ES2628580T3 - Combinación de decitabina con inhibidor de citidina deaminasa y uso del mismo en el tratamiento de cáncer el tratamiento de cáncer - Google Patents

Abstract

Una composición que comprende decitabina y un compuesto de la fórmula I: **Fórmula** en la que: uno de R1 y R2 es F, y el otro se selecciona de H y F; uno de R3 y R4 es H, y el otro se selecciona de H y OH; en la que ------- es un enlace covalente o está ausente, y R4 está ausente cuando -------- es un enlace covalente; o una sal farmacéuticamente aceptable, un éster de alquilo C1-6, o un éster de alquenilo C2-6 del mismo.

Description

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Combinacion de decitabina con inhibidor de citidina deaminasa y uso del mismo en el tratamiento de cancer Antecedentes de la invencion

El cancer es la segunda causa mas comun de muerte en los EE.UU., solo es superada por la enfermedad cardfaca, y representa 1 de cada 4 muertes. Desde 1990, solo en los EE.UU., casi cinco millones de vidas se han perdido debido a alguna forma de cancer.

Por ejemplo, el cancer de mama afecta anualmente a 186.000 mujeres en los EE.UU., y la tasa de mortalidad de esta enfermedad se ha mantenido sin cambios desde hace 50 anos. La reseccion quirurgica de la enfermedad a traves de mastectomfa radical, mastectomfa radical modificada, o lumpectomfa sigue siendo la base del tratamiento para esta afeccion. Desafortunadamente, un alto porcentaje de aquellos pacientes tratados con lumpectomfa desarrollara una recurrencia de la enfermedad.

El cancer de pulmon es la causa mas comun de muerte por cancer en ambos sexos en los Estados Unidos. El cancer de pulmon puede ser resultado de un tumor primario que se origina en el pulmon o un tumor secundario que se ha extendido desde otro organo, tal como el intestino o mama. El cancer de pulmon primario se divide en tres tipos principales; cancer de pulmon de celulas microcfticas; cancer de pulmon de celulas no microcfticas; y mesotelioma. Existen tres tipos de cancer de pulmon de celulas no microcfticas: carcinoma de celulas epidermoides, adenocarcinoma y carcinoma de celulas grandes. El mesotelioma es un tipo raro de cancer que afecta a la cubierta del pulmon llamada pleura, y es a menudo provocado por la exposicion a asbestos.

El cancer de ovario representa aproximadamente el 3% de todos los canceres entre mujeres y ocupa el segundo entre los canceres ginecologicos, despues de cancer del cuerpo uterino. El cancer de ovario afecta a mas de 20.000 mujeres en los Estados Unidos cada ano y provoca unas 15.000 muertes al ano. Si se diagnostica la enfermedad en la etapa localizada, la tasa de supervivencia de 5 anos esta por encima del 90%; sin embargo, solo se detecta alrededor del 19% de los casos en esta etapa.

La incidencia de cancer de pancreas ha aumentado constantemente en los ultimos veinte anos en la mayorfa de los pafses industrializados, que exhibe las caracterfsticas de un problema epidemiologico en crecimiento.

La leucemia es un tipo de cancer que afecta a las celulas de sangre. Entre los regfmenes de tratamiento prescritos actualmente para la leucemia son la irradiacion corporal total y quimioterapia. Sin embargo, los dos regfmenes de tratamiento, plantean un dilema clfnico: debido a que la leucemia es un cancer de sangre, todas las celulas en la sangre y todas las celulas que surgen en la medula osea debe ser tratada con el fin de asegurar la destruccion de las celulas neoplasicas. La destruccion de todas estas celulas deja al paciente en un estado gravemente inmunodeprimido que podrfa ser tan fatal como la leucemia.

Ademas, algunos farmacos contra el cancer son metabolizados por enzimas de origen natural de un organismo tales como la adenosina deaminasa (ADA, EC 3.5.4.4) y citidina deaminasa (CDA, tambien denominada nucleosido de citosina deaminasa, aminohidrolasa citidina, o EC 3.5.4.5). Estas enzimas funcionan para desaminar la aminopurina natural y los nucleosidos de aminopirimidina, respectivamente, en los organismos humanos y otros. Estas enzimas tambien convierten los farmacos contra el cancer con base en nucleosidos activos en metabolitos inactivos. Por ejemplo, el farmaco de nucleosido de purina arabinosiladenina (fludarabina, ara-A) se desamina por ADA; el compuesto resultante, con el grupo amino progenitor sustituido con hidroxilo, es inactivo como un agente antitumoral en comparacion con el compuesto progenitor.

La CDA es un componente de la via de ahorro de pirimidina. Esta convierte la citidina y desoxicitidina a uridina y desoxiuridina, respectivamente, mediante desaminacion hidrolftica (Arch. Biochem. Biophys. 1991, 290, 285-292; Methods Enzymol. 1978, 51, 401-407; Biochem. J. 1967, 104, 7P) Tambien desamina una serie de analogos de citosina sinteticos que son farmacos utiles (Cancer Chemother. Pharmacol. 1998, 42, 373-378; Cancer Res. 1989, 49, 30153019; Antiviral Chem. Chemother. 1990, 1, 255-262). La conversion de los compuestos de citosina a los derivados de uridina usualmente confiere perdida de actividad terapeutica o adicion de efectos secundarios. Tambien se ha mostrado que los canceres que adquieren resistencia a los farmacos analogos de citosina a menudo sobreexpresan CDA (Leuk. Res. 1990, 14, 751-754). Las celulas leucemicas que expresan un alto nivel de CDA pueden manifestar resistencia a antimetabolitos de citosina y de ese modo limitan la actividad antineoplasica de dichos agentes terapeuticos (Biochem. Pharmacol. 1993, 45, 1857-1861).

Se ha conocido la tetrahidrouridina (THU, o 1(p-D-ribofuranosil)-4-hidroxitetrahidropirimidin-2(1H)-ona) como un inhibidor de la citidina deaminasa durante un numero de anos.

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Diversos informes han sugerido que la coadministracion con THU aumenta la eficacia y actividad oral de farmacos a base de citidina. Vease por ejemplo, Cancer Chemotherapy Reports 1975, 59, 459-465 and Blood 1985, 66, 527-532. Sin embargo, los primeros inhibidores de CDA tales como THU sufren de inconvenientes que incluyen la inestabilidad del acido (J. Med. Chem. 1986, 29, 2351) y una pobre biodisponibilidad (J. Clin. Pharmacol. 1978, 18, 259).

La 5-Aza-2'-desoxicitidina (tambien denominada decitabina o el agente activo en el producto de marca Dacogen®) es un agente antineoplasico para el tratamiento del sfndrome mielodisplasico (SMD), con utilidad potencial para el tratamiento de la LMA y la CML tambien. Al igual que los otros farmacos basados en citidina, su biodisponibilidad y eficacia oral estan limitadas por la desactivacion por CDA. THU ha demostrado mejorar la potencia de decitabina en un modelo de enfermedad de celulas falciformes en babuinos (Am. J. Hematol., 1985, 18, 283-288). Ademas, se ha demostrado que otro inhibidor CDA conocido, la zebularina, mejora la eficacia de decitabina en ratones con leucemia L1210 (Anticancer Drugs 2005, 16, 301-308).

Por lo tanto, subsiste la necesidad continua de inhibidores nuevos, potentes y terapeuticamente utiles de la CDA que se pueden usar con decitabina para el tratamiento de cancer o enfermedad neoplasica.

Resumen de la invencion

Sigue subsistiendo la necesidad de nuevos tratamientos y terapias para el cancer y trastornos asociados con el cancer. Tambien subsiste la necesidad de compuestos utiles en el tratamiento o mejora de uno o mas sfntomas de cancer. Ademas, hay una necesidad de metodos para inhibir la actividad de la enzima citidina deaminasa.

La invencion se limita a la materia objeto como se define en las reivindicaciones adjuntas. La siguiente descripcion esta sujeta a esta limitacion.

De esta manera, se proporcionan aquf composiciones que comprenden (i) decitabina y (ii) un compuesto de formula I, II, III, IV, V, VI, VII, o VIII, o sales farmaceuticamente aceptables, esteres de alquilo C1-6 o esteres alquenilo C2-6 de los mismos. En un aspecto de la invencion, se proporcionan aquf composiciones que comprenden (i) decitabina y (ii) un compuesto de la formula VIII o sales farmaceuticamente aceptables, esteres de alquilo C1-6 o esteres alquenilo C2-6 de los mismos. En otro aspecto, se proporciona aquf un metodo de tratamiento de cancer que comprende administrar a un sujeto una composicion que comprende decitabina; y administrar a un sujeto una composicion que comprende un compuesto de formula I, II, III, IV, V, VI, VII o VIII, o sales farmaceuticamente aceptables, esteres de alquilo C1-6 o esteres alquenilo C2-6 de los mismos. En otro aspecto, se proporciona aquf un metodo para tratar cancer que comprende: administrar a un sujeto una composicion que comprende decitabina; y administrar a un sujeto una composicion que comprende un compuesto de la formula I, II, III, IV, V, VI, VII o VIII, o sales farmaceuticamente aceptables, esteres de alquilo C1-6 o esteres alquenilo C2-6 de los mismos.

En otro aspecto, se proporciona aquf un metodo de tratamiento de cancer que comprende administrar a un sujeto una composicion que comprende decitabina, y administrar a un sujeto una composicion que comprende un compuesto de formula I, o sales farmaceuticamente aceptables, esteres de alquilo C1-6, o esteres de alquenilo C2-6 de los mismos. En una realizacion de este metodo, la composicion que comprende decitabina y la composicion que comprende un compuesto de formula I se administran simultaneamente. En otra realizacion, se administra secuencialmente la composicion que comprende decitabina y la composicion que comprende un compuesto de formula I.

En otro aspecto, se proporciona aquf un metodo de tratamiento de cancer que comprende administrar a un sujeto una composicion que comprende decitabina; y administrar a un sujeto una composicion que comprende un compuesto de

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formula VIII, o sales farmaceuticamente aceptables, esteres de alquilo Ci-6 o esteres de alquenilo Ci-6de los mismos. En una realizacion de este metodo, la composicion que comprende decitabina y la composicion que comprende un compuesto de formula VIII se administran simultaneamente. En otra realizacion, la composicion que comprende decitabina y la composicion que comprende un compuesto de formula VIII se administran secuencialmente.

En otro aspecto, se proporcionan aquf composiciones farmaceuticas que comprenden (i) decitabina; (ii) un compuesto

de formula I, II, III, IV, V, VI, VII o VIII, o sales farmaceuticamente aceptables, esteres de alquilo Ci-6 o esteres de

alquenilo Ci-6 de los mismos; y (iii) un excipiente farmaceuticamente aceptable.

En otro aspecto, se proporcionan aquf composiciones farmaceuticas que comprenden (i) decitabina; (ii) un compuesto

de formula VIII, o sales farmaceuticamente aceptables, esteres de alquilo Ci-6 o esteres de alquenilo Ci-6 de los mismos;

y (iii) un excipiente farmaceuticamente aceptable. En cualquiera de estas realizaciones, el cancer puede ser un cancer hematologico o un cancer solido. El cancer hematologico puede ser sfndrome mielodisplasico o leucemia. La leucemia puede ser leucemia mieloide aguda o leucemia mieloide cronica. El cancer solido puede ser cancer de pancreas, cancer de ovario, cancer peritoneal, cancer de pulmon de celulas no pequenas o cancer de mama metastasico.

En otro aspecto, se proporciona aquf un metodo de tratamiento de cancer que comprende administrar a un sujeto una composicion farmaceutica que comprende decitabina; y administrar a un sujeto una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de formula VIII, o una sal farmaceuticamente aceptable, un ester de alquilo Ci-6, o un ester de alquenilo Ci-6 del mismo; y un vehfculo farmaceuticamente aceptable.

En una realizacion, el cancer es un cancer hematologico o un cancer solido. El cancer hematologico puede ser sfndrome mielodisplasico o leucemia. La leucemia puede ser leucemia mieloide aguda o leucemia mieloide cronica. El cancer solido puede ser cancer de pancreas, cancer de ovario, cancer peritoneal, cancer de pulmon de celulas no pequenas o cancer de mama metastasico.

En aun otro aspecto, se proporciona aquf un uso del compuesto de formula I, o una sal farmaceuticamente aceptable, un ester de alquilo Ci-6, o un ester de alquenilo Ci-6 del mismo; para la fabricacion de un medicamento para tratar el cancer en un sujeto que se trata con una composicion que comprende decitabina.

En una realizacion, el cancer es un cancer hematologico o un cancer solido. El cancer hematologico puede ser sfndrome mielodisplasico o leucemia. La leucemia puede ser leucemia mieloide aguda o leucemia mieloide cronica. El cancer solido puede ser cancer de pancreas, cancer de ovario, cancer peritoneal, cancer de pulmon de celulas no pequenas o cancer de mama metastasico.

En todavfa otro aspecto, se proporciona aquf un uso del compuesto de formula VIII, o una sal farmaceuticamente aceptable, un ester de alquilo Ci-6, o un ester de alquenilo Ci-6 del mismo; para la fabricacion de un medicamento para tratar el cancer en un sujeto que se trata con una composicion que comprende decitabina. En una realizacion, el cancer es un cancer hematologico o un cancer solido. El cancer hematologico puede ser sfndrome mielodisplasico o leucemia. La leucemia puede ser leucemia mieloide aguda o leucemia mieloide cronica. El cancer solido puede ser cancer de pancreas, cancer de ovario, cancer peritoneal, cancer de pulmon de celulas no pequenas o cancer de mama metastasico.

En otro aspecto, se proporciona aquf un metodo para prevenir la desaminacion de decitabina, que comprende utilizar una cantidad efectiva de cualquier compuesto de las formulas I-VIII. En una realizacion particular de este metodo, el compuesto es un compuesto dado por la formula VIII.

Breve descripcion de los dibujos

La Figura i muestra una grafica de area de HPLC total-% de purezas de ER-876400 (i-((2R,3R,4S,5R)-3,4-dihidroxi-5- (hidroximetil) tetrahidrofuran-2-il)-3,4-dihidro-iH-i,3-diazepin-2(7H)-ona) como una funcion del tiempo en fluido gastrico simulado a 37°C.

La Figura 2 muestra una grafica de area de HPLC total-% de purezas de ER-876437 (i-((2R,4R,5R)-3,3-difluoro-4- hidroxi-5-(hidroximetil) tetrahidrofuran-2-il)-3,4-dihidro-iH-i,3-diazepin-2(7H)-ona) como una funcion del tiempo en fluido gastrico simulado a 37°C.

La Figura 3 muestra el efecto de combinar gemcitabina (i mg/kg) PO y ER-876437 (i0 mg/kg) PO en el modelo de xenoinjerto de cancer de ovario humano A2780.

La Figura 3 muestra el espectro UV de demcitabina y ER-876437.

La Figura 4 muestra cromatogramas de HPLC de decitabina en la presencia de CDA en regulador de T ris-HCl a 37°C en puntos de tiempo seleccionados.

La Figura 5 muestra cromatogramas de HPLC de decitabina en la presencia de CDA y ER-876437 en regulador de Tris- HCl a 37°C en puntos de tiempo seleccionados.

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La Figura 6 muestra el efecto de ER-876437 sobre los niveles de decitabina en la presencia de CDA en regulador de Tris-HCl a 37°C.

Descripcion detallada de la invencion

Las enzimas que desaminan nucleosidos de aminopurina y aminopirimidina naturales tambien pueden convertir farmacos contra el cacer activos en compuestos inactivos en el cuerpo humano. Por ejemplo, la enzima citidina deaminasa puede convertir rapidamente el grupo amino de ciertos farmacos a un grupo hidroxilo, haciendo estos compuestos inactivos. Cuando un inhibidor de citidina deaminasa se coadministra con un farmaco que se desamina de otra manera (y en consecuencia se desactiva) por esta enzima, se lograra actividad antitumor mejorada.

El inhibidor de citidina deaminasa (Z)-3,4-dihidro-1-((2R,3R,4S,5R)-tetrahidro-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil) furan-2-il)-1H- 1,3-diazepin-2(7H)-ona (tambien mencionada aquf como “ER-876400”; 1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-dihidroxi- 5-

(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)-3,4-dihidro-1H-1,3-diazepin-2(7H)-ona; 2H-1,3-Diazepin-2-ona, 1,3,4,7-tetrahidro- 1-p- D-ribofuranosil-; o dado por el registro qufmico No. 75421-11-3) se ha descrito en Liu, P.S. et al., J. Med. Chem. 24:662666 (1981); y en la Patente Estadounidense No. 4,275,057. ER-876400 se da por la formula IX:

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(Aquf y en cualquier parte, donde existan discrepancias entre un nombre de compuesto y una estructura del compuesto, controlara la estructura qufmica).

Se han descrito previamente otros inhibidores de citidina deaminasa en la solicitud internacional No. PCT/US2008/80163, presentada el 16 de octubre de 2008; en la solicitud de Patente Estadounidense No. 12/252,961, presentada el 16 de octubre de 2008; y en la solictud de patente provisional Estadounidense No. 60/980,397, presentada el 16 de octubre de 2007.

Se proporciona aquf una nueva clase de inhibidores de citidina deaminasa (“CDA”). Como se describe aquf, estos compuestos tienen una vida media mejorada sobre otros compuestos conocidos. En una realizacion, los compuestos de la invencion tienen una vida media mejorada en fluido gastrico simulado en comparacion a ER-876400. Estos compuestos pueden ser administrados en combinacion con decitabina para propositos de tratar cancer (por ejemplo, sfndrome mielodisplasico, leucemia, cancer pancreatico, cancer de ovario, cancer peritoneal, cancer de celula no microcftica, o cancer de mama metastasico).

Definiciones

Las siguientes definiciones se utilizan en toda esta especificacion:

Como se utiliza en la especificacion y las reivindicaciones, las formas singulares “un”, “una” y “el” incluyen referencias plurales a menos que el contenido indique claramente lo contrario. De esta manera, por ejemplo, la referencia a una composicion farmaceutica que comprende “un compuesto” puede abarcar dos o mas compuestos.

