JP2004522781A - 腫瘍処置のためのプロドラッグとしてのインドリンおよびテトラヒドロ−キノリン - Google Patents

Abstract

【化１】

ＸがＨであり、Ｙが脱離基であり、Ｒ¹が好ましくはＤＮＡ結合サブユニットである、一般式ＩまたはＩＡの化合物あるいはその塩は、デュオカルマイシンのプロドラッグアナログである。この化合物は、腫瘍において高レベルに発現するシトクロムＰ４５０によって（特に、ＣＹＰ１Ｂ１によって）、Ｘが結合する炭素原子においてヒドロキシル化されることが予期される。このプロドラッグは、細胞分裂を抑制するＤＮＡアルキル化剤として働くであろう腫瘍細胞において優先的に活性化されることが予測される。

Description

【技術分野】
【０００１】
本発明は、芳香族酸化／ヒドロキシル化活性型プロドラッグに関し、特に、抗−腫瘍プロドラッグ、および酵素であるシトクロムＰ４５０ファミリーの酸化／ヒドロキシル化活性によって特異的に活性化されるものに関する。
【背景技術】
【０００２】
治療目的のために使用され得る多くの従来の細胞障害薬（ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ｄｒｕｇｓ）が知られている。しかしながら、それらは典型的に、一般的に細胞毒性を有し、それゆえ破壊されることが要求される細胞以外の細胞に影響を及ぼすかもしれないという問題を抱えている。これは、標的化された（ｔａｒｇｅｔｅｄ）ドラッグデリバリーシステム（例えば、腫瘍組織の部位への直接的な注射、または例えば、ガン細胞表面上にのみ提示される抗原を特異的に認識する抗体へ細胞障害剤を結合させること）の使用によって幾分か解消され得る。あるいは、電磁照射を使用し、所望される部位において薬剤に細胞毒性になるよう化学変化を引き起こさせることができる。しかしながら、これらの技術は全て、多かれ少なかれ、いくらかの限界および欠点を有する。
【０００３】
化合物（＋）−ＣＣ−１０６５およびデュオカルマイシン（ｄｕｏｃａｒｍｙｃｉｎｓ）は、ＤＮＡアルキル化剤のクラスの天然に存在する代表的なものである。この天然に存在する化合物は、ＤＮＡ結合能を付与する１つまたは２つのサブユニットとともにピロロ［３，２−ｅ］インドールコアに基づくＤＮＡアルキル化ユニットからなる。ＣＣ−１０６５およびデュオカルマイシンＡは、ＤＮＡアルキル化特性の原因となるスピロ環状（ｓｐｉｒｏｃｙｃｌｉｃ）シクロプロパン基を含む。デュオカルマイシンＢ₂、Ｃ₂およびＤ₂は、シクロプロパン活性体（ｃｙｃｌｏｐｒｏｐａｎｅ ａｃｔｉｖｅｓ）に対する前駆体であり、またジヒドロピロール環上の８位において置換された（脱離基による）メチル基を含んでいると考えられている。ＣＣ−１０６５は、様々な経路によって合成されてきた（Ｂｏｇｅｒらにより、Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９７，９７，７８７−８２８中で要約される）。
【０００４】
ＵＳ−Ａ−４４１３１３２において、ＣＣ−１０６５の左手サブユニットの最初の合成が記載される。その合成は、シクロプロパン環が導入されるＷｉｎｓｔｅｉｎ Ａｒ−３’アルキル化に基づく。以前の工程において、Ｇａｓｓｍａｎ’ｓ Ｏｘｉｎｄｏｌ合成に基づく化学を使用して、α−チオメチルエステルとアニリンの反応によって、（インドールコアの）Ａ環が、導入される。アニリンは、最終生成物においてされるＤＮＡアルキル化のために重要であると考えられているＮＨ₂基に対してオルト位（ｏｒｔｈｏ）にある保護フェノール性ヒドロキシル基を有する。ＣＣ−１０６５は、広い抗腫瘍活性を有するが、正常細胞に対する毒性が強すぎて、臨床的に有用でない。
【０００５】
ＤＮＡ結合サブユニットを介して薬物をポリマー、または特異的結合剤（ＵＳ ５，８４３，９３７に記載されるビオチンまたは抗体のような）へ複合体化させることによりＣＣ−１０６５およびアナログの送達を標的化する試みがなされてきた。Ｂｏｇｅｒらは、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ １９９９ ＳＩ，１５０５−１５０９中において、１，２，９，９ａ−テトラヒドロシクロプロパ（ｃ） ベンズ［ｅ］インドール−４−オンのプロドラッグ（ここで、化合物のシクロプロパン開環型（ｒｉｎｇ−ｏｐｅｎｅｄ ｖｅｒｓｉｏｎ）がフェノール基の反応によって誘導され、エステルおよびカルバメート（ｃａｒｂａｍａｔｅｓ）を形成する）を記載する。
【０００６】
Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔｓ．（１９９８）３９，２２２７−２２３０において、Ｂｏｇｅｒらは、化合物
【０００７】
【化１】

【０００８】
（ここで、ＯＭＯＭはアルコキシアルコキシ基である）を含むいくつかのＣＣ−１０６５アナログの合成を記載する。この化合物は、マイトマイシンハイブリッドの前駆体（すなわち、シクロプロパン環が閉じられたインドリン型（ｃｙｃｌｏｐｒｏｐａｎｅ−ｒｉｎｇ−ｃｌｏｓｅｄ ｉｎｄｏｌｉｎｅ ｆｏｒｍ））として提唱される。
【０００９】
Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９９１）， １１３，３９８０−‘８３ Ｂｏｇｅｒ ｅｔ ａｌは、ＤＮＡアルキル化の選択性に寄与するＣＣ−１０６５アナログの特徴を同定するための研究を記載する。ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて試験された化合物は、２，３−ジヒドロインドールに基づくアルキル化サブユニットを有し、また６−デスヒドロキシアナログを含んでいた。これらは、６−ヒドロキシ化合物のものよりも１０⁴倍高い濃度であるが、少しの（ｓｏｍｅ）ＤＮＡアルキル化特性を有することが示された。
【００１０】
本発明は、インドール誘導体であり、インドールアルキル化サブユニットのベンゼン環におけるヒドロキシル基を有さず、且つそれゆえにそれ自体ではＤＮＡアルキル化剤として実質的に不活性である、ＣＣ−１０６５のアナログの前駆体に関する。
【００１１】
酵素ＣＹＰ１Ｂ１（生体異物代謝酵素であるシトクロムＰ４５０（ＣＹＰ）ファミリーのメンバー）が広範囲なヒトガン（乳房、結腸、肺、食道、皮膚、リンパ節、脳および精巣のガンを含む）において高頻度で発現し、そしてそれらが正常組織においては検出できなかったことが報告された（Ｍｕｒｒａｙ，Ｇ．Ｉ．ｅｔ ａｌ．，１５ Ｊｕｌｙ １９９７，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，５７ｍ ３０２６−３０３１およびＷＯ−Ａ−９７１２２４６）。これは、腫瘍細胞におけるシトクロムＰ４５０アイソフォームの発現が、腫瘍細胞におけるＣＹＰ酵素によって選択的に活性化され得る新規の抗腫瘍剤の開発のための分子標的を提供するという結論を導いたものの、薬物の例は与えられなかった。多くの他のＣＹＰアイソフォームは、種々の腫瘍において過剰発現することが示された。
【００１２】
腫瘍において発現するＣＹＰの多くは、Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ，ＬＨ ｅｔ ａｌ，（１９９９）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．１４（６），４７３−４８６において言及される。
【００１３】
ＷＯ−Ａ−９９／４００５６において、スチレン−およびカルコン−誘導体のプロドラッグが記載される。このプロドラッグのｉｎ ｓｉｔｕにおいて形成される代表的なヒドロキシル化型は、強力なチロシンキナーゼ（ＴＫ）阻害剤である。ＴＫ活性の阻害剤は、腫瘍阻害および細胞破壊に寄与する。このプロドラッグは、ＣＹＰ１Ｂ１酵素を発現するミクロソーム調製物によって活性化され、また同酵素を発現する細胞系に対して細胞毒性活性を有する一方、この酵素を発現しない細胞系に対して非常に低い細胞毒性活性を有することが示された。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、ＣＹＰ酵素（特に、Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ ＬＨ， ｅｔ ａｌ， ｏｐ． ｃｉｔ．によって記載されるような、腫瘍において高レベルで発現する酵素）により、ｉｎ ｓｉｔｕにおいてヒドロキシル化されることが予測されるプロドラッグの新規なクラスに関する。特に、このプロドラッグは、ＣＹＰ１Ｂ１酵素によって代謝可能であると考えられている。特に、その化合物のいくつかは新規である。本発明は、広範囲な化合物の最初の治療的使用に関する。
【００１５】
本発明の第１の局面に従って、動物の治療による処置の方法において使用するための組成物の製造における一般式ＩまたはＩＡの化合物あるいはその塩の新規な使用が提供される：
【００１６】
【化２】

