ES2616566T3

ES2616566T3 - 2-fluoro-2-desoxitetrahidrouridinas como inhibidores de la citidina desaminasa

Info

Publication number: ES2616566T3
Application number: ES12151552.2T
Authority: ES
Inventors: Gregory S. Hamilton; Takashi Tsukamoto; Dana V. Ferraris; Bridget Duvall; Rena Lapidus
Original assignee: Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2007-10-16
Filing date: 2008-10-16
Publication date: 2017-06-13
Anticipated expiration: 2028-10-16
Also published as: TW200924786A; CN101827856A; CY2023028I1; US20140186335A1; ATE548374T1; FIC20230039I1; CA2702274C; HUS2300045I1; RS52323B; NO2023048I1; FR23C1051I1; BRPI0818672B1; EP2447272A1; US20150210730A1; CN101827856B; SI2207786T1; TWI445539B; EP2447272B1; JP5496899B2; ECSP10010095A

Abstract

Un compuesto de fórmula I, o su sal farmacéuticamente aceptable:**Fórmula** en la que el carbono marcado con un asterisco puede tener una configuración (R) o (S), y en la que R1 y R2 son fluoro, para uso en un método para inhibir la citidina desaminasa (CDA).

Description

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DESCRIPCION

2'-fluoro-2'-desoxitetrahidrouridinas como inhibidores de la citidina desaminasa

La solicitud reivindica el beneficio de la solicitud provisional de EEUU No 60/980.397, presentada el 16 de octubre de 2007.

Campo de la invencion

La presente invencion proporciona ciertos compuestos derivados de tetrahidrouridina que son inhibidores de la enzima citidina desaminasa, para uso en un metodo para inhibir la citidina desaminasa (CDA), para uso en un metodo para inhibir la degradacion de un farmaco sustrato CDA y/o para uso en un metodo para tratar cancer, composiciones farmaceuticas y kits que comprenden dichos compuestos, y metodos para preparar y utilizar dichos compuestos.

Antecedentes

Las enzimas adenosina desaminasa (ADA, EC 3.5.4.4) y citidina desaminasa (CDA, EC 3.5.4.5) actuan para desaminar los nucleosidos de aminopurina y aminopirimidina naturales, respectivamente, en seres humanos y otros organismos. Tambien pueden convertir farmacos basados en nucleosidos activos en los metabolitos inactivos. Por ejemplo, el farmaco de nucleosido de purina arabinosiladenina (fludarabina, ara-A) es desaminado por ADA; el compuesto resultante, con el grupo amino de origen reemplazado por hidroxilo, es inactivo como agente antitumoral comparado con el compuesto de origen. De forma similar, el farmaco antileucemia arabinosilcitosina (citarabina, ara- C) es degradado metabolicamente por CDA para producir arabinosiluracilo inactivo.

La CDA es un componente de la via de rescate de pirimidina. Convierte la citidina y la desoxicitidina en uridina y desoxiuridina, respectivamente, mediante una desaminacion hidrolttica (Arch. Biochem. Biophys., 1991, 290, 285292; Methods Enzymol.,1978, 51, 401-407; Biochem. J., 1967, 104, 7P). Tambien desamina una serie de analogos de citosina sinteticos que son farmacos utiles desde el punto de vista clmico, tales como ara-C mencionado anteriormente (Cancer Chemother. Pharmacol., 1998, 42, 373-378; Cancer Res., 1989, 49, 3015-3019; Antiviral Chem. Chemother., 1990, 1, 255-262). La conversion de los compuestos de citosina en los derivados de uridina habitualmente confiere la perdida de actividad terapeutica o la adicion de efectos secundarios. Tambien se ha demostrado que los canceres que adquieren resistencia a farmacos de analogos de citosina a menudo sobreexpresan la CDA (Leuk Res., 1990, 14, 751-754). Las celulas leucemicas que expresan un alto nivel de CDA pueden manifestar resistencia a antimetabolitos de citosina y, con ello, se limita la actividad antineoplasica de dichos productos terapeuticos (Biochem. Pharmacol., 1993, 45, 1857-1861). Por tanto, los inhibidores de CDA podnan ser adyuvantes utiles en la quimioterapia de combinacion.

Desde hace varios anos se sabe que la tetrahidrouridina (THU) es un inhibidor de la citidina desaminasa.

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Diversos informes han sugerido que una coadministracion con THU aumenta la eficacia y la actividad oral de farmacos basados en citidina. Se ha demostrado que la THU potencia la actividad oral del agente antileucemico 5- azacitidina en ratones leucemicos L1210 (Cancer Chemotherapy Report, 1975, 59, 459-465). La combinacion de THU y 5-azacitidina tambien se ha estudiado en un modelo de anemia falciforme de babuino (Am. J. Hematol., 1985, 18, 283-288), y en pacientes humanos con anemia falciforme en combinacion con 5-azacitidina administrada por via oral (Blood, 1985, 66, 527-532).

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Tambien se ha demostrado que la THU potencia la eficacia oral de ara-C en ratones leucemicos L1210 (Cancer Research, 1970, 30, 2166; Cancer Invest., 1987, 5, (4), 293-299), y en ratones que portan tumores (Cancer Treat. Rep., 1977, 61, 1355-1364). Se ha investigado la combinacion de ara-C administrada por via intravenosa con THU administrada por via intravenosa en varios estudios clmicos en seres humanos (Cancer Res., 1988, 48, 1337-1342). En particular, se han realizado estudios de combinacion en pacientes con leucemia mieloide aguda (AML) y leucemia mieloide cronica (CML) (Leukemia, 1991, 5, 991-998; Cancer Chemother. Pharmacol., 1993, 31,481-484).

La 5-aza-2'-deoxicitidina (decitabina) es un agente antineoplasico para el tratamiento del smdrome mielodisplasico (MDS), con utilidad potencial tambien para el tratamiento de AML y CML. Al igual que otros farmacos con base de citidina, su biodisponibilidad oral y su eficacia estan limitadas por la desactivacion por CDA. Se ha demostrado que la THU mejora la potencia de la decitabina en un modelo de enfermedad falciforme en babuinos (Am. J. Hematol., 1985, 18, 283-288). Ademas, se ha demostrado que otro inhibidor de CDA conocido, la zebularina, potencia la eficacia de la decitabina en ratones con leucemia L1210 (Anticancer Drugs, 2005, 16, 301-308).

La gemcitabina, otro farmaco antineoplasico con base de citidina, tambien se ha estudiado junto con inhibidores de CDA (Biochem. Pharmacol., 1993, 45, 1857-1861). Se ha demostrado con la coadministracion con THU altera la farmacocinetica y la biodisponibilidad de la gemcitabina en ratones (Abstr. 1556, 2007 AACR Annual Meeting, abril 14-18, 2007, Los Angeles, CA; Clin. Cancer Res., 2008, 14, 3529-3535).

La 5-fluoro-2'-desoxicitidina (fluorocitidina, FdCyd) es otro farmaco anticancer con base de citidina que es un inhibidor del ADN metiltransferasa. Se ha estudiado la modulacion de su metabolismo y su farmacocinetica por THU en ratones (Clin. Cancer Res., 2006, 12, 7483-7491; Cancer Chemother. Pharm., 2008, 62, 363-368).

Los resultados de los estudios mencionados anteriormente sugieren que existe una utilidad terapeutica en la administracion de inhibidores de CDA junto con farmacos con base de citidina, tales como ara-C, decitabina, 5- azacitidina y otros. Sin embargo, inhibidores tempranos de CDA, tales como THU, tienen inconvenientes que incluyen inestabilidad frente a acidos (J. Med. Chem., 1986, 29, 2351) y baja biodisponibilidad (J. Clin. Pharmacol., 1978, 18, 259).

Por tanto, existe una necesidad en curso de nuevos y potentes inhibidores de CDA terapeuticamente utiles.

Breve sumario de la invencion

La presente invencion proporciona ciertos compuestos derivados de tetrahidrouridina, composiciones farmaceuticas y kits que comprenden dichos compuestos, y metodos para preparar y utilizar dichos compuestos. Los compuestos, las composiciones, kits y los metodos de la invencion pueden proporcionar ciertos beneficios. Por ejemplo, los compuestos y las composiciones de la invencion pueden inhibir la actividad de la enzima CDA y/o potenciar la vda media, la biodisponibilidad y/o la eficacia de farmacos que son sustratos para la CDA. Ademas, los compuestos, las composiciones, kits y los metodos de la invencion pueden mostrar una solubilidad acuosa, estabilidad qmmica, niveles de absorcion del farmaco, niveles de toxicidad, caducidad, reproducibilidad en la fabricacion y la formulacion, y eficacia terapeutica mejorados.

En una realizacion, la invencion proporciona un compuesto de formula I:

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o su sal farmaceuticamente aceptable, en la que el carbono marcado con un asterisco puede tener una configuracion (R) o (S), y en la que Ri y R2 son fluoro para uso en un metodo para inhibir la citidina desaminasa (CDA).

5 En otras realizaciones, el compuesto de formula I para uso de acuerdo con la invencion tiene la estereoqmmica de Ia o Ib:

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en la que Ri y R2tienen el significado definido mas arriba

Puesto que los compuestos de la invencion para uso con respecto a la invencion pueden poseer al menos un centro 10 quiral, pueden existir en forma de enantiomeros, diastereomeros, mezclas racemicas, mezclas no racemicas u otros estereoisomeros. La presente invencion incluye todos estos posibles isomeros, asf como los isomeros geometricos y los tautomeros.

Otro aspecto de la presente invencion se refiere a una composicion farmaceutica que comprende:

(i) una cantidad efectiva de un compuesto de la invencion segun se describe en la presente, que incluye pero no se 15 limita a cada realizacion expresa; y

(ii) un excipiente farmaceuticamente aceptable.

En otras realizaciones, la composicion farmaceutica tambien comprende una cantidad efectiva de al menos otro agente terapeutico, tal como un farmaco sustrato de CDA o un agente quimioterapeutico.

La “cantidad efectiva” del compuesto de la invencion puede variar del 0,1% en peso a aproximadamente 100% en

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peso. En algunas realizaciones, la cantidad efectiva del compuesto es del 0,1% al 20% en p/p. En otras realizaciones, la cantidad efectiva es del 1-10% en p/p. En otras realizaciones, la cantidad efectiva es del 2-5% en

p/p.

Las composiciones farmaceuticas de la invencion pueden formularse para la administracion en una forma solida o lfquida, incluyendo las adaptadas para lo siguiente: (1) la administracion oral, por ejemplo, bebidas (por ejemplo, disoluciones o suspensiones acuosas o no acuosas), comprimidos (por ejemplo, los dirigidos a la absorcion bucal, sublingual y sistemica), comprimidos oblongos, pfldoras grandes, polvos, granulos, pastas para la aplicacion a la lengua, capsulas de gelatina dura, capsulas de gelatina blanda, pulverizados bucales, trociscos, pastillas para chupar, granulos, jarabes, suspensiones, elixires, lfquidos, emulsiones y microemulsiones; (2) la administracion parenteral, por ejemplo mediante inyeccion subcutanea, intramuscular, intravenosa o epidural en forma, por ejemplo, de una disolucion o una suspension esteril; (3) la aplicacion topica, por ejemplo en forma de una crema, unguento, parche, almohadilla o pulverizado aplicado a la piel; (4) por via intravaginal o intrarrectal, por ejemplo en forma de un pesario, crema o espuma; (5) por via sublingual; (6) por via ocular; (7) por via transdermica; o (8) por via nasal. Las composiciones farmaceuticas pueden formularse para la liberacion inmediata, sostenida o controlada.

