ES2605109T3

ES2605109T3 - Composición de vacuna y procedimiento de uso de la misma

Info

Publication number: ES2605109T3
Application number: ES00955789.3T
Authority: ES
Inventors: Gilad Gallili; Norbert Frydman
Original assignee: Abic Biological Laboratories Ltd
Current assignee: Abic Biological Laboratories Ltd
Priority date: 1999-08-24
Filing date: 2000-08-21
Publication date: 2017-03-13
Anticipated expiration: 2020-08-21
Also published as: EP1212045B1; MXPA02001891A; PT1212045T; CN100406004C; TR200200477T2; US6541001B1; JP2003507414A; IL148247A; DK1212045T3; EP1212045A1; BRPI0014142B8; AU779403B2; HK1047696A1; RU2277905C2; CN1379663A; AU6793400A; PL364983A1; IL148247A0; HUP0202537A3; CA2382652A1

Abstract

Una composición de vacuna comprimida estable que comprende al menos un componente antigénico liofilizado y un adyuvante de disolución.

Description

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DESCRIPCION

Composicion de vacuna y procedimiento de uso de la misma

A lo largo de esta solicitud, se identifican diversas referencias de autores y citas completas.

Campo de la invencion

La presente invencion se refiere a una composicion de vacuna estable compactada, comprimida o en forma de comprimido que tiene una forma solida densa, que comprende uno o mas componentes antigenicos criodesecados (liofilizados) y un adyuvante de disolucion. Esta composicion de vacuna densa estable retiene todas las propiedades ventajosas de sus componentes liofilizados, incluyendo una estabilidad y solubilidad de la concentracion, proporcionando a la vez ademas una disolucion completa y rapida en un diluyente. Ademas, la composicion de vacuna de la presente invencion evita las desventajas de las preparaciones liofilizadas de la tecnica anterior. Se proporciona tambien el uso de la composicion de vacuna estable para formar una solucion de vacuna para el uso en la inmunizacion de un sujeto.

Antecedentes de la invencion

Es bien conocido que los materiales biologicos en soluciones tales como vacunas son susceptibles a influencias variables que incluyen calor, reactivos de oxidacion, sales, pH, luz, y enzimas proteoltticas.

Se conocen algunos procedimientos para reducir estos efectos perjudiciales en general y mas espedficamente para mejorar la estabilidad de una vacuna, especialmente durante el almacenamiento. Por ejemplo, el almacenamiento por debajo de 0 °C, y a temperaturas tan bajas como -70 °C, es un procedimiento bien conocido. A temperaturas incluso mas bajas, por ejemplo, en nitrogeno lfquido, muchos materiales biologicos incluyendo celulas vivas puede almacenarse satisfactoriamente durante muchos anos. Sin embargo, dichos procedimientos no son siempre convenientes en aquellas situaciones, que implican, por ejemplo, la inoculacion de ganado no estabulado.

El documento WO 00/48662 A se refiere a la administracion de farmacos, y mas concretamente a la disolucion y administracion de farmacos a partir de formulaciones secas. En particular, se refiere a un dispositivo de administracion de monodosis para producir formas fluidas de un reactivo bioactivo a partir de formas secas del reactivo.

Johnston y col., Poultry Science Champaign, vol. 76, no. 1, 1997, p. 165-178 revisan alguna de las aplicaciones in ovo utilizadas en la industria avfcola y en desarrollo o en investigacion por Embrex.

Cardamone y col., Journal of Controlled Release, vol. 47, n.° 3, 8 de septiembre de 1997, p. 205-219 se refiere al ensayo in vitro de un sistema de administracion pulsatil y su aplicacion in vivo para la inmunizacion frente al toxoide del tetanos.

Jeurissen y col., Immunology, vol. 95, n.° 3, 1998, p. 495-500 describen el mecanismo de accion de una vacuna de un complejo inmunitario que protege a las gallinas frente a la bursitis infecciosa.

Haddad y col., Avian Diseases, vol. 41, n.° 4, octubre 1997, p. 882-889 se refiere a la eficacia de una novedosa vacuna de un complejo inmunitario frente al virus de la bursitis infecciosa en pollos de engorde.

El documento WO 97/333531 A1 divulga la potenciacion de la biodisponibilidad de los principios activos peptfdicos que se van a administrar oralmente por una composicion farmaceutica que proporciona la liberacion dirigida del peptido en el intestino.

El documento US 5.206.219 A se refiere a medicamentos protemicos tales como eritropoyetina, insulina y calcitonina formulados en un medicamento que comprende un disolvente farmaceutico de poliol combinado como codisolvente con un disolvente farmaceutico lfpido adaptado a la administracion oral en forma de lfquido o capsulas.

El documento US 5.350.741 A se dirige a una formulacion enterica de un farmaco protemico que le protege de la degradacion enzimatica y promueve su captacion por el tracto intestinal tras la administracion oral.

El documento US 5.472.710 A divulga una preparacion farmaceutica que se va administrar por via oral con liberacion controlada del principio activo y un procedimiento para su fabricacion.

La liofilizacion o la criodesecacion es otro medio conocido de conservar celulas y virus vivos para su uso como vacunas. Durante la criodesecacion, la solucion que contiene el material biologico se congela en primer lugar y a continuacion se evapora el agua por sublimacion, usualmente a vado elevado y temperaturas por debajo de cero. Las soluciones previas han utilizado la criodesecacion u otras tecnicas para formular vacunas vmcas, pero presentan otras dificultades adicionales relativas a la preparacion y administracion de una forma farmaceutica final estable.

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Por ejemplo, la patente de Estados Unidos N.° 4.251.509 (Hanson y Abegunde) divulga una vacuna vftica particulada estable prevista para administrarse por v^a oral a ganado no estabulado en un estado seco. Sin embargo, la forma farmaceutica divulgada no esta criodesecada sino preparada concentrando y extrudiendo una pasta seca para formar aglomerados.

Se requieren antioxidantes, cuya seleccion dependera del virus concreto, para promover la termoestabilidad. Dicha formulacion puede ser mas complicada de preparar y no resulta especialmente bien adecuada para aquellos casos en los que se desea disolver la vacuna antes de la inmunizacion.

Las patentes de Estados Unidos con numeros 3.458.621 y 3.608.030 (Tint) divulgan el uso de preparaciones vfticas criodesecadas para preparar un comprimido de administracion oral para la inmunizacion del tracto intestinal. Sin embargo, los comprimidos preparados son para la administracion oral y estan provistos de un revestimiento enterico para retrasar la disgregacion. Durante el ensayo in vitro no se desintegran rapidamente y se encontro que se desintegraban solo "en 25 minutos" con fluido intestinal simulado. Ademas, se midio el tiempo de disgregacion en fluido intestinal simulado descontando por tanto los efectos del revestimiento enterico. Ademas, Tint resalta adicionalmente que a no ser que los comprimidos se "revistan por presion", perderan su concentracion como se muestra por una comparacion entre los comprimidos revestidos por presion y los comprimidos no revestidos por presion. Tint indica que los comprimidos no revestidos por presion "no solo fracasaron en estimular una respuesta de anticuerpos en todos los individuos negativos a anticuerpos, sino que, ademas, la magnitud de aumento del tftulo fue significativamente mas pequena". (Vease la columna 4, lrnea 40).

La publicacion PCT N.° WO 99/21579 (Seager, y col.) asignada a R.P. Scherer Corp., divulga una composicion dispersante "rapida" para una vacuna veterinaria tal como frente a la enfermedad de New Castle que se criodeseca y se "poco compactada". La forma farmaceutica se divulga como una "red de matriz abierta", tal como una "espuma solida" a la que se hace referencia en la patente de Estados Unidos N.° 4.371.516 (analoga a la patente de Reino Unido N.° 1.548.022), en oposicion a la forma comprimida de un comprimido duro. Ademas, las vacunas se dirigen a la administracion oral y se dirige a la retencion en el tejido mucosal. Los adyuvantes sirven para proporcionar suficiente tiempo de residencia para la absorcion sobre el anterior. La formulacion de vacuna divulgada no proporciona la preparacion de una dosis ftquida para inmunizacion posterior, ni un medio para formar facilmente una solucion de vacuna medida estable para la administracion como una dosis ftquida, ni para proporcionar un liofilizado comprimido estable o comprimido duro para facilitar su administracion posterior.

La patente de Estados unidos N.° 5.587.180 (Allen, Jr. y col) describe un procedimiento para preparar una matriz de un soporte particulado para un comprimido de disolucion rapida. El procedimiento se diferencia de la criodesecacion y utiliza tecnicas de secado por pulverizacion normalizadas. La matriz del soporte particulado es adecuada para la administracion de la dosificacion cuando se coloca en la cavidad oral. Ademas, no se proporciona una formulacion de vacuna estable como solucion de vacuna en una forma farmaceutica ftquida.

La patente de Estados unidos N.° 5.336.666 (Neway y col.) divulga una vacuna ftquida criodesecada que puede formar un comprimido que se va a reconstituir en forma ftquida. Sin embargo, la vacuna esta limitada a un glicopeptido polar de una bacteria concreta y no proporciona una disolucion completa o rapida.

Aunque se puede llevar a cabo la criodesecacion del material biologico de acuerdo con procedimientos de liofilizacion bien conocidos por un experto en la tecnica para proporcionar una preparacion de vacuna estable, el tftulo de un virus vivo al final de la liofilizacion no es normalmente el mismo que era para la solucion antes del procedimiento de liofilizacion. En general, no es posible llevar a cabo la titulacion antes de la liofilizacion debido a que la solucion no es estable hasta que esta criodesecada. Ademas, el tftulo cambiara de forma imprevisible durante la liofilizacion. Por consiguiente, una estimacion del tftulo inicial basada en la experiencia solo es validable mediante titulacion despues de criodesecacion. Como resultado de todo lo anterior, es casi imposible conseguir una precision definida del tftulo diana. Si se ha llevado a cabo la liofilizacion con el liofilizado ya contenido en viales, volver a trabajar el lote no es normalmente posible, y en algunos casos debe descartarse un lote completo si no cumple las especificaciones.

La patente de Estados Unidos N.° 5.897.852 (Wilderbeek, y col.) intenta resolver dicho problema usando diferentes "cuerpos criodesecados" con "liosferas" para compensar el deficit en el tftulo de una torta liofilizada. Sin embargo, cada liosfera tiene su propio tftulo necesitando por tanto la titulacion de multiples cuerpos para llegar a un tftulo deseado. Incluso en el mejor caso, este procedimiento no consigue el tftulo requerido exacto ya que es solo una aproximacion debido al uso de los cuerpos combinados para conseguir el tftulo diana. Ademas, la produccion de liosferas es relativamente diffcil en comparacion con la criodesecacion, mas sencilla, de las soluciones, para producir una torta o polvo. Adicionalmente, se requiere a menudo una matriz especial para evitar que se pulverice el material de la liosfera tras el secado. En general, el procedimiento requiere la preparacion de soluciones separadas teniendo cada una un tftulo, aditivos y adyuvantes diferentes. El procedimiento no resuelve el problema de que el tftulo de un lote de virus vivo es raramente homogeneo, y vana de un vial al siguiente, particularmente alrededor de las zonas de las placas fnas en el liofilizador. Por tanto, la determinacion del numero de liosferas necesarias por vial es siempre una aproximacion.