【００１７】
（ここで、ＸはＨであり、；
Ｙは、脱離基（好ましくは、ＯＣＯＯＲ⁵、ＯＣＯＮＨＲ⁶、Ｃｌ、Ｂｒ、ＩおよびＯＳＯ₂Ｒ⁷（ここで、Ｒ⁵、Ｒ⁶、およびＲ⁷は、それぞれ、Ｃ_1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ_7-12−アラルキル及び必要に応じて置換されたヘテロアリールから選択される）から選択される）であり；
Ｒ¹は、−Ａｒ、−ＮＨ₂、Ｒ⁸またはＯＲ⁸であり；
Ｒ²およびＲ³は、各々独立して、Ｈ、Ｃ_1-4アルキル、−ＯＨ、Ｃ_1-4アルコキシ、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＯ₂、−ＮＨ₂、−ＮＨＣＯＲ⁹、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ¹⁰、−ＮＨＣＯＯＲ¹⁰および−ＣＯＯＲ¹⁰から選択され；
Ｒ⁴は、Ｈ、Ｃ_1-4アルキル、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ₂、ＮＨ₂、−ＮＨＣＯＲ⁹、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ¹⁰、−ＮＨＣＯＯＲ¹⁰および−ＣＯＯＲ¹⁰から選択され；
Ｒ⁸、Ｒ⁹およびＲ¹⁰は、独立して、Ｃ_1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ_7-12−アラルキル、および必要に応じて置換されたヘテロアリールおよびリガンドから選択され；
Ａｒは、
【００１８】
【化３】

【００１９】
から選択され（ここで、Ｂは、ＮまたはＣＲ¹⁴であり；
ＺはＯ、Ｓ−ＣＨ＝ＣＨ−、またはＮＨであり；
各（ｔｈｅ ｏｒ ｅａｃｈ）Ｒ¹¹は、ＯＨ、Ｃ_1-4アルコキシ、Ｃ_1-4アルキル、−ＮＯ₂、−ＮＨ₂、−ＮＨＲ¹⁷、−ＮＲ¹⁷ ₂、−Ｎ⁺Ｒ¹⁷ ₃、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＣＯＲ¹⁵、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ¹⁶、ＮＨＣＯＯＲ¹⁶およびＣＯＯＲ¹⁶から選択され；
ｎは０〜４の範囲の整数であり；
Ｒ¹²は、Ｈ、−ＣＯＡｒ¹、−ＣＯＮＨ₂、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＲ¹⁶または−ＣＯＯＲ¹⁶であり；
各Ｒ¹³は、ＯＨ、Ｃ_1-4アルコキシ、Ｃ_1-4アルキル、−ＮＯ₂、−ＮＨ₂、−ＮＨＲ¹⁷、−ＮＲ¹⁷ ₂、−Ｎ⁺Ｒ¹⁷ ₃、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＣＯＲ¹⁵、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ¹⁶、−ＮＨＣＯＯＲ¹⁶および−ＣＯＯＲ¹⁶から選択され；
ｍは０、１または２であり；
Ｒ¹⁴は、ＯＨ、Ｃ_1-4アルコキシ、Ｃ_1-4アルキル、−ＮＯ₂、−ＮＨ₂、−ＣＮ、Ｃｌ、 Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＣＯＲ¹⁵、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ¹⁶、−ＣＯＯＲ¹⁶、−ＮＨＣＯＯＲ¹⁶およびＨから選択され；
Ｒ¹⁵は、Ｃ_1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、必要に応じて置換されたヘテロアリール、Ｃ_7-12アラルキル、リガンドおよびＡｒ¹から選択され；
Ｒ¹⁶は、Ｃ_1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ_7-12−アラルキルおよび必要に応じて置換されたヘテロアリールおよびリガンドから選択され；
各Ｒ¹⁷は、Ｃ_1-4−アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、必要に応じて置換されたヘテロアリールおよびＣ_7-12−アラルキルから選択され；そして
Ａｒ¹は、Ａｒと同じ基から選択される（但し、任意の１つの環における多くとも１つの基Ｒ¹¹またはＲ¹³が基Ａｒ¹を含む）））
この化合物は獣医学的（ｖｅｔｅｒｎａｒｙ）用途も有するかも知れないが、処置される動物は、概して、ヒトである。処置される適応症（ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎ）は、概して、ガン（腺癌、白血病、リンパ腫、黒色腫、骨髄腫、肉腫、奇形癌、および特に、副腎、膀胱、骨、骨髄、脳、乳房、頚部（ｃｅｒｖｉｘ）、胆嚢、ガングリア（ｇａｎｇｌｉａ）、胃腸管、心臓、腎臓、肝臓、肺、筋肉、卵巣、膵臓、副甲状腺（ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ）、陰茎、前立腺、唾液腺、皮膚、脾臓、精巣、胸腺、甲状腺（ｔｈｙｒｏｉｄ）および子宮のガンを含む）である。腫瘍は、例えば、高レベルのＣＹＰ１Ｂ１を発現する腫瘍として定義され得る。
【００２０】
本発明において、脱離基Ｙは、例えば、求核置換反応において有用性を有する脱離基である。このような基の好適な例は、−ＯＣＯＯＲ⁵、−ＯＣＯＮＨＲ⁶、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、または−ＯＳＯＯＲ⁷である（ここで、Ｒ⁵、Ｒ⁶およびＲ⁷は、それぞれ、Ｃ_1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ_7-12−アラルキル、および必要に応じて置換されたヘテロアリールから選択される）。もっとも好ましくは、脱離基は、ハロゲン原子、好ましくは塩素である。
【００２１】
フェニル、アラルキルおよびヘテロアリール基において必要に応じてなされる置換は、例えば、Ｃ_1-4アルキル、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ_1-4−アルコキシ、−ＮＨ₂、−ＮＨＲ¹⁷、−ＮＲ¹⁷ ₂、−Ｎ⁺Ｒ¹⁷ ₃、−ＮＯ₂、−ＣＮ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＣＯＲ¹⁵、−ＣＯＮＨＲ¹⁶、−ＮＨＣＯＯＲ¹⁶、−ＣＯＯＲ¹⁶などである。
【００２２】
本発明において、用語リガンドは、特異的標的化の性質（例えば、抗体または遺伝子−指向型（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｏｒ ｇｅｎｅ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ）酵素プロドラッグ型環境において有用である）を有する基を含む。リガンドは、オリゴペプチド、ビオチン、アビジン、またはストレプトアビジン、ポリマー基、オリゴヌクレオチドまたはタンパク質であり得る。好ましくは、それは、抗体またはフラグメント、抗原、センスまたはアンチセンスオリゴヌクレオチド、またはアビジン、ストレプトアビジンおよびビオチンのうちの１つのように特異的結合特性を有する（すなわち、それは、特異的結合対の１つの構成成分である）。あるいは、それは、受動標的化のためにデザインされる基（ポリマー基のような）、または安定性を持続するまたは免疫原性を減少させるようデザインされる基（親水性基のような）であり得る。ＵＳ−Ａ−５８４３９３７は、これらの型の活性物（ａｃｔｉｖｅｓ）へ複合体化させる好適なリガンドおよびその複合体化を実行するための方法を開示する。
【００２３】
基Ａｒ¹は、好ましくは、
【００２４】
【化４】