El termino "decitabina", el agente activo en el farmaco de marca conocido como "DACOGEN®" o "5-aza-2'- desoxicitidina" se refiere a un compuesto que tiene la formula:

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“Alquilo” o “grupo alquilo” como se utiliza aqm, significa una cadena lineal (es dedr, no ramificada), cadena de hidrocarburo ramificada o cfclica que esta completamente saturada. Ejemplos incluyen sin limitacion metilo, etilo, propilo, iso-propilo, butilo, iso-butilo, terc-butilo, n-pentilo y n-hexilo. En algunas realizaciones, la cadena de alquilo es un alquilo C1 a C6 de cadena de carbonos ramificada o no ramificada. En algunas realizaciones, la cadena de alquilo es una cadena de carbono ramificada o no ramificada C2 a C5. En algunas realizaciones, la cadena de alquilo es una cadena de carbono ramificada o no ramificada C1 a C4. En algunas realizaciones, la cadena de alquilo es una cadena de carbono ramificada o no ramificada C2 a C4. En algunas realizaciones, la cadena de alquilo es una cadena de carbono ramificada o no ramificada C3 a C5. En algunas realizaciones, la cadena de alquilo es una cadena de carbono ramificada o no ramificada C1 a C2. En algunas realizaciones, la cadena de alquilo es una cadena de carbono ramificada o no ramificada C2 a C3. En ciertas realizaciones, el termino “alquilo” o “grupo alquilo” incluye un grupo cicloalquilo, tambien conocido como un carbociclo. Grupos alquilo C1-3 de ejemplo incluyen metilo, etilo, propilo, isopropilo y ciclopropilo.

“Alquenilo” o “grupo alquenilo”, como se utiliza aqm, se refiere a una cadena de hidrocarburo lineal (es decir, no ramificada), cadena de hidrocarburo ramificada o cfclica que tiene uno o mas dobles enlaces. Ejemplos incluyen, sin limitaciones, etenilo, propenilo, isopropenilo, butenilo, isobutenilo, terc-butenilo, n-pentenilo y n-hexenilo. En algunas realizaciones, la cadena de alquenilo es una cadena de carbono ramificada o no ramificada C2 a C6. En algunas realizaciones, la cadena de alquenilo es una cadena de carbono ramificada o no ramificada C2 a C5. En algunas formas de realizacion, la cadena de alquenilo es una cadena de carbono ramificada o no ramificada C2 a C4. En algunas realizaciones, la cadena de alquenilo es una cadena de carbono ramificada o no ramificada C3 a C5. De acuerdo con otro aspecto, el termino alquenilo se refiere a un hidrocarburo de cadena lineal que tiene dos enlaces dobles, tambien conocidos como “dieno”. En otras realizaciones, el termino “alquenilo” o “grupo alquenilo” se refiere a un grupo cicloalquenilo.

“Ester de alquilo CW se refiere a un ester de alquilo C1-6, en el que cada grupo alquilo C1-6 es como se definio anteriormente. De acuerdo con lo anterior, un grupo ester de alquilo C1-6 de un alcohol (-OH) tiene la formula - C(=O)O(alquilo C1-6), en el que el oxfgeno terminal ocupa la posicion del oxfgeno alcoholico.

“Ester de alquenilo C2-6” se refiere a un ester de alquenilo C2-6, en el que cada grupo alquenilo C2-6 es como se definio anteriormente. De acuerdo con lo anterior, un grupo ester de alquenilo C2-6 de un alcohol (-OH) tiene la formula - C(=O)O(alquenilo C2-6), en el que el oxfgeno terminal ocupa la posicion del oxfgeno alcoholico.

A menos que se indique lo contrario, cuando se describe un grupo bivalente por su formula qufmica, que incluye dos grupos funcionales de enlace terminal indicados por “-”, se entendera que la union se lee de izquierda a derecha.

A menos que la estereoqufmica se represente o se establezca o se muestre de otra forma, las estructuras representadas aquf tambien pretenden incluir todas las formas enantiomericas, diastereomericas, y geometricas (o conformacionales) de la estructura; por ejemplo, las configuraciones R y S para cada centro asimetrico, (Z) y (E) isomeros de enlace doble, e isomeros conformacionales(Z) y (E). Por lo tanto, los isomeros estereoqufmicos individuales asf como las mezclas enantiomericas, diastereomericas, y geometricas (o conformacionales) de los presentes compuestos estan dentro del alcance de la invencion. Cualesquier formas tautomeras de los compuestos de la invencion estan dentro del alcance de la invencion.

Adicionalmente, a menos que se indique lo contrario, las estructuras representadas aquf tambien pretenden incluir compuestos que difieren solo en la presencia de uno o mas atomos isotopicamente enriquecidos. Por ejemplo, los compuestos que tienen las presentes estructuras excepto por la sustitucion de hidrogeno por deuterio o tritio, o el reemplazo de un carbono enriquecido por carbono 13C o 14C estan dentro del alcance de esta invencion. Dichos compuestos son utiles, por ejemplo, como herramientas analfticas o sondas en ensayos biologicos.

“Tratamiento”, “tratar” y “que trata” se refieren a invertir, aliviar, retrasar la aparicion de, o inhibir el progreso de una enfermedad o trastorno como se describe aquf. En algunas realizaciones, el tratamiento se puede administrar despues de que se han desarrollado uno o mas sfntomas. En otras realizaciones, el tratamiento se puede administrar en ausencia de sfntomas. Por ejemplo, el tratamiento se puede administrar a un individuo susceptible antes de la aparicion de los sfntomas (por ejemplo, a la luz de una historia de sfntomas o a la luz de factores geneticos de susceptibilidad o de otro tipo, o a la luz de una historia de sfntomas y a la luz de factores geneticos u otros factores de susceptibilidad). El tratamiento tambien se puede continuar despues de que desaparezcan los sfntomas, por ejemplo, para mitigar o retrasar su repeticion. “Tratar” en referencia a una enfermedad, trastorno o afeccion tambien se refiere a: (i) ralentizar una enfermedad, trastorno o afeccion, por ejemplo, detener su desarrollo; o (ii) aliviar una enfermedad, trastorno o afeccion, por ejemplo, provocar la regresion de los sfntomas clfnicos, o (iii) ralentizar una enfermedad, trastorno o afeccion y aliviar una enfermedad, trastorno o afeccion.

“Prevenir” en referencia a una enfermedad, trastorno o afeccion se refiere a prevenir una enfermedad, trastorno o afeccion, por ejemplo, hacer que no se desarrollen los sfntomas clfnicos de la enfermedad, trastorno o afeccion.

“Inhibir”, “inhibidor”, y “inhibicion” en referencia a cualquiera de los compuestos dados por las formulas I -VIII (o los inhibidores de CDA descritos aquf que incluyen, sin limitacion cualquiera de sus sales, esteres de alquilo o esteres de alquenilo) se refiere a la reduccion de la capacidad de las CDA para unir una decitabina, reduciendo de esta manera la capacidad de las CDA para desaminar enzimaticamente decitabina. Sin estar limitado por ninguna teorfa, la capacidad

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de un compuesto para inhibir la CDA se puede deber a la capacidad del compuesto para unirse al sitio activo de una protefna de CDA particular reduciendo de esta manera la capacidad de esa protefna de CDA particular de unirse a decitabina. “Inhibir”, “inhibidor”, e “inhibicion” en este contexto no se refiere a una prevencion completa de todas las protefnas de CDA de unirse a decitabina. Mas bien, en este contexto, “inhibir”, “inhibidor”, e “inhibicion” se refieren a la capacidad de los inhibidores de CDA para reducir la desaminacion enzimatica de decitabina mediante CDA. En un aspecto, los metodos de la presente invencion comprenden poner en contacto una celula con una cantidad efectiva de un compuesto inhibidor de CDA, es decir, un compuesto de la invencion, inhibiendo de esta manera la actividad de CDA.

“Paciente” o “sujeto”, como se utiliza aqm, significa un sujeto animal, preferiblemente un sujeto mairnfero (por ejemplo, perro, gato, caballo, vaca, oveja, cabra, mono, etc.), y particularmente sujetos humanos (que incluyen sujetos de ambos sexos, y que incluyen pacientes neonatales, infantiles, juveniles, adolescentes, adultos y geriatricos). “Sujeto” tambien se puede referir a una celula o tejido, in vitro o in vivo, de un animal o un humano.

Por el termino “combinacion” se entiende ya sea una combinacion fija en una forma de dosificacion unitaria, o un kit de partes para la administracion combinada en la que un compuesto de la presente invencion y un socio de combinacion se pueden administrar de forma independiente, al mismo tiempo, , o por separado dentro de intervalos de tiempo que permiten especialmente que los socios de combinacion muestren un efecto cooperativo, por ejemplo, aditivo o sinergico, efecto, o cualquier combinacion de los mismos.

“Farmaceuticamente aceptable” se refiere a aquellas propiedades o sustancias que son aceptables para el paciente desde un punto de vista farmacologico o toxicologico, o para el qufmico farmaceutico fabricante desde un punto de vista ffsico o qufmico respecto a la composicion, formulacion, estabilidad, aceptacion de paciente, biodisponibilidad y compatibilidad con otros ingredientes.

“Excipiente farmaceuticamente aceptable” puede significar cualquier sustancia, no es en si un agente terapeutico, utilizado como un vehfculo, diluyente, aglutinante, o vehfculo para el suministro de un agente terapeutico a un sujeto, o agregado a una composicion farmaceutica para mejorar su manejo o propiedades de almacenamiento o para permitir o facilitar la formacion de un compuesto o composicion en una forma de dosificacion unitaria para administracion. Los excipientes farmaceuticamente aceptables son bien conocidos en la tecnica farmaceutica y se describen, por ejemplo, en Remington Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa (por ejemplo, 20a Ed., 2000), y Handbook of Pharmaceutical Excipients, American Pharmaceutical Association, Washington, DC, (por ejemplo, 1a, 2a y 3a Eds., 1986, 1994 y 2000, respectivamente). Los excipientes pueden proporcionar una variedad de funciones y se puede describir como agentes humectantes, agentes de regulacion, agentes de suspension, agentes lubricantes, emulsionantes, desintegrantes, absorbentes, conservantes, surfactantes, colorantes, saborizantes, y edulcorantes. Ejemplos de excipientes farmaceuticamente aceptables incluyen, sin limitacion: (1) azucares, tales como lactosa, glucosa y sacarosa; (2) almidones, tales como almidon de mafz y almidon de papa; (3) celulosa y sus derivados, tales como carboximetilcelulosa de sodio, etilcelulosa, acetato de celulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, e hidroxipropilcelulosa; (4) tragacanto en polvo; (5) malta; (6) gelatina; (7) talco; (8) excipientes, tales como manteca de cacao y ceras para supositorios; (9) aceites, tales como aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodon, aceite de cartamo, aceite de sesamo, aceite de oliva, aceite de mafz y aceite de soja; (10) glicoles, tales como propilenglicol; (11) polioles, tales como glicerina, sorbitol, manitol y polietilenglicol; (12) esteres, tales como oleato de etilo y laurato de etilo; (13) agar; (14) agentes de regulacion, tales como hidroxido de magnesio e hidroxido de aluminio; (15) acido algfnico; (16) agua exenta de pirogenos; (17) solucion salina isotonica; (18) solucion de Ringer; (19) alcohol etflico; (20) soluciones reguladoras de pH; (21) poliesteres, policarbonatos o polianhfdridos; y (22) otras sustancias compatibles no toxicas empleadas en formulaciones farmaceuticas.

“Portador farmaceuticamente aceptable” como se utiliza aqm se refiere a un portador o vehfculo no toxico que no destruye la actividad farmacologica del compuesto con el que se formula. Los portadores o vehfculos farmaceuticamente aceptables que se pueden utilizar en las composiciones de esta invencion incluyen, pero no se limitan a, intercambiadores de iones, alumina, estearato de aluminio, lecitina, protefnas de suero, tales como albumina de suero humano, sustancias reguladoras tales como fosfatos, glicina, acido sorbico, sorbato de potasio, mezclas de gliceridos parciales de acidos grasos saturados de vegetales, agua, sales o electrolitos, tales como sulfato de protamina, fosfato de hidrogeno de disodio, hidrogeno fosfato de potasio, cloruro de sodio, sales de zinc, sflice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinilpirrolidona, sustancias a base de celulosa, polietilenglicol, ciclodextrinas, carboximetilcelulosa de sodio, poliacrilatos, ceras, polfmeros de bloque de polietileno-polioxipropileno, polietilenglicol y grasa de lana.

“Sal farmaceuticamente aceptable” se refiere a una sal de acido o base de un compuesto de la invencion, cuya sal posee la actividad farmacologica deseada y no es ni biologicamente ni de otro modo indeseable. La sal se puede formar con acidos que incluyen sin limitacion, acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, bencenosulfonato, butirato de bisulfato, citrato, canforato, canforsulfonato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, fumarato, glucoheptanoato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, bromhidrato, clorhidrato, yodhidrato, 2- hidroxietano-sulfonato, lactato, maleato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, oxalato, tiocianato, tosilato y undecanoato. Ejemplos de una sal de base incluyen, sin sales de limitacion de amonio, sales de metales alcalinos tales como sales de sodio y de potasio, sales de metales alcalinoterreos tales como sales de calcio y magnesio, sales con bases organicas tales como sales de diciclohexilamina, N-metil-D-glucamina, y sales con aminoacidos tales como arginina y lisina. En algunas realizaciones, los grupos basicos que contienen nitrogeno se pueden cuaternizar con

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agentes que incluyen haluros de alquilo inferior tales como cloruros, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo y butilo; sulfatos de dialquilo tales como sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo y diamilo; haluros de cadena larga tales como cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y estearilo; y haluros de aralquilo tales como bromuros de fenetilo.

“Animal” se refiere a un organismo vivo que tiene la sensacion y el poder de movimiento voluntario, y que requiere para su existencia oxfgeno y alimento organico.

“Mairnfero” se refiere a un animal vertebrado de sangre caliente con pelo o piel. Ejemplos incluyen sin limitacion miembros de la especie humana, equina, porcina, bovina, murina, canina o felina.

“Cancer” se refiere a un crecimiento anormal de celulas que tienden a proliferarse de forma incontrolada y, en algunos casos, a metastasis (diseminacion). Tipos de canceres especfficos incluyen, sin limitacion, los canceres identificados en la Publicacion No. US 2006/0014949 y los siguientes:

- cardiaco: sarcoma (por ejemplo, tales como angiosarcoma, fibrosarcoma, rabdomiosarcoma, liposarcoma y similares), rabdomioma y teratoma;

- de pulmon: carcinoma broncogenico (por ejemplo, tal como de celulas epidermoides, celulas microcfticas no diferenciadas, celulas grandes no diferenciadas, adenocarcinoma y similares), carcinoma alveolar (por ejemplo, tal como bronquiolar), sarcoma, linfoma, cancer de pulmon de celulas no microcfticas y mesotelioma;

- gastrointestinal: esofago (por ejemplo, tal como carcinoma de celulas epidermoides, adenocarcinoma, leiomiosarcoma, linfoma y similares), estomago (por ejemplo, tal como carcinoma, linfoma, leiomiosarcoma y similares), pancreas (por ejemplo, tal como adenocarcinoma ductal, insulinoma, tumores carcinoides, vipoma y similares), intestino delgado (por ejemplo, tales como adenocarcinoma, linfoma, tumores carcinoides, sarcoma de Kaposi, y similares), intestino grueso (por ejemplo, tales como adenocarcinoma, y similares);

- tracto genitourinario: rinon (por ejemplo, tales como adenocarcinoma, linfoma, leucemia, y similares), vejiga y uretra (por ejemplo, tales como carcinoma de celulas epidermoides, carcinoma de celulas de transicion, adenocarcinoma y similares), prostata (por ejemplo, tales como adenocarcinoma , sarcoma), testfculo (por ejemplo, tales como seminoma, teratoma, carcinoma embrionario, teratocarcinoma, coriocarcinoma, sarcoma, carcinoma de celulas intersticiales, y similares);

- hfgado: hepatoma (por ejemplo, carcinoma hepatocelular y similares), colangiocarcinoma, hepatoblastoma, y angiosarcoma;

- hueso: sarcoma osteogenico (por ejemplo, tal como osteosarcoma y similares), fibrosarcoma, histiocitoma fibrosa maligna, condrosarcoma, sarcoma de Ewing, linfoma maligno (por ejemplo, tal como sarcoma celular de retfculo), mieloma multiple, cordoma de tumor maligno de celulas gigantes (por ejemplo, tales como exostosis osteocartilaginosas), condroblastoma, y tumores de celulas gigantes;

- sistema nervioso: craneo, meninges (por ejemplo, tales como meningiosarcoma, gliomatosis y similares), cerebro (por ejemplo, tal como astrocitoma, meduloblastoma, glioma, ependimoma, germinoma [pinealoma], glioblastoma multiforme, oligodendroglioma, retinoblastoma, tumores congenitos y similares), medula espinal (por ejemplo, tales como sarcoma y similares);

- cancer de mama;

- ginecologicos: utero (por ejemplo, tales como carcinoma endometrial y similares), cuello del utero (por ejemplo, tal como carcinoma cervical, y similares), ovarios (por ejemplo, tales como carcinoma de ovario [cistadenocarcinoma seroso, cistadenocarcinoma mucinoso, carcinoma no clasificado], tumores celulares Sertoli-Leydig, disgerminoma, teratoma maligno, y similares), vulva (por ejemplo, tales como carcinoma de celulas epidermoides, carcinoma intraepitelial, adenocarcinoma, fibrosarcoma, melanoma y similares), vagina (por ejemplo, tal como carcinoma de celulas claras, carcinoma de celulas epidermoides, sarcoma botrioide (rabdomiosarcoma embrionario], trompas de Falopio (carcinoma) y similares);

- hematologico: sangre (por ejemplo, tal como leucemia mieloide [aguda y cronica], leucemia linfoblastica aguda, leucemia linfocftica cronica, leucemia mielocftica cronica, enfermedades mieloproliferativas , mieloma multiple, sfndrome mielodisplasico y similares), enfermedad de Hodgkin, linfoma de no Hodgkin;

- piel: melanoma maligno, carcinoma de celulas basales, carcinoma de celulas epidermoides, sarcoma de Kaposi, y similares; y glandulas suprarrenales: neuroblastoma.

Como se utiliza aqrn, “cantidad terapeuticamente efectiva” se refiere a una cantidad suficiente para provocar la respuesta biologica deseada. Una cantidad terapeuticamente efectiva de decitabina, por ejemplo, es una cantidad suficiente para tratar una enfermedad o trastorno como se describe aquf. Una cantidad terapeuticamente efectiva de un compuesto dado por las formulas I-VIII es una cantidad suficiente para aumentar la exposicion in vivo de decitabina.

A lo largo de la especificacion, cuando existen discrepancias entre el compuesto nombrado y la estructura que se muestra, debera controlar la estructura. Cuando cualesquiera sinonimos nombrados (por ejemplo, abreviaturas, nombres de la IUPAC, nombres genericos u otros nombres qufmicos, o numeros de registro) proporcionados para cualquier compuesto particular en realidad se refieren a diferentes compuestos, entonces la especificacion se 5 interpretara para referirse a estos compuestos en la alternativa.