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La criodesecacion puede ser tambien util para vacunas que comprenden mas de un componente inmunogeno. Por ejemplo, el documento EP 290197A divulga una vacuna tetravalente criodesecada. El procedimiento divulga la mezcla y la posterior criodesecacion de cuatro componentes de vacuna de virus vivos.

Una desventaja de las actuales tecnicas de criodesecacion para la preparacion de vacunas es que el procedimiento es muy complejo, teniendo muchas variables, volviendolo notoriamente diffcil de realizar de una manera reproducible para conseguir un producto aceptable y una uniformidad en la dosificacion. Esto es especialmente problematico para las vacunas veterinarias donde se criodesecan un gran numero de dosis en un vial. El problema es menos comun para la preparacion de vacunas humanas, aunque igualmente apreciable cuando es necesaria la inoculacion masiva, por ejemplo, en escenarios militares, o en situaciones de infeccion pandemica. Por ejemplo, un vial de vacuna unico ffpico para la vacunacion de aves de corral comprende tanto 1000 como 2000 dosis, y se registra como tal. Antes de la criodesecacion, se realiza una estimacion grosera acerca del tftulo del material, pero el tftulo final puede solo determinarse despues de la criodesecacion, ya que el tftulo suele disminuir de forma bastante impredecible durante la criodesecacion. Ademas, la materia prima de virus o bacterias vivos no se puede mantener normalmente estable un lapso de tiempo suficiente para obtener resultados fiables de los tftulos antes de la criodesecacion.

En la practica, un envase que comprende originalmente mas de 2000 dosis puede resultar a menudo que comprende solo 1900 dosis tras la criodesecacion. En este caso, el vial solo se puede comercializar como un vial de 1000 dosis, ya que normalmente es otra unica dosificacion registrable oficial posible. Para dicho escenario se podffa producir un 47 % de material residual y un aumento correspondiente en los costes. Este problema se agrava con vacunas combinadas ya que debe utilizarse la dosificacion del componente con el tftulo mas bajo para caracterizar el lote completo. Como desventaja adicional, cuando viales previstos para proporcionar 2000 dosis individuales se comercializan posteriormente como viales de 1000 dosis y se utilizan para inocular 1000 animales, los animales dosificados de esta manera se sobreexponen innecesariamente. Ademas, aumentar de forma deliberada el numero de dosis antes de la criodesecacion no es una alternativa satisfactoria cuando algun lote de la vacuna se seca mas eficazmente. En esta situacion, simplemente se termina por perder este material.

Estos problemas se volveran crecientemente importantes de resolver debido a que los organismos de registro trabajan actualmente hacia un sistema de registro donde el numero de tftulos de dosis de vacunas se configuren entre ftmites superiores e inferiores bien definidos. Dadas las muchas variables en el procedimiento de produccion y el procedimiento de criodesecacion, sera diffcil cumplir estos ftmites sobre la base de una produccion a gran escala. Como se indica, este problema sera incluso mas pronunciado cuando se necesite una vacuna combinada.

Ademas, una desventaja adicional de las vacunas criodesecadas anteriores es que un gran numero de combinaciones formuladas deben mantenerse en almacenamiento. Esto se debe a que los diversos componentes en una vacuna combinada se mezclan normalmente antes de la criodesecacion. De esta manera, para la preparacion de una gama completa de vacunas individuales/multicomponentes frente a, por ejemplo, dos enfermedades, deben mantenerse en almacenamiento tres productos diferentes; (1) el producto que comprende la vacuna anti-A, (2) el producto que comprende la vacuna anti-B; y (3) el producto que comprende vacuna anti-A y anti-B. En el caso de vacunas contra tres enfermedades, han de prepararse y almacenarse siete vacunas/combinaciones diferentes. Para cuatro enfermedades, este numero se incrementa a quince vacunas/combinaciones diferentes. Por consiguiente, frecuentemente es necesario proporcionar y mantener una gran capacidad de almacenamiento.

Las patentes de Estados Unidos numeros 5.397.569 y 5.871.748 (Whitfill y col.) divulgan un procedimiento para producir inmunidad activa frente al virus de la enfermedad de Newcastle (NDV) en sujetos aviares administrando, in ovo, un complejo de vacuna que comprende un virus de vacuna vivo y anticuerpos neutralizantes que se unen al anterior. Whitfill divulga que la relacion de virus al anticuerpo neutralizante o uno de sus fragmentos determinara el exito de la inmunizacion. Sin embargo, para que dicho procedimiento se aplique eficazmente contra el NDV, debe mantenerse un estrecho intervalo de valores para esta relacion para que se produzca una inmunizacion satisfactoria sin matar a los pollos. Ademas, la imprevisibilidad en el tftulo utilizando NDV liofilizado (como con otras preparaciones de virus) significa que los procedimientos tales como el de Whitfill no son facilmente aplicables para el NDV. Por tanto, se desea un procedimiento que pudiera asegurar mas tftulos exactos de NDV y anticuerpos para la preparacion de dicha vacuna.

Otra desventaja mas de las formulaciones de vacuna anteriores y sus procedimientos de produccion se basa en la necesidad importante de espacio del procedimiento de criodesecacion real. Normalmente, liofilizar una vacuna requiere en primer lugar dispensar la vacuna solubilizada en viales de vidrio. Los viales a continuacion se tapan con tapones de caucho sueltos y se colocan sobre bandejas en estanteffas en una camara de criodesecacion o condensador. Es diffcil concentrar dosis muy elevadas de material de vacuna solubilizado en un volumen muy pequeno.

Como resultado, los viales usados normalmente en la criodesecacion de dosis de vacunas multiples contienen siempre un volumen relativamente grande de fluido. La criodesecacion eficaz requiere que el fluido que se va a liofilizar se exponga al vacfo con un area superficial grande. Por tanto, como solamente la parte superior del aglomerado congelado esta en contacto con el vacfo, las vacunas se criodesecan en botellas o viales de vidrio relativamente grandes, con una parte inferior amplia. Estos viales tienen algunas veces 5 cenffmetros de altura, en los que se necesitan 2 cm de altura mas para los tapones de caucho. Por consiguiente, la relacion del material del

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producto al espacio vado en el equipo de criodesecacion es extremadamente ineficaz, dando lugar a un procedimiento de produccion menos economico.

Otra desventaja de las composiciones convencionales para las vacunas criodesecadas formuladas que se van a introducir en viales de vidrio es que los tapones de caucho pueden impedir la transferencia libre de moleculas de agua desde el vial al condensador durante la liofilizacion. Esto puede aumentar la presion parcial de los gases en sublimacion en el interior del vial, disminuyendo por tanto la eficacia de la liofilizacion, asf como un aumento en el riesgo de colapso del material liofilizado. El vidrio impide tambien la transferencia termica que afecta adicionalmente la eficacia de la liofilizacion. Formular una vacuna que eliminara los viales y tapones de vidrio usando bandejas en la liofilizacion aumentana la eficacia. Ademas, la criodesecacion necesita mucho tiempo. Los componentes de vacuna se mantienen normalmente exactamente por debajo del punto de congelacion para disminuir el tiempo de sublimacion del agua. Sin embargo, un periodo de secado mas largo conduce siempre de forma inevitable a una disminucion del tttulo. Los viales de vidrio con sus tapones y cubiertas de aluminio se consideran generalmente como un estorbo. En terminos de produccion pueden representar mas del 50 por ciento del coste de la vacuna acabada. En situaciones de campo, el diluyente debe inyectarse en el vial y extraerse y diluirse la solucion resultante, si se necesita para el uso. Esto es un inconveniente no siempre adecuado para situaciones de campo, tal como pollos en un cobertizo. No es infrecuente para el funcionamiento en estas situaciones la autoinyeccion accidental durante este procedimiento. Otra desventaja mas del envasado y preparacion de dicha vacuna es que algo de la solucion concentrada permanecera en el vial. Por consiguiente, se acepta generalmente que es necesario incluir un exceso en el contenido para compensar la falta de homogeneidad y las perdidas de produccion, asf como las perdidas en las que se incurren durante los periodos de almacenamiento. Los viales de vidrio deben tambien destruirse de manera segura y pueden dar como resultado posibles riesgos para la salud y ambientales.

Como resultado, el uso de formulaciones de vacunas criodesecadas convencionales implica complicadas tecnicas de preparacion que son costosas y diffciles de implementar en el campo. Por consiguiente, dichas formulaciones de vacunas convencionales no son muy adecuadas para vacunaciones en pafses subdesarrollados donde las condiciones economicas y de campo no permiten costosas campanas, o en el caso de inmunizaciones masivas que pueden ser necesarias, tal como en la proteccion contra el armamento biologico, u otras catastrofes o epidemias potenciales.

Lo que se desea, por tanto, es una formulacion de vacuna que eliminen el uso de viales de vidrio para administracion que proporcionan una alternativa de envasado menos costosa y voluminosa. Lo que se desea tambien es una formulacion de vacuna y su uso que proporcione una precision de la dosificacion y una facilidad de uso mayores manteniendo la estabilidad, esterilidad, solubilidad y homogeneidad de las formulaciones de vacuna individuales y multiples. Una formulacion de vacuna y su uso mejorado para la inmunizacion que facilita que una administracion mas fiable, reproducible y eficaz pueda proporcionar las ventajas del mejor comportamiento en el campo, mayor seguridad, rentabilidad, menos residuos, y la mejora del cumplimiento de las normas ambientales.

Sumario de la invencion

De acuerdo con ello, es un objeto de la invencion proporcionar una composicion de vacuna y uso de la misma realizado disolviendo simplemente una forma solida estable densa de una vacuna liofilizada en un diluyente eliminando de esta forma la necesidad de viales de vidrio, permitiendo a la vez tener mucha mayor precision de dosificacion y facilidad de uso.

Un objeto adicional de la invencion es proporcionar una vacuna viva o inactivada liofilizada que se compacte, comprima o forme comprimidos como un solido estable denso que retenga su capacidad inmunizante potencial durante la preparacion y para la duracion requerida para una vida media suficiente de una vacuna comercial.

Un objeto adicional de la invencion es proporcionar una vacuna viva o inactivada liofilizada que se compacte, comprima o forme comprimidos como un solido estable denso que facilite la formulacion de preparaciones de vacuna in-ovo y usos de las mismas.

Un objeto adicional de la invencion es proporcionar una vacuna viva o inactivada liofilizada que se compacte, comprima o forme comprimidos como un solido estable denso que facilite el envasado de las vacunas en envases sin vial y usos de las mismas.

Otro objeto de la invencion es proporcionar una composicion de vacuna y su uso para la inmunizacion con mayor flexibilidad en las vacunaciones que se pueden formular y usos de las mismas.

Un objeto adicional de la invencion es proporcionar una composicion de vacuna y su uso para inmunizacion que reduzca la necesidad de un material de vacuna en exceso para compensar las imprecisiones inherentes en el tttulo de la vacuna envasada preparada de acuerdo con los procedimientos conocidos.

Otro objeto de la invencion es proporcionar una composicion de vacuna y su uso para inmunizacion que permita una mayor flexibilidad en los tipos de formulaciones de vacunas que se pueden administrar.

Otro objeto mas de la invencion es proporcionar una composicion de vacuna y su uso para inmunizacion que facilite la formulacion de una solucion de vacuna multidosis y usos de las mismas.

Otro objeto de la invencion es proporcionar una composicion de vacuna y su uso para una inmunizacion que facilite la inmunizacion masiva de seres humanos.