En algunas realizaciones, las composiciones farmaceuticas se formulan para la administracion oral. En otras realizaciones, las composiciones farmaceuticas se formulan para la administracion oral en forma solida.

Otra realizacion de la presente invencion se refiere a un compuesto de Formula I o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para uso en un metodo para inhibir la citidina desaminasa, que comprende administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad efectiva de un compuesto o de una composicion farmaceutica de la invencion segun se describe en la presente, que incluye pero no se limita a cada realizacion expresa.

En algunas realizaciones, el sujeto es un mairnfero. En otras realizaciones, el sujeto es un ser humano.

Otra realizacion de la presente invencion se refiere a un compuesto de Formula I o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para uso en un metodo para tratar el cancer, que comprende administrar a un sujeto que lo necesite:

(i) una cantidad efectiva de un compuesto o de una composicion farmaceutica de la invencion segun se describe en la presente, que incluye pero no se limita a cada realizacion expresa; y

(ii) un farmaco sustrato de CDA, que incluye pero no se limita a cada realizacion expresa descrita en la presente.

En algunas realizaciones, el sujeto es un mam^era. En otras realizaciones, el sujeto es un ser humano.

En algunas realizaciones, el cancer se selecciona de canceres hematologicos y canceres solidos. En otras realizaciones, el cancer hematologico se selecciona de MDS y leucemia. En otras realizaciones, el cancer solido se selecciona de cancer pancreatico, cancer de ovario, cancer peritoneal, cancer de pulmon no microcftico, y cancer de mama. En otras realizaciones, la leucemia es la leucemia mieloide aguda (AML) o la leucemia mieloide cronica (CML).

Otra realizacion de la presente invencion se refiere a un compuesto de Formula I o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo para uso en un metodo para inhibir la degradacion de un farmaco sustrato de CDA por la citidina desaminasa, que comprende administrar una cantidad efectiva de un compuesto o de una composicion farmaceutica de la invencion segun se describe en la presente, que incluye pero no se limita a cada realizacion expresa, a un sujeto que esta sometido a un tratamiento con el farmaco sustrato de CDA. El farmaco sustrato de CDA incluye pero no se limita a cada realizacion expresa descrita en la presente.

En algunas realizaciones, el sujeto es un mamffero. En otras realizaciones, el sujeto es un ser humano.

Otra realizacion de la presente invencion se refiere a un kit que comprende al menos una forma de dosificacion unitaria, cuya forma de dosificacion unitaria comprende un compuesto o composicion farmaceutica de la invencion.

El kit puede comprender ademas un recipiente y/o un empaque adecuado para la venta comercial. El recipiente puede estar en cualquier forma o forma convencional como se conoce en la tecnica que esta hecha de un material farmaceuticamente aceptable, tal como una caja de papel o carton, una botella o frasco de vidrio o plastico, una bolsa resellable o un empaque blister con dosificaciones individuales para presionar fuera del empaque de acuerdo con un programa terapeutico. Mas de un recipiente puede usarse juntos en un empaque individual. Por ejemplo, las tabletas pueden estar contenidas en un empaque blister que a su vez esta contenido dentro de una caja.

Breve descripcion de los dibujos

La figura 1 es una grafica que muestra el efecto del compuesto 1 sobre la supervivencia inducida por decitabina en el modelo de linfoma de raton L1210.

La figura 2 es una grafica que muestra el efecto del compuesto 1a sobre la supervivencia inducida por decitabina en el modelo de linfoma de raton L1210.

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La figura 3 es una grafica que muestra el efecto del compuesto 3a sobre la supervivencia inducida por decitabina en el modelo de linfoma de raton L1210.

La figura 4 es una grafica que muestra el efecto del compuesto 1 sobre la supervivencia inducida por Ara-C (200 mg/kg) en el modelo L1210.

La figura 5 es una grafica que muestra el efecto del compuesto 1 sobre la supervivencia inducida por Ara-C (100 mg/kg) en el modelo L1210.

La figura 6 es una grafica que muestra el efecto del compuesto 1 sobre la supervivencia inducida por Ara-C (50 mg/kg) en el modelo L1210.

La figura 7 es una grafica que muestra el efecto del compuesto 1 sobre la supervivencia inducida por Ara-C (25 mg/kg) en el modelo L1210.

La figura 8 es una grafica que muestra el efecto del compuesto 1 sobre la reduccion del volumen tumoral inducida por gemcitabina en el modelo de xenoinjerto de cancer de ovario humano A2780 en raton.

La figura 9 es un diagrama ORTEP de la estructura cristalina del compuesto 1a.

La figura 10 es la estructura de RMN de 1H de THU en D2O.

La figura 11 es la estructura de RMN de 1H de THU en D2O, en presencia de acido trifluoroacetico, en diferentes momentos.

La figura 12 es la estructura de RMN de 1H del compuesto 1a en D2O.

La figura 13 es la estructura de RMN de 1H del compuesto 1a en D2O, en presencia de acido trifluoroacetico, en diferentes momentos.

Descripcion detallada de la invencion

La presente invencion proporciona ciertos compuestos derivados de tetrahidrouridina, composiciones farmaceuticas y kits que comprenden dichos compuestos para uso de acuerdo con la invencion, y metodos para preparar y utilizar dichos compuestos. Los compuestos para uso, las composiciones, kits y los metodos de la invencion pueden proporcionar ciertos beneficios. Por ejemplo, los compuestos y las composiciones de la invencion pueden inhibir la actividad de la enzima CDA y/o potenciar la vda media, la biodisponibilidad y/o la eficacia de farmacos que son sustratos para la CDA. Ademas, los compuestos, las composiciones, kits y los metodos de la invencion pueden mostrar una solubilidad acuosa, estabilidad qmmica, niveles de absorcion del farmaco, niveles de toxicidad, caducidad, reproducibilidad en la fabricacion y la formulacion, y eficacia terapeutica mejorados.

Definiciones

A lo largo de la descripcion y de las reivindicaciones se aplican las siguientes definiciones.

Tal como se emplea en la descripcion y en las reivindicaciones, las formas singulares “el/la” y “un/una” incluyen los referentes plurales, a menos que el contenido imponga claramente lo contrario. Asf, por ejemplo, la referencia a que una composicion farmaceutica comprende “un compuesto” puede incluir dos o mas compuestos.

Un “farmaco sustrato de CDA” se refiere a un farmaco que puede ser desaminado por la CDA. Los ejemplos no limitantes de un sustrato de CDA incluyen analogos de citidina, tales como decitabina, 5-azacitidina, gemcitabina, ara-C, troxacitabina, tezacitabina, 5'-fluoro-2'-desoxicitidina, y citoclor.

Una “cantidad efectiva” se refiere a la cantidad requerida para producir un efecto deseado (por ejemplo, potenciar la vda media, la biodisponibilidad o la eficacia de un farmaco sustrato de CDA, tratar el cancer en un sujeto, inhibir la citidina desaminasa en un sujeto, o inhibir la degradacion de un farmaco sustrato de CDA por la citidina desaminasa).

La “vda media” se refiere al periodo de tiempo requerido para que la concentracion o la cantidad de un compuesto en un sujeto se reduzca exactamente a la mitad de una concentracion o una cantidad dadas.

“Farmaceuticamente aceptable” se refiere a las propiedades y/o las sustancias que son aceptables para el paciente desde el punto de vista farmacologico y/o toxicologico, y/o para el qmmico farmaceutico fabricante desde el punto vista ffsico y/o qrnmico con respecto a la composicion, la formulacion, la estabilidad, la aceptacion por el paciente, la biodisponibilidad y la compatibilidad con otros ingredientes.

Los “excipientes farmaceuticamente aceptables” pueden significar cualquier sustancia, que en sf misma no es un agente terapeutico, que se emplea como portador, diluyente, ligante y/o vehfculo para el transporte de un agente terapeutico a un sujeto, o que se anade a una composicion farmaceutica para mejorar su manipulacion o sus propiedades de conservacion, o para permitir o facilitar la formacion de un compuesto o de una composicion en una

forma de dosificacion unitaria para la administracion. Los excipientes farmaceuticamente aceptables son muy conocidos en las tecnicas farmaceuticas y se describen, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa (por ejemplo, 20a ed., 2000), y Handbook of Pharmaceutical Excipients, American Pharmaceutical Association, Washington, D.C. (por ejemplo, 1a, 2a y 3a eds., 1986, 1994 y 2000, respectivamente). 5 Tal como saben los expertos en la tecnica, los excipientes pueden proporcionar una diversidad de funciones, y pueden describirse como agentes humectantes, agentes tamponantes, agentes suspensores, agentes lubricantes, emulgentes, disgregantes, absorbentes, conservantes, tensioactivos, colorantes, aromatizantes y edulcorantes. Los ejemplos de excipientes farmaceuticamente aceptables incluyen, sin limitacion: (1) azucares, tales como lactosa, glucosa y sacarosa; (2) almidones, tales como almidon de mafz y almidon de patata; (3) celulosa y sus derivados, 10 tales como carboximetilcelulosa de sodio, etilcelulosa, acetato de celulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, e hidroxipropilcelulosa; (4) tragacanto en polvo; (5) malta; (6) gelatina; (7) talco; (8) excipientes, tales como mantequilla de cacao y ceras para supositorios; (9) aceites, tales como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodon, aceite de cartamo, aceite de sesamo, aceite de oliva, aceite de mafz y aceite de soja; (10) glicoles, tales como propilenglicol; (11) polioles, tales como glicerina, sorbitol, manitol y polietilenglicol; (12) esteres, tales como 15 oleato de etilo y laurato de etilo; (13) agar; (14) agentes tamponantes, tales como hidroxido de magnesio e hidroxido de aluminio; (15) acido algmico; (16) agua apirogena; (17) disolucion salina isotonica; (18) disolucion de Ringer; (19) alcohol etflico; (20) disoluciones con pH tamponado; (21) poliesteres, policarbonatos y/o poliantndridos; y (22) otras sustancias no toxicas compatibles empleadas en formulaciones farmaceuticas.

Una “sal farmaceuticamente aceptable” se refiere a una sal de acido o de base de un compuesto de la invencion, 20 poseyendo dicha sal la actividad farmacologica deseada y no siendo biologicamente indeseable ni indeseable de otra forma. La sal puede formarse con acidos que incluyen, sin limitacion, acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, bencensulfonato, bisulfato, butirato, citrato, canforato, canforsulfonato, ciclopentanpropionato, digluconato, dodecilsulfato, etansulfonato, fumarato, glucoheptanoato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, 2-hidroxietansulfonato, lactato, maleato, metansulfonato, 2-naftalensulfonato, 25 nicotinato, oxalato, tiocianato, tosilato y undecanoato. Los ejemplos de una sal de base incluyen, sin limitacion, sales de amonio, sales de metales alcalinos, tales como sales de sodio y potasio, sales de metales alcalinoterreos, tales como sales de calcio y magnesio, sales con bases organicas, tales como sales de diciclohexilamina, N-metil-D- glucamina, y sales con aminoacidos, tales como arginina y lisina. En algunas realizaciones, los grupos que contienen nitrogeno basico pueden cuaternizarse con agentes que incluyen haluros de alquilo inferior, tales como 30 cloruros, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo y butilo; sulfatos de dialquilo, tales como sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo y diamilo; haluros de cadena larga, tales como cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y estearilo; y haluros de aralquilo, tales como bromuros de fenetilo.

