,02 (1H, d, H-6), 8,28 (1H, s a, H-4), 8,82 (1H, s, H-3’), 9,54 (1H, s, H-4’), 9,95 (1H, s, NH), 10,15 (1H, s, NH), 10,27 (1H, s, OH); EM (ESI): m/z = 1343,7 (M + H+). Compuesto 18c, R = (CH2)3NHC(O)NH2: RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ = 0,79 (6H, dd, Val), 1,25 -1,8 (6H, m, 3*CH2), 1,91 (1H, m, βHVal), 2,80 (3H, s, MeAr), 2,90 (3H, s, MeN), 2,95 (4H, m, 2 x CH2N), 4,34 (1H, m, CH), 4,45 (1H, m, CH), 4,61 (1H, m, H-2), 4,94 (1H, m, H-2), 4,99 (2H, s, CH2O), 5,32 (4H, s a, 2 x NH2), 5,91 (1H, s a, NH), 5,98 (1H, s a, NH), 6,86 (2H, d, H-3”), 6,95 (2H, s, CH=CH), 7,2 -7,7 (10H, m, ArH + 2 x NH), 7,86 (2H, d, H-2”), 8,02 (1H, d, H-6), 8,28 (H, s a, H-4), 8,82 (1H, s, H-3’), 9,54 (1H, s, H-4’), 9,95 (1H, s, NH), 10,15 (1H, s, NH), 10,27 (1H, s, OH); EM (ESI): m/z = 1431,5 (M + H+). Compuesto 18d, R = (CH2)3NHC(O)NH2: RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ = 0,83 (6H, dd, Val), 1,25 -1,8 (6H, m, 3 x CH2), 1,95 (1H, m, βHVal), 2,85 (3H, s, MeAr), 2,94 (3H, s, MeN), 2,95 (4H, m, 2 x CH2N), 4,20 (2H, d, NCH2), 4,39 (1H, m, CH), 4,48 (3H, m, CH + CH2), 4,67 (1H, m, H-2), 5,02 (3H, m, H-2, CH2O), 5,41 (4H, s a, 2 x NH2), 5,97 (2H, s a, 2 x NH), 6,91 (2H, d, H-3”), 6,99 (2H, s, CH=CH), 7,2 -7,7 (11H, m, ArH + 3 x NH), 7,76 (1H, s, triazol-H), 7,88 (2H, d, H-2”), 8,08 (1H, d, H-6), 8,33 (H, s a, H-4), 8,84 (1H, s, H-3’), 9,57 (1H, s, H-4’), 10,00 (1H, s, NH), 10,20 (1H, s, NH), 10,30 (1H, s, OH); EM (ESI): m/z = 1556,2 (M + H+). Compuesto 18b, R = (CH2CH2O)3H: RMN de 1H (400 MHz, DMSO): δ = 0,83 (6H, dd, J = 6,5 Hz, J = 15,8 Hz, Val), 1,3 -1,7 (4H, m), 1,96 (1H, m), 2,90 (8H, m), 3,00 -4,00 (6H, m), 4,44 (2H, m), 4,67 (1H, m), 6,69 (1H, s), 5,04 (2H, d, J = 9,8 Hz), 5,40 (1H, s a), 5,97 (1H, s, NH), 6,9 (2H, d, J = 8,3 Hz), 7,00 (2H, s, CH=CH), 7,13 -7,61 (7H, m), 7,75 (3H, m) 7,91 (2H, d, J = 8,3 Hz), 8,06 (1H, m), 8,33 (1H, s), 8,83 (1H, s), 9,56 (1H, s), 9,97 (1H, s), 10,20 (1H, s), 10,30 (1H, s); EM (ESI): m / z = 1376 (M + H+).
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1,71 (2H, m, CH2 Cit), 1,91 -1,99 (1H, m, β-H Val), 2,82 -3,03 (8H, m, 2 x CH3 + NCH2), 4,18 -4,22 (2H, m, CH2O), 4,35 -4,43 (1H, m, H-1), 4,46 -4,52 (1H, m, α-H), 4,63 -4,71 (1H, m, H-2), 4,94 -5,08 (3H, m, CH2 PABA + H-2), 5,97 (1H, s a, NH), 7,01 (2H, s, CH=CH), 7,09 -7,20 (4H, m, H-3” + 2 ArH), 7,22 -7,58 (5H, m, 3 ArH + 2 x NH), 7,69 -7,82 (3H, m, ArH), 8,00 (2H, d,  = 8,8 Hz, H-2”), 8,03 -8,08 (1H, s a, H-6), 8,28 -8,37 (1H, m, H-4), 8,83 (1H, s a, H-3’), 9,57 (1H, s a, H-4’), 9,93 -10,02 (1H, m, NH), 10,39 (1H, s, NH); EM (ESI): m/z = 1509,6 (M + H+).