5 Otro objeto de la invencion es proporcionar una composicion de vacuna y su uso para una inmunizacion que sea adecuada y rentable para vacunaciones en pafses subdesarrollados donde las condiciones de coste y campo no permiten una preparacion complicada y campanas costosas.

Otro objeto mas de la invencion es proporcionar una composicion de vacuna y su uso para una inmunizacion susceptible de usar en defensa de armamento biologico, cuando es imprescindible la inmunizacion masiva.

10 Estos y otros objetos pueden conseguirse mediante la presente invencion, que se refiere a una composicion de vacuna estable que comprende al menos un componente antigenico liofilizado pretitulado y un adyuvante de disolucion, en el que la composicion de vacuna esta en la forma de un comprimido duro. Ademas, la presente invencion proporciona tambien su uso para la inmunizacion de un sujeto frente a una enfermedad que comprende las etapas de: disolver una composicion de vacuna con un diluyente para formar una solucion, en el que la 15 composicion de vacuna comprende al menos un componente antigenico liofilizado y un adyuvante de disolucion, en el que la composicion de vacuna esta en la forma de un comprimido duro, y en el que la composicion de vacuna proporciona proteccion frente a dicha enfermedad; y administrar la solucion resultante al sujeto en una cantidad eficaz para inmunizar al sujeto frente a la enfermedad.

La invencion en sus caractensticas concretas sera mas evidente a partir de la siguiente descripcion detallada 20 considerada con referencia a los ejemplos acompanantes. La siguiente descripcion continuara describiendo los problemas y soluciones ofrecidos por la presente invencion que se refieran a aplicaciones veterinarias. Sin embargo, no debe interpretarse lo que sigue de manera que se limite a lo anterior o no sea aplicable a la vacunacion humana.

En particular, la presente invencion proporciona las composiciones de vacuna, el envase y el uso de las mismas como se reivindica en las reivindicaciones 1 a 48.

25 Descripcion detallada de la invencion

La presente invencion proporciona una composicion de vacuna comprimida estable que comprende al menos un componente antigenico liofilizado y un adyuvante de disolucion.

En una realizacion preferida de la invencion, la composicion de vacuna esta en la forma de un comprimido duro.

En otra realizacion preferida de la invencion, la composicion se disuelve completa y rapidamente en agua.

30 En una realizacion preferida de la invencion, la composicion es esteril.

En una realizacion preferida de la invencion, el adyuvante de disolucion es un agente o una pareja de agentes efervescentes, un desintegrante, un tensioactivo, o un solubilizante.

En otra realizacion preferida de la invencion, la pareja efervescente comprende una sal y un acido.

En otra realizacion preferida de la invencion, la pareja efervescente es acido dtrico y la sal es un bicarbonato.

35 En otra realizacion preferida de la invencion, la composicion de vacuna comprende un aglutinante y un lubricante.

En otra realizacion preferida de la invencion mas, la composicion se desintegra completa y rapidamente en agua.

En otra realizacion de la invencion, el material activo es un liofilizado pretitulado que se mantiene en atmosfera de nitrogeno seco por debajo de la temperatura de congelacion antes del uso.

En otra realizacion de la invencion, el componente liofilizado comprende hasta un 80 % en peso de la composicion.

40 En otra realizacion preferida de la invencion, la composicion de vacuna se caracteriza por la completa disolucion en menos de 80 segundos tras el contacto con un diluyente.

En otra realizacion preferida de la invencion, se produce la disolucion completa de la composicion de vacuna a una relacion diluyente a composicion de entre 0,5 ml de diluyente por 200 mg de composicion y 100 ml de diluyente por 400 mg de composicion.

45 En otra realizacion preferida de la invencion la estabilidad de la composicion de vacuna se caracteriza por una perdida de tttulos no mayor que la diferencia entre 109,7 DIE50/ml y 109,2 DlE50/ml despues de 5 dfas a 37 °C.

En otra realizacion preferida de la invencion, la estabilidad de la composicion de vacuna de la composicion se caracteriza por una perdida de tttulos no mayor que la diferencia entre 109,7DIE50/ml and 109,3DIE50/ml despues de 9

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En otra realizacion preferida de la invencion mas, el componente antigenico de la composicion de vacuna es un virus completo, una bacteria completa o un microorganismo completo.

En otra realizacion preferida de la invencion, el componente antigenico de la composicion de vacuna es una bacteria viva o un virus vivo.

En una realizacion preferida de la invencion, la composicion de vacuna comprende un indicador de la presencia del componente antigenico.

En una realizacion preferida de la invencion, el indicador es un colorante.

La presente invencion proporciona ademas una composicion de vacuna estable que comprende al menos un componente antigenico liofilizado y un adyuvante de disolucion, en el que la composicion de vacuna esta en forma de un comprimido duro y el componente antigenico comprende un lipopolisacarido o una protema, que se produce tanto naturalmente como de forma recombinante o modificada.

En otra realizacion preferida de la invencion, el componente antigenico es un virus vivo seleccionado entre el grupo que consiste en: el virus o la bacteria de la enfermedad de Newcastle, la cepa VH del virus de la enfermedad de Newcastle, el virus de la bursitis infecciosa, el virus de la enfermedad de Gumboro, el virus de la viruela aviar, el virus de la laringotraqueftis, el virus de la bronquitis infecciosa de las aves de corral, el virus de Gumboro Winterfield, la bronquitis infecciosa (lB-H120), el virus de la viruela ovina, el virus de la peste bovina, esporas de carbunco, Salmonella SPP, E. coli, o una premezcla o uno o mas de los anteriores que se producen tanto naturalmente, como de forma recombinante o modificada.

En otra realizacion mas de la invencion, el componente antigenico se selecciona entre el grupo que consiste en: esporas del carbunco, Salmonella SPP, E. coli, o una premezcla de uno o mas de los anteriores, que se producen tanto naturalmente, como de forma recombinante o modificada.

En otra realizacion preferida de la invencion mas, el componente antigenico es un virus vivo y la composicion comprende ademas anticuerpos neutralizantes contra el virus.

La presente invencion proporciona ademas el uso de una solucion de vacuna preparada anadiendo un diluyente a una composicion de vacuna para formar una solucion, en el que la composicion de vacuna comprende al menos un componente antigenico liofilizado y un adyuvante de disolucion, en el que la composicion de vacuna esta en forma de un comprimido duro, en la preparacion de una composicion para inmunizar un sujeto contra la enfermedad.

En una realizacion preferida de la invencion, la etapa de disolucion del uso se caracteriza ademas por la disolucion completa de la composicion de vacuna.

En otra realizacion preferida de la invencion mas, se produce la disolucion completa durante el paso de disolucion en una relacion de diluyente a composicion de entre 0,5 ml de diluyente por 200 mg de composicion y 100 ml de diluyente por 400 mg de composicion.

En otra realizacion preferida de la invencion, la etapa de disolucion se caracteriza ademas por la disolucion completa en menos de 80 segundos tras el contacto con un diluyente.

En otra realizacion de la invencion, la solucion es para administrarse mediante inyeccion.

En otra realizacion de la invencion, la solucion es para administrarse pulverizando con un aerosol formado a partir de la solucion.

En otra realizacion mas de la invencion, la solucion es para administrarse en forma de colirios.

En otra realizacion mas de la invencion, la solucion es para administrarse mediante ingestion oral.

En un uso preferido de la invencion, el sujeto que se va a tratar es un animal aviar y la enfermedad se selecciona entre el grupo que consiste en la enfermedad de Newcastle, bursitis infecciosa, viruela aviar, laringotraqueftis, bronquitis infecciosa de aves de corral.

En otra realizacion preferida de la invencion, la solucion es para administrarse al sujeto in-ovo.

La presente invencion proporciona tambien un envase que comprende la composicion de vacuna que tiene al menos un componente antigenico liofilizado y un adyuvante de disolucion, en el que la composicion de vacuna esta en la forma de un comprimido duro o comprende ademas un indicador de la presencia del componente antigenico.

En una realizacion preferida de la invencion, la composicion es un envase de tipo blister.

En otra realizacion preferida de la invencion, el envase es una jeringuilla esteril.

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La presente invencion proporciona tambien una jeringuilla esteril que comprende una composicion de vacuna compactada, en la que la composicion de vacuna comprende al menos un componente antigenico liofilizado y un adyuvante de disolucion.

En una realizacion de la invencion, la composicion de vacuna compactada de la jeringuilla esteril es una composicion comprimida.

En una realizacion preferida de la invencion, la composicion de vacuna comprimida de la jeringuilla esteril esta en forma de un comprimido duro.

La presente invencion proporciona ademas el uso de una solucion de vacuna preparada anadiendo un diluyente a una jeringuilla esteril que comprende una composicion de vacuna compactada, en la que la composicion de vacuna comprende al menos un componente antigenico liofilizado y un adyuvante de disolucion, o en el que la composicion de vacuna compactada de la jeringuilla esteril se caracteriza ademas como una composicion comprimida, o en el que la composicion de vacuna comprimida esta en forma de un comprimido duro, para la preparacion de una composicion para inmunizar un sujeto contra una enfermedad.

Las soluciones resultantes de la disolucion de la composicion de vacuna de la presente invencion pueden administrarse mediante cualquier medio adecuado. El procedimiento de inmunizacion de un sujeto contra una enfermedad de acuerdo con la presente invencion puede emplear numerosos procedimientos para administrar una solucion lfquida formada por la composicion de vacuna. Los procedimientos ilustrativos de administracion son la inyeccion intramuscular, inyeccion subcutanea, inyeccion intravenosa, inyeccion intraperitoneal, gotas oculares, mediante agua corriente, aerosol, o pulverizacion nasal. Cuando el animal que se va a tratar es un ave, el ave puede ser un polluelo recien nacido (es decir, de aproximadamente un dfa de edad tras la eclosion), un ave adolescente o un ave adulta. La vacuna de la presente invencion puede ser util para la administracion de aves in ovo, como se describe en la patente de Estados Unidos N.° 4.453.630 de Sharma.

Se entiende que la composicion de vacuna pretitulada criodesecada (liofilizada) de la presente invencion es una preparacion compuesta por al menos un componente de vacuna antigenico criodesecado pretitulado, excipientes y, opcionalmente diversos aditivos que se han compactado o comprimido en una forma densa.

Tal como se usa en el presente documento, "denso" se refiere a la composicion de vacuna que tiene una densidad mayor de 1,0 g/cc. Normalmente, la densidad de la composicion de vacuna sera mayor de 1,5 g/cc. Tfpicamente, el intervalo de densidad para la composicion de vacuna estara entre aproximadamente 1,5 g/cc a 2,5 g/cc.

La composicion de vacuna puede compactarse, comprimirse, o estar en forma de un comprimido duro.

Tal como se usa en el presente documento, "compactada" se refiere a una composicion de vacuna que tiene una densidad mayor de 1,0 g/cc, pero una dureza no medible, tal como se mide en unidades Strong-Cobb (SCU) y se ensayo la dureza en un analizador de fuerza de comprimidos ERWEKA Modelo TBH20.

Tal como se usa en el presente documento, "comprimida" se refiere a una composicion de vacuna que tiene una dureza de al menos 2,0 SCU y " un "comprimido duro" se refiere a una composicion de vacuna en la forma de comprimido u otra forma densa que tenga una dureza de al menos 3,0 SCU.