【００２５】
である。
【００２６】
好ましくは、Ｒ¹は、薬学的に有効な化合物において−ＯＲ⁸以外である。
一般的に、最適化されたＤＮＡ結合能のために、一般式ＩまたはＩＡの化合物において、基Ｒ¹は基Ａｒである。しばしば、この化合物は互いに連結する２つの芳香族基を含み得る。このような化合物において、Ａｒ基の基Ｒ¹¹の１つ、または基Ｒ¹²は、場合により、基Ａｒ¹である。いくつかの化合物について、３つ以上のこのような芳香族基が連結されることが所望される一方、１つの基Ａｒまたは１つの基Ａｒ¹が存在することが好ましい。従って、ピロロジヒドロインドール型の基である基Ａｒ¹において、基Ｒ¹²は基−ＣＯＡｒ¹以外であるべきである。他の型の基の１つである基Ａｒ¹において、置換基Ｒ¹¹またはＲ¹³が存在しないべきであるか、あるいは、場合により何らかの置換基が存在する場合、このような置換基は基Ａｒ¹を含むべきではない。
【００２７】
本発明の１つの実施形態に従って、置換基Ａｒは、基
【００２８】
【化５】

【００２９】
である。
【００３０】
このような基Ａｒにおいて、Ｂは、好ましくはＣＲ¹⁴である。Ｒ¹⁴は、好ましくはＨである。フラン（Ｚ＝Ｏ）およびチオフェン（Ｚ＝Ｓ）アナログは、ＤＮＡアルキル化ユニットへの複合体化のために生成され、且つ有用なＤＮＡ結合特性を有し得るけれども、Ｚの定義は、好ましくはＮＨである。同様に基Ａｒ¹において、基ＢおよびＺは、同じ好ましい基の中から選択される。好ましくは、ｎが少なくとも１であり且つ基Ｒ¹¹の１つが−−ＮＨＣＯＡｒ¹である。この実施形態においてＡｒ¹は、好ましくは、基
【００３１】
【化６】

【００３２】
（ここで、ＢおよびＺはＡｒにおける場合と同じである。）
である
別の実施形態において、置換基Ａｒは、基
【００３３】
【化７】

【００３４】
である。
【００３５】
好ましくは、このような基ＡｒにおけるＲ¹²は、ＣＯＯＲ¹⁶以外であり、さらに好ましくは、それは、基−ＣＯＡｒ¹（ここで、Ａｒ¹は、好ましくは、同じ型の基である）である。
【００３６】
基ＡｒおよびＡｒ¹の両方の基において、インドール型基におけるｍは、好ましくはゼロである。
【００３７】
ＡｒおよびＡｒ¹において、いくつかの置換基Ｒ¹¹が存在してもよい。最も好ましくは、このような置換基は、Ｃ_1-4−アルコキシ基の中から選択される。
【００３８】
式Ｉの化合物において、ＤＮＡアルキル化サブユニットのコアベンゼン環は、好ましくは非置換である（Ｒ³およびＲ⁴は、両方とも水素原子である）。
【００３９】
式Ｉの化合物において、ＸはＨである。化合物のヒドロキシル化は、Ｘが結合する（ａｔｔａｃｈｅｄ）炭素原子でｉｎ ｓｉｔｕにおいて起こり、それによりＤＮＡアルキル化剤として作用することを可能にする化合物を活性化すると信じられている。
【００４０】
本発明は、さらに、式ＩおよびＩＡの化合物または塩および薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物を提供する。薬学的組成物は、筋肉内、腹腔内、肺内、経口または、もっとも好ましくは、静脈内投与に適しているかも知れない。この組成物は、例えば制御または遅延された放出のために、好適なマトリックスを含む。この組成物は、溶液、固体（例えば、粉末）、タブレットまたはインプラントの形態をとってもよいし、固体または溶解形態で式Ｉの化合物を含んでもよい。この化合物は、例えば液体処方物において、微粒子のドラッグデリバリーシステムに組み込まれ得る。好適な賦形剤の具体例としては、ラクトース、スクロース、マンニトール、およびソルビトール；トウモロコシ、コムギ、コメ、ジャガイモ、または他の植物に由来するスターチ；セルロース（メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、またはカルボキシメチルセルロースナトリウムのような）；ガム類（アラビアおよびトラガントを含む）；およびタンパク質（ゼラチンおよびコラーゲンのような）が挙げられる。所望されるならば、崩壊剤または可溶化剤（架橋結合されたポリビニルピロリドン、寒天、およびアルギン酸またはその塩（アルギン酸ナトリウムのような）のような）が添加されてもよい。固体組成物は、粉末およびゲルの形態をとってもよいが、より便利に、例えばタブレット、カシェ剤またはカプセル（スパンスルを含む）のような成形型（ｆｏｒｍｅｄ ｔｙｐｅ）である。あるいは、リポソーム、ナノソーム、およびナノ粒子を含むより特殊化された型の処方物である。
【００４１】
一般式ＩＡの化合物は、新規な化合物であり得ると考えられる。
【００４２】
一般式Ｉの１つの化合物（ここで、Ｒ¹は、−Ｏ−ｔＢｕであり、Ｒ²、Ｒ³、およびＲ⁴は全てＨであり、そしてＹはＯＳＯ₂ＣＨ₃である）は、Ｂｏｇｅｒ ｅｔ ａｌ， Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ（１９９１）１１３，３９８０−５９８３によって合成される。他のものは、類似する技術によって作製される。一連の工程においてＤＮＡアルキル化サブユニットを形成すること、そしてジヒドロ−ピロールまたはテトラハイドロキノリン環の窒素原子を介して、場合によっては、分子の残りに結合させることが便利である。ＤＮＡアルキル化サブユニットは、Ｂｏｇｅｒ ｅｔ ａｌ， １９９７ ｏｐ． ｃｉｔ．に記載のように合成されるＤＮＡ結合サブユニット（例えば、その文献に記載されるＰＤＥ−ＩおよびＰＤＥ−ＩＩサブユニット）へ複合体化され得る。
【００４３】
式ＩおよびＩＡの化合物は、式ＩＩまたはＩＩＡの化合物が、場合によって、
【００４４】
【化８】