Una “forma de dosificacion unitaria” se refiere a una unidad ffsicamente discreta adecuada como dosificacion unitaria para sujetos humanos u otros sujetos animales. Cada forma de dosificacion unitaria puede contener una cantidad 35 predeterminada de una sustancia activa (por ejemplo, un compuesto o una composicion de la invencion, un farmaco sustrato de CDA y/u otro agente terapeutico) calculada para producir un efecto deseado.

“Isomeros” se refiere a compuestos que tienen el mismo numero y tipo de atomos y, por tanto, el mismo peso molecular, pero se diferencian con respecto a la disposicion o la configuracion de los atomos.

“Estereoisomeros” se refiere a isomeros que se diferencian solo en la disposicion de los atomos en el espacio.

40 “Diastereoisomeros” se refiere a estereoisomeros que no son imagenes especulares entre sf.

“Enantiomeros” se refiere a estereoisomeros que son imagenes especulares entre sf no superponibles. Los enantiomeros incluyen isomeros “enantiomericamente puros” que comprenden sustancialmente un unico enantiomero, por ejemplo, mayor o igual que 90%, 92%, 95%, 98%, o 99%, o igual a 100% de un unico enantiomero.

“Epfmeros” se refiere a estereoisomeros de un compuesto que tienen diferentes configuraciones solo en uno de 45 varios centros estereogenicos.

“Racemico” se refiere a una mezcla que contiene partes iguales de enantiomeros individuales.

“No racemico” se refiere a una mezcla que contiene partes desiguales de enantiomeros individuales. Una mezcla no racemica puede estar enriquecida en la configuracion R o S e incluye, sin limitacion, mezclas de enantiomeros R a S o de enantiomeros S a R de aproximadamente 50/50, aproximadamente 60/40 y aproximadamente 70/30.

50 “Opcional” u “opcionalmente” significa que el acontecimiento o la circunstancia descrita a continuacion puede o no ocurrir, y que la descripcion incluye casos en los que el acontecimiento o la circunstancia ocurre y casos en que no ocurre. Por ejemplo, un alquilo que este “opcionalmente sustituido” incluye un alquilo que no esta sustituido y un alquilo que esta sustituido.

Un “sujeto” se refiere a una celula o a un tejido, in vitro o in vivo, un animal o un ser humano. Un sujeto animal o 55 humano tambien puede denominarse un “paciente”.

Un “animal” se refiere a un organismo vivo que tiene sensaciones y el poder de movimiento voluntario, y que

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requiere para su existencia oxfgeno y comida organica.

Un “mairnfero” se refiere a un animal vertebrado de sangre caliente con pelo o pelaje. Los ejemplos incluyen, sin limitacion, miembros de la especie humana, de especies equinas, porcinas, bovinas, murinas, caninas o felinas.

“Tratar”, en referencia a una enfermedad, un trastorno o una afeccion, se refiere a: (i) inhibir una enfermedad, un trastorno o una afeccion, por ejemplo, detener su desarrollo; y/o (ii) aliviar una enfermedad, un trastorno o una afeccion, por ejemplo, provocando la regresion de los smtomas clmicos.

“Prevenir”, en referencia a una enfermedad, un trastorno o una afeccion, se refiere a prevenir una enfermedad, un trastorno o una afeccion, por ejemplo, provocando que no se desarrollen los smtomas de la enfermedad, el trastorno o la afeccion.

“Cancer” se refiere a un crecimiento anomalo de celulas que tienden a proliferar de una manera incontrolada y, en algunos casos, a metastatizar (propagarse). Los tipos de canceres espedficos incluyen, sin limitacion, los canceres identificados en la publicacion No Us 2006/0014949 y los siguientes:

- cardfacos: sarcoma (por ejemplo, angiosarcoma, fibrosarcoma, rabdomiosarcoma, liposarcoma y similares), mixoma, rabdomioma, fibroma, lipoma y teratoma;

- de pulmon: carcinoma broncogenico (por ejemplo, de celulas escamosas, microcftico indiferenciado, macrocftico indiferenciado, adenocarcinoma y similares), carcinoma alveolar (por ejemplo, bronquiolar), adenoma bronquial, sarcoma, linfoma, hamartoma condromatoso, mesotelioma;

- gastrointestinal: esofago (por ejemplo, carcinoma de celulas escamosas, adenocarcinoma, leiomiosarcoma, linfoma y similares), estomago (por ejemplo, carcinoma, linfoma, leiomiosarcoma y similares), pancreas (por ejemplo, adenocarcinoma ductal, insulinoma, glucagonoma, gastrinoma, tumores carcinoides, vipoma y similares), intestino delgado (por ejemplo, adenocarcinoma, linfoma, tumores carcinoides, sarcoma de Karposi, leiomioma, hemangioma, lipoma, neurofibroma, fibroma y similares), intestino grueso (por ejemplo, adenocarcinoma, adenoma tubular, adenoma velloso, hamartoma, leiomioma y similares);

- tracto genitourinario: rinon (por ejemplo, adenocarcinoma, nefroblastoma de tumor de Wilm, linfoma, leucemia, y similares), vejiga y uretra (por ejemplo, carcinoma de celulas escamosas, carcinoma de celulas de transicion, adenocarcinoma y similares), prostata (por ejemplo, adenocarcinoma, sarcoma), testmulo (por ejemplo, seminoma, teratoma, carcinoma embrionario, teratocarcinoma, coriocarcinoma, sarcoma, carcinoma de celulas intersticiales, fibroma, fibroadenoma, tumores adenomatoides, lipoma y similares);

- tugado: hepatoma (por ejemplo, carcinoma hepatocelular y similares), colangiocarcinoma, hepatoblastoma, angiosarcoma, adenoma hepatocelular, hemangioma;

- hueso: sarcoma osteogenico (por ejemplo, osteosarcoma y similares), fibrosarcoma, histiocitoma fibroso maligno, condrosarcoma, sarcoma de Ewing, linfoma maligno (por ejemplo, sarcoma de celulas reticulares), mieloma multiple, cordoma de tumor de celulas gigantes maligno, osteocronfroma (por ejemplo exostosis osteocartilaginosa), condroma benigno, condroblastoma, condromixofibroma, osteoma osteoide y tumores de celulas gigantes;

- sistema nervioso: craneo (por ejemplo, osteoma, hemangioma, granuloma, xantoma, osteitis deformante y similares), meninges (por ejemplo, meningioma, meningiosarcoma, gliomatosis y similares), cerebro (por ejemplo, astrocitoma, meduloblastoma, glioma, ependimoma, germinoma [pinealoma], glioblastoma multiforme, oligodendroglioma, schwannoma, retinoblastoma, tumores congenitos y similares), medula espinal (por ejemplo, neurofibroma, meningioma, glioma, sarcoma y similares);

- ginecologico: utero (por ejemplo, carcinoma endometrial y similares), cervix (por ejemplo, carcinoma cervical, displasia cervical pretumoral y similares), ovario (por ejemplo, carcinoma de ovario [cistadenocarcinoma seroso, cistadenocarcinoma mucico, carcinoma inclasificado], tumores de celulas tecales-granulosas, tumores de celulas de Sertoli-Leydig, disgerminoma, teratoma maligno y similares), vulva (por ejemplo, carcinoma de celulas escamosas, carcinoma intraepitelial, adenocarcinoma, fibrosarcoma, melanoma y similares), vagina (por ejemplo, carcinoma de celulas claras, carcinoma de celulas escamosas, sarcoma botrioide [rabdomiosarcoma embrionario], de trompas de Falopio (carcinoma) y similares);

- hematologico: sangre (por ejemplo, leucemia mieloide [aguda y cronica], leucemia linfoblastica aguda, leucemia linfocftica cronica, enfermedades mieloproliferativas, mieloma multiple, smdrome mielodisplasico y similares), enfermedad de Hodgkin, linfoma no hodgkiniano;

- piel: melanoma maligno, carcinoma de celulas basales, carcinoma de celulas escamosas, sarcoma de Kaposi, lunares de nevi displasico, lipoma, angioma, dermatofibroma, queloides, psoriasis y similares; y

- glandulas adrenales: neuroblastoma.

Un aspecto de la presente invencion se refiere a un compuesto de Formula I o una sal farmaceuticamente aceptable

del mismo:

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en la que el carbono marcado con un asterisco puede tener una configuracion (R) o una (S); y en la que Ri y R2 son 5 fluoro, para su uso en un metodo para inhibir la citidina desaminasa (CDA).

Un segundo aspecto de la presente invencion se refiere a un compuesto de Formula I, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo:

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en la que el carbono marcado con un asterisco puede tener una configuracion (R) o una (S); y en la que Ri y R2 son 10 fluoro, para uso en un metodo para inhibir la degradacion de un farmaco sustrato de CDA por CDA.

Un tercer aspecto de la presente invencion se refiere al compuesto de Formula 1 para el uso como se define en la realizacion 1 o 2, en la que el compuesto esta representado por el Compuesto 1a o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo:

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Un cuarto aspecto de la presente invencion se refiere al compuesto de Formula 1 para el uso como se define en la realizacion 1 o 2, en la que el compuesto esta representado por el Compuesto 1a:

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Un quinto aspecto de la invencion se refiere a un kit que comprende un compuesto como se define en una cualquiera de las realizaciones 1-4, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

Un sexto aspecto de la invencion se refiere al kit de la realizacion 5, que comprende ademas un segundo compuesto que es un farmaco sustrato de CDA seleccionado del grupo que consiste en 5-azacitidina, gemcitabina, ara-C, tezacitabina, 5-fluoro-2'-desoxicitidina y citocloro.

Un septimo aspecto de la invencion se refiere al kit de la realizacion 5, que comprende ademas un segundo compuesto que es un farmaco sustrato de CDA, en el que el farmaco sustrato de CDA no es decitabina.

Un aspecto adicional de la invencion se refiere al kit de la realizacion 5, que comprende ademas un segundo compuesto que es un farmaco sustrato de CDA, en el que el farmaco sustrato de CDA es decitabina.

Un aspecto adicional de la invencion se refiere al kit de realizaciones 6 o 7, en las que el farmaco sustrato de CDA es 5-azacitidina, gemcitabina o ara-C.

Un aspecto adicional de la invencion se refiere al kit de una cualquiera de las realizaciones 6-9, en las que el compuesto de Formula I y el segundo compuesto estan en recipientes separados.

Un aspecto adicional de la invencion se refiere a un kit que comprende una forma de dosificacion unitaria de un compuesto como se define en una cualquiera de las realizaciones 1-4, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

Un aspecto adicional de la invencion se refiere al kit de cualquiera de las realizaciones 5-11, que comprende ademas informacion.