Compuestos de la Invencion

La presente invencion proporciona compuestos que inhiben la actividad de CDA. En otra realizacion, estos compuestos se pueden administrar en combinacion con decitabina para propositos de tratar cancer (por ejemplo, sfndrome mielodisplasico, leucemia mielogena aguda, leucemia mielocftica cronica, cancer de pulmon de celula no microcftica, 10 cancer pancreatico, cancer de ovario y cancer de mama).

La presente invencion se dirige a una composicion farmaceutica que comprende decitabina y a un compuesto de de la formula I:

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en la que:

15 uno de Ri y R2 es F, y el otro se selecciona de H y F; uno de R3 y R4 es H, y el otro se selecciona de H y OH;

en la que------es un enlace covalente o esta ausente, y R4 esta ausente y R3 es plano cuando--------es un enlace

covalente;

o una sal farmaceuticamente aceptable, un ester de alquilo C1-6, o un ester de alquenilo C2-6 del mismo.

20 Como se utiliza en toda la especificacion, la expresion “R3 es plana” significa que R3 reside en el mismo plano que el plano que contiene el carbono al cual se une R3, asf como los dos atomos de carbono inmediatamente adyacentes al carbono al cual se une R3.

En una realizacion de la formula I, Ri y R2 son cada uno F.

En otra realizacion, la presente invencion se dirige a una composicion farmaceutica que comprende decitabina y a un 25 compuesto de la formula II:

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o una sal farmaceuticamente aceptable, un ester de alquilo C1-6, o un ester de alquenilo C2-6 del mismo.

En otro aspecto, la presente invencion se dirige a una composicion farmaceutica que comprende decitabina y ER- 876437 (o, 2H-1,3-Diazepin-2-ona, 1,3,4,7-tetrahidro- 1-p-(D-2-desoxi-2,2-difluororibofuranosil)-; o 1-((2R,4R,5R)-3,3- difluoro-4-hidroxi-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)-3,4-dihidro-1H-1,3-diazepin-2(7H)-ona, mostrada como la formula 5 VIII). Aquf y en cualquier parte, cuando existan discrepancias entre un nombre qufmico del compuesto y su representacion estructural, controlara la representacion estructural. Cuando existan discrepancias entre la representacion estructural y datos de 1H RMN, controlaran los datos de 1H RMN.

En otro aspecto, la presente invencion se dirige a una composicion farmaceutica que comprende decitabina y a un compuesto de la formula VIII:

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o una sal farmaceuticamente aceptable, un ester de alquilo C1-6, o un ester de alquenilo C2-6 del mismo.

En otro aspecto, la presente invencion se dirige a una composicion farmaceutica que comprende decitabina y a compuestos de la formula VIII:

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15 En otra realizacion, la presente invencion se dirige a una composicion farmaceutica que comprende decitabina y a un compuesto de la formula III:

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en la que:

uno de R3 y R4 es H, y el otro se selecciona de H y OH;

20 o una sal farmaceuticamente aceptable, un ester de alquilo C1-6, o un ester de alquenilo C2-6 del mismo.

En otra realizacion, la presente invencion se dirige a una composicion farmaceutica que comprende decitabina y a un compuesto de la formula IV:

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o una sal farmaceuticamente aceptable, un ester de alquilo Ci-a, o un ester de alquenilo C2-6 del mismo.

5 En una realizacion, la presente invencion se dirige a una composicion farmaceutica que comprende decitabina y a un compuesto de la formula V:

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o una sal farmaceuticamente aceptable, un ester de alquilo C1-6, o un ester de alquenilo C2-6 del mismo.

En otra realizacion, la presente invencion se dirige a una composicion farmaceutica que comprende decitabina y a un 10 compuesto de la formula VI:

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En otra realizacion, la presente invencion se dirige a una composicion farmaceutica que comprende decitabina y a un compuesto de la formula VII:

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o una sal farmaceuticamente aceptable, un ester de alquilo Ci-6, o un ester de alquenilo C2-6 del mismo.

En otra realizacion de la invencion, una composicion farmaceutica puede comprender (a) un compuesto de una cualquiera de las formulas I-VIII y tambien (b) decitabina

Otra realizacion de la invencion se dirige a metodos para administrar las composiciones farmaceuticas descritas aquf. Por lo tanto, la presente invencion se dirige a un metodo para tratar un sujeto para cancer que comprende administrar al sujeto decitabina; y administrar al sujeto una composicion farmaceutica que comprende un compuesto de una cualquiera de las formulas I-VIII. La decitabina y el compuesto dado puede ser una cualquiera de las formulas I-VIII y se puede administrar al sujeto de forma secuencial o simultanea. Una administracion secuencial incluye (a) primero administrar decitabina seguido por (b) administrar la composicion farmaceutica que comprende un compuesto de una cualquiera de las formulas I-VIII. Una administracion secuencial alternativa incluye (a) primero administrar la composicion farmaceutica que comprende un compuesto de una cualquiera de las formulas I-VIII seguida por (b) administrar decitabina. Una administracion secuencial incluye administrar decitabina y la composicion farmaceutica que comprende un compuesto de una cualquiera de las formulas I-VIII al mismo tiempo; o en sustancialmente el mismo tiempo.

Cuando la administracion involucra la administracion separada (por ejemplo, administracion secuencial) del primer compuesto (por ejemplo, un compuesto de la formula I) y un segundo compuesto (por ejemplo, decitabina), como se describe aquf, los compuestos se administran suficientemente cerca en tiempo para tener el efecto terapeutico deseado. Por ejemplo, el perfodo de tiempo entre cada administracion, que puede resultar en el efecto terapeutico deseado, puede variar desde minutos a horas a dfas y se puede determinar con base en las propiedades de cada compuesto tales como potencia, solubilidad, biodisponibilidad, vida media en plasma y perfil cinetico. Por ejemplo, los compuestos se pueden administrar en cualquier orden dentro de 24 a 72 horas uno del otro o dentro de cualquier momento de menos de 24 horas de diferencia. Alternativamente, los compuestos se pueden administrar en cualquier orden dentro de una semana de la otra.

Cuando la decitabina y el compuesto de una cualquiera de las formulas I-VIII se administran de forma secuencial, se pueden formular de forma separada y se puede proporcionar en cualquier orden. Cuando la decitabina y el compuesto de una cualquiera de las formulas I-VIII se administran de forma simultanea, sin embargo, se pueden formular de forma separada o combinar en la misma formulacion. Cuando se combina en la misma formulacion, la decitabina y el compuesto de una cualquiera de las formulas I-VIII se puede formular con el fin de ser liberado en el sujeto al mismo tiempo o en diferentes tiempos. El perfil de liberacion de una formulacion que comprende la decitabina y el compuesto de una cualquiera de las formulas I-VIII incluye lo siguiente:

A) liberacion y biodisponibilidad de la decitabina seguido por liberacion y biodisponibilidad del compuesto de una cualquiera de las formulas I-VIII;

B) liberacion y biodisponibilidad del compuesto de una cualquiera de las formulas I-VIII seguido por liberacion y biodisponibilidad de la decitabina;

C) liberacion y biodisponibilidad del compuesto de una cualquiera de las formulas I-VIII al mismo tiempo como (o sustancialmente al mismo tiempo como) liberacion y biodisponibilidad de la decitabina.

De esta manera, se proporciona aquf un metodo para tratar cancer, que comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una composicion que comprende decitabina y un compuesto de una cualquiera de las formulas I- VIII. El cancer que se va a tratar puede ser leucemia mielocftica cronica, melanoma, mielodisplasia, leucemia recidivante, cancer de colon (incluyendo cancer colorrectal), cancer gastrointestinal, cancer ovarico, leucemia linfoide aguda, leucemia mieloide aguda, leucemia linfocftica, carcinoma de prostata, leucemia mieloide cronica, cancer de pulmon de celulas pequenas, tumor de prostata, carcinoma de celulas renales, cancer testicular, cancer de mama, cancer de trompas de falopio, tumor de ovario, tumor peritoneal, neuroblastoma, linfoma no Hodgkin, tumor de cabeza y cuello, cancer de intestino delgado, tumor de esofago, tumor pulmonar (o, cancer de pulmon), cancer de pulmon de

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celulas pequenas o mesotelioma. En una realizacion particular, el cancer que se va a tratar es sindrome mielodisplasico, leucemia mielogena aguda o leucemia mielocftica cronica.

En otra realizacion, se proporciona aquf un metodo para tratar cancer en un sujeto en necesidad del mismo, que comprende administrar al sujeto una composicion que comprende decitabina y ER-876437. En todavfa otra realizacion, se proporciona aquf un metodo para tratar cancer en un sujeto en necesidad del mismo, que comprende administrar al sujeto una composicion que comprende decitabina y ER-876437, en donde el cancer se selecciona del grupo que consiste en sindrome mielodisplasico, leucemia, cancer de pancreas, cancer de ovario, cancer peritoneal, cancer de pulmon de celulas no pequenas y cancer de mama metastasico. En todavfa otra realizacion, se proporciona aquf un metodo para tratar la leucemia mielogena aguda, el sindrome mielodisplasico o la leucemia mielocftica cronica en un sujeto que lo necesite, que comprende administrar al sujeto una composicion que comprende decitabina y ER-876437.

En todavfa otra realizacion, se proporciona aquf un metodo para tratar la anemia de celulas falciformes en un sujeto que lo necesite, que comprende administrar al sujeto una composicion que comprende decitabina y ER-876437.

En otra realizacion de la invencion, la decitabina y el compuesto de una cualquiera de las formulas I-VIII se puede administrar de forma secuencial (en cualquier orden) o de forma simultanea con otros agentes farmaceuticos normalmente administrados a sujetos que se tratan por cancer. Dichos otros agentes farmaceuticos incluyen sin limitacion antiemeticos, agentes que aumentan el apetito, otros agentes citotoxicos o quimioterapeuticos, y agentes que alivian el dolor. La decitabina y el compuesto de una cualquiera de las formulas I-VIII se puede formular junto con o de forma separada de dichos otros agentes farmaceuticos.

Una combinacion con dichos otros agentes farmaceuticos puede resultar ya sea en aumento sinergico en la actividad contra el cancer, o dicho un aumento puede ser aditivo. Las composiciones descritas aquf normalmente incluyen dosificaciones mas bajas de cada compuesto en una composicion, evitando de esta manera interacciones adversas entre compuestos o efectos secundarios peligrosos, tales como unos que se han reportado para compuestos similares. Adicionalmente, las cantidades normales de cada compuesto cuando se da en combinacion podrfa proporcionar mayor eficacia en sujetos quienes ya sea son insensibles o minfmamente sensibles a cada compuesto cuando se utiliza solo.

Se puede calcular un efecto sinergico, por ejemplo, utilizando metodos adecuados tales como la ecuacion Sigmoid- Emax (Holford, N. H. G. and Scheiner, L. B., Clin. Pharmacokinet. 6: 429-453 (1981)), la ecuacion de aditicidad de Loewe (Loewe, S. and Muischnek, H., Arch. Exp. Pathol Pharmacol. 114: 313-326 (1926)) y la ecuacion de efecto de mediana (Chou, T. C. and Talalay, P., Adv. Enzyme Regul. 22: 27-55 (1984)). Cada ecuacion mencionada anteriormente se puede aplicar a datos experimentales para generar un grafico correspondiente para ayudar a evaluar los efectos de la combinacion de farmacos. Los graficos correspondientes asociados con las ecuaciones mencionadas anteriormente son la curva de concentracion-efecto, la curva de isobolograma y curva de fndice de combinacion, respectivamente.

En ciertas realizaciones, la invencion proporciona una composicion farmaceutica de cualquiera de las composiciones de la presente invencion. En una realizacion relacionada, la invencion proporciona una composicion farmaceutica de cualesquiera de las composiciones de la presente invencion y un portador o excipiente farmaceuticamente aceptable de cualquiera de estas composiciones. En ciertas realizaciones, la invencion incluye las composiciones como entidades qufmicas novedosas.

En una realizacion, la invencion incluye un tratamiento de cancer empacado. El tratamiento de empaque incluye una composicion de la invencion empacada con instrucciones para utilizar una cantidad efectiva de la composicion de la invencion para un uso previsto. En otras realizaciones, la presente invencion proporciona un uso de cualquiera de las composiciones de la invencion para fabricacion de un medicamento para tratar infeccion por cancer en un sujeto.

Procedimiento sintetico

Dentro del alcance de este texto, un grupo facilmente removible que no es un constituyente del producto final deseado particular de los compuestos de la presente invencion se designa un “grupo protector”. La proteccion de grupos funcionales mediante dichos grupos protectores, los grupos protectores en si mismos y sus reacciones de division se describen por ejemplo en trabajos de referencia estandar, tales como por ejemplo, Science of Synthesis: Houben-Weyl Methods of Molecular Transformation. Georg Thieme Verlag, Stuttgart, Alemania. 2005. 41627 pp. (URL:
http://www.science-of-synthesis.com (Electronic Version, 48 Volumes)); J. F. W. McOmie, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, London and New York 1973, in T. W. Greene and P. G. M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", Third edition, Wiley, New York 1999, in "The Peptides"; Volume 3 (editors: E. Gross and J. Meienhofer), Academic Press, London and New York 1981, in "Methoden der organischen Chemie" (Methods of Organic Chemistry), Houben Weyl, 4th edition, Volume 15/I, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974, in H.-D. Jakubke and H. Jeschkeit, "Aminosauren, Peptide, Proteine" (Amino acids, Peptides, Proteins), Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach, and Basel 1982, and in Jochen Lehmann, "Chemie der Kohlenhydrate: Monosaccharide und Derivate" (Chemistry of Carbohydrates: Monosaccharides and Derivatives), Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974. Una caracterfstica de los grupos protectores es que se pueden retirar facilmente (es decir, sin la ocurrencia de reacciones secundarias no deseadas) por ejemplo mediante solvolisis, reduccion, fotolisis o alternativamente bajo condiciones fisiologicas (por ejemplo, por division enzimatica).

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Las sales de adicion de acido de los compuestos de la invencion se forman de forma mas adecuada a partir de acidos farmaceuticamente aceptables, e incluyen por ejemplo aquellas formadas con acidos inorganicos, por ejemplo, clorhfdrico, bromhfdrico, sulfurico o fosforico y acidos organicos, por ejemplo, acido succfnico, maleico , acetico o fumarico. Otras sales no farmaceuticamente aceptables, por ejemplo, se pueden utilizar oxalatos por ejemplo en el aislamiento de los compuestos de la invencion, para uso en laboratorio, o para posterior conversion a una sal de adicion de acido farmaceuticamente aceptable. Tambien se incluyen dentro del alcance de la invencion los solvatos e hidratos de la invencion.

La conversion de una sal de compuesto dado en una sal de compuesto deseado se consigue aplicando tecnicas estandar, en las que una solucion acuosa de la sal dada se trata con una solucion de base, por ejemplo carbonato de sodio o hidroxido de potasio, para liberar la base libre que luego se extrae en un solvente apropiado, tal como eter. La base libre luego se separa de la parte acuosa, se seca, y se trata con el acido requerido para dar la sal deseada.

Los esteres o amidas hidrolizables in vivo de ciertos compuestos de la invencion se pueden formar al tratar los compuestos que tienen un grupo hidroxi libre o funcionalidad amino con el cloruro de acido del ester deseado en presencia de una base en un solvente inerte tal como cloruro de metileno o cloroformo. Las bases adecuadas incluyen trietilamina o piridina. A la inversa, los compuestos de la invencion que tienen un grupo carboxi libre se pueden esterificar utilizando condiciones estandar, que pueden incluir activacion seguido de tratamiento con el alcohol deseado en presencia de una base adecuada.

Las mezclas de isomeros obtenibles de acuerdo con la invencion se pueden separar de una manera conocida per se en los isomeros individuales; los diastereoisomeros se pueden separar, por ejemplo, el dividir mediante particion entre mezclas de solventes polifasicas, recristalizacion o separacion cromatografica, por ejemplo sobre gel de sflice o mediante, por ejemplo, cromatograffa lfquida de media presion sobre una columnaa de fase inversa, y se pueden separar los racematos, por ejemplo, mediante la formacion de sales con reactivos formadores de sales opticamente puros y separacion de la mezcla de diastereoisomeros obtenibles de esta manera, por ejemplo por medio de cristalizacion fraccionada, o mediante cromatograffa sobre materiales de columnaa opticamente activos.

Los compuestos intermedios y productos finales se pueden tratar o purificar de acuerdo con metodos estandar, por ejemplo, utilizando metodos cromatograficos, metodos de distribucion, (re-)cristalizacion, y similares.

Se conocen en la tecnica metodos de preparacion de decitabina.

En otra realizacion, la invencion esta dirigida a un metodo de acoplamiento de compuestos de urea cfclicos tales como imidazolidin-2-ona, tetrahidropirimidin-2(1H)-ona, 1,3-diazepan-2-ona o 1,3,4,7-tetrahidro-2H-1,3-diazepin-2-ona (ER- 878899) a un anillo de tetrahidrofurano C-2-sustituido que comprende formar una mezcla de reaccion al mezclar (i) una primera solucion que comprende 1,3,4,7-tetrahidro-2H-1,3-diazepin-2-ona en un solvente de reaccion con (ii) una segunda solucion que comprende el anillo de tetrahidrofurano sustituido-C-2 en el solvente de reaccion bajo condiciones de reflujo. En esta realizacion, las condiciones de reflujo pueden mantener el volumen de la mezcla de reaccion cuando se agrega la primera solucion a la segunda solucion. Alternativamente, las condiciones de reflujo pueden impedir que el volumen de la mezcla de reaccion aumente en mas de un 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2% o 1%. En esta realizacion, el solvente de reaccion puede ser un solvente polar, aprotico que tiene un punto de ebullicion superior a 150°C, tal como dimetilacetamida (DMA) o dimetilsulfoxido (DMSO). De acuerdo con esta realizacion, la segunda solucion se calienta a mas de 150°C, y la primera solucion se puede agregar mediante una jeringa a la segunda solucion. De acuerdo con esta realizacion, la primera solucion se puede agregar a la segunda solucion en un periodo de tiempo que se extiende menos de 10 horas, a menos de 5 horas, menos de 3 horas, menos de 2 horas, menos de 1 hora o menos de 30 minutos. De acuerdo con esta realizacion, la segunda solucion se puede calentar desde 150°C hasta 250°C, desde 175°C hasta 225°C, o desde 200°C hasta 220°C. De acuerdo con esta realizacion, el anillo de tetrahidrofurano C-2-sustituido puede tener sustituyentes en la posicion C-3, que puede incluir un halogeno en la posicion C-3, dos halogenos en la posicion C-3, o dos atomos de fluor en la posicion C-3. De acuerdo con esta realizacion, el anillo de tetrahidrofurano puede ser ER-878898. Con excepcion de los valores mutuamente excluyentes, cualquiera de las caracterfsticas alternativas descritas en este parrafo se pueden utilizar juntas.