【００４５】
（ここで、Ｘ、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴は上記に定義されるとおりであり；そして
Ｙ¹は、脱離基であるか、またはヒドロキシルである）；
が一般式ＩＩＩ：
Ｒ¹⁸ＣＯＹ² ＩＩＩ
（ここで、Ｒ¹⁸は、Ｃ_1-4−アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ_7-12−アラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリールおよびＡｒ²から選択され；
Ａｒ²は
【００４６】
【化９】

【００４７】
（ここでＢ¹はＮまたはＣＲ²³であり；
Ｚ¹はＯ、Ｓ、−ＣＨ＝ＣＨ−、またはＮＲ²⁴であり；
各（ｔｈｅ ｏｒ ｅａｃｈ）Ｒ¹⁹は、Ｃ_1-4−アルコキシ、Ｃ_1-4−アルキル、−ＮＯ₂、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＲ²⁴、−ＮＲ²⁵ ₂、−Ｎ⁺Ｒ²⁵ ₃−、Ｉ、−ＮＨＣＯＲ²⁶、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ²⁷および−ＣＯＯＲ²⁷から選択され；
ｐは０〜４の範囲の整数であり；
Ｒ²⁰は、アミン保護基であり；
Ｒ²¹は、アミン保護基、−ＣＯＮＨ₂、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＲ²⁷または−ＣＯＡｒ³であり；
各（ｔｈｅ ｏｒ ｅａｃｈ）Ｒ²⁰は、Ｃ_1-4−アルコキシ、Ｃ_1-4−アルキル、ＮＯ₂、ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＲ²⁴、−ＮＲ²⁵ ₂、−Ｎ⁺Ｒ²⁵ ₃−、−ＮＨＣＯＲ²⁶、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ²⁷および−ＣＯＯＲ²⁷から選択され；
ｑは０、１または２であり；
Ｒ²³は、Ｈ、Ｃ_1-4 −アルコキシ、Ｃ_1-4−アルキル、ＮＯ₂、ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＲ²⁴、−ＮＲ²⁵ ₂、−Ｎ⁺Ｒ²⁵ ₃−、−ＮＨＣＯＲ²⁶、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ²⁷およびＣＯＯＲ²⁷から選択され；
Ｒ²⁴は、アミン保護基であり；
Ｒ²⁶は、Ａｒ³、Ｃ_1-4−アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ_7-12−アラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリールおよびリガンドから選択され；
各Ｒ²⁵は、Ｈ、Ｃ_1-4−アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ_7-12−アラルキル、および必要に応じて置換されたヘテロアリールから選択され；
Ｒ²⁶は、Ｃ_1-4−アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ_7-12−アラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリールおよびリガンドから選択され、
Ａｒ³は、Ａｒ²と同じ基から選択され；
そしてＹ²は脱離基である（但し、任意の１つの環における多くとも１つの基Ｒ¹⁹またはＲ²²が基Ａｒ³を含む）））、
の化合物と反応する方法において合成され得る。
【００４８】
基Ａｒ³は、好ましくは、
【００４９】
【化１０】

【００５０】
である。
【００５１】
Ｙ²は、例えば、Ｙについて上記に列挙したような好ましい脱離基の中から選択される。最も好適には、Ｙ²の定義はＣｌである。あるいは、基Ｙ²はＯＨであってもよい。この場合、カップリング反応において補助するカップリング剤を含む必要があるかもしれない。
【００５２】
Ｙ¹は、Ｙと同じであってもよいし、あるいは他の脱離基またはもしくは続く工程においてＹへ転換され得るヒドロキシルであってもよい。
【００５３】
一般式ＩＩまたはＡの化合物と、場合によって、カルボン酸または一般式ＩＩの誘導体との間の反応は、このようなカップリングを起こさせる条件下において、行われる。このような条件は、ペプチド結合の形成のために一般的に使用される（例えば、ペプチド合成方法において使用されるような）条件に似ている。
【００５４】
カップリングプロセスの後、１つ以上の任意の保護アミン基を脱保護することが所望され得る。任意のこのようなアミン基を介して、例えば他の誘導体化剤（グリコシル化合物、ペプチド、ポリマーなど）を用いて、更なる反応が所望されるならば、続く反応が起こるもののみを脱保護し、一方他のアミン基を保護形態に保持することが所望され得る。保護および脱保護のプロトコルならびに適切なアミン保護基の選択は、ペプチド化学において一般的に利用される技術を用いてなされ得る。
【００５５】
式ＩＩまたはＩＩＡの化合物は、アミン基置換基に対してオルト位の炭素原子における脱離基置換基Ｙ³、および基−ＣＨ₂ＣＨ＝ＣＨＹ⁴（ここで、アニリン誘導体は、環化条件下において反応される）であるＮ−置換基を有するアニリン化合物を出発物質として使用して、触媒の存在下で、環化工程を含む予備工程において、調製され得、ジヒドロピロールあるいはジ−またはテトラヒドロキノリン環を形成する。
【００５６】
このような環化反応のための出発化合物は、一般式ＩＶによって表され得る
【００５７】
【化１１】