Los comprimidos compactados, comprimidos y duros de la composicion de vacuna pueden prepararse en un equipo MANESTy F3 automatizado con un unico punzon de 12 mm y bisel plano o con punzones concavos normalizados de 6 mm.

La composicion de vacuna en la forma de comprimido duro se preparo a presiones de un maximo de 4 toneladas. Se ensayaron los comprimidos para la dureza en un analizador de fuerza de comprimidos ERWEKA Modelo TBH20 como se ha descrito anteriormente, y se encontro que todos teman una dureza mayor de 3,0 SCU.

Se entiende que el comprimido clasico asociado normalmente con agentes terapeuticos es lo que se entiende por un "comprimido". Sin embargo, se entiende que esta prevista cualquier forma densa compactada o comprimida, incluyendo aquellas que tienen uso menos frecuente en el campo farmaceutico. Por ejemplo, las "briquetas" grandes que senan convenientes, asf como la aplicacion final requieren un gran volumen de material.

Se entiende que una preparacion que se disgrega o disuelve "completa" y "rapidamente" en un diluyente es una que puede hacerlo en agua pura incluso si el uso previsto no es agua pura, sino mas bien con una solucion, por ejemplo, salina o para esta materia un vehfculo no acuoso.

Por "completamente disuelto" se entiende que un componente no soluble se deja sin disolver. Por "disgregado o disuelto rapidamente" se entiende que la disgregacion o disolucion se completa en aproximadamente unos pocos minutos o menos cuando se emplea un gran volumen de agua para un volumen pequeno de composicion de vacuna liofilizada comprimida, por ejemplo, 100 ml de agua para un comprimido efervescente de 400 mg. Se aumenta el tiempo cuando los volumenes de diluyente se disminuyen de forma comparable. De esta manera, el mismo comprimido puede requerir 70 segundos con un volumen de agua de 10 ml y 80 segundos en 2 ml de agua.

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El tiempo de disgregacion o disolucion citado anteriormente es el tiempo que tarda la disolucion o disgregacion de un comprimido cuando se introduce en una cantidad medida de agua a temperature ambiente sin agitacion.

Por "estable" se entiende que las composiciones de la presente invencion mantendran su capacidad inmunizante (potencial) durante la preparacion y para la duracion requerida durante la vida media de una vacuna comercial.

Como se demostrara por referencia a los siguientes ejemplos, una composicion de vacuna y un procedimiento de inmunizacion de acuerdo con la presente invencion tienen numerosas ventajas como se describe en el presente documento.

El uso de acuerdo con la presente invencion se ilustra generalmente como sigue para la preparacion de una composicion de vacuna que contiene 1000 dosis de componente de vacuna. La solucion del componente de vacuna se liofiliza en bandejas. Se pulveriza el material seco. Se determina el tftulo de una muestra mezclada homogeneamente tras criodesecacion mientras que el liofilizado se mantiene bajo atmosfera de nitrogeno en un envase hermetico a -20 °C. Si se determina que el tftulo del material liofilizado es de 625 dosis por 100 mg, es suficiente pesar 160 mg de este material por preparacion de vacuna comprimida para llegar exactamente al tftulo requerido. El material se mezcla a continuacion con aditivos opcionales y/o funcionales y la preparacion se comprime o se forman comprimidos. Las preparaciones de vacunas criodesecadas comprimidas pueden envasarse mediante cualquiera de los procedimientos conocidos por las personas expertas en la materia y/o se describen en el presente documento.

El termino excipiente un termino que abarca todos los diluyentes o vetftculos utilizados en la formulacion de la composicion de vacuna. Los excipientes pueden incluir: diluyentes o cargas, aglutinantes o adhesivos, adyuvantes de la disolucion, lubricantes, antiadherentes, agentes deslizantes o promotores de flujo, colorantes, aromas, edulcorantes y adsorbentes.

Espedficamente, las cargas de comprimidos son sustancias que comprometen el volumen del comprimido y actuan principalmente como un transportador. Las cargas de comprimido tfpicas incluyen, pero no de forma limitativa, sulfato de calcio, fosfato de calcio, carbonato de calcio, almidon, almidones modificados (carboximetil almidon, etc.), celulosa microcristalina, lactosa, sacarosa, dextrosa-manitol y sorbitol.

Los niveles de carga del comprimido son de aproximadamente 0 % a 90 % en peso del comprimido.

Los aglutinantes actuan como el "pegamento" que mantiene los polvos juntos para formar granulos. Los aglutinantes incluyen, pero no de forma limitativa, poftmeros naturales tales como almidones o gomas acacia, tragacanto y gelatina o poftmeros sinteticos tales como PVP y metilo, etilo e hidroxipropilcelulosa.

Los niveles de aglutinantes son de aproximadamente 0 % a 20 % de la composicion.

Los adyuvantes de la disolucion promueven la disolucion de la composicion de vacuna. Los ejemplos tfpicos incluyen, pero no de forma limitativa, agentes efervescentes, disgregantes, tensioactivos y solubilizantes.

Los disgregantes producen que los comprimidos preparados por compresion se resquebrajen. Los ejemplos tfpicos incluyen, pero no de forma limitativa, almidon, celulosa microcristalina, almidon de lana purificado, acido algmico, almidon glicolato de sodio, goma guar, polivinilpirrolidona reticulada (PVP), resina de intercambio ionico y celulosas tal como metilcroscarmelosa de sodio, carboximetilsodio e hidroxipropilmetilsodio.

Los niveles de adyuvantes de disolucion son de aproximadamente 1 % a 95 % en peso de la composicion.

Los lubricantes reducen la friccion entre el material que se va a comprimir y la pared de la matriz durante la compresion y la eyeccion. La mayona de lubricantes son insolubles en agua e incluyen estearatos (magnesio, calcio y sodio), acido estearico, talco y ceras. Los lubricantes solubles en agua incluyen pEg, benzoato de sodio, oleato de sodio, acetato de sodio, lauril sulfato de sodio y lauril sulfato de magnesio.

Los niveles de lubricantes son de aproximadamente 0 % a 5 % en peso de la composicion.

Se anaden colorantes para ayudar a identificar los tipos de formulaciones de vacunas tales como en la forma de comprimidos con fines esteticos y funcionales, por ejemplo y no como limitacion a la presente invencion, los colorantes divulgados en los Ejemplos A a D tomados de la patente de Israel N.° 46189.

Los niveles de colorantes son aproximadamente<1 % de la formulacion.

Las composiciones de vacunas de la presente invencion pueden comprimirse de acuerdo con procedimientos conocidos por los expertos en la materia, tal como se describe en las Pharmaceutical Dosage Forms, Tablets, 2a. Ed. 1989, Vols 1, 2, 3, Editores H. A. Lieberman, L. Lachman, J. B. Schwartz.

En una realizacion preferida, la composicion de la presente invencion es un comprimido duro preparado que contiene un agente efervescente como adyuvante de disolucion. Como apreciaran los expertos en la materia, el comprimido efervescente debe contener un componente basico y un componente acido tal como una pareja

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efervescente, de tal manera que, tras la disolucion, se producen las reacciones adecuadas para generar dioxido de carbono y acido carbonico. Los componentes efervescentes adecuados incluyen la familia de carbonatos de compuestos basicos y compuestos acidos inorganicos u organicos.

Entre la familia de carbonatos de compuestos basicos, los agentes efervescentes preferidos para el uso en las composiciones de la presente invencion son carbonato de sodio, bicarbonato de sodio, carbonato de glicina, carbonato de potasio, bicarbonato de potasio, dihidrogenocitrato de potasio, y carbonato de calcio. Un compuesto basico mas preferido es bicarbonato de sodio.

Los componentes acidos preferidos para uso en las composiciones de la presente invencion son acido cftrico, acido adfpico, acido tartarico, acido maleico, acido borico, acido benzoico, acido hidroxibenzoico, acido metoxibenzoico, acido mandelico, acido malonico, acido lactico, acido piruvico, acido glutarico, acido aspartico, acido clorhftdrico, acido oxalico, acido salidlico, acido sucdnico, y acido acetico. Un componente acido efervescente mas preferido es acido cftrico.

Ademas de los ingredientes de comprimidos efervescentes basicos y acidos descritos anteriormente, la composicion de comprimido de la presente invencion puede contener tambien otros excipientes convencionalmente empleados.

Las composiciones de comprimidos de la presente invencion se obtienen utilizando procedimientos de empastillado conocidos en la materia. Generalmente, los procedimientos de empastillado utilizados para la presente invencion pueden resumirse como sigue: los ingredientes se tamizan, se mezclan y se comprimen directamente en comprimidos del peso, tamano y dureza requeridos en una prensa de comprimidos MANESTY F3.

Las composiciones de comprimidos efervescentes de la presente invencion pueden disolverse en agua corriente o en una solucion salina simple.

Los componentes de vacuna antigenica son aquellos componentes que estimulan espedficamente la respuesta inmunitaria contra el antfgeno o antfgenos a partir de los cuales se derivaron los componentes de la vacuna. Dichos componentes pueden originarse a partir de un virus o microorganismo incluyen productos recombinantes, por ejemplo, un lipopolisacarido antigenico y una protema antigenica, o, por ejemplo, dos protemas antigenicas diferentes. Pueden comprender tambien partes antigenicas de la protema o polisacarido. Estos componentes se denominan generalmente componentes de la subunidad. En algunos casos, el componente de vacuna comprende el virus o microorganismo completo incluyendo los productos recombinantes. El componente de vacuna puede ser por ejemplo una bacterina, o una bacteria o virus atenuado vivo, una bacteria o virus inactivo, o una bacteria o virus muerto incluyendo los productos recombinantes y modificados de otra forma. Preferentemente, un componente de vacuna es una bacteria o virus vivo (que incluye el producto recombinante modificado no virulento o parcialmente virulento). Los ejemplos incluyen, pero no de forma limitativa, bacterias Salmonella, virus de la enfermedad de New Castle, virus de la bursitis infecciosa (Gumboro), virus de la bronquitis infecciosa, el virus de la pseudorrabia o la vacuna de esporas de carbunco.

Las vacunas combinadas son vacunas que comprenden diversos componentes de vacuna. Las vacunas combinadas pueden comprender tambien componentes antigenicos derivados de dos o mas virus o microorganismos diferentes.

Son posibles tambien combinaciones mas complejas. De esta manera, las vacunas de uno de los tipos descritos anteriormente, asf como sus mezclas, se denominan vacunas combinadas. Estas pueden contener tambien cualesquiera de los adyuvantes conocidos.

Se entiende que un "envase" es cualquier envase util para el almacenamiento de una preparacion de vacuna comprimida estable.

El envase puede ser, por ejemplo, y no de manera limitativa, un recipiente de vidrio o plastico (por ejemplo, un polietileno de alta densidad) utilizado generalmente para envasar y almacenar comprimidos. La adicion de la preparacion de vacuna criodesecada comprimida estable a un diluyente para disolver homogeneamente la preparacion sena suficiente para hacer que la vacuna este lista para el uso. Otra forma de envasar las preparaciones de vacunas criodesecadas comprimidas de la invencion sujeto es un envase de tipo blister. Un ejemplo de un envase de tipo blister son laminas de plastico, con hileras de vanos (bandejas) que contienen las preparaciones y se precintan termicamente con una cubierta de hoja de aluminio en atmosfera de nitrogeno seco. Otra variedad de envase de tipo blister util para los productos sensibles son los denominados bftsteres de aluminio/aluminio donde tanto la bandeja como la cubierta se basan en aluminio o estratificados de aluminio con diversos plasticos. Esto evitana el uso de viales de vidrio caros y que requieren espacio, utilizados generalmente para el envasado y almacenamiento de vacunas para las cuales, el usuario eventual no tiene generalmente uso.