En otra realizacion, la invencion se dirige a un metodo de aislamiento de ER-879381 a partir de una mezcla que comprende ER-878617 que comprende (i) poner en contacto la mezcla con una sustancia cromatografica, y separar la mezcla de la sustancia utilizando tolueno y acetonitrilo como la fase movil. De acuerdo con esta realizacion, la sustancia cromatografica puede ser gel de sflice. De acuerdo con esta realizacion, la fase movil puede ser tolueno: acetonitrilo en una relacion de 7: 1. Alternativamente, de acuerdo con esta realizacion, el tolueno: acetonitrilo puede tener una relacion mayor de 7: 1, o menor de 7: 1. Con la excepcion de valores mutuamente excluyentes, cualquiera de las caracterfsticas alternativas descritas en este parrafo se pueden utilizar juntas.

Formas de Dosificacion

En ciertas realizaciones, las composiciones de la presente invencion (por ejemplo, un compuesto de la formula I en combinacion con decitabina, por ejemplo, ER-876437 en combinacion con decitabina) se puede administrar a un sujeto en necesidad del mismo utilizando las formulaciones y metodos descritos en la Patente Estadounidense No. 7,144,873,

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Patente Estadounidense No. 7,135,464, Patente Estadounidense No. 6,982,253, Patente Estadounidense No. 6,905,669, y Patente Estadounidense No. 6,613,753.

En algunas realizaciones, las composiciones farmaceuticas de los compuestos (o combinaciones) de la invencion pueden estar en forma de dosificacion unitaria adecuada para la administracion mediante inyeccion por via oral, rectal o parenteral. Por ejemplo, en la preparacion de composiciones en forma de dosificacion oral, se puede emplear cualquiera de los medios farmaceuticos habituales , tales como, por ejemplo, agua, glicoles, aceites, alcoholes y similares, como en el caso de preparaciones lfquidas orales tales como suspensiones, jarabes, elixires y soluciones; o portadores solidos tales como almidones, azucares, caolfn, lubricantes, aglutinantes, agentes disgregantes y similares en el caso de polvos, pfldoras, capsulas y comprimidos. Debido a su facilidad de administracion, los comprimidos y capsulas representan la forma unitaria de dosificacion oral mas ventajosa, en cuyo caso se emplean portadores farmaceuticos solidos. Para las composiciones parenterales, los portadores comprenden usualmente agua esteril, por lo menos en gran parte, aunque se pueden incluir otros ingredientes, por ejemplo, que ayudan a la solubilidad. Las soluciones inyectables, por ejemplo, se preparan utilizando un portador que comprende solucion salina, solucion de glucosa o una mezcla de solucion salina y solucion de glucosa. Las suspensiones inyectables tambien se pueden preparar en cuyo caso se pueden emplear portadores lfquidos apropiados, agentes de suspension y similares. En caso de las composiciones adecuadas para administracion percutanea, el portador opcionalmente comprende un agente potenciador de penetracion o un agente humectante adecuado, que se puede combinar con aditivos adecuados de cualquier naturaleza en proporciones menores, cuyos aditivos no provocan un efecto perjudicial significativo a la piel. Los aditivos pueden facilitar la administracion a la piel o pueden ser utiles para la preparacion de composiciones deseadas. Estas composiciones se pueden administrar de diversas maneras, por ejemplo, como un parche transdermico, como uncion dorsal puntual, o como un unguento.

Es especialmente ventajoso formular composiciones farmaceuticas descritas aquf en forma unitaria de dosificacion para facilidad de administracion y uniformidad de dosificacion. La forma de dosificacion unitaria, como se utiliza aquf, se refiere a unidades ffsicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de ingrediente activo calculada para producir el efecto terapeutico deseado en asociacion con el portador farmaceutico requerido. Ejemplos de dichas formas unitarias de dosificacion son comprimidos (que incluyen comprimidos ranurados o recubiertos), capsulas, pfldoras, paquetes de polvo, obleas, soluciones o suspensiones inyectables, cucharaditas, cucharadas y similares, y multiplos segregados de los mismos.

En general, se contempla que una cantidad terapeuticamente efectiva de un primer o un segundo compuesto serfa de 0.0001 mg/kg a 0.001 mg/kg; 0.001 mg/kg a 10 mg/kg de peso o de 0.02 mg/kg a 5 mg/kg de peso corporal. En algunas realizaciones, una cantidad terapeuticamente efectiva de un primer o un segundo compuesto es desde 0.007 mg hasta 0.07 mg, 0.07 mg a 700 mg, o desde 1.4 mg hasta 350 mg. Un metodo de tratamiento profilactico o curativo tambien puede incluir la administracion de la composicion en un regimen de entre uno y cinco tomas al dfa.

En algunas realizaciones, una cantidad terapeuticamente efectiva de un primer compuesto o un segundo compuesto incluye, pero no se limita a, la cantidad de menos de 0.01 mg/dosis, o menos de 0.5 mg/dosis, o menos de 1 mg/dosis, o menos de 2 mg/dosis, o menos de 5 mg/dosis, o menos de 10 mg/dosis, o menos de 20 mg/dosis, o menos de 25 mg/dosis, o menos de 50 mg/dosis, o menos de 100 mg/dosis, o menos de 500 mg/dosis. El numero de veces en un dfa en el que un primero o segundo compuesto se administra a un sujeto se puede determinar con base en diversos criterios utilizados comunmente en la tecnica o aquellos descritos aquf.

Tambien pueden estar presentes agentes humectantes, emulsionantes y lubricantes, tales como lauril sulfato de sodio y estearato de magnesio, asf como agentes colorantes, agentes de liberacion, agentes de recubrimiento, edulcorantes, aromatizantes y agentes perfumantes, conservantes y antioxidantes en las composiciones.

Ejemplos de antioxidantes farmaceuticamente aceptables incluyen: antioxidantes solubles en agua, tales como acido ascorbico, clorhidrato de cistefna, bisulfato de sodio, metabisulfito de sodio, sulfito de sodio y similares; antioxidantes solubles en aceite, tales como palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado (BHA), hidroxitolueno butilado (BHT), lecitina, galato de propilo, a-tocoferol, y similares; y agentes quelantes de metales, tales como acido cftrico, acido etilendiaminotetraacetico (EDTA), sorbitol, acido tartarico, acido fosforico, y similares.

Las formulaciones de la presente invencion incluyen aquellas adecuadas para administracion oral, nasal, topica, bucal, sublingual, rectal, vaginal o parenteral. Las formulaciones se pueden presentar convenientemente en forma de dosificacion unitaria y se pueden preparar mediante cualesquier metodos bien conocidos en la tecnica de farmacia. La cantidad de ingrediente activo que se puede combinar con un material portador para producir una sola forma de dosificacion generalmente sera aquella cantidad de la composicion que produce un efecto terapeutico. Generalmente, de un cien por ciento, esta cantidad variara desde aproximadamente 1 por ciento hasta aproximadamente noventa y nueve por ciento de ingrediente activo, preferiblemente desde aproximadamente 5 por ciento hasta aproximadamente 70 por ciento, mas preferiblemente desde aproximadamente 10 por ciento hasta aproximadamente 30 por ciento.

Los metodos para preparar estas formulaciones o composiciones incluyen la etapa de poner en asociacion una composicion de la presente invencion con el portador y, opcionalmente, uno o mas ingredientes accesorios. En general, las formulaciones se preparan al colocar uniforme e fntimamente en asociacion una composicion de la presente

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invencion con portadores lfquidos, o portadores solidos finamente divididos, o ambos, y despues, si es necesario, dar forma al producto.

Las formulaciones de la invencion adecuadas para administracion oral pueden estar en forma de capsulas, sellos, pfldoras, comprimidos, comprimidos oblongos (utilizando una base aromatizada, usualmente sacarosa y acacia o tragacanto), polvos, granulos, o como una solucion o una suspension en un lfquido acuoso o no acuoso, o como una emulsion lfquida aceite en agua o emulsion lfquida agua en aceite, o como un elixir o jarabe, o como pastillas (utilizando una base inerte, tal como gelatina y glicerina, o sacarosa y acacia) o como enjuagues bucales y similares, conteniendo cada uno una cantidad predeterminada de una composicion de la presente invencion como ingrediente activo. Una composicion de la presente invencion tambien se puede administrar como un bolo, electuario o pasta.

En las formas de dosificacion solidas de la invencion para administracion oral (capsulas, comprimidos, pfldoras, grageas, polvos, granulos y similares), el ingrediente activo se mezcla con uno o mas portadores farmaceuticamente aceptables, tales como citrato de sodio o fosfato de dicalcio, o cualquiera de los siguientes: rellenos o extendedores, tales como almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol o acido silfcico; aglutinantes, tales como, por ejemplo, carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarosa o acacia; humectantes, tales como glicerol; agentes disgregantes, tales como agar-agar, carbonato de calcio, almidon de papa o tapioca, acido algfnico, ciertos silicatos y carbonato de sodio; agentes retardando de solucion, tales como parafina; aceleradores de absorcion, tales como compuestos de amonio cuaternario; agentes humectantes, tales como, por ejemplo, alcohol cetflico y monoestearato de glicerol; absorbentes, tales como caolfn y arcilla de bentonita; lubricantes, tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles solidos, lauril sulfato de sodio, y mezclas de los mismos; y agentes colorantes. En el caso de capsulas, comprimidos y pfldoras, las composiciones farmaceuticas tambien pueden comprender agentes de regulacion. Las composiciones solidas de un tipo similar tambien se pueden emplear como rellenos en capsulas de gelatina llenas blandas y duras utilizando excipientes tales como lactosa o azucares de la leche, asf como polietilenglicoles de alto peso molecular y similares.

Un comprimido se puede fabricar mediante compresion o moldeo, opcionalmente con uno o mas ingredientes accesorios. Las tabletas comprimidas se pueden preparar utilizando aglutinante (por ejemplo, gelatina o hidroxipropilmetilcelulosa), lubricante, diluyente inerte, conservante, disgregante (por ejemplo, glicolato de sodio de almidon o carboximetilcelulosa de sodio entrecruzada), agente de superficie activa o de dispersion. Los comprimidos moldeados se pueden hacer al moldear en una maquina adecuada una mezcla de la composicion en polvo humedecida con un diluyente lfquido inerte.

Los comprimidos, y otras formas de dosificacion solidas de las composiciones farmaceuticas de la presente invencion, tales como grageas, capsulas, pfldoras y granulos, opcionalmente se pueden clasificar o preparar con recubrimientos y cubiertas, tales como recubrimientos entericos y otros recubrimientos bien conocidos en la tecnica de formulacion farmaceutica. Tambien se pueden formular de tal manera que proporcionen una liberacion lenta o controlada del ingrediente activo utilizando, por ejemplo, hidroxipropilmetilcelulosa en proporciones variables para proporcionar el perfil de liberacion deseado, otras matrices polimericas, liposomas o microesferas. Se pueden esterilizar mediante, por ejemplo, filtracion a traves de un filtro de retencion de bacterias, o al incorporar agentes esterilizantes en forma de composiciones solidas esteriles que pueden disolverse en agua esteril, o algun otro medio inyectable esteril inmediatamente antes de uso. Estas composiciones tambien pueden contener opcionalmente agentes opacificantes y pueden ser de una composicion tal que liberen el ingrediente activo(s) solo, o preferiblemente, en una cierta porcion del tracto gastrointestinal, opcionalmente, de una manera retardada. Ejemplos de composiciones de embebido que se pueden utilizar incluyen sustancias polimericas y ceras. El ingrediente activo tambien puede estar en forma microencapsulada, si es apropiado, con uno o mas de los excipientes descritos anteriormente.

Las formas de dosificacion lfquidas para la administracion oral de las composiciones de la invencion incluyen emulsiones, microemulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elfxires farmaceuticamente aceptables. Ademas del ingrediente activo, las formas de dosificacion lfquidas pueden contener diluyente inertes utilizados comunmente en la tecnica, tales como, por ejemplo, agua u otros solventes, agentes de solubilizacion y emulsionantes, tales como alcohol etflico, alcohol isopropflico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencflico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, aceites (en particular, semilla de algodon, cacahuete, mafz, germen, oliva, ricino y aceites de sesamo), glicerol, tetrahidrofuril alcohol, polietilenglicoles y esteres de acidos grasos de sorbitan, y mezclas de los mismos.

Ademas de los diluyentes inertes, las composiciones orales pueden tambien incluir adyuvantes tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes y de suspension, edulcorantes, aromatizantes, colorantes, perfumantes y agentes conservantes.

Las suspensiones, ademas de las composiciones activas, pueden contener agentes de suspension como, por ejemplo, alcoholes isoestearflicos etoxilados, polioxietilensorbitol y esteres de sorbitan, celulosa microcristalina, metahidroxido de aluminio, bentonita, agar-agar y tragacanto, y mezclas de los mismos.

Las formulaciones de las composiciones farmaceuticas de la invencion para administracion rectal o vaginal se pueden presentar como un supositorio, que se pueden preparar al mezclar una o mas composiciones de la invencion con uno o mas excipientes o portadores adecuados no irritantes que comprenden, por ejemplo, manteca de cacao, polietilenglicol,

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una cera de supositorio o un salicilato, y que es solido a temperature ambiente, pero lfquido a temperature corporal y, por lo tanto, se fundira en el recto o la cavidad vaginal y liberara la composicion activa.

Las formulaciones de la presente invencion que son adecuadas para la administracion vaginal tambien incluyen pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones de pulverizacion que contienen dichos portadores que son conocidos en la tecnica por ser apropiados.

Las formas de dosificacion para la administracion topica o transdermica de una composicion de esta invencion incluyen polvos, pulverizaciones, pomadas, pastas, cremas, lociones, geles, soluciones, parches e inhalantes. La composicion activa se puede mezclar bajo condiciones esteriles con un portador farmaceuticamente aceptable, y con cualquier conservante, reguladores, o propelentes que se puedan requerir.

Las pomadas, pastas, cremas y geles pueden contener, ademas de una composicion activa de esta invencion, excipientes, tales como grasas animales y vegetales, aceites, ceras, parafinas, almidon, tragacanto, derivados de celulosa, polietilenglicoles, siliconas, bentonitas, acido silfcico, talco y oxido de zinc, o mezclas de los mismos.

Los polvos y pulverizaciones pueden contener, ademas de una composicion de esta invencion, excipientes tales como lactosa, talco, acido silfcico, hidroxido de aluminio, silicatos de calcio y polvo de poliamida, o mezclas de estas sustancias. Las pulverizaciones pueden contener adicionalmente propulsores habituales, tales como clorofluorohidrocarburos e hidrocarburos volatiles no sustituidos, tales como butano y propano.

Los parches transdermicos tienen la ventaja agregada de proporcionar una administracion controlada de una composicion de la presente invencion al cuerpo. Dichas formas de dosificacion se pueden hacer al disolver o dispersar la composicion en el medio apropiado. Tambien se pueden utilizar potenciadores de absorcion para aumentar el flujo de la composicion a traves de la piel. La velocidad de dicho flujo se puede controlar al ya sea proporcionar una membrana controladora de relacion o dispersar la composicion activa en una matriz polimerica o gel.

Tambien se contempla que las formulaciones oftalmicas, pomadas oculares, polvos, soluciones y similares, estan dentro del alcance de esta invencion.

Las composiciones farmaceuticas de esta invencion adecuadas para la administracion parenteral comprenden una o mas composiciones de la invencion en combinacion con una solucion acuosa uno o farmaceuticamente mas aceptable esteril isotonica o soluciones no acuosas, dispersiones, suspensiones o emulsiones, o polvos esteriles que se pueden reconstituir en soluciones o dispersiones esteriles inyectables justo antes de uso, que pueden contener antioxidantes, reguladores, bacteriostaticos, solutos que hacen la formulacion isotonica con la sangre del receptor deseado o agentes de suspension o espesantes.

Ejemplos de portadores acuosos y no acuosos adecuados que se pueden emplear en las composiciones farmaceuticas de la invencion incluyen agua, etanol, polioles (tales como glicerol, propilenglicol, polietilenglicol, y similares), y mezclas adecuadas de los mismos, aceites vegetales, tales como aceite de oliva, y esteres organicos inyectables, tales como oleato de etilo. Se puede mantener fluidez apropiada puede, por ejemplo, mediante el uso de materiales de recubrimiento, tales como lecitina, mediante el mantenimiento del tamano de partfcula requerido en el caso de dispersiones y mediante el uso de surfactantes.

Estas composiciones tambien pueden contener adyuvantes tales como conservantes, agentes humectantes, agentes emulsionantes y agentes dispersantes. La prevencion de la accion de microorganismos se puede asegurar mediante la inclusion de diversos agentes antibacterianos y antifungicos, por ejemplo, parabeno, clorobutanol, fenol, acido sorbico y similares. Tambien puede ser deseable incluir agentes isotonicos, tales como azucares, cloruro de sodio, y similares en las composiciones. Adicionalmente, la absorcion prolongada de la forma farmaceutica inyectable puede ser provocada por la inclusion de agentes que retardan la absorcion tales como monoestearato de aluminio y gelatina.

En algunos casos, con el fin de prolongar el efecto de un farmaco, es deseable ralentizar la absorcion del farmaco desde la inyeccion subcutanea o intramuscular. Esto se puede lograr mediante el uso de una suspension lfquida de material cristalino o amorfo que tiene pobre solubilidad en agua. La velocidad de absorcion del farmaco depende entonces de su velocidad de disolucion que, a su vez, puede depender del tamano del cristal y la forma cristalina. Alternativamente, la absorcion retardada de una forma de farmaco administrada parenteralmente se logra al disolver o suspender el farmaco en un vehfculo oleoso.

Las formas de deposito inyectables se elaboran al formar matrices microencapsuladas las composiciones objeto en polfmeros biodegradables tales como polilactida-poliglicolida. Dependiendo de la relacion de farmaco a polfmero, y la naturaleza del polfmero particular empleado, se puede controlar la velocidad de liberacion del farmaco. Ejemplos de otros polfmeros biodegradables incluyen poli(ortoesteres) y poli(anhfdridos). Las formulaciones inyectables de deposito tambien se preparan al atrapar el farmaco en liposomas o microemulsiones que son compatibles con el tejido corporal.