【００５８】
（ここで、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｘ⁴およびＹ¹は、式ＩＩの化合物におけるものと同一であり；
Ｒ²⁸は、アミン保護基であり、
Ｚ¹およびＺ²のうち一方がＹ⁴であり且つ他方がＨであり；
Ｙ⁴は、Ｈであるか、またはＹ¹と異なるまたは同じ脱離基であり；そして
Ｙ³がラジカル脱離基である）。
【００５９】
Ｙ³は、好ましくは、ハロゲン原子であり、さらに好ましくはＢｒまたはＩである。
【００６０】
ジヒドロピロール環を形成するための環化が所望される場合、基Ｚ¹はＹ⁴であり、そしてＹ⁴は、Ｈまたは脱離基のいずれかであり、好ましくはＹ¹と同じ基である（この反応において、Ｙ⁴は、脱離基として活性でないが、合成の続く工程においてはそのようであり得る）。この反応は、好適な触媒の存在下において、必要に応じてフリーラジカル捕捉剤（ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ ｔｒａｐ）の存在下において、行われる。基Ｙ⁴は、好ましくはＩである。Ｙ⁴が脱離基である場合、環化は、アゾイソブチロニトリルから誘導されるラジカルの存在下において行われ得る。このようなラジカル環化工程に好適な触媒は、トリブチルスズハイドライドのようなスズハイドライド化合物である。このような合成経路は、実施例１において説明される。
【００６１】
Ｙ⁴がＨである化合物ＩＶを用いる環化反応を行うための適切なラジカルは、２，２，６，６−テトラメチルピペリジニルオキシ（ＴＥＭＰＯ）ラジカルのようなニトロキシ化合物である。
【００６２】
６員環を形成するための環化について、Ｚ²がＹ⁴であり且つＹ⁴が脱離基（好ましくは、トリアルキルスタンニル基）である化合物ＩＶを使用すること、および適切な触媒パラジウム錯体（テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）クロライドまたはパラジウム（ＩＩ）アセテートのような）の存在下において反応を行うことが好ましい。この反応において、Ｙ⁴は脱離基として活性である。このジヒドロキノリン中間体は、例えばペルオキシド試薬を用いて、酸化され、エポキシドであるさらなる中間体を形成する。このエポキシド中間体は、好適な選択的還元剤（ジアルキルアルミニウムハイドライドのような）を用いて還元され、対応するテトラヒドロキノリンアルコール（これは、例えば、カーボンテトラクロライド／トリフェニルホスフィンを用いて、引き続きハロゲン化される）を生産する。この反応は、実施例２において説明される。
【００６３】
一般式ＩＶの化合物は、トランス−１，３−ジハロプロプ−２−エン化合物を用いる対応するアニリン（ａｍｉｌｉｎｅ）誘導体のナトリウム塩のアルキル化によって生成され得る。
【００６４】
一般式ＩＩＩのカルボン酸誘導体は、Ｂｏｇｅｒ ｅｔ ａｌ， １９９７ ｏｐ． ｃｉｔにおいて一般的に記載される方法を用いて合成され得、例えば、ＰＤＥ−ＩおよびＰＤＥ−ＩＩは、Ｕｍｅｚａｗａ合成、Ｒｅｅｓ−Ｍｏｏｄｙ合成、Ｍａｇｎｕｓ合成、Ｃａｖａ−Ｒａｗａｌ合成、Ｂｏｇｅｒ−Ｃｏｌｅｍａｎ合成、Ｓｕｎｄｂｅｒｇ合成、Ｍａｒｔｉｎ合成、Ｔｏｊｏ合成を用いて合成され得る。インドール−２−カルボン酸は、市販されている。デュオカルマイシンのＤＮＡ結合サブユニットの他のアナログ、およびその反応性カルボン酸誘導体は、Ｂｏｇｅｒ ｅｔ ａｌ， ｏｐ． ｃｉｔ．およびＵＳ−Ａ−５８４３９３７によって記載される。
【００６５】
本発明は、正常な状態の場合に細胞毒性効果をほとんど或いは全く有さないけれども、ＣＹＰ酵素による酸化またはヒドロキシル化によって活性化されるとき高度に細胞毒性である（すなわち、相当増強された細胞毒性を有する）広範囲なプロドラッグの創作に関する。これは、セルフ−ターゲッティングドラッグデリバリーシステム（ここで、非毒性（または無視してもよい毒性）化合物が患者へ投与（例えば、全身的な方法において）され得、その後その化合物は、腫瘍細胞の部位において活性化され（腫瘍内活性化）、腫瘍細胞を殺すよう働く高度に細胞毒性の化合物を形成する）を提供する。ＣＹＰアイソフォームが正常な細胞によって発現されないという事実は、この化合物の活性化が腫瘍細胞の部位においてのみ起こり、それにより腫瘍細胞のみが影響を受け、それゆえセルフ−ターゲッティングシステムが提供されることを意味する。
【００６６】
本発明のプロドラッグは、体内のどの部位においても腫瘍の処置において有用であるという明らかな利点を有し、このことは、転移を受けた腫瘍（これは、普通、部位特異的な治療に影響されにくい）でさえも処置され得ることを意味している。
【００６７】
このプロドラッグは、抗腫瘍プロドラッグであり得る。腫瘍の例としては、ガン（悪性新生物）および他の新生物（例えば、良性腫瘍）が挙げられる。このプロドラッグは、シトクロムＰ４５０のアイソフォームによるヒドロキシル化によって活性化され得る。プロドラッグの選択的ヒドロキシル化およびそれによる活性化をもたらすための腫瘍細胞内のＣＹＰ発現に頼る様々な通常の手順において、腫瘍組織と正常組織との間の選択性は、２つの部分手順において高められる。従って、（ａ）シトクロムＰ４５０遺伝子およびシトクロムＰ４５０リダクターゼ遺伝子を有するウイルスベクターで腫瘍細胞を感染させること（ここで、腫瘍細胞によるシトクロムＰ４５０遺伝子およびシトクロムＰ４５０リダクターゼ遺伝子の発現は、腫瘍内において、化学療法剤のその細胞毒性型への酵素的変換を可能にし、これによって、腫瘍細胞は、プロドラッグ化学療法剤に対して選択的に感受性を示す（ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｄ）ようになる）（ｂ）腫瘍細胞をプロドラッグ化学療法剤と接触させ、それにより腫瘍細胞を選択的に殺すこと。
【００６８】
従って、本発明のプロドラッグの腫瘍内ヒドロキシル化は、驚くべき予測不可能な効果をそれらに与える。
【００６９】
ヒドロキシル化形態のプロドラッグはＤＮＡの副溝（ｍｉｎｏｒ ｇｒｏｏｖｅ）において結合し且つＮ３位でプリン塩基をアルキル化する強力なＤＮＡアルキル化剤である。それ自体では、それらは、正確な生物学的作用メカニズムは知られていないが、テンプレートおよびＤＮＡの他の機能の崩壊（ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ）を伴う強力な細胞毒性剤である。ＤＮＡのテンプレート機能の一般的な阻害は、体内の全ての分裂する細胞に対して作用し、全体的に毒性を示し、そして治療設定（ｓｅｔｔｉｎｇ）において受け入れ難い副作用を導くであろう。しかしながら、特定のアイソフォームのＰ４５０を過剰発現する腫瘍細胞におけるヒドロキシル化型の標的化された生産は、それらの細胞においてのみ特異的な細胞毒性効果を導くであろう。非−ヒドロキシル化形態は、実質的に、全ての細胞に対して非−毒性である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００７０】
以下の実施例は、本発明を説明する。
実施例１
一般式Ｉの１つの化合物の合成は、以下の反応スキームに従って行われる。
【００７１】
【化１２】