La presente invencion posibilita anadir una o mas composiciones de vacuna criodesecadas comprimidas directamente a partir de un envase de tipo blister a, por ejemplo, un cubo que se vaya a usar para el agua de bebida o a un sistema de pulverizacion en aerosol para asegurar la vacunacion satisfactoria. Esto se lleva a cabo usualmente en la instalacion, por ejemplo, en un gallinero. Podna conseguirse tambien la vacunacion veterinaria por nebulizacion, cepillo con venteo, perforacion, pulverizacion corporal completa o como gotas oculares. La solucion de

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vacuna obtenida de manera similar puede usarse alternativamente para la inmunizacion in-ovo de embriones como se describe en las patentes de Estados Unidos numeros 5.397.569 y 5.871.748.

Resulta evidente que cualquier dispositivo que se pueda usar para contener solidos comprimidos se puede usar en la invencion. Un diluyente puede ser solo agua, o por otra parte puede ser una mezcla compleja de tampones y adyuvantes. Esto dependera principalmente de que aditivos se han anadido a la solucion antes de la liofilizacion o la preparacion antes de la compresion.

Los procedimientos de criodesecacion conocidos dan como resultado una torta que comprende el componente o componentes de vacuna en un vial. Como se ha mencionado, este procedimiento requiere mucho espacio y es laborioso. Si el componente o componentes de vacunas antigenicas se criodesecan en bandejas de solucion, entonces, se utiliza durante el procedimiento toda la superficie de las placas fnas de la maquina de criodesecacion. Adicionalmente, si se produce el colapso, o se produce cualquier otro problema para esta materia durante el procedimiento de criodesecacion, el material puede recuperarse facilmente. Este no es el caso si el material se precarga en viales de vidrio antes de la liofilizacion. Adicionalmente, debido a que no estan implicados viales que requieren altura en esta parte del procedimiento, las placas fnas pueden apilarse a una densidad elevada. Como resultado, la capacidad de los criodesecadores aumenta sustancialmente, quedando limitada practicamente solo por la capacidad del condensador. Como corolario, podnan utilizarse muchos criodesecadores mas pequenos en la presente invencion para conseguir el mismo resultado que cuando se usan los viales en secadores mucho mas grandes.

Por tanto, en una realizacion preferida, la composicion de vacuna se comprime a partir de un material antigenico liofilizado esteril que se ha secado en bandejas, y a continuacion se desmenuza a polvo y se premezcla con aditivos esteriles para ayudar en la compresion del comprimido y eventual disolucion. La composicion de vacuna esteril se envasa a continuacion bajo atmosfera de nitrogeno seco en un envase esteril de tiras de blister con una barrera fuerte a la humedad y el gas.

En una realizacion preferida, el material liofilizado es un virus atenuado vivo.

En otra realizacion preferida, una premezcla que comprende una combinacion de componentes de virus secos anteriormente se comprime en una unica preparacion junto con aditivos para ayudar a la disolucion y opcionalmente aquellos adyuvantes deseados para la inoculacion.

Si se requiere una vacuna combinada, las ventajas ofrecidas por la presente invencion son incluso mas pronunciadas. Basta anadir simplemente suficiente liofilizado pretitulado de cada tipo de componente de vacuna antigenico a la preparacion antes de la compresion para conseguir una vacuna combinada con cada componente en una dosis muy precisa.

Al mismo tiempo, la presente invencion ofrece una solucion al problema de la gran capacidad de almacenamiento necesaria para almacenar todas las posibles variantes de, por ejemplo, una vacuna de tres o cuatro componentes.

En vez de mezclar los diversos componentes antes de la criodesecacion como puede requerirse para la criodesecacion de las vacunas combinadas, cada componente se criodeseca por separado. De esta manera los diversos componentes se pueden almacenar por separado. Cuando sea necesario, cada combinacion deseada se prepara facilmente premezclando la cantidad adecuada de material liofilizado de cada componente deseado en una preparacion como se describe en el presente documento, y a continuacion comprimiendo y envasando la mezcla como se describe.

Esto permite por ejemplo, en el caso de una vacuna combinada de 4 componentes, almacenar solo cuatro recipientes, conteniendo cada uno solo el material liofilizado de un tipo espedfico de vacuna para componer cualquier preparacion de vacuna individual o combinada que se requiera. Los procedimientos previos requenan 15 recipientes diferentes, comprendiendo cada uno un componente o mezcla prefabricado.

En otra realizacion preferida mas, el recipiente de vacuna comprende una tira de blister esteril que contiene formas solidas, tales como comprimidos esteriles preparados por compresion procedentes de material liofilizado de uno o mas componentes de vacuna premezclados con un adyuvante de disolucion esteril en una pareja efervescentes (por ejemplo, bicarbonato de sodio y acido cftrico) un aglutinante esteril (por ejemplo, polivinilpirrolidona) y un lubricante esteril (por ejemplo, estearilfumarato de sodio, estearato de magnesio). Estas preparaciones de componentes individuales o multiples pueden utilizarse a continuacion para preparar facilmente in situ una solucion de vacuna de tttulo conocido. Lo anterior son ejemplos para el adyuvante de disolucion, el aglutinante y el lubricante, y no son para tomarse como una limitacion para la composicion de vacuna de la presente invencion.

En otra realizacion mas, la composicion de vacuna y su uso para la inmunizacion comprende una composicion de vacuna con componentes derivados de dos o mas componentes antigenicos. Una vacuna basada en componentes de multiples componentes antigenicos tiene la ventaja que una administracion de dicha vacuna basta para inducir la proteccion frente a multiples enfermedades. Debe entenderse que para cada virus o microorganismo, se pueden incluir cualquiera de varios componentes de vacuna antigenicos diferentes.

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En una reaccion mas adicional, los componentes antigenicos de cada vacuna pueden mezclarse en relaciones exactas para formar un complejo requerido para la inmunizacion in-ovo tales como tales como la enfermedad de Marek in vivo, vacunas de NVD y Gumboro. Son por tanto tambien posibles preparaciones de vacunas multicomponentes in-ovo. La forma farmaceutica para dicha combinacion puede conseguirse mediante la presente invencion comprimiendo una premezcla de los componentes antigenicos criodesecados para cada enfermedad, y los anticuerpos con los adyuvantes de formacion de comprimidos. Dicha preparacion podna utilizarse a continuacion para conseguir el complejo del factor de inmunizacion del virus deseado in situ mediante disolucion de la preparacion en el vetnculo requerido y bajo las condiciones estipuladas directamente antes de la inoculacion in-ovo.

Usualmente, el recipiente de vacuna puede contener entre 1 y 10.000 dosis o mas de vacuna. Son comunes los recipientes de dosis individuales para la vacunacion individual, para uso humano y veterinario.

La vacuna de poliovirus humano, la vacuna tifoide criodesecada viva humana o la vacuna de parvovirus canino se formulan normalmente como vacunas de dosis individuales. Deben entenderse, que para una dosis individual de vacuna, se aplicanan completamente procedimientos de formulacion similares a los descritos para las vacunas multidosis.

Para la vacunacion de galpones de pollos recien salidos, es una practica comun utilizar un recipiente de vacuna de 10.000 dosis para una vacunacion masiva frente al virus de la bronquitis infecciosa o NDV. Para la vacunacion de animales de una granja grande tales como ganado, frente, por ejemplo, la rinotraqueftis bovina infecciosa, o el virus paragripal, se usan normalmente recipientes de vacuna con 10 dosis.

Una de las ventajas de las composiciones de vacuna preparadas de acuerdo con la presente invencion es que los adyuvantes de disolucion que pueden haber sido incompatibles en la solucion criodesecada, pueden incluirse tras la liofilizacion. Esto acelera el procedimiento de administracion. Se ha encontrado de forma inesperada que el uso de acido cftrico como parte de una pareja efervescente, que se esperaba que fuera perjudicial para los virus atenuados vivos, no tema impacto significativo sobre los tftulos.

Debe ser tambien evidente que la integridad de la barrera de humedad para que el recipiente tenga un efecto significativo con formulaciones de este tipo y deben tenerse en cuenta las etapas para asegurar que se forma una barrera de humedad eficaz en el envasado. Esto es particularmente verdadero cuando se emplea un envase de tiras de blister y cuando los aditivos seleccionados son potencialmente desestabilizantes cuando estan humedos, como es el caso con acido cftrico.

La presente invencion proporciona tambien el uso de una composicion de vacuna en la forma de un comprimido duro, en el que la composicion de vacuna comprende al menos un componente antigenico liofilizado y un adyuvante de disolucion, que se ha disuelto con un diluyente para formar una solucion para inmunizar un sujeto frente a una enfermedad.

De forma alternativa, los liofilizados pueden comprender componentes de vacuna antigenicos que se derivan de dos o mas virus o microorganismos.

Ademas, la presente invencion proporciona una composicion de vacuna en la que la composicion de vacuna y un diluyente estan contenidos juntos en un envase. Dicha realizacion permite un procedimiento de inmunizacion donde se puede producir una etapa de disolucion para formar una vacuna ftquida para la administracion in situ en el campo.

Debe entenderse que un envase de vacuna o envase que contiene la composicion de vacuna estable criodesecada puede ser cualquier envase util de una vacuna. En una forma simple, el envase de vacuna comprende un recipiente de vacuna que comprende los componentes de vacuna, envasados juntos con las instrucciones en una caja. En una forma mas compleja de un envase de vacuna, el recipiente de la vacuna comprendena adicionalmente un diluyente y una jeringuilla. En una realizacion adicional, la vacuna liofilizada comprimida se envasa en condiciones esteriles en una jeringuilla precintada, donde se puede producir de esta manera la disolucion de la vacuna en el interior de la jeringuilla esteril. De esta manera, el tamano del lote de las jeringuillas precargadas no es dependiente del espacio ocupado por las jeringuillas en el liofilizador.

Los siguientes ejemplos ilustran la preparacion y la potencia de la composicion de vacuna de la presente invencion cuando se usa para inmunizar un sujeto frente a diversas enfermedades infecciosas. Se presentan tambien las evaluaciones de la estabilidad con un analisis del tftulo de una forma de comprimido criodesecado comprimido para diversas formulaciones de vacuna.

Los ejemplos se presentan para ilustrar y explicar adicionalmente la presente invencion y no deben considerarse como limitantes de ninguna forma. Salvo que se indique otra cosa en los ejemplos y en otra parte en la memoria descriptiva y en las reivindicaciones, todas las partes y porcentajes son en peso. Las temperaturas estan en grados centfgrados.

Ejemplo 1

1.1 Preparacion de comprimidos que comprenden la cepa VH del virus de la enfermedad de Newcastle atenuado vivo (denominado a partir de ahora NDV-VH)

Se inocularon huevos exentos de patogenos espedficos (SPF) fertiles con NDV y se incubaron de acuerdo con 5 procedimientos conocidos para la propagacion de virus NDV en huevos.

Se recogio fluido amniotico alantoide (AAF) y se purifico mediante centrifugacion a 4000 g durante 20 min.

Se llevo a cabo la liofilizacion en viales completamente de acuerdo con los procedimientos normalizados conocidos.