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Compuesto 23: el compuesto 23 se preparó de forma análoga partiendo del fármaco activado correspondiente. RMN de 1H (400 MHz, DMSO): δ = 0,80 (6H, dd, J = 6,5 Hz, J = 15,9 Hz, 2 x CH3), 1,3 -1,7 (4H, m), 1,93 (1H, m), 2,9 (11H, m), 3,00 -4,50 (10H, m), 5,03 (3H, m), 5,40 (1H, s a), 5,94 (1H, s, NH), 6,98 (2H, s, CH=CH), 7,10
7,85 (11H, m), 8,03 (3H, m), 8,32 (1H, m) 8,76 (1H, s), 9,50 (1H, s), 9,78 (1H, s), 9,98 (1H, s a), 10,51 (1H, s a); EM (ESI): m / z = 1457 (M + H+).
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20 Compuesto 26: RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ = 0,83 (6H, dd, J = 6,8 Hz, 2 x CH3), 1,30 -1,47 (2H, m, CH2 Cit), 1,54 -1,71 (2H, m, CH2 Cit), 1,90 -2,00 (1H, m, β-H Val), 2,82 -3,03 (10H, m, ArH3 + NCH3 + 2 x NCH2), 3,19 (3H, s, OCH3), 3,97 -4,03 (2H, m, NCH2-triazol), 4,37 -4,52 (2H, m, H-1 + α-H), 4,64 -4,69 (3H, m, H-2 + CH2), 4,94 -5,13 (3H, m, CH2 PABA + H-2), 5,96 (1H, s a, NH), 7,01 (2H, s, CH=CH), 7,14 -7,58 (7H, m, 5 ArH + 3 x NH), 7,72 -7,84 (3H, m, ArH), 8,04 -8,07 (1H, m, H-6), 8,29 -8,38 (H, m, H-4), 8,74 -8,80 (2H, s, H
25 3’ + triazol-H), 9,53 (1H, s, H-4’), 10,00 (1H, s, NH), 10,85 (1H, s, NH); EM (ESI): m/z = 1496,9 (M + H+).
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5 Se disolvieron 0,21 g (0,85 mmol) de N-Boc-N-metil-N’-metil-1,2-diamino-1-metilpropano, 0,45 g (0,64 mmol) de 20 y 8 mg de HOBt en 5 ml de DMF. Se añadieron 0,75 ml DiPEA y la mezcla de reacción se agitó a TA durante una noche. La mezcla se concentró al vacío y se purificó por cromatografía en columna (SiO2, DCM / MeOH, de 1 : 0 a
20 : 1) para dar 0,50 g (100 %) de compuesto intermedio. Este material se suspendió en 4 ml de CHCl3 y se enfrió en hielo. Se añadieron 2 ml de TFA y la mezcla de reacción se agitó durante 2 horas a 0 ºC y después se concentró 10 al vacío. A este material en 6 ml de DMF, se añadieron 0,11 g (0,15 mmol) de fármaco protegido con MOM activado, 2 mg de HOBt y 0,2 ml (1,2 mmol) de Et3N y la mezcla se calentó a 50 ºC durante 3 h. La mezcla se concentró al vacío y se purificó por cromatografía en columna (SiO2, DCM / MeOH, de 1 : 0 a 75 : 15) para dar 0,14 g (72 %) de material. Esto se suspendió en 6 ml de CHCl3 enfriado en hielo. Se añadieron 0,5 ml de TFA y la mezcla se agitó durante 2 h y después se concentró al vacío. Este material y 0,045 g (0,17 mmol) de conector de maleimida-alquino 15 se disolvieron en 2 ml de DMF. Se añadieron 0,6 ml de una solución de 0,025 g (0,1 mmol) de CuSO4, 0,022 g (0,11 mmol) de 1,10-fenantrolina y 0,022 g (0,11 mmol) de ascorbato sódico en 1 ml de acetonitrilo / agua (1 : 2) a la mezcla de reacción y la mezcla se agitó durante 2,5 h. La mezcla se acidificó con ácido acético y se concentró al vacío. El producto en bruto se purificó por cromatografía en columna (SiO2, DCM / MeOH, de 1 : 0 a 8 : 2) para dar 0,026 g (16 %) de material que se purificó adicionalmente mediante HPLC preparativa en fase inversa y se liofilizó 20 para dar 0,015 g de 19. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ = 0,79 (6H, dd, Val), 1,34 (3H, s a, gem-Me ), 1,38 (3H, s a, gem-Me2), 1,3 -1,7 (4H, m, CH2CH2Cit), 1,90 (1H, m, βHVal), 2,80 (3H, s, MeAr), 2,91 (3H, s, MeN). 3,11 (3H, s a, MeN), 3,95 (2H, t, CH2O), 3,98 (2H, t, CH2O), 4,15 (2H, d, NCH2-triazol), 4,30 (1H, m, H-1), 4,43 (2H, t, CH2triazol), 4,61 (1H, m, H-2), 5,00 (2H, s, CH2O), 5,04 (1H, m, H-2), 5,37 (2H, s a, NH2), 5,92 (1H, s a, NH), 6,85 (2H, d, H-3”), 6,94 (2H, s, CH=CH), 7,2 -7,7 (11H, m, ArH + 3 x NH), 7,81 (1H, s, triazol-H), 7,84 (2H, d, H-2”), 8,03 (1H, d,
25 H-6), 8,27 (H, s a, H-4), 8,73 (1H, s, H-3’), 9,48 (1H, s, H-4’), 9,98 (1H, s, NH), 10,15 (1H, s, NH), 10,21 (1H, s, OH); EM (ESI): m/z = 1497,6 (M + H+).
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30 Compuesto 21: El mismo procedimiento se siguió para el compuesto 19. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6): δ = 0,83 (6H, dd, Val), 1,3 -2,1 (3H m, ciclohexilo + CH2CH2Cit + βHVal), 2,84 (3H, s, MeAr), 3,01 (8H, m, 2 x MeNCH), 3,98 (4H, m, 2 x CH2O), 4,20 (2H, d, NCH2-triazol), 4,36 (1H, m, H-1), 4,48 (2H, t, CH2-triazol), 4,65 (1H, m, H-2), 5,04 (1H, m, H-2), 5,06 (2H, s, CH2O), 5,39 (2H, s a, NH2), 5,96 (1H, s a, NH), 6,90 (2H, d, H-3”), 6,99 (2H, s, CH=CH), 7,2 -7,7 (11H, m, ArH + 3 x NH), 7,87 (1H, s, triazol-H), 7,91 (2H, d, H-2”), 8,06 (1H, d, H
35 6), 8,36 (H, s a, H-4), 8,80 (1H, s, H-3’), 9,55 (1H, s, H-4’), 9,97 (1H, s, NH), 10,20 (1H, s, NH), 10,27 (1H, s, OH);
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5
10
15
20
25
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35
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45
50
EM (ESI): m / z = 1523,6 (M + H+). Ejemplo 12: Síntesis de conectores de maleimida-péptido
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Compuesto 25a: RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0,83 (6H, dd, J = 6,9 Hz, 2 x CH3 Val), 1,30 -1,51 (2H, m, CH2 Cit), 1,53 -1,76 (2H, m, CH2 Cit), 1,90 -2,01 (1H, m, β-H Val), 2,89 -3,08 (2H, m, CH2 Cit), 3,62 (2H, t, J = 5,4 Hz, CH2), 3,83 -3,88 (1H, m, α-H), 3,97 -4,05 (1H, m), 4,16 -4,24 (1H, m), 4,35 -4,43 (1H, m, α-H), 5,25 (2H, s, CH2), 5,41 (2H, s, NH2), 5,95 -5,99 (1H, m, NH), 7,02 (2H, s, HC=CH), 7,11 -7,14 (1H, m, NH), 7,40 (2H, d, J = 8,7 Hz, Ar-H), 7,54 -7,59 (2H, m, Ar-H), 7,64 (2H, d, J = 8,4 Hz, Ar-H), 8,03 -8,06 (1H, m, NH), 8,29 -8,33 (2H, m, Ar-H), 10,08 (1H, s, NH); EM (ESI): m / z = 712,5 (M + H+). Compuesto 25b: RMN de 1H (300 MHz, DMSO-d6): δ = 0,85 (6H, dd, J = 6,9 Hz, 2 x CH3 Val), 1,32 -1,50 (2H, m, CH2 Cit), 1,54 -1,76 (2H, m, CH2 Cit), 1,91 -2,02 (1H, m, β-H Val), 2,90 -3,09 (2H, m, CH2), 3,49 -3,60 (6H, m, CH2), 3,87 -3,92 (1H, m, α-H), 3,97 -4,06 (2H, m, CH2), 4,37 -4,46 (1H, m, α-H), 5,24 (2H, s, CH2), 5,41 (2H, s, NH2), 5,95 -6,00 (1H, m, NH), 7,01 (2H, s, HC=CH), 7,15 -7,18 (1H, m, NH), 7,41 (2H, d, J = 8,7 Hz, Ar-H), 7,54 -7,59 (2H, m, Ar-H), 7,64 (2H, d, J = 8,4 Hz, Ar-H), 8,07 -8,10 (1H, m, NH), 8,29 -8,33 (2H, m, Ar-H), 10,11 (1H, s, NH); EM (ESI): m/z = 756,5 (M + H+). Compuesto 25c: RMN de 1H (300 MHz, CDCl3 / CD3OD) 8= 0,98 (6H, dd, J = 6,9 Hz, J = 14,4 Hz, CH3), 1,59 (2H, m), 1,76 (1H, m), 1,94 (1H, m), 2,13 (1H, m), 3,08 -3,28 (2H, m) 3,54 -3,76 (1 0H, m, CH2O), 4,00 (1H, d, J = 6,3 Hz), 4,20 (2H, m), 4,57 (1H, m), 5,27 (2H, s, OCH2Ar), 6,78 (2H, s, CH=CH), 7,42 (4H, m, ArH), 7,65 (2H, d, J = 8,5 Hz), 8,30 (2H, d, J = 9,2 Hz). Compuesto 25d: RMN de 1H (400 MHz, CDCl3 / CD3OD) δ = 0,98 (6H, dd, J = 6,9 Hz, J = 14,4 Hz, CH3), 1,59 (2H, m), 1,76 (1H, m), 1,94 (1H, m), 2,13 (1H, m), 3,08 -3,28 (2H, m) 3,57 -3,76 (14 H, m, CH2O), 4,00 (1H, m), 4,22 (2H, m), 4,57 (1H, m), 5,26 (2H, s, OCH2Ar), 6,78 (2H, s, CH=CH), 7,42 (4H, m, ArH), 7,66 (2H, d, J = 8,3 Hz), 8,29 (2H, d, J = 9,3 Hz).
Ejemplo 13: Determinación de la tasa de ciclado de compuestos de espaciador -duocarmicina de ciclado
Se prepararon compuestos de espaciador -duocarmicina de ciclado en los que el espaciador de ciclado se acopla al grupo hidroxi del agente alquilador de ADN a partir de los correspondientes derivados protegidos con Boc, tales como y similares al compuesto 14a por tratamiento con TFA en DCM durante 10 minutos, seguido de concentración. Para la medición de la tasa de ciclado a pH 7,4, el compuesto de espaciador -duocarmicina de ciclado se disolvió en una mezcla de tampón de fosfato 100 mM a pH 7,4 y acetonitrilo (60 / 40) a 25 ºC y la desaparición del material de partida / aparición de fármaco libre se siguió en el tiempo por LC / EM (inyección directa de mezcla de reacción). Para la medición de la tasa de ciclado a pH 5, el compuesto de espaciador -duocarmicina de ciclado se disolvió en una mezcla de tampón de acetato sódico 100 mM a pH 5 y acetonitrilo (60 / 40) a 37 ºC y la desaparición del material de partida / aparición de fármaco libre se siguió en el tiempo por LC / EM (inyección directa de mezcla de reacción). Las tasas de ciclado se calcularon a partir de los datos de LC / EM. La Figura 2 muestra algunos datos representativos. Todos los compuestos de espaciador -duocarmicina de ciclado representados en la Figura 2 contienen el mismo compuesto de duocarmicina. CM -Fármaco 1 contiene un espaciador de ciclado usado en la técnica anterior. Todos los otros compuestos de espaciador -duocarmicina de ciclado contienen espaciadores de ciclado seleccionados de entre los descritos en los Ejemplos 1 -9. Los resultados presentados en la Figura 2 indican que los espaciadores de ciclado de la presente invención se pueden usar para modular la tasa de ciclado.