Un aspecto adicional de la invencion se refiere al kit de cualquiera de las realizaciones 5-11, para uso en un metodo para inhibir CDA.

Un aspecto adicional de la invencion se refiere al kit de una cualquiera de las realizaciones 5-11, para uso en un metodo para inhibir la degradacion de un farmaco sustrato de CDA por CDA.

Un aspecto adicional de la invencion se refiere al kit de cualquiera de las realizaciones 6-10, para uso en un metodo para tratar el cancer.

Un aspecto adicional de la invencion se refiere a una composicion farmaceutica que comprende:

(i) un compuesto de Formula I o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo;

(ii) un farmaco sustrato de CDA; y

(iii) al menos un agente terapeutico adicional, tal como un farmaco sustrato de CDA o un agente quimioterapeutico.

Un aspecto adicional de la invencion se refiere a un compuesto de Formula I o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, para uso en un metodo para tratar cancer, que comprende:

i) administrar a un mairnfero que lo necesite un compuesto de Formula 1a o una sal farmaceuticamente aceptable

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ii) administrar a un mairnfero que lo necesite un farmaco sustrato de CDA; y

iii) administrar a un marnffero que lo necesite, al menos un agente terapeutico adicional.

Un aspecto adicional de la invencion se refiere a un compuesto de Formula I o una de sus sales farmaceuticamente aceptables, en la que el carbono marcado con un asterisco puede tener una configuracion (R) o (S), y en la que R1 y R2 son fluoro, para la fabricacion de un medicamente para el tratamiento de pacientes que son tratados con un farmaco sustrato de CDA y al menos un agente terapeutico adicional.

Un aspecto adicional de la invencion se refiere a un compuesto de Formula I o una de sus sales farmaceuticamente aceptables:

en el que el carbono marcado con un asterisco puede tener una configuracion (R) o una (S); y en la que R1 y R2 son fluoro, para uso en el tratamiento de pacientes que son tratados con un farmaco sustrato de CDA y al menos un agente terapeutico adicional.

Un aspecto adicional de la invencion se refiere a una forma de dosificacion unitaria para tratar el cancer, que comprende:

i) el compuesto de Formula I como se define en cualquiera de las realizaciones 1-4 o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo; y

ii) un farmaco sustrato de citidina desaminasa (CDA) seleccionado del grupo que consiste de 5-azacitidina, gemcitabina, arabinosilcitosina (citarabina, ara-C), tezacitabina, 5-fluoro-2'-desoxicitidina y citocloro.

Un aspecto adicional de la invencion se refiere a una forma de dosificacion unitaria para tratar cancer, que comprende:

i) el compuesto de Formula I como se define en cualquiera de las realizaciones 1-4 o una de sus sales farmaceuticamente aceptables; y

ii) un farmaco substrato de citidina desaminasa (CDA); en el que el farmaco sustrato de CDA no es decitabina.

i) el compuesto de Formula I como se define en una cualquiera de las realizaciones 1-4 o una de sus sales farmaceuticamente aceptables; y

ii) un farmaco substrato de citidina desaminasa (CDA); en el que el farmaco sustrato de CDA es decitabina.

Un aspecto adicional de la invencion se refiere al compuesto de Formula I como se define en una cualquiera de las realizaciones 1-4, en la que el compuesto y el farmaco sustrato de CDA se administran en una forma de dosificacion unitaria individual.

El farmaco sustrato de CDA puede ser cualquier farmaco que pueda ser desamidado por CDA. Los ejemplos no limitantes de un sustrato de CDA incluyen citosina y analogos de citosina, tales como decitabina, 5-azacitidina, gemcitabina, ara-C, troxacitabina, tezacitabina, 5'-fluoro-2'-desoxicitidina, citoclor, y los compuestos descritos en la publicacion US No. 2006/0014949. En algunas realizaciones, el farmaco sustrato de CDA es decitabina. En otras realizaciones, el farmaco sustrato de CDA es 5-azacitidina. En aun otras realizaciones, el farmaco sustrato de CDA es gemcitabina. En aun otras realizaciones, el farmaco sustrato de CDA es ara-C.

Ejemplos de agentes quimioterapeuticos incluyen, sin limitacion:

- agentes alquilantes (por ejemplo, doxorrubicina, ciclofosfamida, estramustina, carmustina, mitomicina, bleomicin y similares);

- antimetabolitos (por ejemplo, 5-fluorouracilo, capecitabina, gemcitabina, nelarabina, fludarabina, metotrexato y similares);

- agentes platinizantes (por ejemplo, cisplatino, oxaliplatino, carboplatino y similares);

- inhibidores de topoisomerasa (por ejemplo, topotecano, irinotecano, etoposido y similares);

- agentes de tubulina (por ejemplo, paclitaxel, docetaxel, vinorelbina, vinblastina, vincristina, otros taxanos, epotilonas, y similares);

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- inhibidores de la senalizacion (por ejemplo, inhibidores de quinasas, anticuerpos, inhibidores de farnesiltransferasa, y similares); y

- otros agentes quimioterapeuticos (por ejemplo, tamoxifeno, agentes antimitoticos, tales como inhibidores de quinasas de tipo polo o inhibidores de aurora quinasas, y similares).

La “cantidad efectiva” del compuesto de la invencion puede variar del 0,1% en peso a aproximadamente 100% en peso. En algunas realizaciones, la cantidad efectiva del compuesto es del 0,1% al 20% en p/p. En otras realizaciones, la cantidad efectiva es del 1-10% en p/p. En otras realizaciones, la cantidad efectiva es del 2-5% en

p/p.

Las composiciones farmaceuticas de la invencion pueden prepararse utilizando materiales y tecnicas conocidos que pueden incluir, pero no se limitan a mezclar y/o combinar el compuesto de la invencion con el excipiente farmaceuticamente aceptable y el agente o agentes terapeuticos opcionales.

Otro aspecto de la presente invencion se refiere a compuestos para uso en un metodo para inhibir la citidina desaminasa, que comprende administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad efectiva de un compuesto o una composicion farmaceutica de la invencion segun se describe en la presente, que incluye pero no se limita a cada realizacion expresa.

En algunas realizaciones, el sujeto es un mairnfero. En realizaciones adicionales, el sujeto es un ser humano.

Otro aspecto de la presente invencion se refiere a compuestos para uso en un metodo para tratar el cancer,

En algunas realizaciones, el cancer se selecciona de canceres hematologicos y canceres solidos. En otras realizaciones, el cancer hematologico se selecciona de MDS y leucemia. En otras realizaciones, el cancer solido se selecciona de cancer pancreatico, cancer de ovario, cancer peritoneal, cancer de pulmon no microdtico, y cancer de mama. En otras realizaciones, la leucemia es la leucemia mieloide aguda (AML) o la leucemia mieloide cronica (CML).

Otro aspecto de la presente invencion se refiere a un compuesto de Formula I para uso en un metodo para inhibir la degradacion de un farmaco sustrato de CDA por la citidina desaminasa, que comprende administrar una cantidad efectiva de un compuesto o de una composicion farmaceutica de la invencion segun se describe en la presente, que incluye pero no se limita a cada realizacion expresa, a un sujeto que esta sometido a un tratamiento con el farmaco sustrato de CDA. El farmaco sustrato de CDA incluye pero no se limita a cada realizacion expresa descrita en la presente.

La administracion del compuesto o de la composicion de la invencion puede realizarse a traves de cualquier via aceptada conocida por los expertos en la tecnica. por ejemplo por via oral, parenteral, mediante un pulverizado para inhalacion, topica, rectal, nasal, bucal, vaginal, intraocular, intrapulmonar, o mediante un deposito implantado. La expresion “por via parenteral” incluye, sin limitacion, por via subcutanea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, intratecal, intraventricular, intraesternal, intracraneal, mediante inyeccion intraosea, y mediante tecnicas de infusion.

Puede utilizarse cualquier regimen de administracion conocido por los expertos en la tecnica para regular el ritmo y la secuencia de la administracion del farmaco, y puede repetirse si es necesario para realizar un tratamiento en los metodos de la invencion. Por ejemplo, el compuesto o la composicion de la invencion pueden administrarse 1, 2, 3 o 4 veces diarias, en una unica dosis, en multiples dosis discretas o en una infusion continua.

El compuesto o la composicion de la invencion pueden administrarse antes, sustancialmente al mismo tiempo o despues de la administracion del farmaco sustrato de CDA. El regimen de administracion puede incluir un pretratamiento y/o coadministracion con al menos otro agente terapeutico. En este caso, el compuesto o la

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composicion de la invencion, el farmaco sustrato de CDA y al menos otro agente terapeutico pueden administrarse de modo simultaneo, por separado o de modo secuencial.

Los ejemplos de regfmenes de administracion incluyen, sin limitacion:

- la administracion de cada compuesto, composicion, farmaco sustrato de CDA y/o agente terapeutico de una manera secuencial; y

- la coadministracion de cada compuesto, composicion, farmaco sustrato de CDA y/o agente terapeutico de una manera sustancialmente simultanea (por ejemplo, en una forma de dosificacion unitaria individual) o en multiples formas de dosificacion unitaria separadas para cada compuesto, composicion, farmaco sustrato de CDA y/o agente terapeutico.

Los expertos en la tecnica apreciaran que la “cantidad efectiva” o “nivel de dosis” dependera de diversos factores, tales como la via de administracion concreta, el regimen de administracion, el compuesto y la composicion seleccionados, y la enfermedad concreta y el paciente concreto que se esta tratando. Por ejemplo, el nivel de dosis apropiado puede variar dependiendo de la actividad, la velocidad de excrecion y la posible toxicidad del compuesto o de la composicion espedficos utilizados; la edad, el peso corporal, la salud general, el genero y la dieta del paciente que se esta tratando; la frecuencia de la administracion; el otro u otros agentes terapeuticos que se estan coadministrando; y el tipo y la gravedad de la enfermedad.

La presente invencion contempla unos niveles de dosis del orden de aproximadamente 0,001 a aproximadamente 10.000 mg/kg/d. En algunas realizaciones, el nivel de dosis es de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 1.000 mg/kg/d. En otras realizaciones, el nivel de dosis es de aproximadamente 1 a aproximadamente 100 mg/kg/d. En otras realizaciones, el nivel de dosis es de aproximadamente 1 a aproximadamente 50 mg/kg/d. En otras realizaciones, el nivel de dosis es de aproximadamente 1 a aproximadamente 25 mg/kg/d. Los niveles de dosis apropiados, la via de administracion, y el regimen de administracion pueden ser determinados por los expertos en la tecnica utilizando tecnicas conocidas.

Otro aspecto de la presente invencion se refiere a un kit que comprende al menos una forma de dosificacion unitaria, cuya forma de dosificacion unitaria comprende un compuesto o composicion farmaceutica de la invencion.