Se prepararon los comprimidos de la siguiente manera:

A 13,2 g de liofilizado pulverizado se anadieron:

10 60 g de bicarbonato de sodio

42 g de acido cftrico anhidro

4,2 g de polivinilpirrolidona K-30 0,3 g de estearato de magnesio

A continuacion se mezclaron los ingredientes y se perforaron los comprimidos cada uno con un peso de 400 mg.

15 Cada comprimido resultante preparado de esta manera contema 44 mg del liofilizado.

1.2 Analisis de comprimidos

Se evaluo el tftulo en huevos SPF de un muestreo aleatorio de los comprimidos y se comparo con la cantidad ajustada del liofilizado en los viales.

NDV-VH/comprimido: 109,7 DIE50*

NDV-VH/vial: 109,6 DIE50

*Unidades de 50 dosis por huevo infeccioso.

20 Cuando se anadio un comprimido a 100 ml de agua, se completo la disolucion en menos de un minuto, es decir, no habfa trazas visibles de solidos a simple vista.

Cuando se anadio un comprimido a 10 ml de agua, se completo la disolucion en 70 segundos.

Cuando se anadio un comprimido a 2 ml de agua, se completo la disolucion despues de 80 segundos.

En 1 ml de agua, aunque se consiguio una disolucion completa, no se encontro que la naturaleza efervescente de 25 este comprimido estuviera implicada en la disolucion completa, que tardo tardado aproximadamente 4 minutos.

1.3 Envasado y estabilidad

Los comprimidos se envasaron en tiras de blister de cloruro de polivinilo (PVC) y se ensayo la estabilidad a 37 °C y se encontro que era relativamente estable en periodos de 5, 7 y 9 dfas.

Dfas a 37 °C: cero 5 7 9

comprimido de NDV-VH: 109,7 109,2 109,3 109,4

30 El almacenamiento a 4 °C no produjo cambios apreciables en el tftulo y el color de los comprimidos despues de nueve meses.

Meses a 4 °C: cero 3 9

comprimido de NDV-VH: 109,7 10IUJ 109,3

Vial de NDV-VH: 109,6 109,6 109,3

Los tftulos proporcionados son en unidades de EID50 por comprimido o vial calculados para la misma cantidad de material activo.

1.4 Ensayo de potencia del NDV-VH comprimido en polios

Grupo: NDV-VH DIE50/ Dosis HI a las 3 semanas despues de la vacunacion Mortalidad tras el estimulo

A: comprimido 1 10^ 9,3 2/18

B: comprimido 2 1063 9,2 1/20

C: vial 10^ 9,2 2/19

D: no vacunados -- 1,2 10/10

HI = Unidades de inhibicion de hemaglutinacion. A: Se disolvio un comprimido de NDV-VH en 20 ml de agua destilada esteril y se utilizaron 0,02 ml para vacunar

cada uno de los 18 pollos (4 semanas de edad, mantenidos en aisladores) con colirios. B: Se vacuno de manera similar otro grupo de pollos con la vacuna VH comprimida: disuelta en 40 ml de agua

destilada esteril. C: Se disolvio un vial de NDV-VH en agua destilada esteril para dar la misma concentracion de virus que en A.

D: Control sin vacunar.

En las tres semanas despues de la vacunacion se extrajo sangre de las aves para la titulacion de los anticuerpos mediante el ensayo de inhibicion de la hemaglutinacion (HI) y se estimularon todos los grupos con NDV velogenico 5 viscerotropico proporcionado por v^a i.m. Inyeccion a 105,3 DIE50 /ave en el Kimron Veterinary Institute (The Israeli Veterinary Services).

Los resultados de los ensayos indican que se esta proporcionado una buena proteccion a los pollos por todas las preparaciones de vacuna ensayadas.

Ejemplo 2

10 2.1 Preparacion de comprimidos que comprenden NDV-VH

Se inocularon huevos SPF fertiles con NDV y se incubaron de acuerdo con procedimientos conocidos para la propagacion de virus NDV en huevos.

Se recogio el AAF que se purifico mediante centrifugacion a 4000 g durante 20 min. Se llevo a cabo la liofilizacion completamente de acuerdo con los procedimientos normalizados conocidos.

15 El virus NDV-VH se liofilizo en una bandeja. El polvo seco se precinto en una bolsa de polipropileno doble esteriles en condiciones de humedad baja y se mantuvo a -20 °C. Se produjeron comprimidos efervescentes que conteman cantidades crecientes de polvo seco. Se prepararon comprimidos de acuerdo con el procedimiento descrito en el ejemplo 1.

Composicion: p (g) p (g) p (g) p (g)

VH liofilizado en bandejas: 1,25 (2,7 %) 2,5 (5,3 %) 5,0 (10,1 %) 10,0 (20,3 %)

Bicarbonato de sodio: 25,0 25,0 25,0 22,0

Acido cftrico anhidro: 17,5 17,5 17,5 15,4

Polivinilpirrolidona K-30: 1,75 1,75 1,75 1,75

Estearato de magnesio: 0,12 0,12 0,12 0,12

Peso del comprimido: 0,5 0,45 0,38 0,36

20 2.2 Analisis de los comprimidos

Se obtuvieron tttulos de NDV-VH (DIE50) en los comprimidos mediante titulaciones en huevos SPF.

Porcentaje de comprimido liofilizado: 2,7 5,3 10,5 20,3

NDV-VH/comprimido: 10B,UU 108,25 108,75 10a,m

Se obtuvo una relacion lineal satisfactoria entre las concentraciones de material activo y los tftulos de virus.

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Cuando se anadio un comprimido a 100 ml de agua, se completo la disolucion en menos de un minuto, es decir, no hada trazas visibles de solidos a simple vista.

2.3 Envasado y estabilidad

Se introdujeron los comprimidos en jeringuillas que se envasaron en bolsitas de aluminio estratificado. Se preparo una solucion inyectable succionando el diluyente para la inyeccion en la jeringuilla, seguido por una disolucion completa del comprimido. Se utilizaron las soluciones inyectables resultantes directamente para la vacunacion individual, o de forma alternativa para la vacunacion multiple tras la dilucion adicional en un recipiente mas grande. A continuacion se aplico una jeringuilla automatica.

EJEMPLO 3

3.1 Preparacion de comprimidos que contienen NDV-VH que comprenden anticuerpos dirigidos contra el virus de Newcastle (NDA) para la vacunacion in-ovo

Se recogio el AAF y que se centrifugo a 4000 g durante 20 min. Se llevo a cabo la liofilizacion completamente de acuerdo con los procedimientos normalizados conocidos y se titulo el material liofilizado. Se determinaron las cantidades deseadas de NDV y NDA.

Se prepararon los comprimidos de la siguiente manera:

A 7,0 g de liofilizado pulverizado se anadieron:

0,36 g de suero de pollo hiperinmunizado liofilizado para NDV (NDA)

13 g de bicarbonato de sodio 9,1 g de acido dtrico anhidro 0,9 g de polivinilpirrolidona K-30 0,07 g de estearato de magnesio

A continuacion se mezclaron los ingredientes y se perforaron los comprimidos con un peso de 500 mg. Cada comprimido preparado de esta manera contema 115 mg de la preparacion de virus liofilizado.

3.2 Analisis de los comprimidos

Cuando se anadio un comprimido a 100 ml de agua, se completo la disolucion en menos de 2,5 minutos, es decir, no hada trazas visibles de solidos a simple vista.

3.3 Envasado

Los comprimidos se envasaron en tiras de blister de PVC.

3.4 Ensayo de potencia del NDV-VH comprimido con NDA in-ovo

Vacunacion in-ovo de pollos de engorde comerciales con NDV-VH + NDA. Se llevo a cabo el estfmulo de pollos vacunados in-ovo a las 2 y 4 semanas despues de la eclosion. Se inyectaron los embriones en una granja comercial por un equipo Inovoject (Embrex EE.UU.) a los 18 dfas de incubacion. Se disolvio un comprimido en 200 ml de diluyente de la vacuna de Marek y se inyectaron 0,05 ml en cada huevo. Se mantuvieron pollos vacunados y no vacunados en aisladores para evitar la contaminacion no espedfica por virus NDV.

: HI a las 2 semanas % de mortalidad a las 2 semanas del estfmulo HI a las 4 semanas % de mortalidad a las 4 semanas del estfmulo

Vacunado: 5,7 40 4,4 10

No vacunado: 3,4 53 2,5 80

A las 2 y 4 semanas, los pollos se sometieron a sangrado para la deteccion de anticuerpos mediante el ensayo HI y ambos grupos se estimularon con NDV velogenico viscerotropico mediante inyeccion I.M. de 105,3 DIE50/ave en el Kimron Veterinary Institute (The Israeli Veterinary Services). Los resultados indican que se proporciono una buena proteccion a los pollos a las 4 semanas despues de la eclosion.

5

10

15

20

25

30

35

Ejemplo 4

4.1 Preparacion de comprimidos que comprenden el virus de la enfermedad de Gumboro atenuado vivo (denominado a partir de ahora "MB")

Se inocularon huevos SPF con el virus de la enfermedad de Gumboro (MB) de acuerdo con procedimientos conocidos para la propagacion de virus NDV en huevos. Se recogieron embriones y membranas corioalantoides y se extrajo el virus mediante homogeneizacion. Se llevo a cabo la liofilizacion completamente de acuerdo con los procedimientos normalizados conocidos.

Se prepararon los comprimidos de la siguiente manera:

A 10,0 g de liofilizado pulverizado se anadieron:

22,4 g de bicarbonato de sodio

15.7 g de acido cftrico anhidro

1.7 g de polivinilpirrolidona K-30 0,1 g de estearato de magnesio

A continuacion se mezclaron los ingredientes y se perforaron los comprimidos cada uno con un peso de 350 mg. Cada comprimido resultante preparado de esta manera contema 70 mg del liofilizado.

4.2 Analisis de los comprimidos

Se evaluo el tftulo de un muestreo aleatorio de los comprimidos como 105,6 DIE50/comprimido. (Se considero que 102,5 DIE50 era una dosis de vacunacion).

Cuando se anadio un comprimido a 100 ml de agua, se completo la disolucion en menos de un minuto, es decir, no habfa trazas visibles de solidos a simple vista.

Tftulos de virus en comprimidos y viales efervescentes

MB/comprimidos: 105,6 DIE50

MB/viales*: 105,5 DIE50

* Ajustado a la misma cantidad de material inmunizante.

4.3 Envasado y estabilidad

Los comprimidos se envasaron en tiras de blister de PVC y se ensayo la estabilidad a 37 °C.

Dfas a 37 °C: cero 5

MB: 1056 10^

Ejemplo 5

5.1 Preparacion de comprimidos efervescentes que contienen el virus de la vacuna viva de la viruela aviar

Se inocularon huevos SPF con el virus de la viruela aviar y se incubaron de acuerdo con procedimientos conocidos para la propagacion del virus en huevos.

Se recogieron embriones y membranas corioalantoides y se extrajo el virus mediante homogeneizacion.

Se llevo a cabo la liofilizacion completamente de acuerdo con los procedimientos conocidos.

Se prepararon 700 mg de comprimidos sustancialmente como se describe en el Ejemplo 1.

Cada comprimido contema 140 mg de liofilizado.

5.2 Analisis de los comprimidos

Se evaluo el tftulo de cada comprimido en huevos SPF y se encontro que era de 106,25DIE50/comprimido. Cuando se anadio un comprimido a 100 ml de agua, se completo la disolucion en menos de dos minutos, es decir, no habfa trazas visibles de solidos a simple vista.