Ejemplo 14: Estabilidad en plasma humano de conjugados de conector -agente conjugados con HSA
El conjugado de conector -agente que contiene un grupo maleimida se disolvió en DMSO y se añadió al plasma humano estabilizado con heparina sódica a 37 ºC de modo que la concentración de conjugado de conector -agente fuera 7,5 mM y el porcentaje de DMSO fuera de un 2,5 %. El conjugado de conector-agente se hace reaccionar in situ con albúmina de suero humana en 5 minutos, tal como se indica por LC / EM. La formación de fármaco libre se siguió en el tiempo por LC / EM. Las muestras de plasma se trataron con acetonitrilo y se centrifugaron antes del análisis. La Figura 3 presenta los datos de estabilidad del plasma humano para una selección representativa de conjugados de conector -agente de la presente invención. Todos los conjugados de conector -agente contienen el mismo análogo de duocarmicina y los conectores se acoplan al resto alquilador de ADN, con la excepción de LD13, en el que el conector está unido al resto de unión al ADN. LD5, LD12 y LD13 contienen conectores que se han usado en la técnica anterior y que contienen un conector relativamente largo al igual que en el compuesto 18d. LD10, LD25, LD26, LD28 y LD29 contienen conectores relativamente cortos similares al igual que en el compuesto 18b y tienen diferentes espaciadores de ciclado. LD10 y LD12 solo se diferencian en el resto L. Los resultados en la Figura 3 demuestran que los conjugados con un conector relativamente corto tienen una estabilidad elevada en plasma humano, que por lo general supera a la de los conjugados correspondientes con un conector relativamente largo. Además, se demuestra que la estabilidad en está influida por el espaciador de ciclado.
imagen173
Ejemplo 15: Estudio de la eficacia de una sola dosis en ratones nu / nu hembra que portan un xenoinjerto de N87
Preparación de los ADC: El Trastuzumab (50 mg, 10 mg / ml) se redujo usando 1,1 equivalentes molares de TCEP por incubación a 20 ºC durante 90 minutos para generar 2 tioles libres por mAb. La proporción de incorporación se confirmó a través del ensayo de Ellman. El conjugado de conector -agente disuelto en DMSO se añadió a la solución de anticuerpo reducido gota a gota a una proporción de 1,3 equivalentes molares por tiol libre de modo que la concentración final de DMSO fuera de un 10 %. Después de mezclar durante un periodo adicional de 50 minutos a 20 ºC, la reacción se interrumpió mediante la adición de un equivalente molar de N-acetilcisteína por conjugado de conector -agente. Después de la interrupción, el conjugado se desaló en tampón de PBS a pH 7,4 y a continuación se purificó usando una columna de r-Proteína A de 5 ml, con el producto recogido de esta columna siendo desalado en tampón de presentación (mismo tampón que en el Herceptin disponible en el mercado). El producto se filtró a 0,2 µm y se caracterizó para agregado (SEC), proporción de fármaco con respecto a anticuerpo (UV, 280 nm con respecto a 335 nm), y conjugado de conector -agente libre (LC / EM). Los ADC usados en el estudio de eficacia que se describen a continuación contienen una selección representativa de conjugados de conector -agente de la presente invención y tienen una proporción media de fármaco con respecto a anticuerpo de aproximadamente 2.
Estudio de eficacia: A los ratones nu / nu hembra de 7 -8 semanas de edad se les implantaron fragmentos de tumor N87 por vía subcutánea. El tratamiento comenzó 19 días después del implante cuando la masa tumoral media calculada para todos los grupos era de 130 mg. Los grupos de ADC contenían 6 animales por grupo; los grupos de control contenían 4 animales por grupo. Los animales se trataron con una sola dosis de 12 mg de ADC / kg (0,2 ml / 20 g para vehículo; 12 mg de mAb / kg para trastuzumab) el día 0. Los animales se sacrificaron cuando el tumor alcanzó una masa de 1.000 mg. La Figura 4A muestra la carga tumoral media para cada grupo. Una línea se detiene después de que un primer animal en el grupo correspondiente se haya sacrificado debido a la carga tumoral. La Figura B muestra el cambio de peso corporal medio para cada grupo. La Figura C muestra el porcentaje de supervivencia en cada grupo. ADC5 se basa en un conector -agente que contiene un conector relativamente largo al igual que en 18d, mientras que los ADC basados en los otros conector -agentes contienen un conector relativamente corto al igual que en 18b. ADC30 contiene un fármaco diferente al de los otros ADC, pero tiene el mismo conector que ADC28. ADC5 y ADC28 solamente se diferencian en el resto L. Los resultados en la Figura 4 demuestran que los conjugados que contienen un conector relativamente corto tienen una eficacia mejor que el conjugado correspondiente con un conector relativamente largo. Se demostró que tanto la naturaleza del conector como la naturaleza del fármaco también tienen un efecto en la eficacia.