El kit puede comprender ademas un recipiente y/o un empaque adecuado para la venta comercial. El recipiente puede estar en cualquier forma o forma convencional como se conoce en la tecnica que esta hecha de un material farmaceuticamente aceptable, tal como una caja de papel o de carton, una botella o frasco de vidrio o de plastico, una bolsa resellable o un empaque blister con dosificaciones individuales para presionar fuera del empaque de acuerdo con un programa terapeutico. Mas de un recipiente pueden usarse juntos en un solo empaque. Por ejemplo, las tabletas pueden estar contenidas en un empaque blister que a su vez esta contenido dentro de una caja.

El kit puede comprender ademas informacion. La informacion puede proporcionarse en un medio legible. El medio legible puede comprender una etiqueta. La informacion puede dirigirse a un medico, farmaceutico o paciente. La informacion puede indicar que la forma de dosificacion unitaria puede causar uno o mas efectos adversos. La informacion puede comprender instrucciones para administrar la forma de dosificacion unitaria, tal como de una manera descrita en la presente memoria. Estas instrucciones pueden proporcionarse de diversas maneras. Por ejemplo, la informacion puede incluir una tabla que incluya una variedad de pesos o intervalos de peso y dosificaciones apropiadas para cada peso o intervalo de peso.

La informacion puede estar asociada con el recipiente, por ejemplo, estando: escrita en una etiqueta (por ejemplo, la etiqueta de prescripcion o una etiqueta separada) fijada de manera adhesiva a un recipiente; Incluido dentro de un recipiente como un inserto de paquete escrito; aplicada directamente al recipiente tal como se imprime en la pared de una caja o empaque blister; por ejemplo como una tarjeta de instruccion colocada en el cuello de una botella por medio de una cuerda, cordon u otra lmea, un cordel o un dispositivo del tipo de correa.

Sera evidente para los expertos en la tecnica que las realizaciones espedficas de la presente invencion pueden dirigirse a uno, a alguno o a todos los aspectos indicados anteriormente, asf como a otros aspectos, y pueden incluir una, alguna o todas las realizaciones indicadas anteriormente y a continuacon, asf como a otras realizaciones.

En otros puntos que no sean los ejemplos de trabajo, o cuando se indique de otra manera, debe entenderse que todos los numeros que expresan cantidades de ingredientes, condiciones de reaccion, etc. utilizados en la descripcion y en las reivindicaciones, estan modificados por el termino “aproximadamente”. Por consiguiente, a menos que se indique lo contrario, dichos numeros son aproximaciones que pueden variar dependiendo de las propiedades deseadas que quieren obtenerse mediante la presente invencion. Como mmimo, y no como un intento de limitar la aplicacion de la doctrina de los equivalentes al alcance de las reivindicaciones, cada parametro numerico debe considerarse a la luz del numero de dfgitos significativos y de las tecnicas de redondeo habituales.

Aunque los parametros e intervalos numericos que indican el alcance amplio de la invencion son aproximaciones, los valores numericos indicados en los ejemplos de trabajo se indican con la mayor precision posible. Sin embargo, cualquier valor numerico contiene de forma inherente ciertos errores que surgen siempre de la desviacion estandar

que existe en sus respectivas mediciones de ensayo.

Ejemplos

Los siguientes ejemplos son ilustrativos de la presente invencion y no pretenden ser limitaciones.

Smtesis de compuestos

5 Los compuestos usados en la invencion pueden prepararse segun se describe en la presente y/o mediante la aplicacion o la adaptacion de metodos conocidos. Los expertos en la tecnica apreciaran que uno o mas de los reactivos, etapas y/o condiciones descritos en los esquemas de reaccion pueden requerir un ajuste para alojar otros sustituyentes en Ri y R2.

Ejemplo 1:

10 Esquema 1. Smtesis de derivados de difluorotetrahidrouridina (compuestos 1a y 1b)

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2',2'-difluorodihidrouridina (DFDHU, 25). Se disuelve gemcitabina 24 (3,0 g, 11,4 mmol) en H2O (50 ml). Se anade rodio sobre alumina (900 mg) a la disolucion y la mezcla se hidrogena durante la noche a 275,79 kPa. Al dfa 15 siguiente la mezcla se filtra, el agua se retira al vacm y el solido pegajoso resultante se disuelve de nuevo en H2O. Se anade rodio sobre alumina a la disolucion (900 mg) y el material se hidrogena durante la noche a 275,79 kPa. El rodio se retira mediante filtracion y el filtrado resultante se concentra para producir una mezcla bruta de difluorodihidrouridina (5, DFDHU) y aproximadamente 10% de difluorotetrahidrouridina 1a y 1b (DFTHU). La mezcla bruta se purifica en una HPLC en fase inversa (fase inversa C18 a CH3CN al 5%/H2O) para producir 1,84 g (61%, 20 14,5 minutos) de DFDHU 25 y 175 mg (17%, 1a, 9,5 minutos, y 1b, 13,9 minutos) de los epfmeros de DFTHU. La

configuracion absoluta de C-4 para el compuesto 1a se determina mediante difraccion de rayos X de un solo cristal, y es coherente con los precedentes bibliograficos sobre la estructura cristalina de la citidina desaminasa complejada con un unico epfmero de tetrahidrouridina. RMN de 1H de 5: 6,00 (dd, 1H), 4,20 (q, 1H), 3,92-3,72 (m, 3H), 3,64 (m, 1H), 3,43 (m, 1H), 2,68 (t, 2H).

25 2',2'-difluorotetrahidrouridina (DFTHU, 1a y 1b). Se disuelve DFDHU 25 (1,2 g, 4,9 mmol) en 30 ml de MeOH y se enfna hasta 0 °C. Se anade borohidruro de sodio (540 mg, 14,6 mmol) de forma discontinua a la disolucion, y la reaccion se calienta lentamente hasta la temperatura ambiente. Despues de 4 horas de agitacion a temperatura ambiente (ta), el MeOH se retira al vacfo y el residuo se disuelve en 15 ml de H2O. La disolucion se neutraliza con HCl 2,0 N hasta pH 7. La disolucion entonces se purifica a traves de una HPLC preparativa (fase inversa C18 a 30 CH3CN al 5%/H2O). Las sales salen a los 5,2 minutos. Un pico es aparente a los 7,5 minutos (12%). Un epfmero de

la DFTHU 1a sale a los 9,5 minutos (350, 29%). El otro epfmero 1b sale a los 14,3 minutos (370 mg, 31%). El producto desoxigenado 26 eluye a los 17 minutos (200 mg, 17%).

1a: RMN de 1H (D2O, 9,5 minutos): 6,03 (dd, 1H), 5,04 (sa, 1H), 4,20 (q, 1H), 3,90-3,71 (m, 3H), 3,53 (dt, 1H), 3,30

(dt, 1H), 1,92-1,75 (m, 2H). Anal. calc. para C9H14N2O5F2 (0,15 H2O): C, 39,90; H, 5,32; N, 10,34. Encontrado: C, 39,87; H, 5,41; N, 10,26.

1b: RMN de 1H (D2O, 14,3 minutos): 5,97 (dd, 1H), 5,03 (ta, 1H), 4,16 (q, 1H), 3,91-3,68 (m, 3H), 3,41 (dt, 1H), 3,20 (dt, 1H), 1,95-1,80 (m, 2H). Anal. calc. para C9H14N2O5F2 (0,60 H2O): C, 38,74; H, 5,49; N, 10,04. Encontrado: C, 5 38,55; H, 5,36; N, 9,87. 26: RMN de 1H (D2O) 8 5,99 (dd, J = 15 Hz, 6 Hz, 1H), 4,17 ( m, 1H), 3,89 (m, 1H), 3,75 (m,

2H), 3,42 (m, 1H), 3,21 (t, J = 6 Hz, 2H), 3,18 (m, 1H), 1,86 (m, 2H).

Ejemplo 4:

Actividad enzimatica de CDA

Puede demostrarse la capacidad de los compuestos para uso en la invencion para inhibir la actividad enzimatica de 10 CDA utilizando el siguiente metodo de ensayo.

El procedimiento para determinar la actividad enzimatica de CDA se basa en metodologfas publicadas (por ejemplo, Cacciamani, T. et al., Arch. Biochem. Biophys., 1991, 290, 285-292; Cohen R. et al., J. Biol. Chem., 1971,246, 75667568; Vincenzetti S. et al., Protein Expr. Purif., 1996, 8, 247-253). El ensayo sigue el cambio en la absorbancia a 286 nm de la desaminacion catalizada por CDA de la citidina para formar uridina. La reaccion se realiza en tampon 15 fosfato de potasio (pH 7,4, 20 mM, que contiene DTT 1 mM) en un volumen total de 200 |il en un formato de placa de 96 pocillos. La mezcla de reaccion final contiene citidina (50 |iM) y CDA humana recombinante purificada. La enzima purificada se diluye para producir un cambio en la absorbancia de aproximadamente 2 unidades de miliabsorbancia/minuto. Las mediciones en la lmea de base del cambio en la absorbancia a lo largo del tiempo se realizan antes de la adicion de CDA para asegurarse de que no exista cambio en la absorbancia en ausencia de 20 CDA. Despues de la adicion de CDA se controla el cambio en la absorbancia durante 20-30 minutos. Cuando estan presentes inhibidores potenciales, se ensayan ocho concentraciones de cada en el intervalo de 0,1 nM-1 mM para obtener valores de CI50. La pendiente del cambio de absorbancia a lo largo del tiempo para muestras que contienen citidina y CDA pero sin inhibidor (totales) se normaliza a 100%. La actividad enzimatica de CDA que queda en presencia de un compuesto expresada como porcentaje de actividad total se resta del 100% para obtener el 25 porcentaje de inhibicion a concentraciones variables de compuesto.

Utilizando el ensayo descrito anteriormente se evalua la potencia inhibidora de los compuestos 1, 1a y 1b. Los valores de CI50 de los compuestos se indican en la tabla 1. “1a” y “1b” indican estereoisomeros individuales; “1” indica una mezcla epimerica.

Tabla 1. Potencia inhibidora de los compuestos de ensayo

Compuesto: CI50 (nM)

1a: 400 + 60

1b: 5000+1000

1: 400 + 60

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Potenciacion de la eficacia de farmacos sustrato de CDA

Puede demostrarse la capacidad de los compuestos de la invencion para potenciar la eficacia de farmacos sustratos de CDA en el modelo de linfoma de raton L1210.

Ejemplo 5:

35 El efecto del inhibidor de CDA, compuesto 1, sobre la supervivencia inducida por decitabina (0,1 mg/kg) en el modelo de supervivencia de L1210

Metodos

Treinta ratones hembra CD2F1 de 6-7 semanas se separaron aleatoriamente en 6 grupos:

Grupo No.