5

10

15

20

25

30

35

40

EJEMPLO 6

6.1 Preparacion de comprimidos efervescentes que contienen el virus vivo de la laringotraqueftis (aviar)

Se inocularon huevos SPF con el virus de la vacuna de la laringotraqueitis y se incubaron de acuerdo con procedimientos conocidos para el crecimiento de los virus en huevos. Se recogieron embriones y membranas corioalantoides y se extrajo el virus mediante homogeneizacion.

Se llevo a cabo la liofilizacion completamente de acuerdo con los procedimientos conocidos. Se prepararon 700 mg de comprimidos sustancialmente como se describe en el Ejemplo 1.

Cada comprimido contema 140 mg de liofilizado. Se evaluo el tftulo de cada comprimido en huevos SPF y se encontro que era de 105,53 DIE50.

Ejemplo 7

7.1 Preparacion de comprimidos efervescentes que contienen el virus vivo de la bronquitis infecciosa de aves de corral

Se inocularon huevos SPF con el virus de la bronquitis infecciosa de aves de corral y se incubaron de acuerdo con procedimientos conocidos para hacer crecer virus en huevos. Se recogieron embriones y membranas corioalantoides y se extrajo el virus mediante homogeneizacion.

Cada comprimido contema 140 mg de liofilizado.

7.2 Analisis de los comprimidos

Se evaluo el tftulo de cada comprimido en huevos SPF y se encontro que era 106,15 DIE50/comprimido.

Ejemplo 8

8.1 Preparacion de comprimidos efervescentes que contienen el virus vivo de Gumboro Winterfield (aviar)

Se inocularon huevos SPF con el virus de la enfermedad de Gumboro Winterfield (aviar) y se incubaron de acuerdo con procedimientos conocidos para propagar los virus en huevos.

Cada comprimido contema 140 mg de liofilizado.

8.2 Analisis de los comprimidos

Se evaluo el tftulo de cada comprimido en huevos SPF y se encontro que era 106,28 DIE50/comprimido.

Ejemplo 9

9.1 Preparacion de comprimidos efervescentes que contienen el virus vivo de la bronquitis infecciosa (IB-HI20) + NDV-VH (aviar)

Se inocularon huevos SPF con IB-HI20 o con virus NDV-VH y se incubaron de acuerdo con procedimientos conocidos para la propagacion de virus NDV en huevos.

Se recogieron AAF y se centrifugaron a 4000 g durante 20 min. Se llevo a cabo la liofilizacion completamente de acuerdo con los procedimientos normalizados conocidos.

Cada comprimido contema 140 mg de liofilizado.

9.2 Analisis de los comprimidos

Cuando se anadio un comprimido a 100 ml de agua, se completo la disolucion en menos de 2 minutos, es decir, no habfa trazas visibles de solidos a simple vista.

Se evaluo el tftulo de cada comprimido en huevos SPF y se encontro que era 105,80 y 109,60DIE50/comprimido para IB-HI20 y NDV-VH (aviar) respectivamente.

Ejemplo 10

10.1 Preparacion de comprimidos efervescentes que contienen el virus vivo de la viruela ovina 5 Se llevo a cabo la propagacion del virus en celulas Vero que crecfan en cilindros de plastico.

Se prepararon 700 mg de comprimidos sustancialmente como se describe en el Ejemplo 1. Cada comprimido contema 140 mg de liofilizado

10.2 Analisis de los comprimidos

10 Se evaluo el tftulo de cada comprimido como 105,85 DICT50/comprimido. Se titulo el virus de la vacuna de la viruela ovina en celulas Vero.

Ejemplo 11

11.1 Preparacion de comprimidos efervescentes que contienen el virus de la vacuna viva de la peste bovina (ganado)

15 Se llevo a cabo la propagacion del virus en celulas Vero que crecfan en cilindros de plastico.

Cada comprimido contema 140 mg de liofilizado.

11.2 Analisis de los comprimidos

20 Se evaluo el tftulo de cada comprimido como 104,1 DICT50/comprimido. Se titulo el virus de la vacuna de la peste bovina en celulas vero.

11.3 Codificacion por colores de las composiciones de vacuna

La patente de Israel N.° 46189 divulga vacunas de virus de aves de corral codificadas por color tenidas con un colorante distintivo, que es seguro en tejidos vivos y que no perjudica la viabilidad de los virus. Las diferentes 25 vacunas estan codificadas por colores por medio de un colorante distintivo diferente. Los colorantes adecuados son, por ejemplo, colorante rojo amaranto, amarillo de tartrazina, azul carmm indigo o las mezclas de cualquiera de estos, que dan como resultado matices distintos.

Un procedimiento de coloracion de varios tipos diferentes de vacunas (o codificacion por colores) de vacunas en diferentes colores de contraste es util frente a los errores realizados por los granjeros que han vacunado a sus aves 30 de corral con un tipo diferente de vacuna que la prevista, exponiendo por tanto a su poblacion de aves de corral contra la enfermedad que habfan previsto realmente inmunizar. Dichos errores se descubren normalmente demasiado tarde, si llega a descubrirse, y en varios casos han provocado quejas contra la vacuna, ademas de perdidas y danos financieros graves al granjero. Los colorantes qmmicos, sin embargo, seguros como pueden ser por sf mismos, poseen algunos problemas y peligros cuando se combinan con un virus de vacuna.

35 La vacunacion de aves de corral implica el uso de vacunas de virus vivos en las que un cultivo de virus vivos esta contenido en el producto final, y debido a que los virus vivos son muy delicados y pueden deteriorarse facilmente, el problema tecnico es un poco complicado. Se conocen diferentes agentes colorantes y colorantes por ser qmmicamente activo, concretamente, pueden oxigenarse o reducirse qmmicamente. Los virus vivos son muy sensibles a los cambios ambientales tales como las condiciones del pH, la temperatura, radiacion diferentes iones 40 metalicos pueden verse afectados por agentes qmmicos con los cuales pueden entrar en contacto. Dichos agentes colorantes como azul de metileno, o rojo fucsina o colorantes de anilina pueden ser toxicos para los virus y posiblemente poseen problemas con los pollos o pavos en los que se inyectanan. Era por tanto necesario seleccionar dichos colorantes que seran seguros para el uso en tejidos vivos y no seran perjudiciales para la viabilidad de los virus con los que estan en contacto. Se han seleccionado cuatro sombras de color para identificar 45 las cuatro vacunas mas populares e importantes utilizadas en la industria de aves de corral actualmente, concretamente un color rojo para identificar la vacuna de la enfermedad de Newcastle de la cepa lentogenica, o como se denomina en Israel, la cepa Komarov en "polluelos"; un color amarillo para identificar la vacuna de la enfermedad de Newcastle de la cepa Komarov-Haifa o de "pollitas"; un color azul para identificar la vacuna de la laringotraqueftis; y una sombra verde para identificar la vacuna de la viruela aviar.

5

10

15

20

25

30

35

Como se divulga en la patente de Israel N.° 46189, se sometieron a evaluacion diferentes concentraciones de estos colorantes y se mezclaron directamente con la vacuna humeda antes de que se dispensara en los recipientes finales y antes de que se desecara (liofilizada). Se llevaron a cabo algunos ensayos para discernir que estos colorantes no fueran perjudiciales para la vacuna.

Se sometieron diferentes lotes de vacunas secas a condiciones de almacenamiento en refrigeracion y de otras maneras y se titularon repetidamente para verificar la concentracion del virus. Se llevaron a cabo en paralelo amplios controles de la vacuna sin la adicion de los colorantes para llevar a cabo cada ensayo sobre la vacuna coloreada. Se han ensayado tambien vacunas coloreada directamente en aves vivas para observar que efecto pueden tener. Los ensayos de repeticion con cuatro tipos de vacunas y cuatro colorantes utilizados en estos experimentos no han mostrado efectos perjudiciales sobre los resultados de titulacion del virus. Los ensayos de inyeccion en aves vivas y la aplicacion de las vacunas de virus por otras rutas tales como a traves del agua de bebida; mediante el procedimiento del palillo a traves de la piel (viruela aviar); y mediante el procedimiento de cepillo con venteo (para la vacuna de la laringotraqueitis) han mostrado que el colorante no tenia un efecto perjudicial sobre las aves y cuando se inyecto intramuscularmente se reabsorbio a partir de tejido y desaparecio completamente en 36 horas. La patente de Israel N.° 46189 divulga vacunas ensayadas en el campo de varias poblaciones que se vacunaron desde un dia de edad y hasta la edad de comercializacion con estas vacunas coloreadas. Estas aves se comercializaron satisfactoriamente y no hubo evidencia alguna de los colorantes.

Los detalles adicionales de la invencion divulgados en la patente de Israel N.° 46189 pueden entenderse facilmente junto con la descripcion proporcionada en los siguientes ejemplos tomados de la anterior, y que se han seleccionado solo a fines ilustrativos a fin de permitir a un experto en la tecnica utilizar las formulaciones codificadas por color para las vacunas, y de esta manera no son limitaciones de la invencion.

Ejemplo A

Se preparo colorante rojo amaranto para la combinacion con la vacuna Vineland Newcastle en "pollitos", preparando una solucion de colorante concentrado. Este concentrado contenia 145 gramos de colorante seco en polvo disuelto en 4 litros de agua destilada. La solucion de colorante concentrado se autoclavo a 20 psi (137,9 kPa) durante 20 minutos, poco despues de la preparacion y se almaceno en botellas de vidrio precintadas en un lugar oscuro. La solucion concentrada de colorante se anadio a 1,33 % a la vacuna final Vineland Newcastle en pollitos.

Se encontraron los siguientes resultados de las titulaciones con vacunas coloreadas en comparacion con vacunas sin colorear:

Titulaciones 2 semanas despues de la liofilizacion:

Titulacion acelerada:

Titulacion 30 dias despues de la liofilizacion:

Titulacion 3 meses tras la liofilizacion:

Titulacion llevada a cabo 6 meses despues de liofilizacion en una unica muestra

sin colorante: 109,0 DIE50/ml

con colorante: o CD CO

sin colorante: 109,1"

con colorante: O CD CO

sin colorante: 109’16 "

con colorante: O CD CO

sin colorante: 108-86 "

con colorante: O CD CO

la

con colorante 109,16

Ejemplo B

Se preparo colorante amarillo de tartrazina para la combinacion con la vacuna de la cepa Vineland Newcastle en pollita (la cepa Haifa-Komorav mesogenica), preparando una solucion concentrada de colorante. Este concentrado contenia 200 gramos de colorante seco en polvo disuelto en 3 litros de agua destilada. La solucion de colorante concentrado se autoclavo a 20 psi (137,9 kPa) durante 20 minutos, poco despues de la preparacion y se almaceno en botellas de vidrio precintadas e un lugar oscuro. La solucion concentrada de colorante se anadio a un 3 % de la

vacuna final Vineland Newcastle en pollitas.