Las preparaciones de la presente invencion se pueden administrar por via oral, parenteral, topica, o rectal. Por supuesto se dan por formas adecuadas para cada via de administracion. Por ejemplo, se administran en comprimidos o capsulas, mediante inyeccion, inhalacion, locion ocular, unguento, supositorio, etc., administracion por inyeccion, infusion o inhalacion; topico por locion o pomada; y rectal mediante supositorios. Se prefiere la administracion oral o IV.

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Las expresiones “administracion parenteral” y “administrado parenteralmente” como se utiliza aqm significa modos de administracion diferentes de administracion enteral y topica, normalmente por inyeccion, e incluye, sin limitacion, inyeccion intravenosa, intramuscular, intraarterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intracardfaca, intradermica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutanea, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subaracnoidea, intraespinal e intraesternal e infusion.

Las expresiones “administracion sistemica”, “administrado sistemicamente”, “administracion periferica” y “administrado perifericamente” como se utiliza aqm significa la administracion de un compuesto, farmaco u otro material que no sea directamente en el sistema nervioso central, de tal manera que entra en el sistema del paciente y, por tanto, esta sujeto al metabolismo y otros procesos como, por ejemplo, administracion subcutanea.

Estos compuestos se pueden administrar a humanos y otros animales para terapia mediante cualquier ruta de administracion adecuada, que incluye por via oral, nasal, como mediante, por ejemplo, un pulverizador, por via rectal, intravaginal, parenteral, intracisternal y topica, en forma de polvos, unguentos o gotas, que incluyen por via bucal y por via sublingual.

Independientemente de la ruta de administracion seleccionada, los compuestos de la presente invencion, que se pueden utilizar en una forma hidratada adecuada, o las composiciones farmaceuticas de la presente invencion, se formulan en formas de dosificacion farmaceuticamente aceptables mediante metodos convencionales.

Los niveles de dosificacion reales de los ingredientes activos en las composiciones farmaceuticas de esta invencion se pueden variar para obtener una cantidad del ingrediente activo que es efectiva para lograr la respuesta terapeutica deseada para un paciente particular, composicion y modo de administracion, sin ser toxico para el paciente.

El nivel de dosificacion seleccionado dependera de una variedad de factores que incluyen la actividad del compuesto particular de la presente invencion empleado, o el ester, sal o amida del mismo, ruta de administracion, tiempo de administracion, velocidad de excrecion del compuesto particular que se emplea, duracion del tratamiento, otros farmacos, compuestos o materiales utilizados en combinacion con el compuesto particular empleado, edad, sexo, peso, condicion, salud general e historial medico previo del paciente que se esta tratando, y factores bien conocidos en las tecnicas medicas.

Un medico o veterinario puede determinar y prescribir la cantidad efectiva de la composicion farmaceutica requerida. Por ejemplo, el medico o veterinario podna comenzar con dosis de los compuestos de la invencion empleados en la composicion farmaceutica a niveles mas bajos que los requeridos con el fin de lograr el efecto terapeutico deseado y aumentar gradualmente la dosificacion hasta que se consiga el efecto deseado.

En general, una dosis diaria adecuada de un compuesto de la invencion sera la cantidad del compuesto que es la dosis mas baja eficaz para producir un efecto terapeutico. Dicha dosis efectiva dependera generalmente de los factores descritos anteriormente. Generalmente, las dosis intravenosas y subcutaneas de los compuestos de esta invencion para un paciente, cuando se utiliza para los efectos analgesicos indicados, variaran desde aproximadamente 0.0001 hasta aproximadamente 100 mg por kilogramo de peso corporal por dfa, mas preferiblemente desde aproximadamente 0.01 hasta aproximadamente 50 mg por kg por dfa, y aun mas preferiblemente desde aproximadamente 1.0 hasta aproximadamente 100 mg por kg por dfa. Una cantidad efectiva es esa cantidad que trata una infeccion viral.

Si se desea, la dosis diaria efectiva del compuesto activo se puede administrar como dos, tres, cuatro, cinco, seis o mas subdosis administradas por separado a intervalos apropiados durante todo el dfa, opcionalmente, en formas de dosificacion unitarias.

Aunque es posible para un compuesto de la presente invencion ser administrado solo, es preferible administrar el compuesto como una composicion farmaceutica.

Ejemplos

Los metodos generales y experimentales para la preparacion de compuestos de la presente invencion se exponen a continuacion.

Ejemplo I: Smtesis qmmicas

A menos que se indique lo contrario, para los Ejemplos I.B.-I.C., la eliminacion del solvente se llevo a cabo utilizando un evaporador rotatorio Buchi. La cromatograffa analttica se llevo a cabo utilizando una HPLC 1100 serie Hewlett Packard y se llevo a cabo cromatograffa preparativa utilizando ya sea instrumento Biotage SP4 o un instrumento Aguas 4000 utilizando columnaas Chiralpak IA bajo condiciones neutras, a menos que se indique lo contrario. Los espectros de masas se registraron utilizando sistema Aguas Acquity UPLC/MS. Se utilizo equipo similar comparable para los ejemplos restantes.

Los espectros de RMN se registraron utilizando un espectrometro Varian 400 MHz (Ejemplos I.B.-I.C.) o utilizando un espectrometro de Fluka 400 MHz (Ejemplos I.A. y I.D.).

Ejemplo I.A.: ER-876437

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I.A.1Preparacion de ER-878899 (1,3,4,7-tetrahidro-2H-1,3-diazepin-2-ona)

El ER-878899 se preparo como se representa en el Esquema I adelante. Esta preparacion se describio en J. Med. Chem. 1981, 24, 662-666; J. Org. Chem. 1980, 45, 485-489 y Bull. Soc. Chim. Fr. 1973, 198-292.

Esquema I

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Se requiere agitacion mecanica para la formacion de ER-878899 elaborada de acuerdo con el Esquema I. se puede burbujear sulfuro de carbonilo en el matraz de reaccion utilizando una pipeta de vidrio (de diametro grande) y no una aguja, que tiende a taponarse debido al solido formado durante la reaccion. Al final de la reaccion, el material insoluble en el medio de reaccion se filtro, y la ER-878899 puede estar presente en la torta de filtro.

I.A.2.: Preparacion de ER-876437

El ER-878899, preparado de acuerdo con I.A.1., se utilizo en el Esquema II como se describe adelante.

Esquema II

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1-(3,3-Difluoro-4-benzoil-5-benzoximetil-tetrahidro-furan-2-il)-1,3,4,7-tetrahidro-[1,3]diazepin-2-ona (ER- 879381). El mesilato disponible comercialmente ER-878898 mostrado anteriormente en el Esquema II (3.8 g, 8.3 mmol) y la urea ER-878899 (900 mg, 8.0 mmol) se agregan a dimetilacetamida (DMA) (400 ml). Luego de calentamiento (170°C), se solubilizan con componentes de reaccion. La solucion se calento durante la noche (15 h) bajo una atmosfera de nitrogeno.

La DMA luego se elimina en vacfo. El residuo se resuspendio en EtOAc (150 ml) y luego se lavo con agua (2 x 75 ml). Las capas organicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron, y concentraron en vacfo. El material se cromatografio sobre SiO2 y se eluyo con 50% de EtOAc/hexanos. El material obtenido despues de cromatograffa fue los anomeros a/p no resueltos. Los anomeros luego se separaron utilizando HPLC preparativa de fase normal (50% de EtOAc/hexanos isocratico, 10 ml/min, Rt = 25.7 min.); columna: phenomenex luna 10p de silice 100A, 250 x 21.20 mm; detector de fndice refractor. El ammero p ER-879381 se afslo en >90% de pureza (10% de a anomero, Rt. 24 min). 1H RMN (CDCla) 6 8.05 (m, 4H), 7.59 (m, 2H), 7.43 (m, 4H), 5.99 (m, 1H), 5.72 (m, 2H), 5.54 (m, 1H), 4.77 (dd, J = 12.1, 3.4 Hz, 1H), 4.65 (br s, 1H), 4.56 (dd, J = 12.4, 4.0 Hz, 1H), 4.38 (m, 1H), 3.80 (m, 4H).

1-(3,3-Difluoro-4-hidroxi-5-hidroximetil-tetrahidro-furan-2-il)-1,3,4,7-tetrahidro-[1,3]diazepin-2-ona (ER- 876437). ER- 879381 se disolvio en NH3 (7M) en MeOH (40 ml). La solucion agitada durante la noche. El solvente se elimino y el residuo se purifico mediante RP HPLC (10% de acetonitrilo/H2O, flujo 10 ml/min, Rt = 23 minutos); columna: phenomenex luna 5 p C18(2) 100A, 250 x 21.2 mm; detector de fndice refractor. El compuesto deseado ER-876437 se obtuvo en 1.5% (62 mg) rendimiento total. 1H RMN (D2O 6 5.86 (m, 2H), 5.69 (dd, J = 14.3 Hz, 6.2 Hz, 1H), 4.14 (m, 1H), 3. 86 (m 1H), 3.74 (m, 6H). 13C NMR (D2O) 6 164.5, 127.3, 126.2, 122.1 (dd, J = 252, 261 Hz, 1C), 85.9 (dd, J = 41, 22 Hz, 1C), 77.4 (d, J = 8 Hz, 1C), 69.5 (dd, J = 22 Hz, 19 Hz, 1C), 58.9, 41.0, 40.7.

Los componentes de carbono, hidrogeno y nitrogeno de la formula molecular (C10H14N2O4F2 + 0.5 H2O) se calculo para ser C, 43. 96; H, 5.53; y N, 10.25. El analisis elemental revelo que este material contiene C, 43.99; H, 5.36; y N, 10.21.

Se pueden obtener de mejoras marginales al rendimiento de la reaccion de acompanamiento de ER-878899 al mesilato al cambiar el solvente de reaccion. Cuando se utiliza diglima como el solvente, se puede observar una mejora del 15% de rendimiento.

Ejemplo I.B.: ER-876437

Preparacion de ER-878899 (1,3,4,7-tetrahidro-2H-1,3-diazepin-2-ona)

El ER-878705 (mostrado adelante) se preparo siguiendo el procedimiento descrito en Feigenbaum, A. and Lehn, J.M., Bull. Soc. Chim. Fr., 1973, 198-202 y Liu, P.S., Marquez, V.E., Driscoll, J.S. and Fuller, R.W., J.Med. Chem., 1981, 24, 5 662-666.

Esquema III

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A una suspension blanca de ER-878705 (79.7 g, 230 mmol) en etanol (470 mL) en un matraz de 2 L de dos cuellos equipado con agitador mecanico se agrego hidrato de hidrazina (23.5 mL, 483 mmol) a temperatura ambiente. La 10 suspension blanca resultante se calento a 50°C durante 30 minutos para obtener una solucion clara de color amarillo claro. Cuando empezo a aparecer el precipitado blanco, la mezcla se calento a 60°C durante 3 horas y la agitacion se hace muy diffcil. Despues de que se dejo enfriar la mezcla temperatura ambiente, se agrego solucion de cloruro de hidrogeno concentrada (40.3 mL, 483 mmol) y la mezcla se agito facilmente. Despues de agitacion durante 30 minutos, la mezcla se filtro y se lavo con 5 x 200 mL de agua. El filtrado se concentro hasta un solido seco. El solido seco se 15 suspendio en 200 mL de etanol, y se agito durante 1 hora para hacer una buena suspension. La suspension se filtro y

se lavo con 3 x 100 mL de etanol puro. La torta (granulos blancos similares a cristal) se recolecto y se seco para dar

34.6 (94%) g de sal de di-clorhidrato de 1,4-diamino-2-buteno. La 1H RMN mostro que el producto contenfa ftalhidrazida como una impureza menor en la relacion de 5:1. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 6 5.85 (ddd, J=1.6, 1.8 y 4.4 Hz, 2H), 3.69 (d, J=4.4, 4H).

20 Esquema IV

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2 HCI

NaOH

CM>S

Etanol

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ER-070699

A una suspension de sal de diclorhidrato de 1,4-diamino-2-buteno (22.7 g, 143 mmol) en etanol (1.2 L) en un matraz de

2 L de dos cuellos se agrego solucion de NaOH 1.0 M (330 mL, 330 mmol). Luego de la adicion de NaOH a la suspension, la mezcla se vuelve una solucion transparente e incolora. La solucion se calento a 70°C y se burbujeo

25 sulfuro de carbonilo a traves de la mezcla caliente. Despues de esto, la mezcla se calento a 80°C a reflujo. Despues de

3 horas, sw detiene el burbujeo y la mezcla se calento 1.5 horas adicionales, se enfrio a temperatura ambiente y se neutralizo mediante adicion de Hcl 1.0 N (50 mmol). La mezcla se concentro a un solido gris seco. El solido se suspendio en 1 L de metanol, se agito durante 2 horas, se filtro y se lavo con metanol. El filtrado se concentro a aproximadamente 200 mL de volumen, se enfrio a 0°C, se filtro y se lavo con metanol frfo. El solido se recolecto y se

30 seco para dar 5.05 g de producto. El 1H RMN mostro que contenfa muy poca impureza de ftalhidazida en la relacion de 13:1. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) 6 5.91 (ddd, J=0.8, 1.2 y 1.6 Hz, 2H), 3.67 (d, J=4.0, 4H). El licor madre se concentro a aproximadamente 30 mL, se enfrio a -10°C, se filtro y se lavo con MeOH frfo (-10°C). El solido se recolecto y se seco para dar 7.10 g de producto con menor contaminacion de ftalhidrazida en la relacion de 4:1 segun se determina por 1H RMN.

35 I.B.2.: Preparacion de ER-878617

Esquema V

5

10

15

20

25

imagen18

Como se represento en el Esquema V anterior, una solucion de ER-878898 (1.33 g, 2.92 mmol, disponible de Waterstone o Depew Fine Chemical) y ER-878899 (200.0 mg, 1.78 mmol) en DMA seco (30 mL) se calento y se agito a 180-190°C (temperatura de bano de aceite) cuando el DMA se destilo lentamente. 1,3,4,7-tetrahidro-2H-1,3-diazepin-2- ona azeotropado adicional (800.0 mg, 7.13 mmol) en DMA (50 mL) se agrego con bomba de jeringa mas de 2 horas durante esta destilacion de DMA. Despues de adicion de todo el material, la reaccion se mantuvo a reflujo durante 30 minutos y se dejo enfriar. La mezcla de reaccion se concentro en vacfo y el residuo se purifico con cromatograffa para dar ER-878617 (624.8 mg, 45%) como una mezcla de dos epfmeros.

I.B.3.: Preparacion de ER-876437

Esquema VI

imagen19

Como se represento en el Esquema VI anterior, una solucion de ER-878617 (624.8 mg, 1.32 mmol) en amoniaco 7 M/metanol (53 mL) se agito a temperatura ambiente durante 18 horas. La mezcla de reaccion se concentro en vacfo y el residuo se purifico con TLC preparativa para dar un producto crudo (274.2 mg, 78%) como la mezcla de dos epfmeros. La mezcla de dos epfmeros se separo sobre cromatograffa preparativa con columna Chiralpak IA (Daicel Chemical Industries, Ltd., Tokio Japon) para dar ER-876437 (160.2 mg).

Ejemplo I.C.: ER-876437

I.C.1.: Preparacion de ER-879381

El ER-879381 se elaboro de acuerdo con el Esquema VII como se muestra adelante. ER-878899 se preparo como se describio anteriormente en el Ejemplo I.B.1.

Esquema VII

imagen20

Como se represento en el Esquema VII anterior, una solucion de ER-878898 (8.0 g, 18 mmol, disponible de Waterstone o Depew Fine Chemical) y eR-878899 (1.2 g, 10.7 mmol) en DMA seco (100 mL) se calento y se agito a 200-220°C (temperatura de bano de aceite) cuando el DMA se destilo lentamente Se agrego. 1,3,4,7-tetrahidro-2H-1,3-diazepin-2- ona azeotropado adicional (4.8 g, 42.9 mmol) en DMA (350 mL) a traves de una bomba de jeringa mas de 2 horas durante esta destilacion de DMA. Despues de adicion de todo el material, la reaccion se mantuvo a reflujo durante 30

5

10

15

20

25

30

minutos y se dejo enfriar. La mezcla de reaccion se concentro en vacfo y el residuo se combino con el residuo desde un experimento separado conducido sobre la misma escala utilizando el mismo procedimiento. El residuo combinado se purifico con cromatograffa en gel de sflice (fase movil: 50-100% AcOEt/Heptano) para dar una mezcla de dos epfmeros (9.38 g). La mezcla de dos epfmeros se separo adicionalmente con cromatograffa en gel de sflice (fase movil: tolueno:acetonitrilo = 7:1) para producir ER-879381 (3.94 g).

I.C.2.: Preparacion de ER-876437

Se preparo ER-876437 como se muestra adelante en el Esquema VIII.

Esquema VIII

imagen21

Como se represento en el Esquema VIII anterior, una solucion de ER-879381 (3.8 g, 8.0 mmol) en amoniaco 7 M/metanol (100 mL) se agito a temperatura ambiente durante 17 horas. La mezcla de reaccion se concentro en vacfo y el residuo se purifico con cromatograffa (fase movil: 50-100% AcOEt/Heptano) para dar ER-876437 (1.89 g, rendimiento 89%).

Ejemplo I.D.: ER-878895 I.D.1.: Preparacion de ER-878890 Esquema IX

imagen22

Como se represento en el Esquema IX anterior, una solucion de ER-878889 (preparada de acuerdo con Stimac, A. and Kobe, J., Carbohydr. Res., 2000, 329, 317-324, 4.3 g, 11.7 mmol) y di-tert-butildicarbonato (5.4 g, 24.6 mmol) en THF (125 mL) se agito en la presencia de catalizador de Lindlar (1 g) a 30 psi durante l fin de semana. La suspension de reaccion que contenfa el producto hidrogenado se filtro a traves de Celita y se concentro. El residuo se purifico con cromatograffa radial para dar ER-878890 (2.8 g). El ER-878890 se purifico adicionalmente mediante recritalizacion a partir de AcOEt/Hexano para dar agujas blancas con punto de fusion de 106-108°C.

I.D.2.: Preparacion de ER-878891

Esquema X

imagen23

Como se represento en el Esquema X anterior, a una solucion agitada de ER-878890 (1.6 g, 3.48 mmol) en THF/DMF (100 mL/30 mL) se agrego 0.5 M hexametidisilazida de potasio (KHMDS) en tolueno (8.5 mL, 4.25 mmol) en forma de gotas a aproximadamente -78°C (hielo seco/bano de acetona), seguido por adicion de bromuro de alilo (0.4 mL, 4.6 mmol). La mezcla de reaccion se agito durante la noche a medida que el hielo seco-bano de acetona se calento lentamente a temperatura ambiente (~25°C). La reaccion se apago con cloruro de amonio acuoso saturado y se extrajo con AcOEt. La fase organica se lavo con solucion salina y se seco sobre sulfato de magnesio anhidro. La solucion seca se filtro y se evaporo. El residuo se purifico con cromatograffa radial para dar ER-878891 (0.64 g).