1: L1210 i.v. y vehfculo + vehfculo p.o. x 2 durante 4 dfas

2: L1210 i.v. y vehfculo + compuesto 1 10 mg/kg p.o. x 2 durante 4 dfas

3: L1210 i.v. y vehfculo + decitabina 0,1 mg/kg p.o. x 2 durante 4 dfas

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4: L1210 i.v. y compuesto 1 1 mg/kg + decitabina 0,1 mg/kg p.o. x 2 durante 4 dfas

5: L1210 i.v. y compuesto 1 10 mg/kg + decitabina 0,1 mg/kg p.o. x 2 durante 4 dfas

6: L1210 i.v. y vehnculo + decitabina 0,1 mg/kg i.p. x 2 durante 4 dfas

Inyeccion intravenosa (i.v.) de L1210: Antes del experimento, se realizan al menos 3 pases de celulas L1210 en ratones hembra CD2F1. Los ratones reciben inyecciones intraperitoneales (i.p.) con lfquido de ascitis de L1210 una semana antes del sacrificio con CO2. Cada raton se coloca sobre la espalda, la superficie de la barriga se limpia con toallitas de alcohol y se realiza una pequena incision en su cavidad peritoneal. Se inyectan en la cavidad peritoneal 2 ml de albumina de suero bovino (BSA) al 2,1% enfriada en hielo, en disolucion salina. El fluido se extrae de la cavidad, se traslada con una jeringa de 3 cc 18G a un tubo esteril limpio y se mantiene en hielo. El fluido se diluye 1:10 en BSA al 2,1% en disolucion salina y se anade una gota de zap-o-globina a 2 ml del lfquido de ascitis diluido. El lfquido de ascitis diluido (diluido de nuevo 1:10) se cuenta en un hematocitometro y se calcula el numero de celulas/ml. Una disolucion madre de lfquido de ascitis en disolucion BSA se diluye hasta 1 x 104 celulas/0,1 ml. Los ratones se inyectan con 0,1 ml de la disolucion de celulas con una aguja 27G.

Preparacion de la disolucion de dosis: Cuando resulte apropiado, los ratones se dosifican con un vehfculo o con el compuesto 1 p.o. 30 minutos antes de la decitabina.

El compuesto 1 se prepara a 1 mg/ml en disolucion salina con tampon fosfato (PBS) y despues se diluye hasta 0,1 mg/ml en PBS para la dosis menor.

La decitabina se prepara como una disolucion madre 1 mg/ml en PBS y se diluye de forma apropiada para lograr una disolucion de dosificacion de 0,01 y 0,02 mg/ml.

Esquema de dosificacion: La decitabina se prepara fresca dos veces al dfa. Todas las disoluciones de dosis se conservan en hielo durante la dosificacion. Los ratones se dosifican i.p. o por via oral (p.o.) dos veces diarias (con un intervalo de 8 horas) durante 4 dfas consecutivos. El esquema de dosificacion final y las dosis totales de decitabina y compuesto 1 se indican en la tabla 2.

Tabla 2. Esquema de dosificacion

Grupo No.: Farmaco Dosis de decitabina (via administrada) Dosis acumulada de decitabina Dosis del compuesto 1 Dosis acumulada del compuesto 1

1: Vehfculo Vehfculo 0 mg/kg Vehfculo 0 mg/kg

2: Compuesto 1 Vehfculo 0 mg/kg 10 mg/kg 80 mg/kg

3: Decitabina 0,1 mg/kg p.o 0,8 mg/kg Vehfculo 0 mg/kg

4: Decitabina/compuesto 1 0,1 mg/kg p.o 0,8 mg/kg 1 mg/kg 40 mg/kg

5: Decitabina/compuesto 1 0,1 mg/kg p.o 0,8 mg/kg 10 mg/kg 80 mg/kg

6: Decitabina 0,1 mg/kg i.p. 0,8 mg/kg Vehfculo 0 mg/kg

Supervivencia y autopsia: Los ratones se observan para la supervivencia y se pesan a diario (de lunes a viernes) durante la duracion del estudio (30 dfas). Los ratones muertos se someten a una autopsia y se observa la presencia de tumores en los organos. Las muertes por tumor se determinan mediante pesos del hngado mayores que 1,6 g y pesos del bazo mayores que 150 mg segun Covey et al., Eur. J. Cancer Oncol., 1985.

Los ratones dosificados con decitabina o decitabina mas compuesto 1 viven mas tiempo que los ratones dosificados con control de vehfculo o solo compuesto 1 (figura 1 y tabla 3; p<0,05). Se observa una tendencia a una respuesta a la dosis con el compuesto 1 en combinacion con decitabina.

La decitabina (0,1 mg/kg) p.o. es menos efectiva que decitabina 0,1 mg/kg i.p., pero no es significativamente diferente (tabla 3; figura 1, p = 0,052).

La coadministracion del compuesto 1 10 mg/kg con decitabina 0,1 mg/kg p.o. potencia significativamente la supervivencia comparado con decitabina 0,1 mg/kg p.o. sola (p = 0,0031) y decitabina 0,1 mg/kg i.p. (p = 0,016; tabla 3, figura 1). La coadministracion del compuesto 1 1 mg/kg con decitabina 0,1 mg/kg p.o. potencia significativamente la supervivencia comparado con decitabina 0,1 mg/kg p.o. sola (p = 0,0031), pero no comparado

5

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25

con decitabina 0,1 mg/kg i.p. (p = 0,13; tabla 3, figura 1).

La tabla 3 lista la supervivencia media de cada grupo de tratamiento y el porcentaje de ATV (aumento en el tiempo de vida) comparado con el grupo con vehnculo. Todos los grupos tratados viven significativamente mas que los controles con vehnculo y los grupos con inhibidor de CDA solo (p<0,05).

La tabla 3 lista los pesos de los hngados y de los bazos de los ratones tras la autopsia. Todos los ratones, excepto un raton con decitabina 0,1 mg/kg i.p., perecieron por una muerte relacionada con la “carga tumoral”, segun indican unos pesos del hngado mayores que 1 g y unos pesos del bazo mayores que 80 mg (Covey et al., supra). Los pesos del hngado y del bazo de 3 ratones control fueron de 0,97 + 0,08 g, y 0,08 + 0,02 g. Se registran las observaciones generales acerca del aspecto global de las cavidades peritoneal y toracica.

Tabla 3. Efecto de la decitabina y del compuesto 1 sobre la supervivencia y los pesos del hngado y del bazo en el

modelo de supervivencia IV L1210

Grupo No.: Celulas L1210 Supervivencia media (dfas) + DE *% ATV (aumento en el tiempo de vida) Peso medio del hngado (g) + DE Peso medio del bazo (g) + DE

1: 1 x 104 7,40 + 0,55 n/a 1,81 + 0,13 0,31 + 0,05

2: 1 x 104 7,40 + 0,55 0,00 1,99 + 0,22 0,39 + 0,07

3: 1 x 104 10,6 + 0,56 43,24 2,05 + 0,17 0,33 + 0,06

4: 1 x 104 12,8 + 0,45 72,97 2,03 + 0,08 0,29 + 0,03

5: 1 x 104 14,2 + 0,45 91,89 2,02 + 0,27 0,29 + 0,07

* % ATV = supervivencia media del experimento (dias) - supervivencia media del control (dias) x 100

supervivencia media del control (dfas)

La figura 1 es una grafica que muestra el efecto del compuesto 1 sobre la supervivencia inducida por decitabina (DAC) en el modelo de linfoma de raton L1210.

Ejemplo 6:

El efecto del inhibidor de CDA, compuesto 1a, sobre la supervivencia inducida por decitabina (0,1 mg/kg) en el modelo de supervivencia L1210

El compuesto 1a se evalua en el modelo L1210 siguiendo el protocolo del ejemplo 5. Los ratones dosificados con decitabina (“DAC”) y con DAC mas el compuesto 1a viven mas tiempo que los que reciben control con vehfculo y solo inhibidor de CDA (figura 2; p<0,05). En combinacion con DAC, el compuesto 1a 10 mg/kg es mas efectiva para extender la supervivencia que las dosis menores.

Ejemplo 8:

El efecto del inhibidor de CDA, compuesto 1, sobre la supervivencia inducida por citarabina (ara-C) en el modelo de supervivencia L1210

Cincuenta ratones hembra CD2F1 de 6-7 semanas se separaron aleatoriamente en 10 grupos (N = 5 ratones/grupo):

Grupo No.

1: L1210 i.v. y veh. + veh. (PBS) p.o. x 2 durante 4 dfas

2: L1210 i.v. y veh. + Ara-C 200 mg/kg p.o. x 2 durante 4 dfas

3: L1210 i.v. y veh. + Ara-C 100 mg/kg p.o. x 2 durante 4 dfas

4: L1210 i.v. y veh. + Ara-C 50 mg/kg p.o. x 2 durante 4 dfas

5: L1210 i.v. y veh. + Ara-C 25 mg/kg p.o. x 2 durante 4 dfas

6: L1210 i.v. y comp. 1 10 mg/kg + Ara-C 200 mg/kg x 2 durante 4 dfas

5

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7: L1210 i.v. y comp. 1 10 mg/kg + Ara-C 100 mg/kg x 2 durante 4 dfas

8: L1210 i.v. y comp. 1 10 mg/kg + Ara-C 50 mg/kg x 2 durante 4 dfas

9: L1210 i.v. y comp. 1 10 mg/kg + Ara-C 25 mg/kg x 2 durante 4 dfas

10: L1210 i.v. y comp. 1 10 mg/kg + veh. p.o. x 2 durante 4 dfas

Inyeccion IV de L1210: Ratones hembra CD2F1 se inyectaron i.p. con Ifquido de ascitis de L1210 una semana antes del sacrificio (CO2). Se realizan al menos 3 pases de celulas Ll2l0 in vivo antes del experimented El raton se coloca sobre la espalda, la superficie de la barriga se limpia con toallitas de alcohol y se realiza una pequena incision en su cavidad peritoneal. Se inyectan en la cavidad 2 ml de BSA al 2,1% enfriada en hielo, en disolucion salina, y despues se extrae el fluido, se traslada con una jeringa de 3 cc 18G a un tubo esteril limpio y se mantiene en hielo. El fluido se diluye 1:10 en BSA al 2,1% en disolucion salina y se anade una gota de zap-o-globina a 2 ml del lfquido de ascitis diluido. El lfquido de ascitis diluido (diluido de nuevo 1:10) se cuenta en un hematocitometro y se calcula el numero de celulas/ml. Una disolucion madre de lfquido de ascitis en disolucion BSA se diluye hasta 1 x 104 celulas/0,1 ml. Los ratones se inyectan con 0,1 ml de la disolucion de celulas con una aguja 27G. Todas las inyecciones i.v. se realizan en aproximadamente 50 minutos.

Preparacion de la disolucion de dosis: Cuando resulte apropiado, los ratones se dosifican con un vehteulo o con el compuesto 1 p.o. 30 minutos antes de Ara-C. El compuesto 1 se prepara a 1 mg/ml en PBS y Ara-C se prepara a disolucion madre 20 mg/ml en PBS y despues se diluyen de forma apropiada para las dosis menores.

Esquema de dosificacion: El compuesto 1 se prepara al comienzo del estudio y se conserva 4 °C. Ara-C se prepara fresco dos veces al dfa. Todas las disoluciones se conservan en hielo durante la dosificacion. Los ratones se dosifican por via oral dos veces diarias (con un intervalo de 8 horas) durante 4 dfas consecutivos. El esquema de dosificacion final y las dosis totales de Ara-C y compuesto 1 se indican en la tabla 4.