【００７２】
１．１ １−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）アミノ−２−ヨードベンゼン
２−ヨードアニリン（１００ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）（４ｍｌ）、ジ−第三級ブチルジカーボネート（ＢＯＣ−ジカーボネート）（１１９ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）、Ｅｔ₃Ｎ（７６μｌ、０．５５ｍｍｏｌ）、および触媒（ジメチルアミノ）ピライド（ｐｙｒｉｄｅ）（ＤＭＡＰ）（２ｍｇ）の混合物を２０ｈｒの間攪拌した。この反応物を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー ４−（ＤＣＭ／Ｈｅｘが１：１である）によって精製し、生成物（５０ｍｇ、３４％）をオフホワイト粉末固体として得た。
【００７３】
１．２ １−Ｎ−（クロロ−２−プロペン−１−イル）−Ｎ−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）アミノ−２−ヨードベンゼン
１−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）アミノ−２−ヨードベンゼン（１００ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）（２ｍｌ）攪拌溶液を０℃まで冷却し、そして水素化ナトリウム（ＮａＨ）（４１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）で処理した。１５ｍｉｎ後、１，３−ジクロロプロペン（９５μｌ、１．０１ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を２５℃まで温め、２０ｈｒの間攪拌した。これを濃縮し、Ｈ₂Ｏ（１０ｍｌ）を添加し、次いで水層をＥｔＯＡｃ（３×１０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、そして濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１〜１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン勾配）によって精製し、標題化合物（４６ｍ、３７％）を黄色オイルとして得た。
【００７４】
１．３ ３−クロロメチル−２，２−ジヒドロ−１−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）インドール
トルエン（４ｍＬ）中の、１−Ｎ−（３−クロロ−２−プロペン−１−イル）−Ｎ−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）アミノ−２−ヨードベンゼン（２００ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）、（Ｂｕ₃Ｓｎ）₂Ｏ（３８μＬ、０．０７６ｍｍｏｌ）、ポリ（メチルヒドロシロキサン）（ＰＭＨＳ）（１４３９μＬ、０．０１９ｍｍｏｌ）、アゾイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）（８．３４ｍｇ、０．０５１ｍｍｏｌ）の攪拌混合物を、Ｎ₂下において、３ｈの間、８０℃にて加温した。この反応物を冷却し、次いでＥｔＯＡｃ（２０ｍｌ）を用いてクエンチした。この溶液を水（２×２０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、濃縮した。この残渣をクロマトグラフィー（シリカ、１〜１０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンによって精製し、標題化合物（１５９ｍｇ、８５．５％）を透明オイルとして得た。
【００７５】
１．４ ５−メトキシインドール拡張剤（ｅｘｔｅｎｄｅｄ ａｇｅｎｔ）。１−（クロロメチル）−６−ベンゾイル−３−（（５−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−イル）カルボニル）−１，２ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］インドール
３−クロロメチル−２，２−ジヒドロ−１−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル） インドール（１００ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）を酢酸エチル中の塩酸溶液（４Ｍ、５００μＬ）で処理する。３０ｍｉｎ後、溶媒を濃縮し、ＤＭＦ（１ｍＬ）を添加する。この溶液を１−［（３−ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ）（１４０ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）および５−メトキシインドール−２−カルボン酸（１４０ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）で処理した。１６ｈ後、溶媒を減圧下において取り除く。クロマトグラフィー（シリカゲル、２×１５ｃｍ、１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって、生成物を得る。
実施例２
以下の実施例は、一般式ＩＡの化合物の前駆体の合成を説明する。生成物は、式ＩＡの化合物を形成するために工程１．４に類似する工程によって拡大する（ｅｘｔｅｎｄｉｎｇ）のに適している。
【００７６】
【化１３】

【００７７】
２．１ １−Ｎ−（３−（トリブチルスタンニル）−２−プロペン−１−イル）−Ｎ−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）アミノ−２−ヨードベンゼン
１−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）アミノ−２−ヨードベンゼン（実施例１．１において記載されるように合成される）（１００ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（５ｍＬ）中で攪拌し、ナトリウムハイドライド（３８ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ、オイル中の分散度６０％、３等量）を添加した、１５ｍｉｎ後、この懸濁液をＥ／Ｚ−１−トリブチルスタンニル−３−ブロモプロペン（３９２ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ、３等量）で処理し、生じる溶液をＲＴにて１６ｈ攪拌した。この溶液を濃縮し、次いで水（１０ｍＬ）を添加した。水溶液を酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、乾燥し、その後濃縮した。クロマトグラフィー（シリカゲル、２×１５ｃｍ、１０％ 酢酸エチル／ヘキサン）の後、生成物（１４５ｍｇ、７０％）を得た。ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）６４９（Ｍ⁺Ｈ⁺ 予測６４９）。
【００７８】
２．２ １−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−１，２−ジヒドロキノリン
１−Ｎ−（３−（トリブチルスタンニル）−２−プロペン−１−イル）−Ｎ−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）アミノ−２−ヨードベンゼン（１００ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（３２ｍｇ、
０．２当量）をトルエン（２ｍＬ）中で、５０℃にて、Ｎ₂下において、１２ｈ攪拌した
。次いで、溶媒を真空下において取り除いた。クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって、生成物（３５ｍｇ、１００％）を黄色オイルとして得た。ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）２３２（Ｍ＋Ｈ⁺予測２３２）。
【００７９】
２．３ １−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−３，４−エポキシ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン
１−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−１，２−ジヒドロキノリン（１００ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）およびＭＣＰＢＡ（１０９ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ、１．５当量）をＣＨ₂Ｃｌ₂（２ｍＬ）中で、−７８℃〜−３０℃にて、Ｎ₂下において、２ｈ攪拌した。次いで、溶媒を真空下において取り除いた。クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって、生成物（１００ｍｇ、９４％）を無色オイルとして得た。ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）２４８（Ｍ＋Ｈ⁺予測２４８）。
【００８０】
２．４ １−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−４−ヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン
３，４−エポキシ−１−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−１，２，３，４−テトラヒドロ−５，６−ベンゾキノリン（１００ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２ ｍＬ）中のＤｉｂａｌ−Ｈ（９１ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ、１．５当量）を用いて、−７８℃にて、Ｎ₂下において処理した。１ｈ後、水（２ｍＬ）の添加によって反応液をクエンチし、生じる溶液を酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、乾燥し、そして濃縮した。クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって、アルコール（７５ｍｇ、６３％）を無色固体として得た。ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）２５０（Ｍ＋Ｈ⁺予測２５０）。
【００８１】
２．５ １−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−４−クロロ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン
ＲＴにて、ＰＰｈ₃（２１２ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ、２当量）およびＣＣｌ₄（５００μＬ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（２ｍＬ）調製溶液を用いて、ＣＨ₂Ｃｌ₂（２ｍＬ）中の１−（（ｔｅｒｔ−ブチルオキシ）カルボニル）−４−ヒドロキシ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリン（１００ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）を処理した。１６ｈ後、溶媒を真空下において取り除いた。クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、ヘキサン中の１０％酢酸エチル）によって、クロライド（６５ｍｇ、６１％）を得た。ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）２６８（Ｍ＋Ｈ⁺予測２６８）。この化合物を、以下の実施例３．４の工程に類似する方法によって脱保護した後、ＤＮＡ結合サブユニットへ複合体化させ得た。
実施例３
【００８２】
【化１４】