5

10

15

20

25

30

I.D.3.: Preparacion de ER-878892 Esquema XI

imagen24

Como se represento en el Esquema XI anterior, a una solucion agitada de ER-878891 (0.1 g, 0.2 mmol) en diclorometane (DCM) (1 mL) bajo nitrogeno se agrego acido trifluoroacetico (TFA) (0.5 mL) a temperature ambiente. El ER-878891 se desaparecio en 1 hora y el solvente y TFA se evaporaron en vacfo. El aceite resultante se volcio a disolver en DCM (2 mL) se agrego isocianato de alilo (0.2 mL, 2.2 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reaccion se evaporo despues de 1 hora y se purifico mediante cromatograffa radial para dar ER-878892 (50% de rendimiento) como una mezcla de dos anomeros (beta/alfa —3/1).

I.D.4.: Preparacion de ER-878893

Esquema XII

imagen25

Como se represento en el Esquema XII anterior, a una solucion agitada de ER-878892 (0.27 g, 0.56 mmol) en THF (10 mL) bajo nitrogeno se agrego KHMDS 0.5 M en tolueno (1.5 mL, 0.75 mmol) a aproximadamente -78°C (hielo seco/bano de acetona), seguido por adicion de cloruro de benzoilo (0.6 mL, 5.1 mmol). La mezcla de reaccion se agito durante la noche y se dejo calentar lentamente a temperatura ambiente. La reaccion se apago con cloruro de amonio acuoso saturado y se extrajo con AcOEt. La fase organica se lavo con solucion salina, se seco sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtro y se evaporo. El residuo se purifico con cromatograffa radial para dar ER-878893 (0.13 g, 50% de rendimiento) como una mezcla de anomeros.

I.D.5.: Preparacion de ER-878894

Esquema XIII

imagen26

Como se represento en el Esquema XIII anterior, a una solucion desgasificada de ER-878893 (0.13 g, 0.22 mmol) en DCM (120 mL) se agrego catalizado de Grubb de 2a generacion (—30 mg, disponible de Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) bajo nitrogeno. Este catalizador proporciono la metatesis de cierre del anillo (RCM). La mezcla de reaccion se calento a 40°C durante 1 hora seguida por evaporacion del solvente. Al residuo disuelto en AcOEt (20 mL) se agrego depurador de Siliciclo Si-triamina Pd (Silicycle Inc.) y se agito vigorosamente durante 1 hora. La mezcla de reaccion se filtro y se concentro. El aceite viscoso amarillo palido resultante se purifico con cromatograffa radial y se determino que el compuesto menos polar es ER- 878894 (40 mg) que se cristalizo en reposo.

I.D.6.: Preparacion de ER-878895

imagen27

Como se represento en el Esquema XIV anterior, una solucion de ER-878894 (65 mg, 0.14 mmol) en NaOH 0.1 N /MeOH (3 mL) se agito durante 30 minutos hasta que todos los puntos activos de UV desaparecieron mediante. El 5 solvente se elimino en vacfo y el solido crudo se disolvio en agua (2 mL). La solucion se neutralizo con HCl y el solvente se elimino en vacfo. El residuo se purifico mediante HPLC preparativa de fase inversa para proporcionar ER-878895 (12 mg, 35%).

La Tabla 1 proporciona datos analfticos para los compuestos descritos aquf.

Tabla 1. Datos analfticos

Estructura

ER-# Datos analfticos

o O 620 Hp I BzO p F

878617 libre de sal 1H RMN: (400 MHz, CDCh) 6 8.05 (m, 4H), 7.55 (m, 2H), 7.45 (m, 4H), 6.22 (t, J=10.4 Hz), 5.95 (dd, J=12.8, 10.6 Hz), 5.88-5.66 (m), 5.5 (m), 4.76(dd, J=12.4, 3.6 Hz), 4.65 (m), 4.55 (m), 4.55 (dd, J=12, 4.4 Hz), 4.36 (m), 3.94-3.64 (m) MS (ESI) m/z 473.31 (M+H)+

BzO p

879381 libre de sal 1H RMN: (400 MHz, CDCla) 6 8.05 (m, 4H), 7.64 (m, 2H), 7.48 (m, 4H), 6.04 (dd, J=12.0, 10.4 Hz, 1H), 5.76 (m, 2H), 5.58 (ddd, J=12.0, 6.4, 5.2 Hz, 1H), 4.81(dd, J=12.4, 3.6 Hz, 1H), 4.61 (dd, J=12.8, 4.4 Hz, 1H), 4.58 (amplio, parcialmente superpuesto con 4.61 picos, 1H), 4.43 (dt, J=6.4, 3.4 Hz, 1H), 3.99-3.71 (m, 4H)

0 O, H0 HO p h

876437 libre de sal 1H RMN: (400 MHz, CD3OD) 6 5.83 (m, 2H), 5.69 (dd, J=21.2, 8.0 Hz, 1H), 4.05 (ddd, J=14.0, 11.2, 8.4 Hz, 1H), 3.86-3.58 (m, 7H) MS (ESI) m/z 265.17 (M+H)+

bzo'^vVNHBoc BzO'' F

878890 libre de sal 'H RMN: (400 MHz, CDCla) 6 8.11-8.00 (m, 4H), 7.66-7.53 (m, 2H), 7.52-7.40 (m, 4H), 5.86 (dd, J=16, 10 Hz, 1H), 5.57 (d, J=18 Hz, 1H), 5.41 (s, 1H), 5.30 (s, 1H), 5.23 (d, J=50 Hz, 1H), 4.60 (s, 2H), 1.47 (s, 9H)

Boc BzO'' F

878891 libre de sal 1H RMN: (400 MHz, CDCl3) 6 8.08 (d, J=7.6 Hz, 2H), 8.05 (d, J=8.0 Hz, 2H), 7.62 (t, J=7.6Hz, 1H), 7.56 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.46 (m, 4H), 6.0 (dd, J=18.4, 4.4 Hz, 1H), 5.88 (m, 1H), 5.71 (dt, J=19.6, 3.2 Hz, 1H), 5.48 (d, J=52Hz, 1H), 5.18 (d, J=17.2 Hz, 1H), 5.14 (d, J=10.8 Hz, 1H), 4.61 (amplio s, 3H), 3.93 (m, 2H), 1.47 (s, 9H)

0 bzo^N^V'n yN

878892 libre de sal 1H RMN: (400 MHz, CDCh) 6 8.11-8.00 (m, 4H), 7.66-7.53 (m, 2H), 7.52-7.40 (m, 4H), 6.35 (dd, J=26, 3 Hz, 1H), 6.06 (dd, J=18, 5 Hz, 1H), 6.00-5.79 (m, 3H), 5.67 (dt, J=19, 4 Hz, 1H), 5.58-5.50 (m, 1H), 5.44-4.95 (m, 8H), 4.74-4.53 (m, 4H), 4.01-3.97 (m, 2H), 3.91-3.83 (m, 3H), 1.71 (s, 1H)

Estructura

ER-# Datos analfticos

0 BzO' F

878894 libre de sal 'H RMN: (400 MHz, CDCl3) 6 8.12 (dd, J=8.2, 1.2 Hz, 2H), 7.98 (dd, J=8.2, 1.2 Hz, 2H), 7.6 (m, 5H), 7.45, (m, 6H), 5.93 (dd, J=24.4, 3 Hz, 1H), 5.79 (s, 2H), 5.59 (dd, J=18.6, 3.2 Hz, 1H), 5.14 (dd, J=50.8, 2.8 Hz, 1H), 4.85 (d, J=18.8 Hz, 1H), 4.81 (dd, J=12, 3.8 Hz, 1H), 4.72 (dd. J=12, 4.8 Hz, 1H), 4.35 (m, 2H), 4.17 (m, 2H) MS (ESI) m/z 559.2 (M+H)+

Q O ho'YYntnh HO'' F

878895 libre de sal 1H RMN: (400 MHz, D2O) 6 5.8 (m, 2H), 5.7 (dd, J=18.4, 5.2 Hz, 1H), 4.93 (ddd, J=53, 5.2, 3.8 Hz, 1H), 4.19 (ddd, J=22.8, 6.4, 3.6 Hz, 1H), 3.84-3.61 (m, 7H) MS (ESI) m/z 247.11 (M+H)+

Ejemplo II: Ensayo para inhibicion de Citidina Deaminasa (CDA)

El ensayo enzimatico de citidina deaminasa (CDA) descrito por Cacciamani, T. et al., Arch. Biochem. Biophys. 1991, 290, 285-92; Cohen R. et al., J. Biol. Chem., 1971, 246, 7566-8; y Vincenzetti S. et al., Protein Expr. Purif. 1996, 8, 2475 53 se utilizo para determinar la actividad inhibidora (IC50) de los compuestos descritos aquf. Utilizando este ensayo, se

determino el IC50 de estos compuestos al seguir la reduccion del sustrato (citidina) provocada por la reaccion de desaminacion catalizada por CDA. Se monitorizo la desaparicion del sustrato (citidina) con el tiempo mediante la absorbancia en 280 nm de la reaccion.

La reaccion de ensayo se llevo a cabo en regulador de fosfato de potasio (pH 7.4, 20 mM, que contenfa DTT 1 mM) en 10 un volumen total de 100 pl en un formato de placa de 96 pozos. La mezcla de reaccion final contema citidina (50 pM) y CDA recombinante humano purificado. La enzima purificada se diluyo con el fin de producir un cambio de absorbancia de aproximadamente 2 unidades de miliabsorbancia/minuto. Las mediciones de valor inicial de cambio de absorbancia con el tiempo se hicieron antes de adicion de sustrato (citidina). Despues de la adicion de sustrato, el cambio de absorbancia se leyo cada minuto durante 30 minutos con un FlexStation® 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA). Para 15 cada compuesto, se utilizaron 8 concentraciones diferentes (10 pM, 3.33 pM, 1.11 pM, 0.37 pM, 0.12 pM, 0.041 pM, y 0.014 pM, y 0.0047 pM) para inhibir la reaccion. Las pendientes del cambio de absorbancia con el tiempo en cada reaccion se calcularon y utilizaron por el software SoftMax® Pro 5 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) para obtener valores de IC50.

Tabla 2. Potencia inhibidora de los compuestos de prueba

Estructura

Numero ER IC50 (nM)

0 ^ ho^vy" H(5 F F

876437 237 ± 86 n=4

0 0 ho^yVntnh K 0 h5 oh

876400 101 ±53 n=4

Estructura

Numero ER IC50 (nM)

o D Ho^yNTNH h<3 f f

878519 1616 ± 643 n=3

0 n H 6 *=

878895 140 n=1

0 ^ «^nynh H<j 'tH

876404 113 n=2

Ejemplo III: Farmacocinetica de ER-876437 y ER-876400 en ratones despues de administraciones IV y PO

Se administraron ambos ER-876437 y ER-876400 a ratones a 10 mg/kg por via intravenosa (IV) a traves de la vena de la cola, y en 10 mg/kg per os (PO, o, por via oral) a traves de sonda gastrica. Todas las dosis se prepararon en 5 regulador de fosfato salino (PBS) y se administraron en un volumen de 5 ml/kg. Cinco ratones por grupo se utilizaron en estos estudios. Las muestras de sangre se tomaron en serie de la vena de cola de cada raton en puntos de tiempo predeterminados. Las muestras de sangre de todos los ratones en cada grupo se agruparon antes del procesamiento para el plasma. Las muestras de sangre agrupadas se centrifugaron dentro de los 30 - 60 minutos despues del retiro y el plasma se cosecho y se congelo para el ensayo. Despues de la preparacion y la extraccion las muestras se 10 ensayaron por LC/MS/mS. Las concentraciones observadas (ng/mL), se reportan en la Tabla 3 adelante.

Tabla 3. Concentraciones en plasma (ng/mL) de ER-876437 y ER-876400 en ratones despues de administraciones IV y

PO

Tiempo (hr)

ER-876437 ER-876400

IV

PO IV PO

0.167

11838 8597 19860 7101

0.5

7686 3720 10166 7859

1

3469 4179 4206 4665

2

1450 1145 1753 a 1750

4

214 146 495 a 320

6

184 36 118 87

8

64 103 59 44

24

20 39 93 264

aPor encima del lfmite de cuantificacion

Los parametros farmacocineticos (PK) de ER-876437 y ER-876400 se calcularon mediante analisis no compartimental utilizando Watson® v. 7.2. Los parametros PK resultantes se presentan en las Tablas 4 y 5 adelante:

Tabla 4. Parametros PK de ER-876437 y ER-876400 en ratones despues de administracion IV

Parametro

Unidades ER-876437 ER-876400

Dosis

mg/kg 10.0 10.0

t1/2

hr 6.1 16.1

AUCo-t

ng^hr/mL 12893 18838

AUCq.m

ng^hr/mL 13071 20999

AUCq.JD

ng^hr/mL/D 1307 2100

AUCExtrap

% 1.4 10.3

CL

L/kg/hr 0.77 0.48

Vss

L/kg 1.64 3.2

5 Tabla 5. Parametros PK de ER-876437 y ER-876400 en ratones despues de administracion PO

Parametro

Unidades ER-876437 ER-876400

Dosis

mg/kg 10.0 10.0

Cmax

ng/mL 8597 7859

tmax

hr 0.167 0.5

AUCo-t

ng^hr/mL 8579 13160

AUCq.m

ng^hr/mL 9499 NC

AUCq.JD

ng^hr/mL/D 950 NC

AUCExtrap

% 9.7 NC

t1/2

hr 16.3 NC

F

% 66.5 a 69.9 a

a Calculado con base en AUCo-t NC = No calculado debido a datos insuficientes

Los resultados del presente estudio sugieren que los perfiles de PK de ER-876437 y ER-876400 en ratones machos BALB-C son similares. Despues de 10 mg/kg IV de PK de ambos ER-876437 y ER-876400 se puede caracterizar por la distribucion moderada (Vss = 1.64 y 3.20 L/kg, respectivamente), depuracion lenta (CL = 0.77 y 0.48 L/hr/kg, 10 respectivamente), y eliminacion lenta (ti/2 = 6.1 y 16.1 h, respectivamente).

Las exposiciones generales (AUCq.~) despues de administracion IV de ER-876437 y ER-876400 a ratones eran 13071 y 20999 ng^h/ml, respectivamente, que resulto en exposiciones normalizadas de dosis (AUCq.~/D) de respectivamente 1307 y 2100 mL/g. Despues de 10 mg/kg PO, la Cmax de ER-876437 y ER-876400 fue, respectivamente, 8597 y 7859 ng/mL, y se observaron a un tmax de respectivamente, 1.0 y 2.0 hr. El AUC0-t despues de administracion PO de 10 mg/kg 15 fue 8579 y 13160 ng^h/ml para ER-876437 y ER-876400, respectivamente. El aUCq.~ de ER-876437 fue 9499 ng^h/ml y el t1/2 fue de 16.3 h. Debido a datos insuficientes en la fase de eliminacion terminal de estos parametros no se pudieron determinar para ER-876400. Adicionalmente, el t1/2 para ER-876437 despues de administracion PO fue aproximadamente 2.5 veces mayor que despues de administracion IV.

Las biodisponibilidades (F%) de ER-876437 y ER-876400 fueron similares: 66.5 y 69.9%, respectivamente.

5

10

15

20

25

30

35

En conclusion, los perfiles de PK de ER-876437 y ER-876400 en ratones machos BALB-C despues de una sola dosis IV o PO de 10 mg/kg son similares. Se observa, sin embargo, que, bajo condiciones normales de alimentacion, los ratones tienen un alto pH gastrico de alrededor de 5. Vease Simpson, R. J. et al. “Forms of soluble iron in mouse stomach and duodenal lumen: significance for mucosal update”, British Journal of Nutrition. 63:79-89 (1990), que se incorpora por referencia en su totalidad por la presente.

Ejemplo IV: Estabilidad de ER-876400 y ER-876437 en fluido gastrico simulado a 37°C

Este ejemplo describe las estabilidades de ER-876400 y ER-876437 en fluido gastrico simulado con un pH de 1.45 a temperature ambiente (~25°C) y a 37°C. Para humanos, bajo condiciones de ayuno, se ha reportado que el pH gastrico varfa desde 1.4 hasta 2.1. Vease Kararli, T.T. Comparison of the GI anatomy, physiology, and biochemistry of humans and commonly used laboratory animals. BioPharm & DrugDispos. 16:351-380, 1995, que por la presente se incorpora por referencia en su totalidad. Se ha reportado que el pH gastrico en monos en ayunas tiene un rango similar de 1-3. Vease Kondo, H. et al. Characteristics of the gastric pH profiles of unfed and fed cynomolgus monkeys as pharmaceutical product development subjects. BioPharm & DrugDispos. 24:45-51, 2003, que por la presente se incorpora por referencia en su totalidad.

Materiales: el fluido gastrico simulado (SGF) se preparo al mezclar lo siguiente en 100 mL agua de grado HPLC (o purificada): 200 mg de cloruro de sodio y 1.87 mL de una solucion madre de HCl al 37.52%.

Preparacion de muestra: Las muestras iniciales (t = 0) se prepararon al diluir respectivamente ER-876400 o ER-876437 en agua. Todas las otras muestras se prepararon al disolver ~2 mg de analito (ya sea ER-876400 o ER-876437) en ~1.0 ml de fluido gastrico simulado a 37°C.

Los analisis de HPLC se realizaron utilizando un sistema de suministro de solvente Waters UPLC con deteccion CAD Corona. La columna de HPLC (Waters Atlantis HHS T3 2.1 x 100 mm, 1.8 um) se mantuvo a 40°C y equilibrada previamente con una solucion que contenfa agua al 98% y acetonitrilo al 2%. La temperatura controlada del automuestreador se mantuvo a 37°C. La velocidad de flujo para la fase movil de agua/MeCN fue 0.65 mL/min, con un gradiente despues de la inyeccion de muestra (5 pL) como sigue:

Gradiente: Tiempo (min) % de Agua % de MeCN

98 2

gradiente lineal de (Agua al 98%/MeCN al 2%) a (Agua al 60 % /MeCN al 40 %)

60 40

0 -2 2 -2.5 2.5 -3.5

Por lo tanto, en estos estudios de degradacion HPLC-SGF, una alfcuota de 5 pL se tomo de la solucion de SGF/analito en diversos momentos y se cargo en la columna de HPLC con las caracterfsticas y condiciones descritas anteriormente. La fase movil de agua/MeCN se aplico a la columna con la velocidad de flujo descrita anteriormente y se recogieron el gradiente y los cromatogramas de HPLC. Despues de 3.5 minutos, la columna se reequilibro con agua al 98%/MeCN al 2% durante 1.5 minutos.