Tabla 4. Esquema de dosificacion

Grupo No.: Farmaco Dosis de Ara-C (via administrada) Dosis acumulada de Ara-C Dosis del compuesto 1 Dosis acumulada del compuesto 1

1: Vehteulo Vehteulo 0 mg/kg Vehteulo 0 mg/kg

2: Compuesto 1 Vehteulo 0 mg/kg 10 mg/kg 40 mg/kg

3: Ara-C 200 mg/kg p.o 800 mg/kg Vehteulo 0 mg/kg

4: Ara-C 100 mg/kg p.o 400 mg/kg Vehteulo 0 mg/kg

5: Ara-C 50 mg/kg p.o 200 mg/kg Vehteulo 0 mg/kg

6: Ara-C 25 mg/kg p.o. 100 mg/kg Vehteulo 0 mg/kg

7: Ara-C 200 mg/kg p.o 800 mg/kg 10 mg/kg 40 mg/kg

8: Ara-C 100 mg/kg p.o 400 mg/kg 10 mg/kg 40 mg/kg

9: Ara-C 50 mg/kg p.o 200 mg/kg 10 mg/kg 40 mg/kg

10: Ara-C 25 mg/kg p.o. 100 mg/kg 10 mg/kg 40 mg/kg

Supervivencia y autopsia: Los ratones se observan para la supervivencia y se pesan a diario (de lunes a viernes) durante la duracion del estudio (45 dfas). Los ratones muertos se someten a una autopsia y se observa la presencia de tumores en los organos. Las muertes por tumor se determinan mediante pesos del tegado mayores que 1,6 g y pesos del bazo mayores que 150 mg segun Covey et al., supra.

Los ratones dosificados solo con Ara-C (50 mg/kg, 100 mg/kg y 200 mg/kg) y con Ara-C mas compuesto 1 viven tiempo que los ratones dosificados con control de vehteulo y inhibidor de CDA solo (figuras 4-7, p<0,05). El compuesto 1 solo no tiene efecto sobre la supervivencia comparado con los controles de vehteulo (figura 4).

Ara-C 25 mg/kg solo no tiene efecto en la extension de la supervivencia comparado con ratones tratados con vehteulo y compuesto 1 10 mg/kg. Ara-C 50, 100 y 200 mg/kg aumenta significativamente la supervivencia (dfas) de

5

10

15

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25

30

35

una manera dependiente de la dosis, comparado con los ratones en el grupo control. La coadministracion de compuesto 1 10 mg/kg con Ara-C p.o. aumenta significativamente la supervivencia, comparado con el tiempo de supervivencia de ratones tratados con la misma dosis de Ara-C solo (figuras 4-7).

Ejemplo 9:

Efecto del compuesto 1 sobre la reduccion del volumen tumoral inducida por gemcitabina en el modelo de xenoinjerto de cancer de ovario humano A2780 en raton

Se ensaya la eficacia oral de la gemcitabina en combinacion con el compuesto 1 en el xenoinjerto de cancer de ovario humano A2780. Ratones hembra NCr nu/nu de 5-6 semanas se implantan por via subcutanea con fragmentos tumorales de 30 a 60 mg. En el dfa 11, cuando los tumores tienen aproximadamente 200 mm3, el tratamiento comienza como se describe en la tabla 5.

Tabla 5. Esquema de dosificacion

Grupos: Tratamiento Programa de gemcitabina Programa del compuesto 1

1: Vetuculo (disolucion salina) p.o.; q3dx4

2: Compuesto 1 p.o. 10 mg/kg; q3dx4

3: Gemcitabina p.o. 10 mg/kg; q3dx4

4: Gemcitabina/Compuesto 1* p.o. 10 mg/kg; q3dx4 p.o. 10 mg/kg; q3dx4

5: Gemcitabina p.o. 30 mg/kg; q3dx4

6: Gemcitabina/Compuesto 1* p.o. 30 mg/kg; q3dx4 p.o. 10 mg/kg; q3dx4

* El compuesto 1 se dosifica aproximadamente 30 min antes de la gemcitabina.

El volumen tumoral se sigue a lo largo del experimento. El volumen tumoral se mide tres veces a la semana. La carga tumoral (mg = mm3) se calcula a partir de mediciones con calibrador mediante la formula para el volumen de un elipsoide prolato (L x A2)/2, siendo L y A las respectivas mediciones de longitud ortogonal y anchura (mm).

Los principales criterios de valoracion utilizados para evaluar la eficacia en el modelo de A2780 son las regresiones tumorales completa y parcial, el retraso en el crecimiento tumoral, y el numero de supervivientes exentos de tumores al final del estudio. Una respuesta completa (RC) se define como una disminucion en el tamano del tumor hasta un tamano indetectable (<50 mm3). Una respuesta parcial (RP) se define como una disminucion >50% en la masa tumoral desde un tamano tumoral de partida. Un tumor que alcanza una RC o RP durante el estudio pero que comienza a crecer de nuevo sigue considerandose como una RC o RP. La supervivencia exenta de tumores (SET) al final del estudio se define como sin tumores detectables (<50 mm3) al final del estudio (dfa 74). El retraso en el crecimiento tumoral (RCT) se define en este experimento como la mediana del numero de dfas hasta alcanzar 750 mm3 para el grupo de tratamiento comparado con el grupo control.

La administracion oral de gemcitabina 10 mg/kg p.o. q3dx4 no es muy efectiva en este modelo, con un retraso en el crecimiento tumoral de 6,1 dfas (no es estadfsticamente significativo), sin RC, RP ni supervivientes exentos de tumores al final del experimento en el dfa 74. Cuando se dosifica gemcitabina 10 mg/kg en combinacion con el compuesto 1 se observa un retraso significativo en el crecimiento tumoral comparado con este misma dosis de gemcitabina sola (19,2 dfas; p<0,05 comparado con gemcitabina sola), con 75% de tumores que muestran RC, pero sin SET al final del experimento. En la figura 8 (volumen tumoral frente a tiempo (dfas) despues del inicio del tratamiento), resulta evidente que el compuesto 1 por sf solo no tiene efecto sobre el crecimiento tumoral, mientras que el tratamiento de combinacion con el compuesto 1 y gemcitabina es mas efectiva que la gemcitabina por sf sola.

La administracion oral de gemcitabina 30 mg/kg p.o. q3dx4 es efectiva para producir un retraso en el crecimiento tumoral estadfsticamente significativo de 22 dfas con 63% de RC pero sin sEt. La quimioterapia de combinacion con gemcitabina (30 mg/kg P.O.) mas compuesto 1 produce un retraso en el crecimiento tumoral estadfsticamente significativo de >57 dfas, y 100% de RC y una incidencia del 50% de SET en el dfa 74 de fin del experimento.

Tabla 6. Efecto del tratamiento de combinacion de gemcitabina y compuesto 1 sobre el retraso en el crecimiento

tumoral en el modelo de cancer de ovario A2780

Tratamiento: RCT Valor p

Control sin tratar: NA

5

10

15

20

25

30

35

40

Compuesto 1 10 mg/kg: 0,4 dfas

Gemcitabina 10 mg/kg: 6,1 dfas

Gemcitabina 10 mg/kg + compuesto 1: 19,2 dfas <0,05 comparado con solo gemcitabina 10 mg/kg

Gemcitabina 30 mg/kg: 22 dfas <0,05 comparado con el control sin tratar

Gemcitabina 30 mg/kg + compuesto 1: >57 dfas <0,05 comparado con solo gemcitabina 30 mg/kg

Ejemplo 10:

Caracterizacion en estado solido del compuesto 1a Recogida de datos

Un prisma de cristal incoloro del compuesto 1a (F2O5N2C9H14) que tiene una dimensionas aproximadas de 0,48 x 0,43 x 0,32 mm se monta en un asa. Todas las mediciones se realizan en un detector de areas de formacion de imagenes de placas Rigaku RAXIS SPIDER con radiacion Cu-Ka monocromatica de grafito.

La indexacion se realiza a partir de 5 oscilaciones que se exponen durante 60 segundos. La distancia del cristal al detector es de 127,40 mm.

Las constantes celulares y una matriz de orientacion para la recogida de datos se corresponden con una celula trigonal primitiva (grupo de Laue: -3ml) con dimensiones:

a = 9,78961(18) A

c = 20,4588(7) A

V = 1698,02(7) A3

Para Z = 6 y F.W. = 268,22, la densidad calculada es de 1,574 g/cm3. Basandose en las ausencias sistematicas de:

0,001: 1 + 3n

y la disolucion satisfactoria y el refinamiento de la estructura, se determina que el grupo espaciador es:

P3-|21 (# 152).

Los datos se recogen a una temperatura de -123 + 1 °C hasta un valor 20 maximo de 136,4°. Se recogio un total de 111 imagenes de oscilacion. Se realiza un barrido de datos utilizando barridos o de 20,0 a 200,0° en etapas de 5,0° a % = 0,0° y ^ = 180,0°. Se realiza un segundo barrido de 20,0 a 200,0° en etapas de 5,0° a % = 54,0° y ^ = 180,0°. Se realiza un tercer barrido de 20,0 a 185,0° en etapas 5,0° a % = 54,0° y ^ = 90,0°, y se realiza un barrido final utilizando barridos o de 20,0 a 50,0° en etapas de 5,0° a % = 0,0° y ^ = 0,0°. La tasa de exposicion es de 12,0 [seg./°]. La distancia del cristal al detector es de 127,40 mm. La lectura de salida se realiza en el modo de pfxeles de 0,100 mm.

Reduccion de los datos

De las 11772 reflexiones que se recogen, 2025 son exclusivas (Rint = 0,038); las reflexiones equivalentes se fusionan.

El coeficiente de absorcion lineal, |i, para la radiacion Cu-Ka es de 13,035 cm'1. Se aplica una correccion de la absorcion empmca que resulta en factores de transmision que vanan de 0,540 a 0,659. Los datos se corrigen para los efectos de Lorenz y de polarizacion. Se aplica una correccion para la extincion secundaria (Larson, A.C., Crystallographic Computing, 1970, 291-294, ecuacion 22, sustituyendose V por el volumen celular) (coeficiente = 0,005900).

Disolucion de la estructura y refinamiento

La estructura se disuelve mediante metodos directos (SIR92: Larson, A.C., J. Appl. Cryst., 1994, 27, 435) y se expande utilizando tecnicas de Fourier (DIRDIF99: Beurskens, P.T. et al., The DIRD-99 Program System. Technical Report of the Crystallography Laboratory, 1999, Universidad of Nijinegen, Pafses Bajos). Los atomos que no son hidrogeno se refinan anisotropicamente. Algunos atomos de hidrogeno se refinan isotropicamente y el resto se refina utilizando el modelo de cabalgata. El ciclo final del refinamiento de mmimos cuadrados de matriz completa (mmimos cuadrados ponderados = Zw(Fo2-Fc2)2) en F2 se basa 2052 reflexiones observadas y 181 parametros variables y

5

10

15

20

25

30

35

40

convergencias (el mayor desplazamiento de parametro es <0,01 veces su des) con unos factores de concordancia no ponderados y ponderados de:

R1 = S| I Fo I - I Fd I /S| Fol = 0,0303 wR2 = [S(w(Fo2 - Fc2)2)/Sw(Fo2)2]1/2 = 0,0733

La desviacion estandar de una observacion de peso unitario (desviacion estandar = [Ew(Fo2 - Fc2)2/(No-Nv)]1/2, No = numero de observaciones, Nv = numero de variables) es de 1,10. Se emplean pesos unitarios. Los picos maximos y mmimos sobre el mapa de Fourier de diferencia final se corresponden con 0,22 y -0,22 eVA3, respectivamente. La estructura absoluta se deduce basandose en el parametro de Flack, 0,0(1), refinado utilizando 839 pares de Friedel (Flack, H. D., Acta Cryst., 1983, A39, 876-881).