Se ha encontrado que los resultados de las titulaciones con vacunas coloreadas en comparacion con los controles sin colorear son como sigue: Resultados de la titulacion de vacunas regulares:

109,4 DIE50 por mililitro

5 Resultados de la muestra titulada con colorante: 108,8

10

15

Titulacion despues de 7 dias de incubacion a 37 °C:: sin colorante 108,3 DIE50/ml

: con colorante 108'8 "

Titulacion 39 dias despues de la liofilizacion:: sin colorante 1 08.S6 "

: con colorante 108'9 "

Titulacion 93 dias despues de la liofilizacion:: sin colorante 1 08.S6 "

: con colorante 1 08.S6 "

7 meses 1/2 despues de la liofilizacion:: sin colorante 108-53 "

: con colorante 108’76 "

Ejemplo C

Se preparo colorante azul fndigo-carmfn para la combinacion con inyecciones de la vacuna de la laringotraqueitis Vineland, preparando una solucion concentrada de colorante.

Este concentrado contenia 200 gramos de colorante seco en polvo disuelto en 3 litros de agua destilada. La solucion concentrada de colorante se autoclavo a 20 psi (137,9 kPa) durante 20 minutos, poco despues de la preparacion y se almaceno en botellas de vidrio precintadas en un lugar oscuro. La solucion concentrada de colorante se anadio a un 3 % a las inyecciones de la vacuna de la laringotraqueitis Vineland.

Se ha encontrado que los resultados de las titulaciones con vacunas coloreadas en comparacion con los controles sin colorear son como sigue:

Titulacion 3 semanas despues de la liofilizacion:: sin colorante 106,3 DIE50/ml"

: con colorante 106’16 "

Titulacion acelerada:: sin colorante 105,0 "

: con colorante 104'8"

Titulacion 30 dias despues de la liofilizacion:: sin colorante 106,0 "

: con colorante 105,8 "

Titulacion 3 meses tras la liofilizacion:: sin colorante 105’66 "

: con colorante 105'5 "

Titulacion 7 meses tras la liofilizacion:: sin colorante 105,5 "

: con colorante 105,6 "

(Esta disminucion en el titulo es algo inusual para muestras coloreadas y sin colorear y mostro lotes acelerados en mas de una disminucion logaritmica de 1 sobre una indicacion posible de aceleracion con un contenido de humedad elevada en este lote).

Ejemplo D

5 Se obtuvo un colorante de sombra verde codificado "P" (para viruela) mezclando los colorantes fndigo-carmfn con tartrazina y se utilizo para la combinacion con la vacuna de la viruela aviar Vineland. Se disolvieron 100 gramos de mezcla de colorante en polvo en 3 litros de agua destilada.

Se utilizo el mismo procedimiento que en los ejemplos N.° 2 y N.° 3 y se anadio la solucion a un 3 % a la vacuna final de la viruela aviar.

10

Se ha encontrado que los resultados de las titulaciones con vacunas coloreadas en comparacion con los controles sin colorear son como sigue:

7 dias despues de la liofilizacion

3 meses despues

6 meses despues

9 meses despues de la produccion

control sin colorear: 105,5 DIE5o/ml M

vacuna con colorante:: 105'5 " M

control sin colorear: 105-4 DIE50/ml M

vacuna con colorante:: 105,5 " M

control sin colorear: 105.35 " M

vacuna con colorante:: 105,4 " M

: 103,1" M

: 105’3" M

La anterior descripcion tiene el fin de ensenar a las personas normalmente expertas en la materia como practicar la invencion y no se pretende detallar todas las modificaciones y variaciones obvias de esta, que seran evidentes para 15 el trabajador experto tras la lectura de la descripcion. Se pretende, sin embargo, que las mencionadas modificaciones y variaciones obvias se encuentren incluidas en el alcance de la presente invencion, que se define por las reivindicaciones siguientes.

Claims

5

10

15

20

25

30

35

40

45

REIVINDICACIONES

1. Una composicion de vacuna comprimida estable que comprende al menos un componente antigenico liofilizado y un adyuvante de disolucion.
2. La composicion de vacuna de la reivindicacion 1, en la que el adyuvante de disolucion es un agente o una pareja de agentes efervescentes, un disgregante, un tensioactivo o un solubilizante.
3. La composicion de vacuna de la reivindicacion 1 o 2, en la que la composicion de vacuna comprimida esta en la forma de un comprimido duro.
4. La composicion de vacuna de la reivindicacion 1 o 2, en la que la composicion se disuelve completa y rapidamente en agua.
5. La composicion de vacuna de la reivindicacion 1 o 2, en la que la composicion es esteril.
6. La composicion de vacuna de la reivindicacion 2, en la que el adyuvante de disolucion comprende una pareja de agentes efervescentes.
7. La composicion de vacuna de la reivindicacion 6, en la que la pareja efervescente comprende una sal y un acido.
8. La composicion de vacuna de la reivindicacion 7, en la que el acido es acido cftrico y la sal es un bicarbonato.
9. La composicion de vacuna de la reivindicacion 1 o 2, en la que el componente liofilizado comprende hasta un 80 % en peso de la composicion.
10. La composicion de vacuna de la reivindicacion 1 o 2, en la que la composicion esta caracterizada por la completa disolucion en menos de 80 segundos tras el contacto con un diluyente.
11. La composicion de vacuna de la reivindicacion 10, en la que se produce la disolucion completa en una relacion de diluyente a composicion de entre 0,5 ml de diluyente por 200 mg de composicion y 100 ml de diluyente por 400 mg de composicion.
12. La composicion de vacuna de la reivindicacion 1 o 2, en la que la estabilidad de la composicion esta caracterizada por una perdida de tftulo no mayor que la diferencia entre 109,7 DIE50/ml y 109,2 DIE50/ml despues de 5 dfas a 37 °C.
13. La composicion de vacuna de la reivindicacion 1 o 2, en la que la estabilidad de la composicion esta caracterizada por una perdida de tftulo no mayor que la diferencia entre 109,7 DIE50/ml y 109,3 DIE50/ml despues de 9 meses a 4 °C.
14. La composicion de vacuna de la reivindicacion 1 o 2, que comprende ademas un aglutinante y un lubricante.
15. La composicion de vacuna de la reivindicacion 1 o 2, en la que la composicion se disgrega completa y rapidamente en agua.
16. La composicion de vacuna de la reivindicacion 1 o 2, en la que el material activo es un liofilizado pretitulado que se mantiene en atmosfera de nitrogeno seco por debajo de la temperatura de congelacion antes del uso.
17. La composicion de vacuna de la reivindicacion 1 o 2, en la que el componente antigenico es un virus completo o un microorganismo completo.
18. La composicion de vacuna de la reivindicacion 1 o 2, en la que el componente antigenico es una bacteria viva o un virus vivo.
19. La composicion de vacuna de la reivindicacion 18 que comprende ademas un indicador de la presencia del componente antigenico.
20. La composicion de vacuna de la reivindicacion 19, en la que el indicador es un colorante.
21. La composicion de vacuna de la reivindicacion 1 o 2, en la que el componente antigenico comprende un lipopolisacarido o una protema.
22. La composicion de vacuna de la reivindicacion 18, en la que el componente antigenico es un virus vivo seleccionado entre el grupo que consiste en: el virus de la enfermedad de Newcastle, la cepa VH del virus de la enfermedad de Newcastle, el virus de la enfermedad de bursitis infecciosa, el virus de la viruela aviar, el virus de la laringotraqueftis, el virus de la bronquitis infecciosa de las aves de corral, el virus de Gumboro Winterfield, la bronquitis infecciosa (lB-H120), el virus de la viruela ovina, el virus de la peste bovina o una premezcla de o uno o mas de los anteriores, que se producen tanto naturalmente, como de forma recombinante o modificada.

5

10

15

20

25

30

35

40

45
23. La composicion de vacuna de la reivindicacion 18, en la que el componente antigenico se selecciona entre el grupo que consiste en esporas de carbunco, Salmonella SPP, E. coli o una premezcla de uno o mas de los anteriores, que se producen tanto naturalmente, como de forma recombinante o modificada.
24. La composicion de vacuna de la reivindicacion 18, en la que el componente antigenico es un virus vivo y la composicion comprende ademas anticuerpos neutralizantes contra el virus.
25. Uso de una composicion de vacuna de la reivindicacion 1 o 2, que proporciona proteccion frente a una enfermedad, que se ha disuelto con un diluyente para formar una solucion para la preparacion de una composicion para inmunizar un sujeto frente a dicha enfermedad.
26. El uso de la reivindicacion 25, en el que la etapa de disolucion adicionalmente esta caracterizada por la disolucion completa de la composicion de vacuna.
27. El uso de la reivindicacion 26, en el que se produce la disolucion completa en una relacion de diluyente a composicion de entre 0,5 ml de diluyente por 200 mg de composicion y 100 ml de diluyente por 400 mg de composicion.
28. El uso de la reivindicacion 26, en el que se produce la disolucion completa en menos de 80 segundos tras el contacto con un diluyente.
29. El uso de la reivindicacion 25, en el que la solucion es para administrarse mediante inyeccion.
30. El uso de la reivindicacion 25, en el que la solucion es para administrarse mediante un aerosol formado a partir de la solucion.
31. El uso de la reivindicacion 25, en el que la solucion es para administrarse en la forma de colirio.
32. El uso de la reivindicacion 25, en el que la solucion es para administrarse mediante ingestion oral.
33. El uso de la reivindicacion 25, en el que el sujeto que se va a tratar es un animal aviar y la enfermedad se selecciona entre el grupo que consiste en la enfermedad de Newcastle, enfermedad de bursitis infecciosa, viruela aviar, laringotraqueftis, bronquitis infecciosa de aves de corral, Gumboro Winterfield y bronquitis infecciosa (IB- H120).
34. El uso de la reivindicacion 33, en el que la solucion es para administrarse al sujeto in-ovo.
35. Un envase que comprende la composicion de vacuna de acuerdo con la reivindicacion 1,2 o 19.
36. El envase de la reivindicacion 35, en el que el envase es un envase de tipo blister.
37. El envase de la reivindicacion 35, en el que el envase es una jeringuilla esteril.
38. Una jeringuilla esteril que comprende una composicion de vacuna compactada, en la que la composicion de vacuna comprende al menos un componente antigenico liofilizado y un adyuvante de disolucion.
39. La jeringuilla de la reivindicacion 38, en la que la composicion de vacuna compactada es una composicion comprimida.
40. La jeringuilla de la reivindicacion 39, en la que la composicion de vacuna comprimida esta en forma de un comprimido duro.
41. Uso de una solucion de vacuna preparada anadiendo un diluyente a la jeringuilla de la reivindicacion 38, 39 o 40 para la preparacion de una composicion para inmunizar a un sujeto frente a una enfermedad.
42. Un envase que comprende la composicion de vacuna de acuerdo con la reivindicacion 19.
43. Un envase que contiene una composicion de vacuna comprimida estable que tiene al menos un componente antigenico liofilizado y un adyuvante de disolucion.
44. El envase de la reivindicacion 43, en el que el envase es un vial en el que se ha practicado un vacfo o se ha rellenado con un gas inerte.
45. El envase de la reivindicacion 44, en el que el vial es vidrio.
46. El envase de la reivindicacion 43, en el que el envase es una bolsita.
47. Uso de una composicion de vacuna comprimida estable que proporciona proteccion frente a una enfermedad que tiene al menos un componente antigenico liofilizado y un adyuvante de disolucion que se ha disuelto con un diluyente para formar una solucion para la preparacion de una composicion para inmunizar a un marnffero frente a la

enfermedad.
48. El uso de la reivindicacion 47, en el que el marnfero se selecciona entre el grupo que consiste en un sujeto humano, un sujeto bovino y un sujeto ovino.