Los cromatogramas de HPLC de cualquiera de ER-876400 o ER-876437 en agua proporcionaron identificacion del pico atribuido a ER-876400 o ER-876437. Trazas de HPLC de SGF sin ningun ER-876400 o ER-876437 proporcionaron cromatogramas en blanco (o de fondo) que se podrfan utilizar para identificar aquellos picos relacionados con el SGF y distinguir esos picos de los picos de los analitos. Los cromatogramas se recolectaron en los momentos identificados en las Tablas 6 y 7, y el porcentaje correspondiente de la muestra atribuido respectivamente a cualquiera de ER-876400 o ER-876437 se proporcionan para cada tiempo de muestreo. Estos resultados tambien se representan como diagramas de las Figuras 1 y 2.

Tabla 6. Estabilidad de ER-876400 en SGF a 37°C.

, ...... x , . % de ER-876400 (tiempo de retencion

Tiempo de analisis (horas: minutos: segundos) |cq. ^ ^

0:00:00

84.04

0:00:30

19.59

0:06:08

17.04

0:11:45

16.72

0:17:23

15.17

0:23:01

14.20

0:28:38

13.23

0:34:16

12.51

0:39:54

14.05

0:45:33

11.42

0:51:10

10.71

0:56:48

8.87

1:02:27

9.14

1:08:07

8.81

1:13:46

7.66

1:19:23

4.05

1:25:01

6.44

1:30:38

5.92

1:36:16

5.72

1:41:53

5.69

1:47:32

4.98

1:53:10

4.51

1:58:49

3.85

2:04:28

3.59

2:21:24

2.82

2:49:37

1.52

3:17:48

0.81

3:23:28

0.62

3:46:00

0.39

3:51:38

0.25

Tabla 7. Estabilidad de ER-876437 en SGF a 37°C

Tiempo de analisis (horas: minutos: segundos)

% de ER -876437 (tiempo de retencion pico: 2.90 min)

0:00:00

92.18

0:00:30

85.88

0:06:08

85.72

0:11:45

86.46

0:17:24

86.38

0:23:02

83.22

0:28:39

83.48

0:34:17

83.80

0:39:54

84.16

0:45:32

82.62

0:51:10

82.41

0:56:47

82.45

1:02:26

82.45

1:08:04

82.55

1:13:41

83.11

1:19:19

81.82

1:24:56

81.24

1:30:33

79.20

1:36:10

79.14

1:41:47

78.47

1:47:24

77.88

1:53:02

78.29

1:58:39

78.56

2:04:16

77.21

2:21:12

76.06

2:26:50

77.34

2:49:21

75.34

3:17:30

72.37

3:51:16

50.13

4:19:26

51.88

4:47:38

48.95

5:21:25

45.19

5:49:35

47.44

6:17:45

44.94

6:51:31

43.29

7:19:40

41.85

7:47:22

41.72

8:21:11

36.89

8:49:19

37.52

9:17:30

36.34

9:51:17

34.61

10:19:29

31.94

10:47:39

32.33

5

10

15

20

25

30

11:15:53

29.85

11:49:44

29.94

12:17:54

27.99

12:46:10

27.39

13:20:01

26.14

Conclusion: en fluido gastrico simulado a 37°C, se encontro que el ER-876400 se degrada en un 50% en menos de 30 segundos, mientras que el ER-876437 tiene una vida media de aproximadamente 4 a 6 horas.

Ejemplo V: Efecto de ER-876437 en decitabina en la supervivencia de modelo de linfoma L1210 de murino

El proposito de este estudio fue determinar si ER-876437 mejora la eficacia oral de decitabina en el modelo de supervivencia L1210 en ratones.

Preparacion de celulas L1210: se prepararon celulas de ascitis L1210 al pasarlas en ratones por lo menos tres veces de la siguiente manera. Cada raton hembra CD2F1 fue inyectada por via intraperitoneal (IP) con aproximadamente 105 celulas de ascitis L1210. Despues de una semana, se sacrifico el raton (asfixia mediante CO2). El raton fue colocado sobre su parte posterior, se limpio su superficie de vientre con toallitas con alcohol, y se hizo una pequena incision en la cavidad peritoneal. 2 ml de hielo frfo BSA al 2.1% enfriada con hielo en solucion salina se inyectaron en la cavidad y luego se retiro el fluido y se transfirio con una jeringa de 3 cc 18G en un tubo esteril limpio y mantener en hielo. El fluido se diluyo 1:10 en BSA al 2.1% en solucion salina y se puede agregar una gota de reactivo lftico Zap globin II (disponible de Beckman Coulter, Inc.) a 1 ml de ascitis diluidas. Las ascitis diluidas (diluidas 1:10 de nuevo) se contaron en un hematocitometro y el numero de celulas por mL se calculo. Alrededor de 105 celulas L1210 se utilizaron para un pasaje posterior para otro pasaje de raton. O, una solucion madre de ascitis L1210 en solucion de BSA se diluyo a 1 x104 celulas/0.1 ml para su uso en ratones de estudio.

Preparacion de los ratones de estudio: 35 ratones hembra CD2F1 de 6-7 semanas de edad se separaron al azar en los 7 grupos identificados en la Tabla 8. Los ratones se prepararon con inyeccion intravenosa (IV) de la ascitis L1210 (preparada como se describio anteriormente) un dfa antes de comenzar la dosificacion. Los ratones se inyectaron con 0.1 ml de solucion de celulas a traves de la vena caudal con una aguja 27G. La inyeccion IV total para todos los ratones tomo aproximadamente 50 minutos.

Los ratones se dosificaron con vehfculo o ER-876437 per os (PO, es decir, por via oral) 30 minutos antes de la dosificacion con sustrato de decitabina. El ER-876437 se preparo a 1 mg/ml en PBS y despues se diluyo a 0.1 mg/ml, y 0.01 mg/ml en PBS para las dosis mas bajas.

La decitabina se preparo en un 1 mg/ml de solucion madre en PBS y diluir adecuadamente para lograr una solucion de dosificacion de 0.01 mg/ml. Se preparo ER-876437 al comienzo de cada dfa de dosificacion y se almaceno a 4°C. La decitabina se preparo fresco dos veces al dfa, justo antes de dosificacion. Todas las soluciones se almacenaron en hielo, mientras que se dosifican. Los ratones se dosificaron (por via intraperitoneal (IP) o per os (por via oral, PO)) dos veces al dfa (8 horas de diferencia) durante 4 dfas consecutivos. El esquema de dosificacion final y decitabina total y dosis de ER-876437 se describen en la Tabla 8.

Tabla 8: Esquema de dosificacion

Grupo #

Farmaco Dosis de decitabina (rte Adm) Dosis de decitabina acumulada Dosis de ER- 876437 Dosis de ER-876437 acumulada

1

Vehfculo Veh 0 mg/kg Veh 0 mg/kg

2

ER-876437 Veh 0 mg/kg 10 mg/kg 80 mg/kg

3

Decitabina 0.1 mg/kg PO 0.8 mg/kg Veh 0 mg/kg

4

decitabina/ER- 876437 0.1 mg/kg PO 0.8 mg/kg 0.1 mg/kg 0.8 mg/kg

5

decitabina/ER- 876437 0.1 mg/kg PO 0.8 mg/kg 1 mg/kg 8 mg/kg

5

10

15

20

25

6

decitabina/ER- 876437 0.1 mg/kg PO 0.8 mg/kg 10 mg/kg 80 mg/kg

7

decitabina 0.1 mg/kg IP 0.8 mg/kg Veh 0 mg/kg

Supervivencia y autopsia: se observaron ratones para supervivencia y pesar diariamente durante la duracion del estudio (30 dfas). Los ratones muertos se sometieron a autopsia y se observaron para presencia de tumores en organos. Se determinaron las muertes tumorales por pesos del hngado mayores de 1.6 g y pesos de bazo mayores de 150 mg segun Covey JM y Zaharko DS, Eur J Cancer Clin Oncol, Vol. 21 p. 109-117, 1985.

Resultados:

Los ratones dosificados con decitabina y decitabina mas ER-876437 vivieron mas tiempo que los controles de vehnculo y ER-876437 solo (Tabla 9 y 10, p <0,05). No se observo respuesta a la dosis con ER-876437 en combinacion con decitabina.

0.1 mg/kg de decitabina PO fue ligeramente menos efectiva que 0.1 mg/kg de decitabina IP (Tablas 9 y 10, p = 0,0047). La administracion conjunta de ER-876437 con 0.1 mg/kg de decitabina independientemente de la dosis de ER-876437 aumento significativamente la supervivencia (dfas) en comparacion con 0.1 mg/kg de decitabina PO o IP (Tablas 9 y 10, p <0,05), pero no hubo respuesta a la dosis entre dosis de ER-876437.

La Tabla 9 enumera la supervivencia media de cada grupo de tratamiento y el porcentaje de ILS (aumento de la vida util) en comparacion con el grupo de vehnculos. Todos los grupos tratados vivieron significativamente mas tiempo que los controles de vehnculo y los grupos de inhibidores CDA solos (p <0,05).

En la tabla 9 se enumeran el peso de los hngados y bazos de ratones en la autopsia. Todos los ratones murieron de una muerte relacionada con la "carga tumoral" como se indica por los pesos de tngado mayores de 1,6 gramos y los pesos de bazo mayores de 150 mg (Covey et al Eur J Cancer Oncol 1985).

Se notaron observaciones generales sobre la apariencia general de las cavidades peritoneal y toracica; Sin embargo, no hubo un analisis formal de estas observaciones.

Tabla 9. Efecto de decitabina y ER-876437 sobre la supervivencia y los pesos de hngado y bazo en el Modelo de Supervivencia L1210 IV

Grupo

Superviviencia media (dfas ) ± SD % ILS (Aumento de la vida util) Peso medio del hngado (g) ± SD Peso medio del bazo (g) ± SD

Veh/Veh

7.4 ±0.55 1.79 ± 0.34 0.35 ± 0.03

Veh/ decitabina 0.1mg/kg PO

11.2 ± 0.45 51.35 2.17 ± 0.1 0.34 ± 0.04

Veh/ decitabina 0.1mg/kg IP

13.4 ± 0.89 81.08 1.81 ± 0.25 0.37 ± 0.14

ER-876437 0.1mg/kg/ decitabina 0.1mg/kg PO

15.8 ± 1.48 113.51 1.92 ± 0.16 0.24 ± 0.04

ER-876437 1mg/kg/ decitabina 0.1mg/kg PO

16.6 ± 1.52 124.32 2.2 ± 0.46 0.28 ± 0.13

ER-876437 10mg/kg/ decitabina 0.1mg/kg PO

17.2 ± 2.39 132.43 2.18 ± 0.31 0.38 ± 0.12

ER-876437 10mg/kg/Veh

7.6 ± 0.89 2.70 2.02 ± 0.07 0.37 ± 0.04

* %ILS = superviviencia media de experimental (dias) - superviviencia media de controles (dlas) X 100

Superviviencia media de control (dlas)

Tabla 10. Analisis estadfstico (Registro Rango de prueba segun Prism GraphPad)

Comparacion

Valor P

Control vs 0.1mg/kg decitabina PO

0.0023

Control vs 0.1mg/kg decitabina IP

0.0023

Control vs ER-876437 solo

0.601

decitabina 0.1mg/kg PO vs. decitabina 0.1mg/kg IP

0.0047

Control vs ER-876437 0.1mg/kg/ decitabina 0.1mg/kg PO

0.0023

decitabina 0.1mg/kg PO vs. ER-876437 0.1mg/kg/ decitabina 0.1mg/kg PO

0.0016

decitabina 0.1mg/kg PO vs. ER-876437 1mg/kg/ decitabina 0.1mg/kg PO

0.0016

decitabina 0.1mg/kg PO vs. ER-876437 10mg/kg/ decitabina 0.1mg/kg PO

0.0016

decitabina 0.1mg/kg IP vs. ER-876437 0.1mg/kg/ decitabina 0.1mg/kg PO

0.0119

decitabina 0.1mg/kg IP vs. ER-876437 1mg/kg/ decitabina 0.1mg/kg PO

0.0034

decitabina 0.1 mg/kg IP vs. ER-876437 10mg/kg/ decitabina 0.1 mg/kg PO

0.0034

ER-876437 0.1mg/kg/ decitabina 0.1mg/kg PO vs. ER-876437 1mg/kg/ decitabina 0.1mg/kg PO

0.4069

ER-876437 1mg/kg/ decitabina 1mg/kg PO vs. ER-876437 10mg/kg/ decitabina 0.1mg/kg PO

0.6131

Conclusion:

Decitabina mas ER-876437 fue mas eficaz en el modelo de supervivencia L1210 IV que la decitabina sola 5 independientemente de la administracion de la ruta de decitabina (PO o IP). No hubo respuesta a la dosis entre 0.1 mg/kg, 1 mg/kg y 10 mg/kg de los grupos ER-876437 mas decitabina. Este experimento se repitio en el Ejemplo VI pero utilizando dosis mas bajas de ER-876437 para determinar la dosis mfnimamente efectiva.

Ejemplo VI Efecto de ER-876437 sobre Decitabina en el modelo de linfoma de supervivencia murino L1210

Este ejemplo siguio todos los metodos y protocolos del Ejemplo V con los siguientes cambios: 40 ratones hembra 10 CD2F1 de 6-7 semanas de edad se separaron aleatoriamente en los 8 grupos identificados en la Tabla 11. La preparacion de ratones de estudio con inyeccion IV de ascitis L1210 tomo aproximadamente 60 minutos. Se preparo ER-876437 a 1 mg/ml en PBS y luego se diluyo a 0.1 mg/m 0.01 mg/ml y 0.001 mg/ml en PBS. Todas las soluciones se almacenaron en hielo durante la dosificacion. Los ratones se dosificaron (IP o PO) dos veces al dfa (7 u 8 horas de separacion) durante 4 dfas consecutivos.

15 Tabla 11. Esquema de dosificacion

Grupo #

Farmaco Dosis de Decitabina (rte Adm) Dosis acumulativa de Decitabina Dosis de ER- 876437 Dosis de ER- 876437

1

Vehfculo Vehfculo 0 mg/kg Vehfculo 0 mg/kg

2

ER-876437 Vehfculo 0 mg/kg 1 mg/kg 8 mg/kg

3

decitabina 0.1 mg/kg PO 0.8 mg/kg Veh 0 mg/kg

4

decitabina/ER- 876437 0.1 mg/kg PO 0.8 mg/kg 0.01 mg/kg 0.08 mg/kg

5

decitabina/ER- 876437 0.1 mg/kg PO 0.8 mg/kg 0.1 mg/kg 0.8 mg/kg

6

decitabina/ER- 876437 0.1 mg/kg PO 0.8 mg/kg 1 mg/kg 8 mg/kg

5

10

15

20

25

7

decitabina 0.1 mg/kg IP 0.8 mg/kg Vehfculo 0 mg/kg

8*

decitabina 0.1 mg/kg PO 0.8 mg/kg Vehfculo 0

* Dosed dos veces al dfa, intervalo.

8 horas aparte. Todos los demas grupos se dosificaron dos veces al dfa, con 7 horas de

Resultados:

Los ratones dosificados con decitabina y decitabina mas ER-876437 vivieron mas tiempo que los controles vehfculo y ER-876437 solo (Tablas 12 y 13, p <0.05). No hubo diferencias en la supervivencia de ratones dosificados con 0.1 mg/kg de decitabina PO cuando se dosificaron 7 u 8 horas de separacion (Tablas 12 y 13).

0.1 mg/kg de decitabina PO fue menos efectiva que 0.1 mg/kg de IP decitabina (Tablas 12 y 13, p = 0,0086). La coadministracion de 0.01 mg/kg de ER-876437 con 0.1 mg/kg de decitabina PO no tuvo efecto sobre la prolongacion de la supervivencia en ratones leucemicos L1210 en comparacion con decitabina PO sol. La coadministracion de 0.1 mg/kg y 1 mg/kg de ER-876437 con 0.1 mg/kg de decitabina PO mejoro significativamente la supervivencia (dfas) en comparacion con 0.1 mg/kg de decitabina PO solo. La coadministracion de 0.1 mg/kg y 1 mg/kg con 0.1 mg/kg de decitabina PO sola no fue estadfsticamente diferente de 0.1 mg/kg de decitabina administrada via IP. ER-876437 tuvo una respuesta de dosis reducida a estas dosis bajas: 0.01 mg/kg fue ineficaz para mejorar el efecto de la decitabina administrada oralmente, mientras que tanto 0.1 mg/kg como 1 mg/kg mejoraron significativamente la supervivencia (p = 0,04 y p= 0,005 respectivamente; Tabla 13). Las dos dosis mas altas de ER-876437 en combinacion con decitabina PO presentaron una ligera respuesta a la dosis (p = 0,09, Tabla 13).

La Tabla 12 muestra la media de supervivencia de cada grupo de tratamiento y el porcentaje ILS (aumento de la vida util) en comparacion con el grupo Vehfculo. Todos los grupos tratados viven significativamente mas tiempo que los controles Vehfculo y los grupos que recibieron ER-876437 solamente (p <0,05).

En la tabla 12 figuran el peso de los hfgados y bazos de ratones en la autopsia. Todos los ratones murieron por una muerte relacionada con la "carga tumoral" como se indica por los pesos de hfgado mayores de 1,6 gramos y los pesos de bazo mayores de 150 mg (Covey JM and Zaharko DS, Eur J Cancer Clin Oncol, Vol. 21 p. 109-117, 1985).

Se notaron observaciones generales sobre la apariencia general de las cavidades peritoneal y toracica; Sin embargo, no hubo un analisis formal de estas observaciones.

Tabla 12. Efecto de Decitabina y ER-876437 sobre la supervivencia y los pesos de hfgado y bazo en el Modelo de Supervivencia L1210 IV

Grupo

Superviviencia media (dfas) ± SD % ILS (Aumento de la vida util) Peso medio del hfgado (g) ± SD Peso medio del bazo (g) ± SD

Veh/Veh

8± 0.71 1.95± 0.15 0.35± 0.03

Veh/ decitabina 0.1mg/kg PO

11 8± 0.84 47.50 2.02± 0.31 0.36 ± 0.11

Veh/ decitabina 0.1mg/kg PO (8 hr.)