Los factores de dispersion de atomos neutros se toman de Cromer, D.T. et al., International Tables for X-ray Crystallography, 1974, IV, tabla 2.2 A. Los efectos de dispersion anomalos se incluyen en Fcalc (Ibers, J.A. et al., Acta Crystallogr., 1964, 17, 781); los valores de Af y At” son los de Creagh, D.C. et al., International Tables for Crystallography, 1992, C, tabla 4.2.6.8, 219-222. Los valores para los coeficientes de atenuacion de masas son los de Creagh, D.C. et al., International Tables for Crystallography, 1992, C, tabla 4.2.4.3, 200-206. Todos los calculos se realizan utilizando el paquete informatico cristalografico CrystalStructure 3.8 excepto para el refinamiento, que se realiza utilizando SHELXL-97.

Detalles experimentales

A. Datos cristalinos

Formula empmca:

Peso de la formula:

Color del cristal, habito:

Dimensiones del cristal:

Sistema cristalino:

Tipo de red cristalina:

Imagenes de indexacion:

Posicion del detector:

Tamano del pixel:

Parametros de la red cristalina:

Grupo espaciador: Valor Z:

F2O5N2C9H14

268,22

incoloro, prisma 0,48 x 0,43 x 0,32 mm trigonal primitiva

5 oscilaciones a 60,0 segundos 127,40 mm

0,100 mm a = 9,78961(18) A c = 20,4588(7) A V = 1698,02(7) A3 P3-|21 (# 152)

6

Dcalc.:

F000:

|i(CuKa):

B. Mediciones de intensidad Difractometro:

Radiacion:

Apertura del detector:

Imagenes de datos:

Intervalo de oscilacion o (% = 0,0, ^ = 180,

1,574 g/cm3 840,00 13,035 cm-1

Rigaku RAXIS-SPIDER

Cuba (X = 1,54187 A) monocroma de grafito

460 mm x 256 mm

111 exposiciones

1: 20,0-200,0°

5

10

15

20

25

30

Intervalo de oscilacion o (% = 54,0, ^ = 180,0): 20,0-200,0° Intervalo de oscilacion o (% = 54,0, ^ = 90,0): 20,0-185,0°

Intervalo de oscilacion o (% = 0,0, ^ = 0,0):: 20,0-50,0°

Tasa de exposicion:: 12,0 seg./°

Posicion del detector:: 127,40 mm

Tamano del pixel: 20max: 136,4°: 0,100 mm

No. de reflexiones medidas:: Total: 11772

: Exclusivas: 2052 (Rint = 0,038)

: Pares de Friedel: 839

Correcciones:: Polarizacion de Lorentz

: Absorcion (factores de trans.: 0,540-0,659)

: Extincion secundaria (coeficiente: 5,90000e-003)

C. Disolucion de la estructura y refinamiento

Disolucion de la estructura:: metodos directos (SIR92)

Refinamiento:: mmimos cuadrados de matriz completa en F2

Funcion minimizada: Mmimos cuadrados ponderados:: Zw(Fci2 - Fc2)2

w = 1/[o2(Fc2) + (0,0317 ■: P)2 + 0,6904 ■ P], en el que P = (max(Fo2,0) + 2Fc2)/3

L^ite de exclusion de 20max:: 136,40

Dispersion anomala:: todos los atomos que no son hidrogeno

No. de observaciones (todas las reflexiones): 2052

No. de variables:: 181

Proporcion reflexion/parametro:: 11,34

Residuales: R1 (l>2,00o(l)):: 0,0303

Residuales: R (todas las reflexiones):: 0,0329

Residuales: wR2 (todas las reflexiones):: 0,0733

Bondad del indicador de ajuste:: 1,099

Parametro de Flack (pares de Friedel = 839): 0,0(1)

Desplazamiento max./error en el ciclo final: <0,001 Pico maximo en el mapa de dif. final: 0,22 eVA3 Pico mmimo en el mapa de dif. final: -0,22 e'/A3

En la figura 9 se muestra un diagrama ORTEP (Michael N. Burnett y Carroll K. Johnson, ORTEP-III: Oak Ridge Thermal Ellipsoid Plot Program for Crystal Structure Illustrations, Oak Ridge National Laboratory Report ORNL-6895,

1996) de la estructura determinada del compuesto 1a.

Ejemplo 11:

Potenciacion de la estabilidad frente a acidos del compuesto 1a comparado con la THU

Se evaluo la estabilidad del compuesto 1 y de la tetrahidrouridina (THU) en una disolucion acida mediante 5 espectroscop^a de RMN de 1H.

imagen11

Se disuelve tetrahidrouridina (THU, 5 mg) en D2O (0,75 ml). El espectro de RMN de 1H (D2O, 300 MHz, 27 °C) se muestra en la figura 10. A esta muestra se le anade una gota de TFA deuterado, seguido de un espectro inmediato de RMN de 1H (figura 10). Incluso en el momento temprano, el pico a 5,4 ppm (aproximadamente 10% de conversion 10 mediante intregracion) es indicativo de la expansion del anillo a la TH-piranosa. A lo largo de las siguientes horas se registran espectros (D2O, 300 MHz, 27 °C) tal como se muestra en la figura 11. Despues de 4 horas, la TH-piranosa esta mas extendida, indicando una conversion de aproximadamente 60%. A las 72 horas, la conversion es casi totalmente completa (>80%). Unos cambios notables en la region de 4,0-4,5 tambien son indicativos de la descomposicion de THU y la formacion de TH-piranosa.

15 El compuesto 1a (5 mg) se disuelve en D2O (0,75 ml). El espectro de RMN de 1H (D2O, 300 MHz, 27 °C) se muestra en la figura 12. A esta misma muestra se le anade una gota de TFA deuterado, seguido de un espectro inmediato de RMN de 1H (figura 12). Despues del primer momento del tiempo, el unico cambio notable es la epimerizacion del aminal, que se advierte por los picos adicionales a 5,92 y 5,93. Despues de 4 horas y 72 horas (figura 13) no se producen mas cambios notables en los espectros (D2O, 300 MHz, 27 °C). Estos resultados indican que no se 20 produce formacion de piranosa con el compuesto 1a bajo estas condiciones.

Claims

Reivindicaciones

1.- Un compuesto de formula I, o su sal farmaceuticamente aceptable:

imagen1

en la que el carbono marcado con un asterisco puede tener una configuracion (R) o (S), y en la que R1 y R2 son 5 fluoro, para uso en un metodo para inhibir la citidina desaminasa (CDA)
2. Un compuesto de Formula I, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo:

imagen2

en la que el carbono marcado con un asterisco puede tener una configuracion (R) o una (S); y en la que R1 y R2 son fluoro, para uso en un metodo para inhibir la degradacion de un farmaco sustrato de CDA por CDA.

10 3. El compuesto de Formula 1 para el uso como se define en la reivindicacion 1 o 2, en el que el compuesto esta

representado por el Compuesto 1a o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo:

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4. El compuesto de Formula 1 para el uso como se define en la reivindicacion 1 o 2, en el que el compuesto esta representado por el Compuesto 1a:

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5. Un kit que comprende un compuesto como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
6. El kit de la reivindicacion 5, que comprende ademas un segundo compuesto que es un farmaco sustrato de CDA seleccionado del grupo que consiste en 5-azacitidina, gemcitabina, ara-C, tezacitabina, 5-fluoro-2'-desoxicitidina y citocloro.
7. El kit de la reivindicacion 5, que comprende ademas un segundo compuesto que es un farmaco sustrato de CDA, en el que el farmaco sustrato de CDA no es decitabina.
8. El kit de la reivindicacion 5, que comprende ademas un segundo compuesto que es un farmaco sustrato de CDA, en el que el farmaco sustrato de CDA es decitabina.
9. El kit de la reivindicacion 6 o 7, en el que el farmaco sustrato de CDA es 5-azacitidina, gemcitabina o ara-C.
10. El kit de una cualquiera de las reivindicaciones 6-9, en el que el compuesto de Formula I y el segundo compuesto estan en recipientes separados.
11. Un kit que comprende una forma de dosificacion unitaria de un compuesto como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
12. El kit de una cualquiera de las reivindicaciones 5-11, que comprende ademas informacion.
13. El kit de una cualquiera de las reivindicaciones 5-11, para uso en un metodo para inhibir CDA.
14. El kit de una cualquiera de las reivindicaciones 5-11, para uso en un metodo para inhibir la degradacion de un farmaco sustrato de cDa por CDA.
15. El kit de una cualquiera de las reivindicaciones 6-10, para uso en un metodo para tratar el cancer.

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16. Una composicion farmaceutica que comprende:

(i) un compuesto de Formula I como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo;

(ii) un farmaco sustrato de CDA; y

(iii) al menos un agente terapeutico adicional.
17. Un compuesto de Formula I como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, para uso en un metodo para tratar cancer, que comprende:

(i) administrar a un mairnfero que lo necesite un compuesto de Formula I o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo;

(ii) administrar a un mamffero que lo necesite un farmaco sustrato de CDA; y

(iii) administrar a un mamnfero que lo necesite al menos un agente terapeutico adicional.
18. Uso de un compuesto de Formula I como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo,

en el que el carbono marcado con un asterisco puede tener una configuracion (R) o una (S); y en la que R1 y R2 son fluoro, para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de pacientes tratados con un farmaco sustrato de CDA y al menos un agente terapeutico adicional.
19. Un compuesto de Formula I como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo,

en el que el carbono marcado con un asterisco puede tener una configuracion (R) o una (S); y en la que R1 y R2 son fluoro, para uso en el tratamiento de pacientes tratados con un farmaco sustrato de CDA y al menos un agente terapeutico adicional.
20. Una forma de dosificacion unitaria para tratar el cancer, que comprende:

i) el compuesto de Formula I como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 o una sal

farmaceuticamente aceptable del mismo; y

ii) un farmaco sustrato de citidina desaminasa (CDA) seleccionado del grupo que consiste en 5-azacitidina, gemcitabina, arabinosilcitosina (citarabina, ara-C), tezacitabina, 5-fluoro-2'-desoxicitidina y citocloro.
21. Una forma de dosificacion unitaria para tratar el cancer, que comprende:

i) el compuesto de Formula I como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 o una sal

farmaceuticamente aceptable del mismo; y

ii) un farmaco substrato de citidina desaminasa (CDA); en el que el farmaco sustrato de CDA no es decitabina.
22. Una forma de dosificacion unitaria para tratar el cancer, que comprende:

(i) el compuesto de Formula I como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 o una sal

farmaceuticamente aceptable del mismo; y

(ii) un farmaco substrato de citidina desaminasa (CDA); en el que el farmaco sustrato de CDA es decitabina.
23. El compuesto de Formula I como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que el compuesto y el farmaco sustrato de CDA se administran en una forma de dosificacion unitaria unica.