【００８３】
３．１ ２−ブロモ−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アニリン（３．２）
２−ブロモアニリン（１００ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ−ジカーボネート（５０７ｍｇ、２．３２ｍｍｏｌ）およびＥｔ₃Ｎ（８１μｌ、０．５８ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（１０ｍｌ）溶液を１００℃まで、Ｎ₂下において、４８ｈの間加温した。完了後、生じる混合物を冷却し、濃縮し、そしてクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ １：９）によって精製し、２（１１６ｍｇ、７３％）を透明フィルムとして得た。¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、５００ＭＨｚ）ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）：２７１（Ｍ＋Ｈ⁺予測２７１），２９５（Ｍ＋Ｎａ⁺ 予測２９５）。
【００８４】
３．２ ２−ブロモ−Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−Ｎ−（３−クロロ−２−プロペン−１−イル）アニリン（３．３）
３．２（３５０ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（７ｍｌ）溶液を０℃まで冷却し、ＮａＨ（９３ｍｇ、３．８５ｍｍｏｌ）を添加した。生じる混合物を１５ｍｉｎ攪拌し、そして１，３ジクロロプロペン（３５８μｌ、３．８５ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を２５℃まで温め、１５ｈの間攪拌した。次いで、この混合物を濃縮した。Ｈ₂Ｏ（１０ｍｌ）を残渣へ添加し、そしてこの溶液をＥｔＯＡｃ（３×１０ｍｌ）で抽出した。ＭｇＳＯ₄を用いて、合わせた有機層を乾燥し、次いで濃縮した。この残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ １：９）によって精製し、３．３（４００ｍｇ、８９％）を淡黄色オイルとして得た。ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）３４６（Ｍ＋Ｈ⁺予測３４６）。
【００８５】
３．３ １−（ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル）−３−（クロロメチル）インドリン（ｉｎｄｏｌｉｎｅ）（３．４）
３．３（１１０ｍｇ、０．３１８ｍｍｏｌ）およびＡＩＢＮ（２１ｍｇ、０．１２７ｍｍｏｌ）の乾燥トルエン（１０ｍｌ）溶液を、１５ｍｉｎの間、Ｎ₂で脱気し、次いで９０℃まで加温した。Ｂｕ₃ＳｎＨ（８４μｌ、０．３１８ｍｍｏｌ）を、４分割し、１時間かけてこの混合物へ添加し、そして生じる混合物を９０℃にて、さらに２ｈの間攪拌した。次いで、この混合物を濃縮し、そしてフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、ヘキサン中の０〜１０％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、３．４（５０ｍｇ、５９％）を無色オイルとして得た。ＦＡＢＭＳ：（ＮＢＡ／Ｎａｌ）２６７，（Ｍ＋Ｈ⁺，予測２６７）２９２（Ｍ＋Ｎａ⁺，予測２９２）。
【００８６】
３．４ ３−（クロロメチル）−１−−［（５−メトキシインドール−２−イル）カルボニル］インドリン（３．５）
化合物３．４（１００ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）をＥｔＯＡｃ（１ｍＬ）中の２．５Ｍ ＨＣｌで処理し、この溶液を３０ｍｉｎの間攪拌した。窒素の流れ（ｓｔｒｅａｍ）の下において溶媒を取り除き、灰色残渣をＤＭＦ（１０ｍＬ）中に溶解した。５−メトキシインドール−２−カルボン酸（２１５ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（２１５ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）を添加し、その混合物を１６ｈの間攪拌した。溶媒を真空下において取り除き、次いで残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン １：１）にかけ、生成物を赤色オイル（１００ｍｇ、７６％）として得た。ＦＡＢＭＳ（ＮＢＡ／Ｎａｌ）３４１（Ｍ＋Ｈ⁺予測３４１）。
【００８７】
実施例４ ３−（クロロメチル）−１−−［（５−メトキシインドール−２−イル）カルボニル］インドリンの生物学的試験
材料および方法
【００８８】
４．１ 試験化合物とミクロソームのインキュベーション混合物
ＮＡＤＰＨ補充した（ＮＡＤＰＨ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ）ラット肝ミクロソームを用いて、ＣＹＰ酵素による試験化合物活性化を行った。インキュベーション混合物は、ミクロソームタンパク質（１ｍｇ／ｍｌ）、還元−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェート（ＮＡＤＰＨ、１０ｍＭ）およびリン酸緩衝液（ｐＨ７．４、１００ｍＭ）を含んでいた。ＤＭＳＯ（２０μｌ）中の試験化合物（０．０１−１００μＭ最終濃度）を、ミクロソームインキュベーション混合物（０．５ｍｌ）へ添加し、そして６０分間、３７Ｃにてインキュベートした。コントロールのインキュベート物は試験化合物を含み、ミクロソームインキュベーション混合物は０時間にて終了した。全てのインキュベーションは、等量の氷冷アセトニトリルの添加により終了され、次いで３分間微量遠心された（ｍｉｃｒｏｆｕｇｅｄ）。この上清のアリコートを培養中の細胞へ添加した。
【００８９】
４．２ 細胞培養に基づく細胞毒性測定
１０％透析ＦＢＳおよびＧ４１８（４００μｇ／ｍｌ）を補充したＭＥＭ中で、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を増殖させた。全ての細胞を、９６ウェルプレート中において、１０００細胞／ウェルの開始密度にてシーディングし（ｓｅｅｄｅｄ）し、３７℃にて、２４時間インキュベートした。次いで、試験化合物／ミクロソーム／アセトニトリル上清のアリコート（０．１ｍｌ）をＣＨＯ細胞へ添加した。次いで、細胞を２４時間、３７℃、５％ＣＯ₂にてインキュベートした。この時間の後に、ＭＴＴ（５０μｌ； ２ｍｇ／ｍｌ ストック溶液）を各ウェルへ添加し、細胞をさらに４時間インキュベートした。この間、生存細胞（ｖｉａｂｌｅ ｃｅｌｌｓ）のミトコンドリアデヒドロゲナーゼによって、ＭＴＴ、水素アクセプターテトラゾリウム塩、をホルマザン色素（ｈｏｒｍａｚａｎ ｄｙｅ）へ還元した。培地を細胞からアスピレーションし（ａｓｐｉｒａｔｅｄ）、ＤＭＳＯ（１００μｌ／ウェル）を添加し、着色したホルマザン色素を可溶化した。次いで、９６−ウェルプレート中のホルマザン色素の吸光度を５５０ｎｍにて測定した。ＣＨＯ細胞増殖の休止（ａｒｒｅｓｔ）に及ぼす試験化合物によるミクロソーム活性化の影響は、ミクロソームインキュベーションを伴うまたは伴わないＩＣ₅₀（細胞増殖を５０％だけ阻害する濃度）を比較することによって測定され得た。
【００９０】
【表１】

【００９１】
培養中のチャイニーズハムスター卵巣細胞の生存に及ぼす化合物３．５およびその代謝（活性化）産物の効果。細胞は、化合物３．５とＮＡＤＰＨ補強されたラット肝ミクロソームとの反応混合物からの上清と共に、２４時間インキュベートされた。ＩＣ₅₀は、細胞増殖を５０％だけ阻害するために必要とされる薬物の濃度を表す。値は、３回の実験についての平均±ｓｄとして表される。代謝の全詳細についての方法を参照のこと。
ＡＦ＝活性ファクター（すなわち、±化合物３．５活性化について得られるＩＣ₅₀細胞毒性値の比）
＊は、ｐ＞０．０５における有意性（ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ）を表す。