11.± ± 0.55 45.00 1.81± 0.41 0.33± 0.06

Veh/ decitabina 0.1mg/kg IP

13.6 ± 0.55 70.00 2.01± 0.41 0.31± 0.07

ER-876437 0.01mg/kg/ decitabina 0.1mg/kg PO

12 ± 0.0 50.00 2.06 ± 0.23 0.32± 0.04

ER-876437 0.1mg/kg/ decitabina 0.1mg/kg PO

13.2 ± 0.84 ± 5.00 2.28± 0.25 0.35± 0.1

ER-876437 1mg/kg/ decitabina 0.1mg/kg PO

14.2 ± 0.84 77.50 2.24± 0.32 0.34± 0.09

ER-876437 1.0 mg/kg/Veh

8.4± 0.55 5.00 2.04 ± 0.15 0.32± 0.02

Veh: Vehfculo only

5

10

15

20

25

Supervivencia media de grupo de control (dlas)

Tabla 13. Analisis estadfstico (Registro Rango de prueba segun Prism GraphPad)

Comparacion

Valor P

Control vs 0.1mg/kg decitabina PO

0.002

Control vs 0.1mg/kg decitabina PO (8 hr.)

0.002

Control vs 0.1mg/kg decitabina IP

0.002

Control vs ER-876437 solo

0.353

Decitabina 0.1mg/kg PO vs. decitabina 0.1mg/kg PO (8 hr.)

0.6015

decitabina 0.1mg/kg PO vs. decitabina 0.1mg/kg IP

0.0086

Control vs ER-876437 0.01mg/kg/ decitabina 0.1mg/kg PO

0.002

decitabina 0.1mg/kg PO vs. ER-876437 0.01mg/kg/ decitabina 0.1mg/kg PO

0.649

decitabina 0.1mg/kg PO vs. ER-876437 0.1mg/kg/ decitabina 0.1mg/kg PO

0.0368

decitabina 0.1mg/kg PO vs. ER-876437 1mg/kg/ decitabina 0.1mg/kg PO

0.0048

decitabina 0.1mg/kg IP vs. ER-876437 1mg/kg/ decitabina 0.1mg/kg PO

0.1729

ER-876437 0.01mg/kg/ decitabina 0.1mg/kg PO vs. ER-876437 0.1mg/kg/ decitabina 0.1mg/kg PO

0.014

ER-876437 0.1mg/kg/ decitabina 1mg/kg PO vs. ER-876437 1mg/kg/ decitabina 0.1mg/kg PO

0.0889

Conclusion:

La coadministracion de ER-876437 tanto a 0.1 mg/kg como a 1 mg/kg con 0.1 mg/kg de decitabina PO aumento la supervivencia en comparacion con decitabina administrada PO sola pero no decitabina administrada IP en el modelo de supervivencia L1210 en ratones. La dosis mas baja probada (0.01 mg/kg) no tuvo efecto sobre el aumento de la supervivencia de ratones tratados con 0.1 mg/kg de decitabina cuando se administro via PO. Las dos dosis mas altas de eR-876437 en combinacion con decitabina tuvieron una respuesta de dosis leve (p = 0,09). La dosis mfnimamente efectiva de ER-976437 en este modelo se encontro a 0.1 mg/kg.

No hubo diferencia en la supervivencia de ratones dosificados con 0.1 mg/kg de decitabina PO 2x/dfa qdx4 con 7 horas de diferencia u 8 horas de separacion.

Ejemplo VII: Efecto de ER-876437 sobre la vida media de la decitabina en presencia de CDA en regulador Tris-HCl a 37°C

Este ejemplo describe el efecto de ER-876437 sobre la vida media (T1/2) de decitabina en presencia de citidina desaminasa (CDA) en regulador de Tris-HCl a 37°C.

Materiales y equipo

Este ejemplo emplea una columna de HPLC Phenomenex Luna C18 (2) de (100 A 4.6 x 250 mm 5 pm). El sistema de suministro de solvente emplea una bomba cuaternaria de HPLC, mezcla de baja presion. Se utilizo un automuestrador que tiene un bucle variable, rango de 0.1 a 100 pL y termostato de temperatura controlada. El detector de UV puede emplear un detector de longitud de onda dual, un detector de matriz de diodos, un detector de longitud de onda variable o equivalente, y se puede registrar utilizando software de cromatograffa (por ejemplo, software Waters Empower 2 Build 2154, Agilent ChemStation version A.09.03 o superior para HPLC o equivalente). La balanza analftica empleada fue

5

10

15

20

25

capaz de pesar ± 0.1 mg. Se utilizaron agua de grado HPLC desgasificada y acetonitrilo desgasificado de calidad para HPLC como solventes para las fases moviles.

La solucion de dilucion utilizada para hacer las siguientes soluciones fue Tris-HCl (37°C, pH 7.4, Boston BioProducts). La solucion de dilucion tambien sirvio como el blanco para los espectros de UV.

Control estandar de decitabina: control de decitabina 0.2 mM se preparo al pesar 2.6 mg de decitabina en un matraz volumetrico de 10 mL. El matraz se diluyo a volumen con regulador Tris-HCl almacenado a 37°C y se mezclo por inversion. La solucion se etiqueto como solucion madre de decitabina. Se transfi rio 1.0 mL de solucion madre de decitabina a un matraz volumetrico de 5 mL y se diluyo a volumen con solucion de dilucion y se mezclo por inversion.

Control estandar de ER-876437: control de ER-876437 0.4 mM se preparo al pesar 5.2 mg de ER-876437 en un matraz volumetrico de 10 mL. El matraz se diluyo a volumen con regulador Tris-HCl almacenado a 37°C y se mezclo por inversion. La solucion se marco como solucion madre de ER-876437. Se transfirio 1.0 mL de solucion madre de ER- 876437 a un matraz volumetrico de 5 mL y se diluyo a volumen con la solucion de dilucion y se mezclo por inversion.

Decitabina con CDA: se transfirio 1.0 ml de solucion madre de decitabina a un matraz volumetrico de 5 mL. Aproximadamente 2-3 mL de solucion de dilucion se transfirio al matraz. 0.125 mL de solucion de CDA se transfirio al matraz y se diluyeron a volumen con solucion de dilucion. La muestra se mezclo por inversion y se inyecto en la HPLC inmediatamente despues de la preparacion.

Decitabina con CDA y ER-876437: se transfirio 1.0 mL de solucion madre de ER-876437 a un matraz volumetrico de 5 mL. Aproximadamente 2 mL de solucion de dilucion se transfirio al matraz. 0.125 mL de solucion de CDA se transfirio al matraz. 1.0 mL de solucion madre de decitabina se transfirio al mismo matraz y se diluyeron a volumen con solucion de dilucion. La muestra se mezclo por inversion y se inyecto en la HPLC inmediatamente despues de preparacion.

Parametros de HPLC: Los estandares anteriores y las muestras se llevaron a cabo en una columna de HPLC utilizando los parametros se muestra en la Tabla 14.

Tabla 14. Parametros de HPLC

Temperatura de Columna:

25°C

Temperatura de Automuestrador:

37°C

Velocidad de flujo:

1.0 mL/min. La velocidad de flujo se puede ajustar ± 0.2 mL/min para obtener tiempos de retencion especfficos.

Gradiente:

Tiempo, min %-Solvente A* %-Solvente B*

Inicial

96 4

10 96 4

20

75 25

25

75

25

Tiempo de reequilibrio

10 minutos

Volumen de inyeccion:

25 pL

Solucion de lavado de aguja:

Utilice la solucion de dilucion

Deteccion:

205 nm UV

Tiempo de ejecucion:

25 minutos

* Solvente A: agua; solvente B: acetonitrilo

Se encontro que el tiempo de retencion para decitabina es de aproximadamente 8 minutos; y se encontro que el tiempo de retencion de ER-876437 es de aproximadamente 21.8 minutos.

5

10

15

20

25

Resultados y Discusion

Tabla 15. Resumen de resultados

Soluciones

T1/2 estimado

Decitabina en regulador de Tris-HCl a 37°C

9 horas

Decitabina con CDA en regulador de Tris-HCl 37°C

23 minutos

Decitabina con CDA y ER-876437 en regulador de Tris-HCl 37°C

9 horas

Los niveles de decitabina, en presencia y ausencia de CDA, con o sin ER-876437, en regulador Tris-HCl a 37°C se midieron mediante analisis HPLC utilizando deteccion UV. Las areas de los picos de decitabina y ER-876437 en las muestras de estabilidad se midieron y se compararon con las areas de controles estandar de decitabina y ER-876437, respectivamente. Los resultados se presentaron como porcentaje restante de control.

Los datos se recolectaron a 205 nm UV debido a que la decitabina y ER-876437 comparten este UV maximo. Vease Figura 3. Los resultados se capturaron cada 35 minutos durante 12 horas y de forma intermitente a partir de entonces debido a la longitud del metodo analftico. Los cromatogramas de HPLC que muestran trazas superpuestas en los puntos de tiempo especificados se muestran en la Figura 4 y la Figura 5.

Los cromatogramas de HPLC en estas figuras se muestran con una constante, traslado aditivo para claridad. Aunque se muestra la traza de fondo de partida en el tiempo = 0.00 minutos, cada cromatograma sucesivo se desplaza de forma arbitraria a la derecha del cromatograma anterior (por una cantidad constante de tiempo) con el fin de evitar tener los picos superpuestos. Los tiempos reales asociados con los picos mostrados en estos cromatogramas se pueden realizar al desplazar el comienzo de la traza de cromatograma (a la izquierda) de vuelta al eje vertical donde el tiempo es igual a 0.00 minutos. Del mismo modo, la absorcion UV real de cualquier pico se puede realizar al desplazar el valor inicial del cromatograma a la posicion donde mAU = 0.00.

En ausencia de CDA, se observo reduccion en la concentracion de decitabina al 50% despues de 9 horas, mientras que, en presencia de CDA, la concentracion de decitabina se redujo a casi 0% de control despues de 2 horas y el T1/2 se estimo en aproximadamente 23 minutos. La adicion de ER-876437 a la mezcla de incubacion dio como resultado la inhibicion de la reaccion con la reduccion de la concentracion de decitabina hasta el 50% observada despues de 9 horas. Los niveles de ER-876437 no se vieron afectados despues de 12 horas de exposicion a CDA con decitabina. Un resumen de todos los resultados se muestra en la Figura 6.

Se encontro que el T1/2 estimado de decitabina en presencia de CDA en regulador de Tris-HCl a 37°C era de 23 minutos. La ER-876437 inhibio casi completamente este efecto dando como resultado el mismo T1/2 que la decitabina sola en regulador de Tris-HCl a 37°C (9 horas).

Claims (20)

1. Una composicion que comprende decitabina y un compuesto de la formula I:

imagen1

en la que:

5 uno de R1 y R2 es F, y el otro se selecciona de H y F; uno de R3 y R4 es H, y el otro se selecciona de H y OH;

en la que------es un enlace covalente o esta ausente, y R4 esta ausente cuando---------es un enlace covalente;

o una sal farmaceuticamente aceptable, un ester de alquilo C1-6, o un ester de alquenilo C2-6 del mismo.

2. Un kit de partes que comprende: una composicion que comprende decitabina; y una composicion que comprende un 10 compuesto de la formula I:

imagen2

en la que:

uno de R1 y R2 es F, y el otro se selecciona de H y F; uno de R3 y R4 es H, y el otro se selecciona de H y OH;

15 en la que------es un enlace covalente o esta ausente, y R4 esta ausente cuando--------es un enlace covalente;

o una sal farmaceuticamente aceptable, un ester de alquilo C1-6, o un ester de alquenilo C2-6 del mismo; para uso simultaneo, separado o secuencial en un metodo para tratar cancer.

3. Un compuesto de la formula I:

5

10

15

20

25

imagen3

en la que:

uno de Ri y R2 es F, y el otro se selecciona de H y F; uno de R3 y R4 es H, y el otro se selecciona de H y OH;

en la que------es un enlace covalente o esta ausente, y R4 esta ausente cuando--------es un enlace covalente;

o una sal farmaceuticamente aceptable, un ester de alquilo C1-6, o un ester de alquenilo C2-6 del mismo;

para uso en un metodo de tratamiento de cancer o anemia de celulas falciformes en un sujeto que se trata con una composicion que comprende decitabina y opcionalmente al menos un agente farmaceutico adicional.

4. El kit de partes o compuesto, sal o ester para uso de acuerdo con la reivindicacion 2 o 3, en el que dicho cancer se selecciona del grupo que consiste de canceres hematologicos y canceres solidos.

5. El kit de partes o compuesto, sal o ester para uso de acuerdo con la reivindicacion 4, en el que dicho cancer es un cancer hematologico seleccionado del grupo que consiste de sfndrome mielodisplasico y leucemia.

6. El kit de partes o compuesto, sal o ester para uso de acuerdo con la reivindicacion 5, en el que dicho cancer es una leucemia seleccionada del grupo que consiste de leucemia mieloide aguda y leucemia mieloide cronica.

7. El kit de partes o compuesto, sal o ester para uso de acuerdo con la reivindicacion 4, en el que el cancer es un cancer solido seleccionado del grupo que consiste de cancer pancreatico, cancer de ovario, cancer peritoneal, cancer de pulmon de celula no microcftica, y cancer de mama metastasico.

8. La composicion de acuerdo con la reivindicacion 1, que es una composicion farmaceutica que comprende

(i) decitabina;

(ii) un compuesto de formula I:

imagen4

en la que:

uno de R1 y R2 es F, y el otro se selecciona de H y F; uno de R3 y R4 es H, y el otro se selecciona de H y OH;

en la que------es un enlace covalente o esta ausente, y R4 esta ausente cuando---------es un enlace covalente;

o una sal farmaceuticamente aceptable, un ester de alquilo C1-6, o un ester de alquenilo C2-6 del mismo; y

(iii) un excipiente farmaceuticamente aceptable

9. Compuesto de la formula I:

imagen5

5 en la que:

uno de Ri y R2 es F, y el otro se selecciona de H y F; uno de R3 y R4 es H, y el otro se selecciona de H y OH;

en la que------es un enlace covalente o esta ausente, y R4 esta ausente cuando---------es un enlace covalente;

o una sal farmaceuticamente aceptable, un ester de alquilo C1-6, o un ester de alquenilo C2-6 del mismo;

10 para uso en un metodo terapeutico de tratamiento de cancer o anemia de celulas falciformes, en el que se evita la desaminacion de decitabina.

10. El compuesto, sal o ester para uso de acuerdo con la reivindicacion 3, en el que la composicion que comprende decitabina y el compuesto o sal se administran simultaneamente.

11. El compuesto, sal o ester para uso de acuerdo con la reivindicacion 3, en el que la composicion que comprende 15 decitabina y el compuesto o sal se administran secuencialmente.

12. La composicion de acuerdo con la reivindicacion 1, el kit de partes para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 y 4-7, el compuesto, sal o ester para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 3-7 y 10-11 , La composicion farmaceutica de acuerdo con la reivindicacion 8 o el compuesto para uso de acuerdo con la reivindicacion 9, en la que R1 y R2 son cada uno de F.

20 13. La composicion de acuerdo con la reivindicacion 1 o 12, el kit de partes para uso de acuerdo con una cualquiera de

las reivindicaciones 2, 4-7 y 12, el compuesto, sal o ester para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 3-7 y 10 - 12, la composicion farmaceutica de acuerdo con la reivindicacion 8 o 12 o el compuesto para uso de acuerdo con la reivindicacion 9 o 12, en el que el compuesto de formula I es un compuesto de formula VIII:

imagen6

25 o una sal farmaceuticamente aceptable, un ester de alquilo C1-6, o un ester de alquenilo C2-6 del mismo.

14. La composicion de acuerdo con la reivindicacion 1 o 12, el kit de partes para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 y 4-7, el compuesto, sal o ester para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 3-

7 y 10 11, la composicion farmaceutica de acuerdo con la reivindicacion 8 o el compuesto para uso de acuerdo con la reivindicacion 9, en el que el compuesto de formula I es un compuesto de formula VIII:

imagen7

5 15. La composicion de acuerdo con la reivindicacion 1, el kit de partes para uso de acuerdo con una cualquiera de las

reivindicaciones 2 y 4-7, el compuesto, sal o ester para uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 3 - 7 y 10 - 11, la composicion farmaceutica de acuerdo con la reivindicacion 8 o el compuesto para uso de acuerdo con la reivindicacion 9, en el que el compuesto de formula I es un compuesto de formula II:

imagen8

10 o

un compuesto de formula III:

imagen9

o

un compuesto de formula IV:

imagen10

o

5

un compuesto de formula V:

imagen11

o

un compuesto de formula VI:

imagen12

10 o

un compuesto de formula VII:

imagen13

o una sal farmaceuticamente aceptable, un ester de alquilo C1-6, o un ester de alquenilo C2-6 del mismo.

16. Compuesto de la formula I:

imagen14

5 en la que:

uno de Ri y R2 es F, y el otro se selecciona de H y F; uno de R3 y R4 es H, y el otro se selecciona de H y OH;

en la que------es un enlace covalente o esta ausente, y R4 esta ausente cuando--------es un enlace covalente;

o una sal farmaceuticamente aceptable, ester de alquilo C1-6, o un ester de alquenilo C2-6 del mismo para uso en un 10 metodo para tratar cancer, que comprende:

(i) administrar a un mamffero en necesidad del mismo un compuesto de la formula I, y

(ii) administrar a un mamffero en necesidad del mismo decitabina.

17. Una composicion de acuerdo con la reivindicacion 1 para uso en terapia.

18. Una composicion de acuerdo con la reivindicacion 1 para uso en un metodo de tratamiento de cancer.

15 19. Una composicion de acuerdo con la reivindicacion 1 para uso en un metodo de tratamiento de la anemia de celulas

falciformes.

20. Una composicion de acuerdo con la reivindicacion 1 que adicionalmente comprende por lo menos un agente farmaceutico adicional.

21. Un compuesto o una sal farmaceuticamente aceptable, ester de alquilo C1-6, o un ester de alquenilo C2-6 del mismo 20 para uso de acuerdo con la reivindicacion 16, que adicionalmente comprende:

(iii) administrar a un mamffero en necesidad del mismo por lo menos un agente farmaceutico adicional.

22. Uso de un compuesto de la formula I:

imagen15

en la que:

uno de R1 y R2 es F, y el otro se selecciona de H y F; uno de R3 y R4 es H, y el otro se selecciona de H y OH;

5 en la que-------es un enlace covalente o esta ausente, y R4 esta ausente cuando--------es un enlace covalente;

o una sal farmaceuticamente aceptable, ester de alquilo C1-6, o un ester de alquenilo C2-6 del mismo para la fabricacion de un medicamento para el tratamiento de cancer en pacientes que se tratan con un decitabina y opcionalmente por lo menos un agente farmaceutico adicional.

23. Un compuesto para uso de acuerdo con la reivindicacion 3 para uso en el tratamiento de un sujeto que se trata con 10 decitabina.