Ejemplo 16: Escisión de conjugados de conector -agente inactivados por catepsina B
El conjugado de conector -agente se disolvió en acetonitrilo / agua y se añadieron 5 equivalentes de Nacetilcisteína. La mezcla de reacción se incubó durante 1 h a TA y posteriormente se liofilizó para dar el conjugado de conector agente inactivado. El conjugado de conector -agente inactivado disuelto en DMSO se añadió a una solución de 5 µg / ml de catepsina B (> 200 U / mg) en tampón de acetato sódico a pH 5 a 37 ºC. La concentración final del conjugado de conector -agente inactivado era 130 µM. La desaparición del material de partida se controló en el tiempo por LC / EM. La Figura 5 presenta los datos de escisión de catepsina B para una selección representativa de conjugados de conector -agente inactivado de la presente invención. LD5, LD12 y LD13 se basan en conector agentes de la técnica anterior y contienen conectores que son relativamente largos al igual que en 18d, mientras que los conectores en los otros conjugados de conector -agente inactivados son al igual que en 18b. Los otros conjugados de conector -agente inactivados mencionados se diferencian principalmente en el espaciador de ciclado. Los resultados de la Figura 5 demuestran que todos los conjugados de conector -agente inactivados se descienden de forma eficaz con catepsina B.
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Claims (5)

  1. imagen1
    REIVINDICACIONES
    1. Un compuesto, que es
    imagen2
    5
    o un isómero, o una mezcla de isómeros, en donde R5a se selecciona de entre H, metilo y metoxi, AZ es
    10
    imagen3
    o
    imagen4
    71
    imagen5
    V1 se selecciona de entre valilcitrulina, valillisina, fenilalanillisina, alanilfenilalanillisina y D-alanilfenilalanillisina, CL es
    imagen6
    L se selecciona de entre
    imagen7
    q varía de1 a4, y Ab es un anticuerpo o un fragmento o un derivado del mismo. 15
  2. 2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que Ab es un anticuerpo seleccionado de entre un anticuerpo anti-CD19, un anticuerpo anti-CD22, un anticuerpo anti-CD30, un anticuerpo anti-CD33, un anticuerpo anti-CD56, un anticuerpo anti-CD70, un anticuerpo anti-CD74, un anticuerpo anti-CD138, un anticuerpo anti-CLL-1, un anticuerpo anti-5T4, un anticuerpo anti-CD303, un anticuerpo anti-Tag 72, un anticuerpo de carbohidrato similar a
    20 anti-Lewis A, un anticuerpo anti-EphB3, un anticuerpo anti-HMW-MAA, un anticuerpo anti-CD38, un anticuerpo anti-Cripto, un anticuerpo anti-EphA2, un anticuerpo anti-GPNMB, un anticuerpo anti-integrina, un anticuerpo anti-MN, un anticuerpo anti-Her2 y un anticuerpo anti-PSMA, o de entre un fragmento funcional que se une a epítopo o un derivado de los mismos.
    25 3. El compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 2, en el que Ab es un anticuerpo anti-Her2 o un anticuerpo anti-PSMA, o un fragmento funcional que se une a epítopo o un derivado de los mismos.
  3. 4. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que Ab es el anticuerpo anti-
    Her2 trastuzumab. 30
  4. 5. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y un vehículo farmacéuticamente aceptable, preferentemente para su administración parenteral.
    35 6. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o la composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 5 para su uso como medicamento, en particular para el tratamiento o la prevención de un tumor en un mamífero.
  5. 7. El compuesto de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 o la composición farmacéutica de 40 acuerdo con la reivindicación 5 para su uso en terapia de combinación con otros uno o más agentes terapéuticos.
    72
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