Claims (24)

1. 動物の治療による処置の方法において使用するための組成物の製造における一般式ＩまたはＩＡの化合物あるいはその塩の使用：
   

   

   （ここで、ＸはＨであり、ＸはＨであり、；
   Ｙは、脱離基であり；
   Ｒ¹は、−Ａｒ、−ＮＨ₂、またはＲ⁸であり；
   Ｒ²およびＲ³は、各々独立して、Ｈ、Ｃ_1-4アルキル、−ＯＨ、Ｃ_1-4アルコキシ、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＯ₂、−ＮＨ₂、−ＮＨＣＯＲ⁹、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ¹⁰、−ＮＨＣＯＯＲ¹⁰および−ＣＯＯＲ⁰¹から選択され；
   Ｒ⁴は、Ｈ、Ｃ_1-4アルキル、ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＯ₂、ＮＨ₂、−ＮＨＣＯＲ⁹、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ¹⁰、−ＮＨＣＯＯＲ¹⁰および−ＣＯＯＲ¹⁰から選択され；
   Ｒ⁸、Ｒ⁹およびＲ¹⁰は、独立して、Ｃ_1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ_7-12−アラルキル、必要に応じて置換されたヘテロアリールおよびリガンドから選択され；
   Ａｒは、
   

   

   から選択され（ここで、Ｂは、ＮまたはＣＲ¹⁴であり；
   ＺはＯ、Ｓ −ＣＨ＝ＣＨ−、またはＮＨであり；
   各Ｒ¹¹は、ＯＨ、Ｃ_1-4アルコキシ、Ｃ_1-4アルキル、−ＮＯ₂、−ＮＨ₂、−ＮＨＲ¹⁷、−ＮＲ¹⁷ ₂、−Ｎ⁺Ｒ¹⁷ ₃、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＣＯＲ¹⁵、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ¹⁶、ＮＨＣＯＯＲ¹⁶およびＣＯＯＲ¹⁶から選択され；
   ｎは０〜４の範囲の整数であり；
   Ｒ¹²は、Ｈ、−ＣＯＡｒ¹、−ＣＯＮＨ₂、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＲ¹⁶または−ＣＯＯＲ¹⁶であり；
   各Ｒ¹³は、ＯＨ、Ｃ_1-4アルコキシ、Ｃ_1-4アルキル、−ＮＯ₂、−ＮＨ₂、−ＮＨＲ¹⁷、−ＮＲ¹⁷ ₂、−Ｎ⁺Ｒ¹⁷ ₃、−ＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＣＯＲ¹⁵、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ¹⁶、−ＮＨＣＯＯＲ¹⁶および−ＣＯＯＲ¹⁶から選択され；
   ｍは０、１または２であり；
   Ｒ¹⁴は、ＯＨ、Ｃ_1-4アルコキシ、Ｃ_1-4アルキル、−ＮＯ₂、−ＮＨ₂、−ＣＮ、Ｃｌ、 Ｂｒ、Ｉ、−ＮＨＣＯＲ¹⁵、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＮＨＲ¹⁶、−ＣＯＯＲ¹⁶、−ＮＨＣＯＯＲ¹⁶およびＨから選択され；
   Ｒ¹⁵は、Ｃ_1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、必要に応じて置換されたヘテロアリール、Ｃ_7-12アラルキル、リガンドおよびＡｒ¹から選択され；
   Ｒ¹⁶は、Ｃ_1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ_7-12−アラルキルおよび必要に応じて置換されたヘテロアリールおよびリガンドから選択され；
   各Ｒ¹⁷は、Ｃ_1-4−アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、必要に応じて置換されたヘテロアリール（ｈｅｔｅｒａｒｙｌ）およびＣ_7-12−アラルキルから選択され；そして
   Ａｒ¹は、Ａｒと同じ基（ｇｒｏｕｐｓ）から選択される（但し、任意の１つの環における多くとも１つの基Ｒ¹¹またはＲ¹³が基Ａｒ¹を含む）））。
2. 動物がヒトである、請求項１に記載の使用。
3. 処置が腫瘍の処置である、請求項１または請求項２に記載の使用。
4. Ｙが、−ＯＣＯＯＲ⁵、−ＯＣＯＮＨＲ⁶、Ｃｌ、Ｂｒ、および−ＯＳＯＯＲ⁷（ここで、Ｒ⁵、Ｒ⁶およびＲ⁷は、独立して、Ｃ_1-4アルキル、必要に応じて置換されたフェニル、Ｃ_7-12−アラルキル、および必要に応じて置換されたヘテロアリール；好ましくはＣｌから選択される）から選択される、先の請求項のいずれかに記載の使用。
5. Ａｒ¹が
   

   

   である、先の請求項のいずれかに記載の使用。
6. Ｒ¹がＡｒである、先の請求項のいずれかに記載の使用。
7. Ａｒが基
   

   

   である、請求項６に記載の使用。
8. ｎが少なくとも１であり且つＡｒ基の基Ｒ¹¹の１つが−ＮＨＣＯＡｒ¹である、請求項７に記載の使用。
9. Ａｒ¹が基
   

   

   である、請求項８に記載の使用。
10. Ａｒ¹において、ｎが少なくとも２であり且つＲ¹¹が−ＮＨＣＯＡｒ¹以外であるか、またはｎが０である、請求項９に記載の使用。
11. Ａｒが基
    

    

    である、請求項６に記載の使用。
12. Ｒ¹²が−ＣＯＡｒ¹である、請求項１１に記載の使用。
13. Ａｒ¹が基
    

    

    である、請求項１２に記載の使用。
14. Ａｒ¹において、Ｒ¹²が−ＣＯＡｒ¹以外である、請求項１３に記載の使用。
15. Ｒ²がＨである、先の請求項のいずれかに記載の使用。
16. Ｒ³がＨである、先の請求項のいずれかに記載の使用。
17. Ｒ⁴がＨである、先の請求項のいずれかに記載の使用。
18. 治療による動物の処置における使用のための請求項１および４〜１７のいずれかにおいて定義される（ｄｅｆｉｎｅｄ）ような一般式Ｉの化合物。
19. １−（クロロメチル）−６−ベンゾイル−３−（（５−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−イル）カルボニル）−１，２ジヒドロ−３Ｈ−ピロロ［３，２−ｅ］インドール；および
    ３−（クロロメチル）−１−−［（５−メトキシインドール−２−イル）カルボニル］インドリン（ｉｎｄｏｌｉｎｅ）から選択される、請求項１８に記載の化合物。
20. 請求項１および４〜１７のいずれかに定義されるような一般式Ｉの化合物ならびに薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物。
21. 請求項１および４〜１７のいずれかに定義されるような式ＩＡの化合物。
22. １−（（５−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−イル）カルボニル）−４−クロロ−１，２，３，４−テトラヒドロキノリンである、請求項２１に記載の化合物。
23. 治療による動物の処置における使用のための請求項２１または請求項２２に記載の化合物。
24. 請求項２１または請求項２２に記載の化合物および薬学的に許容される賦形剤を含む、薬学的組成物。